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JPWO2019200286A5 - - Google Patents

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JPWO2019200286A5
JPWO2019200286A5 JP2020555467A JP2020555467A JPWO2019200286A5 JP WO2019200286 A5 JPWO2019200286 A5 JP WO2019200286A5 JP 2020555467 A JP2020555467 A JP 2020555467A JP 2020555467 A JP2020555467 A JP 2020555467A JP WO2019200286 A5 JPWO2019200286 A5 JP WO2019200286A5
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Description

上述した送達の方法に加えて、以下の技術も、宿主へｒＡＡＶ組成物を送達する代替方法として考えられる。ソノフォレーシス（すなわち、超音波）が使用され、循環系内へならびにそれを経由して薬物浸透性の率および有効性を増強させるためのデバイスとして米国特許第５,６５６,０１６号明細書に記載されている。考えられる他の薬物送達の選択肢は、骨内注射（米国特許第５,７７９,７０８号明細書）、マイクロチップデバイス（米国特許第５,７９７,８９８号明細書）、眼製剤（Bourlais et al., 1998）、経皮性基材（米国特許第５,７７０,２１９号明細書および第５，７８３，２０８号明細書）およびフィードバック制御送達（米国特許第５,６９７,８９９号明細書）である。

本発明の様々な実施形態を以下に示す。
１．（ｉ）第１のプロモーターの制御下にヘキソサミニダーゼアルファサブユニット（ＨＥＸＡ）をコードしている核酸を含む第１の発現カセット；および
（ｉｉ）第２のプロモーターの制御下にヘキソサミニダーゼベータサブユニット（ＨＥＸＢ）をコードしている核酸を含む第２の発現カセット
を含む、単離された核酸構築物であって、
前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）に隣接している、単離された核酸構築物。
２．第１のイントロンが、前記第１のプロモーターと前記ヘキソサミニダーゼアルファサブユニット（ＨＥＸＡ）をコードしている前記核酸の配列との間に存在する、上記１に記載の単離された核酸。
３．第２のイントロンが、前記第２のプロモーターと前記ヘキソサミニダーゼベータサブユニット（ＨＥＸＢ）をコードしている前記核酸の配列との間に存在する、上記１または２に記載の単離された核酸。
４．前記ＨｅｘＡが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、上記１～３のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
５．前記ＨｅｘＢが、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、上記１～４のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
６．前記第１のイントロンが、前記第１のプロモーターと前記ＨｅｘＡをコードしている前記核酸配列との間に位置し、任意選択で、前記第１のイントロンが、キメライントロンである、上記１～５のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
７．前記第１のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲの近位に位置し、任意選択で、前記第１のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲとＨｅｘＡをコードしている核酸配列との間に位置する、上記１～６のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
８．前記第１のプロモーターおよび／または前記第２のプロモーターが、Ｐ２プロモーターである、上記１～７のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
９．前記第２のイントロンが、前記第２のプロモーターと前記ＨｅｘＢをコードしている前記核酸配列との間に位置し、任意選択で、前記第２のイントロンが、キメライントロンである、上記１～８のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
１０．前記第２のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲの近位に位置し、任意選択で、前記第２のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲとＨｅｘＢをコードしている核酸配列との間に位置する、上記１～９のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
１１．前記第１の発現カセットが、ＨｅｘＡをコードしている前記核酸配列に作動可能に連結された第１のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第１のポリＡシグナルが、ＢＧＨポリＡシグナルである、上記１～１０のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
１２．前記第２の発現カセットが、ＨｅｘＢをコードしている前記核酸配列に作動可能に連結された第２のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第２のポリＡ尾部が、ＳＶ４０ポリＡシグナルである、上記１～１１のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
１３．前記第１のポリＡシグナルおよび前記第２のポリＡシグナルが、互いに近接して位置する、上記１～１２のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
１４．（ｉ）ヘキソサミニダーゼアルファサブユニットをコードしている核酸を含む第１の発現カセット；および
（ｉｉ）ヘキソサミニダーゼベータサブユニットをコードしている核酸を含む第２の発現カセットを含む、単離された核酸構築物であって、
前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットが、双方向性プロモーターによって作動可能に連結されており、前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）に隣接している、単離された核酸構築物。
１５．前記ＨｅｘＡが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、上記１４に記載の単離された核酸構築物。
１６．前記ＨｅｘＢが、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、上記１４または１５に記載の単離された核酸構築物。
１７．前記双方向性プロモーターが、少なくとも１つのチキンベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーターを含む、上記１４～１６のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
１８．前記双方向性プロモーターが、２つのＣＢＡプロモーターを含み、前記ＣＢＡプロモーターが、反対方向で前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットの転写を開始する、上記１７に記載の単離された核酸構築物。
１９．前記双方向性プロモーターが、ＣＭＶエンハンサー配列を含み、任意選択で、前記ＣＭＶエンハンサー配列が、前記２つのＣＢＡプロモーターの間に位置する、上記１８に記載の単離された核酸構築物。
２０．第１の発現構築物が、第１のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第１のポリＡシグナルが、ＡＡＶ ＩＴＲに近位である、上記１４～１９のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
２１．前記第１の発現構築物が、第２のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第２のポリＡシグナルが、ＡＡＶ ＩＴＲに近位である、上記１４～２０のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
２２．前記第１および／または前記第２のポリＡシグナルが、ＳＶ４０ポリＡシグナル、ウサギベータグロブリン（ＲＢＧ）ポリＡシグナルおよびウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡシグナルからそれぞれ選択される、上記１４～２１のいずれかに記載の単離された核酸構築物。
２３．配列番号３～９のいずれかに記載の配列を含む、単離された核酸。
２４．（ｉ）カプシドタンパク質；および
（ｉｉ）上記１～２３のいずれかに記載の単離された核酸
を含む、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）。
２５．前記カプシドタンパク質が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０およびＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂから選択される血清型のものである、上記２４に記載のｒＡＡＶ。
２６．前記単離された核酸が、ＡＡＶ１ ＩＴＲ、ＡＡＶ２ ＩＴＲ、ＡＡＶ３ ＩＴＲ、ＡＡＶ４ ＩＴＲ、ＡＡＶ５ ＩＴＲまたはＡＡＶ６ ＩＴＲからなる群から選択されるＩＴＲを含む、上記２４または２５に記載のｒＡＡＶ。
２７．上記１～２３のいずれかに記載の単離された核酸または上記２２～２４のいずれかに記載のｒＡＡＶを含む、宿主細胞。
２８．前記宿主細胞が、哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌細胞、昆虫細胞、植物細胞または真菌細胞である、上記２７に記載の宿主細胞。
２９．リソソーム蓄積症であるまたはそれと疑われる対象に、上記１～２３のいずれかに記載の単離された核酸または上記２４～２６のいずれかに記載のｒＡＡＶを投与するステップを含む、リソソーム蓄積症を処置する方法。
３０．前記リソソーム蓄積症が、テイサックス病またはサンドホフ病である、上記２９に記載の方法。
３１．前記対象が、前記対象のヘキソサミニダーゼアルファサブユニットの機能の減少または喪失をもたらすＨＥＸＡ遺伝子内の突然変異を有すると特徴付けられる、上記２９または３０に記載の方法。
３２．前記対象が、前記対象のヘキソサミニダーゼベータサブユニットの機能の減少または喪失をもたらすＨＥＸＢ遺伝子内の突然変異を有すると特徴付けられる、上記２９または３０に記載の方法。
３３．前記ｒＡＡＶが、頭蓋内注射、脳内注射または脳室系、小脳延髄槽もしくはくも膜下腔内スペースを通したＣＳＦへの注射によって投与される、上記２９～３２のいずれかに記載の方法。
３４．前記対象が、前記リソソーム蓄積症の前駆症状段階の間に、前記単離された核酸または前記ｒＡＡＶを投与される、上記２９～３３のいずれかに記載の方法。
３５．前記リソソーム蓄積症の前記前駆症状段階が、出生（例えば、周産期）と４週齢との間に起こる、上記３４に記載の方法。 In addition to the delivery methods described above, the following techniques may also be considered as alternatives to delivering the rAAV composition to the host. Sonophoresis (ie, ultrasound) is used and described in US Pat. No. 5,656,016 as a device for enhancing the rate and efficacy of drug permeability into and through the circulatory system. ing. Other possible drug delivery options are intraosseous injection (US Pat. No. 5,779,708), microchip device (US Pat. No. 5,779,898), ophthalmic formulation (Bourlais et al). ., 1998), Percutaneous substrate (US Pat. Nos. 5,770,219 and 5,783,208) and feedback controlled delivery (US Pat. No. 5,697,899). Is.

Various embodiments of the present invention are shown below.
1. 1. (I) A first expression cassette containing a nucleic acid encoding the hexosaminidase alpha subunit (HEXA) under the control of the first promoter; and
(Ii) A second expression cassette containing a nucleic acid encoding the hexosaminidase beta subunit (HEXB) under the control of a second promoter.
An isolated nucleic acid construct comprising:
An isolated nucleic acid construct in which the first expression cassette and the second expression cassette are flanked by adeno-associated virus (AAV) inverted terminal repeats (ITR).
2. 2. The isolated nucleic acid according to 1 above, wherein the first intron is present between the first promoter and the sequence of the nucleic acid encoding the hexosaminidase alpha subunit (HEXA).
3. 3. The isolation according to 1 or 2 above, wherein the second intron is present between the second promoter and the sequence of the nucleic acid encoding the hexosaminidase beta subunit (HEXB). Nucleic acid.
4. The isolated nucleic acid construct according to any one of 1 to 3 above, wherein the HexA comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
5. The isolated nucleic acid construct according to any one of 1 to 4 above, wherein the HexB comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2.
6. The first intron is located between the first promoter and the nucleic acid sequence encoding the HexA, and optionally, the first intron is a chimeric intron, 1-5 above. The isolated nucleic acid construct according to any of the above.
7. 1-6 above, wherein the first promoter is located proximal to the AAV ITR and, optionally, the first promoter is located between the AAV ITR and the nucleic acid sequence encoding HexA. The isolated nucleic acid construct according to any.
8. The isolated nucleic acid construct according to any one of 1 to 7 above, wherein the first promoter and / or the second promoter is a P2 promoter.
9. The second intron is located between the second promoter and the nucleic acid sequence encoding the HexB, and optionally, the second intron is a chimeric intron, 1-8 above. The isolated nucleic acid construct according to any of the above.
10. 1-9 above, wherein the second promoter is located proximal to the AAV ITR and, optionally, the second promoter is located between the AAV ITR and the nucleic acid sequence encoding HexB. The isolated nucleic acid construct according to any.
11. The first expression cassette comprises a first poly A signal operably linked to the nucleic acid sequence encoding HexA, and optionally the first poly A signal is a BGH poly A signal. The isolated nucleic acid construct according to any one of 1 to 10 above.
12. The second expression cassette contains a second poly A signal operably linked to the nucleic acid sequence encoding HexB, and optionally the second poly A tail is an SV40 poly A signal. The isolated nucleic acid construct according to any one of 1 to 11 above.
13. The isolated nucleic acid construct according to any one of 1 to 12 above, wherein the first poly A signal and the second poly A signal are located in close proximity to each other.
14. (I) A first expression cassette containing the nucleic acid encoding the hexosaminidase alpha subunit; and
(Ii) An isolated nucleic acid construct comprising a second expression cassette containing the nucleic acid encoding the hexosaminidase beta subunit.
The first expression cassette and the second expression cassette are operably linked by a bidirectional promoter, and the first expression cassette and the second expression cassette are adeno-associated virus (AAV) reverse. An isolated nucleic acid construct flanking the promoter repeat (ITR).
15. The isolated nucleic acid construct according to 14 above, wherein the HexA comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
16. The isolated nucleic acid construct according to 14 or 15 above, wherein the HexB comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2.
17. The isolated nucleic acid construct according to any of 14-16 above, wherein the bidirectional promoter comprises at least one chicken beta actin (CBA) promoter.
18. 17. The isolated according to 17 above, wherein the bidirectional promoter comprises two CBA promoters, wherein the CBA promoter initiates transcription of the first expression cassette and the second expression cassette in opposite directions. Nucleic acid construct.
19. 18. The isolated nucleic acid construct according to 18 above, wherein the bidirectional promoter comprises a CMV enhancer sequence and, optionally, the CMV enhancer sequence is located between the two CBA promoters.
20. The isolation according to any of 14-19 above, wherein the first expression construct comprises a first poly A signal and optionally the first poly A signal is proximal to AAV ITR. Nucleic acid construct.
21. The isolation according to any of 14-20 above, wherein the first expression construct comprises a second poly A signal and optionally the second poly A signal is proximal to AAV ITR. Nucleic acid constructs made.
22. 14-21 above, wherein the first and / or the second poly A signal is selected from the SV40 poly A signal, the rabbit beta globulin (RBG) poly A signal and the bovine growth hormone (BGH) poly A signal, respectively. The isolated nucleic acid construct according to any.
23. An isolated nucleic acid comprising the sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 3-9.
24. (I) Capsid protein; and
(Ii) The isolated nucleic acid according to any one of 1 to 23 above.
Recombinant AAV (rAAV), including.
25. The capsid proteins are AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAV10, AAVrh10 and AAV. PHP. The rAAV according to 24 above, which is of the serotype selected from B.
26. 24 or 25 above, wherein the isolated nucleic acid comprises an ITR selected from the group consisting of AAV1 ITR, AAV2 ITR, AAV3 ITR, AAV4 ITR, AAV5 ITR or AAV6 ITR.
27. A host cell comprising the isolated nucleic acid according to any one of 1 to 23 above or the rAAV according to any of 22 to 24 above.
28. 27. The host cell according to 27 above, wherein the host cell is a mammalian cell, yeast cell, bacterial cell, insect cell, plant cell or fungal cell.
29. Lysosomal storage, comprising the step of administering to a subject with or suspected of having lysosomal storage the isolated nucleic acid according to any of 1 to 23 above or rAAV according to any of 24 to 26 above. How to treat.
30. 29. The method of 29 above, wherein the lysosomal storage disease is Tay-Sachs disease or Sandhoff disease.
31. 29 or 30 above, wherein the subject is characterized by having a mutation in the HEXA gene that results in diminished or lost function of the hexosaminidase alpha subunit of the subject.
32. 29 or 30 above, wherein said subject is characterized by having a mutation in the HEXB gene that results in diminished or lost function of the subject's hexosaminidase beta subunit.
33. 29-32 above, wherein the rAAV is administered by intracranial injection, intracerebral injection or injection into the CSF through the ventricular system, cerebellar medulla oblongata or subarachnoid space.
34. 29-33, wherein the subject is administered the isolated nucleic acid or the rAAV during the prodromal stage of the lysosomal storage disease.
35. 34. The method of 34 above, wherein the prodromal stage of the lysosomal storage disease occurs between birth (eg, perinatal period) and 4 weeks of age.

Claims (35)

（ｉ）第１のプロモーターの制御下にヘキソサミニダーゼアルファサブユニット（ＨＥＸＡ）をコードしている核酸を含む第１の発現カセット；および
（ｉｉ）第２のプロモーターの制御下にヘキソサミニダーゼベータサブユニット（ＨＥＸＢ）をコードしている核酸を含む第２の発現カセット
を含む、単離された核酸構築物であって、
前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）に隣接している、単離された核酸構築物。 (I) A first expression cassette containing a nucleic acid encoding the hexosaminidase alpha subunit (HEXA) under the control of the first promoter; and (ii) hexosamini under the control of the second promoter. An isolated nucleic acid construct comprising a second expression cassette containing the nucleic acid encoding the dosebeta subunit (HEXB).
An isolated nucleic acid construct in which the first expression cassette and the second expression cassette are flanked by adeno-associated virus (AAV) inverted terminal repeats (ITR). 第１のイントロンが、前記第１のプロモーターと前記ヘキソサミニダーゼアルファサブユニット（ＨＥＸＡ）をコードしている前記核酸の配列との間に存在する、請求項１に記載の単離された核酸。 The isolated nucleic acid of claim 1, wherein the first intron is present between the first promoter and the sequence of the nucleic acid encoding the hexosaminidase alpha subunit (HEXA). .. 第２のイントロンが、前記第２のプロモーターと前記ヘキソサミニダーゼベータサブユニット（ＨＥＸＢ）をコードしている前記核酸の配列との間に存在する、請求項１または２に記載の単離された核酸。 The isolation according to claim 1 or 2, wherein the second intron is present between the second promoter and the sequence of the nucleic acid encoding the hexosaminidase beta subunit (HEXB). Nucleic acid. 前記ＨｅｘＡが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The isolated nucleic acid construct according to any one of claims 1 to 3, wherein the HexA comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1. 前記ＨｅｘＢが、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The isolated nucleic acid construct according to any one of claims 1 to 4, wherein the HexB comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2. 前記第１のイントロンが、前記第１のプロモーターと前記ＨｅｘＡをコードしている前記核酸配列との間に位置し、任意選択で、前記第１のイントロンが、キメライントロンである、請求項１～５のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 Claims 1 to 1, wherein the first intron is located between the first promoter and the nucleic acid sequence encoding the HexA, and optionally the first intron is a chimeric intron. 5. The isolated nucleic acid construct according to any one of 5. 前記第１のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲの近位に位置し、任意選択で、前記第１のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲとＨｅｘＡをコードしている核酸配列との間に位置する、請求項１～６のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 Claims 1-6, wherein the first promoter is located proximal to the AAV ITR and, optionally, the first promoter is located between the AAV ITR and the nucleic acid sequence encoding HexA. The isolated nucleic acid construct according to any one of the above. 前記第１のプロモーターおよび／または前記第２のプロモーターが、Ｐ２プロモーターである、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The isolated nucleic acid construct according to any one of claims 1 to 7, wherein the first promoter and / or the second promoter is a P2 promoter. 前記第２のイントロンが、前記第２のプロモーターと前記ＨｅｘＢをコードしている前記核酸配列との間に位置し、任意選択で、前記第２のイントロンが、キメライントロンである、請求項１～８のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 Claims 1 to 1, wherein the second intron is located between the second promoter and the nucleic acid sequence encoding the HexB, and optionally the second intron is a chimeric intron. 8. The isolated nucleic acid construct according to any one of 8. 前記第２のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲの近位に位置し、任意選択で、前記第２のプロモーターが、ＡＡＶ ＩＴＲとＨｅｘＢをコードしている核酸配列との間に位置する、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 Claims 1-9, wherein the second promoter is located proximal to the AAV ITR and, optionally, the second promoter is located between the AAV ITR and the nucleic acid sequence encoding HexB. The isolated nucleic acid construct according to any one of the above. 前記第１の発現カセットが、ＨｅｘＡをコードしている前記核酸配列に作動可能に連結された第１のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第１のポリＡシグナルが、ＢＧＨポリＡシグナルである、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The first expression cassette comprises a first poly A signal operably linked to the nucleic acid sequence encoding Hex A, and optionally the first poly A signal is a BGH poly A signal. The isolated nucleic acid construct according to any one of claims 1 to 10. 前記第２の発現カセットが、ＨｅｘＢをコードしている前記核酸配列に作動可能に連結された第２のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第２のポリＡ尾部が、ＳＶ４０ポリＡシグナルである、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The second expression cassette contains a second poly A signal operably linked to the nucleic acid sequence encoding HexB, and optionally the second poly A tail is an SV40 poly A signal. The isolated nucleic acid construct according to any one of claims 1 to 11. 前記第１のポリＡシグナルおよび前記第２のポリＡシグナルが、互いに近接して位置する、請求項１～１２のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The isolated nucleic acid construct according to any one of claims 1 to 12, wherein the first poly A signal and the second poly A signal are located in close proximity to each other. （ｉ）ヘキソサミニダーゼアルファサブユニットをコードしている核酸を含む第１の発現カセット；および
（ｉｉ）ヘキソサミニダーゼベータサブユニットをコードしている核酸を含む第２の発現カセットを含む、単離された核酸構築物であって、
前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットが、双方向性プロモーターによって作動可能に連結されており、前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）逆位末端反復（ＩＴＲ）に隣接している、単離された核酸構築物。 (I) A first expression cassette containing the nucleic acid encoding the hexosaminidase alpha subunit; and (ii) a second expression cassette containing the nucleic acid encoding the hexosaminidase beta subunit. , An isolated nucleic acid construct,
The first expression cassette and the second expression cassette are operably linked by a bidirectional promoter, and the first expression cassette and the second expression cassette are adeno-associated virus (AAV) reverse. An isolated nucleic acid construct flanking the promoter repeat (ITR). 前記ＨｅｘＡが、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１４に記載の単離された核酸構築物。 The isolated nucleic acid construct according to claim 14, wherein the HexA comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1. 前記ＨｅｘＢが、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１４または１５に記載の単離された核酸構築物。 The isolated nucleic acid construct according to claim 14 or 15, wherein the HexB comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 2. 前記双方向性プロモーターが、少なくとも１つのチキンベータアクチン（ＣＢＡ）プロモーターを含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The isolated nucleic acid construct according to any one of claims 14 to 16, wherein the bidirectional promoter comprises at least one chicken beta actin (CBA) promoter. 前記双方向性プロモーターが、２つのＣＢＡプロモーターを含み、前記ＣＢＡプロモーターが、反対方向で前記第１の発現カセットおよび前記第２の発現カセットの転写を開始する、請求項１７に記載の単離された核酸構築物。 17. The isolated isolated according to claim 17, wherein the bidirectional promoter comprises two CBA promoters, wherein the CBA promoter initiates transcription of the first expression cassette and the second expression cassette in opposite directions. Nucleic acid construct. 前記双方向性プロモーターが、ＣＭＶエンハンサー配列を含み、任意選択で、前記ＣＭＶエンハンサー配列が、前記２つのＣＢＡプロモーターの間に位置する、請求項１８に記載の単離された核酸構築物。 18. The isolated nucleic acid construct of claim 18, wherein the bidirectional promoter comprises a CMV enhancer sequence and optionally the CMV enhancer sequence is located between the two CBA promoters. 第１の発現構築物が、第１のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第１のポリＡシグナルが、ＡＡＶ ＩＴＲに近位である、請求項１４～１９のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 13. Isolated nucleic acid construct. 前記第１の発現構築物が、第２のポリＡシグナルを含み、任意選択で、前記第２のポリＡシグナルが、ＡＡＶ ＩＴＲに近位である、請求項１４～２０のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 The first expression construct comprises a second poly A signal, optionally according to any one of claims 14-20, wherein the second poly A signal is proximal to AAV ITR. Isolated nucleic acid construct. 前記第１および／または前記第２のポリＡシグナルが、ＳＶ４０ポリＡシグナル、ウサギベータグロブリン（ＲＢＧ）ポリＡシグナルおよびウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリＡシグナルからそれぞれ選択される、請求項１４～２１のいずれか一項に記載の単離された核酸構築物。 Claims 14-21, wherein the first and / or the second poly A signal is selected from SV40 poly A signal, rabbit beta globulin (RBG) poly A signal and bovine growth hormone (BGH) poly A signal, respectively. The isolated nucleic acid construct according to any one of the above. 配列番号３～９のいずれかに記載の配列を含む、単離された核酸。 An isolated nucleic acid comprising the sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 3-9. （ｉ）カプシドタンパク質；および
（ｉｉ）請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された核酸
を含む、組換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）。 A recombinant AAV (rAAV) comprising (i) a capsid protein; and (ii) the isolated nucleic acid according to any one of claims 1-23. 前記カプシドタンパク質が、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶｒｈ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶｒｈ１０およびＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂから選択される血清型のものである、請求項２４に記載のｒＡＡＶ。 The capsid proteins are AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAVrh8, AAV9, AAV10, AAVrh10 and AAV. PHP. 24. The rAAV of claim 24, which is of the serotype selected from B. 前記単離された核酸が、ＡＡＶ１ ＩＴＲ、ＡＡＶ２ ＩＴＲ、ＡＡＶ３ ＩＴＲ、ＡＡＶ４ ＩＴＲ、ＡＡＶ５ ＩＴＲまたはＡＡＶ６ ＩＴＲからなる群から選択されるＩＴＲを含む、請求項２４または２５に記載のｒＡＡＶ。 The rAAV of claim 24 or 25, wherein the isolated nucleic acid comprises an ITR selected from the group consisting of AAV1 ITR, AAV2 ITR, AAV3 ITR, AAV4 ITR, AAV5 ITR or AAV6 ITR. 請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された核酸または請求項２２～２４のいずれか一項に記載のｒＡＡＶを含む、宿主細胞。 A host cell comprising the isolated nucleic acid according to any one of claims 1 to 23 or the rAAV according to any one of claims 22 to 24. 前記宿主細胞が、哺乳動物細胞、酵母細胞、細菌細胞、昆虫細胞、植物細胞または真菌細胞である、請求項２７に記載の宿主細胞。 28. The host cell according to claim 27, wherein the host cell is a mammalian cell, yeast cell, bacterial cell, insect cell, plant cell or fungal cell. リソソーム蓄積症であるまたはそれと疑われる対象においてリソソーム蓄積症を処置するための、請求項１～２３のいずれか一項に記載の単離された核酸または請求項２４～２６のいずれか一項に記載のｒＡＡＶを含む、組成物。 The isolated nucleic acid according to any one of claims 1 to 23 or any one of claims 24 to 26 for treating lysosomal storage disease in a subject having or suspected to have lysosomal storage disease. A composition comprising the rAAV described in the section. 前記リソソーム蓄積症が、テイサックス病またはサンドホフ病である、請求項２９に記載の組成物。 29. The composition of claim 29, wherein the lysosomal storage disease is Tay-Sachs disease or Sandhoff disease. 前記対象が、前記対象のヘキソサミニダーゼアルファサブユニットの機能の減少または喪失をもたらすＨＥＸＡ遺伝子内の突然変異を有すると特徴付けられる、請求項２９または３０に記載の組成物。 29 or 30. The composition of claim 29 or 30, wherein the subject is characterized by having a mutation in the HEXA gene that results in diminished or lost function of the hexosaminidase alpha subunit of the subject. 前記対象が、前記対象のヘキソサミニダーゼベータサブユニットの機能の減少または喪失をもたらすＨＥＸＢ遺伝子内の突然変異を有すると特徴付けられる、請求項２９または３０に記載の組成物。 29 or 30. The composition of claim 29 or 30, wherein the subject is characterized by having a mutation in the HEXB gene that results in diminished or lost function of the hexosaminidasebeta subunit of the subject. 前記ｒＡＡＶが、頭蓋内注射、脳内注射または脳室系、小脳延髄槽もしくはくも膜下腔内スペースを通したＣＳＦへの注射によって投与される、請求項２９～３２のいずれか一項に記載の組成物。 29. 32. Composition . 前記対象が、前記リソソーム蓄積症の前駆症状段階の間に、前記単離された核酸または前記ｒＡＡＶを投与される、請求項２９～３３のいずれか一項に記載の組成物。 The composition according to any one of claims 29 to 33, wherein the subject is administered the isolated nucleic acid or the rAAV during the prodromal stage of the lysosomal storage disease. 前記リソソーム蓄積症の前記前駆症状段階が、出生（例えば、周産期）と４週齢との間に起こる、請求項３４に記載の組成物。
34. The composition of claim 34, wherein the prodromal stage of the lysosomal storage disease occurs between birth (eg, perinatal period) and 4 weeks of age.
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