KR100576999B1 - 살모넬라의 성장을 억제하는 신규 미생물 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 우수한 살모넬라 생장 억제효과를 갖는 신규의 미생물인 락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201(KACC 91084) 및 이의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)은 항생제인 엠피실린 10㎍/㎖에 상당한 살모넬라 성장 억제 효과를 가지므로, 항생제 대체물질로서 사용될 수 있고, 아울러, 생균제로 대표적으로 사용되는 유산균의 일종이므로, 생균제로 사용될 수 있다.

항생제, 락토바실러스 부시네리, 생균제, 사료 첨가제, 살모넬라

Description

살모넬라의 성장을 억제하는 신규 미생물 및 이의 용도{New microorganism for inhibiting the growth of Salmonella typhimurium and it's use}

도 1은 본 발명의 균주를 선발하기 위하여, 목초, 유제품 등에서 분리한 균주의 배양액 및 중화액의 살모넬라 억제활성을 나타낸 도면으로, 선은 균주 배양액의 pH를 나타내고, 붉은 막대는 균주 배양액의 억제활성을 나타내며, 노랑 막대는 균주 배양 중화액의 억제활성을 나타낸다.

도 2는 CSII 12-1 균주의 형태적 특성을 나타내는 도면이다.

도 3은 엠피실린(a)과 락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201(KACC 91084)(b)의 살모넬라 억제효과를 비교하기 위한 사진이다.

도 4는 본 발명의 균주인 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)와 살모넬라를 혼합배양하는 경우, 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)의 균수(a) 및 살모넬라 균수(b)의 변화를 나타내는 도면으로, 선은 배양액의 pH를 나타낸다.

본 발명은 항생제 대체물질 및 생균제로 사용될 수 있는, 우수한 살모넬라 성장 억제효과를 갖는 신규의 미생물 및 이의 용도에 관한 것이다.

일반적으로 가축의 성장을 촉진하고, 설사 등의 각종 질병을 예방, 치료하기 위해 축산업계에서는 사료에 항생제를 첨가하여 사용하고 있다. 그러나, 사료에 투입된 항생제는 2내지 3달이 지나야 완전히 소화 배출되는데, 이러한 휴약기간 전에 출하될 경우 가축내 잔류 항생제로 인하여 그 축산물을 섭취한 인체의 면역력을 저하시키는 문제점이 있다. 또한, 항생제에 대한 내성을 갖는 세균에서 내성을 함유한 유전물질인 플라스미드의 접합이라는 전달에 의해 다른 세균으로 전이될 수 있으며, 이러한 항생제 내성 세균의 증가는 인체에 전이될 수 있는 위험성을 갖고 있다.

이에, 최근의 소비자들은 사료에 대한 항생제의 첨가를 제한하거나 사용을 금지시켜 줄 것을 정부에 요구하고 있으며, 실제로, 유럽연합의 경우에는 사료에 대한 항생제 사용을 금지시키는 등, 전 세계적으로 가축에 대한 항생물질 이용의 규제가 심화되고 있고, 따라서 항생제를 대체할 수 있는 새로운 사료 첨가제에 대한 연구, 개발이 활발히 이루어지고 있는 실정이다.

따라서, 본 발명자들도 항생제를 대체할 수 있는 새로운 사료 첨가제를 개발하고자 연구를 거듭한 결과, 본 발명자들이 분리, 동정한 락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201이 항생제인 엠피실린 10㎍/㎖에 상당하는 살모넬라에 대한 성장 억제 효과를 나타내므로 항생제를 대체할 수 있음을 발견하였고, 아울러, 이 균주가 대표적인 생균제의 하나인 유산균의 일종이기 때문에 생균제로도 사용될 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 항생제 대체물질 및 생균제로 사용될 수 있는 신규의 미생물 락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기한 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201을 유효성분으로 함유하는 사료 첨가제를 제공하는 것이다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

본 발명은 닭, 오리 등의 가금이나 돼지 소 등의 가축에 감염되어, 이를 섭취한 인간에게 설사, 발열, 경련 등을 유발시키는 살모넬라에 대하여 우수한 성장억제 효과를 나타내는 신규의 미생물 락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201에 관한 것이다.

상기한 본 발명의 균주는 목초, 유제품 등에서 얻어진 100 종의 균주들 중, 살모넬라에 대하여 우수한 억제 활성을 나타내면서, 유산균에 속하는 균주로서, 이 균주를 동정한 결과, 락토바실러스 부시네리에 속하는 신규한 균주임을 확인하였다. 이에 이 균주를 "락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201"로 명명하고, 2003년 11월 11일자로 농업생명공학연구원내 농용미생물보존센터에 기탁하여, 수탁번호 KACC 91084를 부여받았다.

본 발명의 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)은 살모넬라에 대한 생육 억제 활성이 항생제인 엠피실린 10㎍/㎖에 상당하므로, 항생제 대체제로서 닭, 오리, 거위 등의 가금이나 돼지, 소 등의 가축의 사료에 첨가될 수 있다.

또한, 본 발명의 균주는 유산균의 일종이므로, 사료에 첨가되어 가축에 급여시 가축의 장내에서 유익한 균은 증식시키고, 유해균의 증식은 억제하여 장내 미생물의 균총을 균형 있게 유지함으로써 숙주에 유익한 영향을 미치는 살아 있는 미생물을 의미하는 생균제로서 작용할 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명을 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들예로만 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 균주의 분리 및 동정

(1-1) 호밀 목초, 옥수수 목초, 유제품 등에서 분리한 균주 100종에 대하여 한천배지 확산법을 이용하여 살모넬라 억제 활성을 측정하였다. 즉, 멸균된 금속환(8㎜)을 페트리디쉬 위에 올려놓고, 10⁶cfu/㎖의 살모넬라(Salmonella typhimurium IFO12529)가 접종된 트립틱 소이 아가(tryptic soy agar; 이하 "TSA"라 함)를 부어 굳힌 후, 형성된 웰에 살모넬라가 접종되지 않은 TSA를 한두 방울 떨어뜨려 바닥을 봉하고 굳혔다. 여기에, 원심분리 및 여과에 의해 세포를 제거한 각각의 균주들의 배양액 또는 중화한 배양액 100㎕를 분주하고, 이를 냉장고에서 하룻밤 방치한 후, 37℃에서 배양하여 억제환이 형성되도록 하였다. 형성된 억제환의 지름을 측정하고, 측정된 지름에서 금속환의 지름을 차감하여 억제활성으로 표시하여, 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1로부터, 호밀 목초로부터 분리한 균주인 C-11, 옥수수 목초로부터 분리 한 균주인 CSⅡ 12-1 및 CSⅡ 12-2가 가장 살모넬라에 대한 억제활성이 우수하다는 것을 알 수 있었다.

(1-2) 상기 세 균주들의 생화학적 특성을 API 50CHL 키트(bioMerieux, France)를 사용하여 측정하고, 그 결과를 표 1에 나타내었다.

(1-3) 이어서, 상기 CSⅡ12-1 균주를 그램 염색한 후, 형태적 특성을 전자 현미경(SEM)으로 측정하여, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

상기한 결과들로부터, CSⅡ 12-1 균주는 락토바실러스 부시네리로 동정되었다. 따라서, 상기 CSⅡ 12-1 균주를 "락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201"로 명명하고, 2003년 11월 11일자로 농업생명공학연구원내 농용미생물보존센터에 기탁하여, 수탁번호 KACC 91084를 부여받았다.

[실시예 2] 살모넬라 억제 효과

(2-1) 상기 실시예 1에서 측정된 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)의 억제효과를 항생제인 엠피실린의 농도(10, 50, 100, 500㎍/㎖, 각각 100㎕)에 따른 억제효과와 비교하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.

도 3으로부터 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)의 억제효과는 엠피실린 10㎍/㎖에 상당한 효과를 나타낸다는 것을 알 수 있었다.

(2-2) 또한, 상기 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)를 살모넬라와 혼합배양한 후, 시간의 경과에 따른 각각의 균수를 계수하여 억제효과를 측정하고, 그 결과를 도 4에 나타내었다.

즉, 일반적으로 유산균 배양에 많이 이용되는 MRS 배지와 살모넬라 배양에 많이 이용되는 트립틱 소이 브로쓰(Tryptic soy broth; 이하, "TSB"라 함)를 변형한 3가지 배지(MRS, MRS+2% 탈지유 분말, TSB+1% 덱스트로스+0.1% 효모 추출액)에 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201(KACC 91084)와 살모넬라를 각각 접종한 후 배양하면서 4시간 마다 시료를 취하여 각각의 균수를 계수하였다. 이 때 락토바실러스 부시네리 NLRI 1201의 균수는 0.02% 소듐아지드가 함유된 MRS 아가에서, 살모넬라는 비스무트 설파이트 아가에서 배양하여 계수하였고, 그 결과를 도 4에 나타내었 다.

도 4로부터 MRS 배지와 MRS에 2%의 탈지유 분말을 첨가한 배지에서는 12시간부터 살모넬라가 검출되지 않았으나, TSB에 1%의 덱스트로스와 0.1%의 효모 추출액을 첨가한 배지에서는 16시간부터 살모넬라가 검출되지 않는 다는 것을 알 수 있었다.

상기에서 설명한 바와 같이, 락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI 1201(KACC 91084)는 살로넬라에 대한 억제 효과가 항생제인 엠피실린 10㎍/㎖에 상당하므로, 항생제 대체물질로서 사료, 화장품, 의약품 등에 사용될 수 있다.

아울러, 본 발명의 균주는 대표적인 생균제인 유산균의 일종이기 때문에, 생균제로도 사용될 수 있다.

이상과 같이 본 발명은 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 본 발명은 상기의 실시예에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이러한 기재로부터 다양한 수정 및 변형이 가능함은 자명하다고 할 것이다.

Claims (4)

1. 살모넬라 생육 억제 효과가 있는 락토바실러스 부시네리(Lactobacillus buchneri) NLRI(KACC 91084).
2. 락토바실러스 부시네리 NLRI(KACC 91084)를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 사료 첨가제.
3. 삭제
4. 삭제

Images