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JPS62246595A - 気菅支拡張作用・降圧作用ペプタイド - Google Patents

気菅支拡張作用・降圧作用ペプタイド

Info

Publication number
JPS62246595A
JPS62246595A JP61086987A JP8698786A JPS62246595A JP S62246595 A JPS62246595 A JP S62246595A JP 61086987 A JP61086987 A JP 61086987A JP 8698786 A JP8698786 A JP 8698786A JP S62246595 A JPS62246595 A JP S62246595A
Authority
JP
Japan
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lys
arg
peptide
vip
leu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP61086987A
Other languages
English (en)
Inventor
Osamu Ito
理 伊藤
Shinro Tachibana
橘 真郎
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eisai Co Ltd
Original Assignee
Eisai Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eisai Co Ltd filed Critical Eisai Co Ltd
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Priority to US07/035,125 priority patent/US4757133A/en
Priority to NO871574A priority patent/NO871574L/no
Priority to DK193887A priority patent/DK193887A/da
Priority to EP87105570A priority patent/EP0241926B1/en
Priority to AT87105570T priority patent/ATE84048T1/de
Priority to DE8787105570T priority patent/DE3783257T2/de
Priority to ES87105570T priority patent/ES2052507T3/es
Priority to CA000534865A priority patent/CA1288894C/en
Publication of JPS62246595A publication Critical patent/JPS62246595A/ja
Priority to US07/177,998 priority patent/US4822774A/en
Priority to GR920402460T priority patent/GR3006718T3/el
Pending legal-status Critical Current

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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575Hormones
    • C07K14/57563Vasoactive intestinal peptide [VIP]; Related peptides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/08Bronchodilators
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12Antihypertensives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は気管支拡張作用および降圧作用を有する新規な
生理活性ペプタイドに関する。
従って本発明は医療のための医薬品の分野において利用
される。
(2)従来技術 V I P (Vasoactive Intesti
nal Po1ypep−tide)はS、5aidら
によッテ単離され、そのアミノ酸酸列が5ecreti
n 、 Glucagon  等と類似しているところ
から、Glucagon Fallyに属するペプタイ
ドとされている。その生理作用は多岐に渉り、心血管系
、呼吸器系、代謝系、内分泌系等の幅広い分野において
観察され、近年ではneurotransmitter
としての機能にも注目が及んでいる。特に注目されるの
は呼吸器系における作用であり、気管支平滑筋への弛緩
作用が非常に強< 、 acetylcal−ins 
、 histamine %5erotonin等の刺
激物質によって惹き起された平滑筋収縮を非常によく緩
解する作用がある。この弛緩作用はadrenalin
eのβラーレセプターを介しで作用する一般の気管拡張
剤の弛緩作用とは異なり、β−ブロッカ−によって抑制
されないという特徴がある。従ってβ2−レセプター刺
激剤が有効に作用しない難治性の喘息発作に対してもV
IPおよびVIP関連誘導体が著効を発揮する可能性は
十分に示唆されるのである。上記の従来治験を詳述する
資料として下記文献(a)〜(c)を列挙する。
(a)ニス、セイド、ブイ、マット、ネイチャーム!5
883 (1970) (S、5aid、 V、Mutt、 Nature 2
25863(197G)) (b)エヌ、ハラ、エイ、ゲウメイ、ニス。
セイド エタール0.クリニカル リ サーチ23347A (1975) (N、Hara。
A、Guemei、  S、5aid  at  al
、  Cl1n、  Res。
録347A (1975)) (C) 11.m合m床34 (11) 249? (
1985)(3)発明が解決しようとする問題点 VIPは下記の一次構造式によって示されるごとく、C
端がアミド化された28個のアミノ酸からなるペプタイ
ドであるが、生体内における含量が低く、従って天然品
を抽出して大量に得ることはできない、液相法、固相法
によるペプタイドの合成によっても高価になるので実用
化は困難とみられる。またC端がアミド化されているの
で、遺伝子組換によって製造することも技術的には困難
であり高価となる。
His−5er−Asp−Ala−Val−Phe−T
hr−Asp−Agn4yr−Thr−Arg−Leu
−Arg−Lyg−Gln−Net−Ala−Val−
Lyg−Lyg−Tyr−Leu−^5n−9s r−
11e−Leu−Aan−NO3かかる実情から、VI
Pよりも強いVIP作用を有するVIP関連誘導体の提
供が望まれる。すなわちそのようなり工P関連誘導体は
VIPに倍増する活性作用を有することにより、液相法
、固相法によって製造した場合にも十分に採算性を持つ
ことができ、また場合によっては遺伝子組換による安価
な製造の可能となることが期待されるからである。そこ
で本発明においては新規にデザインされたVIP関連誘
導体の提供を発明が解決しようとする問題点としてとり
あげた。VIPにはVIP前駆体が存在し、その構造は
下記文献(d)によって明らかにされており、モの構造
中における一^an−Gly−Lyg−Arg−が数段
の酵素反応を受けて最終的にはVIPのC端アミド、す
なわちAan−NO3に至ることが知られている。しか
し中間過程における中間物については知られておらず、
VIP関連誘導体として想定されたものはまだない、ま
た一般にC端7ミド体をC端カルボキシル体にすると活
性が著しく低下してしまうものが多いが。
VIP5EI連誘導体においてどうなるかは明らかでな
い、このような状況下において本発明者はVIPよりも
活性の強いVIP[$EI連誘連体導体めてその新規デ
ザインを試みた。
(d)エヌ、イト−、エッチ、才力モト エJy   
++−3J  ノふ−−リOj ζAフ /1GGす)
(L  Itoh、  H,Okamoto  et 
 al ;  Nature(0解決手段 検討の結果、数種の新規デザインにおいて有用性が認め
られた。ある種のデザインのものはC端がカルボキシル
体であるにもかかわらず天然物VIPよりも高い活性を
有し、いずれの物質も天然物VIPを比較して強い気管
支平滑筋弛緩作用および/または血圧降下作用を有する
ことが判った。
本発明はかかる知見にもとづいて完成されるに至った。
以下に本発明の詳細な説明する。
本発明物質は一次構造式が 旧a−9er−Asp−Ala−Val−Phe−Th
r−Asp−轟an−Tyr−丁hr−Arg−Leu
−^rg−Lys−Gln−X−Ala−Va 1−L
ys−Lys−Tyr−Lau−Asn−5er−11
e−Leu−Asn−Gly−Y(式中X、Yは、Xが
Netで屏あるときはYはOH,Lls−OH,^rg
−OH%Lyt−Arg−OH。
Lys−NO3のいずれかであり、XがLeuであると
きはYはLys−NO3、Lys−OH,Lys−Ar
g−OHのいずれか中番番を表わす) によって示される新規ペプタイドである。ここで−NO
3はC端における酸アミド基を表わし、−OHは同じく
C端におけるカルボキシルOH基を表わす。
本発明における各種の新規デザインは次のような理由で
行われた。まず、前記したごと<、VIPは公知前駆体
からの数段の酵素反応を経過して出現したものであると
されているので、その中間過程において想定される物質
としてxがNetテあり、YがOH,Lys−OH。
Lys−Arg−OHのいずれかとなるデザインを行っ
た。また天然には存在しないが、Lysと同じ塩基性ア
ミノ酸であるArgがGIyに直接結合したものとして
および塩基性アミノ酸のC端をアミド化して塩基性をさ
らに増加したものとしてそれぞれXがNetであり、Y
がArg−OHであるデザインおよびXがNetであり
、YがLls−NO3であるデザインを行った。
次にVIPの17位のNetは酸化を受けやすく、酸化
による失活が懸念されるので、17位のNetを酸化に
抵抗性のあるLeuに置換するデザインを行った。これ
は天然物としては存在しない形態であるが、この場合に
おいても前記した公知前駆体からの数段の酵素反応の経
由を考慮して、XがLauであり、YがLys−OH%
Lys−Arg−OR,14s−NO3であるデザイン
を行った。
本発明物質は各物質のおける酵素分解後のベプチイドマ
ップおよび加水分解後のアミノ酸分析値によって確認さ
れるが、さらに特定を確実にするための物理恒数として
の[α]DおよびHPLCにおける保持時間を参考のた
めに表1に示す、なお、[α]Dの測定装置、測定条件
は次のごとくである。
装 置:日本分光 JASCODIP−140デジタル
ポーラリメータ 条 件:Naランプ589nm  温度 22℃セル1
100n インテグレーシ菖ンタイム5秒 濃度0.2%(0,IN−酢酸中) またHPLCのカラム、溶媒、検出等は次のごとくであ
る。
カラム: YMCODS 5 ILφ4.8+ss+ 
XL25Gmm溶媒:0.1%TFA−28,4%CH
3CM−73,5%H20検 出: 215n鵬 条 件: 1.Oml/win 、 1socrati
c/elution表  1 本発明物質は公知の固相法あるいは液相法を使用して合
成することができる。従って例えば一般にメリフィール
ド法と呼ばれる固相法によりBeckaan社製合成機
Model 990Bを使用して以下のように合成すれ
ばよい。
まずN端をターシャリ−ブトキシカルボニル基(Boa
と略記)で保護した本発明物質に係るC端アミノ酸をス
チレン系樹脂担体にアミド結合あるいはエステル結合さ
せる。具体的には例えばベンズヒドリルアミン樹脂、パ
ラメチルベンズヒドリルアミン樹脂あるいはクロロメチ
ル樹脂にBee−Gly、Boc−Lya (CI−Z
)あるいはBoc−^rg (Tos)を結合させる。
次いでBacを酸で脱離し、あらかじめN端および必要
ならば側鎖の官能基を保護したC端より2番目のアミノ
酸を縮合させてペプタイドボンドを形成させる。この際
3〜5倍量の保護アミノ酸を用い、縮合剤にはジシクロ
へキシルカルボジイミド(DCCと略記)またはDCC
と1−ハイドロオキシベンゾトリアゾール(HOBtと
略記)の混合物を用いる。また反応の終末はニンヒドリ
ンでアミノ基の反応が陰性になる点によって確認する。
このようにN端および必要ならば側鎖の官能基を保護し
たアミノ酸を本発明物質の一次構造式におけるアミノ酸
配列の順序に従って順次縮合させ、最終的に官能基およ
びN末端が保護された本発明物質を得る。最後に本発明
物質を保護基並びに樹脂より脱離するために弗化水素で
処理する。この際副反応を防止するために二 はアノソール、ジメチルスルフィドを添加する。弗化水
素を除いて得られる粗合成物はCM−セルロース等を用
いるイオン交換クロマトグラフィーで精製すればよい、
高速液体クロマトグラフィーで純度を確認し、必要があ
れば分取用高速液体クロマトグラフィーを用いてさらに
精製すれば純粋な本発明物質を得ることができる0本発
明物質の純度と構造の確認は高速液体クロマトグラフィ
ー、ペプタイドマップ、アミノ酸分析等を行えばよい。
(5)作用 本発明はVIP関連誘導体であり、後記実験例によって
示されるとおり、いずれの物質も気管支平滑筋に対する
弛緩作用および/または血圧降下作用においてVIPよ
りも作用が強力である。すなわち本発明物質は気管支拡
張作用および降圧作用を有しており、将来において喘息
治療剤および血圧降下剤としての有用性が期待される。
またある種の誘導体はC端がカルボキシル体であるため
に遺伝子組換による大量生産の可能性を有しており、高
価なVIPに代わることができる。
(8)実施例 以下に記載する実施例によって本発明を具体的に説明す
る。
実施例1 ベラ41フ社製ペプタイド合成@ Mode1890B
の反応槽に1.25gのBoc−L7s(cl−Z)−
0−Resin (Boc−Lyg(cl−Z)含有0
.4+++ mole/g、Pen1nsula La
bs、製)をまず入れCH2Cl2中にて2時間撹拌し
膨潤させる。
次に以下に示す5tepの手順により次のBoa−Gl
yを反応させる。
■ CICl2C1220で3回洗浄。
■ 40%↑FAおよびO,OS%インドールの0M2
C12溶液20m1で予備洗浄。
■ 40%TFAおよび0.05%インドールのCI、
C12溶液20m1で脱保護する。
■ CH2Cl220m1で3回洗浄。
■ MeOH20m1で洗浄。
■ CI(2CI□201で3回洗浄。
■ 10%TEA(7)CI2CI2溶液20m1テ予
備洗浄。
■ 10%TEA17)OR2CI2溶液20m1テ中
和。
■ CH2Cl220■lで3回洗浄。
@  Boa保護アミノ酸2.5m 5oles とH
OBt2.5s 5olesをDNF 7.5ml お
よびC)12CI27.51混液に溶解し添加。
■ 0.5MDCCC82C12溶液を51加え2時間
反応させる。
以上によってBoc−Glyの導入が終了する。
以下順次G17よりN端へ5tep■より■を繰り返す
加える保護アミノ酸は以下の順序であ る。いずれも樹脂結合L7sの5倍量の2.5m mo
leである。
Boc−Aan O,58g/HOBt 0.34g、
(HOB tが存在した方が縮合収率を向上させ、ラセ
ミ化を防止する。ただし旧Sが存在する場合イミダゾー
ルが変化を受けるため使用しない、今回の場合はHis
はカップリングの最終N端である旧S以外はすべて2.
5m moleの)IOBtを添加する) 、 Bee
−Leu @ R20G、82g 、 Boa−1ie
 @  1/2H200,80g %Boc−9er(
Bzl) 0.74g 、 Boc−Asn 0.58
g 、  Boc−Leu・R200,82g、  B
oc−Tyr(Br−Z)1.24g、Boc−Lys
(CI−Z) 1.00g 、 Boc−Lyx (C
I−Z)1.00g 、 BOe−Val 0.54g
 、 Boc−Ala 0.47g 。
Boc−Leu *  R200,82g 、 Boc
−Gln O,62g、Boc−Lys(CI−Z) 
1.00g 、 Aoc−Arg(Tos) * 5d
EtoAc   e  ’y%  R201,18g 
 、  Boc−Leu   *  H2O0,62g
 、  Aoc−Arg(Tos)* 34EtoAc
  * %  H2O1,18g  、  Boc−T
hr(Bzl)0.77g  、  Boa−Tyr(
Br−Z)  1.24g、  Boa−Asn 0.
58g 、  Boc−Asp(OcHex)  0.
79g  、  Boc−Tbr(Bzl)  0.7
7g、Boc−Phe  0.88g  、Boa−V
al  0.54g  、Boc−Ala  O,47
g  、  Boc−Asp  (OcHex)  0
.79g  、Boc−5er(Bzl) 0.74g
、 Bac−旧5(ToS) 1.03g(このときは
HOBtは添加しない) 以上の操作がすべて終了すると樹脂上に次の保護ペプタ
イドが合成される。
Bee−旧s(Tag)−ser(Bzl)−Asp(
OcHex)−^1a−Val−Phe−Thr(Bz
l)−Aap(OcHex)−Aan−Tyr(Br−
Z)−Thr(Bzl)−Arg(Tos)−Leu−
Arg(Tos)−Lys(CI−Z)−Gln−Le
u−Ala−Va 1−Lys(CI−Z)−Lys(
C1−Z)−Tyr(Br−Z)−Leu−Asn−S
er(Bzl)−11e−Leu−Aan−Gly−L
yg(lll:1−Z)−樹脂。
この樹脂上に結合した保護ベプタイドは前述の5tep
■〜■を実施後炉取しデシケータ中で一晩乾燥する。乾
燥した保護ペプタイド樹脂3.25gが得られる。その
うちの1.38をとり、アニソール2m1. DNS 
0.5ml存在下弗化水素301で0℃1時間処理する
。弗化水素を留去し、無水エーテルn−ヘキサン(t 
: i)混液で洗浄し、無水エーテルのみで洗浄し、十
分乾燥させた後10%酢酸501にペプタイドを溶解さ
せ、不溶樹脂を炉去する。得られた溶液は0.22 #
Lミリポアフィルターにて濾過後、凍結乾燥する。82
8腸gの粗ペプタイドが得られる。
次にCトセルロースカラム(2,5φ×30hcm)に
かけ、 0.05Mから0.5Mの直線勾配を、もった
AcoNH4(pH7,0)で溶出(8,5ml/fr
)を行うと、fr、No、112〜119に目的とする
ペプタイドが溶出する。 1’04mgの部分精製ペプ
タイドが得られる。これをさらに以下に示す条件にて高
速液体クロマトグラフィーにかける。
カラム: Y)ICODS 5ルφ10■層X L 2
50m層溶 媒:下記のRおよびSを用意し、R85%
と335%の混液からR40% と580%の混液に至るまでの直 線勾配をもった溶媒 R: CHaCN−HzO (1:99. o、t%TFA含有) S : OH,CM−R20 (8:4 、0.1%TFA含有) 流速:311■in 当該高速液体クロマトグラフィーにより部分精製ペプタ
イド17.4Bより純粋ペプタイドが10.0i+g得
られる。この場合に、収率はAanへのカップリングか
ら算出すると8.5%となる。得られる純粋ペプタイド
につきペプタイドマップおよびアミノ融分析値を求め、
本発明物質であることを確認し、さらに物性値として〔
α〕。およびHPLCの保護時間を求める0本実施例に
よってXがLeuであり、YがLys−OHテある本発
明物質が得られる。なお、記載中の略号はIUPAC−
IUB コミッシ、7の命名法[Eur。
J、 Bioches 1389(1984)]によッ
テ使用され、次のごとくである。
Bzl  : Benz21 CI−Z   :  2−Chlorobenzylo
x7carbonylTos  : 4−Toluen
vsulfon!IBr−Z   :  2−Brom
obenzyloBcarbonylOcHex  :
  (yclohexyl  ester本発明者が本
実施例によって得た物質について行ったアミノ酸分析の
結果を参考までに次に示す。
8N−)1cI (0,1%フェノール含有)中で11
0℃、20時間の加水分解反応を行った後に1日立アミ
ノ酸分析計835型によって分析した。下記のごとく実
験値は理論値によく一致し、本発明の目的物質であるこ
とを確立した。
アミノ酸   理論値   実験値 Asp      5    5.00Thr    
  2     1.130Ser      2  
   1.79Glu      l      1.
04cr7        1       1.04
Ala         2        2.00
Val         2        2.00
IIs         1       0.95L
eu         4        4.00T
yr        2       1.98Phe
         1        1.00Lys
        4       3.95His  
       l         1.Of!Arg
        2       1.99実施例2 実施例1の保護アミノ酸を順次導入し終るまでの操作に
おいて、N末端から17番目のアミノ酸の導入のために
Bor−LeuΦH2O0,82gが使用される代わり
にBoc−Netl、25gが使用される点を除いて実
施例1の保護アミノ酸を順次導入し終るまでの操作の記
載と同様に行う。
同上の操作がすべて終了すると樹脂上に次の保護ペプタ
イドが合成される。
Boc−旧S(Tos)−ser(Bz I)−Asp
(OcHex)−A Ia−Va 1−Phe−Thr
(Bzl)−Asp(OcHex)−Asn−Tyr(
Br−Z)−丁hr(Bz l)−Arg(Tos)−
Leu−Atg(Tos)−Lys(CI−Z)−Gi
n−Net−Ala−Val−Lyg(CI−Z)−L
ts(C1−Z)−Tyr(Br−Z)−Leu−^5
n−9ar(Bzl)−11e−Leu−Asn−Gl
y−Lys(CI−Z)−樹脂。
この樹脂上に結合した保護ペプタイドは前述の5tep
■〜■を実施後炉取しデシケータ中で一晩乾燥する。乾
燥した保護ペプタイド樹脂3.4gが得られる。そのう
ちの1.7gをとり、アニソール211口NS 0.5
ml存在下弗化水素30s+1で0℃1時間処理する。
弗化水素を留去し、無水エーテルn−ヘキサン(1: 
l)混液で洗浄し、無水エーテルのみで洗浄し、十分乾
燥させた後10%酢酸501にペプタイドを溶解させ、
不溶樹脂を炉去する。得られた溶液は0.221Lミリ
ポアフィルタ−にて濾過後、凍結乾燥する。 834+
sgの粗ペプタイドが得られる。
次にCトセルロースカラム(2,5φ×30hC層)に
かけ、0.05Nから0.5Mの直線勾配をもったAc
oNH*  (pH7,0)で溶出(13,5ml/f
r)を行うと、tr、No、1011〜121に目的と
するペプタイドが溶出する。 303mgの部分精製ペ
プタイドが得られる。これをさらに以下に示す条件にて
高速液体クロマトグラフィーにかける。
カラム: YMCODS 5終φ10■■XL250s
膳溶 媒:下記のRおよびSを用意し、R85%と53
5%の混液から140% と580%の混液に至るまでの直 線勾配をもった溶媒 R: CH30N−R20 (1:R39,0,1%TFA含有) S : CH30N−HzO (8:4.0.1%TFA含有) 流速: 3ml/sin 当該高速液体クロマトグラフィーにより部分精製ペプタ
イド18.3層gより純粋ペプタイドが11.5腸8得
られる。この場合に、収率はAsnへのカップリングか
ら算出すると24.3%となる。得られる純粋ペプタイ
ドにつきペプタイドマップおよびアミノ酸分析値を求め
1本発明物質であることを確認し、さらに物性値として
[α]62お よびHPLCの保持時間を求める0本実
施例によってXがNetであり、YがLys−OHであ
る本発明物質が得られる。なお、記載中の略号は実施例
1におけると同じ。
本発明者が本実施例によって得た物質について行ったア
ミノ酸分析の結果を参考までに次に示す。
111N−HCI (0,1%フェノール含有)中で1
10℃、20時間の加水分解反応を行った後に、日立ア
ミノ酸分析計835型によって分析した。下記のごとく
実験値は理論値によく一致し、本発明の目的物質である
ことを確立した。
アミノ酸   理論値   実験値 Asp      5    5.00Thr    
  2     1.94Ser      2   
  1.80Glu      l      1.0
8Gty      1     1.0111轟1a
          2        2.05Va
l      2    2.0011e      
1     1.00Leu      3    3
.07Tyr      2    2.02Phe 
     1     1.01Lys      4
    3.98His      l      1
.07Arg      2    2.02Net 
     1     1.03(7)発明の効果 以下の実験例によって本発明の効果を示す。
実験例 試   料 本発明物質を検体試料とした。別に天 然物VIP (VIP−NO3ト略記すル)オよびVI
PのC端アミド基をカルボキシルOH基に置換した合成
VIP誘導体(VIP−OHと略記する)を用意し、対
照試料とした。
方   法 下記に示すAおよびBの二種類の測定 をおこなった。
A6モルモット摘出気管支筋を使用する測定 体重300g以上の雄のモルモットの頚静脈を切断し、
放血死させ、開胸し。
直ちに気管を約3.0cm取り出す、直ち←クレブス液
中に入れ、これを7等分 に輪状に切断し、軟骨部分同志を綿糸 でつなぎ、鎖状にする0次いで平滑筋 部分がつながるように平滑筋部分と反 対側の軟骨部分を切断する。できあ がった標本を内容量約7mlの恒温ガラスセルに入れ、
糸で上下につるす、下 部を固定し、上部を0.58の負荷をかけたIxome
tric transducerに接続し、弛緩反応を
測定する。この標本には85%酸素と5%炭酸ガスが十
分に吹き込ま れ、かつ8.5X 10”8Mヒスタミンを含有する3
7℃のクレブス液を3.1ml/■inの流速で上部よ
り滴下する。この滴下 液に加えた試料の用量に応じて弛緩反 応が起こるので、これを利用してVIP−NO3と本発
明物質とにおける気管支平滑筋に対する弛緩活性を比較
した。な お、VIP−NH2テハソ(7)濃度t 10’M 、
!:し、これを40終1および8041滴下し、また本
発明物質ではその濃度を同 じ<10’Mとし、これをlO終lおよび20終1滴下
し、各場合における弛緩の面積値(高さx時間)を求め
、VIP−NO3における値を100%として、これと
の相対比率によって比活性を求める 4点検定法で比較した0本測定方法の ための参考文献(e)(f)を次に掲げる。
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ogicalExperiments  on  l5
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コロジカル エフ スベリメンタル テラビー90 104 (1947)(Cagtillo 、De B
eer、J、  Pharmac、  EXP、  T
h5r、  90 104B、ラット頚動脈圧測定 200、 SD系雌雄ラット腹腔内に48%ウレタン2
.7ml/kgを投与して麻酔し、頚静脈に試料を注入
するためのカニュ レーシーンをし、また頚動脈に血圧測 定用transducerをカニュレーシ璽ンする。試
料12.5pmole/kg 〜400pmole/k
gを頚静脈内に投与し、血圧の変化をポリグラフにて測
定し、容量反応曲線 を求める。この曲線から血圧降下の変 化が15mmHHに達するに要する量を求め、VIP4
Hz ニ134+ 6量を100%トシて、これとの相
対比率によって比活性 を求めた。
本測定方法のための参考文献(g)を次に揚げる。
(1)鉛末、荒木、橘、薬学雑誌挫 結   果 結果を表2に示す0表中A欄の数値は Aの測定によって求めた比活性(%)を示し、B欄の数
値はBの測定によって求めた比活性(%)を示す0表2
より本発明物質は天然物VIPよりも強い気管支平滑筋
弛緩作用および/または血圧降下作用を有することが判
明する。
表  2

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)一次構造式 His−Ser−Asp−Ala−Val−Phe−T
    hr−Asp−Asn−Tyr−Thr−Arg−Le
    u−Arg−Lys−Gln−X−Ala−Val−L
    ys−Lys−Tyr−Leu−Asn−Ser−Il
    e−Leu−Asn−Gly−Y(式中X、Yは、Xが
    MetであるときはYはOH、Lys−OH、Arg−
    OH、Lys−Arg−OH、Lys−NH_2のいず
    れかであり、XがLeuであるときはYはLyS−NH
    _2、Lys−OH、Lys−Arg−OHのいずれか
    であるを表わす) によって示される新規ペプタイド
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