JPS5888339A - エイコサペンタエン酸又はそのエステルとドコサヘキサエン酸又はそのエステルの分離精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はカラムクロマトグラフィーによるエイコサペン
タエン酸（Ｃｓｏニー６３）又はそのニステルトドコサ
ヘキサエン酸（Ｃｓｚ；ｇωＳ）又ハソのニスチクの分
離精製方法に関する。

エイコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸は近年抗
コレステ四−ル作用を有する医薬として期待され、特に
エイコサペンタエン酸は疫学的調査から車検症とか動脈
硬化症の治療及び予防のために極めて重要であることが
発見されている。こＯため、エイコサペンタエン酸及び
ドコサヘキサエン酸を高純度に工業的に製造する方法の
開発が望まれている。従来、エイコサペンタエン酸及び
ドコサヘキサエン酸を含有する脂肪酸混合物からエイコ
サペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸を分離精製する
方法として辻尿素付加法、酢酸水銀付加法１分子蒸留法
、薄層りｃＩｗ　）グラフィー。

ガスクロマトグラフィー、硝酸銀含浸ケイ酸カラムクロ
マトグラフィーなどが知られているが、いずれの方法も
純度、生食効率等Ｏ点で満足できるものではない。また
、これらの方法の中で硝酸銀含浸ケイ酸カッ人りロマト
ダラフイーによる方法はか表り有力な方法であるが、硝
酸銀含浸ケイ酸カラムは再生できず、しかも生産効率が
悪く、更に溶離液にへ會サンーエーテルー酢酸系を使用
するため高価であると共に、安全性も劣る等の欠点があ
る。

本発明者らは、上記事情に鑑み、高純度のエイコサペン
タエン酸及びＰロサヘキサエン酸を効率よく得る方法に
ついて鋭意研究を続けた結果、８個乃至２８個の炭素原
子を有するアルキル基をシリカに結合させた充填剤を充
填した逆相分配型カラムを用い、（１）アセトｙ　ｓ　
（２）メチルアル；−ル及び（３）水の混合物を溶離液
とするカツムクロマトダラフイー法が上記目的を効果的
に達成し得ることを知見し１本発明をなしたものである
。なお、本出願人社、これに先だち同様のカラムを用い
、（１）テトラヒドロフラン、（２）メチルアルコール
もしくハ：Ｉ−ｆ　ｋ　フルコール等の低級アル；−ル
又ハフーＩＩトニトリル及び（３）水又は酢酸水溶液Ｏ
ｓ合物を溶離液とするカラムクロ！トゲラフイーによる
方法を出願した。しかし、この方法による場合には、不
安定な溶媒であ゛るテトラヒドロ７ランに安定剤として
添加されている微量の２．６−ジ−ターシャリ−ブチル
−ｐ−クレゾールが目的成分に混入することも考えられ
、この分離を行うための操作が更に必要となる。本発明
においては、比較的化学的安定性が悪く、安定剤を含む
テトラヒドロフランを使用せず、アセトン、メテルアル
ー−ル及び水の混合液を溶離液とすることにより更に効
率よく高純度のエイコサペンタエン酸及びドコサヘキサ
エン酸を分離精製するものである。

以下、本発明につき詳しく説明する。

本発明に係るエイコサペンタエン酸及びドコサヘキサエ
ン酸の分離精製方法は１分子当り２０個以上の炭素原子
を有しかつ３個以上の２重結合を、有する長鎖高度不飽
和脂肪酸を含有する脂肪ｌｌＩ混金物ｔｆｔ、、は前記
長鎖高度不飽和脂肪酸のエステルを含有するエステル混
合物を％８個乃至２８個の炭素原子を有するアルキル基
をシリカに化学結合させた充填剤を充填した逆相分配層
カラムを用いて、（１）アセトｙ、（２）メチルアルコ
ール及び（３）水の混合液を溶離液として展開し、エイ
：ｆｔインタエン酸又はそのエステル、次いでドコサヘ
キサエン酸又はそのエステルを順次溶出させるものであ
為。

この場合、使用する出発物質は、兼備高度不飽和脂肪酸
を含有する脂肪酸混合物又状長鎖高度不飽和脂肪酸のエ
ステルを含有するエステル混合物である。

長鎖高度不飽和脂肪酸は海食動植物油ａｒｃ多量に含有
されて゛いるから、このような油脂を加水分解して得ら
れゐ脂肪酸混合物を使用することが好都合である。海産
動物としては魚類、軟体動物。

諌皮動物シよび節足動物を挙げることができ、海産植物
としては海藻および単細胞藻類を挙げることができる。

これらの動植物体そのものだけでなく、それらの加工廃
棄物からも油脂を抽出することがで１１ゐ。

このような動植物体から有機溶剤を用いて抽出した脂質
は、水酸化カリウムのよりなカセイアルカリのアル；−
ル溶涼でけん化し、けん化反応漬から石油エーテルで夾
雑する不けん化物を抽出して除去し、次いで水層を鎖酸
たとえば塩酸で酸性とすれば脂肪酸混合物が得られる。

このようにしで得られる脂肪酸混合物をそのまま、本発
明の出発物質とすゐことかで裏るが、さらにこの脂肪酸
混合物を後処理することによって、本発ｗＡによる分離
精製の能率および効果を改善することができる。その後
処理方法の１つは、前記のようにして得られた脂肪酸混
合物を有機溶剤で処理して脂肪酸を抽出し、その抽出液
を常法によって脱水し、減圧下で有機溶剤を蒸発させる
ことによって脂肪酸混合物を濃縮する方法である。もう
１りの後処理方法は、前記のようにして濃縮した脂肪−
金物をエステル化処理してエステル混合物とし、それを
本発明の出発物質として利用する方法である。

エステル化処理はエステル化の慣用方法によって行なう
ことができるが、塩化水素を高濃度に含有するアルカノ
ールで処理して、アルキルエステルとするか、もしくは
三フフ化ホウ素メタノールで処理して、アルキルエステ
ルとすることが好ましい。しかし脂肪酸をエステル化す
為ためのアルコール成分はアルカノールに限る必要はな
く、脂肪族の不飽和アルコール、芳香族の飽和アルコー
ルおよび芳香族の不飽和アルコールを使用して％さしつ
かえない。

更に、本発明においては上記脂肪酸混合物又は脂肪酸エ
ステルの混合物を蒸留法、尿素付加法等によって処理し
、エイコサペンタエン酸及びドコサヘキサエン酸の含有
量を高めた本のも出発物質として使用できる。

また、本発明にシいて使用するカラム充填剤紘８個乃至
３８個の炭素原子を有するアルキル基をシリカに化学結
合させたものである。

シリカには種々の形態のものがあることは周知のと＞６
であるが、本発明では任意Ｏ形態のシリカを使用するこ
とができる。また各種の形態のシリカの混合物を使用す
るとともでＩＩゐ。

シリカに化学結合させるアルキル基は、８個ないし３８
個の炭素原子を有するものが適轟であ養が、シリカに１
２個ないし１！４個の炭素原子を有するアルキル基を化
学結合させれば、本発明の効果を十分に発揮することが
できる。

またシリカに化学結合させるべき上記のアルキル基の量
拡、５〜３０重量−程度が適尚であるが。

なかで％数１０〜２５重量％のアルキル基をシリカに化
学結合させれば、本発明の効果を十分に発揮することが
できる。

本発明においては１、シリカに化学結合１せたアルキル
基と移動相（溶離液）、との間で長鎖高度不飽和脂肪酸
が分配作用をくりかえして、エイコサペンタエン酸とド
コサヘキサエン酸が分離精製されるものと推察される。

シリカに上記のアルキル基、特にオクタデシル基を化学
結合させる方法は、次の二つの結合様式がある。一つは
微量の水分を含ませた状態で、オクタデシルトリクロロ
シランを担体（シリカ）表面のシラノール基に反応させ
る方法である。もう一つの方法はまずジメチルジクロ四
シツンと担体（シリカ）表面のシラノール基を反応させ
九後。

水分の存在下でオクタデシルトリクロロシランを反応さ
せ石方法である。前者では担体（シリカ）表面のシ胃キ
ｔン結合がまず加水分解されてシラノール基になり、こ
れにトνり四四シツンが反応するものと考−見られ、オ
クタデシル基の性質が顕著に現われてくる。一方、後者
はシリコーンｆリマーに類似した構造をとる。

また１本発明において使用する溶離ｍｕアセトン、メチ
ルアルコール及び水の３者の混合物であり、この３者混
合物を溶離液として用いることにより、本発明の目的を
達成し得るものである。この溶離液を構成する各成分の
混合割合は広範囲にわたって変更することができるが、
ア竜トン１０〜３０容量嘔、メチルアルー−ル６０〜７
ｓ容量チ、水１０〜［０容量チ、特にアセトｙ１ｇ−２
０容量チ、メチルアルコール６０〜７０容量チ、水１５
〜２６チとすることが好ましい。

また、本発明におけゐ溶出操作は通常のカラムり冒マト
ダラフイーにおけゐ溶出操作に準じて行うことがで１１
ゐが、長鎖高度不飽和脂肪酸の純度を低下させゐ東件（
たとえば高温度）のもとにおける溶出操作は避けること
が好ましい。

表お、得られたエイコサペンタエン酸又はそのエステル
の溶液及びドコサヘキサエン酸又はそのエステルの溶液
はそれぞれ常法によって処理して、エイコサペンタエン
酸又はそのエステルならびにドコサヘキサエン酸又はそ
のエステルを回収することができる。

以上説明したように、本発明は１分子当秒２０備以上の
炭素原子を有しかつ３個以上の２型締合を有する長鎖高
度不飽和脂肪酸を含有する脂肪酸搗合物又状前記高度不
飽和脂肪酸のエステルを含有するエステル混合物を、８
個乃至２８個の炭素原子を有するアルキル基をシリカに
化学結合させた逆相分配型充填剤を充填し九カラムを用
いて、アセトン、メチルアルコール及び水の混合液を溶
離液として展開し、エイコサペンタエン酸又はそのエス
テル、次いでドコサヘキサエン酸又はそのエステルを順
次溶出させよう構成したことにより、動車よく高純度の
へキサペンクエン酸及びドコサヘキサエン酸を分離精製
することができるものである。

即ち、本発明によれば溶離液にアセト／、メチルアルコ
ール及び水の混合物を使用するものであるが、これらの
溶媒はいずれも純度の曳いものが安価に入手でき、しか
％ｅ、れらの漕媒唸化学的に朱定で、かつ目的物質から
分離、除去すゐことも容易に行い得、テトラヒドロフラ
ンを用いる鳩舎のようにその中に添加されている安定剤
の除去等を考慮する必要もなく、都合の良いものである
。

また、本発明によれば硝酸銀を食浸し′たケイ酸を使用
するよりも、はるかに短時間内に灸量の高Ｍ［の壬イコ
サペンタエン酸およびＰコサへキサエン酸あるいはそれ
らのエステルを得ることができる。たとえばエイコサペ
ンタエン＠ｏ１ｓｔとドコサヘキサエン酸の８．４ｖを
得るために、前者では約５日間を必要とするが、本発＠
Ｏ方法によればわずかに約１３時間を必要とするにすぎ
ず。

しかも硝酸銀を含浸したケイ酸を使用する方法よりも処
理過程が簡単である。

また更に、本発明によれば分離精製は外界と比較的纏蔽
されたカラム中で行われるため、エイコサインクエン酸
及びドコサヘキサエン酸あ集いはそれらのエステルを酸
素とあまり接触畜せることなく処理する仁とができるの
で、高純度の目的物を得ることかで暑る。

更に、本発明に使用する８個ないし２８個の炭素原子を
有するアルキル基を化学結合させたシリカよりなる充填
剤は、簡単に再生して使用することができるので、経済
的である。（硝酸銀を含浸したケイ酸社再生することが
できないので、不経済なものである。） 上記のように、本発明の分離精製方法は種々の利点を有
するため、工業的に大規模に実施すゐためには極めて好
適な方法である。

以下、実施例及び比較例により１本発明を更に具体的に
説明する。

〔実施例１〜５、比較例１〜３〕 エイコサペンタエン酸メチル３０嘔とドコサヘキサエン
酸メチル５Ｏｔｓを含有すゐ脂肪酸メチルエステル混合
物中のエイコサインクエン酸を高速液体クロマトグラフ
によって単離精製した。使用機器としてウォーターズ社
ＩＩＯ大量分取専用高連涼体りｐマトダツフシステムＳ
ＯＯを用いた。システム５０００仕様を下記に示す。

葎）溶媒供給送液部 ボンデ：形式　２連ｅストｙ式 流量　ｏ、ｏｓ−ｏ、ｓｔ７分（？ｉ０Ｍ／分）伽）サ
ンプル注入部： オンカラム注入方式 （（１）　　カラム部：分取ノダツクカーＦリッジカラ
ムｆラム外筒　特殊−リエチレン サイズ　５．７国φ×３０ｃＩ１１ タイプ　カラム壁全藺加圧方式。

ディスｌ−デル 充填剤充填量　　　　３１０を 液体容量　　　　　　４６０− 加圧チャンパー：分取ノ臂ツク５００　　：ｘｙデレツ
シ璽ンチャンΔ− （ｄ）　　検出ａ部 示差屈折計 前記のメチルエステル誘導体混合物を前記のウォーター
ズ社製大量分取専用高速液体り田マドグラフシステムＳ
ＯＯに注入した。

分離条件を下記に示す。

分離条件 溶離濱；下表に示す組成のものを使用した。

流　量：２００ｄ／分 注入量−一８を 分離分取時間；３０分 所要時間−カラム平衡　　　　４分 サンプル注入　　　　２分 分離１分取　　　３０分 合計　　　　３６分 エイフサペンタエン酸メチル及びド：ｔ？ヘキナ工ン瞭
メチルの保持比はあｔｂ差がないため、両者の一一夕は
完全に分離し得す、第１．！図に示すような幅広いぜ−
りとなった。そこで、この、−一りを図中の各番号で示
す溶出両分に分割し、これらの溶出画分を減圧下に薄膜
式フ２ツシエエパボレーター（又ハ四−タリーエパポレ
ーター）＆ｅ装入して蒸発させ、濃縮された両分をヘキ
サンで抽出し、ロータリーエバーレータ−によ）減圧下
でヘキサンを留去した。７ツス；内０！ＩＩ留物中のエ
イコサペンタエン酸メチルの純度及び収率は下記の逸す
である。なお、純度はガスク胃マトダラフイーによって
算出した。

なお、実施例１の場合、ＳＷ分に分画し、画分３でエイ
冨すペンタエン酸純度１０＠０ものが得られ、実施例２
の場合、１０両分に分画し１画分５で９１チのものが得
られた。同様にして、適宜分画して各両分中のエイコサ
ペンタエン酸メチルの純度を求め、その最高純度の値を
上記表に示した。

これに対して、メチルアルコールと水を溶離液とした場
合には（比較例１．２）第３図又は第４図に示すように
両エステルの分離が悪＜、ｔたアセトンと水を溶離液と
した場合には（比較例３）第５図に示すように−一りが
得られなかった。なシ、これらのり困マトグツムを得る
際のチャートスぜ一ドは２分関尚り１目盛であった。

【図面の簡単な説明】

第１．．２図はアセトン、メチルアルコール及び水の混
合液を溶離液とした場合、第３．４図はメチルアル；−
ル及び水の混合液を溶離液とし九場合、＠５図はアセト
ン及び水の混合液を溶離液とした場合の大量分取専用高
速液体クロマトグラフによるエイコサペンタエン酸メチ
ルとドコサヘキサエン酸メチルとの分離状態を示すクロ
マトグラムである。 時間（分）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １分子当、？２０個以上の炭素原子を有しかつ３個以上
   の２型締合を有する長鎖高度不飽和脂肪酸を含有すゐ脂
   肪酸混合物又状前記高度不飽和脂肪酸のエステルを含有
   するエステル混合物を％８個乃至２８個の炭素原子を有
   するアルキル基をシリカに化学結合させた逆相分配型充
   填剤を充填したカラムを用いて、アセトン、メチルアル
   コール及び水の滉舎液を溶離液として展開し、エイコサ
   ペンタエン酸又はそのエステル、次いでドコサヘキサエ
   ン酸又はそのエステルを順次溶出させることを特徴とす
   るエイコサペンタエン酸又はそのエステルとドコサヘキ
   サエン酸又はそのエステルの分離精製方法。