JP6754166B2 - Cosmetics - Google Patents
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Description
本発明は、バラ科バラ属の植物から得られ、すぐれた皮膚生理活性及び生体安全性を有する化粧料配合成分並びにかかる成分を配合してなる美白用及び美肌用化粧料に関する。 The present invention relates to a cosmetic compounding ingredient obtained from a plant belonging to the genus Rosaceae and having excellent skin bioactivity and biosafety, and a cosmetic compound for whitening and skin beautifying by blending such an ingredient.
皮膚の老化は、加齢に伴う細胞増殖・分化の不活化、ホルモン分泌の低下、細胞外マトリックス成分の量的低下などの内的要因と、太陽光(紫外線)や排気ガス等により誘発される活性酸素による細胞・組織の損傷、又は炎症などの外的要因とが複雑に絡み合って生ずる現象である。 Skin aging is induced by internal factors such as inactivation of cell proliferation and differentiation with aging, decreased hormone secretion, and quantitative decrease of extracellular matrix components, as well as sunlight (ultraviolet rays) and exhaust gas. It is a phenomenon that occurs when cells and tissues are damaged by active oxygen or external factors such as inflammation are intricately intertwined.
例えば、紫外線や、排ガスなどに含まれる化学物質(窒素化合物や硫黄化合物等)は、皮膚に酸化ダメージを与えて生体成分を変質させ、その結果、皮膚内に抗原を発生させる要因となる。このことから、化学物質や紫外線などの外的要因は、抗原による皮膚の炎症やアレルギーの発症の要因となる。 For example, ultraviolet rays and chemical substances (nitrogen compounds, sulfur compounds, etc.) contained in exhaust gas and the like cause oxidative damage to the skin and alter biological components, resulting in the generation of antigens in the skin. For this reason, external factors such as chemical substances and ultraviolet rays cause skin inflammation and allergies caused by antigens.
また、皮膚老化の外的要因である活性酸素は皮膚細胞に直接傷害を及ぼすばかりでなく、細胞外マトリックス成分のコラーゲンを変性又は架橋させてシワの形成や皮膚の弾力性の低下をもたらし、さらにはメラニン色素の異常沈着を誘発してシミ、ソバカス、肝斑などを生じさせるなど、肌に様々なダメージを与える。 In addition, active oxygen, which is an external factor of skin aging, not only directly damages skin cells, but also denatures or cross-links collagen, which is an extracellular matrix component, resulting in the formation of wrinkles and a decrease in skin elasticity. Causes abnormal deposition of melanin pigment and causes various damages to the skin such as spots, freckles, and chloasma.
この皮膚の老化を防ぎ、皮膚を健全、かつ、若々しい状態に保持するため、従来、種々の活性成分の使用が提案され、それら活性成分(美肌成分、美白成分等)を配合した化粧品が上市されている。例えば、ビタミンC、ビタミンE、スーパーオキシドジスムターゼ(Superoxide dismutase;以下SODと略記)などの抗酸化剤;グリチルリチン酸などの抗炎症剤;各種紫外線吸収剤;α−ヒドロキシカルボン酸、胎盤抽出液、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸などの細胞賦活成分;コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸などの細胞外マトリックス成分;尿素などの保湿剤がそれである。また、皮膚のシミ、ソバカス、肝斑等の色素沈着の発生を抑制する物質としては、アルブチン、コウジ酸などが知られており、美白剤の有効成分として広く使用されている。しかし、上記抗酸化剤、保湿剤、美白剤等は、皮膚安全性の点で問題があり、皮膚安全性にすぐれた化粧料配合成分が求められている。 In order to prevent skin aging and keep the skin healthy and youthful, the use of various active ingredients has been proposed in the past, and cosmetics containing these active ingredients (skin-whitening ingredients, whitening ingredients, etc.) have been introduced. It is on the market. For example, antioxidants such as vitamin C, vitamin E and superoxide dismutase (hereinafter abbreviated as SOD); anti-inflammatory agents such as glycyrrhizic acid; various ultraviolet absorbers; α-hydroxycarboxylic acid, placenta extract, γ Cell-activating components such as -amino-β-hydroxybutyric acid; extracellular matrix components such as collagen, elastin, hyaluronic acid; moisturizers such as urea. Arbutin, kojic acid, and the like are known as substances that suppress the occurrence of pigmentation such as skin spots, freckles, and chloasma, and are widely used as active ingredients of whitening agents. However, the above-mentioned antioxidants, moisturizers, whitening agents and the like have problems in terms of skin safety, and cosmetic compounding ingredients having excellent skin safety are required.
本発明者らは、かかる従来技術の問題点に鑑みて、皮膚安全性の観点から天然物由来の新たな美肌成分及び美白成分を見出すべく鋭意研究を行った。その結果、バラ科バラ属に属するダマスクバラの溶媒抽出物が、すぐれた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用及び美白作用を有し、これにより、当該抽出物を配合することですぐれた美肌効果及び美白効果を奏し、かつ、皮膚安全性にすぐれた化粧料の提供が可能になることを見出した。 In view of the problems of the prior art, the present inventors have conducted diligent research to find new skin-whitening components and whitening components derived from natural products from the viewpoint of skin safety. As a result, the solvent extract of Damask rose, which belongs to the genus Rosa in the family Rosaceae, has excellent antioxidant, anti-inflammatory, anti-aging and whitening effects, and thus it is excellent to mix the extract. We have found that it is possible to provide cosmetics that have skin-whitening and whitening effects and are excellent in skin safety.
従来、バラ科バラ属に属するバラの抽出物を化粧料に利用することについては特許文献1、2に開示され、また、ダマスクバラの抽出物を抗菌剤又は消臭剤として利用可能であることについては特許文献3に開示され、さらに、ダマスクバラの水蒸気蒸留物(精油など)を化粧料に利用することについては、特許文献4、5に開示されている。 Conventionally, the use of a rose extract belonging to the genus Rosa in the family Rosaceae for cosmetics is disclosed in Patent Documents 1 and 2, and the extract of damask rose can be used as an antibacterial agent or a deodorant. Is disclosed in Patent Document 3, and further, the use of steam-distilled Damask rose (essential oil, etc.) in cosmetics is disclosed in Patent Documents 4 and 5.
しかし、ダマスクバラの溶媒抽出物がすぐれた抗酸化作用、抗炎症作用、抗老化作用及び美白作用を有し、それらの相乗効果により、シワ、タルミ等の皮膚老化を改善し、肌のハリ、ツヤを向上させ、さらには、シミ、ソバカスの改善や、肌の紫外線ダメージの予防及び改善効果を有することについては知られていなかった。 However, the solvent extract of freckles has excellent antioxidative, anti-inflammatory, anti-aging and whitening effects, and the synergistic effect of them improves skin aging such as wrinkles and blemishes, and makes the skin firm. It has not been known that it has an effect of improving gloss, improving spots and freckles, and preventing and improving UV damage on the skin.
本発明は、バラ科バラ属のダマスクバラの溶媒抽出物を有効成分とする化粧料である。
なお、本明細書において化粧料なる文言は、所謂化粧料のほかに医薬部外品までも含む広義で用いる。
The present invention is a cosmetic containing a solvent extract of Damask rose of the Rosaceae family as an active ingredient.
In this specification, the term cosmetics is used in a broad sense to include not only so-called cosmetics but also quasi-drugs.
本発明は、バラ科バラ属の植物であるダマスクバラの溶媒抽出物を有効成分とする化粧料であって、抗酸化作用(細胞内カタラーゼ活性亢進作用、ペルオキシレドキシンの発現亢進、過酸化脂質抑制作用、DPPHラジカル消去作用)、抗炎症作用(脱顆粒抑制作用、プロスタグランジンE2(以下「PEG2」と称する)生成抑制作用、インターロイキン1βの発現抑制)、表皮細胞のエネルギー代謝促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼの活性抑制作用、及び美白作用を有し、それらの相乗効果により、シワ、タルミ等の皮膚老化を改善し、肌のハリ、ツヤを向上させ、さらには、シミ、ソバカスの改善や、紫外線等の外的要因による肌のダメージ(酸化ダメージ及び炎症ダメージ)の予防及び改善効果を奏する化粧料を提供することができる。 The present invention is a cosmetic containing a solvent extract of damask rose, which is a plant belonging to the genus Rose family, as an active ingredient, and has an antioxidant effect (intracellular catalase activity enhancing effect, peroxiredoxin expression enhancing, lipid peroxide). Suppressive action, DPPH radical scavenging action), anti-inflammatory action (degranulation inhibitory action, prostaglandin E2 (hereinafter referred to as "PEG2") production inhibitory action, interleukin 1β expression suppression action), epidermal cell energy metabolism promoting action, It has an activity-suppressing effect and whitening effect of matrix metalloproase, and by their synergistic effect, it improves skin aging such as wrinkles and tarmi, improves skin firmness and luster, and further improves spots and buckwheat. It is possible to provide cosmetics that have the effect of preventing and improving skin damage (oxidative damage and inflammatory damage) caused by external factors such as ultraviolet rays.
以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。
本発明で用いる抽出素材は、バラ科バラ属のダマスクバラ(Rosa damascena)であって、ダマスクバラであれば、どのような品種(交配種、亜種も含む)であってよい。
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail.
The extraction material used in the present invention is Rosa damascena of the genus Rosa in the family Rosaceae, and any variety (including hybrids and subspecies) may be used as long as it is Damask rose.
本発明に用いる素材は、ダマスクバラの全草、葉、花部、茎、種子、実、根等、いずれを用いても良いが、全草、或いは花部の使用が好ましい。 As the material used in the present invention, any of damask rose whole plant, leaf, flower part, stem, seed, fruit, root and the like may be used, but the use of whole plant or flower part is preferable.
抽出物の調製は、まず、ダマスクバラ(例えば、全草、花部等)を、必要ならば予め水洗して異物を除いた後、そのまま又は乾燥した上、必要に応じて細切又は粉砕し、抽出溶媒と接触させて抽出を行う。抽出は、浸漬法等の常法に従って抽出溶媒と接触させることで行うことが可能であるが、浸漬法以外にも超臨界抽出法を用いることも可能である。 To prepare the extract, first, damask roses (for example, whole plant, flower part, etc.) are washed with water in advance to remove foreign substances, if necessary, and then left as it is or dried, and then chopped or crushed as necessary. , Extraction is performed by contacting with an extraction solvent. Extraction can be performed by contacting with an extraction solvent according to a conventional method such as a dipping method, but a supercritical extraction method can also be used in addition to the dipping method.
抽出溶媒としては、水;メタノール、エタノール、プロパノールなどの低級アルコール類;エチレングリコール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類;酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類;アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類;エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類;n−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などが挙げられ、それらは単独で又は二種以上混合して用いられる。 As the extraction solvent, water; lower alcohols such as methanol, ethanol and propanol; polyhydric alcohols such as ethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol and glycerin; ethyl acetate, butyl acetate, methyl propionate and the like. Esters; ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; ethers such as ethyl ether and isopropyl ether; hydrocarbon solvents such as n-hexane, toluene and chloroform, etc., which may be used alone or in admixture of two or more. Used.
それら抽出溶媒のうちでも、得られる抽出物の抗酸化作用、抗炎症作用、表皮細胞のエネルギー代謝促進作用、マトリックスメタロプロテアーゼの活性抑制作用、及び美白作用、さらには、皮膚刺激性の観点から、又化粧料への幅広い適用が可能であるという点からも、本発明においては、水、低級アルコール類又は多価アルコール類などの親水性溶媒が好適である。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば、水、低級アルコール類(特にエタノール)、又は多価アルコール(特に、1,3−ブチレングリコール)の単独使用、或いは、水と低級アルコール類(特にエタノール)との混合溶媒、又は水と多価アルコール類(特に1,3−ブチレングリコール,グリセリン)との混合溶媒の使用等が挙げられるが、なかでも水単独、又は水と1,3−ブチレングリコールの混合溶媒が特に好ましい。 Among these extraction solvents, from the viewpoints of antioxidant action, anti-inflammatory action, energy metabolism promoting action of epidermal cells, activity inhibitory action of matrix metalloprotease, whitening action, and skin irritation of the obtained extract, Further, from the viewpoint that it can be widely applied to cosmetics, a hydrophilic solvent such as water, lower alcohols or polyhydric alcohols is preferable in the present invention. Preferred examples of using this hydrophilic solvent include, for example, water, lower alcohols (particularly ethanol), or polyhydric alcohol (particularly 1,3-butylene glycol) used alone, or water and lower alcohols. Examples include the use of a mixed solvent with (particularly ethanol) or a mixed solvent with water and polyhydric alcohols (particularly 1,3-butylene glycol, glycerin). Among them, water alone or water and 1,3 -A mixed solvent of butylene glycol is particularly preferable.
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と1,3−ブチレングリコールとの混合溶媒であれば、容量比(以下同じ)で1:10〜20:1、水とエタノールとの混合溶媒であれば、1:10〜25:1、水とグリセリンとの混合溶媒であれば1:10〜20:1の範囲とすることが好ましい。 When a mixed solvent is used, for example, in the case of a mixed solvent of water and 1,3-butylene glycol, the volume ratio (hereinafter the same applies) is 1: 10 to 20: 1, and the mixed solvent of water and ethanol is used. If there is, it is preferably in the range of 1: 10 to 25: 1, and in the case of a mixed solvent of water and glycerin, the range is preferably 1: 10 to 20: 1.
また、ダマスクバラの乾燥部位(例えば、全草又は花部)と抽出溶媒との重量比は好ましくは1:1〜1:50の範囲であり、より好ましくは、1:5〜1:35の範囲である。 The weight ratio of the dried part (for example, whole plant or flower part) of the damask rose to the extraction solvent is preferably in the range of 1: 1 to 1:50, more preferably 1: 5 to 1:35. The range.
抽出物の調製に際して、そのpHに特に限定はないが、一般には3〜9の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば、前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤、又はクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤を配合し、所望のpHとなるように調整してもよい。 When preparing the extract, the pH is not particularly limited, but is generally preferably in the range of 3 to 9. In this sense, if necessary, an alkali adjusting agent such as sodium hydroxide, sodium carbonate, or potassium hydroxide, or an acid adjusting agent such as citric acid, hydrochloric acid, phosphoric acid, or sulfuric acid may be added to the extraction solvent. The pH may be adjusted to the above.
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やpHによっても異なるが、例えば、水もしくは1,3−ブチレングリコール、又は水と1,3−ブチレングリコールとの混液を溶媒とする場合であれば、抽出温度は好ましくは0℃〜80℃の範囲であり、より好ましく0℃〜20℃の範囲であり、又抽出時間は好ましくは1〜168時間(1時間〜1週間)であり、より好ましくは1〜120時間(1時間〜5日間)の範囲である。 Extraction conditions such as extraction temperature and extraction time differ depending on the type and pH of the solvent used, but for example, when water or 1,3-butylene glycol or a mixed solution of water and 1,3-butylene glycol is used as the solvent. If so, the extraction temperature is preferably in the range of 0 ° C. to 80 ° C., more preferably in the range of 0 ° C. to 20 ° C., and the extraction time is preferably in the range of 1 to 168 hours (1 hour to 1 week). , More preferably in the range of 1 to 120 hours (1 hour to 5 days).
なお、本発明の抽出処理に先立って、又は抽出処理と並行して、必要に応じてダマスクバラに加水分解処理を施してもよい。これによって、ダマスクバラの抽出物の保存安定性等を改善して、化粧料配合剤としての抽出物をより有効に利用できる可能性がある。 If necessary, the damask rose may be hydrolyzed prior to the extraction treatment of the present invention or in parallel with the extraction treatment. As a result, there is a possibility that the storage stability of the damask rose extract can be improved and the extract as a cosmetic compounding agent can be used more effectively.
抽出物に酵素加水分解処理を施す場合、酵素としては、アクチナーゼ、パパイン、ペプシンなどの蛋白分解酵素、グルコアミラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼなどの澱粉分解酵素、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼなどの繊維素分解酵素、及びリパーゼなどの脂肪分解酵素のいずれかの酵素群から選ばれた1種又は2種以上を用いてもよいが、それらの酵素群からそれぞれ選ばれた1種又は2種以上の酵素を組み合わせて用いることがより好ましい。 When the extract is subjected to enzyme hydrolysis treatment, the enzymes include proteolytic enzymes such as actinase, papaine and pepsin, starch degrading enzymes such as glucoamylase, α-amylase and β-amylase, cellulase, hemicellulase and pectinase. One or more selected from any of the fibrinolytic enzymes and lipolytic enzymes such as lipase may be used, but one or more selected from those enzyme groups, respectively. It is more preferable to use the above enzymes in combination.
酵素の添加量は、例えば、ダマスクバラの全草、又は花部であれば、その固形分に対して、合計で0.01〜10重量%の範囲とすることが好ましく、より好ましくは0.1〜2.0重量%の範囲である。 For example, in the case of whole grass or flower part of damask rose, the amount of the enzyme added is preferably in the range of 0.01 to 10% by weight in total, more preferably 0. It is in the range of 1 to 2.0% by weight.
上述のように調製した抽出物は、一般にはpHを3〜8に調製した上で、これをそのままの状態で化粧料配合剤として使用しても良く、又減圧濃縮等により所望の濃度として使用しても良い。また、抽出物はスプレードライ法等の常法により乾燥物としても良い。 The extract prepared as described above may generally have a pH adjusted to 3 to 8 and then used as it is as a cosmetic compounding agent, or may be used as a desired concentration by concentration under reduced pressure or the like. You may. Further, the extract may be a dried product by a conventional method such as a spray drying method.
また、上述のように調製した抽出物は、保存安定性等を高めるために、一定時間冷蔵保存した上で、上清を化粧料配合剤として使用しても良い。 In addition, the extract prepared as described above may be refrigerated for a certain period of time and then the supernatant may be used as a cosmetic compounding agent in order to improve storage stability and the like.
以上のようにして得られる本発明の抽出物には、様々な有効成分が含まれており、例えば、液体クロマトグラフィー(株式会社日立ハイテクノロジーズ社製;LaChrom ELITE)の測定により、有機酸として、没食子酸、クロロゲン酸、カフェ酸が含まれていることを確認した。 The extract of the present invention obtained as described above contains various active ingredients, and is, for example, as an organic acid by measurement by liquid chromatography (manufactured by Hitachi High-Technologies Corporation; LaChrom ELITE). It was confirmed that gallic acid, chlorogenic acid, and caffeic acid were contained.
本発明のダマスクバラの抽出物を含む化粧料(医薬部外品も含む)としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パックなどの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉などのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディシャンプー、毛髪用シャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、育毛剤、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。 Cosmetics containing the extract of damask rose of the present invention (including non-medicinal products) include, for example, basic cosmetics such as milky lotion, cream, lotion, essence, and pack, lipstick, foundation, liquid foundation, and makeup press powder. , Makeup cosmetics such as blusher, white powder, wash pigments, body shampoos, hair shampoos, cleansing cosmetics such as soaps, hair restorers, and bathing agents, but of course they are limited to these. is not.
本発明の化粧料におけるダマスクバラの抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に0.002〜1.0重量%、好ましくは0.02〜0.2重量%の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に0.002〜1.0重量%、好ましくは0.02〜0.2重量%の範囲、又清浄用化粧料の場合は、一般に0.002〜10.0重量%、好ましくは0.02〜7.0重量%の範囲である。 The blending amount of the Damask rose extract in the cosmetic of the present invention is generally 0.002 to 1.0% by weight, preferably 0.02 to 0.2, as the solid content of the extract in the case of basic cosmetics. In the range of% by weight, in the case of make-up cosmetics, generally in the range of 0.002 to 1.0% by weight, preferably in the range of 0.02 to 0.2% by weight, and in the case of cosmetics for cleaning, generally 0. It is in the range of 002 to 10.0% by weight, preferably 0.02 to 7.0% by weight.
本発明の化粧料には、必須成分のダマスクバラの抽出物のほかに、通常化粧料に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤(合成系、天然物系)、保湿剤、増粘剤、乳化剤又は乳化助剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、その他の生理活性成分等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明のダマスクバラの抽出物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分と組み合わせて化粧料に配合することも何ら差し支えない。 In the cosmetic of the present invention, in addition to the extract of damask rose, which is an essential ingredient, ingredients usually used in cosmetics, such as oily ingredients, surfactants (synthetic and natural products), moisturizers, and thickeners , Emulsifiers or emulsifying aids, preservatives / bactericidal agents, powder components, ultraviolet absorbers, antioxidants, pigments, fragrances, other physiologically active ingredients and the like can be appropriately blended as needed. Further, as long as the effectiveness and features of the damask rose extract of the present invention are not impaired, it may be blended in cosmetics in combination with other physiologically active ingredients.
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類;ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類;ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類;流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類;ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、cis−11−エイコセン酸などの脂肪酸類;ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類;ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、2−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル(ステアリン酸オクチルドデシル等)などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。 Here, examples of the oily component include olive oil, jojoba oil, paraffin oil, soybean oil, rice oil, rice germ oil, coconut oil, palm oil, cacao oil, meadowfoam oil, sheer butter, tea tree oil, and avocado oil. Plant-derived fats and oils such as macadamia nut oil and plant-derived squalane; animal-derived fats and oils such as mink oil and turtle oil; waxes such as beeswax, carnauba wax, rice wax and lanolin; liquid paraffin, vaseline, paraffin wax, squalane, etc. Hydrocarbons; fatty acids such as myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, isostearic acid, cis-11-eicosenoic acid; higher alcohols such as lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol; isopropyl myristate, palmitic acid Examples thereof include synthetic esters such as isopropyl, butyl oleate, 2-ethylhexyl glyceride, and higher fatty acid octyldodecyl (octyldodecyl stearate, etc.) and synthetic triglycerides.
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤;脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤;第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、2−アルキル−1−アルキル−1−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、N,N−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤;N,N−ジメチル−N−アルキル−N−カルボキシメチルアンモニオベタイン、N,N,N−トリアルキル−N−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、N−アシルアミドプロピル−N′,N′−ジメチル−N′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。 Examples of the surfactant include polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene fatty acid ester, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, polyoxyethylene glycerin fatty acid ester, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, and poly. Nonionic surfactants such as oxyethylene sorbitol fatty acid esters; fatty acid salts, alkyl sulfates, alkylbenzene sulfonates, polyoxyethylene alkyl ether sulfates, polyoxyethylene fatty amine sulfates, polyoxyethylene alkylphenyl ether sulfates, Anionic surfactants such as polyoxyethylene alkyl ether phosphate, α-sulfonated fatty acid alkyl ester salt, polyoxyethylene alkyl phenyl ether phosphate; quaternary ammonium salt, primary to tertiary fatty amine salt, tri Cationic surfactants such as alkylbenzylammonium salt, alkylpyridinium salt, 2-alkyl-1-alkyl-1-hydroxyethylimidazolinium salt, N, N-dialkylmorphonium salt, polyethylene polyamine fatty acid amide salt; N, N-dimethyl-N-alkyl-N-carboxymethylammoniobetaine, N, N, N-trialkyl-N-alkylene ammoniocarboxybetaine, N-acylamide propyl-N', N'-dimethyl-N'- Amphoteric surfactants such as β-hydroxypropylammoniosulfobetaine can be used.
乳化剤乃至乳化助剤としては、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、レシチン及びその誘導体(水素添加レシチン等)、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類(麦類、豆類、雑穀など)等を配合することもできる。 Examples of emulsifiers or emulsifying aids include stevia derivatives such as enzyme-treated stevia, lecithin and its derivatives (hydrogenated lecithin, etc.), lactic acid bacteria fermented rice, lactic acid bacteria fermented germinated rice, lactic acid bacteria fermented grains (wheat, beans, millet, etc.). It can also be blended.
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類(例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など)、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、NMF関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根(白及)抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。 Examples of the moisturizing agent include glycerin, propylene glycol, dipropylene glycol, 1,3-butylene glycol, polyethylene glycol, sorbitol, xylitol, sodium pyrrolidone carboxylate and the like, and saccharides such as trehalose and mucopolysaccharides (for example, hyalurone). Acids and their derivatives, chondroitin and its derivatives, heparin and its derivatives, etc.), elastin and its derivatives, collagen and its derivatives, NMF-related substances, lactic acid, urea, higher fatty acids octyldodecyl, seaweed extract, silane roots (white) Examples include extracts, various amino acids and derivatives thereof.
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分;シラン根(白及)抽出物;ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類;キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類;カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体;ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類;ヒアルロン酸及びその誘導体;ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。 Examples of the thickener include ingredients derived from brown algae such as alginic acid, agar, carrageenan and fucoidan, green algae or red algae; silane root (white and) extract; polysaccharides such as pectin, locust bean gum and aloe polysaccharide; xanthan gum, Gum such as tragant gum and guar gum; cellulose derivatives such as carboxymethyl cellulose and hydroxyethyl cellulose; synthetic polymers such as polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone, carboxyvinyl polymer, alginic acid / methacrylic acid copolymer; hyaluronic acid and its derivatives; poly Examples thereof include glutamate and derivatives thereof.
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素;パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類;フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール(イミダゾデイニールウレア)、1,2−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物等がある。 Examples of preservatives and bactericides include urea; paraoxybenzoic acid esters such as methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, and butyl paraoxybenzoate; phenoxyethanol, dichlorophenol, hexachlorophene, chlorhexidine hydrochloride, and benza chloride. There are luconium, salicylic acid, ethanol, undesyleneic acid, phenols, jamar (imidazodeini ruurea), 1,2-pentanediol, various essential oils, and dried bark.
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類(米、麦、トウモロコシ、キビなど)のパウダー、豆類(大豆、小豆など)のパウダー等がある。 Examples of powder components include cericite, titanium oxide, talc, kaolin, bentonite, zinc oxide, magnesium carbonate, magnesium oxide, zirconium oxide, barium sulfate, silicic anhydride, mica, nylon powder, polyethylene powder, silk powder, and cellulose. There are system powders, grain powders (rice, wheat, corn, talc, etc.), beans (soybeans, talc, etc.) powders, etc.
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸2−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、2,4−ジヒドロキシベンゾフェノン、2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン−5−スルホン酸塩、4−ターシャリーブチル−4−メトキシベンゾイルメタン、2−(2−ヒドロキシ−5−メチルフェニル)ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。 Examples of the ultraviolet absorber include ethyl paraaminobenzoate, ethylhexyl paradimethylaminobenzoate, amyl salicylate and its derivatives, 2-ethylhexyl paramethoxycinnamate, octyl silicate, oxybenzoyl, 2,4-dihydroxybenzophenone, 2-hydroxy-4. -Methoxybenzophenone-5-sulfonate, 4-tershally butyl-4-methoxybenzoylmethane, 2- (2-hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole, urocanic acid, ethyl urocanate, aloe extract, etc. ..
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンE及びその誘導体(例えば、ビタミンEニコチネート、ビタミンEリノレート等)、ムラサキシキブ抽出物、シャクヤク抽出物、シラン根(白及)抽出物等がある。 Antioxidants include, for example, butylhydroxyanisole, butylhydroxytoluene, propyl gallate, vitamin E and its derivatives (for example, vitamin E nicotinate, vitamin E linoleate, etc.), beautyberry extract, shakyaku extract, silane root (white and white). ) There are extracts etc.
美白剤としては、t−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、4−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン(5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール)、4−HPB(ロドデノール、4−(4−ヒドロキシフェニル)−4−ブタノール))、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンE及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、AMP(アデノシンモノホスフェイト、アデノシン1リン酸)が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。 Whitening agents include t-cycloaminomino acid derivatives, kodiic acid and its derivatives, ascorbic acid and its derivatives, hydroquinone or its derivatives, ellagic acid and its derivatives, nicotinic acid and its derivatives, resorcinol derivatives, tranexamic acid and its derivatives, 4 -Potasium salicylic acid, magnolignan (5,5'-dipropyl-biphenyl-2,2'-diol), 4-HPB (rhododenol, 4- (4-hydroxyphenyl) -4-butanol), hydroxybenzoic acid And its derivatives, vitamin E and its derivatives, α-hydroxyic acid, and AMP (adenosine monophosphate, adenosine monophosphate), and these may be blended alone or in combination of two or more.
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばL−アスコルビン酸−2−リン酸エステルナトリウム、L−アスコルビン酸−2−リン酸エステルマグネシウム、L−アスコルビン酸−2−硫酸エステルナトリウム、L−アスコルビン酸−2−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、L−アスコルビン酸−2−グルコシド、L−アスコルビン酸−5−グルコシドなどのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の6位アシル化物(アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など)、L−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、L−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのL−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、3−O−エチルアスコルビン酸、L−アスコルビン酸−2−リン酸−6−O−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン(ハイドロキノン−β−D−グルコピラノシド)、α−アルブチン(ハイドロキノン−α−D−グルコピラノシド)等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル(例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩)、トラネキサム酸のアミド体(例えば、トラネキサム酸メチルアミド)などが挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、4−n−ブチルレゾルシノール、4−イソアミルレゾルシノール等が、2,5−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば2,5−ジアセトキシ安息香酸、2−アセトキシ−5−ヒドロキシ安息香酸、2−ヒドロキシ−5−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。 Examples of the ascoric acid derivative include ascoric acid esters such as ascoric acid monobutylate, ascoric acid monocaplate, ascoric acid monopalmitate and ascoric acid dibutylate, assic acid sugar derivatives such as ascoric acid ethers and ascoric acid glucoside, and the like. However, examples of the ascorbic acid derivative include L-ascorbic acid-2-phosphate ester sodium, L-ascorbic acid-2-phosphate ester magnesium, L-ascorbic acid-2-sulfate ester sodium, and L-ascorbic acid-2. -Ascorbic acid ester salts such as magnesium sulfate, ascorbic acid sugar derivatives such as L-ascorbic acid-2-glucoside, L-ascorbic acid-5-glucoside, and the 6-position acylated products of these ascorbic acid sugar derivatives (the acyl group is Hexanoyl group, octanoyl group, decanoyl group, etc.), L-ascorbic acid tetra-fatty acid esters such as L-ascorbic acid tetraisopalmitic acid ester, L-ascorbic acid tetralauric acid ester, 3-O-ethylascorbic acid, L- Glucerin ascorbic acid derivatives such as ascorbic acid-2-phosphate-6-O-palmitate sodium, glyceryl ascorbic acid or an acylated derivative thereof, and bisglyceryl ascorbic acid are used as hydroquinone derivatives, and arbtin (hydroquinone-β-D-). Glucopyranoside), α-arbutin (hydroquinone-α-D-glucopyranoside) and the like, as the tranexamic acid derivative, tranexamic acid ester (for example, tranexamic acid lauryl ester, tranexamic acid hexadecyl ester, tranexamic acid cetyl ester or a salt thereof), Examples thereof include an amide form of tranexamic acid (for example, methylamide tranexamic acid). Examples of the resorcinol derivative include 4-n-butylresorcinol and 4-isoamylresorcinol, and examples of the 2,5-dihydroxybenzoic acid derivative include. 2,5-Diacetoxybenzoic acid, 2-acetoxy-5-hydroxybenzoic acid, 2-hydroxy-5-propionyloxybenzoic acid and the like, and as nicotinic acid derivatives, for example, nicotinic acid amide, benzyl nicotinate and the like are α-. Examples of the hydroxy acid include lactic acid, ascoric acid, succinic acid, citric acid, and α-hydroxyoctanoic acid.
生理活性成分としては、美白成分として、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、党参抽出物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ(Arcangelicia flava Merrilli)抽出物、カミツレ抽出物等が上げられ、抗老化成分として、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス(水ナス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等)抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物(例えばリポソーム化リノール酸など)、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体(ジカリウム塩等)、t−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンA及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、アロエ抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、ジュアゼイロ(Zizyphus joazeiro)抽出物等がある。 As the physiologically active ingredient, as a whitening ingredient, for example, a placenta extract, a soybean extract, a yukinoshita extract, a perilla extract, a rice bran extract or a hydrolyzate thereof, a white potato extract or a hydrolyzate thereof, and a white potato Fermented product, Shakyaku extract or its hydrolyzate, Lactobacillus fermented rice, Murasakikibu extract, Hass seed extract or its hydrolyzate, Hass seed fermented product, Ginseng extract, Hatomugi hydrolyzate, Hatomugi seed fermented product, Royal jelly Fermented product, fermented sake lees, Pandanus amaryllifolius Roxb. Extract, Arcangelicia flava Merrilli extract, chamomile extract, etc. are listed, and coral grass extract is used as an anti-aging component. Products, rice leaf extract or its hydrolyzate, eggplant (water eggplant, long eggplant, Kamo eggplant, rice eggplant, etc.) extract or its hydrolyzate, apricot fruit extract, seaweed extract such as catamen giraffe Products, extracts of marine flowering plants such as amamo, fermented soymilk, jellyfish water, rice extract or its hydrolyzate, fermented rice extract, sprouted rice extract or its hydrolyzate, sprouted rice fermented product, black bean extract Substances or hydrolysates thereof, linoleic acid and its derivatives or processed products (for example, liposomal linoleic acid), collagen and its derivatives derived from animals or fish, elastin and its derivatives, glycyrrhizinic acid and its derivatives (dipotassium salt, etc.), t-cycloamino acid derivative, vitamin A and its derivatives, allantin, diisopropylamine dichloroacetate, γ-amino-β-hydroxybutyric acid, gentian extract, licorice extract, carrot extract, aloe extract, honeycomb extract, hechima extract There are products, Ana Aosa extract, Zizyphus joazeiro extract, etc.
次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また%はすべて重量%を意味する。 Next, the present invention will be described in more detail with reference to Production Examples, Formulation Examples, and Test Examples, but the present invention is not limited thereto. In the following, all parts mean parts by weight, and% means all parts by weight.
製造例1.ダマスクバラの花の抽出物溶液の調製
バラ科バラ属のダマスクローズの花弁を乾燥し、乾燥物15gに精製水を225g添加し4℃で浸漬した後、1,3−ブチレングリコールを225g添加した。これを4℃で抽出を行った後ろ過し、褐色透明のダマスクローズ花抽出物溶液382gを得た(固形分濃度0.94%)。
Production example 1. Preparation of Damask rose flower extract solution The petals of Damask rose of the Rosaceae genus were dried, 225 g of purified water was added to 15 g of the dried product, and the mixture was immersed at 4 ° C., and then 225 g of 1,3-butylene glycol was added. .. This was extracted at 4 ° C. and then filtered to obtain 382 g of a brown transparent damask rose flower extract solution (solid content concentration 0.94%).
製造例2.ダマスクバラの全草の抽出物溶液の調製
バラ科バラ属のダマスクローズの全草を乾燥し、乾燥物15gに精製水を225g添加し4℃で浸漬した後、1,3−ブチレングリコールを225g添加した。これを4℃で抽出を行った後ろ過し、褐色透明のダマスクローズ全草抽出物溶液346gを得た(固形分濃度0.69%)。
Production example 2. Preparation of extract solution of whole roses of Damask roses The whole plants of Damask rose of the Rosaceae genus were dried, 225 g of purified water was added to 15 g of the dried product, and the mixture was immersed at 4 ° C. Added. This was extracted at 4 ° C. and then filtered to obtain 346 g of a brown transparent damask rose whole plant extract solution (solid content concentration: 0.69%).
処方例1.化粧水
[A成分] 部
オリーブ油 1.0
ポリオキシエチレン(5.5)セチルアルコール 5.0
ブチルパラベン 0.1
[B成分] 部
製造例1の抽出物溶液 5.0
エタノール 5.0
グリセリン 5.0
1,3−ブチレングリコール 5.0
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が100部となる量
[C成分]
香料 適量
A成分及びB成分をそれぞれ80℃以上に加温後、A成分にB成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン(5000rpm)で2分間ホモジナイズを行った。これを50℃まで冷却した後、C成分を加えて攪拌混合し、さらに30℃以下まで冷却して化粧水を得た。
Prescription example 1. Toner [A component] Part Olive oil 1.0
Polyoxyethylene (5.5) cetyl alcohol 5.0
Butylparaben 0.1
[Component B] Extract solution of Part Production Example 1 5.0
Ethanol 5.0
Glycerin 5.0
1,3-butylene glycol 5.0
Potassium hydroxide Appropriate amount Purified water Amount that makes the total amount 100 parts [C component]
Appropriate amounts of fragrance A component and B component were each heated to 80 ° C. or higher, then B component was added to A component and stirred, and homogenized with hiscotron (5000 rpm) for 2 minutes. After cooling this to 50 ° C., component C was added, stirred and mixed, and further cooled to 30 ° C. or lower to obtain a lotion.
処方例2.化粧水
処方例1のB成分に含まれる製造例1の抽出物溶液に代えて、製造例2の抽出物溶液5.0部を用いるほかは、処方例1と同様にして化粧水を得た。
Prescription example 2. Toner was obtained in the same manner as in Formulation 1, except that 5.0 parts of the extract solution of Production Example 2 was used instead of the extract solution of Production Example 1 contained in the B component of Formulation Example 1. ..
処方例3.乳液
[A成分] 部
流動パラフィン 6.0
ヘキサラン 4.0
ホホバ油 1.0
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノステアレート 2.0
大豆レシチン 1.5
[B成分] 部
製造例1の抽出物溶液 3.0
L−アスコルビン酸−2−グルコシド 2.0
水酸化カリウム 0.5
グリセリン 3.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
カルボキシメチルセルロース 0.3
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
精製水 全量が100部となる量
[C成分]
香料
適量
上記のA成分とB成分をそれぞれ80℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを50℃まで冷却した後、C成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
Prescription example 3. Emulsion [Component A] Part Liquid paraffin 6.0
Hexalan 4.0
Jojoba oil 1.0
Polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate 2.0
Soy lecithin 1.5
[Component B] Part The extract solution of Production Example 1 3.0
L-ascorbic acid-2-glucoside 2.0
Potassium hydroxide 0.5
Glycerin 3.0
1,3-butylene glycol 2.0
Carboxymethyl cellulose 0.3
Sodium hyaluronate 0.01
Amount of purified water totaling 100 parts [C component]
Fragrance
Appropriate amount
The above components A and B were each heated to 80 ° C. or higher, and then stirred and mixed. After cooling this to 50 ° C., component C was added and further stirred and mixed to obtain a milky lotion.
処方例4.乳液
処方例3のB成分中、L−アスコルビン酸−2−グルコシド2.0部及び水酸化カリウム0.5部に代えてトラネキサム酸2.0部を用いるほかは処方例3と同様にして乳液を得た。
Prescription example 4. Emulsion Emulsion in the same manner as in Formulation 3 except that 2.0 parts of tranexamic acid is used instead of 2.0 parts of L-ascorbic acid-2-glucoside and 0.5 part of potassium hydroxide in the B component of Formulation Example 3. Got
処方例5.乳液
[A成分] 部
流動パラフィン 6.0
ヘキサラン 4.0
ホホバ油 1.0
ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノステアレート 2.0
大豆レシチン 1.5
[B成分] 部
製造例1の抽出物溶液 5.0
L−アスコルビン酸−2−グルコシド 2.0
水酸化カリウム 0.5
アルブチン 3.0
グリセリン 3.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
カルボキシメチルセルロース 0.3
ヒアルロン酸ナトリウム 0.01
精製水 全量が100部となる量
Prescription example 5. Emulsion [Component A] Part Liquid paraffin 6.0
Hexalan 4.0
Jojoba oil 1.0
Polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate 2.0
Soy lecithin 1.5
[Component B] Part Extract solution of Production Example 1 5.0
L-ascorbic acid-2-glucoside 2.0
Potassium hydroxide 0.5
Arbutin 3.0
Glycerin 3.0
1,3-butylene glycol 2.0
Carboxymethyl cellulose 0.3
Sodium hyaluronate 0.01
Amount of purified water totaling 100 parts
処方例6.ローション
[成分] 部
製造例2の抽出物溶液 10.0
エタノール 10.0
グリセリン 3.0
1、3−ブチレングリコール 2.0
メチルパラベン 0.2
クエン酸 0.1
クエン酸ナトリウム 0.3
カルボキシビニルポリマー 0.1
香料 適量
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が100部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
Prescription example 6. Lotion [component] part Extract solution of Production Example 2 10.0
Ethanol 10.0
Glycerin 3.0
1,3-butylene glycol 2.0
Methylparaben 0.2
Citric acid 0.1
Sodium citrate 0.3
Carboxyvinyl polymer 0.1
Fragrance Appropriate amount Potassium hydroxide Appropriate amount Purified water Amount that makes the total amount 100 parts A lotion was obtained by mixing the above components.
処方例7.エッセンス
[成分] 部
エタノール 2.0
グリセリン 5.0
1,3−ブチレングリコール 5.0
メチルパラベン 0.1
ヒアルロン酸 0.1
製造例1の抽出物溶液 5.0
クエン酸 0.3
クエン酸ナトリウム 0.6
精製水 全量が100部となる量
精製水にヒアルロン酸を溶解させた後、残りの原料を順次加えて攪拌溶解させ、透明のエッセンスを得た。
Prescription example 7. Essence [ingredient] part ethanol 2.0
Glycerin 5.0
1,3-butylene glycol 5.0
Methylparaben 0.1
Hyaluronic acid 0.1
Extract solution of Production Example 1 5.0
Citric acid 0.3
Sodium citrate 0.6
Hyaluronic acid was dissolved in purified water so that the total amount of purified water was 100 parts, and then the remaining raw materials were sequentially added and dissolved by stirring to obtain a transparent essence.
処方例8.エッセンス
処方例7の成分中製造例1の抽出物溶液に代えて製造例2の抽出物溶液5.0部を用いるほかは処方例7と同様にしてエッセンスを得た。
Prescription example 8. Essence An essence was obtained in the same manner as in Formulation 7, except that 5.0 parts of the extract solution of Production Example 2 was used instead of the extract solution of Production Example 1 in the components of Formulation Example 7.
実施例9.リキッドファンデーション
[A成分] 部
ステアリン酸 2.4
モノステアリン酸プロピレングリコール 2.0
セトステアリルアルコール 0.2
液状ラノリン 2.0
流動パラフィン 3.0
ミリスチン酸イソプロピル 8.5
プロピルパラベン 0.05
[B成分] 部
製造例1の抽出物溶液 5.0
カルボキシメチルセルロースナトリウム 0.2
ベントナイト 0.5
プロピレングリコール 4.0
トリエタノールアミン 1.1
メチルパラベン 0.1
精製水 全量が100部となる量
[C成分] 部
酸化チタン 8.0
タルク 4.0
着色顔料 適量
上記のA成分とB成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のC成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。
Example 9. Liquid foundation [A component] Stearic acid 2.4
Propylene glycol monostearate 2.0
Setostearyl alcohol 0.2
Liquid lanolin 2.0
Liquid paraffin 3.0
Isopropyl myristate 8.5
Propylparaben 0.05
[Component B] Extract solution of Part Production Example 1 5.0
Sodium Carboxymethyl Cellulose 0.2
Bentonite 0.5
Propylene glycol 4.0
Triethanolamine 1.1
Methylparaben 0.1
Amount of purified water totaling 100 parts [C component] Titanium oxide 8.0
Talc 4.0
Appropriate amount of color pigment The above components A and B were heated and then mixed and stirred. This was reheated, the above C component was added and poured into a mold, and the mixture was stirred until it reached room temperature to obtain a liquid foundation.
処方例10.ボディシャンプー
[A成分] 部
N−ラウロイルメチルアラニンナトリウム 25.0
ヤシ油脂肪酸カリウム液(40%) 26.0
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド 3.0
メチルパラベン 0.1
[B成分] 部
製造例2の抽出物溶液 5.0
1,3−ブチレングリコール 2.0
精製水 全量が100部となる量
A成分及びB成分をそれぞれ80℃に加温して均一に溶解した後、A成分にB成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
Prescription example 10. Body shampoo [Ingredient A] Part N-lauroylmethylalanine sodium 25.0
Coconut oil fatty acid potassium solution (40%) 26.0
Coconut oil fatty acid diethanolamide 3.0
Methylparaben 0.1
[Component B] Part The extract solution of Production Example 2 5.0
1,3-butylene glycol 2.0
Amount of purified water totaling 100 parts A component and B component are each heated to 80 ° C to be uniformly dissolved, then B component is added to A component, and stirring is continued to cool to room temperature to obtain a body shampoo. It was.
試験例1.表皮細胞内カタラーゼ活性亢進効果試験
本発明に係る製造例1の抽出物の表皮細胞内カタラーゼ活性亢進効果をカタラーゼの基質である過酸化水素の消去能により評価した。
<実験方法>
(イ)培養細胞からのカタラーゼ活性測定用試験液(粗酵素液)の調整
正常ヒト表皮角化細胞を増殖添加剤含有HuMedia-KG2(登録商標)(クラボウ社製)にて1.2×105個/mLに調製し、6穴マイクロプレートに1mLを播種して、5%炭酸ガス、飽和水蒸気下、37℃で培養した。24時間培養後、さらに、製造例1の抽出物溶液を含む培養液(試料溶液)を添加して48時間培養した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例1の抽出物溶液の終濃度(溶液としての濃度)がそれぞれ0.5%,1.0%となるように調製した2種の濃度のものを使用した。また、製造例1の抽出物溶液に代えて50%1,3−ブチレングリコールを含んだ培養液を追添加した試験区をcontrol区として設定した。ここで、コントロール(control)区の1,3−ブチレングリコールの濃度は、追添加する培養液の全量に対して溶液として終濃度が1%となるように調製した。48時間後、それぞれの試験区の細胞培養上清を除去し0.1%トリトン(Triton)X−100を含むトリス-塩酸緩衝液(pH7.8)を用いて細胞を破砕した。それぞれの細胞破砕液の蛋白質量を測定し、すべての細胞破砕液の蛋白質含量が一定になるように希釈調整したものを試料の粗酵素液とした。
(ロ)カタラーゼ活性の測定
基質として20mM過酸化水素を含むトリス−塩酸緩衝液(pH7.8)3mLに対し、各粗酵素液100μLを添加し、直ちに240nmにおける吸光度(V0)を測定した。室温で20分静置後、同様に240nmにおける吸光度(V1)を測定し、20分間の240nmにおける吸光度の変化量から算出した値(V0−V1)をカタラーゼによる過酸化水素消去量とした。また、カタラーゼ活性の測定が正常に機能しているかを確認するために、粗酵素液の代わりに陽性対照としてカタラーゼ(終濃度50u/mL)を添加した場合についても、同様の試験を行った。
Test Example 1. Test for enhancing catalase activity in epidermal cells The effect of enhancing catalase activity in epidermal cells of the extract of Production Example 1 according to the present invention was evaluated by the ability to eliminate hydrogen peroxide, which is a substrate for catalase.
<Experimental method>
(A) Preparation of test solution (crude enzyme solution) for measuring catalase activity from cultured cells 1.2 × 10 of normal human epidermal keratinocytes with HuMedia-KG2 (registered trademark) (manufactured by Kurabo) containing a growth additive. The cells were prepared at 5 cells / mL, 1 mL was seeded on a 6-well microplate, and cultured at 37 ° C. under 5% carbon dioxide and saturated steam. After culturing for 24 hours, a culture solution (sample solution) containing the extract solution of Production Example 1 was further added and cultured for 48 hours. Here, the sample solution has two concentrations prepared so that the final concentration (concentration as a solution) of the extract solution of Production Example 1 with respect to the total amount thereof is 0.5% and 1.0%, respectively. It was used. Further, a test group in which a culture solution containing 50% 1,3-butylene glycol was additionally added instead of the extract solution of Production Example 1 was set as a control group. Here, the concentration of 1,3-butylene glycol in the control group was adjusted so that the final concentration of the solution was 1% with respect to the total amount of the culture solution to be added. After 48 hours, cell culture supernatants from each test plot were removed and cells were disrupted with Triton-Hydrochloric acid buffer (pH 7.8) containing 0.1% Triton X-100. The protein mass of each cell disruption solution was measured, and the crude enzyme solution of the sample was prepared by diluting and adjusting so that the protein content of all cell disruption solutions was constant.
(B) Measurement of catalase activity 100 μL of each crude enzyme solution was added to 3 mL of Tris-hydrochloric acid buffer (pH 7.8) containing 20 mM hydrogen peroxide, and the absorbance (V 0 ) at 240 nm was immediately measured. After allowing to stand at room temperature for 20 minutes, the absorbance (V 1 ) at 240 nm was measured in the same manner, and the value (V 0 −V 1 ) calculated from the amount of change in the absorbance at 240 nm for 20 minutes was taken as the amount of hydrogen peroxide eliminated by catalase. did. In addition, in order to confirm whether the measurement of catalase activity is functioning normally, the same test was conducted when catalase (final concentration 50 u / mL) was added as a positive control instead of the crude enzyme solution.
試験例1の表皮細胞内カタラーゼ活性亢進効果の結果を図1に示す。図1に示す通り、コントロールでは全く過酸化水素の消去が認められなかったのに対して、本発明に係る製造例1のダマスクバラの抽出物は濃度依存的に格段にすぐれた過酸化水素消去能を示した。このように、本発明に係る製造例1のダマスクバラの抽出物は、表皮細胞内のカタラーゼ活性を亢進する効果を奏することが確認された。また、陽性対照であるカタラーゼも過酸化水素の消去を示したことから、カタラーゼ活性の測定が正常に行われたことも確認された。 The results of the effect of enhancing the catalase activity in epidermal cells of Test Example 1 are shown in FIG. As shown in FIG. 1, no elimination of hydrogen peroxide was observed in the control, whereas the extract of Damask rose of Production Example 1 according to the present invention was significantly excellent in hydrogen peroxide elimination in a concentration-dependent manner. Showed noh. As described above, it was confirmed that the extract of damask rose of Production Example 1 according to the present invention has an effect of enhancing the catalase activity in epidermal cells. In addition, since catalase, which is a positive control, also showed elimination of hydrogen peroxide, it was confirmed that the measurement of catalase activity was performed normally.
試験例2.過酸化脂質生成抑制効果試験
<実験方法>
0.5Mリノール酸エタノール1.0mL、0.2Mリン酸緩衝液(pH7.0)10mLおよびエタノール9.0mLを混合し、充分撹拌した。この混合液に製造例1の抽出物溶液5.0mLを加えて充分撹拌し、試料溶液を調製した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例1の抽出物溶液の終濃度(溶液としての濃度)がそれぞれ0.5%,1.0%となるように調製した2種の濃度のものを使用した。この試料溶液の調製直後のものと40℃の恒温槽中て4日間放置したものに対して、それぞれ0.1mL、75%エタノール4.7mL、30%チオシアン酸アンモニウム溶液0.1mL、及び0.02M塩化第一鉄の3.5%塩酸溶液0.1mLを加えて充分に混合撹拌したのち、3分後の波長500nmにおける吸光度を測定した。また。コントロールとして1,3−ブチレングリコールの1%水溶液についても同様の試験を行い、本試験系での過酸化脂質生成量を、コントロールを100とした場合の相対値で表した。
Test example 2. Lipid peroxide production inhibitory effect test <Experimental method>
1.0 mL of 0.5 M ethanol linoleate, 10 mL of 0.2 M phosphate buffer (pH 7.0) and 9.0 mL of ethanol were mixed and stirred thoroughly. 5.0 mL of the extract solution of Production Example 1 was added to this mixed solution and stirred sufficiently to prepare a sample solution. Here, the sample solution has two concentrations prepared so that the final concentration (concentration as a solution) of the extract solution of Production Example 1 with respect to the total amount thereof is 0.5% and 1.0%, respectively. It was used. For the sample solution immediately after preparation and the one left in a constant temperature bath at 40 ° C. for 4 days, 0.1 mL, 7.5% ethanol 4.7 mL, 30% ammonium thiocyanate solution 0.1 mL, and 0. After adding 0.1 mL of a 3.5% hydrochloric acid solution of 02M ferrous chloride and thoroughly mixing and stirring, the absorbance at a wavelength of 500 nm was measured after 3 minutes. Also. The same test was performed on a 1% aqueous solution of 1,3-butylene glycol as a control, and the amount of lipid peroxide produced in this test system was expressed as a relative value when the control was set to 100.
試験例2の結果を図2に示す。図2に示す通り、本発明の製造例1のダマスクバラの抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれた過酸化脂質生成抑制効果を奏することが明らかとなった。 The result of Test Example 2 is shown in FIG. As shown in FIG. 2, it was clarified that the extract of damask rose of Production Example 1 of the present invention exerts a remarkably excellent effect of suppressing the production of lipid peroxide in a concentration-dependent manner.
試験例3.DPPHラジカル捕捉試験
<実験方法>
DPPH2.4部をエタノール20部に溶解し、これに精製水20部を加えてDPPH溶液を調製した。このDPPH溶液24部に対して、18v/v%エタノール溶液を19.2部、2M酢酸-酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)を4.8部加えて、DPPH添加溶液として調製した。また、抽出液そのものの色調が試験に及ぼす影響を差し引くため、DPPH溶液の代わりに50v/v%エタノール溶液を用いて、18v/v%エタノール溶液と2M酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液を混合した液を対照液とした。次に、製造例1の抽出物溶液を精製水で希釈して試料溶液を調製した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例1の抽出物溶液の終濃度(溶液としての濃度)がそれぞれ0.5%,1.0%となるように調製した2種の濃度のものを使用した。この試料溶液とDPPH添加溶液又は対照液とを1:3の割合で混合し、室温で10分静置後、各試験溶液をDPPH添加溶液と混合した場合の550nmにおける吸光度と、同じく各試験溶液を対照液と混合した場合の550nmにおける吸光度との差を測定し、DPPHラジカルの残存量を確認した。また、同時にコントロールとして製造例1の抽出物溶液の代わりに、50%1,3-ブチレングリコール水溶液を用いて上記と同様の操作を行い、ここに得られる DPPHラジカル残存率に対する各試料添加時のDPPHラジカル残存率の相対値を求めた。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として水溶性ビタミンE(終濃度25μM)を添加した場合についても、同様の試験を行った。
Test example 3. DPPH radical scavenging test <Experimental method>
2.4 parts of DPPH was dissolved in 20 parts of ethanol, and 20 parts of purified water was added thereto to prepare a DPPH solution. To 24 parts of this DPPH solution, 19.2 parts of an 18v / v% ethanol solution and 4.8 parts of a 2M sodium acetate-sodium acetate buffer (pH 5.5) were added to prepare a DPPH-added solution. In addition, in order to subtract the influence of the color tone of the extract itself on the test, a 50v / v% ethanol solution was used instead of the DPPH solution, and a mixture of 18v / v% ethanol solution and 2M sodium acetate-sodium acetate buffer was used. It was used as a control solution. Next, the extract solution of Production Example 1 was diluted with purified water to prepare a sample solution. Here, the sample solution has two concentrations prepared so that the final concentration (concentration as a solution) of the extract solution of Production Example 1 with respect to the total amount thereof is 0.5% and 1.0%, respectively. It was used. This sample solution is mixed with the DPPH-added solution or the control solution at a ratio of 1: 3, and after allowing to stand at room temperature for 10 minutes, the absorbance at 550 nm when each test solution is mixed with the DPPH-added solution and each test solution are also obtained. The difference from the absorbance at 550 nm when mixed with the control solution was measured, and the residual amount of DPPH radical was confirmed. At the same time, the same operation as above was carried out using a 50% 1,3-butylene glycol aqueous solution instead of the extract solution of Production Example 1 as a control, and when each sample was added to the DPPH radical residual ratio obtained here. The relative value of the DPPH radical residual rate was determined. Further, in order to confirm whether the test system is functioning normally, the same test was conducted when water-soluble vitamin E (final concentration 25 μM) was added as a positive control instead of the sample solution.
試験例3の結果を図3に示す。図3に示す通り、本発明の製造例1のダマスクバラの抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれたDPPHラジカル消去効果を奏することが明らかとなった。また、陽性対照である水溶性ビタミンEもDPPHラジカル消去効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。 The result of Test Example 3 is shown in FIG. As shown in FIG. 3, it was clarified that the extract of Damask rose of Production Example 1 of the present invention exerts a remarkably excellent DPPH radical scavenging effect in a concentration-dependent manner. In addition, since the positive control, water-soluble vitamin E, also showed a DPPH radical scavenging effect, it was confirmed that this test system was performed normally.
試験例4.脱顆粒抑制効果試験
本発明に係るダマスクバラの抽出物の抗炎症効果を細胞の脱顆粒抑制試験により評価した。ここで、皮膚細胞は、外的要因(紫外線や化学物質)の影響を受けると抗原が発生し、この抗原が抗塩基球やマスト細胞の脱顆粒(ヒスタミン、セロトニン及び好酸球遊走因子等の放出)に関与していることが知られている。この脱顆粒は皮膚の炎症やアレルギーの発症に関与することも知られていることから、本発明においては抗炎症効果を抗塩基球の脱顆粒抑制試験により評価した。
Test example 4. Degranulation suppression effect test The anti-inflammatory effect of the Damask rose extract according to the present invention was evaluated by a cell degranulation suppression test. Here, skin cells generate antigens when affected by external factors (ultraviolet rays and chemical substances), and these antigens are used to degranulate anti-base cells and mast cells (histamine, serotonin, eosinophil migration factors, etc.). It is known to be involved in (release). Since this degranulation is also known to be involved in the development of skin inflammation and allergies, the anti-inflammatory effect was evaluated in the present invention by an anti-basophil degranulation suppression test.
<実験方法>
ラット好塩基球白血病細胞(RBL-2H3)を、10%NCS含有イーグル最少必須培地に懸濁して96穴プレートに1×105個ずつ播種し、37℃で24時間培養した。コンフルエントになった細胞をリリーシング緩衝液(releasing buffer) [117mM NaCl,5.4mM KCl,2.0mM CaCl,0.8mM MgSO,5.6mM
D-グルコース,25mM HEPES(2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]エタンスルフォン酸),1mg/mL
BSA/pH7.7]の200μL/ウェル(well)を用いて洗浄した後、リリーシング緩衝液に製造例1の抽出物溶液を添加した試料溶液を調製した。この試料溶液をそれぞれウェルに添加し、さらに脱顆粒を誘導するため、200μg/mLの化合物48/80(compound48/80)/リリーシング緩衝液の100μLをさらに添加して、37℃で1時間インキュベートした。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例1の抽出物溶液の終濃度(溶液としての濃度)が1.0%となるように調製した濃度のものを使用した。また、比較のため、製造例1の抽出物溶液の代わりに50%1,3−ブチレングリコール水溶液を含むリリーシング緩衝液を添加した試験区を二つ設け、一方の試験区(ブランク)にはリリーシング緩衝液のみを、他方の試験区(コントロール)には上記と同様の脱顆粒用の化合物48/80/リリーシング緩衝液溶液をそれぞれ100μL添加して、37℃で1時間インキュベートした。さらに、脱顆粒抑制効果を有することが公知の甜茶エキス(溶液として終濃度が5%に調製されたエキス)を陽性対照とした。脱顆粒誘導後、細胞外に遊離したβ−ヘキソサミニダーゼの酵素活性を測定するために細胞上清50μLを別の96穴マイクロプレートに分取した。β−ヘキソサミニダーゼ活性の測定は次のように行った。すなわち、別プレートに取った各細胞上清50μLに基質として5mM p−ニトロフェニル−2−アセタミド-2-デオキシ-β-グルコピラノシド(p-Nitrophenyl-2-acetamide-2-deoxy-β-D-glucopyranoside)を50μL加え、37℃のCO2インキュベーター内で30分間反応させた。その後100μLの0.2Mグリシン緩衝液 (glycinebuffer)(pH10.7)を加えて反応を停止し、吸光プレートリーダー(BIO RAD社製:Model 680)で415nmの吸光度を測定し、β−ヘキソサミニダーゼ活性の指標とした。
<Experimental method>
Rat basophil leukemia cells (RBL-2H3) were suspended in eagle minimum essential medium containing 10% NCS, seeded in 1 × 10 5 cells on a 96-well plate, and cultured at 37 ° C. for 24 hours. Releasing buffer of confluent cells [117mM NaCl, 5.4mM KCl, 2.0mM CaCl, 0.8mM DDL, 5.6mM
D-glucose, 25 mM HEPES (2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulphonic acid), 1 mg / mL
After washing with 200 μL / well of BSA / pH 7.7], a sample solution was prepared by adding the extract solution of Production Example 1 to the releasing buffer solution. Add 100 μL of 200 μg / mL compound 48/80 / Releasing buffer to each well and incubate at 37 ° C. for 1 hour to further induce degranulation. did. Here, as the sample solution, a sample solution having a concentration adjusted so that the final concentration (concentration as a solution) of the extract solution of Production Example 1 was 1.0% with respect to the total amount was used. Further, for comparison, two test groups were provided in which a releasing buffer solution containing a 50% 1,3-butylene glycol aqueous solution was added instead of the extract solution of Production Example 1, and one test group (blank) was provided. Only 100 μL of the same degranulation compound 48/80 / releasing buffer solution as described above was added to the other test group (control), and the mixture was incubated at 37 ° C. for 1 hour. Further, a sweet tea extract (an extract prepared as a solution having a final concentration of 5%) known to have a degranulation inhibitory effect was used as a positive control. After induction of degranulation, 50 μL of cell supernatant was dispensed into another 96-well microplate to measure the enzymatic activity of extracellularly released β-hexosaminidase. The β-hexosaminidase activity was measured as follows. That is, 5 mM p-nitrophenyl-2-acetamide-2-deoxy-β-glucopyranoside (p-Nitrophenyl-2-acetamide-2-deoxy-β-D-glucopyranoside) as a substrate in 50 μL of each cell supernatant taken on a separate plate. ) Was added, and the mixture was reacted in a CO 2 incubator at 37 ° C. for 30 minutes. After that, 100 μL of 0.2 M glycine buffer (pH 10.7) was added to stop the reaction, and the absorbance at 415 nm was measured with an absorption plate reader (BIO RAD: Model 680) to measure β-hexosamini. It was used as an index of dase activity.
試験例4の結果を図4に示す。図4に示す通り、本発明の製造例1に係るダマスクバラの抽出物は、抗塩基球の脱顆粒を顕著に抑制することが明らかとなった。また、陽性対照である甜茶エキスも同様の効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。 The result of Test Example 4 is shown in FIG. As shown in FIG. 4, it was revealed that the extract of damask rose according to Production Example 1 of the present invention remarkably suppresses degranulation of antibasophils. In addition, since the sweet tea extract, which is a positive control, showed the same effect, it was confirmed that this test system was performed normally.
試験例5.プロスタグランジンE2(以下「PGE2」と称する)生成抑制効果試験
本発明に係るダマスクバラの抽出物の抗炎症効果をPEG2の生成抑制試験により評価した。ここで、PGE2は、皮膚の炎症を惹起する炎症性のケミカルメディエーターであって、紫外線や化学物質等の外的要因によりダメージを受けた皮膚細胞内で分泌される物質である。よって、本発明においては、このPGE2の生成抑制効果試験により、抗炎症効果を評価した。
Test example 5. Prostaglandin E2 (hereinafter referred to as "PGE2") production inhibitory effect test The anti-inflammatory effect of the Damask rose extract according to the present invention was evaluated by a PEG2 production inhibitory test. Here, PGE2 is an inflammatory chemical mediator that induces skin inflammation, and is a substance secreted in skin cells damaged by external factors such as ultraviolet rays and chemical substances. Therefore, in the present invention, the anti-inflammatory effect was evaluated by this PGE2 production inhibitory effect test.
<実験方法>
ウサキ角膜由来細胞(SIRC)を、10%FBS含有イーグル最少必須培地に懸濁して96穴プレートに5.0×103個ずつ播種し、37℃で3日間培養した後、その培養液に製造例1の抽出物溶液(試料溶液)を添加して、さらに24時間培養した。ここで、製造例1の抽出物溶液は、上記培養液全量に対する溶液としての終濃度が0.2%又は0.5%の濃度となるように添加した。また、試料溶液の代わりに50%1,3-ブチレングリコール水溶液を添加し24時間培養したものコントロールとした。次に培養器の底面から100mJ/cm2の紫外線B波を照射し、さらに2日間培養後、培養上清に分泌されたPGE2の量を、PGE2測定キット(カイマンケイミカル社製)を用いて測定した。また、試料溶液の代わりに陽性対照としてインドメタシン10μMを用いた場合のPGE2の量も同様に測定した。また、試料溶液の代わりに50%1,3-ブチレングリコール水溶液を添加し24時間培養後、紫外線を照射しない対照区についてもPGE2の量を測定した。
<Experimental method>
Usaki cornea-derived cells (SIRC) were suspended in the minimum essential medium of eagle containing 10% FBS, 5.0 × 10 3 cells were seeded on a 96-well plate, cultured at 37 ° C. for 3 days, and then produced in the culture medium. The extract solution (sample solution) of Example 1 was added, and the cells were further cultured for 24 hours. Here, the extract solution of Production Example 1 was added so that the final concentration as a solution with respect to the total amount of the culture solution was 0.2% or 0.5%. Further, instead of the sample solution, a 50% 1,3-butylene glycol aqueous solution was added and cultured for 24 hours as a control. Next, the bottom surface of the incubator was irradiated with an ultraviolet B wave of 100 mJ / cm 2 , and after culturing for another 2 days, the amount of PGE2 secreted into the culture supernatant was measured using a PGE2 measurement kit (manufactured by Kaiman Keimical Co., Ltd.). It was measured. The amount of PGE2 when indomethacin 10 μM was used as a positive control instead of the sample solution was also measured in the same manner. In addition, a 50% 1,3-butylene glycol aqueous solution was added instead of the sample solution, and after culturing for 24 hours, the amount of PGE2 was also measured in the control group not irradiated with ultraviolet rays.
試験例5の結果を図5に示す。図5に示す通り、本発明の製造例1に係るダマスクバラの抽出物は、紫外線(UV)照射により促進されるPGE2の生成を顕著に抑制し、当該抑制効果は濃度依存的であることが明らかとなった。また、陽性対照であるインドメタシンも同様の効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。 The result of Test Example 5 is shown in FIG. As shown in FIG. 5, the extract of damask rose according to Production Example 1 of the present invention remarkably suppresses the production of PGE2 promoted by ultraviolet (UV) irradiation, and the suppressing effect is concentration-dependent. It became clear. Indomethacin, which is a positive control, also showed the same effect, confirming that this test system was performed normally.
試験例6.チロシナーゼ活性抑制試験
<実験方法>
マックイルベイン緩衝液(pH6.8)を用いて125U/mLのチロシナーゼ酵素液を調製した。次に、製造例1の抽出物溶液を精製水により調製した試料溶液を96ウェルマイクロプレートに100μL/ウェルずつ添加した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例1の抽出物溶液の終濃度(溶液としての濃度)がそれぞれ0.5%,1.0%となるように調製した2種の濃度のものを使用した。次に、0.03%L−チロシン溶液を同じく100μL/ウェルずつ添加し、十分に混合した。これに上記チロシナーゼ酵素液を100μL/ウェルずつ添加して十分に混合し、室温で10分間静置した。そして、波長490nmにおける反応溶液の吸光値を測定した。また、製造例1の抽出物溶液の代わりに50%1,3−ブチレングリコール水溶液を用いて同様に操作したものをコントロールとし、チロシナーゼ活性率を、コントロールの吸光値を100としたときの相対値により求めた。
Test example 6. Tyrosinase activity suppression test <Experimental method>
A 125 U / mL tyrosinase enzyme solution was prepared using Macylvain buffer (pH 6.8). Next, a sample solution prepared by preparing the extract solution of Production Example 1 with purified water was added to a 96-well microplate at a rate of 100 μL / well. Here, the sample solution has two concentrations prepared so that the final concentration (concentration as a solution) of the extract solution of Production Example 1 with respect to the total amount thereof is 0.5% and 1.0%, respectively. It was used. Next, a 0.03% L-tyrosine solution was also added in 100 μL / well increments and mixed well. To this, 100 μL / well of the above tyrosinase enzyme solution was added, mixed thoroughly, and allowed to stand at room temperature for 10 minutes. Then, the absorption value of the reaction solution at a wavelength of 490 nm was measured. Further, a 50% 1,3-butylene glycol aqueous solution was used instead of the extract solution of Production Example 1 and the same operation was performed as a control, and the tyrosinase activity rate was a relative value when the absorption value of the control was 100. Obtained by.
試験例6の結果を図6に示す。図6に示すように、本発明1に係る製造例1のダマスクバラの抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれたチロシナーゼ活性抑制効果を示した。 The result of Test Example 6 is shown in FIG. As shown in FIG. 6, the extract of damask rose of Production Example 1 according to the present invention 1 showed a remarkably excellent effect of suppressing tyrosinase activity in a concentration-dependent manner.
試験例7.B16メラノーマ細胞を用いたチロシナーゼ活性抑制効果試験
本発明に係る製造例1のダマスクバラの抽出物のチロシナーゼ活性抑制効果をさらに細胞を用いて評価した。
Test example 7. Test of inhibitory effect on tyrosinase activity using B16 melanoma cells The inhibitory effect on tyrosinase activity of the Damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention was further evaluated using cells.
<実験方法>
B16マウスメラノーマ細胞を、96穴マイクロプレートに4×103個/穴播種し、10%FBS含有RPMI中、37℃、5%CO2の条件下に1日間プレ培養した後、製造例1の抽出物溶液を10%FBS含有イーグルMEMにより希釈した試料溶液を追添加し、同条件で2日間培養した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する製造例1の抽出物溶液の終濃度(溶液としての濃度)がそれぞれ0.5%,1.0%となるように調製した2種の濃度のものを使用した。培養終了後、培養液を除去し、0.3mg/mLのMTT溶液を添加するか、又は、界面活性剤 (Triton X-100)と5mMのLドーパ溶液を添加して37℃で反応を行った後、マイクロプレートリーダー(Model 680、バイオラッド社製)を用い、波長570−630nmで MTT値を、波長490nmでドーパ値をそれぞれ測定した。なお、比較のため、製造例1の抽出物溶液に代えて、50%1,3−ブチレングリコール水溶液1%添加の場合(対照)及びコウジ酸の添加の場合(陽性対照) についても同様の試験を行った。本発明においてはチロシナーゼ活性率及びMTT活性率を、それぞれコントロールの値を100としたときの相対値で求めた。
<Experimental method>
B16 mouse melanoma cells were seeded in 4 × 10 3 cells / hole in a 96-well microplate, pre-cultured in RPMI containing 10% FBS under the conditions of 37 ° C. and 5% CO 2 for 1 day, and then in Production Example 1. A sample solution obtained by diluting the extract solution with Eagle MEM containing 10% FBS was added, and the cells were cultured under the same conditions for 2 days. Here, the sample solution has two concentrations prepared so that the final concentration (concentration as a solution) of the extract solution of Production Example 1 with respect to the total amount thereof is 0.5% and 1.0%, respectively. It was used. After completion of the culture, the culture solution is removed and a 0.3 mg / mL MTT solution is added, or a surfactant (Triton X-100) and a 5 mM L-dopa solution are added and the reaction is carried out at 37 ° C. Then, using a microplate reader (Model 680, manufactured by Biorad), the MTT value was measured at a wavelength of 570-630 nm, and the dopa value was measured at a wavelength of 490 nm. For comparison, the same test was performed in the case of adding 1% of 50% 1,3-butylene glycol aqueous solution (control) and the case of adding kojic acid (positive control) instead of the extract solution of Production Example 1. Was done. In the present invention, the tyrosinase activity rate and the MTT activity rate were determined as relative values when the control value was set to 100, respectively.
試験例7の結果を表1に示す。
[表1]
表1に示すように、本発明1に係る製造例1のダマスクバラの抽出物は、細胞に対する刺激性を有することなく、かつ、濃度依存的に格段にすぐれた細胞内チロシナーゼ活性抑制効果を示すことが明らかとなった。また、陽性対照であるコウジ酸も同様の効果を示したことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
The results of Test Example 7 are shown in Table 1.
[Table 1]
As shown in Table 1, the extract of damask rose of Production Example 1 according to the present invention 1 does not have cell irritation and exhibits a remarkably excellent effect of suppressing intracellular tyrosinase activity in a concentration-dependent manner. It became clear. In addition, since kojic acid, which is a positive control, showed the same effect, it was confirmed that this test system was performed normally.
試験例8.正常ヒト表皮細胞の遺伝子発現評価試験
本試験においては、本発明に係るダマスクバラ抽出物による、正常ヒト表皮細胞の遺伝子発現に与える影響について評価するため、以下の通り試験を行った。
[試験方法]
正常ヒト表皮細胞を増殖添加剤含有HuMediaKG2[クラボウ社製]にて6×105個/mLに調製し、φ6cmシャーレに1mLを播種して、5%CO2、飽和水蒸気下、37℃で培養した。24時間培養後、さらに、製造例1のダマスクバラ抽出物を含んだ培養液(培養液全量に対して溶液として終濃度が1.0%となるように当該抽出物を添加したもの)を添加して培養した。また、比較対照として、製造例1のダマスクバラ抽出物に代えて、50%1,3−ブチレングリコール溶液のみを含んだ培養液(培養液全量に対する50%1,3−ブチレングリコールの終濃度を1.0%に調整したもの)を添加した試験区(コントロール区)を設定した。24時間培養後、それぞれの試験区の細胞をTrizol試薬(Invitrogen社製)1mLで回収した。回収した細胞に対してクロロホルム(和光純薬工業社製)200μL添加して撹拌混合し遠心分離機(TOMY社製/MX-160)で15,000rpm、4℃の条件下で15分間遠心分離した後、水層のみを400μL分取した。回収した水層にイソプロパノール(和光純薬工業社製)500μLを添加して撹拌混合し、15,000rpm、4℃の条件下で15分間遠心分離してtotalRNAの沈殿物を得た。totalRNAに75%エタノールを1mL添加して撹拌して洗浄し、15,000rpm、4℃条件下で15分間遠心分離して沈殿を回収した。回収したtotal RNAを所定のキット(PrimeScript RT reagent Kit
with gDNA Eraser (Perfect Real Time)(タカラバイオ社製))を用いて逆転写反応し、cDNAを合成した。合成したcDNAをサンプルとして、Thermal Cycler Dice(登録商標)Real Time System
Single(タカラバイオ社製)、及びSYBR(登録商標)Premix Ex TaqTM II(Perfect
Real Time)[タカラバイオ社製]を用いて、各種遺伝子の発現と、内部標準物質G3PDH遺伝子の発現の検出を行った。ここで、G3PDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)は、ハウスキーピング遺伝子(多くの組織や細胞中に共通して一定量発現する遺伝子であって、常に発現され,細胞の維持,増殖に不可欠な遺伝子である)の一つであり、発現量が常に一定とされていることから、PCRの実験では内部標準として用いられるものである。試験結果は、G3PDH遺伝子の発現量を一定とした場合の、それぞれの試験区での各遺伝子の発現量を比較した。本試験系においては、コントロール区のそれぞれの遺伝子の発現量を100としたときの他の試験区でのその遺伝子の発現量の相対値を求めた。試験例8の結果を、図7〜図11に示す。
Test example 8. Gene expression evaluation test of normal human epidermal cells In this test, the following tests were conducted to evaluate the effect of the Damask rose extract according to the present invention on the gene expression of normal human epidermal cells.
[Test method]
Normal human epidermal cells were prepared at 6 × 10 5 cells / mL with HuMedia KG2 [manufactured by Kurabou] containing a growth additive, 1 mL was seeded in a φ6 cm petri dish, and cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 and saturated steam. did. After culturing for 24 hours, a culture solution containing the Damask rose extract of Production Example 1 (the extract was added so that the final concentration as a solution was 1.0% with respect to the total amount of the culture solution) was further added. And cultured. As a comparative control, instead of the damask rose extract of Production Example 1, a culture solution containing only a 50% 1,3-butylene glycol solution (final concentration of 50% 1,3-butylene glycol with respect to the total amount of the culture solution) was used. A test group (control group) to which 1.0% was added) was set. After culturing for 24 hours, the cells of each test group were collected with 1 mL of Trizol reagent (manufactured by Invitrogen). 200 μL of chloroform (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to the collected cells, stirred and mixed, and centrifuged in a centrifuge (manufactured by TOMY / MX-160) at 15,000 rpm for 15 minutes at 4 ° C. After that, only the aqueous layer was separated by 400 μL. 500 μL of isopropanol (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to the recovered aqueous layer, stirred and mixed, and centrifuged at 15,000 rpm for 15 minutes under the conditions of 4 ° C. to obtain a total RNA precipitate. 1 mL of 75% ethanol was added to the total RNA, stirred and washed, and centrifuged at 15,000 rpm for 15 minutes under 4 ° C. conditions to recover the precipitate. Prescribed total RNA collected (PrimeScript RT reagent Kit)
CDNA was synthesized by reverse transcription reaction using with gDNA Eraser (Perfect Real Time) (manufactured by Takara Bio Inc.). Using the synthesized cDNA as a sample, Thermal Cycler Dice® Real Time System
Single (manufactured by Takara Bio Inc.) and SYBR (registered trademark) Premix Ex TaqTM II (Perfect)
Real Time) [manufactured by Takara Bio Inc.] was used to detect the expression of various genes and the expression of the internal standard substance G3PDH gene. Here, G3PDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) is a housekeeping gene (a gene that is commonly expressed in a certain amount in many tissues and cells, is always expressed, and is essential for cell maintenance and proliferation. It is one of the above, and since the expression level is always constant, it is used as an internal standard in PCR experiments. As for the test results, the expression level of each gene in each test group was compared when the expression level of the G3PDH gene was constant. In this test system, the relative value of the expression level of the gene in the other test group was determined when the expression level of each gene in the control group was 100. The results of Test Example 8 are shown in FIGS. 7 to 11.
図7に示すように、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、生体細胞内において過酸化水素を消去する酵素(ペルオキシレドキシン)の発現を顕著に亢進することが明らかとなった。これにより、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、表皮細胞の酸化ダメージを抑制することができる。 As shown in FIG. 7, it was revealed that the Damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention remarkably enhances the expression of an enzyme (peroxiredoxin) that scavenges hydrogen peroxide in living cells. .. As a result, the damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention can suppress oxidative damage to epidermal cells.
図8に示すように、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、セリンペプチダーゼインヒビターの発現を顕著に亢進することが明らかとなった。ここで、セリンペプチダーゼは、表皮細胞の細胞膜に存在するPAR−2という蛋白質を部分分解して活性化することでメラノサイトからのメラニン顆粒の受け渡しを促進することが知られている。従って、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、セリンペプチダーゼの働きを阻害するセリンペプチダーゼインヒビターの発現を亢進することで、細胞間でのメラニン顆粒の受け渡しを抑制し、これにより、皮膚の色素沈着を抑制することができる。 As shown in FIG. 8, it was revealed that the damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention remarkably enhances the expression of serine peptidase inhibitor. Here, serine peptidase is known to promote the delivery of melanin granules from melanocytes by partially decomposing and activating a protein called PAR-2 present in the cell membrane of epidermal cells. Therefore, the damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention suppresses the transfer of melanin granules between cells by enhancing the expression of a serine peptidase inhibitor that inhibits the action of serine peptidase, thereby suppressing the transfer of melanin granules to the skin. Pigmentation can be suppressed.
図9に示すように、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、アシルCoAオキシダーゼの発現を顕著に亢進することが明らかとなった。ここで、アシルCoAオキシダーゼは、ペルオキシソームにおけるβ酸化による脂質代謝に重要な酵素であり、脂質からのエネルギー代謝に重要な役割を担っていることが知られている。従って、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、アシルCoAオキシダーゼの発現を顕著に亢進することから、表皮細胞のエネルギー代謝を亢進し、皮膚の老化を抑制することができる。 As shown in FIG. 9, it was revealed that the damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention remarkably enhances the expression of acyl-CoA oxidase. Here, acyl-CoA oxidase is an enzyme important for lipid metabolism by β-oxidation in peroxisomes, and is known to play an important role in energy metabolism from lipids. Therefore, since the Damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention remarkably enhances the expression of acyl-CoA oxidase, it can enhance the energy metabolism of epidermal cells and suppress the aging of the skin.
図10に示すように、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、炎症性サイトカインの一つであるインターロイキン1β(IL−1β)の発現を顕著に抑制することが明らかとなった。さらに、図11に示すように、インターロイキン1βや酸化ストレスなどの刺激により活性化され、細胞外マトリックスであるプロテオグリカンやフィブロネクチンを分解する酵素(マトリックスメタロプロテイナーゼ、別名:ストロメライシン)の発現も顕著に抑制することが明らかとなった。従って、本発明に係る製造例1のダマスクバラ抽出物は、肌の炎症ダメージの予防及び改善、並びにそれらのダメージから細胞マトリックスを保護し、肌のハリの低下やシワの発生を抑えることができる。 As shown in FIG. 10, it was revealed that the damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention remarkably suppresses the expression of interleukin 1β (IL-1β), which is one of the inflammatory cytokines. .. Furthermore, as shown in FIG. 11, the expression of an enzyme (matrix metalloproteinase, also known as stromelaicin) that is activated by stimuli such as interleukin 1β and oxidative stress and decomposes extracellular matrix proteoglycan and fibronectin is also remarkable. It became clear that it was suppressed. Therefore, the damask rose extract of Production Example 1 according to the present invention can prevent and improve inflammatory damage to the skin, protect the extracellular matrix from such damage, and suppress reduction of skin firmness and occurrence of wrinkles. ..
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