JPH10251296A - ソマトスタチン拮抗薬として有用なペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 純粋なソマトスタチン拮抗薬活性を有するペ
プチドを提供すること。 【解決手段】 構造 【化１】 ［式中、ＡＡ₂はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ又はＨｉｓの
ＤもしくはＬ異性体であり；ＡＡ₃は場合により１つ又
はそれ以上のＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂基で置換されている
ことができる直鎖状もしくは分枝鎖状アルキルアミノ酸
のＤ異性体であり；ＡＡ₄はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、
Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ又は
ＴｒｐのＤもしくはＬ異性体であり；ＡＡ₅はＴｒｐ、
Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ又はＣｙｓのＤもしくはＬ異性
体であり；ＡＡ₆はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、
Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ａｓｎ又はＴｈｒの
ＤもしくはＬ異性体であり、但しＡＡ₂、ＡＡ₄、ＡＡ₅
又はＡＡ₆の１つだけがＬ異性体であることができ；
ｍ、ｎ及びｐはそれぞれ独立して０又は１であり、但し
ｍ、ｎ及びｐの１つだけが０であることができる］を有
するペプチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の背景】テトラデカペプチドである哺乳類のソマ
トスタチンは、下垂体からの成長ホルモンの放出を阻害
する。それはさらにランゲルハンス島細胞からのインス
リン及びグルカゴンの放出を阻害し、胃の酵素の分泌を
阻害し、免疫機能を阻害する。多数の生理学的効果の調
節におけるホルモンの機能の推定を助けるために、ソマ
トスタチン作用薬及び拮抗薬は絶えず求められている。
特に、ホルモンとそのレセプター部位において競合して
成功する化合物であろう純粋なソマトスタチン拮抗薬は
非常に興味深い。この化合物はソマトスタチンの阻害効
果を遮断するのに用いることができ、それが今度は成長
ホルモン、インスリン、グルカゴン及び胃の酵素の放出
を増加させ、免疫機能を増強させるであろう。部分的ソ
マトスタチン拮抗薬活性、すなわち、いくらかの作用薬
効果、いくらかの拮抗薬効果を示す化合物が発見された
が、純粋なソマトスタチン拮抗薬はまだ探索中である。

【０００２】従って、本発明の目的は、純粋なソマトス
タチン拮抗薬活性を有するペプチドを提供することであ
る。

【０００３】本発明の他の目的は、ソマトスタチンの効
果を減少させるための方法を提供することである。

【０００４】本発明のさらなる目的は、哺乳類における
成長ホルモン、インスリン、グルカゴン及び胃の酵素の
放出を増加させるための、ならびに哺乳類における成長
及び免疫機能を増進させるための方法を提供することで
ある。

【０００５】本発明の１つの特長は、食肉動物の成長増
進を有効に及び容易に得られることである。本発明の利
点は、純粋なソマトスタチン拮抗薬活性を有するペプチ
ドが逆作用薬（ｉｎｖｅｒｓｅ ａｇｏｎｉｓｔ）活性
も示し、すなわち、ソマトスタチンレセプターによる構
成的シグナリングを遮断することである。本発明の他の
特長及び利点は下記に示す詳細な記載において明らかに
なるであろう。

【０００６】

【発明の概略】本発明は構造

【０００７】

【化２】

【０００８】［式中、ＡＡ₂はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
又はＨｉｓのＤもしくはＬ異性体であり；ＡＡ₃は場合
により１つ又はそれ以上のＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂基で置
換されていることができる直鎖状もしくは分枝鎖状アル
キルアミノ酸のＤ異性体であり；ＡＡ₄はＡｒｇ、Ｌｙ
ｓ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ、Ｉｌ
ｅ、Ｐｒｏ又はＴｒｐのＤもしくはＬ異性体であり；Ａ
Ａ₅はＴｒｐ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ又はＣｙｓのＤ
もしくはＬ異性体であり；ＡＡ₆はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ａ
ｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ａｓ
ｎ又はＴｈｒのＤもしくはＬ異性体であり、但しＡ
Ａ₂、ＡＡ₄、ＡＡ₅又はＡＡ₆の１つだけがＬ異性体であ
ることができ；ｍ、ｎ及びｐはそれぞれ独立して０又は
１であり、但しｍ、ｎ及びｐの１つだけが０であること
ができる］を有するペプチド又は製薬学的に許容され得
るその塩を提供する。

【０００９】本発明はソマトスタチンの効果を減少させ
るための方法も提供する。さらに、哺乳類における成長
ホルモン、インスリン、グルカゴン及び胃の酵素の放出
を増加させるための、ならびに哺乳類における免疫機能
及び成長増進のための方法を提供する。

【００１０】

【発明の詳細な記載】哺乳類のソマトスタチンは下垂体
からの成長ホルモンの放出及びランゲルハンス島細胞か
らのインスリン及びグルカゴンの放出を阻害する。それ
は哺乳類における多数の他の内分泌腺、胃腸及び免疫機
能への阻害効果も有する。純粋なソマトスタチン拮抗薬
はソマトスタチンの阻害効果を有効に遮断するのに用い
ることができ、それは成長ホルモンの量を増加させ、そ
れが今度は食肉動物などの哺乳類の成長を向上させる。

【００１１】さらに、純粋なソマトスタチン拮抗薬は免
疫機能の阻害を逆転させることができ、かくしてストレ
スに満ちた環境における哺乳類の免疫機能を増進させる
か、又はワクチンにおけるアジュバントとして働く。従
って、純粋なソマトスタチン拮抗薬は、ソマトスタチン
活性の逆転が有益である人又は動物の疾患、例えば胃腸
もしくは食障害、糖尿病、脳機能障害などの処置に有用
であり得る。異常に高い構成的ソマトスタチンレセプタ
ー活性が哺乳類において疾患状態に導くような場合、有
効量の逆作用薬を用いる処理は状態を逆転させ得るが、
中性拮抗薬（ｎｅｕｔｒａｌ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ）
は効果がないであろう。

【００１２】驚くべきことに、今回、ソマトスタチンの
効果の減少のために単独で有用なペプチドが見いだされ
た。該ペプチドは構造

【００１３】

【化３】

【００１４】［式中、ＡＡ₂はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
又はＨｉｓのＤもしくはＬ異性体であり；ＡＡ₃は場合
により１つ又はそれ以上のＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂基で置
換されていることができる直鎖状もしくは分枝鎖状アル
キルアミノ酸のＤ異性体であり；ＡＡ₄はＡｒｇ、Ｌｙ
ｓ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ、Ｉｌ
ｅ、Ｐｒｏ又はＴｒｐのＤもしくはＬ異性体であり；Ａ
Ａ₅はＴｒｐ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ又はＣｙｓのＤ
もしくはＬ異性体であり；ＡＡ₆はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ａ
ｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ａｓ
ｎ又はＴｈｒのＤもしくはＬ異性体であり、但しＡ
Ａ₂、ＡＡ₄、ＡＡ₅又はＡＡ₆の１つだけがＬ異性体であ
ることができ；ｍ、ｎ及びｐはそれぞれ独立して０又は
１であり、但しｍ、ｎ及びｐの１つだけが０であること
ができる］を有するか又は製薬学的に許容され得るその
塩である。

【００１５】式（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の環状ペプチド
は通常の方法で描かれている。式（ＩＩ）のペプチドは
ジスルフィド結合を介して環化しているが、式（ＩＩ
Ｉ）のペプチドはヒスチジンのアミノ末端がＡＡ₆のカ
ルボン酸末端に結合して環化しているアミドである。

【００１６】有利なことに、本発明のペプチドは逆作用
薬活性を示す。かくして独特の結合又はシグナリング性
により、本発明のペプチドが純粋な拮抗薬として作用し
ながら内在性ソマトスタチンに無関係に、固有のソマト
スタチンレセプター活性を遮断することが可能になる。
すなわち、逆作用薬はソマトスタチンの阻害効果の遮断
に加えて及びソマトスタチンの存在又は不在に無関係に
ソマトスタチンレセプターに効果を有する。

【００１７】「製薬学的に許容され得る塩」という用語
は、人及び獣医学的製薬工業において通常用いられる無
毒性酸付加塩又は金属錯体を示す。酸付加塩の代表的例
は酢酸、乳酸、パモ酸、マレイン酸、クエン酸、リンゴ
酸、アスコルビン酸、コハク酸、安息香酸、パルミチン
酸、スベリン酸、サリチル酸、酒石酸、メタンスルホン
酸、トルエンスルホン酸などの有機酸；タンニン酸、カ
ルボキシメチルセルロースなどのポリマー酸；ならびに
塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸などの無機酸である。
金属錯体には亜鉛、鉄などが含まれる。

【００１８】ペプチドのアミノ酸残基に関して用いられ
ている記号は当該技術分野において通常用いられる略字
であり、下記に示される対応表に挙げられるものが含ま
れるが、これらに限られるわけではない。

【００１９】

【表１】

【００２０】さらに、明細書及び特許請求の範囲で用い
られる略字Ａｃはアセチル基、ＣＨ₃ＣＯ−を示す。

【００２１】本発明の好ましいペプチドは、式Ｉ又は式
ＩＩＩ

【００２２】

【化４】

【００２３】［式中、ＡＡ₂、ＡＡ₃、ＡＡ₄、ＡＡ₅、Ａ
Ａ₆、ｍ、ｎ及びｐは上記で記載された通りである］の
構造を有するペプチドである。

【００２４】本発明のさらに好ましいペプチドは、ｍ、
ｎ及びｐがそれぞれ１である式Ｉの構造を有するペプチ
ドである。

【００２５】本発明の特に好ましいペプチドは、アミノ
酸ＡＡ₂、ＡＡ₄、ＡＡ₅、ＡＡ₆がそれぞれ独立してＤ−
異性体である式Ｉ又はＩＩＩの構造を有するペプチドで
ある。

【００２６】最も好ましいものは、ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔ
ｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又
はＶａｌのＤ−異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙ
ｓのＤ−異性体であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ
−異性体であり；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性
体である式Ｉ又はＩＩＩの構造を有するペプチドであ
る。

【００２７】本発明の最も特別に好ましいペプチドは Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【００２８】

【化５】

【００２９】である。

【００３０】式Ｉの構造を有する本発明のペプチドは、
引用することによりその記載事項が本明細書の内容とな
るＵ．Ｓ．４，６３１，２１１に、又はＮａｔｕｒｅ，
３５４，８４−８６，１９９１においてＲ．Ａ．Ｈｏｕ
ｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．により記載されているような
合成組み合わせペプチドライブラリ（ｓｙｎｔｈｅｔｉ
ｃ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｌ
ｉｂｒａｒｙ）から製造することができる。例えば、組
み合わせ混合物中のペプチドのすべてをＮ末端において
アセチル化し、Ｃ末端においてアミド化し、Ｏが限定さ
れたＤ−アミノ酸を示し、Ｘが２０個のＤ−アミノ酸の
すべての無作為な混合物を示すＡｃ−Ｏ−Ｏ−Ｘ−Ｘ−
Ｘ−Ｘ−ＮＨ₂を形成することができる。次いで混合物
をソマトスタチン活性に関して生物学的にアッセイする
ことができる。ソマトスタチン活性を示す混合物に関
し、合成、集合（ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ）、混合、等量分
割（ｄｉｖｉｄｉｎｇ ｅｑｕａｌｌｙ）、脱保護、中
和及び樹脂からの切断の過程を繰り返す。これは今度は
最初の３つのＤ−アミノ酸が限定されている構造Ａｃ−
Ｏ−Ｏ−Ｏ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−ＮＨ₂を有するペプチドを生
ずる。このペプチド混合物を次いでソマトスタチン活性
に関してアッセイし、上記の合成過程を続け、６個のＤ
−アミノ酸残基のすべてが限定されるまで繰り返す。こ
の方法はＳｃｉｅｎｃｅ ２６６，２０１９−２０２２
（１９９４）においてＣ．Ｔ．Ｄｏｏｌｅｙ ｅｔ ａ
ｌ．により記載されている方法と類似であり、該文献は
引用することによりその記載事項が本明細書の内容とな
る。

【００３１】式ＩＩ及び式ＩＩＩの環状構造を有する本
発明のペプチドは、引用することによりその記載事項が
本明細書の内容なとるＶｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ
ｕｒｅ，２９２，５５−５８（１９８１）；ＭｃＣｕｒ
ｄｙ，Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．Ｉ
Ｉ，１４７−１５２（１９８９）；及びＡｔｈｅｒｔｏ
ｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋ
ｉｎ Ｉ，２０５７−２０６４（１９８５）に記載され
ている方法などの通常の方法に従って製造することがで
きる。

【００３２】有利なことに本発明のペプチドは、哺乳類
のソマトスタチンの効果を減少させ、それにより哺乳類
における成長ホルモン、インスリン、グルカゴン及び胃
の酵素の生産を増加させ、哺乳類における免疫機能及び
成長を増進させるために用いることができる。さらに、
本発明のペプチドは逆作用薬として作用し、それにより
構成的に活性な突然変異ソマトスタチンレセプターの悪
影響を遮断することができる。

【００３３】実施においては、成長ホルモン放出のソマ
トスタチン阻害を遮断し、それにより標的種の成長を有
効に促進するために本発明のペプチドを用いることがで
きる。例えば、式Ｉのペプチドを哺乳類に有効比率で投
与すると、哺乳類宿主における成長ホルモン、インスリ
ン、グルカゴン及び胃の酵素の量を増加させることがで
きる。有効比率は標的宿主、投与手段、宿主の健康状
態、宿主環境などに従って変化するであろう。典型的な
有効比率は１日に哺乳類の体重１ｋｇ当たり約２ｘ１０
^-6ｍｇ〜１０．０ｍｇの投薬量を含む。該ペプチドは飲
料水中で又は飼料添加物の形態で、あるいはボーラス、
丸薬、錠剤、経口用ジェル、経口用ペースト、経口用ド
レンチなどとして経口的に投与することができる。非経
口的筋肉内、皮下、腹腔内又は静脈内注射によるかある
いは経皮的適用、鼻内噴霧又は体内埋植物としての投与
も意図されている。

【００３４】本発明のもっと明白な理解を与えるために
以下の特定の実施例を下記に示す。これらの実施例は単
に例示であり、本発明の範囲及びその基礎となる原理を
いかようにも制限すると理解されるべきではない。実際
に、本明細書に例示され、記載されているものの他に種
々の本発明の修正が、以下の実施例及び前記の記載か
ら、当該技術分野における熟練者に明らかになるであろ
う。そのような修正も添付の特許請求の範囲内に含まれ
るものとする。

【００３５】ＳＲＩＦという用語はソマトスタチンを示
す。

【００３６】

【実施例】実施例１ 合成ペプチド混合物の調製 合成組み合わせペプチドライブラリを、引用することに
よりその記載事項が本明細書の内容となるＲ．Ａ．Ｈｏ
ｕｇｈｔｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５４，
８６−８６（１９９１）に記載されている通り、メチル
ベンズヒドリルアミン（ＭＢＨＡ）、ポリスチレン樹脂
及び標準的ｔ−ｂｏｃ化学を用いて調製する。これは、
引用することによりその記載事項が本明細書の内容とな
るＵ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．４，６３１，２１１に
記載されている同時多重ペプチド合成（ｓｉｍｕｌｔａ
ｎｅｏｕｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ）と組み合わせて行う。

【００３７】簡単には、それぞれ等量のＭＢＨＡ樹脂を
含有する２０個の多孔質ポリプロピレンパケットを２０
種の保護Ｄ−α−ｔ−Ｂｏｃアミノ酸（２０種の天然の
Ｌ−アミノ酸のＤ−エナンチオマー）のそれぞれとカッ
プリングさせる。カップリング反応を完了させ、続いて
それぞれのパケットの樹脂のすべてを集合させ、混合す
る。次いでこの混合物を２０個の新しいポリプロピレン
パケット中に等しく分割し、続いてＤ−α−ｔ−Ｂｏｃ
保護基を除去し、得られるアミンＴＦＡ塩を中和する。
この合成、集合、混合、等量分割、脱保護及び中和の過
程を４回繰り返す。得られる混合物は樹脂にカップリン
グした２０種のＤ−アミノ酸の４量体ペプチドのそれぞ
れの組み合わせ又は１６０，０００種のペプチドを等モ
ル量含有する。混合物を５回目の合成のために再度２０
個のパケット中に分割する。今回は、２０個のパケット
のそれぞれ（ここにおいて最後のアミノ酸の同定は既知
である）を２０個のパケット中に等しく分離し、合計４
００個のパケットを得る。最後（６回目）の合成は４０
０種のペプチドの混合物を与え、そのそれぞれを脱保護
し、多重ＨＦ切断装置（Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉ
ｄｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）で
低−高フッ化水素（ｌｏｗ−ｈｉｇｈ ｈｙｄｒｏｇｅ
ｎ ｆｌｕｏｒｉｄｅ）を用いて樹脂から切断し、水を
用いて抽出する。ペプチドをすべてＮ−末端においてア
セチル化し、Ｃ−末端においてアミド化し、５ｍｇ／ｍ
Ｌの濃度で水に溶解する。４００種の混合物のそれぞれ
はＡｃ−Ｏ−Ｏ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−ＮＨ₂の形態の１６
０，０００種のペプチドを含有し、ここでＯは限定され
たＤ−アミノ酸を示し、Ｘは２０個のＤ−アミノ酸のす
べての無作為な混合物を示す。

【００３８】生物学的アッセイにおいてＳＲＩＦ拮抗薬
活性を示す混合物に関し、３回の合成の場合のみに樹脂
のパケットを集合させ、混合し、分割し、３回の合成の
場合はそのままに保つ以外は最初の４００個の試料と本
質的に同じ方法で２０個の新しい試料を調製する。かく
して得られるそれぞれのペプチドは構造Ａｃ−Ｏ−Ｏ−
Ｏ−Ｘ−Ｘ−Ｘ−ＮＨ₂を有し、それにより最初の３つ
のＤ−アミノ酸の位置が限定される。混合物を再度ＳＲ
ＩＦ拮抗薬活性に関して特性化し、続いてこの合成過程
をさらに３回行い、それによりＤ−アミノ酸ペプチド六
量体の６つの位置のすべてが完全に限定された試料が単
離されるまで追加のアミノ酸を完全に限定し、生物学的
活性に関して評価する。（引用することによりその記載
事項が本明細書の内容となるＣ．Ｔ．Ｄｏｏｌｅｙ，ｅ
ｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６６，２０１９−２０
２２，１９４４を参照されたい。）実施例２ ＳＲＩＦに応答して成長するＳＲＩＦレセプターを発現
するＳ．セレビシアエ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）
（酵母）細胞を用いるＳＲＩＦ拮抗薬アッセイ ＳＲＩＦが加えられた下で成長しているＬＹ３６４細胞
を含有する寒天プレートが感受性ＳＲＩＦ拮抗薬アッセ
イのための基礎であり、それにより寒天プレートの表面
にＳＲＩＦ拮抗薬を添加すると成長阻害の領域が生ずる
（引用することによりその記載事項が本明細書の内容と
なるＬ．Ａ．Ｐｒｉｃｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，
１５，６１８８−６１９５，１９９５を参照された
い）。

【００３９】このアッセイにおいては、ＬＹ３６４細胞
を、グルコース（２％）を含み、ウラシル及びトリプト
ファンを含まない２ｍＬの合成完全（ＳＣ）培地（アミ
ノ酸及び硫酸アンモニウムを含まない３．４ｇ／ＬのＹ
ＮＢ、１０ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム、ならびに１．４
ｇ／ＬのＣＳＭ−ｕｒａ−ｔｒｐ）中で終夜成長させ
る。これらの細胞を洗浄し、乳酸塩（３％）を含み、ウ
ラシル及びトリプトファンを含まない５ｍＬのＳＣ培地
中で４〜８時間培養し、最後にガラクトース（２％）を
含み、ウラシル及びトリプトファンを含まない５ｍＬの
ＳＣ培地中で終夜成長させる。ガラクトース（２％）を
含み、ウラシル、トリプトファン及びヒスチジンを含ま
ない溶融（５０℃）ＳＣ寒天培地をＫＯＨを用いてｐＨ
６．８に調節し、１ｍＬ当たり２ｘ１０⁴個の細胞及び
ＳＲＩＦ（Ｓ−１４、１０ｎＭ）と混合し、正方形（２
０ｘ２０ｃｍ）のペトリ皿中に注ぐ。無菌の円形濾紙を
寒天の表面上に置き、５ｍｇ／ｍＬの試験ペプチドを含
有する１０μＬの水又はＤＭＳＯで飽和させる。３日
後、プレートは加えられたＳＲＩＦに応答して成長する
ＬＹ２６４細胞の均一な曇った背景を示す。寒天を通っ
て放射状に拡散する試験ペプチドは、円形濾紙の回りの
成長阻害の透明な領域により、ＳＲＩＦ拮抗薬活性を示
す。その直径（ｍｍ）の測定によりこの領域を定量し、
それはＳＲＩＦ拮抗薬の力価に従って変化する。最大の
阻害の領域を示すペプチド又はペプチドの混合物をさら
に特性化する。

【００４０】表Ｉは酵母ＳＲＩＦ拮抗薬アッセイにおけ
る試験ペプチド及びペプチド混合物の活性を示す。酵母
の成長はアッセイによりいくらか変化するので、同じ実
験における試料の中で値を比較する。他の型よりペプチ
ドの混合物の複雑さが進んでいない最初の５つの試料の
型の場合、このアッセイは、どの試料が続く合成の基礎
を形成するかの選択における一次決定因子である。

【００４１】プレートは３日後に読まれる。表Ｉにおい
てボールド体で示されている試料をさらなる合成のため
に選択する。表Ｉにおいて、すべてのアミノ酸はＤ−ア
ミノ酸であり、ダッシュは限定されないアミノ酸残基を
示す。

【００４２】

【表２】

【００４３】

【表３】

【００４４】

【表４】

【００４５】実施例３ サイクリックＡＭＰ堆積を介した試験管内におけるＳＲ
ＩＦ拮抗薬の機能的活性の評価 哺乳類細胞へのＳＲＩＦの一次効果は、アデニリルサイ
クラーゼの阻害を介したサイクリックアデノシン３’，
５’−モノホスフェート（ｃＡＭＰ）量の減少である。
これはＳＲＩＦ作用薬及び拮抗薬に関する通常のアッセ
イの基礎であり、この場合ＳＲＩＦ作用薬は人工的に刺
激されるｃＡＭＰ量を減少させ、ＳＲＩＦ拮抗薬はＳＲ
ＩＦの効果を逆転させる。ラット下垂体腫瘍細胞系ＧＨ
₄Ｃ₁は主にＳＳＴＲ２を発現し、ＳＲＩＦに、及びアデ
ニレートサイクラーゼの刺激剤であるフォルスコリンに
応答する（引用することによりその記載事項が本明細書
の内容となるＣ．Ｍ．Ｅｐｐｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６７，１５６０３−１５
６１２，１９９２を参照されたい）。クローニングされ
たラットＳＳＴＲ２をＧＨ₄Ｃ₁細胞にさらにトランスフ
ェクションすると、ＳＲＩＦ作用薬及び拮抗薬に関する
高度に感受性のアッセイが生ずる（引用することにより
その記載事項が本明細書の内容となるＬ．Ａ．Ｐｒｉｃ
ｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅ
ｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１５，６１８８−６１
９５，１９９５を参照されたい）。これはＳＲＩＦへの
応答を増加させ、ＳＲＩＦ拮抗薬活性の測定のためのさ
らに大きな動的範囲を与える。

【００４６】細胞の刺激。１０％の牛血清を含むＤＭＥ
Ｍ中で成長したＧＨ₄Ｃ₁／ＳＳＴＲ２細胞を、０．５ｍ
ＭのＥＤＴＡを含有するＰＢＳを用いて３７℃で数分間
インキュベーションすることにより組織培養皿から遊離
させる。細胞を誘導緩衝液（１００μＭのＩＢＭＸ（ｃ
ＡＭＰ破壊の阻害剤）及び２ｍＭのＣａＣｌ₂を含有す
るＰＢＳ）中で室温において洗浄し、誘導緩衝液中に２
ｘ１０⁶／ｍＬにおいて再懸濁させる。９６−ウェルト
レーの各ウェル中に誘導緩衝液中の２倍濃度の刺激剤の
５０μＬを加える。これらは（最終的濃度で）１．２５
μＭのフォルスコリン、１００ｎＭのＳＲＩＦ又は１０
ｎＭのＳＳＴＲ２−選択的作用薬ＭＫ６７８及び試験ペ
プチドを種々の濃度で含む。細胞の刺激を開始するため
に、５０μＬ（１００，０００個）の細胞を各ウェルに
加え、プレート震盪器上で１０秒間震盪させることによ
り混合し、３７℃で１５分間置く。刺激を停止させ、各
ウェルに１５μＬの０．３３Ｎ ＨＣｌを加えることに
より細胞をライシスし、プレートを３７℃で３０分間イ
ンキュベーションする。１５μＬの０．２５Ｎ ＮａＯ
Ｈ／５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ ｐＨ７．４を加えることに
より試料を中和する。フォルスコリン又はＳＲＩＦが加
えられていない試料においてベースラインのｃＡＭＰ量
を決定し、各処理を３重に行う。

【００４７】ｃＡＭＰアッセイ。試料中の堆積したｃＡ
ＭＰを測定するために、ラジオイムノアッセイを用い
る。シンチレーション近似アッセイ（ｓｃｉｎｔｉｌｌ
ａｔｉｏｎ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ａｓｓａｙ）（ＳＰ
Ａ，Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇ
ｈｔｓ，ＩＬ）は、遊離の放射性リガンドから結合した
放射性リガンドを分離することなく、特異的抗体に結合
した¹²⁵Ｉ ｃＡＭＰを迅速に測定できるようにする。
９６−ウェルトレーのウェル当たりに以下の試薬のそれ
ぞれ（５０μｌ）を加える：細胞刺激からの上澄み液；
¹²⁵Ｉ ｃＡＭＰ；サル抗−ウサギＩｇＧ抗体に共役さ
せたＳＰＡビーズ；ならびにウサギ抗−ｃＡＭＰ抗体。
標準曲線のために、既知の量のｃＡＭＰ（０．２〜１
２．８ピコモル）を細胞上澄み液の代わりに加える。９
６−ウェルトレーを密閉し、室温で終夜震盪させ、Ｍｉ
ｃｒｏＢｅｔａ液体シンチレーションカウンター（Ｗａ
ｌｌａｃ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）において
結合した放射性リガンドに関して測定する。ｃＡＭＰ標
準に関して測定されたｃｐｍ対そのｌｏｇ濃度の非線形
回帰（指数減衰）分析を行うことにより、各実験に関し
て標準曲線を決定し、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｇｒａ
ｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄ
ｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いることにより試験試料の値を決
定し、それを表ＩＩ及び図１に示す。図１はペプチド１
の拮抗薬活性を示す。

【００４８】ＳＲＩＦ拮抗薬の固有の活性は、ＳＲＩＦ
又はＭＫ６７８によるＳＳＴＲ２活性化のパーセント逆
転であり、ここで０％はフォルスコリン及びＳＲＩＦ又
はＭＫ６７８で処理された試料におけるｃＡＭＰ量によ
り定義され、１００％はフォルスコリンのみで処理され
た後に測定されるｃＡＭＰ量である。従って試験化合物
の高い固有の活性は、該試験化合物の高い拮抗薬活性を
示す。表ＩＩＩはペプチド１の種々の類似物の固有の活
性を示す。

【００４９】図２（表ＩＶ）は、１０ｍＭのペプチド１
の存在下又は不在下で、Ｓ−１４又はＭＫ６７８のいず
れかの用量を増加させながらフォルスコリン刺激細胞に
おいてｃＡＭＰ量を測定する実験を示す。曲線が平行で
あることは、ペプチド１がＳＲＩＦ作用薬と直接競合し
ていることを示す。

【００５０】逆作用薬は、純粋な拮抗薬である（すなわ
ち作用薬活性がない）のみでなく、非占有レセプターの
構成的活性を遮断もする化合物である。逆作用薬活性の
１つの指標は、ＳＲＩＦが加えられない下でｃＡＭＰ量
を増加させるＳＲＩＦ拮抗薬の能力である。ペプチド１
のこの特質を図１（表ＩＩ）及び図２（表ＩＶ）に示
す。わかる通り、ペプチド１はＳＲＩＦの不在下におい
てさえフォルスコリン−刺激ｃＡＭＰ量を増加させる。

【００５１】

【表５】

【００５２】

【表６】

【００５３】

【表７】

【００５４】実施例４ ＳＲＩＦレセプターにおける試験ペプチドの競合的結合
活性の評価 膜調製。

【００５５】トランスフェクションされたＳＳＴＲ２及
びＳＳＴＲ５のｃＤＮＡクローンを発現する組織培養細
胞系を、¹²⁵Ｉ標識Ｓ−１４（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒ
ｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）に特異的に結
合する原形質膜の供給源として用いる。１ｍＭのＥＤＴ
Ａを含有するＰＢＳ中で４℃において５分間インキュベ
ーションすることにより細胞を培養皿から取り出し、ス
ピンダウンし（ｓｐｕｎ ｄｏｗｎ）（２，０００ｒｐ
ｍ、５’）、１５ｍＬの均質化緩衝液（１ｍＭの重炭酸
ナトリウム ｐＨ７．２、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭの
ＥＧＴＡ及び以下のプロテアーゼ阻害剤：５μｇ／ｍＬ
のロイペプチン及びアプロテニン、ならびに１００μｇ
／ｍＬのベンズアミジン及びバシトラシン）中に再懸濁
させる。氷上のＤｏｕｎｃｅホモジナイザーを用いて細
胞に２０ストロークを与え、２０００ｒｐｍで１０分間
回転させる。１７，０００ｒｐｍで３０分間遠心するこ
とにより膜を上澄み液から単離する。膜ペレットを１５
ｍＬの均質化緩衝液中で１回及び保存緩衝液（プロテア
ーゼ阻害剤を含有する２５ｍＭのＴｒｉｓ ｐＨ７．
４）中で１回洗浄する。各洗浄の後に１７，０００ｒｐ
ｍにおける３０分間の遠心が続く。膜ペレットを保存緩
衝液中に再懸濁させ、タンパク質濃度に関して測定し
（ＢｉｏＲａｄ，ＣＡ）、−８０℃において保存する。

【００５６】結合アッセイ。

【００５７】結合アッセイのためのすべての試薬を結合
緩衝液（５０ｍＭのＨｅｐｅｓ ｐＨ７．４、２ｍＭの
ＥＧＴＡ、５ｍＭのＭｇＣｌ₂及びプロテアーゼ阻害
剤）中に調製する。膜を氷上で解凍し、結合緩衝液の５
０μＬ当たり１〜５ｍｇのタンパク質に希釈する。¹²⁵
Ｉ標識Ｓ−１４（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉｎｇｔｏ
ｎ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）を結合緩衝液中で８０〜１
００，０００ｃｐｍ／５０μＬに希釈する。試験ペプチ
ド又は標準のいずれかの競合物を結合緩衝液中で最終濃
度の４倍において調製し、固体シンチラントを含有する
コムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）−結合ＰＶＣビーズ（ＳＰ
Ａビーズ、Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈ
ｅｉｇｈｔｓ，ＩＬ）も同様にする。各５０μＬの膜、
放射性標識Ｓ−１４、競合物及びＳＰＡビーズを９６−
ウェルトレーの各ウェルで混合することにより結合アッ
セイを開始する。室温で１０〜３０分間震盪し、次いで
４℃で終夜置くことによりアッセイをインキュベーショ
ンする。Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ液体シンチレーションカウ
ンター（Ｗａｌｌａｃ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍ
Ｄ）で計数することにより、結合した放射性リガンドを
決定する。結合データをプロットし、Ｐｒｉｓｍソフト
ウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ ＳｏｆｔｗａｒｅＩｎ
ｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて試験化合物
に関するＩＣ₅₀及びＫ_i値を算出し、表Ｖに示す。結合
はＫ_i、μＭとして表される。

【００５８】

【表８】

【００５９】実施例５ 試験ペプチドの生体内活性 以下の実験は、ＳＲＩＦが加えられた下における試験ペ
プチドの生体内ＳＲＩＦ拮抗薬活性及び試験ペプチドの
みの生体内ＳＲＩＦ拮抗薬活性を示す。そのようなデー
タは哺乳類における治療薬として、又は哺乳類における
成長促進剤としての試験ペプチドの利用の可能性を示
す。

【００６０】麻酔されたラットにおける評価。

【００６１】雄のＳｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット
をＳａｇａｔａｌを用いて麻酔し、標準及び試験化合物
を用いる有効な静脈内処置、ならびに頻繁な血液採取が
可能なように適合させる。血液試料をラジオイムノアッ
セイにより成長ホルモン（ＧＨ）量に関して調べる。血
液採取の開始から３０分後、ラットに５μｇ、２５μｇ
又は５０μｇのペプチド１を与える。ＧＨ量への用量関
連効果を観察し、最高の用量から血清ＧＨ量における有
意な増加が生ずる。続いて６０分において、１０μｇの
長時間作用ＳＲＩＦ作用薬、ＢＩＭ ２３０１４Ｃ
（Ｔ．Ｒｅｉｓｉｎｅ ａｎｄ Ｇ．Ｉ．Ｂｅｌｌ，Ｅ
ｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，１６，４２７−４
４２，１９９５、引用することによりその記載事項が本
明細書の内容となる）を与え、それは予想される血清Ｇ
Ｈ量における減少を誘導する。最後に２回目の用量のペ
プチド１（５μｇ、２５μｇ又は５０μｇのいずれか）
を与え、最高の用量から血清ＧＨ量におけるさらに大き
い増加を誘導する。データを表ＶＩ及び図３に示す。

【００６２】ペプチド１を成長ホルモン放出因子（ＧＲ
Ｆ）と組み合わせて調べ、該ペプチドがＧＲＦの作用を
模しているのかどうかを研究する。麻酔されたラットに
単独で及びペプチド１（５０μｇ）と組み合わせてＧＲ
Ｆ（１μｇ）を与える。ＧＲＦ及びペプチド１で処置さ
れたラットにおけるＧＨ量はＧＲＦのみで処置されたラ
ットより速く及び高く上昇し、ペプチド１がＧＲＦと同
じ機構を介して作用しているのではないことを示してい
る。データを表ＶＩＩ及び図４に示す。

【００６３】

【表９】

【００６４】

【表１０】

【００６５】覚醒ラットにおける評価。

【００６６】雄のＳｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット
を標準及び試験化合物を用いる有効な静脈内処置ならび
に頻繁な血液採取が可能なように適合させる。血液試料
をラジオイムノアッセイにより成長ホルモン（ＧＨ）量
に関して調べる。血液試料は１２時間に及んで採取す
る。６時間の時点で、覚醒した自由に動く雄のラット中
に２時間、ペプチド１を静脈内輸液する（３００μｇ／
時）。標準動物には同じ時間かけて食塩水輸液を与え
る。図５におけるグラフは正常な雄のラットにおける自
然の成長ホルモン分泌パルス、及びペプチド１の輸液に
よるこれらのパルスの停止を示している。ペプチド１が
引き取られると、パルスは同時的（ｓｙｎｃｈｒｏｎｏ
ｕｓｌｙ）に回復し、時間と共に徐々に同時的でなくな
る（ｄｅｓｙｎｃｈｒｏｎｉｚｅ）。成長ホルモンのパ
ルス性にはＳＲＩＦが必要であること及びＳＲＩＦ拮抗
薬は該パルス性を停止させることは既知である（引用す
ることによりその記載事項が本明細書の内容となるＴａ
ｎｎｅｎｂａｕｍ，Ｇ．Ｓ．ａｎｄ Ｌｉｎｇ，Ｎ．，
Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１１５，１９５２−１９
５７，１９８４を参照されたい）。従ってこの実験にお
いて、ペプチド１が未処置の覚醒動物のＳＲＩＦ応答経
路に明確な効果を示すことがわかり、治療的な設定にお
いて本発明のペプチドがＳＲＩＦの効果に対抗するのに
有効であり得ることを示している。

【００６７】本発明の主たる特徴及び態様は以下の通り
である。

【００６８】１．構造

【００６９】

【化６】

【００７０】［式中、ＡＡ₂はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
又はＨｉｓのＤもしくはＬ異性体であり；ＡＡ₃は場合
により１つ又はそれ以上のＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂基で置
換されていることができる直鎖状もしくは分枝鎖状アル
キルアミノ酸のＤ異性体であり；ＡＡ₄はＡｒｇ、Ｌｙ
ｓ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ、Ｉｌ
ｅ、Ｐｒｏ又はＴｒｐのＤもしくはＬ異性体であり；Ａ
Ａ₅はＴｒｐ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ又はＣｙｓのＤ
もしくはＬ異性体であり；ＡＡ₆はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ａ
ｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ａｓ
ｎ又はＴｈｒのＤもしくはＬ異性体であり、但しＡ
Ａ₂、ＡＡ₄、ＡＡ₅又はＡＡ₆の１つだけがＬ異性体であ
ることができ；ｍ、ｎ及びｐはそれぞれ独立して０又は
１であり、但しｍ、ｎ及びｐの１つだけが０であること
ができる］を有するペプチド又は製薬学的に許容され得
るその塩。

【００７１】２．式Ｉ又は式ＩＩＩの構造を有する上記
１項に記載のペプチド。

【００７２】３．ＡＡ₂、ＡＡ₄、ＡＡ₅及びＡＡ₆がそれ
ぞれ独立してＤ−異性体である上記１項に記載のペプチ
ド。

【００７３】４．ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である上記
１項に記載のペプチド。

【００７４】５．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒの
Ｄ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−異
性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体で
あり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であり；
ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、ｍ、ｎ
及びｐがそれぞれ１である上記１項に記載のペプチド。

【００７５】６．式Ｉ又は式ＩＩＩの構造を有する上記
５項に記載のペプチド。

【００７６】７．上記６項に記載のペプチド Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂。

【００７７】８．上記６項に記載のペプチド

【００７８】

【化７】

【００７９】９．ソマトスタチンレセプター部位を有効
量の上記１項に定義されている構造を有するペプチドと
接触させることを含む、ソマトスタチンの効果を減少さ
せるための方法。

【００８０】１０．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒ
のＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−
異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体
であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であ
り；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、
ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である上記９項に記載の方
法。

【００８１】１１．式Ｉ又はＩＩＩの構造を有する上記
１０項に記載の方法。

【００８２】１２．ペプチドが Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【００８３】

【化８】

【００８４】である上記１１項に記載の方法。

【００８５】１３．有効量の上記１項に定義されている
構造を有するペプチドを哺乳類に投与することを含む、
哺乳類における成長ホルモンの放出を増加させるための
方法。

【００８６】１４．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒ
のＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−
異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体
であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であ
り；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、
ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である該ペプチドを有する上
記１３項に記載の方法。

【００８７】１５．ペプチドが Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【００８８】

【化９】

【００８９】である上記１４項に記載の方法。

【００９０】１６．有効量の上記１項に定義されている
構造を有するペプチドを哺乳類に投与することを含む、
哺乳類におけるインスリンの放出を増加させるための方
法。

【００９１】１７．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒ
のＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−
異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体
であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であ
り；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、
ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である該ペプチドを有する上
記１５項に記載の方法。

【００９２】１８．該ペプチドが Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【００９３】

【化１０】

【００９４】である上記１７項に記載の方法。

【００９５】１９．有効量の上記１項に定義されている
ペプチドを哺乳類に投与することを含む、哺乳類におけ
るグルカゴンの放出を増加させるための方法。

【００９６】２０．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒ
のＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−
異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体
であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であ
り；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、
ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である該ペプチドを有する上
記１９項に記載の方法。

【００９７】２１．該ペプチドが Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【００９８】

【化１１】

【００９９】である上記２０項に記載の方法。

【０１００】２２．有効量の上記１項に定義されている
構造を有するペプチドを哺乳類に投与することを含む、
哺乳類における胃の酵素の放出を増加させるための方
法。

【０１０１】２３．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒ
のＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−
異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体
であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であ
り；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、
ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である該ペプチドを有する上
記２２項に記載の方法。

【０１０２】２４．該ペプチドが Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【０１０３】

【化１２】

【０１０４】である上記２３項に記載の方法。

【０１０５】２５．有効量の上記１項に定義されている
構造を有するペプチドを哺乳類に投与することを含む、
哺乳類の成長を増進させるための方法。

【０１０６】２６．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒ
のＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−
異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体
であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であ
り；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、
ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である該ペプチドを有する上
記２５項に記載の方法。

【０１０７】２７．該ペプチドが Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【０１０８】

【化１３】

【０１０９】である上記２６項に記載の方法。

【０１１０】２８．有効量の上記１項に定義されている
構造を有するペプチドを哺乳類に投与することを含む、
哺乳類における免疫機能を増進させるための方法。

【０１１１】２９．ＡＡ₂がＰｈｅ、Ｔｒｐ又はＴｙｒ
のＤ−異性体であり；ＡＡ₃がＩｌｅ又はＶａｌのＤ−
異性体であり；ＡＡ₄がＡｒｇ又はＬｙｓのＤ−異性体
であり；ＡＡ₅がＴｒｐ又はＴｙｒのＤ−異性体であ
り；ＡＡ₆がＰｈｅ又はＴｒｐのＤ−異性体であり、
ｍ、ｎ及びｐがそれぞれ１である該ペプチドを有する上
記２８項に記載の方法。

【０１１２】３０．該ペプチドが Ａｃ−Ｄ−Ｈｉｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｉｌｅ−Ｄ−Ａｒ
ｇ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ₂ 又は

【０１１３】

【化１４】

【０１１４】である上記２９項に記載の方法。

【図面の簡単な説明】

【図１】ペプチド１の拮抗薬活性を示すグラフである。

【図２】フォルスコリン刺激細胞において測定されるｃ
ＡＭＰ量へのペプチド１の効果を示すグラフである。

【図３】生体内における血清成長ホルモン量（ＧＨ）へ
のペプチド１の用量関連効果を示すグラフである。

【図４】ペプチド１と一緒の又はなしの生体内における
成長ホルモン放出因子（ＧＲＦ）の効果を示すグラフで
ある。

【図５】生体内における自然の成長ホルモン（ＧＨ）分
泌パルスへのペプチド１の効果を示すグラフである。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 構造 【化１】 ［式中、ＡＡ₂はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ又はＨｉｓの
   ＤもしくはＬ異性体であり；ＡＡ₃は場合により１つ又
   はそれ以上のＯＨ、ＳＨ又はＮＨ₂基で置換されている
   ことができる直鎖状もしくは分枝鎖状アルキルアミノ酸
   のＤ異性体であり；ＡＡ₄はＡｒｇ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ、
   Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ又は
   ＴｒｐのＤもしくはＬ異性体であり；ＡＡ₅はＴｒｐ、
   Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ又はＣｙｓのＤもしくはＬ異性
   体であり；ＡＡ₆はＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｌｅｕ、
   Ｉｌｅ、Ｍｅｔ、Ｇｌｎ、Ｔｒｐ、Ａｓｎ又はＴｈｒの
   ＤもしくはＬ異性体であり、但しＡＡ₂、ＡＡ₄、ＡＡ₅
   又はＡＡ₆の１つだけがＬ異性体であることができ；
   ｍ、ｎ及びｐはそれぞれ独立して０又は１であり、但し
   ｍ、ｎ及びｐの１つだけが０であることができる］を有
   するペプチド又は製薬学的に許容され得るその塩。
2. 【請求項２】 ソマトスタチンレセプター部位を有効量
   の請求項１に定義されている構造を有するペプチドと接
   触させることを特徴とする、ソマトスタチンの効果を減
   少させるための方法。
3. 【請求項３】 有効量の請求項１に定義されている構造
   を有するペプチドを哺乳類に投与することを特徴とす
   る、哺乳類における成長ホルモンの放出を増加させるた
   めの方法。
4. 【請求項４】 有効量の請求項１に定義されている構造
   を有するペプチドを哺乳類に投与することを特徴とす
   る、哺乳類におけるインスリンの放出を増加させるため
   の方法。
5. 【請求項５】 有効量の請求項１に定義されているペプ
   チドを哺乳類に投与することを特徴とする、哺乳類にお
   いてグルカゴンの放出を増加させるための方法。
6. 【請求項６】 有効量の請求項１に定義されている構造
   を有するペプチドを哺乳類に投与することを特徴とす
   る、哺乳類における胃の酵素の放出を増加させるための
   方法。
7. 【請求項７】 有効量の請求項１に定義されている構造
   を有するペプチドを哺乳類に投与することを特徴とす
   る、哺乳類の成長を増進させるための方法。
8. 【請求項８】 有効量の請求項１に定義されている構造
   を有するペプチドを哺乳類に投与することを特徴とす
   る、哺乳類における免疫機能を増進させるための方法。