JPH07509442A - ウィルス病処置でのホスホリル化フラボノイド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 ウィルス病処置でのホスホリル化フラボノイド類ホ克明１＋ｊ、Ｉｒ　Ｉ　”ｉ ’の感染を含めたレトロウィルス感染の処置、並びにす「トメガロウィルス（Ｃ き■ｖ）及び単純庖疹ウィルス（Ｈ９Ｖ＞Ｉ：及び１にの処置二二於けるある種 のホスホリル化フラボノｒトの用途に間するものである。

人及び動物に於けるつ。ルス惑染の処置及び治療を開発するために多くの研究が 現在なされている。後天的免疫Ｔ上症渓群（二・ｒズ）及びエイス゛閏運コシブ レックス（、べＲＣ）の人に於ける発生例が顕著に驚くｌ＼さ速度でｔ！加して いる。エイズを有する人二二対する５年間の生存率は意気、肖、尤させろもので あり、感染によってひと゛くＩ員われた免疫系を有１′ろ工ｒズ忠１者は、カボ ジ肉臘及びニューモジステイス　カリニ＜Ｐｎｅｕｍｏｃ＞５ｔＩｓ　ｃａｒｎ ｉｎｎｉ）肺炎を含めた数多くの日和見ミ染にかかる。治療法は知られておらず 、現在の処置：！主として効能が適切に実証されていないものであって、数多く の望まれない副作用を有する。病スにズ１する恐れ：、ｔ、病スを有する人又は 有する疑いのある人二二スシする社会的な追敢及び差別を生じている。

しドロウ、ルスは逆転写酢素を使用し、て相補Ｄ　Ｎ　Ａ（ｃＤＮＡ）のスＩ・ ラントを形成し、そこから二本鎖ブロウィ、ルスＤ　Ｎ　Ａを生しろことによっ て？Ｊ［ｉＩ！されるリボ核酸（ＲＮ　Ａ　）ウィルスの頚である。このプロウ ィルスＤＮＡは次にランダムに宿主細胞の染色体ＤＮＡ中に絹み込まれ、統合化 されたウィルスゲノムを有するＤＮＡを後で翻訳することによって、つ、′ルス に特異的なＲＮＡと蛋白質の合成を通してウィルスの複製を可能にする。

ｙｕらＪｌているしトロウィルスの多くは、発癌性又は種層発生性である。′： Ｇ実光見された最初の二つの人のレトロウィルスは、人Ｔ細胞白血病ウィルスＩ 及び■又はＨＴＬＶ−１及び■と命名されているが、これらはＴリンパ球に感染 した峡に稀に人白血后を生じる二とがわがりでいる９発見された第三のそのよう な人ウィルスであるＨＴＬＶ−ＩＩＩは現在ＨＩＶと呼はれているが、Ｔリンパ 球の感染後に細１１！死を生じ、後天的免疫不全症挨群（エイズ）及びエイズ聞 達コンプレックス（、ＡＲＣ）の原因物質として同定されている。

レトロウィルスは通常のウィルスのキャブンッド（外殻）に加え、脂質及び糖蛋 白質の外側膜を有している。

しトロウィルスの膜の脂質はおそらく前に感染した宿主細胞の膜に直接由来する が、ウィルスの膜の１＋！蛋白質はウィルス自身に５虫特のものであって、ウィ ルスのゲノムここよりコートされている。レトロウィルスによる宿主細胞の感染 は、最初はウィルスのエンベロープのの糖蛋白質と、宿主細胞表面上の種々のレ セプター、特にＣＤ４どの相互作用による。その後、ウィルスと細胞膜が融合し 、ヴイリオン（ウィルス粒）の内容物が宿主細胞の細胞質に放出される。レトロ ウィルスの糖蛋白質エンベａ−ブはヴイリオン及び宿主細胞の最初の相互作用と ウィルスエンヘローブと宿主細胞膜との１＆での融合との両方に１要な１２割を 果す。

出願人はホスホリル１ヒフラボノイドの一部の類がＨＩＶに活性であることを発 見した。単純庖疹ウィルス（Ｈ５〜゛）１習及び１１シ並びに（１イトメガロウ ｆルス（ＣＭ〜゛）はｆＲ能的に間違した槍蛋白賀被膜を有し、それらのウィル ス感染性も本発明のホスホリル化フラボノイド類の使用によって（戒少スは除去 出来る。

発明のまとめ 本発明はある種のホスホリル化フラボノイド類の抗レトロウィルス、抗−ＨＳ　 ’、：、及び抗−ＣＭ　Ｖ活性に間する。

より詳しくは、次の式 〔式中ＲとＲ１はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、メトキン、およびホスホ ノキシ並びにグルコース、リボース、フラクトース、）ｆラクトース、マンノー ス及びこれえらの糖で構成されたノサッカライドから選択されるヒドロキシ経由 で結合されたサツカライドからなる群から選択され； Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に水素、ヒドロキシ、メトキシ、及びホス ホノキシからなる群から選択され、 点線は二重結合になりうろこともあることを示し、母し、Ｒ、Ｒｔ、Ｒ２，Ｒ３ ，及びＲ４の少なくとも１つはホスホノキシでなければならないことを条１キと する。〕を有するホスホリル１ヒフラボノイド又は製薬上受入れられろ故は加塩 の抗ウィルス活性に関する。

式１の化合物の１ヒ学的性質は自然に１合しようとする性質を倉んでいる。ｉ合 体の庭窓な溝道的性質は知られておらず、モノマーユニット間の１ヒ学的結合の 種々の撮式を含んでいろ。それても、重合体物質でも抗ウィルス活性を示し、自 然な又は誘発されろｉ合から生じる重合体；π合物であれ、又は制御された重合 又は混合物の分画から生じるはっきりした重合数の実質的に純粋な物質であれ、 重合体物質の混合物として、又ははっきりした重合数の実質的に精製された物質 のいずれがて、有用である。分画はクロマトグラフィーを含めた多種多様な技術 によ・りて達成出来る。

「オリゴマー及びオリゴマーのフラクション」という表現は、扶い範囲のｆｆｉ 　ａ数の物質の、π合物又は実質的に一つの重合数の物質のいずれかとして、式 ｌの化合物の二１本、玉量１本、四ｆｆｉ　Ｉｔ、及びよｉつ高１合度の誘導体 に適用されることが意図される。

「ｉ！藁上受は入れられる故は加塩」という表現は、塩基化合物の任意の無毒の 有機又は集機酸１寸加塩に適用されることが意図される。適当な塩を形成する無 機酸の例は、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸及び酸金属塩、例えばオルト 燐酸−水素ナトリウム及び硫酸水素カリウムである。′ａ当な塩を形成する有機 酸の例には、モへジ、及びトリカルボン酸が含まれる。そのような酸の例は、例 えばｉ￥酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロシ准、コハク酸、グルタル 酸、フマール酸、リンゴ酸、１石註、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、 ヒドロキシマしイン酸、安、さ香酸、ヒドロキシ安患香酸、フェニル酢酸、桂皮 酸、サリチル酸、及び２−フェノキシ安、ぎ、香腋である。適当な塩を形成する 池の有機酸は、スルホン・酸、Ｐｉｌｌえばメタンスルホン酸や２−ヒドロキシ ェタンスルホン酸等である。これらの塩及び塩基化合物は水和形又は実質的に無 水形で存在できる。酸塩は標準の技術で造ることが出来る。１７すえば、適当な 酸を含有する水溶潰又は水−アルコール、８１α又は池の適当な溶媒に遊離塩基 を溶解し、この溶（αを蒸発させることによって単離させるか、又は遊離塩基を 有機溶媒中で反応させることによって単＾「させるが、塩は直接分趨するが又は 溶ｉαの１縮により高ることが出来ろ。一般に本発明の化合物の酸は加塩は水及 び種々の親水性の有機溶媒中に可溶である結晶物置てあり、遊離塩基形と比較し てより高い融点と溶解度を示す。

本発明の好まし・い化合物は二重結合であることも出来る結合が二重結合でこよ ない化合物である。またＲ及びＲ１−４がそれぞれ水素、ヒドロキシ、メトキシ 、又はホスホノキシ基のいずれがである式ｌの１Ｌ合物も好ましい。

より好まし・い化合物はＲが水素である式１の化合物及びＲ４がメトキシであろ 化合物である。更に好ましいのはＲが水素、Ｒ４カ＋ノトギシ、そしてＲ１−３ がそれぞれヒドロキシ又はホスボッキン基である式１の化合物である。

本発明のホスボリル１ヒフラボノイドは一般に知られており、この分野でよく知 られた方法で対応するヒドロキシ置換フラボ、ｚ「トに対する燐酸の反応によっ て製造できる。

本発明のホス、１１リルＩＬフラボノイドの抗ウィルス剤として作用する能力は 、ＨＩ　Ｖ感染人Ｔ細胞、Ｊき！中てのシシシチウム形成とＩ）２４抗原製造を 減少するその能力、及び単純炬唐に対する桿準プラーク減少検定を使用すること によって実証でさろ（実先例４〜７をｆｊ照）。

本発明のホスホリル１ヒフラボノイド゛は、ねずみ白血病ウィルス、ねこ白血病 ウィルス、トリ肉腫ウィルス、人免疫不全ライＡ　ス（ＨＩ　ｖ）　、ＨＴ　Ｌ 　Ｖ　−１、及びＨＴＬ〜゛−■なとのレトロウィルス並びここサイトメガロウ ィルス（ＣＭ　Ｖ　）及び単純庖疹ウィルス（ＨＳＶ）Ｉ型及び１１型によって 生じる病気役び症状を含めたウィルスによって生しることが知られている多くの 病気及び症状を処置するのに開用できる。この分野の経験者は抗ウィルス療法之 こ要求される状況を容易にスがつく。本発明者は、本発明のホスホリル化フラボ ノイドを人ＨＩ　ｖ　ｒ５染の処置に使用するための用途がｒ！ｔも重要と考え る０本発明で使用する「患者」という用語は、哺乳類、例えば人を含めた霊長類 、羊、馬、牛、豚、犬、ね二、ラット及びマウスを９０未する。ホスホリル化フ ラボノイドは、ＨＩ　Ｖ−１、又は間遠表面糖蛋白質、並びに単純庖疹ウィルス （ＨＳｖ）ｌ型及び１！型糖蛋白質、及び人サイトメガロウィルス（Ｃ％Ｉ　Ｖ 　）糖蛋白Ｎを有する旧の関連ウィルスに懇染した細胞のシンシチウム形成を防 止するのに使用できる。ホスホリル１ヒフラボノイドはエイズ（ＡＩＤＳ）及び 八ＲＣ１及びしトロウィルスＨ１〜°又はｇｐ１２０表面＃Ｍ表面質を有する池 の関連ウィルスによって起きる池の病気、並びに単純庖疹ウィルス（ＨＳＶ）Ｉ 型及び１１型及びサイトメガロウィルス（ＣＭ　Ｖ　）によって生じる病気を処 置するのに使用できる。ＨｒＶ、ＨＳＶ、又はＣ）Ｉ　Ｖ　５染′ａ胞中てのシ ンシチウム形成を防止するのに必要とされる式１のホスホリル１ヒフラボノイド の量は江嘗の有効量であり１辱る。実験的に出願人は、１０μｇ／ｍｌの５度で 使用されたときにホスホリル化フラボノイドはシンシチウム形成の完全な阻害、 並びにＨＩＶウィルス複製の指示薬であるｐ２４抗原の存在の３．０λ１１０２ ｐ／ｍｌ以下への減少を測定した。

投与されるＩくき式ｌのホスホリル化フラボノイドの量は、使用される特定の投 与単位、処置の間開、処置される患者の年齢及び性、処置される＠気の性質及び 程度、及び選ばれる特定のホスホリル化フラボノ・「ドに従って広く変化し得る 。更に、ホスホリル化フラボノイドは、レトロウィルス病及び！蛋白質コートさ れたウィルス病の処置に有用であることが知られている池の薬剤、及びしトロウ ィルス及び糖蛋白質コートされたウィルスによって生し、る病ス及び症状の症挨 、関連併発症を処置するのに有用であることが知られる薬剤と組合わせて使用す ることか出来る。投与されるべき式ｌのホスホリル化フラボノイド誘導体の抗し トロウィルス有効量は、一般に約１５ｍ２ハ３〜５００ｍｇ／ｋｇの範囲である 。単位投与形は２５〜５００ｍ３のホスホリル化フラボノイド誘導体を含有出来 、−日あたり１以上の回数摂ることができる。ホスホリル化フラボノイドは、経 口又は非経口のいずれかで慣用の投与単位形を用い製薬上の担体と共に投与でき る。

好ましい投与経路は経口投手である。経口投与には、ホスホリル化フラボノイド をカブ七ル剤、丸薬、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、溶融剤、散剤、溶液、懸 濁液、又は乳濁液のような固１４：やイα１本の製剤に処方できろ、固体単位ｔ ｉｔ形式はカブ七ル剤であり得、これは通常の硬殻又は軟膜ゼラチン型のもので 、例えば表面活性剤、潤滑剤、及び乳糖、庶糖、燐酸カルシウム、及びトウモロ コシ、ｉ２粉のような不活性充填剤を含有してい′る。別の態様では、本発明１ ヒａ・物類をｆＬ！、庶糖、及びトウモロコン刃粉のような慣用の錠剤基剤と一 緒にし・、アラビアゴム、トウモロコンＲ粉、又はゼラチンのような結合剤；投 与後の錠剤の崩壊と溶解を助けるための崩壊剤、例えばバレイシ１１、アルギン 酸、Ｉ・ウモロコシ澱粉、及びグアーゴム：錠剤造粒の流れを改良し１錠剤ダイ ス及びハンチ表面への錠剤目↑１の接；を予防するための潤滑剤、例えば滑石、 ステアリン酸、又はステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム又はス テアリン酸亜鉛−錠剤の美観を増強し、患者に受け入れやすくするた力の染Ｔ↓ 、着色剤及び風味Ｆ↓と組み合わせて錠剤化できる。経ロイα体ａ量彩式の使用 に適し、た１寸形剤は、水とアルコール、例えはエタノール、ヘンシルアルコー ル、及びポリエチしンアルコールのような増量剤を包含し、また製薬上受は入れ られる表面活性剤、懸濁剤、又は乳１ヒ剤を加えても加えなくてもよい。

本発明のホスホリル１ヒフラボノイドこま、製菓担体を伴った生理学的に受け入 れられる希釈剤中の注射適量として非経口的に、すなわち皮下、静脈内、筋肉内 、又は腹腔内に投与できる。担１本は、無菌Ｉｒｉ体又は液体混合物でおって、 例えば水、食塩水、水性デキストロース及び関連１！　＋ｙ　液：エタノール、 イソプロパツール、又は・＼キサデシルアルコールのようなアルコール；プロピ レングリコールやポリエチレングリコールのようなグリコール類；２，２−ジメ チル・１．３−ジオキソラン−４−メタノールのようなりす七ロールケタール； ポリ（エチレングリコール）４００のようなエーテル類；油、脂肪酸、脂肪酸エ ステル又はグリ七リド：又はア七チル化脂肪酸グリセリドであり、また石鹸や洗 剤のような製薬上受は入れられる表面活性剤；ペクチン、カルボマー、メチルセ ルロース、ヒトミキシプロピルメチルセルロース、又はカルボキシメチルセルロ ースのような懸濁剤：又は乳化剤その他の製薬上受は入れられる助剤を加えても 加えなくてもよい。本発明の非経口処方剤に使用できる油類の例は、石油、動植 物、又こ１合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、ごま油、綿実油、トウモ ロコシ油、オリーブ油、ペトロラタム、及び鉱油である。適当な脂肪酸は、オレ イン酸、ステアリン酸、及び−ｒソステアリン酸を包含する。適当な脂肪酸エス テルは、例えばオレイン酸エチルとミリスチン散イソブコビルである。ａ当な石 鹸類は脂肪酸アルカリ金属、アンモニウム及びトリエタノールアミン塩類であり 、適当な洗剤は陽イオン洗剤、例えばジメチルジ７ノしキルアンモニ書りムハラ イド類、アルキルピリジニウムハライド類、及びアルキルアミンアセテートａ　 ；　陰イオン洗剤１例えばアルキル、アリール、及びオレフィンスルホネート類 、アルキル、オレフィン、エーテル、及びモノグリ七リドスルフェート類、及び スルホサクシネート類；非イオン性洗剤、例えば脂肪酸アミンオキシド、脂肪酸 アルカノールアミド、及びポリオキシエチレンポリプロピレン共重合１本類；及 び両性洗剤、例えばアルキル−β−アミノプロピオネートＩ、及び２−アルキル イミダシリン第四級アンモニウム塩類、並びに混合物を包含する０本発明の非経 口組成物類は、典型的には溶液中に式ｌのホスホリル化フラボノイド約０．５な いし約２５重量％を含有する。防腐剤と緩１ｇｉ剤も有利に使用できる。注射部 泣の刺Ｘｌを最小限１ヒないし排除するために、二のような組成物類は１）１２ ないし約１７の親水／ｆＪＩ油バランス（）ｌ　Ｌ　Ｂ）をもつ非イオン性表面 活性剤を含有できる。このような処方剤中の表面活性剤型は、約５ないし約１５ １ｉ　１ｍ％の範囲にある。表面活性剤は、上のＨＬＢをもつ単一成分でもよく 、また所望のＨＬＢをもつ二つ以上の成分の混合物でもよい。非経口処方剤に使 用される表面活性剤の例は、ポリエチレンソルビタン脂ＩｔＩ３酸エステルの部 類、例えばソルビタンモノオレエートや、プロピレンオキシドとプロピレングリ コールとの縮合て生成する疎水性基剤とエチレンオキシドとの高分子量アダクト である。

実施例１ 次の組成を各々が有する錠剤が製造される。

式１ホスホリノしくヒフラボノイド　２５０ｍｇ澱粉　４０ｍｇ 滑石　１０１１ｇ ステアリン酸マグネシウム　１０１ｇ 実施例２ 次の組成を各々が有するカプセル剤が製造される。

式ｌホスホリル化フラボノイｌ；’　４００　ｒｓ　ｇ滑石　４０ｍｇ ナトリウムカルボキシメチルセルロース　４０ｍｇ澱粉　１２０ｎｇ 大も１＝　Ｐンリ　３ 次の組成を各々が有する注射用投与形が製造される。

式１ホスホリル１ヒフラボノイド　０．５００ｇポリオキシエチレンソルヒタン モノオレエー）　２．０００ｇ塩化ナトリウム　Ｏ，１２８ｇ 注射用水　２０．０００ｍ１ Ｊき■細胞を室温で２時間Ｈ１〜°−１で感染させた。細胞を次に洗浄し、異な る１度の試験化合物を含有する二重のウェル中に分配し、３７℃で焙茶した。３ 日目と４日目に細胞を観Ｊすし、シンシチウム（合胞細胞）を数え、４０目に： 、ｉ　ｐ　２４ウーｒルスコア抗原の検出の為に、アボットＥ　Ｉ　Ａを使用し て、上）亘みｉαの収穫も行った。

実施例５ 分画されたホスホリル１ヒ・＼スベリジンの抗ＨＩ　Ｖ活性化合物：　ＨＰＬＣ 分画ホスホリル１ヒヘスペリジンＳＩ　Ｄ　Ｌ　４　！’］　４３ ２９分画 分画方法のについての実験 ０．１：）リフルオロ酢１（ＴＦＡ）を含有している５χ水性ア七トニトリル（ 溶媒Ａ）中のｌｏｇ／ｍｌのホスホリル化・＼スベリジン２００１を、溶媒Ａ中 で平衡にした　４．６Ｘ１５ｃｍリクロスフ７−（い（ｌ＋ｒｏｓｐｈｅｒ（Ｉ ″’）　ＣＩ８逆相方ラム（５μｍ粒径）上に注入した。カラムをＯｚ溶液Ａか ら１００χｉ液Ｂ（Ｇｏ＝水性７　ｔ　Ｉ・ニート’Ｊ　ル、０．１：Ｔ　Ｆ　 Ａ）　（ＩＴ）線形勾配で３０分かけて１１７分の、爪速て溶離した。これらの 実験で連続する１ｍｌｍｌフラクション勾配プログラム間始後１．０から２．０ 分の間に集められた第１の試料に該当するフラクションＮ○、ｌ中に集めた０次 に溶媒を真空遠心で除去し、次に上記のように抗つ、ルス試験用にＲＰ　Ｍ　Ｉ 培地でもどした。

１．５ｍｌのＲＰきＩ＋を各試験管に加えて分画した物置を再、容解した。ホス ホリル化ヘスベリジンの各フラクション１ｍｌをＭｉ織培養プレートのウェルに 加え、次に１００シンシチウム形成ユニツトのＨＩＶ及び１λ１０’ｌ［ｉのＪ 　Ｍ細胞を加えることて、抗ＨＩ　Ｖ活性につきフラクションを検定した。フレ ートを３７　’Ｃ’で２０間培養し・、次に対照（化合物無添加）のバーセント どしてシシンチウムを記録した。

結果：　ｏ＝ｏ：、＋＝＋　〜ｓｏ＝、＋＋＝５０〜１０ｏｚ、＋＋＋＝＞１０ ０：大島１５１ツリＧ ホスホリル（ヒ・＼スベリジンの抗Ｃｈｌ　ｖ活性ウィルス（、入ＤＩＧ９系統 、ＭＲＣｔ５細胞ライン）生育サイクルの次の時間にホスホリル化ヘスベリジン が存在する実験を実施した。

１、吸着の間と後。

２、吸着の間、その後無し。

３、吸着層のみ添加。

薬物なしのウィルス対照が各プレートに存在した。

第一の試験結果 第二の試験結果 第三の試験結果 実施Ｐ７す７ ホスホリル化へスベリジンの抗ウイルス活性細胞ライン：ヴエロ（〜ｅ「０） つ、ｆルス　：・＼ルベス２型系統ＨＧ！５２最初の試験結果： Ｎ温てのウィルス吸着； ３７°Ｃての１ａ養 第二の試験結果 国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、　Ｃ１，６識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｈ１７１０７８６ １５−４Ｃ Ｉ

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. １．以下の式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中ＲとＲ１はそれぞれ独立に、水素、ヒドロキシ、メトキシ、およびホスホ ノキシ、並びにグルコース、リボース、フラクトース、ガラクトース、マンノー ス及びこれえらの糖で構成されたジサッカライドから選択されヒドロキシ基を経 て結合ざれるサッカライドからなる群がら選択され； Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４はそれぞれ独立に水素、ヒドロキシ、メトキシ、及びホス ホノキシからなる群から選択ざれ、 点線はその結合が二量結合になりうることもあることを示し、 但し、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４の少なくとも１つはホスホノキシでなけ ればならないことを条件とする。〕を有するホスホリル化フラボノイド又は製薬 上受入れられる酸付加塩の抗ウイルス有効量を、処置を必要とする患者に投与す ることからなる、必要とする患者のレトロウイルス、単純庖疹ウィルス、及びサ イトメガロウイルス感染からなる群から選択ざれるウイルス感染を処置する方法 。
2. ２．該存在することもできる二重結合が存在せず、Ｒ及びＲ１−４がそれぞれ水 素、ヒドロキシ、メトキシ、又はホスホノキシ基のいずれかである請求項１に記 載の方法。
3. ３．該存在することもできる二重結合が存在せず、Ｒが水素である請求項１に記 載の方法。
4. ４．該存在することもできる二重結合が存在せずＲ４がメトキシである請求項１ に記載の方法。
5. ５．該存在することもできる二重結合が存在せず、Ｒが水素てあり、Ｒ４がメト キシであり、Ｒ１−３がそれぞれヒドロキシ又はホスホノキシ基てある請求項１ に記載の方法。