KR100376954B1 - 장에서집락화하는유산간균 - Google Patents
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Abstract
인체 장 점막에 생체내 정착될 수 있는 능력을 갖는 신규한 락토바실러스 플란타룸 균주(DSM 기탁 번호 9843), 및 상기 균주를 통상의 담체와 함께 함유하는 위장관의 세균 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물이 본 발명에 따라 제공된다.
Description
본 발명은 경구 섭취후 생체내 장 점막상에 집락화하여 정착하는 능력을 갖는 락토바실러스 균주, 및 세균 감염증의 예방 또는 치료를 위한 그의 용도, 특히 이 락토바실러스 균주에 의해 발효된 오우트밀 기재의 영양 용액을 포함하는 조성물 형태의 상기 균주의 용도에 관한 것이다.
많은 사람들이 교란된 장내 미생물총(叢)을 갖는다. 즉, 유용 장내 세균과 유해 장내 세균의 균형이 깨어져 있다. 여러 가지 요인, 그 중에서도 스트레스, 담즙산염의 존재, 음식물 등이 세균총에 영향을 준다. 그러나, 가장 중요한 것은 현대의 항생 물질 치료가 장기간 동안 정상적 미생물총을 파괴하여 정상적 발효 과정을 제거할 수 있다는 것이다.
락토바실러스가 장 점막에 유익한 영향을 끼친다는 것은 오늘날 널리 인정되어 있다. 그러나 이에 어떤 미생물이 관련되는지와 장내 생태계에 대하여는 불분명한 점들이 많다.
오늘날 대부분의 통상적인 식품에 사용되는 락토바실러스외 결정적인 약점은 이러한 미생물이 위 및 십이지장을 통과하는 동안 매우 낮은 생존률을 갖는다는 것이다. 이러한 결점을 극복하기 위하여 호산성균을 이용한 산성 유제품이 개발되어 왔다. 유럽 특허 공개(A2) 0 199 535호는 사람의 대변으로부터의 얻은 락토바실러스 애씨도필러스(Lactobacillus acidophilus, ATCC 기탁 번호 제53 103호)의 생물학적으로 순수한 배양물을 기술하고 있는데, 이는 시험관내 시험에서 점막 세포에 부착될 수 있는 것으로 기술되어 있다. 엘. 애씨도필러스는 위장관의 상부를 잘 통해 나가지만 생체내에서의 부착성은 입증된 바 없다.
오늘날 시판되고 있는 락토바실러스 균주는 무엇보다도 통상의 1차 제품, 예를 들어, 우유에서 증식할 수 있는가에 대하여 선택된 것이다. 어떤 균주가 임의의 유익한 영향을 나타내기 위해서는, 장내에서 정착할 수 있고 기존의 미생물총과 경쟁할 수 있어야 함이 선결 조건이다.
국제 출원 공개 제WO 93/01823호는 인체내 장 점막에서 집락화되어 정착될 수 있는 능력을 갖는 락토바실러스 균주의 분리 방법, 이러한 방법으로 얻어진 균주, 특히 부다페스트 조약하에 국제 기탁 기관인 DSM (Germany, Braunschweig 소재의 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen and Zellkulturen GmbH)에 1991년 7월 2일자로 기탁된 두 균주, 즉 락토바실러스 플란타륨 299 (Lactobacillus plantarum299, DSM 6596) 및 락토바실러스 카제이 아종 람노수스 271(Lactabacillus casei ssp. rhannosus271, DSM 6594)에 관한 것이다. 이 출원은 또한 예를 들면 오우트밀 기재의 담체와 함께 이들 중 어느 균주를 포함하는, 위장관내 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 생체내 인체 장 점막에 집락화할 수 있는 능력이 있는 락토바실러스 균주, 즉 1995년 3월 16일자로 상기한 국제 기탁기관 DSM에 기탁된 락토바실러스 플란타룸 299v (DSM 9843)에 관한 것이다.
엘. 플란타룸 299v는 상기 국제 출원 공개 제WO 93/01823호에 기재된 방법으로 분리하였으며, 상기 문헌에 공지된 균주 엘. 플란타룸 299와 매우 유사하다. 그러나 본 발명의 균주는 인체내에서의 정착 시험에서 공지된 균주보다 놀라울 정도로 월등한 것으로 나타났다.
본 발명은 또한 통상의 담체와 함께 균주 락토바실러스 플란타룸 299v을 포함하는, 위장관내 감염은 예방 또는 치료하기 위한 조성물에 관한 것이다.
통상의 담체란, 예를 들어, 세균에 의해 발효되는 생리학적으로 허용되는 기질뿐 아니라 각종 식품, 특히, 전분이나 우유를 기재로 한 것 및 생리식염수 또는 물과 같은 불활성 고체 또는 액체 물질이다. 적절한 기질은 위장관내에서 재흡수되지 않으며 락토바실러스로 발효되어 단쇄 지방산을 형성하는 액체 또는 고체 섬유를 함유하여야 한다. 적절한 전분 함유 기질의 예로서 귀리, 밀, 옥수수 등의 곡류, 감자와 같은 근채류 및 그린 바나나와 같은 특정 과일을 언급할 수 있다.
우수한 영양가를 갖기도 하는 본 발명에 따른 바람직한 조성물은 락토바실러스 균주에 의해 발효된 오우트밀 기재의 영양 용액이다. 곡류인 귀리(오우트)는 여러면에서 발효에 좋은 기질로서 판명되었다. 즉, 귀리는 단백질, 탄수화물, 지방,식이섬유 및 소위 β-글루칸으로 불리는 수용성 섬유가 풍부하다. 또한, 귀리 또는 오우트밀 지방에는 계면 활성 포스포리피드가 다량 함유되어 있는데, 이는 위점막 차단제("부식 억제제")로서 기능하여 점막을 보호하는 역할을 한다. 마지막으로, 귀리 단백질의 아미노산 조성은 인체가 요구하는 아미노산 조성에 크게 가깝다.
국제 출원 공개 제WO 89/08405호에서 영양 조성물은 장 공급에 적절한 것으로 기술하고 있는데, 이는 오우트밀은 α-아밀라아제, 가능하게는 프로테아제, 및 β-글루카나제로 효소적 분해하고, 열처리하고, 장에 자발적으로 부착하는 능력을 갖는 락토바실러스로 발효시키는 것의 조합에 의해 얻어진다. 상기 특허 출원에 기재된 영양 조성물은 그 발명에 따른 락토바실러스 균주와 조합된 것으로, 대수술후 정상적 치료를 받고 있는 환자에게, 세심한 주의를 요하는 질병 또는 체내기관 파열 환자의 특별한 치료 및 다른 질병 예를 들어 궤양성 대장염의 치료를 위하여 경구, 장 또는 직장 투여하기에 월등한 조성물이다. 다른 세균의 증식을 중지시키기 위해서 발효시 pH 값을 급히 떨어뜨리는 것 또한 필수적이다.
장내에서 집락을 형성하거나 부착할 수 있는 능력을 갖는 락토바실러스를 투여하면 다른 세균총이 장내에 집락화하는 것을 억제하며, 복부 수술후 합병증과 같은 세균 감염과 관련된 패혈증의 위험을 감소시킬 수 있다는 것이 알려져 있다. 이러한 치료는 오늘날 항생 물질의 형태로 사용되고 있는 통상적인 치료 만큼 효과적인 것으로 보인다. 따라서, 장 수술을 받을 환자는 항생 물질보다는 락토바실러스로 예비치료를 받는 것이 합리적일 것 같다. 이는 정상적 장내 미생물총을 파괴하지 않으면서 2차 부작용 효과가 적고 또한 보다 저렴한 치료법이 정착될 수 있음을의미한다.
본 발명은 외과적 수술과 관련된 세균 감염증의 예방 또는 치료를 위해 항생물질을 사용하는 대신 본 발명에 따른 락토바실러스 플란타룸 299v에 의해 발효된 영양 조성물을 사용하는 것에 관한 것이기도 한다.
본 발명에 따른 조성물은 임의의 적절한 경로, 바람직하게는 경구 또는 직장내 예를 들어 관장제의 형태로 투여할 수 있다. 조성물은 또한 위를 경유하거나 또는 직접 장 내로 삽입된 카테테르를 통해 장에 투여될 수도 있다. 시험에 의하면, 예를 들어, 오우트밀 죽 또는 β-글루칸 형태의 식이 섬유가 공급되는 경우 이러한 효과가 개선될 수 있음을 보여 주었다. 처치는 1 내지 2주간 1일 1회 내지 수회 수행되어야 한다.
균주가 장내에 집락화하는 능력은 바람직하게는 경구 투여에 이어서, 투여를 완결한 후 적어도 10일 후에 장 점막 상에서의 집락 형성을 입증하여 시험한다.
분리된 균주의 선별을 보완하려면, 집락화 시험 전후 여러 기능적 및 기술적 특성, 예를 들어, 담즙 저항성, pH 저항성, 요구되는 기질 (바람직하게는 오우트밀)의 발효능, 향미성분 생산능, 동결 건조에 대한 저항성, 항생제 저항성 등을 평가할 수 있다.
위장관을 통과하기 위해서는, 선택된 균주는 pH 1.0에서 30분 동안 생존 가능하여야 하며, 0.1% 담즙 존재하에 증식 가능하여야 한다.
인체로부터 락토바실러스 플란타룸 299v의 분리
인체 장 점막상에서 집락화되어 정착되는 능력을 갖는 균주를 분리하기 위해서, 국제 출원 공개 제WO93/01823호에 기술된 바와 같이, 인체 점막으로부터 락토바실러스 균주를 샘플화하였다. 결장으로부터 장경법에 의해 생검 조직을 취하고, 소장(공장 및 회장)으로부터 장 점막 조각을 외과적 수술시에 제거하였다. 점막 샘플을 특수 배지(0.9 % NaCl, 0.1% 펩톤, 0.1% 트윈 80 및 0.02% 시스틴; 모든 값은 중량/부피%이다)에 즉시 넣고, 초음파 조중에서 2분간 균질화시킨 후 로고사 아가(Rogosa agar, Difco Laboratories, Detroit Michigan, USA) 상에 놓기 전 1분 동안 교반하였다. 플레이트를 2일 동안 37 ℃에서 혐기적으로 배양 (Gas Pak Anaerobic System, BBL)하였다. 1 내지 3개의 집락을 각 플레이트로부터 무작위로 뽑아서 로고사 아가 상에서 5 내지 9회 순수 배양물상에서 배양하고, -80 ℃에서 동결 완충액 중 농밀 배양물로서 유지한다. 약 61개의 상이한 개체로부터 총 209종의 락토바실러스 균주를 분리하였다. 모든 분리물을 API(Montalieu Verceu, France)가 시판하는 시판용 시험 키트인 API 50 CH를 이용하여 49개의 상이한 탄수화물을 발효하는 능력에 대한 특징을 규명하였다. 소장과 대장 사이의 락토바실러스총의 조성에서 의미있는 차이는 관찰되지 않았다.
상이한 그룹으로부터의 대표적 균주를 pH 저항성, 담즙 존재하의 중식능 및 오우토밀 죽의 발효능에 대하여 평가하였다.
pH 저항성은 2 ml의 포스페이트 완충액(pH 1.0)에 0.1 ml의 세균 현탁액(로고사 브로쓰에서 배양되어 원심 분리 및 생리적 염 용액중에 재현탁됨, 109CFU/ml)을 가하여 시험하였다. 30분후 로고사 아가 플레이트에 접종하였으며, 37 ℃에서 3일간 항온배양시킨 후 증식이 육안으로 확인되면, 시험은 양성인 것으로 판정되었다. 시험된 균주중 단지 몇 종만이 이 시험을 통과하였다.
담즙 존재하의 증식은 락토바실러스 분리물을 로고사 아가 플레이트중 각각 0.1% 및 0.15%의 비프 담즙의 존재하에 37℃에서 3일간 혐기적으로 항온배양시켜 증식함으로써 시험했다. 약 80%의 균주가 0.1% 담즙 존재하에 증식할 수 있었던 반면, 0.15% 담즙 존재하에서는 단지 18% 많이 증식할 수 있었다.
이러한 시험의 결과, 이후의 시험을 위하여 다음의 19개 상이한 락토바실러스 균주가 선택되었다: 엘. 살리바리우스 132 (L. salivarius132), 엘. 살리바리우스 280, 엘. 루터리 108 (L. reuteri108), 엘. 루터리 47, 엘. 카제이 아종 슈도플란타룸 136, 엘. 젠세니(L. jenseni), 엘. 가세리 140(L. gasseri140), 엘. 젠세니-엘. 가세리 292, 엘. 애씨도필러스-엘. 크리스파투스 308, 엘. 플란타룸 283, 엘-플란타룸 299, 엘. 플란타룸 299v, 엘. 카제이 아종 람노수스 98, 엘. 카제이 아종 람노수스 271, 엘. 알길리스 294, 락토바실러스 아종 균주 96, 락토바실러스 종 균주 99, 락토바실러스 종 균주 138, 락토바실러스 종 균주 227 및 락토바실러스 종 균주 282.
균주 표시는 문헌[Johsnsson et al., Appl. Environ. Microbiol. vol, 59, No. 1., 15-20, 1993]에서 사용된 것을 참조할 수 있다.
인체 장에서 19개의 선택된 균주의 집락화 능력을 평가하기 위하여, 발효된 오우트밀 수우프에 상기 선택된 균주를 넣은 혼합물을 13명의 건강한 지원자에게경구 투여하였다. 1일 섭취량은 각 균주에 대해 약 5 x 108CFU였으며, 투여는 10일간 계속되었다. 투여가 시작되기 1일전, 투여가 종결된 후 1일 및 11일후에 상부 공장 및 러스 직장에서 생검 조직을 채취하였다. 무작위로 뽑은 락토바실 분리물(로고사 플레이트당 10개)를 API 50 CH 시험을 통해 표현형에 따라 동정하고, 문헌[S, International Jonrnal of Systematic Bacteriology, 40:189-193, 1990]의 방법에 따른 염색체 DNA의 제한 효소 분석 결과 및 플라스미드 유형에 의해 유전형에 따라 동정하였다. 결과는 표 1에 요약되어 있다.
표 1
유산 발효된 오우트밀 수우프중 19개의 상이한 락토바실러스 균주를 넣은 혼합물의 경구 투여 종결 11일 후 13명의 지원자의 장 점막으로부터의 채취한 생검조직에서 발견된 락토바실러스 균주
투여가 종결된지 11일후 투여된 균주 중 다섯가지 균주를 발견할 수 있었으며, 이는 투여가 중지된 1일 후에 발견된 것과 동일하였다. 모든 회수된 균주들은 직장 및 공장에서 분리될 수 있었으나, 반드시 동일한 개체에서만은 아니었다. 분리 과정 때문에 락토바실러스층의 우세한 위치에 있는 균주만이 회수될 것으로 기대된다는 점, 즉, 계수 가능한 로고사 플레이트로부터 뽑은 균주들만 회수될 것으로 기대된다는 것이 강조되어야 할 것이다.
투여 종결 11일 후 재분리된 균주들은 점막상에서 소장에 있어서는 약 3 x 103내지 105CFU/g (점막)의 농도로, 대장에 있어서는 103내지 3 x 107CFU/g (점막)의 농도로 발견되었다.
락토바실러스 균주 299v에 대한 설명
건강한 인체 장 점막 및 신 반죽으로부터 분리된 균주 299v는 도이췌 잠릉 폰미크로오가니스멘 운트 첼쿨투렌 게엠베하 (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH)에 1995년 3월 16일자로, 기탁 번호 DSM 9843호로 기탁되었다.
표현형 설명
균주 299v는 pH 5.5의 로고사 아가상에서 증식하는 그램 양성, 카탈라제 음성 간균으로 구성된다. 이 균주가 상이한 탄수화물을 발효하는 능력은 표 2에 나타나있다. 시험은 제조자의 지시에 따라 API 50 CH를 이용하여 수행되었다.
표 2
상이한 탄수화물로부터 산을 형성하는 능력
표현형적으로 균주 299v는 락토바실러스 플란타룸으로 동정될 수 있다 (엘. 플란타룸 ATCC 14917T에 대한 시험 패턴으로부터 단지 라피노오스만이 이탈되었다. 이 균주는 엘. 플란타룸에 대한 타입 균주, 즉, 이 종을 정의하는 균주이다).
유전자형 설명
균주를 제한 엔도뉴클레아제 분석(REA, 상기등의 문헌에 따름)을 통해 EcoRI로 절단하는 결과 관련하여 염색체 DNA의 절단 패턴에 관하여 검사하였다. REA-패턴이란 하기한 방법에 따라 제한 효소로 절단된 DNA의 아가 겔상에서의전기 영동에 의해 형성된 패턴을 의미한다. 균주를 REA 패턴에 의해 특성화함으로써 이전에는 가능할 수 없었던 사용된 분리물을 동정할 수 있다. REA-패턴에 차이를 보이는 밀접하게 연관된 락토바실러스는 장 상피세포에 부착하는 능력에 있어서도 차이를 나타냈다. REA는 다음과 같이 도식적으로 설명될 수 있다.
(1) 연구에 관여된 균주로부터 염색체 DNA를 분리한다.
(2) DNA를 제한 효소로 절단한다.
(3) 절단된 DNA 단편을 아가로오스 겔 전기 영동에 의해 크기별로 분리한다.
(4) 상이한 균주들의 밴드 패턴들를 등록하고 레이저 덴시토미터 및 관련 프로그램으로 해석한다. 균주들간 REA-패턴에 관한 차이는 주 성분 분석에 의해 수학적으로 나타낼 수 있다.
제1도는 락토바실러스 플란타룸 299v 및 락토바실러스 플란타룸 299의 REA-패턴을 나타낸다. 레인 s는 표준 고분자량 DNA 마커(AEH, BRL, Bethesda Research Laboratories, Life Technologies, Inc.)를 나타낸다. 균주 299v는 통상의 표현형 시험으로는 균주 299와 구별될 수 없다. 유전적으로도 균주 299 및 299v는 매우 가깝다.
플라스미드의 내용물에 관하여도 검사를 수행하였다 [참조 :S. Molin G &S, Systematic and Applied Microbiology 11:320-325, 1989]. 균주 299v는 크기가 각각 4MDal, 9MDal, 20MDal 및 35 MDal인 4개의 플라스미드를 함유한다.
락토바실러스 299v의 배양
- -81 ℃ 냉동기로부터의 접종물을 50 ml의 락토바실러스 배양 배지(LCM, Efthymiou & Hansen, J. Infect, Dis., 110: 258-267, 1962) 또는 로고사에 가한다.
- 이를 37 ℃에서 약 40시간 동안 배양한다.
- 50 ml를 500 ml LCM에 접종한다.
- 이를 37 ℃에서 약 40시간 동안 배양한다.
- 500 ml를 5 l 내로 접종한다.
- 이를 37 ℃에서 약 25 내지 30시간 동안 배양한다.
- 10,000 rpm에서 10분 동안 원심 분리한다.
- 생리적 염 용액 중에서 1회 세척한다.
- 약 1 l의 생리적 염 용액 중에 펠릿를 용해시킨다.
이 양은 400 내지 500 l의 오우트밀 죽에 충분한 것으로 보인다. 배양 배지는 최적화되지 않는다. 로고사는 LCM 보다 더 효과적이었는데, 이는 그의 완충 기능이 더 좋았기 때문인 것으로 보인다. LCM에 2% 글루코오스를 가하였다. 다른 락토바실러스 균주를 생산하는데 동일한 방법을 사용할 수 있다.
오우트밀 죽의 제조
발효 오우트밀 죽을 3단계로 만들었다.
(i) 1295 g의 오우트밀(MP-450, Nord-Mills,단백질 함량 14.2% 및 회분 함량 2.1 %), 129.5 g의 효소 혼합물 (Nord Malt,) 및 5390 g의수돗물을 혼합하고 서서히 교반하면서 95 ℃까지 가열하였다. 오우트밀 죽을 50 ℃로 냉각하고, 1% β-글루카나제(중량/부피)를 가하고 (GV-L; Grindsted Products A/S, Braband, Denmark), 50 ℃에서 2시간 동안 배양하였다.
(ii) 죽을 신선한 락토바실러스로 접종하고, 37 ℃에서 15 내지 20시간 동안 발효시켰다. pH는 3.4 내지 3.9였다.
(iii) 발효된 죽을 동결 건조시켰다. 혼합물을 20% (w/w) 대두분 (단백질 51%, 회분 함량 5.5%, 지방 1%)으로 보충하였다. 영양이 풍부한 혼합물은 2x107CFU/g을 함유하였으며, -18℃에서 보관되었다. 상기와 같은 방법으로 비-발효된 오우트밀 죽을 발효 과정없이 제조하였다.
발효에 의해 오우트밀 죽에 풍미를 부여하는 능력은 상이한 균주에 의해 발효된 오우트밀 죽을 평가하는 4명의 전문가로 구성된 전문가 패널에 의해 평가하였다. 풍미는 5에서부터 1까지 단계별 점수로 평가하였으며, 5는 "매우 양호함"을 의미하고, 1은 "불쾌취"를 의미한다. 균주 락토바실러스 플란타룸 299v에 대한 평가 점수는 5였다.
제1도는 두 균주 락토바실러스 플란타룸 299v 및 299의 REA-패턴을 나타낸 사진.
Claims (4)
- 인체 장 점막에 생체내 집락화하는 능력을 갖는 락토바실러스 균주인 락토바실러스 플란타룸 299v (DSM 9843).
- 통상의 담체와 함께 균주 락토바실러스 플란타룸 299v를 함유하는, 위장관의 감염을 예방 또는 치료하기 위한 조성물.
- 제2항에 있어서, 락토바실러스 균주에 의해 발효된 오우트밀 기재 영양 용액인, 경구, 장내 또는 직장 투여를 위한 조성물.
- 기질을 제1항에 따른 락토바실러스 플란타룸 299v으로 발효시켜 얻은, 외과적 수술과 관련한 세균 감염의 예방 또는 치료를 위한, 항생 물질을 대체하는 영양 조성물.
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Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE511025C2 (sv) * | 1997-10-03 | 1999-07-26 | Probi Ab | Foderprodukt för häst omfattande Lactobacillus plantarum JI:1 samt Lactobacillus plantarum JI:1 och användning därav |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989008405A1 (en) * | 1988-03-09 | 1989-09-21 | Nils Molin | Nutrient composition and method for the preparation thereof |
| KR920001375A (ko) * | 1990-06-07 | 1992-01-30 | 스탄 쉬 | 한글형 문자 입력 처리 방법 |
| WO1993001823A1 (en) * | 1991-07-25 | 1993-02-04 | Probi Ab | Intestine colonizing lactobacilli |
| WO1993009793A1 (en) * | 1991-11-15 | 1993-05-27 | Gregor Reid | Lactobacillus and skim milk compositions and methods for preventing microbial urogenital infections |
| KR19980703102A (ko) * | 1995-03-23 | 1998-10-15 | 카이 바레맨 | 상피 흡착성 락토바실러스 |
| KR19990008403A (ko) * | 1995-05-09 | 1999-01-25 | 카예바레만 | 락토바실러스 플란타룸 및 아르기닌을 포함하는 제약 조성물 |
-
1995
- 1995-07-31 KR KR1019950023252A patent/KR100376954B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1989008405A1 (en) * | 1988-03-09 | 1989-09-21 | Nils Molin | Nutrient composition and method for the preparation thereof |
| KR920001375A (ko) * | 1990-06-07 | 1992-01-30 | 스탄 쉬 | 한글형 문자 입력 처리 방법 |
| WO1993001823A1 (en) * | 1991-07-25 | 1993-02-04 | Probi Ab | Intestine colonizing lactobacilli |
| WO1993009793A1 (en) * | 1991-11-15 | 1993-05-27 | Gregor Reid | Lactobacillus and skim milk compositions and methods for preventing microbial urogenital infections |
| KR19980703102A (ko) * | 1995-03-23 | 1998-10-15 | 카이 바레맨 | 상피 흡착성 락토바실러스 |
| KR19990008403A (ko) * | 1995-05-09 | 1999-01-25 | 카예바레만 | 락토바실러스 플란타룸 및 아르기닌을 포함하는 제약 조성물 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| J Appl Bacteriol 1993 Mar;74(3):314-23 * |
| Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol 1992 Mar;(3):17-20 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR970006481A (ko) | 1997-02-21 |
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