JPS62175499A - 抗生物質ａ４０９２６マンノシルアグリコン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコン
と表示する新規な抗生物質およびその酸付加塩、それを
抗生物質Ａ４０９２６複合体またはその因子から製造す
る方法、およびそれに感受性の微生物を包含する伝染病
の処置におけるその使用に関する。

抗生物質Ａ４０９２６複５合体およびその因子は、グラ
ム陽性バクテリア、およびアクチノマズ之（Ａｃｔ　ｉ
ｎｏｍａｄｕｒａ）により生産されるネイセリア（Ｎｅ
ｉｓｓｅｒｉａｅ）菌株に対して活性な抗生物質である
。

アクチノマズラ（Ａｃｔ　ｉ　ｎｏｍａｄｕｒａ）居の
Ａ４０９２６生産菌株は、ブタペスト条約の規定に従い
、アメリカン・タイプ・カルチャー−コレクシ、ン（Ａ
ｍｅｒｉｃａｎ　　Ｔｙｐｅ　　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　　Ｃ
ｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、１２３０１　　Ｐａｒｋｌａｗｎ
　　Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉ　ｌ　ｌｅ、Ｍａｒｙｌ
ａｎｄ、Ｕ、Ｓ、Ａ、２０８５２）に１９８４年６月８
日に受託された。

抗生物質Ａ４０９２６およびその因子、ならびに生産性
微生物およびそれらを製造する方法は、欧州特許出願公
告第１７７８８２号に開示されている。既知の抗生物質
の物理化学的データに基づきかつ構造を参照することに
より、次の式をＡ４０９２６因子類゛に帰属させること
ができる［番号はＪ、ウィリアムス（Ｗｉｌｌｉａｍｓ
）、Ｊ。

Ａ、Ｃ，Ｓ、、１０６．４８９５−４９０８　（１９８
４）に提案されているものに類似する］　：Ｃ−）。

■ 式中、 ＡはＮ−（Ｃ１−Ｃａ）アシルアミノグルクロニル基を
表わす、そして Ｂはマンノシルおよびアセチルマンノシル基ヲ表わす。

さらに詳しくは、抗生物質Ａ４０９２６因子ＡはＡがウ
ンデカノイルアミノグルクロニルでありモしてＢがマン
ノシルを表わす上の式の化合物であり、そして抗生物質
Ａ４０９２６因子Ｂ０はＡがインドデカノイルアミノグ
ルクロニルでありそしてＢがマンノシルを表わす上の式
の化合物である。

抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡおよび因子ＦＢは、マン
ノース単位がアセチル−マンノース単位により置換され
ていることによおいて、対応する因子ＡおよびＢと異な
る。

抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡおよびＦＢは、少なくと
もある発酵条件下で、Ａ４０９２６生産性の主要な抗生
生成物である。

抗生物質Ａ４０９２６因子ＡおよびＢは、それぞれ抗生
物質Ａ４０９２６因子ＦＡおよび因子ＰＢの主な転化生
成物であり、そしてしばしば発酵ブイヨン中にすでに存
在する。

塩基性条件下に、抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡは抗生
物質Ａ４０９２６因子Ａに転化することができ、そして
抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＢは抗生物質Ａ４０９２６
因子Ｂに転化することができることが発見された。

結局、転化ブイヨン、あるいはＡ４０９２６含有抽出液
またはその濃縮物を塩基性条件下ににある時間放置する
（例えば、親核性塩基、ｐＨ＞９において一夜）下に放
置すると、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａおよび因子Ｂに
富んだ抗生物質Ａ４０９２６複合体が得られるであろう
。

抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコンは次の特性
を有する（付加塩でない形態）：Ａ）　次の吸収最大を
示す紫外線吸収スペクトル： λｍ　ａ　Ｘ （ｎｍ） ａ）　　０．１Ｎ（７）ＭＣＩ　　　　　２８０ｂ）　
リン酸塩緩衝液ｐＨ７．３８２ ８０３００（肩） ｃ）　　０．１ＮのＫＯＨ２９８ ｄ）　リン酸塩緩衝液ｐＨ９．０２８ ２３００（肩） Ｂ）　次の吸収最大を示す赤外吸収スペクトル（Ｃｍ″
−１）（添付図面の第２５図中に示す）： ３７００−３１００．３０００−２８００（ｎｕｊ　ｏ
　ｌ）；　１６５５；　１６２０−１５４０；１５０５
；１４６０　（ｎｕｊ。

１）；　１３７５　（ｎｕｊ　ｏ　ｌ）；　１３５０−
１２５０；１２１０；１１５０；１０２０．９７０，８
５０．８１０ Ｃ）　　ＤＭＳＯｄｓ　　（へキサデユーテロジメチル
スルホキシド）＋ＣＦ３　Ｃ０ＯＨ中で記録した２７０
ＭＨｚにおいて次の信号群（ｐｐｍ）を示す　’Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトル、内部標準ＴＭＳ　（０，ＯＯｐｐｍ）
、（δ＝ｐｐｍ、多重度、属性）： ２．５１　（ＤＭＳＯｄ５）；２．５０　５（ＮＣＨ３
）；２．８８　　ｍ　（Ｚ２）；３．３０　　ｍ（Ｚ’
２）；４．０８　　ｍ（Ｘ６）　　；　４　、４４　　
ｍ　（Ｘ５）　　；　４　、４９　　ｄ　（Ｘ７）；４
．８３　　ｍ（Ｘ２）；５．０２　　ｓ　（４Ｆ）；５
．０８　　ｓ　（Ｚ６）；５．３１　　ｓ（マンノース
のアノマーのブｏ）ン）；５．５３　　ｄ　（Ｘ４）；
５．７８　　Ｓ　（４Ｂ）；６．０８　　ｄ　（Ｘ３）
；７．７０　　ｓ　（６Ｂ）；６４．４４−８．５２（
芳香族およびペプチドのＮＨ） ｄ　＝二重線 ｍ　＝多重線 Ｓ　＝−重線 Ｄ）　次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、抗生
物質Ｌ１７０５４　（Ｔａ２−１）（Ｒｆ＝８．７８分
）に関して１．１８の保持時間（Ｒｔ）： カラム：　ウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒ
ｅ）００５　（５ｐ ｍ）アルチフス（Ａ　ｌ　ｔ　ｅ　ｘ）［ベック−／ン
（Ｂｅ　ｃｋｍａ ｎ）］　４．６ｍｍ　（内径）×２ ０ｍｍ 予備カラム：　ブラウンリー・ラプス（Ｂｒｏｗｎｌｅ
ｅ　　Ｌ　　ａ　　ｂ ｓ）ＲＰ１８　（５ｐｍ） 溶離剤Ａ　　ＣＨ３ＣＮ　　　　　　　１０％（２，５
ｇ／　１）Ｎａ Ｈ２ｐｏａ　　・Ｈ２Ｏ９０％ ｐＨ６，０に調節 溶離剤Ａ　　ＣＨ３ＣＮ　　　　　　　７０％（２，５
ｇ／　１）Ｎａ Ｈ２ＰＯ４−Ｈ２Ｏ３０％ ｐＨ６，０に調節 溶ｌｌ！ｌ：　　溶離剤Ａ中の５％から６０％の溶離剤
Ｂの直線の勾配、４０分 流速：　　１．６ｍｌ／分 ＵＶ検出器　２５４ｎｍ 内部標準：　抗生物質Ｌ１７０５４（Ｔａ２−１）［グ
ルツボ拳レペ チット社（Ｇ　ｒ　ｕ　ｐ　ｐ　０ Ｌｅｐｅｔｉｔ　　Ｓ、ｐ。

Ａ、］ Ｅ）　次のクロマトグラフィー系における０、６２のテ
ィコプラニンＡ２成分２に関するＲｆ値： ５ｇ／１（７）ＮａＨ２ＰＯ４ 番Ｈ２ｏ−Ｈ２０を含有す　　　７０ る１モルのＮａＣｌ アセトニトリル　　　　　　　　３０ ｐＨ６，０に調節、シラン化シリカゲル６０Ｆ２ｓａメ
ルク（Ｍｅｒｃｋ）板（層の厚さ０．２５ｍｍ）を使用
する 可視化ニ ー　　ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　　Ｒｅａｇｅｎｔ’）、す
なわち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・
クロマト グラフィー　（Ｊ　、　　Ｃｈｒｏｍａｔ　。

ｇ、）且、１７１　（１９６５）、 Ｚ、　　Ｐｈｙｓｉｏ１、　　Ｃｈｅｍ。

２９２．９９．（１９５３）］　を使 用する黄色 ６６３３を使用する最少ディビス（Ｄ ａｖｉｓ）培地上のバイオオートラジ オグラフィー Ｆ）　約１３７４におけるＭ＋Ｈ’Ｅ’を使用する急速
原子衝突（ＦＡ）Ｂ質量スペクトル。

既知の抗生物質の物理化学的特性に基づきかつ構造を参
照することにより、Ａが水素を表わしかつＢがマンノシ
ルを表わす上の式１は抗生物質Ａ４０９２６マンノシル
アグリコンに帰属サレる。

この説明および特許請求の範囲において、用語「抗生物
質Ａ４０９２６マンノシルアグリコン」は「内部塩」の
形態ならびに可能な酸および塩基の付加塩を包含するこ
とを意図する。

抗生’ｆｌｙ）質Ａ４０９２Ｂマンノシルアグリコンは
、因子Ａおよび因子Ｂに富んだ抗生物質Ａ４０９２６複
合体、抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ、因子Ｂ、因子ＢＯ
またはそれらの混合物をコントロールされた酸性条件下
に加水分解することによって調製される。

これらのコントロールされた酸性条件は、必要に応じて
非プロトン線有機溶媒の存在下の、強い鉱酸または有機
酸の濃水溶液により代表される。

強鉱酸の好ましい例は硫酸およびリン酸である。

好ましい強有機酸はトリフルオロ酢酸である。

好ましい非プロトン性有機溶媒は、脂環族または環族の
アルキルエーテル、例えば、ジオキサおンおよびテトラ
ヒドロフラン、低級アルキルスルホキシド、例えば、ジ
メチルスルホキシドおよび低級アルキルアミド、例えば
、ジメチルホルムアミドである。

反応温度は一般に０℃と反応混合物の還流温度との間に
保持される。多くの場合において、それは１５℃〜７５
化合物であるが、好ましい温度は２０℃〜５５化合物で
り、そして最も好ましい温度は室温である。

反応時間は特定の反応パラメーターに依存し、そして反
応過程はＴＬＣまたはＨＰＬＣにより追跡できるので、
当業者は反応過程を監視し、そして反応が完結したと考
えることのできる時を決定することができる。

この方法の１つの好ましい実施態様は、抗生物質Ａ４０
９２６複合体またはその純粋な因子を水性８０〜９５％
のトリフルオロ酢酸の存在下に室温においてコントロー
ルされた加水分解に付して抗生物質Ａ４０９２６マンノ
シルアグリコンを得ることによって代表される。

この方法の他の好ましい実施態様は、水性１〜２Ｎの硫
酸およびジオキサンの混合物２：１〜１：２の存在下の
抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコンのコントロ
ールされた加水分解によって代表される。

加水分解工程の終りにおいて回収された粗製の抗生物質
Ａ４０９２６マンノシルアグリコンの精製は、それ自体
既知の技術、例えば、非溶媒の添加による沈殿、溶媒を
使用する抽出およびクロマトグラフィーにより達成する
ことができる。

好ましいクロマトグラフィーの手順はカラムクロマトグ
ラフィーを包含し、そして最も好ましいクロマトグラフ
ィーあ手順は逆相カラムクロマトグラフィーである。

適当な逆相液体クロマトグラフィー手順は、中圧（５〜
５０バール）または高圧（１００〜２００バール）の下
に、好ましくはステンレスのカラムのカラムを使用する
。固相は２〜１８個の炭素原子（最も好ましくは０１８
）の炭化水素相またはフェニル基をもつシラン化シリカ
ゲルであることができ、モして溶離剤は極性水混和性溶
媒と樹脂と適合性のｐＨ（好ましくはｐＨ３−８）の水
性緩衝液との混合物である。

極性水混和性溶媒の代表例は、水溶性アルコール（例え
ば、メタノール、エタノール、イソプロパツール、ｎ−
ブタノール）、アセトン、アセトニトル、低級アルキル
アルラノエート（例えば、酢酸エチル）、テトラヒドロ
フラン、ジキサンおよびジメチルホルムアミドおよびそ
れらの混合物である。好ましい極性水混和性溶媒はアセ
トニトリルである。

溶離された分画をその抗生物質含量について、感受性微
生物についての通常のアッセイ、例えば、紙ディスクま
たは寒天拡散アッセイによりアッセイする。感受性有機
体の例は、バシルス・精製ならびに反応は、また、ＴＬ
ＣまたはＨＰＬＣの技術により便利に監視される。

好ましいＨＰＬＣ技術は、奸才しくは５ｐｍの直径を有
するＣ−１８アルキル基で官能化されたシラン化シリカ
ゲルの多孔質および球形の粒子のカラム［例えば、５Ｉ
Ｌｍのウルトラスフェア−（Ｕｌｔｒａｓｈｐｅｒｅの
）ＯＤＳアルテックス（Ａｌｔｅｘ）；ベックマン・カ
ンパニー］。

Ｃ−１８アルキル基デ官能化されたシリカゲルである予
備カラム［例えば、ＲＰ　　１８　　ブラウンリー・ラ
プス（Ｇｒａｗｎｌｅｅ　　Ｌａｂｓ）］および水性緩
衝化溶液中の極性水混和性溶媒、例えば、前述の１種の
直線勾配混合物である溶離剤を使用する逆相ＨＰＬＣに
より代表される。

好ましくは、この溶液はｐＨ５〜７に調節される。最も
好ましい溶離剤は、溶離剤Ａ中の溶離剤Ｂの５〜６０％
の直線勾配により代表され、ここで溶媒Ａはアセトニト
ル／水性緩衝液の、ｐＨ５〜７．１０：９０．の混合物
であり、そして溶媒Ｂはアセトニトル／水性緩衝液の、
ｐＨ５〜７．７０　：　３０、の混合物である。この分
野において知られているように、多くの物質を内部標準
として使用することができる。非常に便利なものは、こ
の場合において、このＨＰＬＣ系において本発明の化合
物に近接した保持時間を有する抗生物質Ｌ１７０５４で
ある。この標準物質は既知であり、そして欧州特許出願
公告第０１１９５７５号に記載されている。

本発明のこの化合物の抗バクテリア活性は、異なる微生
物培養物についての標準の希釈試験により生体外で立証
することができる。

ＭＩＣ（最小阻止濃度）の決定のための培地および生長
条件は、次の通りであった：アイソセンシテスト（Ｉｓ
ｏｓｅｎｓｉｔｅｓｔ）ブイヨン［オキソイド（Ｏｘｏ
　ｉ　ｄ）１．２４時間、スタフイロｍｌ−／キ（Ｓｔ
ａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、ストレプトマイセス・ファ
エカリス（ＳｔｒｅＬユ　ｆａｅｃａｌｉｓ）およびグ
ラム陰性バクテリア［大Ｑｉｌｉ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ　　ｃ。

ＬＬ）；　トツドーヘウィー／ト　（Ｔｏｄｄ−Ｈｅｗ
ｉｔｔ）ブイヨン［ディフコ（Ｄｉｆｃｏ）］、２２４
時間他のストレプトコッキ種；ＧＣ基本ブイヨン（ディ
フコ）＋１％のアイツバイタレックス（Ｉｓ−ｏｖｉｔ
ａｌｅｘ）（ＢＢＬ）、４８時ヱｚ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉ
ａ　　ｇｏｎｏｒｒｈｏｅ主至）；脳心臓ブイヨン（デ
ィフコ）＋１％の補充物’Ｊｌｃ　（ティフコ）、４８
時間、ヘモフィルフコ）、２４時間、嫌気的雰囲気、ク
ロストリジウｈ−ぺ）Ｉｙ７リンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒ
ｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎ　　ｅｎｓ）；ウイルキンス
ーチャルグレン（Ｗｉ　ｌ　ｋｉ　ｎ５−Ｃｈａ　ｌ　
ｇｒｅｎ）寒天（Ｔ、Ｄ、ウィルキンスおよびＳ、チャ
ルグレン、１９７６、抗モルの化合物剤および化学療法
（Ａｎｔ　１ｍ１ｃｒｏｂ、　　Ａｇ、　　Ｃｈｅｍｏ
ｔｈｒ、）旦、９２６参照］、４８時間、嫌気的雰囲気
、他の妹気的有機体［Ｃ。

ｍ互）、ＰＰＬＯブイヨン（ディクコ）＋１０％のウマ
血清＋１％のグルコース、４８時Ｒ，”ｒ、ｚバンズ（
Ｅ　ｖ　ａ　ｎ　５）およびり、タイラーーロビンソン
（Ｔａｙ　１　ｏ　ｒ−Ｒｏ　ｂ　ｉ　ｎ５ｏｎ）にお
けるような補充物質を含むＰＰＬＯブイヨン［抗微生物
化学療法雑誌（Ｊ、　　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ＋　Ｃｈ
ｅｍｏｔｈｅｒ、）４．５７）、２４時間、且ユ　ウレ
アリチクム（旦工至ａｌ　　ｔｉｃｕｍ）；インキュベ
ーションは３７℃で実施した。接種物は次の通りであっ
た＝１％（Ｖ／Ｖ）の８時間のブイヨン、Ｙユ　ガリセ
プ−Ｆ−７Ａ（ａｌｌｉｓｅ　　ｔｉｃｕｍ）；約１０
４色変化単位／ｍ１、Ｕ、　　ウレアリチクム（旦ｒｅ
ａｌ　　ｔｉｃｕｍ）；約１０’−１０５コロニー形成
単位／　ｍ　１、他のブイヨン希釈のＭＩＣ；約約１０
４−１０５バクテリア／スポツト（多点接種器を使用し
て接種した）。寒天希釈のＭＩＣ［Ｃユ　ニエヱユ上上
（ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）、プロピオニバクテリウム・ア
クネス（旦ユ（Ｂ、　　ｆｒａｇｉｌｉｓ）］。

いく種類かの微生物についての最小阻止濃度）ＭＩＣ，
ｇｇ／ｍｌ）を表工に報告する。

本発明の化合物の抗微生物活性は、また、本質的にＲ，
パランザ（Ｐａｌｌａｎｚａ）ら、抗微生物化学療法雑
誌（Ｊ、　　Ａｎｔｉｍｉｃｒ。

ｂ、　　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、）１１，４１９　（１９
′８３）に記載されているように実施する生体内実験に
おいて確証される。

マウスにＳ、　　ｐｙｏｇｅｎｅｓ　　Ｃ−２０３の懸
濁液を腹腔内投与することによって、実験的感染を実施
した。接種を調節して、未処置動物が４８時間以内に死
ぬように調節した。動物を感染後約３０分で試験化合物
により皮下的に処置した。

ＥＤｓ。を第１０日日にスピア−マン（Ｓ’ｐｅａｒｍ
ａｎ）およびカーバー（Ｋａｒｂｅｒ）ｃ７）方法［Ｄ
、Ｊ、フイ−−−（Ｆｉｎｎｅｙ）ｒ生物学的アッセイ
における統計学的方法（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　　Ｍ
ｅｔｈｏｃｌｓ　　ｉｎ　　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　
ＡＳｓａｙ）Ｊ　　、グリ−／　７４７（Ｇｒｔｆｆｉ
ｎ）、５２４ページ、１９５２］により各投与量におけ
る生存の百分率を基準にして計算した。

抗生物１Ａ４０９２６マンノシルアグリコンは、酸およ
び塩基の機能を有し、そして慣用法に従い塩類を形成す
ることができる。

本発明の化合物の代表的および適当な酸付加塩類は、有
機酸および無機酸との標準の反応により形成される塩類
を包含し、そしてそれらの酸類の例は次の通りである：
塩酸、臭化水素醜、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ
酢酸、トリクロロ酢酸、コハク酸、クエン酸、アスコル
ビン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、
葉酸、パモン酸、粘液酸、グルタミン酸、ショウノウ酸
、グルタル酸、グリコール酸、フタル酸、酒石酸、ラウ
リン酸、ステアリン酸、サリチル酸。

メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、
ピクリン酸、安息鉱酸、桂皮酸など。

これらの塩基の代表例は、次の通りである：アルカリ金
属またはアルカリ土類金属の水酸化物、例えば、ナトリ
ウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、バリウム
の水酸化物；アンモニアおよび脂肪族、脂環族または芳
香族の有機アミン、例えば、メチルアミン、ジメチルア
ミン、トリメチルアミン、そしてピコリン。

本発明の「塩でない」化合物を対応する付加塩類へ転化
すること、およびその逆、すなわち、本発明の化合物の
付加塩を塩でない形態に転化することは、当業者の技能
の範囲内であり、そして本発明に包含される。

例えば、抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコンは
、塩でない形態を水性溶媒中に溶解し、そしてわずかに
モル過剰量の選択した酸または塩基を添加することによ
って、対応する酸または塩基の形態に転化することがで
きる。次いで、得られる溶液またはＰＪｌＲ液を凍結乾
燥して所望の塩を回収する。

塩でない形態が可溶性である溶媒中に最終の塩が不溶性
であるとき、理論量またはわず力誓にモル過剰量の選択
した酸または塩基の添加後、それは濾過により塩でない
形態の有機溶液から回収される。

塩でない形態は水性溶媒中に溶解した対応する酸または
塩基の塩から調製することができ、次いでこれを中和し
て塩でない形態を遊離する。

中和後、酸または塩基の過剰量を排除することが必要で
あるとき、普通の脱塩手順を用いることができる０例え
ば、シラン化シリカゲル、非官能化ポリスチレン、アク
リル樹脂およびコントロールされた孔をもつポリデキス
トラン樹脂［例えば、セフ７デツクス（Ｓｅｐｈａｄｅ
ｘ）ＬＨ２０］または活性炭のクロマトグラフィーを便
利に用いることができる。不必要の塩類を水溶液で溶離
した後、所望生成物は水と極性または非極性の有機溶媒
との直線勾配または段階勾配、例えば、５０　：　５０
から約１００％のアセトニトリルのアセトニトリル／水
により溶離される。

この分野において知られているように、製薬学的に許容
されうる酸類（または塩基類）あるいは製薬学的に許容
されえない酸類（または塩基類）との塩の形成を便利な
精製技術として使用することができる。形成および単離
後、Ａ４０９２６抗生物質の塩の形態を対応する塩でな
い形態に、あるいは製薬学的に許容されうる塩の形態に
転化することができる。

ある場合において、抗生物質Ａ４０９２６マンノシルア
グリコンの塩基付加塩は、水および親木性溶媒中にいっ
そう可溶性である。

抗生物［Ａ４０９２６マンノシルアグリコンは、多数の
広く拡散された感染の原因であるグラム陽性バクテリア
に対して活性である。通常の治療的処置に対してこれら
の病原体は抵抗を増加しているので、新しい抗生物質の
要求はなお大きい。

一般に、抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコンな
らびに無毒のそれらの製薬学的に許容されうる塩類また
はそれらの混合物は、局所的にまたは非経口的の異なる
投与の経路により投与することができる。非経口的投与
は、一般に、好ましい投与経路である。

注射用組成物は、油または水性ビヒクル中の懸濁液、溶
液、または乳濁液のような形態であることができ、そし
て懸濁剤、可溶化剤および／または分散剤のようなアジ
ュバントを含有することができる。

あるいは、活性成分は、供給の時、適当なビヒクル、例
えば、無菌の水を添加する、再構成のための粉末の形態
であることができる。

投与の経路に依存して、これらの化合物は種々の投与形
態に配合することができる。　　。

ある場合において、経口的投与のためのＭ陽性被覆され
た投与形態に配合することができ、これは既知の技術に
おいて知られているようにして調製することができる［
例えば、「レミントンの製薬科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
’ｓ　　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　　５ｃｉｅｎ
ｃｅｓ）Ｊ、第１５版、マツグ・パブリジング・カンパ
ニー、米国ペンシルバニア州イーストン、１６１４ペー
ジ参照］。

これは腸内で抗バクテリア剤の吸収がとくに望ましくか
つ胃を未変化で通過させるとき、ことに有効であろう。

活性成分の量は、種々の因子、例えば、処置すべき患者
の大きさおよび状態、投与の経路および頻度、および含
まれる薬剤に依存する。

本発明の抗生物質、すなわち、抗生物質Ａ４０９２６マ
ンノシルアグリコンおよびそれらの製薬学的に許容され
うる塩類は、約０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、’！！者の活
性成分の毎日の量で、必要に応じて１〜４回／日に分割
して投与したとき、一般に有効である。

とくに好ましい組成物は、約１００〜約５，０００ｍｇ
／単位を含有する投与単位で調製されたものである。

持続作用の配合物は、この分野において知られているよ
うに、異なる機構および方法の基づいて調製することが
できる。

抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコンを含有する
持続作用の配合物を調製する好ましい方法は、水性また
は油性の媒質中に懸濁された。この抗生物質の水不溶性
の形態の使用を含む。

製薬学的組成物の調 筋肉内注射のための投与単位形態は、８％のプロピレン
グリコールおよびｌ　、０００ｍｇの抗生物ｆｉＡ４０
９２６マンノシルアグリコンを含有する無菌の懸濁液Ｕ
ＳＰの５　ｍ　ｌを使用して調製される。

筋肉内注射のための投与単位形態は、５００ｍｇの抗生
物１Ａ４０９２６マンノシルアグリコンを含有する５ｍ
ｌの無菌の注射用の水ＵＳＰを使用して調製される。

筋肉内注射のための投与単位形態は、５ｍｌの無菌の注
射用の水中に懸濁させた２　、０００ｍｇの抗生物１Ａ
４０９２６マンノシルアグリコンのナトリウム塩を使用
して調製される。

さらに、本発明の抗生物質は、腸内の仏説大腸炎（ｐｓ
ｅｕｄｏｍｅｍｂｒａｎｏｕｓ　　ｃｏｔｉ　ｔ　ｉ　
ｓ）の原因であるクロストリジウムφ乏７４シレ（Ｃｌ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　　ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の生長を
抑制するために有用である。

これらの抗生物質は、仏説大腸炎の処置において、製薬
学的に許容されうる投与形態に調製された。抗生物質ま
たは製薬学的に許容されうる塩の有効量を経口的に投与
することにより使用できるであろう。このような使用の
ため、抗生物質はゼラチンカプセル剤または液状懸濁液
の形態で投与することができる。

薬物としての活性のほかに、本発明の抗生物質Ａ４０９
２６マンノシルアグリコンおよびそれらの製薬学的に許
容されうる塩類は、動物の成長促進剤として使用するこ
とができる。

この目的に、本発明の化合物を適当な飼料中に混入して
経口的に投与する。使用する精確な濃度は、正常な飼料
が消費されるとき、成長促進に有効な量で活性剤を供給
するために必要な量である。

動物飼料中への本発明の活性化合物の添加は、好ましく
は、活性化合物を有効量で含有する適当な飼料予備混合
物を調製し、そしてこの予備混合物を完全な割合で混入
することによって達成される。活性成分を含有する中間
濃厚物または供給補助剤を飼料中に配合することができ
る。

このような飼料予備混合物および完全定量を調製しかつ
投与できる方法は、参考書に記載されている［例えば、
「アプライドφアニマルＯニュートリジョン（Ａｐｐｌ
ｉｅｄ　　Ａｎｉｍａｌ　　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）Ｊ、
Ｗ、Ｈ，７リードマン・アンド・カンパ＝−（Ｆｒｅｅ
ｄｍａｎ　　ａｎｄＣｏ、）、米国、Ｓ、フランシスコ
（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）、１９６９または「ライブスト
ックφフィーズ・アント拳フィーディング（Ｌｉｖｅｓ
ｔｏｃｋ　　Ｆｅｅｃｌｓ　　ａｎｄ　　Ｆｅｅｄｉｎ
ｇ）」０・アンド−ＢΦブックス、米国オレゴン州コバ
リス、１９７７参照］そしてこれらをここに引用によっ
て加える。

次の実施例により本発明をさらに説明するが、こらの実
施例は本発明の範囲を限定するもと解釈すべきではない
。

実施例１ ａ）抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ（下の製造３を参
照）の試料（２１４ｍｇ）をトリフルオロ酢酸／水９／
１（ｖ／ｖ）混合物（３０ｍｌ）の中に溶解した。室温
において４８時間後、この混合物室温でもとの体積の１
７１０に真空蒸発させ、３０ｍ１の水で洗浄し１次いで
酢酸エチルで抽出する。水性相は主として抗生物質Ａ４
０９２６マンノシルアグリコンおよびトリフルオロ酢酸
を含有した。

ｂ）この水性相を１Ｎの水酸化ナトリウムで中和し、次
いで水中のシラン化シリカゲル′６０．７０〜２３０メ
ツシユ［５０ｍ１；メルク・カンパ−−−（Ｍｅｒｃｋ
　　Ｃｏ、）　　ａｒｔ　　７７　１９］のカラム（床
高さ５ｃｍ）に−入する。この方ラムを蒸留水で洗浄し
、次いでアセトニトリル−水１／１　（ｖ／ｖ）　で溶
離する。２０ｍ１の分画を集め、ＨＰＬＣ（またはＴＬ
Ｃ）により分析し、そして抗生物質Ａ４０９２６マンノ
シルアグリコンを含有するものをプールし、ｎ−ブタノ
ールとの共沸蒸留により小さい体積に濃縮し、次いで凍
結乾燥すると、１２４ｍｇの抗生物質Ａ４０９２６マン
ノシルアグリコンが得られる。

裏旌輿ヱ 実施例１の手順を反復するが、出発物質を水性トリフル
オロ酢酸と室温で一夜の代わりに約６５℃で２時間反応
させる。収量：最終生成物の１１０ｍｇ。

裏施輿ｌ 実施例１の手順を反復するが、水性トリフルオロ酢酸の
代わりに２Ｎの水性硫酸およびジオキサン（ｌ：１の比
）の混合物を使用する。この反応の温度は、この場合、
約６５℃、−夜である。収量は前の実施例において得ら
れたものに類似する。

実施例４ 実施例１の手順を反復し、出発物質として抗生物質Ａ４
０９２６複合体の代わりに、 ａ）抗生物質Ａ４０９２６因子Ａ ｂ）抗生物質Ａ４０９２８因子Ｂ を使用する。収量は前の実施例において得られたものに
類似する。

夾施輿１ 実施例１ａの手順に従って得られた抗生物質Ａ４０９２
６マンノシルアグリコンを、次のようにしてさらに精製
する： 水性相を１Ｎの水酸化ナトリウムで中和し、次いで約１
８ｍ１に真空下のｅ縮する。

得られた溶液を２回の引続くクロマトグラフィーにかけ
る。ここで、アセトニトリル＝１８ミリモルのリン酸ナ
トリウム緩衝液ｐＨ６，０、１７　：　８３　（ｖ／ｖ
）から成る溶媒と平衡化した２０ｇの１０ミクロンのＲ
Ｐ１８シリカゲル［リチロソーブ（Ｌｉｃｈｒｏｓｏｒ
ｂ）ＲＰ１８メルク・カンパニー、ａｒｔ　　９３３４
）を充填したステンレス鋼のカラム（直径２ｃｍ）を使
用する。

このカラムはクロマトスバク・モヅルプレプ（Ｃｈｒｏ
ｍａｔｏｓｐａｃ　　Ｍｏｄｕｌｐｒｅｐ）単位［ジヨ
ウベン・イポン（Ｊｏｂｅｎ　　Ｙｖ　ｏ　ｎ）、１６
−１８　　フランス国ロングジンネアウ（Ｌｏｎｇｊｎ
ｎｅａｕ）ルー＊ヅＩカー）−ル（Ｒｏｕｅ　　ｄｕ　
　Ｃａｎａｌ）９１１６０］ｃｙ）一部である。このカ
ラムをアセトニトリル：１８ミリモルのリン酸ナトリウ
ム緩衝液ｐＨ６，０，１７：８３（ｖ／ｖ）で溶離する
。溶離した分画を２７５ｎｍにおいてＵＶＩＣ０ＲＤ　
　Ｓ　　ＵＶモニター（ＬＫＢ　　カンパニー）を使用
して監視し、そしてＨＰＬＣおよびＴＬＣにより分析す
る。

抗生１ｉｆｉＡ４０９２６マンノシルアグリコンを含有
する２回のクロマトグラフィーの実験の分画をプールし
、そして真空濃縮して有機溶媒を除去する。次いで、得
られた水溶液をクロマトグラフィーにかけ、そして実施
例１ｂにおけるように仕上げると、６６ｍｇの抗生物質
Ａ４０９２６マンノシルアグリコン凍結乾燥物が得られ
る。

匿久隻亘ムＩ】 製造１： アクチノマズラ（Ａｃｔ　ｉ　ｎｏｍａｄｕｒａ）種Ａ
ＴＣＣ３９７２７の発酵 抗生物質Ａ４０９２６生産性菌株［アクチノマＸ５　（
Ａｃｔ　ｉ　ｎｏｍａｄｕｒａ）種ＡＴＣＣ３９７２７
］の培養物をオートミル寒天傾斜培地上で２８℃におい
て２〜３週間生長させ、そして０５％の肉エキス、０．
５％の自動溶解酵母、０゜５％のペプトン、０．３％の
カゼイン加水分解物、２％のグルコース、０．１５％の
ＮａＣ１から構成された１００ｍ１の培地（滅菌前ｐＨ
７。

５）を含有する５　００　ｍ　ｌ容のエルレンマイヤー
フラスコに接種するために使用する。

このフラスコを２８℃において回転ｉｍｓで２００ｒｐ
ｍで約７時間インキユベーシゴンし、次いでこの培養物
を４文の上の培地を含有する発酵器に移す。この培養物
を、２８℃において約７２時間約２見／分の空気を流し
かつ９０００ｒｐｍで攪拌しながら生長させる０次いで
、それを使用して同一培地の２００２の発酵器を接種す
る。この発酵器を約２８℃において１００ＪＩ／分の空
気で通気しかつ２５０ｒｐｍで攪拌する。抗生物質を紙
ディスクの寒天拡散法によりバシルス・、己ノ＋ｊＪＸ
（Ｂ、　　５ｕｂｔｉｌｉｓ）を最少培地上に試験有機
体として使用して監視する。最高活性は７２〜９６時間
後に得られる。

鼠嶽呈二 抗生物質Ａ４０９２６の回収 Ａ）発酵ブイヨンを４℃に冷却し、ｐＨ９、５にしかつ
攪拌する。約１時間後、濾液をｐＨ約３・５に水性鉱酸
で調節する。この混合物を３０分間４℃で攪拌し、次い
で濾過助剤（Ｈｙｆｌ。

−ＦｌｏＭＡ・）を使用して濾過する。透明濾液を排出
し、濾過ケークを脱イオン水中に懸濁させ、ｐＨ役８．
５に調節し、次いで濾過する。＠収されたケークを同一
手順にかける。プールした濾液は抗生物質Ａ４０９２８
を含有する。

Ｂ）膨潤したＤ−Ａ　ｌ　ａ−Ｄ−Ａ　１　ａ　−ｅ−
アミノカプロイル−セファロース変性マトリックス（２
文）を、製造１に従って得られた発酵ブイヨン（それを
濾過し、そして透明溶液を約８．５のｐＨにしだ後）、
あるいは上の製造２Ａに従って得られたプールした濾液
に添加する。室温において一夜攪拌した後、この樹脂を
濾過により回収し、そして５％（ｗ／ｖ）のＮａＣ１を
含有する約２×１０文の０．４５ミリモルのＨＣｌ−Ｔ
Ｒｌ５緩衝液ｐＨ７，５（ＴＲＩＳ＝２−アミノ−２−
ヒドロキシメチル−１，３−プロパンジオール）で洗浄
し、次いで蒸留水（４Ｘ２０ｎ）で洗浄する。

抗生物質Ａ４０９２６を樹脂から１％（Ｗ／Ｖ）のアン
モニア水利物（２Ｘ２０Ｍ）で溶離する。溶離液を室温
において一夜放置し、次いで小さい体積（約２．５５１
＞に濃縮する。水をｎ−ブタノールとの共佛蒸留により
排除する０次いで、石油エーテルを添加し、３．４ｇの
粗製抗生物質Ａ４０９２６複合体を沈殿させる。

讐盗ユニ 抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢの精製上の製造２の手
順に本質的に従って得られた粗製抗生物質Ａ４０９２６
複合体（７５０ｍｇＨＰＨＬＣ力価７０％）を４００ｍ
１の水中に溶解し、ｐＨ７，５に調節し、濾過する。次
いで、濾液をＤ−Ａ　ｌ　ａ−Ｄ−Ａ　ｌ　ａ　−ε−
７ミノカプロイルーセフアロース（５０ｍ　ｌの膨潤樹
脂−床の高さ＝５ｃｍ）の親和クロマトグラフィーにか
ける。このカラムをｐＨ７，５にＨＣＩで調節した２モ
ルｃｙ）ＮａＣ１を含有する０、１６％（Ｗ／Ｖ）のア
ンモニアと平衡化し、次の３種類の緩衝液で順次に展開
する： 緩衝液Ａ：　　ＨＣＩでｐＨ７，５に調節した２モルの
ＡａＣｌを含有する０、１６％ （Ｗ／Ｖ）のアンモニア（２，６力 ラム体積）； 緩衝液Ｂ：　　ＨＣＩでｐＨ９，５に調節した２モルの
ＡａＣｌを含有する０、１６％ （Ｗ／Ｖ）のアンモニア（１６力ラ ム体積）； 緩衝液Ｃａｔ％（Ｗ／Ｖ）の水性アンモニアｐＨ１１，
４（２，６力ラム体積）； 緩衝液Ｃは単一の分画で抗生物質Ａ４０９２６複合体Ａ
Ｂを溶離する。この溶離された分画をｐＨ７，０に調節
し、そして１０ミリモルのトリス−ＨＣＬ　　ｐＨ７，
０で緩衝化した同一の親和カラムに再び適用する。この
カラムを脱塩が完了するまで蒸留水で洗浄する。

次いで、抗生物質を２力ラム体積の０．３９％（Ｗ／ｖ
）の水性アンモニアｐＨ１１，０で溶離する。

溶離された分画を小さい水性混合物に濃縮し、次いで凍
結乾燥する。純粋な抗生物質Ａ４０９２６複合体ＡＢ　
（３７４ｍｇ）が得られる。

製遺工二 抗生物質Ａ４０９２Ｅｉ因子ＡおよびＢの単離Ａ）製造
２に従って得られた抗生物質Ａ４０９２６複合体（３，
３ｇ）または製造３に従って得られた抗生物質Ａ４０９
２６複合体ＡＨ（２、３ｇ）を０．５見の水中に懸濁さ
せ、攪拌し、次いで濾過する。透明な濾液をシラン化シ
リカゲルのカラム（２００ｇ、床高さ１８ｃｍ；シラフ
化シリカゲル６０；メルク・インコーホレーテッド）［
これは溶液Ａ（０，２５％（ｗ／　ｙ）　（７）Ｎ　ａ
Ｈ２ＰＯ４＠Ｈ２０および２．５％（Ｗ／ｖ）ノＮａＣ
１を含有し、ＮａＯＨでｐＨ６，０に調節されている０
　、　００１　（ｗ／ｖ）モルの水性ナトリウムＥＤＴ
Ａ）で予備平衡化されているコに適用する。このカラム
を溶液Ａ中の０％〜４０％（Ｖ／Ｖ）のアセトニトリル
直線勾配で溶離し、合計の体積は約７１であり所要時間
は約４８時間である。約１５　、５’ｍ　１の分画を集
め、そしてづ＆＞１．−；１＊スブチリス（Ｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　　５ｕｂｔ　ｉ　ｌ　ｉ　ｓ）についてのバイ
オアッセイによりアッセイし、そしてＨＰＬＣにより分
析する。同様な抗生物質含量を有する分画をプールしす
る。

分画Ｎｏ、３１０〜３３０およびＮｏ、３４８〜３６５
は、それぞれＡ４０９２６因子ＡおよびＡ４０９２６Ｂ
と明らかにされた抗生物質を含有した。

Ｂ）単一のＡ４０９２６因子ＡおよびＢを含有するプー
ルした分画を、減圧濃縮してアセトニトリルを除去し、
水（初期の溶液の約２倍の体積）で希釈し、そして前述
の型のシラン化シリカゲル（膨潤したマトリックスの体
Ｊｆｉ：５０ｍ１；床高さ１５ｃｍ）に適用する。この
方ラムを脱イオン水で脱塩が完了するまで洗浄し、最後
にアセトニトリル／水６０　：　４０　（ｖ／ｖ）で展
開する。

溶離された分画を減圧濃縮し、そして残留物を凍結乾燥
すると、溶離された分画の最初の群（上の分画３１Ｏ〜
３３０）から１３４ｍｇの抗生物質Ａ４０９２６Ａが得
られ、そして溶離された分画の第２群（上の分画３４０
〜３６５）から２０６ｍｇの抗生物質Ａ４０９２６Ｂが
得られる。

敲 製造２Ａの手順および製造２Ｂの手順の第１工程に本質
的に従うことにより、樹脂に結合した抗生物質を１％（
Ｗ／Ｖ）のアンモニア水和物（２ｘ２０Ｍ）で溶離する
。溶離液をｐＨ７，８に硫醜で調節し、そしてｎ−ブタ
ノールとの共浦蒸留により小さい体積に減圧濃縮して水
性濃縮物を形成し、次いでこれを紙で濾過する。回収さ
れた濾液は抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡ、抗生物質Ａ
４０９２６因子ＦＢおよび少量の抗生物質Ａ４０９２６
因子ＡＢおよび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂを含有する
（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）。

約５０　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌの純粋な抗生物質Ａ４０９
２６複合体（ＨＰＬＣ分析）を５ｇｍの孔大きさのフィ
ルター［アクロディスク（Ａｃｒｏｄｉｓｃ＠）；ゲル
マン・サイエンス・インニーボレーテッド（Ｇｅｌｍａ
ｎ　　ａｓｃｉｅｎｃｅ　　ＩｎＣ，）］で慮過し１次
いで２０ｇのオクタデシルシリル逆相シリカゲルを含有
するステンレスのカラム（直径＝２ｃｍ）［リチリソー
ブ（Ｌｉｃｈｒｉｓｏｒｂ）ＲＰ１８、メルク・インコ
ーホレーテッド：粒子サイズ１０ＪＬｍｌに適用する。

次いで、シキカゲルをクロマトスバグ拳ポヅルプレプ（
Ｃｈｒｏｍａｔｏｓｐａｃ　　Ｍｏｄｕｌｐｒｅｐ）装
置［ヨウベン・イポン（ＹｏｂｅｎＹｖｏｎ）、　フラ
ンス］のステンレス鋼のカラムの中に適度の圧力（公称
約１４バール）下に詰め、アセトニトリルと１８ミリモ
ルのりリン酸塩緩衝液ｐＨ６，０との２７　：　７５　
（ｖ／ｖ）混合物で平衡化する。この平衡化に使用した
のと同一の溶媒混合物を使用して約１０．５ｍｌ／分の
流速で溶離を実施する。溶離液をバシルス・スブチＩＪ
Ｘ　（Ｂａｃｉ　ｌ　ｌｕｓ　　５ｕｂｔ　ｉ　ｌ　ｉ
　ｓ）についてバイオアッセイおよびＨＰＬＣにより監
視する。

同様な抗生物質を含有する分画をプールし、そして５回
のクロマトグラフィーの実施の均質分画を濃縮して有機
溶媒を蒸発させる。

得られた溶液を水性１モルの塩化ナトリウムでもとの体
積の２倍に希釈し、そして水で平衡化したシラン化シリ
カゲルのカラム（５０ｇ；床の高さ５　ｃ　ｍ　；シラ
ン化シリカゲル６０；メルク・インニーボレーテッド）
に適用する。

この方ラムを脱塩が完結するまで脱イオン水で洗浄し、
（水性ＡｇＮＯ３の添加後、溶離液中にＡｇＣ１の沈殿
が形成しない）、次いでアセトニトリル：水１　：　１
　（ｖ／ｖ）で溶離する。同様な抗生物質含量（ＨＰＬ
Ｃ分析）を有する溶は液をプールし、ｎ−ブタノールと
の強風津蒸留により小さい体積に濃縮すると水相が得ら
れ、次いでこれを凍結乾燥する。収量： 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡ：　　５５ｍｇ抗生物質
Ａ４０９２６因子ＰＢ：　　５１ｍｇ抗生物質Ａ４０９
２６因子Ａ　　：　　３８ｍｇ抗生物質Ａ４０９２６因
子Ｂ（、：　　３３ｍｇ製造６： 抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＦＢのそれぞれ抗生物質Ａ４０９２６因子Ａお
よび抗生物質Ａ４０９２６因子Ｂへの転化 抗生物質Ａ４０９２６因子ＰＡおよび抗生物質Ａ４０９
２６因子ＰＢ　（５０ｍｇ）を別々に２゜５ｍｌの水性
１％（Ｗ／Ｖ）のＮＨ４０Ｈ中に溶解し、そして得られ
た溶液を２４時間攪拌しながら室温に保持する。

抗生物質Ａ４０９２６因子Ａは始め抗生物質Ａ４０９２
６因子ＦＡを含有する溶液から、そして抗生物質Ａ４０
９２６因子Ｂは始め抗生物質Ａ４０９２６因子ＦＢを含
有する溶液から、ｎ−ブタノールとの共沸蒸留により水
を除去し、エチルエーテルで沈殿させ、そして沈殿を濾
過により集めることによって、それぞれ、得られる（収
率的７５％）。

Ｄ−Ａ　１　ａ−Ｄ−Ａ　１　ａ−セフ７ｔｆｆ−スｆ
）調製活性化したＣＨ−セフｙ　（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
）４Ｂ　［ファーマシア・ファイ昏ケミカルス（Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａ　　Ｆｉｎｅ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）］
　　（Ｉｇ）を１ミリモルの冷水塩酸中で膨潤させ、そ
して同一溶液で洗浄する。

得られたゲル（約３ｍ１）を、０．５モルの塩化ナトリ
ウムおよび０．１モルのの重炭酸ナトリウム緩衝液ｐＨ
８中のＤ−７ラニルーＤ−７ランニン（３０ｍｇ）の溶
液と混合する。

この混合物を室温において１時間エンド・オーバー−エ
ンド（ｅｎｄ−ｏｖｅｒ−ｅｎｄ）回転する。

結合反応が完結した後、過剰の配位子を緩衝液で洗浄除
去する。デキストラン支持体の結合しない活性（ＩＪを
、モルのエタノールアミン塩酸塩でｐＨ９において１時
間処理することによりブロッキングする。

次いで、セファデックス−ε−アミ７カブロイルーＤ−
７ラニルーＤ−アランニン変性マトリックスを濾過によ
り回収し、そして０．５モルの塩化ナトリウムおよび０
．１モルの酢酸ナトリウムｐＨ４で、そして０．５モル
の塩化ナトリウムおよび０．１モルのトリス（ヒドロキ
シメチル）アメツメタン緩衝液ｐＨ８で交互によく洗浄
する（４回）。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコン
のＵＶスペクトルである。 第２図は、抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコン
のＩＲスペクトルである。 第３図は、抗生物質Ａ４０９２６マンノシルアグリコン
の　Ｉ　ＨＮＭＲスペクトルである。 特許出願人　グルボ・レペチット・ニス・ビー・エイ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、付加塩でない形態において、次の特性： Ａ）次の吸収最大を示す紫外線吸収スペクトル： 　　　　　　　　　　　　　　　λｍａｘ（ｎｍ） ａ）０．１ＮのＨＣｌ　　　　　　２８０ ｂ）リン酸塩緩衝液ｐＨ７．３８　２８０ 　　　　　　　　　　　　　　　　３００ 　　　　　　　　　　　　　　　　（肩） ｃ）０．１ＮのＫＯＨ　　　　　　２９８ ｄ）リン酸塩緩衝液ｐＨ９．０　　２８２ 　　　　　　　　　　　　　　　　３００ 　　　　　　　　　　　　　　　　（肩） Ｂ）次の吸収最大を示す赤外吸収スペクトル（Ｃｍ＾−
   ＾１）（添付図面の第２５図中に示す）： ３７００−３１００；３０００−２８００（ｎｕｊｏｌ
   ）；１６５５；１６２０−１５４０；１５０５；１４６
   ０（ｎｕｊｏｌ）；１３７５（ｎｕｊｏｌ）；１３５０
   −１２５０；１２１０；１１５０；１０２０；９７０；
   ８５０；８１０ Ｃ）ＤＭＳＯ　ｄ＿６（ヘキサデューテロジメチルスル
   ホキシド）＋ＣＦ＿３ＣＯＯＨ中で記録した２７０ＭＨ
   ｚにおいて次の信号群（ｐｐｍ）を示す＾１Ｈ−ＮＭＲ
   スペクトル、内部標準ＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）、（δ
   ＝ｐｐｍ、多重度、属性）： ２．５１（ＤＭＳＯｄ＿５）；２．５０ｓ（ＮＣＨ＿３
   ）；２．８８ｍ（Ｚ２）；３．３０ｍ（Ｚ′２）；４．
   ０８ｍ（Ｘ６）；４．４４ｍ（Ｘ５）；４．４９ｄ（Ｘ
   ７）；４．８３ｍ（Ｘ２）；５．０２ｓ（４Ｆ）；５．
   ０８ｓ（Ｚ６）；５．３１ｓ（マンノースのアノマーの
   プロトン）；５．５３ｄ（Ｘ４）；５．７８ｓ（４Ｂ）
   ；６．０８ｄ（Ｘ３）；７．７０ｓ（６Ｂ）；６４．４
   ４−８．５２（芳香族およびペプチドのＮＨ） ｄ＝二重線 ｍ＝多重線 Ｓ＝一重線 Ｄ）次の条件下に逆相ＨＰＬＣで分析したとき、抗生物
   質Ｌ１７０５４（ＴＡ３−１） （Ｒｆ＝８．７８分）に関して１．１８の保持時間（Ｒ
   ｔ）： カラム：ウルトラスフェアー（Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ
   ）ＯＤＳ（５μｍ）アルテクス（Ａｌｔｅｘ）［ベック
   マン（Ｂｅｃｋｍａｎ）］４．６ｍｍ（内径）×２５０
   ｍｍ 予備カラム：ブラウンリー・ラブス（Ｂｒｏｗｎｌｅｅ
   Ｌａｂｓ）ＲＰ１８（５μｍ） 溶離剤Ａ　ＣＨ＿３ＣＮ　１０％ （２．５ｇ／ｌ）Ｎａ Ｈ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ　９０％ ｐＨ６．０に調節 溶離剤Ａ　ＣＨ＿３ＣＮ　７０％ （２．５ｇ／ｌ）Ｎａ Ｈ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ　３０％ ｐＨ６．０に調節 溶離：溶離剤Ａ中の５％から６０％の溶離剤Ｂの直線の
   勾配、４０分 流速：１．６ｍｌ／分 ＵＶ検出器２５４ｎｍ 内部標準：抗生物質Ｌ１７０５４（ＴＡ３−１）［グル
   ッポ・レペチット社（Ｇｒｕｐｐｏ　Ｌｅｐｅｔｉｔ　
   Ｓ．ｐ．Ａ．］ Ｅ）次のクロマトグラフィー系における０．６２のテイ
   コプラニンＡ＿２成分２に関するＲｆ値： ５ｇ／ｌのＮａＨ＿２ＰＯ＿４・Ｈ＿２Ｏ・Ｈ＿２Ｏを
   含有する１モルのＮａＣｌ　７０ アセトニトリル　３０ ｐＨ６．０に調節、シラン化シリカゲル６０Ｆ＿２＿５
   ＿４メルク（Ｍｅｒｃｋ）板（層の厚さ０．２５ｍｍ）
   を使用する 可視化： −ＵＶ光 −パウリ試薬（Ｐａｕｌｙ　Ｒｅａｇｅｎｔ）、すなわ
   ち、ジアゾ化スルファニル酸［ジャーナル・オブ・クロ
   マトグラフィー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．）￥２０￥
   ，１７１（１９６５）、 Ｚ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．￥２９２￥，９９，（
   １９５３）］を使用する黄色 −￥Ｂ．￥　￥ｓｕｂｔｉｌｉｓ￥　ＡＴＣＣ６６３３
   を使用する最少デイビス（Ｄａｖｉｓ）培地上のバイオ
   オートラジオグラフィー Ｆ）約１３７４におけるＭ＋Ｈ＾■を使用する急速原子
   衝突（ＦＡ）Ｂ質量スペクトル を有することを特徴とする抗生物質Ａ４０９２６マンノ
   シルアグリコンおよびその酸付加塩。 ２、付加塩でない形態において、次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ I Ｂはマンノシルを表わす、 を有することを特徴とする抗生物質Ａ４０９２６マンノ
   シルアグリコンおよびその酸付加塩。 ３、抗生物質Ａ４０９２６複合体およびその因子をコン
   トロールされた酸性条件下に加水分解することを特徴と
   する特許請求の範囲第１または２項記載の化合物を製造
   する方法。 ４、コントロールされた酸性条件は、必要に応じて非プ
   ロトン性有機溶媒の存在下の、強い鉱酸または有機酸の
   濃水溶液によって代表される特許請求の範囲第３項記載
   の方法。 ５、鉱酸は硫酸またはリン酸である特許請求の範囲第４
   項記載の方法。 ６、有機酸はトリフルオロ酢酸である特許請求の範囲第
   ４項記載の方法。 ７、非プロトン性溶媒は脂環族または環族のアルキルエ
   ーテル、低級アルキルスルホキシドまたは低級アルキル
   アミドである特許請求の範囲第４項記載の方法。 ８、非プロトン性有機溶媒はジオキサ、テトラヒドロフ
   ラン、ジメチルスルホキシドまたはジメチルホルムアミ
   ドである特許請求の範囲第４項記載の方法。 ９、反応温度が０℃ないし還流温度である特許請求の範
   囲第４項記載の方法。 １０、反応温度が１５℃〜７５℃である特許請求の範囲
   第４項記載の方法。 １１、強酸は８５〜９５％の水性トリフルオロ酢酸であ
   り、そして反応温度が室温である特許請求の範囲第４項
   記載の方法。 １２、加水分解を水性１〜２Ｎの硫酸およびジオキサン
   の２：１〜１：２の混合物の存在下に実施する特許請求
   の範囲第３項記載の方法。 １３、薬剤として使用するための特許請求の範囲第１ま
   たは２項記載の化合物。 １４、抗微生物的に使用する薬物の調製のための特許請
   求の範囲第１または２項記載の化合物の使用。 １５、特許請求の範囲第１または２項記載の化合物と製
   薬学的に許容されうる坦体とを含んでなることを特徴と
   する製剤。