JPS58895A - Ｌ−トリプトフアンの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は酵素又は微生物を用いてＬ　−）　ＩＪブト７
アンを製造する際に生成する反応および精製に係る阻害
物質を有効に除去する改良されたＬ−トリプトファンの
製造方法に関する。

Ｌ−）リプトファンは、必須アミノ酸の１種として、医
薬品、栄養強化剤、催眠導入剤および飼料への添加剤な
どの広い用途に有用である。従来Ｔ、−）リプトファン
を得る方法としては化学合成法、発酵法および酵素法な
どの多くの方法が提示されてい・るが、化学合成法によ
る場合は生成物がラセミ体である為光学分割が必要であ
り、Ｌ−）リプトファンを直接生成する発酵法および酵
素法が注目されている。

本発明者らは、インドールおよびセリンを原料としてト
リプトファンシンセターゼ、トリプトファナーゼおよび
これらを酵素源としての生産菌を用いた酵素法によるｔ
反応を検討していた処、反応液又は粗結晶ｒ液の反応系
への反復使用によってＬ−）リプトファンの蓄積濃度が
著しく低下するという現象を確認し、反応の経過に伴な
い反応を阻害する物質が副生ずると考えざるを得ないこ
とを認めた。而して反応阻害物質のこのような副生は、
Ｌ−ト！Ｊブトファンの反応溶液における高濃度蓄積及
び原料の有効利用の上で大きな障害となる為、この不純
物の除去方法について鋭意検討を行った。当初、種々の
単一処理による該不純物の除去方法について試行したが
有効な手段は見出せず、種々の処理を組合わせる方法を
検討していた処、驚くべき事に単一処理では殆んど効果
の認められなかった処理の組合わせである本発明の方法
により、粗結晶ｆ液を反復使用しても当初の反応と殆ん
ど変らないＬ−）リプトファンの蓄積濃度を再現し、相
剰的な不純物の除去効果を確認して本発明の端緒を得、
更に検討を進めた結果、本発明提示の方法で除去される
不純物は、微生物や酵素を用いた場合に固有な現象であ
り、微生物からの分泌物、失活した酵素、副反応生成物
、暗褐色色素（フミン質等を含めた着色物質）、および
微生物並びに酵素に由来するコロイド性蛋白質、脂て形
成されているものとの判断に至り、当初反応の系に限ら
ず、他の酵素法あるいは発酵法にも幅広く応用出来る処
理法である事が判明した。

一方、一般的にアミノ酸の結晶は不純物の存在により晶
出の際に成長阻害を受は易い事が知られているが、本発
明者らは、前記反応により得た粗結晶の精製についても
検討を行った処、該反応で副生ずる不純物は、目的物で
あるＬ−トリプトファンの晶出時に同時に析出又は結晶
に吸着付１着するなど目的物に随伴し易い挙動を示し、
結晶の成長性だけでなく、結晶の形状不良、着色、除去
しにくい悪臭の付着等の現象を伴ない、このような性状
の結晶は再結晶などの通常の方法では容易に精製効果が
得られない事を確認した。

本発明者らは、本発明の方法による反応系に於ける不純
物の相剰的除去効果に注目し、前記反応により得られる
Ｌ−）リプトファンの回収および精製に係る工程液につ
いても本発明の方法を実施シタ処、前記Ｌ−）リプ、・
トファンと類似しり挙動を示す不純物が反応液の場合と
同様に除去され、分離取得される結晶の成長性、形状、
着色度および付着悪臭は大幅に改良され、そのま〜でも
飼料添加剤程度の用途に合致する品質のものが得られ更
に再結晶などの通常の方法で容易に高度精製品を得る事
が出来る事が確認された。

また、本発明の方法を実施しない場合、結晶をｒ液の反
復使用は分離結晶の品質低下を招くが、本発明の方法を
実施した後に得られる粗結晶（−次）Ｐ液は、粗結晶の
溶解工程に戻し反復使用しても分離結晶の品質低下は殆
んど認められず、回。

収および精製工程での品質維持、回収率などの面でも非
常な有効処理方法である事が確認され、本発明を完成す
るに至った。

即ち、本発明は（１）発酵法または酵素法によりＬ−ト
リプトファンを製造するに際し、反応液または回収およ
び精製に係る工程液に対し、非イオン交換性の多孔質性
樹脂による接液処理および限外ｆ過膜によるｆ過処理す
る事を特徴とするＬ−）リプトファンの製造方法であり
、この方法を実施する事により、酵素又は微生物を用い
てＬ−）ＩＪブトファンを得る場合の反応時に生ずる不
純物によってもたらされる、反応液又は粗結晶ｒ液の反
復使用時に於ける反応阻害物質およびＬ−）　ＩＪブト
ファン結晶の分離取得時に於ける結晶性、品質に係る阻
害物質を除去することが可能であり、本発明の属する技
術分野における幅広い有用性を有するものである。

本発明で称するＬ−）リプトファンを製造するための発
酵法には、糖質およびアンモニアを出発物質とする直接
発酵法とアントラニル酸又はインドールまでを化学合成
し、これと糖質およびアンモニアを出発物質とする間接
発酵法とがある。

本発明で称する酵素法には、インドールおよびセリン又
はインドールおよびピルビン酸、アンモニアを出発物質
とし、トリプトファンシンセターゼ又はトリプトファナ
ーゼなどの酵素の働らきでＬ−）リプトファンを得る方
法があり、この際使用する酵素は精製品に限らず粗製品
、酵素源としての微生物、培養液、培養ｒ液などの状態
でも使用され、要するに１鼠とする反応を進行させ得る
ものであればよい。

本発明で・称するＬ−）ＩＪブトファンの反応液とは、
前記発酵法による発酵液、前記酵素法による合成反応液
を意味し、具体的には、 （イ）反応終了後Ｌ　−トＩＪブトファンが溶解度以下
の濃度にある液まｆ３まその除菌液、 （ロ）反応終了後Ｌ−１！Ｊブトファンを溶解度以上に
含有し、析出するＬ〜トリプトファンの結晶を水で希釈
又は酸あるいはアルカリを加えて溶解した液またはその
除菌液、 などの状態にあるものを示し、本発明で称するＬ−トリ
プトファンの回収および精製に係る工程液とは、具体的
には前記反応液の反応終了時およびｐＨ調整又は濃縮な
どの操作により析出したＬ−トリブトファンのスラリー
から結晶分離をした際の、 （ハ）粗結晶ｊ１液またはその除菌液、に）和結晶に溶
解度以下になるように水を加え、または酸あるいはアル
カリを加えてｐＨを変動させる事により溶解した液また
はその除菌液、など或はこれらの状態から誘導された状
態にあるものを示す。

本発明で称する非イオン交換性の多孔質性樹脂とは、ジ
ビニルベンゼンを架橋剤としたポリスチレン又はポリア
クリルエステルを樹脂母体とし、巨大網状構造を持った
均一な孔径を有する多孔性樹脂で、極めて大きな比表面
を有するものであり市販のものとしてはアンバーライ）
ＸＡＤ−２，４，７，８％（商品名：ローム、アンド、
ハウス社）、ダイヤイオ７ＨＰ−１０，２０，、３０，
４０，５０等（商品名：三菱化成社）、レバチットｏｃ
１ｏ３１（商品名：バイエル社）などがある。

本発明で称する限外沢過膜とは、種々のポリマーを特殊
な製膜法を用いて製造し、分子量分画の機能を持たせた
もので、ポリマーとしては、セルロース系、ポリアミド
系、ポリイミド系、ポリベンツイミダゾール系、ポリア
クリロニトリル系、ポリスルホン系、テフロン系などが
代表的であり分画分子量としては５００〜２００．００
０の範囲で種々の分画機能のものがあり、限外ｆ過膜と
しての形状としては平膜、中空繊維、スパイラル型、管
状ノ有すなどのものが市＃！され、例えば旭化成社ＨＨ
１１１０、Ｉ−■／リーズ（商品名、以下省略）、バイ
オエンジニャリング社Ｇシリーズ、ダイセル社ＤＵＹ。

１）ＩＪＣ／リーズ、東洋１紙社ＵＨ％ＵＫ、　ＵＰシ
リーズ、湯浅電池社ＥＤシリーズ、米・アミコン社ＵＭ
、ＰＭ、ＸＭシリーズ、米・トルーオリパー社１０ＦＯ
Ｒ−ＡＰ、　ＢＰ、　ＸＰ、　ＧＰ、　ＦＰシリーズ、
米・ミリポア社Ｐ　Ｓ　Ａ　Ｏｐｚｊｌｆ＃　ｃ６ｒｂ
シリーズ、米・レイバク社ＲｏｐＡＫ−ｔＪＦシリーズ
、西独・ヘキスト社ＩＪＦＯＡ１ＵＦＰＡ、デンマーク
・ＤＤＳ社ＦＳ、ＧＥＬシリーズ、等があげられる。

本発明の方法を実施する場合の処理順序には特に限定は
ないが、限外１過膜への不純物汚染による機能変化、処
理効果の維持性（ライフ）を重点的に配慮すれば、非イ
オン交換性の多孔質性樹脂＋”　ｋ　＝’、接液処理を
先に実施する方が好ましく・。

また、本発明の方法を実施する前の液に於いても、通常
既知の遠心沈降、ｆ過などの方法で微生物や沈澱物を除
去しておいた方が操作上からは好ましい。

尚、本発明の非イオン交換性の多孔質性樹脂による接液
処理に類似した例として、従来り一トリプトファンなど
の芳香族アミノ酸の吸着性を利用して、脂肪族アミノ酸
や無機塩類との分離を行ったり、または５−ヒドロキシ
−Ｌ−トリプトファンなどのＬ−トリプトファン誘導体
とＬ−トリプトファンとの吸着性の差を利用して分離−
する等の方法が知られているが、これらの例はＬ−）’
）ブトファンを非イオン交換性の多孔質性樹脂に一度吸
着させてから、回収すべき種々の溶出剤を用いて溶出回
収を行うものであり、本発明に於ける処理ではＬ−）リ
プトファンを吸着させる事による分離は必要でなく、対
象液はだだカラム通液又は攪拌しながらの接液を行う丈
でよい。

本発明の非イオン交換性の多孔質性樹脂による接液処理
を実施する際の液温は、該樹脂の耐熱性許容範囲から選
択されるが、通常は５〜６０°０の範囲であり、またそ
の際のＰＨは強酸性から強塩基まで広範囲に亘って実施
可能で特に制限はなく、対象液中のＩ、−トリプトファ
ンを溶解させうる条件及び本発明の組み合わせた処理で
用いる後述の限外瀝過膜の材質等による指定の条件範囲
とから選択して同じ条件にしておいた方が操作上からは
好ましく・と言える。

また、本発明の非イオン交換性の多孔質性樹脂による処
理を行う際の該樹脂の使用形態としては対象液中に懸濁
攪拌しても、カラムに充填通液してもよいが、後者の方
が効率、操作の上から好ましい。力くムに充填通液する
際の通液速度は、通常５Ｖ＝１〜１０で好ましくは３〜
７の範囲であり該樹脂量に対する処理液量比は通常１〜
１００、好ましくは５〜５０の範囲である。

また、本発明の処理を行った後の非イオン交換性の多孔
質性樹脂は、希酸、希アルカリ及びアセトン、メタノー
ル、エタノール、イノプロピルアルコール、ブタノール
などの有機溶剤またはアセトン／水−５０１５０などの
ごとき水混合物などを接液させる事で容易に再生され、
反復使用可能となり、経済的にも工業上十分実施可能で
ある。

本発明の限外ｆ過膜によるｆ過処理を実施する際の液条
件、特にＰＨ条件は、該ｒ過膜を構成する樹脂により指
定の範囲があり、その範囲で実施すればよく、その際の
温度は通常５〜８０°Ｃ１好ましくは１０〜４０°Ｃ程
度で指定査れている。

また限外ｒ過膜によるｆ過処理を実施する際の処理条件
も膜の形態、物理的強度などにより指定されており、そ
の範囲で実施すればよい。このｒ過処理の終点に至る濃
縮度は、対象とする液中に含有する除去すべき成分の量
によって決まり、例えば使用する限外沢過膜に対して指
定されている圧力上限を超えなければ実質的ｆ過処理が
不能になった時点を処理終了点と見做すことが可能であ
り、更にＬ−）リプトファンの回収率を上げる為には上
記ｆ過処理による濃縮液を再希釈した後、再ｒ過処理す
る事により可能である。

本発明の方法である二つの処理を組み合わせて行う事に
より前記反応液の場合には、 ｌ）次回反応時への効率的反復使用が可能となり、２）
濃縮またはＰＨ調整により高品質の結晶が動可能となり
容易に高度精製品へ導く事が出来、前記粗結晶ｆ１液の
場合には、 ３）次回反応時への効率的反復使用が可能となり、前記
粗結晶溶解液の場合には、 ４）濃縮またはＰＨ調整により高品質の結晶が入手可能
となり容易に高度精製品へ導く事が出来、さらに ５）（−次）精結晶ｆ液は次回粗結晶溶解液として次回
（−次）精結晶の実質品質低下をきたす事なく反復使用
出来、容易に高度精製品へ導く事が出来る、 などの処理効果を得る事が出来る。

尚、前記２）、４）、５）で得られる（−次）精結晶は
、水又は有機溶媒あるいは水／有機溶媒を用いた再結晶
を行うだけで十分な高度精製品とする事が出来る。。

以下０　）　Ｊ、　ｉ、’ｌｊ例により本発明を具体的
に説明する。

が、これらは何ら本発明を限定するものではない。

尚、以下の実施例に使用した微生物の培養は、下記の培
地を用いて３０４？の培養器でＰＨ＝７．０、温度３５
°０で行ない、培養終了後、遠心沈降器を用いて集菌し
、−２５°Ｃの冷凍庫内に凍結保存し、使用直前に室温
下に解凍して使用した。

（培地の重量％濃度組成） 肉エキス１チ、ペプトン０５％、酵母エキス０１係、Ｋ
Ｈ２ＰＯ４０，２％ また、以下の実施例に於けるＬ−トリプトファンの分析
は、高速流体クロマトグラフィーによって行った。

対照例１ Ｌ−セリン２１％、硫安２５チ、ピリドキサルー５′−
リン酸（以下ＰＬＰと略記）　Ｏ，’０１　％、ＮＱ２
ＳＯ３０゜１係及び前記解凍したトリプトファンシンセ
タの培養菌体０５チ（乾燥菌体基準）を入れ、ＫＯＨ水
溶液でＰＨ＝　８．５に調整した仕込液３１を攪拌Ｌ しながら３５°ＣでＰＨ＼８，５に保ち、インドールを
分割添加しながら反応を行った処、Ｌ−トリ１８フフフ
本１．テ３０．２　ｆｌ／’（ｌの蓄積濃度で反応の進
行が停止してしまった。この反応液を冷蔵庫で一晩冷却
後、遠心沈降により沈澱物および菌体を除去し、得られ
た上澄液から２．５ｅを採って次のような操作を行った
。尚、上澄液中のＬ−）リブトファン濃度は１５９／ｌ
であった。

■、−化リン濃度を２１チとなるよう調整し、ｐ＋、ｐ
ｏ、１ｇ、Ｎ／２２８０３１９を加え、前記Ｂ　＊　ｃ
ｔｙｌＬＭＴ−１０２３２を０５％（乾燥器）　トナ；
６　ヨ５　Ｋ加えて、前記と同様な方法で反応を行った
処、Ｌ−トリプトファンとして２５．７９／ｌの蓄積濃
度で反応が停止（−２でしまった。次に前記と同様な操
作で得られた上澄液２１について行った次回の反応は更
に蓄積濃度が低（、Ｌ　−）　ＩＪブトファンとして１
ｑ、　６９／　ｌで停止してしまった。

対照例２ 前記対照例１で行った３回の反復反応により得られた沈
澱物および菌体の全湿時重量は約４３６ｇで、この中の
Ｌ−４リプトフアンの濃度は２２％（９６ｇ）であった
。

このうち２００ｇを５００ｍＡ’の水に懸濁し、６Ｎ−
Ｎ墨ＯＨでＰＨを１０．５に調整してＬ−トリプトファ
ンを溶解した後、全液量を７５０　ｍｌにし、遠心沈降
により除菌した。この際、沈澱した菌を１００ｍ１の水
で洗浄した。除菌液及び洗浄成約８１０ｍ１を約７００
ｍ１に濃縮した後、酢酸でＰＨ６，０に調整して結晶を
析出させ、攪拌下水水浴で５°Ｃまで冷却した。６時間
攪拌を続行した後、静置した処、結晶は非常に細か（（
顕微鏡写真にて観察した処、径は５〜２５μで５〜１０
μ・の範囲めものが多い。）、浮上する結晶と沈澱する
結晶が認められた。スラリーのま瓦今度は８０°０で１
時間加温した後、放置徐冷して結晶の成長を試みた。結
果は、顕微鏡写真で二次凝集は認められたものの個々の
結晶の粒径は余り変らない上に、容器の底には球状の析
出物にＬ−１Ｊブトフアンの結晶が付着した・沈澱物が
認められ、沢過、水洗により得られた結晶は　　　。

湿時約５５ｇ（含水率５０．５％）で黄褐色に着色し、
若モのインドール臭及び微生物由来の悪臭を伴なうもの
であった。

この結晶を湿時のま〜ｓ　ｏ　ｏ　ｍｌの水／メタノー
ル−＝ｓｏ１５ｏ（容量比）混合液中に懸濁し、６゜０
Ｃで加温溶解した処、浮遊物が認められたので１紙（東
洋１紙社ＮＯ２）により熱時ｒ過した。ｆ液を攪拌ト室
温まで徐冷した後、氷水で５°Ｃまで冷却し、結晶粒径
を前記と同様に観察した処、平均約５０μ程度に成長し
ていたが、ｒ過、水／メタノール洗浄した後の結晶は湿
時約２７ｇ（含液率約４０チ）で、黄褐色の着色がなお
認められた。

この結晶を暗所で風乾した後、乾燥器内５５°Ｃで乾燥
する過程での乾燥器の臭気を調べた処、インドール臭は
消えていだが、微生物由来の臭気はなお認められた。

実施例１ 前記対照例１と同様な組成および操作を最初の仕込液量
１０７？スケールで行った処、反復反応の終了時に於け
るＬ　−トＩＪブトファンの蓄積濃度は１　回Ｕ　３１
．０　ｇ／ｌ、２回目２５．３ｇ／１１６回目２０、１
１７１であった。

６回目の反応終了後、遠心沈降により沈澱物および菌体
を除いて得た上澄液中のＬ−）’Ｊブトファン濃度は１
２．４ｇ／ｌで、重量は約５．７１であった。この液を
用いて以下の比較実験を行った。

比較実験１（無処理）： 前記上澄液を１１採り、液中のＬ−セリン濃度を２．１
％になるよう調整した後、ＰＬＰｏ、０５ｇ、Ｎ（２２
ＳＯ３０，ｓ　９及びＢ　＠ｖｔｙｌ＝　Ｍ　Ｔ　　１
０２３２の培養菌体を０５％（乾燥菌体基準）となるよ
うに入れＫＯＨ水溶液でＰＨ８，５に再調整した。

比較実験２（接液処理）： 前記上澄液を１．５１採り、１５０ｍ１の非イオン交換
性の多孔質樹脂であるレバチッ）００１０３１のカラム
に５Ｖ＝４で通液する。この際、初期のカラム充填液と
して２００ｍ１を除いた。この処理液から１４を採り、
比較実験１と同様に組成の調整を行った。尚、この際液
中のＬ−トリプトファン濃度が’１１．Ｂｇ／ｌとなっ
ていたので、ｏ６１のＬ−トリプトファンも加えた。

比較実験５（限外ｊ４過処理）： 前記」二澄液を１５１採り、デンマークＤＤｓ社限外１
過膜ＦＳＩ！５ＯＰＰ（分画分子量３０．０００）を小
型加圧ｌ′過器で使用しｅ過を行ない、窒素ガスによる
加圧が１３　ｋｇ　／ｃｒＲＧに到達するまでに１．３
１のｒ過液を得た。このｐ過液から１４を採り、比較実
験１と同様に組成の調整を行った。

比較実験４（ブランク）： ■、−セリフ　２１　、ｊｉ’、　ＰＬＰ　Ｏ，１９，
Ｎａ２ＳＯ３１ｆｌ及びＩジ−トリプトファン１２４ｇ
を水９００ｍ１に入れ、ＫｏｌｌでＰＨを８５にしだ後
更に水を加えて１ｅとし、これにＥ　−ｃ、ｃｄ−Ｌ　
ＭＴ−１０２３２の培養菌体を０５％（乾燥菌体基準）
となるように入れ再度ＫＯ１（でＰＨを８．５に調整し
た。

本発明の例： 前記上澄液の残り１．７１１を前記比較例２と同様に１
５０ｍ１のレバチッ）　００１０３１カラムに通液し初
期充填液分及びカラム残液を除いて約１．５１とし、次
いで比較実験６と同様にＦＳ６０ＰＰ膜によるｆ過を行
ない、約１．３１の画処理をした液を得た。この処理液
１１を採り比較例１と同様に組成の調整を行った。尚、
この際比較実験２と同様にＬ−）リプトファ／を０．８
　ｇ加えた。

以上５例の反応は、前記対照例１の１回目の反応と同様
、攪拌ド３５°ＣでＰＨを８５に保ちながらインドール
を分割添加しながら行った。結果を下記表１に示した。

表１ 実施例２ 前記実施例１で行った３回の反復反応で、遠心沈降によ
り得た沈澱物及び菌体を用いて以下の実験を行った。

尚、該沈降物中のＬ　−）リブトファンの濃度（ま２３
１チであった。

比較実験５： 沈降物２００ｇ（Ｌ−）リプトファン４６．２．９）を
水６（３０ｍｌに懸濁し、６Ｎ−ＮＱＯＨ水溶液でＰＨ
を１０．５に調整溶解した後、全液量を７５０　ｍｌと
し遠心沈降により除菌し、沈降した菌を再度１ｏｏｍ７
！の水に苛濁区遠心沈降を行ない、除菌液及び洗浄液を
合わせ゛Ｃ約７５０ｍ１に減圧で濃縮した。この液を酢
酸でＰ　Ｈ６，０に調整し、結晶を析出させ攪拌下水水
浴で５°Ｃまで冷却した。

比較実験６： 比較実験５と同様にして除菌及び洗浄の合液を得た後、
ダイヤイオンＩＰ−１０のｓｏｍｌのカラムを５Ｖ＝５
で通液し、カラム洗浄液を合わせ約１４の液を減圧で濃
縮し約７５Ｃ］ｍｌとし、以下は比較実験５と同様に処
理した。

比較実験７： 比較実験５と同様に（２て除菌及び洗浄の合液を得た後
、デンマークＤＤＳ社ＧＩＭ１１　ＰＦ（分画分子量２
ｚ、ｏｏｏ）膜を用いて小型加圧Ｕ過器で窒素カス圧ｓ
　ｋａ　／ｃｔｌ　ｏで汐１過を行なった。

この際濃縮測的５０１ｎｌに到達した処で希釈本釣２０
０ｍＡ’を追加した。全透過液量約１１を減圧で濃縮し
、約７５０ｍ１とした後は比較例５と同様に処理した。

本発明の例： 比較実験５と同様にして除菌及び洗浄の合液を得た後、
ダイヤイオンＨＰ−１０５０ｍｌのカラムを５ｖ−５で
通液し、カラム洗浄液を合わせ約１１の液をデンマーク
ＤＤＳ社０Ｒ６１ＰＰ膜でｆ過を行ない、比較例７と同
様濃縮側の希釈による回収液を合わせ約１２４の液を減
圧で濃縮し約７５０ｍ１とした。

以下は比較実験５と同様に処理を行った。

以上の実験に関する結果を下記表２にまとめた。

尚、評価の方法は前記対照例２に記載の方法と同様にし
て行った。

また、前記実施例２に於ける本発明の例の結晶を除いた
ｆ液を次回精製のための溶解用液に用いろ循環使用を更
に６回（計４回）行なった。この際ダイヤイオンＨＰ−
１０のカラムはメタノール２５ロ前記４回目の精製によ
る結晶も「飼料及び飼料添加物の規格等に関する省令」
（昭和５４年農林水産省令第４７号）にすべて合格して
いた。

まだ、前記表２本発明の例の水／メタノール再結晶品は
、策士改正日本薬局方による規格に合格していた。

実施例３ ピルビン酸ナトリウム６チ、酢酸アンモニウム３係、Ｐ
ＬＰｏ．０ｉ係、Ｎα２Ｓ０３０１％を含有し、ＰＨを
ＫＯＨ水溶液で８５に調整した３１の液にトリプトファ
ナーゼ生産菌であるＥ・６σＩ−Ｌ　（　Ａ，　Ｔ。

ｃ，Ｏ　　Ｎ０２７３２５　）の培養菌体を０．５％（
乾燥菌体基準）となるように入れ、攪拌下３５°ＣでＰ
Ｈ＝８．５に保ちながらインドールを分割添加し反応を
行った。３０時間後、■、−トリプトファン濃度が約２
　０　ｇ／（ｌ付近で反応の進行が停止してしまったの
で、Ｋ　ＣＩ　Ｈ水溶液でＰＩＩ＝９．５とした後、遠
・（−・沈降により除菌及び菌体洗浄を行ない約３５４
の液とＶ〜、次のような操作を行なった。

１）レバチットｏａ１ｏ３１（前出）３００ｍｌＯカラ
ム通液 ２　）　Ｆ　Ｓ　６　０　Ｐ　Ｉ）　（前出）による限
外１過３）減土濃縮（約１１まで） ４）酢酸をこよる等電一点晶析（ＰＨ＝６．０）以上の
ようにして得た結晶は、水／イソプロパツール＝　５　
０７５　０　（容欧比）で１回の再結晶を行うことで、
策士改正日本薬局方規格に合格した。

特許出願人 三井東圧化学株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）発酵法または酵素法によりＬ−トリプトファンを
   製造するに際し、反応液または回収および精製に係る工
   程液に対して非イオン交換性の多孔質性樹脂による接液
   処理および限外ｒ過膜によるｒ過処理する事を特徴とす
   るＬ−）リプトファンの製造方法。
2. （２）反応液から粗結晶を分離した後のｒ液に対して非
   イオン交換性の多孔質性樹脂による接液処理および限外
   ｆ過膜によるｆ過処理を行ない、次いで処理液を反応に
   反復使用する特許請求の範囲第１項記載の方法。 （ロ）反応液から得た粗結晶を溶解した液に対して、非
   イオン交換性の多孔質性樹脂による接液処理および限外
   ｆ過膜によるｒ過処理を行ない、次いで結晶を析出分離
   して得たｆ液を粗結晶の溶解に反復使用する特許請求の
   範囲第１項記載の方法。