KR101324283B1 - 바이구아나이드 화합물의 신규 염, 그의 제조방법, 그를 포함하는 약제학적 조성물 - Google Patents

Abstract

바이구아나이드 화합물의 신규한 글라이포세이트염, 그의 제조방법, 그를 포함하는 의약, 약제학적 조성물이 제공된다. 본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염은 메트포르민 염산염에 비해 항암 효과가 훨씬 우수하면서동등한 수준의 AMPK 활성을 나타내어 메트포르민 염산염이 나타내는 우수한 혈당 강하 효과, 항산화 효과, 지질 저하 작용 및 대사 증후군(metabolic syndrome) 개선 효과를 발휘한다. 또한, 본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염은 메트포르민 염산염에 비해 용해도, 안정성, 비흡습성, 정제 제형으로서의 가공성 등의 물리화학적 성질이 우수하여 바이구아나이드 화합물의 약제학적으로 허용되는 염으로써 유용하게 이용될 수 있다.

Description

바이구아나이드 화합물의 신규 염, 그의 제조방법, 그를 포함하는 약제학적 조성물 {Novel salt of biguanide compounds, methods of preparing the same and pharmaceutical compositions}

본 발명은 바이구아나이드 화합물의 신규한 글라이포세이트염, 그의 제조방법, 그를 포함하는 의약, 약제학적 조성물에 관한 것이다.

N,N-디메틸 이미도디카르본이미딕 디아미드, 즉 메트포르민(Metformin)은 경구용 당뇨병 치료제로서, 인슐린 비의존형 당뇨병(제2형 당뇨병)의 치료에 사용된다. 메트포르민은 간에서의 당의 생성을 감소시키고, 장에서의 당의 흡수를 감소시키며, 말초에서의 당의 이용을 증가시킴으로써, 인슐린 감응성을 증가시킨다. 메트포르민은 경구용 당뇨병 약 중에서는 혈당 강하작용이 가장 우수하고 설포닐우레아 계열의 약물과는 달리 저혈당증이나 고인슐린혈증을 유발하지 않으며, 합병증의 발생이나 당뇨병의 악화를 예방할 수 있는 능력이 우수하여 인슐린 비의존형 당뇨병 환자의 1차 선택 약물로서 사용되고 있다.

한편 2-(N-펜에틸카르밤이미돌릴)구아니딘과 N-부틸이미도카본 이미딕 디아마이드, 즉 펜포르민과 부트포르민은 바이구아나이드 계열의 항당뇨병제로서, 메트포르민과 동일한 기전으로 인슐린 비의존형 당뇨병을 치료할 수 있으나, 유산 산증을 유도하는 것으로 알려져 이제는 잘 사용되고 있지 않은 약물이다.

메트포르민은 AMPK(AMP-activated protein kinase)를 활성화시키는 것으로 알려져 있다. AMPK는 탄수화물 대사와 지질 대사를 생리적으로 조절하는 핵심 효소로서, 메트포르민은 이 효소를 활성화시켜 고혈당을 정상화시키고, 지질 상태를 개선시키며 월경 불순, 배란 및 임신을 정상화시키고, 지방간을 치료하는 것으로 보고된 바 있다.

펜실바니아 의대 암 연구소(Abramson Cancer Center)가 암 전문지를 통해 발표한 바에 따르면 p53 유전자가 결여된 암의 예방과 치료에 AMPK 효소 활성화제인 메트포르민이 효과가 있다고 보고하였다[Monica Buzzai, et al. Syntemic Treatment with the Antidiabetic Drug Metformin Selectively Impairs p53-Deficient Tumor Cell Growth, Cancer Res 2007; 67:(14). July 15, 2007]. 즉, p53 유전자가 결여된 암세포에 메트포르민을 처리하면 메트포르민이 암세포의 AMPK 효소를 활성화시켜 에너지 대사 경로를 변경시킴으로써, 변경된 대사 경로에 적응치 못하여 암세포가 사멸한다는 것이 실험으로 입증되었다.

또한, Josie M M Evans는 2형 당뇨 환자에게 메트포르민 치료를 받을 시 그렇지 않은 환자에 비해 암 발병률이 낮다는 연구결과를 내놓았다[Josie MM, Evans et al. BMJ. 2005, 330, 1304-1305]. 또한 Samantha L. Bowker는 메트포르민을 복용하는 2형 당뇨 환자가 술포닐우레아를 복용하거나 인슐린을 투약하는 환자보다 암과 관련된 사망률이 낮다고 보고하였다[Samantha L et al. Diabetes Care. 2006, 29, 254-258].

또한, 메트포르민의 항산화 효과로 인하여 당뇨 환자의 심혈관 질환을 개선하고, 트리글리세라이드, 저밀도지단백, 콜레스테롤 수치를 낮추는 효과가 있다고 보고 하였다[UKPDS group. Effect of intensive blood-glucose control with metformin on complications in overweight Patients with type 2 diabetes (UKPDS 34) Lancet 1998:352:854-865].

또한, 미국 보스턴 소재 메디컬센터(Beth Israel Deaconess Medical center)의 연구진이 의학 전문지를 통해 발표한 바에 따르면 PGC-1α 활성제인 메트포르민은 Atrogin-1 유전자의 발현으로 인한 근육통, 근육세포 손상, 나아가 횡문근융해(rhabdomyolysis)라는 심각한 부작용을 예방하는데 효과적인 것으로 보고되었다[Jun-ichi Hanai, et al. The muscle-specific ubiquitin ligase atroigin-1/MAFbx mediates statin-induced muscle toxicity, J. Clin. Invest. 117:3940-3951(2007)]. Atrogin-1 유전자의 발현은 근육통, 근육세포 손상, 나아가 횡문근육해(rhabdomyolysis)의 근육독성을 일으키지만, 메트포르민은 PGC-1α 전사인자 활성으로 인해 Atrogin-1 유전자의 발현을 억제하여 Atrogin-1 유전자의 발현 증가로 인한 근육장해를 억제하고 예방한다.

이러한 보고들은 메트포르민과 동일한 약리기전을 가지고 있는 펜포르민이나 부트포르민 역시 메트포르민과 동일한 용도에 사용할 수 있음을 시사해 준다.

약학적으로 바이구아나이드 화합물은 유리염기 형태인 것이 유용하지만, 안정성이 떨어지는 단점이 있기 때문에 산 부가염의 형태로 사용되고 있다.

의약의 유효성분을 약제학적으로 허용 가능한 염의 형태로 제조하는데 있어서는 (1) 우수한 용해도; (2) 우수한 안정성; (3) 비흡습성; (4) 정제 제형으로서의 가공성과 같은 네 가지 물리화학적 기준을 충족시킬 수 있어야 한다(대한민국특허등록 제90,479호 참조). 그러나 약제학적으로 허용되는 산 부가염으로서 상기 네 가지 조건을 모두 충족시키기란 매우 어려운 면이 있다.

현재 유일하게 약물로서 허가받은 메트포르민의 산 부가염인, 메트포르민 염산염은 매우 높은 수성 용해도(>300mg/ml, 메트포르민으로서 >230mg/ml)를 가지며, 매우 높은 흡습성(25 ℃/95%RH, 6시간 후에 20%이상 흡습)을 가져 의약품의 제조시 다루기 힘들다. 특히 이러한 메트포르민 염산염의 물리화학적 특성은 서방성 제제로의 제형화 시에 다량의 서방성 부형제를 필요로 하여 제형의 크기를 커지게 하는 문제점을 야기한다. 특히 메트포르민은 고용량을 복용해야 하는 약물이므로 다량의 서방성 부형제를 이용할 경우 제형의 크기가 커져 하나의 단위투여형 제제로 제제화할 수 없게 되어 환자의 복약순응도를 떨어뜨리게 된다.

메트포르민 염산염이 아닌 그 외에 부가 염에 대한 연구는 예전부터 이루어져 왔다. CN 1962661A에서는 임상적으로 항악성 빈혈인자로 쓰이는 엽산을 이용한 메트포르민 엽산염을 개시하고 있고, WO 2005/033067에서는 고지혈증, 고혈당증 치료에 쓰이는 메트포르민 1,2,6,7,8,8a-헥사하이드로-베타,감마,6-트리하이드록시-2-메틸-8-[(2s)-2-메틸-1-옥소부톡시]-(베타R,감마R,1S,2S,6S,8S,8aS)-1-나프탈렌헵타산염을 개시하고 있다. US 3,957,853에서는 메트포르민 아세틸살리실산염을, US 4,028,402에서는 비구아니드계 화합물의 디클로로아세테이트염을 개시하고 있다. US 4,080,472에서는 메트포르민 클로피브린산염의 당뇨병 관련 질환에 대한 용도를 개시하고 있으며, US 6,031,004에서는 메트포르민의 푸마르산염, 석신산염, 말레인산염을 포함하는 의약 조성물과 그의 용도에 대한 내용을 나타내고 있으며, US 4,835,184에서는 p-클로로-페녹시아세트산염, US 3,903,141에서는 아다만탄염에 대해 개시하고 있다.

이처럼 메트포르민 부가 염에 대한 연구는 꾸준히 진행되어 왔음에도 불구하고, 지금까지 메트포르민은 오로지 메트포르민 염산염으로서의 약물만이 허가되어 있는 상태이다.

따라서, 용해도, 안정성, 비흡습성, 부착방지특성 등의 물리화학적 성질이 개선되고 약리효과가 우수한 바이구아나이드 화합물의 신규염을 개발할 필요가 있다.

본 발명은 용해도, 안정성, 비흡습성, 정제 제형으로서의 가공성 등의 물리화학적 성질이 우수하고, 약리 효과는 우수한 바이구아나이드 화합물의 약제학적으로 허용가능한 신규 산 부가염, 그의 제조방법, 그를 포함하는 의약, 약제학적 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은

하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 제공한다:

[화학식 1]

상기 식에서,

R₁ 또는 R₂는 각각 독립적으로 수소, C_{1 - 4}알킬, 또는 페닐로 치환된 C_{1 - 4}알킬이고,

A는 글라이포세이트이다.

한 구체예에서, R₁ 또는 R₂는 각각 독립적으로 수소, 메틸, 부틸, 또는 페닐로 치환된 에틸일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 무수물 또는 수화물 형태로 존재하는 상기 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 모두 포함하는 것으로 해석된다.

또한, 상기 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 결정형의 형태로 존재하는 상기 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 포함하는 것으로 해석된다.

한 구체예에서, 상기 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 하기 화학식 2의 구조를 갖는 메트포르민 글라이포세이트염일 수 있다.

[화학식 2]

다른 구체예에서, 상기 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 하기 화학식 3의 구조를 갖는 펜포르민 글라이포세이트염일 수 있다.

[화학식 3]

또 다른 구체예에서, 상기 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 하기 화학식 4의 구조를 갖는 부포르민 글라이포세이트염일 수 있다.

[화학식 4]

본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염은 바이구아나이드 화합물의 항암 효과를 현저히 상승시키며, 또한 기존에 보고된 메트포르민 염산염과 동등한 수준의 AMPK 활성을 나타내는 것으로 확인되어 우수한 혈당 강하 효과, 특히 공복 시뿐만 아니라 식후 혈당 강하에 매우 효과적이고 인슐린 감수성을 증가시키는 효과를 나타낸다.

뿐만 아니라, 본 발명의 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염은 안정성, 비흡습성 및 정제 제형으로서의 가공성 등 제제학적 물리학적 장점이 증가되어, 메트포르민 염산염에 비해 약제학적 제형의 제조에 적합하다.

또한, 본 발명은 또한

하기 화학식 5의 바이구아나이드 화합물의 유리염기를 글라이포세이트와 반응시키는 것을 포함하는

하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 산 부가염의 제조 방법을 제공한다:

[화학식 5]

[화학식 1]

상기 식에서,

R₁ 또는 R₂는 각각 독립적으로 수소, C_{1 - 4}알킬, 또는 페닐로 치환된 C_{1 - 4}알킬이고,

A는 글라이포세이트이다.

본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 형성하기 위해 이용되는 바이구아나이드 화합물의 유리염기는 상업적으로 입수하거나 공지의 방법을 통해 합성할 수 있다.

하기 실시예에서는, 메트포르민 염산염과 같은 공지의 바이구아나이드 화합물의 산 부가염과 무기염기를 반응시켜 바이구아나이드 화합물의 유리염기를 형성한다. 바이구아나이드 화합물의 유리염기의 합성을 위해 사용될 수 있는 바이구아나이드 화합물의 산 부가염의 종류는 다음과 같다: 염산, 설페이트, 나이트레이트, 포스페이트, 설파이트, 디티오네이트, 아세테이트, 벤조에이트, 시트레이트, 글리코레이트염, 글리옥시레이트, 머캅토아세테이트, 감마하이드록시부티레이트, 파모에이트, 아스파르테이트, 글루타메이트, 피롤리돈 카르복시레이트, 메탄설포네이트, 나프탈렌 설포네이트, 글루코스-1-포스페이트, 클로로페녹시 아세테이트, 엠보네이트, 말리에이트, 파라클로로페녹시이소부티레이트, 포르메이트, 락테이트, 석신네이트, 타트레이트, 시클로헥산카로복시레이트, 헥사노에이트, 옥타노에이트, 데카노에이트, 헥사데카노에이트, 옥토데카노에이트, 벤젠설포네이트, 트리메톡시 벤조에이트, 파라톨루엔 설포네이트, 아다만탄카르복시레이트, 글루타메이트, 피롤리돈카르복시레이트, 말로네이트, 말레이트, 옥살레이트, 2-[4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일]에탄술포네이트 등.

종래의 기술에서는 바이구아나이드 화합물의 유리염기, 예컨대, 메트포르민 유리염기를 합성할 때, 메트포르민 염산염에서 염산을 제거하기 위해서 이온교환수지 칼럼을 사용하여 어렵게 생산하고, 용매를 가열 환류하고 뜨거운 상태에서 여과를 하는 혹독한 생산조건을 요구한다(미국특허 4,080,472). 본 발명에서는 특별한 설비 없이 일반적인 생산설비에서 합성이 가능하도록 단순하게 공정을 개선하여 보다 낮은 단가로 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 합성할 수 있다.

한 구체예에서, 바이구아나이드 화합물의 유리염기를 형성하기 위해 사용되는 무기염기는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘, 수산화리튬, 탄산칼륨, 탄산나트륨, 탄산세슘, 탄산수소나트륨 및 탄산수소칼륨으로부터 선택될 수 있다.

바이구아나이드 화합물의 산 부가염과 무기염기를 반응시킬 때에는 물 또는 통상의 유기 용매를 사용할 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니나, 바람직하게는 물을 사용하지 않고 유기용매만을 사용할 수 있다.

이와 같이 제조된 바이구아나이드 화합물의 유리염기는 글라이포세이트와 반응하여 본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염을 형성하게 된다.

한 구체예에서, 상기 바이구아나이드 화합물의 유리염기는 1몰당량 당 글라이포세이트 0.5 내지 4몰당량과 반응할 수 있다.

바이구아나이드 화합물의 유리염기와, 글라이포세이트와의 반응은 물 또는 통상의 유기용매를 사용하여 수행될 수 있다.

본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 산 부가염의 제조방법에서 사용될 수 있는 유기용매는 이제 제한되는 것은 아니나, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 펜탄올, 다이옥산, 디메틸포름아마이드, 디메틸설폭사이드, 아세톤 및 아세토니트릴로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.

바이구아나이드 화합물의 유리염기와 글라이포세이트와의 반응이 유기용매 하에서 수행될 경우, 바이구아나이드 화합물의 유리염기에 글라이포세이트를 첨가한 후 생성된 고체를 여과, 세척 및 건조시켜 바이구아나이드 화합물의 결정성 산 부가염을 형성하게 된다.

한편, 바이구아나이드 화합물의 유리염기와 글라이포세이트와의 반응이 수용액 하에서 수행될 경우, 바이구아나이드 화합물의 유리염기에 글라이포세이트를 첨가한 후, 동결건조, 진공건조, 열풍건조와 같은 건조 과정을 거쳐 생성된 고체를 세척, 여과 및 건조시켜 바이구아나이드 화합물의 결정성 산 부가염을 형성하게 된다.

상기 반응 및 고체 생성온도는 -10 내지 100℃의 온도 범위에서 수행될 수 있다.

본 발명은 또한

하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 유효성분으로 포함하는 의약을 제공한다:

본 발명은 또한

약제학적으로 허용되는 담체 및 하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 유효성분으로 포함하는 당뇨, 비만, 고혈압, 고지혈증, 지방간, 관상동맥질환, 골다공증, 다낭성 난소증후군, 대사성 증후군, 암, 근육통, 근육세포 손상 및 횡문근 융해로 구성되는 군으로부터 선택되는 질환의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 조성물, 상기 질환의 치료를 위한 하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 산 부가염의 용도 및 치료상 유효량의 하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 산 부가염을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 상기 질환의 치료 방법을 제공한다:

[화학식 1]

상기 식에서,

R₁ 또는 R₂는 각각 독립적으로 수소, C_{1 - 4}알킬, 또는 페닐로 치환된 C_{1 - 4}알킬이고,

A는 글라이포세이트이다.

메트포르민과 같은 바이구아나이드 화합물은 당뇨, 비만, 고혈압, 고지혈증, 지방간, 관상동맥질환, 골다공증, 다낭성 난소증후군, 대사성 증후군, 암, 근육통, 근육세포 손상 및 횡문근 융해 등의 질환을 치료하기 위해 이용될 수 있음이 당업계에 잘 알려져 있다. 특히, 본 발명에 따른 바이구나이드 화합물의 글라이포세이트염은 암세포 성장을 통계적으로 유의성 있게 감소시켜 우수한 암세포 성장 억제 능력을 나타낸다. 한 구체예에서, 상기 암은 자궁암, 유방암, 위암, 뇌암, 직장암, 대장암, 폐암, 피부암, 혈액암, 간암, 췌장암, 전립선암 및 갑상선암으로 구성되는 군으로부터 선택되는 암일 수 있다.

본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 기존에 보고된 메트포르민 염산염과 비교할 때 동등한 수준의 APMK 활성을 나타내어 우수한 혈당 강하 효과, 특히 공복 시뿐만 아니라 식후 혈당 강하에 매우 효과적이고 인슐린 감수성을 증가시키는 효과를 나타낸다.

본 발명의 약제학적 조성물은 유효 성분 이외에 약제학적으로 허용가능한 담체를 1종 이상 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, '약제학적으로 허용가능한 담체'는 투여용 약제학적 활성 성분을 제형화할 경우에 유용하고 사용 조건하에 사실상 비독성 및 비민감성인 공지된 약제학적 부형제를 의미한다. 이러한 부형제의 정확한 비율은 활성 성분의 용해도와 화학적 특성, 선택된 투여경로뿐만 아니라, 표준 약제학적 관행에 의해 결정된다.

본 발명의 약제학적 조성물은 적합하고 생리학적으로 허용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제, 향미제 등과 같은 보조제를 사용하여 원하는 투여 방법에 적합한 형태로 제제화될 수 있다.

상기 약제학적 조성물은 이에 제한되는 것은 아니나, 정제, 캡슐제, 환제, 과립제, 산제, 주사제 또는 액제의 형태로 제제화될 수 있다.

경구 투여에 적합한 제제는 고체 제제, 예를 들어 정제, 미립자, 액체 또는 분말을 함유한 캡슐제, 환제, 과립제, 산제, 로젠지제(lozenge)(액체-충전된 것 포함), 츄제(chew), 멀티- 및 나노-미립제, 겔제, 고용제(solid solution), 리포솜, 필름제(점막-점착성 포함), 난형제(ovule), 분무제(spray) 및 액제를 포함한다. 액제는 예를 들어 현탁액제, 용액제, 시럽제 및 엘릭시르(elixir)제를 포함한다.

정제는 약물 이외에도 일반적으로 붕해제를 함유한다. 붕해제로서 나트륨 전분 글리콜레이트, 옥수수 전분, 감자 전분 또는 예비 젤라틴화 전분 등의 전분 또는 변성전분과, 벤토나이트, 몬모릴로나이트, 비검(veegum) 등의 클레이와, 미세결정성 셀룰로오스, 저치환도 히드록시프로필셀룰로오스 또는 카르복시메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류와, 알긴산 등의 알긴류와, 크로스카멜로스(croscarmellose) 나트륨 등의 가교 셀룰로오스류와, 구아검, 잔탄검 등의 검류와, 크로스포비돈(crospovidone) 등의 가교 중합체와, 중탄산 나트륨, 시트르산 등의 비등성 제제 등을 혼합 사용할 수 있다. 일반적으로, 붕해제는 투여 형태의 약 1 중량% 내지 약 25 중량%, 바람직하게는 투여 형태의 약 2 중량% 내지 약 10 중량%를 포함할 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.

결합제는 일반적으로 정제 제제에 점착성을 부여하기 위해 사용된다. 적합한 결합제는 미세결정성 셀룰로오스, 젤라틴, 당(sugar), 폴리에틸렌 글리콜, 천연 및 합성 검(gum), 폴리비닐피롤리돈, 예비젤라틴화된 전분, 전분, 코포비돈, 고분산성 실리카, 만니톨, 락토스, 히드록시프로필 셀룰로오스 및 하이드록시프로필 메틸셀룰로스를 포함한다. 일반적으로, 결합제는 투여 형태의 약 1 중량% 내지 약 40 중량%, 바람직하게는 투여 형태의 약 2중량% 내지 약 25 중량%를 포함할 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 정제는 희석제로서, 예를 들어 전분, 미세결정성 셀룰로오스, 유당, 포도당, 만니톨, 알기네이트, 알칼리토류금속염, 클레이, 폴리에틸렌글리콜 및 디칼슘 포스페이트 등을 사용할 수 있다. 일반적으로, 희석제는 투여 형태의 약 1 중량% 내지 약 70 중량%, 바람직하게는 투여 형태의 약 2 중량% 내지 약 50 중량%를 포함할 것이나, 이에 제한되는 것은 아니다.

정제는 또한 계면활성제, 예컨대 나트륨 라우릴 설페이트 및 폴리솔베이트, 및 유동화제(glidant), 예컨대 이산화규소 및 활석을 선택적으로 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 계면활성제는 정제의 약 0.2 중량% 내지 약 20 중량%를 포함할 수 있고, 유동화제는 정제의 약 0.2 중량% 내지 약 1 중량%를 포함할 수 있다.

또한 활택제(윤활제)로서, 예컨대 탈크, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아르산 아연, 나트륨 스테아릴 푸마레이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 라우릴 설페이트, 수소화 식물성 오일, 나트륨 벤조에이트, 글리세릴 모노스테아레이트, 폴리에틸렌글리콜 등을 사용할 수 있다. 활택제(윤활제)는 일반적으로 정제의 약 0.25 중량% 내지 약 5 중량%, 바람직하게는 약 0.5 중량% 내지 약 3 중량%를 포함한다.

그 밖의 다른 가능한 성분은 산화방지제, 착색제, 향미제, 보존제 및 맛-차단제를 포함한다.

정제 배합물은 직접적으로 압착되거나 롤러로 압착되어 정제를 형성할 수 있다. 다른 방법으로 정제 배합물 또는 그 배합물의 일부는 정제화되기 전에 습식-, 건식-, 용융-과립화(granulated)되거나, 용융 응고(melt congealed)되거나, 또는 압출될 수 있다. 최종 제제는 하나 이상의 층을 포함할 수 있고, 코팅되거나 코팅되지 않을 수 있으며, 캡슐화될 수 있다.

경구 투여용 고체 제제는 즉시(immediate) 방출형 및/또는 변형(modified) 방출형으로 제제화될 수 있다. 변형 방출형 제제는 지연(delayed)-, 지속(sustained)-, 펄스(pulsed)-, 제어(controlled)-, 표적(targeted) 및 프로그램(programmed) 방출형을 포함한다.

약제학적 조성물의 제형 및 약제학적으로 허용되는 담체는 당업계에 공지된 기술에 따라 적절히 선택할 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 정제의 형태로 제제화될 수 있다. 정제는 임의적으로 필름 코팅될 수 있다. 복용 단위당 약의 총량은 환자에게 편리한 크기의 복용 형태를 제공하는 양일 수 있다.

또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 캡슐제의 형태로 제제화될 수 있다.

다른 구체예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 서방성 형태의 제형으로 제제화 될 수 있다. 상기 서방성 형태의 제형은 정제 또는 캡슐제일 수 있다. 서방성 제형의 제조를 위해서는, 매트릭스 기제로서 장용 중합체, 소수성 물질, 친수성 고분자 등 중에서 선택된 성분을 사용할 수 있다.

상기 장용 중합체로서는 폴리비닐아세테이트프탈레이트, 폴리(메타크릴산, 메틸메타크릴레이트)공중합체 및 폴리(메타크릴산, 에틸아크릴레이트)공중합체와 같은 폴리메타크릴레이트 공중합체, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스프탈레이트, 쉘락, 셀룰로오스아세테이트프탈레이트, 셀룰로오스프로피오네이트프탈레이트, 중에서 선택된 1 종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다.

상기 소수성 물질은 약학적으로 허용 가능한 것으로 폴리비닐 아세테이트, 폴리메타크릴레이트 공중합체로서 폴리(에틸아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트) 공중합체, 폴리(에틸아크릴레이트, 메틸 메타크릴레이트, 트리메틸아미노에틸메타크릴레이트)공중합체, 에틸셀룰로오스 및 셀룰로오스아세테이트, 지방산 및 지방산 에스테르류, 지방산 알코올류, 왁스류 및 무기물질 등을 선택 사용할 수 있으며, 구체적으로, 지방산 및 지방산 에스테르류로서 글리세릴 팔미토스테아레이트, 글리세릴 스테아레이트, 글리세릴 비헤네이트, 세틸 팔미테이트, 글리세릴 모노 올레이트 및 스테아르산 등 지방산 알코올류로서 세토스테아릴 알코올, 세틸알코올 및 스테아릴알코올 등 왁스류로서 카르나우바왁스, 밀납 및 미결정왁스 등 무기물질로서 탈크, 침강탄산칼슘, 인산일수소칼슘, 산화아연, 산화티탄, 카올린, 벤토나이트, 몬모릴로나이트 및 비검 등 중에서 선택된 1 종 또는 2 종을 선택하여 사용할 수 있다.

상기 친수성 고분자는 당류, 셀룰로오스 유도체, 검류, 단백질류, 폴리비닐 유도체, 폴리메타크릴레이트 공중합체, 폴리에틸렌 유도체 및 카르복시비닐중합체 등을 선택 사용할 수 있으며, 구체적으로 당류로서 덱스트린, 폴리덱스트린, 덱스트란, 펙틴 및 펙틴 유도체, 알긴산염, 폴리갈락투론산, 자일란, 아라비노자일란, 아라비노갈락탄, 전분, 히드록시프로필스타치, 아밀로오스, 아밀로펙틴 등을 선택 사용할 수 있고, 셀룰로오스 유도체로서 히드록시프로필메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스 나트륨, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 아세테이트 숙시네이트, 히드록시에틸메틸셀룰로오스 등을 선택하여 사용할 수 있으며, 검류로서 구아검, 로커스트 콩 검, 트라가칸타, 카라기난, 아카시아검, 아라비아검, 젤란검, 잔탄검 등을 선택 사용할 수 있으며, 단백질류로서 젤라틴, 카제인, 및 제인 등을 선택 사용할 수 있고, 폴리비닐 유도체로서 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈 및 폴리비닐아세탈디에틸아미노아세테이트 등을 선택 사용할 수 있으며, 폴리메타크릴레이트 공중합체로서 폴리(부틸 메타크릴레이트,(2-디메틸아미노에틸)메타크릴레이트, 메틸메타크릴레이트) 공중합체 등을 선택하여 사용할 수 있으며, 폴리에틸렌 유도체로서 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 옥사이드 등을 선택 사용할 수 있으며, 카르복시비닐폴리머로서 카보머를 사용할 수 있다.

한편, 본 발명에 있어서, '대상체'는 특정 질병, 장애 또는 질환에 걸린 포유동물과 같은 온혈 동물을 의미하며, 예를 들어, 인간, 오랑우탄, 침팬지, 마우스, 랫트, 개, 소, 닭, 돼지, 염소, 양 등을 포함하나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다.

또한 '치료'는 증상을 경감시키거나, 증상의 원인을 일시적 또는 영구적으로 제거하거나 증상의 출현 및 상기한 질병, 장애 또는 질환의 진행을 예방 또는 둔화시키는 것을 포함하나 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 약제학적 조성물의 유효성분의 유효량은 질환의 치료를 이루는데 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 예컨대, 성인의 경우, 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 1일 1회 내지 수회 투여 시, 총 25 내지 3000 mg의 용량으로 투여할 수 있다.

본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 메트포르민 염산염과 비교할 때 항암 효과가 훨씬 우수하면서 동등한 수준의 AMPK 활성을 나타내어 메트포르민 염산염이 나타내는 우수한 혈당 강하 효과, 항산화 효과, 지질 저하 작용 및 대사 증후군(metabolic syndrome) 개선 효과를 발휘한다. 또한, 본 발명에 따른 바이구아나이드 화합물의 산 부가염은 메트포르민 염산염에 비해 용해도, 안정성, 비흡습성, 정제 제형으로서의 가공성 등의 물리화학적 성질이 우수하여, 바이구아나이드 화합물의 약제학적으로 허용되는 염으로써 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

[ 실시예 ]

실시예 1: 메트포르민 유리염기의 제조

메트포르민 염산염 (16.6 g, 100 mmol)과 수산화칼륨 (6.00 g, 109 mmol)을 이소프로판올 (50 mL)에 넣고 50 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응혼합물을 실온으로 냉각한 후, 여과하고 이소프로판올 (20 mL),과 아세톤 (20 mL)으로 세척하였다. 여액을 농축한 후 진공 건조하여 흰색 고체의 메트포르민 유리염기 (12.8 g, 99%)를 얻었다.

녹는점 : 119.0~119.5 ℃.

¹H-NMR (600 MHz, D₂O) δ 3.07 (s, 6H).

¹³C-NMR (150 MHz, D₂O) δ(ppm) 161.05, 158.50, 37.35.

실시예 2: 메트포르민 유리염기의 제조

메트포르민 염산염 (3.4 g, 20.5 mmol)과 수산화칼륨 (1.34 g, 23.9 mmol)을 이소프로판올 (50mL)에 넣고 50 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응혼합물을 실온으로 냉각한 후, 여과하고 이소프로판올 (10 mL)로 세척하였다. 여과후 얻은 여액을 정제과정 없이 다음 반응에 사용하였다.

실시예 3: 메트포르민 글라이포세이트염의 제조

실시예 2에서 얻은 메트포르민 유리염기 용액에 글라이포세이트(3.38 g, 20.0 mmol)을 천천히 적가한 후25 ℃에서 1시간 동안 교반 후, 생성된 고체를 여과하여 흰색의 고체 생성물을 얻었다. 생성된 고체를 여과하고 1,4-다이옥산 (50 mL)으로 세척하였다. 여과물을 메탄올을 이용하여 재결정한 후, 열풍 건조하여 흰색 고체의 메트포르민 글라이포세이트염 (2.26 g, 78%)을 얻었다.

녹는점 : 145.0~146.0 ℃.

¹H-NMR (600 MHz, D₂O) δ 3.66 (s, 2H), 3.11 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 2.97 (s, 6H).

¹³C-NMR (150 MHz, D₂O) δ 171.17, 159.98, 158.44, 50.69, 44.74, 37.58.

실시예 4 : 펜포르민 글라이포세이트염의 제조

펜포르민 염산염 (2.25 g, 9.31 mmol)과 수산화칼륨 (671 mg, 11.9 mmol)을 이소프로판올(15ml)에 넣고 50 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응혼합물을 실온으로 냉각한 후, 여과하고 이소프로판올 (10 mL)로 세척하였다. 상기 여액에 글라이포세이트 (1.69 g, 10.0 mmol)를 넣고, 40 ℃에서 5 시간 교반하였다. 생성된 결정을 여과하고, 여과한 고체화합물에 10% 아세톤 수용액 (50 mL)을 가하고 1시간동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 아세톤 (50 mL)으로 세척하였다. 여과물을 열풍 건조하여 흰색 고체의 펜포르민 글라이포세이트염 (2.59 g, 69%)을 얻었다.

¹H-NMR (600 MHz, D₂O) δ 7.35-7.41 (m, 5H), 3.68 (s, 2H), 3.12 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 3.06 (m, 2H), 2.80 (m, 2H).

¹³C-NMR (150 MHz, D₂O) δ 172.12, 170.2, 158.1, 156.3, 139.8, 128.9, 127.5, 50.68, 50.65, 44.9, 35.1.

실시예 5 : 부포르민 글리포세이트염의 제조

부포르민 염산염 (2.12 g, 11.0 mmol)과 수산화칼륨 (741 mg, 13.2 mmol)을 이소프로판올 (20ml)에 넣고 50 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응혼합물을 실온으로 냉각한 후, 여과하고 이소프로판올 (10 mL)로 세척하였다. 상기 여액에 글라이포세이트 (1.69 g, 10.0 mmol)를 넣고, 30 ℃에서 5 시간 교반하였다. 생성된 결정을 여과하고, 여과한 고체화합물에 10% 아세톤 수용액 (50 mL)을 가하고 1시간동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 아세톤 (50 mL)으로 세척하였다. 여과물을 열풍 건조하여 흰색 고체의 펜포르민 글라이포세이트염 (2.34 g, 72%)을 얻었다.

¹H-NMR (600 MHz, D₂O) δ 11.98 (br s, 2H), 8.51 (br s, 2H), 3.49 (s, 2H), 2.91 (m, 2H), 2.64 (s, 2H), 1.59 (m, 2H), 1.33 (m, 2H), 0.95 (m, 2H).

¹³C-NMR (150 MHz, D₂O) δ 175.2, 158.5, 155.4, 54.9, 53.0, 41.6, 32.5, 19.8, 13.8.

[ 제제예 ]

제제예 1: 메트포르민 글라이포세이트염 함유 정제의 제조

메트포르민 글라이포세이트염 450.16g과 미결정셀룰로오스 49.84g을 각각 20호 체로 체과한 후 V형 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 따로 콜리돈 VA64 (BASF, 독일) 20g과 경질무수규산 5g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 5g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 메트포르민 글라이포세이트염 450.16mg 을 함유한 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 10mg의 필름 코팅 층을 형성하여 메트포르민 글라이포세이트염이 함유된 정제를 제조하였다.

제제예 2: 메트포르민 글라이포세이트염 함유 정제의 제조

메트포르민 글라이포세이트염 900.35g과 디칼슘 포스페이트 62.65g을 각각 20호 체로 체과한 후 고속 혼합기에서 3분간 혼합하였다. 따로 포비돈 K-30 20g을 이소프로판올 150g에 가하고 녹여 결합액을 제조하고, 이 결합액을 고속 혼합기에 투여한 후 3분간 연합하였다. 연합된 연합물은 스팀건조기에서 건조한 후 20호 체로 정립하였다. 경질무수규산 10g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 V형 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 마그네슘 7g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 메트포르민 글라이포세이트염 900.35mg 을 함유한 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 20mg의 필름 코팅 층을 형성하여 메트포르민 글라이포세이트염 이 함유된 메트포르민 정제를 제조하였다.

제제예 3: 메트포르민 글라이포세이트염 함유 서방 정제의 제조

메트포르민 글라이포세이트염 450.16g과 히드록시프로필메틸셀룰로오스 2208 (점도 100,000cps) 374.84g을 각각 20호 체로 체과한 후 더블콘 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 따로 히드록시프로필셀룰로오스 15g과 경질무수규산 5g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 5g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 메트포르민 글라이포세이트염 450.16mg을 함유한 서방 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 20mg의 필름 코팅 층을 형성하여 메트포르민 글라이포세이트염이 함유된 서방형 정제를 제조하였다.

제제예 4: 메트포르민 글라이포세이트염 함유 서방 정제의 제조

메트포르민 글라이포세이트염 450.16g, 미결정셀룰로오스 19.84g과 폴리에틸렌옥사이드 (분자량 500만, 다우케미칼, 미국) 300g을 20호체로 체과한 후 더블콘 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 따로 콜리돈 VA64 20g과 경질무수규산 5g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 5g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 메트포르민 글라이포세이트염 450.16mg을 함유한 서방 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 20mg의 필름 코팅 층을 형성하여 메트포르민 글라이포세이트염이 함유된 서방형 정제를 제조하였다.

제제예 5: 메트포르민 글라이포세이트염 함유 캡슐제의 제조

메트포르민 글라이포세이트염 225.08g 및 미결정셀룰로오스 94.92g을 각각 20호 체로 체과한 후 V형 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 경질무수규산 5g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 5g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 캡슐에 충진하여 1캡슐 중 메트포르민 글라이포세이트염 225.08mg을 함유한 캡슐을 제조하였다.

제제예 6: 펜포르민 글라이포세이트염 함유 정제의 제조

펜포르민 글라이포세이트염 154.87g과 미결정셀룰로오스 58.13g을 각각 20호 체로 체과한 후 V형 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 따로 콜리돈 VA64 (BASF, 독일) 5g과 경질무수규산 1g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 1g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 펜포르민 글라이포세이트염 154.87mg 을 함유한 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 5mg의 필름 코팅 층을 형성하여 펜포르민 글라이포세이트염이 함유된 정제를 제조하였다.

제제예 7: 펜포르민 글라이포세이트염 함유 정제의 제조

펜포르민 글라이포세이트염 77.43g과 디칼슘 포스페이트 130.57g을 각각 20호 체로 체과한 후 고속 혼합기에서 3분간 혼합하였다. 따로 포비돈 K-30 5g을 이소프로판올 30g에 가하고 녹여 결합액을 제조하고, 이 결합액을 고속 혼합기에 투여한 후 3분간 연합하였다. 연합된 연합물은 스팀건조기에서 건조한 후 20호 체로 정립하였다. 크로스카멜로스 나트륨 5g 및 경질무수규산 1g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 V형 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 마그네슘 1g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 펜포르민 글라이포세이트염 77.43mg 을 함유한 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 5mg의 필름 코팅 층을 형성하여 펜포르민 글라이포세이트염이 함유된 정제를 제조하였다.

제제예 8: 펜포르민 글라이포세이트염 함유 서방 캡슐의 제조

펜포르민 글라이포세이트염 38.72g을 미결정셀룰로오스36.28g을 각각 20호 체로 체과한 후 V형 혼합기에서 60분간 혼합하여 혼합분을 제조하였다. 따로 포비돈 K-30 6g을 정제수 60g에 가하고 녹여 결합액을 제조하였다. 결정성 수크로오스 60g 을 CF 과립기에 투입한 후 결합액을 분사하면서 펜포르민과 미결정셀룰로오스의 혼합분을 투입하여 펠렛을 제조하였으며, 제조된 펠렛은 수분이 2% 이하가 되도록 건조하였다.

따로 아세톤 40g과 이소프로판올 60g에 유드라짓 RL (에보닉사) 15g, 탈크 1.5g, 트리에틸시트레이트 1.5g을 용해 및 분산시켜서 서방성 코팅액을 제조한 후 유동층코팅기를 이용하여 건조된 펠렛을 코팅하였다.

최종적으로 스테아르산 마그네슘 1g을 35호 체로 체과하여 상기 코팅된 펠렛에 가하여 1분간 혼합하였다.

이후 히드록시프로필메틸셀룰로오스 캡슐에 상기 펠렛을 충진하여 캡슐 당 38.72mg의 펜포르민 글라이포세이트염이 함유된 서방형 캡슐을 제조하였다.

제제예 9: 부포르민 글라이포세이트염 함유 정제의 제조

부포르민 글라이포세이트염 84.24g과 미결정셀룰로오스 102.76g을 각각 20호 체로 체과한 후 V형 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 따로 콜리돈 VA64 (BASF, 독일) 6g, 전분 글리콜산 나트륨 4g 및 경질무수규산 2g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 1g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 부포르민 글라이포세이트염 84.24mg 을 함유한 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 5mg의 필름 코팅 층을 형성하여 부포르민 글라이포세이트염이 함유된 정제를 제조하였다.

제제예 10: 부포르민 글라이포세이트염 함유 정제의 제조

부포르민 글라이포세이트염 168.48g과 디칼슘 포스페이트 113.52g을 각각 20호 체로 체과한 후 고속 혼합기에서 3분간 혼합하였다. 따로 포비돈 K-30 10g을 이소프로판올 60g에 가하고 녹여 결합액을 제조하고, 이 결합액을 고속 혼합기에 투여한 후 3분간 연합하였다. 연합된 연합물은 스팀건조기에서 건조한 후 20호 체로 정립하였다. 경질무수규산 6g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 V형 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 마그네슘 2g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 부포르민 글라이포세이트염 168.48mg 을 함유한 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 10mg의 필름 코팅 층을 형성하여 부포르민 글라이포세이트염이 함유된 정제를 제조하였다.

제제예 11: 부포르민 글라이포세이트염 함유 서방 정제의 제조

부포르민 글라이포세이트염 168.48g과 히드록시프로필메틸셀룰로오스 2208 (점도 100,000cps) 156.52g을 각각 20호 체로 체과한 후 더블콘 혼합기에서 60분간 혼합하였다. 따로 히드록시프로필셀룰로오스 10g과 경질무수규산 3g을 35호 체에 체과하여 상기 혼합물에 가하고 60분간 혼합하였다. 최종적으로 스테아르산 2g을 35호 체로 체과하여 상기 혼합물에 가하여 3분간 혼합하였다.

이어서 상기 최종혼합 분을 타정하여 1정중 부포르민 글라이포세이트염 168.48mg을 함유한 서방 정제 층을 제조하였으며, 하이코터(SFC-30F, 세종 기계, 한국)로서 오파드라이 OY-C-7000A를 코팅 기제로 하여 정당 10mg의 필름 코팅 층을 형성하여 부포르민 글라이포세이트염이 함유된 서방형 정제를 제조하였다.

[ 실험예 ]

실험예 1: 메트포르민 글라이포세이트염의 암세포 증식 억제 효과 확인

본 발명의 실시예 3에 기술된 방식으로 합성된 메트포르민 글라이포세이트염을 암세포에 처리하여 암세포 증식 억제 효능을 측정하였다. 간략한 실험 방법은 다음과 같다.

인간의 대장암에서 유래한 HCT116 세포를 사용하였고, MTT (3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-ditetrazoliumbromide) 시약을 이용하여 메트포르민 글라이포세이트염에 의한 세포의 생존율 (%)과 세포생장이 50%로 억제되는 농도 (세포생장억제농도, GIC50) 값을 측정하여 메트포르민 글라이포세이트염의 암세포 증식 억제 효과를 확인하였다.

HCT116 (한국세포주은행 구입) 세포를 10 % 송아지 혈청이 포함된 DMEM 배지에서 세포수가 약 5000개가 되도록 96 웰 플레이트 (well plate)에 넣고 약 24 시간 배양하였다. 이후 세포생존율을 확인하기 위해서 실시예 3에서 합성한 메트포르민 글라이포세이트염을 2mM 및 10mM을 각각 상기 배양액에 처리하고 72시간 동안 배양하였다. 또한 GIC50을 구하기 위해서 메트포르민 글라이포세이트염을 10 mM, 2 mM, 0.4 mM, 0.08 mM 그리고 0.016 mM로 상기 배양액에 각각 처리하여 72시간 동안 배양하였다.

메트포르민 글라이포세이트염 처리 후 살아있는 세포를 확인하기 위하여 MTT를 배양액에 첨가하고 3시간 동안 더 배양시켰다. 생성된 포마잔 크리스탈 (formazane crystal)은 DMSO (dimethyl sulfoxide)를 이용하여 용해시킨 후 560 nm에서 용액의 흡광도를 측정하였다.

72시간을 배양한 후 메트포르민 글라이포세이트염을 처리하지 않은 웰 플레이트에서 배양된 세포 개수 대비 메트포르민 글라이포세이트염을 처리한 웰 플레이트에서 생존하는 세포의 개수를 세포 생존율 (%)로 나타내었다. 또한 세포 생존율 곡선을 이용하여 성장이 50 %로 억제되는 메트포민 글라이포세이트염의 농도 (GIC 50) 값을 계산하여 메트포르민 글라이포세이트염의 암세포 증식 억제 효과를 확인하였으며, 그 결과를 표 1 및 표 2에 각각 나타내었다.

또한 메트포르민 글라이포세이트염 대신에 메트포르민 염산염 또는 글라이포세이트를 사용하여 세포 생존율 (%) 및 GIC 50 값을 구하고 그 결과를 표 1 및 표 2에 함께 나타내었다.

세포생존율(%)	HCT116
	2mM	10mM
메트포르민 글라이포세이트염	37.3%	22.4%
메트포르민 염산염	56.7%	47.5%
Glyphosate	100.4%	58.4%

세포성장 억제농도(GIC 50)	HCT116
메트포르민 글라이포세이트염	1.4mM
메트포르민 염산염	3.6mM
Glyphosate	>10mM

상기 표 1의 세포 생존율 및 표 2의 GIC 50 값에서 알 수 있는 바와 같이, HCT116세포를 메트포르민 글라이포세이트염 존재 하에서 배양하는 경우에 메트포르민 염산염 하에서 배양한 경우보다 세포의 생존율이 더 낮았으며, 이로부터 메트포르민 글라이포세이트염이 메트포르민 염산염보다 암세포 특히, 대장암 세포의 생존을 효과적으로 억제하는 것을 알 수 있었다.

또한 표 2의 GIC 50 값에서 알 수 있는 바와 같이, 메트포르민 글라이포세이트염을 1.4 mM 사용하는 경우 HCT116 세포의 생장을 50 % 억제할 수 있는 반면, 메트포르민 염산염은 3.6 mM을 처리해야 세포의 생장을 50 % 억제할 수 있었다. 따라서 메트포르민 글라이포세이트염을 메트포르민 염산염보다 적은 양을 사용하여도 대장암에서 유래한 암세포의 생장을 효과적으로 억제할 수 있음을 알 수 있었다.

실험예 2: 메트포르민 글라이포세이트염의 AMPKa 의 활성화 효과 확인

인간 유방암 세포에서 유래한 MCF7 세포를 사용하였고, AMPKα immunoassay kit(Invitrogen, catalog No. KHO0651)를 이용하여 메트포르민 글라이포세이트염에 의한 AMPKα(5'-AMP-activated protein kinase alpha) 활성화 효과를 확인하였다.

MCF7 세포를 10% 송아지 혈청이 포함된 DMEM 배지에서 배양하고 세포수가 약 5X10⁵개가 되도록 6웰 플레이트에 넣은 후, 5% CO²가 공급되는 배양기에서 세포를 배양하였다. 상기 배양액에 상기 실시예에서 합성한 유도체를 10 mM로 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 다음으로 AMPKα immunoassay kit 사용설명서에서 제시하는 방법으로 세포를 용해한 후, 단백질 정량을 통해 20 ug의 세포 용해물을 수득한 후, AMPKα immunoassay kit 사용설명서에서 제시하는 방법에 따라 상기 세포 용해물로부터 AMPKα 트레오닌 172잔기 (Thr172)의 인산화된 정도를 확인하여 그 결과를 얻었다. 메트포르민 글라이포세이트염에 의한 AMPKα 활성화 정도는 메트포르민 글라이포세이트염을 처리하지 않은 상태로 배양된 세포에서의 인산화된 AMPKα 대비, 상기 실시예에서 합성된 메트포르민 글라이포세이트염의 존재 하에서 배양된 세포에서의 인산화된 AMPKα의 정도로 나타내었다.

또한, 대조군으로 메트포르민 염산염을 사용하여 동일한 방법으로 실험하였다.

그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

		0 mM	10 mM
메트포르민 글라이포세이트염	측정값	1.4±0.28 unit/ml	5.4 unit/ml
	비율	1.0	3.9
메트포르민 염산염	측정값	1.40±0.28 unit/ml	4.95±0.64 unit/ml
	비율	1.0	3.5

Claims (13)

1. 하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염:
   [화학식 1]
   

   

   
   상기 식에서,
   R₁ 및 R₂가 모두 메틸이거나, R₁ 및 R₂ 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 부틸; 또는 페닐로 치환된 에틸이며,
   A는 글라이포세이트이다.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   하기 화학식 2의 구조를 갖는 메트포르민 글라이포세이트염인 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염.
   [화학식 2]
   

   
4. 삭제
5. 삭제
6. 제1항에 있어서,
   결정형의 형태로 존재하는 것인 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염.
7. 하기 화학식 5의 바이구아나이드 화합물의 유리염기를 글라이포세이트와 반응시키는 것을 포함하는
   하기 화학식 1의 구조를 갖는 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염의 제조 방법:
   [화학식 5]
   

   

   
   [화학식 1]
   

   

   
   상기 식에서,
   R₁ 및 R₂가 모두 메틸이거나, R₁ 및 R₂ 중 하나는 수소이고, 다른 하나는 부틸; 또는 페닐로 치환된 에틸이며,
   A는 글라이포세이트이다.
8. 제7항에 있어서,
   상기 바이구아나이드 화합물의 유리염기는 1몰당량 당 글라이포세이트 0.5 내지 4몰당량과 반응하는 것인 제조 방법.
9. 삭제
10. 약제학적으로 허용되는 담체 및 제1항, 제3항 또는 제6항에 따른 바이구아나이드 화합물의 글라이포세이트염을 유효성분으로 포함하는 당뇨, 비만, 고혈압, 고지혈증, 지방간, 관상동맥질환, 골다공증, 다낭성 난소증후군, 대사성 증후군, 암, 근육통, 근육세포 손상 및 횡문근 융해로 구성되는 군으로부터 선택되는 질환의 치료 또는 예방을 위한 약제학적 조성물:
11. 제10항에 있어서,
    상기 암은 자궁암, 유방암, 위암, 뇌암, 직장암, 대장암, 폐암, 피부암, 혈액암, 간암, 췌장암, 전립선암 및 갑상선암으로 구성되는 군으로부터 선택되는 암인 약제학적 조성물.
12. 제10항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 정제, 캡슐제, 환제, 과립제, 산제, 주사제 또는 액제의 형태로 제제화되는 것인 약제학적 조성물.
13. 제10항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 서방성 정제 또는 서방성 캡슐제의 형태로 제제화되는 것인 약제학적 조성물.