JPH08196282A - サイトメガロウイルスの読み枠ＵＬ５７およびテグメント蛋白質ｐｐ１５０のＣ端領域に由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび融合蛋白質、これらを含む診断検査キット、サイトメガロウイルスおよびＤＮＡオリゴヌクレオチドに対する抗体の検出法 - Google Patents
サイトメガロウイルスの読み枠ＵＬ５７およびテグメント蛋白質ｐｐ１５０のＣ端領域に由来するアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび融合蛋白質、これらを含む診断検査キット、サイトメガロウイルスおよびＤＮＡオリゴヌクレオチドに対する抗体の検出法Info
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- JPH08196282A JPH08196282A JP7189080A JP18908095A JPH08196282A JP H08196282 A JPH08196282 A JP H08196282A JP 7189080 A JP7189080 A JP 7189080A JP 18908095 A JP18908095 A JP 18908095A JP H08196282 A JPH08196282 A JP H08196282A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 サイトメガロウイルスに由来するアミノ酸配
列を提供する。 【解決手段】 サイトメガロウイルスに由来し、主ＤＮ
Ａ結合蛋白質の領域またはサイトメガロウイルスの抗原
性蛋白質からの他の断片少なくとも一つと融合したテグ
メント蛋白質ｐｐ１５０のＣ端領域に対応するアミノ酸
配列を含むポリペプチドおよび融合蛋白質を開示する。
この主ＤＮＡ結合蛋白質には読み枠ＵＬ５７がコードさ
れている。この発明のポリペプチドおよび融合蛋白質は
サイトメガロウイルスに対するＩｇＭ抗体を検出するた
めの診断検査およびその方法において有利に使用するこ
とができる。
列を提供する。 【解決手段】 サイトメガロウイルスに由来し、主ＤＮ
Ａ結合蛋白質の領域またはサイトメガロウイルスの抗原
性蛋白質からの他の断片少なくとも一つと融合したテグ
メント蛋白質ｐｐ１５０のＣ端領域に対応するアミノ酸
配列を含むポリペプチドおよび融合蛋白質を開示する。
この主ＤＮＡ結合蛋白質には読み枠ＵＬ５７がコードさ
れている。この発明のポリペプチドおよび融合蛋白質は
サイトメガロウイルスに対するＩｇＭ抗体を検出するた
めの診断検査およびその方法において有利に使用するこ
とができる。
Description
【０００１】ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）に
よるヒトの感染症は広く分布し、一般に小児期の間は症
状なしに進行する。ＨＣＭＶ特異的ＩｇＧ抗体は発症し
たまたは潜伏している感染のためのマーカーとして、母
集団に依存して成人の５０〜９０％に検出される。移植
患者およびＨＩＶ感染症患者のような免疫力低下患者に
おける先天性感染症および急性感染症は致死的疾患を起
こすこともある。早期の効果的な抗ウイルス処置を確保
するためには、急性感染症が存在するかどうか確定する
ことは重要である。急性ＨＣＭＶ感染症の診断のために
種々の方法を用いることができる。殊に定期的な同時診
断法が可能な移植患者では、高感度のためにｐｐ６５特
異的抗原血症検査法およびＰＣＲが近年多数採用される
ようになった。臨床検査室では通常、例えばウイルス分
別診断に関してまたは妊娠スクリーニングの間に、細胞
培養物中の病原の検出および、殊にＥＬＩＳＡ中で特定
の抗体の血清学的検出によって急性感染症が診断され
る。多かれ少なかれ精製した、特定不十分なＨＣＭＶ感
染細胞培養物のリゼイトを近年特定抗原として抗体検出
のために専ら使用している。このため、特にＩｇＭ検出
においては特異性および感度に問題を起こす。種々の組
換え抗原および化学合成ペプチドと診断との相関を扱っ
ている多数の報告が存在する。最近までに得られた結果
はＭ．Ｐ．Ｌａｎｄｉｎｉ：「ヒトサイトメガロウイル
ス蛋白質に対する抗体反応（Ａｎｔｉｂｏｄｙ・Ｒｅｓ
ｐｏｎｓｅｓ・ｔｏ・Ｈｕｍａｎ・Ｃｙｔｏｍｅｇａｌ
ｏｖｉｒｕｓ・Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」、Ｒｅｖｉｅｗｓ
・ｉｎ・Ｍｅｄｉｃａｌ・Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２巻、６
３〜７２頁（１９９２年）に綜説されている。
よるヒトの感染症は広く分布し、一般に小児期の間は症
状なしに進行する。ＨＣＭＶ特異的ＩｇＧ抗体は発症し
たまたは潜伏している感染のためのマーカーとして、母
集団に依存して成人の５０〜９０％に検出される。移植
患者およびＨＩＶ感染症患者のような免疫力低下患者に
おける先天性感染症および急性感染症は致死的疾患を起
こすこともある。早期の効果的な抗ウイルス処置を確保
するためには、急性感染症が存在するかどうか確定する
ことは重要である。急性ＨＣＭＶ感染症の診断のために
種々の方法を用いることができる。殊に定期的な同時診
断法が可能な移植患者では、高感度のためにｐｐ６５特
異的抗原血症検査法およびＰＣＲが近年多数採用される
ようになった。臨床検査室では通常、例えばウイルス分
別診断に関してまたは妊娠スクリーニングの間に、細胞
培養物中の病原の検出および、殊にＥＬＩＳＡ中で特定
の抗体の血清学的検出によって急性感染症が診断され
る。多かれ少なかれ精製した、特定不十分なＨＣＭＶ感
染細胞培養物のリゼイトを近年特定抗原として抗体検出
のために専ら使用している。このため、特にＩｇＭ検出
においては特異性および感度に問題を起こす。種々の組
換え抗原および化学合成ペプチドと診断との相関を扱っ
ている多数の報告が存在する。最近までに得られた結果
はＭ．Ｐ．Ｌａｎｄｉｎｉ：「ヒトサイトメガロウイル
ス蛋白質に対する抗体反応（Ａｎｔｉｂｏｄｙ・Ｒｅｓ
ｐｏｎｓｅｓ・ｔｏ・Ｈｕｍａｎ・Ｃｙｔｏｍｅｇａｌ
ｏｖｉｒｕｓ・Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」、Ｒｅｖｉｅｗｓ
・ｉｎ・Ｍｅｄｉｃａｌ・Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、２巻、６
３〜７２頁（１９９２年）に綜説されている。
【０００２】
【産業上の利用分野】それ故、本発明の目的は診断のた
めに有益なポリペプチドおよび／または融合蛋白質、な
らびにこれらを含む検査キットおよびＨＣＭＶ急性感染
症の検出法を提供することである。本出願に関しては、
用語「ポリペプチド」はα−アミノ酸からなり、１０個
またはそれ以上のアミノ酸を含む生物分子を意味する。
これらポリペプチドの上限に関して、これらが完全蛋白
質または実質的完全蛋白質ではないことに留意すべきで
ある。本発明のポリペプチドが融合蛋白質の型であるな
ら、アミノ酸１００個またはそれ以上を含むことも全く
可能である。それらが融合蛋白質の型であるなら、本発
明のポリペプチドがアミノ酸約３００個の長さを持つこ
とも全く可能である。しかしながら、本発明のポリペプ
チドがサイトメガロウイルスからの蛋白質の一定領域の
みを含むことが必須である。
めに有益なポリペプチドおよび／または融合蛋白質、な
らびにこれらを含む検査キットおよびＨＣＭＶ急性感染
症の検出法を提供することである。本出願に関しては、
用語「ポリペプチド」はα−アミノ酸からなり、１０個
またはそれ以上のアミノ酸を含む生物分子を意味する。
これらポリペプチドの上限に関して、これらが完全蛋白
質または実質的完全蛋白質ではないことに留意すべきで
ある。本発明のポリペプチドが融合蛋白質の型であるな
ら、アミノ酸１００個またはそれ以上を含むことも全く
可能である。それらが融合蛋白質の型であるなら、本発
明のポリペプチドがアミノ酸約３００個の長さを持つこ
とも全く可能である。しかしながら、本発明のポリペプ
チドがサイトメガロウイルスからの蛋白質の一定領域の
みを含むことが必須である。
【０００３】
【従来の技術】診断検査には２点が殊に重要である。一
方では抗原は高度に特異的でなければならない、すなわ
ち、診断検査では、病原が求めるものであって、別の病
原ではないことを明瞭に識別しなければならない。他
方、診断検査は高感度でなければならない、すなわち、
分析すべきサンプルに比較的少数の抗体が存在していた
としても、求める病原でのすべての感染症が可能な限り
の信頼性をもって検出されなければならない。可能な限
り、誤陽性の検査結果を起こしてはならない。ヒトサイ
トメガロウイルスによってコードされる各蛋白質は一般
に、それらがコードされている読み枠によって特定され
る。Ｌａｎｄｉｎｉ（前出）は、例えばＨＣＭウイルス
について既に知られている種々の蛋白質がゲノム上に占
める位置を報告している。それ故、この蛋白質を特定す
るために読み枠を用いることができる。
方では抗原は高度に特異的でなければならない、すなわ
ち、診断検査では、病原が求めるものであって、別の病
原ではないことを明瞭に識別しなければならない。他
方、診断検査は高感度でなければならない、すなわち、
分析すべきサンプルに比較的少数の抗体が存在していた
としても、求める病原でのすべての感染症が可能な限り
の信頼性をもって検出されなければならない。可能な限
り、誤陽性の検査結果を起こしてはならない。ヒトサイ
トメガロウイルスによってコードされる各蛋白質は一般
に、それらがコードされている読み枠によって特定され
る。Ｌａｎｄｉｎｉ（前出）は、例えばＨＣＭウイルス
について既に知られている種々の蛋白質がゲノム上に占
める位置を報告している。それ故、この蛋白質を特定す
るために読み枠を用いることができる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】ヒトサイトメガロウイ
ルスの読み枠ＵＬ５７は分子量約１３０から１３３ｋＤ
を持つ所謂主ＤＮＡ結合蛋白質をコードする。Ａｎｄｅ
ｒｓなどはこの蛋白質とその読み枠を特定して、Ｊ．Ｖ
ｉｒｏｌｏｇｙ、６２巻：１３６４〜１３７２頁（１９
８８年）に報告した。興味深いことに、読み枠ＵＬ５７
は他のヘルペスウイルス、殊にＨＨＶ−６ウイルスおよ
びやや低いがＥＢＶ（エプスタインバーウイルス）、の
対応する読み枠に明確な相同性を持つ。他のウイルスの
読み枠に対する相同性に基づいて、ＵＬ５７がコードす
る主ＤＮＡ結合蛋白質は交差反応の危険があるので診断
用には不適当と思われた。
ルスの読み枠ＵＬ５７は分子量約１３０から１３３ｋＤ
を持つ所謂主ＤＮＡ結合蛋白質をコードする。Ａｎｄｅ
ｒｓなどはこの蛋白質とその読み枠を特定して、Ｊ．Ｖ
ｉｒｏｌｏｇｙ、６２巻：１３６４〜１３７２頁（１９
８８年）に報告した。興味深いことに、読み枠ＵＬ５７
は他のヘルペスウイルス、殊にＨＨＶ−６ウイルスおよ
びやや低いがＥＢＶ（エプスタインバーウイルス）、の
対応する読み枠に明確な相同性を持つ。他のウイルスの
読み枠に対する相同性に基づいて、ＵＬ５７がコードす
る主ＤＮＡ結合蛋白質は交差反応の危険があるので診断
用には不適当と思われた。
【０００５】しかしながら、本発明に関して驚くべきこ
とに読み枠ＵＬ５７からの領域は、このアミノ酸配列を
含むポリペプチドおよび融合蛋白質が診断検査に有益な
結果をもたらすので、診断のために殊に有益に使用でき
るということが見出された。本発明に関し、読み枠ＵＬ
５７から断片３個が得られ、断片ＵＬ５７／１およびＵ
Ｌ５７／３の２個はポリメラーゼ鎖反応により増幅で
き、断片ＵＬ５７／２は化学的ＤＮＡ合成により得られ
た。これらのＤＮＡ断片を発現ベクター（ｐＧＥＸ−
３）に再クローンし、これにより融合蛋白質（グルタチ
オンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を持つ）の型で
ウイルス抗原の発現ができる。この融合抗原を精製し、
ＥＬＩＳＡ実験で選択された血清について検定した。こ
こで、驚くべきことに、５７ＡＡからなる抗原断片ＵＬ
５７／３は急性ＨＣＭＶ感染症におけるＩｇＭ抗体の特
異的で高感度な検出のための優れた抗原であることが見
出された。これに対して、他の断片２個は診断には関連
がないことが証明された。ＵＬ５７／３はそのサイズが
小さいために大腸菌内では非融合蛋白質としては発現さ
れ難いので、他の診断的に関連あるＨＣＭＶ抗原断片で
あって特異的で高感度のＩｇＭ血清学的診断に有意義な
ものとともにオートロガス融合蛋白質として発現を行っ
た。オートロガス融合蛋白質５２／３・５７／３の場合
には、ｐ５２のアミノ酸２９７〜４３３についてＣ端か
ら発現を行った。オートロガス融合蛋白質５２／３・５
７／３・１５０／７の場合には、ｐｐ１５０の５４Ｃ端
アミノ酸を５７／３のＣ端に付加的に発現した。ＵＬ５
７／３はさらにペプチドとして化学的に合成した。
とに読み枠ＵＬ５７からの領域は、このアミノ酸配列を
含むポリペプチドおよび融合蛋白質が診断検査に有益な
結果をもたらすので、診断のために殊に有益に使用でき
るということが見出された。本発明に関し、読み枠ＵＬ
５７から断片３個が得られ、断片ＵＬ５７／１およびＵ
Ｌ５７／３の２個はポリメラーゼ鎖反応により増幅で
き、断片ＵＬ５７／２は化学的ＤＮＡ合成により得られ
た。これらのＤＮＡ断片を発現ベクター（ｐＧＥＸ−
３）に再クローンし、これにより融合蛋白質（グルタチ
オンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を持つ）の型で
ウイルス抗原の発現ができる。この融合抗原を精製し、
ＥＬＩＳＡ実験で選択された血清について検定した。こ
こで、驚くべきことに、５７ＡＡからなる抗原断片ＵＬ
５７／３は急性ＨＣＭＶ感染症におけるＩｇＭ抗体の特
異的で高感度な検出のための優れた抗原であることが見
出された。これに対して、他の断片２個は診断には関連
がないことが証明された。ＵＬ５７／３はそのサイズが
小さいために大腸菌内では非融合蛋白質としては発現さ
れ難いので、他の診断的に関連あるＨＣＭＶ抗原断片で
あって特異的で高感度のＩｇＭ血清学的診断に有意義な
ものとともにオートロガス融合蛋白質として発現を行っ
た。オートロガス融合蛋白質５２／３・５７／３の場合
には、ｐ５２のアミノ酸２９７〜４３３についてＣ端か
ら発現を行った。オートロガス融合蛋白質５２／３・５
７／３・１５０／７の場合には、ｐｐ１５０の５４Ｃ端
アミノ酸を５７／３のＣ端に付加的に発現した。ＵＬ５
７／３はさらにペプチドとして化学的に合成した。
【０００６】
【課題を解決するための手段】それ故、本発明はサイト
メガロウイルス（ＨＣＭＶ）に由来し、主ＤＮＡ結合蛋
白質をコードするＨＣＭウイルスの読み枠ＵＬ５７に由
来するアミノ酸配列を含む次のアミノ酸配列：
メガロウイルス（ＨＣＭＶ）に由来し、主ＤＮＡ結合蛋
白質をコードするＨＣＭウイルスの読み枠ＵＬ５７に由
来するアミノ酸配列を含む次のアミノ酸配列：
【化２】Ｇｌｙ・Ｖａｌ・Ｐｒｏ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇ
ｌｙ・Ａｌａ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌ
ｙ・Ａｒｇ・Ａｓｐ・Ｖａｌ・Ｓｅｒ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ
・Ｐｒｏ・Ｓｅｒ・Ａｓｐ・Ｇｌｙ・Ｌｅｕ・Ｇｌｙ・
Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ａｒｇ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇ
ｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ａｓｐ・Ｓｅｒ・Ｇｌｙ・Ｇｌ
ｙ・Ｍｅｔ・Ｍｅｔ・Ｇｌｙ・Ａｒｇ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ
・Ａｒｇ・Ｍｅｔ・Ｌｅｕ・Ｇｌｙ・Ａｌａ・Ｓｅｒ・
Ｖａｌ・Ａｓｐ・Ａｒｇ・Ｔｈｒ・Ｔｙｒ・Ａｒｇ・Ｌ
ｅｕ・Ａｓｎ に対して少なくとも６０％の相同性を持つポリペプチド
に関する。この発明のポリペプチドは、好ましくは、前
記アミノ酸配列に対して少なくとも８０％の相同性を持
つ。殊に好適な態様において、この発明のポリペプチド
は前記アミノ酸配列またはその部分配列を持つ。この発
明のポリペプチドは通常少なくとも１０アミノ酸長を持
つが、しかしながら、少なくとも２５アミノ酸長を持つ
ポリペプチドは好適であり、少なくとも４０アミノ酸長
のポリペプチドは特に好適である。
ｌｙ・Ａｌａ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌ
ｙ・Ａｒｇ・Ａｓｐ・Ｖａｌ・Ｓｅｒ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ
・Ｐｒｏ・Ｓｅｒ・Ａｓｐ・Ｇｌｙ・Ｌｅｕ・Ｇｌｙ・
Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ａｒｇ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇ
ｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ａｓｐ・Ｓｅｒ・Ｇｌｙ・Ｇｌ
ｙ・Ｍｅｔ・Ｍｅｔ・Ｇｌｙ・Ａｒｇ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ
・Ａｒｇ・Ｍｅｔ・Ｌｅｕ・Ｇｌｙ・Ａｌａ・Ｓｅｒ・
Ｖａｌ・Ａｓｐ・Ａｒｇ・Ｔｈｒ・Ｔｙｒ・Ａｒｇ・Ｌ
ｅｕ・Ａｓｎ に対して少なくとも６０％の相同性を持つポリペプチド
に関する。この発明のポリペプチドは、好ましくは、前
記アミノ酸配列に対して少なくとも８０％の相同性を持
つ。殊に好適な態様において、この発明のポリペプチド
は前記アミノ酸配列またはその部分配列を持つ。この発
明のポリペプチドは通常少なくとも１０アミノ酸長を持
つが、しかしながら、少なくとも２５アミノ酸長を持つ
ポリペプチドは好適であり、少なくとも４０アミノ酸長
のポリペプチドは特に好適である。
【０００７】この発明のペプチドはそれ自体公知の化学
的方法（例えば固相合成法）により合成することがで
き、あるいは遺伝子工学法により製造することもでき
る。欧州特許出願８７．１１１７２６．３号には特異的
抗体の検出用に重要であることが証明されているヒトサ
イトメガロウイルスの構造ホスホ蛋白質（ｐｐ１５０）
が記載されている。
的方法（例えば固相合成法）により合成することがで
き、あるいは遺伝子工学法により製造することもでき
る。欧州特許出願８７．１１１７２６．３号には特異的
抗体の検出用に重要であることが証明されているヒトサ
イトメガロウイルスの構造ホスホ蛋白質（ｐｐ１５０）
が記載されている。
【０００８】ＨＣＭＶに対するＩｇＧ抗体はヒトサイト
メガロウイルスによる感染症がいつか起きていたことを
示す。一方、ＨＣＭＶに対するＩｇＭ抗体の力価を測定
することによって、ＨＣＭウイルスによる新感染がある
かどうかが確認できる。この質問に対する回答は前記の
危険を持つ患者および妊娠中の女性に対して重要性が大
きい。このような検査については検出が高度に特異的で
高度に感受性であることが殊に重要である。もし陽性に
なる数が多過ぎるが非確認的な結果が得られると、その
検査の決定的とは言い難い。しかしながら、一方で検査
は十分な確実性をもって新しいＨＣＭＶ感染を示さなけ
ればならないが、結果が誤陽性となる数は可能な限り減
らさなければならない。
メガロウイルスによる感染症がいつか起きていたことを
示す。一方、ＨＣＭＶに対するＩｇＭ抗体の力価を測定
することによって、ＨＣＭウイルスによる新感染がある
かどうかが確認できる。この質問に対する回答は前記の
危険を持つ患者および妊娠中の女性に対して重要性が大
きい。このような検査については検出が高度に特異的で
高度に感受性であることが殊に重要である。もし陽性に
なる数が多過ぎるが非確認的な結果が得られると、その
検査の決定的とは言い難い。しかしながら、一方で検査
は十分な確実性をもって新しいＨＣＭＶ感染を示さなけ
ればならないが、結果が誤陽性となる数は可能な限り減
らさなければならない。
【０００９】サイトメガロウイルスのＤＮＡ配列は既に
公知である。ＣｈｅｅなどはＣｕｒｒｅｎｔ・Ｔｏｐｉ
ｃｓ・ｉｎ・Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ・ａｎｄ・Ｉｍ
ｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，１５４巻（１９９０年）、１
２５〜１６９頁の論文にこのＤＮＡ配列の位置およびサ
イトメガロウイルスがコードする配列の分析を記載し
た。この文献は本出願の開示内容に参考として含めるも
のである。
公知である。ＣｈｅｅなどはＣｕｒｒｅｎｔ・Ｔｏｐｉ
ｃｓ・ｉｎ・Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ・ａｎｄ・Ｉｍ
ｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，１５４巻（１９９０年）、１
２５〜１６９頁の論文にこのＤＮＡ配列の位置およびサ
イトメガロウイルスがコードする配列の分析を記載し
た。この文献は本出願の開示内容に参考として含めるも
のである。
【００１０】本発明に関し、テグメント蛋白質ｐｐ１５
０のＣ端領域がＩｇＭ抗体の検出のためには非常に感受
性の抗原であることが見出されている。本発明に関して
は、これはｐｐ１５０蛋白質のＣ端にあるアミノ酸４０
個から６０個の領域である。ｐｐ１５０蛋白質のアミノ
酸配列は公知であって、これはアミノ酸９８８から１０
４８である。ｐｐ１５０テグメント蛋白質のアミノ酸９
９４から１０４８から構成される領域は殊に本発明に関
して好適であって、この領域はここにｐｐ１５０／７／
２と命名する。
０のＣ端領域がＩｇＭ抗体の検出のためには非常に感受
性の抗原であることが見出されている。本発明に関して
は、これはｐｐ１５０蛋白質のＣ端にあるアミノ酸４０
個から６０個の領域である。ｐｐ１５０蛋白質のアミノ
酸配列は公知であって、これはアミノ酸９８８から１０
４８である。ｐｐ１５０テグメント蛋白質のアミノ酸９
９４から１０４８から構成される領域は殊に本発明に関
して好適であって、この領域はここにｐｐ１５０／７／
２と命名する。
【００１１】この発明に従えば、ｐｐ１５０テグメント
蛋白質のこのＣ端領域はＨＣＭウイルスの別の抗原に由
来するＩｇＭ反応性の高い領域に融合する。別の抗原と
は、例えばｐｐ６５、ｐｐ７１、ｐｐ２８またはｇｐ１
１６／５８と呼ばれる抗原である。抗原ｐ５２、殊に抗
原ｐ５２のＣ端領域は、本発明に関して殊に適当な抗原
であることが証明されている。
蛋白質のこのＣ端領域はＨＣＭウイルスの別の抗原に由
来するＩｇＭ反応性の高い領域に融合する。別の抗原と
は、例えばｐｐ６５、ｐｐ７１、ｐｐ２８またはｇｐ１
１６／５８と呼ばれる抗原である。抗原ｐ５２、殊に抗
原ｐ５２のＣ端領域は、本発明に関して殊に適当な抗原
であることが証明されている。
【００１２】本発明に関し、ｐ５２抗原の約１００から
１５０アミノ酸を含むｐ５２のＣ端からの領域を融合蛋
白質の好ましい別成分として採用される。アミノ酸２９
７から４３３までを含むｐ５２からの領域は、本発明に
関しては特に好適である。
１５０アミノ酸を含むｐ５２のＣ端からの領域を融合蛋
白質の好ましい別成分として採用される。アミノ酸２９
７から４３３までを含むｐ５２からの領域は、本発明に
関しては特に好適である。
【００１３】本発明に関して、テグメント蛋白質ｐｐ１
５０と健康血液提供者からの血清とが非常に高いＩｇＭ
反応性を示し、ここでは急性感染症の検出用にはこの抗
原の価値は明らかに低いことが見出されている。健康な
血清学的陽性な血液提供者におけるＩｇＭ検査での約３
５％に達する陽性の比率は真実性がなく、ｐｐ１５０抗
原全体はＩｇＭ抗体の検出には不適当であることを示
す。
５０と健康血液提供者からの血清とが非常に高いＩｇＭ
反応性を示し、ここでは急性感染症の検出用にはこの抗
原の価値は明らかに低いことが見出されている。健康な
血清学的陽性な血液提供者におけるＩｇＭ検査での約３
５％に達する陽性の比率は真実性がなく、ｐｐ１５０抗
原全体はＩｇＭ抗体の検出には不適当であることを示
す。
【００１４】さらに、ｐ５２抗原のＣ端領域は単に血清
一つとの間の陽性反応を示すことが発見されている。し
かしながら、もしｐ５２のみを抗原として使用するなら
ば、この抗原の感受性は不適切である。本発明はそれ
故、組換えにより製造され、さらにサイトメガロウイル
ス（ＨＣＭＶ）のｐ１５０テグメント蛋白質のＣ端領域
からの断片少なくとも１個を含み、さらにヒトサイトメ
ガロウイルスに由来する別の抗原性蛋白質からの別の断
片少なくとも１個を含む融合蛋白質に関する。
一つとの間の陽性反応を示すことが発見されている。し
かしながら、もしｐ５２のみを抗原として使用するなら
ば、この抗原の感受性は不適切である。本発明はそれ
故、組換えにより製造され、さらにサイトメガロウイル
ス（ＨＣＭＶ）のｐ１５０テグメント蛋白質のＣ端領域
からの断片少なくとも１個を含み、さらにヒトサイトメ
ガロウイルスに由来する別の抗原性蛋白質からの別の断
片少なくとも１個を含む融合蛋白質に関する。
【００１５】好適な態様において、融合蛋白質のこの別
の抗原性蛋白質はｐ５２と呼ばれる蛋白質から由来し、
これがｐ５２抗原のＣ端領域であるものは殊に好適な態
様である。特に好適な態様において、この領域はおよそ
２８３位のアミノ酸からアミノ酸４３３位までに及ぶ。
の抗原性蛋白質はｐ５２と呼ばれる蛋白質から由来し、
これがｐ５２抗原のＣ端領域であるものは殊に好適な態
様である。特に好適な態様において、この領域はおよそ
２８３位のアミノ酸からアミノ酸４３３位までに及ぶ。
【００１６】殊に好適な融合蛋白質のアミノ酸配列を図
２、図３および図４に示す。免疫学的検査のためにはア
ミノ酸は勿論、融合蛋白質の作用を変化させることなし
に、官能的に同じ作用を持つアミノ酸と交換することが
できる。専門家はエピトープの本質的構造を変化しない
限り、アミノ酸の交換は蛋白質の免疫学的性質に影響し
ないことを完全に認識している。それ故、この発明はま
た、図２、図３および図４に示す融合蛋白質に対する相
同性少なくとも８０％、また殊に好適な型では少なくと
も９０％、を持つ融合蛋白質に関する。相同性８０％と
は対応する点におけるアミノ酸１００個の中で８０個が
同一であるが、一方ではアミノ酸の２０％が交換されう
ることを意味する。
２、図３および図４に示す。免疫学的検査のためにはア
ミノ酸は勿論、融合蛋白質の作用を変化させることなし
に、官能的に同じ作用を持つアミノ酸と交換することが
できる。専門家はエピトープの本質的構造を変化しない
限り、アミノ酸の交換は蛋白質の免疫学的性質に影響し
ないことを完全に認識している。それ故、この発明はま
た、図２、図３および図４に示す融合蛋白質に対する相
同性少なくとも８０％、また殊に好適な型では少なくと
も９０％、を持つ融合蛋白質に関する。相同性８０％と
は対応する点におけるアミノ酸１００個の中で８０個が
同一であるが、一方ではアミノ酸の２０％が交換されう
ることを意味する。
【００１７】この発明に従って使用される前記融合蛋白
質は、一方ではｐｐ１５０のＣ端部分および他方では別
のサイトメガロウイルス抗原の高ＩｇＭ反応性領域を含
む。さらに、この発明によるこの融合蛋白質は、この融
合蛋白質の組換えによる製造のための短い成分を含むこ
とができる。しかしながら、この発明に従う好適な態様
においては、この成分は殊に発現ベクターから由来し、
２５個を超えないアミノ酸を含む。
質は、一方ではｐｐ１５０のＣ端部分および他方では別
のサイトメガロウイルス抗原の高ＩｇＭ反応性領域を含
む。さらに、この発明によるこの融合蛋白質は、この融
合蛋白質の組換えによる製造のための短い成分を含むこ
とができる。しかしながら、この発明に従う好適な態様
においては、この成分は殊に発現ベクターから由来し、
２５個を超えないアミノ酸を含む。
【００１８】このようにして製造することのできる融合
蛋白質は請求項１〜１５の中の一つに従うポリペプチド
または融合蛋白質のアミノ酸配列を持つ。融合蛋白質の
あるものは好ましくはグルタチオンＳ−トランスフェラ
ーゼから由来する。この発明に従う融合蛋白質はＨＣＭ
ウイルスの読み枠ＵＬ５７からのポリペプチドまたはヒ
トサイトメガロウイルスの別の抗原性蛋白質の一つの少
なくとも一部分を含むことができる。殊に好適な態様に
おいて、ヒトサイトメガロウイルスのこの別の抗原性蛋
白質はｐｐ１５０テグメント蛋白質またはｐ５２蛋白質
である。前記蛋白質類の部分的配列の結合は殊に好適で
ある。
蛋白質は請求項１〜１５の中の一つに従うポリペプチド
または融合蛋白質のアミノ酸配列を持つ。融合蛋白質の
あるものは好ましくはグルタチオンＳ−トランスフェラ
ーゼから由来する。この発明に従う融合蛋白質はＨＣＭ
ウイルスの読み枠ＵＬ５７からのポリペプチドまたはヒ
トサイトメガロウイルスの別の抗原性蛋白質の一つの少
なくとも一部分を含むことができる。殊に好適な態様に
おいて、ヒトサイトメガロウイルスのこの別の抗原性蛋
白質はｐｐ１５０テグメント蛋白質またはｐ５２蛋白質
である。前記蛋白質類の部分的配列の結合は殊に好適で
ある。
【００１９】本発明はまた、本発明に従うポリペプチド
少なくとも１個および／または本発明に従う融合蛋白質
１個を含むサイトメガロウイルスに対する抗体、殊にＩ
ｇＭ抗体、の検出用検査キットに関する。これらは好ま
しくはＥＬＩＳＡ検定を行うための検査キットである。
少なくとも１個および／または本発明に従う融合蛋白質
１個を含むサイトメガロウイルスに対する抗体、殊にＩ
ｇＭ抗体、の検出用検査キットに関する。これらは好ま
しくはＥＬＩＳＡ検定を行うための検査キットである。
【００２０】ウエスタンブロット法、ラジオイムノアッ
セイなどのような数種の異なる検査方法が診断用に知ら
れている。本発明に関して殊に好適な検査キットはＥＬ
ＩＳＡ検定（酵素免疫吸着測定法）を行うために適す
る。この検定では固相への結合が起こす。この場合は融
合蛋白質である抗原を固相、殊にマイクロタイター板、
に結合して非特異的な結合を飽和する。通常は血清であ
るが、分析すべき標本を次にこれらのマイクロタイター
板に入れ、インキュベートし、洗浄する。固相に結合し
た抗体を次に検出すべき抗原に接触させる。これらの抗
体は一般に標識成分を結合した抗−ヒト抗体で検出す
る。呈色反応を触媒し、これによって検定結果を読み取
ることのできるホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ
はここでは殊に適当であることが証明されている。
セイなどのような数種の異なる検査方法が診断用に知ら
れている。本発明に関して殊に好適な検査キットはＥＬ
ＩＳＡ検定（酵素免疫吸着測定法）を行うために適す
る。この検定では固相への結合が起こす。この場合は融
合蛋白質である抗原を固相、殊にマイクロタイター板、
に結合して非特異的な結合を飽和する。通常は血清であ
るが、分析すべき標本を次にこれらのマイクロタイター
板に入れ、インキュベートし、洗浄する。固相に結合し
た抗体を次に検出すべき抗原に接触させる。これらの抗
体は一般に標識成分を結合した抗−ヒト抗体で検出す
る。呈色反応を触媒し、これによって検定結果を読み取
ることのできるホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ
はここでは殊に適当であることが証明されている。
【００２１】特定的なＩｇＭ抗体の検出のための他の方
法は、μ−捕捉ＥＬＩＳＡである。この方法において、
担体の固相、例えばＥＬＩＳＡ板、をヒトＩｇＭ分子の
μ鎖に対するポリクロナールまたはモノクロナール抗体
で被覆する。続いてヒト血清とインキュベートすると、
ＩｇＭ抗体は選択的に固相に結合する一方、他の抗体は
すべて洗浄により除去される。ＣＭＶ−特異的ＩｇＭ抗
体はこの抗原に対するＩｇＭ分子が結合した酵素標識Ｃ
ＭＶ抗原によって、多数の結合ＩｇＭ分子から測定され
る。形成した抗体−抗原複合体は−前記の通りに−酵素
仲介呈色反応により検出することができる。
法は、μ−捕捉ＥＬＩＳＡである。この方法において、
担体の固相、例えばＥＬＩＳＡ板、をヒトＩｇＭ分子の
μ鎖に対するポリクロナールまたはモノクロナール抗体
で被覆する。続いてヒト血清とインキュベートすると、
ＩｇＭ抗体は選択的に固相に結合する一方、他の抗体は
すべて洗浄により除去される。ＣＭＶ−特異的ＩｇＭ抗
体はこの抗原に対するＩｇＭ分子が結合した酵素標識Ｃ
ＭＶ抗原によって、多数の結合ＩｇＭ分子から測定され
る。形成した抗体−抗原複合体は−前記の通りに−酵素
仲介呈色反応により検出することができる。
【００２２】本発明はまた分析されるべき標本を融合蛋
白質と混合することによるＨＣＭＶに対する抗体の検出
法にも関する。次にこの抗体−ポリペプチドまたは融合
蛋白質複合体を検出用成分で検出する。ｐｐ１５０の
「付加的感受性」のいくらかを示すが、同時に高い特異
性を示す抗原もこの発明のポリペプチドおよび融合蛋白
質により提供される。それ故、この発明に従うポリペプ
チドおよび融合蛋白質では健康な血液提供者の血清では
低いＩｇＭ反応性しか示さないものが得られる。この発
明に従うポリペプチドおよび融合蛋白質を用いて、急性
の感染症が存在するかどうか、および同時に誤陽性の結
果の発生を完全には除けないとしてもかなり減らして適
当な感度で検出するＩｇＭ抗体用の検定を行うことが可
能になる。
白質と混合することによるＨＣＭＶに対する抗体の検出
法にも関する。次にこの抗体−ポリペプチドまたは融合
蛋白質複合体を検出用成分で検出する。ｐｐ１５０の
「付加的感受性」のいくらかを示すが、同時に高い特異
性を示す抗原もこの発明のポリペプチドおよび融合蛋白
質により提供される。それ故、この発明に従うポリペプ
チドおよび融合蛋白質では健康な血液提供者の血清では
低いＩｇＭ反応性しか示さないものが得られる。この発
明に従うポリペプチドおよび融合蛋白質を用いて、急性
の感染症が存在するかどうか、および同時に誤陽性の結
果の発生を完全には除けないとしてもかなり減らして適
当な感度で検出するＩｇＭ抗体用の検定を行うことが可
能になる。
【００２３】高い感度を持つが、同時に高い特異性を持
つ抗原がこの発明の融合蛋白質およびペプチドにより提
供される。健康な血液提供者の血清とはＩｇＭ反応性が
低いものがこの発明に従うペプチドおよび融合蛋白質で
得られる。この発明に従うペプチドおよび融合蛋白質を
用いれば、適当な感度で急性感染症が存在するかどうか
および同時に臨床的には無関係であるかまたは誤陽性で
ある結果の発生を除けないにしてもかなり減少するＩｇ
Ｍ抗体の検査を行うことが可能である。
つ抗原がこの発明の融合蛋白質およびペプチドにより提
供される。健康な血液提供者の血清とはＩｇＭ反応性が
低いものがこの発明に従うペプチドおよび融合蛋白質で
得られる。この発明に従うペプチドおよび融合蛋白質を
用いれば、適当な感度で急性感染症が存在するかどうか
および同時に臨床的には無関係であるかまたは誤陽性で
ある結果の発生を除けないにしてもかなり減少するＩｇ
Ｍ抗体の検査を行うことが可能である。
【００２４】検出成分は、好ましくは標識分子、殊にホ
ースラディッシュ・ペルオキシダーゼ、に結合した抗−
ヒト抗体である。
ースラディッシュ・ペルオキシダーゼ、に結合した抗−
ヒト抗体である。
【００２５】本発明の原理で専門家にはまた、請求項１
に提示されるアミノ酸配列の少なくとも一部に対応する
アミノ酸配列をコードするオリゴヌクレオチドの配列を
含むオリゴヌクレオチドの合成が可能になる。このオリ
ゴヌクレオチドは好ましくは１２〜３０塩基長である。
これらは通常、ポリメラーゼ鎖反応または核酸を増幅す
る他の工法に使用できるＤＮＡオリゴヌクレオチドであ
る。
に提示されるアミノ酸配列の少なくとも一部に対応する
アミノ酸配列をコードするオリゴヌクレオチドの配列を
含むオリゴヌクレオチドの合成が可能になる。このオリ
ゴヌクレオチドは好ましくは１２〜３０塩基長である。
これらは通常、ポリメラーゼ鎖反応または核酸を増幅す
る他の工法に使用できるＤＮＡオリゴヌクレオチドであ
る。
【００２６】本発明はまた、この発明によるポリペプチ
ドＵＬ５７／３の少なくともいくらかをコードするヌク
レオチド配列を含むオリゴヌクレオチドに関する。この
ようなオリゴヌクレオチドはポリメラーゼ鎖反応におけ
るプライマーとして有利に採用される。ポリメラーゼ鎖
反応を用いれば、サイトメガロウイルスの感度の高い検
出が可能である。この一般的に公知の方法により、殊に
ウイルスの遺伝子的情報が極く少ないコピー数のみしか
ない場合にも検出が可能になる。
ドＵＬ５７／３の少なくともいくらかをコードするヌク
レオチド配列を含むオリゴヌクレオチドに関する。この
ようなオリゴヌクレオチドはポリメラーゼ鎖反応におけ
るプライマーとして有利に採用される。ポリメラーゼ鎖
反応を用いれば、サイトメガロウイルスの感度の高い検
出が可能である。この一般的に公知の方法により、殊に
ウイルスの遺伝子的情報が極く少ないコピー数のみしか
ない場合にも検出が可能になる。
【００２７】用語「相同性」はＤＮＡまたはアミノ酸配
列２個の一致の程度を意味するものと理解される。例え
ば相同性６０％は配列内アミノ酸１００個の位置の中、
６０個が一致することを意味する。蛋白質の相同性は配
列分析により決定される。
列２個の一致の程度を意味するものと理解される。例え
ば相同性６０％は配列内アミノ酸１００個の位置の中、
６０個が一致することを意味する。蛋白質の相同性は配
列分析により決定される。
【００２８】ヒトサイトメガロウイルスは既にかなり完
全に研究されているので、その配列とこの発明に従うペ
プチドを含む読み枠はＣｈｅｅなどによる報告、Ｃｕｒ
ｒｅｎｔ・Ｔｏｐｉｃｓ・ｉｎ・Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ・ａｎｄ・Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５４巻、Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ・Ｖｅｒｌａｇ（１９９０年）、１２６〜
１６９頁、を用いて決定することができる。
全に研究されているので、その配列とこの発明に従うペ
プチドを含む読み枠はＣｈｅｅなどによる報告、Ｃｕｒ
ｒｅｎｔ・Ｔｏｐｉｃｓ・ｉｎ・Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏ
ｇｙ・ａｎｄ・Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１５４巻、Ｓｐ
ｒｉｎｇｅｒ・Ｖｅｒｌａｇ（１９９０年）、１２６〜
１６９頁、を用いて決定することができる。
【００２９】この発明に従えば好適な融合蛋白質は、一
方ではこの発明に従うポリペプチドＵＬ５７／３のアミ
ノ酸配列を持ち、他方ではヒトサイトメガロウイルスの
別の蛋白質、殊に抗原性蛋白質、の断片および／または
発現ベクターから由来する断片を持つ。これらの融合蛋
白質の付加的成分は、殊に好ましくはテグメント蛋白質
ｐｐ１５０からおよび／またはサイトメガロウイルスの
蛋白質ｐ５２から由来する。殊に好適な形は、この出願
の実施例に記載されている断片である。
方ではこの発明に従うポリペプチドＵＬ５７／３のアミ
ノ酸配列を持ち、他方ではヒトサイトメガロウイルスの
別の蛋白質、殊に抗原性蛋白質、の断片および／または
発現ベクターから由来する断片を持つ。これらの融合蛋
白質の付加的成分は、殊に好ましくはテグメント蛋白質
ｐｐ１５０からおよび／またはサイトメガロウイルスの
蛋白質ｐ５２から由来する。殊に好適な形は、この出願
の実施例に記載されている断片である。
【００３０】本発明に関し、グルタチオン・Ｓ−トラン
スフェラーゼ（ＧＳＴ）の少なくとも一部を含む融合蛋
白質は大腸菌内で容易に発現されることが見出されてい
る。このような融合蛋白質を提供することのできるベク
ターは、中でもＶｏｒｎｈａｇｅｎなど、Ｊｏｕｒｎａ
ｌ・ｏｆ・Ｃｌｉｎｉｃａｌ・Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ、３２巻、９８１〜９８６頁（１９９４年）に記載さ
れている。
スフェラーゼ（ＧＳＴ）の少なくとも一部を含む融合蛋
白質は大腸菌内で容易に発現されることが見出されてい
る。このような融合蛋白質を提供することのできるベク
ターは、中でもＶｏｒｎｈａｇｅｎなど、Ｊｏｕｒｎａ
ｌ・ｏｆ・Ｃｌｉｎｉｃａｌ・Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ、３２巻、９８１〜９８６頁（１９９４年）に記載さ
れている。
【００３１】本発明においては、抗原を次のように検定
する： イ）急性ＨＣＭＶ感染症の兆候がない健康な血液提供者
の非選択的血清。ポール・エールリッヒ研究所が承認し
た抗ＣＭＶ・ＩｇＧ・ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｔｅｓｔ）を
用いてこれらの血清をＨＣＭ−陽性／陰性に分類する。
表５参照。 ロ）ウイルス分離および／またはＩｇＧセロコンバージ
ョンで陽性の結果が記録されている急性ＨＣＭＶ感染症
を持つ免疫応答性（機能している免疫系）個体の選択さ
れた血清（表３参照）。 ハ）急性ＨＣＭＶ原発性感染症を持つ移植患者の選択さ
れた血清。表４参照。この急性感染症はｐｐ６５特異的
抗原血症検査を用いて検出した。
する： イ）急性ＨＣＭＶ感染症の兆候がない健康な血液提供者
の非選択的血清。ポール・エールリッヒ研究所が承認し
た抗ＣＭＶ・ＩｇＧ・ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｔｅｓｔ）を
用いてこれらの血清をＨＣＭ−陽性／陰性に分類する。
表５参照。 ロ）ウイルス分離および／またはＩｇＧセロコンバージ
ョンで陽性の結果が記録されている急性ＨＣＭＶ感染症
を持つ免疫応答性（機能している免疫系）個体の選択さ
れた血清（表３参照）。 ハ）急性ＨＣＭＶ原発性感染症を持つ移植患者の選択さ
れた血清。表４参照。この急性感染症はｐｐ６５特異的
抗原血症検査を用いて検出した。
【００３２】データは検査したＵＬ５７断片、ＵＬ５７
／３は殊に診断に有意義であることを明らかに示す。こ
の抗原断片は、急性ＨＣＭＶ感染症を持つ者の血清には
極端に高いＩｇＭ特異的反応性を示した。反応性サンプ
ルの数は免疫応答性患者（表３）および移植患者（表
４）で組換え抗原１５０／７および５２／３と同等また
はより多かった。これらの抗原は殊に従前の評価による
急性ＨＣＭＶ感染症の検出のために適することが証明さ
れた。これと比べて、健康な血液提供者からの血清につ
いては非常に低いＩｇＭ反応性が見出された。オートロ
ガス融合蛋白質を検査する時、急性感染患者の両群にお
いて同数の陽性の結果が得られた。個体差は反応性の程
度にのみ見出された。化学的に合成されたペプチド５７
／３−Ｐにはやや低いＩｇＭ特異性が見出された。要約
すると、ＵＬ５７／３と命名された抗原断片は急性ＨＣ
ＭＶ感染症のＩｇＭ特異的血液学的診断剤のために極め
て適していると言うことができる。
／３は殊に診断に有意義であることを明らかに示す。こ
の抗原断片は、急性ＨＣＭＶ感染症を持つ者の血清には
極端に高いＩｇＭ特異的反応性を示した。反応性サンプ
ルの数は免疫応答性患者（表３）および移植患者（表
４）で組換え抗原１５０／７および５２／３と同等また
はより多かった。これらの抗原は殊に従前の評価による
急性ＨＣＭＶ感染症の検出のために適することが証明さ
れた。これと比べて、健康な血液提供者からの血清につ
いては非常に低いＩｇＭ反応性が見出された。オートロ
ガス融合蛋白質を検査する時、急性感染患者の両群にお
いて同数の陽性の結果が得られた。個体差は反応性の程
度にのみ見出された。化学的に合成されたペプチド５７
／３−Ｐにはやや低いＩｇＭ特異性が見出された。要約
すると、ＵＬ５７／３と命名された抗原断片は急性ＨＣ
ＭＶ感染症のＩｇＭ特異的血液学的診断剤のために極め
て適していると言うことができる。
【００３３】
【実施例】実施例１ オートロガス融合蛋白質５２／３｜１５０／
７／２のクローニング これは５２／３の完全な領域および１５０／７の５４Ｃ
端アミノ酸が結合するオートロガス融合蛋白質である。
７／２のクローニング これは５２／３の完全な領域および１５０／７の５４Ｃ
端アミノ酸が結合するオートロガス融合蛋白質である。
【００３４】１． ＡＡ８６２〜１０４８をコードする
ｐｐ１５０の部分配列を含むクローンｐｕｃ８／ＰＣＣ
１５０／７から出発して、部分的断片ＰＣＣ１５０／７
／２のＰＣＲ増幅をプライマーＰＣＣ１５０１２．ｓｅ
ｑおよびＰＣＣ１５０１３．ｓｅｑ（図１）を用いて実
施した。両プライマーは、ｐｐ１５０と相補的な領域に
加えて、いくらかの独特な制限切断部位、すなわちＰＣ
Ｃ１５０１２．ｓｅｑ：ＥｃｏＲＩおよびＰＣＣ１５０
１３．ｓｅｑ：ＢａｍＨＩを含むオーバーハングを持
つ。これらの切断部位は増幅生成物の指向的クローニン
グを可能にする。
ｐｐ１５０の部分配列を含むクローンｐｕｃ８／ＰＣＣ
１５０／７から出発して、部分的断片ＰＣＣ１５０／７
／２のＰＣＲ増幅をプライマーＰＣＣ１５０１２．ｓｅ
ｑおよびＰＣＣ１５０１３．ｓｅｑ（図１）を用いて実
施した。両プライマーは、ｐｐ１５０と相補的な領域に
加えて、いくらかの独特な制限切断部位、すなわちＰＣ
Ｃ１５０１２．ｓｅｑ：ＥｃｏＲＩおよびＰＣＣ１５０
１３．ｓｅｑ：ＢａｍＨＩを含むオーバーハングを持
つ。これらの切断部位は増幅生成物の指向的クローニン
グを可能にする。
【００３５】ＰＣＲ増幅は、反応緩衝液（Ｐｅｒｋｉｎ
−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔｕｓ）１０μＬ、２００μＭ−デ
オキシヌクレオチド４個、０．５μＭ−ＰＣＲプライマ
ー２個、出発ＤＮＡ５０〜１００ｎｇおよびＡｍｐｌｉ
Ｔａｑ・ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅ
ｒ・Ｃｅｔｕｓ）２．５単位を含む全容積１００μＬ中
で実施した。増幅はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔ
ｕｓ・ＤＮＡサーマルサイクラー中で次の条件下に２５
サイクルで実施した：１分−５５℃、１分−７２℃、１
分−９４℃。ＰＣＲ反応混合物をサブマリンアガロース
ゲル室内で、０．５μｇ／ｍＬ臭化エチジウムを含む
１．２％アガロースゲル（Ｕｌｔｒａ・Ｐｕｒｅ・Ａｇ
ａｒｏｓｅ、ＢＲＬ）中で、ＴＢＥランニング緩衝液
（０．０８９Ｍ−トリス／ホウ酸塩、０．００２Ｍ−Ｅ
ＤＴＡ）を用いて電気泳動的に分別した。その後、増幅
したＤＮＡ断片を３６４ｎｍのＵＶランプで可視化し、
対応するバンドを含むゲルの領域をメスで切り出した。
メーカーの指示書に従って、バイオトラップチャンバー
（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ・＆・Ｓｃｈｕｌｌ）を用いて
ゲル断片からＤＮＡを溶出した。これに続いてメーカー
の使用指示書に従って、エルチップＤカラム（Ｓｃｈｌ
ｅｉｃｈｅｒ・＆・Ｓｃｈｕｌｌ）を用いてＤＮＡをさ
らに精製した。
−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔｕｓ）１０μＬ、２００μＭ−デ
オキシヌクレオチド４個、０．５μＭ−ＰＣＲプライマ
ー２個、出発ＤＮＡ５０〜１００ｎｇおよびＡｍｐｌｉ
Ｔａｑ・ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅ
ｒ・Ｃｅｔｕｓ）２．５単位を含む全容積１００μＬ中
で実施した。増幅はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔ
ｕｓ・ＤＮＡサーマルサイクラー中で次の条件下に２５
サイクルで実施した：１分−５５℃、１分−７２℃、１
分−９４℃。ＰＣＲ反応混合物をサブマリンアガロース
ゲル室内で、０．５μｇ／ｍＬ臭化エチジウムを含む
１．２％アガロースゲル（Ｕｌｔｒａ・Ｐｕｒｅ・Ａｇ
ａｒｏｓｅ、ＢＲＬ）中で、ＴＢＥランニング緩衝液
（０．０８９Ｍ−トリス／ホウ酸塩、０．００２Ｍ−Ｅ
ＤＴＡ）を用いて電気泳動的に分別した。その後、増幅
したＤＮＡ断片を３６４ｎｍのＵＶランプで可視化し、
対応するバンドを含むゲルの領域をメスで切り出した。
メーカーの指示書に従って、バイオトラップチャンバー
（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ・＆・Ｓｃｈｕｌｌ）を用いて
ゲル断片からＤＮＡを溶出した。これに続いてメーカー
の使用指示書に従って、エルチップＤカラム（Ｓｃｈｌ
ｅｉｃｈｅｒ・＆・Ｓｃｈｕｌｌ）を用いてＤＮＡをさ
らに精製した。
【００３６】このようにして精製し、乾燥したＤＮＡ断
片を蒸留水８０μＬに溶解した。ＮＥバッファ４（Ｎｅ
ｗ・Ｅｎｇｌａｎｄ・Ｂｉｏｌａｂｓ）１０μＬを添加
後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ消化を各々の場合に両酵素
１００Ｕの添加によって行った。２時間後、フェノール
抽出、続いてエタノール沈殿を行った。このようにして
製造したＤＮＡ断片１００ｎｇを標準ベクターｐｕｃ８
のＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ処理ＤＮＡ２００ｎｇと４℃
で１６時間結合させ、次にこれで大腸菌ＪＭ１０９を形
質転換した。形質転換混合物をアンピシリン（５０μｇ
／ｍＬ）およびＸ−ガル（３０μｇ／ｍＬ）を加えた寒
天平板で培養した。白色のコロニーをアンピシリン添加
ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりまぜながら１２〜
１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮＡを単離
した後、ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ制限消化およびアガロ
ースゲル中の電気泳動を実施した。所期サイズの付加Ｄ
ＮＡ断片が見出されたクローンをｐｕｃ８／ＰＣＣ１５
０／７／２と命名し、これを以下のクローニングに用い
た。
片を蒸留水８０μＬに溶解した。ＮＥバッファ４（Ｎｅ
ｗ・Ｅｎｇｌａｎｄ・Ｂｉｏｌａｂｓ）１０μＬを添加
後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ消化を各々の場合に両酵素
１００Ｕの添加によって行った。２時間後、フェノール
抽出、続いてエタノール沈殿を行った。このようにして
製造したＤＮＡ断片１００ｎｇを標準ベクターｐｕｃ８
のＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ処理ＤＮＡ２００ｎｇと４℃
で１６時間結合させ、次にこれで大腸菌ＪＭ１０９を形
質転換した。形質転換混合物をアンピシリン（５０μｇ
／ｍＬ）およびＸ−ガル（３０μｇ／ｍＬ）を加えた寒
天平板で培養した。白色のコロニーをアンピシリン添加
ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりまぜながら１２〜
１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮＡを単離
した後、ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ制限消化およびアガロ
ースゲル中の電気泳動を実施した。所期サイズの付加Ｄ
ＮＡ断片が見出されたクローンをｐｕｃ８／ＰＣＣ１５
０／７／２と命名し、これを以下のクローニングに用い
た。
【００３７】２． クローンｐｕｃ８／ＰＣＣ５２／３
−ｐ５２のＡＡ２９７〜４３３のためのクローン化断片
コード−から出発し、ＰＣＲ増幅をプライマーＰＣＣ５
２５．ｓｅｑおよびＰＣＣ５２６．ｓｅｑを用いて実施
し、増幅した断片を後に前記のようにしてクローンし
た。ここで用いたプライマー２種のオーバーハングに基
づいて、増幅された断片は５’−端にＢａｍＨＩ切断部
位を持ち、ＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩの両切断部位を
３’−端に持っている。対応するクローンをｐｕｃ８／
ＰＣＣ５２／３Ｆと命名した。
−ｐ５２のＡＡ２９７〜４３３のためのクローン化断片
コード−から出発し、ＰＣＲ増幅をプライマーＰＣＣ５
２５．ｓｅｑおよびＰＣＣ５２６．ｓｅｑを用いて実施
し、増幅した断片を後に前記のようにしてクローンし
た。ここで用いたプライマー２種のオーバーハングに基
づいて、増幅された断片は５’−端にＢａｍＨＩ切断部
位を持ち、ＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩの両切断部位を
３’−端に持っている。対応するクローンをｐｕｃ８／
ＰＣＣ５２／３Ｆと命名した。
【００３８】３． クローンｐｕｃ８／ＰＣＣ１５０／
７／２のＤＮＡについて、ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ
による制限消化を実施した。その際に遊離される約１６
０ｂｐの断片をアガロース電気泳動を用いて分離し、前
記のようにしてゲル切片から溶出した。このＤＮＡ断片
約５０ｎｇを次にＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩで開環し
たベクターｐｕｃ８／ＰＣＣ５２／３Ｆの２００ｎｇに
結合させ、同様にして電気泳動を使用して精製した。こ
れに続いて大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、アンピシリ
ン添加寒天で平板培養した。単離したコロニーをアンピ
シリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりまぜな
がら１２〜１６時間インキュベートした。プラスミドＤ
ＮＡの分離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩで制限消化と、
続けてアガロースゲル中で電気泳動を実施した。所期サ
イズの挿入部を持つクローンをｐｕｃ８／５２／３・１
５０／７／２と命名し、以下の実験に使用した。Ｂａｍ
ＨＩおよびＢｇｌＩＩの認識配列が結合可能な同一のオ
ーバーハングを持つという事実をこの操作に用いた。し
かしながら、結合実施後、両切断部位は失われる。同じ
読み枠内の翻訳を可能とするために５２／３Ｆから１５
０／７／２へのオーバーハングを選択した。図２、図３
および図４は前記の構造の全ＤＮＡ配列および得られる
オートロガス融合蛋白質の対応するＡＡ配列を示す。
７／２のＤＮＡについて、ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ
による制限消化を実施した。その際に遊離される約１６
０ｂｐの断片をアガロース電気泳動を用いて分離し、前
記のようにしてゲル切片から溶出した。このＤＮＡ断片
約５０ｎｇを次にＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩで開環し
たベクターｐｕｃ８／ＰＣＣ５２／３Ｆの２００ｎｇに
結合させ、同様にして電気泳動を使用して精製した。こ
れに続いて大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、アンピシリ
ン添加寒天で平板培養した。単離したコロニーをアンピ
シリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりまぜな
がら１２〜１６時間インキュベートした。プラスミドＤ
ＮＡの分離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩで制限消化と、
続けてアガロースゲル中で電気泳動を実施した。所期サ
イズの挿入部を持つクローンをｐｕｃ８／５２／３・１
５０／７／２と命名し、以下の実験に使用した。Ｂａｍ
ＨＩおよびＢｇｌＩＩの認識配列が結合可能な同一のオ
ーバーハングを持つという事実をこの操作に用いた。し
かしながら、結合実施後、両切断部位は失われる。同じ
読み枠内の翻訳を可能とするために５２／３Ｆから１５
０／７／２へのオーバーハングを選択した。図２、図３
および図４は前記の構造の全ＤＮＡ配列および得られる
オートロガス融合蛋白質の対応するＡＡ配列を示す。
【００３９】４． オートロガス融合蛋白質の発現を確
実にするために、バクテリオファージＴ７遺伝子１０の
強力なＴ７プロモーターを持つベクターｐＥＴ５ｃへの
対応するＤＮＡ断片の再クローニングを実施した。この
背景として、このベクターはリボソーム結合部位および
適当な距離に出発コドンを持っている。この出発コドン
の後にバクテリオファージＴ７遺伝子１０の１１アミノ
酸読み枠およびＢａｍＨＩとＥｃｏＲＩ切断部位があ
る。ＢａｍＨＩ切断部位の読み枠は前記したオートロガ
ス融合蛋白質のそれと一致する。ＥｃｏＲＩとＢａｍＨ
Ｉ制限消化によってｐｕｃ８／５２／３｜１５０／７／
２から遊離したＤＮＡ断片１００ｎｇを同じ制限酵素で
開裂したこのベクター２００ｎｇに４℃で１６時間結合
させた。大腸菌ＪＭ１０９の形質転換およびアンピシリ
ン添加板での平板培養を続けた。単離したコロニーをア
ンピシリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりま
ぜながら１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮ
Ａの単離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し
た。所期サイズの挿入部を持つクローンをｐＥＴ５ｃ／
５２／３｜１５０／７／２と命名した。組換え蛋白質の
発現を確実にするため、発現ベクターのＤＮＡをクロラ
ムフェニコール耐性発現株ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓ
Ｓに形質転換した。得られたクローンの一つを以下の実
験に用いた。
実にするために、バクテリオファージＴ７遺伝子１０の
強力なＴ７プロモーターを持つベクターｐＥＴ５ｃへの
対応するＤＮＡ断片の再クローニングを実施した。この
背景として、このベクターはリボソーム結合部位および
適当な距離に出発コドンを持っている。この出発コドン
の後にバクテリオファージＴ７遺伝子１０の１１アミノ
酸読み枠およびＢａｍＨＩとＥｃｏＲＩ切断部位があ
る。ＢａｍＨＩ切断部位の読み枠は前記したオートロガ
ス融合蛋白質のそれと一致する。ＥｃｏＲＩとＢａｍＨ
Ｉ制限消化によってｐｕｃ８／５２／３｜１５０／７／
２から遊離したＤＮＡ断片１００ｎｇを同じ制限酵素で
開裂したこのベクター２００ｎｇに４℃で１６時間結合
させた。大腸菌ＪＭ１０９の形質転換およびアンピシリ
ン添加板での平板培養を続けた。単離したコロニーをア
ンピシリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりま
ぜながら１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮ
Ａの単離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し
た。所期サイズの挿入部を持つクローンをｐＥＴ５ｃ／
５２／３｜１５０／７／２と命名した。組換え蛋白質の
発現を確実にするため、発現ベクターのＤＮＡをクロラ
ムフェニコール耐性発現株ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓ
Ｓに形質転換した。得られたクローンの一つを以下の実
験に用いた。
【００４０】実施例２ 組換え融合蛋白質５２／３｜１
５０／７／２の発現 １． クローンｐＥＴ５ｃ／５２／３｜１５０／７／２
のＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ菌の培地板上コロニー
から出発し、１５ｍＬの液体培地−アンピシリン（Ａｍ
ｐ）とクロラムフェニコール（ＣＡ）とを含むＬＢ培地
−中で回転ふりまぜ機内で吸光度（６００ｎｍ）が１．
８〜２．０になるまで３７℃で培養した。次にグリセリ
ン（８７％）を培養物に加えて最終濃度１５％（ｖ／
ｖ）とし、混合物を０．１ｍＬ分割に分け、これを−６
０から−８０℃で使用するまで保存した。
５０／７／２の発現 １． クローンｐＥＴ５ｃ／５２／３｜１５０／７／２
のＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ菌の培地板上コロニー
から出発し、１５ｍＬの液体培地−アンピシリン（Ａｍ
ｐ）とクロラムフェニコール（ＣＡ）とを含むＬＢ培地
−中で回転ふりまぜ機内で吸光度（６００ｎｍ）が１．
８〜２．０になるまで３７℃で培養した。次にグリセリ
ン（８７％）を培養物に加えて最終濃度１５％（ｖ／
ｖ）とし、混合物を０．１ｍＬ分割に分け、これを−６
０から−８０℃で使用するまで保存した。
【００４１】２． グリセリン培養物凍結品を迅速解凍
し、ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ培地１５０ｍＬ中にピペットで
入れた。一夜培養物を１Ｌ−コニカルフラスコ（ＣＦ）
中、毎分１００回転の回転ふりまぜ機中、２８℃で１６
時間培養した。
し、ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ培地１５０ｍＬ中にピペットで
入れた。一夜培養物を１Ｌ−コニカルフラスコ（ＣＦ）
中、毎分１００回転の回転ふりまぜ機中、２８℃で１６
時間培養した。
【００４２】３． 調整板付２Ｌ・ＣＦ内で各０．５Ｌ
の並行バッチ１２回によって主培養物６Ｌを培養した。
培地（ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ）を３７℃に予熱した。フラ
スコに前培養物（１：５１）１０ｍＬづつを植菌した
後、インキュベーションを毎分１６０回転の回転ふりま
ぜ機中、３７℃で実施した。生育は６００ｎｍでのＯＤ
を連続的に測定して監視した。ＯＤ０．６で組換え抗原
の発現を最終濃度１ｍＭまでＩＰＴＧを添加して減速さ
せた。
の並行バッチ１２回によって主培養物６Ｌを培養した。
培地（ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ）を３７℃に予熱した。フラ
スコに前培養物（１：５１）１０ｍＬづつを植菌した
後、インキュベーションを毎分１６０回転の回転ふりま
ぜ機中、３７℃で実施した。生育は６００ｎｍでのＯＤ
を連続的に測定して監視した。ＯＤ０．６で組換え抗原
の発現を最終濃度１ｍＭまでＩＰＴＧを添加して減速さ
せた。
【００４３】４． 誘導の３時間後、遠心分離（６×１
Ｌビーカー、４０００ｇ、０〜４℃、３０分）によって
収集を実施した。排水の良い細菌ペレットを氷冷ＰＢＳ
２００ｍＬに再懸濁し、再び遠心分離（２×２５０ｍＬ
ビーカー、５０００ｇ、０〜４℃、１０分間）した。再
び排水の良いペレットを凍結し、さらに処理するまで−
２０から−３０℃で保存した。
Ｌビーカー、４０００ｇ、０〜４℃、３０分）によって
収集を実施した。排水の良い細菌ペレットを氷冷ＰＢＳ
２００ｍＬに再懸濁し、再び遠心分離（２×２５０ｍＬ
ビーカー、５０００ｇ、０〜４℃、１０分間）した。再
び排水の良いペレットを凍結し、さらに処理するまで−
２０から−３０℃で保存した。
【００４４】５． バクテリア誘導前と収集前に、選択
したフラスコからバクテリアの懸濁液１．５ｍＬづつを
取出し、エッペンドルフ管に移し、バクテリアを遠心分
離によってペレット化した。バクテリアを次にＳＤＳ電
気泳動緩衝液で処理し、適当量を１７．５％ポリアクリ
ルアミドゲルを用いるＳＤＳ電気泳動により分析した。
収集前に取出したサンプルは誘導前に取出したサンプル
と比較して高度に強力な付加的蛋白質の二重バンドを２
５ｋの領域に示した。
したフラスコからバクテリアの懸濁液１．５ｍＬづつを
取出し、エッペンドルフ管に移し、バクテリアを遠心分
離によってペレット化した。バクテリアを次にＳＤＳ電
気泳動緩衝液で処理し、適当量を１７．５％ポリアクリ
ルアミドゲルを用いるＳＤＳ電気泳動により分析した。
収集前に取出したサンプルは誘導前に取出したサンプル
と比較して高度に強力な付加的蛋白質の二重バンドを２
５ｋの領域に示した。
【００４５】実施例３ バクテリアの消化 凍結した細菌ペレットを解凍し、基本緩衝液（トリス−
塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５）１６０ｍＬに再懸濁し、
次にテフロン／硝子ポッターホモゲナイザーでホモゲナ
イズした。続いて撹拌しつつ次の添加物を加えた：ＮＰ
−４０（０．０５％）、ＰＭＳＦ（０．２ｍＭ）、ペフ
ァブロック（０．２ｍＭ）、ＥＤＴＡ（５０ｍＭ）、リ
ゾチーム（５０ｍｇ）を加え、総容積２００ｍＬ。この
混合物を激しく撹拌しつつ室温で６０分間インキュベー
トし、次に直ちに氷冷した。この後の工程は氷上または
冷却下に実施した。インキュベーション後、グリセリン
（１０％）と２−メルカプトエタノール（１４ｍＭ）を
加え、基本緩衝液で容積を２８０ｍＬに調整した。溶菌
混合物を次に超音波処理した（２０ｋＨｚ、パルス、５
分間、３／４”チタンプローブ）。非溶解性物質を遠心
分離（２×２５０ｍＬビーカー、２７０００ｇ、３０分
間、０〜４℃）で除去した。ペレットは廃棄した。
塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５）１６０ｍＬに再懸濁し、
次にテフロン／硝子ポッターホモゲナイザーでホモゲナ
イズした。続いて撹拌しつつ次の添加物を加えた：ＮＰ
−４０（０．０５％）、ＰＭＳＦ（０．２ｍＭ）、ペフ
ァブロック（０．２ｍＭ）、ＥＤＴＡ（５０ｍＭ）、リ
ゾチーム（５０ｍｇ）を加え、総容積２００ｍＬ。この
混合物を激しく撹拌しつつ室温で６０分間インキュベー
トし、次に直ちに氷冷した。この後の工程は氷上または
冷却下に実施した。インキュベーション後、グリセリン
（１０％）と２−メルカプトエタノール（１４ｍＭ）を
加え、基本緩衝液で容積を２８０ｍＬに調整した。溶菌
混合物を次に超音波処理した（２０ｋＨｚ、パルス、５
分間、３／４”チタンプローブ）。非溶解性物質を遠心
分離（２×２５０ｍＬビーカー、２７０００ｇ、３０分
間、０〜４℃）で除去した。ペレットは廃棄した。
【００４６】実施例４ 組換え蛋白質５２／３｜１５０
／７／２の精製 １． 固体硫酸アンモニウムの微粉末を実施例３からの
上清液中に氷浴上で撹拌しつつ、２５％飽和になるまで
徐々に添加した。続けて撹拌しつつ１５分間インキュベ
ートした。遠心分離（２×２５０ｍＬビーカー、２７０
００ｇ、３０分、０〜４℃）後、ペレットは廃棄した。
上清液に再び硫酸アンモニウムを加えて４５％飽和濃度
とし、混合物を前記のように遠心分離した。上清液は廃
棄した。ペレットを２−メルカプトエタノール（１４ｍ
Ｍ）とペファブロック（０．１ｍＭ）とを含む基本緩衝
液２５ｍＬに再懸濁し、凍結し、−２０から−３０℃で
一夜保存した。
／７／２の精製 １． 固体硫酸アンモニウムの微粉末を実施例３からの
上清液中に氷浴上で撹拌しつつ、２５％飽和になるまで
徐々に添加した。続けて撹拌しつつ１５分間インキュベ
ートした。遠心分離（２×２５０ｍＬビーカー、２７０
００ｇ、３０分、０〜４℃）後、ペレットは廃棄した。
上清液に再び硫酸アンモニウムを加えて４５％飽和濃度
とし、混合物を前記のように遠心分離した。上清液は廃
棄した。ペレットを２−メルカプトエタノール（１４ｍ
Ｍ）とペファブロック（０．１ｍＭ）とを含む基本緩衝
液２５ｍＬに再懸濁し、凍結し、−２０から−３０℃で
一夜保存した。
【００４７】２． 硫酸アンモニウム（２５〜４５％）
で分画した蛋白質溶液を解凍し、沈殿した蛋白質を遠心
分離（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分
間、０〜４℃）により除去した。上清液をセファデック
スＧ−２５（粗）カラム（容積は少なくとも２００ｍ
Ｌ）上でＡ（２８０ｎｍ）および流出液の電導度を用い
てクロマトグラフした。２−メルカプトエタノール
（１．４ｍＭ）およびＰｒｅｆａｂｌｏｃ（０．０２ｍ
Ｍ）を含む基本緩衝液をカラム緩衝液として用いた。流
出液中の蛋白質を全部集めて直ちにＳＰ−セファロース
上で（急速）クロマトグラフした。これには、２．６×
１２ｃｍ（６０ｍＬ）の大きさのカラムを用いた。Ａ
（２８０ｎｍ）と電導度とを連続的に記録した。流速は
５ｍＬ／分で、２−メルカプトエタノール（１．４ｍ
Ｍ）およびＰｒｅｆａｂｌｏｃ（０．０２ｍＭ）を含む
基本緩衝液をカラム緩衝液として用いた。サンプルに続
いてカラム緩衝液１００ｍＬを入れた後、カラム緩衝液
中の直線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１ｍＭ／ｍＬ、
３００ｍＭまで）を採用した。流出液を１０ｍＬづつの
分画として集め、冷凍した。
で分画した蛋白質溶液を解凍し、沈殿した蛋白質を遠心
分離（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分
間、０〜４℃）により除去した。上清液をセファデック
スＧ−２５（粗）カラム（容積は少なくとも２００ｍ
Ｌ）上でＡ（２８０ｎｍ）および流出液の電導度を用い
てクロマトグラフした。２−メルカプトエタノール
（１．４ｍＭ）およびＰｒｅｆａｂｌｏｃ（０．０２ｍ
Ｍ）を含む基本緩衝液をカラム緩衝液として用いた。流
出液中の蛋白質を全部集めて直ちにＳＰ−セファロース
上で（急速）クロマトグラフした。これには、２．６×
１２ｃｍ（６０ｍＬ）の大きさのカラムを用いた。Ａ
（２８０ｎｍ）と電導度とを連続的に記録した。流速は
５ｍＬ／分で、２−メルカプトエタノール（１．４ｍ
Ｍ）およびＰｒｅｆａｂｌｏｃ（０．０２ｍＭ）を含む
基本緩衝液をカラム緩衝液として用いた。サンプルに続
いてカラム緩衝液１００ｍＬを入れた後、カラム緩衝液
中の直線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１ｍＭ／ｍＬ、
３００ｍＭまで）を採用した。流出液を１０ｍＬづつの
分画として集め、冷凍した。
【００４８】抗原を含む分画は、１００ｍＭと２００ｍ
Ｍ−ＮａＣｌとの間の範囲内にあった。検出はＳＤＳ−
ＰＡディスク電気泳動および後続クーマシー・染色によ
る。
Ｍ−ＮａＣｌとの間の範囲内にあった。検出はＳＤＳ−
ＰＡディスク電気泳動および後続クーマシー・染色によ
る。
【００４９】３． 純抗原を含むと証明された分画（ク
ーマシー・ゲル）を解凍し、集めて、グリセリン（２０
％）で処理し、限外濾過（撹拌セル、氷浴、膜＝オメガ
３０）によって濃縮して最終濃度少なくとも２ｍｇ／ｍ
Ｌとした。セルの付着物を除き、凍結し、適量に分割
し、−６０から−８０℃で保存した。精製の経過を図５
に示す。
ーマシー・ゲル）を解凍し、集めて、グリセリン（２０
％）で処理し、限外濾過（撹拌セル、氷浴、膜＝オメガ
３０）によって濃縮して最終濃度少なくとも２ｍｇ／ｍ
Ｌとした。セルの付着物を除き、凍結し、適量に分割
し、−６０から−８０℃で保存した。精製の経過を図５
に示す。
【００５０】実施例５ 精製組換え抗原５２／３｜１５
０／７／２のＥＬＩＳＡでの反応性 １． 検査操作法 精製組換え抗原１００ｎｇ部分をｐＨ９．５の０．０１
Ｍ−炭酸緩衝液１００μＬに溶解し、マイクロタイター
板（Ｎｕｎｃ）の穴に入れ、アースした湿潤室内で１６
時間インキュベートした。子牛血清を含む第２の被覆溶
液１００μＬの添加後、インキュベーションをさらに２
時間継続した。次に板を空にして、注意して内容物を抜
き取った。板を次に実施の検定操作に用いるか、または
真空箱内で乾燥し、管状フィルムに封入して−２０℃で
後に使用するまで保存した。実際の検査の操作には、Ｅ
ＬＩＳＡ板のテスト穴を１：２１に希釈した血清１００
μＬで満たし、プラスチックフィルムに密封し、水浴に
浮かせて４０℃で１時間インキュベートした。バイオテ
ストＥＬＩＳＡ洗浄液ＩＩで３回洗浄後、ヒトＩｇＭに
対するペルオキシダーゼ標識モノクロナールマウス抗体
（Ｊａｎｓｓｅｎ）１００μＬと４０℃で３０分間イン
キュベーションを実施した。改めて洗浄後、結合した抗
体を発色剤としての１，２−フェニレンジアミンとの呈
色反応で可視化した。個々のサンプルの吸光度はアンソ
スＨＴＩＩ・ＥＬＩＳＡ測定器を用いて４９５ｎｍ（対
照：６２０ｎｍ）で測定した。０．３より大きい全ＯＤ
値を陽性の成績と評価した。
０／７／２のＥＬＩＳＡでの反応性 １． 検査操作法 精製組換え抗原１００ｎｇ部分をｐＨ９．５の０．０１
Ｍ−炭酸緩衝液１００μＬに溶解し、マイクロタイター
板（Ｎｕｎｃ）の穴に入れ、アースした湿潤室内で１６
時間インキュベートした。子牛血清を含む第２の被覆溶
液１００μＬの添加後、インキュベーションをさらに２
時間継続した。次に板を空にして、注意して内容物を抜
き取った。板を次に実施の検定操作に用いるか、または
真空箱内で乾燥し、管状フィルムに封入して−２０℃で
後に使用するまで保存した。実際の検査の操作には、Ｅ
ＬＩＳＡ板のテスト穴を１：２１に希釈した血清１００
μＬで満たし、プラスチックフィルムに密封し、水浴に
浮かせて４０℃で１時間インキュベートした。バイオテ
ストＥＬＩＳＡ洗浄液ＩＩで３回洗浄後、ヒトＩｇＭに
対するペルオキシダーゼ標識モノクロナールマウス抗体
（Ｊａｎｓｓｅｎ）１００μＬと４０℃で３０分間イン
キュベーションを実施した。改めて洗浄後、結合した抗
体を発色剤としての１，２−フェニレンジアミンとの呈
色反応で可視化した。個々のサンプルの吸光度はアンソ
スＨＴＩＩ・ＥＬＩＳＡ測定器を用いて４９５ｎｍ（対
照：６２０ｎｍ）で測定した。０．３より大きい全ＯＤ
値を陽性の成績と評価した。
【００５１】２． 結果 反応性を次により研究した： −急性ＨＣＭＶ感染症の兆候がない健康な血液提供者の
非選択的血清。これらの血清は公認の抗ＣＭＶ・ＩｇＧ
・ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｔｅｓｔ）によりＨＣＭＶ陽性／
陰性に分類した。 −急性ＨＣＭＶ感染症を持つ免疫応答性個体の選択的血
清。 −急性ＨＣＭＶ感染症を持つ腎移植患者の選択的コー
ス。
非選択的血清。これらの血清は公認の抗ＣＭＶ・ＩｇＧ
・ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｔｅｓｔ）によりＨＣＭＶ陽性／
陰性に分類した。 −急性ＨＣＭＶ感染症を持つ免疫応答性個体の選択的血
清。 −急性ＨＣＭＶ感染症を持つ腎移植患者の選択的コー
ス。
【００５２】図７の中の表１はオートロガス融合蛋白質
５２／３｜１５０／７／２とＨＣＭＶ免疫学的陽性（ｎ
＝５４）または免疫学的陰性の健康な血液提供者の血清
とのＩｇＭ反応性をｐＥＴ５ｃ内に同様に発現し、均質
になるまで精製した組換え抗原５２／３および１５０／
７との比較で示す。１５０／７はこの疾患とは明らかに
関連のないＨＣＭＶ陽性血清と高いＩｇＭ反応性（＞３
２％）を示すが、このオートロガス融合蛋白質は５２／
３と同様に低い反応性を示すので、１５０／７よりも明
確に良い特異性を示す。
５２／３｜１５０／７／２とＨＣＭＶ免疫学的陽性（ｎ
＝５４）または免疫学的陰性の健康な血液提供者の血清
とのＩｇＭ反応性をｐＥＴ５ｃ内に同様に発現し、均質
になるまで精製した組換え抗原５２／３および１５０／
７との比較で示す。１５０／７はこの疾患とは明らかに
関連のないＨＣＭＶ陽性血清と高いＩｇＭ反応性（＞３
２％）を示すが、このオートロガス融合蛋白質は５２／
３と同様に低い反応性を示すので、１５０／７よりも明
確に良い特異性を示す。
【００５３】図８の中の表２は急性ＨＣＭＶ感染症を持
つ免疫応答性個体の血清１５個について前記ＩｇＭ・Ｅ
ＬＩＳＡでのＯＤ値を示す。全血清は通常のＩｇＭ・Ｅ
ＬＩＳＡでは陽性であった。組換え抗原５２／３と比較
して、オートロガス融合蛋白質５２／３｜１５０／７／
２は顕著に改良された感度、すなわち、５２／３陰性の
血清の幾つかが前記オートロガス融合蛋白質の基準値と
しての０．３を超えるＯＤ値を与えた。
つ免疫応答性個体の血清１５個について前記ＩｇＭ・Ｅ
ＬＩＳＡでのＯＤ値を示す。全血清は通常のＩｇＭ・Ｅ
ＬＩＳＡでは陽性であった。組換え抗原５２／３と比較
して、オートロガス融合蛋白質５２／３｜１５０／７／
２は顕著に改良された感度、すなわち、５２／３陰性の
血清の幾つかが前記オートロガス融合蛋白質の基準値と
しての０．３を超えるＯＤ値を与えた。
【００５４】図６は急性ＨＣＭＶ感染症を持つ移植患者
２名の血清について、組換え蛋白質５２／３｜１５０／
７／２、５２／３および１５０／７の前記ＩｇＭ・ＥＬ
ＩＳＡでの結果を示す。両患者は移植前はＨＣＭＶ血清
学的陰性であり、血清学的陽性提供者からの器官（腎
臓）を与えられた。急性感染症の経過はｐｐ６５特異性
抗原血症検査とＰＣＲで監視した。５２／３はＩｇＭ反
応性を示さず、また、痕跡的ＩｇＭ反応性は両経過で示
されるが、一方１５０／７は強い反応性を示す。この疾
患の急性経過に関連するＩｇＭ特異的血清学的反応性の
高さは両患者にオートロガス融合蛋白質５２／３｜１５
０／７／２をもたらした。
２名の血清について、組換え蛋白質５２／３｜１５０／
７／２、５２／３および１５０／７の前記ＩｇＭ・ＥＬ
ＩＳＡでの結果を示す。両患者は移植前はＨＣＭＶ血清
学的陰性であり、血清学的陽性提供者からの器官（腎
臓）を与えられた。急性感染症の経過はｐｐ６５特異性
抗原血症検査とＰＣＲで監視した。５２／３はＩｇＭ反
応性を示さず、また、痕跡的ＩｇＭ反応性は両経過で示
されるが、一方１５０／７は強い反応性を示す。この疾
患の急性経過に関連するＩｇＭ特異的血清学的反応性の
高さは両患者にオートロガス融合蛋白質５２／３｜１５
０／７／２をもたらした。
【００５５】実施例６ 断片ＵＬ５７／３のＰＣＲ増幅
およびクローニング ＵＬ５７の全配列を含むコスミドクローンＰＣＭ１０２
９（Ｆｌｅｃｋｅｎｓｔｅｉｎ，Ｂ．、Ｉ．Ｍｕｅｌｌ
ｅｒとＪ．Ｃｏｌｌｉｎｓ、１９８２年、Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ・ｏｆ・ｔｈｅ・ｃｏｍｐｌｅｔｅ・ｈｕｍａｎ・ｃ
ｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ・ｉｎ・ｃｏｓｍｉｄｓ
「コスミド中の完全なヒトサイトメガロウイルスのクロ
ーニング」、Ｇｅｎｅ、１８巻、３９〜４６頁）から出
発して、読み枠ＵＬ５７のアミノ酸５４５〜６０１をコ
ードする部分断片ＵＬ５７／３のＰＣＲ増幅をプライマ
ーＰＣＣＵＬ５７７．ｓｅｑとＰＣＣＵＬ５７８．ｓｅ
ｑとを用いて行った（図９および図１０）。両プライマ
ーはＵＬ５７と相補的な領域に加えて独特な制限開裂部
位を含むオーバーハング、すなわちＰＣＣＵＬ５７８．
ｓｅｑ：ＥｃｏＲＩ、ＰＣＣＵＬ５７７．ｓｅｑ：Ｂａ
ｍＨＩ、を持つ。これら開裂部位は増幅生成物の指向的
クローニングを可能にする。ＰＣＲ増幅は反応緩衝液
（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔｕｓ）１０μＬ、
２００μＭ−デオキシヌクレオチド４種、０．５μＭ−
ＰＣＲプライマー２種、出発ＤＮＡ５０〜１００ｎｇお
よびＡｍｐｌｉＴａｑ・ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋ
ｉｎ−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔｕｓ）２．５単位を含む全容
積１００μＬ中で実施した。増幅はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌ
ｍｅｒ・ＣｅｔｕｓのＤＮＡサーマルサイクラー中、次
の条件下に２５サイクルで実施した：１分間−５５℃、
１分間−７２℃、１分間−９４℃。ＰＣＲ反応混合物を
サブマリンアガロースゲルチャンバー内で、臭化エチジ
ウム０．５μｇ／ｍＬを含む１．２％アガロースゲル中
（Ｕｌｔｒａ・Ｐｕｒｅ・Ａｇａｒｏｓｅ、ＢＲＬ）、
ＴＢＥランニング緩衝液（０．０８９Ｍ−トリス／ホウ
酸塩、０．００２Ｍ−ＥＤＴＡ）を用いて、電気泳動的
に分離した。その後、増幅したＤＮＡ断片を３６４ｎｍ
でＵＶランプにより可視化し、対応するバンドを含むゲ
ル領域をメスで切出した。ＤＮＡを製造者の指示書に従
ってＢｉｏｔｒａｐチャンバー（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ
・＆・Ｓｃｈｕｅｌｌ）によって溶出した。これに続い
てＤＮＡを製造者の使用指示書に従ってＥｌｕｔｉｐ・
Ｄカラム（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ・＆・Ｓｃｈｕｅｌ
ｌ）によって精製した。
およびクローニング ＵＬ５７の全配列を含むコスミドクローンＰＣＭ１０２
９（Ｆｌｅｃｋｅｎｓｔｅｉｎ，Ｂ．、Ｉ．Ｍｕｅｌｌ
ｅｒとＪ．Ｃｏｌｌｉｎｓ、１９８２年、Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ・ｏｆ・ｔｈｅ・ｃｏｍｐｌｅｔｅ・ｈｕｍａｎ・ｃ
ｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ・ｉｎ・ｃｏｓｍｉｄｓ
「コスミド中の完全なヒトサイトメガロウイルスのクロ
ーニング」、Ｇｅｎｅ、１８巻、３９〜４６頁）から出
発して、読み枠ＵＬ５７のアミノ酸５４５〜６０１をコ
ードする部分断片ＵＬ５７／３のＰＣＲ増幅をプライマ
ーＰＣＣＵＬ５７７．ｓｅｑとＰＣＣＵＬ５７８．ｓｅ
ｑとを用いて行った（図９および図１０）。両プライマ
ーはＵＬ５７と相補的な領域に加えて独特な制限開裂部
位を含むオーバーハング、すなわちＰＣＣＵＬ５７８．
ｓｅｑ：ＥｃｏＲＩ、ＰＣＣＵＬ５７７．ｓｅｑ：Ｂａ
ｍＨＩ、を持つ。これら開裂部位は増幅生成物の指向的
クローニングを可能にする。ＰＣＲ増幅は反応緩衝液
（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔｕｓ）１０μＬ、
２００μＭ−デオキシヌクレオチド４種、０．５μＭ−
ＰＣＲプライマー２種、出発ＤＮＡ５０〜１００ｎｇお
よびＡｍｐｌｉＴａｑ・ＤＮＡポリメラーゼ（Ｐｅｒｋ
ｉｎ−Ｅｌｍｅｒ・Ｃｅｔｕｓ）２．５単位を含む全容
積１００μＬ中で実施した。増幅はＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌ
ｍｅｒ・ＣｅｔｕｓのＤＮＡサーマルサイクラー中、次
の条件下に２５サイクルで実施した：１分間−５５℃、
１分間−７２℃、１分間−９４℃。ＰＣＲ反応混合物を
サブマリンアガロースゲルチャンバー内で、臭化エチジ
ウム０．５μｇ／ｍＬを含む１．２％アガロースゲル中
（Ｕｌｔｒａ・Ｐｕｒｅ・Ａｇａｒｏｓｅ、ＢＲＬ）、
ＴＢＥランニング緩衝液（０．０８９Ｍ−トリス／ホウ
酸塩、０．００２Ｍ−ＥＤＴＡ）を用いて、電気泳動的
に分離した。その後、増幅したＤＮＡ断片を３６４ｎｍ
でＵＶランプにより可視化し、対応するバンドを含むゲ
ル領域をメスで切出した。ＤＮＡを製造者の指示書に従
ってＢｉｏｔｒａｐチャンバー（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ
・＆・Ｓｃｈｕｅｌｌ）によって溶出した。これに続い
てＤＮＡを製造者の使用指示書に従ってＥｌｕｔｉｐ・
Ｄカラム（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ・＆・Ｓｃｈｕｅｌ
ｌ）によって精製した。
【００５６】このように精製し、乾燥したＤＮＡ断片を
蒸留水８０μＬに溶解した。ＮＥＢｕｆｆｅｒ・４（Ｎ
ｅｗ・Ｅｎｇｌａｎｄ・Ｂｉｏｌａｂｓ）１０μＬを添
加した後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ消化を酵素２種各１
００Ｕの添加によって実施した。２時間後、フェノール
抽出し、続いてエタノール沈殿をした。このようにして
製造したＤＮＡ断片１００ｎｇを標準的ベクターｐＵＣ
８のＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ−処理ＤＮＡ２００ｎｇと
４℃で１６時間結合させ、次に大腸菌ＪＭ１０９をこれ
で形質転換した。形質転換混合物はアンピシリン（５０
μｇ／ｍＬ）およびＸーガル（３０μｇ／ｍＬ）添加寒
天で平板培養した。白色のコロニーをアンピシリン添加
ＬＢ培地３ｍＬに移し、ふりまぜながら３７℃で１２〜
１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮＡの単離
後、ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ制限消化およびアガロース
ゲル電気泳動を実施した。所期の大きさの付加ＤＮＡ断
片が見出されたクローンをｐＵＣ８／ＰＣＣＵＬ５７／
３と命名し、以下のクローニングに使用した。
蒸留水８０μＬに溶解した。ＮＥＢｕｆｆｅｒ・４（Ｎ
ｅｗ・Ｅｎｇｌａｎｄ・Ｂｉｏｌａｂｓ）１０μＬを添
加した後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ消化を酵素２種各１
００Ｕの添加によって実施した。２時間後、フェノール
抽出し、続いてエタノール沈殿をした。このようにして
製造したＤＮＡ断片１００ｎｇを標準的ベクターｐＵＣ
８のＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ−処理ＤＮＡ２００ｎｇと
４℃で１６時間結合させ、次に大腸菌ＪＭ１０９をこれ
で形質転換した。形質転換混合物はアンピシリン（５０
μｇ／ｍＬ）およびＸーガル（３０μｇ／ｍＬ）添加寒
天で平板培養した。白色のコロニーをアンピシリン添加
ＬＢ培地３ｍＬに移し、ふりまぜながら３７℃で１２〜
１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮＡの単離
後、ＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ制限消化およびアガロース
ゲル電気泳動を実施した。所期の大きさの付加ＤＮＡ断
片が見出されたクローンをｐＵＣ８／ＰＣＣＵＬ５７／
３と命名し、以下のクローニングに使用した。
【００５７】実施例７ 部分断片ＵＬ５７／１のＰＣＲ
増幅およびクローニング クローンＰＣＭ１０２９（実施例６参照）から出発し
て、読み枠ＵＬ５７のアミノ酸７５５〜１０００をコー
ドする断片ＵＬ５７／１をプライマーＰＣＣＵＬ５７
１．ｓｅｑおよびＰＣＣＵＬ５７２．ｓｅｑを用い、前
記のように増幅した断片をクローニングしてＰＣＲ増幅
を実施した。対応するクローンをｐｕｃ８／ＰＣＣＵＬ
５７１と命名した。
増幅およびクローニング クローンＰＣＭ１０２９（実施例６参照）から出発し
て、読み枠ＵＬ５７のアミノ酸７５５〜１０００をコー
ドする断片ＵＬ５７／１をプライマーＰＣＣＵＬ５７
１．ｓｅｑおよびＰＣＣＵＬ５７２．ｓｅｑを用い、前
記のように増幅した断片をクローニングしてＰＣＲ増幅
を実施した。対応するクローンをｐｕｃ８／ＰＣＣＵＬ
５７１と命名した。
【００５８】実施例８ 部分断片ＵＬ５７／２のクロー
ニング この部分断片ではプライマーに数種の修飾を施したにも
かかわらず、ＰＣＲ増幅はできなかった。この理由か
ら、クローンすべき出発ＤＮＡは化学的に合成した。そ
のために、断片のアミノ酸配列をＤＮＡＳＴＡＲからの
コンピュータプログラムによって、用いられる大腸菌遺
伝子を強く発現するコドンのみをＤＮＡ中に翻訳した。
ＡＡ配列を変更せずにＤＮＡ配列に若干の修飾をして、
独特の制限開裂部位を導入して化学的に合成したオリゴ
ヌクレオチド対のクローニングが可能になった。
ニング この部分断片ではプライマーに数種の修飾を施したにも
かかわらず、ＰＣＲ増幅はできなかった。この理由か
ら、クローンすべき出発ＤＮＡは化学的に合成した。そ
のために、断片のアミノ酸配列をＤＮＡＳＴＡＲからの
コンピュータプログラムによって、用いられる大腸菌遺
伝子を強く発現するコドンのみをＤＮＡ中に翻訳した。
ＡＡ配列を変更せずにＤＮＡ配列に若干の修飾をして、
独特の制限開裂部位を導入して化学的に合成したオリゴ
ヌクレオチド対のクローニングが可能になった。
【００５９】オリゴヌクレオチドはＡｐｐｌｉｅｄ・Ｂ
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成器３８１Ａで合成し、
続いてオリゴヌクレオチドを製造者の指示書に従ってＯ
ＰＣカートリッジ（Ａｐｐｌｉｅｄ・Ｂｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ）を用いて精製した。
ｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡ合成器３８１Ａで合成し、
続いてオリゴヌクレオチドを製造者の指示書に従ってＯ
ＰＣカートリッジ（Ａｐｐｌｉｅｄ・Ｂｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ）を用いて精製した。
【００６０】ヌクレオチドＨＣ５７２ＳＹ１．ＳＥＱお
よびＨＣ５７２ＳＹ２．ＳＥＱ各々１０ｎｇを制限酵素
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで４℃で１６時間開裂
したベクターｐＵＣ８約２００ｇに結合させ、次にこれ
で大腸菌ＪＭ１０９を形質転換した。Ｘーガル／アンピ
シリン含有寒天平板培養およびコロニーの培養を前記の
ようにして実施した。プラスミドＤＮＡの単離後、Ｐｓ
ｔＩで制限消化を行ったが、この開裂部位は最初のオリ
ゴヌクレオチド対により新規に導入されたものである。
リニアリゼーションを示したクローンを以下の実験に使
用した。このクローンのＤＮＡを制限酵素ＰｓｔＩおよ
びＥｃｏＲＩで処理し、オリゴヌクレオチドＨＣ５７２
ＳＹ１．ＳＥＱおよびＨＣ５７２．ＳＹ４ＳＥＱ各１０
ｎｇと結合させた。形質転換、平板培養および分離は前
記のようにして行った。ＢｓｇＩで制限消化後、リニア
化したクローンを第３のクローニング工程に用いた。Ｂ
ｓｇＩとＥｃｏＲＩで制限消化後、これをオリゴヌクレ
オチドＨＣ５７２ＳＹ５．ＳＥＱおよびＨＣ５７２ＳＹ
６．ＳＥＱで前記のように処理した。ＡｖａＩを用いて
リニア化したクローンをｐＵＣ８／ＵＬ５７／２と命名
し、以下の実験に用いた。
よびＨＣ５７２ＳＹ２．ＳＥＱ各々１０ｎｇを制限酵素
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで４℃で１６時間開裂
したベクターｐＵＣ８約２００ｇに結合させ、次にこれ
で大腸菌ＪＭ１０９を形質転換した。Ｘーガル／アンピ
シリン含有寒天平板培養およびコロニーの培養を前記の
ようにして実施した。プラスミドＤＮＡの単離後、Ｐｓ
ｔＩで制限消化を行ったが、この開裂部位は最初のオリ
ゴヌクレオチド対により新規に導入されたものである。
リニアリゼーションを示したクローンを以下の実験に使
用した。このクローンのＤＮＡを制限酵素ＰｓｔＩおよ
びＥｃｏＲＩで処理し、オリゴヌクレオチドＨＣ５７２
ＳＹ１．ＳＥＱおよびＨＣ５７２．ＳＹ４ＳＥＱ各１０
ｎｇと結合させた。形質転換、平板培養および分離は前
記のようにして行った。ＢｓｇＩで制限消化後、リニア
化したクローンを第３のクローニング工程に用いた。Ｂ
ｓｇＩとＥｃｏＲＩで制限消化後、これをオリゴヌクレ
オチドＨＣ５７２ＳＹ５．ＳＥＱおよびＨＣ５７２ＳＹ
６．ＳＥＱで前記のように処理した。ＡｖａＩを用いて
リニア化したクローンをｐＵＣ８／ＵＬ５７／２と命名
し、以下の実験に用いた。
【００６１】実施例９ 発現ベクターｐＧＥＸ−３Ｘへ
の断片ＵＬ５７／１〜３のクローニング ヘテロロガス蛋白質グルタチオン・Ｓ−トランスフェラ
ーゼ（ＧＳＴ）と融合の抗原断片ＵＬ５７／１〜３の発
現を確実にするために、発現ベクターｐＧＥＸ−３Ｘ
（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｂ．およびＫ．Ｓ．Ｊｏｈｏｎｓｏ
ｎ、１９８８年、Ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｅｐ・ｐｕｒｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎ・ｏｆ・ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ・ｅ
ｘｐｒｅｓｓｅｄ・ｉｎ・Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ・ｃ
ｏｌｉ・ａｓ・ｆｕｓｉｏｎｓ・ｗｉｔｈ・ｇｌｕｔａ
ｔｈｉｏｎｅ・Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ「グルタチ
オンＳートランスフェラーゼとの融合として大腸菌内に
発現されたポリペプチドの単一工程精製法」、Ｇｅｎ
ｅ、６７巻：３１〜４０頁）で再クローニングを実施し
た。このベクターはＢａｍＨＩ切断部位をＧＳＴをコー
ドする遺伝子の３’端に持つ。ＢａｍＨＩ切断部位の読
み枠はクローンｐＵＣ８／ＵＬ５７／１〜３をコードす
る断片のものと一致する。ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩ
制限消化によってｐＵＣ８／ＵＬ５７／１、ｐＵＣ８／
ＵＬ５７／２およびｐＵＣ８／ＵＬ５７／３から分離し
たＤＮＡ断片１００ｍｇを同じ制限酵素で開裂したベク
ターｐＧＥＸ−３Ｘ２００ｎｇと４℃で１６時間結合さ
せた。続いて大腸菌ＪＭ１０９の形質転換およびアンピ
シリン添加平板培養を行った。分離されたコロニーをア
ンピシリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりま
ぜながら１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮ
Ａの分離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し
た。所期サイズの挿入部分を持つクローンをｐＧＥＸ−
３／ＵＬ５７／１、ｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／２および
ｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／３と命名し、ＧＳＴ融合蛋白
質としてＵＬ５７断片の発現に用いた。
の断片ＵＬ５７／１〜３のクローニング ヘテロロガス蛋白質グルタチオン・Ｓ−トランスフェラ
ーゼ（ＧＳＴ）と融合の抗原断片ＵＬ５７／１〜３の発
現を確実にするために、発現ベクターｐＧＥＸ−３Ｘ
（Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｂ．およびＫ．Ｓ．Ｊｏｈｏｎｓｏ
ｎ、１９８８年、Ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｅｐ・ｐｕｒｉｆ
ｉｃａｔｉｏｎ・ｏｆ・ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ・ｅ
ｘｐｒｅｓｓｅｄ・ｉｎ・Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ・ｃ
ｏｌｉ・ａｓ・ｆｕｓｉｏｎｓ・ｗｉｔｈ・ｇｌｕｔａ
ｔｈｉｏｎｅ・Ｓ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ「グルタチ
オンＳートランスフェラーゼとの融合として大腸菌内に
発現されたポリペプチドの単一工程精製法」、Ｇｅｎ
ｅ、６７巻：３１〜４０頁）で再クローニングを実施し
た。このベクターはＢａｍＨＩ切断部位をＧＳＴをコー
ドする遺伝子の３’端に持つ。ＢａｍＨＩ切断部位の読
み枠はクローンｐＵＣ８／ＵＬ５７／１〜３をコードす
る断片のものと一致する。ＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩ
制限消化によってｐＵＣ８／ＵＬ５７／１、ｐＵＣ８／
ＵＬ５７／２およびｐＵＣ８／ＵＬ５７／３から分離し
たＤＮＡ断片１００ｍｇを同じ制限酵素で開裂したベク
ターｐＧＥＸ−３Ｘ２００ｎｇと４℃で１６時間結合さ
せた。続いて大腸菌ＪＭ１０９の形質転換およびアンピ
シリン添加平板培養を行った。分離されたコロニーをア
ンピシリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、３７℃でふりま
ぜながら１６時間インキュベートした。プラスミドＤＮ
Ａの分離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し
た。所期サイズの挿入部分を持つクローンをｐＧＥＸ−
３／ＵＬ５７／１、ｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／２および
ｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／３と命名し、ＧＳＴ融合蛋白
質としてＵＬ５７断片の発現に用いた。
【００６２】実施例１０ オートロガス融合蛋白質５２
／３・５７／３および５２／３・５７／３ ・１５０／７
／２のクローニング イ） クローンｐＵＣ８／ＰＣＣ５２／３−ｐ５２のＡ
Ａ２９７〜４３３をコードするクローン化された断片−
から出発して、プライマーＰＣＣ５２５．ｓｅｑおよび
ＰＣＣ５２６．ｓｅｑを用いるＰＣＲ増幅および後に、
増幅された断片のクローニングを実施した。ここに用い
たプライマー２種のオーバーハングのために、増幅され
た断片は５’端にＢａｍＨＩ切断部位、３’端にＢｇｌ
ＩＩおよびＥｃｏＲＩ切断部位を持つ。対応するクロー
ンをｐＵＣ８／ＰＣＣ５２／３Ｆと命名した。
／３・５７／３および５２／３・５７／３ ・１５０／７
／２のクローニング イ） クローンｐＵＣ８／ＰＣＣ５２／３−ｐ５２のＡ
Ａ２９７〜４３３をコードするクローン化された断片−
から出発して、プライマーＰＣＣ５２５．ｓｅｑおよび
ＰＣＣ５２６．ｓｅｑを用いるＰＣＲ増幅および後に、
増幅された断片のクローニングを実施した。ここに用い
たプライマー２種のオーバーハングのために、増幅され
た断片は５’端にＢａｍＨＩ切断部位、３’端にＢｇｌ
ＩＩおよびＥｃｏＲＩ切断部位を持つ。対応するクロー
ンをｐＵＣ８／ＰＣＣ５２／３Ｆと命名した。
【００６３】ロ） クローンｐＵＣ８／ＵＬ５７／３の
ＤＮＡについて、制限酵素ＸｂａＩおよびＥｃｏＲＩを
用いる制限消化を実施した。こうして開裂したベクター
２００ｎｇを２種のオリゴヌクレオチドＵＬ５７Ｆ３．
ＳＥＱおよびＵＬ５７Ｆ４．ＳＥＱ各々１０ｎｇで結合
させ、次に大腸菌ＪＭ１０９をこれで前記のようにして
形質転換した。分離されたコロニーをＬＢ培地に接種
し、前記のようにしてインキュベートした。プラスミド
ＤＮＡの分離後、ＢｇｌＩＩで制限消化を実施し、続い
てアガロースゲル電気泳動を行った。オリゴヌクレオチ
ド２種の導入の証拠としてリニアリゼーションが証明さ
れたクローンをｐＵＣ８／ＵＬ５７／３Ｆと命名し、以
下のクローニング実験に用いた。
ＤＮＡについて、制限酵素ＸｂａＩおよびＥｃｏＲＩを
用いる制限消化を実施した。こうして開裂したベクター
２００ｎｇを２種のオリゴヌクレオチドＵＬ５７Ｆ３．
ＳＥＱおよびＵＬ５７Ｆ４．ＳＥＱ各々１０ｎｇで結合
させ、次に大腸菌ＪＭ１０９をこれで前記のようにして
形質転換した。分離されたコロニーをＬＢ培地に接種
し、前記のようにしてインキュベートした。プラスミド
ＤＮＡの分離後、ＢｇｌＩＩで制限消化を実施し、続い
てアガロースゲル電気泳動を行った。オリゴヌクレオチ
ド２種の導入の証拠としてリニアリゼーションが証明さ
れたクローンをｐＵＣ８／ＵＬ５７／３Ｆと命名し、以
下のクローニング実験に用いた。
【００６４】ハ） ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩを用い
てクローンｐＵＣ８／ＵＬ５７／３ＦのＤＮＡについて
制限消化を実施した。ここで発生する約２００ｂｐの断
片はアガロース電気泳動を用いて単離し、前記のように
してゲル切片から溶出した。このＤＮＡ断片約５０ｎｇ
を次にベクターｐＵＣ８／ＰＣＣ５２／３Ｆ２００ｎｇ
と結合させ、これをＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩで開裂
し、電気泳動を用いて同様に精製した。続いてこれで大
腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、アンピシリン添加寒天平
板で培養した。分離したコロニーをアンピシリン添加Ｌ
Ｂ培地３ｍＬに移し、ふりまぜながら３７℃で１２〜１
６時間インキュベートした。プラスミドＤＮＡの分離
後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し、続いて
アガロースゲル中で電気泳動を実施した。所期の大きさ
の挿入部を持つクローンをｐＵＣ８／５２／３・ＵＬ５
７／３と命名し、以下の実験に用いた。ＢａｍＨＩおよ
びＢｇｌＩＩの認識配列が結合を可能にする同じオーバ
ーハングを持つという事実をこの操作に利用する。しか
しながら、開裂部位２個は結合が実施された後には失わ
れる。５２／３ＦからＵＬ５７／３へのオーバーハング
は、同じ読み枠内で翻訳が可能であるように選択したも
のである。
てクローンｐＵＣ８／ＵＬ５７／３ＦのＤＮＡについて
制限消化を実施した。ここで発生する約２００ｂｐの断
片はアガロース電気泳動を用いて単離し、前記のように
してゲル切片から溶出した。このＤＮＡ断片約５０ｎｇ
を次にベクターｐＵＣ８／ＰＣＣ５２／３Ｆ２００ｎｇ
と結合させ、これをＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩで開裂
し、電気泳動を用いて同様に精製した。続いてこれで大
腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、アンピシリン添加寒天平
板で培養した。分離したコロニーをアンピシリン添加Ｌ
Ｂ培地３ｍＬに移し、ふりまぜながら３７℃で１２〜１
６時間インキュベートした。プラスミドＤＮＡの分離
後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し、続いて
アガロースゲル中で電気泳動を実施した。所期の大きさ
の挿入部を持つクローンをｐＵＣ８／５２／３・ＵＬ５
７／３と命名し、以下の実験に用いた。ＢａｍＨＩおよ
びＢｇｌＩＩの認識配列が結合を可能にする同じオーバ
ーハングを持つという事実をこの操作に利用する。しか
しながら、開裂部位２個は結合が実施された後には失わ
れる。５２／３ＦからＵＬ５７／３へのオーバーハング
は、同じ読み枠内で翻訳が可能であるように選択したも
のである。
【００６５】ニ） クローンｐＵＣ８／ＰＣＣ１５０／
７／２−このクローンはＨＣＭＶ抗原ｐｐ１５０のアミ
ノ酸９９４〜１０４８をコードしている部分断片を含む
−のＤＮＡについてＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩを用い
て制限消化を実施した。このようにして遊離された約１
７０ｂｐの断片を前記のように電気泳動的に精製した。
精製断片５０ｎｇを２００ｎｇのベクターｐＵＣ８／５
２／３・５７／３と結合させ、４℃で１６時間ＢｇｌＩ
ＩおよびＥｃｏＲＩで処理し、これで大腸菌ＪＭ１０９
を形質転換した。アンピシリン添加寒天平板培養を行っ
た。分離したコロニーをアンピシリン添加ＬＢ培地３ｍ
Ｌに移し、ふりまぜながら３７℃で１２〜１６時間イン
キュベートした。プラスミドＤＮＡの分離後、ＢａｍＨ
Ｉ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し、続いてアガロースゲ
ル中での電気泳動を実施した。所期の大きさの挿入部を
持つクローンをｐＵＣ８／５２／３・５７／３・１５０
／７／２と命名し、以下の研究に用いた。
７／２−このクローンはＨＣＭＶ抗原ｐｐ１５０のアミ
ノ酸９９４〜１０４８をコードしている部分断片を含む
−のＤＮＡについてＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩを用い
て制限消化を実施した。このようにして遊離された約１
７０ｂｐの断片を前記のように電気泳動的に精製した。
精製断片５０ｎｇを２００ｎｇのベクターｐＵＣ８／５
２／３・５７／３と結合させ、４℃で１６時間ＢｇｌＩ
ＩおよびＥｃｏＲＩで処理し、これで大腸菌ＪＭ１０９
を形質転換した。アンピシリン添加寒天平板培養を行っ
た。分離したコロニーをアンピシリン添加ＬＢ培地３ｍ
Ｌに移し、ふりまぜながら３７℃で１２〜１６時間イン
キュベートした。プラスミドＤＮＡの分離後、ＢａｍＨ
Ｉ／ＥｃｏＲＩ制限消化を実施し、続いてアガロースゲ
ル中での電気泳動を実施した。所期の大きさの挿入部を
持つクローンをｐＵＣ８／５２／３・５７／３・１５０
／７／２と命名し、以下の研究に用いた。
【００６６】ホ） オートロガス融合蛋白質の発現を確
実にするために、対応するＤＮＡ断片のバクテリオファ
ージＴ７の遺伝子１０にある強力なＴ７プロモータを持
っているベクターｐＥＴ５ｃへの再クローニングを実施
した。この背景として、このベクターはリボソーム結合
部位および適当な距離に出発コドンを持っている。出発
コドンの後にバクテリオファージＴ７の遺伝子１０の１
１アミノ酸の読み枠およびＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ
開裂部位が存在する。ＢａｍＨＩ開裂部位の読み枠は前
記のオートロガス融合蛋白質のそれと一致する。Ｅｃｏ
ＲＩおよびＢａｍＨＩ制限消化によりｐＵＣ８／５２／
３・ＵＬ５７／３およびｐＵＣ８／５２／３・５７／３
・１５０／７／２から分離したＤＮＡ断片１００ｎｇを
同じ制限酵素で開裂したベクター２００ｎｇと４℃で１
６時間結合した。大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、続い
てアンピシリン添加平板で培養を行った。分離したコロ
ニーをアンピシリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、ふりま
ぜながら３７℃で１６時間インキュベートした。プラス
ミドＤＮＡの分離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化
を実施した。所期の大きさの挿入部を持つクローンをｐ
ＥＴ５ａ／５２／３・ＵＬ５７／３およびｐＥＴ５ｃ／
５２／３・５７／３・１５０／７／２と命名した。組み
換え蛋白質の発現を確実にするため、発現クローンのＤ
ＮＡでクロラムフェニコール耐性発現株ＢＬ２１（ＤＥ
３）ｐＬｙｓＳを形質転換した。各々の得られたクロー
ンの一つを以下の研究に用いた。
実にするために、対応するＤＮＡ断片のバクテリオファ
ージＴ７の遺伝子１０にある強力なＴ７プロモータを持
っているベクターｐＥＴ５ｃへの再クローニングを実施
した。この背景として、このベクターはリボソーム結合
部位および適当な距離に出発コドンを持っている。出発
コドンの後にバクテリオファージＴ７の遺伝子１０の１
１アミノ酸の読み枠およびＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ
開裂部位が存在する。ＢａｍＨＩ開裂部位の読み枠は前
記のオートロガス融合蛋白質のそれと一致する。Ｅｃｏ
ＲＩおよびＢａｍＨＩ制限消化によりｐＵＣ８／５２／
３・ＵＬ５７／３およびｐＵＣ８／５２／３・５７／３
・１５０／７／２から分離したＤＮＡ断片１００ｎｇを
同じ制限酵素で開裂したベクター２００ｎｇと４℃で１
６時間結合した。大腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、続い
てアンピシリン添加平板で培養を行った。分離したコロ
ニーをアンピシリン添加ＬＢ培地３ｍＬに移し、ふりま
ぜながら３７℃で１６時間インキュベートした。プラス
ミドＤＮＡの分離後、ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ制限消化
を実施した。所期の大きさの挿入部を持つクローンをｐ
ＥＴ５ａ／５２／３・ＵＬ５７／３およびｐＥＴ５ｃ／
５２／３・５７／３・１５０／７／２と命名した。組み
換え蛋白質の発現を確実にするため、発現クローンのＤ
ＮＡでクロラムフェニコール耐性発現株ＢＬ２１（ＤＥ
３）ｐＬｙｓＳを形質転換した。各々の得られたクロー
ンの一つを以下の研究に用いた。
【００６７】実施例１１ ペプチドＵＬ５７／３Ｐの化
学合成およびその精製 ペプチドＵＬ５７／３Ｐは図１１に示すアミノ酸配列に
従い、ミリポア９０５０連続流ペプチド合成器（Ｍｉｌ
ｌｉｐｏｒｅ・Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、Ｕ
ＳＡ）を用いて、９ーフルオレニルメトキシカルボニル
（Ｆｍｏｃ）試薬を用いて合成した。合成は担体物質
（ＰＥＧ−ＰＳ樹脂）１０００ｍｇおよび特殊活性化ア
ミノ酸エステル０．８ミリモルで実施した。担体物質か
らの脱離および保護基の除去は８８％トリフルオロ酢
酸、５％フェノール（液体）、２％トリイソプロピルシ
ランおよび５％蒸留水の混合物中で１２時間インキュベ
ーションして行った。遊離のペプチドは氷冷エーテルで
数回沈殿させて、次に真空乾燥した。精製はＣ４カラム
（２５×１００ｍｍ、１５μｍ、３００Ａ、Ｄｅｌｔａ
−Ｐａｋ、Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ・Ｃｏｒ
ｐ）上で０．１％ＴＦＡ中の０〜６０％アセトニトリル
勾配を用いる分取逆相ＨＰＬＣにより実施した。採集し
た分画を凍結乾燥し、逆相ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡ
Ｇ電気泳動により分析した。純粋なペプチドを含む分画
はＥＬＩＳＡでの評価のために用いた。
学合成およびその精製 ペプチドＵＬ５７／３Ｐは図１１に示すアミノ酸配列に
従い、ミリポア９０５０連続流ペプチド合成器（Ｍｉｌ
ｌｉｐｏｒｅ・Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ、Ｕ
ＳＡ）を用いて、９ーフルオレニルメトキシカルボニル
（Ｆｍｏｃ）試薬を用いて合成した。合成は担体物質
（ＰＥＧ−ＰＳ樹脂）１０００ｍｇおよび特殊活性化ア
ミノ酸エステル０．８ミリモルで実施した。担体物質か
らの脱離および保護基の除去は８８％トリフルオロ酢
酸、５％フェノール（液体）、２％トリイソプロピルシ
ランおよび５％蒸留水の混合物中で１２時間インキュベ
ーションして行った。遊離のペプチドは氷冷エーテルで
数回沈殿させて、次に真空乾燥した。精製はＣ４カラム
（２５×１００ｍｍ、１５μｍ、３００Ａ、Ｄｅｌｔａ
−Ｐａｋ、Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ・Ｃｏｒ
ｐ）上で０．１％ＴＦＡ中の０〜６０％アセトニトリル
勾配を用いる分取逆相ＨＰＬＣにより実施した。採集し
た分画を凍結乾燥し、逆相ＨＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡ
Ｇ電気泳動により分析した。純粋なペプチドを含む分画
はＥＬＩＳＡでの評価のために用いた。
【００６８】実施例１２ ＵＬ５７／１−ＧＳＴ、ＵＬ
５７／２−ＧＳＴおよびＵＬ５７／３−Ｇ ＳＴの培養、
発現および精製 ＬＢ／ＡＭＰ培地１５０ｍＬにクローンｐＧＥＸ−３／
ＵＬ５７／１〜３（ＬＢ／ＡＭＰ培地）の寒天平板から
分離したコロニーを植菌した。培養は１ＬのＣＦ内で毎
分１６０回転のロータリーシェーカー上で３７℃で１６
時間行った。
５７／２−ＧＳＴおよびＵＬ５７／３−Ｇ ＳＴの培養、
発現および精製 ＬＢ／ＡＭＰ培地１５０ｍＬにクローンｐＧＥＸ−３／
ＵＬ５７／１〜３（ＬＢ／ＡＭＰ培地）の寒天平板から
分離したコロニーを植菌した。培養は１ＬのＣＦ内で毎
分１６０回転のロータリーシェーカー上で３７℃で１６
時間行った。
【００６９】培養物３Ｌを各０．５Ｌの並列した６個の
バッチを２Ｌの調整板付ＣＦ内で培養した。培地（ＬＢ
／ＣＡ、ＡＭＰ）は３７℃に予熱した。フラスコに前培
養（１：２６）の２０ｍＬ分割を植菌し、バッチを毎分
１６０回転のロータリーシェーカー中、３７℃でインキ
ュベートした。生長を６００ｎｍの吸収Ａを連続的に測
定して監視した。Ａ（６００ｎｍ）が０．７になった
時、ＩＰＴＧ（最終濃度１ｍＭ）の添加により、誘導を
行った。
バッチを２Ｌの調整板付ＣＦ内で培養した。培地（ＬＢ
／ＣＡ、ＡＭＰ）は３７℃に予熱した。フラスコに前培
養（１：２６）の２０ｍＬ分割を植菌し、バッチを毎分
１６０回転のロータリーシェーカー中、３７℃でインキ
ュベートした。生長を６００ｎｍの吸収Ａを連続的に測
定して監視した。Ａ（６００ｎｍ）が０．７になった
時、ＩＰＴＧ（最終濃度１ｍＭ）の添加により、誘導を
行った。
【００７０】誘導の４時間後、収集を遠心分離（６×１
Ｌビーカー、４０００ｇ、０〜４℃、３０分間）によっ
て行った。排水のよい細菌ペレットを氷冷ＰＢＳ２００
ｍＬに再懸濁し、再び遠心分離（２×２５０ｍＬビーカ
ー、５０００ｇ、０〜４℃、１０分間）した。排水のよ
いペレットを凍結、−２０から−３０℃で保存した。
Ｌビーカー、４０００ｇ、０〜４℃、３０分間）によっ
て行った。排水のよい細菌ペレットを氷冷ＰＢＳ２００
ｍＬに再懸濁し、再び遠心分離（２×２５０ｍＬビーカ
ー、５０００ｇ、０〜４℃、１０分間）した。排水のよ
いペレットを凍結、−２０から−３０℃で保存した。
【００７１】細菌ペレットを解凍した後、これを基本緩
衝液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５）８０ｍＬ
に再懸濁し、ホモゲナイズ（テフロン／ガラスポッター
ホモゲナイザー）した。室温で撹拌しつつ次の添加物を
加えた：ＮＰ−４０（０．１％）、ＰＭＳＦ（０．１ｍ
Ｍ）、ペファブロック（０．１ｍＭ）、ＥＤＴＡ（５０
ｍＭ）およびリゾチーム（１００ｍｇ）。全容積は１０
０ｍＬであった。混合物を室温で激しく撹拌し、６０分
後に氷上に置いた。以後の全工程は氷上または冷却下に
実施した。インキュベーション後、グリセリン（１０
％）および２ーメルカプトエタノール（１４ｍＭ）を添
加し、各成分を混合した。基本緩衝液で容積を１４０ｍ
Ｌとした。溶菌混合物を次に超音波処理（２０ｋＨｚ、
パルス、５分間、３／４”チタンプローブ）し、続いて
機械的ポッター処理（テフロン／ガラスポッターホモゲ
ナイザー、毎分１０００回転、６ストローク）した。ク
ローンｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／１およびｐＧＥＸ／Ｕ
Ｌ５７／２の場合、溶解した物質を遠心分離（１×２５
０ｍＬビーカー、１００００ｇ、１０分間、０〜４℃）
により分離し、廃棄した。
衝液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５）８０ｍＬ
に再懸濁し、ホモゲナイズ（テフロン／ガラスポッター
ホモゲナイザー）した。室温で撹拌しつつ次の添加物を
加えた：ＮＰ−４０（０．１％）、ＰＭＳＦ（０．１ｍ
Ｍ）、ペファブロック（０．１ｍＭ）、ＥＤＴＡ（５０
ｍＭ）およびリゾチーム（１００ｍｇ）。全容積は１０
０ｍＬであった。混合物を室温で激しく撹拌し、６０分
後に氷上に置いた。以後の全工程は氷上または冷却下に
実施した。インキュベーション後、グリセリン（１０
％）および２ーメルカプトエタノール（１４ｍＭ）を添
加し、各成分を混合した。基本緩衝液で容積を１４０ｍ
Ｌとした。溶菌混合物を次に超音波処理（２０ｋＨｚ、
パルス、５分間、３／４”チタンプローブ）し、続いて
機械的ポッター処理（テフロン／ガラスポッターホモゲ
ナイザー、毎分１０００回転、６ストローク）した。ク
ローンｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／１およびｐＧＥＸ／Ｕ
Ｌ５７／２の場合、溶解した物質を遠心分離（１×２５
０ｍＬビーカー、１００００ｇ、１０分間、０〜４℃）
により分離し、廃棄した。
【００７２】クローンｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／３の場
合、非溶解物質を遠心分離（４×５０ｍＬビーカー、４
００００ｇ、３０分間、０〜４℃）で分離し、廃棄し
た。
合、非溶解物質を遠心分離（４×５０ｍＬビーカー、４
００００ｇ、３０分間、０〜４℃）で分離し、廃棄し
た。
【００７３】溶菌後に溶解しなかったクローンｐＧＥＸ
−３／ＵＬ５７／１の物質（ペレット）は洗浄緩衝液１
（トリス−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ９／１０％グリセリ
ン／０．５％ＮＰ−４０／１４ｍＭ−２−メルカプトエ
タノール）５０ｍＬ中で前ホモゲナイズ（テフロン／ガ
ラスポッターホモゲナイザー）し、超音波処理（２０ｋ
Ｈｚ、パルス、５分間、３／４”チタンプローブ）し
た。溶解した物質を遠心分離（２×５０ｍＬビーカー、
３３０００ｇ、２０分間、０〜４℃）で分離し、廃棄し
た。
−３／ＵＬ５７／１の物質（ペレット）は洗浄緩衝液１
（トリス−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ９／１０％グリセリ
ン／０．５％ＮＰ−４０／１４ｍＭ−２−メルカプトエ
タノール）５０ｍＬ中で前ホモゲナイズ（テフロン／ガ
ラスポッターホモゲナイザー）し、超音波処理（２０ｋ
Ｈｚ、パルス、５分間、３／４”チタンプローブ）し
た。溶解した物質を遠心分離（２×５０ｍＬビーカー、
３３０００ｇ、２０分間、０〜４℃）で分離し、廃棄し
た。
【００７４】非溶解物質（ペレット）を洗浄緩衝液２
（グリセリン−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ３／１４ｍＭ−
２−メルカプトエタノール）３０ｍＬで前ホモゲナイズ
（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）し、超音
波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／４”チタン
プローブ）を行った。溶解した物質を遠心分離（１×５
０ｍＬビーカー、４００００ｇ、２０分間、０〜４℃）
で分離し、廃棄した。
（グリセリン−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ３／１４ｍＭ−
２−メルカプトエタノール）３０ｍＬで前ホモゲナイズ
（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）し、超音
波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／４”チタン
プローブ）を行った。溶解した物質を遠心分離（１×５
０ｍＬビーカー、４００００ｇ、２０分間、０〜４℃）
で分離し、廃棄した。
【００７５】非溶解物質（ペレット）を洗浄緩衝液３
（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／４Ｍ−尿素／１４
ｍＭ−２−メルカプトエタノール）３０ｍＬ中で前ホモ
ゲナイズ（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）
し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／
４”チタンプローブ）を実施した。溶解した物質を遠心
分離（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分
間、０〜４℃）で分離し、廃棄した。
（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／４Ｍ−尿素／１４
ｍＭ−２−メルカプトエタノール）３０ｍＬ中で前ホモ
ゲナイズ（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）
し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／
４”チタンプローブ）を実施した。溶解した物質を遠心
分離（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分
間、０〜４℃）で分離し、廃棄した。
【００７６】３回目の洗浄工程後の非溶解物質（ペレッ
ト）を溶解緩衝液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／
８ｍＭ−尿素／１４ｍＭ−２−メルカプトエタノール）
３０ｍＬ中で前ホモゲナイズ（テフロン／ガラスポッタ
ーホモゲナイザー）し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パル
ス、５分間、３／４”チタンプローブ）した。不溶であ
り続けた物質を遠心分離（１×５０ｍＬビーカー、４０
０００ｇ、３０分間、８〜１０℃）で分離し、廃棄し
た。
ト）を溶解緩衝液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／
８ｍＭ−尿素／１４ｍＭ−２−メルカプトエタノール）
３０ｍＬ中で前ホモゲナイズ（テフロン／ガラスポッタ
ーホモゲナイザー）し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パル
ス、５分間、３／４”チタンプローブ）した。不溶であ
り続けた物質を遠心分離（１×５０ｍＬビーカー、４０
０００ｇ、３０分間、８〜１０℃）で分離し、廃棄し
た。
【００７７】溶解した蛋白質をＳＱ−セファロース（Ｈ
ｉＬｏａｄ）上でクロマトグラフした。このためには
１．６×１０ｃｍ（２０ｍＬ）の大きさのカラムを用い
た。Ａ（２８０ｎｍ）と電導度を連続的に記録した。流
速は５ｍＬ／分、カラム緩衝液＝溶解緩衝液。サンプ
ル、続いてカラム緩衝液５０ｍＬを入れた後、カラム緩
衝液中で、最初は緩い直線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ
＝２．５ｍＭ／ｍＬ、５００ｍＭまで）、続いて急な直
線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１０ｍＭ／ｍＬ、１０
００ｍＭまで）を適用した。溶出液を１０ｍＬづつの分
画に分け、凍結した。抗原含有分画は緩い勾配の領域に
見出された。検出はＳＤＳ−ＰＡディスク電気泳動、続
いてクーマシー染色によった。
ｉＬｏａｄ）上でクロマトグラフした。このためには
１．６×１０ｃｍ（２０ｍＬ）の大きさのカラムを用い
た。Ａ（２８０ｎｍ）と電導度を連続的に記録した。流
速は５ｍＬ／分、カラム緩衝液＝溶解緩衝液。サンプ
ル、続いてカラム緩衝液５０ｍＬを入れた後、カラム緩
衝液中で、最初は緩い直線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ
＝２．５ｍＭ／ｍＬ、５００ｍＭまで）、続いて急な直
線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１０ｍＭ／ｍＬ、１０
００ｍＭまで）を適用した。溶出液を１０ｍＬづつの分
画に分け、凍結した。抗原含有分画は緩い勾配の領域に
見出された。検出はＳＤＳ−ＰＡディスク電気泳動、続
いてクーマシー染色によった。
【００７８】純粋な抗原を含むことが証明された（クー
マシーゲル）分画を解凍し、集め、同量の復元緩衝液
（トリス−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ９／１０％グリセリ
ン／１４Ｍ−２−メルカプトエタノール）で希釈（尿素
濃度は４Ｍまで低下）した。以後の工程は全て限外濾過
セル（膜＝オメガ５０）中撹拌しつつ、窒素気中で氷冷
下に実施した。該蛋白質溶液を最初に約３０ｍＬまで濃
縮し、徐々に復元緩衝液で２倍容まで希釈した。各々の
場合に、出発容積の半分までの濃縮と復元緩衝液での容
積比１：１までの希釈を実施した。尿素濃度は次の段階
を経て低下した：４Ｍ−２Ｍ−１Ｍ−０．５Ｍ−０．２
５Ｍ。
マシーゲル）分画を解凍し、集め、同量の復元緩衝液
（トリス−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ９／１０％グリセリ
ン／１４Ｍ−２−メルカプトエタノール）で希釈（尿素
濃度は４Ｍまで低下）した。以後の工程は全て限外濾過
セル（膜＝オメガ５０）中撹拌しつつ、窒素気中で氷冷
下に実施した。該蛋白質溶液を最初に約３０ｍＬまで濃
縮し、徐々に復元緩衝液で２倍容まで希釈した。各々の
場合に、出発容積の半分までの濃縮と復元緩衝液での容
積比１：１までの希釈を実施した。尿素濃度は次の段階
を経て低下した：４Ｍ−２Ｍ−１Ｍ−０．５Ｍ−０．２
５Ｍ。
【００７９】尿素の最終濃度は０．２５Ｍを超えなかっ
た。付着物は室から除き、凍結し、分割して−６０℃か
ら−８０℃で保存した。溶菌後に溶解しなかったクロー
ンｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／２の物質（ペレット）を洗
浄緩衝液１（トリス−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ９／１０
％グリセリン／０．５％ＮＰ−４０／１４ｍＭ−２−メ
ルカプトエタノール）５０ｍＬで前ホモゲナイズ（テフ
ロン／ガラスポッターホモゲナイザー）し、超音波処理
（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／４”チタンプロー
ブ）した。溶解した物質を遠心分離（２×５０ｍＬビー
カー、３３０００ｇ、２０分間、０〜４℃）で分離し、
廃棄した。
た。付着物は室から除き、凍結し、分割して−６０℃か
ら−８０℃で保存した。溶菌後に溶解しなかったクロー
ンｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／２の物質（ペレット）を洗
浄緩衝液１（トリス−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ９／１０
％グリセリン／０．５％ＮＰ−４０／１４ｍＭ−２−メ
ルカプトエタノール）５０ｍＬで前ホモゲナイズ（テフ
ロン／ガラスポッターホモゲナイザー）し、超音波処理
（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／４”チタンプロー
ブ）した。溶解した物質を遠心分離（２×５０ｍＬビー
カー、３３０００ｇ、２０分間、０〜４℃）で分離し、
廃棄した。
【００８０】非溶解物質（ペレット）を洗浄緩衝液２
（グリセリン−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ３／１４ｍＭ−
２−メルカプトエタノール）３０ｍＬで前ホモゲナイズ
（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）し、超音
波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／４”チタン
プローブ）した。溶解した物質を遠心分離（１×５０ｍ
Ｌビーカー、４００００ｇ、２０分間、０〜４℃）で分
離し、廃棄した。
（グリセリン−塩酸／１００ｍＭ／ｐＨ３／１４ｍＭ−
２−メルカプトエタノール）３０ｍＬで前ホモゲナイズ
（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）し、超音
波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／４”チタン
プローブ）した。溶解した物質を遠心分離（１×５０ｍ
Ｌビーカー、４００００ｇ、２０分間、０〜４℃）で分
離し、廃棄した。
【００８１】非溶解物質（ペレット）を洗浄緩衝液３
（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／４Ｍ−尿素／１４
ｍＭ−２−メルカプトエタノール）３０ｍＬで前ホモゲ
ナイズ（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）
し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／
４”チタンプローブ）した。溶解した物質を遠心分離
（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分間、０
〜４℃）で分離し、廃棄した。
（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／４Ｍ−尿素／１４
ｍＭ−２−メルカプトエタノール）３０ｍＬで前ホモゲ
ナイズ（テフロン／ガラスポッターホモゲナイザー）
し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パルス、５分間、３／
４”チタンプローブ）した。溶解した物質を遠心分離
（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分間、０
〜４℃）で分離し、廃棄した。
【００８２】３回目の洗浄工程後の非溶解物質（ペレッ
ト）を溶解緩衝液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／
８ｍＭ−尿素／１４ｍＭ−２−メルカプトエタノール）
３０ｍＬで前ホモゲナイズ（テフロン／ガラスポッター
ホモゲナイザー）し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パル
ス、５分間、３／４”チタンプローブ）した。不溶であ
り続けた物質を遠心分離（１×５０ｍＬビーカー、４０
０００ｇ、３０分間、８〜１０℃）で分離し、廃棄し
た。
ト）を溶解緩衝液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９／
８ｍＭ−尿素／１４ｍＭ−２−メルカプトエタノール）
３０ｍＬで前ホモゲナイズ（テフロン／ガラスポッター
ホモゲナイザー）し、超音波処理（２０ｋＨｚ、パル
ス、５分間、３／４”チタンプローブ）した。不溶であ
り続けた物質を遠心分離（１×５０ｍＬビーカー、４０
０００ｇ、３０分間、８〜１０℃）で分離し、廃棄し
た。
【００８３】溶解した融合蛋白質を復元緩衝液の同容で
希釈（尿素濃度は４Ｍまで低下）した。以後の工程は全
て限外濾過セル（膜＝オメガ５０）中で、窒素気下に、
氷冷、撹拌しつつ実施した。蛋白質溶液を各々最初は出
発容積の半分まで濃縮し、徐々に復元緩衝液で希釈し
た。尿素濃度は次の段階を経て低下した：４Ｍ−２Ｍ−
２Ｍ−０．５Ｍ−０．２５Ｍ。尿素の最終濃度は０．２
５Ｍを超えなかった。付着物は室から除き、凍結し、−
６０℃から−８０℃で分割保存した。
希釈（尿素濃度は４Ｍまで低下）した。以後の工程は全
て限外濾過セル（膜＝オメガ５０）中で、窒素気下に、
氷冷、撹拌しつつ実施した。蛋白質溶液を各々最初は出
発容積の半分まで濃縮し、徐々に復元緩衝液で希釈し
た。尿素濃度は次の段階を経て低下した：４Ｍ−２Ｍ−
２Ｍ−０．５Ｍ−０．２５Ｍ。尿素の最終濃度は０．２
５Ｍを超えなかった。付着物は室から除き、凍結し、−
６０℃から−８０℃で分割保存した。
【００８４】クローンｐＧＥＸ−３／ＵＬ５７／３の溶
解性蛋白質をＧＳＨーセファロース−４Ｂ（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ）上でクロマトグラフした。このため２．６×
１０ｃｍ（５０ｍＬ）の大きさのカラムを用いた。Ａ
（２８０ｎｍ）を連続的に記録した。
解性蛋白質をＧＳＨーセファロース−４Ｂ（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ）上でクロマトグラフした。このため２．６×
１０ｃｍ（５０ｍＬ）の大きさのカラムを用いた。Ａ
（２８０ｎｍ）を連続的に記録した。
【００８５】流速は２ｍＬ／分であった。カラム緩衝液
＝トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５／１．４ｍＭー
メルカプトエタノール。サンプルを入れた後、記録計が
ベースラインに落着くまでカラムをカラム緩衝液で洗浄
した。ＧＳＴ蛋白質は５ｍＭーグルタチオン（ＧＳＨｒ
ｅｄ）のカラム緩衝液の溶液で溶出した。ＧＳＨは使用
直前に溶解した。ＧＳＨ溶出液（吸収極大を記録計に記
録）を集め、凍結し、−６０〜−８０℃で分割保存し
た。
＝トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５／１．４ｍＭー
メルカプトエタノール。サンプルを入れた後、記録計が
ベースラインに落着くまでカラムをカラム緩衝液で洗浄
した。ＧＳＴ蛋白質は５ｍＭーグルタチオン（ＧＳＨｒ
ｅｄ）のカラム緩衝液の溶液で溶出した。ＧＳＨは使用
直前に溶解した。ＧＳＨ溶出液（吸収極大を記録計に記
録）を集め、凍結し、−６０〜−８０℃で分割保存し
た。
【００８６】実施例１３ オートロガス融合蛋白質５２
／３・５７／３の培養、発現と精製 クローンｐＥＴ５ｃ・５２／３・５７／３の平板培養コ
ロニー（ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ）から出発して、培養物
（ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ）１５ｍＬをロータリーシェーカ
ー内でＡ（６００ｎｍ）が１．８〜２．０になるまで３
７℃で培養した。培養物を次にグリセリン（８７％）と
混合して最終濃度を１５％（ｖ／ｖ）とした。培養物を
０．１ｍＬ分割として凍結し、−６０から−８０℃で保
存した。
／３・５７／３の培養、発現と精製 クローンｐＥＴ５ｃ・５２／３・５７／３の平板培養コ
ロニー（ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ）から出発して、培養物
（ＬＢ／ＣＡ、ＡＭＰ）１５ｍＬをロータリーシェーカ
ー内でＡ（６００ｎｍ）が１．８〜２．０になるまで３
７℃で培養した。培養物を次にグリセリン（８７％）と
混合して最終濃度を１５％（ｖ／ｖ）とした。培養物を
０．１ｍＬ分割として凍結し、−６０から−８０℃で保
存した。
【００８７】凍結前培養物１分割を急速解凍し、ＬＢ／
ＣＡ、ＡＭＰ培地１５０ｍＬに注入した。培養は１Ｌ・
ＣＦ内で毎分１００回転のロータリーシェーカー上、２
８℃で１６時間行った。
ＣＡ、ＡＭＰ培地１５０ｍＬに注入した。培養は１Ｌ・
ＣＦ内で毎分１００回転のロータリーシェーカー上、２
８℃で１６時間行った。
【００８８】調整板付２ＬのＣＦ内で並行する各０．５
Ｌのバッチ１２回から培養物６Ｌを得た。培地（ＬＢ／
ＣＡ、ＡＭＰ）は３７℃に予熱した。フラスコに前培養
物１０ｍＬづつを植菌し、毎分１６０回転のロータリー
シェーカー上、３７℃でインキュベートした。生育はＡ
（６００ｎｍ）の測定で連続的に監視した。Ａ（６００
ｎｍ）が０．６になった時、ＩＰＴＧ（最終濃度１ｍ
Ｍ）の添加によって誘導を実施した。
Ｌのバッチ１２回から培養物６Ｌを得た。培地（ＬＢ／
ＣＡ、ＡＭＰ）は３７℃に予熱した。フラスコに前培養
物１０ｍＬづつを植菌し、毎分１６０回転のロータリー
シェーカー上、３７℃でインキュベートした。生育はＡ
（６００ｎｍ）の測定で連続的に監視した。Ａ（６００
ｎｍ）が０．６になった時、ＩＰＴＧ（最終濃度１ｍ
Ｍ）の添加によって誘導を実施した。
【００８９】収集は誘導の３時間後に遠心分離（６×１
Ｌビーカー、４０００ｇ、３０分、０〜４℃）により実
施した。排水のよい細菌ペレットを氷冷ＰＢＳ２００ｍ
Ｌに再懸濁し、再び遠心分離（２×２５０ｍＬビーカ
ー、５０００ｇ、０〜４℃、１０分間）した。排水のよ
い細菌ペレットを凍結し、−２０℃から−３０℃で保存
した。
Ｌビーカー、４０００ｇ、３０分、０〜４℃）により実
施した。排水のよい細菌ペレットを氷冷ＰＢＳ２００ｍ
Ｌに再懸濁し、再び遠心分離（２×２５０ｍＬビーカ
ー、５０００ｇ、０〜４℃、１０分間）した。排水のよ
い細菌ペレットを凍結し、−２０℃から−３０℃で保存
した。
【００９０】凍結した細菌ペレットを解凍し、基本緩衝
液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５）１６０ｍＬ
に再懸濁し、次にテフロン／ガラス／ポッターホモゲナ
イザーでホモゲナイズした。室温で撹拌しながら、次の
添加物を加えた：ＮＰ−４０（０．０５％）、ＰＭＳＦ
（０．２ｍＭ）、ペファブロック（０．２ｍＭ）、ＥＤ
ＴＡ（５０ｍＭ）およびリゾチーム（５０ｍｇ）。全容
は２００ｍＬであった。リゾチーム添加後、混合物を直
ちに氷上に置いた。以下の工程は全て氷上または冷却下
に実施した。インキュベーション後、グリセリン（１０
％）と２−メルカプトエタノール（１４ｍＭ）とを加
え、各成分を混合した。基本緩衝液を加えて容積を２８
０ｍＬとした。溶菌混合物を次に超音波処理（２０ｋＨ
ｚ、パルス、５分間、３／４”チタンプローブ）した。
非溶解物質は遠心分離（２×２５０ｍＬビーカー、２７
０００ｇ、３０分間、０〜４℃）した。ペレットは廃棄
した。
液（トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ７．５）１６０ｍＬ
に再懸濁し、次にテフロン／ガラス／ポッターホモゲナ
イザーでホモゲナイズした。室温で撹拌しながら、次の
添加物を加えた：ＮＰ−４０（０．０５％）、ＰＭＳＦ
（０．２ｍＭ）、ペファブロック（０．２ｍＭ）、ＥＤ
ＴＡ（５０ｍＭ）およびリゾチーム（５０ｍｇ）。全容
は２００ｍＬであった。リゾチーム添加後、混合物を直
ちに氷上に置いた。以下の工程は全て氷上または冷却下
に実施した。インキュベーション後、グリセリン（１０
％）と２−メルカプトエタノール（１４ｍＭ）とを加
え、各成分を混合した。基本緩衝液を加えて容積を２８
０ｍＬとした。溶菌混合物を次に超音波処理（２０ｋＨ
ｚ、パルス、５分間、３／４”チタンプローブ）した。
非溶解物質は遠心分離（２×２５０ｍＬビーカー、２７
０００ｇ、３０分間、０〜４℃）した。ペレットは廃棄
した。
【００９１】上清液を氷浴中で撹拌しながら、これに固
体硫酸アンモニウム微粉末を濃度が３０％飽和になるま
で徐々に添加（１５分間かけて）した。撹拌をさらに１
５分間継続した。混合物を次に遠心分離（２×２５０ｍ
Ｌビーカー、２７０００ｇ、３０分間、０〜４℃）し
た。ペレットは廃棄した。上清液に再び硫酸アンモニウ
ムを添加して４３％飽和の濃度とし、混合物を前記のよ
うにして遠心分離した。上清液は廃棄した。ペレットを
２−メルカプトエタノール（１４ｍＭ）、ペファブロッ
ク（０．１ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加し
たトリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ８．５に再懸濁し、−
２０℃から−３０℃で一夜保存した。
体硫酸アンモニウム微粉末を濃度が３０％飽和になるま
で徐々に添加（１５分間かけて）した。撹拌をさらに１
５分間継続した。混合物を次に遠心分離（２×２５０ｍ
Ｌビーカー、２７０００ｇ、３０分間、０〜４℃）し
た。ペレットは廃棄した。上清液に再び硫酸アンモニウ
ムを添加して４３％飽和の濃度とし、混合物を前記のよ
うにして遠心分離した。上清液は廃棄した。ペレットを
２−メルカプトエタノール（１４ｍＭ）、ペファブロッ
ク（０．１ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加し
たトリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ８．５に再懸濁し、−
２０℃から−３０℃で一夜保存した。
【００９２】硫酸アンモニウム（３０〜４３％）で分画
した蛋白質溶液を解凍し、沈殿した蛋白質を遠心分離
（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分、０〜
４℃）で除去した。上清液をセファデックスＧ−２５
（粗）カラム（容積は少なくとも２００ｍＬ）上で、溶
出液のＡ（２８０ｎｍ）と電導度を測定しながらクロマ
トグラフした。カラム緩衝液＝２−メルカプトエタノー
ル（１．４ｍＭ）、ペファブロック（０．０２ｍＭ）お
よびグリセリン（１０％）を添加したトリス−塩酸／２
０ｍＭ／ｐＨ８．５。溶出液内の蛋白質を全部を集め、
さらに直接にクロマトグラフした。
した蛋白質溶液を解凍し、沈殿した蛋白質を遠心分離
（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分、０〜
４℃）で除去した。上清液をセファデックスＧ−２５
（粗）カラム（容積は少なくとも２００ｍＬ）上で、溶
出液のＡ（２８０ｎｍ）と電導度を測定しながらクロマ
トグラフした。カラム緩衝液＝２−メルカプトエタノー
ル（１．４ｍＭ）、ペファブロック（０．０２ｍＭ）お
よびグリセリン（１０％）を添加したトリス−塩酸／２
０ｍＭ／ｐＨ８．５。溶出液内の蛋白質を全部を集め、
さらに直接にクロマトグラフした。
【００９３】セファデックスＧ−２５の溶出物をＳＰ−
セファロース（急速）クロマトグラフした。これには
２．６×１２ｃｍ（６０ｍＬ）の大きさのカラムを用い
た。Ａ（２８０ｎｍ）および電導度を連続的に記録し
た。流速は５ｍＬ／分であった。カラム緩衝液＝２−メ
ルカプトエタノール（１．４ｍＭ）、ペファブロック
（０．０２ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加し
たトリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ８．５。サンプルの添
加に続いてカラム緩衝液１００ｍＬおよびカラム緩衝液
中の直線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１．２ｍＭ／ｍ
Ｌ、５００ｍＭまで）を適用した。溶出液を１０ｍＬ分
画に分割し、凍結した。抗原含有分画は２００ｍＭ−と
３００ｍＭ−ＮａＣｌの間の範囲にあった。検出はＳＤ
Ｓ−ＰＡディスク電気泳動とそれに続くクーマシー染色
で行った。
セファロース（急速）クロマトグラフした。これには
２．６×１２ｃｍ（６０ｍＬ）の大きさのカラムを用い
た。Ａ（２８０ｎｍ）および電導度を連続的に記録し
た。流速は５ｍＬ／分であった。カラム緩衝液＝２−メ
ルカプトエタノール（１．４ｍＭ）、ペファブロック
（０．０２ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加し
たトリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ８．５。サンプルの添
加に続いてカラム緩衝液１００ｍＬおよびカラム緩衝液
中の直線状ＮａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１．２ｍＭ／ｍ
Ｌ、５００ｍＭまで）を適用した。溶出液を１０ｍＬ分
画に分割し、凍結した。抗原含有分画は２００ｍＭ−と
３００ｍＭ−ＮａＣｌの間の範囲にあった。検出はＳＤ
Ｓ−ＰＡディスク電気泳動とそれに続くクーマシー染色
で行った。
【００９４】無傷の抗原を含むと証明された分画（２
８．８／２７．５ＫＤバンド）（クーマシーゲル）を解
凍し、集め、グリセリンを添加し（２０％）、限外濾過
（撹拌セル、氷浴、膜＝オメガ３０）により濃縮して最
終容積約５ｍＬとした。付着物は室から除き、次にクロ
マトグラフした。
８．８／２７．５ＫＤバンド）（クーマシーゲル）を解
凍し、集め、グリセリンを添加し（２０％）、限外濾過
（撹拌セル、氷浴、膜＝オメガ３０）により濃縮して最
終容積約５ｍＬとした。付着物は室から除き、次にクロ
マトグラフした。
【００９５】濃縮したＳＰ−セファロースのプールをス
ーパーデックス７５（製造級）上でクロマトグラフし
た。ここでは２．６×６０ｃｍ（３００ｍＬ）の大きさ
のハイロードカラムを使用した。Ａ（２８０ｎｍ）およ
び電導度を連続的に記録した。流速は２ｍＬ／分であっ
た。カラム緩衝液＝ＮａＣｌ（０．５Ｍ）、グリセリン
（２０％）、２−メルカプトエタノール（１．４ｍ
Ｍ）、ＥＤＴＡ（１ｍＭ）、ＰＭＳＦ（０．１ｍＭ）お
よびペファブロック（０．０２ｍＭ）を添加した基本緩
衝液。溶出液を５ｍＬ分画に分割し、冷凍した。抗原含
有分画は２番目の吸収極大にあった。検出はＳＤＳ−Ｐ
Ａディスク電気泳動と後続するクーマシー染色で行っ
た。
ーパーデックス７５（製造級）上でクロマトグラフし
た。ここでは２．６×６０ｃｍ（３００ｍＬ）の大きさ
のハイロードカラムを使用した。Ａ（２８０ｎｍ）およ
び電導度を連続的に記録した。流速は２ｍＬ／分であっ
た。カラム緩衝液＝ＮａＣｌ（０．５Ｍ）、グリセリン
（２０％）、２−メルカプトエタノール（１．４ｍ
Ｍ）、ＥＤＴＡ（１ｍＭ）、ＰＭＳＦ（０．１ｍＭ）お
よびペファブロック（０．０２ｍＭ）を添加した基本緩
衝液。溶出液を５ｍＬ分画に分割し、冷凍した。抗原含
有分画は２番目の吸収極大にあった。検出はＳＤＳ−Ｐ
Ａディスク電気泳動と後続するクーマシー染色で行っ
た。
【００９６】無傷で純粋な抗原を含むことが証明された
（クーマシーゲル）分画を解凍し、集め、限外濾過（撹
拌セル、氷浴、膜＝オメガ３０）により濃縮し、最終濃
度少なくとも２ｍｇ／ｍＬとした。付着物は室から除
き、凍結し、−６０℃から−８０℃で適量づつに分割保
存した。
（クーマシーゲル）分画を解凍し、集め、限外濾過（撹
拌セル、氷浴、膜＝オメガ３０）により濃縮し、最終濃
度少なくとも２ｍｇ／ｍＬとした。付着物は室から除
き、凍結し、−６０℃から−８０℃で適量づつに分割保
存した。
【００９７】実施例１４ オートロガス融合蛋白質５２
／３・５７／３・１５０／７／２の培養、 発現および精
製 培養と溶菌はオートロガス融合蛋白質５２／３・５７／
３について記載したものと同様にして実施した。
／３・５７／３・１５０／７／２の培養、 発現および精
製 培養と溶菌はオートロガス融合蛋白質５２／３・５７／
３について記載したものと同様にして実施した。
【００９８】溶菌で得た上清液に氷浴中で撹拌しなが
ら、固体の硫酸アンモニウム微粉末を３０％飽和濃度に
なるまで徐々に添加した（１５分間）。撹拌はさらに１
５分間継続した。混合物を次に遠心分離（２×２５０ｍ
Ｌビーカー、２７０００ｇ、３０分間、０〜４℃）し
た。ペレットは廃棄した。再び硫酸アンモニウムを３８
％飽和濃度になるまで添加し、混合物を前記のようにし
て遠心分離した。上清液は廃棄した。ペレットを２−メ
ルカプトエタノール（１４ｍＭ）、ペファブロック
（０．１ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加した
トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９緩衝液２５ｍＬに再懸
濁し、凍結し、一夜−２０℃から−３０℃で保存した。
ら、固体の硫酸アンモニウム微粉末を３０％飽和濃度に
なるまで徐々に添加した（１５分間）。撹拌はさらに１
５分間継続した。混合物を次に遠心分離（２×２５０ｍ
Ｌビーカー、２７０００ｇ、３０分間、０〜４℃）し
た。ペレットは廃棄した。再び硫酸アンモニウムを３８
％飽和濃度になるまで添加し、混合物を前記のようにし
て遠心分離した。上清液は廃棄した。ペレットを２−メ
ルカプトエタノール（１４ｍＭ）、ペファブロック
（０．１ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加した
トリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９緩衝液２５ｍＬに再懸
濁し、凍結し、一夜−２０℃から−３０℃で保存した。
【００９９】硫酸アンモニウム（３０〜３８％）で分画
した蛋白質溶液を解凍し、沈殿した蛋白質を遠心分離
（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分間、０
〜４℃）した。上清液はセファデックスＧ−２５（粗）
カラム（容積少なくとも２００ｍＬ）でクロマトグラフ
し、溶出液のＡ（２８０ｎｍ）と電導度とを測定した。
カラム緩衝液＝２−メルカプトエタノール（１．４ｍ
Ｍ）、ペファブロック（０．０２ｍＭ）およびグリセリ
ン（１０％）を添加したトリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ
９。溶出液中の全蛋白質を集め、さらに直接クロマトグ
ラフした。
した蛋白質溶液を解凍し、沈殿した蛋白質を遠心分離
（１×５０ｍＬビーカー、４００００ｇ、３０分間、０
〜４℃）した。上清液はセファデックスＧ−２５（粗）
カラム（容積少なくとも２００ｍＬ）でクロマトグラフ
し、溶出液のＡ（２８０ｎｍ）と電導度とを測定した。
カラム緩衝液＝２−メルカプトエタノール（１．４ｍ
Ｍ）、ペファブロック（０．０２ｍＭ）およびグリセリ
ン（１０％）を添加したトリス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ
９。溶出液中の全蛋白質を集め、さらに直接クロマトグ
ラフした。
【０１００】セファデックスＧ−２５溶出液をＳＰ−セ
ファロース（急速）上でクロマトグラフした。これには
２．６×１２ｃｍ（６０ｍＬ）の大きさのカラムを用い
た。Ａ（２８０ｎｍ）と電導度とを連続的に記録した。
流速は５ｍＬ／分であった。カラム緩衝液＝２−メルカ
プトエタノール（１．４ｍＭ）、ペファブロック（０．
０２ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加したトリ
ス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９。サンプル、続いてカラム
緩衝液１００ｍＬの注入後、カラム緩衝液中の直線状Ｎ
ａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１．７ｍＭ／ｍＬ、５００ｍ
Ｍまで）を適用した。溶出液を１０ｍＬ分割に分け、凍
結した。抗原含有分画は１５０ｍＭ−と３００ｍＭ−Ｎ
ａＣｌとの間の範囲にあった。ＳＤＳ−ＰＡディスク電
気泳動に続くクーマシー染色により検出した。
ファロース（急速）上でクロマトグラフした。これには
２．６×１２ｃｍ（６０ｍＬ）の大きさのカラムを用い
た。Ａ（２８０ｎｍ）と電導度とを連続的に記録した。
流速は５ｍＬ／分であった。カラム緩衝液＝２−メルカ
プトエタノール（１．４ｍＭ）、ペファブロック（０．
０２ｍＭ）およびグリセリン（１０％）を添加したトリ
ス−塩酸／２０ｍＭ／ｐＨ９。サンプル、続いてカラム
緩衝液１００ｍＬの注入後、カラム緩衝液中の直線状Ｎ
ａＣｌ勾配（ｄＣ／ｄＶ＝１．７ｍＭ／ｍＬ、５００ｍ
Ｍまで）を適用した。溶出液を１０ｍＬ分割に分け、凍
結した。抗原含有分画は１５０ｍＭ−と３００ｍＭ−Ｎ
ａＣｌとの間の範囲にあった。ＳＤＳ−ＰＡディスク電
気泳動に続くクーマシー染色により検出した。
【０１０１】無傷の抗原（３３ｋＤバンド）（クーマシ
ーゲル）の含有が証明された分画を解凍し、集め、グリ
セリンを添加し（２０％）、限外濾過（撹拌セル、氷
浴、膜＝オメガ３０）で濃縮して最終容積を約５ｍＬと
した。付着物は室から除き、次にクロマトグラフした。
ーゲル）の含有が証明された分画を解凍し、集め、グリ
セリンを添加し（２０％）、限外濾過（撹拌セル、氷
浴、膜＝オメガ３０）で濃縮して最終容積を約５ｍＬと
した。付着物は室から除き、次にクロマトグラフした。
【０１０２】濃縮したセファロースプールをスーパーデ
ックス７５（製造級）上でクロマトグラフした。２．６
×６０ｃｍ（３００ｍＬ）の大きさのハイロードカラム
をここでは使用した。Ａ（２８０ｎｍ）と電導度とを連
続的に記録した。流速は２ｍＬ／分とした。カラム緩衝
液＝ＮａＣｌ（０．５Ｍ）、グリセリン（２０％）、２
−メルカプトエタノール（１．４ｍＭ）、ＥＤＴＡ（１
ｍＭ）、ＰＭＳＦ（０．１ｍＭ）およびペファブロック
（０．０２ｍＭ）を添加した基本緩衝液。溶出液を５ｍ
Ｌ分画に分けて凍結した。抗原含有分画は最初の吸収ピ
ーク（＝最大ピーク）中にあった。ＳＤＳ−ＰＡディス
ク電気泳動に続くクーマシー染色で検出した。
ックス７５（製造級）上でクロマトグラフした。２．６
×６０ｃｍ（３００ｍＬ）の大きさのハイロードカラム
をここでは使用した。Ａ（２８０ｎｍ）と電導度とを連
続的に記録した。流速は２ｍＬ／分とした。カラム緩衝
液＝ＮａＣｌ（０．５Ｍ）、グリセリン（２０％）、２
−メルカプトエタノール（１．４ｍＭ）、ＥＤＴＡ（１
ｍＭ）、ＰＭＳＦ（０．１ｍＭ）およびペファブロック
（０．０２ｍＭ）を添加した基本緩衝液。溶出液を５ｍ
Ｌ分画に分けて凍結した。抗原含有分画は最初の吸収ピ
ーク（＝最大ピーク）中にあった。ＳＤＳ−ＰＡディス
ク電気泳動に続くクーマシー染色で検出した。
【０１０３】無傷で純粋の抗原を含むことが証明された
（クーマシーゲル）分画を解凍し、集め、限外濾過（撹
拌セル、氷浴、膜＝オメガ３０）して最終濃度少なくと
も２ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。付着物は室から除き、凍
結し、−６０℃から−８０℃で分割保存した。
（クーマシーゲル）分画を解凍し、集め、限外濾過（撹
拌セル、氷浴、膜＝オメガ３０）して最終濃度少なくと
も２ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。付着物は室から除き、凍
結し、−６０℃から−８０℃で分割保存した。
【０１０４】実施例１５ 組換え抗原のＥＬＩＳＡ評価 精製組み換え抗原ＵＬ５７／１、ＵＬ５７／３、および
５２／３・ＵＬ５７／３の１００ｎｇづつおよび抗原Ｕ
Ｌ５７／２および５２／３・５７／３・１５０／７／２
の２００ｎｇづつを各々０．０１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．
５の１００μＬづつに溶かし、溶液をマイクロタイター
板（Ｐｏｌｙｃｏｒｂ、Ｎｕｎｃ）の穴に入れ、アース
した湿潤室内で１６時間インキュベートした。子牛血清
を含む第２の被覆溶液１００μＬを添加後、インキュベ
ーションをさらに２時間継続した。プレートを次に空に
し、注意して取出した。プレートを次に実際の検査操作
に使用するか、または真空室で乾燥し、続いて管状フィ
ルムに封入した後、あとで使用するまで−２０℃で保存
した。化学合成ペプチドの被覆は２μｇ／１００μＬで
前記のようにしてＭａｘｉｓｏｒｂ・ＥＬＩＳＡ板（Ｎ
ｕｎｃ）を用いて実施した。実際の検査操作のために
は、ＥＬＩＳＡ板の検査穴を１：２１に希釈した血清１
００μＬで満たし、プラスチックフィルムに密封し、水
浴に浮かべて４０℃で１時間インキュベートした。バイ
オテストＥＬＩＳＡ洗浄液ＩＩで３回洗浄後、ヒトＩｇ
Ｍに対するペルオキシダーゼ標識モノクロナールマウス
抗体（Ｊａｎｓｓｅｎ）と４０℃で３０分間インキュベ
ーションした。改めて洗浄後に、結合した抗体をクロモ
ーゲンとしての１，２−フェニレンジアミンとの呈色反
応により可視化した。各サンプルの吸光度を４９５ｎｍ
（対照：６２０ｎｍ）でのアンソスＨＴＩＩ・ＥＬＩＳ
Ａ測定器上で測定した。０．３またはそれ以上のＯＤ値
全部を陽性の成績と評価した。
５２／３・ＵＬ５７／３の１００ｎｇづつおよび抗原Ｕ
Ｌ５７／２および５２／３・５７／３・１５０／７／２
の２００ｎｇづつを各々０．０１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９．
５の１００μＬづつに溶かし、溶液をマイクロタイター
板（Ｐｏｌｙｃｏｒｂ、Ｎｕｎｃ）の穴に入れ、アース
した湿潤室内で１６時間インキュベートした。子牛血清
を含む第２の被覆溶液１００μＬを添加後、インキュベ
ーションをさらに２時間継続した。プレートを次に空に
し、注意して取出した。プレートを次に実際の検査操作
に使用するか、または真空室で乾燥し、続いて管状フィ
ルムに封入した後、あとで使用するまで−２０℃で保存
した。化学合成ペプチドの被覆は２μｇ／１００μＬで
前記のようにしてＭａｘｉｓｏｒｂ・ＥＬＩＳＡ板（Ｎ
ｕｎｃ）を用いて実施した。実際の検査操作のために
は、ＥＬＩＳＡ板の検査穴を１：２１に希釈した血清１
００μＬで満たし、プラスチックフィルムに密封し、水
浴に浮かべて４０℃で１時間インキュベートした。バイ
オテストＥＬＩＳＡ洗浄液ＩＩで３回洗浄後、ヒトＩｇ
Ｍに対するペルオキシダーゼ標識モノクロナールマウス
抗体（Ｊａｎｓｓｅｎ）と４０℃で３０分間インキュベ
ーションした。改めて洗浄後に、結合した抗体をクロモ
ーゲンとしての１，２−フェニレンジアミンとの呈色反
応により可視化した。各サンプルの吸光度を４９５ｎｍ
（対照：６２０ｎｍ）でのアンソスＨＴＩＩ・ＥＬＩＳ
Ａ測定器上で測定した。０．３またはそれ以上のＯＤ値
全部を陽性の成績と評価した。
【０１０５】このようにして得られた評価の結果を表３
〜５に示す。
〜５に示す。
【０１０６】
【０１０７】配列番号：１ 配列の長さ：４２ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 ＧＡＴＣＣＣＣＴＣＴ ＡＧＡＧＡＣＧＣＴＣ ＡＧＣＧＴＣＴＴＡＣ ＴＧＡ
ＣＧＣＴＧＣＡ ＧＧ ４２
ＣＧＣＴＧＣＡ ＧＧ ４２
【０１０８】配列番号：２ 配列の長さ：４２ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 AATCTCTGCA GCGTCAGTAA GACGCTGAGC GTCTCTAGAG GG 42
【０１０９】配列番号：３ 配列の長さ：７２ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GGTGGTGAAG TTCATGACCT TTCTGCTCTT TTCGCTCCGT CTGGTGTTGG TGCAGCTTCT 60 GGTGTTGGTG GG 72
【０１１０】配列番号：４ 配列の長さ：８０ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 AATCTCCACC AACACCAGAA GCTGCACCAA CACCAGACGG AGCGAAAAGA GCAGAAAGGT 60 CATGAACTTC ACCACCTGCA 80
【０１１１】配列番号：５ 配列の長さ：６１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 TGGTGGTCTG CTTCTTGGTG AATCTGTTGC TGGTAACTCT ATCTGCTTCG GTGTCCCGGG 60 G 61
【０１１２】配列番号：６ 配列の長さ：６７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 AATTCCCCGG GACACCGAAG CAGATAGAGT TACCAGCAAC AGATTCACCA AGAAGCAGAC 60 CACCACC 67
【０１１３】配列番号：７ 配列の長さ：３７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 CCGGGTGAAA CTGGTGGTGG TTGCTTCCTT GTTAACG 37
【０１１４】配列番号：８ 配列の長さ：３７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 AATCTGTTAA CAAGGAAGCA ACCACCACCA GTTTCAC 37
【０１１５】配列番号：９ 配列の長さ：９３ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 AACGCTGGTG AGGACGAAGC TGGTGGTGTT GGTGGTTCTT CTGGTGGTGG TGGTGGTTCT 60 GGTCTTCTTC CGGCTAAACG TTCTCGTCTT TAG 93
【０１１６】配列番号：１０ 配列の長さ：３３ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GGATCCGCAT GCATCACGAC CGCCTGCTGG ACT 33
【０１１７】配列番号：１１ 配列の長さ：２９ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GAATTCTTAG TTGTTGATAC CCGCATATT 29
【０１１８】配列番号：１２ 配列の長さ：３５ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 ＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴ ＧＣＡＴＡＧＣＡＡＧ ＧＡＧＡＴＣＴＡＴＣ ＡＧＴ
ＴＴ ３５
ＴＴ ３５
【０１１９】配列番号：１３ 配列の長さ：２７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 ＧＡＡＴＴＣＴＴＡＣ ＡＡＣＣＧＧＣＴＧＣ ＧＴＴＴＧＧＣ
２７
２７
【０１２０】配列番号：１４ 配列の長さ：３２ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GGATCCGCAT GCATGCGGGT ATCAACAACA GC 32
【０１２１】配列番号：１５ 配列の長さ：２６ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GAATTCGCTG GCGGTTACAA CCGGCT 26
【０１２２】配列番号：１６ 配列の長さ：３４ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GGATCCGCAT GCATGGGGTT CCGGGCGGCG GTGC 34
【０１２３】配列番号：１７ 配列の長さ：３１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GAATTCTCTA GAATTGAGCC GATAGGTACG G 31
【０１２４】配列番号：１８ 配列の長さ：３４ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GGATCCAATC TAGAGACGCC CAGCGATTAA CGGA 34
【０１２５】配列番号：１９ 配列の長さ：２７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GAATTCTATT CCTCCGTGTT CTTAATC 27
【０１２６】配列番号：２０ 配列の長さ：２６ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 CGGATCCTGA AGAGCACGAC GGGCAT 26
【０１２７】配列番号：２１ 配列の長さ：３５ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GGATCCGCAT GCGTGGCAGC CTCTCTTCGC TGGCC 35
【０１２８】配列番号：２２ 配列の長さ：３０ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノム−ＤＮＡ 配列 GAATTCAGAT CTTGCCGCAC TTTTGCTTCT 30
【０１２９】配列番号：２３ 配列の長さ：６０７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Gly Gly Ala Thr Cys Cys Gly Cys Ala Thr Gly Cys Gly Thr Gly Gly 1 5 10 15 Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr Thr Cys Gly Cys Thr Gly 20 25 30 Gly Cys Cys Ala Ala Thr Gly Cys Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys 35 40 45 Thr Gly Cys Ala Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys Gly Gly Cys Cys Cys 50 55 60 Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala Ala Cys Gly Ala Thr 65 70 75 80 Cys Thr Cys Ala Thr Gly Ala Ala Cys Gly Ala Gly Cys Cys Cys Ala 85 90 95 Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys Thr 100 105 110 Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys 115 120 125 Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala Gly Ala Ala Gly Cys 130 135 140 Ala Cys Gly Ala Cys Cys Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly 145 150 155 160 Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Gly Gly Thr Ala Cys Gly 165 170 175 Cys Gly Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Gly Thr Ala Gly Cys Gly 180 185 190 Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Ala 195 200 205 Thr Cys Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Cys Thr Thr 210 215 220 Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Thr 225 230 235 240 Ala Cys Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys Ala Ala Gly Ala Thr 245 250 255 Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Ala Cys Gly 260 265 270 Thr Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Ala Thr Cys Gly Gly 275 280 285 Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly 290 295 300 Ala Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr Gly 305 310 315 320 Gly Ala Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys Thr Cys Cys Gly Gly Cys Ala 325 330 335 Ala Thr Thr Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys Gly Ala Cys Gly Cys 340 345 350 Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala Gly Cys Gly Ala Cys 355 360 365 Ala Gly Cys Gly Ala Gly Gly Ala Thr Thr Cys Thr Gly Thr Ala Ala 370 375 380 Cys Gly Thr Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys Gly Thr Cys Cys Cys 385 390 395 400 Thr Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala Ala Gly Cys Ala Ala 405 410 415 Ala Ala Gly Thr Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys 420 425 430 Thr Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Cys Gly Ala Cys Gly Gly Gly 435 440 445 Cys Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Thr 450 455 460 Thr Thr Cys Gly Ala Cys Cys Thr Ala Thr Cys Gly Thr Cys Gly Cys 465 470 475 480 Cys Cys Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Gly Gly Thr Ala Cys 485 490 495 Gly Gly Gly Gly Cys Cys Gly Cys Ala Ala Cys Cys Gly Gly Gly Thr 500 505 510 Thr Cys Thr Gly Cys Cys Gly Gly Cys Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly 515 520 525 Gly Cys Gly Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Gly Cys Cys Gly Thr Cys 530 535 540 Gly Gly Ala Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Cys Ala Gly Ala Ala Cys 545 550 555 560 Ala Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Ala Gly Ala Thr Cys Gly 565 570 575 Ala Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Cys 580 585 590 Gly Gly Ala Gly Gly Ala Ala Thr Ala Gly Ala Ala Thr Thr Cys 595 600 605
【０１３０】配列番号：２４ 配列の長さ：６０７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ ２０ ２５
３０ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ ８５
９０ ９５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ １００ １０５
１１０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １１５ １２０
１２５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １３０ １３５
１４０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １８０ １８５
１９０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ １９５ ２００
２０５ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ ２１０ ２１５
２２０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ ２４５
２５０ ２５５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ２６０ ２６５
２７０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２７５ ２８０
２８５ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２９０ ２９５
３００ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｃｙｓ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ ３２５
３３０ ３３５ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ３４０ ３４５
３５０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ３５５ ３６０
３６５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ３７０ ３７５
３８０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ４０５
４１０ ４１５ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ４２０ ４２５
４３０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ４３５ ４４０
４４５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ ４５０ ４５５
４６０ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ４６５ ４７０
４７５ ４８０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ４８５
４９０ ４９５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ ５００ ５０５
５１０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５１５ ５２０
５２５ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ ５３０ ５３５
５４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ５４５ ５５０
５５５ ５６０ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ５６５
５７０ ５７５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ５８０ ５８５
５９０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ５９５ ６００
６０５
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ ２０ ２５
３０ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ ８５
９０ ９５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ １００ １０５
１１０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １１５ １２０
１２５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １３０ １３５
１４０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １８０ １８５
１９０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ １９５ ２００
２０５ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ ２１０ ２１５
２２０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ ２４５
２５０ ２５５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ２６０ ２６５
２７０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２７５ ２８０
２８５ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２９０ ２９５
３００ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｃｙｓ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ ３２５
３３０ ３３５ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ３４０ ３４５
３５０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ３５５ ３６０
３６５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ３７０ ３７５
３８０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ４０５
４１０ ４１５ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ４２０ ４２５
４３０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ４３５ ４４０
４４５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ ４５０ ４５５
４６０ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ４６５ ４７０
４７５ ４８０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ４８５
４９０ ４９５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ ５００ ５０５
５１０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５１５ ５２０
５２５ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ ５３０ ５３５
５４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ５４５ ５５０
５５５ ５６０ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ５６５
５７０ ５７５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ５８０ ５８５
５９０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ５９５ ６００
６０５
【０１３１】配列番号：２５ 配列の長さ：１９７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ａｒｇ Ｔｒｐ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｉｌｅ
Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｔｒｐ ２０ ２５
３０ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ａｌａ
Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｌａ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｔｈｒ ３５ ４０
４５ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｖａｌ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ ５０ ５５
６０ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ
Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｓｅｒ ６５ ７０
７５ ８０ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｐｒｏ
Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ ８５
９０ ９５ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｉｌｅ
Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ １００ １０５
１１０ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ １１５ １２０
１２５ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ａｌａ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｒｇ １３０ １３５
１４０ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ
Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｔｒｐ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ １６５
１７０ １７５ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ
Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ａｒｇ １８０ １８５
１９０ Ａｒｇ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ １９５
Ａｒｇ Ｔｒｐ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｖａｌ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｉｌｅ
Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｔｒｐ ２０ ２５
３０ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ａｌａ
Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｌａ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｔｈｒ ３５ ４０
４５ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｖａｌ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ ５０ ５５
６０ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ
Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｓｅｒ ６５ ７０
７５ ８０ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｐｒｏ
Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ ８５
９０ ９５ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ｔｒｐ Ｉｌｅ
Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ １００ １０５
１１０ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ １１５ １２０
１２５ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ａｌａ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｒｇ １３０ １３５
１４０ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ
Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｔｒｐ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ １６５
１７０ １７５ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｒｇ
Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ａｒｇ １８０ １８５
１９０ Ａｒｇ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ １９５
【０１３２】配列番号：２６ 配列の長さ：８３１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ala Thr Gly Gly Cys Thr Ala Gly Cys Ala Thr Gly Ala Cys Thr Gly 1 5 10 15 Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly 20 25 30 Thr Cys Gly Cys Cys Gly Gly Ala Thr Cys Cys Gly Cys Ala Thr Gly 35 40 45 Cys Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr Thr 50 55 60 Cys Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Ala Thr Gly Cys Cys Gly Gly 65 70 75 80 Cys Gly Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys 85 90 95 Gly Gly Cys Cys Cys Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala 100 105 110 Ala Cys Gly Ala Thr Cys Thr Cys Ala Thr Gly Ala Ala Cys Gly Ala 115 120 125 Gly Cys Cys Cys Ala Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Cys Gly Gly Cys 130 135 140 Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly 145 150 155 160 Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala 165 170 175 Gly Ala Ala Gly Cys Ala Cys Gly Ala Cys Cys Gly Cys Gly Gly Thr 180 185 190 Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Gly 195 200 205 Gly Thr Ala Cys Gly Cys Gly Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Gly 210 215 220 Thr Ala Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys 225 230 235 240 Gly Gly Thr Gly Ala Thr Cys Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly 245 250 255 Gly Thr Cys Thr Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala 260 265 270 Ala Ala Ala Ala Thr Ala Cys Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys 275 280 285 Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys 290 295 300 Thr Gly Ala Cys Gly Thr Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly 305 310 315 320 Ala Thr Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Ala 325 330 335 Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly 340 345 350 Gly Thr Thr Thr Gly Gly Ala Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys Thr Cys 355 360 365 Cys Gly Gly Cys Ala Ala Thr Thr Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys 370 375 380 Gly Ala Cys Gly Cys Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala 385 390 395 400 Gly Cys Gly Ala Cys Ala Gly Cys Gly Ala Gly Gly Ala Thr Thr Cys 405 410 415 Thr Gly Thr Ala Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys 420 425 430 Gly Thr Cys Cys Cys Thr Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala 435 440 445 Ala Gly Cys Ala Ala Ala Ala Gly Thr Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala 450 455 460 Gly Ala Thr Cys Cys Gly Cys Ala Thr Gly Cys Ala Thr Gly Gly Gly 465 470 475 480 Gly Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly 485 490 495 Cys Thr Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly 500 505 510 Ala Cys Gly Ala Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Gly Gly Gly 515 520 525 Gly Gly Cys Cys Cys Gly Ala Gly Cys Gly Ala Cys Gly Gly Thr Cys 530 535 540 Thr Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys Gly Thr Gly Gly 545 550 555 560 Thr Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Gly 565 570 575 Gly Ala Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Thr Gly Ala 580 585 590 Thr Gly Gly Gly Gly Cys Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys Gly 595 600 605 Cys Ala Thr Gly Thr Thr Gly Gly Gly Cys Gly Cys Thr Ala Gly Cys 610 615 620 Gly Thr Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Ala Cys Cys Thr Ala Thr Cys 625 630 635 640 Gly Gly Cys Thr Cys Ala Ala Thr Thr Cys Thr Ala Gly Ala Ala Ala 645 650 655 Gly Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys Ala Cys Gly 660 665 670 Ala Cys Gly Gly Gly Cys Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Cys Gly Gly 675 680 685 Thr Gly Gly Cys Thr Thr Thr Cys Gly Ala Cys Cys Thr Ala Thr Cys 690 695 700 Gly Thr Cys Gly Cys Cys Cys Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Gly Cys 705 710 715 720 Gly Gly Thr Ala Cys Gly Gly Gly Gly Cys Cys Gly Cys Ala Ala Cys 725 730 735 Cys Gly Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Cys Cys Gly Gly Cys Ala Thr 740 745 750 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Cys Gly Cys Cys Ala Ala Ala Ala Cys Gly 755 760 765 Cys Cys Gly Thr Cys Gly Gly Ala Cys Gly Cys Cys Gly Thr Gly Cys 770 775 780 Ala Gly Ala Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Ala Ala 785 790 795 800 Gly Ala Thr Cys Gly Ala Gly Ala Ala Gly Ala Thr Thr Ala Ala Gly 805 810 815 Ala Ala Cys Ala Cys Gly Gly Ala Gly Gly Ala Ala Thr Ala Gly 820 825 830
【０１３３】配列番号：２７ 配列の長さ：８３１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２０ ２５
３０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ８５
９０ ９５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ １００ １０５
１１０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ １１５ １２０
１２５ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １３０ １３５
１４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ １６５
１７０ １７５ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ １８０ １８５
１９０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １９５ ２００
２０５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ ２１０ ２１５
２２０ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ２４５
２５０ ２５５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ２６０ ２６５
２７０ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ２７５ ２８０
２８５ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２９０ ２９５
３００ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ３２５
３３０ ３３５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ３４０ ３４５
３５０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ ３５５ ３６０
３６５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ３７０ ３７５
３８０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ４０５
４１０ ４１５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ４２０ ４２５
４３０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ４３５ ４４０
４４５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ４５０ ４５５
４６０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ４６５ ４７０
４７５ ４８０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ ４８５
４９０ ４９５ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５００ ５０５
５１０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５１５ ５２０
５２５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ ５３０ ５３５
５４０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５４５ ５５０
５５５ ５６０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５６５
５７０ ５７５ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ５８０ ５８５
５９０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ５９５ ６００
６０５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ６１０ ６１５
６２０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ ６２５ ６３０
６３５ ６４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ６４５
６５０ ６５５ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ６６０ ６６５
６７０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ６７５ ６８０
６８５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ ６９０ ６９５
７００ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ７０５ ７１０
７１５ ７２０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ７２５
７３０ ７３５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ ７４０ ７４５
７５０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ７５５ ７６０
７６５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ７７０ ７７５
７８０ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ７８５ ７９０
７９５ ８００ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ ８０５
８１０ ８１５ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ ８２０ ８２５
８３０
Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２０ ２５
３０ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ８５
９０ ９５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ １００ １０５
１１０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ １１５ １２０
１２５ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １３０ １３５
１４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ １６５
１７０ １７５ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ １８０ １８５
１９０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １９５ ２００
２０５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ ２１０ ２１５
２２０ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ２４５
２５０ ２５５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ２６０ ２６５
２７０ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ２７５ ２８０
２８５ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２９０ ２９５
３００ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ３２５
３３０ ３３５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ３４０ ３４５
３５０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ ３５５ ３６０
３６５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ３７０ ３７５
３８０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ４０５
４１０ ４１５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ ４２０ ４２５
４３０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ４３５ ４４０
４４５ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ４５０ ４５５
４６０ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ４６５ ４７０
４７５ ４８０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ ４８５
４９０ ４９５ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５００ ５０５
５１０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５１５ ５２０
５２５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ ５３０ ５３５
５４０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５４５ ５５０
５５５ ５６０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ５６５
５７０ ５７５ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ ５８０ ５８５
５９０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ５９５ ６００
６０５ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ６１０ ６１５
６２０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ ６２５ ６３０
６３５ ６４０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ６４５
６５０ ６５５ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ６６０ ６６５
６７０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ６７５ ６８０
６８５ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ ６９０ ６９５
７００ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ７０５ ７１０
７１５ ７２０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ ７２５
７３０ ７３５ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ ７４０ ７４５
７５０ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ７５５ ７６０
７６５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ７７０ ７７５
７８０ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ ７８５ ７９０
７９５ ８００ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｃｙｓ ８０５
８１０ ８１５ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｃｙｓ ８２０ ８２５
８３０
【０１３４】配列番号：２８ 配列の長さ：２７６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ｍｅｔ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｎ
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ ８５
９０ ９５ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １００ １０５
１１０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ １１５ １２０
１２５ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ １３０ １３５
１４０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｇｌｙ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １８０ １８５
１９０ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ １９５ ２００
２０５ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ ２１０ ２１５
２２０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ２４５
２５０ ２５５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ ２６０ ２６５
２７０ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ２７５
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ ８５
９０ ９５ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １００ １０５
１１０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ １１５ １２０
１２５ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ １３０ １３５
１４０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｇｌｙ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １８０ １８５
１９０ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ １９５ ２００
２０５ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ ２１０ ２１５
２２０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ２４５
２５０ ２５５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ ２６０ ２６５
２７０ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ２７５
【０１３５】配列番号：２９ 配列の長さ：６５１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ala Thr Gly Gly Cys Thr Ala Gly Cys Ala Thr Gly Ala Cys Thr Gly 1 5 10 15 Gly Thr Gly Gly Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly 20 25 30 Thr Cys Gly Cys Cys Gly Gly Ala Thr Cys Cys Gly Cys Ala Thr Gly 35 40 45 Cys Gly Thr Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr Thr 50 55 60 Cys Gly Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Ala Thr Gly Cys Cys Gly Gly 65 70 75 80 Cys Gly Gly Thr Cys Thr Gly Cys Ala Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys 85 90 95 Gly Gly Cys Cys Cys Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala 100 105 110 Ala Cys Gly Ala Thr Cys Thr Cys Ala Thr Gly Ala Ala Cys Gly Ala 115 120 125 Gly Cys Cys Cys Ala Thr Gly Gly Gly Thr Cys Thr Cys Gly Gly Cys 130 135 140 Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly 145 150 155 160 Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala 165 170 175 Gly Ala Ala Gly Cys Ala Cys Gly Ala Cys Cys Gly Cys Gly Gly Thr 180 185 190 Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Thr Cys Cys Gly 195 200 205 Gly Thr Ala Cys Gly Cys Gly Gly Ala Ala Ala Ala Thr Gly Ala Gly 210 215 220 Thr Ala Gly Cys Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys 225 230 235 240 Gly Gly Thr Gly Ala Thr Cys Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala Cys Gly 245 250 255 Gly Thr Cys Thr Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Ala Gly Gly Ala 260 265 270 Ala Ala Ala Ala Thr Ala Cys Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys 275 280 285 Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys 290 295 300 Thr Gly Ala Cys Gly Thr Cys Cys Ala Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly 305 310 315 320 Ala Thr Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Ala 325 330 335 Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly 340 345 350 Gly Thr Thr Thr Gly Gly Ala Thr Cys Gly Cys Ala Ala Cys Thr Cys 355 360 365 Cys Gly Gly Cys Ala Ala Thr Thr Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys 370 375 380 Gly Ala Cys Gly Cys Gly Ala Ala Ala Gly Ala Gly Gly Ala Gly Ala 385 390 395 400 Gly Cys Gly Ala Cys Ala Gly Cys Gly Ala Gly Gly Ala Thr Thr Cys 405 410 415 Thr Gly Thr Ala Ala Cys Gly Thr Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys 420 425 430 Gly Thr Cys Cys Cys Thr Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Ala 435 440 445 Ala Gly Cys Ala Ala Ala Ala Gly Thr Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala 450 455 460 Gly Ala Thr Cys Cys Gly Cys Ala Thr Gly Cys Ala Thr Gly Gly Gly 465 470 475 480 Gly Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly 485 490 495 Cys Thr Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly 500 505 510 Ala Cys Gly Ala Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys Gly Gly Gly 515 520 525 Gly Gly Cys Cys Cys Gly Ala Gly Cys Gly Ala Cys Gly Gly Thr Cys 530 535 540 Thr Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys Gly Thr Gly Gly 545 550 555 560 Thr Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Gly 565 570 575 Gly Ala Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala Thr Gly Ala 580 585 590 Thr Gly Gly Gly Gly Cys Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys Gly 595 600 605 Cys Ala Thr Gly Thr Thr Gly Gly Gly Cys Gly Cys Thr Ala Gly Cys 610 615 620 Gly Thr Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Ala Cys Cys Thr Ala Thr Cys 625 630 635 640 Gly Gly Cys Thr Cys Ala Ala Thr Thr Ala Gly 645 650
【０１３６】配列番号：３０ 配列の長さ：８３１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Thr Ala Cys Cys Gly Ala Thr Cys Gly Thr Ala Cys Thr Gly Ala Cys 1 5 10 15 Cys Ala Cys Cys Thr Gly Thr Cys Gly Thr Thr Thr Ala Cys Cys Cys 20 25 30 Ala Gly Cys Gly Gly Cys Cys Thr Ala Gly Gly Cys Gly Thr Ala Cys 35 40 45 Gly Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Gly Gly Ala Gly Ala Gly Ala Ala 50 55 60 Gly Cys Gly Ala Cys Cys Gly Gly Thr Thr Ala Cys Gly Gly Cys Cys 65 70 75 80 Gly Cys Cys Ala Gly Ala Cys Gly Thr Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly 85 90 95 Cys Cys Gly Gly Gly Cys Cys Cys Ala Gly Ala Cys Cys Thr Ala Thr 100 105 110 Thr Gly Cys Thr Ala Gly Ala Gly Thr Ala Cys Thr Thr Gly Cys Thr 115 120 125 Cys Gly Gly Gly Thr Ala Cys Cys Cys Ala Gly Ala Gly Cys Cys Gly 130 135 140 Cys Cys Ala Gly Ala Cys Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys Ala Cys 145 150 155 160 Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Cys Gly Thr Thr 165 170 175 Cys Thr Thr Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Cys Gly Cys Cys Ala 180 185 190 Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Ala Cys Cys Ala Ala Gly Gly Cys 195 200 205 Cys Ala Thr Gly Cys Gly Cys Cys Thr Thr Thr Thr Ala Cys Thr Cys 210 215 220 Ala Thr Cys Gly Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly 225 230 235 240 Cys Cys Ala Cys Thr Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys 245 250 255 Cys Ala Gly Ala Ala Ala Gly Gly Ala Gly Gly Thr Thr Cys Cys Thr 260 265 270 Thr Thr Thr Thr Ala Thr Gly Cys Thr Cys Gly Thr Cys Gly Thr Gly 275 280 285 Thr Thr Cys Thr Ala Gly Thr Gly Gly Thr Cys Gly Ala Thr Gly Gly 290 295 300 Ala Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Thr Thr Thr Cys Cys Ala Cys Cys 305 310 315 320 Thr Ala Gly Cys Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Thr 325 330 335 Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys 340 345 350 Cys Ala Ala Ala Cys Cys Thr Ala Gly Cys Gly Thr Thr Gly Ala Gly 355 360 365 Gly Cys Cys Gly Thr Thr Ala Ala Thr Gly Ala Ala Gly Thr Thr Gly 370 375 380 Cys Thr Gly Cys Gly Cys Thr Thr Thr Cys Thr Cys Cys Thr Cys Thr 385 390 395 400 Cys Gly Cys Thr Gly Thr Cys Gly Cys Thr Cys Cys Thr Ala Ala Gly 405 410 415 Ala Cys Ala Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly Cys Thr Cys Ala Ala Gly 420 425 430 Cys Ala Gly Gly Gly Ala Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Thr Cys Thr 435 440 445 Thr Cys Gly Thr Thr Thr Thr Cys Ala Cys Gly Cys Cys Gly Thr Thr 450 455 460 Cys Thr Ala Gly Gly Cys Gly Thr Ala Cys Gly Thr Ala Cys Cys Cys 465 470 475 480 Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Ala Cys 485 490 495 Gly Ala Cys Cys Gly Cys Cys Cys Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys 500 505 510 Thr Gly Cys Thr Cys Thr Gly Cys Ala Cys Thr Cys Gly Cys Cys Cys 515 520 525 Cys Cys Gly Gly Gly Cys Thr Cys Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly 530 535 540 Ala Cys Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys 545 550 555 560 Ala Cys Cys Ala Cys Cys Cys Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Cys 565 570 575 Cys Thr Ala Ala Gly Gly Cys Cys Cys Cys Cys Thr Thr Ala Cys Thr 580 585 590 Ala Cys Cys Cys Cys Gly Cys Gly Cys Cys Gly Cys Cys Ala Gly Cys 595 600 605 Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Cys Cys Gly Cys Gly Ala Thr Cys Gly 610 615 620 Cys Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Ala Thr Gly Gly Ala Thr Ala Gly 625 630 635 640 Cys Cys Gly Ala Gly Thr Thr Ala Ala Gly Ala Thr Cys Thr Thr Thr 645 650 655 Cys Thr Ala Gly Gly Ala Cys Thr Thr Cys Thr Cys Gly Thr Gly Cys 660 665 670 Thr Gly Cys Cys Cys Gly Thr Ala Cys Thr Thr Thr Thr Gly Cys Cys 675 680 685 Ala Cys Cys Gly Ala Ala Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Thr Ala Gly 690 695 700 Cys Ala Gly Cys Gly Gly Gly Gly Thr Cys Thr Thr Cys Thr Cys Gly 705 710 715 720 Cys Cys Ala Thr Gly Cys Cys Cys Cys Gly Gly Cys Gly Thr Thr Gly 725 730 735 Gly Cys Cys Cys Ala Ala Gly Ala Cys Gly Gly Cys Cys Gly Thr Ala 740 745 750 Cys Cys Cys Cys Cys Cys Gly Cys Gly Gly Thr Thr Thr Thr Gly Cys 755 760 765 Gly Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly Gly Cys Ala Cys Gly 770 775 780 Thr Cys Thr Thr Gly Thr Ala Gly Gly Ala Gly Gly Thr Thr Thr Thr 785 790 795 800 Cys Thr Ala Gly Cys Thr Cys Thr Thr Cys Thr Ala Ala Thr Thr Cys 805 810 815 Thr Thr Gly Thr Gly Cys Cys Thr Cys Cys Thr Thr Ala Thr Cys 820 825 830
【０１３７】配列番号：３１ 配列の長さ：２１６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Met Ala Ser Met Thr Gly Gly Gln Gln Met Gly Arg Arg Ile Arg Met 1 5 10 15 Arg Gly Ser Leu Ser Ser Leu Ala Asn Ala Gly Gly Leu His Asp Asp 20 25 30 Gly Pro Gly Leu Asp Asn Asp Leu Met Asn Glu Pro Met Gly Leu Gly 35 40 45 Gly Leu Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Lys Lys His Asp Arg Gly 50 55 60 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Thr Arg Lys Met Ser Ser Gly Gly Gly Gly 65 70 75 80 Gly Asp His Asp His Gly Leu Ser Ser Lys Glu Lys Tyr Glu Gln His 85 90 95 Lys Ile Thr Ser Tyr Leu Thr Ser Lys Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 100 105 110 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Leu Asp Arg Asn Ser Gly Asn Tyr Phe Asn 115 120 125 Asp Ala Lys Glu Glu Ser Asp Ser Glu Asp Ser Val Thr Phe Glu Phe 130 135 140 Val Pro Asn Thr Lys Lys Gln Lys Cys Gly Lys Ile Arg Met His Gly 145 150 155 160 Val Pro Gly Gly Gly Ala Gly Gly Gly Gly Gly Arg Asp Val Ser Gly 165 170 175 Gly Pro Ser Asp Gly Leu Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Gly Gly Gly 180 185 190 Asp Ser Gly Gly Met Met Gly Arg Gly Gly Arg Met Leu Gly Ala Ser 195 200 205 Val Asp Arg Thr Tyr Arg Leu Asn 210 215
【０１３８】配列番号：３２ 配列の長さ：１７１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Gly Gly Gly Gly Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Cys Gly 1 5 10 15 Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Cys Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly 20 25 30 Thr Gly Gly Ala Cys Gly Ala Gly Ala Cys Gly Thr Gly Ala Gly Cys 35 40 45 Gly Gly Gly Gly Gly Cys Cys Cys Gly Ala Gly Cys Gly Ala Cys Gly 50 55 60 Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys Gly 65 70 75 80 Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Gly Gly Gly Gly Thr Gly Gly Thr 85 90 95 Gly Gly Gly Gly Ala Thr Thr Cys Cys Gly Gly Gly Gly Gly Ala Ala 100 105 110 Thr Gly Ala Thr Gly Gly Gly Gly Cys Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly 115 120 125 Thr Cys Gly Cys Ala Thr Gly Thr Thr Gly Gly Gly Cys Gly Cys Thr 130 135 140 Ala Gly Cys Gly Thr Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Ala Cys Cys Thr 145 150 155 160 Ala Thr Cys Gly Gly Cys Thr Cys Ala Ala Thr 165 170
【０１３９】配列番号：３３ 配列の長さ：１７１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２０ ２５
３０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ５０ ５５
６０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ６５ ７０
７５ ８０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ ８５
９０ ９５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ １００ １０５
１１０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ １１５ １２０
１２５ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ １３０ １３５
１４０ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ａｌａ １６５
１７０
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ １ ５
１０ １５ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ ２０ ２５
３０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｔｈｒ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｃｙｓ
Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ５０ ５５
６０ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ ６５ ７０
７５ ８０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ ８５
９０ ９５ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ １００ １０５
１１０ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ
Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ １１５ １２０
１２５ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｃｙｓ Ａｌａ Ａｌａ
Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ １３０ １３５
１４０ Ｔｈｒ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ａｌａ １６５
１７０
【０１４０】配列番号：３４ 配列の長さ：５７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク フラグメント型：内部 配列 Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ５０ ５５
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ５０ ５５
【図１】 ５２／３｜１０５／７／２と命名したオート
ロガス融合蛋白質をクローニングするために用いたポリ
メラーゼ鎖反応のためのプライマーを示す。
ロガス融合蛋白質をクローニングするために用いたポリ
メラーゼ鎖反応のためのプライマーを示す。
【図２】 実施例１に記載した構造の全ＤＮＡ配列およ
びそれから得られた対応する融合蛋白質のアミノ酸配列
を示す。
びそれから得られた対応する融合蛋白質のアミノ酸配列
を示す。
【図３】 実施例１に記載した構造の全ＤＮＡ配列およ
びそれから得られた対応する融合蛋白質のアミノ酸配列
を示す。
びそれから得られた対応する融合蛋白質のアミノ酸配列
を示す。
【図４】 実施例１に記載した構造の全ＤＮＡ配列およ
びそれから得られた対応する融合蛋白質のアミノ酸配列
を示す。
びそれから得られた対応する融合蛋白質のアミノ酸配列
を示す。
【図５】 ＳＤＳポリアクリルアミドゲルの電気泳動の
写真であり、組換え融合蛋白質５２／３｜１０５／７／
２の発現および精製を示す。
写真であり、組換え融合蛋白質５２／３｜１０５／７／
２の発現および精製を示す。
【図６】 患者二人（上図および下図）のＩｇＭ経過を
示し、一例ではｐｐ１５０のＣ端断片（アミノ酸８６２
〜１０４８）、他例ではｐ５２のＣ端断片（アミノ酸２
９７〜４３３）をＩｇＭ・ＥＬＩＳＡで用いた。さらに
本発明による融合蛋白５２／３｜１０５／７／２を用い
た。ＡＧと記す陰付棒グラフは他の方法で見出された抗
原血の値を示す。急性感染症はこの時点で観察される。
図４は、この発明による融合蛋白質を用いれば、例えば
断片５２／３単独では不可能な、はっきりとしないＩｇ
Ｍが検出できることを明らかに示す。
示し、一例ではｐｐ１５０のＣ端断片（アミノ酸８６２
〜１０４８）、他例ではｐ５２のＣ端断片（アミノ酸２
９７〜４３３）をＩｇＭ・ＥＬＩＳＡで用いた。さらに
本発明による融合蛋白５２／３｜１０５／７／２を用い
た。ＡＧと記す陰付棒グラフは他の方法で見出された抗
原血の値を示す。急性感染症はこの時点で観察される。
図４は、この発明による融合蛋白質を用いれば、例えば
断片５２／３単独では不可能な、はっきりとしないＩｇ
Ｍが検出できることを明らかに示す。
【図７】 種々の組換え抗原のＩｇＭ反応性を、一方で
は血清学的陰性の健康な血液提供者の血清と、他方では
血清学的陽性の健康な血液提供者の血清とを比較した表
１を示す。テグメント蛋白質ｐｐ１５０（アミノ酸８６
２〜１０４８＝１５０／７）に由来する断片部分は高い
ＩｇＭ反応性を持つが、これは明らかに病気とは無関係
である。この発明に従う融合蛋白質（５２／３｜１０５
／７／２）を用いる時には、ＩｇＭ陽性血清はかなり減
少する。
は血清学的陰性の健康な血液提供者の血清と、他方では
血清学的陽性の健康な血液提供者の血清とを比較した表
１を示す。テグメント蛋白質ｐｐ１５０（アミノ酸８６
２〜１０４８＝１５０／７）に由来する断片部分は高い
ＩｇＭ反応性を持つが、これは明らかに病気とは無関係
である。この発明に従う融合蛋白質（５２／３｜１０５
／７／２）を用いる時には、ＩｇＭ陽性血清はかなり減
少する。
【図８】 表２における、急性ＨＣＭＶ感染症に罹患し
た種々の免疫応答性患者の血清でのＩｇＭ・ＥＬＩＳＡ
におけるＯＤ値を示す。組換え抗原ｐ５２／３と比べ
て、この発明の融合蛋白質は明瞭に改善された感度を示
す。
た種々の免疫応答性患者の血清でのＩｇＭ・ＥＬＩＳＡ
におけるＯＤ値を示す。組換え抗原ｐ５２／３と比べ
て、この発明の融合蛋白質は明瞭に改善された感度を示
す。
【図９】 種々の断片をクローニングするために用いた
ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）のためのプライマーおよ
びオリゴヌクレオチドを示す。
ポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）のためのプライマーおよ
びオリゴヌクレオチドを示す。
【図１０】 種々の断片をクローニングするために用い
たポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）のためのプライマーお
よびオリゴヌクレオチドを示す。
たポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）のためのプライマーお
よびオリゴヌクレオチドを示す。
【図１１】 ＵＬ５７／３と命名された読み枠ＵＬ５７
からのこの発明のＤＮＡ配列および得られるペプチドの
アミノ酸配列を示す。
からのこの発明のＤＮＡ配列および得られるペプチドの
アミノ酸配列を示す。
【図１２】 ５２／３・５７／３と略称されたオートロ
ガス融合蛋白質のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配列を
示す。この融合蛋白質の別の部分はヒトサイトメガロウ
イルスの抗原性蛋白質ｐ５２に由来する。
ガス融合蛋白質のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配列を
示す。この融合蛋白質の別の部分はヒトサイトメガロウ
イルスの抗原性蛋白質ｐ５２に由来する。
【図１３】 ５２／３・５７／３と略称されたオートロ
ガス融合蛋白質のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配列を
示す。この融合蛋白質の別の部分はヒトサイトメガロウ
イルスの抗原性蛋白質ｐ５２に由来する。
ガス融合蛋白質のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配列を
示す。この融合蛋白質の別の部分はヒトサイトメガロウ
イルスの抗原性蛋白質ｐ５２に由来する。
【図１４】 ５２／３・５７／３と略称されたオートロ
ガス融合蛋白質のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配列を
示す。この融合蛋白質の別の部分はヒトサイトメガロウ
イルスの抗原性蛋白質ｐ５２に由来する。
ガス融合蛋白質のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配列を
示す。この融合蛋白質の別の部分はヒトサイトメガロウ
イルスの抗原性蛋白質ｐ５２に由来する。
【図１５】 オートロガス融合蛋白質５２／３・５７／
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
【図１６】 オートロガス融合蛋白質５２／３・５７／
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
【図１７】 オートロガス融合蛋白質５２／３・５７／
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
【図１８】 オートロガス融合蛋白質５２／３・５７／
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
３・１５０／７／２のＤＮＡおよび得られるアミノ酸配
列を示す。この発明に従うペプチドの配列に加え、この
融合蛋白質は各々の場合に抗原性蛋白質ｐ５２およびテ
グメント蛋白質ｐｐ１５０の一部を含む。
【図１９】 表３における急性ＨＣＭＶ感染症を持つ免
疫応答性個体の種々の血清とのＩｇＭ反応性を示す。患
者の血清は機能している免疫系および急性ＨＣＭＶ感染
症を持つ患者のものである。
疫応答性個体の種々の血清とのＩｇＭ反応性を示す。患
者の血清は機能している免疫系および急性ＨＣＭＶ感染
症を持つ患者のものである。
【図２０】 表４における急性ＨＣＭＶ原発性感染症を
持つ移植患者の血清とのＩｇＭ反応性を示す。移植患者
では通常、移植に関連して免疫抑制剤を定期的に投与す
るので完全に機能している免疫系は持っていない。
持つ移植患者の血清とのＩｇＭ反応性を示す。移植患者
では通常、移植に関連して免疫抑制剤を定期的に投与す
るので完全に機能している免疫系は持っていない。
【図２１】 表５において、一方ではＣＭＶ血清学的陽
性、および他方ではＣＭＶ血清学的陰性に分類された健
康な血液提供者の血清と組換え抗原のＩｇＭ反応性を示
す。血清学的陽性と陰性との区別はＩｇＧ抗体の測定に
よって行った。この発明に従うペプチドおよび融合蛋白
質によると、実際上誤陽性の結果が得られない点が優れ
ている。
性、および他方ではＣＭＶ血清学的陰性に分類された健
康な血液提供者の血清と組換え抗原のＩｇＭ反応性を示
す。血清学的陽性と陰性との区別はＩｇＧ抗体の測定に
よって行った。この発明に従うペプチドおよび融合蛋白
質によると、実際上誤陽性の結果が得られない点が優れ
ている。
【図２２】 表６において、この発明に従う抗原の概略
的特性を示す。ここに略号ＧＳＴは融合蛋白質の他の成
分がグルタチオン・Ｓトランスフェラーゼから由来する
ことを示す。略号Ｐは化学的に合成されたペプチドであ
ることを意味する。
的特性を示す。ここに略号ＧＳＴは融合蛋白質の他の成
分がグルタチオン・Ｓトランスフェラーゼから由来する
ことを示す。略号Ｐは化学的に合成されたペプチドであ
ることを意味する。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年１０月２３日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１０７】配列番号：１ 配列の長さ：５７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部 配列 Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ５０ ５５
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ５０ ５５
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１０８】配列番号：２ 配列の長さ：２７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＡＡＴＴＣＴＡＴＴ ＣＣＴＣＣＧＴＧＴＴ ＣＴＴＡＡＴＣ
２７
２７
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０９
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１０９】配列番号：３ 配列の長さ：２６ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＣＧＧＡＴＣＣＴＧＡ ＡＧＡＧＣＡＣＧＡＣ ＧＧＧＣＡＴ
２６
２６
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１０】配列番号：４ 配列の長さ：３５ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴ ＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣ ＣＴＣＴＣＴＴＣＧＣ ＴＧＧ
ＣＣ ３５
ＣＣ ３５
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１１】配列番号：５ 配列の長さ：３０ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＡＡＴＴＣＡＧＡＴ ＣＴＴＧＣＣＧＣＡＣ ＴＴＴＴＧＣＴＴＣＴ
３０
３０
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１２
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１２】配列番号：６ 配列の長さ：６０７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴ ＧＣＧＴＧＧＣＡＧＣ ＣＴＣＴＣＴＴＣＧＣ ＴＧＧ
ＣＣＡＡＴＧＣ ＣＧＧＣＧＧＴＣＴＧ ＣＡＴＧＡＣＧＡＣＧ ６０ ＧＣＣＣＧＧＧＴＣＴ ＧＧＡＴＡＡＣＧＡＴ ＣＴＣＡＴＧＡＡＣＧ ＡＧＣ
ＣＣＡＴＧＧＧ ＴＣＴＣＧＧＣＧＧＴ ＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧ １２０ ＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧ ＴＧＧＣＧＧＣＡＡＧ ＡＡＧＣＡＣＧＡＣＣ ＧＣＧ
ＧＴＧＧＣＧＧ ＣＧＧＴＧＧＴＴＣＣ ＧＧＴＡＣＧＣＧＧＡ １８０ ＡＡＡＴＧＡＧＴＡＧ ＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣ ＧＧＣＧＧＴＧＡＴＣ ＡＴＧ
ＡＣＣＡＣＧＧ ＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣ ＡＡＧＧＡＡＡＡＡＴ ２４０ ＡＣＧＡＧＣＡＧＣＡ ＣＡＡＧＡＴＣＡＣＣ ＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡ ＣＧＴ
ＣＣＡＡＡＧＧ ＴＧＧＡＴＣＧＧＧＣ ＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧ ３００ ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧ ＣＧＧＣＧＧＴＴＴＧ ＧＡＴＣＧＣＡＡＣＴ ＣＣＧ
ＧＣＡＡＴＴＡ ＣＴＴＣＡＡＣＧＡＣ ＧＣＧＡＡＡＧＡＧＧ ３６０ ＡＧＡＧＣＧＡＣＡＧ ＣＧＡＧＧＡＴＴＣＴ ＧＴＡＡＣＧＴＴＣＧ ＡＧＴ
ＴＣＧＴＣＣＣ ＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧ ＡＡＧＣＡＡＡＡＧＴ ４２０ ＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴ ＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣ ＡＣＧＡＣＧＧＧＣＡ ＴＧＡ
ＡＡＡＣＧＧＴ ＧＧＣＴＴＴＣＧＡＣ ＣＴＡＴＣＧＴＣＧＣ ４８０ ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧ ＣＧＧＴＡＣＧＧＧＧ ＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧ ＧＴＴ
ＣＴＧＣＣＧＧ ＣＡＴＧＧＧＧＧＧＣ ＧＣＣＡＡＡＡＣＧＣ ５４０ ＣＧＴＣＧＧＡＣＧＣ ＣＧＴＧＣＡＧＡＡＣ ＡＴＣＣＴＣＣＡＡＡ ＡＧＡ
ＴＣＧＡＧＡＡ ＧＡＴＴＡＡＧＡＡＣ ＡＣＧＧＡＧＧＡＡＴ ６００ ＡＧＡＡＴＴＣ
６０７
ＣＣＡＡＴＧＣ ＣＧＧＣＧＧＴＣＴＧ ＣＡＴＧＡＣＧＡＣＧ ６０ ＧＣＣＣＧＧＧＴＣＴ ＧＧＡＴＡＡＣＧＡＴ ＣＴＣＡＴＧＡＡＣＧ ＡＧＣ
ＣＣＡＴＧＧＧ ＴＣＴＣＧＧＣＧＧＴ ＣＴＧＧＧＡＧＧＡＧ １２０ ＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧ ＴＧＧＣＧＧＣＡＡＧ ＡＡＧＣＡＣＧＡＣＣ ＧＣＧ
ＧＴＧＧＣＧＧ ＣＧＧＴＧＧＴＴＣＣ ＧＧＴＡＣＧＣＧＧＡ １８０ ＡＡＡＴＧＡＧＴＡＧ ＣＧＧＴＧＧＣＧＧＣ ＧＧＣＧＧＴＧＡＴＣ ＡＴＧ
ＡＣＣＡＣＧＧ ＴＣＴＴＴＣＣＴＣＣ ＡＡＧＧＡＡＡＡＡＴ ２４０ ＡＣＧＡＧＣＡＧＣＡ ＣＡＡＧＡＴＣＡＣＣ ＡＧＣＴＡＣＣＴＧＡ ＣＧＴ
ＣＣＡＡＡＧＧ ＴＧＧＡＴＣＧＧＧＣ ＧＧＣＧＧＣＧＧＡＧ ３００ ＧＡＧＧＡＧＧＡＧＧ ＣＧＧＣＧＧＴＴＴＧ ＧＡＴＣＧＣＡＡＣＴ ＣＣＧ
ＧＣＡＡＴＴＡ ＣＴＴＣＡＡＣＧＡＣ ＧＣＧＡＡＡＧＡＧＧ ３６０ ＡＧＡＧＣＧＡＣＡＧ ＣＧＡＧＧＡＴＴＣＴ ＧＴＡＡＣＧＴＴＣＧ ＡＧＴ
ＴＣＧＴＣＣＣ ＴＡＡＣＡＣＣＡＡＧ ＡＡＧＣＡＡＡＡＧＴ ４２０ ＧＣＧＧＣＡＡＧＡＴ ＣＣＴＧＡＡＧＡＧＣ ＡＣＧＡＣＧＧＧＣＡ ＴＧＡ
ＡＡＡＣＧＧＴ ＧＧＣＴＴＴＣＧＡＣ ＣＴＡＴＣＧＴＣＧＣ ４８０ ＣＣＣＡＧＡＡＧＡＧ ＣＧＧＴＡＣＧＧＧＧ ＣＣＧＣＡＡＣＣＧＧ ＧＴＴ
ＣＴＧＣＣＧＧ ＣＡＴＧＧＧＧＧＧＣ ＧＣＣＡＡＡＡＣＧＣ ５４０ ＣＧＴＣＧＧＡＣＧＣ ＣＧＴＧＣＡＧＡＡＣ ＡＴＣＣＴＣＣＡＡＡ ＡＧＡ
ＴＣＧＡＧＡＡ ＧＡＴＴＡＡＧＡＡＣ ＡＣＧＧＡＧＧＡＡＴ ６００ ＡＧＡＡＴＴＣ
６０７
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１３】配列番号：７ 配列の長さ：６０７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＣＣＴＡＧＧＣＧＴＡ ＣＧＣＡＣＣＧＴＣＧ ＧＡＧＡＧＡＡＧＣＧ ＡＣＣ
ＧＧＴＴＡＣＧ ＧＣＣＧＣＣＡＧＡＣ ＧＴＡＣＴＧＣＴＧＣ ６０ ＣＧＧＧＣＣＣＡＧＡ ＣＣＴＡＴＴＧＣＴＡ ＧＡＧＴＡＣＴＴＧＣ ＴＣＧ
ＧＧＴＡＣＣＣ ＡＧＡＧＣＣＧＣＣＡ ＧＡＣＣＣＴＣＣＴＣ １２０ ＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣ ＡＣＣＧＣＣＧＴＴＣ ＴＴＣＧＴＧＣＴＧＧ ＣＧＣ
ＣＡＣＣＧＣＣ ＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧ ＣＣＡＴＧＣＧＣＣＴ １８０ ＴＴＴＡＣＴＣＡＴＣ ＧＣＣＡＣＣＧＣＣＧ ＣＣＧＣＣＡＣＴＡＧ ＴＡＣ
ＴＧＧＴＧＣＣ ＡＧＡＡＡＧＧＡＧＧ ＴＴＣＣＴＴＴＴＴＡ ２４０ ＴＧＣＴＣＧＴＣＧＴ ＧＴＴＣＴＡＧＴＧＧ ＴＣＧＡＴＧＧＡＣＴ ＧＣＡ
ＧＧＴＴＴＣＣ ＡＣＣＴＡＧＣＣＣＧ ＣＣＧＣＣＧＣＣＴＣ ３００ ＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣ ＧＣＣＧＣＣＡＡＡＣ ＣＴＡＧＣＧＴＴＧＡ ＧＧＣ
ＣＧＴＴＡＡＴ ＧＡＡＧＴＴＧＣＴＧ ＣＧＣＴＴＴＣＴＣＣ ３６０ ＴＣＴＣＧＣＴＧＴＣ ＧＣＴＣＣＴＡＡＧＡ ＣＡＴＴＧＣＡＡＧＣ ＴＣＡ
ＡＧＣＡＧＧＧ ＡＴＴＧＴＧＧＴＴＣ ＴＴＣＧＴＴＴＴＣＡ ４２０ ＣＧＣＣＧＴＴＣＴＡ ＧＧＡＣＴＴＣＴＣＧ ＴＧＣＴＧＣＣＣＧＴ ＡＣＴ
ＴＴＴＧＣＣＡ ＣＣＧＡＡＡＧＣＴＧ ＧＡＴＡＧＣＡＧＣＧ ４８０ ＧＧＧＴＣＴＴＣＴＣ ＧＣＣＡＴＧＣＣＣＣ ＧＧＣＧＴＴＧＧＣＣ ＣＡＡ
ＧＡＣＧＧＣＣ ＧＴＡＣＣＣＣＣＣＧ ＣＧＧＴＴＴＴＧＣＧ ５４０ ＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧ ＧＣＡＣＧＴＣＴＴＧ ＴＡＧＧＡＧＧＴＴＴ ＴＣＴ
ＡＧＣＴＣＴＴ ＣＴＡＡＴＴＣＴＴＧ ＴＧＣＣＴＣＣＴＴＡ ６００ ＴＣＴＴＡＡＧ
６０７
ＧＧＴＴＡＣＧ ＧＣＣＧＣＣＡＧＡＣ ＧＴＡＣＴＧＣＴＧＣ ６０ ＣＧＧＧＣＣＣＡＧＡ ＣＣＴＡＴＴＧＣＴＡ ＧＡＧＴＡＣＴＴＧＣ ＴＣＧ
ＧＧＴＡＣＣＣ ＡＧＡＧＣＣＧＣＣＡ ＧＡＣＣＣＴＣＣＴＣ １２０ ＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣ ＡＣＣＧＣＣＧＴＴＣ ＴＴＣＧＴＧＣＴＧＧ ＣＧＣ
ＣＡＣＣＧＣＣ ＧＣＣＡＣＣＡＡＧＧ ＣＣＡＴＧＣＧＣＣＴ １８０ ＴＴＴＡＣＴＣＡＴＣ ＧＣＣＡＣＣＧＣＣＧ ＣＣＧＣＣＡＣＴＡＧ ＴＡＣ
ＴＧＧＴＧＣＣ ＡＧＡＡＡＧＧＡＧＧ ＴＴＣＣＴＴＴＴＴＡ ２４０ ＴＧＣＴＣＧＴＣＧＴ ＧＴＴＣＴＡＧＴＧＧ ＴＣＧＡＴＧＧＡＣＴ ＧＣＡ
ＧＧＴＴＴＣＣ ＡＣＣＴＡＧＣＣＣＧ ＣＣＧＣＣＧＣＣＴＣ ３００ ＣＴＣＣＴＣＣＴＣＣ ＧＣＣＧＣＣＡＡＡＣ ＣＴＡＧＣＧＴＴＧＡ ＧＧＣ
ＣＧＴＴＡＡＴ ＧＡＡＧＴＴＧＣＴＧ ＣＧＣＴＴＴＣＴＣＣ ３６０ ＴＣＴＣＧＣＴＧＴＣ ＧＣＴＣＣＴＡＡＧＡ ＣＡＴＴＧＣＡＡＧＣ ＴＣＡ
ＡＧＣＡＧＧＧ ＡＴＴＧＴＧＧＴＴＣ ＴＴＣＧＴＴＴＴＣＡ ４２０ ＣＧＣＣＧＴＴＣＴＡ ＧＧＡＣＴＴＣＴＣＧ ＴＧＣＴＧＣＣＣＧＴ ＡＣＴ
ＴＴＴＧＣＣＡ ＣＣＧＡＡＡＧＣＴＧ ＧＡＴＡＧＣＡＧＣＧ ４８０ ＧＧＧＴＣＴＴＣＴＣ ＧＣＣＡＴＧＣＣＣＣ ＧＧＣＧＴＴＧＧＣＣ ＣＡＡ
ＧＡＣＧＧＣＣ ＧＴＡＣＣＣＣＣＣＧ ＣＧＧＴＴＴＴＧＣＧ ５４０ ＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧ ＧＣＡＣＧＴＣＴＴＧ ＴＡＧＧＡＧＧＴＴＴ ＴＣＴ
ＡＧＣＴＣＴＴ ＣＴＡＡＴＴＣＴＴＧ ＴＧＣＣＴＣＣＴＴＡ ６００ ＴＣＴＴＡＡＧ
６０７
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１４
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１４】配列番号：８ 配列の長さ：１９９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：タンパク質 フラグメント型：中間部 配列 Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ １ ５
１０ １５ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ ３５ ４０
４５ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ ８５
９０ ９５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ １００ １０５
１１０ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ １１５ １２０
１２５ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ １３０ １３５
１４０ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ
Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ
Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｎ
Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ １８０ １８５
１９０ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ １９５
Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ １ ５
１０ １５ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ ３５ ４０
４５ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ ８５
９０ ９５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ １００ １０５
１１０ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ １１５ １２０
１２５ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ １３０ １３５
１４０ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ
Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ
Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｎ
Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ １８０ １８５
１９０ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ １９５
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１５】配列番号：９ 配列の長さ：３３ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴ ＧＣＡＴＣＡＣＧＡＣ ＣＧＣＣＴＧＣＴＧＧ ＡＣＴ
３３
３３
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１６
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１６】配列番号：１０ 配列の長さ：２９ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＡＡＴＴＣＴＴＡＧ ＴＴＧＴＴＧＡＴＡＣ ＣＣＧＣＡＴＡＴＴ
２９
２９
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１７】配列番号：１１ 配列の長さ：３４ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＧＡＴＣＣＧＣＡＴ ＧＣＡＴＧＧＧＧＴＴ ＣＣＧＧＧＣＧＧＣＧ ＧＴＧ
Ｃ ３４
Ｃ ３４
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１８】配列番号：１２ 配列の長さ：３１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＡＡＴＴＣＴＣＴＡ ＧＡＡＴＴＧＡＧＣＣ ＧＡＴＡＧＧＴＡＣＧ Ｇ
３１
３１
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１９
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１１９】配列番号：１３ 配列の長さ：４２ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＡＴＣＣＣＣＴＣＴ ＡＧＡＧＡＣＧＣＴＣ ＡＧＣＧＴＣＴＴＡＣ ＴＧＡ
ＣＧＣＴＧＣＡ ＧＧ ４２
ＣＧＣＴＧＣＡ ＧＧ ４２
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２０
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２０】配列番号：１４ 配列の長さ：４２ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＡＡＴＣＴＣＴＧＣＡ ＧＣＧＴＣＡＧＴＡＡ ＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣ ＧＴＣ
ＴＣＴＡＧＡＧ ＧＧ ４２
ＴＣＴＡＧＡＧ ＧＧ ４２
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２１
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２１】配列番号：１５ 配列の長さ：７２ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＧＧＴＧＧＴＧＡＡＧ ＴＴＣＡＴＧＡＣＣＴ ＴＴＣＴＧＣＴＣＴＴ ＴＴＣ
ＧＣＴＣＣＧＴ ＣＴＧＧＴＧＴＴＧＧ ＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴ ６０ ＧＧＴＧＴＴＧＧＴＧ ＧＧ
７２
ＧＣＴＣＣＧＴ ＣＴＧＧＴＧＴＴＧＧ ＴＧＣＡＧＣＴＴＣＴ ６０ ＧＧＴＧＴＴＧＧＴＧ ＧＧ
７２
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２２】配列番号：１６ 配列の長さ：８０ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＡＡＴＣＴＣＣＡＣＣ ＡＡＣＡＣＣＡＧＡＡ ＧＣＴＧＣＡＣＣＡＡ ＣＡＣ
ＣＡＧＡＣＧＧ ＡＧＣＧＡＡＡＡＧＡ ＧＣＡＧＡＡＡＧＧＴ ６０ ＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣ ＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡ
８０
ＣＡＧＡＣＧＧ ＡＧＣＧＡＡＡＡＧＡ ＧＣＡＧＡＡＡＧＧＴ ６０ ＣＡＴＧＡＡＣＴＴＣ ＡＣＣＡＣＣＴＧＣＡ
８０
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２３】配列番号：１７ 配列の長さ：６１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＴＧＧＴＧＧＴＣＴＧ ＣＴＴＣＴＴＧＧＴＧ ＡＡＴＣＴＧＴＴＧＣ ＴＧＧ
ＴＡＡＣＴＣＴ ＡＴＣＴＧＣＴＴＣＧ ＧＴＧＴＣＣＣＧＧＧ ６０ Ｇ
６１
ＴＡＡＣＴＣＴ ＡＴＣＴＧＣＴＴＣＧ ＧＴＧＴＣＣＣＧＧＧ ６０ Ｇ
６１
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２４
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２４】配列番号：１８ 配列の長さ：６７ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：プライマーＤＮＡ 配列 ＡＡＴＴＣＣＣＣＧＧ ＧＡＣＡＣＣＧＡＡＧ ＣＡＧＡＴＡＧＡＧＴ ＴＡＣ
ＣＡＧＣＡＡＣ ＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡ ＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣ ６０ ＣＡＣＣＡＣＣ
６７
ＣＡＧＣＡＡＣ ＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡ ＡＧＡＡＧＣＡＧＡＣ ６０ ＣＡＣＣＡＣＣ
６７
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２５
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２５】配列番号：１９ 配列の長さ：１７１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＧＧＧＧＴＴＣＣＧＧ ＧＣＧＧＣＧＧＴＧＣ ＴＧＧＣＧＧＧＧＧＴ ＧＧＴ
ＧＧＡＣＧＡＧ ＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧ ＧＧＧＣＣＣＧＡＧＣ ６０ ＧＡＣＧＧＴＣＴＧＧ ＧＴＧＧＣＧＧＴＣＧ ＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧ ＧＧＴ
ＧＧＴＧＧＧＧ ＡＴＴＣＣＧＧＧＧＧ ＡＡＴＧＡＴＧＧＧＧ １２０ ＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣ ＧＣＡＴＧＴＴＧＧＧ ＣＧＣＴＡＧＣＧＴＧ ＧＡＣ
ＣＧＴＡＣＣＴ ＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡ Ｔ １７１
ＧＧＡＣＧＡＧ ＡＣＧＴＧＡＧＣＧＧ ＧＧＧＣＣＣＧＡＧＣ ６０ ＧＡＣＧＧＴＣＴＧＧ ＧＴＧＧＣＧＧＴＣＧ ＴＧＧＴＧＧＴＧＧＧ ＧＧＴ
ＧＧＴＧＧＧＧ ＡＴＴＣＣＧＧＧＧＧ ＡＡＴＧＡＴＧＧＧＧ １２０ ＣＧＣＧＧＣＧＧＴＣ ＧＣＡＴＧＴＴＧＧＧ ＣＧＣＴＡＧＣＧＴＧ ＧＡＣ
ＣＧＴＡＣＣＴ ＡＴＣＧＧＣＴＣＡＡ Ｔ １７１
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２６
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２６】配列番号：２０ 配列の長さ：１７１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＣＣＣＣＡＡＧＧＣＣ ＣＧＣＣＧＣＣＡＣＧ ＡＣＣＧＣＣＣＣＣＡ ＣＣＡ
ＣＣＴＧＣＴＣ ＴＧＣＡＣＴＣＧＣＣ ＣＣＣＧＧＧＣＴＣＧ ６０ ＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣ ＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣ ＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣ ＣＣＡ
ＣＣＡＣＣＣＣ ＴＡＡＧＧＣＣＣＣＣ ＴＴＡＣＴＡＣＣＣＣ １２０ ＧＣＧＣＣＧＣＣＡＧ ＣＧＴＡＣＡＡＣＣＣ ＧＣＧＡＴＣＧＣＡＣ ＣＴＧ
ＧＣＡＴＧＧＡ ＴＡＧＣＣＧＡＧＴＴ Ａ １７１
ＣＣＴＧＣＴＣ ＴＧＣＡＣＴＣＧＣＣ ＣＣＣＧＧＧＣＴＣＧ ６０ ＣＴＧＣＣＡＧＡＣＣ ＣＡＣＣＧＣＣＡＧＣ ＡＣＣＡＣＣＡＣＣＣ ＣＣＡ
ＣＣＡＣＣＣＣ ＴＡＡＧＧＣＣＣＣＣ ＴＴＡＣＴＡＣＣＣＣ １２０ ＧＣＧＣＣＧＣＣＡＧ ＣＧＴＡＣＡＡＣＣＣ ＧＣＧＡＴＣＧＣＡＣ ＣＴＧ
ＧＣＡＴＧＧＡ ＴＡＧＣＣＧＡＧＴＴ Ａ １７１
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２７
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２７】配列番号：２１ 配列の長さ：５７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ポリペプチド フラグメント型：中間部 配列 Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ５０ ５５
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ １ ５
１０ １５ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ ３５ ４０
４５ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ５０ ５５
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２８】配列番号：２２ 配列の長さ：６５１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡ ＴＧＡＣＴＧＧＴＧＧ ＡＣＡＧＣＡＡＡＴＧ ＧＧＴ
ＣＧＣＣＧＧＡ ＴＣＣＧＣＡＴＧＣＧ ＴＧＧＣＡＧＣＣＴＣ ６０ ＴＣＴＴＣＧＣＴＧＧ ＣＣＡＡＴＧＣＣＧＧ ＣＧＧＴＣＴＧＣＡＴ ＧＡＣ
ＧＡＣＧＧＣＣ ＣＧＧＧＴＣＴＧＧＡ ＴＡＡＣＧＡＴＣＴＣ １２０ ＡＴＧＡＡＣＧＡＧＣ ＣＣＡＴＧＧＧＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＴＣＴＧ ＧＧＡ
ＧＧＡＧＧＴＧ ＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧ ＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧ １８０ ＣＡＣＧＡＣＣＧＣＧ ＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧ ＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴ ＡＣＧ
ＣＧＧＡＡＡＡ ＴＧＡＧＴＡＧＣＧＧ ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣ ２４０ ＧＧＴＧＡＴＣＡＴＧ ＡＣＣＡＣＧＧＴＣＴ ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＧ ＧＡＡ
ＡＡＡＴＡＣＧ ＡＧＣＡＧＣＡＣＡＡ ＧＡＴＣＡＣＣＡＧＣ ３００ ＴＡＣＣＴＧＡＣＧＴ ＣＣＡＡＡＧＧＴＧＧ ＡＴＣＧＧＧＣＧＧＣ ＧＧＣ
ＧＧＡＧＧＡＧ ＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧ ＣＧＧＴＴＴＧＧＡＴ ３６０ ＣＧＣＡＡＣＴＣＣＧ ＧＣＡＡＴＴＡＣＴＴ ＣＡＡＣＧＡＣＧＣＧ ＡＡＡ
ＧＡＧＧＡＧＡ ＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡ ＧＧＡＴＴＣＴＧＴＡ ４２０ ＡＣＧＴＴＣＧＡＧＴ ＴＣＧＴＣＣＣＴＡＡ ＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧ ＣＡＡ
ＡＡＧＴＧＣＧ ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＧ ＣＡＴＧＣＡＴＧＧＧ ４８０ ＧＴＴＣＣＧＧＧＣＧ ＧＣＧＧＴＧＣＴＧＧ ＣＧＧＧＧＧＴＧＧＴ ＧＧＡ
ＣＧＡＧＡＣＧ ＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧ ＣＣＣＧＡＧＣＧＡＣ ５４０ ＧＧＴＣＴＧＧＧＴＧ ＧＣＧＧＴＣＧＴＧＧ ＴＧＧＴＧＧＧＧＧＴ ＧＧＴ
ＧＧＧＧＡＴＴ ＣＣＧＧＧＧＧＡＡＴ ＧＡＴＧＧＧＧＣＧＣ ６００ ＧＧＣＧＧＴＣＧＣＡ ＴＧＴＴＧＧＧＣＧＣ ＴＡＧＣＧＴＧＧＡＣ ＣＧＴ
ＡＣＣＴＡＴＣ ＧＧＣＴＣＡＡＴＴＡ Ｇ ６５１
ＣＧＣＣＧＧＡ ＴＣＣＧＣＡＴＧＣＧ ＴＧＧＣＡＧＣＣＴＣ ６０ ＴＣＴＴＣＧＣＴＧＧ ＣＣＡＡＴＧＣＣＧＧ ＣＧＧＴＣＴＧＣＡＴ ＧＡＣ
ＧＡＣＧＧＣＣ ＣＧＧＧＴＣＴＧＧＡ ＴＡＡＣＧＡＴＣＴＣ １２０ ＡＴＧＡＡＣＧＡＧＣ ＣＣＡＴＧＧＧＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＴＣＴＧ ＧＧＡ
ＧＧＡＧＧＴＧ ＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧ ＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧ １８０ ＣＡＣＧＡＣＣＧＣＧ ＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧ ＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴ ＡＣＧ
ＣＧＧＡＡＡＡ ＴＧＡＧＴＡＧＣＧＧ ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣ ２４０ ＧＧＴＧＡＴＣＡＴＧ ＡＣＣＡＣＧＧＴＣＴ ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＧ ＧＡＡ
ＡＡＡＴＡＣＧ ＡＧＣＡＧＣＡＣＡＡ ＧＡＴＣＡＣＣＡＧＣ ３００ ＴＡＣＣＴＧＡＣＧＴ ＣＣＡＡＡＧＧＴＧＧ ＡＴＣＧＧＧＣＧＧＣ ＧＧＣ
ＧＧＡＧＧＡＧ ＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧ ＣＧＧＴＴＴＧＧＡＴ ３６０ ＣＧＣＡＡＣＴＣＣＧ ＧＣＡＡＴＴＡＣＴＴ ＣＡＡＣＧＡＣＧＣＧ ＡＡＡ
ＧＡＧＧＡＧＡ ＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡ ＧＧＡＴＴＣＴＧＴＡ ４２０ ＡＣＧＴＴＣＧＡＧＴ ＴＣＧＴＣＣＣＴＡＡ ＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧ ＣＡＡ
ＡＡＧＴＧＣＧ ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＧ ＣＡＴＧＣＡＴＧＧＧ ４８０ ＧＴＴＣＣＧＧＧＣＧ ＧＣＧＧＴＧＣＴＧＧ ＣＧＧＧＧＧＴＧＧＴ ＧＧＡ
ＣＧＡＧＡＣＧ ＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧ ＣＣＣＧＡＧＣＧＡＣ ５４０ ＧＧＴＣＴＧＧＧＴＧ ＧＣＧＧＴＣＧＴＧＧ ＴＧＧＴＧＧＧＧＧＴ ＧＧＴ
ＧＧＧＧＡＴＴ ＣＣＧＧＧＧＧＡＡＴ ＧＡＴＧＧＧＧＣＧＣ ６００ ＧＧＣＧＧＴＣＧＣＡ ＴＧＴＴＧＧＧＣＧＣ ＴＡＧＣＧＴＧＧＡＣ ＣＧＴ
ＡＣＣＴＡＴＣ ＧＧＣＴＣＡＡＴＴＡ Ｇ ６５１
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２９
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１２９】配列番号：２３ 配列の長さ：６５１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＴＡＣＣＧＡＴＣＧＴ ＡＣＴＧＡＣＣＡＣＣ ＴＧＴＣＧＴＴＴＡＣ ＣＣＡ
ＧＣＧＧＣＣＴ ＡＧＧＣＧＴＡＣＧＣ ＡＣＣＧＴＣＧＧＡＧ ６０ ＡＧＡＡＧＣＧＡＣＣ ＧＧＴＴＡＣＧＧＣＣ ＧＣＣＡＧＡＣＧＴＡ ＣＴＧ
ＣＴＧＣＣＧＧ ＧＣＣＣＡＧＡＣＣＴ ＡＴＴＧＣＴＡＧＡＧ １２０ ＴＡＣＴＴＧＣＴＣＧ ＧＧＴＡＣＣＣＡＧＡ ＧＣＣＧＣＣＡＧＡＣ ＣＣＴ
ＣＣＴＣＣＡＣ ＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣ ＧＣＣＧＴＴＣＴＴＣ １８０ ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＣ ＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣ ＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡ ＴＧＣ
ＧＣＣＴＴＴＴ ＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣ ＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧ ２４０ ＣＣＡＣＴＡＧＴＡＣ ＴＧＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＡＧＧＡＧＧＴＴＣ ＣＴＴ
ＴＴＴＡＴＧＣ ＴＣＧＴＣＧＴＧＴＴ ＣＴＡＧＴＧＧＴＣＧ ３００ ＡＴＧＧＡＣＴＧＣＡ ＧＧＴＴＴＣＣＡＣＣ ＴＡＧＣＣＣＧＣＣＧ ＣＣＧ
ＣＣＴＣＣＴＣ ＣＴＣＣＴＣＣＧＣＣ ＧＣＣＡＡＡＣＣＴＡ ３６０ ＧＣＧＴＴＧＡＧＧＣ ＣＧＴＴＡＡＴＧＡＡ ＧＴＴＧＣＴＧＣＧＣ ＴＴＴ
ＣＴＣＣＴＣＴ ＣＧＣＴＧＴＣＧＣＴ ＣＣＴＡＡＧＡＣＡＴ ４２０ ＴＧＣＡＡＧＣＴＣＡ ＡＧＣＡＧＧＧＡＴＴ ＧＴＧＧＴＴＣＴＴＣ ＧＴＴ
ＴＴＣＡＣＧＣ ＣＧＴＴＣＴＡＧＧＣ ＧＴＡＣＧＴＡＣＣＣ ４８０ ＣＡＡＧＧＣＣＣＧＣ ＣＧＣＣＡＣＧＡＣＣ ＧＣＣＣＣＣＡＣＣＡ ＣＣＴ
ＧＣＴＣＴＧＣ ＡＣＴＣＧＣＣＣＣＣ ＧＧＧＣＴＣＧＣＴＧ ５４０ ＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣ ＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣ ＡＣＣＡＣＣＣＣＣＡ ＣＣＡ
ＣＣＣＣＴＡＡ ＧＧＣＣＣＣＣＴＴＡ ＣＴＡＣＣＣＣＧＣＧ ６００ ＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴ ＡＣＡＡＣＣＣＧＣＧ ＡＴＣＧＣＡＣＣＴＧ ＧＣＡ
ＴＧＧＡＴＡＧ ＣＣＧＡＧＴＴＡＡＴ Ｃ ６５１
ＧＣＧＧＣＣＴ ＡＧＧＣＧＴＡＣＧＣ ＡＣＣＧＴＣＧＧＡＧ ６０ ＡＧＡＡＧＣＧＡＣＣ ＧＧＴＴＡＣＧＧＣＣ ＧＣＣＡＧＡＣＧＴＡ ＣＴＧ
ＣＴＧＣＣＧＧ ＧＣＣＣＡＧＡＣＣＴ ＡＴＴＧＣＴＡＧＡＧ １２０ ＴＡＣＴＴＧＣＴＣＧ ＧＧＴＡＣＣＣＡＧＡ ＧＣＣＧＣＣＡＧＡＣ ＣＣＴ
ＣＣＴＣＣＡＣ ＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣ ＧＣＣＧＴＴＣＴＴＣ １８０ ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＣ ＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣ ＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡ ＴＧＣ
ＧＣＣＴＴＴＴ ＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣ ＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧ ２４０ ＣＣＡＣＴＡＧＴＡＣ ＴＧＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＡＧＧＡＧＧＴＴＣ ＣＴＴ
ＴＴＴＡＴＧＣ ＴＣＧＴＣＧＴＧＴＴ ＣＴＡＧＴＧＧＴＣＧ ３００ ＡＴＧＧＡＣＴＧＣＡ ＧＧＴＴＴＣＣＡＣＣ ＴＡＧＣＣＣＧＣＣＧ ＣＣＧ
ＣＣＴＣＣＴＣ ＣＴＣＣＴＣＣＧＣＣ ＧＣＣＡＡＡＣＣＴＡ ３６０ ＧＣＧＴＴＧＡＧＧＣ ＣＧＴＴＡＡＴＧＡＡ ＧＴＴＧＣＴＧＣＧＣ ＴＴＴ
ＣＴＣＣＴＣＴ ＣＧＣＴＧＴＣＧＣＴ ＣＣＴＡＡＧＡＣＡＴ ４２０ ＴＧＣＡＡＧＣＴＣＡ ＡＧＣＡＧＧＧＡＴＴ ＧＴＧＧＴＴＣＴＴＣ ＧＴＴ
ＴＴＣＡＣＧＣ ＣＧＴＴＣＴＡＧＧＣ ＧＴＡＣＧＴＡＣＣＣ ４８０ ＣＡＡＧＧＣＣＣＧＣ ＣＧＣＣＡＣＧＡＣＣ ＧＣＣＣＣＣＡＣＣＡ ＣＣＴ
ＧＣＴＣＴＧＣ ＡＣＴＣＧＣＣＣＣＣ ＧＧＧＣＴＣＧＣＴＧ ５４０ ＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣ ＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣ ＡＣＣＡＣＣＣＣＣＡ ＣＣＡ
ＣＣＣＣＴＡＡ ＧＧＣＣＣＣＣＴＴＡ ＣＴＡＣＣＣＣＧＣＧ ６００ ＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴ ＡＣＡＡＣＣＣＧＣＧ ＡＴＣＧＣＡＣＣＴＧ ＧＣＡ
ＴＧＧＡＴＡＧ ＣＣＧＡＧＴＴＡＡＴ Ｃ ６５１
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３０
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１３０】配列番号：２４ 配列の長さ：２１６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ポリペプチド フラグメント型：中間部 配列 Ｍｅｔ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｎ
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ ８５
９０ ９５ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １００ １０５
１１０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ １１５ １２０
１２５ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ １３０ １３５
１４０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｇｌｙ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １８０ １８５
１９０ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ １９５ ２００
２０５ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ２１０ ２１５
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ ８５
９０ ９５ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １００ １０５
１１０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ １１５ １２０
１２５ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ １３０ １３５
１４０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｇｌｙ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １８０ １８５
１９０ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ １９５ ２００
２０５ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ ２１０ ２１５
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３１
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１３１】配列番号：２５ 配列の長さ：８３１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＡＴＧＧＣＴＡＧＣＡ ＴＧＡＣＴＧＧＴＧＧ ＡＣＡＧＣＡＡＡＴＧ ＧＧＴ
ＣＧＣＣＧＧＡ ＴＣＣＧＣＡＴＧＣＧ ＴＧＧＣＡＧＣＣＴＣ ６０ ＴＣＴＴＣＧＣＴＧＧ ＣＣＡＡＴＧＣＣＧＧ ＣＧＧＴＣＴＧＣＡＴ ＧＡＣ
ＧＡＣＧＧＣＣ ＣＧＧＧＴＣＴＧＧＡ ＴＡＡＣＧＡＴＣＴＣ １２０ ＡＴＧＡＡＣＧＡＧＣ ＣＣＡＴＧＧＧＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＴＣＴＧ ＧＧＡ
ＧＧＡＧＧＴＧ ＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧ ＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧ １８０ ＣＡＣＧＡＣＣＧＣＧ ＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧ ＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴ ＡＣＧ
ＣＧＧＡＡＡＡ ＴＧＡＧＴＡＧＣＧＧ ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣ ２４０ ＧＧＴＧＡＴＣＡＴＧ ＡＣＣＡＣＧＧＴＣＴ ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＧ ＧＡＡ
ＡＡＡＴＡＣＧ ＡＧＣＡＧＣＡＣＡＡ ＧＡＴＣＡＣＣＡＧＣ ３００ ＴＡＣＣＴＧＡＣＧＴ ＣＣＡＡＡＧＧＴＧＧ ＡＴＣＧＧＧＣＧＧＣ ＧＧＣ
ＧＧＡＧＧＡＧ ＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧ ＣＧＧＴＴＴＧＧＡＴ ３６０ ＣＧＣＡＡＣＴＣＣＧ ＧＣＡＡＴＴＡＣＴＴ ＣＡＡＣＧＡＣＧＣＧ ＡＡＡ
ＧＡＧＧＡＧＡ ＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡ ＧＧＡＴＴＣＴＧＴＡ ４２０ ＡＣＧＴＴＣＧＡＧＴ ＴＣＧＴＣＣＣＴＡＡ ＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧ ＣＡＡ
ＡＡＧＴＧＣＧ ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＧ ＣＡＴＧＣＡＴＧＧＧ ４８０ ＧＴＴＣＣＧＧＧＣＧ ＧＣＧＧＴＧＣＴＧＧ ＣＧＧＧＧＧＴＧＧＴ ＧＧＡ
ＣＧＡＧＡＣＧ ＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧ ＣＣＣＧＡＧＣＧＡＣ ５４０ ＧＧＴＣＴＧＧＧＴＧ ＧＣＧＧＴＣＧＴＧＧ ＴＧＧＴＧＧＧＧＧＴ ＧＧＴ
ＧＧＧＧＡＴＴ ＣＣＧＧＧＧＧＡＡＴ ＧＡＴＧＧＧＧＣＧＣ ６００ ＧＧＣＧＧＴＣＧＣＡ ＴＧＴＴＧＧＧＣＧＣ ＴＡＧＣＧＴＧＧＡＣ ＣＧＴ
ＡＣＣＴＡＴＣ ＧＧＣＴＣＡＡＴＴＣ ＴＡＧＡＡＡＧＡＴＣ ６６０ ＣＴＧＡＡＧＡＧＣＡ ＣＧＡＣＧＧＧＣＡＴ ＧＡＡＡＡＣＧＧＴＧ ＧＣＴ
ＴＴＣＧＡＣＣ ＴＡＴＣＧＴＣＧＣＣ ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣ ７２０ ＧＧＴＡＣＧＧＧＧＣ ＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧ ＴＴＣＴＧＣＣＧＧＣ ＡＴＧ
ＧＧＧＧＧＣＧ ＣＣＡＡＡＡＣＧＣＣ ＧＴＣＧＧＡＣＧＣＣ ７８０ ＧＴＧＣＡＧＡＡＣＡ ＴＣＣＴＣＣＡＡＡＡ ＧＡＴＣＧＡＧＡＡＧ ＡＴＴ
ＡＡＧＡＡＣＡ ＣＧＧＡＧＧＡＡＴＡ Ｇ ８３１
ＣＧＣＣＧＧＡ ＴＣＣＧＣＡＴＧＣＧ ＴＧＧＣＡＧＣＣＴＣ ６０ ＴＣＴＴＣＧＣＴＧＧ ＣＣＡＡＴＧＣＣＧＧ ＣＧＧＴＣＴＧＣＡＴ ＧＡＣ
ＧＡＣＧＧＣＣ ＣＧＧＧＴＣＴＧＧＡ ＴＡＡＣＧＡＴＣＴＣ １２０ ＡＴＧＡＡＣＧＡＧＣ ＣＣＡＴＧＧＧＴＣＴ ＣＧＧＣＧＧＴＣＴＧ ＧＧＡ
ＧＧＡＧＧＴＧ ＧＣＧＧＣＧＧＴＧＧ ＣＧＧＣＡＡＧＡＡＧ １８０ ＣＡＣＧＡＣＣＧＣＧ ＧＴＧＧＣＧＧＣＧＧ ＴＧＧＴＴＣＣＧＧＴ ＡＣＧ
ＣＧＧＡＡＡＡ ＴＧＡＧＴＡＧＣＧＧ ＴＧＧＣＧＧＣＧＧＣ ２４０ ＧＧＴＧＡＴＣＡＴＧ ＡＣＣＡＣＧＧＴＣＴ ＴＴＣＣＴＣＣＡＡＧ ＧＡＡ
ＡＡＡＴＡＣＧ ＡＧＣＡＧＣＡＣＡＡ ＧＡＴＣＡＣＣＡＧＣ ３００ ＴＡＣＣＴＧＡＣＧＴ ＣＣＡＡＡＧＧＴＧＧ ＡＴＣＧＧＧＣＧＧＣ ＧＧＣ
ＧＧＡＧＧＡＧ ＧＡＧＧＡＧＧＣＧＧ ＣＧＧＴＴＴＧＧＡＴ ３６０ ＣＧＣＡＡＣＴＣＣＧ ＧＣＡＡＴＴＡＣＴＴ ＣＡＡＣＧＡＣＧＣＧ ＡＡＡ
ＧＡＧＧＡＧＡ ＧＣＧＡＣＡＧＣＧＡ ＧＧＡＴＴＣＴＧＴＡ ４２０ ＡＣＧＴＴＣＧＡＧＴ ＴＣＧＴＣＣＣＴＡＡ ＣＡＣＣＡＡＧＡＡＧ ＣＡＡ
ＡＡＧＴＧＣＧ ＧＣＡＡＧＡＴＣＣＧ ＣＡＴＧＣＡＴＧＧＧ ４８０ ＧＴＴＣＣＧＧＧＣＧ ＧＣＧＧＴＧＣＴＧＧ ＣＧＧＧＧＧＴＧＧＴ ＧＧＡ
ＣＧＡＧＡＣＧ ＴＧＡＧＣＧＧＧＧＧ ＣＣＣＧＡＧＣＧＡＣ ５４０ ＧＧＴＣＴＧＧＧＴＧ ＧＣＧＧＴＣＧＴＧＧ ＴＧＧＴＧＧＧＧＧＴ ＧＧＴ
ＧＧＧＧＡＴＴ ＣＣＧＧＧＧＧＡＡＴ ＧＡＴＧＧＧＧＣＧＣ ６００ ＧＧＣＧＧＴＣＧＣＡ ＴＧＴＴＧＧＧＣＧＣ ＴＡＧＣＧＴＧＧＡＣ ＣＧＴ
ＡＣＣＴＡＴＣ ＧＧＣＴＣＡＡＴＴＣ ＴＡＧＡＡＡＧＡＴＣ ６６０ ＣＴＧＡＡＧＡＧＣＡ ＣＧＡＣＧＧＧＣＡＴ ＧＡＡＡＡＣＧＧＴＧ ＧＣＴ
ＴＴＣＧＡＣＣ ＴＡＴＣＧＴＣＧＣＣ ＣＣＡＧＡＡＧＡＧＣ ７２０ ＧＧＴＡＣＧＧＧＧＣ ＣＧＣＡＡＣＣＧＧＧ ＴＴＣＴＧＣＣＧＧＣ ＡＴＧ
ＧＧＧＧＧＣＧ ＣＣＡＡＡＡＣＧＣＣ ＧＴＣＧＧＡＣＧＣＣ ７８０ ＧＴＧＣＡＧＡＡＣＡ ＴＣＣＴＣＣＡＡＡＡ ＧＡＴＣＧＡＧＡＡＧ ＡＴＴ
ＡＡＧＡＡＣＡ ＣＧＧＡＧＧＡＡＴＡ Ｇ ８３１
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３２
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１３２】配列番号：２６ 配列の長さ：８３１ 配列の型：ＤＮＡ 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 配列 ＴＡＣＣＧＡＴＣＧＴ ＡＣＴＧＡＣＣＡＣＣ ＴＧＴＣＧＴＴＴＡＣ ＣＣＡ
ＧＣＧＧＣＣＴ ＡＧＧＣＧＴＡＣＧＣ ＡＣＣＧＴＣＧＧＡＧ ６０ ＡＧＡＡＧＣＧＡＣＣ ＧＧＴＴＡＣＧＧＣＣ ＧＣＣＡＧＡＣＧＴＡ ＣＴＧ
ＣＴＧＣＣＧＧ ＧＣＣＣＡＧＡＣＣＴ ＡＴＴＧＣＴＡＧＡＧ １２０ ＴＡＣＴＴＧＣＴＣＧ ＧＧＴＡＣＣＣＡＧＡ ＧＣＣＧＣＣＡＧＡＣ ＣＣＴ
ＣＣＴＣＣＡＣ ＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣ ＧＣＣＧＴＴＣＴＴＣ １８０ ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＣ ＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣ ＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡ ＴＧＣ
ＧＣＣＴＴＴＴ ＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣ ＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧ ２４０ ＣＣＡＣＴＡＧＴＡＣ ＴＧＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＡＧＧＡＧＧＴＴＣ ＣＴＴ
ＴＴＴＡＴＧＣ ＴＣＧＴＣＧＴＧＴＴ ＣＴＡＧＴＧＧＴＣＧ ３００ ＡＴＧＧＡＣＴＧＣＡ ＧＧＴＴＴＣＣＡＣＣ ＴＡＧＣＣＣＧＣＣＧ ＣＣＧ
ＣＣＴＣＣＴＣ ＣＴＣＣＴＣＣＧＣＣ ＧＣＣＡＡＡＣＣＴＡ ３６０ ＧＣＧＴＴＧＡＧＧＣ ＣＧＴＴＡＡＴＧＡＡ ＧＴＴＧＣＴＧＣＧＣ ＴＴＴ
ＣＴＣＣＴＣＴ ＣＧＣＴＧＴＣＧＣＴ ＣＣＴＡＡＧＡＣＡＴ ４２０ ＴＧＣＡＡＧＣＴＣＡ ＡＧＣＡＧＧＧＡＴＴ ＧＴＧＧＴＴＣＴＴＣ ＧＴＴ
ＴＴＣＡＣＧＣ ＣＧＴＴＣＴＡＧＧＣ ＧＴＡＣＧＴＡＣＣＣ ４８０ ＣＡＡＧＧＣＣＣＧＣ ＣＧＣＣＡＣＧＡＣＣ ＧＣＣＣＣＣＡＣＣＡ ＣＣＴ
ＧＣＴＣＴＧＣ ＡＣＴＣＧＣＣＣＣＣ ＧＧＧＣＴＣＧＣＴＧ ５４０ ＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣ ＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣ ＡＣＣＡＣＣＣＣＣＡ ＣＣＡ
ＣＣＣＣＴＡＡ ＧＧＣＣＣＣＣＴＴＡ ＣＴＡＣＣＣＣＧＣＧ ６００ ＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴ ＡＣＡＡＣＣＣＧＣＧ ＡＴＣＧＣＡＣＣＴＧ ＧＣＡ
ＴＧＧＡＴＡＧ ＣＣＧＡＧＴＴＡＡＧ ＡＴＣＴＴＴＣＴＡＧ ６６０ ＧＡＣＴＴＣＴＣＧＴ ＧＣＴＧＣＣＣＧＴＡ ＣＴＴＴＴＧＣＣＡＣ ＣＧＡ
ＡＡＧＣＴＧＧ ＡＴＡＧＣＡＧＣＧＧ ＧＧＴＣＴＴＣＴＣＧ ７２０ ＣＣＡＴＧＣＣＣＣＧ ＧＣＧＴＴＧＧＣＣＣ ＡＡＧＡＣＧＧＣＣＧ ＴＡＣ
ＣＣＣＣＣＧＣ ＧＧＴＴＴＴＧＣＧＧ ＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧ ７８０ ＣＡＣＧＴＣＴＴＧＴ ＡＧＧＡＧＧＴＴＴＴ ＣＴＡＧＣＴＣＴＴＣ ＴＡＡ
ＴＴＣＴＴＧＴ ＧＣＣＴＣＣＴＴＡＴ Ｃ ８３１
ＧＣＧＧＣＣＴ ＡＧＧＣＧＴＡＣＧＣ ＡＣＣＧＴＣＧＧＡＧ ６０ ＡＧＡＡＧＣＧＡＣＣ ＧＧＴＴＡＣＧＧＣＣ ＧＣＣＡＧＡＣＧＴＡ ＣＴＧ
ＣＴＧＣＣＧＧ ＧＣＣＣＡＧＡＣＣＴ ＡＴＴＧＣＴＡＧＡＧ １２０ ＴＡＣＴＴＧＣＴＣＧ ＧＧＴＡＣＣＣＡＧＡ ＧＣＣＧＣＣＡＧＡＣ ＣＣＴ
ＣＣＴＣＣＡＣ ＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣ ＧＣＣＧＴＴＣＴＴＣ １８０ ＧＴＧＣＴＧＧＣＧＣ ＣＡＣＣＧＣＣＧＣＣ ＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡ ＴＧＣ
ＧＣＣＴＴＴＴ ＡＣＴＣＡＴＣＧＣＣ ＡＣＣＧＣＣＧＣＣＧ ２４０ ＣＣＡＣＴＡＧＴＡＣ ＴＧＧＴＧＣＣＡＧＡ ＡＡＧＧＡＧＧＴＴＣ ＣＴＴ
ＴＴＴＡＴＧＣ ＴＣＧＴＣＧＴＧＴＴ ＣＴＡＧＴＧＧＴＣＧ ３００ ＡＴＧＧＡＣＴＧＣＡ ＧＧＴＴＴＣＣＡＣＣ ＴＡＧＣＣＣＧＣＣＧ ＣＣＧ
ＣＣＴＣＣＴＣ ＣＴＣＣＴＣＣＧＣＣ ＧＣＣＡＡＡＣＣＴＡ ３６０ ＧＣＧＴＴＧＡＧＧＣ ＣＧＴＴＡＡＴＧＡＡ ＧＴＴＧＣＴＧＣＧＣ ＴＴＴ
ＣＴＣＣＴＣＴ ＣＧＣＴＧＴＣＧＣＴ ＣＣＴＡＡＧＡＣＡＴ ４２０ ＴＧＣＡＡＧＣＴＣＡ ＡＧＣＡＧＧＧＡＴＴ ＧＴＧＧＴＴＣＴＴＣ ＧＴＴ
ＴＴＣＡＣＧＣ ＣＧＴＴＣＴＡＧＧＣ ＧＴＡＣＧＴＡＣＣＣ ４８０ ＣＡＡＧＧＣＣＣＧＣ ＣＧＣＣＡＣＧＡＣＣ ＧＣＣＣＣＣＡＣＣＡ ＣＣＴ
ＧＣＴＣＴＧＣ ＡＣＴＣＧＣＣＣＣＣ ＧＧＧＣＴＣＧＣＴＧ ５４０ ＣＣＡＧＡＣＣＣＡＣ ＣＧＣＣＡＧＣＡＣＣ ＡＣＣＡＣＣＣＣＣＡ ＣＣＡ
ＣＣＣＣＴＡＡ ＧＧＣＣＣＣＣＴＴＡ ＣＴＡＣＣＣＣＧＣＧ ６００ ＣＣＧＣＣＡＧＣＧＴ ＡＣＡＡＣＣＣＧＣＧ ＡＴＣＧＣＡＣＣＴＧ ＧＣＡ
ＴＧＧＡＴＡＧ ＣＣＧＡＧＴＴＡＡＧ ＡＴＣＴＴＴＣＴＡＧ ６６０ ＧＡＣＴＴＣＴＣＧＴ ＧＣＴＧＣＣＣＧＴＡ ＣＴＴＴＴＧＣＣＡＣ ＣＧＡ
ＡＡＧＣＴＧＧ ＡＴＡＧＣＡＧＣＧＧ ＧＧＴＣＴＴＣＴＣＧ ７２０ ＣＣＡＴＧＣＣＣＣＧ ＧＣＧＴＴＧＧＣＣＣ ＡＡＧＡＣＧＧＣＣＧ ＴＡＣ
ＣＣＣＣＣＧＣ ＧＧＴＴＴＴＧＣＧＧ ＣＡＧＣＣＴＧＣＧＧ ７８０ ＣＡＣＧＴＣＴＴＧＴ ＡＧＧＡＧＧＴＴＴＴ ＣＴＡＧＣＴＣＴＴＣ ＴＡＡ
ＴＴＣＴＴＧＴ ＧＣＣＴＣＣＴＴＡＴ Ｃ ８３１
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３３
【補正方法】変更
【補正内容】
【０１３３】配列番号：２７ 配列の長さ：２７６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖 配列の種類：ポリペプチド フラグメント型：中間部 配列 Ｍｅｔ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｇｌｎ
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ ８５
９０ ９５ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １００ １０５
１１０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ １１５ １２０
１２５ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ １３０ １３５
１４０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｇｌｙ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １８０ １８５
１９０ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ １９５ ２００
２０５ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ ２１０ ２１５
２２０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ２４５
２５０ ２５５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ ２６０ ２６５
２７０ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ２７５
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ １ ５
１０ １５ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｓｎ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｐｒｏ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｇｌｙ ５０ ５５
６０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ
Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ６５ ７０
７５ ８０ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｈｉｓ ８５
９０ ９５ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １００ １０５
１１０ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ａｒｇ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ａｓｎ １１５ １２０
１２５ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｕ
Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ １３０ １３５
１４０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ
Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ｇｌｙ １４５ １５０
１５５ １６０ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｇｌｙ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｇｌｙ １８０ １８５
１９０ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｇｌｙ
Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ １９５ ２００
２０５ Ｖａｌ Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔｈｒ ２１０ ２１５
２２０ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｓｅｒ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｇｌｙ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ２４５
２５０ ２５５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｙｓ ２６０ ２６５
２７０ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｇｌｕ Ｇｌｕ ２７５
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３４
【補正方法】削除
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３５
【補正方法】削除
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３６
【補正方法】削除
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３７
【補正方法】削除
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３８
【補正方法】削除
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１３９
【補正方法】削除
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４０
【補正方法】削除
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 9453−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ｊ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） Ｃ１２Ｒ 1:92） (72)発明者 ハンス・ハー・ゾンネボルン ドイツ連邦共和国63150ホイゼンシュタン ム、イム・ビルケンエック70番 (72)発明者 ボード・プラハター ドイツ連邦共和国91083バイエルスドルフ、 ゲーテシュトラーセ10番 (72)発明者 ゲルハルト・ヤーン ドイツ連邦共和国72108ロッテンブルク、 ロベルト−コッホ−ヴェーク５番 (54)【発明の名称】 サイトメガロウイルスの読み枠ＵＬ57およびテグメント蛋白質ｐｐ150のＣ端領域に由来するア ミノ酸配列を含むポリペプチドおよび融合蛋白質、これらを含む診断検査キット、サイトメガロ ウイルスおよびＤＮＡオリゴヌクレオチドに対する抗体の検出法
Claims (22)
- 【請求項１】 サイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）に由
来するアミノ酸配列少なくとも一つを含むポリペプチド
であって、その配列が次から選択されるもの： イ） ＨＣＭウイルスの読み枠ＵＬ５７、この読み枠は
主ＤＮＡ結合蛋白質をコードするものであって、次のア
ミノ酸配列： 【化１】Ｇｌｙ・Ｖａｌ・Ｐｒｏ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇ
ｌｙ・Ａｌａ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌ
ｙ・Ａｒｇ・Ａｓｐ・Ｖａｌ・Ｓｅｒ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ
・Ｐｒｏ・Ｓｅｒ・Ａｓｐ・Ｇｌｙ・Ｌｅｕ・Ｇｌｙ・
Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ａｒｇ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇ
ｌｙ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ・Ａｓｐ・Ｓｅｒ・Ｇｌｙ・Ｇｌ
ｙ・Ｍｅｔ・Ｍｅｔ・Ｇｌｙ・Ａｒｇ・Ｇｌｙ・Ｇｌｙ
・Ａｒｇ・Ｍｅｔ・Ｌｅｕ・Ｇｌｙ・Ａｌａ・Ｓｅｒ・
Ｖａｌ・Ａｓｐ・Ａｒｇ・Ｔｈｒ・Ｔｙｒ・Ａｒｇ・Ｌ
ｅｕ・Ａｓｎ に対して少なくとも６０％の相同性を持つもの、および
／または ロ） サイトメガロウイルスのテグメント蛋白質ｐｐ１
５０のＣ端領域およびヒトサイトメガロウイルスに由来
する別の抗原性蛋白質からの他の断片少なくとも一つで
あって、ロ）にしたがうポリペプチドは融合蛋白質とし
て存在する。 - 【請求項２】 選択肢イ）のポリペプチドが請求項１に
示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の相同性を
持つものである請求項１のポリペプチド。 - 【請求項３】 ポリペプチドが請求項１の選択肢イ）の
アミノ酸配列またはその部分配列に対応するものである
請求項１のポリペプチド。 - 【請求項４】 少なくとも１０アミノ酸長を持つもので
ある請求項１から３の一つのポリペプチド。 - 【請求項５】 化学的に合成されたものである先行請求
項の一つのポリペプチド。 - 【請求項６】 請求項１から４の一つのポリペプチドの
アミノ酸配列を含む融合蛋白質。 - 【請求項７】 ヒトサイトメガロウイルスに由来する別
の抗原性蛋白質がｐ５２蛋白質である請求項１の選択肢
ロ）の融合蛋白質。 - 【請求項８】 ヒトサイトメガロウイルスに由来する別
の抗原性蛋白質がｐ５２蛋白質のＣ端領域に由来するも
のである請求項７の融合蛋白質。 - 【請求項９】 融合蛋白質が図２、図３および図４に示
すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の相同性を持
つアミノ酸配列を持つものである請求項７または８の融
合蛋白質。 - 【請求項１０】 融合蛋白質が図２、図３および図４に
示すアミノ酸配列を持つものである請求項９の融合蛋白
質。 - 【請求項１１】 融合蛋白質が、その融合蛋白質を発現
する細菌の蛋白質またはベクターに由来するアミノ酸２
５個以上を持たないものである請求項６から請求項１０
の一つの融合蛋白質。 - 【請求項１２】 融合蛋白質の一部がグルタチオン・Ｓ
トランスフェラーゼに由来するものである請求項６の融
合蛋白質。 - 【請求項１３】 融合蛋白質の一部が請求項１の選択肢
イ）に従うポリペプチドに由来し、他の部分がヒトサイ
トメガロウイルスの他の蛋白質の少なくとも１種、殊に
別の抗原性蛋白質、に由来するものである請求項６から
請求項１２の融合蛋白質。 - 【請求項１４】 ヒトサイトメガロウイルスの別の抗原
性蛋白質がｐｐ１５０テグメント蛋白質である請求項１
３の融合蛋白質。 - 【請求項１５】 さらにヒトサイトメガロウイルスのｐ
５２蛋白質のアミノ酸配列の一部を含むものである請求
項１３または１４の融合蛋白質。 - 【請求項１６】 請求項１から請求項５までのポリペプ
チド少なくとも１種および／または請求項６から請求項
１５のどれかの融合蛋白質少なくとも１種を含むもので
ある抗体、殊にサイトメガロウイルスに対するＩｇＭ抗
体、の検出用検査キット。 - 【請求項１７】 ＥＬＩＳＡ検定を実施するための検査
キットである請求項１６の検査キット。 - 【請求項１８】 分析すべきサンプルを請求項１〜５の
一つのポリペプチドおよび／または請求項６から請求項
１５の一つの融合蛋白質と混合し、抗体−ポリペプチド
複合体および／または抗体ー融合蛋白質複合体を検出用
成分で検出することを含むものである抗体、殊にサイト
メガロウイルスに対するＩｇＭ抗体、の検出方法。 - 【請求項１９】 検出用成分が指標分子、殊にホースラ
ディシュ・ペルオキシダーゼ、に結合した抗−ヒト抗体
である請求項１８の方法。 - 【請求項２０】 請求項１のポリペプチドの少なくとも
一部に対応するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド
配列を含むものであるオリゴヌクレオチド。 - 【請求項２１】 １２〜３０塩基長である請求項２０の
オリゴヌクレオチド。 - 【請求項２２】 核酸をコピーするための操作を用いて
サイトメガロウイルス感染症を検出するための請求項２
０または請求項２２のオリゴヌクレオチドの使用法。
Applications Claiming Priority (4)
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| DE19944426453 DE4426453C1 (de) | 1994-07-26 | 1994-07-26 | Rekombinant hergestellte Fusionsproteine des Cytomegalievirus und diese enthaltende diagnostische Testkits |
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| DE19944435789 DE4435789C1 (de) | 1994-10-06 | 1994-10-06 | Peptide und Fusionsproteine umfassend eine aus dem Leserahmen UL 57 des Cytomegalievirus stammende Aminosäuresequenz und diese enthaltende diagnostische Testkits |
| DE4426453-4 | 1994-10-06 |
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