JP7334363B2 - 検査容器、検査装置及び核酸検査方法 - Google Patents
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Description
本発明は、検査容器、検査装置及び核酸検査方法に関する。
遺伝子診断の技術において、検体に含まれる微量な核酸を増幅する技術が検討されている。核酸増幅方法としては、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応（Polymerase Chain Reaction：PCR）法、ＬＡＭＰ（Loop-Mediated Isothermal Amplification)法などが挙げられる
。
。
核酸増幅検査においては、検体から核酸を抽出した後、核酸を含む検体液を、検出対象となる特定の核酸配列（ターゲットＤＮＡ（deoxyribonucleic acid)あるいはＲＮＡ(ribonucleic acid）、以下、総称してターゲットＤＮＡと称する。）を増幅させるための増
幅試薬と混合する。その後、ターゲットＤＮＡの増幅工程を経た後にターゲットＤＮＡの有無を判別することで検体にターゲットＤＮＡ検出対象核酸が含まれているか否かの検査を行う。
幅試薬と混合する。その後、ターゲットＤＮＡの増幅工程を経た後にターゲットＤＮＡの有無を判別することで検体にターゲットＤＮＡ検出対象核酸が含まれているか否かの検査を行う。
ＰＣＲ法等の核酸増幅方法を用いた検査は、現在、インフルエンザ及び新型コロナなどの罹患の有無の検査にも用いられている。迅速な診断のため、臨床現場即時検査（Point of Care Testing：POCT）の需要が高まっており、核酸増幅を簡便に実施可能な検査装置
が求められている。
が求められている。
特許文献１は、ＰＯＣＴにおいて使用可能なマイクロ流路チップが提案されている。特許文献１には、検体液を反応空間に押し出すための空気を収容したシリンジ、及び検体液と反応させる試薬を収容したシリンジを備え、内部で検体液と試薬の混合が可能なマイクロ流路チップが開示されている。
例えば、ＰＣＲによるターゲットＤＮＡ増幅は、二本鎖ＤＮＡを高温で一本鎖ＤＮＡに解離させる工程（熱変性工程）、その後温度を下げてプライマーを一本鎖ＤＮＡに結合させる工程（アニーリング工程）、および一本鎖ＤＮＡを鋳型として、ポリメラーゼにより、新たに二重鎖ＤＮＡを合成する工程（伸長工程）を繰り返すことで実現される。なお、ターゲットがＲＮＡの場合には、ＲＴ（reverse transcription)－ＰＣＲにより増幅を行う。温度サイクルの一例として、９４℃で１分、５０～６０℃で１分、７２℃で１～５分を１サイクルとして、２０～３０回繰り返すものが挙げられる。また、ＬＡＭＰ法は、６５℃付近の一定温度に保った状態で増幅反応を進める手法である。このように、一般に、核酸増幅反応には検体液と増幅試薬を混合させた液体を加熱する工程を含む。この際、検体液及び試薬中に含まれる気体が加熱処理によって発泡すると、増幅工程を阻害して増幅工程に時間がかかる、あるいは、十分な増幅ができない、などの問題が生じる可能性がある。ＰＯＣＴ用途においては、検査に要する時間を短縮し、かつ検査精度を向上させることが求められる。
特許文献１に記載のマイクロ流路チップは、核酸増幅検査に用いることについては記載されていない。そのため、加熱工程を含む反応において生じる問題点及び解決手法については何ら記載されていない。
本開示の技術は、上記事情に鑑みてなされたものであって、加熱工程を含む検査において、高い検査精度で検査可能な検査容器、検査装置及び核酸検査方法を提供することを目的とする。
本開示の検査容器は、
検体液を投入する投入口と、
投入口を覆う着脱可能な蓋部と、
投入口が開口端面として有する様に設けられた、投入口から滴下された検体液を収容する第１収容部と、
液体を収容可能な第２収容部であって、検体液と試薬とを反応させる第２収容部と、
第１収容部と第２収容部とを接続する第１流路と、
第２流路を介して第１収容部に一端が接続された第１シリンダであって、他端が外部に開口した第１シリンダと、
第３流路を介して第２収容部に一端が接続された第２シリンダであって、他端が外部に開口した第２シリンダと、
第１シリンダ内を移動可能に備えられた第１栓と、
第２シリンダ内を移動可能に備えられた第２栓とを備え、
第１栓及び第２栓を外部から押圧して移動させることにより、第１収容部、第２収容部、第１流路、第２流路及び第３流路を含む内部空間を加圧可能である。
検体液を投入する投入口と、
投入口を覆う着脱可能な蓋部と、
投入口が開口端面として有する様に設けられた、投入口から滴下された検体液を収容する第１収容部と、
液体を収容可能な第２収容部であって、検体液と試薬とを反応させる第２収容部と、
第１収容部と第２収容部とを接続する第１流路と、
第２流路を介して第１収容部に一端が接続された第１シリンダであって、他端が外部に開口した第１シリンダと、
第３流路を介して第２収容部に一端が接続された第２シリンダであって、他端が外部に開口した第２シリンダと、
第１シリンダ内を移動可能に備えられた第１栓と、
第２シリンダ内を移動可能に備えられた第２栓とを備え、
第１栓及び第２栓を外部から押圧して移動させることにより、第１収容部、第２収容部、第１流路、第２流路及び第３流路を含む内部空間を加圧可能である。
本開示の検査容器においては、第１栓及び第２栓によって、内部空間が密閉されており、第１シリンダ内において、第１栓を外部から押圧して内部空間側に移動させた場合に、第１栓の移動に連動して第２栓が第２シリンダ内において内部空間側から外部側へと移動する構成であってもよい。
本開示の検査容器は、第２シリンダの一部に空気穴が設けられており、第２栓を空気穴よりも内部空間側に移動させることにより、内部空間の加圧が可能となる構成であってもよい。
本開示の検査容器は、第１流路の途中に、検体液中に夾雑物を除去する精製チャンバを備えることが好ましい。
本開示の検査容器においては、試薬が第２収容部に収容されていてもよい。
本開示の検査容器においては、第１流路の途中に、試薬を収容した第３収容部を備えてもよい。
本開示の検査容器においては、第１流路の途中であって、精製チャンバと第２収容部との間に、第３収容部を備えることが好ましい。
本開示の検査容器においては、第３収容部と第２収容部との間に検体液と試薬との混合を促進する撹拌流路を備えてもよい。
本開示の検査容器は、第２収容部の底面が、フィルムにより構成されていることが好ましい。
本開示の検査容器においては、試薬が特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と、核酸配列判定用のプローブを含んでもよい。
本開示の検査装置は、本開示の検査容器と、
検査容器の第１シリンダ内の第１栓を外部から押圧する第１押圧部と、第２シリンダ内の第２栓を外部から押圧する第２押圧部とを備えた押圧機を備え、
第１栓を第１押圧部によって押圧して内部空間側に移動させることにより、検査容器の第１収容部に収容された検体液を第２収容部に送液する、検査装置である。
検査容器の第１シリンダ内の第１栓を外部から押圧する第１押圧部と、第２シリンダ内の第２栓を外部から押圧する第２押圧部とを備えた押圧機を備え、
第１栓を第１押圧部によって押圧して内部空間側に移動させることにより、検査容器の第１収容部に収容された検体液を第２収容部に送液する、検査装置である。
本開示の検査装置においては、検査容器の第２収容部の底面と接触する位置に設けられた第１加熱部であって、第２収容部に収容された液体を加熱する第１加熱部を備えることが好ましい。
本開示の検査装置においては、検査容器の第１収容部の底面と接触する位置に設けられた第２加熱部であって、第１収容部に収容された液体を加熱する第２加熱部を備えていてもよい。
本開示の検査装置においては、第２収容部において、検体液中に検出対象物が含まれているか否かを検出する検出部を備えてもよい。
本開示の検査装置においては、検査容器において、試薬が特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と、核酸配列判定用の蛍光プローブを含み、
検出部が、第２収容部に収容されている液体に対して、蛍光プローブを励起するための励起光を照射する励起光源と、励起光の照射により励起された蛍光プローブから発光される蛍光を検出する光検出器を備えてもよい、
検出部が、第２収容部に収容されている液体に対して、蛍光プローブを励起するための励起光を照射する励起光源と、励起光の照射により励起された蛍光プローブから発光される蛍光を検出する光検出器を備えてもよい、
本開示の核酸検査方法は、
採取具を用いて生体から採取した検体を核酸抽出液に浸漬し、検体から核酸を抽出し、
検査容器の投入口から、検体液として核酸を含む液体を投入し、
投入口を蓋部によって密閉し、
第１収容部に収容された検体液を、押圧機によって、第２収容部に送液し、
第２収容部において、検体液と試薬との混合液を温調することにより特定の核酸配列を増幅し、
励起光源を混合液に照射し、光検出器を用いて蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
特定の核酸配列の有無を判定する、核酸検査方法である。
採取具を用いて生体から採取した検体を核酸抽出液に浸漬し、検体から核酸を抽出し、
検査容器の投入口から、検体液として核酸を含む液体を投入し、
投入口を蓋部によって密閉し、
第１収容部に収容された検体液を、押圧機によって、第２収容部に送液し、
第２収容部において、検体液と試薬との混合液を温調することにより特定の核酸配列を増幅し、
励起光源を混合液に照射し、光検出器を用いて蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
特定の核酸配列の有無を判定する、核酸検査方法である。
本開示の検査容器、検査装置及び核酸検査方法によれば、高い検査精度で検査可能である。
以下、図面を参照して本開示の実施形態を詳細に説明する。なお、図面中の各構成要素の縮尺等は実際のものとは適宜変更している。
「第１実施形態の検査容器」
図１は、第１実施形態の検査容器１を模式的に示す平面図であり、図２は、図１に示す検査容器１の斜視図である。また、図３の図３Ａは、図１の３Ａ－３Ａ線切断端面、図３Ｂは図１の３Ｂ－３Ｂ線切断端面、図３Ｃは図１の３Ｃ－３Ｃ線切断端面をそれぞれ示す。
図１は、第１実施形態の検査容器１を模式的に示す平面図であり、図２は、図１に示す検査容器１の斜視図である。また、図３の図３Ａは、図１の３Ａ－３Ａ線切断端面、図３Ｂは図１の３Ｂ－３Ｂ線切断端面、図３Ｃは図１の３Ｃ－３Ｃ線切断端面をそれぞれ示す。
本実施形態の検査容器１はカード状の外形を有し、内部に流路構造を有する核酸検査用カートリッジである。検査容器１は、例えば、検出対象物である特定の核酸配列を有する検体中の特定の核酸配列を増幅して検出可能とすることによって、検体中に検出対象物が含まれているか否かを検出するために用いられる。具体的には、例えば、インフルエンザなどの感染症の罹患の有無の検査に用いられる。検査容器１は、例えば、クレジットカード程度の平面サイズと１ｃｍ程度の厚みを有する。
検査容器１は、流路及び収容部を含む流路構造の一部を構成する凹部および孔部が形成された本体部材１Ａと、流路の底面を構成する底部材１Ｂとから構成されている。
本体部材１Ａは、公知の樹脂成型プラスチック材料であれば、特に制限なく利用できるが、耐熱性及び透明性の観点から、ポリカーボネート、ポリプロピレン、シクロオレフィンあるいはシリコーン樹脂が好ましい。
底部材１Ｂは、例えば、薄板あるいはフィルムにより形成されている。底部材１Ｂとしては、公知の樹脂成型プラスチック材料であれば、特に制限なく利用できるが、本体部材１Ａとの密着性の観点から、本体部材１Ａと同じ材質が好ましい。
底部材１Ｂは、例えば、薄板あるいはフィルムにより形成されている。底部材１Ｂとしては、公知の樹脂成型プラスチック材料であれば、特に制限なく利用できるが、本体部材１Ａとの密着性の観点から、本体部材１Ａと同じ材質が好ましい。
本検査容器１は、投入口１２と、蓋部１４と、第１収容部１６と、第２収容部１８と、第１流路２０と、第１シリンダ３１と、第２シリンダ３２と、第１栓３３と、第２栓３４とを備える。また、検査容器１は第２流路２４及び第３流路２６をさらに備える。
投入口１２は、検体液４０を投入するための開口である。蓋部１４は投入口１２を覆い、投入口１２の開口に着脱可能な蓋部である。本例においては、蓋部１４は投入口１２を形成する筒状部１５に螺合可能に形成されている。着脱方法に関して特に制限はなく、例えば、スナップ式のキャップ構造や粘着剤を用いて蓋部１４と筒状部１５を着脱してもよい。蓋部１４は、検体液投入時には投入口１２を開放するが、検体液投入時以外は、投入口１２を閉じて外部からのコンタミの混入を排除すると共に内部からの検体液４０の蒸発を防止する。検体液４０は、例えば、被験者の鼻腔、咽頭、口腔及び患部などから採取した検体から核酸を抽出した液体である。
なお、以下において、投入口１２が設けられている面を検査容器１の上面、底部材１Ｂ側を検査容器１の下面と称する。ここで、本体部材１Ａの上面は検査容器１の上面と同一であり、本体部材１Ａの下面は底部材１Ｂの上面と接する面であり、底部材１Ｂの下面は検査容器１の下面と同一である。
第１収容部１６は、投入口１２が開口端面となる様に設けられており、投入口１２から滴下された検体液４０を収容する。第１収容部１６の形状に特に制限はなく、柱状、錐状、錐台状など任意に選択することができる。
本検査容器１においては、本体部材１Ａを厚み方向に貫き、本体部材１Ａの表面から突出して形成された筒状部１５の開口によって、投入口１２が構成されており、筒状部１５の本体部材１Ａの内部側部分と底部材１Ｂとによって、第１収容部１６が形成されている。
第２収容部１８は、液体を収容可能な収容部であり、検体液４０と試薬４２とを反応させる反応部として機能する。試薬４２としては、検査対象の核酸配列を増幅するための増幅試薬及び判定するためのプローブが含まれる。第２収容部１８は本体部材１Ａの下面に設けられた凹部と、底部材１Ｂとによって形成されている。
本例において、試薬４２は、予め第２収容部１８に収容されている。但し、試薬４２は、第１収容部１６から第２収容部１８までの間に備えられていればよく、必ずしも、第２収容部１８に収容されていなくてもよい。試薬４２としては、特定の核酸配列を増幅するための増幅試薬、特定の核酸配列を検出するためのプローブなどが含まれる。増幅試薬としては、プライマー、ポリメラーゼ、ｄＮＴＰなどの基質及び塩などが挙げられる。さらに、還元剤などの添加材やバッファーなどを含んでいてもよい。増幅対称の核酸がＲＮＡである場合、逆転写プライマー、逆転写酵素をさらに含んでいてもよい。試薬４２は増幅方法および検出方法に応じて適宜選択される。例えば、蛍光法により特定の核酸配列の検出を行う場合には、試薬４２が増幅試薬と蛍光プローブを含み得る。封入される試薬形態としては特に制限はなく、液体、固体いずれの試薬も用いられる。例えば、液体試薬を凍結乾燥して作製した粉体状の試薬や、ペレット状や粒状に成型した試薬を封入してもよい。
第１流路２０は、第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する。第１収容部１６に投入された検体液４０は第１流路２０を通って第２収容部１８に送液される。第１流路２０は、本体部材１Ａの下面に第１収容部１６から第２収容部１８に延びる線状の凹部と、底部材１Ｂの上面とによって形成されている（図３参照）。なお、第２流路２４及び第３流路２６も同様に、本体部材１Ａの下面に形成された線状の凹部と底部材１Ｂの上面とによって形成されている。
第１シリンダ３１は、第２流路２４を介して第１収容部１６に一端３１ｂが接続された第１シリンダ３１であって、他端３１ａが外部に開口するように設けられている。
第２シリンダ３２は、第３流路２６を介して第２収容部１８に一端３２ｂが接続された第２シリンダ３２であって、他端３２ａが外部に開口するように設けられている。
第１シリンダ３１及び第２シリンダ３２は、本体部材１Ａの面方向に形成された筒状部であり、本体部材１Ａの端から内部側に向かって形成されている。
第１栓３３は、第１シリンダ３１内を移動可能に備えられている。第２栓３４は、第２シリンダ３２内を移動可能に備えられている。第１栓３３及び第２栓３４は、一例としてゴム栓であり、第１シリンダ３１及び第２シリンダ３２内のそれぞれにおいて、外気を遮断する機能を有する。
第１シリンダ３１は外部に開口する他端３１ａから、後述する押圧機の第１押圧部が挿入可能となっており、第１押圧部によって、第１栓３３を第１シリンダ３１内において内部空間側に押圧可能である。同様に、第２シリンダ３２は外部に開口する他端３２ａから、後述する押圧機の第２押圧部が挿入可能となっており、第２押圧部によって、第２栓３４を第２シリンダ３２において内部空間側に押圧可能である。押圧機によって、押圧していない状態では、内部空間は大気圧となっている。
検査容器１は、第１栓３３及び第２栓３４を外部から押圧して移動させることにより、第１収容部１６、第２収容部１８、第１流路２０、第２流路２４及び第３流路２６を含む内部空間を加圧可能に構成されている。検体液４０及び試薬４２中の気体が泡となって発生し、核酸増幅を阻害する可能性がある。第２収容部１８内において、検体液４０と試薬４２とを混合した後に、第２収容部１８内の液体を加熱する際に、内部空間を加圧することで、発泡を抑制することができ、発泡により核酸増幅が阻害されるのを抑制することができる。そのため、第２収容部１８における核酸増幅工程を阻害されることなく進行させることができるので、増幅時間の遅延を生じたり、増幅不足を生じたりすることなく、検査精度を向上させることができる。
なお、検査容器１の底部材１Ｂがフィルムである場合、後述の検査装置１００において、第１収容部１６及び第２収容部１８を加熱する際に、第２収容部１８と第１加熱部１１２との接触性、及び第１収容部１６と第２加熱部１１４との接触性を高めることができる。一方で、ある程度以上に加熱すると、底部材１Ｂは膨張、もしくは収縮して撚れが生じて加熱部との接触性が低下して加熱効率が低下する場合がある。これに対し、検査容器１の内部空間を加圧し内部空間を適度に加圧することにより、底部材１Ｂに撚れが生じないようにして、底部材１Ｂと加熱部との接触性を改善し、加熱効率を向上させることができる。
第１収容部１６に検体液４０を収容し、蓋部１４により投入口１２を閉じた場合、検査容器１は、第１栓３３及び第２栓３４によって、内部空間は密閉されている。図４に示すように、送液前の初期状態において、第１栓３３は、第１シリンダ３１の長さ方向の中心よりも外部に開口する他端３１ａ側に配置されている。他方、第２栓３４は、第２シリンダ３２の長さ方向の中心よりも一端３２ｂ側に配置されている。この状態で、図４に示すように、第１シリンダ３１内において第１栓３３を外部から押圧（矢印Ｐ１）して破線矢印Ａ１で示すように内部空間側に移動させると、内部空間が加圧されることにより、第２シリンダ３２内の第２栓３４が連動して破線矢印Ａ２で示すように内部空間側から外部側へと押し出されるように移動する。第１栓３３の移動に連動して第２栓３４が移動することにより内部空間の圧力が調整され、第１収容部１６に収容されている検体液４０を、第２収容部１８へと送液（矢印Ｂ）することができる。第１栓３３の移動に連動して第２栓３４が移動可能であるので、弱い押圧で送液が可能である。
「設計変更例１」
図５は、第１実施形態の検査容器１の設計変更例の検査容器２を模式的に示す平面図である。なお、以下の設計変更例及び実施形態において、第１実施形態の検査容器１と同等の要素には同等の符号を付し、詳細な説明を省略する。本検査容器２においては、第２シリンダ３２の一部に空気穴３６が設けられている点が第１実施形態の検査容器１と異なる。
図５は、第１実施形態の検査容器１の設計変更例の検査容器２を模式的に示す平面図である。なお、以下の設計変更例及び実施形態において、第１実施形態の検査容器１と同等の要素には同等の符号を付し、詳細な説明を省略する。本検査容器２においては、第２シリンダ３２の一部に空気穴３６が設けられている点が第１実施形態の検査容器１と異なる。
図５に示すように、送液前の初期状態において、第１栓３３は、第１シリンダ３１の長さ方向の中心よりも外部に開口する他端３１ａ側に配置されている。第２栓３４は、空気穴３６よりも第２シリンダ３２の他端３２ａ側に配置されている。この際、内部空間は、空気穴３６によって開放されている。この状態で、図５に示すように、第１シリンダ３１内において第１栓３３を外部から押圧（矢印Ｐ１）して内部空間側に移動させると、第１栓３３の移動に伴い、第１収容部１６に収容されている検体液４０を、第２収容部１８へと送液することができる。また、この第１栓３３の移動に伴い、第２シリンダ３２内の空気が空気穴３６から排出される。
また、第２栓３４を空気穴３６よりも内部空間側となる第２シリンダ３２の一端３２ｂ側に移動させると、内部空間を密閉した状態とすることができる。さらに、内部空間を密閉した状態から、図６に示すように、第１栓３３及び第２栓３４をそれぞれ外部から押圧する（矢印Ｐ１、Ｐ２）ことにより、内部空間を加圧することができる。従って、本検査容器２においても、検体液４０及び試薬４２中の気体が泡となって発生し、核酸増幅を阻害する可能性がある。第２収容部１８内において、検体液４０と試薬４２とを反応させる際に、第２収容部１８内の液体を加熱する際に、内部空間を加圧することで、発泡を抑制することができ、発泡により核酸増幅が阻害されるのを抑制することができる。そのため、第２収容部１８における核酸増幅工程を阻害されることなく進行させることができるので、増幅時間の遅延を生じたり、増幅不足を生じたりすることなく、検査精度を向上させることができる。
「設計変更例２」
図７は、第１実施形態の検査容器１の設計変更例２の検査容器３を模式的に示す平面図である。図８は、第２シリンダ３２に備えられている第２栓３４の拡大図であり、図８が本検査容器３においては、第２シリンダ３２に備えられている第２栓３４に、後述の第２押圧部１０４の第２押込み棒１０３をセットした状態を示し、図８Ｂは第２栓３４に第２押込み棒１０３をセットする前の状態を示す。
本検査容器３は、第２栓３４が、第２押込み棒１０３の先端の突起１０３ａと篏合する凹部形状の穴３４ａを有している点で第１実施形態の検査容器１と異なる。
図７は、第１実施形態の検査容器１の設計変更例２の検査容器３を模式的に示す平面図である。図８は、第２シリンダ３２に備えられている第２栓３４の拡大図であり、図８が本検査容器３においては、第２シリンダ３２に備えられている第２栓３４に、後述の第２押圧部１０４の第２押込み棒１０３をセットした状態を示し、図８Ｂは第２栓３４に第２押込み棒１０３をセットする前の状態を示す。
本検査容器３は、第２栓３４が、第２押込み棒１０３の先端の突起１０３ａと篏合する凹部形状の穴３４ａを有している点で第１実施形態の検査容器１と異なる。
図８に示すように、第２押込み棒１０３の突起１０３ａと第２栓３４の穴３４ａを嵌合して、第２押込み棒１０３と第２栓３４を一体化して、第２栓３４を強制的に動かすことで、内部空間の圧力を調整することが可能である。送液前の初期状態において、第１栓３３を、第１シリンダ３１の長さ方向の中心よりも外部に開口する他端３１ａ側に配置しておく。第２栓３４は、第２シリンダ３２の長さ方向の衷心よりも一端３２ｂ側に配置しておく。この状態で、第２シリンダ３２中の第２栓３４を第２押込み棒１０３によって、外部側（図中右方向）に移動させると、第２栓３４の移動に伴い、第１収容部１６に収容されている検体液４０を、第２収容部１８へと送液することができる。この際、第２栓３４の移動に伴い、第１シリンダ３１内の第１栓３３が連動して内部空間側に引き込まれるように移動する。
また、さらに、第１シリンダ３１内の第１栓３３についても第１押込み棒１０１の先端の突起と篏合する穴を備え、第１押込み棒１０１及び第２押込み棒１０３のそれぞれ第１栓３３第２栓３４に篏合することにより、第１シリンダ３１及び第２シリンダ３２の移動を独立して制御してもよい。
また、さらに、第１シリンダ３１内の第１栓３３についても第１押込み棒１０１の先端の突起と篏合する穴を備え、第１押込み棒１０１及び第２押込み棒１０３のそれぞれ第１栓３３第２栓３４に篏合することにより、第１シリンダ３１及び第２シリンダ３２の移動を独立して制御してもよい。
また第２栓３４を第２押込み棒１０３によって、内部空間側に押込み、第１栓３３についても外部から内部空間側に押圧することにより、内部空間を加圧することができる。従って、本検査容器３においても、検体液４０及び試薬４２中の気体が泡となって発生し、核酸増幅を阻害する可能性がある。第２収容部１８内において、検体液４０と試薬４２とを反応させる際に、第２収容部１８内の液体を加熱する際に、内部空間を加圧することで、発泡を抑制することができ、発泡により核酸増幅が阻害されるのを抑制することができる。そのため、第２収容部１８における核酸増幅工程を阻害されることなく進行させることができるので、増幅時間の遅延を生じたり、増幅不足を生じたりすることなく、検査精度を向上させることができる。
「第２実施形態の検査容器」
図９は、第２実施形態の検査容器４を模式的に示す平面図である。
検査容器４は、第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する第１流路２０の途中に精製チャンバ５０を備えている。第１流路２０は第１収容部１６と精製チャンバ５０とを接続する第１流路第１部２０ａと、精製チャンバ５０と第２収容部１８とを接続する第１流路第２部２０ｂとから構成されている。
図９は、第２実施形態の検査容器４を模式的に示す平面図である。
検査容器４は、第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する第１流路２０の途中に精製チャンバ５０を備えている。第１流路２０は第１収容部１６と精製チャンバ５０とを接続する第１流路第１部２０ａと、精製チャンバ５０と第２収容部１８とを接続する第１流路第２部２０ｂとから構成されている。
精製チャンバ５０は、検体液から夾雑物を除去するためのチャンバである。精製方法としては、特に限定されず、公知の方法を用いることができる。例えば、メンブレンフィルター法、限外ろ過法、透析法、ゲルろ過法あるいは脱塩法などを利用できる。また、イオン交換樹脂あるいはモレキュラーシーブなどの吸着剤を用いて、夾雑物をトラップする方法を用いてもよい。精製チャンバ５０を備えることにより、検体液４０中に含まれる夾雑物による核酸の増幅阻害を抑制でき、より精度の高い検査が可能となる。
本検査容器４は、上記構成以外は、第１実施形態の検査容器１と同様の構成をしている。したがって、同様の効果を得ることができる。
「第３実施形態の検査容器」
図１０は、第３実施形態の検査容器５を模式的に示す平面図である。
検査容器５は、第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する第１流路２０の途中に第３収容部５６を備えている。第１流路２０は第１収容部１６と第３収容部５６とを接続する第１流路第１部２０ａと、精製チャンバ５０と第２収容部１８とを接続する第１流路第２部２０ｂとから構成されている。
図１０は、第３実施形態の検査容器５を模式的に示す平面図である。
検査容器５は、第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する第１流路２０の途中に第３収容部５６を備えている。第１流路２０は第１収容部１６と第３収容部５６とを接続する第１流路第１部２０ａと、精製チャンバ５０と第２収容部１８とを接続する第１流路第２部２０ｂとから構成されている。
第３収容部５６には、試薬４２が収容されている。試薬４２としては、例えば、増幅試薬と検出用のプローブを備える。第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する第１流路２０の途中に試薬４２が備えられているので、検体液４０が第１流路２０を通過している間に試薬が溶解し、検体液と混合されるため、第２収容部１８に到達した後、すぐに増幅を開始することができ、増幅工程の時間の短縮を図ることができる。
本検査容器５は、上記構成以外は、第１実施形態の検査容器１と同様の構成をしている。したがって、同様の効果を得ることができる。
「第４実施形態の検査容器」
図１１は、第４実施形態の検査容器６を模式的に示す平面図であり、図１２は、図１１に示す検査容器６の斜視図である。また、図１３の図１３Ａは、図１１の１３Ａ－１３Ａ線切断端面、図１３Ｂは図１１の１３Ｂ－１３Ｂ線切断端面、図１３Ｃは図１１の１３Ｃ－１３Ｃ線切断端面、図１３Ｄは、図１１の１３Ｄ－１３Ｄ線切断端面、及び図１３Ｅは図１１の１３Ｅ－１３Ｅ線切断端面をそれぞれ示す。
図１１は、第４実施形態の検査容器６を模式的に示す平面図であり、図１２は、図１１に示す検査容器６の斜視図である。また、図１３の図１３Ａは、図１１の１３Ａ－１３Ａ線切断端面、図１３Ｂは図１１の１３Ｂ－１３Ｂ線切断端面、図１３Ｃは図１１の１３Ｃ－１３Ｃ線切断端面、図１３Ｄは、図１１の１３Ｄ－１３Ｄ線切断端面、及び図１３Ｅは図１１の１３Ｅ－１３Ｅ線切断端面をそれぞれ示す。
本実施形態の検査容器６は、流路及び収容部を含む流路構造の一部を構成する凹部および孔部が形成された本体部材６Ａと、流路の底面を構成する底部材６Ｂとから構成されている。本例における本体部材６Ａ及び底部材６Ｂは検査容器１における本体部材１Ａ及び底部材１Ｂと同様の材料により構成される。
本検査容器６は、検査容器１と同様に、投入口１２と、蓋部１４と、第１収容部１６と、第２収容部１８と、第１流路２０と、第１シリンダ３１と、第２シリンダ３２と、第１栓３３と、第２栓３４とを備える。また、検査容器１は第２流路２４及び第３流路２６をさらに備える。さらに、第１流路２０の途中に、第１収容部１６側から順に精製チャンバ５０及び第３収容部５６を備えている。第１流路２０は、第１収容部１６と精製チャンバ５０とを接続する第１流路第１部２０ａと、精製チャンバ５０と第３収容部５６とを接続する第１流路第２部２０ｂと、第３収容部５６と第２収容部１８とを接続する第１流路第３部２０ｃとから構成されている。
精製チャンバ５０は、本体部材６Ａの中心近傍に設けられた厚み方向に貫く孔と、底部材６Ｂとによって構成され、精製チャンバ５０を構成する孔の本体部材６Ａの厚み方向の途中に精製フィルタ５１が備えられている。
第３収容部５６は、試薬４２を収容する収容部であり、本体部材６Ａの下面の精製チャンバ５０に隣接する位置に設けられた凹部と、底部材６Ｂとによって構成される（図１２、図１３Ｃ参照）。
第１流路第１部２０ａは、本体部材６Ａの下面に第１収容部１６から精製チャンバ５０に延びる凹部と、底部材６Ｂによって構成されている。第１流路第１部２０ａは、第１収容部１６及び精製チャンバ５０と本体部材６Ａの下面で連通している。
第１流路第２部２０ｂは、本体部材６Ａの上面に精製チャンバ５０から第３収容部に延びる凹部と、上面に開口する精製チャンバ及び第１流路第２部２０ｂを覆う封止部材５５とから構成されている。封止部材５５は精製チャンバ５０に精製フィルタ５１が挿入された後、精製チャンバ５０と第１流路第２部２０ｂを覆って本体部材６Ａの上面に固定され。第１流路第２部２０ｂは、精製チャンバ５０及び第３流路と本体部材６Ａの上面で連通している。
第１流路第３部２０ｃは、本体部材６Ａの下面に第３収容部５６から第２収容部１８に延びる凹部と、底部材６Ｂによって構成されている。第１流路第３部２０ｃは、第３収容部５６及び第２収容部１８と、本体部材６Ａの下面で連通している。
上記構成により、第１収容部１６に収容されている検体液４０は、下記のルートによって第２収容部１８へ送液される。まず、第１収容部１６から本体部材６Ａの下面に設けられている第１流路第１部２０ａを通過し、第１流路第１部２０ａに連通する精製チャンバ５０に本体部材６Ａの下面から流入する。図１３Ｂに破線矢印で示すように、精製チャンバ５０に流入した検体液４０は、精製チャンバ５０内において、精製フィルタ５１を通過して、本体部材６Ａの上面において、精製チャンバ５０に連通する第１流路第２部２０ｂに流入する。第１流路第２部２０ｂに流入した検体液４０は、図１３Ｃにおいて破線矢印で示すように、第１流路第２部２０ｂが連通する第３収容部５６の上部から第３収容部５６に流入する。さらに、第３収容部５６に、本体部材６Ａの下面で連通する第１流路第３部２０ｃを通過して第２収容部１８に送液される。
本検査容器６において、第１シリンダ３１、第２シリンダ３２、第１栓３３及び第２栓３４の構成は第１実施形態の検査容器１と同一の構成であり、同一の機能を奏するので、検査容器１と同様の効果を得ることができる。
また、精製チャンバ５０を備えているので、検体液４０中に含まれる夾雑物による核酸の増幅阻害を抑制でき、より精度の高い検査が可能である。
さらに、第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する第１流路２０の途中であって、精製チャンバ５０の下流に試薬４２が備えられているので、検体液４０が第１流路２０を通過している間に試薬が溶解し、検体液と混合されるため、第２収容部１８に到達した後、すぐに増幅を開始することができ、増幅工程の時間の短縮を図ることができる。
また、精製チャンバ５０を備えているので、検体液４０中に含まれる夾雑物による核酸の増幅阻害を抑制でき、より精度の高い検査が可能である。
さらに、第１収容部１６と第２収容部１８とを接続する第１流路２０の途中であって、精製チャンバ５０の下流に試薬４２が備えられているので、検体液４０が第１流路２０を通過している間に試薬が溶解し、検体液と混合されるため、第２収容部１８に到達した後、すぐに増幅を開始することができ、増幅工程の時間の短縮を図ることができる。
「第５実施形態の検査容器」
図１４は、第５実施形態の検査容器７を模式的に示す平面図である。
検査容器７は、第４実施形態の検査容器６において、第３収容部５６と第２収容部１８との間であって、第１流路第３部２０ｃ中に攪拌流路２２を備えた構成である。本例において、攪拌流路２２は蛇腹状の流路であるが、攪拌流路２２は、乱流を生じさせることができる構成であればよく、例えば、直線流路中に邪魔板を備えた構成であってもよい。
図１４は、第５実施形態の検査容器７を模式的に示す平面図である。
検査容器７は、第４実施形態の検査容器６において、第３収容部５６と第２収容部１８との間であって、第１流路第３部２０ｃ中に攪拌流路２２を備えた構成である。本例において、攪拌流路２２は蛇腹状の流路であるが、攪拌流路２２は、乱流を生じさせることができる構成であればよく、例えば、直線流路中に邪魔板を備えた構成であってもよい。
第３収容部５６と第２収容部１８との間に、攪拌流路２２を備えることによって、試薬４２の溶解を進めると共に、検体液４０と試薬４２の混合を促進させることができる。また、本検査容器７は、上記構成以外は、第４実施形態の検査容器６と同様の構成をしている。したがって、検査容器６と同様の効果を得ることができる。
「検査装置」
図１５は、一実施形態の検査装置１００の概略構成を示す図である。本検査装置１００は、検査容器６と、押圧機１０８と、第１加熱部１１２と、第２加熱部１１４と、検出部１２０と、モニタ１３０と、ＩＤ（identification）管理部１４０とを備える。図１６Ａは、検査装置１００における検査容器６と押圧機１０８との位置関係を示す平面図である。また、図１６Ｂは、検査装置１００における検査容器６と検出部１２０との位置関係を示す図１６Ａの１６Ｂ－１６Ｂ線断面図である。なお、検査容器６の水平面は検査装置１００の水平面に対して一致していても良く、傾斜していたり、垂直方向を向いていても良い。
図１５は、一実施形態の検査装置１００の概略構成を示す図である。本検査装置１００は、検査容器６と、押圧機１０８と、第１加熱部１１２と、第２加熱部１１４と、検出部１２０と、モニタ１３０と、ＩＤ（identification）管理部１４０とを備える。図１６Ａは、検査装置１００における検査容器６と押圧機１０８との位置関係を示す平面図である。また、図１６Ｂは、検査装置１００における検査容器６と検出部１２０との位置関係を示す図１６Ａの１６Ｂ－１６Ｂ線断面図である。なお、検査容器６の水平面は検査装置１００の水平面に対して一致していても良く、傾斜していたり、垂直方向を向いていても良い。
本構成においては、第４の実施形態の検査容器６を備えているが、検査容器１から７のいずれを用いてもよい。
押圧機１０８は、第１押込み棒１０１を備えた第１押圧部１０２と、第２押込み棒１０３を備えた第２押圧部１０４と、第１押圧部１０２及び第２押圧部１０４を制御する押圧制御ユニット１０６を備える。第１押圧部１０２及び第２押圧部１０４は、ステッピングモータあるいはソレノイドなどを用いたアクチュエータで第１押込み棒１０１及び第２押込み棒１０３を押し込んだり、引き出したりすることができる。アクチュエータは空気圧などの動力を用いた構成でもよい。
第１押圧部１０２は、検査容器６が設置された状態で第１押込み棒１０１が第１シリンダ３１の外部に開口する他端３１ａから第１シリンダ３１内に挿入可能な位置に配置される。第１押込み棒１０１によって、第１シリンダ３１内で第１栓３３を内部空間側に押圧して移動させることができる。
第２押圧部１０４は、検査容器６が設置された状態で第２押込み棒１０３が第２シリンダ３２の外部に開口する他端３２ａから第２シリンダ３２内に挿入可能な位置に配置される。第２押込み棒１０３によって、第２シリンダ３２内で第２栓３４を内部空間側に押圧して移動させることができる。
第２押圧部１０４は、検査容器６が設置された状態で第２押込み棒１０３が第２シリンダ３２の外部に開口する他端３２ａから第２シリンダ３２内に挿入可能な位置に配置される。第２押込み棒１０３によって、第２シリンダ３２内で第２栓３４を内部空間側に押圧して移動させることができる。
検査容器６の第１収容部１６に検体液４０が投入されて、蓋部１４を閉じることによって、内部空間が密閉された状態で、第１栓３３を第１押圧部１０２によって押圧して内部空間側に移動させることにより、検査容器６の第１収容部１６に収容された検体液４０を第２収容部１８に送液することができる。
また、第１押圧部１０２で第１栓３３を押圧し、かつ、第２押圧部１０４で第２栓３４を押圧することで、検査容器６の内部空間を加圧することができる。
第１加熱部１１２は、検査容器６の第２収容部１８の底面と接触する位置に設けられている。第１加熱部１１２は、第２収容部１８に収容された液体を加熱する。ここで、第２収容部１８に収容される液体は、検体液４０と試薬４２との混合液である。第１加熱部１１２は、検体液４０と試薬４２との混合液を加熱して、核酸増幅を促進させる。
第２加熱部１１４は、検査容器６の第１収容部１６の底面と接触する位置に設けられている。第２加熱部１１４は、第１収容部１６に収容された液体を加熱する。ここで、第２収容部１８に収容される液体は、検体液４０である。第２加熱部１１４は、前処理のために検体液４０を加熱する。なお、検査装置１００は、検体液４０の前処理のための加熱が不要な場合には、第２加熱部１１４を備えていなくてもよい。
第１加熱部１１２は、ペルチェ素子などを備え温調可能とされており、増幅工程における温度サイクルを実施する。他方、第２加熱部１１４は、第１加熱部１１２のような温度サイクルは不要であり、例えば、ヒーターから構成される。第１加熱部１１２及び第２加熱部１１４それぞれに用いられる加熱機構は、公知の加熱機構を用いることができ、特に制限されない。
検出部１２０は、第２収容部１８において、検体液４０中に検出対象物が含まれているか否かを検出する。検出部１２０は、励起光源１２２と、波長選択フィルタ１２３と、光検出器１２４とを備える。検出部１２０は、検査容器６の第２収容部１８の上方に配置されている。励起光源１２２は、波長選択フィルタ１２３を介して、特定の波長の励起光Ｌ１を第２収容部１８内に照射する。光検出器１２４は、励起光Ｌ１によって励起されて蛍光プローブから生じる蛍光Ｌ２を検出する。励起光Ｌ１は蛍光プローブの励起波長に応じて選択される。また、必要に応じて、強度や光量を調整するフィルタ、励起光Ｌ１を収束したり検出プローブ由来の蛍光Ｌ２を光検出器１２４へ集光するためのレンズ、あるいは光学系などを含んでもよい。
励起光源１２２としては、ＬＥＤあるいはレーザなどが用いられる。波長選択フィルタ１２３は、励起光源１２２から発せられた光のうちプローブの励起波長に応じた波長のみを透過するフィルタである。光検出器１２４としては、例えばフォトダイオードあるいは光電子増倍管などが適用される。
モニタ１３０は、例えばタッチパネルディスプレイであり、タッチパネル操作で測定をスタートさせたり、検査結果を表示したりする。
ＩＤ管理部１４０は、検査容器６に備えられたバーコード１４２を読み取るバーコードリーダを備え、検査容器６のＩＤを管理する。
「核酸検査方法」
上記実施形態の検査装置１００を用いた一実施形態の核酸検査方法について図１７を参照して説明する。
上記実施形態の検査装置１００を用いた一実施形態の核酸検査方法について図１７を参照して説明する。
本核酸検査方法は、核酸抽出工程（ＳＴＥＰ１）と、増幅工程（ＳＴＥＰ２）と、検出工程（ＳＴＥＰ３）とを含む。ＳＴＥＰ１の核酸抽出工程は、検査装置１００外で行い、増幅工程及び検出工程は検査装置１００において行う。
（核酸抽出工程）
まず、検査装置１００とは別途に用意したスワブなどの採取具１５１を用いて生体から検体を採取する。具体的には、被験者の鼻腔、咽頭、口腔内部あるいは患部から採取具を用いて採取する。もしくは、鼻腔、咽頭、口腔内部の洗浄液、唾液、尿あるいは血液などの体液を検体として採取する。
まず、検査装置１００とは別途に用意したスワブなどの採取具１５１を用いて生体から検体を採取する。具体的には、被験者の鼻腔、咽頭、口腔内部あるいは患部から採取具を用いて採取する。もしくは、鼻腔、咽頭、口腔内部の洗浄液、唾液、尿あるいは血液などの体液を検体として採取する。
次いで、検査装置１００とは別途に用意した抽出具１５２を用いて検体からＤＮＡあるはＲＮＡなどの核酸を抽出し、検体液４０の状態にする。本例において、抽出具１５２は核酸抽出液を収容しており、核酸抽出液中に検体を浸漬して核酸の抽出を行う。核酸抽出方法としては、公知の核酸抽出方法を特に制限なく利用できる。例えば、界面活性剤やカオトロピック物質を用いる方法、超音波やビーズミルなどの物理的なせん断を加える方法が挙げられる。
（増幅工程）
抽出具１５２に粗大物を除去する粗フィルタ１５３ａを備えた滴下用のキャップ１５３を付け、検査容器６の投入口１２から検体液４０を投入する。なお、抽出具１５２から検体液４０をピペットなどで吸い取り、投入口１２から投入してもよい。検体液４０の投入完了後には蓋部１４により投入口１２を閉じて、検査容器６の内部空間を密閉する。
抽出具１５２に粗大物を除去する粗フィルタ１５３ａを備えた滴下用のキャップ１５３を付け、検査容器６の投入口１２から検体液４０を投入する。なお、抽出具１５２から検体液４０をピペットなどで吸い取り、投入口１２から投入してもよい。検体液４０の投入完了後には蓋部１４により投入口１２を閉じて、検査容器６の内部空間を密閉する。
この検査容器６を検査装置１００の検査容器設置部に設置し、以下の増幅工程及び検出工程を検査装置１００において実施する。
第１収容部１６に収容された検体液４０を、第２加熱部１１４を用いて加熱する。加熱により、核酸の溶出を促進したり、制限酵素を不活性化して抽出した核酸の分解を抑制したりすることができる。加熱温度としては、核酸に悪影響を及ぼさない温度範囲であればよいが、例えば、５０℃から９５℃程度が好ましい。
第１収容部１６内において前処理としての加熱処理がなされた検体液４０を、第２収容部１８に向けて送液する。第１シリンダ３１の外部に開口する他端３１ａから第１押圧部１０２の第１押込み棒１０１を挿入して、第１栓３３を検査容器６の内部空間側に押圧して移動させる。これによって、第１収容部１６に収容されている検体液４０を第２収容部１８へと送液することができる。この際、第１栓３３が押し込まれて内部空間が加圧されることにより、第２シリンダ３２内の第２栓３４が外部側に向かって移動することにより内部空間内の圧力が調整され、弱い押圧で送液することができる。
検体液４０は、第１収容部１６から精製チャンバ５０及び第３収容部５６を経て第２収容部１８に送液される。精製チャンバ５０においては精製フィルタ５１によって検体液４０中の夾雑物が除去され、夾雑物が除去された検体液４０が第３収容部５６へと送液される。第３収容部５６には試薬４２が備えられており、第３収容部５６に検体液４０が流入することで、試薬４２が溶解されて、検体液４０と試薬４２が混合されつつ、第２収容部１８へと送液される。
第２収容部１８に検体液４０と試薬４２の混合液が送液された後、第２シリンダ３２の外部に開口する他端３２ａから第２押圧部１０４の第２押込み棒１０３を挿入して、第２栓３４を押圧して、内部空間を加圧する。この加圧状態で、第１加熱部１１２により第２収容部１８内の混合液を加熱し、特定の核酸配列を増幅させる。なお、増幅方法は限定されるものではないが、例えば、ＲＴ－ＰＣＲ法、あるいはＰＣＲ法を用いる。ＰＣＲ法を用いる場合、二本鎖ＤＮＡを高温で一本鎖ＤＮＡに解離させる工程（熱変性工程）、その後温度を下げてプライマーを一本鎖ＤＮＡに結合させる工程（アニーリング工程）、および一本鎖ＤＮＡを鋳型として、ポリメラーゼにより、新たに二重鎖ＤＮＡを合成する工程（伸長工程）を繰り返す。熱変性工程、アニーリング工程及び伸長工程の温度サイクルの一例として、９４℃で１分、５０～６０℃で１分、７２℃で１～５分を１サイクルとして、２０～５０回繰り返すものが挙げられる。また、熱変性工程、アニーリング工程を１つの温度で行ってもよい。このような温度サイクルの一例としては、例えば、９４℃で１分、６０℃で１分を１サイクルとして、２０～５０回繰り返すものが挙げられる。増幅工程における温度サイクルの温度、時間は特に制限はなく、ポリメラーゼやプライマーの性能により任意に選択される。
（検出工程）
上記の温度サイクルの１サイクルごとに蛍光検出を行いリアルタイムに増幅状況をモニタリングする。すなわち、本例においては、増幅工程と検出工程とを並行して実施する。蛍光検出の結果はモニタ１３０に表示する。
上記の温度サイクルの１サイクルごとに蛍光検出を行いリアルタイムに増幅状況をモニタリングする。すなわち、本例においては、増幅工程と検出工程とを並行して実施する。蛍光検出の結果はモニタ１３０に表示する。
検体液４０内に特定の核酸配列が存在した場合、増幅工程でその核酸配列が増幅され、この特定の核酸配列に標識される蛍光プローブに励起光が照射されることにより、蛍光が検出される。他方、検体液４０内に特定の核酸配列が存在しない場合には、励起光を照射しても蛍光が検出されない。これによって、特定の核酸配列の有無を判定することができる。
本検査装置１００を用いた検査方法によれば、検査容器６の内部空間を密閉した状態で、第１栓３３及び第２栓３４をそれぞれ外部から押圧する（矢印Ｐ１、Ｐ２）ことにより、内部空間を加圧することができる。そして、加圧した状態で、第１加熱部１１２を用いて検体液４０と試薬４２の混合液を加熱するので、加熱時に生じ得る発泡を抑制することができ、発泡により核酸増幅が阻害されるのを抑制することができる。そのため、第２収容部１８における核酸増幅工程を阻害されることなく進行させることができるので、増幅時間の遅延を生じたり、増幅不足を生じたりすることなく、検査精度を向上させることができる。
上記検査装置１００を用いた検査方法においては、蛍光プローブを用いた蛍光法により、核酸の有無の判定を行っているが、核酸の有無の検出方法としては、蛍光法に限らず、核酸クロマト法、光散乱法、シーケンス法及び電気化学法などの他の検出方法を用いてもよい。これらは、検出部を適宜変更することで実現可能である。なお、リアルタイムに検出が可能であり、強陽性患者を迅速に判定できる点から、蛍光法あるいは電気化学法による検出方法が特に好ましい。
１、２、３、４、５、６、７ 検査容器
１Ａ、６Ａ 本体部材
１Ｂ、６Ｂ 底部材
１２ 投入口
１４ 蓋部
１５ 筒状部
１６ 第１収容部
１８ 第２収容部
２０ 第１流路
２０ａ 第１流路第１部
２０ｂ 第１流路第２部
２０ｃ 第１流路第３部
２２ 攪拌流路
２４ 第２流路
２６ 第３流路
３１ 第１シリンダ
３１ａ 第１シリンダの他端
３１ｂ 第１シリンダの一端
３２ 第２シリンダ
３２ａ 第２シリンダの他端
３２ｂ 第２シリンダの一端
３３ 第１栓
３４ 第２栓
３４ａ 第２栓の凹部形状の穴
３６ 空気穴
４０ 検体液
４２ 試薬
５０ 精製チャンバ
５１ 精製フィルタ
５５ 封止部材
５６ 第３収容部
１００ 検査装置
１０１ 第１押込み棒
１０２ 第１押圧部
１０３ 第２押込み棒
１０３ａ 第２押込み棒の突起
１０４ 第２押圧部
１０６ 押圧制御ユニット
１０８ 押圧機
１１２ 第１加熱部
１１４ 第２加熱部
１２０ 検出部
１２２ 励起光源
１２３ 波長選択フィルタ
１２４ 光検出器
１３０ モニタ
１４０ 管理部
１４２ バーコード
１５１ 採取具
１５２ 抽出具
１５３ キャップ
１５３ａ 粗大フィルタ
１Ａ、６Ａ 本体部材
１Ｂ、６Ｂ 底部材
１２ 投入口
１４ 蓋部
１５ 筒状部
１６ 第１収容部
１８ 第２収容部
２０ 第１流路
２０ａ 第１流路第１部
２０ｂ 第１流路第２部
２０ｃ 第１流路第３部
２２ 攪拌流路
２４ 第２流路
２６ 第３流路
３１ 第１シリンダ
３１ａ 第１シリンダの他端
３１ｂ 第１シリンダの一端
３２ 第２シリンダ
３２ａ 第２シリンダの他端
３２ｂ 第２シリンダの一端
３３ 第１栓
３４ 第２栓
３４ａ 第２栓の凹部形状の穴
３６ 空気穴
４０ 検体液
４２ 試薬
５０ 精製チャンバ
５１ 精製フィルタ
５５ 封止部材
５６ 第３収容部
１００ 検査装置
１０１ 第１押込み棒
１０２ 第１押圧部
１０３ 第２押込み棒
１０３ａ 第２押込み棒の突起
１０４ 第２押圧部
１０６ 押圧制御ユニット
１０８ 押圧機
１１２ 第１加熱部
１１４ 第２加熱部
１２０ 検出部
１２２ 励起光源
１２３ 波長選択フィルタ
１２４ 光検出器
１３０ モニタ
１４０ 管理部
１４２ バーコード
１５１ 採取具
１５２ 抽出具
１５３ キャップ
１５３ａ 粗大フィルタ
Claims (16)
- 検体液を投入する投入口と、
前記投入口を覆う着脱可能な蓋部と、
前記投入口が開口端面として有する様に設けられた、前記投入口から滴下された検体液を収容する第１収容部と、
液体を収容可能な第２収容部であって、前記検体液と試薬とを反応させる第２収容部と、
前記第１収容部と前記第２収容部とを接続する第１流路と、
第２流路を介して前記第１収容部に一端が接続された第１シリンダであって、他端が外部に開口した第１シリンダと、
第３流路を介して前記第２収容部に一端が接続された第２シリンダであって、他端が外部に開口した第２シリンダと、
前記第１シリンダ内を移動可能に備えられた第１栓と、
前記第２シリンダ内を移動可能に備えられた第２栓とを備え、
前記第１栓及び前記第２栓を外部から押圧して移動させることにより、前記第１収容部、前記第２収容部、前記第１流路、前記第２流路及び前記第３流路を含む内部空間を加圧可能である、検査容器。 - 前記第１栓及び第２栓によって、前記内部空間が密閉されており、前記第１シリンダ内において、前記第１栓を外部から押圧して前記内部空間側に移動させた場合に、前記第１栓の移動に連動して前記第２栓が前記第２シリンダ内において前記内部空間側から前記外部側へと移動する、請求項１に記載の検査容器。
- 前記第２シリンダの一部に空気穴が設けられており、前記第２栓を前記空気穴よりも前記内部空間側に移動させることにより、前記内部空間の加圧が可能となる請求項１に記載の検査容器。
- 前記第１流路の途中に、前記検体液中に夾雑物を除去する精製チャンバを備えた、請求項１から３のいずれか１項に記載の検査容器。
- 前記試薬が前記第２収容部に収容されている、請求項１から４のいずれか１項に記載の検査容器。
- 前記第１流路の途中に、前記試薬を収容した第３収容部を備えた、請求項１から４のいずれか１項に記載の検査容器。
- 前記第１流路の途中であって、前記精製チャンバと前記第２収容部との間に、前記第３収容部を備えた、請求項４を引用する請求項６に記載の検査容器。
- 前記第３収容部と前記第２収容部との間に前記検体液と前記試薬との混合を促進する撹拌流路を備えた、請求項６又は７に記載の検査容器。
- 前記第２収容部の底面が、フィルムにより構成されている、請求項１から８のいずれか１項に記載の検査容器。
- 前記試薬が特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と、核酸配列判定用のプローブを含む、請求項１から９のいずれか１項に記載の検査容器。
- 請求項１から９のいずれか１項に記載の検査容器と、
前記検査容器の前記第１シリンダ内の前記第１栓を外部から押圧する第１押圧部と、前記第２シリンダ内の前記第２栓を外部から押圧する第２押圧部とを備えた押圧機を備え、
前記第１栓を前記第１押圧部によって押圧して前記内部空間側に移動させることにより、前記検査容器の前記第１収容部に収容された前記検体液を前記第２収容部に送液する、検査装置。 - 前記検査容器の前記第２収容部の底面と接触する位置に設けられた第１加熱部であって、前記第２収容部に収容された液体を加熱する第１加熱部を備えた、請求項１１に記載の検査装置。
- 前記検査容器の前記第１収容部の底面と接触する位置に設けられた第２加熱部であって、前記第１収容部に収容された液体を加熱する第２加熱部を備えた、請求項１１又は１２に記載の検査装置。
- 前記第２収容部において、前記検体液中に検出対象物が含まれているか否かを検出する検出部を備えた請求項１１から１３のいずれか１項に記載の検査装置。
- 前記検査容器において、前記試薬が特定の核酸配列を増幅する増幅試薬と、核酸配列判定用の蛍光プローブを含み、
前記検出部が、前記第２収容部に収容されている液体に対して、前記蛍光プローブを励起するための励起光を照射する励起光源と、前記励起光の照射により励起された前記蛍光プローブから発光される蛍光を検出する光検出器を備えた、請求項１４に記載の検査装置。 - 請求項１５に記載の検査装置を用いた核酸検査方法であって、
採取具を用いて生体から採取した検体を核酸抽出液に浸漬し、前記検体から核酸を抽出し、
前記検査容器の前記投入口から、前記検体液として前記核酸を含む液体を投入し、
前記投入口を前記蓋部によって密閉し、
前記第１収容部に収容された前記検体液を、前記押圧機によって、前記第２収容部に送液し、
前記第２収容部において、前記検体液と前記試薬との混合液を温調することにより前記特定の核酸配列を増幅し、
前記励起光源を前記混合液に照射し、前記光検出器を用いて前記蛍光プローブから生じる蛍光を検出し、
前記特定の核酸配列の有無を判定する、核酸検査方法。
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