JPH0283331A - インターロイキン−２、及びインターフェロン−γ誘起剤とその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、インターロイキン−２、及びインターフェロ
ン−７３Ｆｒ起剤（以下、それぞれＩ　Ｌ−２、ＩＦＮ
−ｒという。）、特にナンバンギセルの種子を原料とす
るＩ　Ｌ−２、およびＩＦＮ−γ誘起剤とその製造方法
に関する。

〔従来の技術〕

インターフェロン誘起剤は、ヒト、動物の細胞に作用し
て、インターフェロンを誘起する物質であり、インター
フェロン誘起作用を有する天然物質は種々知られている
が、それらの多くは強い副作用を有している。そのため
漢方薬当帰を熱水で処理し、その抽出液からＩＦＮ誘起
活性を有する物質が単層され（特開昭５３−３２１０７
号公報）、また漢方薬全白皮から同様にＩＦＮ誘起活性
物質が単層される（１！開昭５３−９９３１３号公報）
等いくつかの報告がなされている。

〔発明が解決しようとする課題〕

本発明は、強壮剤として知られている（床用書店、総合
藁用値物、第１０６〜１０７頁、昭和１１年発行）ナン
バンギセル（八ｅｇｌｎｅｔｉａ　ＩｎｄｉｃａＬ；Ａ
ＩＬ）の種子からの抽出物質が、著しいＩＬ２、及びＩ
ＦＮ　　ｒ誘起活性を有する成分を有し、かつ副作用を
有しないことを見出し、その提供と有効分画の分離、精
製手段の提供を課題とする。

［課題を解決するための手段〕 ナンバンギセルは、ハマウツボ科ナンバンギセル属の１
年生無葉緑植物で、ススキ、ミョウガ、サトウキビ等の
根に寄生し、果実のうちに無数のほこりのように細かい
種子を入れている。

本発明のインターロイキン−２、及びインターフェロン
−Ｔ誘起剤は、このナンバンギセルの種子から単離され
ることを竹（改とし、ナンバンギセルの種子より蒸溜水
、特に蒸溜水がリン酸緩衝生理食塩水により抽出される
ことを特徴とし、またナンバンギセルの種子より水飽和
ブタノールにより抽出され、得られた水層をプロナーゼ
処理し、その沈澱除去液を限外濾過して回収されるか、
またナンパンギセルの種子より水飽和フェノールにより
抽出され、得られた水層を酢酸カリウム、及びエタノー
ル処理し、その沈澱除去液を蒸溜水に対して透析し、そ
の透析内液よりＲＮＡを除去後、得られた水層を更に酢
酸カリウム、及びエタノール処理し、沈澱除去液を蒸溜
水に対して透析し、その透析内液を濃縮することを特徴
とするものである。

〔作用〕

本発明の抽出物質は、ナンバンギセルの種子から蒸溜水
、特にリン酸緩衝生理食塩水により抽出されるか、また
はこの種高分子多糖体の抽出手段としては公知であるモ
リソン等の方法（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ＆Ｌｅｉｖｅ、Ｆｒ
ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　　Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈ
ａｒｉｄｅｆｒｏｍ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌ
ｉ　　０１１１：Ｂ４　　Ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　Ｔ
ｗｏ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ、
Ｊ、［１ｉｏ１．Ｃｈｅｍ、２５０　　：２９１１２９
１９．１９７５）により抽出され、著しい！Ｌ−２、及
びＴ　Ｆ　ＮＴ　誘算能を有することを見出したもので
ある。またこの種高分子多糖類の抽出手段とじて同）η
の方法であるウェストファール等の方法（Ｗｅｓｔｐｂ
ａｌ、０．、、〕ｎｄ　Ｌ；ｄｅｒｉｔｚ、ｏ、　Ｃｈ
ｅｍｉｓｃｈｅ　Ｅｒｆ−ｏｒｓｃｈｕｎｇ　ｖｏｎ　
Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈｒｉｄｅｎ　ｇｒａｍｍｎ
ｅｇａＬｉｖ−ｅｒ　ＢａｋｔＩ！ｒｉｅｎ、、へｎｇ
ｅｗ、ｃｈｃｍ、６６　；４０７−４１７．１９５４）
により得られる多糖類は、モリソン等の方法による抽出
’１＋ＩＪ質より強いＩＦＮ　ｙ誘導能を示す。

本発明により抽出される多糖類の構造、組成は、いまだ
十分には判明していないが、ナンバンギセルの種子を抽
出する際に、ウェストファール等の方法により水飽和フ
ェノールで抽出すると、蛋白質成分が殆ど結合していな
い多ｔｈ　＋ｉが得られるのに対して、モリソン等の方
法を使用し、水飽和ｎブタノールにより抽出すると、脂
質であるリビドＡが蛋白により結合した多糖類が抽出さ
れるものと思われる。本発明の抽出物質は後述するよう
に水可溶性、ｎ−ブタノール不溶性であり、ＲＮＡ（オ
ルソノール反応を利用したメジャハウム（Ｍｅｚｂａｕ
ｍ）法、および紫外部吸収による）は含有されてなく、
分子量は１０万〜２０万の範囲と思われる。

〔実施例　１〕 ナンバンギセルの種子のリン酸緩衝生理食塩水抽出物（
以下、粗抽出物という）のｉＪｌ　ｍナンバンギセルの
種子４０ｍｇに、カルシウムイオン、マグネシウムイオ
ンを含有しない０．１モルリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ
７，２）］　　ｍｆｔを加え、乳鉢中において粉砕した
。この粉砕物を１５０００ｘｇ、１５分間、４°Ｃて遠
心処理し、得られた上清を、０．４５μｍ径のミリポア
フィルタ−を通して無菌化し、本発明の抽出物を得た。

〔実施例　２〕 上記ナンバンギセルの種子の粉砕物に、等容量の水飽和
ｎ−ブタノールを加え、０゛ｃで１５分間撹拌した。こ
の混和物を３５０００ｘｇで２０分間遠心して、分離し
た下層の水層を集めた。なおブタノール層および沈澱物
は更に２回ブタノール抽出を行った。

このようにして得られた水層分画を更に遠心処理して不
溶物を除去し、盃白質分解酵素であるプロナーゼを最終
濃度２０μｇ７ｍｌ！、になるように添加し、３７°Ｃ
で一夜処理した。このプロナーゼ処理によりプロナーゼ
を含む蛋白質からなる白色沈澱が生し、この沈澱を遠心
処理により除去した。次いでカットオフ分子１３５００
、コアサイド３０００の限外濾過膜（アミコン社、米国
）を圧力１．５　ｋｇ／ｃｍ２で使用して濃縮し、本発
明の抽出物を得た。収量は、ウロン酸定量によりナンバ
ンギセルの種子１ｇにつき４５ｍｇであった。

次に上記ウェストファール等の方法によるナンバンギセ
ルの種子からの多糖類抽出方法を実施例３として示す。

〔実施例　３〕 上記ナンバンギセルの種子の粉砕物に、等容量の水飽和
フェノールを加えて０°Ｃで３０分間撹拌した後、２０
０ｘｇで１０分間遠心処理し、水層を分離した。水層中
に混入しているフェノールをエーテルで抽出除去し、水
層に溶解したエーテルは窒素ガスを通気することにより
除去した。このようにして得られるフェノール抽出物に
酢酸カリウムを２％（ｗ／ｗ）の割合で添加し、１０倍
容量の９５％エタノールを添加し、４°Ｃ２−夜装置し
た後形成される沈澱物を蒸溜水に溶解させた。この溶液
に上記同様２％の割合に酢酸カリウムを添加した後等容
量のエタノールと混和させ、０°Ｃで３０分間静置した
。

その後５０００ｘｇ、２０分間遠心し、主としてＲＮＡ
を含有する沈澱を廃棄した。更に上清に６倍容量のエタ
ノールを添加し、１時間静置した後生じた沈ｔを５００
０ｘ（ｚ、２０分間遠心処理して集め、蒸溜水に溶解さ
せ、蒸溜水に対して透析した。この透析内液には多糖類
と微量のＲＮＡが混在しているので、ＲＮＡを破壊する
目的で１　ｍｌ、あたり３０〜４０μｇの生肝由来ＲＮ
Ａ分解酵素（Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ＲＮａｓｅ）を添
加し、３８°Ｃで１時間処理した。処理後、酢酸カリウ
ム２％と６倍容量のエタノールを添加し、生した沈澱を
遠心処理により集め、蒸溜水に溶解し、２００　ｘｇで
遠心処理した。得られた上清を蒸溜水に対して透析し、
透析内液を濃縮し実施例３にょる標品とした。収量はウ
ロン酸定■によりナンバンギセルの種子１ｇあたり、３
８ｍｇであった。

上記各実施例、及び実施例３により調製した多ｔ、’！
　Ｘｎ分画についての化学分析は、次のように行った。

ウロン酸の定量は、カルバゾール反応を利用したビター
等の方法（Ｂｉｔｔｅｒ、Ｔ、、ａｎｄ　ｌＥｗｉｎｓ
　Ｒ，八ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｃａｒｂａｚｏｌｅ　ｒｅ
ａｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄｓ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、　８１；４３，１９６１．）に
より、またＲＮＡはオルシノール反応を利用したメジャ
ハウＪ、の方法（ＭｅｚｂａｕｍＪ、Ｃｏ１ｏｒ　ｒｅ
ａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｃｏ
ｍｐｏｎｅｎｔｓ；　Ｉｎ　Ｔｈｅ　ｎｕｃｌｅｉｃ　
ａｃｉｄｓ、（ＣｈａｒｇａｆｆＥ、、ａｎｄ　Ｄａｖ
ｉｄｓｏｎ、Ｊ、、ｅｄｉｔｏｒｓ）、　Ａｃａｄｅｍ
ｉｃ　ＰｒｅｓｓＮｅｗ　Ｙｏｒｋ、　１：　２８３−
３０５．１９３９．　ｌ　、及び紫外部吸収を指標とし
て定量した。また蛋白質定量はフォリン等の方法（Ｆｏ
ｌｌｉｎ、０．、ａｎｄ　Ｃ１ｏｃａｌｔｅａｕ、Ｖ、
　Ｏｎ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ａｎｄ　ｔｒｙｐｔｏｐｈ
ａｎｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　１ｎｐｒｏｔｅ
ｉｎｓ、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、７３　：６２７−
６５０．１９２７．）、及び紫外部吸収を指標として定
量した。

（Ｉ　Ｌ−２、及びＩＦＮ−Ｔ活性検索）検索用標品の
調製 ヘパリン添加ヒト末梢血より密度勾配遠心法（密度、１
．０７７　、Ｂ；ｙｕｍ、八、　ｌ５ｏｌａｔｉｏｎ　
ｏｆ　ｍｏｎｏ−ｎ−ｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎ
ｄ　ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｈｕｍａｎ
　ｂｌｏ−ｏｄ、　５ｃａｎ、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖａ
ｓｔ、　２１　ニア７−８９．１９６７、）を用いて、
末梢血単核球（以下、ＰＢＭＣという）を分離し、１０
％胎児牢血清を含有する白血球増殖培養液（ＲＰ？！１
−１６４０）を使用して１０’／ｍｎの細胞浮遊液を調
製した。

このＰＢＭＣ浮遊液１　ｍｌに上記実施例１、実施例２
、実施例３で調製した各分画を各々１ｍＰ添加し、５％
炭酸ガスを含む空気中で３７°Ｃで２４時間、４８時間
培養した。この培養上清を５００ｘｇ、　１５分間遠心
した後、ミリポアフィルタ−を通して無菌化した標品を
得、以下に記載するｒ　Ｌ　−２、及びＩＦＮ−γ活性
検索に供した。

Ｉ　Ｌ−２活性測定法 細胞増殖がＩＬ−２依存性であるＣＴＬＬ細胞を、９６
六マイクロプレートに、１０％被検標品を含む増殖培養
液５００μｉに５×１０３個０ＣＴＬＬ細胞を浮遊させ
各ホールに植え込み、５％炭酸ガス培養器中で３７°Ｃ
で２４時間培養した。その後各ホールに’Ｈ−チミジン
（アマジャム社、英国）５０μＣｉを添加して更に１６
時間培養を継続し、３Ｈチミジンの取り込み量を液体シ
ンチレーションカウンターで測定した。この場合、ｌ　
Ｌ−２力価の算定は、組み換え型Ｉ　Ｌ−２（ジオツギ
社製）を、最終濃度５．０．２．５．１２５．０．６３
、Ｏ，３ｔ＠位／ｍｌになるように調製した標準標品に
よりＣＴＬＬ細胞を処理した場合の３Ｈ−チミジンの取
り込み星より換算した。

ＩＦＮ−Ｔ活性測定法 ヒト羊膜由来ＦＬ細胞（１０６）を６０１径のプラスチ
ソクペトリ皿に植え込み、５％炭酸ガス培養器中で３７
°Ｃ１２日間培養し、ＦＬ単層細胞を調製した。

次に被検標品０．２ｍｊ２に最少必須培地０．８ｍｊ２
を添加して、被検標品の５倍希釈したちの０．５ｍｆｆ
１によりＦＬ単層培養細胞を１２時間、３７°Ｃで処理
した。その後この処理ＦＬ単層培養細胞における水庖性
口内炎ウィルス（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ　Ｓｔｏｍａｔｉ
ｔｉｓ　ｖｉ−ｒｕｓ　、以下、■Ｓ■という）のブラ
ック形成能を、未処理ＦＬ単層培養細胞での■Ｓ■ブラ
ック形成能との比較により算定した。ＩＦＮ力価は■Ｓ
■ブラック形成能を５０％減じるために必要な被検標品
の最高希釈率でもって表現される。

ｒＦＮのタイピング方法 被検標品中に含有されるＩＦＮのタイピングは、被検標
品０．２ｎ＋４！に抗ＩＦＮ−α／β抗体（米国国立衛
生研究所（Ｎｌｌｌ）ＩＮＣ，米国）を０．２ｍｆｆ１
、そして被検標品０．２ｍｊ２に抗ＩＦＮ−Ｔ抗体（イ
ンターフェロン　サイエンシーズＩＮＣ，米国）０．２
ｍｌを添加して、３０分間、３７°Ｃで培養した後、最
少必須培地０．６ｍｎを添加して総容量１ｍｆとした。

この標品０．５ｍｊ２によりＦＬ単層培養細胞を３７°
Ｃ２１２時間処理し、上記同様にＶＳＶブラック減少率
を測定した。尚抗ＩＦＮ−α／β抗体、或いは抗ＩＦＮ
−Ｔ抗体は、ＩＦＮ−α、またはＩＦＮ−βの１００単
位、或いはＩＦＮ〜γの１００単位を中和する力価を有
するように調製し、試験に供した。

抽出物のクロマトグラフィー 実施例２でａｍ−Ａｔした抽出物を、カラムクロマトグ
ラフィ（５ｅｐｈａｄｃｘ　Ｇ−２００フアーマシア、
ス工−デン、カラムサイズ；　φＱ、９ｃｍ　Ｘ３０ｃ
ｍ）を使用し、０．１５モルＮａ　Ｃ２−０，０２モル
Ｔｒｉｓ−ＨＣｎｔｌ街液（ｐ　Ｈ７，４）により溶出
させ、１分画２　ｍｌとして２０分画採取した。それぞ
れの分画について、ＰＢＭＣＩＸＩＯ’個／ｍｌを２４
穴プレートの各ホールに植え込み、更に各分画０．１ｍ
ｆｆ１ずつ添加して２４時間、３７°Ｃで培養した。そ
の後培養上清を採取し、ＩＦＮ活性、ＩＬ−２活性を測
定した。

次に、実施例１で調製したナンバツギセルの種子の粗抽
出標品のＩ　Ｌ−２誘導能測定方法を示す。

実施例１で調製したナンバツギセルの種子粗抽出標品と
ＰＢＭＣとを、２４時間、４８時間培養して調製した培
養上清について、上記Ｉ　Ｌ−２力価の測定方法により
測定した。

第１図は標準ＩＬ−２（ＩＪＩみ換えＩＬ−２）を用い
て作成された定量曲線であり、横軸は、標準ＩＬ−２（
単位／ｍ／り、縦軸は、３Ｈ−チミジンの取り込み量を
表す。上記２４時間、４８時間培養して調製した培養上
清についての、それぞれの３Ｈ−チミジンの取り込みを
示すカウント数（単位はＤＰＭ）を計測し、第１図によ
りそのカウント数に相当するＩＬ−２（単位／ｍｆｆ１
）を求めた。

第１表により本発明におけるナンバツギセルの種子の粗
抽出標品は、ＩＬ−２誘導能を有していることが確認さ
れる。

次に実施例１で調製したナンバツギセルの種子の粗抽出
標品のＩＦＮ産生能測定方法を示す。

実施例１で調製したナンバツギセルの種子の粗抽出標品
とＰＢＭＣとを、２４時間、或いは４８時間培養した後
採取し、得られた上清を１０倍に希釈したものにより、
ＦＬ単層培養細胞を処理してＶＳ■ブランク形成能を測
定した。またブランク減少率は下式により算出される。

２回にわたって実験した結果を第２表に示す。

ナンバツギセルの種子の粗抽出標品によりＰＢＭＣを２
４時間処理して得た培養上清を５倍に希釈した標品を本
実験で使用した。２回実験し、その測定結果を第３表に
示す。

第３表 第２表により、ナンハツギセルの種子の粗抽出標品は、
ＩＦＮ産生能を有していることが確認される。特に２４
時間標品は、４８時時間孔に比較してＩＦＮ活性が高値
である。

続いて、ナンハツギセルの種子の粗抽出標品より誘導さ
れるＩＦＮのタイピング方法を示す。

尚、表の数値はブラック数を示し、２プレートの平均値
を示す。（）内の数値は、未処理対照ＦＬ単層培養細胞
上でのｖＳ■ブランク数に対する抗体処理、或いは未処
理被検ＩＦＮ標品で処理したＦＬ単層培養細胞上での■
Ｓ■ブランク数の減少率（％）を示している。

本実験によりナンハツギセルの種子の粗抽出標品は、Ｉ
ＦＮ−ｒ誘導能を有していることが確認される。

またナンバツギセルの種子の粗抽出標品を上記クロマト
グラフィーにかけ、その各分画におけるｌ　Ｌ−２、及
びＩＦＮ誘導能の検索、及びウロン酸（００５３０ｎｍ
　、カルバゾール反応）、蛋白質（００Ｄ　２８０ｎｍ
）の定量を行い、その結果を第２図に示す。尚この測定
においでＩＦＮ力価は５倍希釈品についての■Ｓ■ブラ
ック城少減少％）を示す。

第２図かられかるように、各分画におけるＩＬ２、及び
ｒＦＮ誘導能、ウロン酸量、及び蛋白質量は同一の傾向
を示しており、このことから本発明の粗抽出物は単一物
質であることが偲定される。

次にナンバツギセルの種子から実施例２、および実施例
３により調製した分画をそれぞれ５００μｇウロン酸定
量による）ずつ用いて、ＰＢＭＣを２４時間刺激して、
その培養上清についてＩ　Ｌ２力価を測定した。ＰＢＭ
ＣはＡ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、ＥＳＦの６人の人から調製した。

ＩＬ 測定結果について下記第４表に示す。

単位は、単位／ｍＰ。

第４表 ２力価の 第４表かられかるように、実施例２、実施例３により調
製した抽出物はいずれもＩＬ−：ｇｚ誘導能有するが、
実施例２による抽出物はより強いＩＬ　　２＝導能を保
有することが明らかである。

また下記第５表に実施例２、実施例３により調製した抽
出物のＩＦＮ−γ力価の測定結果を示す。

測定にあたっては、まず実施例２、実施例３により調製
した各多ｔｌ！類分画により２４時間、ＰＢＭＣ釈した
標品を抗ＩＦＮ−γ処理したもの、または未処理のもの
にわけ、次いでこの標品をＦＬ単層培養細胞を処理して
■ＳＶブランクを形成させ、抗ＩＦＮ−γ処理、または
未処理のＦＬ単層培養細胞での■Ｓ■プラック数を比較
したものである。

尚、数値は減少率（％）を示す。

第５表 この第５表から分かるように実施例２、実施例３により
抽出された標品の方は共に強いＩＦＮ−Ｔ誘導能を保有
していることがわかる。

次に実施例２で調製した多Ｉ！類分画でＰＢＭＣを２４
時間刺激して得た培養上清について、ＩＬ−２、及びＩ
ＦＮ力価を測定した結果を第３図に示す。ＩＦＮ力価は
ＰＢＭＣ上清を５倍希釈した標品について■Ｓ■のブラ
ンク減少率により測定した。尚黒丸によりＩ　Ｌ−２活
性の推移を示し、白三角によりＩＦＮ力価の推移を示す
。

この第３図かられかるように、本発明の多糖類の量に応
してＩ　Ｌ−２、ＩＦＮ力価共に増大することがわかる
。

次いで本発明の実施例２で調製した多Ｉｌ！類について
の毒性試験の結果について説明する。

バルブ−シーマウス（Ｂａｌｂ−Ｃマウス）１０匹の腹
腔に実施例２で調製した多糖類を、ウロン酸定量で５０
０μｇをＩ　ｍｇ、３　ｍｇを注射したが、２８日後に
おいても異常は認められなかった。

〔発明の効果〕

本発明は、ナンバツギセルの種子から単離されたインタ
ーロイキン−２、及びインターフェロンＴＦａ起剤を提
供すると共に、ナンバツギセルの種子よりリン酸緩衝生
理食塩水により抽出されるか、またはナンハツギセルの
種子より水飽和ブタノールにより抽出され、得られた水
層をプロナーゼ処理し、その沈澱除去液を限外濾過して
回収されるか、更にナンハツギセルの種子より水飽和フ
ェノールにより抽出され、得られた水層を酢酸カリウム
、及びエタノール処理し、その沈澱除去液を蒸溜水に対
して透析し、その透析内液よりＲＮＡを除去後、得られ
た水層を更に酢酸カリウム、及びエタノール処理し、沈
澱除去液を蒸溜水に対して透析し、その透析内液を濃縮
することにより得られるｆ　Ｌ−２、及びＩＦＮ−Ｔ誘
起剤は、著しいＩＬ−２、及びＴＦＮ−Ｔ誘起活性を有
し、ヒト及び動物の各種ウィルス感染症の予防、及び治
療に有用であることが期待される。

【図面の簡単な説明】

第１図は孔率ＴＬ−２（ｍみ換えＩ　Ｌ−２）を用いて
作成された定量曲線を示す図、第２図はナンハツギセル
の種子の粗抽出標品をクロマトグラフィーにかけ、その
各分画におけるＩＬ−２、及びＩＦＮ誘導能の検索結果
、及びウロン酸（００５３０ｎｍ　、カルバゾール反応
）、蛋白質（ＯＤＤ　２８０ｎｍ）の定量結果を示す回
、第３図は実施例２で調製した多糖類分画でＰＢＭＣを
２４時間刺激して得た培養上清について、ＩＬ−２、及
びＩＦＮ力価を測定した結果を示す図である。 出　　願　　人　　大久保　新組（外１名）代理人　弁
理士　　内口１　亘彦　（外５名）第 図 練在／ｍＬ 多糖類　（μｇ／腸１〉 第２ 図 ／８ムｒ＞Ｋ′− か−−−や　：ウロン酸（ＯＤＪ３０ｎｍ：カルバソー
ル反応）シー−く　：　ｆンバク（００２８０ｖ）ご−
一″（１：ＩＦＮ（１０ｍ希ＩＲ嘱品についてＶＳＶブ
ラック減少を！！定した。） Ｍ　　：　Ｉ　Ｌ　−２ 千　Ｖ≧　・川ｉ　正　書　（方式） ％式％ １、事件の表示 昭和６３年特許願第２３２９９１号 ２、発明の名称　インターロイキン−２、及びインター
フェロン−γ誘起剤とその製造方法 ３゜ 補正をする者 氏 名 大 久 保 新 也 （外１名） ４゜ 代 理 人 ５゜ 補正命令の日付 昭和６３年１ ２月 ７日 第 図 ０．３１ ２．５０　　５００ 桐％り ′Ｉ＞四すンバ２ ・−ｍ＝−１ １，ウロＶ醸（ＯＤ５３０ｎｍ：力ル）〈ツーノ比受ズ
己）■−−−−−　・ Ｌ−２

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. （１）ナンバンギセルの種子から単離されたインターロ
   イキン−２、及びインターフェロン−γ誘起剤。
2. （２）ナンバンギセルの種子より蒸溜水により抽出され
   ることを特徴とするインターロイキン−２、及びインタ
   ーフェロン−γ誘起剤の製造方法。
3. （３）上記蒸溜水がリン酸緩衝生理食塩水である請求項
   ２記載のインターロイキン−２、及びインターフェロン
   −γ誘起剤の製造方法。
4. （４）ナンバンギセルの種子より水飽和ブタノールによ
   り抽出され、得られた水層をプロナーゼ処理し、その沈
   澱除去液を限外濾過して回収されることを特徴とするイ
   ンターロイキン−２、及びインターフェロン−γ誘起剤
   の製造方法。
5. （５）ナンバンギセルの種子より水飽和フェノールによ
   り抽出され、得られた水層を酢酸カリウム、及びエタノ
   ール処理し、その沈澱除去液を蒸溜水に対して透析し、
   その透析内液よりＲＮＡを除去後、得られた水層を更に
   酢酸カリウム、及びエタノール処理し、沈澱除去液を蒸
   溜水に対して透析し、その透析内液を濃縮することを特
   徴とするインターロイキン−２、及びインターフェロン
   −γ誘起剤の製造方法。