JP7169501B2 - Intracellular oxidative stress inhibitor and use thereof - Google Patents
Intracellular oxidative stress inhibitor and use thereof Download PDFInfo
- Publication number
- JP7169501B2 JP7169501B2 JP2018172289A JP2018172289A JP7169501B2 JP 7169501 B2 JP7169501 B2 JP 7169501B2 JP 2018172289 A JP2018172289 A JP 2018172289A JP 2018172289 A JP2018172289 A JP 2018172289A JP 7169501 B2 JP7169501 B2 JP 7169501B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oxidative stress
- alvarose
- water
- intracellular
- soluble extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Cosmetics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
本発明は、細胞内酸化ストレス抑制剤に関し、より詳細には特定のバラエキスを有効成分とする細胞内酸化ストレス抑制剤及びその用途に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to an intracellular oxidative stress inhibitor, and more particularly to an intracellular oxidative stress inhibitor containing a specific rose extract as an active ingredient and uses thereof.
外部環境と接触するヒトの肌や皮膚は、常に紫外線、乾燥状態や酸化状態にさらされている。これらの外部環境は、肌の乾燥、シミ、シワやたるみといった皮膚の問題を引き起こす。これらの問題は、紫外線等の外部環境による細胞内活性酸素種（Ｏ２ ・－、Ｈ２Ｏ２、１Ｏ２及びＯＨ・、以下、ＲＯＳという）の生成、細胞内酸化ストレスの亢進、そして細胞内酸化ストレスによる分子損傷、細胞への影響や細胞死と関連する（非特許文献１）。 Human skin and skin in contact with the external environment are constantly exposed to ultraviolet rays, dry conditions and oxidized conditions. These external environments cause skin problems such as skin dryness, spots, wrinkles and sagging. These problems are caused by the generation of intracellular reactive oxygen species (O 2.− , H 2 O 2 , 1 O 2 and OH . , hereinafter referred to as ROS) due to the external environment such as ultraviolet rays, the enhancement of intracellular oxidative stress, and It is associated with molecular damage, effects on cells, and cell death due to intracellular oxidative stress (Non-Patent Document 1).
人体は、抗酸化物質（Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ、以下、ＡＯＸという）を備えており、通常、ＡＯＸとＲＯＳとがバランスを保っている。バランスのとれた状態では、ＲＯＳは、一酸化窒素と反応してその作用を消滅させる、体内に侵入した細菌を取り除くといった役割を果たす。皮膚が紫外線曝露、乾燥や酸化状態にさらされると、ＲＯＳレベルが上昇する。ＲＯＳの蓄積がＡＯＸよりも過剰となってＡＯＸとＲＯＳとのバランスがくずれると、細胞内酸化ストレスが起こる。細胞内酸化ストレスは、脂質や脂肪酸、アミノ酸、タンパク質、核酸等の分子を損傷させ、その結果、コラーゲンやヒアルロン酸で構成される皮膚マトリックスの変質、細胞死等の重要な細胞機能に悪影響を与える。細胞内酸化ストレスは、高血圧、動脈硬化、糖尿病等の生活習慣病や癌疾患にも関与する。したがって、ＲＯＳの過剰な蓄積と細胞内酸化ストレスの発生は、皮膚の老化や疾患にとって重大な問題である。 The human body is equipped with antioxidants (hereinafter referred to as AOX), and normally AOX and ROS are in balance. In a balanced state, ROS play a role in reacting with nitric oxide to neutralize its action and in removing bacteria that invade the body. ROS levels increase when the skin is exposed to UV exposure, dryness and oxidative conditions. Intracellular oxidative stress occurs when the accumulation of ROS exceeds that of AOX and the balance between AOX and ROS is disturbed. Intracellular oxidative stress damages molecules such as lipids, fatty acids, amino acids, proteins, and nucleic acids, resulting in deterioration of the skin matrix composed of collagen and hyaluronic acid, and adversely affects important cellular functions such as cell death. . Intracellular oxidative stress is also involved in lifestyle-related diseases such as hypertension, arteriosclerosis and diabetes, and cancer diseases. Therefore, excessive accumulation of ROS and generation of intracellular oxidative stress are serious problems for skin aging and diseases.
活性酸素を消去する物質として、従来、ビタミンＥ、ビタミンＣ、ＢＨＡ等の抗酸化物質が知られている。現在、新規な抗酸化物質の探索も行われている。例えば、特許文献１は、ジャスミン、ローズ、ベチバー、及びローレルの一種以上の植物抽出物からなる抗酸化剤を提案する。この抗酸化剤を含む香料組成物を配合した皮膚外用剤は、香料としての機能に経皮的な抗酸化作用を賦与することができる。特許文献２は、ハイブリッド・ティー・ローズ又はその抽出物を含有する化粧品組成物を提案する。この化粧品組成物は、抗老化作用が高く、とりわけコラゲナーゼ活性阻害作用が高い。特許文献３は、ダマスクバラの溶媒抽出物を含有する化粧料を提案する。この化粧料は、抗酸化作用、抗炎症作用及び美白作用を有する抽出物を有効成分とする化粧料であって、肌の老化（シワ、たるみ等）の予防及び改善効果、肌のハリ、ツヤの向上効果、外的要因（紫外線や化学物質）による酸化ダメージ及び炎症から肌を保護する効果、並びにシミ、ソバカス、肝斑等を予防及び改善する効果を奏する。特許文献４は、β－エンドルフィン及びβ－エンドルフィン産生促進剤と、抗炎症剤とを含有してなる皮膚外用剤を提案する。β－エンドルフィン産生促進剤は、テルミナリアエキス、セイヨウオトギリソウエキス、トウキンセンカエキス、ジャイアントケルプエキス、又はローズウォーターから選択される。この皮膚外用剤は、抗酸化効果が相乗的に増強され、少量の配合により抗酸化剤の効果を十分に発揮し、皮膚中での活性酸素生成に起因する過酸化脂質の生成を抑制し、肌の炎症，肌荒れを防止あるいは改善する効果を有する。
Antioxidants such as vitamin E, vitamin C, and BHA are conventionally known as substances that scavenge active oxygen. Searches for novel antioxidants are also currently underway. For example, US Pat. No. 6,200,003 proposes antioxidants consisting of one or more plant extracts of jasmine, rose, vetiver, and laurel. An external preparation for skin containing this anti-oxidant-containing perfume composition can impart percutaneous anti-oxidation action to its function as a perfume. US Pat. No. 5,300,000 proposes a cosmetic composition containing hybrid tea rose or an extract thereof. This cosmetic composition has a high anti-aging effect, particularly a high collagenase activity inhibitory effect.
本発明は、新規な細胞内酸化ストレス抑制剤及びその用途を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a novel intracellular oxidative stress inhibitor and uses thereof.
バラ科バラ属の植物であるローズ（バラ）は、美を象徴する花として歴史的になじみがある植物である。ローズは、原種の数が多く古来、交配が繰りかえされてきたため、バラの登録品種数は４０，０００以上といわれている。中でも、アルバローズは、“白バラの祖”と言われており、爽やかで上品な香りを放つので、リラックス作用がある。本発明者は、意外にも、アルバローズの水溶性エキスには、細胞内酸化ストレス抑制作用があることを発見し、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、アルバローズの水溶性エキスを有効成分とする細胞内酸化ストレス抑制剤を提供する。本発明書において、細胞内酸化ストレス抑制剤とは、正常状態よりも過剰量の細胞内ＲＯＳの生成を抑制する機能を有する組成物を意味する。 Rose, which belongs to the family Rosaceae, is a plant that is historically familiar as a flower that symbolizes beauty. It is said that more than 40,000 varieties of roses are registered because of the large number of rose species that have been crossbred since ancient times. Among them, alba rose is said to be the "ancestor of white roses" and has a refreshing and elegant scent that has a relaxing effect. The present inventors have unexpectedly discovered that a water-soluble extract of Alvarose has an intracellular oxidative stress inhibitory effect, and completed the present invention. That is, the present invention provides an intracellular oxidative stress inhibitor containing a water-soluble extract of Albarose as an active ingredient. In the present invention, an inhibitor of intracellular oxidative stress means a composition having a function of suppressing the production of intracellular ROS in excess of that in the normal state.
前記アルバローズの水溶性エキスは、特にアルバローズの水蒸気蒸留後の蒸留釜残渣から得られたものである。 Said water-soluble extract of Alvarose is obtained in particular from the still residue after steam distillation of Alvarose.
前記細胞内酸化ストレス抑制剤は、細胞内酸化ストレスによる細胞死を抑制するために用いられる。 The inhibitor of intracellular oxidative stress is used to inhibit cell death caused by intracellular oxidative stress.
前記細胞内酸化ストレス抑制剤は、また、細胞内酸化ストレスによる皮膚コラーゲン量の減少を抑制するために用いられる。 The inhibitor of intracellular oxidative stress is also used to suppress the decrease in skin collagen content due to intracellular oxidative stress.
本発明は、また、前記細胞内酸化ストレス抑制剤、並びに化粧品学的、皮膚病学的及び／又は薬学的に許容される添加剤を含有する、細胞内酸化ストレス抑制用皮膚外用剤を提供する。 The present invention also provides a topical skin preparation for suppressing intracellular oxidative stress, containing the intracellular oxidative stress suppressor and cosmetically, dermatologically and/or pharmaceutically acceptable additives. .
細胞内酸化ストレス抑制用皮膚外用剤は、例えば化粧料用である。 The intracellular oxidative stress-suppressing external preparation for skin is, for example, a cosmetic.
アルバローズ水溶性エキスを有効成分とする本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤によれば、細胞内酸化ストレス抑制作用に優れ、かつ天然の植物成分由来で安全性の高い組成物を提供可能である。本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤は、例えば皮膚が紫外線、赤外線、大気中のオゾンやＳＯ２等に曝露された際のＲＯＳの生成、細胞死、皮膚コラーゲン量の減少等を抑制するために用いることができる。 According to the intracellular oxidative stress inhibitor of the present invention, which contains a water-soluble Alvarose extract as an active ingredient, it is possible to provide a composition that is excellent in intracellular oxidative stress inhibitory action and is derived from natural plant ingredients and has high safety. . The intracellular oxidative stress inhibitor of the present invention is used, for example, to suppress the generation of ROS, cell death, reduction in skin collagen content, etc. when the skin is exposed to ultraviolet rays, infrared rays, atmospheric ozone, SO2 , etc. can be used.
従来、赤外線曝露の細胞内酸化ストレスに及ぼす影響が、あまりよくわかっていなかったところ、後述の実施例で、赤外線曝露の影響が明確となった。したがって、本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤は、例えば炎天下での比較的長期にわたる赤外線曝露時のＲＯＳの生成や皮膚コラーゲン量の減少を抑制することができる。 Conventionally, the effects of infrared exposure on intracellular oxidative stress were not well understood, but the effects of infrared exposure have been clarified in the Examples described later. Therefore, the inhibitor of intracellular oxidative stress of the present invention can suppress the production of ROS and the decrease in the amount of skin collagen during relatively long-term exposure to infrared rays under the scorching sun, for example.
上記細胞内ストレス抑制剤を配合した皮膚外用剤は、紫外線、赤外線、乾燥や酸化状態等のさまざまな外部環境により生ずる細胞内酸化ストレスを抑制する作用を有するので、特にＵＶ化粧品、抗老化化粧品等の化粧品用途が期待される。 Skin external preparations containing the above intracellular stress inhibitors have the effect of suppressing intracellular oxidative stress caused by various external environments such as ultraviolet rays, infrared rays, dryness, and oxidative conditions. are expected to be used in cosmetics.
以下に示す本発明の一実施の形態によって、本発明を詳細に説明する。本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤は、アルバローズの水溶性エキスを有効成分として含有する。 The present invention will be explained in detail by one embodiment of the present invention shown below. The intracellular oxidative stress inhibitor of the present invention contains a water-soluble extract of Albarose as an active ingredient.
アルバローズ（学名ロサ・アルバ）は、ロサ・ダマスケナとロサ・カニナの自然交雑で生まれたと言われている、オールドローズの系統の一つである。本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤に使用するアルバローズ原料は、花、花弁、がく、葉、茎、種子、根等でよく、好ましくは花、特に好ましくは花弁である。原料は、生物自体、凍結物、乾燥物、凍結乾燥物等のいずれでもよいが、抽出効率を上げるために、抽出前に裁断、粉砕等の微細化を行うことが好ましい。 Albarose (scientific name: Rosa alba) is one of the old rose strains said to be the result of natural crossing between Rosa damascena and Rosa canina. Alvarose raw materials used in the intracellular oxidative stress inhibitor of the present invention may be flowers, petals, calyxes, leaves, stems, seeds, roots, etc. Flowers are preferred, and petals are particularly preferred. The raw material may be an organism itself, a frozen product, a dried product, a freeze-dried product, or the like, but in order to increase the extraction efficiency, it is preferable to perform fineness such as cutting or pulverization before extraction.
アルバローズ水溶性エキスは、例えば蒸留釜内のアルバローズ原料と水との混合物を水蒸気蒸留にかけた際に、蒸留釜内の残渣中の水分、すなわち煮沸水から得ることができる。煮沸水から得られる水溶性エキスは、水蒸気蒸留によって油分が除かれて水溶性エキスのみが濃縮されている、沸点の高い成分が濃縮される等の点で有利である。また、アルバローズの水蒸気蒸留後の煮沸水は、通常は廃棄されてしまうところ、本発明によって有効利用が可能となる。水蒸気蒸留は、常法に基づく。 The water-soluble extract of Alvarose can be obtained, for example, from the water content in the residue in the still, ie, boiling water, when a mixture of Alvarose raw material and water in the still is subjected to steam distillation. The water-soluble extract obtained from boiling water is advantageous in that oil is removed by steam distillation and only the water-soluble extract is concentrated, and components with high boiling points are concentrated. In addition, the boiled water after steam distillation of alvarose is usually discarded, but the present invention enables effective utilization. Steam distillation is based on a conventional method.
アルバローズ水溶性エキスは、また、アルバローズ原料を水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合物からなる抽出溶媒中に浸漬して水溶性成分を抽出することによっても得ることができる。上記親水性有機溶媒の例として、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール，グリセロール、プロピレングリコール、３－ブチレングリコール等の低級アルコール；アセトン、メチルケトン等のケトン；エチルエーテル、イソプロピルエーテル、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル等のカルボン酸エステル等が挙げられる。親水性有機溶媒は、一種単独、又は二種以上の併用であってもよい。好ましい抽出溶媒は、水である。溶剤抽出は、常温又は加温下で行われ、好ましくは加温下である。 The Alvarose water-soluble extract can also be obtained by immersing Alvarose raw material in an extraction solvent consisting of water, a hydrophilic organic solvent, or a mixture thereof to extract water-soluble components. Examples of the hydrophilic organic solvent include lower alcohols such as methanol, ethanol, propanol, butanol, glycerol, propylene glycol and 3-butylene glycol; ketones such as acetone and methyl ketone; ethyl ether, isopropyl ether, diethyl ether and tetrahydrofuran. ether; carboxylic acid esters such as ethyl acetate, butyl acetate and methyl propionate; The hydrophilic organic solvent may be used alone or in combination of two or more. A preferred extraction solvent is water. Solvent extraction is performed at room temperature or under heating, preferably under heating.
上記の水蒸気蒸留時の蒸留釜に残る煮沸水や上記溶剤抽出時の親水性溶媒抽出物を、適宜、ろ過や遠心分離機にかけることによって、アルバローズ水溶性エキスを精製する。さらに、細胞内酸化ストレス抑制剤の効能を阻害しない限り、脱色処理、脱臭処理等の精製を行ってもよい。 The water-soluble Alvarose extract is purified by filtering or centrifuging the boiling water remaining in the distillation pot during the steam distillation or the hydrophilic solvent extract during the solvent extraction. Furthermore, purification such as decolorization and deodorization may be performed as long as the efficacy of the intracellular oxidative stress inhibitor is not impaired.
精製されたアルバローズ水溶性エキスは、適宜、エバポレーション、凍結乾燥等の濃縮手段によって濃縮又は乾固してもよい。さらに、濃縮又は乾固したエキスを再度、水、アルコール等の溶媒に溶解してもよい。 The purified Alvarose water-soluble extract may be appropriately concentrated or dried by concentration means such as evaporation and freeze-drying. Furthermore, the concentrated or dried extract may be dissolved again in a solvent such as water or alcohol.
本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤中のアルバローズ水溶性エキスの配合量は、使用目的に応じて適宜決められるが、エキスの固形分として、通常、０．０１～５質量％でよく、好ましくは０．０１～１質量％であり、より好ましくは０．０１～０．１質量％である。 The amount of the Alvarose water-soluble extract to be blended in the intracellular oxidative stress inhibitor of the present invention is appropriately determined according to the purpose of use, but the solid content of the extract is usually 0.01 to 5% by mass, preferably. is 0.01 to 1% by mass, more preferably 0.01 to 0.1% by mass.
アルバローズ水溶性エキスは、ＤＰＰＨラジカル消去活性能又はスーパーオキシド消去活性能で示される抗酸化性を示す。本発明では、アルバローズ水溶性エキスが、細胞内酸化ストレスによる細胞死、及び／又は皮膚コラーゲン量の減少を抑制するといった生理活性を発揮することが重要である。これらの生理活性に基づいて、本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤は、細胞死、皮膚コラーゲン量の減少を抑制する等の用途に有用となる。 The Alvarose water-soluble extract exhibits antioxidant properties indicated by DPPH radical scavenging activity or superoxide scavenging activity. In the present invention, it is important that the Alvarose water-soluble extract exhibits physiological activity such as suppressing cell death and/or reduction in skin collagen content due to intracellular oxidative stress. Based on these physiological activities, the inhibitor of intracellular oxidative stress of the present invention is useful for applications such as inhibition of cell death and reduction of skin collagen content.
本発明は、また、前記細胞内酸化ストレス抑制剤、並びに化粧品学的、皮膚病学的及び／又は薬学的に許容される添加剤を含有する、細胞内酸化ストレス抑制用皮膚外用剤を提供する。 The present invention also provides a topical skin preparation for suppressing intracellular oxidative stress, containing the intracellular oxidative stress suppressor and cosmetically, dermatologically and/or pharmaceutically acceptable additives. .
化粧品学的、皮膚病学的及び／又は薬学的に許容される添加剤の例には、水；エチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、１，４－ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、ペンチレングリコール、イソプレングリコール、グルコース、マルトース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マルトトリオース、エリスリトール等の多価アルコール；メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、イソブチルアルコール等の低級アルコール；オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類；オリーブ油、トウモロコシ油、ツバキ油、マカデミアナッツ油、アボカド油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油等の油脂；カルナバロウ、キャンデリラロウ、ミツロウ、ラノリン等のロウ類；ソルビトール、マンニトール、グルコース、ショ糖、ラクトース、トレハロース等の糖類；メチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、メチルシクロポリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、オクタメチルシクロペンタシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン等のシリコーン類；カラギーナン、キサンタンガム、ゼラチン、ペクチン、アガロース、アルギン酸塩、デキストリン、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アラビアガム、カラヤガム、トラガントガム、タマリンドガム等の増粘剤；ラウロイル硫酸ナトリウム、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン等の非イオン界面活性剤、アルキルサルフェート塩、ノルマルドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム等の陰イオン界面活性剤、ポリオキシエチレンドデシルモノメチルアンモニウムクロライド等の陽イオン界面活性剤；フェノキシエタノール、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、パラオキシ安息香酸エステル、安息香酸、サリチル酸とその塩類、ソルビン酸とその塩類、デヒドロ酢酸とその塩類、クロルクレゾール、ヘキサクロロフェン等の防腐剤；ベントナイト、スメクタイト、バイデライト、ノントロナイト、サポナイト、ヘクトライト、ソーコナイト、スチーブンサイト等の鉱物；ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛等の無機顔料；赤色２０２号、黄色４号、青色４０４号等の着色料；香料；香油；ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＦ、ビタミンＫ等のビタミン類やジカプリル酸ピリドキシン、ジパルミチン酸ピリドキシン、ジパルミチン酸アスコルビル、モノパルミチン酸アスコルビル、モノステアリン酸アスコルビル等のビタミン誘導体；スクワラン、スクワレン、流動パラフィン等の高級脂肪族炭化水素類；セラミド、セレブロシド、スフィンゴミエリン等のスフィンゴ脂質；コレステロール、フィトステロール等のステロール類；フラボノイド、カロテノイド、タンニン類、没食子酸、トコフェロール、スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）、チオレドキシン、チオレドキシンリダクターゼ、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール等の抗酸化剤；ステロイド系及び非ステロイド系抗炎症剤；パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸モノグリセリンエステル、アントラニル酸メチル、ホモメンチル－Ｎ－アセチルアントラニレート、パラメトキシケイ皮酸オクチル、エチル－４－イソプロピルシンナメート等の紫外線吸収剤；ｔ－シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸、アスコルビン酸、ハイドロキノン、エラグ酸、ニコチン酸、レゾルシノール、トラネキサム酸、４－メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン、４－ＨＰＢ、ヒドロキシ安息香酸、ビタミンＥ、α－ヒドロキシ酸、ＡＭＰ等の美白剤；グリセリン、１，３－ブチレングリコール（ＢＧ）、ジプロピレングリコール（ＤＰＧ）、ベタイン、トレハロース、ヒアルロン酸Ｎａ、水溶性コラーゲン、尿素等の保湿剤等が挙げられる。 Examples of cosmetically, dermatologically and/or pharmaceutically acceptable additives include water; ethylene glycol, polyethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, 1,4-butylene glycol, di Polyhydric alcohols such as propylene glycol, glycerin, diglycerin, polyglycerin, pentylene glycol, isoprene glycol, glucose, maltose, fructose, xylitol, sorbitol, maltotriose, erythritol; methanol, ethanol, propyl alcohol, isopropyl alcohol, butyl Lower alcohols such as alcohol and isobutyl alcohol; Higher fatty acids such as oleic acid, isostearic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, and undecylenic acid; Olive oil, corn oil, camellia oil, macadamia nut oil, avocado oil, rapeseed oil, sesame oil, castor oil, safflower oil, cottonseed oil, jojoba oil, coconut oil, palm oil; waxes such as carnauba wax, candelilla wax, beeswax, lanolin; sorbitol, mannitol, glucose, sucrose , lactose, trehalose and other sugars; methylpolysiloxane, methylphenylpolysiloxane, methylcyclopolysiloxane, octamethylcyclotetrasiloxane, octamethylcyclopentasiloxane, decamethylcyclopentasiloxane, methylhydrogenpolysiloxane and other silicones; Carrageenan, xanthan gum, gelatin, pectin, agarose, alginate, dextrin, methylcellulose, ethylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxyethylcellulose, carboxymethylcellulose, carboxyvinyl polymer, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, gum arabic, karaya gum, tragacanth gum, tamarind gum, etc. Thickeners; nonionic surfactants such as sodium lauroyl sulfate and polyoxyethylene sorbitan monooleate; anionic surfactants such as alkyl sulfate salts and sodium normaldodecylbenzenesulfonate; Cationic surfactants; phenoxyethanol, methylparaben, ethylparaben, propylparaben, butylparaben, paraoxybenzoic acid ester, benzoic acid, salicylic acid and its salts, sorbic acid and its salts, dehi Preservatives such as doroacetic acid and its salts, chlorcresol, hexachlorophene; minerals such as bentonite, smectite, beidellite, nontronite, saponite, hectorite, sauconite, stevensite; red iron oxide, yellow iron oxide, black iron oxide, oxidation Inorganic pigments such as cobalt, ultramarine, Prussian blue, titanium oxide, zinc oxide; coloring agents such as red No. 202, yellow No. 4, blue No. 404; fragrances; perfume oils; vitamin A, vitamin D, vitamin E, vitamin F, vitamin K vitamins such as pyridoxine dicaprylate, pyridoxine dipalmitate, ascorbyl dipalmitate, ascorbyl monopalmitate, and ascorbyl monostearate; higher aliphatic hydrocarbons such as squalane, squalene, and liquid paraffin; sphingolipids such as cerebroside and sphingomyelin; sterols such as cholesterol and phytosterol; Antioxidants; steroidal and non-steroidal anti-inflammatory agents; para-aminobenzoic acid, para-aminobenzoic acid monoglycerol ester, methyl anthranilate, homomenthyl-N-acetylanthranilate, octyl para-methoxycinnamate, ethyl-4-isopropyl UV absorbers such as cinnamate; t-cycloamino acid derivatives, kojic acid, ascorbic acid, hydroquinone, ellagic acid, nicotinic acid, resorcinol, tranexamic acid, potassium 4-methoxysalicylate, magnolignan, 4-HPB, hydroxybenzoic acid , vitamin E, α-hydroxy acid, AMP, and other whitening agents; glycerin, 1,3-butylene glycol (BG), dipropylene glycol (DPG), betaine, trehalose, sodium hyaluronate, water-soluble collagen, urea, and other moisturizing agents agents and the like.
本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤は、ヒトを含む動物の皮膚に塗布されることにより、経皮的に吸収される。本発明の細胞内酸化ストレス抑制剤は、化粧品や医薬品用途の皮膚外用剤へ配合されることが好ましい。化粧料、皮膚外用薬等の皮膚外用剤に細胞内酸化ストレス抑制作用を付加することができる。 The intracellular oxidative stress inhibitor of the present invention is transdermally absorbed by being applied to the skin of animals including humans. The intracellular oxidative stress inhibitor of the present invention is preferably blended into skin preparations for external use for cosmetics and pharmaceuticals. Intracellular oxidative stress inhibitory action can be added to skin external agents such as cosmetics and skin external medicines.
本発明の皮膚外用剤は、細胞内酸化ストレス抑制作用を有する化粧料として用いることが好ましい。化粧料の具体的用途としては、サンタン化粧品、美容液、保湿化粧水、柔軟化粧水、収れん化粧水等のスキンケア化粧品；ファーミング化粧品、アンチセルライト化粧品等のボディ化粧品；基礎化粧品（化粧水、乳液、クリーム）、ファンデーション、下地クリーム、フェイスパウダー、ウォータープルーフ等のメイクアップ化粧品；石鹸、シャンプー、リンス、入浴剤等の入浴料；毛髪剤、育毛剤等が挙げられる。 The external preparation for skin of the present invention is preferably used as a cosmetic having an intracellular oxidative stress inhibitory effect. Specific uses of cosmetics include skin care cosmetics such as suntan cosmetics, serums, moisturizing lotions, softening lotions, and astringent lotions; body cosmetics such as firming cosmetics and anti-cellulite cosmetics; basic cosmetics (lotions, milky lotions, creams), foundations, base creams, face powders, waterproofs, and other makeup cosmetics; soaps, shampoos, rinses, bath agents, etc.; hair preparations, hair restorers, and the like.
化粧料等の皮膚外用剤の形態は、上記用途に応じて、水剤、液剤、エアゾール、乳剤、乳液、エマルション、ローション、クリーム、軟膏、粉体又は固形物である。即効性の観点から、水剤、液剤、エアゾール、ローション、乳剤、乳液、エマルションに加工される。 The forms of external preparations for skin such as cosmetics are water, liquid, aerosol, emulsion, latex, emulsion, lotion, cream, ointment, powder or solid, depending on the application. From the viewpoint of immediate effect, it is processed into liquid medicines, liquid medicines, aerosols, lotions, emulsifiable concentrates, milky lotions, and emulsions.
本発明の皮膚外用剤への細胞内酸化ストレス抑制剤の配合量は、化粧料や医薬品の用途や効果に応じて適宜決められるが、エキスの固形分として、通常、０．０１～５質量％でよく、好ましくは０．０１～１質量％であり、より好ましくは０．０１～０．１質量％である。 The amount of the intracellular oxidative stress inhibitor to be added to the external preparation for skin of the present invention is appropriately determined according to the use and effect of the cosmetic or pharmaceutical product. , preferably 0.01 to 1% by mass, more preferably 0.01 to 0.1% by mass.
本発明の細胞内酸化ストレス抑制用皮膚外用剤の処方例を示す。しかし、本発明は、以下の処方例に限定されるものではない。
［処方例１］化粧水
[Prescription example 1] Lotion
［処方例２］乳液
［処方例３］クリーム
［処方例３］入浴剤
以下に、本発明に従う実施例を示すことにより、本発明をより詳細に説明する。しかし、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。 The invention will be explained in more detail below by showing examples according to the invention. However, the invention is not limited to the following examples.
（１）アルバローズ水溶性エキスの調製
アルバローズの花部からなる原料を蒸留釜に収めて水蒸気蒸留処理に供して、水蒸気蒸留物と蒸留釜に残る蒸留残渣を得た。蒸留残渣中の含水率（すなわち、残渣中の煮沸水の含有率）は８６．７％であった。蒸留残渣をエバポレーターにかけて水を蒸発させることにより、アルバローズ水溶性エキス（固形分：０．９９質量％）を得た。
(1) Preparation of Water-Soluble Extract of Albarose A raw material consisting of flower parts of Albarose was placed in a still and subjected to steam distillation to obtain a steam distillate and a distillation residue remaining in the still. The water content in the distillation residue (ie content of boiling water in the residue) was 86.7%. By evaporating water from the distillation residue with an evaporator, a water-soluble alvarose extract (solid content: 0.99% by mass) was obtained.
（２）培養細胞の準備
ヒト表皮角化細胞株（ＨａＣａＴ細胞）、及びヒト皮膚繊維芽細胞株（ＮＨＤＦｓ細胞）をクラボウ株式会社より入手し、それぞれ、５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地にて５％ＣＯ２＋９５％エアーからなる雰囲気下、３７℃の温度で培養した。
(2) Preparation of cultured cells A human epidermal keratinocyte cell line (HaCaT cells) and a human skin fibroblast cell line (NHDFs cells) were obtained from Kurabo Industries, Ltd., and each was treated with 5% FBS-supplemented DMEM medium at 5% CO. The cells were cultured at a temperature of 37°C in an atmosphere consisting of 2 + 95% air.
（３）アルバローズ水溶性エキスの細胞毒性評価試験
培養したＨａＣａＴ細胞に上記アルバローズ水溶性エキスを表５に示す量のアルバローズ水溶性エキスを添加した。対照として、上記エキス処理をしないものを用意した。これらの処理液のＨａＣａＴの細胞生存率を、ニュートラルレッド（ＮＲ）試験（http://www.fdsc.or.jp/contract/device/d_cell.html）に従って測定した。対照（アルバローズ水溶性エキス無添加）の細胞生存率を１００％としたときの各濃度での細胞生存率を表５に示す。
(3) Cytotoxicity Evaluation Test of Alvarose Water-Soluble Extract The amount of Alvarose water-soluble extract shown in Table 5 was added to cultured HaCaT cells. As a control, one without the extract treatment was prepared. The HaCaT cell viability of these treatment solutions was measured according to the Neutral Red (NR) test (http://www.fdsc.or.jp/contract/device/d_cell.html). Table 5 shows the cell viability at each concentration when the cell viability of the control (no Alvarose water-soluble extract added) is taken as 100%.
表５に示すとおり、アルバローズ水溶性エキスを通常の使用範囲として想定される１ｍｇ／ｍＬ以下の量で用いても細胞毒性が見られなかった。特に、アルバローズの水溶性エキスの濃度が０．５ｍｇ／ｍＬ以下では、細胞死はほとんど認められなかった。 As shown in Table 5, no cytotoxicity was observed even when the Alvarose water-soluble extract was used in an amount of 1 mg/mL or less, which is assumed as a normal use range. In particular, almost no cell death was observed when the concentration of the water-soluble extract of Albarose was 0.5 mg/mL or less.
（４）アルバローズ水溶性エキスの抗酸化性測定試験
アルバローズの水溶性エキスの抗酸化能をスーパーオキシド（・Ｏ２
－）消去活性、及びＤＰＰＨ（２，２－ジフェニル－１－ピクリルヒドラジル）ラジカル消去活性によって評価した。結果を表６に示す。
(4) Antioxidant property measurement test of water - soluble alvarose extract Gyl) was evaluated by radical scavenging activity. Table 6 shows the results.
表６に示すとおり、アルバローズ水溶性エキスには、２２μｍｏｌ ＴＥ／ｇのDPPHラジカル消去活性能が観測された。すなわち、本発明に従うアルバローズ水溶性エキスには、抗酸化物質であるトロロックスの２２倍という極めて高い抗酸化活性が認められた。
As shown in Table 6, the Alvarose water-soluble extract was observed to have a DPPH radical scavenging activity of 22 μmol TE/g. That is, the alvarose water-soluble extract according to the present invention was found to have a very high antioxidant activity, 22 times that of the antioxidant Trolox.
（５）皮膚細胞のＩＲ照射試験
太陽光からのＵＶは、皮膚内の酸化ストレスを誘起するために光老化を促進する役割を演ずると理解されている。一方、太陽光からのＩＲの光老化に対する影響には矛盾した作用が報告されている。例えば、美容領域では、近赤外線（ＮＩＲ）を含む広いバンドスペクトルを有する光は、皮膚を若返させると考えられてきた。実際、インテンス・パルス・ライト（ＩＰＬ）のような強いIRの曝露は、真皮繊維芽細胞内のコラーゲンやヒアルロン酸の合成を刺激して真皮マトリックスの再構成を活発にすると報告されている。一方で、弱いＩＲの真皮繊維芽細胞への曝露は、コラーゲン及びヒアルロン酸の合成を減じ、ＭＭＰ－１の分泌を誘起すると報告されている。
(5) IR Irradiation Test of Skin Cells UV from sunlight is understood to play a role in accelerating photoaging to induce oxidative stress within the skin. On the other hand, conflicting effects have been reported on the effect of IR from sunlight on photoaging. For example, in the cosmetic area, light with a broad band spectrum including near-infrared (NIR) has been thought to rejuvenate the skin. In fact, it has been reported that strong IR exposure such as intense pulsed light (IPL) stimulates the synthesis of collagen and hyaluronic acid in dermal fibroblasts and activates the remodeling of the dermal matrix. On the other hand, weak IR exposure to dermal fibroblasts has been reported to reduce the synthesis of collagen and hyaluronic acid and induce the secretion of MMP-1.
そこで、皮膚老化に対するＩＲの役割を調べるために、弾性繊維の足場繊維となるコラーゲン繊維やミクロフィブリルに焦点を当て、低密度長期間のＩＲ照射時の真皮マトリックス関連タンパクのｍＲＮＡ発現レベルへの影響を調べた。 Therefore, in order to investigate the role of IR on skin aging, we focused on collagen fibers and microfibrils, which serve as scaffolding fibers for elastic fibers, and investigated the effects on mRNA expression levels of dermal matrix-related proteins during low-density long-term IR irradiation. examined.
具体的には、ＩＲ照射を受けたＮＨＤＦｓ細胞中の皮膚マトリックス関連タンパク質のｍＲＮＡ発現レベルをＲＴ－ＰＣＲで測定した。まず、ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉキットを用いて細胞からトータルＲＮＡを抽出した。ＧｅｎｅＡｍｐＰＣＲシステム（アプライドバイオシステムズ製）とＲｅｖｅｒＴｒａＡｃｅｑ ＰＣＲ ＲＴＭａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（東洋紡株式会社製）を用いて、５０℃、５分及び９８℃、５分の条件でＲＮＡの逆転写反応を行った。Ｉｌｌｕｍｉｎｅ Ｅｃｏ ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ（イルミナ製）とＬｕｍｉｎｏＣｔ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ｑＰＣＲ ＲｅａｄｙＭｉｘ （シグマアルドリッチ製）を用いてｑＲＴ－ＰＣＲを行った。増幅反応は、５０℃×２分の第一ステップで開始させ、続いて９５℃×１０分→９５℃×１０秒→６０℃×３０秒→９５℃×１５秒→５５℃×１５秒→９５℃×１５秒の連続ＰＣＲサイクル反応を行わせた。皮膚マトリックス関連タンパク質のｍＲＮＡ発現に及ぼすＩＲの影響を、図１に示す。 Specifically, mRNA expression levels of skin matrix-associated proteins in IR-irradiated NHDFs cells were measured by RT-PCR. First, total RNA was extracted from cells using the RNeasy Mini kit. Using the GeneAmp PCR system (manufactured by Applied Biosystems) and ReverTraAceq PCR RTMaster Mix (manufactured by Toyobo Co., Ltd.), reverse transcription of RNA was performed under conditions of 50° C. for 5 minutes and 98° C. for 5 minutes. qRT-PCR was performed using Illumina Eco real-time PCR system (manufactured by Illumina) and LuminoCt SYBR Green qPCR ReadyMix (manufactured by Sigma-Aldrich). The amplification reaction was initiated with a first step of 50°C x 2 minutes followed by 95°C x 10 minutes → 95°C x 10 seconds → 60°C x 30 seconds → 95°C x 15 seconds → 55°C x 15 seconds → 95. A continuous PCR cycle reaction was performed at °C x 15 seconds. The effect of IR on mRNA expression of skin matrix-associated proteins is shown in FIG.
図１を見ると、ＩＲ照射された真皮繊維芽細胞において、ヘパリン結合性細胞外マトリックスタンパクであるＣＣＮ１及びＭＭＰ抑制物質として機能するＴＩＭＰ－１は、ＩＲ照射で変化を示さない。 As shown in FIG. 1, in IR-irradiated dermal fibroblasts, CCN1, a heparin-binding extracellular matrix protein, and TIMP-1, which functions as an MMP inhibitor, do not show any changes upon IR irradiation.
コラーゲン繊維の場合の場合は、Ｉ型コラーゲンをエンコードするＣＯＬＩＡ１は、有意にダウンレギュレート、そしてコラーゲン繊維を断裂するＭＭＰ－１は有意にアップレギュレートする。これらのｍＲＮＡの挙動は、ＩＲ照射時の真皮中では、コラーゲン繊維の消耗が起こることを示している。繊維芽細胞のコラーゲン繊維の消失は、ＲＯＳにより誘導されたＭＡＰKシグナル伝達の活性化により説明される（非特許文献１）。ＭＡＰＫシグナル伝達の活性化は、ｃ－Ｆｏｓ及びｃ－Ｊｕｎのヘテロ二量体であるＡＰ－１を増加させる。ＡＰ－１は、ＭＭＰ－１及びＣＣＮ１／Ｃｙｒ６１を制御する転写因子である。すなわち、ＡＰ－１がＭＭＰ－１及びＣＣＮ１／Ｃｙｒ６１の合成を刺激し、その結果、コラーゲン繊維が消失することになる。 In the case of collagen fibers, COLIA1, which encodes type I collagen, is significantly downregulated and MMP-1, which disrupts collagen fibers, is significantly upregulated. The behavior of these mRNAs indicates that collagen fiber depletion occurs in the dermis upon IR irradiation. Loss of collagen fibers in fibroblasts is explained by activation of MAPK signaling induced by ROS (Non-Patent Document 1). Activation of MAPK signaling increases AP-1, a heterodimer of c-Fos and c-Jun. AP-1 is a transcription factor that regulates MMP-1 and CCN1/Cyr61. That is, AP-1 stimulates the synthesis of MMP-1 and CCN1/Cyr61, resulting in loss of collagen fibers.
ミクロフィブリル関連タンパク質に関して、ＩＲ照射によって、ＦＢＮ－１が有意にダウンレギュレートする。ＦＢＮ－１は、エラスチンミクロフィブリルインターフェイサー（ＥＭＩＬＩＮ－１）及びミクロフィブリル関連タンパク４（ＭＦＡＰ－４）を補助することによってミクロフィブリルを構築する。これらの結果は、エラスチン繊維の形成をＩＲが妨害することを示唆する。 As for microfibril-associated proteins, IR irradiation significantly down-regulates FBN-1. FBN-1 assembles microfibrils by assisting elastin microfibril interfacer (EMILIN-1) and microfibril associated protein 4 (MFAP-4). These results suggest that IR interferes with elastin fiber formation.
ＩＲ照射は、さらに、好中球をリクルートするケモカインであるＩＬ－８／ＣＸＣＬ－８を有意にアップレギュレートする。好中球は、血管から真皮中へ浸透するときに、コラーゲン繊維やエラスチン繊維のような囲んでいる繊維を消化する。この現象は、また、ＩＲが、真皮マトリックスの崩壊を助長することによって真皮マトリックスの再構成を妨害することを示している。 IR irradiation also significantly upregulates IL-8/CXCL-8, a chemokine that recruits neutrophils. As neutrophils penetrate blood vessels into the dermis, they digest surrounding fibers such as collagen and elastin fibers. This phenomenon also indicates that IR interferes with dermal matrix remodeling by promoting dermal matrix disintegration.
（６）ＩＲ照射時のコラーゲン量の測定試験
皮膚マトリックス内の骨格構造繊維タンパク質であるＩ型コラーゲン量へのＩＲの影響を確認した。具体的には、ＮＨＤＦｓ細胞にＩＲを０（未照射）、５０、１００、１５０、又は２００Ｊのエネルギー量で照射した。さらに、０．５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地中でさらに２４時間培養した。培養後、培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を図２に示す。図中、ＩＲを照射しない場合のコラーゲン量に対する各照射レベルでのコラーゲン量の比率を示す。図２に示すように、ＩＲ照射によって、コラーゲン量は、エネルギー量に依存して有意に減少した。
(6) Collagen Amount Measurement Test During IR Irradiation The effect of IR on the amount of type I collagen, which is a skeletal structural fiber protein in the skin matrix, was confirmed. Specifically, NHDFs cells were irradiated with IR at an energy dose of 0 (unirradiated), 50, 100, 150, or 200J. In addition, they were cultured in DMEM medium supplemented with 0.5% FBS for an additional 24 hours. After culturing, the amount of collagen in the medium was measured by ELISA. The results are shown in FIG. The figure shows the ratio of the amount of collagen at each irradiation level to the amount of collagen without IR irradiation. As shown in FIG. 2, IR irradiation significantly decreased the amount of collagen depending on the amount of energy.
（７）ＩＲ照射による細胞内ＲＯＳ生成試験
上記のようなＩＲ照射によって生起する現象が、酸化ストレスと関連することが予期された。そこで、ＩＲが細胞内酸化に影響するか否かを試験するため、ＩＲ照射されたＮＨＤＦｓの細胞内ＲＯＳ量の測定試験を行った。
(7) Intracellular ROS generation test by IR irradiation It was expected that the phenomenon caused by IR irradiation as described above was associated with oxidative stress. Therefore, in order to test whether IR affects intracellular oxidation, a test was conducted to measure the intracellular ROS amount of NHDFs irradiated with IR.
具体的には、培養ＮＨＤＦｓ細胞にＲＯＳ検出用試薬Ｈ２ＤＣＦＤＡ（ＥＭＤミリポア社製）で３０分間、ローディング後、ランプ容量１００Wの人工太陽照明灯（製品名ＳＯＬＡＸ ＸＣ－１００Ｅ、セリック株式会社製）を用いて、ＩＲを０（未照射）、５０、１００、１５０、又は２００Ｊのエネルギー量にて細胞に照射した。照射後の細胞を０．５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地中でさらに２４時間培養した。培養後、ＮＨＤＳＦｓの細胞内ＲＯＳ量を蛍光強度により測定した。結果を図３に示す。図中、ＩＲを照射しない場合の蛍光強度に対する各照射レベルでの蛍光強度比を示す。図３に示すように、細胞内ＲＯＳは、ＩＲ照射によってエネルギー量に依存して有意に増大した。 Specifically, cultured NHDFs cells were loaded with ROS detection reagent H 2 DCFDA (manufactured by EMD Millipore) for 30 minutes, followed by artificial solar lighting with a lamp capacity of 100 W (product name SOLAX XC-100E, manufactured by Seric). was used to irradiate the cells with IR at an energy dose of 0 (unirradiated), 50, 100, 150, or 200 J. After irradiation, the cells were cultured in DMEM medium supplemented with 0.5% FBS for an additional 24 hours. After culturing, the amount of intracellular ROS in NHDSFs was measured by fluorescence intensity. The results are shown in FIG. The figure shows the ratio of fluorescence intensity at each irradiation level to the fluorescence intensity without IR irradiation. As shown in FIG. 3, intracellular ROS was significantly increased by IR irradiation in an energy dose-dependent manner.
（８）ＩＲ照射時の細胞内ＲＯＳ生成のアルバローズ水溶性エキスによる抑制試験
（４）に示したように、アルバローズ水溶性エキスは、優れた抗酸化能を示した。しかし、化学的パラメーターである抗酸化能が生化学的にも通用するとは一概にいえない。そこで、ＩＲ照射時の酸化ストレスによる細胞内ＲＯＳの生成を、アルバローズ水溶性エキスが抑制や改善するか否かを試験した。
(8) Inhibition test of intracellular ROS generation during IR irradiation by Alvarose water-soluble extract As shown in (4), Alvarose water-soluble extract exhibited excellent antioxidant ability. However, it cannot be said unconditionally that the antioxidant capacity, which is a chemical parameter, is also biochemically applicable. Therefore, it was tested whether or not the alvarose water-soluble extract suppresses or improves intracellular ROS generation due to oxidative stress during IR irradiation.
濃度０（陰性対照）、０．２５、又は０．５ｍｇ／ｍＬのアルバローズ水溶性エキス及び５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地で２４時間、培養したＮＨＤＦｓに、ＲＯＳ検出試薬である２０μＭ Ｈ２ＤＣＦＤＡのＨＢＳＳ溶液（ＥＭＤミリポア社製）を３０分間、ローディング後、前記人工太陽照明灯からＩＲを２５０Ｊ照射した。さらに２４時間培養後、蛍光強度（蛍光励起波長４９２～４９５ｎｍ、発光波長５１７～５２７ｎｍ）を測定した。蛍光強度から細胞内ＲＯＳ量を求めた。結果を図４に示す。図中、各濃度レベルにおける棒グラフの左側はＩＲ未照射、そして右側は２５０ＪのＩＲ照射を示す。細胞内ＲＯＳ量は、アルバローズ水溶性エキス無添加かつＩＲ未照射の細胞内ＲＯＳ量を１としたときの、各濃度レベルでのＩＲ未照射及びＩＲ照射での細胞内ＲＯＳの比率で示す。 NHDFs cultured in 0 (negative control), 0.25, or 0.5 mg/mL Alvarose water-soluble extract and 5% FBS-supplemented DMEM medium for 24 h were added with 20 μM H 2 DCFDA, a ROS detection reagent, in HBSS. After the solution (manufactured by EMD Millipore) was loaded for 30 minutes, 250 J of IR was irradiated from the artificial solar lighting lamp. After culturing for another 24 hours, fluorescence intensity (fluorescence excitation wavelength: 492-495 nm, emission wavelength: 517-527 nm) was measured. The amount of intracellular ROS was obtained from the fluorescence intensity. The results are shown in FIG. In the figure, the left side of the bar graph at each density level shows no IR irradiation, and the right side shows 250 J IR irradiation. The amount of intracellular ROS is indicated by the ratio of intracellular ROS in non-irradiated and irradiated with IR at each concentration level when the amount of intracellular ROS in the absence of Alvarose water-soluble extract and without IR irradiation is set to 1.
ＩＲ照射による細胞内ＲＯＳの上昇率を、下記式：
図４及び表７に示すように、ＮＨＤＦｓ細胞をアルバローズ水溶性エキスで処理すると、処理された細胞は、ＩＲを照射されても、細胞内ＲＯＳ上昇が抑制される。すなわち、アルバローズ水溶性エキスは、ＩＲ照射由来の細胞内ＲＯＳを濃度依存的に抑制することが判明した。 As shown in FIG. 4 and Table 7, when NHDFs cells were treated with alvarose water-soluble extract, intracellular ROS elevation was suppressed even when the treated cells were irradiated with IR. That is, it was found that the alvarose water-soluble extract inhibits intracellular ROS derived from IR irradiation in a concentration-dependent manner.
（９）Ｈ２Ｏ２曝露時の細胞内ＲＯＳ生成のアルバローズ水溶性エキスによる抑制試験
（7）で、ＩＲ照射によって細胞内ＲＯＳが蓄積されることが判明した。そこで、ＲＯＳの一種であるＨ２Ｏ２に皮膚細胞が直接さらされたときに、細胞内ＲＯＳが増大するか否か、そしてその増大をアルバローズ水溶性エキスが抑制できるか否か試験した。
(9) Inhibition test of intracellular ROS generation by exposure to H 2 O 2 with Alvarose water-soluble extract (7) revealed that intracellular ROS was accumulated by IR irradiation. Therefore, it was examined whether intracellular ROS increases when skin cells are directly exposed to H 2 O 2 , which is a kind of ROS, and whether the Alvarose water-soluble extract can suppress the increase.
具体的には、アルバローズの水溶性エキスで処理されたヒトの表皮細胞が酸化状態の外部環境に晒されたときに、前記エキスに細胞内ＲＯＳの生成を抑制する効果があるか否かを試験した。まず、濃度０（陰性対照）、０．１２５、０．２５、又は０．５ｍｇ／ｍＬのアルバローズ水溶性エキス及び５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地で、ＨａＣａＴ細胞を２４時間培養した。前記ＲＯＳ検出用試薬Ｈ２ＤＣＦＤＡを３０分間、ローディング後、過酸化水素水（５００μＭ）に１５分間、曝露した。その後、蛍光強度（蛍光励起波長４９２～４９５ｎｍ、発光波長５１７～５２７ｎｍ）を測定することにより、細胞内ＲＯＳ量を求めた。結果を図５に示す。図中、各濃度レベルにおける棒グラフの左側は過酸化水素水（Ｈ２Ｏ２）非曝露、そして右側はＨ２Ｏ２曝露を示す。細胞内ＲＯＳ量は、アルバローズ水溶性エキス無添加かつＨ２Ｏ２非曝露の細胞内ＲＯＳ量を１としたときの、各濃度レベルでのＨ２Ｏ２非曝露及びＨ２Ｏ２曝露での細胞内ＲＯＳの比率で示す。 Specifically, when human epidermal cells treated with a water-soluble extract of Albarose are exposed to an oxidizing external environment, the extract has the effect of suppressing the production of intracellular ROS. tested. First, HaCaT cells were cultured for 24 hours in Alvarose water-soluble extract at concentrations of 0 (negative control), 0.125, 0.25, or 0.5 mg/mL and DMEM medium supplemented with 5% FBS. After loading the ROS detection reagent H 2 DCFDA for 30 minutes, it was exposed to hydrogen peroxide solution (500 μM) for 15 minutes. Thereafter, the amount of intracellular ROS was determined by measuring fluorescence intensity (fluorescence excitation wavelength: 492-495 nm, emission wavelength: 517-527 nm). The results are shown in FIG. In the figure, the left side of the bar graph at each concentration level shows no hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) exposure, and the right side shows H 2 O 2 exposure. The amount of intracellular ROS was measured at each concentration level without H 2 O 2 exposure and with H 2 O 2 exposure when the intracellular ROS amount without addition of alvarose water-soluble extract and without H 2 O 2 exposure was set to 1. is shown as the ratio of intracellular ROS of .
Ｈ２Ｏ２由来の細胞内ＲＯＳの上昇率を、下記式：
図５及び表８の陰性対照に示すように、ＨａＣａＴ細胞をＨ２Ｏ２に曝露すると細胞内ＲＯＳが増大する。しかし、細胞をアルバローズ水溶性エキスで処理すると、ＲＯＳの増大が抑制される。細胞内ＲＯＳの上昇率の抑制度合いは、アルバローズ水溶性エキスの添加濃度が増すほど大きくなることが判明した。その効果は、活性酸素消去能が知られているＡＰＭに匹敵する。 As shown in Figure 5 and the negative controls in Table 8 , exposure of HaCaT cells to H2O2 increases intracellular ROS. However, treatment of cells with Alvarose water-soluble extract inhibits the increase in ROS. It was found that the degree of suppression of the rate of increase in intracellular ROS increased as the concentration of the Alvarose water-soluble extract added increased. The effect is comparable to APM, which is known for its active oxygen scavenging ability.
（１０）Ｈ２Ｏ２曝露時のコラーゲン量減少のアルバローズ水溶性エキスによる抑制試験
ＩＲ照射により減少するコラーゲン量をアルバローズ水溶性エキスが改善する能力を有するか否か確かめるため、Ｈ２Ｏ２曝露で誘起されるコラーゲン量減少について試験した。具体的には、濃度０（陰性対照）、０．０６２５、０．１２５、０．２５、又は０．５ｍｇ／ｍＬのアルバローズ水溶性エキスを添加した５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地でＮＨＤＦｓ細胞を２４時間培養した。Ｈ２Ｏ２（１ｍＭ）に１時間、曝露後、０．５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で２４時間、培養した。培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を、図６に示す。図中、各濃度レベルにおける棒グラフの左側はＨ２Ｏ２非曝露、そして右側はＨ２Ｏ２曝露を示す。コラーゲン量は、アルバローズ水溶性エキス無添加かつＨ２Ｏ２非曝露のコラーゲン量を１としたときの、各濃度レベルでのＨ２Ｏ２非曝露及びＨ２Ｏ２曝露でのコラーゲン量の比率で示す。
(10) Suppression test of Alvarose water-soluble extract on decrease in collagen content during exposure to H 2 O 2 2 exposures induced decrease in collagen content was tested. Specifically, NHDFs cells were grown 24 times in 5% FBS-supplemented DMEM medium supplemented with Alvarose water-soluble extract at concentrations of 0 (negative control), 0.0625, 0.125, 0.25, or 0.5 mg/mL. cultured for hours. After exposure to H 2 O 2 (1 mM) for 1 hour, cells were cultured in DMEM medium containing 0.5% FBS for 24 hours. The amount of collagen in the medium was measured by ELISA method. Results are shown in FIG. In the figure, the left side of the bar graph at each concentration level shows H 2 O 2 non-exposure, and the right side shows H 2 O 2 exposure. The amount of collagen is the amount of collagen at each concentration level when not exposed to H 2 O 2 and exposed to H 2 O 2 when the amount of collagen not added with Alvarose water-soluble extract and not exposed to H 2 O 2 is set to 1. Expressed as a ratio.
Ｈ２Ｏ２由来の細胞内酸化ストレスによるコラーゲンの減少率を、下記式：
図６及び表９に示すように、コラーゲン量は、Ｈ２Ｏ２曝露がもたらす細胞内ＲＯＳによって減少するが、アルバローズ水溶性エキスで処理された細胞では、コラーゲン減少率がアルバローズ水溶性エキス濃度依存的に抑制されている。 As shown in FIG. 6 and Table 9, collagen content is decreased by intracellular ROS caused by H 2 O 2 exposure, but in cells treated with Alvarose aqueous extract, the rate of collagen reduction was higher than that of Alvarose aqueous extract. It is suppressed in a concentration-dependent manner.
（１１）ＵＶＢ照射時の細胞死のアルバローズ水溶性エキスによる抑制試験
２９０～３２０ｎｍの中波長紫外線であるＵＶＢは、ＤＮＡを損傷させることが報告されている。アルバローズの水溶性エキスが、ＵＶ照射時の酸化ストレスによる細胞死を抑制するか否かを試験した。具体的には、濃度０（陰性対照）、０．０６２５、０．１２５、０．２５、又は０．５ｍｇ／ｍＬのアルバローズ水溶性エキスを添加した５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地で、ＨａＣａＴ細胞を２４時間培養した。これらの処理液に、紫外線ランプ（ＰＨＩＬＩＰＳ製）からＵＶＢ（波長：３００ｎｍ）を２０ｍＪ照射した。照射から２４時間後、これらの処理液の細胞生存率を、前記ニュートラルレッド（ＮＲ）試験に従って測定した。結果を図７に示す。
(11) Suppression test of cell death during UVB irradiation with alvarose water-soluble extract It has been reported that UVB, which is a medium wavelength ultraviolet ray of 290 to 320 nm, damages DNA. It was tested whether or not a water-soluble extract of Albarose inhibits cell death due to oxidative stress during UV irradiation. Specifically, HaCaT cells were grown in 5% FBS-supplemented DMEM medium supplemented with Alvarose water-soluble extract at concentrations of 0 (negative control), 0.0625, 0.125, 0.25, or 0.5 mg/mL. Incubated for 24 hours. These treatment liquids were irradiated with 20 mJ of UVB (wavelength: 300 nm) from an ultraviolet lamp (manufactured by PHILIPS). Twenty-four hours after irradiation, cell viability of these treatments was determined according to the neutral red (NR) test described above. The results are shown in FIG.
図７に示すように、ＨａＣａＴ細胞をアルバローズ水溶性エキスで処理すると、処理された細胞は、ＵＶＢを照射されても、細胞生存率の低下が抑制される。アルバローズ水溶性エキスは、ＵＶＢ照射由来の細胞死を濃度依存的に抑制することが判明した。 As shown in FIG. 7, when HaCaT cells are treated with Alvarose water-soluble extract, even when the treated cells are irradiated with UVB, decrease in cell viability is suppressed. It was found that the Alvarose water-soluble extract inhibits UVB-induced cell death in a dose-dependent manner.
（１２）ＵＶＡ照射時のコラーゲン量減少のアルバローズ水溶性エキスによる抑制試験
３２０～４００ｎｍの長波長紫外線であるＵＶＡは、真皮深部や皮下組織に到達して真皮全体のマトリックスに影響を与える。ＵＶＡ照射による細胞外マトリックス成分への影響に関して、ＵＶＡが細胞外マトリックス分解酵素であるＭＭＰのｍＲＮＡ発現を促進し、線維芽細胞のコラーゲン量を減少させることが報告されている。
(12) Suppression Test of Alvarose Water-Soluble Extract on Decrease in Collagen Amount During UVA Exposure UVA, which is a long-wavelength ultraviolet ray of 320 to 400 nm, reaches the deep dermis and subcutaneous tissue and affects the matrix of the entire dermis. Regarding the effects of UVA irradiation on extracellular matrix components, it has been reported that UVA promotes the expression of MMP mRNA, which is an extracellular matrix degrading enzyme, and reduces the amount of collagen in fibroblasts.
アルバローズの水溶性エキスが、ＵＶＡ照射時の酸化ストレスによる皮膚コラーゲン量減少を抑制するか否かを試験した。具体的には、濃度０（陰性対照）、０．０６２５、０．１２５、０．２５、又は０．５ｍｇ／ｍＬのアルバローズ水溶性エキスを添加したＮＨＤＦｓ細胞に、紫外線ランプ（株式会社東芝製）からＵＶＡ（波長：３５２ｎｍ）を５Ｊ照射した。ＵＶＡ照射後、０．５％ＦＢＳ補充ＤＭＥＭ培地でさらに２４時間、培養した。培地中のコラーゲン量をＥＬＩＳＡ法で測定した。結果を、図８に示す。図中、各濃度レベルにおける棒グラフの左側はＵＶＡ未照射、そして右側はＵＶＡ照射を示す。 It was tested whether or not a water-soluble extract of Albarose inhibits the reduction in skin collagen content due to oxidative stress during UVA irradiation. Specifically, NHDFs cells added with Alvarose water-soluble extract at a concentration of 0 (negative control), 0.0625, 0.125, 0.25, or 0.5 mg/mL were treated with an ultraviolet lamp (manufactured by Toshiba Corporation). ) was irradiated with UVA (wavelength: 352 nm) for 5 J. After UVA irradiation, the cells were further cultured in DMEM medium supplemented with 0.5% FBS for 24 hours. The amount of collagen in the medium was measured by ELISA method. Results are shown in FIG. In the figure, the left side of the bar graph at each concentration level shows no UVA irradiation, and the right side shows UVA irradiation.
コラーゲン量減少率（％）を、以下の式：
図８及び表１０に示すように、ＮＨＤＦｓ細胞をアルバローズ水溶性エキスで処理すると、ＵＶＡを照射されても皮膚コラーゲン量の低下が抑制される。すなわち、アルバローズ水溶性エキスは、優れた抗老化作用を発揮することが判明した。 As shown in FIG. 8 and Table 10, when NHDFs cells were treated with Alvarose water-soluble extract, the decrease in skin collagen content was suppressed even when exposed to UVA. That is, it was found that the Alvarose water-soluble extract exhibits excellent anti-aging action.
Claims (6)
前記アルバローズの水溶性エキスは、アルバローズの水蒸気蒸留後の蒸留釜に残る煮沸水から得られたものであることを特徴とする、前記細胞内酸化ストレス抑制剤。 An intracellular oxidative stress inhibitor containing a water-soluble extract of Albarose as an active ingredient ,
The intracellular oxidative stress inhibitor, wherein the water-soluble extract of Alvarose is obtained from boiled water remaining in a distillation still after steam distillation of Alvarose .
アルバローズを水蒸気蒸留に供して、アルバローズ水蒸気蒸留物、並びにアルバローズ水蒸気蒸留釜内に残る煮沸水を得る工程、及びsubjecting the alvarose to steam distillation to obtain an alvarose steam distillate and boiled water remaining in the alvarose steam still;
前記煮沸水からアルバローズの水溶性エキスを得る工程obtaining a water-soluble extract of Alvarose from the boiling water;
を含む、前記細胞内酸化ストレス抑制剤の製造方法。A method for producing the intracellular oxidative stress inhibitor, comprising:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018172289A JP7169501B2 (en) | 2018-09-14 | 2018-09-14 | Intracellular oxidative stress inhibitor and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2018172289A JP7169501B2 (en) | 2018-09-14 | 2018-09-14 | Intracellular oxidative stress inhibitor and use thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020045288A JP2020045288A (en) | 2020-03-26 |
| JP7169501B2 true JP7169501B2 (en) | 2022-11-11 |
Family
ID=69899320
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018172289A Active JP7169501B2 (en) | 2018-09-14 | 2018-09-14 | Intracellular oxidative stress inhibitor and use thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP7169501B2 (en) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170042795A1 (en) | 2013-06-07 | 2017-02-16 | Chungbuk National University Industry-Academic Cooperation Foundation | Cosmetic composition comprising white rose flower extract for skin whitening and improving skin wrinkle |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20110072153A (en) * | 2009-12-22 | 2011-06-29 | 충북대학교 산학협력단 | Composition comprising white rosa rugosa flower extract as active ingredient |
-
2018
- 2018-09-14 JP JP2018172289A patent/JP7169501B2/en active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20170042795A1 (en) | 2013-06-07 | 2017-02-16 | Chungbuk National University Industry-Academic Cooperation Foundation | Cosmetic composition comprising white rose flower extract for skin whitening and improving skin wrinkle |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Industrial Crops and Products, 2013, vol.41, p.375-380 |
| Rev. Environ. Sci. Biotechnol., 2017, vol.16, p.309-325 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2020045288A (en) | 2020-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7275103B2 (en) | Novel cosmetic use of Nephelium lapaceum extract | |
| KR101382112B1 (en) | Composition of skin external application containing Chamaecyparis obtusa polysaccharide | |
| KR102142311B1 (en) | Skin external composition comprising tangeretin | |
| JPH0892057A (en) | Cosmetic blended with extract of seed of coffee tree | |
| JP4489923B2 (en) | Topical skin preparation | |
| KR20200134929A (en) | Cosmetic composition containing complex medicinal herbs extract for skin whitening and anti-wrinkle effect and manufacturing method thereof | |
| KR101839491B1 (en) | Extraction Method of Houttuynia cordata Thunberg Extract and Cosmetic materials Using the same | |
| KR102300581B1 (en) | Compositions for improving skin conditions comprising plant extracts or fractions thereof | |
| EP2100594A1 (en) | Ternary mixtures with increased collagen synthesis | |
| KR102278167B1 (en) | A cosmetic composition having prevention of lipid peroxidation, improved damaged skin and soothing effect on redness of skin | |
| KR102226179B1 (en) | Cosmetic Compositions for Anti-aging Comprising Extracts of Plants | |
| JP2000169329A (en) | Cosmetic composition | |
| JP7169501B2 (en) | Intracellular oxidative stress inhibitor and use thereof | |
| KR101481208B1 (en) | Composition for skin external application comprising cryptotanshinone as the active ingredient | |
| KR20230135528A (en) | Cosmetic compositions comprising astaxanthin, epidermal growth factor and mixed extracts of natural product as effective components | |
| KR100816265B1 (en) | Cosmetic Composition for Abirritating Skin Containing Extract of Rheum undulatum as Active Ingredient | |
| JPH03200708A (en) | Dermal external agent | |
| KR20230152511A (en) | Cosmetic composition in relieving skin for skin regenerating, Manufacturing method thereof, and Cosmetics containing the same | |
| JP7165293B2 (en) | beauty composition | |
| KR102689489B1 (en) | A cosmetic compositon comprising chamaecyparis obtuse leaf extracts, andrographis paniculata extract, and astaxanthin as active ingredients | |
| KR102468538B1 (en) | Skin improvement composition containing wild geranium extract with excellent antioxidant, whitening and anti-inflammatory effects | |
| JP6253702B2 (en) | Cosmetics for external use with Connals louver extract | |
| JP7197228B2 (en) | multipurpose serum | |
| KR101460900B1 (en) | Cosmetic composition for skin whitening, regeneration or moisturizing comprising epifriedelanol | |
| JP2022021398A (en) | Ultraviolet absorber |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210709 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20220316 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220328 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220512 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220823 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220930 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221005 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7169501 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |