JPS61272663A - 癌関連抗原検出法 - Google Patents
癌関連抗原検出法Info
- Publication number
- JPS61272663A JPS61272663A JP11408785A JP11408785A JPS61272663A JP S61272663 A JPS61272663 A JP S61272663A JP 11408785 A JP11408785 A JP 11408785A JP 11408785 A JP11408785 A JP 11408785A JP S61272663 A JPS61272663 A JP S61272663A
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- Japan
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は癌細胞の癌関連抗原の検出法に係り、特に細胞
の膜表面に発現している抗原、又は細胞内部にある抗原
の検出に好適な方法に関する。
の膜表面に発現している抗原、又は細胞内部にある抗原
の検出に好適な方法に関する。
「腫瘍マーカー」に記載されているように１からだの科
学Ｊ Ｈａ ｉ−００（１９８１）における各種の癌の
診断において、癌関連抗原の検出など免疫学的な手法が
検討されている。特に、大腸癌ではカルチノ・エンブリ
オニック・アンティジエン（ｃａｒｃｊｎｏ ｅｍｂｒ
ｙｏｎｉｃ ａｎｔｊｇｅｎ以下ＣＥＡと略）、カルボ
ハイドレイト・アンディジエン１９−９（ｃａｒｂｏｈ
ｙｄｒａｔｅ ａｎｔｊｇｅｎ １９−９ 、以下ＣＡ
１９−９と略）、ティッシュ・ポリペプチド アンティ
ジエン（ｔｉｓｓｕｅ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ａｎ
ｔｉｇｅｎ）等、膵癌ではＣＥＡ、バイフレアティック
・オンコフイタル アンティジエン（ｐａｎｃｒｅａｔ
ｊｃ ｏｎｃｏｆｅｌ；ａｌａｎｔｊｇｅｎ）、ＣＡ１
．９−９等、肝細胞癌ではα−フェトプロティン（α−
ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ） 、胃癌ではＣＥＡ等が癌
関連抗原としてとらえられており、現在、血液中のこれ
らの抗原の濃度が、癌診断の指標となっている。これら
の抗原は癌細胞内で産生されており、血液中に遊離する
量は癌組織の大きさに依存している。そのため、血液中
の抗原濃度が」二昇したところでこれを測定しても細胞
塊の小さな早期癌を検出することは困難である。
学Ｊ Ｈａ ｉ−００（１９８１）における各種の癌の
診断において、癌関連抗原の検出など免疫学的な手法が
検討されている。特に、大腸癌ではカルチノ・エンブリ
オニック・アンティジエン（ｃａｒｃｊｎｏ ｅｍｂｒ
ｙｏｎｉｃ ａｎｔｊｇｅｎ以下ＣＥＡと略）、カルボ
ハイドレイト・アンディジエン１９−９（ｃａｒｂｏｈ
ｙｄｒａｔｅ ａｎｔｊｇｅｎ １９−９ 、以下ＣＡ
１９−９と略）、ティッシュ・ポリペプチド アンティ
ジエン（ｔｉｓｓｕｅ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ａｎ
ｔｉｇｅｎ）等、膵癌ではＣＥＡ、バイフレアティック
・オンコフイタル アンティジエン（ｐａｎｃｒｅａｔ
ｊｃ ｏｎｃｏｆｅｌ；ａｌａｎｔｊｇｅｎ）、ＣＡ１
．９−９等、肝細胞癌ではα−フェトプロティン（α−
ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ ） 、胃癌ではＣＥＡ等が癌
関連抗原としてとらえられており、現在、血液中のこれ
らの抗原の濃度が、癌診断の指標となっている。これら
の抗原は癌細胞内で産生されており、血液中に遊離する
量は癌組織の大きさに依存している。そのため、血液中
の抗原濃度が」二昇したところでこれを測定しても細胞
塊の小さな早期癌を検出することは困難である。
また細胞に結合している抗原を検出する方法として、細
胞表面抗原を蛍光標識した抗体で染色し、フローサイト
メータにより検出する方法がある（太田、野村編［フロ
ーサイ１ヘメ１へり一手技と実際」）。この方法では細
胞表面の抗原のみを検出しており、細胞内部の抗原は検
出できない。
胞表面抗原を蛍光標識した抗体で染色し、フローサイト
メータにより検出する方法がある（太田、野村編［フロ
ーサイ１ヘメ１へり一手技と実際」）。この方法では細
胞表面の抗原のみを検出しており、細胞内部の抗原は検
出できない。
そこで癌細胞の産生ずる癌関連抗原を感度よく検出でき
る方法が望まれている。
る方法が望まれている。
本発明の目的は、癌細胞の産生ずる癌関連抗原を効率よ
く定量的に測定する方法を提供することにある。
く定量的に測定する方法を提供することにある。
癌細胞内で産生される抗原は、細胞外に分泌されるが、
当然、細胞膜上及び細胞内部にも存在している。一般に
、早期癌では血液中に遊離する抗原の量は非常に少ない
。また抗原によっては、細胞内において産生されるが、
細胞外には分泌しない癌細胞の存在も指摘されている。
当然、細胞膜上及び細胞内部にも存在している。一般に
、早期癌では血液中に遊離する抗原の量は非常に少ない
。また抗原によっては、細胞内において産生されるが、
細胞外には分泌しない癌細胞の存在も指摘されている。
したがって、細胞外に分泌された抗原よりも、細胞膜」
二、及び／又は細胞内部に存在する抗原の量を検出した
方が癌の早期発見にとって有利である。
二、及び／又は細胞内部に存在する抗原の量を検出した
方が癌の早期発見にとって有利である。
一般に抗体は細胞内部に侵入しないため、細胞内部を存
在する抗原をそのまま検出することは困難である。しか
し、細胞を破砕することにより、膜表面及び／又は細胞
内部の癌関連抗原を遊離させれば抗原抗体反応によりこ
れを容易に検出することができる。
在する抗原をそのまま検出することは困難である。しか
し、細胞を破砕することにより、膜表面及び／又は細胞
内部の癌関連抗原を遊離させれば抗原抗体反応によりこ
れを容易に検出することができる。
本発明の実施例として膵癌をとり上げ、その癌関連抗原
であるＣＥＡの定量検出法について説明する。
であるＣＥＡの定量検出法について説明する。
実施例１
第１図は、試料となる細胞の調製手段の概略図である。
まず、体内から切り出した膵臓組織塊１をハンクス液（
ｃ Ｍ Ｆ −ｔｈａｎｋｓ ）で洗浄する。この組織
塊１をシャーレ２に移し、メスまたはハサミを用いて十
分に細切する（第１図（１）））。この細切した組織片
３をディスパーザ又はトリジン（酵素）液５をいれたフ
ラスコ４に移し、３７℃で一定時間振盪する（第１図（
Ｃ））。その後遠心分離又はろ過により酵素液５咎除き
細胞の浮遊液６を得る（第１図（ｄ））。
ｃ Ｍ Ｆ −ｔｈａｎｋｓ ）で洗浄する。この組織
塊１をシャーレ２に移し、メスまたはハサミを用いて十
分に細切する（第１図（１）））。この細切した組織片
３をディスパーザ又はトリジン（酵素）液５をいれたフ
ラスコ４に移し、３７℃で一定時間振盪する（第１図（
Ｃ））。その後遠心分離又はろ過により酵素液５咎除き
細胞の浮遊液６を得る（第１図（ｄ））。
第２図は、細胞に結合している抗原の定曖測定法を示す
模式図である。細胞が癌化していると、癌細胞７の膜表
面には抗原ＣＥ Ａ ８ ａが存在する。
模式図である。細胞が癌化していると、癌細胞７の膜表
面には抗原ＣＥ Ａ ８ ａが存在する。
また、細胞内にも抗原８ｂが産生されている。細胞の浮
遊液６にＣＥ Ａ ８ ａと特異的に反応する抗ＣＥＡ
抗体（ウサギ）９を加えて膜−にの全てのＣＥＡと抗原
抗体反応をおこさせる（第２図（ａ））。
遊液６にＣＥ Ａ ８ ａと特異的に反応する抗ＣＥＡ
抗体（ウサギ）９を加えて膜−にの全てのＣＥＡと抗原
抗体反応をおこさせる（第２図（ａ））。
この抗ＣＥＡ抗体９はフルオレツセインイソチオシアネ
ート（ＦＩＴＣ） １０で標識しておく。次に、遠心分
離又はろ過により未反応のＦＴＴＣ−抗ＣＥＡ抗体を除
く（第２図（ｂ））。膜に結合しているｃＥＡ （８ａ
）を可溶化させるため、細胞７をブレンダーを用いて破
砕し、さらに抗原部をＮＰ−４０などの非イオン性界面
活性剤の０．５ ％液により溶解させる（第２図（Ｃ）
）。この溶液をＦＴＴＣ−抗ＣＥＡ抗体と特異的に反応
する抗体、例えば、抗つサギＩｇＧ抗体（ヤギ）１１を
結合した膜などの固相１２−１−を通らせることにより
ＦＩＴＣ−抗ＣＥＡ抗体−ＣＥＡ複合体を固定する（第
２図（ｄ））。このとき固相は、ＦＴＴＣにより蛍光標
識されたと同じことになり、この同相を取り出し、蛍光
測定することにより、膵組織塊１の膜表面の抗原量を定
量することができる。例えば、４８８ｎｍのＡｒレーザ
光を同相に照射し、５２０〜５４０ｎｍの蛍光強度を測
定する。この蛍光強度を、あらかじめ校正しておいた蛍
光強度−抗原量の関係と照らし合わせ、抗原量を定量す
ることができる。
ート（ＦＩＴＣ） １０で標識しておく。次に、遠心分
離又はろ過により未反応のＦＴＴＣ−抗ＣＥＡ抗体を除
く（第２図（ｂ））。膜に結合しているｃＥＡ （８ａ
）を可溶化させるため、細胞７をブレンダーを用いて破
砕し、さらに抗原部をＮＰ−４０などの非イオン性界面
活性剤の０．５ ％液により溶解させる（第２図（Ｃ）
）。この溶液をＦＴＴＣ−抗ＣＥＡ抗体と特異的に反応
する抗体、例えば、抗つサギＩｇＧ抗体（ヤギ）１１を
結合した膜などの固相１２−１−を通らせることにより
ＦＩＴＣ−抗ＣＥＡ抗体−ＣＥＡ複合体を固定する（第
２図（ｄ））。このとき固相は、ＦＴＴＣにより蛍光標
識されたと同じことになり、この同相を取り出し、蛍光
測定することにより、膵組織塊１の膜表面の抗原量を定
量することができる。例えば、４８８ｎｍのＡｒレーザ
光を同相に照射し、５２０〜５４０ｎｍの蛍光強度を測
定する。この蛍光強度を、あらかじめ校正しておいた蛍
光強度−抗原量の関係と照らし合わせ、抗原量を定量す
ることができる。
実施例２
実施例１の第２図（ａ）では抗原抗体反応は細胞表面の
抗原８ａに対してのみ起こり、細胞内に存在する抗原８
ｂには作用していない。そのため、第２図（ｄ）では、
細胞内部にあった抗原８ｂは同相に固定されず、全て−
Ｌ清み液中に溶解している。
抗原８ａに対してのみ起こり、細胞内に存在する抗原８
ｂには作用していない。そのため、第２図（ｄ）では、
細胞内部にあった抗原８ｂは同相に固定されず、全て−
Ｌ清み液中に溶解している。
そこで、この」二清み液を採取し液中の抗原８ｂを測定
すると、細胞内部にあった抗原８ｂの量を定量すること
ができる。抗原８ｂが膜表面の抗原８ａと同じＣＥＡの
ときを例にして説明する。第３図及び第４図は抗原ＣＥ
Ａ８ｂの定敏測定法を示す模式図である。第３図では、
−に清み液に第２図と同じように、ＦＴＴＣ標識した抗
ＣＥＡ抗体を加えて抗原抗体反応を引き起こす。次にＣ
Ｅ Ａ ８ ｂのみを固定するために、ＣＥ Ａと特異
的に反応する抗ＣＥＡ抗体（ヤギ）を結合した固相１２
−［−を通過させる。このようにしてＣＥＡ８ ｂを固
相上に固定する。第７３図とは逆に第４図のように、始
めにＣＥ Ａ ８ ｂを固相１２に固定し、次にｌ／１
１’Ｃ−抗Ｃｌ（Ａ抗体と抗原抗体反応を起こさせても
同じである。抗原の定置法は実施例１の場合と同じであ
る。
すると、細胞内部にあった抗原８ｂの量を定量すること
ができる。抗原８ｂが膜表面の抗原８ａと同じＣＥＡの
ときを例にして説明する。第３図及び第４図は抗原ＣＥ
Ａ８ｂの定敏測定法を示す模式図である。第３図では、
−に清み液に第２図と同じように、ＦＴＴＣ標識した抗
ＣＥＡ抗体を加えて抗原抗体反応を引き起こす。次にＣ
Ｅ Ａ ８ ｂのみを固定するために、ＣＥ Ａと特異
的に反応する抗ＣＥＡ抗体（ヤギ）を結合した固相１２
−［−を通過させる。このようにしてＣＥＡ８ ｂを固
相上に固定する。第７３図とは逆に第４図のように、始
めにＣＥ Ａ ８ ｂを固相１２に固定し、次にｌ／１
１’Ｃ−抗Ｃｌ（Ａ抗体と抗原抗体反応を起こさせても
同じである。抗原の定置法は実施例１の場合と同じであ
る。
実施例３
実施例１及び２では抗原ＣＥＡを細胞膜−Ｌに発見して
いるＣ ＥΔ８ａ量と細胞内部に存在するＣＥＡＢｂ量
とに分けて定量する方法について説明した。細胞の膜−
ヒと内部のＣＥＡを分けることなくまとめて検出する場
合には、癌組織片３をブレンダー及び０．５ ％ＮＰ
−４０液を用いて破砕し、ＣＥＡを溶解させる。この後
、実施例２と同じようにしてＣＩ＝： Ａを定量するこ
とができる。
いるＣ ＥΔ８ａ量と細胞内部に存在するＣＥＡＢｂ量
とに分けて定量する方法について説明した。細胞の膜−
ヒと内部のＣＥＡを分けることなくまとめて検出する場
合には、癌組織片３をブレンダー及び０．５ ％ＮＰ
−４０液を用いて破砕し、ＣＥＡを溶解させる。この後
、実施例２と同じようにしてＣＩ＝： Ａを定量するこ
とができる。
実施例４
実施例１，２．３では細胞膜」二の抗原と内部の抗原と
が同じものである場合を示している。ところで細胞が癌
化することにより膜表面の糖鎖などが変化し、癌特異抗
原となることもある。さらに、１つの癌細胞が産生する
抗原は１種類たけではなく多種類存在する。例えば膵鎗
ではＣＥ ＡとＣＡ１９−９などを産生ずる。そのため
検出すべき膜−Ｌの抗原と細胞内部の抗原とは必すしも
一致しない。しかし、この場合でも、それぞれに特異的
に反応する抗体を作用させることにより、実施例１及び
２ど回し、ように、定量することができる。
が同じものである場合を示している。ところで細胞が癌
化することにより膜表面の糖鎖などが変化し、癌特異抗
原となることもある。さらに、１つの癌細胞が産生する
抗原は１種類たけではなく多種類存在する。例えば膵鎗
ではＣＥ ＡとＣＡ１９−９などを産生ずる。そのため
検出すべき膜−Ｌの抗原と細胞内部の抗原とは必すしも
一致しない。しかし、この場合でも、それぞれに特異的
に反応する抗体を作用させることにより、実施例１及び
２ど回し、ように、定量することができる。
本実施例（１〜４）では、細胞を破砕し、抗原を遊離さ
せてから定量測定を行っている。抗原を遊離させてから
後は、血液中の抗原の定量測定とほぼ同じ過程となって
いる。そのため、従来の血液中の抗原定置装置に、細胞
の表面及び内部の抗原の検出系を非常に簡単にしかも安
価に組み込むことができるという効果がある。またこの
ことにより血液中の抗原の定置、細胞の抗〃にの定量を
１台の装麿で行うことが可能となる。
せてから定量測定を行っている。抗原を遊離させてから
後は、血液中の抗原の定量測定とほぼ同じ過程となって
いる。そのため、従来の血液中の抗原定置装置に、細胞
の表面及び内部の抗原の検出系を非常に簡単にしかも安
価に組み込むことができるという効果がある。またこの
ことにより血液中の抗原の定置、細胞の抗〃にの定量を
１台の装麿で行うことが可能となる。
本実施例によれば、癌細胞の膜」二の抗原と内部の抗原
とを独立に定量することができる。また、細胞内部にし
か分泌しない（細胞外に分泌しない）抗原をも効率よく
計測することができる。さらに抗原部を溶解して測定す
るため、細胞が有色細胞であったり、内部に蛍光体をも
っている細胞であっても関係なく抗原量を定量すること
ができる。
とを独立に定量することができる。また、細胞内部にし
か分泌しない（細胞外に分泌しない）抗原をも効率よく
計測することができる。さらに抗原部を溶解して測定す
るため、細胞が有色細胞であったり、内部に蛍光体をも
っている細胞であっても関係なく抗原量を定量すること
ができる。
また試薬との反応は全て抗原抗体反応という特異的な反
応であるため、原理的に検出感度が高いという効果があ
る。
応であるため、原理的に検出感度が高いという効果があ
る。
本実施例では膵癌関連検査について説明したが、大腸癌
肝細胞癌、胃癌・肺癌等でも同様に行うことができる。
肝細胞癌、胃癌・肺癌等でも同様に行うことができる。
また悪性リンパ腫のように細胞が始めから浮遊細胞であ
る場合は、第１図のような調整は不必要である。
る場合は、第１図のような調整は不必要である。
本発明によれば、細胞に結合している癌関連抗原を効率
よく直接定量できるので、抗原産生量の少ない早期癌で
も感度よく検出することができる。
よく直接定量できるので、抗原産生量の少ない早期癌で
も感度よく検出することができる。
また、細胞の膜トの抗原のみ、または細胞内部の抗原の
みを定量することができるので、ガン診断に際してより
多くの情報をｌｊえることができる効果がある。さらに
細胞の外部に抗原を放出しない癌細胞の抗原を定量でき
るので、診断の有用性を広げる効果がある。
みを定量することができるので、ガン診断に際してより
多くの情報をｌｊえることができる効果がある。さらに
細胞の外部に抗原を放出しない癌細胞の抗原を定量でき
るので、診断の有用性を広げる効果がある。
第１図は癌細胞の調製手順の概略図、第２図は細胞膜」
ユの抗原の定量測定法を示す模式図、第３図は細胞内部
の抗原の定板測定Ｙ人を示す模式図、第４図は細胞内部
の抗原の定量測定法を示す模式】・・・組識塊、２・・
・シャーレ、コ３・・組織片、４・・フラスコ、５・・
・酵素液、６・・・細胞浮遊液、７・・・癌細胞、８ａ
・・・細胞膜りの抗原（ＣＥＡ）、８ｂ・・細胞内部の
抗原（ＣＥＡ）、９・・・抗ＣＥＡ抗体、冨１図 （Ｃ） ′ｆＪ２図 ￥ ご （えっ 冨・ ｌン （ｂ、 ）
ユの抗原の定量測定法を示す模式図、第３図は細胞内部
の抗原の定板測定Ｙ人を示す模式図、第４図は細胞内部
の抗原の定量測定法を示す模式】・・・組識塊、２・・
・シャーレ、コ３・・組織片、４・・フラスコ、５・・
・酵素液、６・・・細胞浮遊液、７・・・癌細胞、８ａ
・・・細胞膜りの抗原（ＣＥＡ）、８ｂ・・細胞内部の
抗原（ＣＥＡ）、９・・・抗ＣＥＡ抗体、冨１図 （Ｃ） ′ｆＪ２図 ￥ ご （えっ 冨・ ｌン （ｂ、 ）
Claims (1)
- １、細胞に結合している癌関連抗原を抗原抗体反応を用
いて検出する方法において、該細胞を破砕することによ
つて該細胞の膜表面の抗原及び／または該細胞内部の抗
原を遊離させ、該遊離した抗原を検出することを特徴と
する癌関連抗原検出法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11408785A JPS61272663A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | 癌関連抗原検出法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11408785A JPS61272663A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | 癌関連抗原検出法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61272663A true JPS61272663A (ja) | 1986-12-02 |
Family
ID=14628761
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11408785A Pending JPS61272663A (ja) | 1985-05-29 | 1985-05-29 | 癌関連抗原検出法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61272663A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10684254B2 (en) | 2016-02-08 | 2020-06-16 | Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. | Analyte detection by dielectrophoresis |
-
1985
- 1985-05-29 JP JP11408785A patent/JPS61272663A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10684254B2 (en) | 2016-02-08 | 2020-06-16 | Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. | Analyte detection by dielectrophoresis |
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