JP6147593B2 - コレステロール吸収抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、霊芝抽出物を含有することを特徴とする、コレステロール吸収抑制剤に関する。

コレステロールは動物細胞膜の構成成分として、また胆汁酸、ステロイドホルモン、ビタミンＤなどの前駆体として重要な脂質である。しかしながら、血中コレステロール値が高値を示す高コレステロール血症は、動脈硬化の主な原因であると考えられており、虚血性心疾患や脳梗塞などの致命的な疾患を招く危険性がある。

血液中のコレステロールには悪玉コレステロール（低比重リポタンパク、以下ＬＤＬ）や善玉コレステロール（高比重リポタンパク、以下ＨＤＬ）などがある。このうち余剰のＬＤＬが酸化し、蓄積すると、血管壁に付着して動脈硬化の原因となる。一方で、ＨＤＬは余分なコレステロールを肝臓に戻す働きをするため、抗動脈硬化因子であると考えられている。すなわち、血液中のＬＤＬとＨＤＬの比率が重要であり、ＬＤＬ／ＨＤＬ比を低下させることが動脈硬化を予防又は改善する新たな指標として注目されている。ＬＤＬ／ＨＤＬ比を低下させるものとして、脱脂大豆を用いたＬＤＬ／ＨＤＬコレステロール濃度の比を低減させること（特許文献１）が提案されている。

また、従来の高コレステロール血症に対する治療剤としては、コレステロール合成阻害剤、陰イオン交換樹脂製剤、コレステロール酸化抑制剤を用いる方法が一般的である。しかし、これらの薬物の長期連用による副作用も報告されていることから、より副作用のリスクが低い方法、たとえば、食事由来のコレステロールの吸収を抑制し、排泄を促進する方法が望ましい。

従来のコレステロール吸収抑制剤としては、ビフィドバクテリウム細菌を有効成分とするコレステロール吸収抑制剤（特許文献２）、ホエイの限外濾過濃縮物のゲル濾過画分によるコレステロール吸収抑制組成物（特許文献３）などが知られている。また、コレステロールの排泄を促進するものとしては、茶から得られるサポニン類を有効成分とするコレステロール排出促進剤（特許文献４）が知られている。

ところで、食事由来のコレステロールが腸管で吸収されるには、コレステロールが、胆汁の働きにより形成される脂質ミセルという粒子の中に取り込まれる過程が必須である。従って、コレステロールの脂質ミセルへの取り込みを抑制すれば、コレステロールの腸管での吸収を抑制することができる。従来、コレステロールの脂質ミセルへの取り込みを抑制するものとして、茶サポニン化合物（特許文献５）、特定の乳酸菌（特許文献６）、ローヤルゼリー由来タンパク質（特許文献７）などが知られている。

霊芝は、マンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属する担子菌であり、古来より不老不死の霊薬として知られており、中国の薬学古書である「本草綱目」や「神農本草経」によると、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫霊芝（紫芝）、青霊芝（青芝）、黄霊芝（黄芝）及び白霊芝（白芝）が存在すると記載されている。

霊芝のコレステロールに対する作用としては、ビーグル犬（非特許文献１）、ラット（非特許文献２）において血中のコレステロールを低下させる作用が報告されている。しかしながら、非特許文献１及び非特許文献２には、１％霊芝を２〜５週間皮下投与または胃内投与したという記述しかなされておらず、霊芝としてどの様な霊芝（例えば、赤芝なのか黒芝なのか）を使用しているのか記載されておらず、かつ霊芝そのものを使用しているのか何らかの溶媒で抽出した抽出物を使用しているのか記載されておらず、更に体重当たりの投与量も記載されておらず、詳細な実験方法や結果も不明である。また、非特許文献１及び２には、霊芝抽出物によるＬＤＬ／ＨＤＬ比の低下作用、コレステロール排泄促進作用、コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用については記載がなされておらず、更に、霊芝熱水抽出物を有機溶媒で分画することで、コレステロール吸収抑制作用がより高まることについても、全く記載がなされていない。

また、霊芝による血中コレステロール低下剤として、黒霊芝の抽出物を含有することを特徴とする、ＬＤＬレセプター合成促進剤（特許文献８）が報告されている。しかし、特許文献８記載の血中コレステロール低下作用は、肝臓におけるＬＤＬレセプターの合成促進に基づくものであり、コレステロール吸収抑制作用や、ＬＤＬ／ＨＤＬ比の低下作用、コレステロール排泄促進作用、コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用については全く記載がなされていない。
特開２００９−２８０５１７号公報 特許第５１１６４７３号公報 特許第２９３５８３７号公報 特開２００６−２０６４７２号公報 特許第４８２８１３５号公報 特許第４６６２４４３号公報 特開２０１２−１０６９８８号公報 特開２０１０−２０８９６５号公報 小動物臨床 １４（３）：１９−２４，１９９５ 小動物臨床 １４（４）：１３−１９，１９９５

本発明の目的は、霊芝抽出物を含有することを特徴とするコレステロール吸収抑制剤に関する。更に詳しくは、霊芝抽出物を含有することを特徴とする動脈硬化の予防又は改善剤、コレステロール排泄促進剤、コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制剤に関する。また、霊芝熱水抽出物の有機溶媒可溶画分を含有することを特徴とするコレステロール吸収抑制剤に関する。

本発明者らは、鋭意研究した結果、霊芝抽出物がコレステロール吸収抑制作用、動脈硬化の予防又は改善作用、コレステロール排泄促進作用、コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用を有することを見出した。また、抽出溶媒を水からエタノールなどの低級アルコールに変えることで著しく作用が高まることを見出した。更に、霊芝熱水抽出物を有機溶媒で抽出して得た有機溶媒可溶画分により著しく効果が高まることを見出し、本発明を完成するに至った。

本発明に用いる霊芝は、担子菌類のマンネンタケ科（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｔａｃｅａｅ）マンネンタケ属（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ）に属するキノコで、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫霊芝（紫芝）、青霊芝（青芝）、黄霊芝（黄芝）及び白霊芝（白芝）が知られている。本発明では、マンネンタケ科に属する全てのキノコを用いることができるが、好ましくは霊芝、黒霊芝、紫霊芝、青霊芝、黄霊芝、白霊芝であり、更に好ましくは霊芝（赤芝、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）を用いることが望ましい。

本発明に用いる霊芝は、子実体、菌糸体、天産物、栽培物、及び培養物などを問わず使用することができ、広く中国や日本市場などで流通しているものを用いることができる。また、必要に応じてそのままの状態、破砕物、或いは乾燥物などを適宜選択して抽出操作に付することができる。

本発明に用いる霊芝抽出物を得る抽出溶媒としては、例えば、水、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノールなど）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトンなど）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、石油エーテルなど）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテルなど）が挙げられる。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。好ましくは水、エタノール、これらの混合物が望ましい。

本発明の霊芝熱水抽出物を更に分画し、霊芝熱水抽出物の有機溶媒可溶画分を得る方法として、例えば、低級アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノールなど）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリンなど）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトンなど）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチルなど）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、石油エーテルなど）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテルなど）が挙げられる。これらの溶媒は一種でも二種以上を混合して用いても良い。好ましくはブタノール、酢酸エチルが望ましい。

本発明に用いる霊芝抽出物、霊芝熱水抽出物の有機溶媒可溶画分の摂取量は、投与形態、使用目的、年齢、体重などによって異なるが、乾燥物に換算して１〜２００００ｍｇ／日、好ましくは１０〜１００００ｍｇ／日、より好ましくは５０〜５０００ｍｇ／日の範囲で１日１回から数回経口投与できる。上記投与範囲より少ない量で十分な場合もあるし、また、範囲を超えて投与する必要がある場合もある。また、製剤化における薬効成分の添加法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

本発明のコレステロール吸収抑制剤は、食品、医薬部外品又は医薬品のいずれにも用いることができ、その剤形としては、例えば、経口用として散剤、顆粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、シロップ剤、丸剤、懸濁剤、液剤、乳剤などである。非経口用として注射剤にすることが出来る。また、座剤とすることも出来る。

本発明のコレステロール吸収抑制剤は、霊芝抽出物や霊芝熱水抽出物の有機溶媒可溶画分をそのまま使用しても良く、抽出物の効果を損なわない範囲内で、必要に応じて通常の医薬品、医薬部外品又は食品に用いられる賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料などの成分を配合することもできる。

本発明の霊芝抽出物を含有することを特徴とするコレステロール吸収抑制剤は、コレステロール吸収抑制作用、動脈硬化の予防又は改善作用、コレステロール排泄促進作用、コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用を有する。本発明のコレステロール吸収抑制剤は、食経験のある天然素材から抽出したものであるので、安全性にも優れている。

製造例１ 霊芝熱水抽出物
霊芝（赤芝、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝熱水抽出物を１．４ｇ得た。

製造例２ 霊芝熱水抽出物
黒霊芝の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝熱水抽出物を１．１ｇ得た。

製造例３ 霊芝エタノール抽出物
霊芝（赤芝、Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝エタノール抽出物を１．６ｇ得た。

製造例４ 霊芝エタノール抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝エタノール抽出物を１．４ｇ得た。

製造例５ 霊芝熱水抽出物のブタノール可溶画分
製造例１記載の霊芝熱水抽出物６ｇに６００ｍＬのブタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝熱水抽出物のブタノール可溶画分（以下、霊芝熱水−ブタノール可溶画分と表記する）を０．６ｇ得た。

製造例６ 霊芝熱水抽出物の酢酸エチル可溶画分
製造例１記載の霊芝熱水抽出物６ｇに６００ｍＬの酢酸エチルを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝熱水抽出物の酢酸エチル可溶画分（以下、霊芝熱水−酢酸エチル可溶画分と表記する）を０．５ｇ得た。

比較例１ 霊芝熱水抽出物のブタノール非可溶画分
製造例５の濾過工程の残査を精製水に溶解させて、濃縮し、凍結乾燥して、霊芝熱水抽出物のブタノール非可溶画分（以下、霊芝熱水−ブタノール非可溶画分と表記する）を５．０ｇ得た。

本発明を詳細に説明するため実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されない。実施例に示す％は重量％を示す。

軟カプセル剤
＜処方＞
成分 配合量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１） ３０．０
２．米胚芽油 ６０．０
３．ミツロウ ７．０
４．ビタミンＥ ３．０
＜製造方法＞
成分１〜４を混合し、ゼラチン、グリセリン、カラメル色素で構成される被膜に、２５０ｍｇ充填し、乾燥後、軟カプセル剤を得る。
＜用法＞
１日当り４粒摂取する。

硬カプセル剤
＜処方＞
成分 配合量（％）
１．霊芝エタノール抽出物（製造例３） ４５．０
２．コーンスターチ ５２．０
３．ショ糖脂肪酸エステル ３．０
＜製造方法＞
成分１〜３を混合し、２号硬カプセルに２５０ｍｇ充填してカプセル剤を得る。
＜用法＞
１日当り４粒摂取する。

飲料
＜処方＞
成分 配合量（％）
１．霊芝熱水抽出物（製造例１） １．０
２．クエン酸 ６．０
３．ショ糖 １０．０
４．香料 １．０
５．水 ８２．０
＜製造方法＞
成分１〜４を成分５の一部の水に撹拌溶解する。次いで、成分５の残りの水を加えて混合する。
＜用法＞
１日当り５０ｍＬ摂取する。

顆粒剤
＜処方＞
成分 配合量（％）
１．霊芝熱水−ブタノール可溶画分（製造例５） １５．０
２．乳糖 ８０．０
３．セルロース ５．０
＜製造方法＞
成分１〜３を湿式法により造粒し、乾燥後、顆粒剤を得る。
＜用法＞
１日当り１ｇ摂取する。

錠剤
＜処方＞
成分 配合量（％）
１．霊芝熱水−酢酸エチル可溶画分（製造例６） １１．０
２．乳糖 ６０．０
３．還元麦芽糖水飴 ２５．０
４．ショ糖脂肪酸エステル ４．０
＜製造方法＞
成分１〜４を混合して打錠成型し、０．５ｇの錠剤を得る。
＜用法＞
１日当り２粒摂取する。

クッキー
＜処方＞ 配合量（％）
１．霊芝エタノール抽出物（製造例３） ３．０
２．菜種油 ２５．０
３．はちみつ ２２．０
４．薄力粉 ３５．０
５．全粒粉 １５．０
＜製造方法＞
成分１〜５を混合し、成型して１７０度で２０分焼く。
＜用法＞
１日２個（２０ｇ）を摂取する。

実験例１−（１）高コレステロール負荷ラットにおけるコレステロール吸収抑制作用
３週齢の雄性Ｗｉｓｔａｒラットを、体重が均等になるように５群に分けた。高コレステロール飼料（以下、ＨＣ飼料）は、粉末飼料に１％コレステロール、０．２５％コール酸ナトリウムを混合して調製し、対照群にはＨＣ飼料を与えた。試料の投与は、霊芝熱水抽出物、霊芝エタノール抽出物、霊芝熱水−ブタノール可溶画分、霊芝熱水−ブタノール非可溶画分を４％混合したＨＣ飼料を調製し、それを自由摂取させることにより行った。飼育開始から４日後に、一晩絶食させたラットより採血し、遠心分離により得られた血漿を用いて、総コレステロール値（以下ＴＣ）を市販のコレステロール測定キットを用いて測定した。測定結果は平均値±標準誤差にて示し、有意差検定はＴｕｋｅｙの多重比較検定を用いた。

総コレステロールの結果を表１に示した。霊芝熱水抽出物、霊芝エタノール抽出物、霊芝熱水−ブタノール可溶画分に、コレステロール吸収抑制作用が認められた。一方、霊芝熱水−ブタノール非可溶画分には認められなかった。霊芝熱水抽出物と霊芝エタノール抽出物を比較すると、統計学的に有意な差が認められ、霊芝エタノール抽出物に著しく強いコレステロール吸収抑制作用を認めた。また、霊芝熱水抽出物と霊芝熱水−ブタノール可溶画分を比較すると、統計学的に有意な差が認められ、霊芝熱水−ブタノール可溶画分に著しく強いコレステロール吸収抑制作用を認めた。

実験例１−（２）高コレステロール負荷ラットにおけるＬＤＬ／ＨＤＬ比の低下作用
実験例１−（１）記載のラットにおいて、飼育開始から４日後に得られた血漿を用いて、ＨＤＬとトリグリセリド（以下ＴＧ）値を市販の測定キットを用いて測定した。ＬＤＬは、算出式（ＬＤＬ＝ＴＣ−ＨＤＬ−０．２×ＴＧ）を用いて値を求めた。また、得られたＬＤＬ、ＨＤＬの値からＬＤＬ／ＨＤＬ比を算出した。結果は平均値±標準誤差にて示し、有意差検定はＴｕｋｅｙの多重比較検定を用いた。

ＨＤＬ、ＬＤＬ値及びＬＤＬ／ＨＤＬ比の結果を表２に示した。霊芝熱水抽出物、霊芝エタノール抽出物、霊芝熱水−ブタノール可溶画分に、ＬＤＬ／ＨＤＬ比の低下作用が認められた。一方、霊芝熱水−ブタノール非可溶画分には認められなかった。霊芝熱水抽出物と霊芝熱水−ブタノール可溶画分を比較すると、統計学的に有意な差が認められ、霊芝熱水−ブタノール可溶画分に著しく強いＬＤＬ／ＨＤＬ比の低下作用を認めた。

実験例１−（３）高コレステロール負荷ラットにおけるコレステロール排泄促進作用
実験例１−（１）記載のラットにおいて、飼育開始から２〜３日後にかけての２４時間における糞便を回収し、乾燥させた。得られた糞便から、クロロホルム／メタノール（２：１）にて脂質を抽出し、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ−ＭＳ）により糞便中コレステロールの定量を行った。結果は平均値±標準誤差にて示し、有意差検定はＴｕｋｅｙの多重比較検定を用いた。

コレステロール排泄促進作用の結果を表３に示した。霊芝エタノール抽出物、霊芝熱水−ブタノール可溶画分に、コレステロール排泄促進作用が認められた。一方、霊芝熱水−ブタノール非可溶画分には認められなかった。霊芝熱水抽出物と霊芝エタノール抽出物を比較すると、統計学的に有意な差が認められ、霊芝エタノール抽出物に著しく強いコレステロール排泄促進作用を認めた。また、霊芝熱水抽出物と霊芝熱水−ブタノール可溶画分を比較すると、統計学的に有意な差が認められ、霊芝熱水−ブタノール可溶画分に著しく強いコレステロール排泄促進作用を認めた。

実験例２ コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用
最終濃度として０．５ｍＭコレステロール、０．６ｍＭホスファチジルコリン、０．５ｍＭモノオレイン、１ｍＭオレイン酸となるように、それぞれクロロホルム／メタノール（２：１）溶液に溶解させ、試験管内で混合した後、窒素ガスを吹きつけて溶媒を留去した。１５ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に、１３２ｍＭ ＮａＣｌ、６．６ｍＭタウロコール酸ナトリウムを溶解させて試験管に加えた。超音波処理した後、３７℃にて２４時間インキュベートし、脂質ミセル溶液を調製した。この脂質ミセル溶液を別の試験管に分注し、試料として、霊芝熱水抽出物、霊芝エタノール抽出物、霊芝熱水−ブタノール可溶画分、霊芝熱水−ブタノール非可溶画分を１０ｍｇ／ｍＬとなるように添加して超音波処理した後、３７℃にて１時間インキュベートした。反応終了後、超遠心分離し、脂質ミセルに取り込まれていないコレステロールを沈殿させた。遠心後の上清を採取し、ＧＣ−ＭＳによりコレステロール量を定量した。霊芝抽出物を加えていないコントロールのコレステロール量を１００とした場合の、試料添加による上清中コレステロールの割合を求めた。結果は平均値±標準誤差にて示し、有意差検定はＴｕｋｅｙの多重比較検定を用いた。

コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用の結果を表４に示した。上清中コレステロールの割合が低いほど、コレステロールの脂質ミセルへの取り込みを抑制していることを意味する。コントロール（試料無添加）と比較して、霊芝熱水抽出物、霊芝エタノール抽出物、霊芝熱水−ブタノール可溶画分にコレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用が認められた。一方、霊芝熱水−ブタノール非可溶画分には認められなかった。霊芝熱水抽出物と霊芝エタノール抽出物を比較すると、統計学的に有意な差が認められ、霊芝エタノール抽出物に著しく強いコレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用を認めた。また、霊芝熱水抽出物と霊芝熱水−ブタノール可溶画分を比較すると、統計学的に有意な差が認められ、霊芝熱水−ブタノール可溶画分に著しく強いコレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用を認めた。

霊芝熱水−酢酸エチル可溶画分（製造例６）についても、同様の試験を行ったところ、霊芝抽出物と同様に、コレステロール吸収抑制作用、ＬＤＬ／ＨＤＬ比の低下作用、コレステロール排泄促進作用、コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用について著しい効果を認めた。

実施例３の飲料を用いて、健康な男女２３名（４０〜６０歳）を対象に、１ヶ月間の摂取試験を行い、１日５０ｍＬを任意の時間に摂取させた。飲用前及び１ヶ月後に血液を採取し、血液検査を行ったところ、血中コレステロール値の低下作用、ＬＤＬ／ＨＤＬ比の低下作用が認められた。肝臓機能等を示す血液検査項目は何れの被験者も正常値の範囲内であり、高い安全性を有することが確認された。

以上の結果より、霊芝抽出物は、コレステロール吸収抑制作用、動脈硬化の予防又は改善作用、コレステロール排泄促進作用、コレステロールの脂質ミセルへの取込抑制作用を有することが示された。また、抽出溶媒を水からエタノールなどの低級アルコールに変えることで著しく効果が高まることや、霊芝熱水抽出物を有機溶媒で抽出して得た有機溶媒可溶画分により著しく効果が高まることが示された。

本発明のコレステロール吸収抑制剤は、優れたコレステロール吸収抑制作用を示した。従って、安全で優れたコレステロール吸収抑制作用を有する医薬品、医薬部外品または食品としての利用に有用である。

Claims (3)

1. 赤霊芝熱水抽出物の有機溶媒可溶画分を含有することを特徴とするコレステロール吸収抑制剤。
2. 赤霊芝熱水抽出物の有機溶媒可溶画分を含有することを特徴とするコレステロール排泄促進剤。
3. 赤霊芝熱水抽出物の有機溶媒可溶画分を含有することを特徴とするコレステロールの脂質ミセルへの取込抑制剤。