JPH05260972A - 核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法 - Google Patents
核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法Info
- Publication number
- JPH05260972A JPH05260972A JP4092435A JP9243592A JPH05260972A JP H05260972 A JPH05260972 A JP H05260972A JP 4092435 A JP4092435 A JP 4092435A JP 9243592 A JP9243592 A JP 9243592A JP H05260972 A JPH05260972 A JP H05260972A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- group
- anchor
- amplification
- binding
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 固相担体上の核酸プローブ量を増幅して、実
際のＤＮＡ結合タンパク質の分離、精製や遺伝子クロー
ニング等にも充分に使用することのできる核酸増幅固相
化アンカー及びその調整方法を得る。 【構成】 固相担体上に形成された結合部位に増幅基を
備え、該増幅基の分岐した末端の複数の結合基と、所望
の核酸プローブを結合させる核酸断片の一端に配された
官能基とを結合したものであるため、増幅基を種々選択
することにより、一つの結合部位から数百〜数千以上も
の多数の結合基が形成されることとなり、多数の核酸プ
ローブを搭載することが可能となる。
際のＤＮＡ結合タンパク質の分離、精製や遺伝子クロー
ニング等にも充分に使用することのできる核酸増幅固相
化アンカー及びその調整方法を得る。 【構成】 固相担体上に形成された結合部位に増幅基を
備え、該増幅基の分岐した末端の複数の結合基と、所望
の核酸プローブを結合させる核酸断片の一端に配された
官能基とを結合したものであるため、増幅基を種々選択
することにより、一つの結合部位から数百〜数千以上も
の多数の結合基が形成されることとなり、多数の核酸プ
ローブを搭載することが可能となる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ＤＮＡ結合タンパク質
の分離、精製や遺伝子クローニング等で必要な多量のＤ
ＮＡを固相化又は脱固相化することのできる核酸増幅固
相化アンカー及びその調整方法に関するものである。
の分離、精製や遺伝子クローニング等で必要な多量のＤ
ＮＡを固相化又は脱固相化することのできる核酸増幅固
相化アンカー及びその調整方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年さかんに行われているｃＤＮＡクロ
ーニング法においては、まずｍＲＮＡを抽出、精製する
ことが必要となる。最近ではこの目的のために一本鎖の
オリゴｄＴを固相に結合したものが利用できるが、これ
に続くｃＤＮＡの合成過程の前にｍＲＮＡを一旦解離精
製しなければならない。この解離精製はある程度ｍＲＮ
Ａの分解を伴うと共に回収率を低下させる原因となり、
従来のプレートスクリーニングの域を脱していなかっ
た。
ーニング法においては、まずｍＲＮＡを抽出、精製する
ことが必要となる。最近ではこの目的のために一本鎖の
オリゴｄＴを固相に結合したものが利用できるが、これ
に続くｃＤＮＡの合成過程の前にｍＲＮＡを一旦解離精
製しなければならない。この解離精製はある程度ｍＲＮ
Ａの分解を伴うと共に回収率を低下させる原因となり、
従来のプレートスクリーニングの域を脱していなかっ
た。
【０００３】また、特定の塩基配列を持つ二本鎖ＤＮＡ
に結合するタンパク質を単離する場合や、核酸プローブ
により目的ＤＮＡを検出単離する場合に、効率よく、し
かも簡単に二本鎖ＤＮＡを固相担体に結合させることは
大変有用な技術であるにもかかわらず、未だこのような
技術方法はない。
に結合するタンパク質を単離する場合や、核酸プローブ
により目的ＤＮＡを検出単離する場合に、効率よく、し
かも簡単に二本鎖ＤＮＡを固相担体に結合させることは
大変有用な技術であるにもかかわらず、未だこのような
技術方法はない。
【０００４】更に、固相担体に結合したオリゴｄＴ（固
相化オリゴｄＴ）を用いてｍＲＮＡを単離し、これを基
にして、ｃＤＮＡを合成することは最近さかんに行われ
ているが、この場合、一旦ｍＲＮＡを固相化オリゴｄＴ
より解離して精製した後、ｃＤＮＡを合成する。もし、
これを固相化状態で行えば、効率及び収率が格段に上昇
するわけであるが、従来の固相化オリゴｄＴでは、最終
産物である二本鎖ｃＤＮＡを簡単に固相担体より単離で
きないという問題があった。
相化オリゴｄＴ）を用いてｍＲＮＡを単離し、これを基
にして、ｃＤＮＡを合成することは最近さかんに行われ
ているが、この場合、一旦ｍＲＮＡを固相化オリゴｄＴ
より解離して精製した後、ｃＤＮＡを合成する。もし、
これを固相化状態で行えば、効率及び収率が格段に上昇
するわけであるが、従来の固相化オリゴｄＴでは、最終
産物である二本鎖ｃＤＮＡを簡単に固相担体より単離で
きないという問題があった。
【０００５】そこで、固相担体と核酸とを酵素的につな
ぐことのできる核酸固相化アンカー及びその調整方法が
提案された（特開平０３−１４７８００号）。
ぐことのできる核酸固相化アンカー及びその調整方法が
提案された（特開平０３−１４７８００号）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、例えば
クローニングに固相法を実用化する場合には、使用する
核酸プローブ及び所望の遺伝子断片は常に２本鎖のＤＮ
Ａである。また、固相上の核酸プローブは固相担体上に
結合されており、対する所望の遺伝子断片は溶液中に懸
濁されている。
クローニングに固相法を実用化する場合には、使用する
核酸プローブ及び所望の遺伝子断片は常に２本鎖のＤＮ
Ａである。また、固相上の核酸プローブは固相担体上に
結合されており、対する所望の遺伝子断片は溶液中に懸
濁されている。
【０００７】このため、例えば所望の遺伝子断片を固相
担体上の核酸プローブとハイブリダイズする場合には、
所望の遺伝子断片からの一本鎖ＤＮＡが固相担体上の核
酸プローブ（一本鎖）とハイブリダイズする前に、自分
自身の相補鎖ＤＮＡとアニーリングする確率の方が極め
て高いこととなる。
担体上の核酸プローブとハイブリダイズする場合には、
所望の遺伝子断片からの一本鎖ＤＮＡが固相担体上の核
酸プローブ（一本鎖）とハイブリダイズする前に、自分
自身の相補鎖ＤＮＡとアニーリングする確率の方が極め
て高いこととなる。
【０００８】従って、固相担体上の核酸プローブにハイ
ブリダイズする量が圧倒的に少なく、例えばゲル電気泳
動では精度のよい検出機器を用いなければ検出不能であ
り、実際のＤＮＡ結合タンパク質の分離、精製や遺伝子
クローニング等には、ほとんど用いることができなかっ
た。
ブリダイズする量が圧倒的に少なく、例えばゲル電気泳
動では精度のよい検出機器を用いなければ検出不能であ
り、実際のＤＮＡ結合タンパク質の分離、精製や遺伝子
クローニング等には、ほとんど用いることができなかっ
た。
【０００９】本発明は、固相担体上の核酸プローブ量を
増幅して、実際のＤＮＡ結合タンパク質の分離、精製や
遺伝子クローニング等にも充分に使用することのできる
核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法を得ることを
目的とする。
増幅して、実際のＤＮＡ結合タンパク質の分離、精製や
遺伝子クローニング等にも充分に使用することのできる
核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法を得ることを
目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本請求項１に記載の発明
に係る核酸増幅固相化アンカーでは、所望の核酸プロー
ブを結合させる核酸断片の一端に配された官能基と、所
望の固相担体上に形成され且つ前記官能基と結合する結
合基とを結合した核酸固相化アンカーにおいて、分岐し
た末端に複数の前記結合基を備えた増幅基を、前記固相
担体上に形成された結合部位に備えたものである。
に係る核酸増幅固相化アンカーでは、所望の核酸プロー
ブを結合させる核酸断片の一端に配された官能基と、所
望の固相担体上に形成され且つ前記官能基と結合する結
合基とを結合した核酸固相化アンカーにおいて、分岐し
た末端に複数の前記結合基を備えた増幅基を、前記固相
担体上に形成された結合部位に備えたものである。
【００１１】本請求項２に記載の発明に係る核酸増幅固
相化アンカーでは、前記請求項１に記載の核酸固相化ア
ンカーにおいて、前記増幅基が、単量体中に前記官能基
と結合する結合基を有した重合物からなるものである。
相化アンカーでは、前記請求項１に記載の核酸固相化ア
ンカーにおいて、前記増幅基が、単量体中に前記官能基
と結合する結合基を有した重合物からなるものである。
【００１２】本請求項３に記載の発明に係る核酸増幅固
相化アンカーでは、前記請求項１又は２に記載の核酸固
相化アンカーにおいて、前記増幅基が、ポリペプチド
系、セルロース系、ポリビニルアルコール系、アクリル
系、又はビニル系の何れかから選ばれた重合物からなる
ものである。
相化アンカーでは、前記請求項１又は２に記載の核酸固
相化アンカーにおいて、前記増幅基が、ポリペプチド
系、セルロース系、ポリビニルアルコール系、アクリル
系、又はビニル系の何れかから選ばれた重合物からなる
ものである。
【００１３】本請求項４に記載の発明に係る核酸増幅固
相化アンカーでは、前記請求項１〜３の何れかに記載の
核酸固相化アンカーにおいて、前記増幅基がポリリジン
からなり、前記ポリリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末
端に、前記核酸断片を結合させたものである。
相化アンカーでは、前記請求項１〜３の何れかに記載の
核酸固相化アンカーにおいて、前記増幅基がポリリジン
からなり、前記ポリリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末
端に、前記核酸断片を結合させたものである。
【００１４】更に、本請求項５に記載の発明に係る核酸
増幅固相化アンカーの調整方法では、所望の核酸プロー
ブを結合させる核酸断片の一端に官能基を配し、固相担
体上に前記官能基と結合する結合基を形成し、前記官能
基を固相担体上の結合基に結合させる核酸固相化アンカ
ーの調整方法において、前記固相担体を活性化して形成
された結合部位に、分岐した末端に複数の前記結合基を
形成する増幅基を配する方法である。
増幅固相化アンカーの調整方法では、所望の核酸プロー
ブを結合させる核酸断片の一端に官能基を配し、固相担
体上に前記官能基と結合する結合基を形成し、前記官能
基を固相担体上の結合基に結合させる核酸固相化アンカ
ーの調整方法において、前記固相担体を活性化して形成
された結合部位に、分岐した末端に複数の前記結合基を
形成する増幅基を配する方法である。
【００１５】具体的な実施態様として、本請求項６に記
載の発明に係る核酸増幅固相化アンカーの調整方法で
は、前記請求項５に記載の核酸増幅固相化アンカーの調
整方法において、前記増幅基として、単量体中に前記官
能基と結合する結合基を有した重合物を配する方法であ
る。
載の発明に係る核酸増幅固相化アンカーの調整方法で
は、前記請求項５に記載の核酸増幅固相化アンカーの調
整方法において、前記増幅基として、単量体中に前記官
能基と結合する結合基を有した重合物を配する方法であ
る。
【００１６】更に、本請求項７に記載の発明に係る核酸
増幅固相化アンカーの調整方法では、前記請求項５又は
６に記載の核酸増幅固相化アンカーの調整方法におい
て、前記増幅基として、ポリペプチド系、セルロース
系、ポリビニルアルコール系、アクリル系、又はビニル
系の何れかから選ばれた重合物を配する方法である。
増幅固相化アンカーの調整方法では、前記請求項５又は
６に記載の核酸増幅固相化アンカーの調整方法におい
て、前記増幅基として、ポリペプチド系、セルロース
系、ポリビニルアルコール系、アクリル系、又はビニル
系の何れかから選ばれた重合物を配する方法である。
【００１７】また、本請求項８に記載の発明に係る核酸
増幅固相化アンカーの調整方法では、前記請求項５〜７
の何れかに記載の核酸増幅固相化アンカーの調整方法に
おいて、前記増幅基として、ポリリジンを配し、前記ポ
リリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末端に、前記核酸断
片を結合する方法である。
増幅固相化アンカーの調整方法では、前記請求項５〜７
の何れかに記載の核酸増幅固相化アンカーの調整方法に
おいて、前記増幅基として、ポリリジンを配し、前記ポ
リリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末端に、前記核酸断
片を結合する方法である。
【００１８】
【作用】本発明においては、固相担体上に形成された結
合部位に増幅基を備え、該増幅基の分岐した末端の複数
の結合基と、所望の核酸プローブを結合させる核酸断片
の一端に配された官能基とを結合したものであるため、
増幅基を種々選択することにより、一つの結合部位から
数百〜数千以上もの多数の結合基が形成されることとな
り、多数の核酸プローブを搭載することが可能となる。
合部位に増幅基を備え、該増幅基の分岐した末端の複数
の結合基と、所望の核酸プローブを結合させる核酸断片
の一端に配された官能基とを結合したものであるため、
増幅基を種々選択することにより、一つの結合部位から
数百〜数千以上もの多数の結合基が形成されることとな
り、多数の核酸プローブを搭載することが可能となる。
【００１９】即ち、本発明による核酸増幅固相化アンカ
ーは、後述するようにアンカー内の核酸断片や制限酵素
の種類を適当に選べば、如何なる二本鎖ＤＮＡ、一本鎖
ＤＮＡ，ＲＮＡプローブを、容易にしかも多量に固相化
できる。
ーは、後述するようにアンカー内の核酸断片や制限酵素
の種類を適当に選べば、如何なる二本鎖ＤＮＡ、一本鎖
ＤＮＡ，ＲＮＡプローブを、容易にしかも多量に固相化
できる。
【００２０】従って、例えば２本鎖の遺伝子断片中から
所望の遺伝子をハイブリダイズして選択する場合にも、
固相担体上に結合される所望の核酸プローブにハイブリ
ダイズする量が多くなり、例えば通常のアガローズゲル
電気泳動による検出に充分となり、実際のＤＮＡ結合タ
ンパク質の分離、精製や遺伝子クローニング等にも充分
に使用することができる。
所望の遺伝子をハイブリダイズして選択する場合にも、
固相担体上に結合される所望の核酸プローブにハイブリ
ダイズする量が多くなり、例えば通常のアガローズゲル
電気泳動による検出に充分となり、実際のＤＮＡ結合タ
ンパク質の分離、精製や遺伝子クローニング等にも充分
に使用することができる。
【００２１】固相担体上の増幅基は前記官能基を分子中
に複数個有するのであれば、種々のものが使用可能とな
る。また、所望の核酸プローブを結合させる核酸断片の
一端に備えた官能基を種々選択するならば、増幅基の分
岐した末端に形成される結合基は、例えば、−ＯＨ基，
−ＮＨ2 基，−ＣＯＯＨ基，−ＣＯＮＨ2 基，−ＯＣＨ
3 基等のように種々の結合基を取り得る。
に複数個有するのであれば、種々のものが使用可能とな
る。また、所望の核酸プローブを結合させる核酸断片の
一端に備えた官能基を種々選択するならば、増幅基の分
岐した末端に形成される結合基は、例えば、−ＯＨ基，
−ＮＨ2 基，−ＣＯＯＨ基，−ＣＯＮＨ2 基，−ＯＣＨ
3 基等のように種々の結合基を取り得る。
【００２２】具体的な増幅基は、単量体中に前記官能基
と結合する結合基を有した重合物からなるものである。
更に具体的には、例えば、ポリグルタミン酸，ポリリジ
ン，セリシン，フォブロイン，ケラチン，コラーゲン等
の分子中に−ＮＨ2 基を有するポリペプチド系、カルボ
キシメチルセルロース，アルギン酸，キトサン等の分子
中に−ＯＨ基，−ＮＨ2 基，−ＣＯＯＨ基を有するセル
ロース系はもとより、ポリビニルアルコール，エチレン
・ビニルアクロール共重合体等のポリビニルカルコール
系、ポリメタクリル酸ヒドロキシエチル，ポリアクリル
酸，ポリアクリルアミド等のアクリル系、及びポリ−Ｎ
−ビニルピロリドン，ポリビニルメチルエーテル等のビ
ニル系のものも使用することができる。
と結合する結合基を有した重合物からなるものである。
更に具体的には、例えば、ポリグルタミン酸，ポリリジ
ン，セリシン，フォブロイン，ケラチン，コラーゲン等
の分子中に−ＮＨ2 基を有するポリペプチド系、カルボ
キシメチルセルロース，アルギン酸，キトサン等の分子
中に−ＯＨ基，−ＮＨ2 基，−ＣＯＯＨ基を有するセル
ロース系はもとより、ポリビニルアルコール，エチレン
・ビニルアクロール共重合体等のポリビニルカルコール
系、ポリメタクリル酸ヒドロキシエチル，ポリアクリル
酸，ポリアクリルアミド等のアクリル系、及びポリ−Ｎ
−ビニルピロリドン，ポリビニルメチルエーテル等のビ
ニル系のものも使用することができる。
【００２３】また、所望の核酸プローブを結合させる核
酸断片の一端に備えた官能基は、具体的には、固相担体
上の結合基との結合が容易で、固相担体及び核酸との結
合時に核酸の変性を生じないものであればよい。
酸断片の一端に備えた官能基は、具体的には、固相担体
上の結合基との結合が容易で、固相担体及び核酸との結
合時に核酸の変性を生じないものであればよい。
【００２４】また、本発明の核酸増幅固相化アンカー
は、固相担体を活性化して結合部位を形成し、この結合
部位に増幅基を配し、この増幅基の分岐した末端に複数
の結合基を形成し、更にこれら結合基に予め所望の核酸
プローブを結合させる核酸断片の一端に形成した官能基
を結合する調整方法によって簡便に得ることができ、所
望の核酸プローブを結合させる核酸断片であれば、如何
なるものでも核酸増幅固相化アンカーとして使用でき
る。更に、予め所望の核酸プローブを結合させた核酸断
片を用いてもよい。
は、固相担体を活性化して結合部位を形成し、この結合
部位に増幅基を配し、この増幅基の分岐した末端に複数
の結合基を形成し、更にこれら結合基に予め所望の核酸
プローブを結合させる核酸断片の一端に形成した官能基
を結合する調整方法によって簡便に得ることができ、所
望の核酸プローブを結合させる核酸断片であれば、如何
なるものでも核酸増幅固相化アンカーとして使用でき
る。更に、予め所望の核酸プローブを結合させた核酸断
片を用いてもよい。
【００２５】尚、具体的な調整方法は、選択する固相担
体，結合部位の形成，増幅基，結合基，及び官能基の種
類によって細かに相違することは言うまでもないが、具
体的な実施例として、増幅基としてポリリジンを配し、
前記ポリリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末端に、前記
核酸断片を結合する方法を後述する実施例で開示する。
体，結合部位の形成，増幅基，結合基，及び官能基の種
類によって細かに相違することは言うまでもないが、具
体的な実施例として、増幅基としてポリリジンを配し、
前記ポリリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末端に、前記
核酸断片を結合する方法を後述する実施例で開示する。
【００２６】ところで、この後述する実施例では、固相
担体として非多孔質性のビーズ状の樹脂担体を用い、こ
れをアルカリ条件下、ビスオキシラン（１，４−ブタン
ジオールジグリシジルエーテル、アルドリッチ社製）に
て、固相担体表面の−ＯＨ基を活性化し、この活性化−
ＯＨ基に増幅基としてポリリジンを配し、更にポリリジ
ンの−ＮＨ2 基末端の各々２−イミノチオランを配して
−ＳＨ基を結合基とした。この−ＳＨ基に結合する官能
基として、スルフォサクシニミジル４−（ｐ−マレイミ
ドフェニル）−ブチレートのマレイミド基を用いた。即
ち、予め所望の核酸プローブを結合させる核酸断片の
５’末端の−ＮＨ2 基にスルフォサクシニミジル４−
（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチレートを結合させ
て、末端にマレイミド基を備えたものを前述の固相担体
の−ＳＨ基と結合させて核酸増幅固相化アンカーを得
た。
担体として非多孔質性のビーズ状の樹脂担体を用い、こ
れをアルカリ条件下、ビスオキシラン（１，４−ブタン
ジオールジグリシジルエーテル、アルドリッチ社製）に
て、固相担体表面の−ＯＨ基を活性化し、この活性化−
ＯＨ基に増幅基としてポリリジンを配し、更にポリリジ
ンの−ＮＨ2 基末端の各々２−イミノチオランを配して
−ＳＨ基を結合基とした。この−ＳＨ基に結合する官能
基として、スルフォサクシニミジル４−（ｐ−マレイミ
ドフェニル）−ブチレートのマレイミド基を用いた。即
ち、予め所望の核酸プローブを結合させる核酸断片の
５’末端の−ＮＨ2 基にスルフォサクシニミジル４−
（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチレートを結合させ
て、末端にマレイミド基を備えたものを前述の固相担体
の−ＳＨ基と結合させて核酸増幅固相化アンカーを得
た。
【００２７】尚、所望の核酸プローブを結合させる核酸
断片は、該核酸断片に所望の制限酵素切断部位が備わっ
ていれば、例えば、特定の制限酵素により切断後、生成
する末端構造と対向する末端を持つ二本鎖、一本鎖の所
望の核酸プローブを、リガーゼ等の酵素をもってつなぐ
ことができる。固相化された核酸プローブは、固相化さ
れなかった物質と分離が容易であり、使用目的に応じた
高収率、高効率が達成できる。
断片は、該核酸断片に所望の制限酵素切断部位が備わっ
ていれば、例えば、特定の制限酵素により切断後、生成
する末端構造と対向する末端を持つ二本鎖、一本鎖の所
望の核酸プローブを、リガーゼ等の酵素をもってつなぐ
ことができる。固相化された核酸プローブは、固相化さ
れなかった物質と分離が容易であり、使用目的に応じた
高収率、高効率が達成できる。
【００２８】更に、核酸断片の他端にポリｄＴ配列を備
わっていれば、ｍＲＮＡのポリＡ鎖と容易に結合するこ
とから、逆転写酵素等の酵素により、直接ｃＤＮＡライ
ブラリーを作製し、所望の核酸プローブとして用いるこ
とが容易となる。作製されたｃＤＮＡライブラリーは、
固相化されなかった物質と分離が容易であるため、容易
にベクター等に挿入を行うことができる。
わっていれば、ｍＲＮＡのポリＡ鎖と容易に結合するこ
とから、逆転写酵素等の酵素により、直接ｃＤＮＡライ
ブラリーを作製し、所望の核酸プローブとして用いるこ
とが容易となる。作製されたｃＤＮＡライブラリーは、
固相化されなかった物質と分離が容易であるため、容易
にベクター等に挿入を行うことができる。
【００２９】尚、官能基と結合基との結合は、前述の他
にも官能基をジアゾ結合によって固相担体に結合する方
法、カルボジイミドを介してカプリングする方法、ビス
オキシランと直接カップリングする方法等がある。即
ち、前記官能基を容易に結合させ、固相担体及び核酸と
の結合時に核酸の変性を生じないものであればよい。
にも官能基をジアゾ結合によって固相担体に結合する方
法、カルボジイミドを介してカプリングする方法、ビス
オキシランと直接カップリングする方法等がある。即
ち、前記官能基を容易に結合させ、固相担体及び核酸と
の結合時に核酸の変性を生じないものであればよい。
【００３０】
（実施例１．ポリリジン型核酸増幅固相化アンカーの概
略）図１は本発明の一実施例のポリリジン型核酸増幅固
相化アンカーの概略構成を模式的に示す説明図である。
図に示すように、ポリリジン型核酸増幅固相化アンカー
は、非多孔質性のビーズ状の樹脂製ＮＰＲの固相担体
(1) を以下のように、アルカリ条件下でビスオキシラン
にて、固相担体表面の−ＯＨ基を活性化し、この活性化
部位(2) にポリリジンの増幅基(3) を繋ぎ、更にポリリ
ジンの−ＮＨ2基末端の各々に２−イミノチオランを配
して形成した−ＳＨ基の結合基(4) と、予め所望の核酸
プローブを結合させる核酸断片(5) の５’末端の−ＮＨ
2 基にスルフォサクシニミジル４−（ｐ−マレイミドフ
ェニル）−ブチレートを結合させて末端に形成されたマ
レイミド基の官能基(6) とを結合させたものである。
略）図１は本発明の一実施例のポリリジン型核酸増幅固
相化アンカーの概略構成を模式的に示す説明図である。
図に示すように、ポリリジン型核酸増幅固相化アンカー
は、非多孔質性のビーズ状の樹脂製ＮＰＲの固相担体
(1) を以下のように、アルカリ条件下でビスオキシラン
にて、固相担体表面の−ＯＨ基を活性化し、この活性化
部位(2) にポリリジンの増幅基(3) を繋ぎ、更にポリリ
ジンの−ＮＨ2基末端の各々に２−イミノチオランを配
して形成した−ＳＨ基の結合基(4) と、予め所望の核酸
プローブを結合させる核酸断片(5) の５’末端の−ＮＨ
2 基にスルフォサクシニミジル４−（ｐ−マレイミドフ
ェニル）−ブチレートを結合させて末端に形成されたマ
レイミド基の官能基(6) とを結合させたものである。
【００３１】このため、一つの結合部位(2) から数百〜
数千以上もの多数の結合基(4) が形成されることとな
り、多数の核酸プローブを搭載することが可能となり、
例えば２本鎖の遺伝子断片中から所望の遺伝子をハイブ
リダイズして選択する場合にも、固相担体にハイブリダ
イズする量が多くなり、例えば通常のアガローズゲル電
気泳動による検出に充分となり、実際のＤＮＡ結合タン
パク質の分離、精製や遺伝子クローニング等にも充分に
使用することができる。
数千以上もの多数の結合基(4) が形成されることとな
り、多数の核酸プローブを搭載することが可能となり、
例えば２本鎖の遺伝子断片中から所望の遺伝子をハイブ
リダイズして選択する場合にも、固相担体にハイブリダ
イズする量が多くなり、例えば通常のアガローズゲル電
気泳動による検出に充分となり、実際のＤＮＡ結合タン
パク質の分離、精製や遺伝子クローニング等にも充分に
使用することができる。
【００３２】所望の核酸プローブを結合させる核酸断片
(5) は種々のものが取り得る。例えば、図２は図１の核
酸断片(5) の一実施例の塩基配列を示す説明図であり、
Ａ図，Ｂ図，Ｃ図共に制限酵素切断部位（BamHＩ， Not
Ｉ，EcoRＩ）を有し、この切断部位に所望の核酸プロー
ブを挿入する。
(5) は種々のものが取り得る。例えば、図２は図１の核
酸断片(5) の一実施例の塩基配列を示す説明図であり、
Ａ図，Ｂ図，Ｃ図共に制限酵素切断部位（BamHＩ， Not
Ｉ，EcoRＩ）を有し、この切断部位に所望の核酸プロー
ブを挿入する。
【００３３】（実施例２．ポリリジン型核酸増幅固相化
アンカーの調整）以下に、ポリリジン型核酸増幅固相化
アンカーの調整の一実施例の方法を示す。図３は調整に
よる固相担体側の反応の状態を示す説明図である。図に
示すように、(1) 固相担体ＮＰＲ（Non Porus Resin 東
ソー社製）１ｍｌをＡ液（２０％ＤＭＳＯ，０．２５Ｎ
ＮａＯＨ）で遠心洗浄した。
アンカーの調整）以下に、ポリリジン型核酸増幅固相化
アンカーの調整の一実施例の方法を示す。図３は調整に
よる固相担体側の反応の状態を示す説明図である。図に
示すように、(1) 固相担体ＮＰＲ（Non Porus Resin 東
ソー社製）１ｍｌをＡ液（２０％ＤＭＳＯ，０．２５Ｎ
ＮａＯＨ）で遠心洗浄した。
【００３４】(2) Ａ液４０ｍｌ、ビスオキシラン５ｍｌ
を、ローテーターで攪拌しながら、室温、１２時間の反
応を行った。更にＡ液で３回、２０％ＤＭＳＯで２回、
蒸留水で１回遠心洗浄した。
を、ローテーターで攪拌しながら、室温、１２時間の反
応を行った。更にＡ液で３回、２０％ＤＭＳＯで２回、
蒸留水で１回遠心洗浄した。
【００３５】(3) ２０ｍｇのポリリジン（平均分子量１
００，０００、和光純薬製）を４０ｍｌの０．５Ｍ炭酸
緩衝液（ｐＨ１０）で溶解し、活性化ＮＰＲをこの溶液
中に懸濁した後、ローテーターで攪拌しながら、室温、
２４時間の反応を行った。更に、２Ｍ食塩水で２回、２
０％ＤＭＳＯで２回、蒸留水で数回、上清にアミノ基が
検出されなくなるまで洗浄した。
００，０００、和光純薬製）を４０ｍｌの０．５Ｍ炭酸
緩衝液（ｐＨ１０）で溶解し、活性化ＮＰＲをこの溶液
中に懸濁した後、ローテーターで攪拌しながら、室温、
２４時間の反応を行った。更に、２Ｍ食塩水で２回、２
０％ＤＭＳＯで２回、蒸留水で数回、上清にアミノ基が
検出されなくなるまで洗浄した。
【００３６】(4) ポリリジン化ＮＰＲをＢ液（ＥＤＴＡ
を１ｍＭ含む０．１Ｍリン酸緩衝液−ｐＨ７．４）４０
ｍｌに懸濁し、２−イミノチオラン（シグマ社製）１０
ｍｇを加えて、ローテーターで攪拌しながら、室温、１
時間の反応を行った。
を１ｍＭ含む０．１Ｍリン酸緩衝液−ｐＨ７．４）４０
ｍｌに懸濁し、２−イミノチオラン（シグマ社製）１０
ｍｇを加えて、ローテーターで攪拌しながら、室温、１
時間の反応を行った。
【００３７】図４は調整による核酸断片側の反応の状態
を示す説明図である。図に示すように、 (5) 所望の核酸プローブを挿入した核酸断片をＢ液中に
おいて、１０倍過剰量のスルホＳＭＰＢ（スルフォサク
シンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチレ
ート）と４０℃、３０分の反応を行い、未反応のスルホ
ＳＭＰＢを除去して活性化核酸断片を得た。
を示す説明図である。図に示すように、 (5) 所望の核酸プローブを挿入した核酸断片をＢ液中に
おいて、１０倍過剰量のスルホＳＭＰＢ（スルフォサク
シンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）−ブチレ
ート）と４０℃、３０分の反応を行い、未反応のスルホ
ＳＭＰＢを除去して活性化核酸断片を得た。
【００３８】図５は固相担体と核酸断片との反応の状態
を示す説明図である。図に示すように、 (6) (4) で得られたポリリジン化ＮＰＲをＢ液で３回の
遠心洗浄後、４０ｍｌのＢ液に再懸濁し、(5) で得られ
た活性化した核酸断片約０．５ｍｇを加え、ローテータ
ーで攪拌しながら、室温、４時間以上反応を行った。 (7) Ｂ液で３回、１×ＳＳＣで２回遠心洗浄し、０．７
５ｍｇの相補鎖を加え、９５℃１０分間の熱処理の後、
６８℃１時間ハイブリダイゼーション反応後、室温まで
徐々に冷却させ、１×ＳＳＣで数回遠心洗浄後、一部を
熱処理し、結合量を定量する。
を示す説明図である。図に示すように、 (6) (4) で得られたポリリジン化ＮＰＲをＢ液で３回の
遠心洗浄後、４０ｍｌのＢ液に再懸濁し、(5) で得られ
た活性化した核酸断片約０．５ｍｇを加え、ローテータ
ーで攪拌しながら、室温、４時間以上反応を行った。 (7) Ｂ液で３回、１×ＳＳＣで２回遠心洗浄し、０．７
５ｍｇの相補鎖を加え、９５℃１０分間の熱処理の後、
６８℃１時間ハイブリダイゼーション反応後、室温まで
徐々に冷却させ、１×ＳＳＣで数回遠心洗浄後、一部を
熱処理し、結合量を定量する。
【００３９】以上示したように、本実施例では、結合基
の搭載数を増幅するため、増幅基としてポリリジン（po
ly-Lysine ）を結合し、単量体中の−ＮＨ2 基を利用
し、各々の−ＮＨ2 基に２−イミノチオランを配して−
ＳＨ基を結合基として増幅させる。
の搭載数を増幅するため、増幅基としてポリリジン（po
ly-Lysine ）を結合し、単量体中の−ＮＨ2 基を利用
し、各々の−ＮＨ2 基に２−イミノチオランを配して−
ＳＨ基を結合基として増幅させる。
【００４０】（実施例３．ＤＮＡ断片の核酸増幅固相化
アンカーへの付加と回収）実施例２に示した方法で増幅
固相化アンカー NotＩ（ NotＩ消化ＤＮＡ断片をライゲ
ーション可能とする末端を持つアンカーＤＮＡが結合し
た固相担体）を調整した。
アンカーへの付加と回収）実施例２に示した方法で増幅
固相化アンカー NotＩ（ NotＩ消化ＤＮＡ断片をライゲ
ーション可能とする末端を持つアンカーＤＮＡが結合し
た固相担体）を調整した。
【００４１】この増幅固相化アンカー NotＩ５μｌを、
０．０４％ＢＳＡを含む１×Ｔ４ＤＮＡリガーゼ反応液
で２回洗浄し、プラスミドＢ３１５（ｐＢＲ３２２にＡ
ｄ２ウイルスＤＮＡの一部をクローニングした全長１６
７６９塩基対よりなる）を NotＩで完全に消化したＤＮ
Ａを、同反応液１００μｌに加え、先の固相担体を懸濁
した。Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（以下、Ｔ４リガーゼと記
す）６，０００ユニットを加え、１５℃にて、ローテー
ターでゆっくりと攪拌しながら４時間反応した。５，０
００回転、２分間、遠心分離を行った。
０．０４％ＢＳＡを含む１×Ｔ４ＤＮＡリガーゼ反応液
で２回洗浄し、プラスミドＢ３１５（ｐＢＲ３２２にＡ
ｄ２ウイルスＤＮＡの一部をクローニングした全長１６
７６９塩基対よりなる）を NotＩで完全に消化したＤＮ
Ａを、同反応液１００μｌに加え、先の固相担体を懸濁
した。Ｔ４ＤＮＡリガーゼ（以下、Ｔ４リガーゼと記
す）６，０００ユニットを加え、１５℃にて、ローテー
ターでゆっくりと攪拌しながら４時間反応した。５，０
００回転、２分間、遠心分離を行った。
【００４２】上清約１００μｌは電気泳動時まで保管し
た。沈殿は１×ＴＥＳ溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ・ＨＣ
ｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，５０ｍＭ ＮａＣｌ）で１回、
０．０４％ＢＳＡを含む１× NotＩ反応液で２回、丁寧
に洗浄し、１００μｌの１×NotＩ反応液に懸濁した。
NotＩ１００ユニットを加え、３７℃にてローテーター
でゆっくりと攪拌しながら３時間反応を行った。５００
０回転、２分間遠心後、上清を、先に保管しておいた上
清と共に、０．８％アガロースゲル電気泳動を行い、 N
otＩＤＮＡ断片の結合量を推定した。
た。沈殿は１×ＴＥＳ溶液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ・ＨＣ
ｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，５０ｍＭ ＮａＣｌ）で１回、
０．０４％ＢＳＡを含む１× NotＩ反応液で２回、丁寧
に洗浄し、１００μｌの１×NotＩ反応液に懸濁した。
NotＩ１００ユニットを加え、３７℃にてローテーター
でゆっくりと攪拌しながら３時間反応を行った。５００
０回転、２分間遠心後、上清を、先に保管しておいた上
清と共に、０．８％アガロースゲル電気泳動を行い、 N
otＩＤＮＡ断片の結合量を推定した。
【００４３】図６はアガロースゲル電気泳動の結果を示
す図面代用写真である。図面代用写真において、レーン
１はλＤＮＡ／HindIII 消化物分子量マーカー、レーン
２はλＤＮＡ／ StyＩ消化物分子量マーカー、レーン３
は NPR-NotＩアンカー（比較例；Ｔ４リガーゼ未添
加）、レーン４は NPR-NotＩアンカー（比較例；Ｔ４リ
ガーゼ未添加， NotＩ消化）、レーン５は NPR-NotＩア
ンカー（比較例；Ｔ４リガーゼ添加）、レーン６は NPR
-NotＩアンカー（比較例；Ｔ４リガーゼ添加， NotＩ消
化）、レーン７はpoly-Lysinyl NPR-NotＩアンカー（実
施例；Ｔ４リガーゼ未添加）、レーン８はpoly-Lysinyl
NPR-NotＩアンカー（実施例；Ｔ４リガーゼ未添加， N
otＩ消化）、レーン９はpoly-Lysinyl NPR-NotＩアンカ
ー（実施例；Ｔ４リガーゼ添加）、レーン１０はpoly-L
ysinyl NPR-NotＩアンカー（実施例；Ｔ４リガーゼ添
加， NotＩ消化）、レーン１１はレーン２と同じ、レー
ン１２はレーン１と同じである。
す図面代用写真である。図面代用写真において、レーン
１はλＤＮＡ／HindIII 消化物分子量マーカー、レーン
２はλＤＮＡ／ StyＩ消化物分子量マーカー、レーン３
は NPR-NotＩアンカー（比較例；Ｔ４リガーゼ未添
加）、レーン４は NPR-NotＩアンカー（比較例；Ｔ４リ
ガーゼ未添加， NotＩ消化）、レーン５は NPR-NotＩア
ンカー（比較例；Ｔ４リガーゼ添加）、レーン６は NPR
-NotＩアンカー（比較例；Ｔ４リガーゼ添加， NotＩ消
化）、レーン７はpoly-Lysinyl NPR-NotＩアンカー（実
施例；Ｔ４リガーゼ未添加）、レーン８はpoly-Lysinyl
NPR-NotＩアンカー（実施例；Ｔ４リガーゼ未添加， N
otＩ消化）、レーン９はpoly-Lysinyl NPR-NotＩアンカ
ー（実施例；Ｔ４リガーゼ添加）、レーン１０はpoly-L
ysinyl NPR-NotＩアンカー（実施例；Ｔ４リガーゼ添
加， NotＩ消化）、レーン１１はレーン２と同じ、レー
ン１２はレーン１と同じである。
【００４４】図面代用写真に示す通り、ポリリジンで増
幅されなかった比較例（従来例）では検出できず、ポリ
リジンでＮＰＲを処理しＴ４リガーゼで反応した検体に
のみ、ＤＮＡ断片が回収された（レーン１０）。レーン
１０に示された結果から、増幅固相化アンカーには約
０．８μｇ（／５μｌ resin）のＤＮＡが結合したと考
えられ、Ｔ４リガーゼで容易に固相担体へ結合できるこ
とが判明した。
幅されなかった比較例（従来例）では検出できず、ポリ
リジンでＮＰＲを処理しＴ４リガーゼで反応した検体に
のみ、ＤＮＡ断片が回収された（レーン１０）。レーン
１０に示された結果から、増幅固相化アンカーには約
０．８μｇ（／５μｌ resin）のＤＮＡが結合したと考
えられ、Ｔ４リガーゼで容易に固相担体へ結合できるこ
とが判明した。
【００４５】以上のように、本発明の核酸増幅固相化ア
ンカー及びその調整方法によって得られた核酸増幅固相
化アンカーは、所望の核酸プローブを適切な支持体に末
端で固定することにより、目的の遺伝子を極めて選択的
且つ迅速に溶液中より濃縮・精製することができ、しか
も、簡単な酵素反応で固相化でき、更に、通常の遺伝子
クローニング技術で充分に検出可能に増幅されることと
なる。
ンカー及びその調整方法によって得られた核酸増幅固相
化アンカーは、所望の核酸プローブを適切な支持体に末
端で固定することにより、目的の遺伝子を極めて選択的
且つ迅速に溶液中より濃縮・精製することができ、しか
も、簡単な酵素反応で固相化でき、更に、通常の遺伝子
クローニング技術で充分に検出可能に増幅されることと
なる。
【００４６】
【発明の効果】本発明は以上説明したとおり、固相担体
上に形成された結合部位に増幅基を備え、該増幅基の分
岐した末端に複数の結合基と、所望の核酸プローブを結
合させる核酸断片の一端に配された官能基とを結合した
ものであるため、増幅基を種々選択することにより、一
つの結合部位から数百〜数千以上もの多数の結合基が形
成されることとなり、多数の核酸プローブを搭載するこ
とが可能となる。即ち、核酸増幅固相化アンカー内の核
酸断片や制限酵素の種類を適当に選べば、如何なる二本
鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ，ＲＮＡプローブを、容易にし
かも多量に固相化できる。
上に形成された結合部位に増幅基を備え、該増幅基の分
岐した末端に複数の結合基と、所望の核酸プローブを結
合させる核酸断片の一端に配された官能基とを結合した
ものであるため、増幅基を種々選択することにより、一
つの結合部位から数百〜数千以上もの多数の結合基が形
成されることとなり、多数の核酸プローブを搭載するこ
とが可能となる。即ち、核酸増幅固相化アンカー内の核
酸断片や制限酵素の種類を適当に選べば、如何なる二本
鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ，ＲＮＡプローブを、容易にし
かも多量に固相化できる。
【００４７】また、本発明の核酸増幅固相化アンカー
は、固相担体を活性化して結合部位を形成し、この結合
部位に増幅基を配し、この増幅基の分岐した末端に複数
の結合基を形成し、更にこれら結合基に予め所望の核酸
プローブを結合させた核酸断片の一端に形成した官能基
を結合する調整方法によって簡便に得ることができ、所
望の核酸プローブを結合させる核酸断片であれば、如何
なるものでも核酸増幅固相化アンカーとして使用できる
等の効果を有する。
は、固相担体を活性化して結合部位を形成し、この結合
部位に増幅基を配し、この増幅基の分岐した末端に複数
の結合基を形成し、更にこれら結合基に予め所望の核酸
プローブを結合させた核酸断片の一端に形成した官能基
を結合する調整方法によって簡便に得ることができ、所
望の核酸プローブを結合させる核酸断片であれば、如何
なるものでも核酸増幅固相化アンカーとして使用できる
等の効果を有する。
【図１】本発明の一実施例のポリリジン型核酸増幅固相
化アンカーの概略構成の模式的に示す説明図である。
化アンカーの概略構成の模式的に示す説明図である。
【図２】核酸断片の一実施例の塩基配列を示す説明図で
ある。
ある。
【図３】調整による固相担体側の反応の状態を示す説明
図である。
図である。
【図４】調整による核酸断片側の反応の状態を示す説明
図である。
図である。
【図５】固相担体と核酸断片との反応の状態を示す説明
図である。
図である。
【図６】アガロースゲル電気泳動の結果を示す図面代用
写真である。
写真である。
(1) …固相担体、 (2) …結合部位、 (3) …増幅基、 (4) …結合基、 (5) …核酸断片、 (6) …官能基、
Claims (8)
- 【請求項１】 所望の核酸プローブを結合させる核酸断
片の一端に配された官能基と、所望の固相担体上に形成
され且つ前記官能基と結合する結合基とを結合した核酸
固相化アンカーにおいて、 分岐した末端に複数の前記結合基を備えた増幅基を、前
記固相担体上に形成された結合部位に備えたことを特徴
とする核酸増幅固相化アンカー。 - 【請求項２】 前記請求項１に記載の核酸増幅固相化ア
ンカーにおいて、 前記増幅基が、単量体中に前記官能基と結合する結合基
を有した重合物からなることを特徴とする核酸増幅固相
化アンカー。 - 【請求項３】 前記請求項１又は２に記載の核酸増幅固
相化アンカーにおいて、 前記増幅基が、ポリペプチド系、セルロース系、ポリビ
ニルアルコール系、アクリル系、又はビニル系の何れか
から選ばれた重合物からなることを特徴とする核酸増幅
固相化アンカー。 - 【請求項４】 前記請求項１〜３の何れかに記載の核酸
増幅固相化アンカーにおいて、 前記増幅基がポリリジンからなり、 前記ポリリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末端に、前記
核酸断片を結合させたことを特徴とする核酸増幅固相化
アンカー。 - 【請求項５】 所望の核酸プローブを結合させる核酸断
片の一端に官能基を配し、固相担体上に前記官能基と結
合する結合基を形成し、前記官能基を固相担体上の結合
基に結合させる核酸固相化アンカーの調整方法におい
て、 前記固相担体を活性化して形成された結合部位に、分岐
した末端に複数の前記結合基を形成する増幅基を配する
ことを特徴とする核酸増幅固相化アンカーの調整方法。 - 【請求項６】 前記請求項５に記載の核酸増幅固相化ア
ンカーの調整方法において、 前記増幅基として、単量体中に前記官能基と結合する結
合基を有した重合物を配することを特徴とする核酸増幅
固相化アンカーの調整方法。 - 【請求項７】 前記請求項５又は６に記載の核酸増幅固
相化アンカーの調整方法において、 前記増幅基として、ポリペプチド系、セルロース系、ポ
リビニルアルコール系、アクリル系、又はビニル系のい
ずれかから選ばれた重合物を配することを特徴とする核
酸増幅固相化アンカーの調整方法。 - 【請求項８】 前記請求項５〜７の何れかに記載の核酸
増幅固相化アンカーの調整方法において、 前記増幅基として、ポリリジンを配し、 前記ポリリジンの−ＮＨ2 基より分岐した末端に、前記
核酸断片を結合することを特徴とする核酸増幅固相化ア
ンカーの調整方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4092435A JPH05260972A (ja) | 1992-03-19 | 1992-03-19 | 核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法 |
| EP93906812A EP0647719A4 (en) | 1992-03-19 | 1993-03-22 | A SOLID-PHASE ANCHOR CARRYING A NUCLEIC ACID AND METHOD FOR ITS ADAPTATION. |
| PCT/JP1993/000348 WO1994021819A1 (en) | 1992-03-19 | 1993-03-22 | Solid-phase anchor carrying nucleic acid and method of adjusting the same |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4092435A JPH05260972A (ja) | 1992-03-19 | 1992-03-19 | 核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法 |
| PCT/JP1993/000348 WO1994021819A1 (en) | 1992-03-19 | 1993-03-22 | Solid-phase anchor carrying nucleic acid and method of adjusting the same |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05260972A true JPH05260972A (ja) | 1993-10-12 |
Family
ID=26433857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4092435A Pending JPH05260972A (ja) | 1992-03-19 | 1992-03-19 | 核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05260972A (ja) |
| WO (1) | WO1994021819A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003083473A1 (fr) * | 2002-03-29 | 2003-10-09 | Riken | Substrats pour l'hybridation et son procede d'utilisation |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03147800A (ja) * | 1989-11-02 | 1991-06-24 | Toshihiko Kondo | 核酸固相化アンカー及びその調整方法 |
-
1992
- 1992-03-19 JP JP4092435A patent/JPH05260972A/ja active Pending
-
1993
- 1993-03-22 WO PCT/JP1993/000348 patent/WO1994021819A1/ja not_active Application Discontinuation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003083473A1 (fr) * | 2002-03-29 | 2003-10-09 | Riken | Substrats pour l'hybridation et son procede d'utilisation |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1994021819A1 (en) | 1994-09-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3802925B2 (ja) | バックグランドノイズの減少を伴う液相核酸サンドイッチアッセイ | |
| JP2685143B2 (ja) | 標識用組成物 | |
| JP2528107B2 (ja) | ポリヌクレオチド測定試薬と方法 | |
| EP3365460B1 (en) | Method for generating proximity probes | |
| JP2003505094A (ja) | ペプチドアクセプターの連結法 | |
| US20080261202A1 (en) | Tagged Polyfunctional Reagents Capable of Reversibly Binding Target Substances in a pH-dependent Manner | |
| WO1998004571A2 (en) | Affinity-based purification of oligonucleotides using soluble multimeric oligonucleotides | |
| JPS60502155A (ja) | オリゴヌクレオチドの高分子支持体系 | |
| EP1161561A1 (en) | One step sample preparation and detection of nucleic acids in complex biological samples | |
| JPS61501746A (ja) | 核酸の固定化法 | |
| IL111733A (en) | Nucleic acid analogs with clattical forming groups | |
| JP6057185B2 (ja) | 核酸リンカー | |
| AU2003272561B2 (en) | Compositions and methods for the use of FMOC derivatives in DNA/RNA synthesis | |
| WO2003045975A2 (en) | Solid-phase immobilization of proteins and peptides | |
| JP2003500013A (ja) | 固形支持体からの核酸の切断 | |
| WO2011089393A1 (en) | Detection of target nucleic acids based on oligonucleotide hybridization and chemical ligation | |
| JP2008253176A (ja) | 高親和性分子取得のためのリンカー | |
| JPH05260972A (ja) | 核酸増幅固相化アンカー及びその調整方法 | |
| CA2042808C (en) | Method of extracting particular nucleic acid fragment | |
| AU2019284088B2 (en) | Method of isolating nucleic acid from specimens in liquid-based cytology preservatives containing formaldehyde | |
| JP4651196B2 (ja) | 相補的オリゴヌクレオチドタグセットを作製するための方法 | |
| Li et al. | In vitro selection of kinase and ligase deoxyribozymes | |
| WO2023278333A1 (en) | Monoclonal polony generation and spatial organization using nucleic acid supramolecular structures | |
| EP0647719A1 (en) | Solid-phase anchor carrying nucleic acid and method of adjusting the same | |
| JPH03147800A (ja) | 核酸固相化アンカー及びその調整方法 |