JPS59210021A - リポキシゲナ−ゼ代謝産物に起因する疾患の予防治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はりポキシゲナーゼ阻害による疾患の予防治療剤
に関する。更に詳しくは、本発明は式 （式中Ｒは炭素数１〜１２のアルキル基である）で表わ
される化合物を含有してなるリポキシゲナーゼ代謝産物
に起因する疾患の予防治療剤に関する。

リポキシゲナーゼ（Ｌ　１３．１１．１２　）は血小板
。

白血球、リンパ球などに存在する酵素であシ、多価不飽
和脂肪酸（特にアラキドン酸）をヒドロペルオキシ酸へ
変換する酵素である。リポキシゲナーゼによるヒドロペ
ルオキシ基のアラキドン酸への導入部位は、５位、８位
、９位。

１１位、１２位、１１５位が知られている。例えば血小
板等に多く存在するりポキシゲナーゼはアラキドン酸の
１２位をヒドロペルオキシ化する酵素（１２−リポキシ
ゲナーゼ）であり、白血球には、５−リポキシゲナーゼ
や１５−リポキシゲナーゼの存在が報告されている。リ
ポキシゲナーゼによシアラキドン酸より生成するヒドロ
ペルオキシエイコサテトラエン酸は不安定で、ヒドロキ
シエイコサテトラエン酸へと変換される。リポキシゲナ
ーゼによって生成するとれらの脂肪酸は、それ自身、例
えば白血球や大動脈中膜平滑筋の遊走作用などの生理作
用を示すが、それらは更に生体内で代謝されて種々の生
理作用を有する代謝産物を生成することが最筋をゆっく
りと強く収縮させる力があり、長い間喘息の原因物質と
目されていたｓｌｏｗ　ｒｅａｃｔｉｎｇｓｕｂｓｔａ
ｎｃｅ　ｏｆ　ａｎａｐｔｙｙｌａｘｉｓ　（５Ｒ８−
Ａと略す）は、最近Ｓａｍｕｅｌｓｏｎら（Ｐｒｏｃ　
Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｂｃｉ。

Ｕ、　Ｓ、・Ｈ・２０１４　（１９８０）　、ｌにより
その化学構造と生合成経路が明らかにされ、アラキドン
酸から５−リポキシゲナーゼを介して代謝生成すること
がわかった。このように、リポキシゲナーゼを介して代
謝生成するヒドロペルオキシエイコサテトラエン酸を初
めとする各種過酸化脂質。

ヒドロキシエイコサテトラエン酸、ロイコトリエンＢＩ
　　５Ｒ８−Ａ等は、各種平滑筋２例えば呼吸器系（気
管、気管支、肺組織）、血管系。

消化器などの平滑筋を収縮したり、末悄崩管の透過性先
進作用、白血球や大動脈中膜平滑筋の遊走作用などを有
し、気管支喘息、アレルギー性疾患（アトピー性皮膚炎
、臓器炎症など）。

循環器系疾患（浮腫や虚血性心疾患、高血圧症。

虚穐性脳障害、動脈硬化ガど）の原因となることや、炎
症性疾患の原因となるケミカルメディエータ−であるこ
とが報告されている。しかし表から、リポキシゲナーゼ
代謝産物に起因する疾患に対して有効な化合物の報告例
は極めて少ない。

リポキシゲナーゼ代謝物に起因する疾患に対する予防治
療薬を探索した結果、上式（Ｉ）で表わされる化合物が
リポキシゲナーゼを極めて強力に阻害し、その代謝産物
の産成・放出を著しく抑制することにより、リポキシゲ
ナーゼ代謝産物に起因する疾患の予防治療剤として有用
であることが見い出された。

式（１）中Ｒとしては直鎖２分岐のいずれでもよく、メ
チル、エチル、ｎ−プロピル、１−プロピル、ｎ−７”
チル、１−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−
ヘプチル、ｎ−、ｔブチル、ｎ−エチルヘキシル、ｎ−
ノニル、ｎ−デシル、ｎ−ウンデシル、ｎ−ドデシル等
があげられる。

化合物（１）は、例えばＪ、　Ｗ、　Ｃｏｒｎｆｏｒｔ
ｈ　等の方法［Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ’、、　６３．１
２４　（１９５６）　、：］に準じて以下のように合成
することができる。

（式中Ｒは炭素数１〜１２のアルキル基である〕マタ、
（Ｉ　）式中ＲノＦ［数カフ、　ｓ、　９．１ｉ　。

化合物は、Ｊ、　Ｗ、　Ｌｉｇｈｔｂｒｏｗｎの方法（
Ｊ、　Ｇｅｎ。

ＭｉｃｒｏｂｉＯｌ、、　１１．４７７〜４９２　（１
９５４）　）に準じてシュードモナス属に属する菌株を
培養、ｆ１！製、単離することにより製造し得る。

化合物（Ｉ）は、リポキシゲナーゼ活性を強力に阻害し
、リポキシゲナーゼ代謝産物に起因する気管支喘息７種
々のアレルギー症（アレルギー性鼻炎、じん麻疹等）、
虚血性心疾患、高血圧症、虚血性脳障害、動脈硬化、炎
症等の治療・予防に有用である。そのために用いる投与
量は、目的とする治療効果、投与方法、治療期間９年令
２体重などにより決められるが、経口もしくは非経口（
例、注射、塗布、吸入等）のルートにより、通常成人１
日当り化合物（Ｉ）として０．１〜ＩＩＩｇ／＃である
。投与には、化合物（Ｉ）自体をそのまま用いることも
できるが、一般には錠剤、丸薬、散剤、顆粒剤、カプセ
ル剤、層剤、注射剤等が挙げられる。また医薬組成物に
使用される担体としては、例えばラクト−スルデキスト
ロース、シュークロース。

ソルビトール、マンニトール、ブドウ糖、セルロース、
シクロデキストリン、タルク、−でん粉。

メチルセルロース、ゼラチン、アラビヤゴム。

ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース
、ヒドロキシプロピルセルロース、安息香酸ナトリウム
、亜硫酸水素ナトリウム、ステアリン酸アルミニウム、
ステアリン酸マグネシウム、鉱油、植物油、白色ワセリ
ン、流動パラフィン等が挙げられ、これらは製剤の種類
に応じて適宜選択される。

実施例 ２−　ｎ　−ヘｊ　ｆ）ｖ　−４−ヒドロキシキノリン
−Ｎ−オキシドのりボ中シゲナーゼに対する阻害作用を
試験管内試駆によシ以下に示す方法によって測定した。

ａ）血小板１２−リポキシゲナーゼに対する阻害作用の
測定法： Ｄ、　Ｈ−Ｎｕｇｔｅｒｎ　　らの方法（Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ、　Ｂｉｏｐ）！ｙａ。

ｘｃｔａ、　上圧、　２９９　（１９７５）　：］に準
じて測定した。即ちウシ血小板よｐ調製した標品を酵素
源として用いた。この血小板リポキシゲナーゼ４１＋と
ｚ−ｎ−へブチル−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキ
シドとを０．　ＯＩ　Ｍ　）リス塩酸緩衝液（１）ｌＨ
７，４）中で、予め３０℃。

５分間接触させた後、〔１４Ｃ〕−アラキドン酸３５μ
Ｍを加えて３０℃、１０分間反応させた。反応生成物を
酢酸エチル／メタノール／　０．２　Ｍクエン酸（３０
／４／１　）で抽出してから薄層クロマトグラフィーで
分離して（展開ソルベント系：リグロイン／エチルエー
テル／酢酸、５０１５０／１）、生成物中の１２−ヒド
ロキシ−５，８，１０，１４−エイコサテトラエン酸の
スポットをかきとシ液体シンチレーションカウンターで
１４０を測定した。

ｂ）白血球５−リポキシゲナーゼに対する阻害作用の測
定法二 Ｂ、　Ａ、　、ｙａｋｓｃｈｉｋら（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ。

Ｃｏｍｍｕｎ、、　９５．１０３　（１９８０）］の方
法を改変して測定した。即ちラットのＬｅｕｋｅｍｉｃ
　ｂａｓｏｐｈｉｌｉｃｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ（ＲＢ
Ｌ−１，・ＡＴＣＣＮ０１ＣＲＬ１３７８）細胞を５−
リポキシゲナーゼ酵素源として用い、本細胞と２−ｎ−
ヘプチル−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキシドとを
０．７ｍ’Ｍ塩化カルシウム存在下０．０７Ｍ）！Ｊス
塩酸緩衝液中で３７℃、５分間接触後、［”Ｃ）−アラ
キドン酸２０μ）ｉを加えて３７℃、５分間反応させた
。反応生成物を酢酸エチル／メタ／　−に／　０．２　
Ｍクエン酸（３０／４／１　）で抽出してから薄層クロ
マトグラフィーで分離して（展開ソルベント二石油エー
テル／エチルエーテル／酢酸、５０１５０／１）、生成
物中の５−ヒドロキシ−５，８，１０，１４−エイコサ
テトラエン酸のスポットをかきとシ、液体シンチレーシ
ョンカウンターで１４Ｃを測定した。

その結果第１表に示すように、本化合物は１２−リポキ
シゲナーゼおよび５−リポキシゲナーゼの両酵素に対し
て低濃度において阻害作用を示すことが明らかになった
。その強度を公知化合物ＢＹ−７５５Ｃと比較すると、
１２−リポキシゲナーゼに対する阻害作用はほぼ同等で
あったが、５−リポキシゲナーゼに対する阻害作用は本
化合物の方が顕著に優れていることが認められた。

第１表　１２−リポキシゲナーゼおよび５−リポキシゲ
ナーゼに対する阻害作用 １）酵素活性を５０チ阻害するに要する化合物の濃度実
施例 ２−ｎ−へブチル−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキ
シドの５Ｒ８−Ａ産生に対する抑制作用を以下の方法に
て測定した。

方法；　ｗａｔａｎａｂｅ−４ｏｈｎｏ　ａｎｄ　ｐａ
ｒｋｅｒ　　の方法（Ｊ、　ＩｍｍｕｎｏＬ、　１２５
．９４６　（１９８０）　〕に準じ卵白アルブミン（以
下、ＥＷＡと略）ｚｏｍｇをｌＱｍの生理食塩液に溶解
後、等容量のフロイント完全免疫補助物質（，７ｒｅｕ
ｎｄ＋ｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅａｄｊｕｖａｎｔ　）に加
えて得られたエマルジョンｌ　ｙｔｌをモルモットの足
踏皮下に投与して能動的に感作した。３〜５週間後、頚
動脈よシ放血致死せしめ、右心室よりタイロード（’Ｉ
’ｙｒＯ（１＋３　）液を注入して肺を潅流し、可及的
速やかに血液を除去した。肺を摘出後、タイロード液中
で７・サミを用いて約２目大に細切し、ガーゼ２枚で濾
過して、タイロード液５ｄを分注した試験管に４００ｍ
ｇ宛の肺切片を入れた。肺切片を３７℃。

１０分間予めインキニーベートした後、種々の濃度の被
検薬液０．５−を加えて１０分間インキュベートし、ｇ
ｗＡ（２ｏｍｇ／ｍ／）０．５＋ｄを添加し、さらに１
５分間インキュベートした。氷冷することによって反応
を停止後、ガーゼ１枚で濾過した。

炉液中の５Ｒ８−Ａ量はＭａｇｎｕＳ法によりモルモッ
ト回腸を用いてバイオアッセイした。すなわち、タイロ
ード液（３１±１℃、９５％０２＋５％ＣＯ２混合ガス
通気）を満たした１０−のオーガンパス（ｏｒｇａｎ　
ｂａｔｈ　）に懸垂し、その運動を等張性トランスデー
−サー（日本光電：ＪＤ１１２Ｓ）を介して、ペン書き
６己録計（日立：ＱＰＤ５４）に記録した。ヒスタミン
１０−７Ｍによる回腸収縮反応が安定した後、５Ｘ１０
−７Ｍアトロビンおよび１０　””’　Ｍ　トリベレン
アミン（ｔｒｉｐθ１８ｎｎ（１１，ｙｌｌｌＢｅ　）
共存下、炉液１−を添加し、回腸収縮反応を惹起した。

なお、８Ｒ８−Ａによる回腸収縮反応は、反復適用する
ことによって増大することが知られているため、予め作
成した５Ｒ８−Ａを５回以上適用して反応が一定となっ
た後、コントロールおよび被検薬液を加えたｆ液を適用
した。この反応は５Ｒ８−Ａの特異的拮抗物質であるＦ
ＰＬ−５５７１２３Ｘ１０−７Ｍによってほぼ完全に抑
制された。

各Ｆ液中に含まれる５Ｒ８−Ａ量はＣｏｎｔｒｏｌの５
Ｒ８−Ａ量を１００チとする百分率で示した。

実験結果 第２表に示すように本化合物４．４０．４００４／ｄ適
用によ、９８Ｒ８−Ａの生゛成が抑制された。

また、その強度は同時に測定したＢＷ−７５５Ｃの抑制
作用と比較しても明らかに優れていた。

第２表５Ｒ８−Ａ量成・放出に対する抑ｔｅ１１作用実
施例 ２−ｎ−へグチル−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキ
シドの受動感作モルモットの気道収縮反応におよぼす抑
制作用を以下の方法にて測定した。

方法 受動感作モルモットを用い、投原投与によるアナフィラ
キシ−性気道収縮反応をＫｏｎｚｅｔｔおよびＲｏｓｓ
’：ｔｅｒ法［Ａｒｃｈ、　ｅｘｐ、　ｐａｔｈ、　ｐ
ｈａｒｍａｋｏｌ、。

ユ１．７１（１９４０））の変法で測定した。正常モル
モットの腹腔内に抗ＥＷＡモルモット血清（１ｄ／動物
）を投与して受動的に感作した。

２４時間後、ウレタン麻酔下に気管カニユーレを挿入固
定し、これに人工呼吸器およびブロンコスバスム・トラ
ンスデユーサ−（ｂｒｏｎｃｈｏｓｐａｓｍｔｒａｎｓ
ｄｕｃｅｒ　）を連結した。ガラミントリエチオダイト
ー（ｇａｌｌａｍｉｎｅ　ｔｒｉｅｔｈｉｏｄｉｄｅ　
）　　１　ｃ）　ｒｎｇ／蛇静脈内投与によシ自発呼吸
を停止後、ＫＷＡＩＩＩＩｇ／対を頚静脈から注射して
、アナフィラキシ−性気道収縮を惹起させ、気管カニー
−レ側路よυのエアーオーバーフロー（ａｉｒ　ｏｖθ
ｒｆｌｏｗ　）量をトランスデユーサ−を介して、ポリ
グラフに記録した。測定終了時に気管を完全閉塞し、こ
れを最大収縮として、結果はこれに対する百分率で示し
た。

実験結果 受動感作したモルモットに抗原ＥＷＡを投与した場合の
エアーオーバーフローの増加（最大収縮の場合のエアー
オーバースローに対する百分率）とチャレンジ後の時間
（分）との関係を第１図に示す。第１図中−〇−は抗原
投与の１時間前に２−ｎ−へブチル−４−ヒドロキシキ
ノリン−Ｎ−オキシド１０翼９７ｋｇ投与（ｐ、　ｏ　
）（６匹）、−・−はコントロール（１８匹）の場合を
示す。又、第１図中秦、※奈および１１はそれぞれ危険
率５％未満、１チ未満およびｏ、ｉ俤未満を示す。

第１図から明らかなごとく上記Ｎ−オキシドを予め投与
しておいた場合、本反応は有意に抑制された。

実施例１１錠　剤 ２−ｎ−へブチＡ／−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オ
キシドｉｏｏｇ、　ラクトース４０ｇ。

コーンスターチ１８ｇ、カルボキシメチルセルロースカ
ルシウム１０９からなる混合物に１０チヒドロキシプロ
ビルセルロース溶液を加えて練合する。この練合液を１
．０鼠のバス、ケラトを柩ね付けた押し出し造粒機で造
粒し、６０°Ｃで乾燥する。得られた乾燥物を１６メツ
シユ篩で整粒し、ステアリアン酸マグネシウムを加えて
打錠用顆粒とし、常法によ、９１製剤中（１７０ｍｇ　
）に上記Ｎ−オキシド１００ｍｇを含む８制径の錠剤と
した。

実施例２．　カプセル剤 ２−ｎ−ヘプチル−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキ
シド５０ｇ、ラクトース８０ｇ、ポテトスターチ３８ｇ
からなる混合物に、１０％ヒドロキシプロピルセルロー
ス溶液を加えて練合する。実施例１と同様に造粒、顆粒
化し、ステアリン酸マグネシウムを加え常法により１製
剤中（ｘ７ｏｉｇ）に上記Ｎ−オキシドｓｏｔｎｇを含
むカプセル剤とした。

実施例３．軟カプセル剤 ２−ｎ−へブチル−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキ
シド１０ｇを大豆油１０（ｌに溶解し常法によシ１カプ
セルとして上記Ｎ−オキシド１ｏｒｒｙ宛この溶液を充
填し、軟カプセル剤とした。

実施例４゜軟膏剤 ２−ｎ−へブチル−４−ヒドロキシキノリン−Ｎ−オキ
シド２０ｇを白色ワセリンと流動パラフィンの混合物に
混合し、１ｇ当り上記Ｎ−オキシド１００ｙ＋ｇ含む軟
膏剤とした。

【図面の簡単な説明】

第１図は受動感作したモルモットに抗原ＥＷＡを投与す
る場合に、気管カニユーレ狽１］路へ流れる空気量の増
加と時間との関係を示す。−〇−は有効化合物投与の場
合、−・−はコントロールの場合を示す。 ±ヤレン′；３翫の咋１類　（宿） 第１頁の続き ０発　明　者　犬森健守 三島市芙蓉台２−４４−３ ０発　明　者　周藤勝− 静岡県駿東郡長泉町納米里４１〇 １ 手　　続　　補　　正　　書 昭和５９年を月２２日 特３′［庁長宮　殿 ｊ事件の表示 昭和５８年特許願第８３３３９号 ２、発明の名称 リポキンゲナーセ代謝産物に起因する疾患の予防治療剤 ３４補正をする者 事件との関係　１４許出願人 郵便番号　ｉｏ。 住　所　　東京都千代田区大手町−丁目６番１号名　称
　（＋０２）協和“醗酵工業株式会社（ＴＩＥＬ　：　
０３−２０１−７２１１　　内線２γ釘）Ｃ，Ｄ、Ｅ、
Ｆを包含する〕」を加入する。 （２）５頁４行の「−げられる。」のあとに「Ｒとして
は炭素数３〜１２、特に５〜１２の直鎖又は分岐のアル
キルが薬理効果」−好ましい。」を加入する。 （３）７頁７行の記載のあとに［一本発明の組成物は化
合物（Ｊ）を０．０１〜８５重量％含むことができる。 」を追加する。 （４）９真下４行のｒ　ＢＷ−７５５ＣＪのあとに「、
ずなわぢ３−アミノ−１−（３−トリフルオロメヂルフ
ェニル）−２−ピラソリン塩酸塩」を加入する。 （５）１０頁Ｔ１０行の「実験例２」を「実施例３」に
訂正すると共に、その前に次の実験例を追加する。 実施例 第２表の化合物のリポキンゲナーセに対する阻害作用を
実験例１と同様の方法で測定した絽果、第２表に示す如
く、いずれも５−リポキンケナー七に対して特異的で強
い阻害作用を示すことが明らかとなった。 １）　各化合物１０００μＭにおける１２−リポキシゲ
ナーゼ阻害率 ２）　酵素活性を５０％阻害するに要する化合物の濃度 （６）１３頁１行の「第２表」を「第３表」に訂正する
。 （７）１３頁Ｔ１３行の「実験例３」を「実験例５」に
言１正すると共に、その前に次の実験例を追加する。 実施例 第４表の化合物の５Ｒ３−Δ産成・放出に対する抑制作
用を実験例３と同様の方法で測定した結果、第４表に示
すごとく同化合物は５Ｒ３−Δ産成を明らかに抑制する
ことが認められた。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （式中Ｒは炭素数１〜１２のアルキル基である）で表わ
   される化合物を含有してなるリポキシゲナーゼ代謝産物
   に起因する疾患の予防治療剤０