JPH0235355A

JPH0235355A - 液体クロマトグラフィによる糖類の分折計

Info

Publication number: JPH0235355A
Application number: JP18481188A
Authority: JP
Inventors: Seiji Shioda; 塩田　清治
Original assignee: Showa Denko KK
Current assignee: Resonac Holdings Corp
Priority date: 1988-07-25
Filing date: 1988-07-25
Publication date: 1990-02-05

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、主として食品中、醗酵液中、或い（Ｊ微生物
培養液中の糖類の定性、定Ｌｊ１分析に好適な液体クロ
マトグラフィによる糖類の分＋１１計に関・１−る３゜〔従来の技術〕従来、糖類を液体りし１７トグラフイによって分離分析
′４〜ろ多くの方法が知られており実用化されている。

例えば、（ａ）示差屈折計および波長１！ＪＯｎｍを使
用するＬＪ　Ｖホトメータ検出法、（１））糖類を選択
的に検出するため、硫酸−オルソノール、２−ソアノア
セトアミト等を使用して誘導体化し、分光光度計または
螢光光度計で検出する方θ９、等がある。

また、過ヨウ素酸は１個の酸素原子を５えてαグリコー
ルのＣ−Ｃ結合を開裂する。例えばαＤクルコピラノノ
ドに過ヨウ素酸を作用さＵろと、２モルの過ヨウ素酸を
消費し、１モルのギ酸か生ずる。この反応は低温でも定
量的に進行するので、（Ｃ）この過ヨウ素酸酸化を軸検
出に利用オろ方法（八ｎａｌｙＬｉｃａ１．１１ｉｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｉ：Ｎ、４９２−４９８、＋９８３
）は、カラム溶出液を過ヨウ素酸酸化し、過ヨウ素酸消
費ｈ（を波長２６０ｎｍでモニターしている。

〔発明か解決しようと４”ろ課題〕しかし、（ａ）の示差屈折計及波長１９０ｎｍを使用４
”ろＵ　Ｖホトメーター検出法では、試料中に含よれろ
欠隔（物によるＵＪ害を受（ｊ、（１））の糖を誘導体
化し、分光光度計又は螢光光度計て検出して高感度化、
選択性を得る方法では、硫酸−オルノノールを用いる場
合に（」強酸を取扱かイつな１Ｊればム′らケ、２−ノ
アノアセトアミトを使用する場合に（Ｊ還元糖のみの検
出となり、また（ｃ）のカラム溶出液を過ヨウ素酸酸化
したのち、過ヨウ素酸消費徂をモニターする事によって
、糖を分析する方法では、選択性、及検出感度に優れて
し）るか、検出θす１ｋか２６０　ｎｍを使用している
ノこめ試１；１中に含１れろ火卸物の妨害を受ｉ：Ｉや
すい、なと、それぞれ欠点を有している。

本発明（Ｊ上記の事情に鑑み、還元糖も非還元糖も検出
てき、試料中に含まれろ夾雑物の妨害を受（Ｊにくい検
出方法を提供−４〜るごとを１−１的とする。

〔課題を解決４−るための手段〕上記の目的を達成するため、本発明に係る液体クロマト
グラフィによる糖類の分析計において（」、溶離液供給
部、分離用カラ２・、反応器、冷却器、分光光度計が順
次導管に、］；って直列に接続され、−１−記溶離液供
給部と分離カラムの間には糖類試料を注入する試ｔ・１
液注入器か設（」られ、」１記分離カラムと反応器の間
の導管には、別個に設けられた、過ヨウ素酸また過ヨウ
素酸塩の溶液を送る反応液供給部からの導管が接続され
、冷却器と分光光度計の間の導管には、別個に設（］ら
れだ、ｐｌ＋指示薬と緩衝剤とを溶解した溶液またはｐ
　＋−１指示薬と緩衝剤各々の溶液を送るｐ　Ｉ−１指
示液供給部からの導管が接続されている。上記分光光度
計が高温液の吸光度測定がｉｉＪ能であれば、冷却器を
省略してｔ、Ｊ−い３゜〔作用〕本発明の分（）１計は上記の構成を存するため、溶離液
、反応液、ｌ）　Ｉ−１指示液をそれぞれ所定の流量で
流し、８部のｌ’ｊｌＡ度を七ノｌ−Ｌ、ておけば、糖
類の試料を試ＩＩ注入器に２部人４−ろのみて、試１′
、Ａ中の各糖類のり［Ｊ７トクラフが得られる。

〔実施例〕

本発明の分１７計に１１−１いられろ、溶離液としては
、脱イオン水か用し）られる３゜まノこ、反応液としては過ヨウ素酸と、過ヨウ素酸塩と
してＩ（、Ｎａ塩か用いられる。これら過ヨウ素酸また
は過ヨウ素酸塩（」、濃度０１モル−０５モルの水溶液
として反応に１１１、される。

ｐ　Ｉ（指示薬として（Ｊ、例えばゾロムフェノールブ
ルー、ブ〔Ｊムク（ｌルフェノールブルー、ブＣ１〕−
、クレゾールクリーン、クロルフＪノールレッド、ブｖ
＋　ｌｘクレソールバーブル、ブｒ］ムチモールプル、
フェノールレット、クレゾールレット、メタクレゾール
レノ１−かあげられる。

また緩衝剤としては、例えばＮ　ａ２１−Ｉ　Ｐ　０４
、Ｎ　ａ　３　Ｐ　０４などがあげられる。

−」１記ｐ　Ｉ−１指示薬、０．０００１モル／Ｌ２〜
０．０００３モル／ρ、および緩衝剤０．０００１モル
／ｇ〜００１モル／ａ含何した水溶液がｐＨ指示液とし
て使用される。

第１図は、本発明に係る液体クロマトグラフィによる糖
類の分析計のブロックダイヤグラムで、図中狗号１．２
１．３Ｉで示ずものは、別個に０１設された溶離液、反
応液、ｐ　Ｉ−Ｉ指示液の供給部である。これら供給部
１１２１．３１は、それぞれ、液貯槽１ａ、２１ａ、３
１ａ１液中の溶存ガスを除去する溶存ガス除去器１ｂ、
２１ｂ、３１１）、液を定量圧送する圧送ポンプＩｃ、
＼２１ｃ、３１ｃ、圧送された液の脈動を減少さＵるグ
ンパー１ｔｌ、２］　（１，３１ｄ、および圧力計１ｅ
、　２１ｅ、　３１ｅから構成されている。

上記溶離液供給部１によって圧送される溶離液は、試ｔ
１注入器２の取ト１０られた導管３を介して、所定の温
度に保持可能な恒温槽４内に設けられた分離カラム５に
接続されている。この分離力ラム５（Ｊ室／Ｉ′ｌＩ＋
１〜１００″Ｃの間の任意の温度に調整可能な恒温槽０
内に設置された管状の反応器７に導管８によ−）で接続
されている３、この反応器７は、反応器７を通過しノコ
液を室温〜８０°Ｃの間の任意の１１〒７１度に冷却ず
ろ冷却器９に導管１０によって接続されている。１ごの
冷却器９（」、記録装置１１ａをイｊ−４−ろ分光光度
、ｉｌ　Ｉ　＋に導管１２によって接続さ２１、分光光
度計１１を出ノコ液は廃液貯槽１３に導かれろ１゜よノーＬ記分離力うノ、５と反応器７との間の導管８に
は、１．記反応液（１１、給部２１からの導管２２か接
続され、また冷却イ：く９と分光光度計１１との間の導
管１２には、上記ｐ　＋４指示液供給部３１からの、流
！１１調整用＋１．Ｅ抗部３２ａか設（］られた導管３
２か接続さＡ１でいろ３、ごの、］−うに本発明の特徴は反応液を分離カラム５と
反応器７の間に１）ｌｌ指示液を分光光度計１１の入Ｌ
１に流入させるところにある。

なお、上記冷却器９　ｔｆ、分光光度計か高温液吸光度
測定か可能で、かつ安定しノコヘースラインか得られる
場合には設置しなくてもよい。また恒温槽４．６の設定
温度がほぼ同じ場合には、いずれか一方のみと１．て、
分離カラム５および反応器７を収納することもできる。

］１記分析計を用いて糖類を分析するに（Ｊ、先“４゛
、それぞれの液貯槽１ａ、　２１ａ、　３１ａに溶離液
、反応液、ｐ　＋−１指示液を充填し、圧送ポンプ１ｃ
、２１ｃ、３］ｃを始動して、所定の流量で送液すると
ともに、分離カラム５、反応器７、冷却器９を所定の温
度に保持し、分光光度計を始動する。

定常状態となった後、試料を試ネ゛１／Ａ：、人器２に
より注入すると、記録装置１１ａによって試料に含有さ
れるそれぞれの糖類のクロマトグラフが得られる。すな
わち、試料を試料Ｌｌ：、人器に入れる簡単な操作のみ
で、次々に糖類分析が可能となる。

これは、試料中の糖成分が、分離カラ１５によってそれ
ぞれの成分に分離され、反応器内で過ヨウ素酸に酸化さ
れて生ずる何機酸をｐＩ−ｉ指示液によって発色させ、
分光分析計によってその色の濃度が検出されるためであ
る。

分離用カラノ・の充填剤としてはボリスヂレン系強酸性
陽イ′Ａン交換樹脂（Ｎａ＋）やボリスヂレン系強酸性
陽イオン交換樹脂（Ｐｂ”）か用いられる３、そして、
分光光度計の検出波長範囲は１９５〜Ｔｉ　ＯＯｎｍか
採用されろか、通常ｋ１．３００〜Ｇ　ＯＯｎｍか用い
られる。

実施例１クルコース、カラクト−ス、アラビノース、リポースを
それぞれｌ１１ｇ／７［含有する糖類の混合溶液５μＱ
を、第１図にブ［１ツクグイヤグラノ、て示した分１１
ｉ’ｒｉｌを用い、１・記の条件で分１ｊ１シた。ピー
クの同定はピークか現れろまでの時間によって行なった
（以下間し）。

（＋）溶離液供給部脱イオン水を用い、流速　１　ｍＱ／分、圧力３５　ｋ
２／　ｃｍ’で圧送１．た。

（２）分離カラムボリスヂレン系強酸性陽イオン交換樹脂（Ｎａ”）（昭
和屯工株式会社製、商品名ンジウデソクスＫ　Ｓ　８０
１　）を用い、カラム温度を８０℃とした。

（３）反応液供給部過ヨウ素酸すＩ・リウｌ、０　、０５モル／Ｑの水溶液
を用い、流ｆｆ１０．３ｍ１２／分で圧送した。

（／ｌ　）　ｐＩｒ指示液供給部ｐＩ−Ｉ　Ｔ’ＦＩ　示薬としてプロムクレゾ−パープ
ル、００００２モル／Ｑ、緩衝剤としてＮ　ａ　２　Ｈ
Ｐ　Ｏ−：　Ｏ、ＯＯＯＩモル／ρを含有した水溶液を
用い、流ｉ：０．４ｍＱ／分て圧送した。

（５）反応器温度：８０°Ｃ１冷却器温度室’／に！ｒ
、検出器の波長４３０　ｎｍ、吸光レンツ　０１６とし
た。

その結果、第２図に示すり、ロマトグラトを得た。

実施例のクロマトグラムの図中、ａ・グルコース、ｂ　
ガラクトース、Ｃアラビノース、ｄ　リポース、ｅ・マ
ンノース、ｆ・マンニト−ル、ｇギノリト−ル、ｈ・　
ソルビトール、１　フルクｌ−−ス、１　　グリセロー
ル、ｋ　イノント−ルを示ず、。

実施例２クルコース、マンノース、マンニト−ル、ギノリトール
、ソルビト−ルをそれぞれ１７１ｇ／　ｔｉ　Ｑ含有す
る糖混合溶液１０μＱを上記分析計を用いて、下記条件
で分１１ｒした。

（１）溶離液供給部脱イオン水を用い、ｉＡＥ　’、’ｉｔ　：　Ｉ　ｍρ
／分、圧力　５０ｋｇ／ｃｍ’て圧送した１、（２）分離カラ１３昭和電−１−株式会社製、商品名　ノヨーデックスＫ　
Ｓ　８０１およびボリスヂレン系強酸性陽イオン交換樹
脂（ｌ’　ｂ”）、　（同社製、商品名）：１−デソク
ス５ＰＩＯＩＯ）を用い、カラ　ム温度を８００Ｃと　
じ　ノこ　、。

（３）反応液供給部過ヨウ素酸すトリウム　００５モル／ρの水溶液を用い
、流ｍ：０．３ｎｌ／分て圧送した。

（４）ｐｌ−１指示液供給部ｐ　ｌ−１指示薬としてブ〔ツムクレゾールパープル０
．０００２モル／Ｑ、緩衝剤としてＮ　ａ、ｌｌ　Ｐ　
Ｏ４：０．０００１モル／ρ含有した水溶液を用い、流
量０４ｍ０／分て圧送した９、（５）反応器温度・８０’Ｃ１冷却器温度室温、検出器
の波長４３０　ｎｍ、吸光度レンジ　０Ｉ（３と　し　
）こ　。

その結果、第３図に示ずクロマトクラムを得ノこ３、実
施例３クル：１−ス、フルクト−ス、クリセロールを含む１フ
イン２７ｔＱを上記分１１１旧を用いて、下記条イｌＩ
で分析した。

（１）溶離液供給部脱イオン水を用い、流’５ｋ　：　Ｉ　ｍρ／分、用カ
　５０ｋｇ／　ｃｍ２で圧送した。

（２）分離カラ１８昭和電工株式会社製、商−名、Ｋ　Ｓ　８０１およびＳ
　ｌ）　Ｉ　Ｏｌ　Ｏを用い、カラム温度を８０ｏＣと
　し　ノこ　。

（３）反応液供給部過ヨウ素酸すトリウｌ＼・Ｏｏ５モル／ρの水溶液を用
い、流ｆｆｔ：０．３ｍ（２／分で圧送した。

（４）ｐｌ（指示液供給部ｐ　＋−１指示薬としてブしＪムクレゾールパープル０
．０００２モル／ρ、緩衝剤としてＮ　ａ、ｌｌ　Ｐ　
Ｏ４：０．０００１モル／（ｌ！金含有た水溶液を用い
、流量　０４ｍ１２／分で圧送した。

（５）反応器温度　８０　’Ｃ１Ｃ１冷却器室ｌ晶、検
出器の波長　４３０　ｎｍ、吸光レンジ　０．１Ｇとし
　ノこ　。

その結果第４図にポケりＵＪ７トクラノ、を得た。

実施例４イノシトール　１μｇ／１ｌ（ｌ！を含む溶液　１０７
１（１を−１−泥分す１計を用い、下記条件で分（ｊ１
シた。

（１）溶離液供給部脱イオン水を用い、流速、１ｍσ／分、ＹＴ−力　３５
ｋｇ／ｃｍ’て圧送した。。

（２）分離カラム昭和電工株式会社製、商品名　ノヨウデ・ソクスＫ　Ｓ
　８０１を用い、カラム温度を８０’Ｃと１゜た。

（３）反応液供給部過ヨウ素酸すトリウへ０．０５モル／Ｑの水溶液を月１
い、流量　０　、３　ｍＱ／分て圧送した。

（／１）ｐＨ指示液供給部ｐ　Ｉ−Ｉ指示薬としてプロムチモールブルー００００
２モル／Ｑ、緩衝剤としてＮ　ａ、Ｉ−Ｉ　Ｐ　Ｏ４：
０．０ＯＯＩモル／（！含有した水溶液を用い、流量＋
０．４ｍ０゜７分で圧送した。

（５）反応器温度　８０°Ｃ１冷却器温度室温、検出器
の波長４４５　ｎｕｎ、吸光度レンツ　（］　、　Ｉ　
［ｉどし　）こ　。

その結果第５図に示すり［ノマトグラノ・を得た。

実施例５マンニトールＩμｇ／μρを含む溶液：ｌ０７ｚ０．を
−に泥分析計を用い、下記条件で分析した。

（１）溶離液供給部脱イオン水を用い、流用：　Ｉ　ｍρ／分、圧力　３３
ｋｇ／ｃｍ’で圧送した。

（２）分離カラム昭和電工株式会社製、商品名：ノヨウデックスＫＳ８０
１を用い、カラム温度を８０℃とした。

（３）反応液供給部過ヨウ素酸　００５モル／１２（ＮａＯ）１水溶液を用
いてｐＩＩを４２としたもの）の水溶液を用い、流量　
０．２７ｍρ／分で圧送した。

（４）ｐ＋（指示液イｊ（給部１−１指示液としてブ［ｌムフェノールブルー００００
２モル／　Ｑ　（Ｎ　ａｏ　１１水溶液を用いてｐ　Ｈ
を４８とした乙の）の水溶液を用い、流量０．３ｍ＋２
／分で圧送した。

（５）反応器／ｌＩＮ度・８０　℃、冷却器温度室温、
検出器の波ＩＡ　：　４３０　ｎ１ｎ、吸光度レンツ　
ｏ　１６と　し　ノこ　１゜その結果、第６図に示ケタロマトクラムを得た。

実施例６マンニト−ルｌ１１ｇ／μρを含む溶液　２０μρを１
−泥分析計を用い、下記の条件で分析した。

（１）　溶Ｍ＃、戚　イ共給　童事脱イオン水を用い、流量　１ｍρ／分、圧ツノ　３５　
ｋｇ／　ｃｍ’て圧送した３゜（２）分離カラム昭和型「株式会社製、商品名　ンヨウデックスＫＳ８０
１を用い、カラム温度を８０℃とした。

（３）反応液供給部過ヨウ素酸カリウム：Ｏ，ＯＯ］モル／ρの水溶液を用
い、流量　０５２…Ｑ／分で圧送した。

（４）ｐ＋−１指示液供給部ｐ　Ｉ−■指示薬としてブロムクレゾールパープル０．
０００２モル／Ｑ、緩衝剤としてＮ　ａｐｒ−Ｔ　Ｐ　
Ｏ＋　＋０．０００１モル／ｌ！を含杓−した水溶液を
用い、０．４ｍ（１／分で圧送した。

（５）反応器温度、８０℃、冷却器温度；室？Ｍｆｈ、
検出器波長４３０　ｎｍ、吸光度レンジ　０．１６とし
た。

その結果、第７図に示すクロマトグラムを得た。

〔発明の効果〕

以上述べたように、本発明に係る液体クロマトグラフィ
による糖類の分析計は、還元糖、非還元糖が共に検出可
能で、誘導体化等の前処理を必要とせず、操作が簡単で
、短時間に分析が出来、さらに、検出感度が高く、被検
体試料中に含有される夾雑物の妨害なく糖が分析出来る
など、多くの長所を有し、糖類の分析を必要とする分野
の工業或いは研究に寄与することは極めて大きい。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明に係る液体クロマトグラフィによる糖類
の分析計の一実施例を示すブロックタイヤクラム、第２
図ないし第７図は、実施例において得られたクロマトク
ラムである。槽、３１ｂ　　・・・溶存ガス除去器、３１ｃ・・圧カ
ボンプ、３１ｄ・・・ダンパー　３１ｅ・・　圧力計、
３２・・・・導管、３２ａ・・・・流量調整用抵抗部。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）溶離液供給部、分離用カラム、反応器、冷却器、
分光光度計が順次導管によって直列に接続され、上記溶
離液供給部と分離カラムの間には糖類試料を注入する試
料液注入器が設けられ、上記分離カラムと反応器の間の
導管には、別個に設けられた、過ヨウ素酸または過ヨウ
素酸塩の溶液を送る反応液供給部からの導管が接続され
、冷却器と分光光度計の間の導管には、別個に設けられ
た、ｐＨ指示薬と緩衝剤との溶液を送るｐＨ指示液供給
部からの導管が接続されていることを特徴とする液体ク
ロマトグラフィによる糖類の分析計。
（２）冷却器を設けず反応器と分光光度計とが直接導管
によって接続され、ｐＨ指示液供給部からの導管が上記
反応器と分光光度計の間の導管に接続されている請求項
（１）記載の液体クロマトグラフィによる糖類の分析計
。