JPH0683677B2 - Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸の製造方法 - Google Patents
Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸の製造方法Info
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- JPH0683677B2 JPH0683677B2 JP21586586A JP21586586A JPH0683677B2 JP H0683677 B2 JPH0683677 B2 JP H0683677B2 JP 21586586 A JP21586586 A JP 21586586A JP 21586586 A JP21586586 A JP 21586586A JP H0683677 B2 JPH0683677 B2 JP H0683677B2
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- carbamyl
- amino acid
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は,5−置換ヒダントイン類をＤ−Ｎ−カルバミル
−α−アミノ酸に変換する能力を有するハンセニュラ
（Hansenula）属に属する微生物を用いることによりＤ
−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸に変換する方法に関
し，医薬，農薬の中間原料を極めて有利に製造すること
を目的とする。
−α−アミノ酸に変換する能力を有するハンセニュラ
（Hansenula）属に属する微生物を用いることによりＤ
−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸に変換する方法に関
し，医薬，農薬の中間原料を極めて有利に製造すること
を目的とする。
（従来の技術とその問題点） 医薬，農薬の中間原料としては例えば,D−フェニルグリ
シン,D−ｐ−ヒドロキシフェニルグリシンおよびＤ−バ
リンなどがある。これらのＤ−α−アミノ酸は化学合成
によって得られるDL体を光学分割して製造する方法が、
更には本発明のように微生物を利用して５−置換ヒダン
トイン類をＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸類に変換
させる方法としては特開昭53−91189号が知られてい
る。
シン,D−ｐ−ヒドロキシフェニルグリシンおよびＤ−バ
リンなどがある。これらのＤ−α−アミノ酸は化学合成
によって得られるDL体を光学分割して製造する方法が、
更には本発明のように微生物を利用して５−置換ヒダン
トイン類をＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸類に変換
させる方法としては特開昭53−91189号が知られてい
る。
本発明が解決しようとする問題点は従来のＤ−Ｎ−カル
バミル−α−アミノ酸の製造法よりも更に安価な良い製
造法を開発することにある。
バミル−α−アミノ酸の製造法よりも更に安価な良い製
造法を開発することにある。
（問題点を解決するための手段） 本発明者らのこの様な従来のＤ−Ｎ−カルバミル−α−
アミノ酸の製造に対してより効率の良い方法を見いだす
べく研究した結果，ハンセニュラ属に属する微生物が５
−置換ヒダントインを水解してＤ−Ｎ−カルバミル−α
−アミノ酸に変換する能力を有する事を初めて見い出
し，本発明を完成するに至った。
アミノ酸の製造に対してより効率の良い方法を見いだす
べく研究した結果，ハンセニュラ属に属する微生物が５
−置換ヒダントインを水解してＤ−Ｎ−カルバミル−α
−アミノ酸に変換する能力を有する事を初めて見い出
し，本発明を完成するに至った。
すなわち，本発明は，一般式（Ｉ） （式中,Rはアルキル基，置換アルキル基，フェニル基ま
たは置換フェニル基を示す）で表わされる５−置換ヒダ
ントイン類に,5−置換ヒダントイン類をＤ−Ｎ−カルバ
ミル−α−アミノ酸に変換する能力を有するハンセニュ
ラ（Hansenula）属に属する微生物の培養液，菌体また
は菌体処理物を作用させてＤ−Ｎ−カルバミル−α−ア
ミノ酸に変換させることを特徴とする，一般式（II） （式中,Rは前記に同じ）で表わされるＤ−Ｎ−カルバミ
ル−α−アミノ酸の製造方法である。
たは置換フェニル基を示す）で表わされる５−置換ヒダ
ントイン類に,5−置換ヒダントイン類をＤ−Ｎ−カルバ
ミル−α−アミノ酸に変換する能力を有するハンセニュ
ラ（Hansenula）属に属する微生物の培養液，菌体また
は菌体処理物を作用させてＤ−Ｎ−カルバミル−α−ア
ミノ酸に変換させることを特徴とする，一般式（II） （式中,Rは前記に同じ）で表わされるＤ−Ｎ−カルバミ
ル−α−アミノ酸の製造方法である。
また，光学活性のＮ−カルバミル−α−アミノ酸を亜硝
酸と反応させると，光学活性を保持したままのα−アミ
ノ酸が得られることは既に知られている。従って，本発
明の方法をこの方法と組合せることにより,D−α−アミ
ノ酸類を工業的に作ることができる。
酸と反応させると，光学活性を保持したままのα−アミ
ノ酸が得られることは既に知られている。従って，本発
明の方法をこの方法と組合せることにより,D−α−アミ
ノ酸類を工業的に作ることができる。
本発明の目的のために使用されうる微生物は，例えば代
表例としては，ハンセニュラ シフェリ（Hansenula ci
ferrii），ハンセニュラ ヘンリッシー（Hansenula he
nricii），ハンセニュラ ノフェルメンタス（Hansenul
a nonfermentaus），ハンセニュラ ポリモルファ（Han
senula polymorpha）などが挙げられ，これらは本発明
の目的に使用されうるかぎり自然界に存在する野生株お
よび公的な微生物保存機関に保存されている微生物が用
いられる。
表例としては，ハンセニュラ シフェリ（Hansenula ci
ferrii），ハンセニュラ ヘンリッシー（Hansenula he
nricii），ハンセニュラ ノフェルメンタス（Hansenul
a nonfermentaus），ハンセニュラ ポリモルファ（Han
senula polymorpha）などが挙げられ，これらは本発明
の目的に使用されうるかぎり自然界に存在する野生株お
よび公的な微生物保存機関に保存されている微生物が用
いられる。
本発明で用いられる５−置換ヒダントイン類とは，ヒダ
ントインの５位の水素原子がアルキル基，フェエル基ま
たはそれらの置換誘導体でありアルキル基またはフェエ
ル基に付随する置換基としては，例えばハロゲン原子，
アルキルメルカプト基，ヒドロキシル基，アルコキシ
基，アミノ基，インドリル基，アルコキシカルボニル基
などがある。
ントインの５位の水素原子がアルキル基，フェエル基ま
たはそれらの置換誘導体でありアルキル基またはフェエ
ル基に付随する置換基としては，例えばハロゲン原子，
アルキルメルカプト基，ヒドロキシル基，アルコキシ
基，アミノ基，インドリル基，アルコキシカルボニル基
などがある。
本微生物の培養に用いられる培地は通常資化しうる炭素
源，窒素源および微生物の生育に必要な無機栄養素を含
有させる通常の培地である。培養条件は好気的条件下に
てpH ３〜9,温度15〜40℃の適当の範囲に制御しつつ行
えばよい。５−置換ヒダントインのＤ−Ｎ−カルバミル
−α−アミノ酸に変換せしめる方法は前記の微生物の培
養液，菌体または菌体処理物の形態で使用できる。微生
物の培養液をそのまま使用してよいが培養液中の成分が
障害になる場合や菌体量を多く使用したい場合には，培
養液から分離した菌体を用いればよい。
源，窒素源および微生物の生育に必要な無機栄養素を含
有させる通常の培地である。培養条件は好気的条件下に
てpH ３〜9,温度15〜40℃の適当の範囲に制御しつつ行
えばよい。５−置換ヒダントインのＤ−Ｎ−カルバミル
−α−アミノ酸に変換せしめる方法は前記の微生物の培
養液，菌体または菌体処理物の形態で使用できる。微生
物の培養液をそのまま使用してよいが培養液中の成分が
障害になる場合や菌体量を多く使用したい場合には，培
養液から分離した菌体を用いればよい。
反応基質である５−置換ヒダントインに微生物の培養
液，菌体または菌体処理物を作用させるには通常，水性
媒体中で行う方法が用いられ，反応基質の濃度は0.1〜1
0重量％の濃度で用いられる。また反応における温度お
よびpHは使用する微生物の５−置換ヒダントインをＤ−
Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸へ変換する能力を持つ酵
素の至適温度および至適pHが採用されるが通常，温度は
15〜60℃,pHは９〜11の範囲である。反応溶液中のpHは
反応の進行に伴って低下するので適時中和剤を添加して
前記の至適pHに保持することが望ましい。中和剤として
は，水酸化ナトリウム，水酸化カリウム，アンモニア，
炭酸ナトリウムなどが適当である。このようにして得ら
れたＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸を反応溶液中か
らの分離にはイオン交換樹脂などを用いる通常の方法が
採用できる。生成したＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ
酸の定量はｐ−ジメチルアミノベンズアルデハイドを用
いる比色法および液体クロマトグラフィで測定する方法
を用いた。光学異性体は結晶の比施光度の測定および光
学分割カラム（キラルパックWH…ダイセル社製）を用い
る液体クロマトグラフィーによってD,Lを確認した。
液，菌体または菌体処理物を作用させるには通常，水性
媒体中で行う方法が用いられ，反応基質の濃度は0.1〜1
0重量％の濃度で用いられる。また反応における温度お
よびpHは使用する微生物の５−置換ヒダントインをＤ−
Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸へ変換する能力を持つ酵
素の至適温度および至適pHが採用されるが通常，温度は
15〜60℃,pHは９〜11の範囲である。反応溶液中のpHは
反応の進行に伴って低下するので適時中和剤を添加して
前記の至適pHに保持することが望ましい。中和剤として
は，水酸化ナトリウム，水酸化カリウム，アンモニア，
炭酸ナトリウムなどが適当である。このようにして得ら
れたＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸を反応溶液中か
らの分離にはイオン交換樹脂などを用いる通常の方法が
採用できる。生成したＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ
酸の定量はｐ−ジメチルアミノベンズアルデハイドを用
いる比色法および液体クロマトグラフィで測定する方法
を用いた。光学異性体は結晶の比施光度の測定および光
学分割カラム（キラルパックWH…ダイセル社製）を用い
る液体クロマトグラフィーによってD,Lを確認した。
（発明の作用および効果） 本発明によれば，微生物を用いることにより５−置換ヒ
ダントインから容易に高収率でＤ−Ｎ−カルバミル−α
−アミノ酸を取得することができる。即ち，本発明にお
いてはハンセニュラ属に属する微生物を用いて５−置換
ヒダントインから効率よくＤ−Ｎ−カルバミル−α−ア
ミノ酸に変換することが出来,D−Ｎ−カルバミル−α−
アミノ酸の製造方法としては極めて有利な方法である。
ダントインから容易に高収率でＤ−Ｎ−カルバミル−α
−アミノ酸を取得することができる。即ち，本発明にお
いてはハンセニュラ属に属する微生物を用いて５−置換
ヒダントインから効率よくＤ−Ｎ−カルバミル−α−ア
ミノ酸に変換することが出来,D−Ｎ−カルバミル−α−
アミノ酸の製造方法としては極めて有利な方法である。
（実施例） 以下の例により本発明を具体的に説明する。
実施例−１ グリコース20g/,DL−５−フェニルヒダントイン5g/
，マルツエキス1g/，酵母エキス3g/，KH2PO4 1.
5g/，MgSO4・7H2O 0.5g/，Cacl2・2H2O 0.33g/
（pH6）の培地を250ml三角フラスコに20ml入れ120℃,15
分間殺菌した。
，マルツエキス1g/，酵母エキス3g/，KH2PO4 1.
5g/，MgSO4・7H2O 0.5g/，Cacl2・2H2O 0.33g/
（pH6）の培地を250ml三角フラスコに20ml入れ120℃,15
分間殺菌した。
これに酵母YM培地で28℃,24時間培養したハンセニュラ
ポリモルファ（NRRL Ｙ−2423）を１白金耳接種し,2
8℃24時間培養した。この培養液を遠心分離により菌体
を採取し，培養液と同量の殺菌した生理食塩水にて１回
洗浄し菌体を集めた。
ポリモルファ（NRRL Ｙ−2423）を１白金耳接種し,2
8℃24時間培養した。この培養液を遠心分離により菌体
を採取し，培養液と同量の殺菌した生理食塩水にて１回
洗浄し菌体を集めた。
この菌体をDL−５−イソプロピルヒダントイン10g/を
含む0.1Mトリスバッファ（pH9.0）…終末5ml…に30g/
になる様に添加し32℃で24時間反応した。
含む0.1Mトリスバッファ（pH9.0）…終末5ml…に30g/
になる様に添加し32℃で24時間反応した。
生成したＮ−カルバミルバリンを前述の比色法で測定
し,5.2mg/mlの生成量を認め、またＮ−カルバミルバリ
ンを分離精製し施光度を測定した結果,D体であって
〔α〕Ｄ 25は−14.1（Ｃ＝2.6 1N−NH4OH）を認めた。
し,5.2mg/mlの生成量を認め、またＮ−カルバミルバリ
ンを分離精製し施光度を測定した結果,D体であって
〔α〕Ｄ 25は−14.1（Ｃ＝2.6 1N−NH4OH）を認めた。
実施例−２ 実施例−１と同様な方法で表−１に示す各種DL−５−置
換ヒダントインを反応させた結果を表−１に示した。ま
た生成した各種のＮ−カルバミル−α−アミノ酸は光学
分割カラムによる光学活性測定により，全ての場合Ｄ体
であった。
換ヒダントインを反応させた結果を表−１に示した。ま
た生成した各種のＮ−カルバミル−α−アミノ酸は光学
分割カラムによる光学活性測定により，全ての場合Ｄ体
であった。
実施例−３ 表−２に示す各種微生物を実施例−１と同様に調整して
得られた菌体を,DL−５−イソプロピルヒダントイン10g
/を含む 0.1Mトリスバッファ（pH9.0）…終末5ml…
に30g/になるように添加し,32℃,24時間反応した。
得られた菌体を,DL−５−イソプロピルヒダントイン10g
/を含む 0.1Mトリスバッファ（pH9.0）…終末5ml…
に30g/になるように添加し,32℃,24時間反応した。
生成したＮ−カルバミル−α−アミノ酸は前記の方法に
て測定した。また光学分割カラムによる光学活性測定に
より生成Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸は全てＤ体であ
った。
て測定した。また光学分割カラムによる光学活性測定に
より生成Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸は全てＤ体であ
った。
Claims (1)
- 【請求項１】 一般式（Ｉ） （式中,Rはアルキル基，置換アルキル基，フェニル基ま
たは置換フェニル基を示す）で表わされ５−置換ヒダン
トイン類に,5−置換ヒダントイン類をＤ−Ｎ−カルバミ
ル−α−アミノ酸に変換する能力を有するハンセニュラ
（Hansenula）属に属する微生物の培養液，菌体または
菌体処理物を作用させてＤ−Ｎ−カルバミル−α−アミ
ノ酸に変換させることを特徴とする，一般式（II） （式中,Rは前記に同じ）で表わされるＤ−Ｎ−カルバミ
ル−α−アミノ酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21586586A JPH0683677B2 (ja) | 1986-09-16 | 1986-09-16 | Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21586586A JPH0683677B2 (ja) | 1986-09-16 | 1986-09-16 | Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6371196A JPS6371196A (ja) | 1988-03-31 |
| JPH0683677B2 true JPH0683677B2 (ja) | 1994-10-26 |
Family
ID=16679551
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21586586A Expired - Lifetime JPH0683677B2 (ja) | 1986-09-16 | 1986-09-16 | Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0683677B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2002022844A1 (ja) * | 2000-09-18 | 2004-01-22 | 鐘淵化学工業株式会社 | 光学活性含フッ素フェニルアラニン誘導体およびその製造法 |
-
1986
- 1986-09-16 JP JP21586586A patent/JPH0683677B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6371196A (ja) | 1988-03-31 |
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