JPS62226981A - 新規抗生物質ｓｓ５０９０５ｂ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は医療用の抗癌剤及び抗菌剤として有用な抗生物
質ＳＳ５０９０５Ｂ及びその製造法に関するものである
。

〔従来の技術及びその問題点〕

従来、微生物が産出する種々の抗生物質１例えばラビド
々イシｙ　（Ｒａｖｉｄｏｍｙｃｉｎ　）　（ジャーナ
ルオブ　７７チバイオチクス（Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ａｎｔ−ｉｂｉｏｔｉｃｓ　）　、　３６巻、
３５５頁（１９８３年）〕などが知られている。

本発明者らは有用な新規物質全書るべく、天然の土ｆｉ
Ａｘり数多ぐの微生物を分離し、その生産物について種
々検討を行なった結果、神奈川県厚木市の土壌から分離
した菌株が脱アセチルラビドマイシ／金生産し、更に、
その菌株を一般式（Ｉ）（式中Ｒは水素原子又はスルホ
／酸基を示す）で表わされるア／トラキノンスルホ／酸
類若しくはその塩の一種又は２種以上の存在下で培養す
るとき、脱アセチルラビドマイシンの生産量が著しく増
′加することを見い出し、先に特許出願した（特願昭　
６０−２０２１６７号）。また、当該培養物中から副作
用の少ない新規抗生物質脱アセチルラビドマイシｙ−Ｎ
−オキシドでらるＳＳ５０９０５Ａを見い出し１％許出
願した（特願昭　６０−２２８４４０号および同６１−
２５６２２号）。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、更に当該培養物について検討を行なって
いたところ、その中に上記以外の新規抗生物質が存在す
ることを見い出し１本発明を完成した。

すなわち１本発明は新規抗生物質ＳＳ５０９０５Ｂ及び
その製造法を提供するものである。

本発明の抗生物質ＳＳ５０９０５Ｂｋ生産する８５０９
０５株は次のような菌学的性質を有する。

＋１１形態 胞子形成菌糸は気菌糸工り単純分枝し、車軸分枝は認め
られない。気菌糸の先端部はループ。

フック状で１時には大径スパイラル状である。

基生菌糸は通常分断しない。胞子嚢、及び鞭毛胞子は認
められない。胞子の表面は平滑でろり。

形は楕円形〜円筒形で、その大きさは０．５〜０．７×
０．７〜１．２μｍである。胞子は通常１０個以上が連
鎖している。

（２）　　各種培地における生育状態（２８℃、１４日
間培養） ８５０９０５株の各種培地上での生育状態は次表のとお
りである。色の記載には１日本色研事業■発行のＥ色名
小辞典」を用い、その系統名で表示した。（）内の番号
は色標番号を示す。

Ｌ”ｌ下余白 （３）　　生理的性質 ■　生育温度範囲 （イースト、麦芽寒天培地（ＩＳＰ２）　　１４日間培
養） 生育可能温度　　１４〜３９℃ 生育至適温度　　２７〜３３℃ ■　ゼラチンの液化　　　　　陽性 ■　澱粉の加水分解　　　　　陽性 ■　脱脂乳の凝固　　　　　　陽性 ■　脱脂乳のペプトン化　　　陽性 ■　メラニン様色素の生成　　陰性 ■　硝酸塩の還元　　　　　　陽性 ■　セルロースの分解　　　　陰性 （４）炭素源の利用（ブリドー・ム、ゴドリーブ寒天培
地、２８℃、１４日間培養） Ｄ−グルコース、Ｄ−キシロース、イノシトール、ガラ
クトース、プリシンを利用する。Ｄ−フラクトースをわ
ずかに利用する。Ｌ−アラビノース、シュクロース、Ｄ
−マンニトール。

Ｌ−ラムノース、ラフィノースを利用しない。

（５）　　細胞壁組成 細胞壁組成成分中のジアミノピメリン酸を分析した結果
、ＬＬ型であった。

以上の形態的特徴及びＬＬ−ジアミノピメリン酸Ｚ含む
ことより、８５０９０５株はストレプトミセス属に属す
る一菌株でめると判断される。

８５０９０５株の菌学的性質を要約すると次のようにな
る。気菌糸の先端はループ、フック状〔この性状から、
プリトノ・ムらのアプライド　ミクロバイオロジー（Ａ
ｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　）　、　６
巻、５２〜７９頁（１９５８年）に記載のレチナクルム
ーアベルタム（Ｒｅｔ　ｉｎａｃｕｌｕｍ　−Ａｐｅｒ
ｔｕｍ　）群に属する。〕で、その分生胞子は１０個以
上の胞子が連鎖し。

胞子表面は平滑である。気菌糸の色調はグレーカラーシ
リーズ、裏面の色は黄色からプラウ／でおり、リンゴ酸
石灰寒天培地で緑みの黄を認める。

可溶性色素はうすい黄色からブラウンである。メラニン
様色素を生成しない。

以上の諸性質會もとに、シャーリングとゴントリーブの
ＩＳＰ報告［イノターナショナル　ジャーナル　オブ　
システマチック　バクテリオロジ−（Ｉｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ　Ｂａｃｔｅｒ−ｉｏｌｏｇｙ　）　Ｊ第１８巻、
６９頁、２７９頁（１９６８年）、同１９巻、３９１頁
（１９６９年）、同２２巻、２６５頁（１９７２年）及
び［バーシーズ　マニアル　オブ　デターミネイチブ　
バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｎｕａｌ
　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒ−
ｉｏｌｏｇｙ　）第８版より検索すると８５０９０５株
と近似の種として アクチノミセス　ムタビリス （Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ　　ｍｕｔａｂｉｌｉｓ　）
ストレプトミセス　レジフェンシス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒｅｃｉｆｅｎｓｉｓ　
）ストレプトミセス　サーモブルガリス （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｈｅｒｍｏｖｕｌｇａ
ｒｉｓ　）アクチノミセス　オリバセオビリテイス（Ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ　ｏｌｉｖａｃｅｏｖｉｒｉｄｉ
ｓ　）が挙げられるが、これらの種はいずれも８５０９
０５株とは炭素源の同化性が太きく異なっている。また
、ラビドマイシ／の生産菌ストレプトミセスラピダス（
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒａｖｉｄｕｓ　）　Ｃジ
ャーナル　オブ　アンチバイオチクＸ　（Ｔｈｅ　Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｔｌｂ−ｉｏｔｉｃｓ　）　３
６巻、３５５頁（１９８３年）〕とは。

ガラクトース、プリシンの同化性、及び３７℃での生育
性の点で異なっているが、他は概ね一致している。した
がって８５０９０５株はストレプトミセス　ラビダスに
属する一菌株であると同定した。

本発明者らは８５０９０５株を公知の菌株と区別するた
めに、ストレプトミセス　ラビダスＳ　５０９０５　（
Ｓｔｅｐｔｏｍｙａｅｓ　ｒａｖｉｄｕｓ　５５０９０
５　）と命名し、工業技術院微生物工業研究所に受託番
号微工研菌寄第８４２８号（ＦＥＲＭ　　Ｐ−８４２８
）　　として寄託した。

本発明の５８５０９０５Ｂは上記菌株を栄養源含有培地
に接種し、好気的に培養することにニジ製造される。Ｓ
Ｓ５０９０５Ｂ生産囚としては上記５５０９０５株はも
とより、その人工変異株あるいは自然変異株であっても
ＳＳ５０９０５Ｂｆｆｉ生産する能力全有するものであ
れば、すべて本発明に使用することができる。上記５５
０９Ｑ５株の人工変異株は他の放線菌の場合と同様１例
えば紫外線照射。

コバル）６０照射、化学変異誘起剤処理等により容易に
得ることができる。

次にＳＳ５０９０５Ｂの製造における菌株の培養につい
て説明する。すなわち、ストンブトミセス属に属する８
５０９０５株の培養には通常の放線菌の培養法が用いら
れる。栄養培地としては資化しうる炭素源、窒素源、無
機物など全適当に含有する限り１合成培地、半合成培地
あるいは天然培地のいずれでも使用可能である。炭素源
としては１例えばグルコース、ガラクトース、澱粉など
が用いられる。更に菌の資化性によっては炭化水素、ア
ルコール類、有機酸も用い得る。窒素源としては無機も
しくは有機窒素化合物１例えば硫酸アンモニウム、　尿
ｓ、硝酸ナトリウム、グルタミン酸ナトリウムなど、ま
た天然物１例えば大豆粉、酵母エキス、ペプトン、肉エ
キス、綿実粕などが用いられる。無機物としては炭酸カ
ルシウム、塩化ナトリウム、硫酸銅などが用いられる。

その他。

８５０９０５株の発育を助け、ＳＳ５０９０５ＢＯ生産
全促進する物質、あるいはシリコン油又はアデカノール
（商品名）等の一般的消泡剤を適宜培地に添加すること
ができる。

培養法と１７では液体培養法、特に深部攪拌培！法が最
も適しでいる。培養は好気的条件下で行なわれ、培養温
度は通常２５〜３５℃の範囲が適当である。培養期間は
通常２〜７日間で、これにより培養液中にＳＳ　５０９
０５Ｂが生成蓄積される。

培養終了後、培養液中からＳＳ５０９０５Ｂ’ｉ採取す
る。培養液中からのＳＳ５０９０５Ｂの単離は後記実施
例に示すごとく１本化合物の理化学的性質全考慮して１
種々の方法上単独あるいは適宜組み合わせることによっ
て行なわれる。すなわち。

ＳＳ５０９０５Ｂは通常培養濾液及び菌体中に存在する
ので、培養液を遠心分離又は濾過等によって笛体を分離
し、その菌体及び培※濾液から通常の分離手段１例えば
溶媒抽出法、イメン交換樹脂法。

沈殿法、吸着又は分配クロマト法などを単独で。

又は適宜組み合わせてＳＳ５０９０５Ｂ’に採取するこ
とができる。−例として１次の方法が挙げられる。

（ｒｏ） 発酵を終了した培養液全遠心分離し、笛体と培養濾液に
分ける。菌体はアセト／・クロロポルム混液等の適当な
溶媒で抽出する。培養濾液は、Ｈ８前後で適当な溶媒例
えば酢酸エチル等で抽出し、前述の菌体からの抽出液と
ともに、減圧濃縮し、残渣ｋ　ｎ−ヘキサ／等で洗った
後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付す。次に
適当な溶離液。

例、ｔばクロロホルム・メタノール・１＆７７モニア水
の混液等で溶出すると、脱アセチルラビドマイシンに続
いてＳＳ５０９０５Ａ画分が溶出し、これに続いて５８
５０９０５Ｂ画分が溶出するのでこれを集め、減圧濃縮
後、再度クロロボルム−メタノール・酢酸の混液でシリ
カゲルカラムクロマトグラフィーを行なうと純粋なＳＳ
５０９０５Ｂの両分が得られる。この画分全酢酸を除い
た後、減圧濃縮すると、ＳＳ５０９０５Ｂの粗結晶が得
られ、これを適当な溶媒１例えばジクｏロメタン・メタ
ノール溶液等で再結晶すれば、　ＳＳ　！’１０９０５
Ｂの黄色結晶が得られる。以上のようにして得らノまた
５ｓｓｏｑｏｓＢは次のような理化学的性質をゼする。

〈理化学的性質〉 ■　元素分析 ＣＨＮ 実験値（多）　　　６６．４３　　５．６２　　２．８
８理論値（チ）　　　６６．２６　　５．７６　　２．
７６■　分子式 ％式％ ■　紫外線吸収スペクトル 第１図　　λＭ＠ＯＨ（、）ｎｍ ２７７　　　５ｈ ■　赤外線吸収スペクトル　（ＫＢｒ法）第２図 ■　１）Ｉ−ＮＭＲスペクトル　（９０ＭＨｚ　）第３
図 重メタノール溶液中、ＴＭＳ’ｅ基準にして測定した。

■　　Ｃ−ＮＭＲスペクトル（２２，５ＭＨｚ　）重ジ
チチルスルホキシド中、ＴＭＳ’ｉ基準にして測定した
。

δ（ｐｐｍ）： １５９．５（ｓ）、１５７．２（ｓ）　、１５３．６（
ｓ）、　１．５１．６（ｓ）１４２．１（ｓ）　、１３
８．６（ｓ）、１３５．０（ｄ）、１２９．２（ｄ）１
２５．８（３）、　Ｌ２４．８（ｓ）　、１２２．６（
ｓ）　、　１２１．８（ｓ）Ｌ１２．８（ｄ）　、ｌ１
６．９（ｔ）、　ｌ１５．３（ｓ）　、　１１４．５（
ｄ）１１３．３（８）、１１１．９（ｄ）、１０１．６
（ｄ）、　　７８．４（ｄ）７４．４（ｄ）、　　６８
．２（ｄ）、　　６６．３（２ｄ）、５６．５（ｑ）５
６．１（ｑ）、　　３１．９（ｑ）、　　１７．１（ｑ
）■融点 ２６０〜２６４℃　（分解） ■　溶解性 メタノール、ジメチルスルホキシドに可溶。

クロロホルム、アセトンに難溶。

エーテル、ｎ−ヘキサン、水に不溶。

０　物質の色及び性状 黄色結晶 ■゛呈色反応 ドラーグ／ドルノ試薬に陽性。

◎　薄層クロマトグラフィー 担体ニジリカゲルプレートＦ□４（メルク社製）クロロ
ホルム；メタノール：酢酸＝１００：２０：ＩＲｆ＝Ｏ
，１６ クロロホルム：メタノール：濃アンモニア水＝１００：
２０：Ｌ Ｒｆ＝０．３４ 上記の理化学的性質から、ＳＳ５０９０５Ｂは、次式 で示される新規化合物である。

〈生物学的性質〉 本発明の５８５０９０５Ｂは次のような生物学的性質′
ｔｌ−有する。

■　抗菌活性 ３８５０９０５Ｂの各種微生物に対する最小発育阻止濃
度（ＭＩＣ）’ｅ第１表に示す。

以下余白 ■　抗腫瘍活性 ８８５０９０５Ｂのマウス白血病Ｐ−３８８に対する治
療効果 を下記方法により試験した。結果全第２表に示す１）な
お３表中の延命効果は無処置群の生存日数（Ｃ）に対す
る治療群の生存日数（Ｔ）の比を百分率をもって表わし
た。

実験方法：ｔｘｔｏ’　個（７）Ｐ−３８８細胞ｔｃＤ
Ｆ、−ｒウス（♂１日本チャールズ・リバー）の腹腔内
に移植し、２４時間後よ、りＳＳ５０９０５Ｂをそれぞ
れ、−日一回、計１０回腹腔内に投与した。

第２表 〔発明の効果〕 これらの抗菌及び抗腫瘍活性からみて９本発明の抗生物
質ＳＳ５０９０５Ｂは抗菌剤及び抗癌剤として有用なも
のである。

（実施例〕 次に実施例を挙げて説明する。

実施例　ｌ グルコース２チ、溶性デンプノ３％、ペプトン０．５％
、ンイト／１％、コーン・スザープ・リカー１％、塩化
ナトリウム０．３％、炭酸カルシウム０．３％の組成？
有する液体培地＊　、Ｈ７，０とし。

ｓｏａｍｌ容坂ロフラスコに１（３ｖｍ１分注して滅菌
した。これにストレプトミセス　ラビダス８５０９０５
株全接種し、２８℃で２日間振盪培養して種培養液を作
成した。同じ培地組成からなる液体培地１６１にアント
ラキノ／−β−スルホン酸ナトリウム８０９？加え、３
０６容ジヤーフアーメ／ターに仕込み、これに前記の種
培養液２　［、）　０ｒｕｌ　ｆ接種し、培養温度３３
℃、攪拌数４５　Ｏｒ、ｐ、ｍ、−通気ｊ＃Ｉ６１／分
の条件下で５日間培養した。培養終了後、培養液を遠心
分離し菌体と濾液に分けた。得られた菌体にア七トンｌ
ｌを加え、よく混合した後、クロロホルム’Ｉｌｆ加え
て抽出した。

また、濾液（１３ＡりはｐＨ８〜９に調製した後。

酢酸エチル７１”ｆｃ加えて抽出した。菌体及び濾液の
抽出液を合わせ、減圧濃縮した後、これにｎ　−ヘキサ
ンを加え、可溶物を除き、残渣全シリカゲルカラムクロ
マトグラフィーに供した。めらがしめクロロホルム・メ
タノール・濃アンモニア水（７：ｌ：０．１）で充填し
たキーゼルゲル６０（メルク社製）のカラム（直径４の
−長さ４５ｃｒｒＬ）に同様の混液に溶解させた前記の
抽出物の残渣の溶液全通導し、同様の混液にて溶出した
。まず、ラビドマイシンを含んだ両分が先端部に溶出し
た後。

脱アセチルラピドマイシンを含んだ両分が溶出し。

次にＳＳ５ｏ９０５Ａｔ含んだ両分が溶出し、続いてＳ
Ｓ５０９０５Ｂ’に含んだ自分が溶出したので、これを
集め、減圧濃縮し、残渣全再度クロロホルム・メタノー
ル・酢酸（７：１−０．１）のキーゼルグル６０のカラ
ム（直径２　ｃＩｒＬ：長さ５５ｃｍ）に通導し、同様
の混液にて溶出した。ＳＳ５０９０５Ｂ’に含んだ両分
を集め、減圧濃縮した後、セファデフクスＬＨ２０のカ
ラムクロマトグラフィー（直径２ＣｒｆＬ：長さ５０　
ｍ　）に供した。メタノールにて溶出し、ＳＳ５０９０
５Ｂ’に含んだ画分全集め、減圧濃縮した後、ジクロロ
メタン・メタノール混液にて再結晶全行ない、ＳＳ５０
９０５Ｂの黄色結晶１２０ダを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の抗生物質ＳＳ５０９０５Ｂの紫外線吸
収スペクトル、第２図は同赤外線吸収スペクトル、第３
図は同　Ｈ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ示す図面であ
る。 以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　次式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で表わされる抗生物質ＳＳ５０９０５Ｂ。 ２　ストレプトミセス属に属する抗生物質 ＳＳ５０９０５Ｂ生産菌を培養し、その培養物から抗生
   物質ＳＳ５０９０５Ｂを採取することを特徴とするＳＳ
   ５０９０５Ｂの製造法。 ３　抗生物質ＳＳ５０９０５Ｂ生産菌がストレプトミセ
   ス　ラビダス　Ｓ５０９０５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
   ｓｒａｖｉｄｕｓ　Ｓ５０９０５）株である特許請求の
   範囲第２項記載の製造法。