JPS6345228A - 抗原の免疫原性の増強 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野１ 本発明は、疾病に対する免疫化、および／または助剤を
用いることなしに生体内での抗体応答の発生のための新
規な方法、並びにこの方法において用いられる新規なワ
クチン物質およびコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ
ｓ）に関する中［従来の技術ｊ 予防接種による疾病予防の従来法においては、ある物質
に対して抗体を導き出すその物質を、後に同−源物質を
含む病原性微生物により攻撃された場合、その物質を投
与された固体が疾病に対して保護されるように、注射ま
たは経口摂取することが中心的原理である。注射または
経口摂取された、抗体を導き出す性質を有する物質は抗
１７と称される。

抗原の免疫性（すなわち、抗体を導き出す能力）は、い
わゆる助剤の添加により改良され得ることは多年にわた
って知られていた。いくつかの事例では、明らかに少し
しか、または全く免疫性をもたない物質が、助剤の添加
によって生体内で抗体の力価を高めるようにされた。し
かしながら、これらの助剤のいくつかは、非常に毒性が
あり、望ましくない副作用または傷害を惹き起すことが
ある。酸化アルミニウムまたはリン酸アルミニウムは入
用ワクチンに日常的に用いられるが、注射部位にしこり
を惹き起すことが知られていた。フロイントの完全助剤
（ＦＣＡ）　、すなわち軽油と殺されたマイコバクテリ
ウム・ラベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
　　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）　との混合物は、生体
内で、その他の条件では通常抗体を生成させない物質に
対してすぐれた力価を、しばしば生じさせることができ
る。

不幸なことには、この物質を用いた場合、注射部位にし
ばしば傷害が発生するので、この方法は人に用い得ない
。

助剤として用いるために、他の多数の化合物が研究され
た。公開されたヨーロッパ特許出願第０１４９５８１号
には、ムラミルジペプチドの使用が開示されている。公
開された英国特許出願第２、０５３．２３１号にはテト
ラペプチドまたはペンタペプチドからなる合成助剤の使
用が開示されている。昔の特許にはオイル・エマルジョ
ンの使用が、助剤効果を有するとして開示されている。

不幸にして、ある物質が抗原免疫性の助剤として良く働
けば働くほど、副作用は大きくなるようにみえる。例え
ば、ムラミルジペプチドは優れた助剤であるが、人にワ
クチンとして用いるのを妨げる多くの望ましくない性質
をもつようであることが示された。

哨乳類に対して現在用いられている全ての助剤は、一般
に２つの異ったタイプに分かれろ。第１のタイプはいわ
ゆる”デイボウ“（ｄｉｐｏｔ）効果を包含し、また第
２のタイプは研究されている系の一般的免疫性の刺激に
依存している。デイボウ効果に依存する助剤は、そのデ
イボウ効果が、注射された抗原が媒体中で捕えられるか
、または不溶化され、一様に保たれた循環７３度を与え
ることに依存している抗原の場所に、免疫性の細胞をも
たらすと信じられる。免疫系の一般的刺激を必要とする
第２のタイプの助剤は、炎症性の反応に依存し、どの抗
原も抗体を導き出す改善された機会をもつように一連の
細胞が刺激される結果を生ずるようにみえる。

免疫学の最近の学説は、強い抗体反応を用意するために
、抗原は、抗体生産細胞へ引続いて進化するＢ細胞と抗
原特定ＢＩａ胞への生長と分化の信号を用意する介助Ｔ
！！ｌｌ胞とに、遭遇させられなければならないと示唆
する。

介助Ｔ細胞は、クラスＩＩの主要組織適合抗原（Ｍ）Ｉ
ｃ）遺伝子産物と会合している抗原提供細胞（ＡＰＣ）
の表面上に、抗原を認識する。

［発明の概要１ この発明は、受入れられない補薬類の使用を含まぬ新し
い免疫化方法を包含する。

一つの局面において、この発明は新規な免疫化方法を用
意し、Ｂ細胞と、クラスＩＩの主要組織適合抗原（〜Ｉ
）ＩＣ）遺伝子を代表する大食細胞系統の抗原提供細胞
（ＡＰＣ）　との両刀の実相の利益を獲得する。

補薬の存在下の抗原の注入の代りに、抗体は抗原提供細
胞の表面構造に特効があり、クラスＩＩの主要組織適合
抗原の決定要素を含むモノクロナル抗体と組合わされ、
この形を以って注入される。

それを抗原へ組合わせることにより、モノクロナル抗体
は“ベクター“あるいは“ディリバリー・ビークル“へ
転化される。

この“ベクター“あるいは“ディリバリービークル”は
免疫系中の関連細胞上の抗原用である。

この方法は、フロイントの完全補薬の存在下に抗原が注
入される場合に考えられるように、他の周りの方法より
もむしろ抗原を抗原提供細胞へ導く。

他の一つの局面において、この発明は抗原と、主要組織
適合抗原の遺伝子産物に特効があるモノクロナル抗体か
、適当な担持媒体中の他の表面構造の遺伝子産物に特効
があるモノクロナル抗体との結合からなる新規な免疫化
に使用されるための新規なワクチンを用意するのであり
、更に他の局面において、この発明は新規な組合せを用
意する。

この発明は、弱い抗原の免疫原性を増強すＳ新しい方法
を使用する。

そうして、この新しい方法は受入れられない補薬の使用
を含まず、従って−Ｍ安全であり、通常は非常に抗原性
的でない物質群のために使用可能な方法である。

このような物質の例は、より大きい蛋白質か、バントゲ
ン自体の蛋白質のサブユニットのエビトウプ類である小
さいペプチド類である。エビトウブ類は構造中において
免疫認識個所に相当する−７大きい抗原の部品である。

従って、この発明の予防接種法は不幸な副作用を持つ死
滅させられたか、減毒された有磯体の注射を避は得るの
であり、これは標的モノクロナル抗体との接合の形にお
ける同エビトウブ類あるいは蛋白質サブユニットの使用
により避は得るのである。

本発明においては、人体中で抗体に対して生ずることか
要求される抗原が、モノクロナールな抗体と結びついた
ものであり、該抗体は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ
Ｉの遺伝子生産物を含む、抗原となりつる（プレゼンテ
ィング）細胞の、表面構造に、特異性を示す。これは、
結びついた物質の投与のとき、免疫系中の関連細胞への
抗原の集中を許容する。故に、派生的に生ずる抗体は、
マクロファージ細胞上で抗原性決定要素をとするための
“ベクター”あるいは”デエリバグーヴイーイクル（ｄ
ｅｌｉｖｅｒｙｖｅｈｉｃｌｅ）　”として行動する。

これにより、Ｔヘルパー細胞の認識を容易化する。プレ
ゼンティング細胞は、クラス１とクラス２の組Ｉａ適合
性遺伝生産物を含む、多種の特殊な細胞表面構造をもつ
。このように、クラスｌとクラス２のＭＨＣ遺伝生産物
を含む抗原プレセンティング細胞上のいかなる表面構造
にも、特異性のある、モノクロナールな抗体とも、抗原
は結び付きつる。

本発明の有用なカップリング（結合したもの）の１つの
例は、ｌ−Ａ３クラスＩＩの主要組織適合性決定要素に
特異的なモノクロナールな抗体と抗原性タンパクの７ビ
デインｌである。この例は、上で述べた本発明の一般的
原理のほんの一例にすぎないことを理解すべきである。

かかる特定例において、Ｉ−ＡＫクラスＩＩの主要な組
織適合性決定子について特定なモノクロナル抗体は適切
なハイブリドーマ細胞系から調製しつる。他の蛋白との
コンジュゲーシヨンを容易にするために、適切な蛋白、
本例においてはアビジン、にさらすに先立って、抗体は
好ましくはビオチニレートされる。アビジンはビオチニ
レートされた抗体と強い親和性をもって結合し、かくて
あらかじめ抗原として特徴づけられる。このコンジュゲ
ートのドーズな変えたものが７　　ＡＫ決定子を表わし
ているマウスのあるストレインを処理するために用いら
れた。単にＩ−Ａｂ決定子を表わしている別のストレイ
ンのマウスが対照として用いられた。下記の実施例中に
詳細に記述しであるこれらの実験結果によれば、このよ
うな様式で、かつきわめて受皿抗原として存在していれ
ば、標準的アジュバントの不存在下において、高度に免
疫抗原性たりうることがわかる。（コンジュゲーシヨン
が起らないように）ビオチニレートされていない抗体と
、それと当量の遊離のアビジンを混合した場合は、抗体
応答は誘発せず、この結果はコンジュゲート依存性の存
在することを示していた。Ｉ−ＡＫ決定子の認識が必要
であることは、不適切な特性の抗体とコンジュゲートし
たアビジンは抗体応答を誘発する効果がなかったことか
ら明らかであった。下記実施例中に詳記した他の実験に
おいては、アビジンにコンジュゲートしたクラスＩのＭ
ＨＣについて特定なモノクロナル抗体もまた免疫抗原性
応答を示し、かつアビジンに対する抗体を生成した。

本発明において用いられるコンジュゲートは、単一抗原
とモノクロナル抗体とのコンジュゲートに限定されるも
のではなく、２種以上の抗原またはベブタイドがモノク
ロナル抗体とコンジュゲートしたコンジュゲートをも含
む。

特定例においては、ビオチニレートされたモノクロナル
抗体はアビジンおよび牛血清アルブミンにコンジュゲー
トしていてもよいし、あるいはアビジンおよびヘルペス
の合成ペプタイドにコンジュゲートしていてもよい、こ
れらのコンジュゲートはマウスに免疫性を与えるために
形成され、用いられた。ヘルペスのベブタイドはヘルペ
スの単純な（ｓｉｍｐｌｅｘ）　ビールスのクリコブロ
チインＤの一部である。下記実施例において詳細に報告
されたこれら実験において、アビジンに対すると同様に
牛血清アルブミンおよびヘルペスのベブタイドに対して
も抗体が高められたことが判明した。アビジンを他の蛋
白、すなわちそれもまたビオチンに対して高い結合親和
性をもつストレブタビジンにかえても、やはり良好な応
答を与えることから、ターゲット効果はアビジンに対し
て限定されるものでなく、抗ストレブタビジン抗体のア
ビジンとの血清学上のクロスーリアクションはなかった
ことを示している。

下記実施例に報告された実験は、抗体−アビジンーベブ
タイドよりなるコンプレックスの累加的注射に対するマ
ウスの応答が、フロイントの完全アジュバントを用いた
ときの応答に相当するものであることを示している。こ
の後者の実験は、ワクチンは抗体を引き出すペブタイド
抗原を用いて組立てうることを示しており、その抗体は
、ヘプタ・イドがそこから抽出される病原菌に対して中
和的かつ保護的でありうるものである。

上記より、本発明は、インビボおよびインビトロにおい
て、バイプリドーマおよびその特異なモノクローナル抗
体を作る免疫方法として用いることができるのは明らか
である。そのような特異なモノクロナール抗体は、薬学
および免疫学の両方において広い利用範囲を有する。

後述の特別な実施例の中で、三つの免疫とは無関係のタ
ンパク質の抗原、すなわちアビジン、ストレプトアビジ
ンおよび牛の血清アルブミンのための本発明の効果を証
明する。更には、本方法の使用の結果として、ヘルペス
単独のビールスの糖タンパクＤからの合成ペプチドに対
するＩｇＧ抗体が発生する。更には、免疫性の応答は、
ＭＨＣのクラス１およびクラスＩＩのデターミナントに
対するＭＡｂｓを使用して達成される。このデータは、
ＡＰＣの表面組織に対し抗原とモノクローナル抗体の接
合対を用いることに対する応用において、本発明の概論
を立証するものである。

［実施例］ 実施例１ 本実施例ではビオチニル化モノクロナール抗体の生成と
、それと抗原との接合を説明する。

ハイブリドーマセルラインＴＩＲ−９２、ＴＩＲ−９３
、ＴＩＢ−９２またはＴＩＢ−９３（抗Ｉ−Ａ’）なら
びにＴＲ−６５またはＴＢ−６５（抗インフルエンザＡ
ＮＰ　、制御抗体）は、アメリカンタイプカルチャーコ
レクション（ＡＴＣＣ）より得られ、ＲＰＭＴ１６４０
カルチャーメディウムの中で培養され、１０％の牛の胎
児の血清、Ｌ−グルタミンおよび抗性物質で補われた。

これらのセルラインより生成された抗体はＩｇＧ２ａサ
ブクラスの両方であり、通常のプロティンＡ−セファロ
ース（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ）クロマトグラフィーによっ
てカルチャースーパーナタント（Ｓｕｐｅｒｎａｔａｎ
ｔｓ）より精製した。

その精製された抗体を、著名“　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：　　Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ａ
ｎｄ　Ｐｌａｃｔｉｃｅ”　（１９８３）Ａｃａｄｅｍ
ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｌｏｎｄｏｎ　　、に記載の一般
的な方法を用いてビオチニル化した。この方法によると
、この抗体は使用直前にｐ）１８．２の０．１Ｍ重塩酸
塩ナトリウム溶液により透析され、１．　Ｏｍｇ／ｍｌ
まで濃縮された。

注射は各種溶液の０．２ｍｌの皮下接種からなり、　　
　１２１日後、全グループのハツカネズミに０．２＋Ｊ
の　　貨ＰＢＳ中０，５μｇのアビジンを腹膜内に注射
した。　　　２９日後、ハツカネズミのレトロ−パルパ
ー（ｒｅｔｒｏ　　　　”−ｂｕｌｂａｒ　）洞様血管
から採血し、その血清を４８℃で貯蔵した。

免疫血清を下記のように抗アビジン活性テストを行った
：ポリビニルミクロ滴定プレートのウニ　　　Ｃルに、
２０μｇ７ｍｌの濃度のアビジン溶液（５０μｊＮ　　
　　−を加えて１時間培養し、その後プレートを洗っ　
　　−た。次いでＰＢＳ中牛の血清アルブミン（ＢＳＡ
）の１％　　　を溶液でさらに１時間プレートを培養し
た。ＢＳＡ緩　　　）衝液を除き、１％ＢＳＡ−ＰＢＳ
中免疫血清の連続希釈液　　　′の５０μを各ウェルに
加えて１時間培養した。次にプレートを１％ＢＳＡ−Ｐ
ＢＳで３回洗浄し、各ウェルを　　　ＩＩ２８　■−蛋
白質Ａの５０μで１時間処理した０次　　　゛いてプレ
ートを媛衝液で２回洗浄し、各ウェルを　　　ｊガンマ
カウンターでカウントした。　　　　　　　　　　ノ免
疫血清の抗アビジン反応をグラフにプロット　　　スし
たのを図１に示す。図１において、グループＩ、ＩＩ、
ＩＩＩおよびＩＶからの免疫血清の抗アビジン反Ｓが、
夫々Ａ、Ｂ、Ｃ，およびＤで示されてい５、Ｏで結ばれ
た線は（Ｂ６　ＸＣ３）１）　Ｆ１ハツカネズミの反応
であり、・で結ばれた線はＢ６ハツカネズミの反応であ
る。

図１に示されたデータかられかるように、（坑−Ｉ−Ａ
ｋ）−アジピン接合体を注射した（Ｂ６　Ｘ１３）１）
　Ｆ、ハツカネズミ（図ＩＡ、　Ｏで結ばれた線）Ｓは
、アビジンの５μｇ分量で強度の反応が観察され、一方
、抗体がつくられた特別の表面抗原を寺たないＢ６ハツ
カネズミ（図ＩＡ、・で結ばれた線はそれ程敏感ではな
かった（図ＩＡ　　を見よ）。

二の結果は、５μｇのアビジンと未変性の抗−■−Ａ’
　　ＭＡｂの混合物が反応を起さなかった（図８）ので
、抗体だけの免疫刺激効果に帰すことはひきない。コン
トロールの抗−ＮＰ　　ＭＡｂに投与さまた等量のアビ
ジンも僅かな反応しか生じなかっさく図ＩＣ）、このこ
とは図１Ａに示される正の反応５イ、抗体へのアビジン
の単一接合以上に帰因してハることを示している０期待
通り、フロイントの完全なアジュバントとともに注射し
た５μｇのアビジンは、強い血清反応を起した（図１０
）。５０μｇのアビジン分量で、アジュバントの不存在
下遊離のアビジンは反応を刺激しなかったが（図ＩＢ）
　、　（生物−抗−１−Ａ’）−アビジンの形では、接
合体は（Ｂ６Ｘ　Ｃ３）１　）　Ｆ＋およびＢ６ハツカ
ネズミの両方を感応させた（図ＩＡ）　。

Ｂ６ハツカネズミの反応は、Ｂ６ターゲツトのアジピン
−ＭＡｂ接合体の反応性が上ったことの反映であるらし
く、接合ｋｌＡｂの交差反応性やこの１．ｌＡｂ　−ア
ビジン複合物のより効率のよいＡＰＣ摂取などに起因す
るものと思われる。

免疫血清の抗−アビジン反応を第１図のように図示した
。第１図においてグループ１．Ｉｌ、ＩＩＩおよびＩＶ
（表１）からの免疫血清の抗−アビジン反応はそれぞれ
Ａ、　Ｂ、　ＣおよびＤで示した。白丸線は（Ｂ６　Ｘ
Ｃ３Ｈ）　Ｆ１マウスにおける反応で、黒丸線はＢ６マ
ウスにおける反応である。

第１図に示した結果から理解されるように、アビジンの
５μｇ服用において、（アンチ−Ｉ−Ａ’）−アビジン
複合体（第１図、ＩＡ　　、白丸線）を注射した（８５
　ＸＣ３１（）　Ｆ＋マウスでは明瞭な反応が観察され
るのに対してＢ６マウス（第１図、ＩＡ　　黒丸線）は
抗体を生成した抗原表面上の特徴をもたないこと、認め
られる程には感応していないこと（第１図ＩＡ参照）が
認められる。この結果は、アビジンの５μｇと未変性の
アンチ−７Ａ’＼ＩＡｂとの混合物は反応（第１図ＩＢ
）を示さなかったことから抗体の免疫活性化効果に帰因
させることはできない。アビジンの等量が結合した調節
アンチ−ＮＰ〜＋Ａｂも認められるほどの反応（第１図
１ｃ）を生じていない、このことは第１図ＩＡにおいて
示された明白な反応は抗体にアビジンの単純な複合以外
の作用に基くことを示している。予期されたようにフロ
イント　（Ｆｒｅｕｎｄ　′ｓ）の完全補助薬と共に注
射したアビジンの５μｇは強い血清学的反応（第１図１
Ｄ）を生起した。アビジン投与の５０μｇでは、補助薬
の存在しない状態におけるアビジンだけでは反応を刺激
しない（第１図ｉ８）が、（ビオ−アンチ−１−Ａ’　
ｌ　−アビジンの形態では（Ｂ６ＸＣ３Ｈ）　Ｆ、およ
びＢ６マウス（第１図ＩＡ）の何れも感応している。　
８６マウスにおける反応はＢターゲット上に結合するア
ビジン−ＭＡｂの上昇した反応性に反映するようであり
、複合ＭＡｂのクロス−反応性またはＭＡｂ−アビジン
複合体のより効率の良いＡＰＣ吸収に由来するようであ
る。

これらの結果はアビジンの低い投与（例えば５μｇ）は
、クラスＩＩ主要組織適合決定要素、すなわちアンチ−
１−ＡゝＭＡｂ、受領のために特定されるモノクロナー
ル抗体に結合する免疫系が存在する時に補助薬の存在し
ない状態で免疫源を造ることができる。

試験法は異なるアンチ−クラスＩＩ　！、ｌＡｂ、この
場合アンチ−ｒ−Ｅ″をＭＡｂ目標物として使用して繰
り返した。得られた結果はグラフ的に示し第２図に再現
した。それらに見られるように、（アンチ−１−Ｅ’）
−アビジン結合で免疫化したｆＢ６ＸＣ３ｔ１）　ＦＩ
Ｉマウス体（白角印）は補助薬の同じ投与量の８６マウ
ス（黒角印）よりも７〜９（２高い反応をあたえた。ア
ビジンとＭＡｂの非結合混合物は反応性のベースライン
の水準を示すのみでこの結果は図示していない。

実施例ＩＩＩ この実施例は抗体−ビオチン−アビジン複合物の使用が
第３の蛋白質への抗体を産生ずることを示す。　　゛ アンチ−１−Ａｋ抗体、アビジンおよびボビンセラムア
ルブミン（ＢＳＡ）は、等モル量のビオチン化されたモ
ノクロナル抗体（実施例１に述べたように調製されたも
の）、アビジンおよびビオチン化されたボビンセラムを
２０℃において２０分間混合して形成される。

混合物はついで５分間１２．０００ｇで遠心機にかけら
れ、沈澱可能な凝集物は除去される。

この混合物を実施例ＩＩと同様のやり方で約３０μｇＢ
ｓＡマウスに皮下注射した。３週間後さらにＰＢＳ中の
フリーのＢＳＡ　１０μｇを腹腔内注射した。マウスの
血清を９日後に採取し、実施例１工と同様の方法で分析
（アッセイ）した、ラジオイムユーンアッセイ中のブロ
ッキングバッファーはＰＢＳ中Ｏ１％のオバルブミンを
含み、６５．０００ｃｐｍの１２′ニー蛋白質Ａが各エ
ッセイウエルに加えられた。

得られた結果はグラフにプロットされ、Ｆｉｇ３のよう
に示されている。白丸は個々の（Ｂ６×Ｃ３）１）　Ｆ
、マウスの応答を示し黒丸はＢ６マウスの応答を示す。

ビオチン化されなかったｋｌａｂとアビジンとの非複合
混合物においてアビジンを等量注射されたマウスは何の
応答も見られなかったがこれは図示していない。

Ｆｉｇ　３で見られるように、ボビンセラムアルブミン
に対するかなりの応答が観察された。

これらのデーターは何れかの第３の蛋白質がＭＡＢ−ア
ビジン複合物にカップリングすることによって第３の蛋
白質に対して血清学的な応答を得ることが実際的である
ことを示している。これは補助剤フリーのサブユニット
プロティンワクチンのいくつかのものの調製を承認する
ものであり、そのサブユニットプロティンのベアレント
オルガニズムに付随する諸問題を避けることができると
思われる。

実施例ＩＶ この実施例は小さなペプチドに対して抗体を産生ずるた
めの抗体−ビオチン−アビジンの使用を示す。

ビオチン仲介の複合物がアンチ−Ｉ−Ａ’とアビジンと
の間で作られ、これにヘルペス合成ペプチドがカップル
された。このヘルペスペプチドはヘルペスシンプレック
スパイラスのグリコプロティンＤからのＮ一端末ペプチ
ド（１２−２０１で、ベンゾイル−ベンゾイル−グリシ
ンリンカ−残基な用いペプチドのアビジンに対するモル
比を８：ｌとしてアビジンに光カップルさせた。このペ
プチドは合成され９ケのアミノ酸から成る。３０ＬＬｇ
のアンチ−Ｉ−Ａ’アビジン−ペプチド複合物を（Ｂ６
×３Ｈ）Ｆ１マウスに注射して３週間後に、そのマウス
はアビジン−（ヘルペスペプチド）で−変復腔内注射で
ブーストされ、ブースターインジェクション後９日に血
清が採取された。その結果はＦｉｇ　４に示されている
。この示された結果は対照サンプルに結合したものを差
引いた後のヘルペスペプチドに対するネットの抗体の応
答をあられし、フロイントのコンプリートアジュバント
（ＦＣＡ）に単独に入れたものでその後に同様のブース
ターインジェクションをして得られる応答と比較される
。

実施例■ 本実施例はストレプトアビジンに対する抗体を増やすた
めの抗体−ビオチン−ストレプトアビジン複合体の利用
法を例示するものである。

ストレプトアビジンは、ストレブトミセスアビジ＝（Ｓ
ｔｒｅ　ｔｏｎ　ｃｅｓ　　Ａｖｉｄｉｎｉｉ）から抽
出されたタンパク質である。このタンパク質は上記実施
例１に記載された方法に従って抗　Ｉ−Ａｋ　　ビオチ
ニル化（ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ）抗体と結合され、
更にそうして得られた複合体は実施例２に記載された方
法に従って（Ｂ６　ＸＣ３Ｈ）　Ｆ、マウス及びＢ６マ
ウスに投与された。これらマウスから採取された血清は
ストレプトアビジンに対して反応したが、アビジンに対
する試験では陰性を示した。第５図に各マウスにおける
結果をそれぞれ個々に示した。

これらの結果により、そのターゲツティング効果がアビ
ジンに限定されず、血清学的に非交叉にビオチンと結合
する他の活性タンパク質　（ｎｏｎ−ｃｒｏｓｓ　ｂｉ
ｏｔｉｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｃｔｉｖｅ　ｐｒｏｔｅ
ｉｎ）によっても得られることが示された。

実施例Ｖ１ 本実施例はクラスＩ　　ＭＨＣに対して特異性を有する
モノクロナール抗体を用いたアビジンの免疫原性を高め
る方法を例示するものである。

実施例１と同様の方法により、アビジンをビオチニル化
した抗−１（ｋモノクロナール抗体に結合した。得られ
た複合体（３０μｇ）はプライム雌（Ｈ−２ｋ）マウス
またはＢ６（ｌＩ−２ｂ”　マウスに適用された。３週
間後、プレブースト血清を逼るためにこれらマウスに出
血させ、続いてこれらマウスにアビジンによる追加抗原
刺激を与えた。その結果は第６図に表わされている。第
６図に見られるように、い　デテルミナントを発現する
マウスにおいてのみアビジンの放出か行なわれるという
ことが示され、Ｃ３）１マウス（白ぬきの三角）は、Ｂ
６マウス（黒三角）よりも高い抗アビデインン反応性を
示した。これらの結果は、ＡＰＣデテルミナントに向け
たいずれのモノクロナール抗体も、これらデテルミナン
トがＡＰＣに制限されていなくても抗原の放出を仲介で
きることを示している。

【図面の簡単な説明】 第１図は、上述の実施例に記された一連の実験中での、
マウスの抗アビデイン反応を、ＡからＤにグラフ化した
ものである。 第２図は、上述の実施例の別の一連の実験中での、マウ
スの二次的抗アビデイン１反応をグラフ化したものであ
る。 第３図は上述の実施例中の、さらに他の一連の実験中で
の、マウスの抗ボビンセラムアルブミン反応をグラフ化
したものである。 第４図は、上述の実施例中の別の一連の実験中での、マ
ウスの合成ヘルペスペプチドに対する二次的抗体反応を
グラフ化したものである。 第５図は、上述の実施例中のさらに他の一連の実験中で
の、マウスのストレブタヴイディンとアビデインに対す
る二次的抗体反応をグラフ化したものである。 第６図は、上述の実施例中のもう一つの一連の実験中で
の、マウスのアビデインに対する抗体反応をグラフ化し
たものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）抗原を供与する細胞の表面構造に特異的なモノクロ
   ナール抗体と結合した抗原を有することを特徴とする、
   免疫応答を引き出すために哺乳動物に投与するのに好適
   な新規な複合体。 ２）前記モノクロナール抗体が主要組織適合遺伝子複合
   体の遺伝子産物に特異的である特許請求の範囲第１項に
   記載の複合体。 ３）前記モノクロナール抗体が主要組織適合遺伝子複合
   体デテルミナントのクラスII分子に特異的である特許請
   求の範囲第２項に記載の複合体。 ４）前記モノクロナール抗体が主要組織適合遺伝子複合
   体デテルミナントのクラス I 分子に特異的である特許
   請求の範囲第２項に記載の複合体。 ５）異なる２以上の抗原分子のタンデム結合が前記モノ
   クロナール抗体に結合している特許請求の範囲第１項〜
   第４項のいずれかに記載の複合体。 ６）前記抗原が、その免疫原性が前記モノクロナール抗
   体との結合により増強される弱免疫原性分子を含む特許
   請求の範囲第１項〜第５項のいずれかに記載の複合体。 ７）前記弱免疫原性分子が病原体抗原分子の免疫認識部
   位に相当する合成ペプチドを含む特許請求の範囲第６項
   に記載の複合体。 ８）前記弱免疫原性分子が病原体の免疫認識部位を有す
   るプロテインサブユニットを含む特許請求の範囲第６項
   に記載の複合体。 ９）抗原に対するＩｇＧ抗体反応を引き出すために哺乳
   類動物に投与するのに好適なワクチンであって、特許請
   求の範囲第１項〜第８項のいずれかに記載の複合体と適
   当なキャリアーとを含み、免疫原性を高めるアジュバン
   トの不在下で前記抗体反応を得ることを特徴とするワク
   チン。