JP7316802B2

JP7316802B2 - 糖吸収促進用組成物

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Publication number: JP7316802B2
Application number: JP2019027010A
Authority: JP
Inventors: 忠昭宮崎; 通生河野; 雅也三好
Original assignee: Megmilk Snow Brand Co Ltd
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Filing date: 2019-02-19
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Description

本発明は、乳酸菌および/またはビフィズス菌の菌体を有効成分とする腸管における糖吸収促進組成物に関する。

糖質は消化吸収されて血中を巡り、全身の組織のエネルギー源となる。特に脳においては、血液中のグルコースが主なエネルギー源となるため、極端な糖質不足は、めまいやふらつき、集中力の欠如につながり、重篤な場合には意識障害を引き起こすこともある。

血中の糖質不足は、例えば極端なダイエットや摂食障害等によって、糖質摂取量が恒常的に不足している場合、あるいは空腹時の運動等によって糖質消費過多になった場合に起こりうる。また、糖尿病患者が使用するインスリン製剤や経口血糖低下薬の副作用としても報告されている。

腸管における糖の吸収不良もまた、糖質不足の原因となりうる。腸管での糖の取り込みは、主に腸上皮細胞に発現する単糖トランスポーターを介して行われる。小腸には、ナトリウム依存性の一方向性輸送体であるＳＧＬＴ１と、促進性の双方向輸送体であるＧＬＵＴ２およびＧＬＵＴ５の３つの単糖トランスポーターが発現しており、腸管管腔側から体内への糖の取り込みに寄与している。これらの単糖トランスポーターの発現が阻害されると腸管からの糖の取り込みが抑制される。例えばトマト種子由来サポニンであるトマトシドＡは、腸上皮細胞のＳＧＬＴ１の発現を抑制することで糖の取り込みを抑制することが報告されている（特許文献１）。また、リンゴや玉ねぎに含まれるケルセチン、セロリやパセリに含まれるアピゲニンは、いずれもＧＬＵＴ２とＧＬＵＴ５の遺伝子発現を著しく低下させる作用を持ち、糖の取り込みを抑制することが報告されている（非特許文献１）。

腸管における糖の取り込みを促進することは、糖質不足を改善するための手段の一つであると考えられる。しかしながら、糖の取り込み抑制効果を示す食品や医薬組成物が数多く報告されている一方、糖の取り込みを促進する食品や医薬組成物はほとんど報告されていない。

ところで、乳酸菌およびビフィズス菌は、古来より発酵食品の製造に使用される細菌であるが、近年の研究で様々な健康機能の増進に寄与することが明らかとなりつつある。乳酸菌培養物は、糖の吸収にも影響することが示唆されている。特許文献２では、乳酸菌を含む様々な微生物を用いて作る発酵乳ケフィアの抽出物（分子量１０００以下）が、筋管細胞への糖の取り込み促進に寄与することが示されている。しかしながら、乳酸菌やビフィズス菌の菌体そのものが腸管での糖の取り込み促進に関与するか否かは、いずれの文献にも開示も示唆もされていない。

特開２０１７－１９２３１２号特許３８１３８０８号

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＦｏｏｄｓ（２０１７）、３６、４２９－４３９

本発明は、新規な腸管における糖吸収促進用組成物を提供することを課題とする。

本発明は、以下の新たな糖吸収促進用組成物を提供するものである。
＜１＞ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属またはビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体を有効成分とする腸管における糖吸収促進用組成物。
＜２＞Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する菌が、ラクトバチルスアシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルスアミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルスヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルスジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルスパラカゼイサブスピーシーズパラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルスプランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルスロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルスラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズクレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストックメセンテロイデスサブスピーシーズメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、リューコノストックシュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ビフィドバクテリウムロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウムアドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウムビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウムブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウムカテニュラタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ビフィドバクテリウムシュードカテニュラタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ビフィドバクテリウムシュードロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ）から選択されるひとつ以上であることを特徴とする＜１＞に記載の腸管における糖吸収促進用組成物。
＜３＞Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属またはＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属に属する菌が、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓＪＣＭ１１３２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓＪＣＭ１１２６、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓＪＣＭ１００２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＪＣＭ１０１２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓＪＣＭ１１２０、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉＪＣＭ２０１２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉＪＣＭ８１３０、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍＪＣＭ１１４９、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｅｕｔｅｒｉＪＣＭ１１１２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＪＣＭ１１３６、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓＪＣＭ１６１６７、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＪＣＭ５８０５、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓＪＣＭ６１２４、ＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓＪＣＭ９６９６、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２１７、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓＪＣＭ１２７５、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｉｆｉｄｕｍＪＣＭ１２５５、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｒｅｖｅＪＣＭ１１９２、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍＪＣＭ１１９４、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍＪＣＭ１２００、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２０５から選択されるひとつ以上であることを特徴とする＜２＞に記載の腸管における糖吸収促進用組成物。
＜４＞＜１＞～＜３＞のいずれか一つに記載の糖吸収促進用組成物を含む、糖吸収促進用飼料組成物、糖吸収促進用医薬組成物、又は糖吸収促進用食品組成物。

本発明によれば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属およびリューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属に属する乳酸菌およびビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属するビフィズス菌の菌体を有効成分とする腸管における糖吸収促進用組成物を提供することができる。

腸管上皮様に培養したヒト結腸癌由来細胞株Ｃａｃｏ－２に、様々な乳酸菌またはビフィズス菌加熱死菌体を添加して、２４時間培養後に各種グルコーストランスポーター（ＳＧＬＴ１、ＧＬＵＴ２、ＧＬＵＴ５）の遺伝子発現量を比較したグラフである。

（乳酸菌およびビフィズス菌）
本発明の乳酸菌およびビフィズス菌は、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属およびリューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属に分類される乳酸菌およびビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に分類されるビフィズス菌であればどのようなものでも用いることができる。
具体的には、ラクトバチルスアシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルスアミロボラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓ）、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズラクティス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、ラクトバチルスヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルスジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）、ラクトバチルスパラカゼイサブスピーシーズパラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルスプランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルスロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルスラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズクレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ）、ラクトコッカスラクティスサブスピーシーズラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓ）、リューコノストックメセンテロイデスサブスピーシーズメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、リューコノストックシュードメセンテロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、ビフィドバクテリウムロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍ）、ビフィドバクテリウムアドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウムビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウムブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウムカテニュラタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ビフィドバクテリウムシュードカテニュラタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ）、ビフィドバクテリウムシュードロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ）等を例示できるが、これらに限定されるものではない。

本発明の乳酸菌は、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓＪＣＭ１１３２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓＪＣＭ１１２６、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓＪＣＭ１００２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＪＣＭ１０１２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓＪＣＭ１１２０、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉＪＣＭ２０１２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉＪＣＭ８１３０、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍＪＣＭ１１４９、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｅｕｔｅｒｉＪＣＭ１１１２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＪＣＭ１１３６、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓＪＣＭ１６１６７、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＪＣＭ５８０５、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓＪＣＭ６１２４、ＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓＪＣＭ９６９６、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２１７、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓＪＣＭ１２７５、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｉｆｉｄｕｍＪＣＭ１２５５、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｒｅｖｅＪＣＭ１１９２、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍＪＣＭ１１９４、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍＪＣＭ１２００、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２０５であることが好ましい。
上記の菌株は、理化学研究所バイオリソースセンター（日本、茨城県、つくば市）等から入手することができる。

（乳酸菌およびビフィズス菌の調製）
乳酸菌およびビフィズス菌は、各菌の培養の常法に従って培養し、所望の量を調製すればよい。調製の一例を以下に示す。ラクトバチルス属に属する乳酸菌はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて、ラクトコッカス属に属する乳酸菌はＭ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて、リューコノストック属に属する乳酸菌およびビフィドバクテリウム属に属するビフィズス菌は、１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）を用いてそれぞれ培養し、得られた培養物を遠心分離により集菌することにより菌体を得る。得られた菌体をそのまま用いてもよいし、濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体を用いることもできる。菌体は加熱乾燥などにより死菌体にしたものを用いることもできる。

（利用方法）
上記したとおり、本発明の組成物は濃縮、乾燥、凍結乾燥処理に供した菌体、加熱乾燥などにより得られる死菌体も有効成分とすることができることから、製剤、飲食品、飼料の原料として広く用いることができる。製剤、飲食品、又は飼料を培地として菌体を培養して、当該培地をそのまま製剤、飲食品、又は飼料として用いてもよく、または、他の培地で培養した菌体を製剤、飲食品、又は飼料に添加してもよい。

本発明の組成物の投与対象は特に限定されず、ヒトに対して投与することができるが、投与対象はヒト以外の動物（例えば、イヌ、ネコ、ウマ又はウサギ等）であることもできる。投与対象がヒトである場合は、２０歳未満の未成年、成人、又は６５歳以上の高齢者などに投与することができる。
本発明の組成物の摂取量は、投与対象者の症状、年齢などを考慮してそれぞれ個別に決定されるが、通常成人の場合、一日あたり１－５０００ｍｇ程度摂取すればよい。

（糖吸収促進能の評価方法）
実施例に記載の方法で評価が可能である。

以下、本発明の実施例をもとにさらに詳細に説明するが、本発明は係る実施例に限定して解釈されるものではない。

（実施例品１）乳酸菌およびビフィズス菌加熱死菌体
下記（１）の各供試菌を、ラクトバチルス属はＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ）、ラクトコッカス属はＭ１７培地（Ｄｉｆｃｏ）、リューコノストック属およびビフィドバクテリウム属は１％グルコース含有ＧＡＭブイヨン（日水）にそれぞれ植菌し、３７℃にて１６時間静置培養を行った。培養物を、生理食塩水にて２回、滅菌水にて１回洗浄し、洗浄菌体を得た。この洗浄菌体を凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。菌体粉末を１０ｍｇ/ｍｌになるように滅菌ＰＢＳ（－）で希釈し、８０℃にて３０分間加熱して加熱死菌体を得た。加熱死菌体は１００μｇ/ｍｌとなるように１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１×Ｎｏｎ－ｅｓｓｅｎｔｉａｌＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）で希釈した。

（１）供試菌
ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の下記２１株を供試菌とした。
ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓＪＣＭ１１３２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌｏｖｏｒｕｓＪＣＭ１１２６、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓＪＣＭ１００２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＪＣＭ１０１２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓＪＣＭ１１２０、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｊｏｈｎｓｏｎｉｉＪＣＭ２０１２、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐａｒａｃａｓｅｉｓｕｂｓｐ．ｐａｒａｃａｓｅｉＪＣＭ８１３０、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌａｎｔａｒｕｍＪＣＭ１１４９、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｅｕｔｅｒｉＪＣＭ１１１２、ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｒｈａｍｎｏｓｕｓＪＣＭ１１３６、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｃｒｅｍｏｒｉｓＪＣＭ１６１６７、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓｌａｃｔｉｓｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＪＣＭ５８０５、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓｓｕｂｓｐ．ｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓＪＣＭ６１２４、ＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｐｓｅｕｄｏｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓＪＣＭ９６９６、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２１７、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓＪＣＭ１２７５、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｉｆｉｄｕｍＪＣＭ１２５５、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｂｒｅｖｅＪＣＭ１１９２、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍＪＣＭ１１９４、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍＪＣＭ１２００、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍＪＣＭ１２０５
上記の菌株は、理化学研究所バイオリソースセンター（日本、茨城県、つくば市）等から入手することができる。

[試験例１]乳酸菌およびビフィズス菌によるグルコーストランスポーター発現促進効果に関する試験
実施例品１を以下の試験に供した。
ＣｅｌｌｍａｔｒｉｘｔｙｐｅＩ－Ｃ（新田ゼラチン）でコラーゲンコートした２４ｗｅｌｌｐｌａｔｅ（ＢＤ）に、ヒト結腸癌由来細胞株Ｃａｃｏ－２を５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、１０％ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１×Ｎｏｎ－ｅｓｓｅｎｔｉａｌＡｍｉｎｏＡｃｉｄｓ（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｓｉｇｍａ）を含むＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ）で培養した。２－３日ごとに培地交換しながら２４日間培養し、腸上皮様に分化させた。２４日後、細胞をＰＢＳで１回洗浄し、試験群には各種菌体を１００μｇ／ｍｌで懸濁した培地を、コントロール群には菌体を含まない培地を添加して、２４時間培養した。２４時間後、細胞を冷ＰＢＳ（－）で１回洗浄し、洗浄した細胞に、ＴＲＩｚｏｌＲｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）３００μｌを入れ、細胞をピペッティングにより溶解した。細胞溶解液を１．５ｍｌチューブに回収し、５分以上室温でインキュベートした後、ＲＮＡ抽出操作実施まで－８０℃で保存した。

－８０℃で保管しておいた細胞溶解液を室温に戻し、６０μｌ（５分の１量）のクロロホルムを添加した。手で力強く振って撹拌した後、室温で３分間静置した。１２，０００×ｇ、４℃で１５分間遠心し、上層（水層）を別のチューブに移した。水層と等量のイソプロプロパノールを添加してピペッティングにより混合し、室温で１０分間静置した。２０，０００×ｇ、４℃で１０分間遠心し、ペレットを残して上清を除去した。３００μｌの７５％エタノールを添加し、転倒混和によってペレットを洗い、２０，０００×ｇ、４℃で５分間遠心した。ペレットを残して上清を完全に除去し、３０分間風乾した。３０μｌのＮｕｃｌｅａｓｅ－ＦｒｅｅＷａｔｅｒでペレットを懸濁し、５５℃で１０分間インキュベートしてＲＮＡを溶解した。溶解したＲＮＡ溶液を氷冷し、ＢｉｏＳｐｅｃ－ｎａｎｏ（島津製作所）により核酸濃度を測定した。

ＲＮＡからのｃＤＮＡ合成は、ＲｅｖｅｒＴｒａＡｃｅ（Ｔｏｙｏｂｏ）のプロトコールをスケールダウンしたものに従って実施した。逆転写に供する総ＲＮＡ量は２５０ｎｇ／μｌとした。合成したｃＤＮＡは、定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）に供するまで－２０℃で保存した。

ｑＰＣＲ反応試薬は、ＫＡＰＡＳＹＢＲＦＡＳＴＭａｓｔｅｒＭｉｘ（２×）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ（ＫａｐａＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いた。ｑＰＣＲ装置はＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。ｑＰＣＲ反応は、ＫＡＰＡＳＹＢＲＦＡＳＴＭａｓｔｅｒＭｉｘ（２×）Ｕｎｉｖｅｒｓａｌの「ＡＢＩ社製装置用プロトコール（Ｆａｓｔプログラム）」をスケールダウンしたものに従って実施した。テンプレートには２０倍希釈したｃＤＮＡを１μｌ／ｗｅｌｌ用いた。ｑＰＣＲプログラムは、ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓシステムのＦａｓｔプログラムを一部改変して使用した（反応液量：２０μｌ／ｗｅｌｌ→５μｌ／ｗｅｌｌ、ＤｅｎａｔｕｒｅＳｔｅｐの反応時間：３秒→５秒、ＡｎｎｅａｌｉｎｇＳｔｅｐの反応温度：すべて６０℃）。

ＳＧＬＴ１、ＧＬＵＴ２およびＧＬＵＴ５遺伝子の相対発現量は、ΔΔＣＴ法にて算出した。各遺伝子の相対発現量は、ハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨの相対発現量にて補正した。試験に使用したプライマーの塩基配列は以下に示す。

（試験結果）
腸上皮様に分化させたＣａｃｏ－２細胞に、乳酸菌またはビフィズス菌２１菌種のいずれかを添加して２４時間培養した時の、グルコーストランスポーターの遺伝子発現量を図１に示した。ＳＧＬＴ１およびＧＬＵＴ５については、すべての供試菌株が遺伝子発現を増加させた（Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して、ＳＧＬＴ１は約１．５－２．５倍、ＧＬＵＴ５は約１．２－２．７倍）。また、ＧＬＵＴ２についても、ラクトバチルスアミロボラス、ラクトバチルスパラカゼイサブスピーシーズパラカゼイ、ラクトバチルスロイテリ、ラクトバチルスラムノーサスの４菌種は遺伝子発現にほとんど影響を与えなかったが、それ以外の１７菌種は遺伝子発現を増加させた（Ｃｏｎｔｒｏｌ群と比較して約１．２－２．３倍）。したがって、乳酸菌およびビフィズス菌の菌体は、菌種によらず、単糖トランスポーターの遺伝子発現を増加させ、腸管における糖の取り込みを増加させることが示唆された。

本発明によれば、ラクトバチルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、リューコノストック（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ）属またはビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する菌の菌体を有効成分とする腸管における糖吸収促進用組成物を提供することができる。

Claims

ラクトバチルス（Lactobacillus）属に属する菌の菌体を有効成分とする腸管における糖吸収促進用組成物であって、ラクトバチルス（Lactobacillus）属に属する菌が、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズラクティス（Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis）、ラクトバチルスヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、ラクトバチルスジョンソニー（Lactobacillus johnsonii)、ラクトバチルスプランタラム（Lactobacillus plantarum）、から選択されるひとつ以上である前記組成物。
ラクトバチルス(Lactobacillus)属に属する菌が、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズブルガリクス(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)JCM1002、ラクトバチルスデルブルッキーサブスピーシーズラクティス(Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactis)JCM1012、ラクトバチルスヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）JCM1120、ラクトバチルスジョンソニー(Lactobacillus johnsonii)JCM2012、ラクトバチルスプランタラム(Lactobacillus plantarum)JCM1149から選択されるひとつ以上であることを特徴とする請求項１に記載の腸管における糖吸収促進用組成物。
請求項１又は２に記載の糖吸収促進用組成物を含む、糖吸収促進用飼料組成物、糖吸収促進用医薬組成物、又は糖吸収促進用食品組成物。