JPS60252497A - マクロファージ活性化作用をもつムラミルペプチド親油性誘導体およびこれを含む薬剤組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はマクロファージ活性化作用、特に腫瘍破壊性を
有するムラミルペプチド親油性誘導体に係る。本発明は
よシ特定的にはこれらムラミルペプチド親油性誘導体を
含む組成物、特にこの種の誘導体を含むリポソームをベ
ースとするか又はこれらリポソームを形成し得る組成を
もつ組成物に係る。

マクロファージの活性化はイ・ムノモジュレータの抗腫
瘍活性の主要メカニズムの１つである。即ち活性化され
たマクロファージは同系１ｉｉ　ｍ細胞をｉｎ　ｖｉｔ
ｒｏだけでな（ｉｎ　ｖｉｖｏでも破馳できる。

一方、ムラミルペプチドはマクロファージのｉｎ　ｖｉ
ｔｒｏでの抗腫瘍活性を増大させ得ることが判明した。

但しこれらの物質を食塩密液の形で用いるｉｎ　ｖｉｖ
ｏの場合には事情が異なる。恐らく、この不活性の原因
は、多分、流体の飲作用のためにムラミルペプチドのマ
クロファージ内への浸入が緩慢になることと、これらム
ラミルペプチドが腎臓によって生体から急速に排出され
ることとにある。これら２つの現象が重なるために食塩
溶液の形で注入されたムラミルペプチドはマクロファー
ジ内でそれらを活性化する程十分な濃度には達し得ない
と推察される。

これらの欠点を解消する方法はこれまでにも多数提案さ
れてきた。特に、ムラミルペプチドをリポソーム内に封
入するとそれだけでｉｎ　ｖｉｔｒｏでもｉｎ　ｖｉｖ
ｏでもかなシの細胞毒活性がマクロファージに与えられ
ることが判明した。フイドラ−（１’ＩＤＬＢＲ）等は
この方法を更に発展させ、７対３の割合でホスファチジ
ルコリン（ＰＯ）とホスファチジルセリン（ＰＳ）とを
含み且つＭＤＰをも含有する多重ラメラリポソームを使
用した。その結果このイムノモジュレータの標的を循環
単球に向けることに成功した。これら単球は細胞内に取
込んだＭＤＰの作用によシ活性化マクロファージに分化
する（キャンサーリサーチ（０ａｎｃ、　Ｒｅｓ、）　
、４２゜１６１−１６７（１９８２年））。

前記リポソームの組成及び性質（多重ラメラ）はこれら
リポソームを特に肺循環毛細血管に向けるのに適してい
る。これらリポソームを取入れた単球は次いで肺内を移
動し、そこで活性化マクロファージに分化する。これら
の活性化されたマクロファージはマウスのメラノー””
ｒ　３３１６の如き肺内性腫瘍の転移部を破壊する能力
がある。

しかし乍ら可溶性ムラミルペプチドの使用には多くの問
題が伴う。例えば成る種のリボンーノ、（特に標的を肺
循環単球に向けるのに適した組成をもつもの）では「洩
れ」が生じる、即ち封入溶質が失われる。この洩れはＰ
　Ｏ／Ｐ　Ｓ　！Ｊボソームを血清の存在下におくと特
に顕著になる。このような現象は勿論リポソームの保存
に有害である。

この欠点は多重ラメラリポソームを使用すると多少解消
される。即ち、リポソームが食作用で取入れられる前に
は最も内側のインタラメラ種が前記洩れを抑止又は制限
し得ると考えられる。この場合はしかし乍ら標的設定の
特異性が失われる。

実際、単うメラリポソーム即ち僅かの薄膜からなるリポ
ソームを使用する方が標的を肺以外の臓器に設定する上
で有利でちる（ジー・ボス）　（Ｇ。

ＰＯ８ＴＢ　）他、キャンサーリサーチ、４２．１４１
２−１４２２（１９８２年））。

この問題を解消すべくフイドラー等は既にＮ−アセチル
ームラミルーＬ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＭＤ
Ｐ）又はＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−
イソグルタミル−Ｌ−アラニン（ＭＴＰ）　の親油性誘
導体、例えばＭＴＰ−ホスファチジルエタノールアミン
を使用することを提唱していた。

また、マクロファージの細胞毒活性を刺激すべ（ＭＤＰ
又はＭＴＰをホスファチジルエタノールアミン又はステ
アリン酸分子に結合することも提案された。しかし乍ら
この稲の誘導体を含むリポソームの調製は容易ではない
。％に、これらムラミルペプチド誘導体を含む薄い脂質
薄膜の形成と、従来技術によるこれら薄い脂質薄膜のリ
ポソームへの変換は必ずし２も再現可能な結果をもたら
すとは限らず、得られたリポソームも長期保存は殆んど
不可能である。

更に、成る種の親油基を既に含んでいる成る種のムラミ
ルペプチド誘導体は′マクロファージニ対して毒性及び
／又は不安定化作用を示し得ることが判明した。、 本発明の目的は前述の諸問題をよシ効果的に解決するこ
と、特定的には新規のＮ目〕ｐ銹導体を提供することに
ちる。これら新規誘導体重マクロファージ活性化能力、
特にマクロファージのｉｎ　ｖｉｖ。

での肺瘍破象活性を促進させる能力が大きい。これは特
にこれら誘導体をリポソームの形状で投与した時に顕著
である。

本発明はまた、それを含有するリポソームの製造に主と
して使用し得るムラミルポリペプチド親油性誘導体（で
も係る。この種のリポソームはマクロファージを刺激す
る性質が極めて強く、且つこれらリポソーム（又はリポ
ソームへの変換が容易な組成物）の保存の可能性からも
、マクロファージに対する不安定化活性もしくは毒性の
欠如という点からも、極めて安定しているという特徴を
有する。

本発明のムラミルペプチド誘導体は基本的に、各原子か
ら８〜１００個好ましくは１４〜２４個の炭素原子を含
む親油類が分枝されている２つの隣接し合う原子を有す
る基を、必要であれば結合手を介して、ムラミルペプチ
ドと結合（ｃｏｎｊｕｇａｌｓｏｎ）又はカップリング
（ｃｏｕｐ！ａｇｅ　）させることにより得られる。

前記の隣接し合う２原子は主として次の構造−ｃ−ｃ−
；　−ｃ−Ｎ−ニーＮ−０−の１つに属する。

ＩＩ　ＩＩ　＋１ 本発明の好ましい化合物は次式 ％式％ で示されることを特徴とする。

前記式中置換基馬、Ｒａ、　Ｘ　、　Ｙ　、　Ａ及びＢ
は下記の意味を表わす。

一馬はＨ又はＯＨ，である。

一＆は−ＭＨｚ基、−ＯＨ基又は−〇Ｗ基であシ、Ｗは
１〜１０個の炭素原子を含む炭化水素基を表わす。

−ｘはアラニル、バリル、インロイシル、ノルロイシル
、ロイシル、セリル、トレオニル、フロリル、グルタミ
ニル、アスパラギニル、メチオニル、ＭＪフ）ファニル
、フェニルアラニル。

チロシル、グリシルを含む基のアミノアシル残基である
。

−Ｙは馬と同じ意味を表わすか又は親油基−ＯＣＨ，−
０ＨＱ（馬）ａＨｔｏ（Ｒ，）を表わし馬及び■−は互
に等しいか又は異々９８〜１００個の炭素原子を含むア
シル基を表わす。

−２は烏と同じ意味を表わすか又は親油基−０００ＨＯ
（Ｒａ）ＯＪ（２０（瓜）を表わし、烏及び瓜は互に等
しいか又は異な９８〜１００個の炭素原子を含むアシル
基を表わす。但し２つの基Ｘ及びＹの少なくとも一方は
常に対応親油基であると理解されたい。

−Ａ及びＢは直接結合又は互に等しいもしくは異なる１
〜３個のアミノアシル残基を夫々含む互に等しいもしく
は異なる基を表わし、又は−１州−（ＣＨ，）−００−
基を表わす。ｐの値は２〜１０である。

本発明の好ましい化合物では基Ｘが左旋性アミノ酸残基
である（勿論アミノアシＡ・残基がグリシル以外の場合
）。特に好ましい基ＸはＬ−アラニル、Ｌ−セリル、Ｌ
−バリル、Ｌ−ロイシル、Ｌ−インロイシル、Ｌ−１−
レオニル又はグリシルである。また馬はアルキル−オキ
シ基であるのが好ましい。

基Ａ及びＢは直接結合を表わすと有利である。

基Ｙがグルタミル基のガンマ−カルボキシルに直接結合
している場合、及び基２が糖基の６位の酸素原子に直接
結合している場合はこれに当たる。

Ａ及びＢは前述のＸの意味を表わす１つ以上のアミノア
シル残基、好ましくはＬ−アラニル及び／又はＬ−リシ
ルであってもよい。

勿論、前述の好址しい基は１つ以上を任意に組合わせて
使用し得る。これらの基は２つの親油鎖を担持する基に
よって修飾されたムラミルペプチドの基本構造と個々に
組合わせることもできる。

但し特に好ましい化合物類は、 一基２が前述の如き対応親油基からなり、鳥が炭素原子
を１〜１０個、よシ特定的には４個含むアルキル−オキ
シ基、特にｎ−ブチル−オキシであシ、 一へが直接結合を表わし、且つ −ＹがＮＨ，基である 化合物である。

この種の化合物は発熱性を殆んど有さないという点で特
に優れている。

特に好ましい親油基Ｒ１及び曳はバルミトイル基である
。

本発明はよυ特定的には本発明の化合物を１種以上含む
リポソーム組成物又は容易にリポソームに変換し得る組
成物に係る。実際、本発明の化合物をリポソームに合体
（１ｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　）するとマクロファー
ジに対するリポソームの刺激作用がかなシ増大する。

グリセリル基の２つの隣接炭素原子上に２つの親油基を
存在させるとムラミルペプチドがリポソームの脂質膜の
上又は中に固定され、且つリポソーム自体を安定させる
と共にこれらと接触するマクロファージに対する青性又
は不安化作用を存在させないという効果が基本的に得ら
れる。少なくともｉｎ　ｖｉｔｒｏ及びｉｎ　ｖｒｖｏ
での実験ではこのような（Ｉａ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒ
ｅ　ｄｅ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　）　Ｔ　ｙｙｌが３
７℃を越えるような脂質を使用する・Ｓ・と７カ＼゛て
゛さる。この転移温度は「固体結晶」状態と「液体結晶
」状態との間の転移が生じる時の平均温度に係シ、この
場合、前記脂質が特にリポソーム膜内でそれよシ低い温
度及び高い温度で存在し得る。Ｔｍが３７℃を越えるよ
うなリポソームを使用すればマクロファージのみへの標
的設定が促進される。このような理由からリン脂質は鎖
内に１４〜３０．特に１６〜２４個の炭素原子を含む脂
肪酸で形成するのが好ましい。

リポソーム（又はリポソームの形成に適した組成物）の
形成に使用される脂質に関してはこの分〜２０個の炭素
原子を含む脂肪酸誘導体）、ホスジン酸の如きリン脂質
を用いる組成物である。こと特に有利である。有利には
これらリン脂質をＤＳＰＣ又はホスファチジルコリン（
ＰＣ）７容に対し１〜１０好ましくは３容のｐＢの割合
で含む混合物によリポソーム中基成する。本発明の誘導
体を含むリポソームは単ラメラ又は多重ラメラの形状で
かなりの生物学的活性を示す。リポソーム粒子の粒径ｉ
ｊｏ、１ミクロン以上、例えば１〜１０ミクロンが好ま
しい。

本発明の化合物はリポソーム中で使用するか、又はこれ
ら組成物を非経口投与する場合には、これらリポソーム
を生理学的に許容し得る水溶液、好ましくは無菌且つ等
張の水浴液に懸濁させたものとして用いるのが好ましい
。

リポソーム懸濁液は媒質１麓当り４〜４００μＭの脂質
と２０〜２００μりの本発明ムラミルペプチド親油性誘
導体とを含むと有利である。

よシ特定的には本発明は凍結乾燥状態の、従って完全に
無水状態のムラミルペプチド親油性誘導体と合体するリ
ポソーム組成物にも係る。このようなリボンーム製剤を
凍結乾燥するとリポソーム懸濁液の即時的形成後にマク
ロファージ刺激活性が大幅に向上することが判明した。

これら凍結乾燥無水組成物は活性損失を伴うととなく数
ケ月間保存できる。

本発明の生成物は「ムラミン構造」と称する次の構造を
共通して有するムラミン酸、その類似物質又は誘導体か
ら製造し得る。

式中Ｂ７．は前述の意味を表わす。

本発明の化合物の好ましい製法はペプチド合成分野で従
来より使用されている方法によシ式Ｘ−Ｄ−Ｇｌｕ　−
（Ａ−Ｙ　）−ｘＣ式中Ｘ　ｒ　Ａ及びＹは前述の意味
を表わす〕のペプチド鎖をムラミン構造に固定させ、必
要であれば基−Ｂ−Ｚをムラミン構造の位置６−０−に
固定させることからなる。

この場合反応し合う物質によって担持され且つこの反応
に介入しない官能基は必要に応じ予め保護しておく。保
護された官能基は本発明の化合物の製法の最終段階で最
後には脱保護される。先行技術の文献、特に後述の仏画
特許出願に記載の方法も本発明の化合物の製造に使用し
得る６置換馬は前記録の合成の前にグルタミル基土での
が好ましい。

ペプチドの合成は従来の方法によって行なう。

−例として、活性化エステル法、混合無水物法又はカル
ボジイミドタイプの化合物、例えばＮ、Ｎ’　−ジシク
ロへキシルカルボジイミドもしくは他の等価カルボジイ
ミドを使用する方法の如きカルボキシル活性化方法を選
択し得る。従来のペプチド合成法の一例はジエーＯエッ
チ・ジョーンズ（Ｊ、　Ｈ。

ＪＯＮＢＳ）によシケミストリーアンドインダストリ−
（Ｏｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　）
＋　７２３　（１９７４年）に開示されている。その他
例えば仏国特許出願第７５２９６２４号、第７６０６８
１９号。

第７６０６８２０号、第７６０６８２１号。

第７６２１８８９号、第７７０２６４６号と、レフラン
シエ（ＬＥＦＲ，ＡＮＯＩＥＲ）他の論文（インターナ
ショナル　ジャーナル　ペプチド　プロティン　リサー
チ（Ｉｎｔ、　Ｊ、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎ
　＆ｓ、　）。

１９７７年、乏、２４９及び１９７８年、す。

２８９；並びにＪ、　Ｍｅｄ、　Ｏｈｅｍ、　２５．１
９８２年。

８７）とをも参照し得る。

基烏に対応するエステル化誘導体又はアミド誘導体は公
知の方法で得られる。これに関しては前出の仏画特許出
願、特に第７６０６８２０号、第７６０６８２１号、第
７６２１８８９号及び第７７０２６４６号を参照された
い。

基Ｙを２つの親油鎖を担持するグリセロール基で構成す
べき場合は、グルタミン基又は（人が直接結合を表わさ
ない時は）０末端アミノアシルのガンマ−カルボキシル
基を必要に応じ活性化させたものを、親油酸特に脂肪酸
によりベータ、ガンマ−ジエステル化したグリセロール
によってエステル化する。但し前記グリセロールは遊離
末端ヒドロキシル基を有する。ペプチド鎖のＮ末端基は
通常前記エステル化反応に先立ち例えばｔ−ブチル−オ
キシ−カルボニル（Ｂｏｏ　）基によって保護しておく
。これに関しては仏国特許出願第７８０８０４９号を参
照し得る。この特許出願には別の基を担持するグリセロ
ール基により修飾されたペプチド鎖の製法が開示されて
いる。これらの製法は本発明の化合物の製造に使用し得
る修飾されたペプチド鎖の形成にも使用できる。このよ
うにすればジ置換した親油基を担持するペプチド配列の
合成が可能になる。

このように、対応ムラミルペプチド誘導体の合成はＮ末
端アミン基を予め遊離した後にペプチド鎖（ジ置換した
グリセロール基で修飾したもの又は未修飾のもの）をム
ラミン構造とカップリングさせることによシ全うされる
。このムラミン構造自体は予め保護しておいてよい。こ
の構造は例えばアルファー〇−ベンジル−４，６−０−
ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミン酸で構成し得る。

最終的には保護基除去（例えば加水素分解による）後に
グリコペプチド誘導体が遊離状態で得られる。

その他、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−
グルタミン酸のα−置換した（一般式に従いアミドもし
くはエステルで）誘導体を、非限定的−例として混合無
水物法により予め形成した基Ｈ−Ａ−Ｙと直接結合させ
る方法もある。

基Ｂ−Ｚ−が親油酸特に脂肪酸にょシベータｐガンマー
ジエステル化されたグリセロール基を含むような本発明
の誘導体は従って、糖基の１，４及び６位の保護基を除
去する前に、前記グリコペプチド誘導体とベータ、ガン
マ−ジエステル化シた対応グリセリン醒とを反応させる
ことにょシ製造し得る。

本発明の他の特徴は本発明の好ましい非限定的実施例に
関する以下の説明から明らかにされよう。

実施例１ 次式 で示されるアルファー（Ｎ−アセチルームラミル−ル（
１に １ｉ　９ｍＭ（０，３７ｓｍＭ）のＢｏｏ−Ｌ　−Ａｌ
ａ−Ｄ−イソＧＩｎどｉ　４２ｍ９（０，２ｓ　ｍＭ）
のベータ、ガンマ−ジパルミトイル−５ｎ−グリセロー
ルと１８０ｍ９（０，４０６１Ｍ）のＢＯＰとを１０ｍ
１のＴＨＦ−ＤＭＦ　（１／１　）中に溶解した溶液に
Ｎ−メチルモルホリン０．０５ｒｎｌ（０，４０６ｍＭ
）及びイミダゾール３１〜（０，４５７＋？、Ｍ）を加
える。

室温で週末の間装置した後、生成物をクロロホルム中に
抽出し、次いでシリカａ　ｏ　Ｇ２０９のカラムで精製
する。このシリカカラムはクロロホルムで安定させ、次
いでクロロホルム（ｔｏｏｙ）とクロロホルム−メタノ
ールの５０／１混合液（１００ｍ／）と２５／１混合液
とで順次溶離したものである。ｆｌ）のクロロホルム溶
液を限外済過にかけた後、（Ｉ）をジオキザン溶液から
凍結乾燥によシ回収するニア３＋＋＋９（３３，６％）
。

〔アルファ〕二’：Ｏ’（ｃ：０．５．氷酢酸）。

０．８Ｈ，、Ｎ、Ｏ，ｏ　の分析計算値％：０：６６．
４：Ｈ：１０．３：Ｎ：４．８゜ 測定値：Ｏ：６６．２；Ｈ：１０．２：Ｎ：４．３゜±
二 ５２１■（０，６ｍＭ）の（１）を規定塩酸氷酢酸溶液
１，６−により室温で４５分間処理する。溶媒濃縮後（
ｍｌをその酢酸溶液の凍結乾燥処理によって得、即刻使
用する：４８０■。

カンマ−ジパルミトイル−ｓｎ　−ｆ　’）　七〇　−
＃（Ｉ）　：３７８１ｎ９（０，４７ｙｎＭ　）の＋１
）と、２６０１Ｑ（ｏ、ｓｓｍＭ）のＭｕｒＮＡｃ　（
アルファー〇　−Ｂｚｌ−４，６−０−Ｂｚｉ　）と、
２６５ｍＭ（０，６０５ｍＭ）のＢＯＰと、０．２　ｍ
ｌ　（１，７５ｒｎ　Ｍ　）のＮ−メチルモルホリンと
を８−のクロロホルム−ＤＭＦ（５／２）に溶解する。

３６時間後生成物をクロロホルムで抽出し、シリカカラ
ムで精製する。このシリカカラムはクロロホルム−メタ
ノール（１５／１）混合物で安定させ、次いで、これら
溶媒の（１２／１）混合物で溶離したものである。（１
１はそのクロロホルム溶液を限外濾過にかけた後その酢
酸溶液を凍結乾燥処理することにより得られる：５４５
■（９５チ）。

〔アルファ：］　：＋４０（Ｃ：０．５：氷酢酸）。

０１１６ＨＩ（１８Ｎ４０１６　Ｈ０，５０Ｈ３０００
Ｈの分析計算値％：Ｃ：６６．２；Ｈ：８．８；Ｎ：４
．５゜測定値：０：６６．４；Ｈ：８．７８Ｎ：４．３
゜アルファ（ＭｕｒＮＡｃ　−Ｌ　−Ａ、ｌａ　−Ｄ−
イソＧｉｎ　）＋−ル（■）： ５３５■（０，４４７７１Ｍ）のｆｌ）を氷酢酸３〇−
中に溶解し、パラジウム５％担持木炭５５０■の存在下
で４０時間水素添加処理する。触媒を濾過した後、酢酸
溶液の凍結乾燥処理によって（ＩＶ）を得、クロロホル
ム−メタノール（５／１）混合物によりｉ離したシリカ
のカラムで精製する。ｆｌＶ）のクロロホルム溶液を限
外濾過し、次いで氷酢酸溶液を凍結乾燥処理して（ｍを
回収する：３４８■（７／２％）。

〔アルファ：）　：＋２３．４（ｃ：０．７；氷酢酸）
。

０５４Ｈ９ｇＮ４０１１＋　１．６０Ｈ３０００Ｈの分
析計算値％：Ｃ：６０、２９　：　Ｈ：　９．２３：Ｎ
：４．９２゜測定値％：Ｏ：６０．３．Ｈ：９．２：Ｎ
：５．０゜実施例１ ルミトイルーＬ−り！７セリル）−Ｎ−アセチル−の合
成 ＣＩ−（側御）１番００００Ｈ。

■ ０Ｈｓ（ＯＨｔ）ｔ４００００Ｈ グリセリン酸２２　ｚｍｐ（ｏ、２ｍＭ）Ｋジイソプロ
ピルベンジルイソウレア＋ａａｍ９（２ｍＭ）を加える
。室温で３時間攪拌した後、脱ペルオキシド処理した無
水ＴＩ（Ｆを５１ｎｔ加える。室温で２４時間放置した
後、該溶液を一１５℃に冷却し、炉ｉＫよってジイソプ
ロピルウレアを除去する。（１１はシリカカラムでの精
製後クロロホルムーメタノールー酢酸（１２０／１０／
１）混合物中に回収される：３１６■（８０％）。

（７／Ｌ’７７）”　ニー１　ａ６°（Ｃ：０゜５５ニ
ジｙＦ＃ザン）。

赤外スペクトル：３４１０−３５１０ｃＩＩＬ　（ＯＨ
）：１７３５ｃＩＩＬ　（エステル）。

紫外スペクトル：２５２ｎｍ、２５７ｎｍ、２６２ｎｍ
（ベンジル）。

３１６ｑ（１６ｍＭ）の＋１１を３−の乾燥ピリジン中
に溶解する。０℃で且つアルゴン流を導入しながら、乾
燥ジクロロメタン６−に塩化バルミトイルｔａｓ２ｇ（
４、ｓ　ａ　ｍＭ）を加えた溶液を１５分で添加する。

室温で４時間反応させた後８０ｍの乾燥エーテルと６０
−の凍った０、５ＮＨ，８０，とを順次加える。２０分
攪拌した後有機相を中性声になるまで洗浄し、Ｎａ１８
０４で乾燥し、濾過して濃縮する。（ｌｌはシリカカラ
ムで精製した後ヘキサンー酢酸エチル（８／２）混合物
中に回収する二８３５■（７７，５チ）。

融点（Ｆｃ）　：　３９−４０℃ （７／ｌ／７７：］”　：　−１１，５°（ｃ　：　１
　：＞ｏｏホルム）。

Ｃ□Ｉ（ｒ＊ｏｍの分析計算値チ：Ｏニア４９５：Ｈ：
１　０、７　８゜ 測定値％：０ニア５．２：Ｈ：１０．６゜７５０ｍｐ（
１，１１ｔｎＭ）の（１）を２０艷のＴＨＦ中でＰｄ５
％担持木炭３００ｍＩｉの存在下で水素添加処理する。

３時間後肢溶液を限外濾過し、次いで粉末が得られるま
で濃縮する：　ｓ　２　ｏＴｎ９（８０チ）。

〔アルファ）”ニー６．３５°（ｃ　：　０．４　’、
クロロホルム）。

ＯａｎＨａｓＯｍの分析計算値％：ｃニアｚｔｚ：Ｈ：
１１．４１゜ 測定値％　：　０　：　７　Ｚ　Ｏ：　Ｈ：　１１．５
゜ＤＭＦ３−にＭｕｒＮＡＣ（アルファーＢｚｌ　）　
−Ｌ−人１ａ　−Ｄ−Ｇｉｎ　−０ｎＢｕ　６５８Ｗ（
１，２ｍＭ）？ｍ解した浴液に２　ａ　３■（ｏ、、ｓ
ｍＭ）のｔｌ）、５０■（ｏ、４ｍＭ）の４−ジメチル
−アミノピリジン、６４■（０，４ｍＭ）のＮ−ヒドロ
キシベンゾトリアゾール及び（１５ｍｇ（Ｑ、４　ｃｉ
ｍＭ）のり。

Ｏを加える。乾燥ジクロロメタンを１．５−加えた後、
得られた反応混合物を室温で２４時間攪拌しながら放置
し、次いでクロロホルム１５０＋ｄｔＪＩＩ］見る。有
機相をＨＯＬ　０．５　Ｍ　ｐ　ＮａＨＯＯａＭ及び水
で順次洗浄し、Ｎａ１８０４で乾燥し濃縮する。（ＩＶ
）を先ず無水エタノール中に沈殿させ、次いでシリカカ
ラムで精製する。このシリカカラムはり四ロホルムーメ
タノールー酢酸（１８／１１０．１）混合物、クロロホ
ルム−酢酸（５／１　）混合物及びメタ／　−ルで順次
溶離したものである。（ＩＶ）のクロロホルム溶液を限
外濾過にかけ、濃縮して［ＩＶｌを回収する：３３０１
ｎ９（６９％）。

融点：１５７−１６２℃。

〔アルファ］”：＋４６°（ｃ：ｏ、５：酢酸）。

０６１１ＨＩＩＯＮ４０１６０．５　ＨｓＯの分析計算
値％　：　Ｏ：　６４．３８：Ｈ：９．２３：Ｎ：４．
６２゜ 測定値チ：Ｏ：６４３：Ｈ：９．１　：　Ｎ　：　４．
４゜氷酢酸１５−とメタノール１ｔＲｔとに溶解した１
　２０ｒＩ＋９（０，１？７１Ｍ）のけ）をＰｄ５％担
持木炭１２０１ｖの存在下で２０時間水素添加処理する
。

触媒を濾過した後（ｖ）の氷酢酸溶液を凍結乾燥して（
Ｖ）を回収する：１０７１０９（９６％）。

〔アルファ）”　：　＋　１５．４’（ｃ：０．４　：
氷酢酸）。

０ｓｓＨ＋ｏ＋Ｎ４０＋ｇ　Ｉ　ＣＨ４０００Ｈの分析
計算値％：Ｏ：６１．４１　：Ｈ：９．２８　：Ｎ：４
．７７゜測定値チ：０：６１．５：Ｈ：９．０；Ｎ：４
．８゜（以下余白） 実施倒用 ＭＤＰ−ｓｎ　ＧＤＰの製造忙使用したと同様の方法で
合成する。

得られた生成物は次の分析特性を示す；〔α］　Ｄ　’
　＋３１．５’　（ｃ　＝０．５　、氷酢酸）Ｃ３Ａ　
Ｈ９！ｌ　Ｎ４０１３・Ｉ　ＣＨｓＣＯＯＨ（１１０３
５４６）の元素分析計算値％：　Ｃ，６０，９５：　Ｈ
，９，３１：　Ｎ、　５．０７測定値％：　Ｃ，６０，
６８：　Ｈ，９，２２：　Ｎ、　５．１７実施例■ 合成法は下記に詳述する。得られた生成物は次の分析特
性を示す： 〔α〕甘甘子＋１５．６℃ｃ＝０．３、氷酢酸）Ｃｓｙ
ＨｒｏｓＮｓＯ＋ｓ　・２　ＣＨｓＣＯＯＨ（１２３４
５９）の元素分析計算値％：　Ｃ，５９，３４：　Ｈ，
９，０６：　Ｎ、　５．６７測定値％：　Ｃ，５９，４
６：　Ｈ，９，０４：　Ｎ、　５．９９実施例■ 〔α〕甘甘子＋２５．７℃ｃ＝０．３５、氷酢酸）Ｃ１
１７ＨＩ（１３Ｎｌ１０１６　・１．５ＣＨｓＣＯＯＨ
（１２０４５６）の元素分析計算値チ：　Ｃ，５９，８
２：　Ｈ，９，１２：　Ｎ、　５．８１測定値％：　Ｃ
，５９，７５：　Ｈ，９，０５：　Ｎ、　６．０６実施
例■及び■の誘導体は次のようにして合成する： アルファーＢＯＣ−Ｌ−ＡＡ！ａ−Ｄ−インＧ１ｎ−ガ
ンマージパルミトイルー８ｎ−グリセロールの製造につ
いて前述した条件下で、カップリンク”試薬の対（ＢＯ
Ｐ−イミダゾール）を用いてエステル化することにより
ＢＯＣ−Ｌ　−Ａｌａ−ガンマ−ジノｑルミトイルー１
ｉｎ−グリ七ロールを製造する。

翔７ζ得られた生成物を結合させる。このようにして、
クロロホルム−メタノール（５／１　）で溶離したシリ
カカラムで精製し、クロロホルム−メタノール（１／１
　）で溶離したＬＨ２０カラムで再度精製した後、ＭＤ
Ｐ−Ｌ−Ａｌａ−ＧＤＰ又はＭＤＰ（ＤＤ）−Ｌ　−Ａ
Ａ！ａ　−ＧＤＰが得られる。

実施例■ （６−０−ＧＤＰ−７ミ／カブｏイ＃−ＭＤＰＧ−Ｏｎ
Ｂｕ）　（Ｄ合成リポソームの製造ニ アコ００モル比）を無水クロロホルム溶液中でＭＤＰ−
ＧＤＰと混合する。この溶液を底の丸いガラスフラスコ
内に入れて券、回転攪拌しながら蒸発させる。フラスコ
の内側表面に形成された無水脂質膜をリン酸で緩衝した
塩化ナトリウム溶液ＰＢＳと共に１０分間２０℃に冷却
する。この懸濁液をボルテクス（ＶＯＲＴＥＸ　）と称
する装置に入れ６０℃で激しく攪拌してリポソームを形
成する。

リン脂質に対するＭＤ　Ｐ　−ＧＤ　Ｐの相対比と脂質
に対するＰＢ８緩衝液の相対比とは、最終リポソームに
おいて使用懸濁液の量に対するリン脂質及びＭＤＰ−Ｇ
ＤＰの相対比が添付の結果表に示されている如き値にな
るようその都度選択した。比較を行なうべくＭＤＰを含
むリポソームを同一条件下で製造した。

また、対照リポソームも同様の方法で＼但しＭＤＰ−Ｇ
ＤＰを存在させずに製造した。

ｂ）凍結乾燥状リポソームの製造 ＤＳＰＯ，ＰＳ及びＭＤＰ−ＧＤＰを適切な割合で２８
−３０℃の無水２−メチル−２−グロパノールに溶解す
ることによシ凍結乾燥状リポソームを製造した。添付の
結果表に示されている相対量の成分（合計量ニー中）を
含むアリコートを凍結乾燥に適した複数のフラスコに導
入した。この２−メチル−２−グロパノール湾液を＋４
℃で凝固させた後、これらフラスコを一２０℃で６時間
凍結乾燥処理した。凍結乾燥した脂質組成物は使用時ま
で一２０℃又は＋４℃で密封フラスコ内に保存した。こ
れら凍結乾燥組成物からのリポソーム製造は、必要量の
ＰＢＳ緩衝液を６０℃で加え、得られた懸濁液をボルテ
クス装置で２分間激しく攪拌し、次いでテスト開始前の
３０分間水浴中に保存することによっていつでも実施で
きる。

ＭＤＰ−ＧＤＰを含むリポソームはＭＤＰを用いて製造
したリポソームに比べて著しく安定している。同一条件
下で、但しトリチウムにより標識したムラミルペプチド
を用いて形成したリポソームに関しては下記の如き現象
が観察された。ｒ、　ｈ、　１−ＦＯ８媒質（サール（
５ｅａｒｌｅ　）塩を含む最小必須培地と子牛胎児血清
との混合物）に懸濁させたリポソーム中でのムラミルペ
プチドの保持テストの結果、３７℃で４時間インキュベ
ートした後では合体したＭＤＰの５０％以上が失われ、
１８時間インキュベートした後では該ＭＤＰの８０チ以
上が失われることが判明した。逆に、対応リポソームの
ＭＤ　Ｐ　−ＧＤ　Ｐは殆んど完全に保持されていた。

ＭＤＰ−ＧＤＰの合体及び安定性は抗ＭＤＰモノクロー
ン抗体との反応テストでも確認された。

これらリポソームを同−媒質中３７℃で７２時間インキ
ュベートするとリポソームと抗体との間に一定の凝着現
象が観察される（９５チのリポソームが凝着）。これは
ＭＤＰ−ＧＤＰの損失が殆んどないことを意味する。実
・際、ムラミルペプチドのＭＤＰ部分はリポソーム膜の
外側表面に存在することが判明した。このような漏洩は
仮に生じたとしたリポソームにも全く同様の現象が観察
された。

従って本発明は特に、極めて短時間例えば２分間ボルテ
クス装置内で攪拌することによシいつでも適切な緩衝溶
液に懸濁させることのできる粉末状凍結乾燥リポソーム
に係る。以下のテストでは「凍結乾燥リポソーム」がし
ばしば使用されるが、言うまでもなくこれは前述の条件
下で特ＫＰＢＳ緩衝液に予め懸濁したものである。

本発明はより特定的には４〜４００μＭの脂質に対し本
発明の親油性ムラミルペプチドを２０〜４０００μｑ保
持するこの種の凍結乾燥リポソームに係る。脂質自体は
ＤＳＰＯ及びＰＳを７：１〜７：１０特に約７：３のＤ
ＳＰＯ／Ｐａ比で混合したもので構成するのが好ましい
。

圭璽崖透ｌヱ」 １）マクロファージの媒介によるＩｎ　ｖｉｔｒｏの細
胞毒性テスト これらのテストで使用した標的細胞はマウス０５７Ｂ１
／６と同系の単層状に維持したマウスメラノーマ細胞）
３１６−ＢＬ６の培養株である。

使用したマクロファージは２００ｇのオスラツ）−Ｆ３
４４の肺胞マクロファージである。これらマクロファー
ジは、０．５−の５チネムブタールｉｐ（ラボラドワー
ルアボット社（ＬａｂｏｒａｔｏｌｒｅｓＡｂｂｏｔｔ
　Ｓ、Ａ、）で麻酔し且つ腎臓動脈内に配置したカニユ
ーレを介して放血したラットの肺をカルシウム又はマグ
ネシウムを含まないダルベツコ（ＤＵＬＢＥＯＯＯ）の
ＰＢ８媒質９×５−で洗浄することにより得られる。遠
心分離後、アール（ＥａｒＪＣ）塩（「フローラボラト
リーズ社（Ｆｌｏｗ　ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓＳ、Ａ
、）によシ市販の「アールズソルト（Ｄｉｒ１５ａ８ａ
ｌｔｓ）ｊ　）を含み且つ不活性化子牛胎児血清５％と
、グルタミンと、ピルビン酸ナトリウムと、非必須アミ
ノ酸と、ビタミン類と、抗生物質（ペニシリン及びスト
レプトマイシン）とを加えたＭＢＭ（最小必須培地）に
マクロファージを懸濁させる。

次いでこの懸濁液を１−当り５　Ｘ　１０１１個のマク
ロファージを含むよう調整し、タイターチック（ＴＨｅ
ｒｔｅｋ　）　７６−００２−０５プラスチック箱内の
各容器毎に１００μｔの割合で配分する。

００、を５チ含む雰囲下３７℃で４時間インキュベート
するとマクロファージが容器の壁に付着する。

ＭＥＭ−ＦＯ８媒質で十分に洗浄して未付着細胞を除去
する。次いでマクロファージ単層をリポソーム製剤、非
すボンームＭＤＰ及び対照リポソームと共に２４時間イ
ンキュベートする。これらリポソーム等は最終量が２０
０１１１になるように導入する。マクロファージ単層を
各洗浄毎に容器当シ２００μｔのＭＢＭ−ＦＯ８媒質を
用いて３回洗浄する。

一方、指数増殖期の標的細胞Ｂ１６−ＢＬ６を０．２μ
Ｏ＋ｉｒ　／−の　ｔｌｌｌ　ＩｄＵｒｃ！　（比放射
能２２００Ｃ・ｉｔ／ｍＭ）の存在下で２４時間インキ
ュベートした。未固定＊＊ａ　１−工ｄＴＪｒｄを完全
に除去すべく単層を血清を含まないＭＥＭで入念に洗浄
した。次いでこれら細胞をトリプシン（０，２５％）／
ＥＤＴ人（０，０２％）ＰＢ８溶液で１分間処理して剥
離する。剥離細胞をＭＢＭ−ＦＯ８媒質に懸濁させる。

８００ｇの遠心分離によυ４℃で１０分間洗浄した後、
１−当り５　Ｘ　１０’個の生細胞を含むようにＭＥＭ
−ＦＯ８媒質に細胞を再びＳ濁させた。

複数のアリコート（該懸濁液１００μｔ）を容器にξ 触さ斗 養を行なう。細胞Ｂ１６−ＢＬ６の回復効率（ｅｆｆｉ
ｃａｃｉｔ；　ｄｅ　ｒｅｃｏｕｖｒｅｍｅｎｔ　）は
約９０−９５％でちった。

インキュベーション終了後裔容器を再加熱したＰＢＳ２
００μｔで３回洗浄し、残留付着細胞を２００μｔの０
．５　Ｍ　ＮａＯＨの添加によル溶解した。

各容器の溶解物と洗浄後の液体とを混合して液体シンチ
レーションカウンタの檜に導入した。測定は全て３回行
なった。チで表わされる死細胞毒性は次の式を用いて計
算した。

このテストは前記細胞がマクロファージによって殺され
た時にこれら細胞の溶解によって媒質中に遊離式れる細
胞Ｂ１６−ＢＬ６のＤＮＡの割合（又は、生存Ｂ１６−
ＢＬ６細胞に関して言えば非遊離ＤＮＡの割合）に基づ
く。

これらテストの結果を表１に示した。この表は前述の条
件下で処理し九細胞の残留放射活性（ＯＰＭ士標準標準
偏差９Ｄ）　）と細胞毒性のパーセンテージ（表１の括
弧内に値が示されている）とを示す。

この表の左側にはリポソーム懸濁液ＩＮ１当υ又は遊離
ＭＤＰの場合には食塩溶液１−当シのＭＤＰ又はＭＤ　
Ｐ　−ＧＤ　Ｐ濃度も示されている。

「凍結乾燥リポソーム」製剤から再形成したＭＤＰ−Ｇ
ＤＰ保持リポソームに関しても同じテストを行なった。

結果は表置及び夏に示す。以下はこれら３つの表に基づ
く考察である。

表１はＭＤＰリボンームが遊離ＭＤＰの７００倍の感作
活性をマクロファージに及ぼすことを示している。しか
しながらＭＤ　Ｐ　−ＧＤ　Ｐリポソームは（ＭＤＰ当
量で評価して）遊離ＭＤＰの７，０００倍、従ってＭ　
Ｄ　Ｐ　ＩＪボンームの１０倍の活性を有する（表１）
。凍結乾燥ＭＤＰ−ＧＤＰ　ｉノボソーム（表■及びＩ
）は同一用量で更に強い活性を示す。

即ち遊離ＭＤＰの５００，０００倍の刺激活性を有する
（リポソームに保持されたＭＤＰ−ＧＤＰのＭＤＰ等価
用量と比較した値）。マクロファージ刺激効果は共培養
（ｃｏｃｕｌｔｕｒｅ　）を９６時間行なうと特に大き
くなる。

との細胞毒性はこれらリポソームの極めて大きな安定性
と重さなると著しい重要性を帯びることになる。これは
粉末状凍結乾燥リポソームが活性損失を伴わずに数ケ月
保存できることを考えると特に重要である。

七ｍ−’ｒ　σ）ｇＪ＆イＩ／ｎｎｕ’ｒｌ’ＯｆｌＴ
’ｌｌ）　ＶＩ＋　ｔｓ　−Ａ　−ｒｘｎＤ−ＭＤＰＧ
　−０ｎＢｕを含むリポソームのｉｎ　ｖｉｖｏ分布１
０μｑのＭＤＰ−ＧＤＰ又は６−６−０−ＧＤＰ−Ｐ　
Ｇ　−０ｎＢｕ　を含む凍結乾燥リポソームを２００ｔ
ｉｔのＰＢ８に懸濁させてマウス０５７Ｂ１／６Ｊの尾
の静脈に注射した。２４時間後に前述の条件下で前記マ
ウスの肺を洗浄することによシ肺胞マクロファージを採
取した。ＭＥＭ−ＦＯ８緩衝液で洗浄し念後マイクログ
レートのくほみの中にマクロファージを一定量ずつ導入
しくくほみ当υ５×１０番個）、Ｃ”’Ｉ　）　−Ｉ　
ｄ　−Ｕｒｄで標識したメラノーマ細胞Ｂ１６−ＢＬ６
を加えた。

前述の条件で細胞毒性を測定した。

同様のテストを対照リポソームとＭＤＰ含有含有リボニ
ーム関しても行なった。結果は表■に示されている。こ
の表から明らかなように、ＭＤＰ−ＧＤＰリポソーム又
は６−Ｑ−ＧＤＰ−ＭＤＰＧ−ＯｎＢｕ　リポソームを
投与した前記動物から得たマクロファージは細胞Ｂ１６
−ＢＬ６に対し゛Ｃ大きな細胞毒性を示すが、対照リポ
ソーム又はＭＤＰを含むリポソームを投与した動物から
得たマクロファージは未処理動物から得られるマクロフ
ァージに比べてＩ丘んの少し高い細胞毒性を示すにすぎ
ない。

ｂ）凍結乾燥リポソームの臓器内分布 このテストはＭＤＰ−ＧＤＰを含むがＤＳＰＯは炭素１
４で標識したリポソームを前述と同様の条件で動物に注
射することにより実施した。

注射の４時間後にこれら動物を殺して肺、肝臓及び肺臓
を取出した。これら器官と血液とにおける放射活性のパ
ーセンテージを測定した。この測定はＤＳ　ＰＯ及びＰ
Ｓの割合を様々に変えて行なった。結果は表■に示す。

この表では、実質的量のＰＳの存在によ、）ＤＳＰＯに
対するＰＳの割合が相対的に増大すると、ｉｎ　ｖｉｖ
ｏで吸着したリポソームの肺への分布が促進されること
を示している。

ＤＳＰＯ／ＰＳ　のモル比を７：、３にすると特に好ま
しい結果が得られる。次のテストではこのモル比を使用
した。

指数増殖期の腫瘍細胞Ｂ１６−ＢＬ６をトリプシン処理
によって採取し、遠心分離によって洗浄し、且つ１−当
り　５　Ｘ　１０’個の生細胞を含む懸濁液を得るべく
ＦＢＳＫ懸濁させる。この懸濁液０．２４をマウス０５
７Ｂ１／６Ｊの尾の外側静脈に注射し念。前記腫瘍細胞
を注射した日の３日。

５日、７日、９日及び１２日後にＭＤＰ−ＧＤＰ１０μ
ｑを含む前記凍結乾燥リポソームの０．５μＭ溶液２０
０μｔを各マウスに静脈内注射した。

２１日目にこれらマウスを頚管部切断によって殺し、肺
転移の数を解剖顕微鈍で記録した。

マウスをＭＤＰ−ＧＤＰを含まない対照リポソームで処
理した。

マン−ウィトニー（Ｍａｎｎ−Ｗｉｔｎｅｙ　）の「ｕ
」検定を用いて転移数に関する処理効果を分析した。

結果は表■に示されている。この表は特に、細胞Ｂ１６
−ＢＬ６の注射後２１日目に処理した種種のグループの
マウスにおいて観察された肺転移数の平均値を示す。

この結果から明らかなように、ＭＤＰ−ＧＤＰをベース
とする凍結乾燥リポソームは転移を実質的に減少せしめ
るが、対照リポソーム又は等量の遊離ＭＤＰはその対照
動物に観察される転移の発生に対して効果がない。

処理後の残留転移の大きさを調べると、直径２寓未満の
転移部は完全に根絶されていた。残存していたのは２−
５冑以上のより大きい転移部のみである。

従って本発明のリポソームが転移に対して特に有効な活
性を有することは明らかである。これは＋錫シ売１．か
榊４人畦俟顛硅υｎｐ今倉ｌゼソームで処理しても効果
がないというキー　エム争イー（ＫＥＹ　Ｍ、　Ｅ、　
）等の観察（ジエー書ナショナル拳キャンサー・インス
チチュート（Ｊ、　Ｎａ１ｌ。

０ａｎｃ、　Ｉｎａｔ、　）　６９．１１８９−１１９
８．１９８２年）を考慮すればより明白でおる。

本発明の化合物類に属する数種の化合物を用いた場合に
ｉｎ　ｖｌｖｏで得られる結果は、同様の条件下でＭＴ
Ｐ−ホスファチジル−モノ−エタノールアミンのリポソ
ームを用いて得られる結果に比べてもかなシ優れている
。実際、後者のリポソームが同一テストで示す活性はＭ
ＤＰをベースとするリポソームと同程度である。

また、本発明の生成物は９６時間後に最大の活性を示し
、従って代謝レベルでの作用持続時間も遥かに早い作用
を示す比較分子の持続時間と比べて有利である。

本発明の化合物には用量が比較的多いと成る程度の発熱
性を示すものがあるが、これら化合物に有利と思われる
治療指数（ｔ′１ｎｄｅ）Ｈｔｂｅｒａｐｅｕｔｉｑｕ
ｅ　）が極めて高い場合にはその影響は少ない。従って
、２つの親油鎖による修飾基が糖基の６位に固定されて
おり且つペプチド鎖の末端基がグルタミル−アルファー
エステル−ガンマ−アミド基であるようなムラミルペプ
チドは発熱性がより低いという理由から％に有利である
。これは、欧州薬局方（Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｅ　Ｅｕ
ｒｏｐｅｅｎｎｅ）第２巻、１９７１年。

５８−６０ページに記載のプロトコールに従い、よシ特
定的に研究した２種の化合物で３匹１組のウサギを処理
して行なった発熱性測定比較テストからも明らかである
。得られた結果は、前記化合物を１■／　ＫＶ投与した
実験動物において観察された温度上昇で表わすと次の通
シである。ＭＤＰ−ＧＤＰの場合１’、０．９°及び１
℃ ６−０−ＧＤＰ−Ｍ６−０−ＧＤＰ−の場合　０，２：
０．３＠及び０．５℃ 本発明の化合物類に属する数種の化合物を用いて得た結
果によれば、ムラミルペプチドに結合された基に担持さ
れている２つの隣接原子から夫々分枝される２つの親油
鎖を導入すると、このムラミルペプチドが、特にリポソ
ームの形状を有している場合には、マクロファージを活
性化し且つ大きな抗腫瘍活性をマクロファージに付与す
るのに特に適した性質をもつようになる。また、本発明
のムラミルペプチド親油性誘導体はＭＤＰの特性、即ち
アジュバント性及び抗感染性（特にクレブシェラ（Ｋｌ
ｅｂｓｌｅｌｌｇ　）に対して）を保持していたことに
も留意されたい。

特に、ＭＤＰ（ＧＤＰ）及び６−０−ＧＤＰ−ＭＤＰ−
０−ＧＤＰ−のアジュバント活性をメススイスマウスを
用いて調べた。θ日月、１００μｑの０４７４を５００
μりの子牛血清アルブミンと共に注射した。３０日口重
抗原のみ１００μ９の２次注射を行なった。結果は次の
通りである。

１次応答　２次応答 出　ｕｌ 対照　１，６４　５．０９　２ ＭＤＰ　３．９７　８，４８　１．７−４−＋ＭＤＰ　
ＧＤＰ　＆６４　１０．２７　０．５２＋→−６−０−
ＧＤＰ−ＭＤＰ（）−ＯｎＢｕ　Ｚ６４　＆６　０．７
１＋＋＋十Ｆ　＜０．０１ 力価は受身血球凝集力価のＬｏｇ　２で示されている。

２１日目処は血清をグループで滴定した。３６日日目血
清を別個に滴定した。

抗感染活性（下記の結果から明らかなように高い）は１
０’個の肺炎杆菌（Ｋｌｅｂａｉｅｌｌａ　７　）細胞
の懸濁液を生後６〜８週間のスイスマウスに静脈内注射
することによって確認した。ｎ（以下余白） 表■から■は試験化合物の投与条件を示し、１０日後又
は１５日後の生存マウス数と対照に対する比として観察
される予防（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　）率を検討してい
る。

観察されたことは次のように要約できる：（１）３つの
生成物すなわちＭＤＰ−ＧＤＰ、ＭＤＰ（Ｄ、Ｄ）−Ｇ
ＤＰ及びＧＤＰ−ＭＤＰＧ　−０ｎＢｕはマウスへの致
死量の肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎ
ｌａｓ　）感染に対し似通った予防活性を有している。

（２１ＭＤＰ　−Ｌ　−ＡＡ！ａ　−ＧＤＰ及び６−Ｏ
−ＧＤＰ−アミノカプロイル−ＭＤＰＧ−０ｎＢｕでも
同様の結果が観察される。

（３）　リポソーム中で注射するとＭＤＰ−ＧＤＰは最
も活性が高（（０，１μｆ）、他の２つでは水＋４１　
ＭＤＰと同様に、抗生物質（ゲンタマイシン）との相乗
作用を認めうる。

（５）　カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ　）　ｆ用イタ実験
は、ＭＤＰ−ＧＤＰが活性を有しておシ、その効果はリ
ポソーム中に合体することによシ増強され、ファンギゾ
ン（Ｆｕｎｇｉｚｏｎｅ　）　（アンホテリシンＢ）の
効果に付加されることを示す。

カンジダに対して得られた結果は衣中に示す。

本発明は従って本発明の化合物を用いて形成し得る生物
学的試薬にも係る。これらの試薬は、よシ特定的には主
として肺での腫瘍破壊性に関して研究中の化合物のマク
ロファージ活性化作用を調べる場合に基準化合物又は比
較化合物として有効に使用される。

本発明は本発明の化合物の少なくとも１種類を有効成分
として含む薬剤にも係る。これら薬剤はこれを投与され
た被験者におけるマクロファージ活性化の刺激剤として
使用し得る。特に好着しい用途は腫瘍疾患の治療並びに
腫瘍の増殖及び転移の予防である。但し本発明の薬剤は
全ての感染性疾患の治療にも使用し得、特に抗生物質に
対する抵抗性をもつよう疋なった病原菌に対して使用し
得る。更に、本発明の親油性ムラミルペプチドは免疫原
剤によシ宿主体内に誘発される免疫のアジュバント、特
にワクチンの有効成分として主に免疫原剤が微力な場合
に使用し得る。これらアジュバントを使用し得る特定条
件については前出の先行特許を参照されたい。

本発明の薬剤は所望の効果を得るのに適した任意の方法
で宿主−動物又はヒト−に投与し得る。

勿論本発明は種々の製剤組成物、より特定的には生理学
的に許容し得る脂質を用い本発明の化合物を必要であれ
ば他の活性物質と共に含み得るリポソームをペースとす
る組成物にも係る。

有利な薬剤組成物は本発明の化合物の少なくとも１種を
有効量含む注射可能なリポソーム懸濁液からなる。この
種の懸濁液は好ましくは食塩の又はグルコースの等張滅
菌水相を用いて製造するのが好ましい。

本発明はより特定的には真皮内注射、筋内注射。

皮下注射、静脈内注射又は乱切法による投与に適した懸
濁液に係る。

本発明は他の方法、例えば経口又は直腸投与により好ま
しくはリポソーム形状で投与し得、又は粘膜特に眼、鼻
、肺又は膣の粘膜と接触させるのに適した形状で投与し
得る薬剤組成物にも係る。

従って本発明は本発明の少なくとも１種の化合物をロ、
眼もしくは鼻からの投与に適した形態を与えるための製
薬上許容し得る固体もしくは液体賦形剤か、直腸投与に
適した形態を与える賦形剤か、又は膣投与に適した形態
、例えばゼラチン様形態を与える賦形剤と共に含む製剤
組成物に係る。

本発明はまた膣投与に適した組成物、特に従来のエーロ
ゾル装置によって投与すべく調製される溶液にも係る。

宿主の抗腫瘍防衛を強化するための投与量は例えば１０
〜１０，０００μｇ／体重紛であり、非経口投与の場合
は例えば５０〜５００μｇ／Ｉｔｗとし得、又は経口投
与の場合には１〜１０〜／Ｋｆとし得る。

これら投与量はリポソームに含まれるＭＤＰ−ＧＤｒ当
量で表わされる。

これらの化合物は乳腫瘍、メラノーマ及び他の固体腫瘍
の如き腫瘍への病巣内注射を行なう場合にも使用し得る
。

本発明は勿論これまで説明してきた特定実施例には限定
されず、当業者は特許請求の範囲内で種種の変形を実現
し得る。

特に、特許請求の範囲には特定例として説明した前述の
諸生成物と等価の生成物も全て包含される。各から前述
の如き親油鎖が分枝された前記２つの隣接原子を含む基
とムラミルペプチドとの間の結合が前述の特定実施例と
は異なる方法で行なわれるような化合物は全て前記等価
生成物と見なされる。例えば前記結合はムラミルペプチ
ドのサッカリール基の１位で生起し得る。また、前記結
合が他の結合手、例えばアミノアルコール残基（−隅ｒ
　ＯＨＯＨｔ　Ｏ）もしくはその類似物を介して行なわ
れるか、又はグルタミル残基のガンマ−カルボキシルと
エステル結合を形成し且つ他端が任意の結合法によって
親油鎖担持グリセリル基に接続される架橋基を介して被
修飾ペプチド鎖のレベルで行なわれるような化合物も特
許請求の範囲の化合物の等価物を構成する。本発明の範
囲内で実現し得る結合を生起するために使用できる他の
結合手及び方法に関しては例えば仏画特許第７８０８０
４９号を参照し得る。逆に１例えばムラミルペプチドの
糖基の炭素６に直接接続される一ＮＨ−基に２つの親油
鎖を担持するグリセリル基が直接又は間接的に接続され
るようなムラミルペプチド化合物も等価生成物と見なさ
れる。

また、先に考察したものと同じ特性要素を有するが、前
述の説明では特に考察しなかった基の局部的置換という
点でのみ異なるような修飾されたムラミルペプチドも全
て本発明の範囲内に含まれる。例えば、糖基の１位の置
換基例えばフェニルアミノ基、又は糖基の４位の置換基
例えば炭素原子を１〜４個有するアシル基を含むような
生成物も本発明の修飾ムラミルペプチドの等価物である
。

更に１修飾され九ペプチド鎖の第４アミノアシル残基及
び／又は第２アミノアシル残基が例えば低級アルキル基
、よル特定的にはメチル基でＮ−置換されたような生成
物、又はグルタミル基及び／又は必要であればグリセリ
ル基に存在するメチレン基の１つに属する１つの水素原
子がメチルの如き低級アルキルで置換されたような生成
物も本発明の化合物の等価物である。基塩又は瓜がアシ
ル基ではなくアルキル基であるような本発明のムラミル
ペプチド等々についても同様である。

要約すれば、これら種々の変形例は前述の如く得られる
ムラミルペプチドの基本的性質、特にマクロファージを
活性化させ且つこれらマクロファージのｉｎ　ｖ！ｖｏ
での腫瘍破壊活性を刺激する力を変化させない限シ本発
明の化合物の等価物の範啼に含まれる。

麦−」 マクロファージの細胞毒活性に及ばず作用ａ：２００μ
を容量中の５　Ｘ　１０４個のマクロファージをＤ８Ｐ
Ｏ／Ｐｇ　リポソーム（８０ｎＭのリン脂質ＬｍＤｐも
しくはＭＤＰ／ＧＤＰを含むＤ８ＰＯ／Ｐ８　リポソー
ム又は遊離ＭＤＰで２４時間予処理した。

ｂ：マクロファージと〔ｌ諺’Ｉ　：］　−ＩｄＵｒｄ
で標識した５　Ｘ　１０”１７）標的細胞Ｂ１６−ＢＬ
６とを共培養し９６時間後に細胞毒性を測定した。

Ｃ：リポソームのＭＤＰ−ＧＤＰ濃度。

ｄ：遊離ＭＤＰの濃度。

た５　Ｘ　１０ｊの標的細胞Ｂ１６−ＢＬ６とを共培養
し７２時間又は９６時間後に細胞毒性を測定した。

Ｃ；リポソームのＭＤＰ−ＧＤＰ濃度。

ｄ；遊離ＭＤＰの濃度。

ｂ＝マクロファージと〔１”Ｉ　］　−ＩｄＵｒｄで標
識した５　Ｘ　１０’の標的細胞Ｂ１６−ＢＬ６とを共
培養し９６時間後に細胞毒性を測定した。

Ｃ：リポソームのＭＤＰ−ＧＤＰ濃度。

表ＩＶａ：１回目及び２回目の実験 ＭＤＰ−ＧＤＰ又は６−０−　ＧＤＰ　−ＭＤＰＧ　−
０ｎＢｕを含有する凍結乾燥リポソームによるマウス肺
胞マク０７アージのその場での活性化 ａ　ＤＳＰＣ／ＰＳリポソーム（リン脂質０．５　ｔｔ
Ｍ　：ＤＳＰＣ／ＰＳのモル比７：３）、ＭＤＰ１０β
ｙを混合したＤＳＰＣ／ＰＳリポソーム又は各々１０μ
ｍのＭＤＰ／ＧＤＰ及び６−〇　−ＧＤＰ　−ＭＤＰＧ
　−ＱＢＢｕを含有したＤＳＰＣ／ＰＳリポソームを各
回２００μノ中で用い、尾の外側諦静脈を介してＣ５７
Ｂ１／６マウスを処理した。２４時間後に肺胞マクロフ
ァージを採取した。５　Ｘ　１０’のマクロファージの
層を置いた後　（１２５１１−Ｉ　ｄ　Ｕｒｄで標識し
た細胞Ｂ１６−ＢＬ６　５Ｘ１０８を添加した。共培養
の９６時間後にマクロファージで誘発された細胞毒性を
測定した。

対照リポソーム＋ＭＤＰＧ　−０ｎＢｕは活性ではなく
、Ｐの値は示されない。

表ＩＶｂ ＭＤＰ−ＧＤＰ、６−０−ＧＤＰ−Ｍ６−０−ＧＤＰ−
又はＭＤＰ（ＤＤ）−ＧＤＰを含有するリポソームによ
るマウス肺胞細胞マクロファージのその場での活性化ａ
　ＤＳＰＣ／ＰＳリポソーム（リン脂質０．５μＭ：Ｄ
ＳＰＣ／ＰＳのモル比７：３）、ＭＤＰ１０μＩを混合
したＤＳＰＣ／ＰＳＩＪポンーム又は各々１０μｙのＭ
ＤＰ／ＧＤＰ及び６−０−　ＧＤＰ・−ＭＤＰＧ−Ｏｎ
Ｂｕを含有したＤＳＰＣ／ＰＳリポソームを各回２００
μノ中で用い、尾のりｎ側静脈を介してＣ５７Ｂ１／６
マウスを処理した。２４時間後に肺胞マクロファージを
採取した。５×１０のマクロファージの層を置いた後　
（１２！１工）−Ｉ　ｄ　Ｕｒｄで標識した細胞Ｂ　ｉ
　６−　ＢＬ６５Ｘ１０Ｂを添加した。共培養の９６時
間後にマクロファージで誘発された細胞毒性を測定した
。

皇−Ｎ ＭＤＰ−ｏＤｐ％含む凍結乾燥リポソームの臓器内分布
８１５匹１組のマウス０５７Ｂ１／６の尾の外側静脈に
ＭＤＰ−ＧＤＰ（１０μｇ）を含む炭素１番で標識され
たＤ　８　Ｐ　Ｏ／Ｐ　Ｓリポソーム（α５μＭのリン
脂質）を２００μｔの容量で注射した。４時間後にマウ
スを殺し標識Ｘ４１′）０保持率を測定した。

ｂ：リポソームの製造に使用したＤ８ＰＯ対Ｐ８のモル
比。

Ｃ：標識１４０の保持率は臓器当りの標識の保持率（チ
）で表わす。完全血液における結果は血液１−当シの該
放射性標識のチで表わす。

ａ　：　Ｄ８ＰＯリポソーム（モル比７：０）との明ら
かな差、ｐ（０，０５゜ 衣−１ −ＧＤＰ含有凍結乾燥リポソームの作用ａ：数組のマウ
ス０５７Ｂ１６の尾の外側静脈に０白目ｆ’Ｂ１６−Ｂ
Ｌ６細胞を１０”注射した。

ｂ：対照リポソームｎ５ｐｏ／ｐｓ（ｏ、ｓμＭのリン
脂質）、ＭＤＰ−ＧＤＰＩＯρｑを含むＤ　Ｓ　Ｐ　ｏ
７ｐ　ｓリポソーム又は遊離ＭＤＰ１０μりを２００　
ｌｉｔのＰＢＳに懸濁して、Ｂ１６−ＢＬ６細胞注射し
た日の３　、５　、７゜９及び１２日後に尾の外側静脈
に注射した。

ｃ：Ｂ１６−ＢＬ６細胞細胞注射後２自の数を測定した
。

ｄ：対照マウスとの明らかな差（マン−ウィトニーのｒ
ｕＪテスト）。

表■ｂ Ｂ　１６−　ＢＬ　６の転移に対するＭＤＰ−ＧＤＰ、
６−０−　ＧＤＰ　−ＭＤＰＧ　−０ｎＢｕ又はＭＤＰ
（ＤＤ）−ＧＤＰを含有するリポソームの作用 ａ　ＤＳＰＣ／ＰＳリポソーム（リン脂質０．５　ｔｔ
Ｍ　：ＤＳＰＣ／ＰＳのモル比７：３）、ＭＤＰ１０μ
ｙを混合したＤＳＰＣ／ＰＳ　ＩＪポソーム又は各々１
０μｍのＭＤＰ　／　ＧＤＰ及び６−０−　ＧＤＰ　−
ＭＤＰＧ−ＯｎＢｕを含有したＤＳＰＣ／ＰＳリポソー
ムを各回２００μノ中で用い、尾の側面静脈を介してＣ
５７Ｂ１／６マウスを処理した。２４時間後に肺胞マク
ロファージを採取した。

５×１０のマクロファージの層を置いた後、Ｃ１２５Ｉ
　）　−ＩｄＵｒｄで標識した細胞Ｂ　１６−　ＢＬ６
　５Ｘ１０８を添加した。共培養の９６時間後にマクロ
ファージで誘発された細胞毒性を測定した。

表　■ 肺炎桿菌に感染したマウスの体内に水性懸濁液として注
射したＭＤＰ−ＧＤＰ及びその誘導体の予防作用ＭＤＰ
　１００μｙ　３０１５６　５２Ｍ、ＤＰ−ＧＤＰ　１
００μｒ　３２／４８　６５対照　０／３２ ＭＤＰ　１００μタ　１５／３２　４７ＭＤＰＧ−Ｏｎ
Ｂｕ　１００　ｐｆ　２０／３２　６２．５６−０−Ｇ
ＤＰ−ＭＤＰＧ６−０−ＧＤＰ−ｐｆ　２２／３２　６
８．７対照　Ｏ／２４ ＭＤＰ　１００μｆ　１２／２４　５０ＭＤＰ（Ｄ、Ｄ
）　１００μｙ　５／２４　２０．８ＭＤＰＧ（Ｄ、Ｄ
）−ＧＤＰ　１００μｆ　２０／２４　８３．３マウス
には１０４の肺炎桿菌を感染させた。

表　■ 肺炎桿菌に感染したマウス体内におけるリポソームに合
体したＭＤＰ−ＧＤＰ及びその誘導体の予防作用 一１日月の処理（１，ｖ、）　生存数（１５日（イ）予
防率（％）空のりポンーム　２／２４ リポソーム　ＭＤＰ−ＧＤＰ　Ｏ，０１μｇ　６／１６
　３１．２０．１　μ！１１８／２４　６６．７ １　μｙ　１８／２４　６６．７ １０　μｇ２０／２４　７５ 空のリポソーム　２／２４ り寂−ム６−０−ＧＤＰ−ＭＤＰ６−０−ＧＤＰ−μｇ
　８７２４　２５１０μｇ１５／２４　５４ 空のリポソーム　２／２４ すｄ大ン′−ムＭＤＰＧの、Ｄ）−ＧＤＰ　１μＩＩ　
４／２４８１０μｇ１４／２４　５０ マウスには１０　の肺炎桿菌を感染させた表　■ 少量の抗生物質とＭＤＰ又はＭＤＰ　−ＧＤＰ　とを併
用することによる肺炎桿菌に対する予防効果の増強 一１日月の処理　生存数（Ｉ石目）　予防率（チ）対　
照　０／２４ ゲンタマイシン　５７２４　２１ ＭＤＰ　３０μＦ　１／　２４　４ ＭＤＰ＋ゲンタマイシン　１４／２４　５８ＭＤＰ−Ｇ
ＤＰ　３０ｐｌ！　４／２４　１６ＭＤＰ−ＧＤＰ＋ゲ
ンタマイシン　１４／２４　５８マクスには５Ｘ１０’
　の肺炎桿菌を経静脈で感染させた。感染の２時間後に
ゲンタマイシン１０　ｐＦｌを皮下投与し、感染の災時
間前にＭＤＰ又はＭＤＰ−ＧＤＰ　３０μｇを経静脈投
与した。

注：この実験では、ＭＤＰがわずかな作用しか持ってい
ない状態を得るために通常よシ多い量の細菌で感染させ
る。

表　Ｘ 肺炎桿菌に感染したマウス体内における一連のＧＤＰの
他の生成物の予防作用 一１日月の処理（ｉ、ｖ、）　生存数（１５日日月予防
率帳）対　照　２／１６ ＭＤＰ−Ｌ−Ａｌａ　−ＧＤＰ　１２／１６　６３対　
照　２／１６ ＭＤＰ■、Ｄ）−Ｌ−Ａｌａ−ＧＤＰ　１００Ｐｆｌ　
６／１６　２５対　照　Ｏ／１６ ６（）−ＧＤＰ−アミノカブ−イル−ＭＤＰＧ−ＯｎＢ
ｕ　９／１６　５６００１１ｇ マウスには１０　の肺炎桿菌を経静脈で感染させた。

表　Ｘ ＭＤＰ−ＧＤＰとアンホテリシンＢとの併用処　理　生
存数（１０日日月予防率（％〕対　照　０／１６ アンホテリシンＢ３μ９　２７１６　１３ＭＤＰ−ＧＤ
Ｐ　１００　ｐｇ／日／日日４日間　３／１６　１９Ｍ
ＤＰ−ＧＤＰ＋アン水戸リシンす　１１／１６　６９Ｍ
ＤＰＱ）、Ｄ）−ＧＤＰ　１００μ９ＡＶ４日関　０／
１６ＭＤＰ（ＤＪ））−ＧＤＰ＋アンホテリシンＢ　３
／１６　１９マウスには２×１０のカンジダアルビカン
ス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）を経静脈で感
染させた。

ＭＤＰ　−ＧＤＰは１００μ９／日を４日間（−４゜−
３、−２及び−１）靜注し、アンホテリシンＢ３μｇは
感染の日に皮下注射する。

表　刈 カンジダアルビカンスによる感染に対するＭＤＰ−ＧＤ
Ｐの予防作用 処理（−４，−３，−２及び−１岨）　生存数（１０８
目）予防率対　照　０７８ ＭＤＰ−ＧＤＰ水性懸濁液中（１００ｐＩＩＸ４）　６
／８　７５　チＭＤＰ−ＧＤＰ　リポソーム中　（１０
／ｊｇＸ４）　５／８　６２．５％ｇ　（ａＯ＃ｘ４）
　６／８７５％ マウスには１０６のカンジダアルビカンスヲ経静脈で感
染させた。

本発明化合物、特にＭＤＰ−ＧＤＰの抗菌活性この分子
の抗菌活性はインフルエンザ菌によるマウスの実験感染
系で評価した。実験のプロトコールは種々の経路により
、特に経口及び皮下で０．１ｖ／匹のＭＤＰ−ＧＤＰを
投与することからなった。インフルエンザ菌ＡＰＲ／８
の１／１００００　懸濁液５０μノを鼻腔内に感染させ
ることによりマウス（１０週令のスイスマウス）を感染
させた。ＭＤＰ−ＧＤＰは感染の２４時間＃Ｊ（−１日
月）又は２４時間後（＋１日０）に投与した。感染後２
１日口の処理群での生存動物数と非処理対照群での生存
動物数とを比較して抗菌活性を判定した。

使用用量においては、ＭＤＰ−ＧＤＰの抗菌活性は経口
投与後（５６％の生存）及び皮下投与後（４４％の生存
）で同様に予防の意味で示された。

この結果、人間の臨床で使用しうる本発明化合物のこれ
らの投与量は０．０１　ｌｌｖ／に９〜０．５　＃／ｋ
ｇとすることができよう。この分子の形状については、
特に水性又は油性懸濁液、油性エマルジョン又はリポソ
ームと組合せた形としての使用が考えられる。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）各原子から８〜１００、好ましくは１４〜２４個
   の炭素原子を含む親油鎖が分枝されている互に隣接する
   ２つの原子を含む基を、必要であれば結合手を介して、
   ムラミルペプチドと結合又はカップリングさせることで
   基本的に得られるムラミルペプチド誘導体。
2. （２）２つの隣接原子が特に構造 のいずれか１つに属することを特徴とする特許請求の範
   囲第１項に記載のムラミルペプチド誘導体。
3. （３）　次式 ％式％ （ 〔式中、置換基＆、Ｒａ、Ｘ、Ｙ、Ａ及びＢは一瓜がＨ
   又はＯＨ，であり、 一烏が基−ＮＨ２，−ＯＨ又は基−ＯＷ　であｐｌＷは
   １〜１０個の炭素原子を含む炭化水素基を表わし、 −Ｘ　カ７ラニル、バリル、インロイシル、ノルロイシ
   ル、ロイシル、セリル、トレオニ／Ｉ／。 プロリル、グルタミニルアアスパラギニル。 メチオニ／Ｉ／、トリプトファニル、フェニルアラニル
   、チロシＡ／、グリ、シルを包含する基のアミノアシル
   残基であシ、 −Ｙが鳥と同じ意味を表わすか又は親油基−ＯＯＨ，−
   ＯＨＯ（馬）ＯＨｘＯ（＆）を表わし、烏及び曳は互に
   等しいか又は異な９．８〜１００個の炭素原子を含むア
   シル基を表わし、 −２が鳥と同じ意味を表わすか又は親油基−ＱＣ）−０
   ＨＯ（Ｒ，）ＯＨｘＯ（＆）を表わし、馬及び現は互に
   等しいか又は異なシ、８〜１００個の炭素原子を含むア
   シル基を表わし、但し２つの基Ｘ及びＹの少なくとも一
   方は常に対応親油基であるとし、 一人及びＢが直接結合又は互に等しいもしくは異なる１
   〜３個のアミノアシル残基を夫々含む互に等しいもしく
   は異なる基を表わし、又は−■−（ＯＨ２）ｐ−Ｃｏ−
   基を表わし、ｐの値は２〜工０である　〕 で示されることを特徴とする特許請求の範囲第１項に記
   載の誘導体。
4. （４）アミノアシル残基がグリシル以外の場合は基Ｘが
   左旋性アミノ酸残基、好ましくはＬ−アラニ／Ｉ／、Ｌ
   −セリル、Ｌ−バリル、Ｌ−ロイシル。 Ｌ−イソロイシル、Ｉ、−）レオニル又ハクリシルであ
   ることを特徴とする特許請求の範囲第３項に記載の誘導
   体。
5. （５）　Ｒａがアルキル−オキシ基からなることを特徴
   とする特許請求の範囲第１項から第４項のいずれかに記
   載の誘導体。
6. （６）基Ａ及びＢが直接結合を表わすことを特徴とする
   特許請求の範囲第１項から第５項のいずれかに記載の誘
   導体。
7. （７）基Ａ及びＢがＸの意味を１つ以上有する１つ以上
   のアミノアシル残基、好ましくはＬ−アラニル及び／又
   はＬ−リシルであることを特徴とする特許請求の範囲第
   １項から第５項のいずれかに記載の誘導体。
8. （８）基２が前記対応親油基であシ、鳥が炭素原子を１
   〜１０％に４個含むアルキル−オキシ基、特に。−ブチ
   ル−オキシであＪ、ＹがＮＨ２基であることを特徴とす
   る特許請求の！［！１第６項に記載の誘導体。
9. （９）焉及び瓜がバルミトイル基からなることを特徴と
   する特許請求の範囲第１項から第８項のいずれかに記載
   の誘導体。 αＱ　特許請求の範囲第１項から第９項のいずれかに記
   載の１種以上の化合物を含有するリポソーム組成物又は
   容易にリポソームに変換し得る組成物０ （ロ）転移温度Ｔｒｎが３７℃よシ高いとどを特徴とす
   る脂質、特に１４〜３０好ましくは１６〜２４個の炭素
   原子を鎖に含む脂肪酸で形成されるリン脂質を用いて形
   成されるリポソームの組成物。 Ｕ　ＩＪｙ脂質がホスファチジルコリン、ホスファチジ
   ルセリン、ホスファチジルイノシトール。 ホスファチジルエタノールアミン及びホスファチジン酸
   の中よシ選択され、単独で又は混合して用いられること
   を特徴とする特許請求の範囲第１１項に記載のリポソー
   ム組成物。 ０　リポソームがジステアリルホスファチジルコリン（
   ＤＳＰＯ）又はジホスファチジルコリン（ＰＣ）とホス
   ファチジルセリン（ＰＳ）とを７容のＤＳＰＯ又はＰＯ
   対７〜１０、好ましくは３容のＰＳの割合で混合したも
   のから形成されることを特徴とする特許請求の範囲第１
   ２項に記載の組成物。 α尋　リポソームが単ラメラ又は多重ラメラの形状を有
   し且つリポソーム粒子の大きさがｏ、　ｉμ以上、特に
   １〜１０μであることを特徴とする特許請求の範囲第１
   ０項から第１３項のいずれかに記載のリポソーム組成物
   。 （イ）生理学的に許容し得好ましくけ等張性て滅菌しで
   ある水溶液に前記リポソームを懸濁させることによって
   形成され、このリポソーム懸濁液が１−当り特に脂質４
   〜４００μＭと、特許請求の範囲第１項から第９項のい
   ずれかに記載のムラミルペプチド親油性誘導体２０〜４
   ０００μ９とを含むことを特徴とする特許請求の範囲第
   １０項から第１４項のいずれかに記載の組成物。 （ト）　リポソームが凍結乾燥状態であることを特徴と
   する特許請求の範囲第１０項から第１３項のいずれかに
   記載のリポソームの安定した組成物。 （ロ）凍結乾燥リポソームが４〜４００μＭの脂質に対
   し特許請求の範囲第１項乃至第９項のいずれかに記載の
   親油性ムラミルペプチドを２０〜２．０００　＃ｇ保持
   することを特徴とする特許請求の範囲第１６項に記載の
   リポソーム組成物。 （ト）脂質自体がＤＳＰＣ及びＰＳを７：エ〜７：１０
   １特に約７：３のＤ８ＰＣ／Ｐａ比で混合したものから
   なることを特徴とする特許請求の範囲第１６項又は第１
   ７項に記載のリポソーム組成物。 （ＩＩ　マクロファージに対して特にマクロファージの
   腫瘍破壊性を刺激する作用を及ぼす薬剤組成物であシ、
   有効成分として特許請求の範囲第１項から第９項のいず
   れかに記載のムラミ／ｌ／ペプチド誘導体を生理学的に
   許容し得る製剤ベヒクルと共に含むことを特徴とする組
   成物。 曽　前記ムラミルペプチド誘導体が特許請求の範囲第１
   ０項から第１９項のいずれかに記載のリポソーム形状で
   存在することを特徴とする特許請求の範囲第４８項に記
   載の組成物。