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JPH02152996A - 抗体コンジュゲート - Google Patents

抗体コンジュゲート

Info

Publication number
JPH02152996A
JPH02152996A JP1019404A JP1940489A JPH02152996A JP H02152996 A JPH02152996 A JP H02152996A JP 1019404 A JP1019404 A JP 1019404A JP 1940489 A JP1940489 A JP 1940489A JP H02152996 A JPH02152996 A JP H02152996A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
conjugate
alkyl
formula
ethyl
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP1019404A
Other languages
English (en)
Inventor
James Jacob Starling
ジェームズ・ジェイコブ・スターリング
Bennett Coleman Laguzza
ベネット・コールマン・ラグッザ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Eli Lilly and Co
Original Assignee
Eli Lilly and Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eli Lilly and Co filed Critical Eli Lilly and Co
Publication of JPH02152996A publication Critical patent/JPH02152996A/ja
Pending legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C07D519/04—Dimeric indole alkaloids, e.g. vincaleucoblastine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6805—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a vinca alkaloid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

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  • Epidemiology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、免疫学および製薬化学の分野に属し、抗体と
ビンカ薬物の新規なコンジュゲートを提供するものであ
る。
免疫学者および化学者は最近協力体制をとり、一定の抗
原を標的とする免疫グロブリンと、免疫グロブリンによ
って所望の部位に運ばれる薬物またはその他の活性薬剤
からなるコンジュゲートを開発した。この様なコンジュ
ゲートは多数、文献に記載されている。例えば、英国特
許出願第２１３７２０２号および第２１３７２１０号は
、抗癌薬物であるビンカアルカロイドと、腫瘍抗原を標
的とする免疫グロブリンのコンジュゲートを記載してい
る。
この様なコンジュゲートを得るために科学的努力が重ね
られてきたが、この分野はまだその開発初期にあると言
ってよい。抗原に結合するその活性を妨害せずに免疫グ
ロブリンに多量の活性薬剤を負荷するのが困難であるこ
とも、まだあまりわかっていない問題の１つである。本
発明は、免疫グロブリンに対し高割合の薬物を有するコ
ンジュゲートの製造を可能にし、問題に対する１つの解
決を提供するものである。
本発明は、式： ［式中、Ｒ’ｉｉＨ，ＣＨ３＊ｔ：はＣＨＯであＦ）；
ＲＩおよびＲＩが独立している時、Ｒ’はＩ］であり、
Ｒ３とＲ４の一方はエチルであり他方は［（または。
Ｈであり；Ｒ４およびＲ’が、これらが結合している炭
素と共に一緒になっている時、これらはオキ／ラン環を
形成しており（この場合、Ｒ３はエチルしり ０（ＣＩ−ｓアルキル）、ＮＨ，、ＮＨ（Ｃ，、□３ア
ルキル）、ＮＨ−ＣＨ，ＣＨ，−Ｙ、１−ピロリジニル
または１−ピペリジニルであり（ここに、ｎは２−４で
あり、ＹはＣ（、ＯＣＨ，またはＳＣＨ，である）；Ｒ
’　ハＨ１（ＣＩ−３７にキル）ＣＯｌりｏｏ置換（Ｃ
Ｉ−３アルキル）−ＣｏまたはＲ１１であり（ここに、
Ｒ’　ハＣＯＸ　ＣＯＮ　ＨＮ　＝　テあっ”Ｃ１Ｘは
Ｃ１−４直鎖状アルキレン、Ｃ２−６分枝鎖状アルキレ
ン、Ｃ！−。アルケニレン、Ｃｆｆ−４アルキニレン、
Ｃ３−８シクロアルキレン、フェニレン、ヒドロキシ置
換Ｃ１−４アルキレンまたは直接結合である。ただし、
ＲがＮ　ＨＮ　＝　であるかまたはＲＩがＲ６であり、
Ｒ１がＲ６である時にはＲはＮＨＮ＝であることはでき
ず、ＲがＮＨＮ＝である時にはＲ１はＲ・であることは
できない）；ｍは約５から約３５の整数であり、Ａｂは
約６％〜約１８％の炭水化物を含有しているＩｇＧクラ
スの抗体である］で示されるコンジュゲートを提供する
ものである。
上の式においてＸで示される基には、メチレン、エチレ
ン、プロピレン、ブチレン、ビニル、フロピレン、ブテ
ニレン、ブテニレン、プロビニレン、ヒドロ牛ジエチレ
ン、１．２−ジヒドロキシエチレン、■、２−ジメチル
エチレン、１．２，３．４−テトラヒドロキシブチレン
、３，４−ジメチルブチレン、１．４−シクロヘキシレ
ン、１．４−フェニレン、１．２−フェニレン等力アル
。
本発明はまた、約６％〜約１８％の炭水化物を含有して
いるＩｇＧクラスの酸化抗体と、式：％式％ ０（Ｃ，、アルキル’）　、ＮＨ，、ＮＨ（Ｃ，−、ア
ルキル）、ＮＨ−ＣＨ，ＣＨ，−Ｙ、ｌ−ピロリジニル
または１−ピペリジニルであり（ここに、ｎは２４であ
り、ＹはＣＱ１０ＣＨ３またはＳＣＨ３である）；Ｒ８
はＨｓ　（Ｃ（−，７’　ルキシ）−Ｃｏ、’）０口置
換（ＣＩ−３アルキル）−ＣＯまたはＲ８である（ここ
に、Ｒ会はＣ０ＸＣＯＮＨＮＨ，である）。たたし、Ｒ
７がＮＨＮＨ，であるかまたはＲ１がＲ１１である場合
、Ｒ”がＲ９である時にはＲ？はＮ　ＨＮ　Ｈｔである
ことはできず、Ｒ７がＮＨＮＨ，である時にはＲ８はＲ
”であることはできない］ で示されるビンカヒドラジドを反応させることによる、
式（＋）で示されるコンジュゲートの製造方法を提供す
るものである。
本発明は更に、腫瘍崩壊剤としての式（Ｉ）で示される
コンジュゲートの用途、および式（Ｉ）で示されるコン
ジュゲートと薬学的に許容し得る希釈剤を含有してなる
注射用医薬製剤を提供するものである。
本発明のコンジュゲートを構成するヒドラジドの製造に
有用なインドール−ジヒドロインドールアルカロイドは
、以下の２次元構造： ｑコ ［式中、Ｒ”ＳＲ３、Ｒ４およびＲ５は前記の意義を有
する］ で表わすことができる。
上の式（ＩＩ）において、Ｒ１がメチルであり、Ｒ３が
ヒドロキシルであり　Ｒ４がエチルであり、Ｒ５がＨで
ある時、ＶＬＢ（ビンブラスチン）が表わされ：Ｒ”が
ホルミルであり、Ｒｓがヒドロキシルであり、Ｒ４がエ
チルであり、Ｒ５がＨである時、ビンクリスチン（ＶＣ
Ｒ）が表わされ；Ｒ２がメチルであり、Ｒ３がエチルで
あり、Ｒ４がヒドロキシルであり、Ｒ５がＨである時、
ロイロシジンが表わされ、Ｒ２がメチルまたはホルミル
であり、Ｒ３がエチルであり、Ｒ４およびＲ５が、これ
らが結合している炭素と一緒になってアルファーエポキ
シド環を構成している時、それぞれロイロジンおよびロ
イロホルミンが表わされ；Ｒ富がメチルでアリ、Ｒ３が
エチルであり、Ｒ４およびＲ６がＨである時、デオキシ
ＶＬＢ″Ｂ”（４′−デオキシロイロシジンまたは４°
−エビデオキシＶＬＢ）が表わされ；Ｒ２がメチルであ
り、Ｒ４がエチルであり、Ｒ３およびＲ５がＨである時
、デオキシＶＬＢ”Ａ”または４″−デオキシＶＬＢが
表わされ；Ｒ２がＣＨＯであり、Ｒ３がエチルであり、
Ｒ４およびＲ５がＨである時、４′−エビデオキシピン
クリスチン（Ｉ−ホルミル−１−デスメチル−４′−デ
オキシロイロシジン）が表わされる。
これらのビンカアルカロイド（ＩＩＩ）についての参考
文献は、以下の通りである二ロイロジン（米国特許束３
，３７０，０５７号）、ＶＬＢ（米国特許束３．０９７
，１３７号）、ロイロシジン（ビンロシジン）およびロ
イロクリスチン（以下、ビンクリスチンという）（両者
とも、米国特許束３，２０５，２２０号）、デスメチル
ＶＬＢ（米国特許束３，３５４゜１６３号）、４’−エ
ビビンクリスチン（米国特許束４．１４３，０４１号）
、ロイロホルミン、ホルミルロイロジン（米国特許束４
，２７９，８１６号）、およびデオキシＶＬＢ″Ａ″お
よび“Ｂ″［テトラヘトｏンーレターズ（Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ）、　　７８３（Ｉ９５８
）コ　。
本発明のコンジュゲートの製造に有用な式（ｎ）のヒド
ラジドは、ヒドラジドがｃ−３に結合しているかまたは
Ｃ−４に結合しているかによって異なった方法で製造さ
れる。Ｃ−３ヒドラジドは、米国特許筒４．２０３，８
９８号、第１２欄、第６５行以下および実施例３、第１
８欄の方法によって製造される。この方法では、無水ヒ
ドラジンと式（ｆｆｌ）で示されるビンカアルカロイド
をエタノール中、約６０’Ｃで密封管内にて反応させる
。Ｃ−４のアセトキシ基が塩基性反応条件下で加水分解
されるので、この反応の生成物は４−デスアセチル３−
カルボキシヒドラジドである。Ｃ−４のエステル（式（
ｎ）においてＲ８は（Ｃ、−、アルキル）−〇〇または
クロロ（ＣＩ−８−アルキル）−ＣＯである）の製造が
所望の場合、Ｒ８がＨであるｃ−３カルボキシヒドラジ
ドを、アセトンと反応させてＮ″−プロピリデン誘導体
を生成させることによってまず保護する。ヒドラジドの
アシル化し得るＮＨ８基をアシル化に対して効果的に保
護しておいた上で、この“保護ｎ誘導体を、アシルハラ
イド（例えばクロロアセチルクロリド）またはアシル無
水物（例えば無水プロピオン酸）を用い、常法にてア／
ル化することができる。次に、酸で処理することによっ
て、保護基を除去することができる。
しばしば起こるようにＣ−３ヒドロキシルにおいてもア
シル化か起こる場合、湿ったシリカゲルで処理すること
によって、このＣ−３アシル基を優先的に除去すること
ができる一ハーグローブ（）（ａｒｇｒｏｖ６）の米国
特許筒３．３９２，１７３号委照。
ヒドラジド基がＣ−４鎖の一部分く即ち、上の式（Ｉ［
）においてＲ８の一部分）である時、４−デスアセチル
出発物質は、Ｃ−３基の性質によって、以下の様にして
製造される；Ｃ−３がエステル基である時、４−デスア
セチル誘導体は、ハーグローブの米国特許筒３，３９２
，１７３号、実施例１−５の方法によって製造される；
Ｃ−３がアミド基である時、４−デスアセチルは、コン
ラッド等（前掲）、またはクリナン（ＣｕｌＬｉｎａｎ
）の米国特許筒４，２０３．８９８号の方法によって製
造される。
この方法は、Ｃ−４の加水分解を伴なったＣ−３カルボ
キシヒドラジドの製造を含む。次に、このヒドラジドを
アジドに変換し、アジドをアンモニアまたは構造式：Ｎ
Ｈ，−（Ｃ，−、アルキル）で示される１級アミン、ま
たはＮＨ，−ＣＨ，−ＣＩ（！−６−ＣＨ，、ＮＨｔ　
　ＣＨｌ　　ＣＨＩ　　ＯＣＨｓ、ピロリジン、ピペリ
ジンまたはＮＨ，−ＣＨ，−ＣＨｌ−ＣＣと反応させる
。この最終化合物の好ましい製造方法、即ちクロロエチ
ルアミドから所望のｃ−３カルボキサミドＣ−４ヒドロ
キシル誘導体を得るには、上の式（ＩＩＩ）で示される
ビンカアルカロイドの３”−（β−クロロエチル）−３
−スピロ−５゛′−オキサゾリジン−２”、４”−ジオ
ンの分解による。これらのオキサゾリジンジオン誘導体
の！７造は、ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ）およびブトウスキ
−（Ｇ　ｕｔｏｗｓｋｉ）の米国特許ＲＥ３０，５６０
号に記載されている。上のオキサゾリジンジオンからの
β−クロロエチルアミドの製造は、ミラーおよびブトウ
スキーの米国特許筒４，３５７．３３４号の実施例１に
記載されている。（この特許の実施例２は、従来のアジ
ド法を使用して、同一のβ−クロロエチルアミドを製造
する。）１級アミド（式（Ｘ）においてＲはＮ　Ｈ，で
ある）は、直接アンモニア分解またはラネーニッケルを
使用するヒドラジドの還元によって製造することもでき
る一米国特許第４，２０３，８９８号参照。最後に、式
（ＩＩ）においてＲ７が式： （式中、ｎは２−４；即ち、それぞれ、環状スクシンイ
ミド、グルタルイミドまたはアジドミドである） である時、４−ヒドロキシル誘導体は、クリナンの米国
特許筒４，６６７．０３０号に記載の方法によって製造
される。
本発明のコンジュゲートの製造に使用するには、ある種
のビンカヒドラジドが好ましい。式（Ｉ）で示されるコ
ンジ−ゲートは全て有用であるが、以下のタイプのコン
ジュゲートがとりわけ好ましい。
更により限定されたタイプの好ましい化合物を得るため
に、以下のタイプを組み合わせ得ることは理解されるで
あろう。
１）ＲはＮＨＮ−である； ２）Ｒ’はＲ”である； ３）Ｒはアルコキシまたはアルキルアミノである； ４）Ｒ’は水素である； ５）Ｒ”はメチルまたはＣＨＯである；６）Ｒ３はＯＨ
またはエチルである； ７）Ｒ４は水素またはエチルである； ８）Ｒ５は水素である； ９）Ｘはアルキレンである； １０）　ＸはＣｌ−４直鎖状アルキレンである。
以下のリストは、本発明で使用し得る式（ＩＩ）で示さ
れる好ましいビンカヒドラジドの幾つか、および当業者
に知られているその一般名を示す。
４−デスアセチル−ＶＬＢ−３−カルボキシヒドラジド
（Ｒ’＝ＮＨＮＨ，；　Ｒ”＝Ｒ’＝水素；Ｒ雪＝メチ
ル；Ｒ３＝ヒドロキシ；Ｒ４＝エチル）、４−デスアセ
チル−ＶＬＢ−４−ヘミスクシネートヒドラジド（Ｒ’
＝ＯＣＨｓ；　Ｒ＠＝Ｃ０ＣＨ１Ｃｔ（ＩＣｏ　ＮＨＮ
Ｈｔ　：　Ｒ”＝メｆ　ル；　Ｒ’＝　ヒＦ。
キン；Ｒ４＝エチル；Ｒ５＝水素）、 ４−デスアセチル−ＶＬＢ−３−カルボキシヒドラジド
−Ｎ！−スクシンイミド−４−ヘミスフＲ’＝Ｃ０ＣＨ
，ＣＨ，Ｃ０ＮＨＮＩ−１，；　Ｒ”＝メｆル；Ｒ３−
ヒドロキシ；Ｒ４−エチル；Ｒ５＝水素）、４−デスア
セチル−ＶＬＢ−３−カルボキサミド−４−ヘミスクシ
ネートヒドラジド（Ｒ７；Ｎ　Ｈｔ　：　Ｒ・＝Ｃ０Ｃ
Ｈ，ＣＨ，Ｃ０ＮＨＮＨ，、Ｒ”＝メチル；Ｒ３＝ヒド
ロキシ；Ｒ４＝エチル、Ｒ８＝水素）、 ４−デスアセチル−ＶＬＢ−４−ヘミグルタレートヒド
ラジド（Ｒ’＝ＯＣＲ，、Ｒ”＝Ｃ，ＯＣＨ，−ＣＨ，
ＣＨ，Ｃ０ＮＨＮＨ，；　Ｒ”＝メチル；Ｒ３＝ヒドロ
キシ、Ｒ’＝エチル；　Ｒ’−水素）、４−デスアセチ
ル−ＶＣＲ−４−ヘミスクシネートヒドラジド（Ｒ’＝
ＯＣＲ，、Ｒ’＝Ｃ０ＣＨ２−ＣＩ（、Ｃ０ＮＨＮＨ，
；　Ｒ’＝ＣＨ０；　Ｒ’＝＝ヒ）。
キシ；Ｒ４＝エチル；Ｒ６−水素）、 ４−デスアセチル−４′−エビデオキシ−ＶＬＢ−４−
ヘミスクシネートヒドラジド（Ｒ’＝Ｏ−ＣＨ，：　Ｒ
”＝Ｃ０ＣＨ，Ｃ１，Ｃ０ＮＨＮｌ（、；　Ｒ”＝メチ
ル・Ｒ３＝エチル、Ｒ’＝Ｒ″＝水素）、４−デスアセ
チル−Ｖ　Ｌ　Ｂ　−３−カルボキシヒトランド−Ｎ１
−グルタルイミド−４−ヘミスフす Ｃ０ＣＨｔＣｌ（、Ｃ０ＮＨＮＨｔ；　Ｒ’＝メチル；
１じ＝ヒドロキシ、Ｒ’＝エチル：Ｒ５；水素）、４−
デスアセチル−ＶＣＲ−３−カルボキシヒドラジド（Ｒ
’＝ＮＨＮＨ，；　Ｒ”＝Ｒ”＝水素；Ｒ１＝Ｃｌ−１
０；Ｒ’＝ヒドロキシ；Ｒ４＝エチル）、４−デスアセ
チル−４′−エビデオキシ−ＶＬＢ−３−カルボキシヒ
ドラジド（Ｒ’＝ＮＨＮＨ。
、Ｒ”＝Ｒ’＝Ｒ’＝水素；Ｒ３＝水素小Ｒ３＝メチル
ル）、 ４−デスアセチル−ＶＬＢ−３−エチルカルボキサミド
−４−ヘミスクシネートヒドラジド（Ｒ’　−Ｎ　ＨＣ
Ｈ！　ＣＨｓ　；　Ｒ”　＝　ＣＯＣＨｔ　ＣＨ＊　Ｃ
０ＮＨＮＨｔ；Ｒ’＝メチル；Ｒ３＝ヒドロキシ；Ｒ４
＝エチル；Ｒ６＝水素）、 ４−デスアセチル−ＶＬＢ−３−メトキシエチルカルボ
キサミド−４−ヘミスクシネートヒドラジド（ＲＴ＝Ｎ
ＨＣＨＩＣＨ，ＯＣＨ３；　Ｒ”＝Ｃ０ＣＨ，ＣＨ，Ｃ
０ＮＨＮＨｔ；　Ｒ”＝メチル；Ｒ３＝ヒドロキシ、Ｒ
’＝エチル；　Ｒ５＝水素＞、４−デスアセチル−ＶＬ
Ｂ−４−プロピオニル−３−カルボキシヒドラジド（Ｒ
７＝ＮＨＮＨ２：Ｒ＠＝Ｃ０ＣＨ，ＣＨ，：　Ｒ”＝メ
チル；Ｒ３＝ヒドロキシ：Ｒ４＝エチル；Ｒ５＝水素）
。
ｃ−３位において種々置換されているこれらの二量体イ
ンドール−ジヒドロインドールアルカロイドのＣ−４誘
導体（式（ｎ）におけるＲ７参照）の製造は、Ｒ８がＨ
であり、ＲマおよびＲ”−Ｒ’が、英国特許下２，１３
７．２０２Ａ号またはクリナンの米国特許束４，６６７
．０３０号に記載されている多工程法において定義され
た意義を有する、式（ＩＩ）で示される化合物を反応さ
せることによって行われる。
本発明のコンジュゲートのその他の成分は、ＩｇＧクラ
スの酸化抗体、好ましくは、抗体が約６％〜約１８％の
炭水化物を含有するモノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）で
ある。従って、本発明で使用される抗体は非常に珍しい
。なぜなら、通常のＩｇＧ免疫グロブリンは約２−５％
の炭水化物しか含有していないからである。［専門家ら
は、ＩｇＧの炭水化物含量について別の数を予想した。
ボッディング（Ｇｏｄｉｎｇ）（モノクローナル抗体：
理論と実際、アカデミツク・プレス、１９８３．ｐ、９
）は２−３％と報告し、ボーズ等（Ｇｈｏｓｅ　ｅｔ　
ａｌ、）（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、Ｍｅｔｈｏｄｓ、　　
５９．１３０（Ｉ９８３））は３％と言っている。コ 本明細書において、“抗体”なる語句は、上のバラグラ
フに記載されたクラスの抗体のＦａｂ％Ｆ　ａｂ’およ
びＦ　（ａｂ’　＞ｔフラグメントを包含するものとし
て使用されている。
この抗体は、多量の炭水化物が軽鎖上に位置している抗
体であってもよい。しかしながら、重鎖は多量の炭水化
物を含有゛し得るか、または抗体のＦａｂ部分は総体的
に多量の炭水化物を含有し得る。一方、抗体のＦｃ部分
には、多量の炭水化物が含有されていてもよく、または
一部が含をされていてもよい。
本発明で使用される抗体は、約６％〜約１８％の炭水化
物を含有するが、好ましいクラスの抗体は以下の如（、
更に種々の範囲の量の炭水化物を含有する； １）約６％〜約１５％； ２）約６％〜約１２％； ３）約８％〜約１５％； ４）約８％〜約１２％： ５）約６％〜約１０％； ６）約１０％〜約１５％。
免疫化動物の血清から、またはモノクローナル生成物を
分泌するハイブリドーマを培養することによって抗体を
製造する方法は、周知である。多量の炭水化物含量を有
する現在用いられている抗体の様な、一定の特性を有す
る抗体を産生ずるために、遺伝子操作法によってハイブ
リドーマを改変することもできる。純粋な抗体を、その
炭水化物含量を高めるために化学的に修飾することもで
きる。本発明で使用される代表的な抗体には、例えば、 （ｉ）ヒトまたは動物の腫瘍関連抗原；（ｉｉ）ヒトＢ
−およびＴ−細胞抗原；（ｉｉｉ　）ヒトＩａ抗原； （Ｉ■）ウィルス、真菌および細菌性抗原；および（ｖ
）ヒトの炎症またはアレルギー反応に関連する細胞、 に対するモノ−またはポリ−クローナル抗体がある。
ヒトまたは動物の腫瘍関連抗原に対する好ましい抗体に
は、以下のものが挙げられる・（ｉ）癌胎児性抗原で免
疫されたヤギまたはヒツジからのＩｇＧ。
（Ｉ１）ウサギ抗急性リンパ芽球性白血病血清からのＩ
ｇＧ。
（ｉｉｉ　）急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄芽球性
白血病、慢性リンパ芽球性白血病および慢性顆粒球性白
血病に対して生じた種々の霊長類動物抗血清からのＩｇ
Ｇ。
（Ｉｖ）肺癌細胞または細胞フラクシヨンで免疫された
ヤギまたはヒツジからのＩｇＧ。
（ｖ）抗−ヒト結腸直腸癌抗体を分泌しているマウスハ
イブリドーマからのモノクローナルＩｇＧ。
（ｖｌ）抗−ヒト黒色腫抗体を分泌しているマウスハイ
ブリドーマからのモノクローナルＩｇＧ：（ｖｉｉ　）
ヒト白血病細胞と反応する抗体を分泌しているマウスハ
イブリドーマからのモノクローナルＩｇＧ。
（ｖｉ）ヒト神経芽細胞腫細胞と反応する抗体を分泌し
ているマウスハイブリドーマからのモノクローナルＩｇ
Ｇ； （ｉｘ　）ヒト乳房癌抗原と反応する抗体を分泌してい
るマウスハイブリドーマからのモノクローナルＩｇＧ。
（ｘ）ヒト卵巣癌細胞と反応する抗体を分泌しているマ
ウスハイブリドーマからのモノクローナルＩｇＧ。
（ｘｌ）ヒト骨肉腫細胞、ヒト膵癌細胞、ヒト前立腺癌
細胞等と反応する抗体を分泌しているマウスハイブリド
ーマからのモノクローナル［ｇＧ；（ｘｉｉ　）肺、腎
、乳房および膵臓を包含する腺癌に対する抗体を分泌し
ているマウスハイブリドーマからのモノクローナルＩｇ
Ｇ； （ｘｉｉｉ）ヒト扁平上皮癌細胞と反応する抗体を分ｉ
・シているマウスハイブリドーマからのモノクローナル
ＩｇＧ； （ｘｉｖ）　ヒトハイブリドーマ（上のモノクローナル
を包含するが、これらに限定されないヒト腫瘍関連抗原
に対する抗体を分泌するハイブリドーマ）からのモノク
ローナルＩｇＧ。
好ましいコンジュゲートは、モノクローナル抗体、とり
わけ腺癌、扁平上皮癌、移行上皮癌、黒色腫、神経芽細
胞腫、小細胞癌、白血病、リンパ腫および肉腫の様なヒ
ト癌細胞を認識するモノクローナル抗体から製造された
コンジュゲートであ表面の炭水化物のビシナルジオール
間の結合が断たれ、元の結合の両側においてアルデヒド
基が製造されるように過ヨウ素酸塩またはその他の適当
な酸化剤でそれを酸化することによって、ビンカヒドラ
ジドと反応させるための抗体を製造する。
アルデヒド基は、溶液中、その他の機能的試薬の存在下
で実際にアセタール、ヘミアセクール、アミナール、ヘ
ミアミナール等の形をとり得るということは化学者には
理解されよう。
炭水化物　　　　　　　ジアルデヒド 部分構造　　　　　　　生成物 酸化される炭水化物ユニット、および生成されるジアル
デヒドユニットの数の割合は、当業者に理解される様に
、以下の因子の結果である二使用される過ヨウ素酸塩の
ｍ、酸化の一般的反応条件（例えば、時間、温度、溶媒
、濃度等）、抗体に存在するビシナルジオール炭水化物
ユニットノ数、および酸化剤へのその接近し易さ。
別法として、または上の過ヨウ素酸塩酸化と組み合わせ
て、ガラクトースオキシダーゼを用いる酵素的酸化を使
用することができる。これは、炭水化物ユニ７）のガラ
クトース残基の６−　ＣＩ（。
０８位のアルデヒド官能基への変換を触媒する、より選
択的かつ制限的試薬である。酸化を成功裡に行なうため
にこの６−ＣＨ，ＯＨ基は置換されてはならず、シアル
酸残基に結合する基の様な保護基の除去は、酵素ニュー
ラミニダーゼを用いて行なうことができる。上の様に、
生成されるアルデヒド部分の数は多数の変数の関数とな
るであろう。
次に、酸化抗体と式（Ｉ）のビンカヒドラジドを、ヒド
ラジド基の末端窒素の電子のローンベアが酸化抗体のア
ルデヒド基を求める求核反応によってコンジュゲートさ
せる。
通常、抗体１モルは、多数のモルのビンカヒドラジドに
コンジュゲートされる。事実、本発明の利点の１つは、
抗体１分子に多量の薬物を負荷し得ることである。′コ
ンジュゲーシツン比”なる語句は、抗体１モル当たりの
ビンカヒドラジドの平均モル数について使用される。約
５〜約３５のコンジュゲーンヨン比が本発明では通常で
あり、約５〜約２５の範囲のフンジュゲーション比が好
ましい。コンジュゲーシヨン化の更に好ましい範囲は、
約１０〜約２０、約１５〜約２５および約５〜約１５で
ある。
ビンカヒドラジドと酸化抗体のフンジュゲーションは、
当業者既知の常法によって行われる。通常、式（ｎ）で
示されるビンカの、ジメチルホルムアミドの様な水混和
性溶媒中溶液を、酸化抗体の冷緩衝化水溶液に加える。
ビンカを硫酸塩として使用することもでき、その場合、
有機溶媒は必要ではない。約０−８℃の温度が好ましく
、通常、０゜１Ｎ酢酸ナトリウムバツフアーが使用され
る。反応は、暗所かつ不活性雰囲気下で行なわれるのが
最も好ましい。反応は通常、約ｔｏ−２４時間で終了し
、得られたコンジュゲートは、セファデックスクロマト
グラフィーの様な、常法で精製することができる。
以下の実施例で使用されるＭ　ｏ　Ａ　ｂは、ＺＣＥ０
２５、即ち、癌胎児性抗原と反応するＩｇＧサブクラス
のネズミ抗体である。これは、ハイブリチック・インコ
ーホレイテッド（ＨｙｂｒｉｔｅｃｈＩ　ｎｃｏｒｐｏ
ｒａｔｅｄ）のアブデルーナビ等（Ａｂｄｅｌ−Ｎａｂ
ｉ　ｅｔ　ａｌ、、　　Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ上６４．６
１７−２１（Ｉ９８７））によって研究されている。こ
の抗体は、モノクローナル抗体３５の名称の下、とりわ
け癌のための診断薬として、マツチ等（Ｊ、Ｐ、Ｍａｃ
ｈ　ａｎｄ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）によってかなりの
間研究された。
デラロイエ等（Ｄｅｌａｌｏｙｅ　ｅｔ　ａｌ、）、　
　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、　Ｉｎｖｅｓｔ、　７ヱ、３０１−１
１（Ｉ９８６）；ハスケル等（Ｈａｓｋｅｌｌ　ｅｔ　
ａｌ、）＋　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　４３＋　　３８
５７−６４（Ｉ９８３）；サザーランド等（Ｓ　ｕｔｈ
ｅｒｌａｎｄ　ｅｔ　ａｌ、）、　　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒ
ｅｓ、　４ヱ、１６２７−３３（Ｉ９８７）。
ＺＣＥ−０２５は、還元条件下、５ＤＳ−ＰＡＧＥ分析
によって、非常に高い分子量、２８，０００の軽鎖を有
することがわかっている。この方法は、ラエムリ（Ｌａ
ｅｍｍｌｉ）によってＵ、に、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌ　ｏｎ
ｄｏｎ）　２７７．６８０−８５（Ｉ９７０）に記載さ
れた方法であった。ＺＣＥ−０２５をエンドグリコシダ
ーゼＦで処理（エルダー等（Ｅ　１ｄｅｒ　ｅｔａｌ、
、　　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ７
０．　４５４０−４４（Ｉ９８２））すると、５ＤＳ−
ＰＡＧＥ上、対照と同じ領域に軽鎖の大部分が移動し、
このことは軽鎖の高分子量が炭水化物に起因しているこ
とを示している。
実施例１ ｐ　Ｈ５，６のＯ，１Ｍ酢酸ナトリウムバッファー（酢
酸ナトリウム２９．３９、酢酸２．４４Ｎに十分量の滅
菌水を加えてバッファー４Ｑとする）　１　ｙｒＱにＺ
ＣＥ−０２５を１ＯＲ９溶解することによって、溶液を
調製した。この溶液に、激しく撹拌しながら、０−２℃
にてメタ過ヨウ素酸ナトリウム２４１次９を加えた。
この混合物を暗所にて約０−２°Ｃで１０分間撹拌し、
次いで滅菌水中１２．５Ｍエチレングリコール溶液０．
００４ＪＩｆの添加によって反応を抑えた。この新しい
混合物を暗所にて０−２℃で５分間撹拌し、次に遠心し
て、透明な上清および白色ペレットを得た。上清をセフ
ァデックスＧ２５（中程度のメツシュ）ゲルカラムにか
け、生成物を同一の酢酸ナトリウムバッファーで溶離し
た。溶出液を２８０ｘｍのＵＶ光でモニターした。酸化
生成物の濃度を、溶出液フラクシッン毎に２８０ｘｍで
評価した。
上の酸化生成物の溶出ｍ液は、最終タンパク濃１ｉ　２
　、５　ｐ９／　ｘＱおよび総容電３．１＊（！であっ
た。溶液を約４℃に冷却した。
４−デスアセチルＶＬＢ　３−カルボキシヒドラジド硫
酸塩１３．４ｉｙを、冷緩衝化ＭｏＡｂ溶液に加えた。
反応容器に窒素ガスを流し、次いで封をした。反応混合
物を冷却下、暗所にて、磁気撹拌を用いて１６時間撹拌
した。次に反応容器を開き、得られた透明な淡黄色の反
応混合物を、ｐＨ＝７．４のリン酸塩緩衝化食塩水（０
，ＯＩＭＩＪン酸塩、０．１５Ｍ　Ｎａ（ＪＸ溶離剤と
してもｕ）で予め平衡化しておいたセファデックス、：
ｊ２５ゲルでクロマトグラフした。最初にコンジュゲー
ト、次いで未反応の４−デスアセチルＶＬＢ　　３−カ
ルボキシヒドラジドが溶離された。得られたコンジュゲ
ートの収量は、４．８峠中、５．７朽であった。２８０
および２７０ｘｍにおける２元−波長ＵＶスペクトル分
析によって調べたフンジュゲーション比は、ＭｏＡｂ　
１モル当たり、４−デスアセチル−ＶＬＢ−３−カルボ
キシヒドラジド約５２モルであった。
実施例２ 酢酸塩バッファー１ｘ（ｌ中、同一のＭｏＡｂ　　１０
所試料を、メタ過ヨウ素酸ナトリウム３４１ｇで０℃に
て２１分間酸化した。次に、１２．５Ｍエチレングリコ
ール０．０６４ｘ（で反応を抑え、生成物を実施例１と
同様にして精製し、溶液４′ＩＣ中、酸化ＭｏＡｂ　　
９．７Ｒ９を得た。この溶液に０℃にて４−デスアセチ
ル−ＶＬＢ−３−カルボキシヒドラジド硫酸塩１７１９
を加え、この混合物を暗所にて４°Ｃで１６時間放置し
た。次に、反応混合物を２０分間遠心し、上清を実施例
１の記載の様にして後処理し、２７．２のコンシュゲー
ジコン比を有する生成物０．６Ｒ９を得た。
実施例３ 実施例１の方法と同様の方法を行なった。メタ過ヨウ素
酸ナトリウムの量は２．１ｍｙであり、酸化は２１分間
行なった。酸化ＭｏＡｂ　　８．８ｘｙ収電が得られ、
これをビンカヒドラジド１９．ｍ９と反応させ、実施例
２の記載の様にして後処理し、コンシュゲージコン比８
．６を有するコンジュゲート６．９ｚ９を得た。
亙施男Ａ メタ過ヨウ素酸ナトリウムの量が８．６ｘ９でありエチ
レングリコールの量がＯ，０１６１ＦＣである以外は、
実施例３の方法を行なった。酸化ＭｏＡｂの収電は８．
６Ｒ９であり、これをビンカヒドラジド１８ｘ９と反応
させた。コンシュゲージコン比１３．８を有する所望の
コンシュケート５所を得た。
実施例５ メタ過ヨウ素酸ナトリウムの量が８．６ｙ９でありエチ
レングリコールの量が０．０１６ｚｆ２であり、酸化時
間が１０分間である以外は、実施例３の方法を行なった
。酸化ＭｏＡｂ　８．ｌＲ９収量を得た。
これをビンカヒドラジド１９Ｒ９と反応させ、コンシュ
ゲージコン比１０．３を有するコンジュゲート６．５ｘ
ｇを得た。
上の実施例で製造したコンジュゲートを、放射免疫検定
および免疫蛍光によって、抗原−ポジティブＬＳ　１７
４Ｔヒト結腸腺癌細胞への結合、並びに少なくともコン
ジュゲートしていないＺＣＥ０２５への結合について調
べた。免疫蛍光による検定から、コンジュゲートが抗原
−ネガティブＭ１４ヒト黒色腫細胞に結合しなかったこ
とがわかった。
実施例６ 抗体ＺＣＥ−０２５３７４ｏをｐ　Ｈ５，６の酢酸ナト
リウムバッファー２８．８Ｒ（ｌに対して透析し、バッ
ファーを更に８，１村加え、次いで１５０ｘｙ／ｘＱで
含有している過ヨウ素酸ナトリウム水溶液０．５３ｘ＆
と合した。この混合物を暗所にて１０分間撹拌し、次い
でエチレングリコールの添加によって反応を抑えた。次
に、反応混合物を遠心し、上清をセファデックスＧ２５
でクロマトグラフ（溶離剤、酢酸ナトリウムバッファー
）した。
抗体な有フラクンヨンを合し、２８０ｏｍにおいてＵＶ
スペクトル分析によって分析したところ、酸化抗体３５
５Ｒ９が回収されたことがわかった。
これを酢酸ナトリウムバッファー中２　、８　ｍｇ／ｘ
（Ｉ）濃度に希釈し、これに４−デスアセチル−ＶＬＢ
−３−カルボキシヒドラジド５５４　ｘｑを加えた。
反応混合物を４°Ｃで−・夜装置（５、次いで混合物を
セファデックスＧ２５にてクロマトグラフ（溶離剤、生
理学的緩衝化食塩水、ｐＨ７，４）することによって精
製した。生成物含有フラクションを合し、０．２μ膜で
濾過した。１３　、５　ｍ９／　ｚ（２）７ａ度でコン
ジュゲート計３０４　ｍｇが回収され、これは抗体１モ
ル当たり薬物５．０モルのコンジュゲーソン化であった
。
火Ｉ例１− よす高いコンシュゲージコン比の生成物を得るための改
変を加え、実質上、実施例６の方法を行なった。過ヨウ
素酸ナトリウム溶液の量は１５０１９／　ｘ（ｌ濃度で
６．４１（ｌであり、酸化反応は２１分間行なった。同
量のビンカ薬物を使用すると、生成物は８．９ｘｖ／ｍ
（ｌの濃度でコンジュゲート１８７肩９となり、タンパ
ク１モル当たり薬物９゜７モルのコンシュゲージコン比
を存していた。
実施例６および７のコンジュゲートを、Ｉ性ｆヤールズ
・リバー（Ｃｈａｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ）ヌードマウス
中で増殖しているＬＳ１７４Ｔ腫瘍の異種移植片に対し
て試験した。ＬＳ１７４Ｔは、癌胎児性抗原を産生ずる
ヒト結腸直腸腫瘍である。各マウスに１０７細胞の腫瘍
を皮下移植することによって試験を開始した。移植後そ
れぞれ７．１０，１４および１７日口重各マウスに、ビ
ンカａ物３　ｍ９／に９体重を与える投与１のコンジュ
ゲートを注射した。移植によって誘発された腫瘍の大き
さを、移植後４２日まで種々の時間測定した。１０匹の
マウスからなる非処置対照群以外、各処置群は５匹のマ
ウスで構成された。コンジュゲートしていない４−デス
アセチル−ＶＬＢ−３−カルボキシヒドラジドを投与し
た群も試験に含めた。
４２日後、対照群マウスは平均約２３．５ｇの非常に大
きい腫瘍を有した。実施例６のコンジュゲートを投与し
たマウスは全て死亡した。実施例７のコンジュゲートを
投与した１匹の動物は死亡し、その他の４匹は平均約４
．５９の腫瘍を有した。コンジュゲートしていない薬物
を投与した３匹のマウスは死亡し、その他の２匹も平均
約４．５９の腫瘍を有した。
同様の方法で行なった別の試験において、腫瘍はより緩
慢に増殖した。移植の３４日後、対照群マウスは約３．
７ｇの重さの腫瘍を有した。コンジュゲートしていない
薬物を投与したマウスは全て死亡した。実施例６および
７のコンジュゲートを投与したマウスは両者とも、平均
約０．１９の腫瘍を有しただけであった；しかしながら
、実施例６のコンジュゲートを投与した４匹のマウスは
死亡し、実施例７のコンジュゲートを投与したマウスは
全く死亡しなかった。
同様の試験において、ビンカ薬物２　Ｑ／　ｋｇのみを
与える割合でコンジュゲートを投与した。この場合、対
照群マウスは最初の試験と同様、平均約２３、５ｇの腫
瘍を有した。遊離のビンカ薬物または実施例７のコンジ
ュゲートを投与したマウスは４２日目の評価時点で全く
死亡せず；実施例６のコンジュゲートを投与した１匹の
マウスのみが死亡した。遊離のビンカ薬物を投与した動
物の腫瘍は４２日目に平均約８９であり、実施例６およ
び７の薬物を投与したマウスの腫瘍は両者とも平均約５
９であった。
本発明のコンジュゲートは非常に安全であり、非常に予
想外なことに、高いコンジュゲーシゴン比を有するコン
ジュゲートはより低いビンカ薬物含量のコンジュゲート
より安全でさえあるということがわかった。従って、こ
のコンジュゲートは、予想外に安全に、比較的高投与量
の抗新生物ビンカ薬物を患者に投与するための非常に有
利な方法を提供する。
本発明の新規なコンジュゲートは癌の治療に有用であり
、注射に好適な製剤の形で使用するために製造されるの
が好ましい。従って、本発明は、医１剤、例えば本発明
のコンジュゲートと、当業者既知の薬学的に許容し得る
担体または希釈剤を含有してなる注射用製剤を包含する
。製剤は、各投与剤型が、例えば０．Ｏ１〜１０Ｒ９の
活性成分（ビンカ薬物部分に換算して）を含有する単位
投与剤型であるのが好ましい。
本発明の新規なコンジュゲートは広範な投与量範囲で有
効であり、１週間当たり投与１は例えば、癌に罹忠して
いるヒト成人の治療のためには通常、０．０１〜１０ｍ
９／に９ｃビン力薬物部分）の範囲、よりしばしば０．
０３〜９１９／　ｋｇの範囲となるであろう。しかしな
がら、実際に投与されるコンジュゲートの１は、治療さ
れる条件および選ばれる投与経路を含む関連する状況に
照らし、医師によって決定されるということは理解され
るであろう。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ I ［式中、Ｒ＾２はＨ、ＣＨ＿３またはＣＨＯであり；Ｒ
    ＾４およびＲ＾５が独立している時、Ｒ＾６はＨであり
    、Ｒ＾３とＲ＾４の一方はエチルであり他方はＨまたは
    ＯＨであり；Ｒ＾４およびＲ＾５が、これらが結合して
    いる炭素と共に一緒になっている時、これらはオキシラ
    ン環を形成しており（この場合、Ｒ＾３はエチルである
    ）；ＲはＮＨＮ＝、▲数式、化学式、表等があります▼
    、 Ｏ（Ｃ＿１＿−＿３アルキル）、ＮＨ＿２、ＮＨ（Ｃ＿
    １＿−＿３アルキル）、ＮＨ−ＣＨ＿２ＣＨ＿２−Ｙ、
    １−ピロリジニルまたは１−ピペリジニルであり（ここ
    に、ｎは２−４であり、ＹはＣｌ、ＯＣＨ＿３またはＳ
    ＣＨ＿３である）；Ｒ＾１はＨ、（Ｃ＿１＿−＿３アル
    キル）−ＣＯ、クロロ置換（Ｃ＿１＿−＿３アルキル）
    −ＣＯまたはＲ＾８であり（ここに、Ｒ＾８はＣＯＸＣ
    ＯＮＨＮ＝であって、ＸはＣ＿１＿−＿４直鎖状アルキ
    レン、Ｃ＿２＿−＿８分枝鎖状アルキレン、Ｃ＿２＿−
    ＿４アルケニレン、Ｃ＿３＿−＿４アルキニレン、Ｃ＿
    ３＿−＿８シクロアルキレン、フェニレン、ヒドロキシ
    置換Ｃ＿１＿−＿４アルキレンまたは直接結合である。 ただし、ＲがＮＨＮ＝であるかまたはＲ＾１がＲ＾６で
    あり、Ｒ＾１がＲ＾８である時にはＲはＮＨＮ＝である
    ことはできず、ＲがＮＨＮ＝である時にはＲ＾１はＲ＾
    ６であることはできない）；ｍは約５から約３５の整数
    であり：Ａｂは約６％〜約１８％の炭水化物を含有して
    いるＩｇＧクラスの抗体である］ で示されるコンジュゲート。 ２、抗体がモノクローナル抗体である請求項１に記載の
    コンジュゲート。 ３、抗体が、望ましくない哺乳動物細胞の表面の抗原の
    認識のために適合している請求項２に記載のコンジュゲ
    ート。 ４、抗体が、腺癌、扁平上皮癌、移行上皮癌、黒色腫、
    神経芽細胞腫、小細胞癌、白血病、リンパ腫および肉腫
    からなる群から選ばれるヒト癌細胞の認識のために適合
    している請求項１、２または３に記載のコンジュゲート
    。 ５、ＲがＮＨＮ＝であり；Ｒ＾１およびＲ＾５が水素で
    あり；Ｒ＾２がメチルであり；Ｒ＾３がヒドロキシであ
    り；Ｒ＾４がエチルである請求項４に記載のコンジュゲ
    ート。 ６、ＲがＯＣＨ＿３であり；Ｒ＾１がＣＯＣＨ＿２ＣＨ
    ＿２ＣＯＮＨＮ＝であり；Ｒ＾２がメチルであり；Ｒ＾
    ３がヒドロキシであり；Ｒ＾４がエチルであり；Ｒ＾５
    が水素である請求項４に記載のコンジュゲート。 ７、ＲがＮＨ＿２であり；Ｒ＾１がＣＯＣＨ＿２ＣＨ＿
    ２ＣＯＮＨＮ＝であり；Ｒ＾２がメチルであり；Ｒ＾３
    がヒドロキシであり；Ｒ＾４がエチルであり；Ｒ＾５が
    水素である請求項４に記載のコンジュゲート。 ８、請求項１に記載のコンジュゲートを活性成分とし、
    １またはそれ以上の薬学的に許容し得る担体または希釈
    剤を含有してなる医薬製剤。 ９、請求項１に記載のコンジュゲートの製造方法であっ
    て、約６％〜約１８％の炭水化物を含有しているＩｇＧ
    クラスの酸化抗体と、式： ▲数式、化学式、表等があります▼II ［式中、Ｒ＾７はＮＨＮＨ＿２、▲数式、化学式、表等
    があります▼、 Ｏ（Ｃ＿１＿−＿３アルキル）、ＮＨ＿２、ＮＨ（Ｃ＿
    １＿−＿３アルキル）、ＮＨ−ＣＨ＿２ＣＨ＿２−Ｙ、
    １−ピロリジニルまたは１−ピペリジニルであり（ここ
    に、ｎは２−４であり、ＹはＣｌ、ＯＣＨ＿３またはＳ
    ＣＨ＿３である）；Ｒ＾８はＨ、（Ｃ＿１＿−＿３アル
    キル）−ＣＯ、クロロ置換（Ｃ＿１＿−＿３アルキル）
    −ＣＯまたはＲ＾８である（ここに、Ｒ＾９はＣＯＸＣ
    ＯＮＨＮＨ＿２である）。ただし、Ｒ＾７がＮＨＮＨ＿
    ２であるかまたはＲ＾８がＲ＾９であり、Ｒ＾８がＲ＾
    ９である時にはＲ＾７はＮＨＮＨ＿２であることはでき
    ず、Ｒ＾７がＮＨＮＨ＿２である時にはＲ＾８はＲ＾９
    であることはできない］ で示されるビンカヒドラジドを反応させることからなる
    製造方法。 １０、請求項９の製造方法で製造された式（ I ）で示
    されるコンジュゲート。
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