JPWO2018131192A1 - 被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法 - Google Patents
被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2018131192A1 JPWO2018131192A1 JP2018561792A JP2018561792A JPWO2018131192A1 JP WO2018131192 A1 JPWO2018131192 A1 JP WO2018131192A1 JP 2018561792 A JP2018561792 A JP 2018561792A JP 2018561792 A JP2018561792 A JP 2018561792A JP WO2018131192 A1 JPWO2018131192 A1 JP WO2018131192A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gprc5c
- exosome
- antibody
- concentration
- pancreatic cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 243
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 243
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 title claims abstract description 243
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 241
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 234
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 102100032524 G-protein coupled receptor family C group 5 member C Human genes 0.000 claims abstract description 513
- 101001014685 Homo sapiens G-protein coupled receptor family C group 5 member C Proteins 0.000 claims abstract description 507
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 claims abstract description 504
- 101710174801 G-protein coupled receptor family C group 5 member C Proteins 0.000 claims abstract 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 241
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 203
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 203
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 179
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 152
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 152
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 152
- 208000016222 Pancreatic disease Diseases 0.000 claims description 111
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 68
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 41
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims description 34
- 208000024691 pancreas disease Diseases 0.000 claims description 31
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 29
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 29
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 claims description 23
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 claims description 23
- 101150003543 GPRC5C gene Proteins 0.000 claims description 22
- 101000738354 Homo sapiens CD9 antigen Proteins 0.000 claims description 22
- 102100037904 CD9 antigen Human genes 0.000 claims description 21
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 20
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 20
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 19
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 16
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 claims description 16
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 15
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims description 14
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 claims description 14
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 claims description 14
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 claims description 14
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 claims description 14
- 101000980823 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD53 Proteins 0.000 claims description 14
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 claims description 14
- 102100024221 Leukocyte surface antigen CD53 Human genes 0.000 claims description 14
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 claims description 14
- 102100027217 CD82 antigen Human genes 0.000 claims description 13
- 101000914469 Homo sapiens CD82 antigen Proteins 0.000 claims description 13
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 claims description 12
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 claims description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 11
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims description 10
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims description 10
- 108010064171 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000014944 Lysosome-Associated Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 7
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 claims description 7
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 claims 11
- 108010009254 Lysosomal-Associated Membrane Protein 1 Proteins 0.000 claims 6
- 101710116782 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 claims 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 58
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 36
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 28
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 20
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 18
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 12
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- -1 Rab5 Proteins 0.000 description 5
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 238000012815 AlphaLISA Methods 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 3
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 description 3
- 238000003452 antibody preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 3
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 235000005956 Cosmos caudatus Nutrition 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N FLAG peptide Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XZWYTXMRWQJBGX-VXBMVYAYSA-N 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 2
- 101150048357 Lamp1 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 2
- 239000012327 Ruthenium complex Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108091005948 blue fluorescent proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- 102000045252 human GPRC5C Human genes 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 229920003217 poly(methylsilsesquioxane) Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RNIPJYFZGXJSDD-UHFFFAOYSA-N 2,4,5-triphenyl-1h-imidazole Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=NC(C=2C=CC=CC=2)=C(C=2C=CC=CC=2)N1 RNIPJYFZGXJSDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000000668 Chronic Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010020195 FLAG peptide Proteins 0.000 description 1
- DSIFMINXCSHZPQ-UHFFFAOYSA-M FUN-1 Chemical compound [I-].S1C2=CC=CC=C2[N+](C)=C1C=C(C1=CC=CC=C11)C=C(Cl)N1C1=CC=CC=C1 DSIFMINXCSHZPQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N Glu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JVSBYEDSSRZQGV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LVCHEMOPBORRLB-DCAQKATOSA-N Glu-Gln-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(O)=O LVCHEMOPBORRLB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N His-His-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)C1=CNC=N1 STOOMQFEJUVAKR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 101000798441 Homo sapiens Basigin Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 101000946850 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD86 Proteins 0.000 description 1
- ZNOBVZFCHNHKHA-KBIXCLLPSA-N Ile-Ser-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZNOBVZFCHNHKHA-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 1
- 206010033649 Pancreatitis chronic Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 102100034924 T-lymphocyte activation antigen CD86 Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001793 Wilcoxon signed-rank test Methods 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000000078 claw Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 208000030172 endocrine system disease Diseases 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 102000043530 human CD9 Human genes 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 108060006184 phycobiliprotein Proteins 0.000 description 1
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000003498 protein array Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57438—Specifically defined cancers of liver, pancreas or kidney
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5076—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving cell organelles, e.g. Golgi complex, endoplasmic reticulum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/70525—ICAM molecules, e.g. CD50, CD54, CD102
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70546—Integrin superfamily, e.g. VLAs, leuCAM, GPIIb/GPIIIa, LPAM
- G01N2333/70553—Integrin beta2-subunit-containing molecules, e.g. CD11, CD18
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
本願は、2017年1月12日に、日本に出願された特願2017−003709号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。
GPRC5C(G−protein coupled Receptor familyC group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)は、7回膜貫通型のGタンパク質共役受容体で、副腎、甲状腺、膵臓等の内分泌系で高発現しており、内分泌系疾患の診断に利用され得ることが報告されている(特許文献3)。
[2]以下の工程を含むことを特徴とする、[1]に記載の方法。
(1)被検者より検体を採取する工程;
(2)工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3)工程(2)で測定したGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定する工程
[3]前記工程(2)において、前記工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度の測定が、検体より単離されたエクソソームを用いて行われる、[2]に記載の方法。
[4]前記工程(2)が免疫学的測定法によって行われる、[2]又は[3]に記載の方法。
[5]前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、[4]に記載の方法。
[6]前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソームに特異的に発現する抗原(以下、エクソソーム特異的抗原という)に結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、[4]に記載の方法。
[7]前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1:細胞間接着分子−1)、Rab5、Annexin V、又はLAMP1(lysosome−associated membrane protein 1:リソソーム膜タンパク質1)である、[6]に記載の方法。
[8]前記検体が、血液である、[1]〜[7]のいずれか一つに記載の方法。
[10]以下の工程を含むことを特徴とする、[9]に記載の方法。
(1)膵臓疾患患者より検体を採取する工程;
(2)工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3)工程(2)で測定したGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌以外の膵臓疾患に罹患している可能性が高いと判定する工程
[11]前記工程(2)において、前記工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度の測定が、検体より単離されたエクソソームを用いて行われる、[10]記載の方法。
[12]前記工程(2)が免疫学的測定法によって行われる、[10]又は[11]に記載の方法。
[13]前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、[12]に記載の方法。
[14]前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、[12]に記載の方法。
[15]前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1、Rab5、Annexin V、又はLAMP1である、[14]に記載の方法。
[16]前記膵臓癌以外の膵臓疾患が、膵炎である、[9]〜[15]のいずれか一つに記載の方法。
[17]前記検体が、血液である、[9]〜[16]のいずれか一つに記載の方法。
[19]以下の工程を含むことを特徴とする、[18]に記載の方法。
(1)被検者より経時的に検体を採取する工程;
(2)工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3)工程(2)で測定したGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定する工程。
[20]前記工程(2)において、前記工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度の測定が、検体より単離されたエクソソームを用いて行われる、[19]記載の方法。
[21]前記工程(2)が免疫学的測定法によって行われる、[19]又は[20]に記載の方法。
[22]前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、[21]に記載の方法。
[23]前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、[21]に記載の方法。
[24]前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1、Rab5、Annexin V、又はLAMP1である、[23]に記載の方法。
[25]前記検体が、血液である、[18]〜[24]のいずれか一つに記載の方法。
[27]前記GPRC5C測定試薬が、免疫学的測定試薬である、[26]に記載の試薬。
[28]前記免疫学的測定試薬が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む、[27]に記載の試薬。
[29]前記免疫学的測定試薬が、さらに、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む、[28]に記載の試薬。
[30]前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1、Rab5、Annexin V、又はLAMP1である、[29]に記載の試薬。
[31]さらに、エクソソーム単離試薬を含む、[26]〜[30]のいずれか一つに記載の試薬。
[32]前記検体が、血液である、[26]〜[31]のいずれか一つに記載の試薬。
[34]前記GPRC5C測定試薬が、免疫学的測定試薬である、[33]に記載の試薬。
[35]前記免疫学的測定試薬が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む、[34]に記載の試薬。
[36]前記免疫学的測定試薬が、さらに、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む、[35]に記載の試薬。
[37]前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1、Rab5、Annexin V、又はLAMP1である、[36]に記載の試薬。
[38]さらに、エクソソーム単離試薬を含む、[33]〜[37]のいずれか一つに記載の試薬。
[39]前記膵臓癌以外の膵臓疾患が、膵炎である、[33]〜[38]のいずれか一つに記載の試薬。
[40]前記検体が、血液である、[33]〜[39]のいずれか一つに記載の試薬。
[42]前記GPRC5C測定試薬が、免疫学的測定試薬である、[41]に記載の試薬。
[43]前記免疫学的測定試薬が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む、[42]に記載の試薬。
[44]前記免疫学的測定試薬が、さらに、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む、[43]に記載の試薬。
[45]前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1、Rab5、Annexin V、又はLAMP1である、[44]に記載の試薬。
[46]さらに、エクソソーム単離試薬を含む、[41]〜[45]のいずれか一つに記載の試薬。
[47]前記検体が、血液である、[41]〜[46]のいずれか一つに記載の試薬。
[49]GPRC5Cに対する特異的結合物質、GPRC5C遺伝子を増幅可能なプライマーセット、又はGPRC5C遺伝子のmRNAに特異的にハイブリダイズするプローブを備えたことを特徴とする、膵臓癌診断薬。
[50]前記GPRC5Cに対する特異的結合物質が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片である、[49]記載の診断薬。
[51]生体試料中のGPRC5Cの存在量を測定する工程と、
測定された前記タンパク質の存在量が、健常者又は膵臓癌以外の膵臓疾患患者の生体試料中のGPRC5Cの存在量と比較して多い場合に、前記生体試料は膵臓癌患者のものであると判定する工程と、
を含むことを特徴とする、生体試料の判定方法。
[52]生体試料中のGPRC5C遺伝子の発現量を測定する工程と、
測定された前記遺伝子の発現量が、健常者又は膵臓癌以外の膵臓疾患患者の生体試料中のGPRC5C遺伝子の発現量と比較して多い場合に、前記生体試料は膵臓癌患者のものであると判定する工程と、
を備えたことを特徴とする、生体試料の判定方法。
[53]膵臓癌以外の膵臓疾患が、膵炎である、[51]又は[52]記載の方法。
本発明の、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法は、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定することを特徴とする方法である。
本発明における検体としては、エクソソームが有するGPRC5Cが測定され得る検体であれば特に制限はなく、例えば血液、尿、唾液、乳汁、鼻汁、脳脊髄液等が挙げられ、血液が好ましい。前記血液としては、例えば、全血、血清、血漿等が挙げられ、血清が好ましい。
本発明において、エクソソームが有するGPRC5C濃度とは、単位容量あたりの量又はモル数のみならず、単位容量あたりのシグナル強度をも包含する。
本発明において、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法は、以下の工程を含む方法により行うことができる。
(1)被検者より検体を採取する工程;
(2)工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3)工程(2)で測定したGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定する工程。
以下、各工程について詳細に説明する。
工程(1)において、被検者より採取された検体としては、前述の検体等が挙げられる。
工程(2)は、工程(1)で採取された検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を測定する工程である。工程(1)で採取された検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度は、例えば、免疫学的測定法によって測定することができる。免疫学的測定法としては、検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を抗原抗体反応を用いて測定できる方法であれば如何なる方法でも用いることができ、例えば、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法、及び、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片と、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片とを用いる方法等が挙げられる。
また、固相用抗体として、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用い、標識用抗体として、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いる場合は、固相に固定化されたエクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片に、検体中のエクソソームを結合させ、次いで、標識化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を添加して、固相上に、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片、エクソソーム、及び、標識化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片の複合体を形成させ、形成した該複合体中の該標識を測定することにより、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cを測定することができる。
蛍光物質としては、例えば、フルオレッセイン イソチオシアナート(FITC)、ローダミンB−イソチオシアナート(RITC)等が挙げられる。その他の蛍光物質としては、例えば、quantum dot(Science, 281, 2016−2018,1998)、フィコエリスリン等のフィコビリ蛋白質、GFP(Green fluorescent Protein)、RFP(Redfluorescent Protein、YFP (Yellow fluorescent Protein)、BFP(Blue fluorescent Protein)等の蛍光を発する蛋白質が挙げられる。
発光物質としては、例えば、アクリジニウム及びその誘導体、ルテニウム錯体化合物、ロフィン等が挙げられる。ルテニウム錯体化合物としては、電子供与体と共に電気化学的に発光する、Clin.Chem.37,9,1534−1539, 1991に示されたものが好ましい。
放射性同位元素としては、例えば、3H、14C、35S、32P、125I、131I等が挙げられる。
タグ配列を含むポリペプチドとしては、FLAGペプチド(FLAGタグ、Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys)、ポリヒスチジン(Hisタグ、His His His His His His)、mycエピトープペプチド(mycタグ、Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu)、ヘマグルチニンエピトープペプチド(HAタグ、Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala)等が挙げられる。
また、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片にビオチンを結合させたビオチン化抗体、及びAlphaLISAアクセプタービーズを結合させたGPRC5Cに結合する抗体又は抗体断片を、検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cと反応させ、その後、ストレプ卜アビジンが結合したドナービーズを添加することで、該アクセプタービーズ、エクソソーム、及び、該ドナービーズの複合体を形成させる。該複合体のドナービーズに励起光を照射し一重項酸素を発生させ、発生した一重項酸素と該アクセプタービーズとの反応により生成する光を測定する。
工程(3)は、工程(2)で得られた、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する工程であり、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定される。
健常者より採取した検体としては、被検者より採取した検体と同種の試料であることが好ましく、例えば、被検者より採取した検体が血液である場合、健常者より採取した検体も血液を用いることが好ましい。
被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と、健常者より採取した検体中のエクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する方法としては、特に限定はなく、公知の方法(Steel法、t検定、Wilcoxon検定等)を用いることができる。該解析により、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高いことが示された場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低いことが示された場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定される。
また、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を判定するための基準値として、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の代わりに、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を用いることもできる。この場合、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合と比較する。エクソソーム特異抗原としては、例えば前述のエクソソーム特異抗原等が挙げられる。
[測定方法2]
(1A)被検者より検体を採取する工程;
(2A)工程(1A)で採取した検体からエクソソームを単離する工程;
(3A)工程(2A)で単離したエクソソームが有するGPRC5C濃度を測定する工程;
(4A)工程(3A)で測定したGPRC5C濃度から、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定する工程;
(5A)工程(4A)で決定したGPRC5C濃度が、健常者から採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者から採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定する工程。
以下、各工程について詳細に説明する。
工程(1A)において、被検者より採取された検体としては、前述の検体等が挙げられる。
工程(2A)における、エクソソームを単離する方法としては、検体中のエクソソームを単離できる方法であれば特に制限はなく、例えば超遠心法(Trends in Molecular Medicine.21,533(2015))、エクソソーム単離キットEXO−Prep(コスモバイオ社製)を用いる方法等が挙げられる。
工程(3A)におけるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法は、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定し得る方法であれば、如何なる方法を用いて行うことができ、例えば免疫学的測定法等の方法を用いて行うことができる。免疫学的測定法によるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法としては、以下の態様が挙げられる。
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
・態様2
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
態様2の方法としては、単離したエクソソームを破壊せずに測定する場合には、上記測定方法1に記載した免疫学的測定方法、例えば、エクソスクリーン法等が挙げられ、単離したエクソソームを破壊して測定する場合には、サンドイッチELISA法等が挙げられる。エクソスクリーン法としては、例えば、前述のエクソスクリーン法等が挙げられる。
単離したエクソソームを破壊せずに測定する場合は、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片は、前記GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片のうち、エクソソーム表面に存在するGPRC5Cのエピトープに結合する抗体又は抗体断片を用いる。
単離したエクソソームを破壊する方法としては、例えば、超音波を用いる方法等が挙げられる。サンドイッチELISA法としては、例えば、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いても、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いてもよい。固相及び標識としては、例えば公知の固相及び標識がそれぞれ挙げられ、例えば、前記の固相及び標識がそれぞれ用いられる。固相用抗体及び標識用抗体の調製方法としては、例えば公知の調製方法が挙げられる。
工程(4A)は、工程(3A)で測定したGPRC5C濃度から、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定する工程である。該検体の容量と、工程(3A)で測定したGPRC5C濃度とから、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定することができる。
工程(5A)は、工程(4A)で決定された、該被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する工程であり、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定される。
健常者の検体としては、被検者の検体と同種の試料であることが好ましく、例えば、被検者の検体が血液である場合、健常者の検体も血液を用いることが好ましい。
また、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を判定するための基準値として、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の代わりに、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を用いることもできる。この場合、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合と比較する。エクソソーム特異抗原としては、例えば前述のエクソソーム特異抗原等が挙げられる。
本発明の、膵臓疾患患者より採取した検体中のエクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定することを特徴とする方法である。
本発明の鑑別方法における検体としては、エクソソームが有するGPRC5Cが測定され得る検体であれば特に制限はなく、例えば前述の検体等が挙げられる。
本発明の鑑別方法において、エクソソームが有するGPRC5Cは、エクソソームに内包されていても、エクソソームの膜表面に存在していても、エクソソームの膜を貫通していても、何れの形態で存在していてもよい。
本発明の鑑別方法において、エクソソームが有するGPRC5C濃度とは、単位容量あたりの質量又はモル数のみならず、単位容量あたりのシグナル強度をも包含する。
本発明の、膵臓疾患患者において、膵臓癌と膵臓癌以外膵臓疾患とを鑑別する方法は、以下の工程を含む方法により行うことができる。
(1B)被検者より検体を採取する工程;
(2B)工程(1B)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3B)工程(2B)で測定したGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌以外の膵臓疾患に罹患している可能性が高いと判定する工程。
以下、各工程について詳細に説明する。
工程(1B)において、被検者より採取された検体としては、前述の検体等が挙げられる。
工程(2B)におけるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法は、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定し得る方法であれば、如何なる方法を用いて行うことができ、例えば免疫学的測定法等の方法を用いて行うことができる。免疫学的測定法によるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法としては、以下の態様が挙げられる。
・態様1
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
・態様2
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
工程(2B)におけるエクソソーム特異的抗原としては、例えば前述の抗原等が挙げられる。
工程(2B)において、検体中のエクソソームを破壊せずに、検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する場合には、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片として、上記GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片のうち、エクソソーム表面に存在するGPRC5Cのエピトープに結合する抗体又は抗体断片を用いることが好ましい。
工程(3B)は、工程(2B)で得られた、膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する工程であり、膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、GPRC5C濃度よりも高い場合には該膵臓疾患患者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、GPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該膵臓疾患患者は膵臓癌以外の膵臓疾患に罹患している可能性が高いと判定する工程である。
膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体としては、被検者より採取した検体と同種の試料であることが好ましく、例えば、被検者より採取した検体が血液である場合、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体も血液を用いることが好ましい。
被検者より採取した検体中のエクソソームが有するGPRC5C濃度と、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中のエクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する方法としては、特に限定はなく、例えば前述の方法等を用いることができる。該解析により、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高いことが示された場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低いことが示された場合は、該被検者は膵臓癌以外の膵臓疾患に罹患している可能性が高いと判定される。
また、膵臓疾患患者において、膵臓癌と膵臓癌以外の膵臓疾患とを鑑別するための基準値として、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の代わりに、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を用いることもできる。この場合、膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合と比較する。エクソソーム特異抗原としては、例えば前述のエクソソーム特異抗原等が挙げられる。
[測定方法4]
(1C)膵臓疾患患者より検体を採取する工程;
(2C)工程(1C)で採取した検体からエクソソームを単離する工程;
(3C)工程(2C)で単離したエクソソームが有するGPRC5C濃度を測定する工程;
(4C)工程(3C)で測定したGPRC5C濃度から、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定する工程;
(5C)工程(4C)で決定したGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、膵臓癌以外の膵臓疾患より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌以外の膵臓疾患に罹患している可能性が高いと判定する工程。
工程(1C)において、被検者より採取された検体としては、前述の検体等が挙げられる。
工程(2C)における、エクソソームを単離する方法としては、検体中のエクソソームを単離できる方法であれば特に制限はなく、例えば前述の方法等が挙げられる。
工程(3C)におけるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法は、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定し得る方法であれば、如何なる方法を用いて行うことができ、例えば免疫学的測定法等の方法を用いて行うことができる。免疫学的測定法によるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法としては、以下の態様が挙げられる。
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
・態様2
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
態様2の方法としては、単離したエクソソームを破壊せずに測定する場合には、上記測定方法1に記載した免疫学的測定方法、例えば、エクソスクリーン法等が挙げられ、単離したエクソソームを破壊して測定する場合には、サンドイッチELISA法等が挙げられる。エクソスクリーン法としては、例えば前述のエクソスクリーン法等が挙げられる。
単離したエクソソームを破壊する方法としては、例えば前述の方法等が挙げられる。
サンドイッチELISA法としては、例えばGPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いても、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いてもよい。固相及び標識としては、例えば公知の固相及び標識がそれぞれ挙げられ、例えば前述の固相及び標識がそれぞれ用いられる。固相用抗体及び標識用抗体の調製方法としては、例えば公知の調製方法が挙げられる。
工程(4C)は、工程(3C)で測定したGPRC5C濃度から、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定する工程である。該検体の容量と、工程(3C)で測定したGPRC5C濃度とから、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定することができる。
工程(5C)は、工程(4C)で決定された、該膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と、膵臓癌以外の膵臓疾患より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する工程であり、膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該膵臓疾患患者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、膵臓癌以外の膵臓疾患より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には、該膵臓疾患患者は膵臓癌以外の膵臓疾患に罹患している可能性が高いと判定される。
この場合、基準値を設定する際に用いた膵臓癌以外の膵臓疾患患者の検体は、被検者である膵臓疾患患者の検体と同種の試料であることが好ましく、例えば、被検者である膵臓疾患患者の検体が血液である場合、膵臓癌以外の膵臓疾患患者の検体も血液を用いることが好ましい。
被検者のエクソソームが有するGPRC5C濃度と、膵臓癌以外の膵臓疾患患者のエクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する方法としては、前述の方法を用いることができる。該解析により、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高いことが示された場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低いことが示された場合は、該被検者は膵臓癌以外の膵臓疾患患者に罹患している可能性が高いと判定される。
また、膵臓疾患患者において、膵臓癌と膵臓癌以外の膵臓疾患とを鑑別するための基準値として、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の代わりに、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を用いることもできる。この場合、膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合と比較する。エクソソーム特異抗原としては、例えば前述のエクソソーム特異抗原等が挙げられる。
本発明の、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングする方法は、被検者より経時的に採取した検体中のエクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定することを特徴とする方法である。
本発明において、エクソソームが有するGPRC5Cは、エクソソームに内包されていても、エクソソームの膜表面に存在していても、エクソソームの膜を貫通していても、何れの形態で存在していてもよい。
本発明において、エクソソームが有するGPRC5C濃度とは、単位容量あたりの質量又はモル数のみならず、単位容量あたりのシグナル強度をも包含する。
本発明において、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングする方法は、以下の工程を含む方法により行うことができる。
(1D)被検者より経時的に検体を採取する工程;
(2D)工程(1D)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3D)工程(2D)で測定したGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が低いと判定する工程。
工程(1D)において、被検者より採取された検体としては、前述の検体等が挙げられる。
工程(2D)におけるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法は、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定し得る方法であれば、如何なる方法を用いて行うことができ、例えば免疫学的測定法等の方法を用いて行うことができる。免疫学的測定法によるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法としては、以下の態様が挙げられる。
・態様1
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
・態様2
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
工程(2D)におけるGPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片としては、GPRC5Cを測定できる抗体又は該抗体断片であれば特に制限はなく、例えば前述の抗体又は該抗体断片等が挙げられる。
工程(2D)におけるエクソソーム特異的抗原としては、例えば前述の抗原等が挙げられる。
工程(2D)において、上記2種類の抗体又は該抗体断片を用いる場合は、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いて、エクソソームが有するGPRC5C濃度を測定することができる。または、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いて、エクソソームが有するGPRC5C濃度を測定することもできる。固相用抗体及び標識用抗体の調製は、特に限定はなく、公知の方法に従って行うことができる。
エクソソームが有するGPRC5Cの測定方法は、エクソソームが有するGPRC5Cを測定し得る方法であれば、如何なる方法を用いて行うことができ、例えば前述のサンドイッチELISA、エクソスクリーン法等の免疫学的測定法等を用いて行うことができる。
工程(2D)において、検体中のエクソソームを破壊せずに、検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する場合には、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片として、上記GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片のうち、エクソソーム表面に存在するGPRC5Cのエピトープに結合する抗体又は抗体断片を用いることが好ましい。
工程(3D)は、工程(2D)で得られた、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する工程であり、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が低いと判定する。
健常者より採取した検体としては、被検者より採取した検体と同種の試料であることが好ましく、例えば、被検者より採取した検体が血液である場合、健常者より採取した検体も血液を用いることが好ましい。
被検者より経時的に採取した検体中のエクソソームが有するGPRC5C濃度と、健常者より採取した検体中のエクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する方法としては、特に限定はなく、例えば前述の方法等を用いることができる。該解析により、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、健常者により採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い濃度で維持されている場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い濃度で維持されている場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が低いと判定される。
また、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングするための基準値として、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の代わりに、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を用いることもできる。この場合、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合と比較する。エクソソーム特異抗原としては、例えば前述のエクソソーム特異抗原等が挙げられる。
[測定方法6]
(1E)被検者より経時的に検体を採取する工程;
(2E)工程(1E)で採取した検体からエクソソームを単離する工程;
(3E)工程(2E)で単離したエクソソームが有するGPRC5C濃度を測定する工程;
(4E)工程(3E)で測定したGPRC5C濃度から、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定する工程;
(5E)工程(4E)で決定したGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高いで維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が低いと判定する工程。
工程(1E)において、被検者より採取された検体としては、前述の検体等が挙げられる。
工程(2E)における、エクソソームを単離する方法としては、検体中のエクソソームを単離できる方法であれば特に制限はなく、例えば前述の方法等が挙げられる。
工程(3E)におけるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法は、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定し得る方法であれば、如何なる方法を用いて行うことができ、例えば免疫学的測定法等の方法を用いて行うことができる。免疫学的測定法によるエクソソームが有するGPRC5C濃度の測定方法としては、以下の態様が挙げられる。
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
・態様2
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を用いる方法。
単離したエクソソームを破壊せずに測定する場合は、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片は、前記GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片のうち、エクソソーム表面に存在するGPRC5Cのエピトープに結合する抗体又は抗体断片を用いる。
単離したエクソソームを破壊する方法としては、例えば前述の方法等が挙げられる。
サンドイッチELISA法としては、例えばGPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いても、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を固相用抗体として、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を標識用抗体として用いてもよい。固相及び標識としては、例えば公知の固相及び標識がそれぞれ挙げられ、例えば前述の固相及び標識がそれぞれ用いられる。固相用抗体及び標識用抗体の調製方法としては、例えば公知の調製方法が挙げられる。
工程(4E)は、工程(3E)で測定したGPRC5C濃度から、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定する工程である。該検体の容量と、工程(3E)で測定したGPRC5C濃度とから、該検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を決定することができる。
工程(5E)は、工程(4E)で決定された、該被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する工程であり、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い濃度で維持されている場合には、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が低いと判定される。
健常者の検体としては、被検者の検体と同種の試料であることが好ましく、例えば、被検者の検体が血液である場合、健常者の検体も血液を用いることが好ましい。
被検者のエクソソームが有するGPRC5C濃度と、健常者のエクソソームが有するGPRC5C濃度とを対比する方法としては、前述の方法を用いることができる。該解析により、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い濃度で維持されている場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定され、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い濃度で維持されている場合は、該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が低いと判定される。
また、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングするための基準値として、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の代わりに、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を用いることもできる。この場合、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合を、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の、エクソソーム特異抗原濃度に対する割合と比較する。エクソソーム特異抗原としては、例えば前述のエクソソーム特異抗原等が挙げられる。
また、本発明によれば、治療中の膵臓癌患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を測定することで、膵臓癌の再発を予測することができる。
また、本発明によれば、被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度を測定することで、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングすることができる。
本発明の、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験するための試薬は、エクソソームが有するGPRC5C測定試薬を含有することを特徴とする試薬であり、本発明の、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法に用いることができる。
免疫学的測定法に基づいた、エクソソームが有するGPRC5C測定試薬の具体的態様を以下に示す。
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬2
標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬3
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬4
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬5
固相に固定化された、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬6
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する第1抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、GPRC5Cに結合する第2抗体又は該抗体断片を含む試薬。
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片としては、それぞれ前述のGPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片等が挙げられる。
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、固相に固定化された、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片における固相としては、例えば前述の固相等が挙げられる。GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片の固相への固定化、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片の固相への固定化は、例えば公知の方法に従って行うことができる。
測定試薬6において、GPRC5Cに結合する第1抗体又は該抗体断片が結合するエピトープと、GPRC5Cに結合する第2抗体又は該抗体断片が結合するエピトープは異なっていても同じでもよいが、異なっている方が好ましい。
前記測定試薬1〜6には、さらにエクソソーム単離試薬が含まれていてもよい。エクソソーム単離試薬としては、検体からエクソソームを単離できる試薬であれば特に制限はなく、例えば前述のエクソソーム単離キット等が挙げられる。
本発明の、膵臓疾患患者において、膵臓癌と膵臓癌以外の膵臓疾患とを鑑別するための試薬は、エクソソームが有するGPRC5C測定試薬を含有することを特徴とする試薬であり、本発明の、膵臓疾患患者において、膵臓癌と、膵臓癌以外の膵臓疾患とを鑑別する方法に用いることができる。
免疫学的測定法に基づいた、エクソソームが有するGPRC5C測定試薬の具体的態様を以下に示す。
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬8
標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬9
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬10
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬11
固相に固定化された、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬12
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する第1抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、GPRC5Cに結合する第2抗体又は該抗体断片を含む試薬。
標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片における標識としては、例えば前述の標識等が挙げられる。標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片の調製は、例えば公知の標識化抗体の調製方法に従って行うことができる。
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、固相に固定化された、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片における固相としては、例えば前述の固相等が挙げられる。GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片の固相への固定化、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片の固相への固定化は、例えば公知の方法に従って行うことができる。
測定試薬12において、GPRC5Cに結合する第1抗体又は該抗体断片が結合するエピトープと、GPRC5Cに結合する第2抗体又は該抗体断片が結合するエピトープは異なっていても同じでもよいが、異なっている方が好ましい。
前記測定試薬7〜12には、さらにエクソソーム単離試薬が含まれていてもよい。エクソソーム単離試薬としては、検体からエクソソームを単離できる試薬であれば特に制限はなく、例えば前述のエクソソーム単離キット等が挙げられる。
本発明の、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングするための試薬は、エクソソームが有するGPRC5C測定試薬を含有することを特徴とする試薬であり、本発明の、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングする方法に用いることができる。
免疫学的測定法に基づいた、エクソソームが有するGPRC5C測定試薬の具体的態様を以下に示す。
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬14
標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬15
GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬16
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬17
固相に固定化された、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む試薬。
・測定試薬18
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する第1抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、GPRC5Cに結合する第2抗体又は該抗体断片を含む試薬。
標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片における標識としては、例えば前述の標識等が挙げられる。標識が結合した、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、標識が結合した、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片の調製は、例えば公知の標識化抗体の調製方法に従って行うことができる。
固相に固定化された、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、固相に固定化された、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片における固相としては、例えば前述の固相等が挙げられる。GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片の固相への固定化、及び、エクソソーム特異的抗原に結合する抗体又は該抗体断片の固相への固定化は、例えば公知の方法に従って行うことができる。
測定試薬18において、GPRC5Cに結合する第1抗体又は該抗体断片が結合するエピトープと、GPRC5Cに結合する第2抗体又は該抗体断片が結合するエピトープは異なっていても同じでもよいが、異なっている方が好ましい。
前記測定試薬13〜18には、さらにエクソソーム単離試薬が含まれていてもよい。エクソソーム単離試薬としては、検体からエクソソームを単離できる試薬であれば特に制限はなく、例えば前述のエクソソーム単離キット等が挙げられる。
本発明の膵臓癌マーカーは、GPRC5C又はGPRC5C遺伝子からなることを特徴とする。ヒトGPRC5CのGenBankのアクセッション番号は、NP_071319.2;NP_061123.3である。また、ヒトGPRC5CのmRNAのGenBankのアクセッション番号は、NM_022036.2;NM_018653.3である。
本発明の膵臓癌診断薬は、GPRC5Cに対する特異的結合物質、GPRC5C遺伝子を増幅可能なプライマーセット、又はGPRC5C遺伝子のmRNAに特異的にハイブリダイズするプローブを備えたことを特徴とする。
特異的結合物質としては、GPRC5Cに結合する抗体、該抗体断片、GPRC5Cに結合するアプタマー等が挙げられる。抗体又は該抗体断片としては、前述したものが挙げられる。
GPRC5C遺伝子を増幅可能なプライマーセットとは、これらの遺伝子のmRNAをRT−PCR等により増幅することができるものであれば特に制限されない。
プローブとしては、GPRC5C遺伝子のmRNAに特異的にハイブリダイズするものであれば特に限定されない。プローブは、担体上に固定されてDNAマイクロアレイ等を構成していてもよい。例えば、上記のDNAマイクロアレイに、被検者の組織から抽出したmRNAを接触させ、プローブにハイブリダイズしたGPRC5C遺伝子のmRNAを検出することにより、被検者が膵臓癌に罹患しているか否かを判定することができる。担体としては、例えば前述の担体等が挙げられる。
本発明の生体試料の判定方法は、生体試料中のGPRC5Cの存在量を測定する工程と、測定されたGPRC5Cの存在量が、対照と比較して多い場合に、前記生体試料は膵臓癌患者より採取されたものであると判定する工程と、を含む。
ここで、測定したGPRC5Cは、段階希釈した既知濃度のGPRC5Cを標準品として用いて作成された検量線に基づいて、定量値に換算してもよい。
各血清中のエクソソームが有するGRPC5Cの検出
健常人から採取した血清(4検体)、膵炎患者から採取した血清(4検体)、及び膵臓癌患者から採取した血清(4検体:ステージIIAが2種類、ステージIIBが1種類、ステージIIIが1種類)を、スイングロータにて100,000×g以上で(4 ℃)で70分間超遠心分離後、上清を捨てて、PBS[0.15 mol/L塩化ナトリウムを含有する10 mmol/Lリン酸緩衝液(pH7.2)]を加えて沈殿させ、この沈殿画分をエクソソーム画分とした。このエクソソーム画分をPBS(総量100 μL)で溶解した。1wellにつき血清100 μL相当量のエクソソーム画分溶液に、該溶液と1/3量の4×サンプルバッファー(4%ドデシル硫酸ナトリウム、10% スクロース、0.01% ブロモフェノールブルー、10% 2-メルカプトエタノールを含む、0.125 mol/L トリス緩衝液[pH6.8])を加えて混合し、95℃で5分間保温した後、氷冷した。該処理液を、4-15%ミニプロティアンTGXゲル(バイオラッド社製)のウェルにアプライし、SDS-PAGEを行った。SDS-PAGE後のゲルをPVDF メンブレンに転写した後、該メンブレンを、Nacalai Blocking One solution[ナカライテスク社製]を用いて、室温(25℃)で1時間ブロッキングした。次に、室温(25℃)で1時間、一次抗体反応を行った(Anti-GPRC5C antibody C-terminal Rabbit polyclonal[アブカム社製] 1:500)。続いて室温(25℃)で1時間、二次抗体反応を行った(Rabbit IgG HRP[GEヘルスケア社製] 1:5000)。最後に、ImmunoStar LD(和光純薬工業社製)を用いて発色反応(室温[25℃]5分)を行い、ブロッティング画像を撮影し、それぞれの血清中のエクソソームが有するGPRC5Cのシグナルを検出した。ブロッティング画像の結果を図1に示す。
図1から明らかなように、健常人と膵臓癌患者と比較して、膵臓癌患者において、顕著に、エクソソームが有するGPRC5Cが高発現していることが判明した。
健常人から採取した血清(10検体)、膵炎患者から採取した血清(10検体)、及び膵臓癌患者から採取した血清(23検体)を用いて、それぞれの血清中のエクソソームが有するGPRC5C濃度を比較するため、実施例1の方法に従い、それぞれの血清中の、エクソソームが有するGPRC5Cのシグナル及びCD63のシグナルを、エクソソームが有するGPRC5C濃度及びCD63濃度として検出した。GPRC5C/CD63のシグナル比を図2に示す。
図2から明らかなように、健常人から採取した血清中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度に比べ、膵臓癌患者から採取した血清中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が高値であることが判明した。また、膵炎患者から採取した血清中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度に比べ、膵臓癌患者から採取した血清中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度が高値であることが判明した。
膵臓癌患者(5症例)について、手術前と手術後における、それぞれの血清中のエクソソームが有するGPRC5C濃度を、実施例1の方法に従い、ウェスタンブロッティングを用いて比較した。ブロッティング画像の結果を図3に示す。
図3から明らかなように、手術前に比較して、手術後では顕著に、エクソソームが有するGPRC5C濃度が低下していることが判明した。
再発した膵臓癌患者より採取した血清中のエクソソームが有するGPRC5C濃度、及び、健常人より採取した血清中のエクソソームが有するGPRC5C濃度を、ウェスタンブロッティングを用いる実施例1の方法により測定し、両GPRC5C濃度を比較した。また、同時に、各血清中の、エクソソームが有するCD9濃度を、抗CD9抗体(8A12)(コスモバイオ社製)をビオチン化したビオチン化抗CD9抗体(1000倍希釈)及びHRP結合ストレプトアビジン (CST社製)(2000倍希釈)を用いる、ウェスタンブロッティングにより測定した。測定したGPRC5C濃度及びCD9濃度から、CD9濃度に対するGPRC5C濃度の割合を算出し、GPRC5C/CD9のシグナル比とした。当該GPRC5C/CD9のシグナル比を図4に示す。
図4から明らかなように、健常人より採取した血清中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と比較して、再発した膵臓癌患者より採取した血清中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度の方が高値であることが判明した。
Claims (53)
- 被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C(G−protein coupled Receptor family C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)を測定することを特徴とする、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法。
- 以下の工程を含むことを特徴とする、請求項1に記載の方法。
(1)被検者より検体を採取する工程;
(2)工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3)工程(2)で測定したGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定する工程 - 前記工程(2)において、前記工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度の測定が、検体より単離されたエクソソームを用いて行われる、請求項2に記載の方法。
- 前記工程(2)が免疫学的測定法によって行われる、請求項2又は3に記載の方法。
- 前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、請求項4に記載の方法。
- 前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソームに特異的に発現する抗原(以下、エクソソーム特異的抗原という)に結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、請求項4に記載の方法。
- 前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1:細胞間接着分子−1)、Rab5、Annexin V、又はLAMP1(lysosome−associated membrane protein 1:リソソーム膜タンパク質1)である、請求項6に記載の方法。
- 前記検体が、血液である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C(G−protein coupled Receptor family C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)を測定することを特徴とする、膵臓疾患患者において、膵臓癌と膵臓癌以外の膵臓疾患とを鑑別する方法。
- 以下の工程を含むことを特徴とする、請求項9に記載の方法。
(1)膵臓疾患患者より検体を採取する工程;
(2)工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3)工程(2)で測定したGPRC5C濃度が、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、膵臓癌以外の膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い場合には該被検者は膵臓癌以外の膵臓疾患に罹患している可能性が高いと判定する工程 - 前記工程(2)において、前記工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度の測定が、検体より単離されたエクソソームを用いて行われる、請求項10記載の方法。
- 前記工程(2)が免疫学的測定法によって行われる、請求項10又は11に記載の方法。
- 前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、請求項12に記載の方法。
- 前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及び、エクソソームに特異的に発現する抗原(以下、エクソソーム特異的抗原という)に結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、請求項12に記載の方法。
- 前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1:細胞間接着分子−1)、Rab5、Annexin V、又はLAMP1(lysosome−associated membrane protein 1:リソソーム膜タンパク質1)である、請求項14に記載の方法。
- 前記膵臓癌以外の膵臓疾患が、膵炎である、請求項9〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記検体が、血液である、請求項9〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 被検者より経時的に採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C(G−protein coupled Receptor family C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)を測定することを特徴とする、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングする方法。
- 以下の工程を含むことを特徴とする、請求項18に記載の方法。
(1)被検者より経時的に検体を採取する工程;
(2)工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度を測定する工程;
(3)工程(2)で測定したGPRC5C濃度が、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度よりも高い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性が高いと判定し、健常者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C濃度と同じか又は低い濃度で維持されている場合には該被検者は膵臓癌に罹患している可能性は低いと判定する工程。 - 前記工程(2)において、前記工程(1)で採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5Cの濃度の測定が、検体より単離されたエクソソームを用いて行われる、請求項19記載の方法。
- 前記工程(2)が免疫学的測定法によって行われる、請求項19又は20に記載の方法。
- 前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、請求項21に記載の方法。
- 前記免疫学的測定法が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片、及びエクソソームに特異的に発現する抗原(以下、エクソソーム特異的抗原という)に結合する抗体又は該抗体断片を用いて行われる、請求項21に記載の方法。
- 前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1:細胞間接着分子−1)、Rab5、Annexin V、又はLAMP1(lysosome−associated membrane protein 1:リソソーム膜タンパク質1)である、請求項23に記載の方法。
- 前記検体が、血液である、請求項18〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 被検者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C(G−protein coupled Receptor family C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)測定試薬を含むことを特徴とする、被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験するための試薬。
- 前記GPRC5C測定試薬が、免疫学的測定試薬である、請求項26に記載の試薬。
- 前記免疫学的測定試薬が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む、請求項27に記載の試薬。
- 前記免疫学的測定試薬が、さらに、エクソソームに特異的に発現する抗原(以下、エクソソーム特異的抗原という)に結合する抗体又は該抗体断片を含む、請求項28に記載の試薬。
- 前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1:細胞間接着分子−1)、Rab5、Annexin V、又はLAMP1(lysosome−associated membrane protein 1:リソソーム膜タンパク質1)である、請求項29に記載の試薬。
- さらに、エクソソーム単離試薬を含む、請求項26〜30のいずれか一項に記載の試薬。
- 前記検体が、血液である、請求項26〜31のいずれか一項に記載の試薬。
- 膵臓疾患患者より採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C(G−protein coupled Receptor family C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)測定試薬を含むことを特徴とする、膵臓癌患者と膵臓癌以外の膵臓疾患患者とを鑑別するための試薬。
- 前記GPRC5C測定試薬が、免疫学的測定試薬である、請求項33に記載の試薬。
- 前記免疫学的測定試薬が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む、請求項34に記載の試薬。
- 前記免疫学的測定試薬が、さらに、エクソソームに特異的に発現する抗原(以下、エクソソーム特異的抗原という)に結合する抗体又は該抗体断片を含む、請求項35に記載の試薬。
- 前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1:細胞間接着分子−1)、Rab5、Annexin V、又はLAMP1(lysosome−associated membrane protein 1:リソソーム膜タンパク質1)である、請求項36に記載の試薬。
- さらに、エクソソーム単離試薬を含む、請求項33〜37のいずれか一項に記載の試薬。
- 前記膵臓癌以外の膵臓疾患が、膵炎である、請求項33〜38のいずれか一項に記載の試薬。
- 前記検体が、血液である、請求項33〜39のいずれか一項に記載の試薬。
- 被検者より経時的に採取した検体中の、エクソソームが有するGPRC5C(G−protein coupled Receptor family C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)測定試薬を含むことを特徴とする、被検者が膵臓癌に罹患している可能性をモニタリングするための試薬。
- 前記GPRC5C測定試薬が、免疫学的測定試薬である、請求項41に記載の試薬。
- 前記免疫学的測定試薬が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片を含む、請求項42に記載の試薬。
- 前記免疫学的測定試薬が、さらに、エクソソームに特異的に発現する抗原(以下、エクソソーム特異的抗原という)に結合する抗体又は該抗体断片を含む、請求項43に記載の試薬。
- 前記エクソソーム特異的抗原が、CD63、CD9、CD81、CD37、CD53、CD82、CD13、CD11、CD86、ICAM−1(intercellular adhesion molecule−1:細胞間接着分子−1)、Rab5、Annexin V、又はLAMP1(lysosome−associated membrane protein 1:リソソーム膜タンパク質1)である、請求項44に記載の試薬。
- さらに、エクソソーム単離試薬を含む、請求項41〜45のいずれか一項に記載の試薬。
- 前記検体が、血液である、請求項41〜46のいずれか一項に記載の試薬。
- GPRC5C(G−protein coupled Receptor familyC group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)又はGPRC5C遺伝子からなることを特徴とする、膵臓癌マーカー。
- GPRC5C(G−protein coupled Receptor familyC group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)に対する特異的結合物質、GPRC5C遺伝子を増幅可能なプライマーセット、又はGPRC5C遺伝子のmRNAに特異的にハイブリダイズするプローブを含むことを特徴とする、膵臓癌診断薬。
- 前記GPRC5Cに対する特異的結合物質が、GPRC5Cに結合する抗体又は該抗体断片である、請求項49記載の診断薬。
- 生体試料中のGPRC5C(G−protein coupled Receptorfamily C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)の存在量を測定する工程と、
測定されたGPRC5Cの存在量が、健常者又は膵臓癌以外の膵臓疾患患者の生体試料中のGPRC5Cタンパク質の存在量と比較して多い場合に、前記生体試料は膵臓癌患者のものであると判定する工程と、
を含むことを特徴とする、生体試料の判定方法。 - 生体試料中のGPRC5C(G−protein coupled Receptorfamily C group 5 member C:Gタンパク質共役受容体、ファミリーC、グループ5、メンバーC)遺伝子の発現量を測定する工程と、
測定された前記遺伝子の発現量が、健常者又は膵臓癌以外の膵臓疾患患者の生体試料中のGPRC5C遺伝子の発現量と比較して多い場合に、前記生体試料は膵臓癌患者のものであると判定する工程と、
を含むことを特徴とする、生体試料の判定方法。 - 前記膵臓癌以外の膵臓疾患が、膵炎である、請求項51又は52記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2017003709 | 2017-01-12 | ||
JP2017003709 | 2017-01-12 | ||
PCT/JP2017/025115 WO2018131192A1 (ja) | 2017-01-12 | 2017-07-10 | 被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2018131192A1 true JPWO2018131192A1 (ja) | 2019-11-07 |
JP6797427B2 JP6797427B2 (ja) | 2020-12-09 |
Family
ID=62840493
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018561792A Active JP6797427B2 (ja) | 2017-01-12 | 2017-07-10 | 被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11965887B2 (ja) |
EP (1) | EP3570032B1 (ja) |
JP (1) | JP6797427B2 (ja) |
CN (1) | CN110462404B (ja) |
WO (1) | WO2018131192A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109324186B (zh) * | 2018-11-08 | 2019-05-10 | 上海宝藤生物医药科技股份有限公司 | 外泌体蛋白cd82、gpc1联合ca19-9用于胰腺癌早期诊断及疗效监控 |
JP7505682B2 (ja) | 2020-09-29 | 2024-06-25 | 国立大学法人三重大学 | 膵癌の検出方法 |
CN114807358B (zh) * | 2022-05-30 | 2023-02-28 | 北京体育大学 | 一种与肌腱损伤相关的生物标志物 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050260639A1 (en) * | 2002-09-30 | 2005-11-24 | Oncotherapy Science, Inc. | Method for diagnosing pancreatic cancer |
WO2005101001A2 (en) * | 2004-04-13 | 2005-10-27 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with g protein-coupled receptor, family c, group 5, member c (gprc5c) |
WO2005101012A1 (en) * | 2004-04-16 | 2005-10-27 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with g protein-coupled receptor, familiy c, group 5, member b (gprc5b) |
US8758991B2 (en) * | 2006-04-26 | 2014-06-24 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Isolation of membrane vesicles from biological fluids and methods of using same |
US8617806B2 (en) * | 2008-01-25 | 2013-12-31 | Hansabiomed Ou | Method to measure and characterize microvesicles in the human body fluids |
AU2009212543B2 (en) * | 2008-02-01 | 2015-07-09 | The General Hospital Corporation | Use of microvesicles in diagnosis, prognosis and treatment of medical diseases and conditions |
CA2860144C (en) | 2011-12-22 | 2020-01-21 | Takahiro Ochiya | Method of exosome analysis, reagent for exosome analysis, and analyzer for exosome |
WO2014167969A1 (ja) | 2013-04-08 | 2014-10-16 | 塩野義製薬株式会社 | 大腸がんの検出方法 |
WO2016057629A1 (en) * | 2014-10-07 | 2016-04-14 | Duke University | Methods and therapeutics relating to human r-spondin protein and leucine-rich repeat-containing g protein-coupled receptor protein |
JP6611477B2 (ja) | 2015-06-08 | 2019-11-27 | キヤノン株式会社 | 撮像装置、発光制御方法、プログラム |
-
2017
- 2017-07-10 WO PCT/JP2017/025115 patent/WO2018131192A1/ja unknown
- 2017-07-10 EP EP17891449.5A patent/EP3570032B1/en active Active
- 2017-07-10 JP JP2018561792A patent/JP6797427B2/ja active Active
- 2017-07-10 CN CN201780082943.5A patent/CN110462404B/zh active Active
- 2017-07-10 US US16/476,921 patent/US11965887B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3570032B1 (en) | 2023-04-12 |
CN110462404B (zh) | 2023-06-02 |
WO2018131192A1 (ja) | 2018-07-19 |
CN110462404A (zh) | 2019-11-15 |
EP3570032A4 (en) | 2020-11-25 |
JP6797427B2 (ja) | 2020-12-09 |
US20190331685A1 (en) | 2019-10-31 |
US11965887B2 (en) | 2024-04-23 |
EP3570032A1 (en) | 2019-11-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6183809B2 (ja) | ペリオスチンの特定領域に結合する抗体及びこれを用いたペリオスチンの測定方法 | |
JP6812521B2 (ja) | クロモグラニンaを検出するための免疫アッセイ法および抗体 | |
US20140271621A1 (en) | Methods of prognosis and diagnosis of pancreatic cancer | |
CN110873711B (zh) | 一种基于全自动化学发光分析仪的血清tk1检测试剂盒 | |
CN111316099A (zh) | 用于1型糖尿病诊断的基于脂蛋白体的znt8自身抗原 | |
JP6797427B2 (ja) | 被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法 | |
KR101794403B1 (ko) | 쇼그렌증후군 특이적 항체반응 검사를 이용한 쇼그렌증후군 진단방법 | |
US20170097352A1 (en) | Immunoglobulin-bound extracellular vesicles and uses thereof | |
JP2019516104A (ja) | 子宮内膜がんのマーカーとしてのmmp9 | |
JP6873460B2 (ja) | 被検者が膵臓癌に罹患している可能性を試験する方法 | |
US20190011451A1 (en) | Methods and compositions for assaying blood levels of legumain | |
RU2707071C2 (ru) | Способы детектирования антител против членов семейства сердечных рецепторов | |
WO2021187173A1 (ja) | 消化管間質腫瘍を検出する方法および検出試薬 | |
US20170089909A1 (en) | Methods and compositions for assaying blood levels of legumain | |
JP2019190883A (ja) | 新規肺がんマーカー | |
CN115746134A (zh) | 半乳糖凝集素-3的免疫测定 | |
US8313917B2 (en) | Methods of diagnosing latent and active malignancies | |
KR20240151234A (ko) | 세린 프로테아제의 검출용 또는 측정용 시약 | |
JP2023004699A (ja) | Abo血液型不適合腎移植を行う被験動物における抗体関連型拒絶反応の可能性を試験する方法 | |
CN116539894A (zh) | Capg在制备病理性心肌肥厚检测试剂中的应用 | |
WO2010062705A1 (en) | Cancer diagnosis using ki-67 | |
US20050186136A1 (en) | Soluble JAM-1, 2, and 3 as diagnostic & prognostic markers in cardiovascular, vascular, and inflammatory disorders | |
JP2011117922A (ja) | アレルギー疾患の検査方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A801 Effective date: 20190626 |
|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20190626 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190711 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20200508 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200520 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200508 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20200729 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20200805 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200923 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201005 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20201104 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20201111 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6797427 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |