JPH02103467A - 濾紙を用いる免疫分析法 - Google Patents
濾紙を用いる免疫分析法Info
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- JPH02103467A JPH02103467A JP25498088A JP25498088A JPH02103467A JP H02103467 A JPH02103467 A JP H02103467A JP 25498088 A JP25498088 A JP 25498088A JP 25498088 A JP25498088 A JP 25498088A JP H02103467 A JPH02103467 A JP H02103467A
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Landscapes
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は血液や糞便のような液状又はペースト状の試料
中の生体成分の改良された免疫分析法に関するものであ
る。
中の生体成分の改良された免疫分析法に関するものであ
る。
さらに詳しくは、本発明は
「濾紙又は濾紙状担体に担持させた液状又はペースト状
の生体成分含有試料と固相に固定化された抗体又は抗原
とを反応させることによって生体成分を同相上に結合さ
せて分離し、分離した生体成分を測定する免疫分析法に
おいて、濾紙又は濾紙状担体が水溶性又は水分散性であ
ることを特徴とする濾紙を用いる免疫分析法。」 に関するものである。
の生体成分含有試料と固相に固定化された抗体又は抗原
とを反応させることによって生体成分を同相上に結合さ
せて分離し、分離した生体成分を測定する免疫分析法に
おいて、濾紙又は濾紙状担体が水溶性又は水分散性であ
ることを特徴とする濾紙を用いる免疫分析法。」 に関するものである。
本発明に利用する濾紙又は濾紙状担体は水溶性又は水分
散性のものであれば特に材質を限定しないが、通常のパ
ルプ紙にカルボキシメチルセルロースを配合したものが
好適である。
散性のものであれば特に材質を限定しないが、通常のパ
ルプ紙にカルボキシメチルセルロースを配合したものが
好適である。
本発明に於ける固相は生体成分をその表面に結合させて
分離し、引続き分析出来るような固相であれば特に限定
するものではなく、その代表例として通常の免疫分析に
利用されている試験管、マイクロプレート、ビーズ等が
挙げられる。
分離し、引続き分析出来るような固相であれば特に限定
するものではなく、その代表例として通常の免疫分析に
利用されている試験管、マイクロプレート、ビーズ等が
挙げられる。
本発明によれば、集団検診のように固相に抗原又は抗体
が固定化されているマイクロプレート又は自動分析装置
等を利用して多数検体を取扱う免疫分析、例えば大腸ガ
ンや胃潰瘍のような消化管からの出血を伴う疾病を早期
に発見するための糞便中の潜血分析又は生体のホルモン
異常や病原感染を診断するための血中微量成分の免疫分
析を著しく簡便−迅速且つ高精度で行うことが出来る。
が固定化されているマイクロプレート又は自動分析装置
等を利用して多数検体を取扱う免疫分析、例えば大腸ガ
ンや胃潰瘍のような消化管からの出血を伴う疾病を早期
に発見するための糞便中の潜血分析又は生体のホルモン
異常や病原感染を診断するための血中微量成分の免疫分
析を著しく簡便−迅速且つ高精度で行うことが出来る。
(従来の技術)
マイクロプレートを利用して多数検体を取扱う免疫分析
用キットとしては、例えば本発明者等が開発したEIA
(酵素免疫分析法)による便中ヒトヘモグロビン測定
用キット(商品名:チェソクメイト・ヘモ、製造元二本
出願人)が市販されている。このキットは各穴の内面に
抗ヒト・ヘモグロビン抗体を固定化した96穴のマイク
ロプレートを使用し、検体の糞便試料は、直径約5鰭の
円形に離脱するようにあらかじめ切り込みを入れた濾紙
片(東洋濾紙覧7)に塗布した状態で収集し、その円形
部分をビンセントで離脱させてマイクロプレートの穴に
入れ、緩衝液中で振盪・静置することにより検体中のヒ
ト・ヘモグロビンのみを選択的に穴内面の抗体と結合さ
せ、余分の物を洗浄除去した後、結合単離されたヒト・
ヘモグロビンを酵素サンドウィッチ法により測定出来る
ように、各種の必要な試薬類が1セツトにとりまとめて
あり、広く集団検診に利用されており、その商品パンフ
レット[三光純薬側発行〕には測定原理、試薬の種類及
び測定方法が詳細に記載されている。
用キットとしては、例えば本発明者等が開発したEIA
(酵素免疫分析法)による便中ヒトヘモグロビン測定
用キット(商品名:チェソクメイト・ヘモ、製造元二本
出願人)が市販されている。このキットは各穴の内面に
抗ヒト・ヘモグロビン抗体を固定化した96穴のマイク
ロプレートを使用し、検体の糞便試料は、直径約5鰭の
円形に離脱するようにあらかじめ切り込みを入れた濾紙
片(東洋濾紙覧7)に塗布した状態で収集し、その円形
部分をビンセントで離脱させてマイクロプレートの穴に
入れ、緩衝液中で振盪・静置することにより検体中のヒ
ト・ヘモグロビンのみを選択的に穴内面の抗体と結合さ
せ、余分の物を洗浄除去した後、結合単離されたヒト・
ヘモグロビンを酵素サンドウィッチ法により測定出来る
ように、各種の必要な試薬類が1セツトにとりまとめて
あり、広く集団検診に利用されており、その商品パンフ
レット[三光純薬側発行〕には測定原理、試薬の種類及
び測定方法が詳細に記載されている。
このキットで使用する濾紙片は上述のとおり、円形に離
脱し易いように、あらかじめ切り込みが入れてあり(実
開昭61−205066号)被検者は自己の糞便をそれ
に塗布し、数分間風乾後ポリ袋に入れて試験施設に届け
るか、遠隔地の場合は郵送することができ、試験者はそ
れぞれの濾紙片から円形部分をビンセットで引切ってそ
のまま分析用試料としてマイクロプレートの所定の穴に
入れることが出来る。
脱し易いように、あらかじめ切り込みが入れてあり(実
開昭61−205066号)被検者は自己の糞便をそれ
に塗布し、数分間風乾後ポリ袋に入れて試験施設に届け
るか、遠隔地の場合は郵送することができ、試験者はそ
れぞれの濾紙片から円形部分をビンセットで引切ってそ
のまま分析用試料としてマイクロプレートの所定の穴に
入れることが出来る。
本発明は上述の糞便試料のようなペースト状試料又は血
液のような液状試料を収集採取するための濾紙片を水分
散性の濾紙片に改良することを要旨とするもので、これ
により生体成分の分析操作が著しく簡便迅速に行えるよ
うになった。
液のような液状試料を収集採取するための濾紙片を水分
散性の濾紙片に改良することを要旨とするもので、これ
により生体成分の分析操作が著しく簡便迅速に行えるよ
うになった。
(発明が解決しようとする課題)
前述のようにペースト状又は液状の試料を濾紙片に担持
収集して、96六マイクロプレートを使用しETAによ
り微量成分を測定する方法は検出怒度が高く、集団検診
などの多数検体の測定に広く利用されている。
収集して、96六マイクロプレートを使用しETAによ
り微量成分を測定する方法は検出怒度が高く、集団検診
などの多数検体の測定に広く利用されている。
しかしながら、試料を塗布した濾紙をマイクロプレート
の穴に入れて前述の操作で穴の内面に試料中の微量成分
を結合させ、余分の物を洗浄除去する際、穴の中の濾紙
片は洗浄のみでは容易に除去されないためピンセントで
取り除(必要があった。
の穴に入れて前述の操作で穴の内面に試料中の微量成分
を結合させ、余分の物を洗浄除去する際、穴の中の濾紙
片は洗浄のみでは容易に除去されないためピンセントで
取り除(必要があった。
多数の穴から濾紙片をピンセットで取り出す作業は非常
に面倒なため濾紙片を水溶性又は水分散性の材質のもの
に変更し、洗浄除去作業を効率化しようとした。
に面倒なため濾紙片を水溶性又は水分散性の材質のもの
に変更し、洗浄除去作業を効率化しようとした。
(問題を解決するための手段)
本発明は
「(1)濾紙又は濾紙状担体に担持させた液状又はペー
スト状の生体成分含有試料と固相に固定化された抗体又
は抗原とを反応させることによって生体成分を固相上に
結合させて分離し、分離した生体成分を測定する免疫分
析法において、濾紙又は濾紙状担体が水溶性又は水分散
性であることを特徴とする濾紙を用いる免疫分析法。
スト状の生体成分含有試料と固相に固定化された抗体又
は抗原とを反応させることによって生体成分を固相上に
結合させて分離し、分離した生体成分を測定する免疫分
析法において、濾紙又は濾紙状担体が水溶性又は水分散
性であることを特徴とする濾紙を用いる免疫分析法。
(2)濾紙又は濾紙状担体がカルボキシメチルセルロー
スを含有することを特徴とする請求項(11記載の濾紙
を用いる免疫分析法。
スを含有することを特徴とする請求項(11記載の濾紙
を用いる免疫分析法。
(3)固相がマイクロプレートであることを特徴とする
請求項(1)記載の濾紙を用いる免疫分析法。
請求項(1)記載の濾紙を用いる免疫分析法。
(4)試料が糞便であって試料中の生体成分がヘモグロ
ビンであることを特徴とする請求項(1)記載の濾紙を
用いる免疫分析法。」 に関するものである。
ビンであることを特徴とする請求項(1)記載の濾紙を
用いる免疫分析法。」 に関するものである。
本発明を実施するにあたり、試料は血液のような液状の
場合は、そのまま又は緩衝液で希釈してピペットで適宜
滴下し、糞便試料のようなペースト状の場合はヘラ又は
綿棒で適宜塗布して濾紙又は濾紙状担体に担持させる。
場合は、そのまま又は緩衝液で希釈してピペットで適宜
滴下し、糞便試料のようなペースト状の場合はヘラ又は
綿棒で適宜塗布して濾紙又は濾紙状担体に担持させる。
濾紙又は濾紙状担体は試験管、マイクロプレート等の反
応室に入れ易い大きさく通常、直径約5 w+富の円形
)に容易に切り取ることが出来るように、あらかじめ切
り込みが入れであるものを使用し、試料はその切り取ら
れる個所に担持させる。濾紙片又は濾紙状担体は試料中
の分析目的物を変質させるような成分を含んでおらず、
試料を担持させる際、実質的に溶解又は変形せず、試験
管、マイクロプレート等の反応室で、担持している生体
成分を抗原抗体反応により固相に結合させた後、洗浄除
去され易い水分散性を有するものを使用する。
応室に入れ易い大きさく通常、直径約5 w+富の円形
)に容易に切り取ることが出来るように、あらかじめ切
り込みが入れであるものを使用し、試料はその切り取ら
れる個所に担持させる。濾紙片又は濾紙状担体は試料中
の分析目的物を変質させるような成分を含んでおらず、
試料を担持させる際、実質的に溶解又は変形せず、試験
管、マイクロプレート等の反応室で、担持している生体
成分を抗原抗体反応により固相に結合させた後、洗浄除
去され易い水分散性を有するものを使用する。
この目的のために利用する水分散性濾紙又は濾紙状担体
としては、通常のパルプ紙にカルボキシメチルセルロー
スを配合したものが適当であり、特にカルボキシメチル
セルロース80%とパルプ20%からなる水分散性濾紙
〔商品名:ディゾルボWA、製造元二三島製紙側〕が好
適に利用出来る。
としては、通常のパルプ紙にカルボキシメチルセルロー
スを配合したものが適当であり、特にカルボキシメチル
セルロース80%とパルプ20%からなる水分散性濾紙
〔商品名:ディゾルボWA、製造元二三島製紙側〕が好
適に利用出来る。
(発明の効果)
本発明によれば、分析試料を収集するための濾紙又は濾
紙状担体の材質を通常のパルプ製から、水溶性又は水分
散性のものに変更することにより、分析精度に悪影響な
く、著しく簡便迅速に行うことのできる免疫分析法が提
供される。
紙状担体の材質を通常のパルプ製から、水溶性又は水分
散性のものに変更することにより、分析精度に悪影響な
く、著しく簡便迅速に行うことのできる免疫分析法が提
供される。
本発明の効果を詳細に説明するため以下糞便中のヒト・
ヘモグロビンの分析について試験例を示すが、本発明は
ヒト・ヘモグロビンに限定されることなく、当然血中の
免疫成分の分析にも利用出来るものである。
ヘモグロビンの分析について試験例を示すが、本発明は
ヒト・ヘモグロビンに限定されることなく、当然血中の
免疫成分の分析にも利用出来るものである。
試験例1.(糞便中のヒト・ヘモグロビンの分析)病院
から集めた潜血試験陽性の糞便10種を試料とし、これ
を直径5flの円形に切り取ることが出来るように切り
込みを入れた水分散性濾紙(ディゾルボWA)にうずく
塗布し、それぞれの円形部をビンセットで切り取って9
6六マイクロプレートニ入れてヒト・ヘモグロビンの免
疫分析を行ない、通常の濾紙(東洋濾紙階7)を使用し
た場合の分析値と比較した。
から集めた潜血試験陽性の糞便10種を試料とし、これ
を直径5flの円形に切り取ることが出来るように切り
込みを入れた水分散性濾紙(ディゾルボWA)にうずく
塗布し、それぞれの円形部をビンセットで切り取って9
6六マイクロプレートニ入れてヒト・ヘモグロビンの免
疫分析を行ない、通常の濾紙(東洋濾紙階7)を使用し
た場合の分析値と比較した。
即ち、市販の抗ヒト・ヘモグロビン抗体で内面コーティ
ングした96穴マイクロプレートを準備し、その容入に
0.1%ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理食塩液(
以下“A液”という)200μβを加え、これに糞便試
料を塗布した濾紙円形部を入れ、37℃、1時間反応さ
せた後反応液を捨て、容入をA液250μlで3回洗浄
し、その間必要であれば使用済み濾紙片をピンセントで
除去(水分散性濾紙を使用する場合は不要)し、パーオ
キシダーゼ標識抗ヒト・ヘモグロビン抗体液200μl
を加え37℃、1時間反応させる。反応液を捨て、A液
で3回洗浄後、オルトフェニレンジアミン0.16%及
び過酸化水素0.012%を含むリン酸緩衝液200μ
lを加え室温で15分間反応させた後、4N硫酸50μ
lを添加して反応を停止させ、490r+n+の吸光度
を測定する。各測定値は標準ヒト・ヘモグロビン液(5
,10゜20、 40. 80. 160ng/mβ)
の検量線よりヒト・ヘモグロビン濃度に換算し、判定は
60ng/mI!以上の場合に潜血試験陽性(+)とし
、60ng/mi!未満の場合は陰性(−)とした。
ングした96穴マイクロプレートを準備し、その容入に
0.1%ウシ血清アルブミンを含むリン酸生理食塩液(
以下“A液”という)200μβを加え、これに糞便試
料を塗布した濾紙円形部を入れ、37℃、1時間反応さ
せた後反応液を捨て、容入をA液250μlで3回洗浄
し、その間必要であれば使用済み濾紙片をピンセントで
除去(水分散性濾紙を使用する場合は不要)し、パーオ
キシダーゼ標識抗ヒト・ヘモグロビン抗体液200μl
を加え37℃、1時間反応させる。反応液を捨て、A液
で3回洗浄後、オルトフェニレンジアミン0.16%及
び過酸化水素0.012%を含むリン酸緩衝液200μ
lを加え室温で15分間反応させた後、4N硫酸50μ
lを添加して反応を停止させ、490r+n+の吸光度
を測定する。各測定値は標準ヒト・ヘモグロビン液(5
,10゜20、 40. 80. 160ng/mβ)
の検量線よりヒト・ヘモグロビン濃度に換算し、判定は
60ng/mI!以上の場合に潜血試験陽性(+)とし
、60ng/mi!未満の場合は陰性(−)とした。
本試験の結果は第1表に示すとおりであり、従来の濾紙
を使用した場合と、本発明の分散性濾紙を使用した場合
のヒト・ヘモグロビンの測定値は、はぼ完全に一敗した
。
を使用した場合と、本発明の分散性濾紙を使用した場合
のヒト・ヘモグロビンの測定値は、はぼ完全に一敗した
。
なお、表中の成績は各試料について、5回の測定値から
最大及び最小の値を削除した残り3回の測定値の平均値
で示した。
最大及び最小の値を削除した残り3回の測定値の平均値
で示した。
第
表
試験例2.(試料の保存試験)
ヒト・ヘモグロビン含量の異なる試料として試験例1で
使用した試料N116.It7及び1kloの糞便試料
を用い、それぞれ水分散性濾紙と従来の濾紙に塗布し、
10分間風乾後ポリ袋に入れて室温で14日間放置し、
その間経時的にサンプリングしてヒト・ヘモグロビンを
試験例1と同様にして測定した結果、いづれの場合も1
4日間ヒト・ヘモグロビンの経時変化は全く認められな
かった。
使用した試料N116.It7及び1kloの糞便試料
を用い、それぞれ水分散性濾紙と従来の濾紙に塗布し、
10分間風乾後ポリ袋に入れて室温で14日間放置し、
その間経時的にサンプリングしてヒト・ヘモグロビンを
試験例1と同様にして測定した結果、いづれの場合も1
4日間ヒト・ヘモグロビンの経時変化は全く認められな
かった。
Claims (4)
- (1)濾紙又は濾紙状担体に担持させた液状又はペース
ト状の生体成分含有試料と固相に固定化された抗体又は
抗原とを反応させることによって生体成分を固相上に結
合させて分離し、分離した生体成分を測定する免疫分析
法において、濾紙又は濾紙状担体が水溶性又は水分散性
であることを特徴とする濾紙を用いる免疫分析法。 - (2)濾紙又は濾紙状担体がカルボキシメチルセルロー
スを含有することを特徴とする請求項(1)記載の濾紙
を用いる免疫分析法。 - (3)固相がマイクロプレートであることを特徴とする
請求項(1)記載の濾紙を用いる免疫分析法。 - (4)試料が糞便であって試料中の生体成分がヘモグロ
ビンであることを特徴とする請求項(1)記載の濾紙を
用いる免疫分析法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP25498088A JPH02103467A (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 濾紙を用いる免疫分析法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP25498088A JPH02103467A (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 濾紙を用いる免疫分析法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02103467A true JPH02103467A (ja) | 1990-04-16 |
Family
ID=17272544
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP25498088A Pending JPH02103467A (ja) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | 濾紙を用いる免疫分析法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH02103467A (ja) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS59204766A (ja) * | 1983-05-03 | 1984-11-20 | ワ−ナ−−ランバ−ト・コンパニ− | 試料中の潜血を検出する方法 |
-
1988
- 1988-10-12 JP JP25498088A patent/JPH02103467A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS59204766A (ja) * | 1983-05-03 | 1984-11-20 | ワ−ナ−−ランバ−ト・コンパニ− | 試料中の潜血を検出する方法 |
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