JPH01503464A - インフルエンザウイルスの感染の診断及び予防のための合成ペプチド並びにそれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 発明の分野 本発明は、インフルエンザ用の抗原に関する。本発明は％Ｋ、インフルエンザの 抗原決定基を与える合成ペプチド配列体、診断用試薬やワクチンの製造及び抗体 の形成等における抗原としての該配列体の使用、並びにインフルエンザウィルス の感染の診断及び予防における上記のペプチド、試薬、抗体及びワクチンの使用 に関する。

背景資料 〔インフルエンザの重要性〕 インフルエンザは、新たな株の出現後に流行病又は汎流行病の原因となシ得る依 然として重大な伝染病である。監視研究所のネットワークが世界的に設立されて いるが、これらの努力にもかかわらすインフルエンザは依然として実際よシかな シ少ない数が報告されているにすぎない。この原因は少なくとも、普通の程度の 設備しかない研究所において採用されるための迅速かつ信頼性のある試験法がな いことにある。加えて、アマンタゾンの如き効果的な薬は、処置又は予防のため に（特に、初老の人において）充分に用いられておらず、何故なら迅速な診断法 が一般的には利用され得ないからである。

応答性ウィルスが異なる株として絶え間なく再生する傾向があるので、問題は更 に複雑になる。これらの新たな株が出現する場合、該株はそれらの表面上の抗原 決定基の“浮動”又は１転位′を示し、そのためこれらの決定基に基づいて免疫 学的同定が行われる場合免疫学的同定は疑わしいものになる、ということが指摘 される。インフルエンザウィルスのマトリックスタン／４り質の構造は株から株 へ大いに保存される、ということが指摘される。

〔マトリックスタン・９り質〕 インフルエンザのマトリックスタンノ９り質（即チ；“Ｍタンツク質＃）は、イ ンフルエンザグイリオンの主要な内部タンパク質である。Ｍタンパク質は、ウィ ルスの全タンツク質のｔ乙％からなシ、約２７．０００の分子量を有し、またウ ィルスの赤血球凝集素サブユニット及びノイラミニダーゼサブユニットを含有す るエンベロープの脂質二重層の内面を裏張シするように存在している、ことが知 られている。そのペプチド鎖は、２よ２個のアミノ酸を含有している。そのアミ ノ酸配列は報告されている。

インフルエンザに関するマトリックスタンパク質の役割の種々の観点が、多くの 研究者によって調べられている。ウェブスター（Ｗｅｂｍｔｅｒ　）及びヒンス ホ−（Ｈｉｎａｈａｖ　）によシ、「１感染及び免疫性（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎａ ｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ　）　’　（／　９７７年９月号）、ｌり、　（、？） 　。

第３６ノ〜！６６頁」にお込て無傷の単離され九Ｍタン／母り質がマウスにおい てウィルス浄化値を高めた、と報告されている。共同発明者であるプチャ（Ｂｕ Ｃｈ・ｒ）及び彼女の共同研究者達は、「１ジエイ・タリノ・マイクロパイオル （Ｊ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）　’　（／　９！：２年ｌ／月号 ）　、　／　４　、　（！ｒ）　、第ざ７３〜ｇコ０頁」において、インフルエ ンザウィルスに対する抗体を検出するために無傷の単離されたＭタンパク質ｔ− 酵素結合免疫吸着検定（ＥＬＩＳＡ　）に用すたととを報告してｂる。

Ｍタンパク質の性質に関する他の参照的記載には、ｎＭされた無傷のＭタンノ４ り質が／　：　１４０，０００の力価でウサギにおいて抗体応答を引き出し得る ことを示しているところの、共同発明者であるプチャ（Ｂｕｅｈｅｒ　）及び彼 女の共同研究者達の報告（「“ジエイ・イミュノル・メソツズ（Ｊ、　Ｉｍｍｕ ｎｏｌ、　ｂｉｅｔｈｏｄｓ　）”（１９ｇ７）。

９６、第７７〜ｇ！頁」）、Ｍタンパク質の構造における複抗原ドメインに関す る、「“ジニイ・ヴアイアロル（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　）　−（／　９　ｇ　４ ’　）　、　ＩＩデ、第ｓｙｇ〜２Ｓ＝頁」におけるグアノ・クイケ（Ｖ龜ｎＷ ｙｋｅ　）等の報告、並びにインフルエンザウィルス々り質に対するモノクロー ナル抗体及びインフルエンザの診断におけるそれらの使用に関する、「１ランセ ツト（Ｌａｎｃｅｔ　）”（／９ｇ！ｒ年１０月コ乙日）、２．Ｃｇ≠乙／）、 第デ／ｌ〜９／ダ頁」に報告されているマククイリン（ＭｅＱｕｉｌｌｌｎ　） 等の研究がある。

〔他の研究〕

インフルエンザ並びにその診断及び処置の一般的主題に関する他の研究には、グ ランディエン（Ｇｒａｎｄｌ＠ｎ　）等が「１ジエイ・タリノ・マイクロパイオ ル（Ｊ、　Ｃ１１ｎ。

Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ、　）　’　（／　９　ｇ　、！ｒ年／／月号）　、　、２ ！　、　（５）。

第７！ｒ７〜７４０頁」に報告している、インフルエンザ感染の診断のための二 つの免疫検定技法の比較研究、並びにジャリット（５ｈａｌｌｔ　）等が「”ジ エイ・タリノ・マイクロパイオル（Ｊ、　Ｃ１１ｎ、　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ、　 ）　（／９ｇＡｒ年ｌ１月号）、２２．（，５−）、第ｔ７り〜サクデ頁」に報 告している、インフルエンザ感染の診断のためのモノクローナル抗体とポリクロ ナール抗血清の比較研究がある。

インフルエンザ感染の診断の一般的主題に関する他の参照的記載には、例えば、 ニルクメン・アイ（Ｊｕｌｋｕｍ＠ｎ　、　！　）等の「１ジエイ・ヴアイアロ ル・メソツズ（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　）　’　（／　９　ｇ　 ４１年ｇ月号）。

ｑｃｉ＞、第’ｙ〜／ダ頁」、ズ７０グ・ニス・エイ（Ｚｈｕｒｏマ、　Ｓ、Ａ 、　）等の「“デ・マイクロパイオル・エビデミオル・イミュノバイオル（Ｚａ 、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ。

Ｅｐｉｄ＠ｍ１ｏ１．　Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ、　）”（／９ｒｊ年１月号）。

（１）、第ｇｉ−を頁（エング・アプストル（Ｅ＋ｇ。

Ａｂａｔｒ、　）　）　Ｊ　、プタコヴア・エム（Ｐｔａｋｏｖａ　、　Ｍ　） 等の「”アクタ・グアイアロル（Ａｅｔｉ　Ｖｉｒｏｌ、　）　’　（７”ラバ ）（１９ｇ５年）月号）　、　Ｕ　？　（１）　、第１９〜！４頁」、プクリン スカイア・エイ・ジー（ＢｕｋｒｉｎａｋｍｉｍＡ、Ｇ、　）の［１グオグロ・ グアイアロモル（Ｖｏｐｒｏ・Ｖｉｒｏｍｏｌ、　）　−（／　９　ｇ　！ｒ年 １月−二月号）、３０（１）。

第１１．〜２／頁（６／し７　（ｒｅｆ、））　Ｊ、アネスタト。

ジー（Ａｎ＊５ｔａｄ　、　Ｇ　）の「１ジエイ・ハイグ（Ｊ−Ｈｙｇ−）（Ｋ ｏｂｉａｋｏｖａ　、　Ｔ、Ｎ、　）の「“マイクロパイオル・エビデミオル・ イミュノパイオル（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　、　Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ。

Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌ、　）　”　（／　９ざ！年μ月号）、（す、第９３〜３ 頁」、グアノ・ヴオリス長？　−（Ｖａｎ　Ｖｏ市。

Ｌ、Ｐ、）等の「１ジエイ・メト・グイアロル（Ｊ　、　Ｍａｄ。

Ｖｉｒｏｌ　）　”　（／　９　ｇ　ｊ’年を月号）　、　／　Ａ（４Ｚ）　、 第３７Ｓ〜２０頁」及び「“ヴオプロ・グアイアロモル（Ｖｏｐｒｏ。

Ｖｔｒｏｍｏｌ、　）　’　（／　９ｇμ年７月−を月号）、、２９（り。

第４／７〜？頁」、プチャ（Ｂｕｅｈ＠ｒ　）等の「１ジエイ・イミュノル・メ ソツズ（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　）　’（／デ１７）、ｑｂ 、第７７〜ｇ！頁」がある。

上記の先行的研究は、インフルエンザウィルスの一般的な理解にとっては価値が あるが、成る欠点が指摘される。特に、′ｎ製されたＭタンＩ母り質の如き精製 された物質の使用は、汚染及びパッチ間の変動の問題がある。モノクローナル抗 体は、理論的には魅力的であるけれども、低い結合活性及び低い結合定数及びか くして低い価値を有する。

本発明の記載 成る合成ポリペプチドが、インフルエンザＡのＭタンパク質に対する予備形成さ れた抗体と反応し得ること、インフルエンザＡのＭタン／やり質の抗体応答を刺 激し得ること、並びに広範囲のインフルエンザウィルス株に対する選択的な感染 診断を行う際に自然のＭタンパク質（ネイチブＭタン・母り質）の置換物として 潜在的に働き得ること、が今般見出された。これらのタンノクク質のこの抗原反 応性によシ、それらは、広範囲のインフルエンザＡの感染の予防及び／又は処置 にとって有用な抗体を生じせしめるワクチン剤としても用いられ得る。

特に、本発明によｆｉ、ＡＷインフルエンデのＭタンパク質の７９〜１０４を領 域における／！〜２！ｒ個のアミノ酸配列体に実質的に相当する７３〜２３個の アミノ酸残基を有する合成ポリペプチドが高いインフルエンザ抗原反応性を有す る、ということがわかった。

同様に、本発明によシ、ＡｆｆｉインフルエンデのＭタンノ々り質の４１１Ｌ− ｆｆＯ領域における９〜１５個のアミノ酸配列体に実質的に相当する９〜／１個 のアミノ酸残基を有する合成ポリペプチドが高いインフルエンザ抗原反応性を有 する、ということがわかった。

更に、本発明によシ、Ａ型インフルエンデのＭタンパク質の／４９〜／Ａ？領域 における７２〜２１個のアミノ酸配列体に実質的に相当する７２〜２１個のアミ ノ酸残基を有する合成ポリペプチドもまた高いインフルエンザ抗原反応性を有す る、ということがわかった。

他の側面において、本発明は、Ｗ：Ｉ！／リペプチドの塩、該ポリ４ｆチド及び それらの塩のカルがニル及びアミノ末端基のアミド及アシル誘導体、並びに該ポ リ４ｆチドと巨大分子状担体との複合体に関する。

別の他のｇＡ百におりで、本発明は、該ポリペプチド、それらの対応する塩、誘 導体及び複合体の標識変種、並びに放射線免疫検定（ＲＩＡ　）及び酵素結合免 疫吸着検定の如き標識依存性検定法へのそれらの適用に関する。

別の他の側面において、本発明は、鳥類又は哨乳類特にヒトにおけるインフルエ ンザウィルスの存在を検出したシあるいはインフルエンザの感染状態を診断する 方法でろって、該合成ポリペプチドに基づく方法に関する。これらの方法の一つ では、検体から採取された試料が、本発明のペプチド、その塩又はその複合体（ 随意に、適当に標識されたもの）と免疫反応条件下で接触される。もし検体がイ ンフルエンザに感染していたならば、検体の試料もまた、インフルエンザウィル スに対する抗体を含んでいるであろう。本ペプチド（又は塩又は複合体）は、広 範口のかかる抗体と免疫的に反応しよう、この免疫反応が起こっているかどうか は、ＥＩＪａＡ法又はＥＭＩＴ法、放射性標識、ケイ党標識等の如き慣用のリポ ータ−機構で追跡され得る。

第コの代表的な方法を挙げると、該ペプチドあるいはその塩又は複合体（随意に 、適当に標識されたもの）が、添加された抗体に対して試料中の抗原と拮抗せし められる方法であシ、しかしてその結果は拮抗する抗原とペプチドの相対的反応 に基づく。

別の他の側面にお−て、本発Ｆ！Ａは該合成−ｅプチドあるいはそれらの塩又は 複合体く対する抗体に関する。

これらの抗体は、適当な宿主動物において抗体を発現させるべく免疫原としてポ リペプチド（あるいは製薬的に許容され得るその塩、あるいは該ペプチドの複合 体もしくは製薬的に許容され得るその塩）を用すて発現され得る。かかる抗体は 、ＥＬＩＳＡ又はＥＭＩＴ検定らるｂは放射線免疫検定（ＲＩＡ　）の技法の如 き抗体に基づく検定における診断試薬として用いられ得る。純粋な該合成ポリ４ ｆチド、その複合体又Ｆ′ｉ該技法に従って作られた抗体もまた、ＥＬＩＳＡ又 はＥＭＩＴ技法並びに他の免疫検定技法における検量試薬として働き得る。

別の他の側面において、本発明は、鴫乳類又は鳥類特にヒトにおけるインフルエ ンザに対する免疫化法でちって、かかる処置が必要な被処置体に、治療的に有効 な量の１種又はそれ以上の本発明の合成ポリペプチドあるいは製薬的に許容され 得るその塩又は複合体あるいはそれから作られたワクチン（随意に、製薬的に適 当なアジュバント、担体又は希釈剤中のもの）を投与することからなる免疫化法 に関する。

別の他の側面において、本発明は、インフルエンザの処置法において該合成ポリ ペプチドちるいはそれらの複合体又は塩に対する抗体を用いることに関する。

かかる方法においては抗体は１受身免疫化２による治療剤として働き得、しかし てこの技法は、宿主動物又はハイツリドーマ細胞系統からの部分的に精製された 免疫血清がインフルエンザ患者に注入され、しかして感染性インフルエンザウィ ルスに結合しそして中和することによシ治療効果がある。

本明細書及び本請求範囲において、下記の用語は次のように定義される： 「アシル」は、アルキル含有カルボニル基ｔ−指Ｌ、例えばＲ−Ｃ（＝Ｏ）−（ ここで、Ｒは７〜ｇ個の炭素原子を有するアルキル基例えばメチル、エチル、ｎ −プロビル、イソプロピル、ヘキシル、オクチル等である。）を指す。本発明に おいて通常好ましいアシル基は、アセチルである。アシル基は、ポリペプチドの 末ｍ７ミノ基をブロックするのに用いられる。

「抗体」は、抗原例えばインフルエンザ抗原と特異的に結合し得る、免疫グロブ リンと呼ばれるグリコジル化タンパク質の群員を指す。

「抗原」は、抗体の形成をもたらすタン／４り質又は−ｅ７’テド化合物を指す 。

「抗原決定基」又は「抗原決定部位」は、抗原の現実の抗体認識部位を指す。こ の用語は、「エピトープ」と交換的に用すられる。

「担体」は、抗体の形成を容易にするように抗原又はハプテンが結合又は複合化 され得る高分子量（巨大分子）のポリマー物質を指す。担体は、所望するならそ れらの構造中に標識を有し得る。

「複合体」は、担体に化学的に結合された抗原又はハプテンを指す。複合体はま た、他の基を含有し得る。

ｒ　ＥＬＩＳＡ　Ｊは、試料中に存在する抗原又は抗体の量を検出しかつ定量す るために固相に結合された抗体又は抗原及び醪素−抗厘又は酵素−抗体の複合体 を用いる、酵素結合免疫吸着検定を指す。ＥＬＩＳ人技法についての記載は「” 基礎及び臨床免疫学（Ｂａ５ｉｃ　ａｎｄＣＩｉｎｌｅａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏ ｇｙ　）　’　、ディー・ピー・シテス（Ｄ、　Ｐ、　５ｉｔｅｓ　）等、カリ フォルニア州ロスアルトスのラング・メディカル・バグリケーション、ｅ　（Ｌ ａｎｇｅＭｅｄｉｃａｌ　Ｐｕｂｌｌｅａｔｉｏｎｓ　）による出版、／９１２ ．ｇ４’版の第２２章」に見られ、これが参照される。

ｒ　ＥＭＩＴ　Ｊは酵素増殖免疫検定技法を指し、この技法は（１）酵素標識ハ プテン、（コ）ハプテンに特異的な抗体、（３）予備処理試薬、（り緩衝剤が添 加された酵素基質及び（ｊ）試料中の未知の量を検出するための標準物を用いる 。ＥＭＩ　Ｔ技法の記載は、「１酵素免疫検定（Ｅｎｚｙｍｅ　Ｉｍｍｕｎｏｍ ｓｓａｙ　）　’　、イー−ティー・マツギオ（Ｅ、　Ｔ、　Ｍｍｇｇｉｏ　） 編集、フロリダ州ゴカレートンのシー・アール・シー・プレス（ＣＲＣＰｒ・ａ ｍ　）による出版。

／９ｔＯＪの特に第１４１１〜ｌ！Ｏ頁、第２３４〜５頁及び第二ダニ〜３頁に 見られ、これらが参照される。

「エピトープ」は、抗体によって特異的に認識される分子の部分を指す。それは また、決定基とも呼ばれる。

「ケイ光免疫検定」は、抗体に基づく検定でちって測定される種（ｓｐ・ｃｉｅ ｓ　）が、抗体−配位子の錯体中のケイ光種で標識された物質との結合のために 、結合したち、置換したシあるめは拮抗したシする検定を指す。この検定のいく つかの態様では、該錯体が分離され、そして測定された種の量の尺度がケイ光種 の存在又は不存在によシ与えられる。他の態様では、該錯体は錯化されてｂない ケイ光種とは異なったケイ光性を有し、そのため該錯体の形成は錯体を分離する ことなく検出され得る。ケイ党免疫検定技法の記！！は、「ケイ光免疫検定及び 免疫ケイ光測定検定の評論（ＡＲｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｆｌｕｏｒｏｉｍｍｕｎｏ ｉｓｓａｙ　ａｎｄ　ＩｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃＡａｓｍｙ　）　 、ディー・ニス・スミス（Ｄ、　Ｓ、　１５ｍ１ｔｈ　）等。

“アン・クリ７・バイオケム（Ａｎｎ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｂｉｏｅｈｅｍ）　’（ ／９ｇ／）、１ｇ、第２５３〜２７９頁」に見られ、これが参照される。

「バグテン」は、大きな分子に結合するときに抗体の形成をもたらし得る化合物 を指し、通常低分子量である。

「インフルエンザ」は、インフルエンザウィルスによる感染によってもたらされ る病気の状態を指す。インフルエンザウィルスの中には、Ａｍ及びＢ型のウィル スがある。これらＡ型及びＢ型は、轟該分野において認められている。これらの 型か数多く同定され、アメリカンＩｌメイデ・カルチャーコレクションυ−ｅｒ ｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｖ　Ｃｏ１１ｅｅｔｉｏｎ　）にｓｂかつそこ から入手できる。これらの代表的な物は、「“アメリカン・タイｆ−力ｙチャ・ コレクション・カタログの株■（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ 　Ｃｏ１１ｅｅｔ１ｏｎ　Ｃａｔａｌｏｇｕｅ　ｏｆＳｔｒａｉｔ　ｎ　）　＋ 第ダ版−、Ｃｌ９１３”）、アール・ヘイ（Ｒ，Ｈａｙ　）等編集、アメリカン ・タイプ・カルチャ・コレクション、メリーランド州ロツクグイル」の第２７２ 〜２７６頁に記載され、これが参照される。

「標識」は、分子中の検出可能な基を指す。普通の標識の中には、放射線免疫検 定において有用な放射性種、ケイ光免疫検定において有用なケイ光種、ＥＬＩＳ Ａ法及びＥＲｌＩ　Ｔ法において有用な酵素種等がある。

「配位子」は、抗体結合部位を有しかつ受容体に結合し得る分子を指す。

「低級アルキル」は、／〜り個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖のａ加炭化水 素基を指し、例えばメチル、エチル、ｎ−グロビル、イソプロピル、ｎ−ブチル 、イソブチル、第二級ブチル及び第３ｉｉ＆ブチルである。

「マトリックスタンノ母り質」又は「Ｍタンパク質」は、インフルエンザ及びそ の関連ウィルスのタン／４り質構成成分を指す。それらは、上記の１背景″の所 に詳細に記載されている。

ｒ−ｅｆチド」又は「ポリペプチド」は、加水分解する二つ又はそれ以上のアミ ノ酸を生じる比較的低分子量の化合物を指す。

「製薬的に許容され得る塩」及び「塩」は、親のポリペプチドの所望の抗原活性 を保持している塩を指す。

「製薬的に許容され得る塩」は、いかなる不所望な毒物的効果を与えないことに おいて摂取又は非経口的投与等に適している塩を指す、かかる塩及び製薬的に許 容され得る塩の例には、（１）無機酸例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リ ン酸、硝醗等によって形成される酸付加塩並びに有機酸例えば酢酸、ショウ酸、 酒石醗、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、クルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、 アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナ フタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸等によって 形成される塩、Ｃｂ）−価及び多価の金属カチオン例えばナトリウム、カリウム 、亜鉛、カルシウム、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、 ニッケル、カドミウム等あるいはＮ、Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン又はエ チレンジアミンからの有機カチオンによって形成される塩、及び（ｅ）上記のＣ ＆）と（ｂ）の組合せ例えばタンニン酸亜鉛塩等がある。

「放射線免疫検定」又はｒ　ＲＩＡ　Ｊは、抗体に基づく検定であって測定され る種が、抗体−配位子錯体中の放射性標識された物質との結合のために結合した シ、置換したシあるいは拮抗したシする検定を指す。該錯体は分離され、そして 測定された種の量の尺度が放射性の存在又は不存在によシ与えられる。

「受容体」は、抗原と特異的に結合する能力を有する抗体の領域を指す。

「実質的に相当する」は、二つのアミノ酸配列体の性質が互ＬｎＪＣ同一である かあるいｊ−１２個以下のアミノ酸ユニットだけ互すに異なってｈることを指す 。配列体は、所与の位置にお込て異なるアミノ酸を有するたあるいは余分のアミ ノ酸を有するかあるいはアミノ酸を欠如することによシ異なシ得る。好ましくは 配列体は多くとも７つの相違点を有し、そして一層好ましくは配列体は同一でち る。

「ワクチン」は、インフルエンザウィルスに対する特定の抗体の生成を刺激する ことによってインフルエンザを予防、快方又は処置するために投与されるところ の弱毒化された又は死滅された微生物（特定的には、インフルエンザウィルス） ある込は合成ポリペプチド又は複合体の懸濁液又は溶液を指す。

本明細書には、次の略記が、記載のアミノ酸に対して用−られてｂる： アス／母ラーン　Ａ魯ｎ アスパラプン酸　Ａｍｐ システィン　Ｃｙｓ グルタミン　Ｇｌｎ グルタミン酸　Ｇｌｕ グリシン　Ｇ１７ ヒスチジン　Ｈｌｍ イソロイシン　ｌ１ｅ ｐイシン　Ｌｏｕ リシン　Ｌ７畠 メチオニン　Ｍ・ｔ ７ニニルアラニン　ｐｈ・ トレオニン　Ｔｈｒ トリプトファン　Ｔｒｐ チロシン　Ｔｙｒ バリン　Ｖｍｌ これらは、非キラルのアミノ酸であるグリシンを除いてＬ−アミノ酸を表す。本 ＥＡ１ｆ！５書く記載のすべてのイデチド配列は、一般的に受け入れられてｈる 慣習に従って記載されておシ、かくしてＮ末端（即ち、アミノ末増）アミノ酸は 左側にあシ、Ｃ末端（カルぎキシル末増）アミノ酸は右側にある。

好まし１ｎ１１様の記載 一つの側面において、本発明は、インフルエンザ抗原性を有する合成ベグチド配 列体に関する。

：ＩＥ／に挙げられるかかる合成配列体は、Ａ型インフルエンデウイルスのマト リックスタンパク質の７９〜ｉｏ４を領域の／、５″〜２５個のアミノ酸配列に 実質的に相当する約１５〜２３個のアミノ酸を有する。マトリックスタン／ぐり 質の７９〜ｉｏ４を領域は、次の配列をｇ−Ｐｈｅ　−Ｖａ　１−Ｃ１ｎ−Ａｍ 　ｎ−Ａｌ　ｔ−Ｌｅ　ｕ　−Ａｓ　ｎ−Ｇ１　ｙ　−Ａｓ　ｎ−Ｇ１　ｙ−Ａ ｓ　ｐ−Ｐｒｏ−ＡｌＩ３−ＡＳ　ｎ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓ　ｐ　−Ｌ）ｒｖ　− Ａｌ　ｔ−Ｖａ　１−Ｌｙｅ　−Ｌｅ　ｕ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ− Ｌｙｓ　−ＯＨ好ましい態様では、合成配列体は、１５〜２θ個のアミノ酸の長 さを有しかつｇθ〜１０３領域に実質的に相当する。一層好ましくは、１ｇ個の アミノ酸の長さを有しかつざ３〜１００領域に実質的に相当する。特に好ましい 態様では、次のアミノ酸配列を有する：Ｈ−Ａｌ　ｔ−Ｌｅｔ＋　−Ａｓ　ｎ− Ｇ１　ｙ−Ａｍｎ−Ｇｌ　ｙ−Ａｓ　ｐ−Ｐｒｏ　−Ａｍ　ｎ　−Ａｓ　ｎ−Ｍ ｅ　ｔ　−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｙｅ−Ｌ＠ｕ−Ｔｙｒ−ＯＨ第 コに挙げられる合成配列体は、Ａ型インフルエンデウイルスのマトリックスタン パク質のるダ〜ｇＯ領域の９〜ｌ！個のアミノ酸配列に実質的に相当する約９〜 ｌ！個のアミノ酸を有する。マトリックスタンパＧｌ　ｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａ ｒｇ−Ｐｈｅ　−Ｖａ　ｌ　−ＯＨ好ましい態様では、合成配列体は、７３〜１ ３個のアミノ酸の長さを有しかつ６６〜１０領域に実質的に相当する。一層好ま しくは、７３個のアミノ酸の長さを有しかつ６６〜７ｇ領域に実質的に相当する 。特に好ましい態様では、次のアミノ酸配列を有する：Ｈ−Ｌｅｔ＋　−Ｔｈ　 ｒ−Ｖｉ　１−Ｐｒ　ｏ−Ｂｏ　ｒ−Ｇｌ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｙ−Ｌｅｕ　− Ｇｌ　ｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＯＨ 第３に挙げられる合成配列体は、Ａｆｆｉインフルエンザウィルスのマトリック スタンノ奇り質の／４Ｌ９〜／１，９領謔の１２〜．２／個のアミノ酸配列に実 質的に相当する約／ｊ〜２１個のアミノ酸を有する。マトリックスタン／４’り 質のｌダ９〜ｌ乙デ領域は、次の配列を有する： Ｈ−Ａｌｔ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｇｌｎ−Ｇｉｎ−１１＠−Ａｌｔ−Ａｓｐ−８ｅ ｒ−Ｇｌｎ−Ｈｊｍ−Ａｒｇ−８ｅ　ｒ　−Ｈｌ　ｍ−Ａｒｇ−Ｇｌ　ｎ−Ｍｅ 　ｔ　−Ｖａ　ｌ　−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ　−Ｔｈｒ　−ＯＨ好ましい態様では、合 成配列体は、７３〜１９個のアミノ酸の長さを有しかつ１３０〜１６ｇ領域に実 質的に相当する。一層好ましくは、７５個のアミノ俄の長さを有しかつノ！２〜 ／６６領域に実質的に相当する。

特に好ましい態様では、次のアミノ酸配列を有する：Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−１１ ｅ−Ａ）、ａ−Ａｓｐ−８ｏｒ−Ｃ１ｎ−Ｈｌｓ−Ａｒｇ−８ｔｒ−ＨＡｓ−Ａ ｒｇ−Ｇｌｎ−Ｍｅｔ−Ｖａｎ　−ＯＨこれらの合成ポリペプチドの製造＃′ｉ 、下記の１一般的製造技法”Ｃ所におりて記載されている。

本発明はまた、アミノ末端アミノ酸がアシル基（特〈アセチル基）を用いてブロ ックされておシかり／又は力／＋／ゴキシル末端アミノ酸がアミド基に変換され てｂるポリペ′；″テドの塩特に製薬的許容され得る垣に関する。典型的な塩及 びブロックされた物質のＭ造は。

下ｉシＯ”一般的製造技法１の所に記載されてｂる。

ポリペプチドが巨大分子の担体で傾合化される本発明の側面では、適当な担体は 典型的には大きながっゆつくシと代謝される巨大分子例えばタン・中り質、多糖 類例えばラテックスで官能化された七７７０−・ス、アガロース、セルロース、 セルロースビーノ等、ｚｔ＋マー状アくノ酸例えばポリグルタミン酸、ポリリシ ン等、及びアミ７ノ酸；ポリマーでおる。崎に有用なタン、・やり質基′ｊｉは 、血清アルブミン、キーホールカサガイヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ　１１ｍ ｐ＊ｔ　ｈｅｍｏｅｙａｎｊｎ　）、免疫グロブリン分子、甲状腺グロブリン、 卵アルッミン、及び当業者によく知られた他のタン／やり質がある。かかるタン Δり質担体は自然の形態で用すられ得、あるいはそれらの官能差分がＬｙｌ残基 のスクシニル化によシ又はＣｙｍ−チオラクトンとの反応によシ改質され得る。

スルフヒドリル基もまた、アミノ官能基と二−イミノチ第２ン又Ｆｉ３−（４ｊ −ジチオピリジル）プロピオネートＯＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと の反応に、２．夛担体（又は合成ポリペプチド）中に組込まれ得る。過当な担体 はまた、合成ペプチドを結合させるためにスペーサーアーム（例えば、ヘキサメ チレンジアミン又は同様な大きさの他の二官能性分子）が組込まれて改質されて ｂてもよ込。複合体を形成する種もまた、所望するなら標識を組込み得る。ポリ ペプチドそれ自体の場合のように、それらの複合体は、適宜末端アミノ酸の一方 又は両方がアシル又はアミドに変換され得る。かかる複合体の製造は、下記に記 載されてｂる。

本発明の−ｅ７″チド及びそれらの複合体は、インフルエンザ抗原性を示す。従 って、それらけ、この性質がオリ用きれ得る検定技法に用すられ得る。

ぜプチド及びそれらの複合体のインフルエンザ抗原性はまた、治療の際活動し始 まシ得る。一つのかかる適用では、ペプチド又は複合体は、インフルエンザに特 異的な抗体を作るのく用いられる。その方法においては、宿主動物にポリペプチ ド又は複合体が対抗投与されて抗体の性成が誘引され、次いで抗体が集められる 。この方法は、下記の“一般的製造技法”の所に詳細に記載されている。

一般的製造技法 〔ポリペプチド配列体の化学的合成〕 Ｉす４プチドは−ｅ７”チド技術分野の当業者に知られたいかなる技法によって 合成されてもよく、例えば「ジエイ・マイエンホ７ア（Ｊ、　Ｍ＊ｉ＊ｎｈｏｆ ＊ｒ　）　、　＠ホルモンのタン／母り質及び−ｅｆチド（Ｈｏｒｍｏｎａｌ　 Ｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄ　Ｐ＠ｐｔｉｄｏｓ　）　”　、第２巻、第４ｔ６頁、 アカデミツク・プレス（Ａｅａｄ＠ｍｉｅ　Ｐｒｖｓｓ　）　、　（＝ｓ−−ヨ ーク）　、／９７３Ｊ（固相ペグチト°合成のため）及び「イー・シュ四ダー（ Ｅ、　５ｅｈｒｏｄｅｒ　）等、′イグチド類（Ｔｈ＠Ｐｅｐｔｉｄｅｓ）’。

にューヨーク）　、　／９１．！ｒＪ　（古典的な溶液合成のため）ＩＣ見られ る。

これらの方法は、アミノ酸又は適当に保護されたアミノ酸を成長しつつある一ｅ ７＃チド鎖に逐次的に付加させることからなる。一般に、第１のアミノ酸のアミ ノ基又はカルＩキシル基のいずれか一方が適当な保護基によシ保獲される。保護 された即ち誘導体化されたアミノ酸は、適当に保護された補足の基（アミノ又は カルがキシル基）を有するその次のアミノ酸（配列体におけるその次のアミノ酸 ）と、アミド結合を形成させるのに適した条件下で接触される。次いで、この新 たに付加されたアミノ酸残基から保護基が除去され、そしてその次のアミノ酸が 次いで付加される。所望のアミノ酸のすべてが適正な配列にて結合された後、残 存している保護基（及び固体の支持体）が逐次的に又は同時に除去されて最終の ポリペプチドが得られる。また、よく知られているように、一種以上のアミノ酸 を成長しつつある鎖に一度に添加することも可能である。

本発明の化合物を製造する好ましい方法は、固相（グチド合成を伴う、この方法 では、アミノ酸のα−７ミノ官能基は酸感受性基又は塩基感受性基によシ保護さ れる。適当な保護基は、ｔ−ブチルオキシカルがニル（Ｂｏｅ　）　、ペンゾル オキシカル〆ニル（幻等である。

側鎖の活性部位もまた、不所望な反応即ちカップリングを防ぐために保護される 。特に好ましｂ＠鎖の保護基は、アルギニンに対してはニトロ、Ｐ−）Ａ／エン スルホニＡｔ、４ｔ−）１トキシベンゼンスルホニル％Ｚ％Ｂｅｅ及びアダマン チルオキシカルボニルでラシ、チロシンに対シてはベンジル、０−ブロモベンジ ルオキシカルがニル％ａ、６−ジクロロベンジル、イソｆロール、シクロヘキシ ル、シクロペンチル及びアセチルでアシ、セリンに対してはベンジル及びテトラ ヒドロビシニルでｓｂ、ヒスチジンに対してはベンジル、Ｐ−）ルエンスルホニ ル及びコ、４−ジニトロフェニルで６ルｅカルぎキシル末端アミノ！１！は、適 当な固体支持体に結合される。適当な支持体は、反応の試薬及び反応条件九対し て不活性でｓｂ並びに使用媒体に不溶性である。適当な固体支持体には、クロロ メチルｆリスチレンージビニルペンゼンＩリマー等、％にクロロメチルポリスチ レン−１％ジビニルベンゼンポリマーがある。

ペプチドのカル−キシル末端アミノ酸がアミド〔−Ｃ（＝Ｑ）−ＮＨ２）になる 特別な場合には、特に有用な支持体は、「ピー・グイグエイル（ｐ、　Ｖｉｖａ ｉｌｌ＊　）等。

−ヘルプ・チム・アクタ（Ｒｅ１ｙ　Ｃｈｉｎ　Ａｅｔ＆　）”（／９７／）。

！’／−、ｆＪＥ２７７２頁」に記載のベンズヒドリルアミノ−ポリスチレン− ジビニルベンゼンポリマーである。

クロロメチルポリスチレン−ジビニルベンゼンタイプの樹脂への結合は、ｆ−保 護アミノ酸特１ｃＢｏｃ−アミノ酸をエタノール、アセトニトリル、Ｎ、Ｎ−ジ メチルホルムアミド（ＤＭＦ　）等巾のセシウム、テトラメチルアンモニウム又 は４ｔ、！ｒ−ジアゾビシクロＩｎ　！；、’Ａ、０１−５−クンデセンの塩又 は同様な塩の形！１にて特にＤＭＦ中のセシウム塩の形態にてクロロメチル樹脂 と高温例えば約ダグないし６０℃好ましくは約５０℃において約ｌコ〜ａｔ時間 好ましくは約２≠時間反応させることにょシ行われる。Ｎ“−Ｂｏａ−アミノ酸 は、溶媒例えばジクロロメタン中はＤＭＩＰ好ましくはジクロロメタン巾約／　 ＯＤないし３Ｑ℃好ましくＦｉ、、２ｊ℃の温度において約２〜約コダ時間好ま しくは約／、２時間Ｎ、Ｎ’−ノシクロへキシルカル？ジイミド（ＤＣＣ）／／ −ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＢＴ　）媒介カップリングを行うことによ ジベンズヒドリルアミン樹脂に結合される。

Ｎ”−保護基の除去は、例えばメチレンクロライド中のトリフルオロ酢駿溶液又 は他の強酸溶液好ましくはジクロロメタン中の５０％トリフルオロ酢酸浴液の存 在下おおよそ周囲温度において行われ得る。塩基に不安定な保護基は、塩基例え ばＤＭＦ中のピペリジンでの処理によシ除去され得る。保護アミノ酸の各ｋＦｉ 好ましくはおおよそ２３モルの過剰で導入され、カップリングはジクロロメタン 等中特にメチレンクロライド中おおよそ周囲温度において行われ得る。カップリ ング剤は、普通ジクロロメタン中のＤＣＣであるが、Ｎ、Ｎ’−ジイソプロピル カルメジイミド又は他のカルボシイミド（単独に−ＣあるいはＩ（ＢＴ％Ｎ−ヒ ドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒドロキシイミド又はオキシムの存在下にて ）であシ得る。その代わシ、保護アミノ酸活性エステル（例えば、ｐ−二トロフ エ二ル、インタフルオロ７エール等）又は対称無水物が用いられ得る。

固相合成の終夛の時期に、ポリペプチドは別のサイクル部ち脱保護及び中和に付 されそしてその後アシル化好ましくは酢酸無水物でのアセチル化に付されてＮ− アセチル（Ｎ−Ａｅ）ブロックトアミド末端基が生じせしめられるか、ちるいは ポリペプチドは直接樹脂から除去され得る。カルボキシル［−Ｃ（＝０）　−Ｏ Ｈ］末端がアミドとしてブロックされるべきである場合には、ペプチドは、アミ ドを直接生じるベンズヒドリルアミノ−ポリスチレン樹脂上で合成され得るかあ るいは約００ないし約！ｒＯ℃好ましくは約コ５℃の温度において約１２〜約４ Ｌｒ時間好ましくは約ｌざ時間例えばアンモニア／メタノール又はアンモニア／ エタノールでのアンモニア分解を行うことによシ樹脂から除去され得る。遊離ア ミノ末端又はカルがキシル末端を有するペプチドが所望される場合は、ペプチド は、ラジカルスカベンジャー例えばアニソールの存在下無水の液体７フ化水素で 処理することによシ樹脂からＩ［ｆｆｌ除去され得る。樹脂上のある論はアンモ ニア分解によって樹脂から除去されたアミノ−又はカルがキシルーグロツクド（ 保護された）ペプチドも同様に、無水の液体フッ化水素での処理によシ脱保護さ れる。Ｎ“−官能基の塩基に不安定な保護がｔ−ブチルに基づく側鎖保護ととも になされる場合は、最終の樹脂の除去及び脱保護の工程は、トリフルオロ酢酸を 用いて行われ得る。

ポリペプチドから（＠鎖の）保護基を除去する他の手段は、フッ化水素／ピリジ ン錯体での処理、トリス（トリフルオロアセチル）ボロン及びトリフルオロ酢酸 での処理、カーボン又はポリビニルピロリドン上の／９ラジウム及び水素での還 元、あるいは液体アンモニア中のナトリウムでの還元又は液体フッ化水素及びア ニソールでの還元（約−１０ｃ′なＩ／”Ｌ＋／θ℃好ましくは約θ℃の温度に おいて約１５分ないし１時間好ましくは約３０分間）である。後者の処理（ＨＦ ／アニソール）は、普通のベンジルエステル結合が用因られた場合に遊離ＣＯ□ Ｈ末端基を生じせしめるためにあるいはベンズヒドリルアミノ結合が用いられた 場合にＣｏ−ＮＨ２（アミド）末端基を形成させるために、樹脂からの開裂及び 脱保護を同時に行うため用いられ得る。ベンズヒドリルアミン樹脂上のアミド末 ３−ｅｆチドの場合、樹脂の開裂及び脱保護の工程は、上記に記載したように液 体ＨＦ／アニソールを用いる単一工程におりで一緒にされ得る。充分に保護され たポリ＜　７’チドは、次すでクロマトグラフィ工程によシ精製され得る。

〔塩の形成〕

ペプチドは媒体の−を単にｖＩＡ！！することＫよシ塩として得られ得、しかし て所望の対イオンに相当する酸又は塩基を用いて該媒体から最終的に回収される 。

〔担体への複合化〕

本明細書に記載のポリペプチドは、ポリペプチド上のいくつかのタイプの官能基 によって担体く対してカップリングされ得る。該官能基には、ペプチド中の（＆ ）α−又はＩ−７ミノ基、（ｂ）α−１β−又はγ−カルメキシル基、（Ｃ）チ オール基及び（ｄ）芳香族環がある。

α−及びε−アミノ基は、ｂくつかの方法によってカップリングされ得る。それ らの方法の一つでは、担体中の活性化カルボキシル基と反応せしめられる。該活 性化は、カルがシイミド％に水溶性カルボシイミド（ＷＳＣ）例えばＮ　−ｘチ ル−Ｎ’−（３−）　メｆＡ／７　ミノーゾロピルカ／Ｌ／カシイミド）、イン オキシアゾリウム塩、／−エトキシカルボニルーコーエトキシー／、コージヒド ロキシリン、活性エステル形成剤（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、／ −ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル、二Ｆ口フェニルエステル、ペンタフ ルオロフェニルエステル等を生じせしめるためのもの）、散塩化物を生じせしめ るための試薬（例えばＰＣｌ５、しかし非タンパク質担体に対してのみ）、混合 無水物を生じせしめるための試薬（例えば、酢酸無水物）等を用いて行われ得る 。

合成ペプチドの遊離アミノ官能基（リシンのα−アミノ官能基又Ｆｉｔ−７ミノ 官能基のいずれか）は次いで、水性緩衝剤又は有機／水性の混合緩衝剤系（例え ば、ＤＭＦ’　／水）（ｐＨざ）中で担体の活性化カルがキシル官能基と反応せ しめられる。非タンパク質担体の場合、有機溶媒（例えば、ＤＭＦ　）が用いら れ得る。この種の特に有用な技法は、水性緩衝剤中での−（グチドによるタン・ やり質担体の同時的活性化とカップリングあるいはスクシニル化タンパク質担体 のｐ−Ｎｏ２−７エ二ルエステルの調製及びその後の水性緩衝剤中でのペプチド とのカップリングである。

別の方法では、合成ベグチド上の７ミノ官能基は、室温における水溶液又は有機 ／水性の混合溶液（ｐＨ−り）中でのグルタルアルデヒドとの反応によ＃）ある いは二官能性架橋試薬例えばジメチルスペルイミデート、フェニルジイソシアネ ート、フェニルジイソチオシア＄−）、ジフルオロノ二トロベンゼン又はシアン 酸クロ２イドとの反応によシ担体分子上の７ミノ官能基と架橋され得る。

４７’チド上のα−１β−又はｒ−カルがキシル基は、上記の過程とは逆に担体 上のアミンと反応せしめられ得る０合成イグチド上のカルがキシル官能基は、す ぐ上に記載した技法によシ活性化される。活性化カルがキシル官能基は次すで、 上述した水性緩衝剤又は有Ｖ水性の混合緩衝剤の条件を用いて適当な担体分子上 の７ミノ官能基と反応せしめられる。

合成ポリペプチド鎖上に存在するチオール（−８Ｒ）基は、マレイミド官能基の 組込みによって改質されている担体と反応せしめられ得る。−８Ｈ官能基は、特 異的にマレイミド官能基の二重結合中に入シそして−ｅｆチドー担体錯体を先じ る。　ＳＨ官能基は、アミノ官能基（リシンのα−アミノ又はＣ−アミノ）とシ スティンチオールアセトンとの反応によジペプチド中に組込まれ得る。

ペプチドのＴｙｒ及びＨｉｍユニット中に存在する芳香族環は、ビスジアゾ化芳 香族化合物（例えば、ビろジアゾ化ベンゾジン又はビスジアゾ化Ｏ−７ニシジン ）によシタンパク質担体のＴｙｒ及びＨｉｓ残基の芳香族環に架橋され得る。こ の反応は、抗原及び担体の水性溶液又は有機／水性の混合溶液にて行われる。か かる技術に関して、「″′３素学の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｏ ｌｏｇｙ）’Ｃｌ９１０）、７０〜ｔ！Ｊのｒ−抗原・母ブテンー担体複合体の 製造−概観（Ｔｈ＠Ｐｒ＠ｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉｇ＊ｎ１ｅＨａｐ ｔｅｎ　−Ｃａｒｒｉｅｒ　Ｃｏｎｊｔ＋ｇａｔｖｓ　−−Ａ　５ｕｒｖｅｙ　 ）　”　、ビー−エフ・エルランｄ　−（Ｂ、　Ｆ、　Ｅｒｌａｎｇｅｒ　）　 Ｊが参照される。

〔ペプチドの標識変種の製造〕

ポリ−１！ｆチドの放射性標識変種は、いくつかの方法で製造され得る。それら の方法の一つでは、商業的に入手できる　炭素標識アミノ酸がポリペプチドの合 成に用いられ得る。同様に、ＳＨ−アミノ酸が、「シュクイデー（５ｃｈｖｙｚ ＠ｒ　）等、′ヘルプ・リシン・アクタ（Ｈｏ１ｙ、Ｃ１１ｍ、Ａｃｔｓ）ｅ　 ’４２　ｅ　第　２６　コ　コ頁　（／デＳデ）」の酸化マグネシクム処理操作 法によシ製造され得る。

放射性化学薬品と関連したきまシきった予防策以外は、これらの方法は通常の合 成経路に従す得る。その代わシ、最終のポリペプチド又は複合体はトリチクム交 換によシ放射性標識され得る。

薄葉標識は、複合体を形成させるための酵素担体を用ることによシあるいは酵素 活性基を担体又はペプチドに結合させることによシ組込まれ得る。

〔合成ペプチドに対する抗体の生成〕

宿主動物を用いて抗原に対する抗体を生じせしめる方法は、当業者に一般的に知 られている。典型的な製造法においては、１８１又はそれ以上の合成ポリペプチ ド配列体が唾乳類又は鳥類の宿主中に導入される。適当な宿主ＫＦｉ、例えばサ ル、ウシ、ウサギ、ラット、マウス等がある。これは通常、完全７０インドアジ ユバントで乳化された塩水溶液として皮下注射によシ達成される。

抗体は、約ｌケ月後動物から採血することによシ集められる。血液全体が、２５ ℃において数時間凝固せしめられる。≠０１量％の水溶液になるように硫酸アン モニウム水溶液が添加され、そしてＩｇＧ分画が沈殿する。この沈殿物が、遠心 操作によシ集められそして塩溶液又は緩衝剤溶液中に再懸濁されて所望濃度にさ れる。

ｎ４ａされた抗体分画は、診断検定系に用するために更に改質され得る。かかる 改質は、酵素例えばリポジム、ラクトペルオキシダーゼ、アルカリホスファター ゼ及びＥＬＩＳＡ検定用の他の酵素との結合を含み得る。

抗体は、ケイ光性の基で改質され得る。最適には、このケイ光は、抗体と抗原と の結合後直ぐに低下又は高められ得る。抗体−抗原の相互作用の程度を検定する ためのこれらの技法は、当業者に知られている。しかしながら、必須的な第１の 工程は、高親和力の抗体の集団が得られるように、動物への投与のために適した 〔利用及び投与〕 本発明の医療及び獣医療の方法の実施に際し、本発明のポリペプチド又は複合体 又はそれらに対する抗体あるいはかかるものを含有する製薬組成物の有効量が、 処置の必要な被処置体に投与される。これらのｚｙ−ｅプチド、複合体、抗体又 は組成物は、特に非経口的投与（皮下、筋肉及び静脈投与を含む。）を含めて、 特定の最終用途に従って種々の経路のいずれＫよって投与されてもよい。経口投 与も用いられ得、特に当該物質の安定な形態で用いられ得る。個々の場合の最も 適した経路は、用途、活性成分、被処置体及び医療又は獣医療の実行人の判断に 依存しよう。

本物質は、哺乳類例えばヒト、サル、イヌ、けつ菌類動物等並びに非唾乳類例え ば鳥類（例えば、七面鳥、ニワトリ、アヒル等を含めて家禽）に投与され得る。

かかる用途では、本組成物は、一般ＫＭ薬希釈剤例えば注射用の塩水、鉱油等を 含む。経口投与の場合腸被覆タブレットを含めてタブレットが用いられ得、獣医 速用の場合経口投与が処理食餌を用いてなされ得る。

本化合物又は本組成物はまた、当該技術でよく知られているように緩慢放出性貯 蔵物又は植込み配合物によシ投与され得る。本明細書に記載のポリペプチド、ポ リペプチド複合体及び抗体は、通常体重／ｋｌｉｌ当たシｌ〜１０００μｇの量 特に体重／ｋｌＩ当たシｊ−４００μｓの量で投与される。

能動免疫の場合、ポリペプチド又はポリペプチド複合体が、処置の必要な被処置 体中にインフルエンザ抗体を作るために投与される。受身免疫では、宿主動物か らの抗体を含有する部分的に精製した血清が、治療効果を得るためＫｍ処置体中 に導入される。

本発明のポＩ）　＜プチド及びポリペプチド複合体並びにこれらのポリペプチド 及びポリ（プチド複合体に対する抗体はまた、インフルエンザの検出及び診断に おいて有用であシ、特に検定技法例えばＥＬＩＳＡ又はＥＭＩＴ用の検量溶液用 に有用な高純度の物質をもたらすことにおいて有用である。

診断試薬、標本物又はキットに用するための酵素は、複合化の容易性、回転率、 及び生理的流体（この流体中で未知物（分析物）が測定される。）に依シ広く変 えられ得る。選ばれる代表的な酵素には、加水分解酵素、ヌクレアーゼ、アミダ ーゼ、エステラーゼ等があシ、これらは米国特許第３．　ｆｆ　／　Ｚ　ｇ　３ ７号に記載されておシ、これが参照される。

本明ＭＡ書に記載の抗体を診断試薬、標本物又はキットに用いるために該抗体を 標識するための方法及び装置は米国特許第４ｔ、３乙乙、２ダ／号に記載されて おシ、これが参照される。

実施例 次の例によシ、本発明を説明する。これらの例は、本発明を狭くするものあるｂ ＃′ｉ本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではなめ。

例１ ’Ｈ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｖａ　１−Ｐｒ　ｏ−８ｅ　ｒ−Ｇｌ　ｕ−Ａｒｇ−Ｇ ｌ　ｙ−Ｌ＊ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＯＨの製造 この−ｅｆチドは、ベックマン製型式９９０Ｃｃｌイプチド合成装置を用いかつ 下記に示した側鎖を保護する基を有するｔ−Ｂｏｅ保護アミノ酸及び商業的に入 手できるｔ−Ｂｏｅアミノ酸ポリスチレン樹脂を用いて固相技法によシ合成され る：　Ａｓｐ及びＧｌＩ＋につ込てＦｉＯ−ベンジルエステル、　Ｔｈｒ及びＳ ｅｙにつ−ては０−ベンノルエーテル、Ａｒｇについてはトシル、Ｈｉｓについ てはｄｎｐ、Ｃｙ畠に′：）−てはｐ−メトキシベンジル、Ｌｙ−についてはオ ルトクロロペンジルオキシカルゲニル及ヒＴｙｒについてはコ、６−ジクロロベ ンジル。カップリングはすべて、樹脂上のアミノ酸のミリ当量数に対して３モル 過剰のｔ−Ｂｅｅアミノ酸及びジシクロへキシルカルがジイミド（ＤＣＣ）を用 いて行われる６　Ａｓｎ及びＧｌｎの場合、３モル過剰のｔ−ＢｏＣアミノ酸、 ＤＣＣ及びＮ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ　）が用すられる。カ ップリングはすべて、ニンヒドリン試験（「カイザー（Ｋａｉｍｅｒ　）等、′ ″アナルノぐイオタム（ＡｎｉｌＢｉｏｅｈｅｍ　）　”　、　３４’　、　！ ；　９　ｊ　（／　ｑ７０　）　Ｊによシ監視される。４ｔｏパーセントのＴＦ Ａ−ＣＨ２Ｃ１２が、Ｂｏｅの脱保護のために用いられる。メチオニンが存在す る場合は、コーメルカブトエタノール（０，／％）がＴＦＡ　／ＣＨ２Ｃｌ２に 添加される（メチオニンは、未保護スルフヒドリル側鎖で吃って用いられる。） 。合成サイクルの詳細を表１に示す。

表　７ 樹脂上にペプチドを集成するための事柄のスケジュール工程　試薬又は溶媒　時 間（ｗｉｎ） ＩＣＨ２Ｃ１２３回　／、！ コ　４ｔｏ％　ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２予備洗浄　！３　１４０％　ＴＦＡ／ＣＨ ２Ｃ１２３０ａ　ＣＭ２Ｃ１２ｂｍ　／、！ｒ ｊ　１０％　イ”／７”　口ＡソーＬ７／ＣＨ２Ｃｌ２　３回　／、！ｒＡ　Ｃ Ｍ２Ｃ１２３回　／、ｊＳ− ・　ｔ　ＣＨ２Ｃｌ２　３回　乙！ ＩＯＣＭ２Ｃ１２３回　／、！ｒ ｉｉ　ｇｏ％イソプ５Ｉνｉ化／ＣＨ２Ｃｌ２　３回　／、５合成の光子後、ペ プチドは、低−高ＦｉＦ処理操作（「タム（Ｔａｎ）等、′″チツトレット（Ｔ ｅａｍ、　Ｌｅｔｔ、　）　”　。

主１．第２９３９頁ｃｉｑざ２）」及び「１ジエイ・アム・タム・ンク（Ｊ、　 Ａｍ、Ｃｈｅｎｉ、　Ｓｅｅ、　）　’　、／　０　！ｒ　。

第６４４２頁（／９ざ３）」参照）及びｓＮコ脱保護反応を用いてＨＦ反応装置 型式■（ベニンスラ研究所（Ｐ＠ｎ１ｎｓｕｌａ　Ｌａｂｓ　）ｇ　）にて樹脂 から開裂される。ペプチド樹脂は、最初にｌｌ′Ｃにて／時間ゴとジメチルスル フイドとｐ−クレゾールの混合物（２に：ｌ、！：ＩＯ）で処理される。ＨＦ及 びジメチルスルフィドは、完全く蒸発される０次に、一層多くのゴが反応容器中 に蒸留されて、Ｉ対ｐ−クレゾールの比率がｑ：ｌにされる。得られた混合物は 、４℃にて４Ｌｊ分間かくはんされる。その後、ＨＦは、真空下で最初４（’Ｃ にてそして次いで室温にて完全に蒸発される。低ＨＦ濃度では、Ａｍｐ　及（Ｊ 　Ｇｌｕ　（Ｄ　＠鎖のベンジルエステル基が開裂され、アシル化副反応は極く わずかしか伴わない。高ＨＦ工程では、一層酸く安定な基例えばＡｒｇ　（Ｔｏ ｓ　）が除去されかつペプチドは樹脂から完全に開裂される。ＨｉｓのＤＮＰ　 ｉｔは、１ｏｏｏ倍過剰のコーメルカブトエタノールでの処理によシ、ＨＦ開裂 の前に除去される。

ペプチドは、エーテルでの抽出によシ種々の副生物から分離され、そして！ｒ％ （又はペプチドの溶解度に依シ一層高込）酢酸での抽出及びその後の凍結乾燥に よシ樹脂から単離される。粗製ペプチドは、セファデックス（５ｅｐｈａｄ・ｘ ）ＬＨ−コク上でグル濾過に付される。

最終的精製は、グイダク（ｖｙｄａＣ）／３〜２０μＣ１８が充填されたＪｏ（ ７）／　２０　ｍの調製カラムを用いてｍルＣにて達成される。ペプチドの純度 は、分析用ＨＰＬＣ及びアミノ酸分析によ！ｌｌ調べられる。

水から五目凍結乾燥した後、純粋なＨ−Ｌ＠　ｕ　−Ｔｈ　ｒ　−Ｖａ　１−Ｐ ｈｅ−８＊ｒ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａ ｒｇ−ＯＲが酢酸塩として得られる。後で記載する試験において、この“ｔ、６ 〜７ｇｍの配列体は、“−ｅｆチドｌ”と記載される。

例コ Ｈ−Ａｌ　＊−Ｌ＠ｕ−Ａｍｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｈ　−Ｇｌ　ｙ−Ａｓ　ｐ　−Ｐ ｒ　ｏ−ＡＩ！ｌ　−Ａｓ　！Ｌ−Ｍ＠　ｔ　−Ａｓｐ−Ｌｙｅ−Ａｉｍ−Ｖａ ｌ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−ＴＦｒ−ＯＨの製造例／の処理操作を繰返すが適切に保護 されかつ保護されていないアミノ酸を用いると、Ｈ−Ａｌａ−Ｌ・ｕ−Ａｍｎ− Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｍｅ　ｔ　−Ａｓ 　ｐ−Ｌｙｅ−Ａｌ　ｔ−Ｖａ　１−Ｌｙｓ−Ｌ＠ｕ−Ｔｙｒ−ＯＨが製造され そして回収される。後で記載する試験におりて、この１ｇ３〜１００”の配列体 は、′ペプチド２１と記載される。

例３ Ｈ−Ｇｌ　ｕ−Ｇｌ　ｎ−Ｉ　１ａ　−Ａｌ　ｔ−Ａａｐ−８ｅｒ−Ｇｌ　ｎ− Ｈｌ　ｍ−Ａｒｇ　−８ｅ　ｒ−Ｈｌ　ｓ−Ａｒｇ　−Ｇ　ｌ　ｎ　−Ｍｅ　ｔ 　−Ｖａ　１−ＯＨｃｌ製造例１の処理操作を繰返すが適切に保護されかつ保護 されていなめアミノ酸を用いると、Ｈ（；１ｕ−Ｇｌｎ−１１ｅ−Ａｌ　ｔ　− Ａｓ　ｐ−８ｓ　ｒ−Ｇｌ　ｎ−Ｈｌ　ｍ　−Ａｒｔ−８ｅ　ｒ−Ｈｌ　ｓ　− Ａｒｇ−Ｇｌ　ｎ−Ｍｅｔ　−Ｖａ　１−ＯＨが製造されそして回収される。後 で記載する試験において、この＠／！０〜／乙６＃の配列体は、＠″イプチド３ と記載される。

例ダ 放射性標識Ｈ−Ｇｌｕ−Ｇｉｎ−１１ｅ−Ａｌａ−Ａｓｐ−８ｖｒ−Ｇｌｎ−Ｈ ｌｓ−Ａｒｇ−８ｅ　ｒ　−Ｈｌ　ｓ　−Ａｒｇ−Ｇｌ　！ｌ−Ｍ＠　ｔ−Ｖａ 　１−ＯＨの製造「シュクイザ−（Ｓｃｈｗｙｚｅｒ　）等、′ヘルプ・チム・ アクタ（Ｈｅｌｖ、　Ｃｈｉｍ、　Ａｅｔａ）’　（／　９！ｒ　９　）　、　 ４！、、２　。

第２６２２頁」の方法によって製造した放射性標識Ｂｏｃ−アミノ酸を用いて、 例／の方法が繰返される。

これによシ、所望の放射性標識生成物が得られる。

例！ 複合体の製造 例１．コ、３及びダにおいて合成された一ｅｆチドが、タン／譬り質に対して複 合化される。キーホールカサガイヘモシアニン（ＫＬＨ）が、担体として用いら れる。

複合化は１本明細書に概略されている一般的処理操作及びバルナガ−（Ｂｈａｌ ｎｍｇａｒ　）等によって「“ブロク・ナトル・アカド・サイ（Ｐｒｏｅ、　Ｎ ａｔｌ、　Ａｅａｄ、　Ｓｃｉ、　）　”（米国）、（／９ｇｌ、）ヱ！、第４ Ｌダ００頁」に報告されている技法を用いて行われる。

例１〜３の生成物の活性が試験された。いくつかのインフルエンザＡｍウィルス で実験動物（ウサギ）を免疫化することによって生じせしめられた抗血清は、Ｅ ＬＩＳＡ系においてこれらのペプチドに対して反応性がおる。結果を表二〜μに 示す。同様な結果が、二つの他の種に関して認められた。

調べられた２０個のウサギの血清のうち１１個が、種々ノインフルエンザＡ型ウ ィルスでの免疫化後に例１の合成ポリペプチドに対する抗体レベルが増大し、平 均倍増は６００ｇ倍であシ、メジアン倍増は乙Ｏ倍であった（表２）。

調べられた２０個のウサギの血清のうち１９個が、種々のインフルエンザＡ型ウ ィルスでの免疫化後に例コの合＃：ポリペプチドに対する抗体レベルが増大し、 平均倍増は２乙１倍であシ、メジアン倍増はｌＩＬ、２倍であった（表３）。

調べられた２０個のウサギの血清のうち／１個が、種々のインフルエンデＡ型ウ ィルスでの免疫化後に例３の合成ポリペプチドに対する抗体レベルが増大し、平 均倍増は１２．９倍でちシ、メジアン倍増は弘３倍であった（表４Ｌ）。

これらの結果は、サラタイプの範囲にちるインフルエンデウイルスでの免役化に よシ、合成ペプチドに対して反応性がある抗体が生じせしめられる、ということ を示している。

表　二 ）ｖ’ＮＷｓ／３３ｂ　／７１　／ｂ１ｇｇ９　９０９Ｊ　／り’７　３’ｌ／ ３１．　．２．２／／犯３３ｅ１０４’　３３＆ｌ−３４Ｌ　３２３１−９　３ ０　／ｌｈ’１９１　評９７）ＪＰＶＶ、Ｗ　ｇｌｏ　３／３（ｍ　３ｇ１Ｊ　 ７／ｇ６２．’Ａｇｂ　ｇ７．０人／ゲタ／Ｃｍ司／３デ　ダ７デ　／乙乙０９ コ　３９２ｇ　Ｎ、Ｄ、　ｌｏｇ／”　−ＡＩＵＳＳＦＶ９Ｑ／７７芹／　ＲＥ 、／ｂ／コ／３．り／２’Ｈ４４Ｊｇ３．６Ａ／ｆ５−）ｋ／／／／７ｇ　７３ ０　１１７ＪＯ９ｂＡ；、！ｒ　ｇ０２　ｄ９！；　Ｑ７Ｈ／Ｎコ Ｘ−７”　／’Ａ３　ｍ、９！；り　３６；１．３　４／　４．２７　／！；、 ３Ｘ−’７（Ｆ／）　、２！乙６覇コ３０３Ｊコ’Ａ２７３０ｇよダＰＢＸ／ｗ 参２０７／　１１ｇ　／！；、啼　Ｘｉデ　Ｘ）Ａ　！３７　２．１゜ＰＲＵＷ Ｋｈ４＋２０７２　／ｊ５　２各３００　Ａ；ｌ、ｇ　Ｂ　、２３３ｇ　３１． ＱＰＲｇＡｒＫ’＃３６’１２　、ｌ、？、２　？θ汀６　３θ罠ｇ　１０／３ 　７ｍ　り／ＰＲｇＡＫｊ　０３１．ぐ　ｍ　よりｇ３　／３；ｌ！；　Ｎ、Ｄ 、ム鈷〆　−ｐＲと／ηｘト＊３ｂ＃　り３　３ふり０り　亭ざ９．０　３乙　 １７！；９　ｇ９２Ｎ２ いＶ！？−、Ａ；７　／ダコ■を胛／４１７．／　／／７二／乙／／＆５ＨｊＮ コ 、へ／′ビクトリア／３／７！ｆ；　７’１９　３ふ７ｇ−ダ７０　クニ５　ふ ７／ｇ　’２９人／テキサーｖ１／７７　１０１０　２，０≠６　ユ０　り／； 　ニュタ　０．３Ｘ−３／’　４９９　４ｔ９Ｊ！ｒ／　７１３　Ｎ、Ｄ、７７ ．２”　−ｘ−７Ｐ　ｎＯａ９２９　ざ３．、！；　３１．／　１，９／ｉｓ　 ／９．２Ｘ−７９”　Ｊ０３　’Ａ３，０／／　／７．９１．、ｌ、、ＱＱ　□ 　Ｑ、３７Ｎ２ Ｘ−７１Ｉ０Ｘ）７７ｇ、ＳＸ　ｎ！ｊｒ　ｇ２６７２　ｇ、二表　３ Ａ／’ｔψＲ／３３　／りざ　／乙１ｇｇデ　９Ｃワ！ｒ　１１ｇ　＆３ざ７　 ３久ＯＡＡＭＶ３３°　１０４１３３１．、ｂ３４ｔ　３）Ｊ＆９　／１０１． ．３ｇりｎｏ）ｖ’ＰＶｇ／３４ｔ　ｇｌｏ　３／３，０９６３ざム！；す／と Ｏｈたグへ／ブタ１０■νクワ　４’７９　／６乙０≠２　３，９２ざ　６５７ 　二／７７　３．３Ａ／’Ｕｓｓ’Ｖ９０／７７７ダ／／甚／乙／Ｊ３，９３ｇ コニｔおｌコ人／ｌラジ不／γ／／７ｇ　７３０　４ｔ７ＪＯ９ムダ！　／７ダ ６　ふニュ３　３．ＯＩ（／Ｎ、２ ｘ−７ｅ／ｌＡ３　！；０，９！ｎ　３３１．３乙７／　ｉ’Ｂ／ユ９Ｘ−（Ｆ ／）ｆ　ム　ｂｇ、、ｑ＝　３０３Ｊ　１０ｇダ　２３７７　二二ＰＭ４ｇ＃二 ０７／　１ｇｇ　／ふ弘Ｏ５ざ１９　２３７　ｇＯ５３，ダｐＮ／＋”＃２０７ ２　／＃　２４ｔ、３）０　／ｓ１．ｇ　２７０　３，３ｙ４ｔ　／ｌｑＰβゝ ＃３乙→　７３３ふ７１　”；ｇ９０　３０　、＆７品　二Ｓ二Ｎ＝ Ａ／ＲＶｆ／３り　／’Ａ２　、ｌＯ，ＦＪ９　／’１７．／　、２／７　７７ ４１　３．乙３Ｎ２ 人／ビクトリア／ユ／７５　クダデ　３３，１ｇ２　ダク０　７Ｓ９　ム３コｊ 　１３人／テキサヌＩＩ／７７　１０１０　２０≠６　ユ０　／＝？　ｂｇｓ　 ｏ、５ｘ−３／　１　６９９　４１９．ｇ３／　７／３　、Ｂ；り　１７０７　 ’ＡざＸ−７３ｒｒ′！；’？Ｏ１１ｔ？Ｊ９ｇ３．ｊ５；　４ｇｇｇ０２／／ Ａ　Ｏ，’ｌＸ−７９”　気４Ｌ３．０／／　／７．９　ｇ９４Ｌ　１０ｇ９１ ２ＨＥＮコ Ｘ−’７ダ０　コ０７　７ｇ、！＞二ｇ　ｇ９５　！ｒ３　ｂざダ　／、２．デ 平均　５０７〜６７ダ　３７３．３　ｇａｇ　名７９ｇコ／メジアン　ニ評　４ ｔ＆ふ非　１５クニ　３／ダ　ニ６／６　ダコ表ダ ＾１つ９９＄レベ３３ｂ　７７ｇ　ＩＡｉｇｇ９　９Ｃｌｊ　＃５　７．ＸＢ　 ／７９Ａ／ＮＷＳ／、？、？Ｃ１０’ｔ’　３３１ｈｌ＝３’ｌ　３１３１−９ 　２！４’　１５３！ｒ’ｌ　１１）、４’）ＪＰＷ３’ｌ　ｇｌｏ　３／３， ０９４　Ｘｉ−！ｒ　’Ｉ！ｒｇ３　／’１５ｇ３　’Ａ３人／ブラシ’／ｌ／ ／り’／／７ざ　７３０　４ｇ７ｇ０９　ｕＡ；　７’！−／　９／ｌ、　、２ 、ＯＨ／Ｎｕ Ｘ−’７”　／ｌＡ３　！ｒＯ，９！；ｆ　３ｒ１．３　３７　２４１　１０Ｘ −（Ｆ／）’　、２！　ｂ＆！；９２　３０３Ｊ２ｊ９７　２１）０１１　０． ９ＰＲ８／１■（１礼２り７／　１ｇｇ　／Δ３９２夕　ｇ１９　／９３ざ　Ｓ じ？　０．３ｐＲε／ｎｘ紐＊ツク７２　／Ａ：５　調３００　Ｒ１，ｇ　１０ ｇ　７９７３　り３．ざＰＲＪＱＩＨＫ’−１１３１，１！２　２２　７０，９ 見　３０！Ｊ　３１Ｊ　！ｒ、！３７　１０．６ＰＲＬ／ＨＫｊ和乙〈　／！３ 　二／ｇ３　／！；ｉ！　Ｎ、Ｄ、　ｌコ／グ　−ＰＲＪン１田に一＃３乙４９ 〆　７３　３ふ７００　ダｇデ０　／７乙　−デ　／Ｌ７）ｕＮ２ Ａ／ＲＩ／、ター／〈り７　／’７２　Ｘ）、ｇざデ　／！Ｉｔ７／　乙０９　 ユ３．２／　３．ざジＮ２ へ／ビクトリプン２／７タ　７’１９　３ふ１ｇ２　４ｔ７．Ｏ５ｇダ　４り０ コ　／ｌＳＡ／６Ｆ−村７ｙ／／／７’７　１０１０　諺乙　ｚｏ　ｉ、ａヲ　 ／７６　θ３Ｘ−３７’　４９９　４ｔ９Ｊ！ｔ／　７ｉ３Ｎ、Ｄ、　ｇｇ！” 　−Ｘ−７３°　ＨＯ４１９ｎ９　ｇ３Ｊ　ｅ７／　！；、９７４’　／、２． ７ｘ−７９”　−ηり３　４ｔ−３，０／／　／７．９　ｎ！ｒ０　３，０３／ 　０ＪＨ７Ｎ、２ Ｘ−７４Ｌ０　よη　パＳコ　ｇデ！ｒ　／３１．　７３１．／　／θＯ表コ、 ３及びダの注記 １　表面抗原Ｈ（ＨＡ、赤血球凝集素）及びＮ（ＮＡ、ノイラミニダーゼ）に関 するサラタイプ。

ｂ　サルの腎臓細胞に通されたウィルス（血清製剤ナコ０４ｔ２）。

Ｃサルの腎臓細胞に通されたウィルス（血清製剤す二〇４ｔ３）。

ｄ　Ａ／７”タ／Ｎａｒ／／／／７６表面抗原及びＡ　／　Ｐ　Ｒｇ／３ダ内部 抗原を含有する組換え体ウィルス。

ｅ　Ａ　／　ＮＷＳ　／　３３からの胆及びＡ　／　ＲＩ／、ｔ＋１５７からの ＮＡ　′（ｉ−含有する組換え体ウィルス。

ｆ　Ａ／Ｎｗｓ／３３から）ＨＡ及びＡ　／ＲＩ　／Ａ；＋／！ｒ７からのＮＡ を含有する組換え体ウィルス。

ｇ　Ａ　／　ｐｎｇ　／　３１１　（ケンブリッジ系統）からの琺及びＡ／ホン コン／ざ／乙ｇ（×Ａ２３　ＩＩ　３ｈ　、ジエイ・エル・シュルマン（Ｊ、　 Ｌ、　５ｅｈｕｌｒｎａｎ　）　）からのＮＡを含有する組換え体ウィルス（血 清製剤す二〇り／）。

ｈｇ参照、血清製剤す２０７２゜ ｔｇ参照、血清製剤Φ３６グコ。

ｊｇ参照、血清製剤す３６’４３゜ ｋｇ参照、血清製剤≠３１１゜ Ｉ　Ａ／アイチ／１ｇからの彪及びＮＡ及びＡ　／　ＰＲｇ／３μからのＭタン ／４り質含有内部抗原を含有する高産生性組換え体ウィルス株。

ｍＡ／パンコク／７９からの臥及びＮＡを含有する高産生性組換え体ウィルス株 。

ｎ　Ａ／フィリピン／１１からのム及びＮＡ　ｆ：含有する高産生性組換え体ウ ィルス株。

ｏ　Ｈ＠ｑｌ／グラバ１５６からの−及びＡ／パンコク／７９からのＮＡｔ−含 有する組換え体ウィルス。

国際調査報告 １ＩＩｌｖ鴫−−＾−ｅｋｔａｌ＄　−、ｐ（＋／υＳ　ε８１０ｎＳε６、。

１．７０．、。＋０．。。４．。ＩＩＩＩＭ　Ｎ。　７ｃτ、／とＳ　二二゛０ １−三６国際調査報告 ＵＳ　８８０１５ε６

Claims (31)

【特許請求の範囲】
1. １．約１５〜約２５個のアミノ酸の長さを有しかつＡ型インフルエンザウイルス のマトリックスタンパク質の７９〜１０４領域の１５〜２５個のアミノ酸配列に 実質的に相当するポリペプチド、約９〜約１５個のアミノ酸の長さを有しかつＡ 型インフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質の６４〜８０領域の９〜１ ５個のアミノ酸配列に実質的に相当するポリペプチド及び約１２〜約２１個のア ミノ酸の長さを有しかつＡ型インフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質 の１４９〜１６９領域の１２〜２１個のアミノ酸配列に実質的に相当するポリペ プチドから選択された、インフルエンザウイルスの抗原反応性を示す合成ポリペ プチド。
2. ２．１５〜２０個のアミノ酸の長さを有しかつＡ型インフルエンザウイルスのマ トリックスタンパク質の８０〜１０３領域に実質的に相当する請求の範囲第１項 の合成ポリペプチド。
3. ３．１８個のアミノ酸の長さを有しかつ【配列があります】のアミノ酸配列を有 する、請求の 範囲第２項の合成ポリペプチド。
4. ４．１３〜１５個のアミノ酸の長さを有しかつＡ型インフルエンザウイルスのマ トリックスタンパク質の６６〜８０領域に実質的に相当する、請求の範囲第１項 の合成ポリペプチド。
5. ５．１３個のアミノ酸の長さを有しかつ【配列があります】のアミノ酸配列を有 する、請求の範囲第４項の合成ポリペプチド。
6. ６．１３〜１９個のアミノ酸の長さを有しかつＡ型インフルエンザウイルスのマ トリックスタンパク質の１５０〜１６８領域に実質的に相当する、請求の範囲第 １項の合成ポリペプチド。
7. ７．１５個のアミノ酸の長さを有しかつ【配列があります】のアミノ酸配列を有 する、請求の範囲第６項の合成ペプチド。
8. ８．請求の範囲第１項のポリペプチドの塩。
9. ９．放射性標識を更に有する、請求の範囲第１項のポリペプチド。
10. １０．カルボキシル末端アミノ酸がアミド基に変換されている、請求の範囲第１ 項のポリペプチド。
11. １１．アミノ末端アミノ酸がアシル基でブロツクされている、請求の範囲第１項 のポリペプチド。
12. １２．請求の範囲第１項の合成ポリペプチドが巨大分子の担体に結合されている 巨大分子の担体からなる複合体。
13. １３．ポリペプチドのカルボキシル末端アミノ酸がアミド基に変換されかつ／又 はアミノ末端アミノ酸がアシル基でブロツクされている、請求の範囲第１２項の 複合体。
14. １４．担体がタンパ質である、請求の範囲第１２項の複合体。
15. １５．担体が標識を有する、請求の範囲第１２項の複合体。
16. １６．標識が放射性標識である、請求の範囲第１５項の複合体。
17. １７．標識がケイ光標識である、請求の範囲第１５項の複合体。
18. １８．標識が酵素標識である、請求の範囲第１５項の複合体。
19. １９．請求の範囲第１項のポリペプチドに対する抗体。
20. ２０．請求の範囲第１２項の複合体に対する抗体。
21. ２１．インフルエンザウイルスに特異的な抗体を作る方法であつて、宿主動物に 請求の範囲第１項のポリペプチドを対抗投与して抗体を生じせしめそしてこの抗 体を集めることからなる上記方法。
22. ２２．請求の範囲第１項のポリペプチドに特異的な抗体を作る方法であつて、宿 主動物に該ポリペプチドを対抗投与して抗体を生じせしめそしてこの抗体を集め ることからなる上記方法。
23. ２３．インフルエンザウィルスに特異的な抗体を作る方法てあつて、宿主動物に 請求の範囲第１２項の複合体を対抗投与して抗体を生じせしめそしてこの抗体を 集めることからなる上記方法。
24. ２４．試料中のインフルエンザウイルスの存在を測定する方法であつて、免疫反 応条件下で該試料を請求の範囲第１９項の抗体と接触させそして該ウイルスと該 抗体との免疫結合を検出することからなる上記方法。
25. ２５．試料中のインフルエンザウイルスの存在を測定する方法であつて、免疫反 応条件下で該試料を請求の範囲第２０項の抗体と接触させそして該ウイルスと該 抗体との免疫結合を検出することからなる上記方法。
26. ２６．試料中のインフルエンザウイルスに対する抗体の存在を測定する方法であ つて、免疫反応条件下で該試料を請求の範囲第１項のポリペプチドと接触させそ して該ペプチドと該抗体との免疫結合を検出することからなる上記方法。
27. ２７．試料中のインフルエンザウイルスに対する抗体の存在を測定する方法であ つて、免疫反応条件下で該試料を請求の範囲第９項の複合体と接触させそして該 ペプチドと該抗体との免疫結合を検出することからなる上記方法。
28. ２８．インフルエンザの処置が必要な被処置体のインフルエンザ処置方法であつ て、治療的に有効なインフルエンザ処置量の請求の範囲第１９項の抗体を該被処 置体に投与することからなる上記方法。
29. ２９．インフルエンザの処置が必要な被処置体のインフルエンザ処置方法であつ て、治療的に有効なインフルエンザ処置量の請求の範囲第２０項の抗体を該被処 置体に投与することからなる上記方法。
30. ３０．哺乳類又は鳥をインフルエンザに対して免疫化する方法であつて、治療的 に有効なインフルエンザ免疫化量の請求の範囲第１項のポリペプチドを該哺乳類 又は鳥に投与することからなる上記方法。
31. ３１．哺乳類又は鳥をインフルエンザに対して免疫化する方法であつて、治療的 に有効なインフルエンザ免疫化量の請求の範囲第１２項の複合体を該哺乳類又は 鳥に投与することからなる上記方法。