JP6083060B2 - Microorganism culture device and microbe inspection method using microorganism culture device - Google Patents
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- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
本発明は、微生物を培養するための微生物培養具に関する。また本発明は、微生物培養具を用いて微生物を検査する微生物検査方法に関する。 The present invention relates to a microorganism culture device for culturing microorganisms. The present invention also relates to a microorganism testing method for testing microorganisms using a microorganism culture device.
微生物の存在を確認し、又は微生物数を測定する方法としては、寒天平板混釈法がある。この寒天平板混釈法では、あらかじめ滅菌したシャーレに形成した寒天培地を使用する。このため、寒天培地を高圧蒸気滅菌するためのオートクレーブや、微生物検査を無菌的に行うための検査室を必要とする。また、微生物のサンプリングから試料液の調製、分注、培地との混釈、培養、計数に至る微生物検査の操作に、熟練を要する。そこで、高度な熟練を必要とせず、簡易に微生物検査を行うことができる培養層を備える微生物培養具が開発されている。 As a method for confirming the presence of microorganisms or measuring the number of microorganisms, there is an agar plate mixing method. In this agar plate pour method, an agar medium formed in a petri dish previously sterilized is used. For this reason, an autoclave for autoclaving the agar medium and an inspection room for performing microbial tests aseptically are required. Moreover, skill is required for the operation of the microorganism inspection from the sampling of the microorganism to the preparation of the sample solution, dispensing, mixing with the medium, culture, and counting. Therefore, a microorganism culture device having a culture layer that does not require highly skilled skills and can be easily tested for microorganisms has been developed.
例えば特許文献１において、基材と、基材に装着された台座と、基材に取り付けられたカバーシートと、台座またはカバーシートのいずれかに設けられた培養層と、を備える微生物培養具が開示されている。特許文献１においては、培養層としてグアーガムを用いる例が示されている。 For example, in Patent Document 1, there is provided a microorganism culture device comprising a base material, a base attached to the base material, a cover sheet attached to the base material, and a culture layer provided on either the base or the cover sheet. It is disclosed. In patent document 1, the example which uses a guar gum as a culture layer is shown.
培養層において培養されている微生物は一般に、増殖することやガスを生成することによって、周囲の培養層に広がったり影響を与えたりする。一方、そのような広がりの程度が大きくなりすぎると、各微生物の領域が互いに重なってしまうことなどによって、微生物のコロニーの視認性が低下してしまうことが考えられる。従って、培養層は、培養性能だけでなく、微生物のコロニーを観察する際の視認性を考慮して構成されることが好ましい。 Microorganisms cultured in the culture layer generally spread or affect the surrounding culture layer by multiplying or generating gas. On the other hand, if the extent of such spread becomes too large, it is considered that the visibility of the colonies of microorganisms is reduced due to the areas of the microorganisms overlapping each other. Therefore, the culture layer is preferably configured in consideration of not only the culture performance but also the visibility when observing a colony of microorganisms.
本発明は、このような課題を効果的に解決し得る微生物培養具および微生物培養具を用いた微生物検査方法を提供することを目的とする。 The object of the present invention is to provide a microorganism culture device and a microorganism testing method using the microorganism culture device that can effectively solve such problems.
本発明は、基材シートと、前記基材シートの上面に設けられ、微生物を培養するよう構成された培養層と、前記培養層を覆うことができるカバーフィルムと、を備え、前記培養層は、少なくともゲル化剤および栄養成分を有し、前記ゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含み、前記ゲル化剤における前記グアーガムの重量部は、前記ゲル化剤における前記サイリウムシードガムの重量部以上となっている、微生物培養具である。 The present invention comprises a base sheet, a culture layer provided on the top surface of the base sheet and configured to culture microorganisms, and a cover film that can cover the culture layer, The gelling agent includes at least guar gum and psyllium seed gum, and the weight part of the guar gum in the gelling agent is the weight of the psyllium seed gum in the gelling agent. It is a microorganism culture device that is more than part.
本発明による微生物培養具において、前記ゲル化剤における前記グアーガムの重量部と前記サイリウムシードガムの重量部との比が、７：３〜５：５の範囲内であってもよい。 In the microorganism culture device according to the present invention, the ratio of the weight part of the guar gum to the weight part of the psyllium seed gum in the gelling agent may be in the range of 7: 3 to 5: 5.
本発明による微生物培養具において、前記培養層は、可塑剤をさらに含み、前記培養層の固形分の全体に対する前記可塑剤の重量％が、１０〜１５％の範囲内であってもよい。 In the microorganism culture device according to the present invention, the culture layer may further include a plasticizer, and the weight percent of the plasticizer relative to the total solid content of the culture layer may be in the range of 10 to 15%.
本発明による微生物培養具において、前記可塑剤は、グリセリンであってもよい。 In the microorganism culture device according to the present invention, the plasticizer may be glycerin.
本発明の微生物培養具によれば、培養層のゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含んでいる。また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部は、ゲル化剤におけるサイリウムシードガムの重量部以上となっている。このため、培養性能とともに微生物を観察する際の視認性を備えた培養層を構成することができる。 According to the microorganism culture device of the present invention, the gelling agent of the culture layer contains at least guar gum and psyllium seed gum. Moreover, the weight part of the guar gum in a gelatinizer is more than the weight part of the psyllium seed gum in a gelatinizer. For this reason, the culture layer provided with the visibility at the time of observing microorganisms with culture | cultivation performance can be comprised.
以下、図１乃至図６を参照して、本発明の実施の形態による微生物培養具について説明する。なお、本件明細書に添付する図面においては、図示と理解のしやすさの便宜上、適宜縮尺および縦横の寸法比等を、実物のそれらから変更し誇張してある。 Hereinafter, with reference to FIG. 1 thru | or FIG. 6, the microorganisms culture tool by embodiment of this invention is demonstrated. In the drawings attached to the present specification, for the sake of illustration and ease of understanding, the scale, the vertical / horizontal dimension ratio, and the like are appropriately changed and exaggerated from those of the actual product.
はじめに、微生物について説明する。微生物は好気性生物と嫌気性生物に分けられる。
好気性生物は、酸素に基づく代謝機構を備えた生物である。好気生生物には、酸素がないと増殖できない偏性好気性生物や、酸素が存在する場合には好気的呼吸によってATPを生成するが酸素がない場合でも発酵によってエネルギーを得られるように代謝を切り替えることのできる通性好気性生物が含まれる。偏性好気性生物の例としては、カビやNocardia属、Pseudomonas属などが含まれる。通性好気性生物の例としては、Staphylococcus属、Escherichia属 、Citrobacter属、Klebsiella属、Enterobacter属、Proteus属や酵母などが含まれる。
嫌気性生物は、酸素のない状況でのみ生育できる生物であり、偏性嫌気性生物と呼ばれる。偏性嫌気性生物の例としては、Clostridium属、Bifidobacterium属などが挙げられる。
以下に説明する、本実施の形態による微生物培養具は、好気性細菌（好気性生物）の検査に好適に使用することができるものである。また、本実施の形態による微生物培養具は、嫌気性細菌（嫌気性生物）の検査に使用することもできるものである。
First, microorganisms will be described. Microorganisms are divided into aerobic organisms and anaerobic organisms.
Aerobic organisms are organisms with a metabolic mechanism based on oxygen. For aerobic organisms, obligate aerobic organisms that cannot grow without oxygen, and in the presence of oxygen, ATP is produced by aerobic respiration, but energy can be obtained by fermentation even in the absence of oxygen. Includes facultative aerobic organisms that can switch metabolism. Examples of obligate aerobic organisms include mold, Nocardia genus, and Pseudomonas genus. Examples of facultative aerobic organisms include Staphylococcus genus, Escherichia genus, Citrobacter genus, Klebsiella genus, Enterobacter genus, Proteus genus and yeast.
Anaerobic organisms are organisms that can grow only in the absence of oxygen and are called obligate anaerobes. Examples of obligate anaerobes include the genus Clostridium and the genus Bifidobacterium.
The microorganism culture device according to the present embodiment, which will be described below, can be suitably used for testing aerobic bacteria (aerobic organisms). In addition, the microorganism culture device according to the present embodiment can also be used for inspection of anaerobic bacteria (anaerobic organisms).
微生物培養具
次に図１乃至図３により、本実施の形態における微生物培養具１の構造について説明する。図１は、微生物培養具１を示す平面図であり、図２は、図１の微生物培養具１を矢印Ａの方向から見た場合を示す側面図である。図３は、微生物培養具１を示す斜視図である。なお図１においては、後述するカバーフィルム４０よりも下側にある枠体２０、接合部２５および培養層３０などの微生物培養具１の構成要素が、透視されて点線で示されている。
Microorganism culture tool Next, the structure of the microorganism culture tool 1 according to the present embodiment will be described with reference to FIGS. FIG. 1 is a plan view showing a microorganism cultivating device 1, and FIG. 2 is a side view showing the microorganism culturing device 1 of FIG. FIG. 3 is a perspective view showing the microorganism culture device 1. In FIG. 1, constituent elements of the microorganism culturing tool 1 such as the frame body 20, the joint portion 25, and the culture layer 30 located below the cover film 40 described later are seen through and indicated by dotted lines.
図１に示すように、微生物培養具１は、平面図で見た場合に略四角形状の輪郭を有している。この微生物培養具１は、図１および図２に示すように、基材シート１０と、基材シート１０の上面に設けられた培養層３０と、培養層３０を囲うよう基材シート１０の上面に設けられた枠体２０と、を備えている。また微生物培養具１は、培養層３０および枠体２０を覆うことができるカバーフィルム４０をさらに備えている。 As shown in FIG. 1, the microorganism culture device 1 has a substantially rectangular outline when viewed in a plan view. As shown in FIGS. 1 and 2, the microorganism culture tool 1 includes a base sheet 10, a culture layer 30 provided on the top surface of the base sheet 10, and an upper surface of the base sheet 10 so as to surround the culture layer 30. And a frame body 20 provided on the frame. Moreover, the microorganism culture tool 1 further includes a cover film 40 that can cover the culture layer 30 and the frame body 20.
図１に示すように、基材シート１０およびカバーフィルム４０はいずれも、平面図で見た場合に、すなわち基材シート１０の法線方向から見た場合に、略四角形状の輪郭を有している。具体的には、基材シート１０は、基材シート１０の法線方向から見た場合に、直線状の第１外縁１１と、第１外縁１１に対向する直線状の第２外縁１２と、第１外縁１１および第２外縁１２の間を延び、互いに対向する直線状の第３外縁１３および第４外縁１４と、を含む輪郭を有している。同様に、カバーフィルム４０は、各々が直線状の第１外縁４１，第２外縁４２，第３外縁４３および第４外縁４４を含む輪郭を有している。 As shown in FIG. 1, both the base sheet 10 and the cover film 40 have a substantially rectangular outline when viewed in a plan view, that is, when viewed from the normal direction of the base sheet 10. ing. Specifically, when the base sheet 10 is viewed from the normal direction of the base sheet 10, the linear first outer edge 11, the linear second outer edge 12 facing the first outer edge 11, and The first outer edge 11 and the second outer edge 12 have a contour that includes a third outer edge 13 and a fourth outer edge 14 that are linear and extend from each other. Similarly, the cover film 40 has a contour including a first outer edge 41, a second outer edge 42, a third outer edge 43, and a fourth outer edge 44 that are each linear.
図２に示すように、微生物培養具１は、カバーフィルム４０の一部分を基材シート１０の一部分に接合する接合部２５をさらに備えていてもよい。これによって、カバーフィルム４０は、接合部２５を軸として基材シート１０に対して変位することが可能となる。このことにより、カバーフィルム４０の操作や取り扱いを容易にすることができる。また、基材シート１０に対するカバーフィルム４０の位置を確実に定めることができる。図３においては、カバーフィルム４０の一部分が接合部２５によって基材シート１０に対して固定されながら、カバーフィルム４０が基材シート１０に対して持ち上げられた状態にある微生物培養具１が示されている。 As shown in FIG. 2, the microorganism culture device 1 may further include a joining portion 25 that joins a part of the cover film 40 to a part of the base sheet 10. Thereby, the cover film 40 can be displaced with respect to the base material sheet 10 with the joint portion 25 as an axis. Thereby, the operation and handling of the cover film 40 can be facilitated. Moreover, the position of the cover film 40 with respect to the base material sheet 10 can be determined reliably. In FIG. 3, the microorganism culture device 1 is shown in which the cover film 40 is lifted with respect to the base sheet 10 while a part of the cover film 40 is fixed to the base sheet 10 by the joint portion 25. ing.
接合部２５は、例えば、基材シート１０の第１外縁１１の近傍に配置されている。ここで「近傍」とは、接合部２５が第１外縁１１に接するよう接合部２５が配置されている場合、および、接合部２５が第１外縁１１に接してはいないが、接合部２５と第１外縁１１との間の距離が接合部２５と他の外縁１２，１３，１４との間の距離よりも小さくなっている場合の両方を含む概念である。 The joining part 25 is arrange | positioned in the vicinity of the 1st outer edge 11 of the base material sheet 10, for example. Here, “near” means that the joint portion 25 is arranged so that the joint portion 25 is in contact with the first outer edge 11, and the joint portion 25 is not in contact with the first outer edge 11, This is a concept that includes both cases where the distance between the first outer edge 11 is smaller than the distance between the joint portion 25 and the other outer edges 12, 13, and 14.
枠体２０は、培養層３０上に供給される後述する被検液の吸水範囲を確実に限定するためのものである。図３においては、枠体２０と培養層３０との間には隙間がなく、両者が接触している例が示されている。しかしながら、被検液が枠体２０の外側に洩れることを防ぐことができる限りにおいて、枠体２０と培養層３０との間の位置関係が特に限定されることはない。 The frame 20 is for surely limiting the water absorption range of a test liquid to be described later supplied on the culture layer 30. FIG. 3 shows an example in which there is no gap between the frame body 20 and the culture layer 30 and both are in contact with each other. However, the positional relationship between the frame 20 and the culture layer 30 is not particularly limited as long as the test liquid can be prevented from leaking outside the frame 20.
図３においては、枠体２０が円形状の輪郭を有する例が示されている。しかしながら、培養層３０上に供給される被検液の吸水範囲が所定の面積にわたって広がることができる限りにおいて、枠体２０の輪郭が特に限定されることはない。例えば枠体２０は、方形、楕円形、多角形、不定形等の輪郭を有していてもよい。 FIG. 3 shows an example in which the frame 20 has a circular outline. However, the outline of the frame body 20 is not particularly limited as long as the water absorption range of the test solution supplied onto the culture layer 30 can extend over a predetermined area. For example, the frame 20 may have a contour such as a rectangle, an ellipse, a polygon, and an indefinite shape.
図３に示すように、カバーフィルム４０には枡目線４０ａが形成されていてもよい。枡目線４０ａは、培養層３０によって培養された微生物の数を算出する際の目安となるものである。このような枡目線４０ａは、カバーフィルム４０に含まれる、後述する印刷層４７などによってもたらされ得る。なお、このような枡目線は、カバーフィルム４０ではなく基材シート１０に形成されていてもよい。 As shown in FIG. 3, the cover film 40 may have a grid line 40 a. The grid line 40a serves as a standard for calculating the number of microorganisms cultured in the culture layer 30. Such a grid line 40 a can be provided by a print layer 47 described later included in the cover film 40. Such grid lines may be formed on the base sheet 10 instead of the cover film 40.
微生物培養具の層構成
次に図４を参照して、微生物培養具１の層構成について説明する。図４は、図１の微生物培養具１をＢ−Ｂ方向から見た場合を示す縦断面図である。以下、各構成要素について順に説明する。
Layer Configuration of Microorganism Culture Tool Next , the layer configuration of the microorganism culture tool 1 will be described with reference to FIG. FIG. 4 is a longitudinal sectional view showing a case where the microorganism culture tool 1 of FIG. 1 is viewed from the BB direction. Hereinafter, each component will be described in order.
（基材シート）
基材シート１０には、培養層３０を形成するために基材シート１０上に塗布される後述する培地液３０Ａによって劣化しない程度の耐溶剤性や培養時に必要な耐水性が求められる。また、培養層３０を形成する際の乾燥処理に耐え得る耐熱性も求められる。また、培養層３０において培養される微生物が好気性細菌である場合、基材シート１０には、酸素透過性が求められる。基材シート１０が酸素透過性を有することにより、好気性細菌に酸素を供給することが可能となる。
(Substrate sheet)
The base sheet 10 is required to have a solvent resistance that is not deteriorated by a later-described medium solution 30 </ b> A applied on the base sheet 10 in order to form the culture layer 30, and a water resistance necessary for culture. In addition, heat resistance that can withstand the drying process when the culture layer 30 is formed is also required. Moreover, when the microorganisms cultured in the culture layer 30 are aerobic bacteria, the base material sheet 10 is required to have oxygen permeability. When the base sheet 10 has oxygen permeability, oxygen can be supplied to the aerobic bacteria.
基材シート１０を構成する材料としては、耐水性及び耐熱性、および必要に応じて酸素透過性を有している限りにおいて、特に限定されるものではないが、例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル等のプラスチックシートを使用することができる。これらのプラスチックシートは、透明性に優れる点において好ましい。後述するように、微生物培養具１は、培養層３０中で発育した微生物のコロニーを観察、計数するものである。基材シート１０の透明性が高いと、微生物培養具１の下側（基材シート１０側）からの投射光や側面側からの入射光によりコロニーの視認性を高めることができ、コロニーの計測が容易となる。ただし、必ずしも透明である必要はなく、微生物の種類、コロニーの着色の有無等によって、基材シート１０の光学特性を適宜選択することができる。例えば、発泡により白色を呈するものや、着色されたものを基材シート１０として使用することもできる。 The material constituting the base sheet 10 is not particularly limited as long as it has water resistance and heat resistance and, if necessary, oxygen permeability. For example, polyester, polyethylene, polypropylene, Plastic sheets such as polystyrene, polycarbonate, and polyvinyl chloride can be used. These plastic sheets are preferable in terms of excellent transparency. As will be described later, the microorganism culture tool 1 is for observing and counting colonies of microorganisms grown in the culture layer 30. When the transparency of the base material sheet 10 is high, the visibility of the colonies can be increased by the projection light from the lower side (base material sheet 10 side) of the microorganism culture device 1 or the incident light from the side surface, and the colony measurement is possible. Becomes easy. However, it does not necessarily need to be transparent, and the optical characteristics of the base sheet 10 can be appropriately selected depending on the type of microorganism, the presence or absence of colony coloring, and the like. For example, the base sheet 10 may be white or colored by foaming.
基材シート１０は、単層であってもよいし、２層以上の積層シートであってもよい。積層シートとしては、上記プラスチックシートの２種以上を積層したものが挙げられる。その他、上記プラスチックシートに紙基材を積層した積層シートや、紙基材に合成樹脂をコーティングした積層シート等も好適に使用することができる。このような積層シートとしては、例えば、ポリエチレンフィルムと紙基材との積層シートが挙げられる。また、基材シート１０に上述の酸素透過性が求められる場合、合成樹脂を主原料とした合成紙を好適に使用することができる。このような合成紙の市販品としては、例えば、ユポ・コーポレーション社製の「ユポ」、東洋紡社製の「クリスパー」等が挙げられる。 The base sheet 10 may be a single layer or a laminated sheet of two or more layers. As a laminated sheet, what laminated | stacked 2 or more types of the said plastic sheet is mentioned. In addition, a laminated sheet in which a paper base material is laminated on the plastic sheet, a laminated sheet in which a paper base material is coated with a synthetic resin, and the like can be suitably used. Examples of such a laminated sheet include a laminated sheet of a polyethylene film and a paper base material. Moreover, when the above-mentioned oxygen permeability is calculated | required by the base material sheet 10, the synthetic paper which used the synthetic resin as the main raw material can be used conveniently. Examples of such commercially available synthetic paper include “YUPO” manufactured by Yupo Corporation, “Chrisper” manufactured by Toyobo Co., Ltd., and the like.
基材シート１０の上面には、培養層３０との密着性を向上させるために、あらかじめ表面処理が実施されていてもよい。表面処理としては、例えば、コロナ放電処理、オゾン処理、グロー放電処理、化学薬品等を用いる酸化処理、酸素ガス又は窒素ガス等を用いる低温プラズマ処理等の公知の表面処理を用いることができる。 In order to improve the adhesion with the culture layer 30, surface treatment may be performed on the upper surface of the substrate sheet 10 in advance. As the surface treatment, for example, a known surface treatment such as a corona discharge treatment, an ozone treatment, a glow discharge treatment, an oxidation treatment using chemicals, or a low temperature plasma treatment using oxygen gas or nitrogen gas can be used.
また、アンカーコート剤を基材シート１０の上面に塗布するという表面処理を行ってもよい。このようなアンカーコート剤としては、イソシアネート系（ウレタン系）、ポリエチレンイミン系、ポリブタジエン系、有機チタン系、その他のアンカーコーティング剤が例示できる。より好ましくは、例えば、トリレンジイソシアナート、ジフェニルメタンジイソシアナート、ポリメチレンポリフェニレンポリイソシアナート等の芳香族ポリイソシアナート、又はヘキサメチレンジイソシアナート、キシリレンジイソシアナート等の脂肪族ポリイソシアナート等の多官能イソシアナートと、ポリエーテル系ポリオール、ポリエステル系ポリオール、ポリアクリレートポリオール、その他のヒドロキシル基含有化合物との反応によって得られるポリエーテルポリウレタン系樹脂、ポリエステル系ポリウレタン系樹脂、ポリアクリレートポリウレタン系樹脂を主成分とするものである。 Moreover, you may perform the surface treatment of apply | coating an anchor coating agent to the upper surface of the base material sheet 10. FIG. Examples of such anchor coating agents include isocyanate (urethane), polyethyleneimine, polybutadiene, organic titanium, and other anchor coating agents. More preferably, for example, aromatic polyisocyanates such as tolylene diisocyanate, diphenylmethane diisocyanate, polymethylene polyphenylene polyisocyanate, or aliphatic polyisocyanates such as hexamethylene diisocyanate, xylylene diisocyanate, etc. Mainly used are polyether polyurethane resins, polyester polyurethane resins, and polyacrylate polyurethane resins obtained by reacting polyfunctional isocyanates with polyether polyols, polyester polyols, polyacrylate polyols, and other hydroxyl group-containing compounds. Ingredients.
基材シート１０は、カール等がなく平坦であることが好ましい。基材シート１０の厚さは、特に限定されないが、通常、２５〜１５００μｍの範囲内であり、好ましくは５０〜５００μｍの範囲内である。 The substrate sheet 10 is preferably flat without curling or the like. Although the thickness of the base material sheet 10 is not specifically limited, Usually, it exists in the range of 25-1500 micrometers, Preferably it exists in the range of 50-500 micrometers.
（培養層）
培養層３０は、少なくともゲル化剤を含む乾式の培養層であって、微生物を培養するよう構成された層である。ここで、乾式の培養層とは、溶媒を含んだ培地液を乾燥させて溶媒を揮発させることにより得られるものである。例えば培養層３０は、固着剤、ゲル化剤、栄養成分および可塑剤を含んでいる。また培養層３０は、発色指示薬や選択剤等などをさらに含んでいてもよい。培養層３０の各成分は、培養の対象となる微生物に応じて適宜選択される。以下、各成分の役割、および各成分を構成する材料の例について説明する。
(Culture layer)
The culture layer 30 is a dry culture layer containing at least a gelling agent, and is a layer configured to culture microorganisms. Here, the dry culture layer is obtained by drying a medium solution containing a solvent to volatilize the solvent. For example, the culture layer 30 includes a fixing agent, a gelling agent, a nutrient component, and a plasticizer. The culture layer 30 may further contain a color development indicator, a selection agent, and the like. Each component of the culture layer 30 is appropriately selected according to the microorganism to be cultured. Hereinafter, the role of each component and an example of the material constituting each component will be described.
〔固着剤〕
固着剤は、ゲル化剤、栄養成分、可塑剤、発色指示薬、選択剤等の他の成分を基材シート１０に固着させる役割を有するものである。固着剤としては、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリエチレンオキサイド、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール等が挙げられ、特に、ポリビニルピロリドンが好ましい。ポリビニルピロリドンを用いる場合、アルコール系溶媒に可溶であるので、培地液の粘度を容易に調整することができる。また、ポリビニルピロリドンを用いる場合、アルコール系溶媒を使用することができるので、ゲル化剤を溶解させずに、分散させた培地液を調製することができる。これにより、ゲル化剤に起因する培地液の著しい粘度上昇を抑制することができる。更に、所定のパターンで培地液を基材シート１０上に塗布した後に、高温で加熱することなく培地液から溶媒を除去することができる。またポリビニルピロリドンの皮膜性が高いので、ゲル化剤、栄養成分、可塑剤、発色指示薬、選択剤等の他の成分を取り込んで成膜することができる。また、基材シート１０との密着性に優れている。
[Sticking agent]
The fixing agent has a role of fixing other components such as a gelling agent, a nutrient component, a plasticizer, a color development indicator, and a selection agent to the base sheet 10. Examples of the fixing agent include polyvinyl pyrrolidone, polyethylene oxide, hydroxypropyl cellulose, polyvinyl alcohol, and the like, and polyvinyl pyrrolidone is particularly preferable. When polyvinyl pyrrolidone is used, it is soluble in an alcohol solvent, so that the viscosity of the medium solution can be easily adjusted. In addition, when polyvinylpyrrolidone is used, an alcohol-based solvent can be used, so that a dispersed medium solution can be prepared without dissolving the gelling agent. Thereby, the remarkable viscosity raise of the culture medium liquid resulting from a gelatinizer can be suppressed. Furthermore, after apply | coating a culture solution on the base material sheet 10 by a predetermined pattern, a solvent can be removed from a culture solution without heating at high temperature. Moreover, since the film property of polyvinylpyrrolidone is high, it is possible to form a film by incorporating other components such as a gelling agent, a nutrient component, a plasticizer, a coloring indicator, and a selective agent. Moreover, the adhesiveness with the base material sheet 10 is excellent.
〔ゲル化剤〕
ゲル化剤は、被検液３５Ａが供給された培養層３０をゲル化させ、これによって、培養層３０の粘度を、微生物の培養に良好なものとするためのものである。また、培養層３０がゲル化剤を含むことにより、培養層３０がカバーフィルム４０に密着しやすくなるため、培養時の培養層３０からの水分の蒸発を抑制することができる。一般にゲル化剤としては、水吸収性（または水膨潤性）を有し、水を吸収しまたは水により膨潤した際に実質的にその形状を保持し得るものを使用することができる。
[Gelling agent]
The gelling agent gels the culture layer 30 to which the test solution 35A is supplied, thereby making the viscosity of the culture layer 30 favorable for culturing microorganisms. In addition, since the culture layer 30 contains the gelling agent, the culture layer 30 easily adheres to the cover film 40, so that evaporation of moisture from the culture layer 30 during culture can be suppressed. Generally, as the gelling agent, one having water absorbability (or water swellability) and capable of substantially retaining its shape when water is absorbed or swollen with water can be used.
本発明において、培養層３０のゲル化剤は、検液の滴下によってゲル化し、菌の発育に適した環境を作ることができるという条件を満たすことができる成分を少なくとも含んでいる。本件発明者らが鋭意研究を重ねたところ、グアーガムは、低濃度で極めて高い粘度を呈することができ、このため、上記の条件を満たすことができることが分かった。従って、本発明による微生物培養具１の培養層３０のゲル化剤においては、グアーガムが必須構成要素となっている。 In the present invention, the gelling agent of the culture layer 30 contains at least a component that can satisfy the condition that it can be gelled by dropping a test solution to create an environment suitable for bacterial growth. As a result of extensive studies by the present inventors, it has been found that guar gum can exhibit a very high viscosity at a low concentration, and therefore can satisfy the above-mentioned conditions. Therefore, in the gelling agent for the culture layer 30 of the microorganism culture device 1 according to the present invention, guar gum is an essential component.
ところで、本件発明者らが鋭意研究を重ねたところ、ゲル化剤におけるグアーガムの比率が高くなりすぎると、培養層３０の柔軟性が低下し、この結果、培養層３０が脆くなってしまうことがあることが分かった。特に、培養層３０によって好気性細菌が培養される場合、培養時に好気性細菌から生じるガスによって培養層３０が裂けてしまい、コロニーの視認性が低下してしまうことが考えられる。さらに、培養層３０の弾性が低くなるにつれて、コロニーが滲みやすくなってしまい、この結果、コロニーのカウントが困難になってしまうことも考えられる。一方、サイリウムシードガムは、弾力のあるゲルを形成することができるものであり、このため、培養層３０に適度な弾力を与えることができる。このため、培養時に好気性細菌から生じるガスを培養層３０内に閉じ込めることが可能となる。すなわち、ガスによって培養層３０が部分的に破砕してしまうことを抑制することができる。また、コロニーが滲んでしまうことを抑制することができる。従って、本発明による微生物培養具１の培養層３０のゲル化剤においては、グアーガムに加えてサイリウムシードガムが必須構成要素となっている。 By the way, when the present inventors conducted extensive research, if the ratio of guar gum in the gelling agent becomes too high, the flexibility of the culture layer 30 is lowered, and as a result, the culture layer 30 may become brittle. I found out. In particular, when aerobic bacteria are cultured in the culture layer 30, it is conceivable that the culture layer 30 is torn by the gas generated from the aerobic bacteria during culture, and the visibility of the colonies is reduced. Furthermore, as the elasticity of the culture layer 30 becomes lower, colonies become more likely to spread, and as a result, it may be difficult to count the colonies. On the other hand, psyllium seed gum is capable of forming a gel with elasticity, and thus can provide an appropriate elasticity to the culture layer 30. For this reason, it becomes possible to confine the gas generated from the aerobic bacteria in the culture layer 30 during the culture. That is, it is possible to suppress the culture layer 30 from being partially crushed by the gas. Moreover, it can suppress that a colony oozes. Therefore, in the gelling agent of the culture layer 30 of the microorganism culture device 1 according to the present invention, psyllium seed gum is an essential component in addition to guar gum.
なお、培養層３０の弾性が高くなるにつれて菌が成長しにくくなることが考えられる。従って、培養層３０のゲル化剤におけるグアーガムの重量部およびサイリウムシードガムの重量部は、培養層３０における培養性能および弾性のバランスが適切な範囲内になるよう設定される。具体的には、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部は、ゲル化剤におけるサイリウムシードガムの重量部以上となっている。また、グアーガムの比率が高くなり、これによって培養層３０が脆くなることを防ぐため、後述する実施例によって支持されるように、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比が７：３〜５：５の範囲内であることが好ましい。このように培養層３０のゲル化剤を構成することにより、微生物のコロニーの視認性、特に好気性細菌のコロニーの視認性を確保しながら、微生物を適切に培養することができる。 In addition, it is possible that a microbe will become difficult to grow as the elasticity of the culture layer 30 becomes high. Therefore, the weight part of guar gum and the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent of the culture layer 30 are set so that the balance between culture performance and elasticity in the culture layer 30 is within an appropriate range. Specifically, the weight part of the guar gum in the gelling agent is not less than the weight part of the psyllium seed gum in the gelling agent. Moreover, in order to prevent the ratio of guar gum from becoming high and thereby causing the culture layer 30 to become brittle, as supported by the examples described later, the weight part of guar gum and the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent The ratio is preferably in the range of 7: 3 to 5: 5. Thus, by comprising the gelatinizer of the culture layer 30, microorganisms can be appropriately cultured while ensuring the visibility of microorganism colonies, particularly the visibility of aerobic bacteria colonies.
なお、本発明による微生物培養具１の培養層３０には、上述のグアーガムおよびサイリウムシードガム以外のゲル化剤が含まれていてもよい。例えば、グアーガムおよびサイリウムシードガム以外のゲル化剤として、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、変性ＰＶＡ、セルロース誘導体、澱粉およびその誘導体、セルロース誘導体および澱粉以外の多糖類、アクリル酸およびその誘導体、ポリエーテル、およびタンパク質などの水溶性ポリマーの架橋物；澱粉系吸水性ポリマー；セルロース系吸水性ポリマー；アクリル系吸水性ポリマー；無水マレイン酸系コポリマー；ビニルピロリドン系コポリマー；ポリエーテル系吸水性ポリマー；アクリル繊維加水分解物；およびその他の吸水性ポリマー、キサンタンガム、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリルアミド、ローカストビーンガム、アルギン等が挙げられる。 The culture layer 30 of the microorganism culture device 1 according to the present invention may contain a gelling agent other than the above-mentioned guar gum and psyllium seed gum. For example, as gelling agents other than guar gum and psyllium seed gum, polyvinyl alcohol (PVA), modified PVA, cellulose derivatives, starch and derivatives thereof, cellulose derivatives and polysaccharides other than starch, acrylic acid and derivatives thereof, polyethers, and Cross-linked products of water-soluble polymers such as proteins; starch-based water-absorbing polymers; cellulose-based water-absorbing polymers; acrylic-based water-absorbing polymers; maleic anhydride-based copolymers; vinyl pyrrolidone-based copolymers; And other water-absorbing polymers, xanthan gum, hydroxyethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, polyacrylamide, locust bean gum, algin and the like.
〔栄養成分〕
栄養成分は、微生物の種類に応じて、適宜選択することができる。例えば、一般生菌検査用としては、ソルビトール・ピルビン酸ナトリウム・酵母エキス・ペプトン・ブドウ糖混合物、肉エキス・ペプトン混合物、ペプトン・大豆ペプトン・ブドウ糖混合物等や、これらにリン酸二カリウム及び／又は塩化ナトリウムを加えた混合物が挙げられる。大腸菌・大腸菌群検査用としては、デソキシコール酸ナトリウム・ペプトン・クエン酸鉄アンモニウム・塩化ナトリウム・リン酸二カリウム・乳糖混合物、ペプトン・乳糖・リン酸二カリウム混合物等が挙げられる。ブドウ球菌用としては、肉エキス・ペプトン・塩化ナトリウム・マンニット・卵黄混合物、ペプトン・肉エキス・酵母エキス・ピルビン酸ナトリウム・グリシン・塩化リチウム・亜テルル酸卵黄液混合物等が挙げられる。ビブリオ用としては、酵母エキス・ペプトン・蔗糖・チオ硫酸ナトリウム・クエン酸ナトリウム・コール酸ナトリウム・クエン酸第２鉄・塩化ナトリウム・牛胆汁混合物等が挙げられる。腸球菌用としては、牛脳エキス・ハートエキス・ペプトン・ブドウ糖・リン酸二カリウム・窒化ナトリウム混合物等が挙げられる。真菌用としては、ペプトン・ブドウ糖混合物、酵母エキス・ブドウ糖混合物、ポテトエキス・ブドウ糖混合物等が挙げられる。これらの中から、発育させようとする微生物の種類に応じて、１種類又はそれ以上を選択し、混合して使用することができる。
[Nutrition ingredient]
The nutrient component can be appropriately selected according to the type of microorganism. For example, for the inspection of general live bacteria, sorbitol, sodium pyruvate, yeast extract, peptone, glucose mixture, meat extract, peptone mixture, peptone, soybean peptone, glucose mixture, etc., and dipotassium phosphate and / or chloride The mixture which added sodium is mentioned. Examples of the test for Escherichia coli and coliform group include sodium desoxycholate / peptone / ammonium iron citrate / sodium chloride / dipotassium phosphate / lactose mixture, and peptone / lactose / dipotassium phosphate mixture. Examples of staphylococci include meat extract, peptone, sodium chloride, mannitol, egg yolk mixture, peptone, meat extract, yeast extract, sodium pyruvate, glycine, lithium chloride, tellurite egg yolk mixture, and the like. For vibrio use, yeast extract, peptone, sucrose, sodium thiosulfate, sodium citrate, sodium cholate, ferric citrate, sodium chloride, bovine bile mixture and the like can be mentioned. Examples of enterococci include bovine brain extract, heart extract, peptone, glucose, dipotassium phosphate and sodium nitride. Examples of fungi include peptone / glucose mixture, yeast extract / glucose mixture, potato extract / glucose mixture, and the like. From these, one or more types can be selected and mixed for use according to the type of microorganism to be grown.
〔可塑剤〕
可塑剤は、ポリビニルピロリドンなどの固着剤によって構成される培養層３０の被膜が硬く脆い場合に添加されるものである。可塑剤としては、例えば、グリセリンやグリセリン誘導体系可塑剤、ポリエチレングリコール等が挙げられる。このような可塑剤を添加することにより、培養層３０の被膜に柔軟性を与えることができる。このことにより、例えば、基材シート１０の外縁近傍がカールしてしまうことを抑制することができる。なお培養層３０中における可塑剤の含有比率が高くなりすぎると、微生物の培養特性や視認性が低下してしまうことが考えらえる。従って、培養層３０中における可塑剤の含有比率は、培養層３０における所望の柔軟性、培養特性や視認性などの様々な点を考慮して決定される。例えば可塑剤としてグリセリンが用いられる場合、後述する実施例によって支持されているように、好ましくは、培養層３０の固形分（アルコールなどの溶媒を除く成分）の全体に対するグリセリンの重量％が１０〜１５％の範囲内となっている。
[Plasticizer]
The plasticizer is added when the film of the culture layer 30 composed of a fixing agent such as polyvinylpyrrolidone is hard and brittle. Examples of the plasticizer include glycerin, glycerin derivative plasticizer, and polyethylene glycol. By adding such a plasticizer, the film of the culture layer 30 can be given flexibility. Thereby, for example, the vicinity of the outer edge of the base sheet 10 can be prevented from curling. In addition, when the content rate of the plasticizer in the culture layer 30 becomes high too much, it can be considered that the culture characteristics and visibility of the microorganisms deteriorate. Therefore, the content ratio of the plasticizer in the culture layer 30 is determined in consideration of various points such as desired flexibility, culture characteristics, and visibility in the culture layer 30. For example, when glycerin is used as a plasticizer, as supported by the examples described later, preferably, the weight percent of glycerin relative to the total solid content of the culture layer 30 (components excluding solvents such as alcohol) is 10 to 10. It is within the range of 15%.
〔発色指示薬〕
発色指示薬は、培養過程で発育する微生物の代謝により産出される特異物質との反応、ｐＨ変化の認識、酵素との反応等によって発色してコロニーを着色するものである。発色指示薬を用いることにより、コロニー数の計数を極めて容易にすることができる。発色指示薬としては、例えば、トリフェニルテトラゾリウムクロライド（以下、ＴＴＣとする）、ｐ−トリルテトラゾリウムレッド、テトラゾリウムバイオレット、ペテトリルテトラゾリウムブルー等のテトラゾリム塩や、ニュートラルレッド混合物、フェノールレッド、ブロムチモールブルー、チモールブルー混合物等のｐＨ指示薬が挙げられる。また発色指示薬として、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−Ｂ−Ｄ−グルクロニドシクロヘキシルアンモニウム水和物、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−D−ガラクトピラノシド、５−ブロモ−６−クロロ−３−インドリル−β−D−ガラクトピラノシド、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリルフォスフェートなどを用いることもできる。
[Coloring indicator]
The coloring indicator is colored by coloring with a reaction with a specific substance produced by metabolism of microorganisms that develop during the culturing process, recognition of pH change, reaction with an enzyme, and the like. By using a color development indicator, the number of colonies can be counted very easily. Examples of the color development indicator include tetrazorim salts such as triphenyltetrazolium chloride (hereinafter referred to as TTC), p-tolyltetrazolium red, tetrazolium violet, petetylyltetrazolium blue, neutral red mixtures, phenol red, bromthymol blue, and thymol. PH indicator such as blue mixture. Further, as a color developing indicator, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-BD-glucuronide cyclohexylammonium hydrate, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside, 5 -Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate and the like can also be used.
〔選択剤〕
選択剤は、検出対象ではない微生物の発育を抑えるために培養層３０に添加されるものである。このような選択剤としては、メチシリン、セフタメタゾール、セフィキシム、セフタジジム、セフスロジン、バシトラシン、ポリミキシンＢ、リファンピシン、ノボビオシン、コリスチン、リンコマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、アザクタム、アクリフラビン等の抗生物質、サルファ剤、ナリジクス酸、オラキンドックス等の合成抗菌剤、クリスタルバイオレット、ブリリアントグリーン、マラカイトグリーン、メチレンブルー等の静菌又は殺菌作用を有する色素、Ｔｅｒｇｉｔｏｌ７、ドデシル硫酸塩、ラウリル硫酸塩、コール酸ナトリウム等の界面活性剤、亜セレン酸塩、亜テルル酸塩、亜硫酸塩、窒化ナトリウム、塩化リチウム、シュウ酸塩、アジ化ナトリウム、高濃度の塩化ナトリウム等の無機塩等が挙げられる。
(Selective agent)
The selective agent is added to the culture layer 30 in order to suppress the growth of microorganisms that are not detection targets. Examples of such a selective agent include antibiotics such as methicillin, ceftamezole, cefixime, ceftazidime, cefsulosin, bacitracin, polymyxin B, rifampicin, novobiocin, colistin, lincomycin, chloramphenicol, tetracycline, streptomycin, azactam, acriflavine, Synthetic antibacterial agents such as sulfa drugs, nalidixic acid and olaquindox, dyes having bacteriostatic or bactericidal activity such as crystal violet, brilliant green, malachite green, methylene blue, Tergitol 7, dodecyl sulfate, lauryl sulfate, sodium cholate, etc. Surfactant, selenite, tellurite, sulfite, sodium nitride, lithium chloride, oxalate, sodium azide, high concentration sodium chloride, etc. Inorganic salts, and the like.
上記の構成成分を含む培養層３０を形成するために基材シート１０上に塗布される培地液３０Ａに使用する溶媒としては、選択した構成成分を溶解又は分散し得るものであれば特に限定されるものではないが、アルコール系溶媒を使用することが好ましい。アルコール系溶媒は、水やトルエン等の高沸点溶媒とは異なり、溶媒除去の際に高温加熱する必要がない。このため、各成分が熱分解するおそれがなく、また、溶媒除去に長時間を要しないので、生産効率に優れる点において好ましい。アルコール系溶媒としては、炭素数１〜５のアルコールが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等が挙げられる。これらの中でも、沸点が低く、乾燥による溶媒除去が容易であって、且つ、微生物の発育を阻害しないメタノールが最も好ましい。なお、上記溶媒は、単独又は２種以上を混合して使用することができる。溶媒の使用量は、培地液の構成成分や溶媒の種類によって、適宜選択するとよい。 The solvent used in the medium solution 30A applied on the base sheet 10 in order to form the culture layer 30 containing the above constituent components is not particularly limited as long as it can dissolve or disperse the selected constituent components. Although not intended, it is preferable to use an alcohol solvent. Unlike a high boiling point solvent such as water or toluene, the alcohol solvent does not need to be heated at a high temperature when removing the solvent. For this reason, there is no possibility that each component is thermally decomposed, and it does not require a long time for solvent removal, which is preferable in terms of excellent production efficiency. As the alcohol solvent, an alcohol having 1 to 5 carbon atoms is preferable, and examples thereof include methanol, ethanol, isopropyl alcohol and the like. Among these, methanol is most preferable because it has a low boiling point, can be easily removed by drying, and does not inhibit the growth of microorganisms. In addition, the said solvent can be used individually or in mixture of 2 or more types. The amount of solvent used may be appropriately selected depending on the components of the medium and the type of solvent.
なお図４においては、培養層３０が１層で構成されている例を示したが、これに限られることはなく、培養層３０を２層以上の多層で構成してもよい。例えば、固着剤およびゲル化剤を含む培地液を用いて第１培養層を形成し、その上に、固着剤、ゲル化剤および／または栄養成分を含む培地液を用いて第２培養層を形成してもよい。 In FIG. 4, an example in which the culture layer 30 is composed of one layer is shown, but the present invention is not limited to this, and the culture layer 30 may be composed of two or more layers. For example, a first culture layer is formed using a medium solution containing a fixing agent and a gelling agent, and a second culture layer is formed thereon using a medium solution containing a fixing agent, a gelling agent and / or a nutrient component. It may be formed.
（枠体）
枠体２０は、上述のように、培養層３０を囲うよう基材シート１０の上面に設けられるものである。このような枠体２０を設けることにより、被検液３５Ａを培養層３０上に供給するときに、被検液３５Ａが枠体２０を超えて拡がることを防止することができるとともに、被検液３５が広がる領域を一定にすることができる。従って、カバーフィルム４０を被せるたけで被検液３５Ａを拡げることができるため、スプレッダを用いて培養層３０上の被検液３５Ａを拡げる作業を省くことができ、このことにより、検査工程に要する時間を短縮することができる。また、被検液３５Ａが基材シート１０上に洩れてしまうことを防ぐこともできる。
(Frame)
As described above, the frame body 20 is provided on the upper surface of the substrate sheet 10 so as to surround the culture layer 30. By providing such a frame 20, when supplying the test solution 35 A onto the culture layer 30, the test solution 35 A can be prevented from spreading beyond the frame 20, and the test solution The area where 35 extends can be made constant. Therefore, since the test solution 35A can be expanded only by covering the cover film 40, the work of expanding the test solution 35A on the culture layer 30 by using a spreader can be omitted, and this requires the inspection process. Time can be shortened. Further, it is possible to prevent the test liquid 35A from leaking onto the base sheet 10.
枠体２０は、培養層３０の形成前に形成されてもよく、若しくは培養層３０の形成後に形成されてもよいが、培養層３０の形成後に形成されると、枠体２０と培養層３０との間に隙間が生じやすくなることが考えられる。この場合、微生物を培養した際にその隙間に菌が遊走し、正確なコロニー数の計測が困難となることがある。従って、培養層３０の形成前に枠体２０が形成されることが好ましい。また、培養層３０の形成前に枠体２０を形成することにより、培地液３０Ａが拡がる範囲、すなわち培養層３０が形成される範囲を画定することができるため、高価な微生物培養材料が無駄になることを低減することができる。 The frame body 20 may be formed before the culture layer 30 is formed, or may be formed after the culture layer 30 is formed. When the frame body 20 is formed after the culture layer 30 is formed, the frame body 20 and the culture layer 30 are formed. It is conceivable that a gap is easily generated between the two. In this case, when the microorganism is cultured, the bacteria migrate to the gap, and it may be difficult to accurately measure the number of colonies. Therefore, it is preferable that the frame body 20 is formed before the culture layer 30 is formed. Further, by forming the frame body 20 before the formation of the culture layer 30, it is possible to delimit the range in which the medium solution 30A spreads, that is, the range in which the culture layer 30 is formed, so that expensive microorganism culture material is wasted. Can be reduced.
枠体２０の幅は、最細部が幅０．５〜５．０ｍｍの範囲内であることが好ましく、より好ましくは１．０〜３．０ｍｍの範囲内である。上記範囲であれば、培養層３０が吸水して膨潤した場合であっても、枠体２０の形状が崩れるおそれが少ない。 As for the width | variety of the frame 20, it is preferable that the most detail is in the range of 0.5-5.0 mm in width, More preferably, it exists in the range of 1.0-3.0 mm. If it is the said range, even if it is a case where the culture layer 30 absorbs water and swells, there is little possibility that the shape of the frame 20 will collapse.
被検疫３５Ａを滴下してカバーフィルム４０を被せたときに、被検液３５Ａがカバーフィルム４０に接触するように、枠体２０の高さが設定される。枠体２０は、培養層３０の高さより１００〜１２００μｍ高くなるよう設定され、より好ましくは２００〜１０００μｍ高くなるよう設定され、特に好ましくは３００〜８００μｍ高くなるよう設定される。枠体２０の高さと培養層３０の高さの差を１００μｍより大きくすることにより、被検液の拡がりを十分に抑制することができ、これによって、基材シート１０上への漏れが生じることを防ぐことができる。また、枠体２０の高さと培養層３０の高さの差を１２００μｍよりも小さくすることにより、被検液３５Ａおよび培養層３０とカバーフィルム４０との間の密着性を確保することができる。これによって、被検液３５Ａを培養層３０に給水させながら被検液３５Ａを培養層３０の全域に拡げることができる。 The height of the frame 20 is set so that the test liquid 35A comes into contact with the cover film 40 when the test quarantine 35A is dropped and covered with the cover film 40. The frame 20 is set to be 100 to 1200 μm higher than the height of the culture layer 30, more preferably 200 to 1000 μm higher, and particularly preferably 300 to 800 μm higher. By making the difference between the height of the frame 20 and the height of the culture layer 30 larger than 100 μm, it is possible to sufficiently suppress the spread of the test solution, thereby causing leakage onto the base sheet 10. Can be prevented. Further, by making the difference between the height of the frame 20 and the height of the culture layer 30 smaller than 1200 μm, the adhesion between the test solution 35A and the culture layer 30 and the cover film 40 can be ensured. Thus, the test solution 35A can be spread over the entire culture layer 30 while supplying the test solution 35A to the culture layer 30.
枠体２０の高さｈ１、すなわち基材シート１０から枠体２０の上端までの距離は、３００〜１４００μｍとなっており、好ましくは５００〜９００μｍとなっている。枠体２０の高さｈ１を３００μｍより大きくすることにより、被検液３５Ａを滴下するためにカバーフィルム４０をめくり上げる際に、基材シート１０とカバーフィルム４０との間に指が入りやすくなるため、カバーフィルム４０をめくり上げやすくすることができる。また、枠体２０の高さｈ１を１４００μｍより小さくすることにより、高価である培地液３０Ａを基材シート１０上に塗布する量を減らすことができるため、微生物培養具１のコストを下げることができる。 The height h 1 of the frame body 20, that is, the distance from the base sheet 10 to the upper end of the frame body 20 is 300 to 1400 μm, preferably 500 to 900 μm. By making the height h 1 of the frame 20 larger than 300 μm, a finger can easily enter between the base sheet 10 and the cover film 40 when the cover film 40 is turned up to drop the test liquid 35A. Therefore, the cover film 40 can be easily turned up. In addition, by reducing the height h 1 of the frame 20 to less than 1400 μm, the amount of the expensive medium solution 30A applied onto the base sheet 10 can be reduced, so that the cost of the microorganism culture tool 1 is reduced. Can do.
枠体２０を構成する材料としては、好ましくは、疎水性を有する材料が用いられ、例えば疎水性樹脂が用いられる。疎水性樹脂としては、例えば、ＵＶ硬化樹脂、ホットメルト樹脂、熱発泡インクやＵＶ発泡剤等を好適に使用することができる。これらは着色されていてもよい。 As a material constituting the frame body 20, a hydrophobic material is preferably used, and for example, a hydrophobic resin is used. As the hydrophobic resin, for example, a UV curable resin, a hot melt resin, a thermally foamed ink, a UV foaming agent, or the like can be preferably used. These may be colored.
ＵＶ硬化樹脂としては、特に限定されるものではないが、例えば、ラジカル型では、アクリレート系や不飽和ポリエステル系等が挙げられ、カチオン型では、エポキシアクリレート系、オキセタン系やビニルエーテル系等が挙げられる。 The UV curable resin is not particularly limited. For example, the radical type includes an acrylate type and an unsaturated polyester type, and the cationic type includes an epoxy acrylate type, an oxetane type, a vinyl ether type, and the like. .
ホットメルト樹脂としては、軟化点温度が１２０度以下、より好ましくは１００度以下のものを好適に使用することができる。例えば、ホットメルト樹脂として、ウレタン系、ポリアミド系、ポリオレフィン系、ポリエステル系、エチレン酢酸ビニル系、スチレンブタジエンゴム系やウレタンゴム系等の合成ゴム系等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。 As the hot melt resin, one having a softening point temperature of 120 ° C. or lower, more preferably 100 ° C. or lower can be suitably used. Examples of the hot melt resin include urethane, polyamide, polyolefin, polyester, ethylene vinyl acetate, synthetic rubber such as styrene butadiene rubber and urethane rubber, but are not limited thereto. Absent.
その他にも、枠体２０を構成する疎水性樹脂として、熱発泡インクやＵＶ発泡剤等も好適に使用することができる。例えば、バインダーとしてポリウレタン系樹脂、ポリアミド系樹脂、ポリ塩化ビニル系樹脂、ポリアクリレート系樹脂、ポリエステル系樹脂、そして、塩素化ポリプロピレン等のポリオレフィン系樹脂、また、塩化ゴムや環化ゴム等のゴム類等を用いたインキを使用することができる。これらのインキは、撥水性を有していれば更に好ましく、この点から上記の樹脂にシリコーン類やワックス類を添加したインキが更に好ましい。 In addition, as the hydrophobic resin constituting the frame body 20, a thermal foaming ink, a UV foaming agent, or the like can be suitably used. For example, polyurethane resin, polyamide resin, polyvinyl chloride resin, polyacrylate resin, polyester resin as a binder, polyolefin resin such as chlorinated polypropylene, and rubbers such as chlorinated rubber and cyclized rubber Etc. can be used. These inks are more preferable if they have water repellency. In this respect, inks obtained by adding silicones or waxes to the above resins are more preferable.
枠体２０に用いる疎水性樹脂は、疎水性、撥水性を有すると同時に、その塗膜の厚さが大きくできるものであることが好ましい。この観点からは、上記の樹脂に従来公知の発泡剤等を添加して、発泡インキとして使用することが効果的である。このようなＵＶ発泡インキとして、少なくともアクリレート反応性希釈剤又はメタクリレート反応性希釈等の反応性希釈剤と、ウレタンアクリレート光重合性オリゴマー、ポリエステルアクリレート光重合性オリゴマー、エポキシアクリレート光重合性オリゴマー、アクリル系光重合性オリゴマー、特殊光重合性オリゴマー等の光重合性オリゴマーと、光重合開始剤からなる紫外線硬化型インキに、無機発泡剤、有機発泡剤、液体発泡剤等の発泡剤を含有してなる紫外線硬化型発泡インキを挙げることができる。 It is preferable that the hydrophobic resin used for the frame 20 has hydrophobicity and water repellency, and at the same time the thickness of the coating film can be increased. From this viewpoint, it is effective to add a conventionally known foaming agent or the like to the above resin and use it as a foamed ink. As such UV foaming ink, at least reactive diluent such as acrylate reactive diluent or methacrylate reactive dilution, urethane acrylate photopolymerizable oligomer, polyester acrylate photopolymerizable oligomer, epoxy acrylate photopolymerizable oligomer, acrylic A UV-curable ink consisting of a photopolymerizable oligomer, a photopolymerizable oligomer such as a special photopolymerizable oligomer, and a photopolymerization initiator, and containing a foaming agent such as an inorganic foaming agent, an organic foaming agent, or a liquid foaming agent. An ultraviolet curable foaming ink can be mentioned.
なお、上記疎水性樹脂には、添加剤として、消泡剤、重合禁止剤、顔料分散剤等を添加してもよい。また、通常使用される着色顔料を、１５質量％未満の範囲で含有してもよい１５質量％を超えると、発泡を阻害するおそれがあるため好ましくない場合がある。 In addition, you may add an antifoamer, a polymerization inhibitor, a pigment dispersant etc. to the said hydrophobic resin as an additive. Moreover, since the coloring pigment normally used may be contained in the range less than 15 mass% and exceeds 15 mass%, since there exists a possibility of inhibiting foaming, it may be unpreferable.
本実施の形態による微生物培養具１においては、枠体２０の材料として、上記いずれの疎水性樹脂も好適に使用することができるが、ＵＶ硬化樹脂又はホットメルト樹脂が好ましく、ホットメルト樹脂がより好ましい。枠体２０の形成には、一定の高さを有するパターン形成が必要であるが、ＵＶ硬化樹脂やホットメルト樹脂は、非溶媒系の状態でディスペンサー等による塗布により容易に形状加工ができ、加工後も光照射や冷却により硬化させるだけで容易にパターン形成できるからである。ただし、ＵＶ照射に起因して変質する成分が培養層３０に含まれている場合には、ＵＶ照射の際に培養層３０を金属等で覆う必要があり、作業が煩雑となるため、ホットメルト樹脂を使用するとよい。 In the microorganism culture device 1 according to the present embodiment, any of the above-mentioned hydrophobic resins can be suitably used as the material of the frame 20, but a UV curable resin or a hot melt resin is preferable, and a hot melt resin is more preferable. preferable. The formation of the frame 20 requires a pattern formation having a certain height, but the UV curable resin or hot melt resin can be easily processed by coating with a dispenser or the like in a non-solvent system. This is because the pattern can be easily formed only by curing by light irradiation or cooling. However, if the culture layer 30 contains a component that changes in quality due to UV irradiation, it is necessary to cover the culture layer 30 with a metal or the like during UV irradiation, and the work becomes complicated. It is good to use resin.
なお、疎水性材料のくりぬき品を基材シート１０の上面に接着して枠体２０を形成してもよい。もしくは基材シート１０を熱成形、プレス成形、しぼり成形などを用いて枠体状に成形することにより、枠体２０を形成してもよい。 The frame 20 may be formed by bonding a hollow material of a hydrophobic material to the upper surface of the base sheet 10. Or you may form the frame 20 by shape | molding the base material sheet 10 in a frame shape using thermoforming, press molding, drawing, etc.
（カバーフィルム）
カバーフィルム４０は、培養中の落下菌等による汚染を防止するとともに、培養層３０の水分蒸発を防止するという作用を有する。またカバーフィルム４０は、培養層３０上に供給された被検液３５Ａの塊を培養層３０の全域にわたって拡げるという作用も有する。カバーフィルム４０は、例えば図４に示すように、基材４６と、基材４６の基材シート１０側に設けられた印刷層４７と、印刷層４７の基材シート１０側に設けられた撥水層４８と、を含んでいる。
(Cover film)
The cover film 40 has an effect of preventing contamination by falling bacteria during culture and preventing moisture evaporation of the culture layer 30. The cover film 40 also has an action of expanding the mass of the test solution 35 </ b> A supplied on the culture layer 30 over the entire area of the culture layer 30. For example, as shown in FIG. 4, the cover film 40 includes a base material 46, a printing layer 47 provided on the base material sheet 10 side of the base material 46, and a repellent provided on the base material sheet 10 side of the printing layer 47. And an aqueous layer 48.
カバーフィルム４０は、防水性、水蒸気不透過性を有すると同時に、透明性を有することが好ましい。これによって、微生物の培養後、カバーフィルム４０を通してコロニーを観察したり、計数したりすることができる。例えば、カバーフィルム４０の基材４６を構成する材料として、ポリエチレン、ポリプロピレン等のポリオレフィン、ポリエステル、ポリアミド、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリ塩化ビニル等のプラスチックフィルムを使用することができる。 The cover film 40 preferably has transparency and water vapor impermeability as well as transparency. Thereby, after culture | cultivation of microorganisms, a colony can be observed through the cover film 40, or can be counted. For example, a plastic film such as a polyolefin such as polyethylene or polypropylene, a polyester, a polyamide, a polystyrene, a polycarbonate, or a polyvinyl chloride can be used as a material constituting the substrate 46 of the cover film 40.
また、カバーフィルム４０の基材４６には、基材シート１０の項で記載したコロナ放電処理等の表面処理がなされていてもよい。なお、カバーフィルム４０は、培養する微生物の種類により、適した気体透過性、主に酸素透過性、又は酸素非透過性を有することが好ましく、この点も考慮して選定するとよい。 Further, the substrate 46 of the cover film 40 may be subjected to a surface treatment such as a corona discharge treatment described in the section of the substrate sheet 10. The cover film 40 preferably has suitable gas permeability, mainly oxygen permeability, or oxygen non-permeability depending on the type of microorganism to be cultured, and may be selected in consideration of this point.
カバーフィルム４０は、被検液３５Ａを培養層３０上に供給するためにカバーフィルム４０を基材シート１０から持ち上げる際に、適度の柔軟性が確保されることが好ましい。したがって、カバーフィルム４０の厚さは、１０〜２００μｍ程度が好ましく、２０〜７０μｍ程度が更に好ましい。 When the cover film 40 is lifted from the base material sheet 10 in order to supply the test solution 35A onto the culture layer 30, it is preferable that the cover film 40 has an appropriate flexibility. Therefore, the thickness of the cover film 40 is preferably about 10 to 200 μm, more preferably about 20 to 70 μm.
基材シート１０に枡目線が印刷されていない場合、カバーフィルム４０に枡目線４０ａが印刷されていてもよい。なお枡目線４０ａは、コロニーが多数形成された場合に、数ヶ所の枡目内の菌数を計測し、枡目の合計数に比例した数を掛けるだけで、おおよその全体数を求めるために形成されるものである。枡目線４０ａは、基材４６上に印刷されていてもよい。若しくは図４に示すように、水に不溶性であり、かつ微生物の生育に影響を与えないインキを用いて枡目線４０ａが形成された印刷層４７を準備し、この印刷層４７と基材４６とを積層することにより、枡目線４０ａが得られてもよい。枡目の大きさは、１０ｍｍ角程度が適当である。 When the grid line is not printed on the base material sheet 10, the grid line 40 a may be printed on the cover film 40. In addition, the square line 40a is used to obtain an approximate total number by simply counting the number of bacteria in several squares and multiplying by a number proportional to the total number of squares when a large number of colonies are formed. Is formed. The grid line 40 a may be printed on the base material 46. Alternatively, as shown in FIG. 4, a printing layer 47 having a grid line 40a formed using an ink that is insoluble in water and does not affect the growth of microorganisms is prepared. The grid line 40a may be obtained by stacking layers. A suitable size of the square is about 10 mm square.
好ましくは、カバーフィルム４０は、カバーフィルム４０の下面、すなわち培養層３０と対向する面が撥水性を有するよう構成されている。これによって、培養層３０上に供給された被検液３５Ａの塊を培養層３０の全域にわたって拡げるというカバーフィルム４０の作用を強化することができる。カバーフィルム４０の下面に撥水性を与える方法としては、例えば図４に示すように、カバーフィルム４０の下面を、撥水性を有する撥水層４８を用いて構成することが考えられる。 Preferably, the cover film 40 is configured such that the lower surface of the cover film 40, that is, the surface facing the culture layer 30 has water repellency. Thereby, the action of the cover film 40 for expanding the mass of the test solution 35A supplied onto the culture layer 30 over the entire area of the culture layer 30 can be enhanced. As a method for imparting water repellency to the lower surface of the cover film 40, for example, as shown in FIG. 4, it is conceivable to form the lower surface of the cover film 40 using a water-repellent layer 48 having water repellency.
撥水層４８は、好ましくは、ＪＩＳ Ｒ３２５７に準拠して、水滴に対する接触角が５０〜１０５度となるよう構成される。これによって、培養層３０上における被検液３５Ａを枠体２０の内側に保持するとともに被検液３５Ａを拡散させることができる。また、仮にカバーフィルム４０と枠体２０との間にわずかな隙間が形成されている場合であっても、このような隙間を被検液３５Ａが通り抜けて被検液３５Ａが枠体２０の外側に洩れてしまうことを抑制することができる。撥水層４８を構成する材料としては、例えば、ポリアミド系樹脂、ポリ（メタ）アクリル系樹脂、ポリオレフィン系樹脂、ポリエステル系樹脂などの公知の樹脂を挙げることができる。これらの樹脂は、単独で用いられてもよく、２種以上が組み合わされて用いられてもよい。 The water repellent layer 48 is preferably configured such that the contact angle with respect to water droplets is 50 to 105 degrees in accordance with JIS R3257. As a result, the test solution 35A on the culture layer 30 can be held inside the frame 20, and the test solution 35A can be diffused. Even if a slight gap is formed between the cover film 40 and the frame body 20, the test liquid 35 </ b> A passes through the gap and the test liquid 35 </ b> A is outside the frame body 20. It is possible to suppress the leakage. Examples of the material constituting the water repellent layer 48 include known resins such as polyamide resins, poly (meth) acrylic resins, polyolefin resins, and polyester resins. These resins may be used alone or in combination of two or more.
カバーフィルム４０のうち培養層３０と対向する領域に、特定成分層が形成されていてもよい。特定成分層としては、例えば、固着剤を溶解、又は分散した液に、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、選択剤及び基質からなる群から選択される１種以上を配合した特定成分溶液を塗布することにより得られる層が用いられる。なお、カバーフィルム４０に設けられた特定成分層が発色指示薬を含んでいる場合、培養層３０や被検液３５Ａに発色指示薬を添加する手間を省くことができる。 A specific component layer may be formed in a region of the cover film 40 that faces the culture layer 30. As the specific component layer, for example, a specific component solution in which one or more selected from the group consisting of a gelling agent, a nutritional component, a coloring indicator, a selective agent, and a substrate is mixed in a solution in which a fixing agent is dissolved or dispersed. A layer obtained by coating is used. In addition, when the specific component layer provided in the cover film 40 contains the color development indicator, the effort which adds a color development indicator to the culture layer 30 or the test liquid 35A can be saved.
（接合部）
接合部２５は、カバーフィルム４０を基材シート１０に対して接合するためのものである。カバーフィルム４０が接合部２５を軸として基材シート１０に対して変位し、これによって、枠体２０および培養層３０がカバーフィルム４０によって覆われている被覆状態と、枠体２０および培養層３０がカバーフィルム４０によって覆われていない開放状態と、を実現することができる限りにおいて、接合部２５の具体的な構成が特に限られることはない。例えば図２および図４に示すように、接合部２５を、基材シート１０およびカバーフィルム４０とは別個の部材を用いて構成してもよい。この場合、接合部２５として、例えば一般的な両面テープやホットメルト剤を用いることができる。若しくは、図示はしないが、接合部２５を、基材シート１０およびカバーフィルム４０と同一の材料を用いて構成してもよい。例えば、一枚のプラスチックシートや積層シートを準備し、このシートを折り曲げることによって、一連のシート上に基材シート１０およびカバーフィルム４０を画定してもよい。この場合、基材シート１０とカバーフィルム４０との間に位置する折り曲げられた領域が、カバーフィルム４０を基材シート１０に対して接合する接合部２５となる。
(Joint part)
The joining portion 25 is for joining the cover film 40 to the base sheet 10. The cover film 40 is displaced with respect to the base sheet 10 with the joint portion 25 as an axis, whereby the frame 20 and the culture layer 30 are covered with the cover film 40, and the frame 20 and the culture layer 30. As long as it is possible to realize an open state in which the cover film 40 is not covered with the cover film 40, the specific configuration of the joint portion 25 is not particularly limited. For example, as illustrated in FIGS. 2 and 4, the joint portion 25 may be configured using a member separate from the base sheet 10 and the cover film 40. In this case, for example, a general double-sided tape or a hot melt agent can be used as the bonding portion 25. Or although not illustrated, you may comprise the junction part 25 using the material same as the base material sheet 10 and the cover film 40. FIG. For example, the base sheet 10 and the cover film 40 may be defined on a series of sheets by preparing a single plastic sheet or a laminated sheet and bending the sheet. In this case, the folded region located between the base sheet 10 and the cover film 40 becomes a joint portion 25 that joins the cover film 40 to the base sheet 10.
次に、このような構成からなる本実施の形態の作用および効果について説明する。ここでは、はじめに、微生物培養具１を製造する方法について説明する。次に、得られた微生物培養具１を用いて微生物を検査する方法について説明する。 Next, the operation and effect of the present embodiment having such a configuration will be described. Here, first, a method for producing the microorganism culture device 1 will be described. Next, a method for inspecting microorganisms using the obtained microorganism culture tool 1 will be described.
微生物培養具の製造方法
はじめに、微生物培養具１を製造する方法について、図５（ａ）〜（ｆ）を参照して説明する。
The manufacturing method Introduction microbial culture device, a method for producing the microorganism culture device 1 will be described with reference to FIG. 5 (a) ~ (f) .
まず図５（ａ）に示すように、合成紙等の基材シート１０を準備する。次に、単孔ノズルを備えるディスペンサーなどを用いて、ホットメルト樹脂などから構成される円形状の枠体２０を基材シート１０の上面に形成する（図５（ｂ）参照）。 First, as shown in FIG. 5A, a base sheet 10 such as synthetic paper is prepared. Next, a circular frame 20 made of hot melt resin or the like is formed on the upper surface of the base sheet 10 using a dispenser equipped with a single-hole nozzle (see FIG. 5B).
また、アルコール系溶媒に上記固着剤、ゲル化剤、栄養成分、発色指示薬、選択剤等を溶解又は分散させて、培養層３０を形成するための培地液３０Ａを調製する。次に図５（ｃ）に示すように、基材シート１０の上面であって、枠体２０によって囲まれた領域内に、多孔ノズルを有するディスペンサーＮなどを用いて培地液３０Ａを塗布する。その後、塗布した培地液３０Ａに熱をかけて溶媒を除去し、乾燥させる。これによって、図５（ｄ）に示すように、基材シート１０の上面に培養層３０が形成される。 Also, a medium solution 30A for forming the culture layer 30 is prepared by dissolving or dispersing the above-mentioned fixing agent, gelling agent, nutrient component, coloring indicator, selective agent, and the like in an alcohol solvent. Next, as illustrated in FIG. 5C, the medium solution 30 </ b> A is applied to the upper surface of the base sheet 10 and in a region surrounded by the frame body 20 using a dispenser N having a porous nozzle. Thereafter, the applied medium solution 30A is heated to remove the solvent and dried. Thereby, the culture layer 30 is formed on the upper surface of the base sheet 10 as shown in FIG.
次に図５（ｅ）に示すように、両面テープやホットメルト剤などからなる接合部２５を、基材シート１０の第１外縁１１近傍に配置する。その後、カバーフィルム４０を準備し、図５（ｆ）に示すように、当該カバーフィルム４０の第１外縁４１近傍を接合部２５に接合する。これによって、微生物培養具１が得られる。 Next, as shown in FIG. 5E, the joint portion 25 made of a double-sided tape, a hot melt agent, or the like is disposed in the vicinity of the first outer edge 11 of the base sheet 10. Then, the cover film 40 is prepared and the 1st outer edge 41 vicinity of the said cover film 40 is joined to the junction part 25 as shown in FIG.5 (f). Thereby, the microorganism culture tool 1 is obtained.
ところで、培養層３０にはある程度の厚みが必要である。例えば培養層３０の厚みは、乾燥後において５０〜１０００μｍであることが好ましく、２００〜６００μｍであることがより好ましい。基材シート１０上にこのような厚みを有する培養層３０を形成させるための従来法としては、スクリーン印刷がある。しかしながら、メッシュの版を使用するスクリーン印刷では、培養層３０の形成途中で溶媒が揮発し、培地液３０Ａの粘度が上昇するため、メッシュ部分が目詰まりを起こしやすく、また、培地液３０Ａの版離れも悪いため、培養層３０を連続的に形成させることが困難である。メタルマスクの版を使用するスクリーン印刷を採用する場合も、メッシュの版と同様に培地液３０Ａの版離れが悪く、やはり培養層３０の連続形成は困難である。また、スキージの移動方向に厚みのムラが生じやすく、均一な厚みの培養層３０を形成することも困難である。一方、溶媒の揮発による培地液３０Ａの粘度上昇を考慮して溶媒量を増やすと、培地液３０Ａの粘度が低くなるため、所定領域にのみ培養層３０を形成することが困難になる。これに対して、本実施の形態によれば、枠体２０によって囲まれた領域内に、溶媒量を増やした培地液３０Ａを供給するので、培地液３０Ａの粘度が低い場合であっても、適度な厚みおよび均一な厚さを有する培養層３０を所定領域に形成することができる。 By the way, the culture layer 30 needs to have a certain thickness. For example, the thickness of the culture layer 30 is preferably 50 to 1000 μm, more preferably 200 to 600 μm after drying. As a conventional method for forming the culture layer 30 having such a thickness on the base sheet 10, there is screen printing. However, in screen printing using a mesh plate, the solvent volatilizes during the formation of the culture layer 30 and the viscosity of the medium solution 30A increases, so the mesh portion is likely to be clogged, and the plate of the medium solution 30A. Since the separation is also bad, it is difficult to form the culture layer 30 continuously. Even when screen printing using a metal mask plate is employed, the plate separation of the medium solution 30A is poor as in the case of the mesh plate, and the continuous formation of the culture layer 30 is also difficult. In addition, uneven thickness tends to occur in the moving direction of the squeegee, and it is difficult to form the culture layer 30 having a uniform thickness. On the other hand, if the amount of the solvent is increased in consideration of the increase in the viscosity of the medium solution 30A due to the volatilization of the solvent, the viscosity of the medium solution 30A becomes lower, so that it becomes difficult to form the culture layer 30 only in a predetermined region. On the other hand, according to the present embodiment, since the medium solution 30A with an increased amount of solvent is supplied into the region surrounded by the frame 20, even when the viscosity of the medium solution 30A is low, The culture layer 30 having an appropriate thickness and a uniform thickness can be formed in a predetermined region.
十分な厚みを有する培養層３０は、微生物の発育に必要な量の栄養成分と、コロニーの滲みが生じない量のゲル化剤とを十分に含むことができる。このため、微生物を適正に発育させるとともに、滲みの少ないコロニーを形成することができる。また、均一な厚みを有する培養層３０においては、固着剤、ゲル化剤、栄養成分等の各成分の含有量に偏りが生じにくいため、微生物の発育環境をほぼ一定のものとすることができる。これによって、培養層３０の領域ごとにコロニーの形成速度の差が生じることを抑制することができる。これらのことにより、コロニー数の計測等の微生物検査をより正確に行うことができる。なお、培地液３０Ａの構成成分（溶媒を除く）の少なくとも一種が溶媒中で溶解することなく分散している分散系の培地液３０Ａを用いて形成した培養層３０においては、培養層３０の厚みの均一性が培養層３０中での各構成成分の分布に与える影響が大きい。そのため、上述の方法による培養層３０の形成は、分散系の培地液３０Ａを使用した場合において、特に、効果を発揮する。 The culture layer 30 having a sufficient thickness can sufficiently contain an amount of nutrient components necessary for the growth of microorganisms and an amount of a gelling agent that does not cause colony bleeding. For this reason, while growing microorganisms appropriately, a colony with few bleeding can be formed. Further, in the culture layer 30 having a uniform thickness, the content of each component such as a fixing agent, a gelling agent, and a nutrient component is not easily biased, so that the growth environment of microorganisms can be made almost constant. . Thereby, it is possible to suppress the occurrence of a difference in colony formation speed for each region of the culture layer 30. By these things, microbe inspections, such as measurement of the number of colonies, can be performed more correctly. In the culture layer 30 formed using the dispersion medium solution 30A in which at least one of the components (excluding the solvent) of the medium solution 30A is dispersed without dissolving in the solvent, the thickness of the culture layer 30 is Has a great influence on the distribution of each constituent component in the culture layer 30. Therefore, the formation of the culture layer 30 by the above-described method is particularly effective when the dispersion medium solution 30A is used.
微生物検査方法
次に、微生物培養具１を用いて微生物を検査する方法について、図６（ａ）〜（ｅ）および図７を参照して説明する。
Microbial testing method Next, a method for inspecting microbes using a microorganism culture device 1 will be described with reference to FIG. 6 (a) ~ (e) and FIG.
はじめに図６（ａ）に示すように、微生物培養具１を作業台５の上に配置する。ここで作業台５は、図７に示すように、微生物培養具１の培養層３０上に被検液を供給する作業を実施するための作業領域５ａと、被検液が供給された後の微生物培養具１を一時的に保管するための保管領域５ｂと、を含んでいる。図６（ａ）に示す工程において、微生物培養具１は、作業台５の作業領域５ａ内に配置される。 First, as shown in FIG. 6A, the microorganism culture tool 1 is placed on the work table 5. Here, as shown in FIG. 7, the work table 5 includes a work area 5 a for performing the work of supplying the test liquid onto the culture layer 30 of the microorganism culture device 1, and the test liquid after the test liquid is supplied. A storage area 5b for temporarily storing the microorganism culture device 1. In the step shown in FIG. 6A, the microorganism culture tool 1 is disposed in the work area 5 a of the work table 5.
（供給工程）
次に、図６（ｂ）に示すように、微生物培養具１の培養層３０上に被検液３５Ａを供給する供給工程を実施する。被検液３５Ａとは、微生物の存在を確認し、または微生物数を測定する対象となる液のことである。被検液３５Ａは例えば、培養層３０の一部分に塊として供給される。供給工程においては、図６（ｂ）に示すように、カバーフィルム４０が基材シート１０から持ち上げられている。
(Supply process)
Next, as shown in FIG. 6 (b), a supplying step of supplying the test solution 35 </ b> A onto the culture layer 30 of the microorganism culture device 1 is performed. The test liquid 35A is a liquid that is a target for confirming the presence of microorganisms or measuring the number of microorganisms. The test solution 35A is supplied as a lump to a part of the culture layer 30, for example. In the supplying step, the cover film 40 is lifted from the base sheet 10 as shown in FIG.
（被覆工程）
次に、微生物培養具１の培養層３０および枠体２０を、微生物培養具１のカバーフィルム４０を用いて覆う被覆工程を実施する。例えば図６（ｃ）に示すように、接合部２５を軸としてカバーフィルム４０を基材シート１０に向けて変位させる。このとき、カバーフィルム４０の下面が被検液３５Ａに接触する。被検液３５Ａは、カバーフィルム４０と接触することによって、培養層３０上で拡がっていく。これによって、図６（ｄ）に示すように、被検液３５Ａを培養層３０の全域に行き渡らせることができる。ここで本実施の形態によれば、培養層３０は、培養層３０よりも大きい厚み（高さ）を有する枠体２０によって囲われている。このため、被検液３５Ａが基材シート１０上に洩れてしまうことを抑制しながら、被検液３５Ａを培養層３０の全域に迅速に行き渡らせることができる。このようにして、培養層３０に被検液３５Ａを接種することができる。なお、以下の説明において、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１を符号１Ａで示すこともある。
(Coating process)
Next, a covering step of covering the culture layer 30 and the frame 20 of the microorganism culture tool 1 with the cover film 40 of the microorganism culture tool 1 is performed. For example, as shown in FIG. 6C, the cover film 40 is displaced toward the base sheet 10 with the joint portion 25 as an axis. At this time, the lower surface of the cover film 40 comes into contact with the test liquid 35A. The test liquid 35 </ b> A spreads on the culture layer 30 by contacting the cover film 40. As a result, as shown in FIG. 6 (d), the test solution 35 A can be spread over the entire culture layer 30. Here, according to the present embodiment, the culture layer 30 is surrounded by the frame body 20 having a larger thickness (height) than the culture layer 30. For this reason, the test liquid 35A can be quickly spread throughout the culture layer 30 while suppressing the test liquid 35A from leaking onto the base sheet 10. In this way, the culture solution 30 can be inoculated with the test solution 35A. In the following description, the microorganism culture tool 1 inoculated with the test solution 35A may be indicated by reference numeral 1A.
（搬送工程）
次に、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１Ａを作業領域５ａから保管領域５ｂに搬送する搬送工程を実施する。例えば指を用いて作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることによって、図７において矢印で示されているように、微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送する。
(Conveying process)
Next, a carrying step of carrying the microorganism culture tool 1A inoculated with the test solution 35A from the work area 5a to the storage area 5b is performed. For example, by dragging the microorganism culture tool 1A on the work table 5 using a finger, the microorganism culture tool 1A is transported to the storage area 5b as indicated by an arrow in FIG.
保管領域５ｂに搬送された微生物培養具１Ａは、培養層３０がゲル化した後、孵卵器に入れられる。孵卵器において所定の時間にわたって微生物を培養した後、微生物培養具１Ａを孵卵器から取り出し、発生したコロニーの状態を観察する。このようにして、被検液３５Ａに含まれる微生物を検査することができる。微生物培養具１Ａを孵卵器に入れる時間は、被検液３５Ａや培養層３０の種類に応じて適宜設定されるが、例えば３５度で４８時間に設定される。 The microorganism culture tool 1A conveyed to the storage area 5b is placed in an incubator after the culture layer 30 is gelled. After culturing the microorganisms for a predetermined time in the incubator, the microorganism culture tool 1A is taken out of the incubator and the state of the generated colonies is observed. In this manner, microorganisms contained in the test liquid 35A can be tested. The time for putting the microorganism culture device 1A into the incubator is appropriately set according to the type of the test solution 35A and the culture layer 30, but is set to, for example, 35 hours and 48 hours.
ここで本発明によれば、培養層３０のゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含んでおり、また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部は、ゲル化剤におけるサイリウムシードガムの重量部以上となっている。このため、培養層３０は、十分な培養性能だけでなく、微生物を観察する際の視認性を備えることができる。このことにより、被検液３５Ａに含まれる微生物を正確に検査することができる。 Here, according to the present invention, the gelling agent of the culture layer 30 contains at least guar gum and psyllium seed gum, and the weight part of guar gum in the gelling agent is the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent. That's it. For this reason, the culture layer 30 can have not only sufficient culture performance but also visibility when observing microorganisms. Thereby, the microorganisms contained in the test liquid 35A can be accurately inspected.
また本実施の形態によれば、培養層３０は、グリセリンなどの可塑剤を含んでおり、また、培養層３０の固形分の全体に対する可塑剤の重量％は、１０〜１５％の範囲内となっている。このため、微生物の培養特性や視認性が低下してしまうことを抑制しながら、基材シート１０がカールしてしまうことを抑制することができる。 Moreover, according to this Embodiment, the culture layer 30 contains plasticizers, such as glycerol, and the weight% of the plasticizer with respect to the whole solid content of the culture layer 30 is in the range of 10-15%. It has become. For this reason, it can suppress that the base material sheet 10 curls, suppressing the culture | cultivation characteristic and visibility of microorganisms falling.
なお、上述した実施の形態に対して様々な変更を加えることが可能である。以下、図面を参照しながら、変形の一例について説明する。以下の説明および以下の説明で用いる図面では、上述した実施の形態と同様に構成され得る部分について、上述の実施の形態における対応する部分に対して用いた符号と同一の符号を用いることとし、重複する説明を省略する。 Note that various modifications can be made to the above-described embodiment. Hereinafter, an example of modification will be described with reference to the drawings. In the following description and the drawings used in the following description, the same reference numerals as those used for the corresponding parts in the above embodiment are used for the parts that can be configured in the same manner as in the above embodiment. A duplicate description is omitted.
カバーフィルムの変形例
上述の本実施の形態においては、図１に示すように、基材シート１０の法線方向から見た場合に、基材シート１０の各外縁１１，１２，１３，１４とカバーフィルム４０の各外縁４１，４２，４３，４４とがほぼ一致している例を示した。しかしながら、これに限られることはなく、カバーフィルム４０は、基材シート１０が培養層３０および枠体２０を覆う際、基材シート１０の上面の領域が少なくとも部分的に露出されるよう構成されていてもよい。例えば、基材シート１０の第１外縁１１から第２外縁１２に向かう方向を第１方向とするとき、第１方向におけるカバーフィルム４０の寸法は、図８および図９に示すように、第１方向における基材シート１０の寸法よりも小さくなっていてもよい。以下の記載において、基材シート１０の上面の領域のうちカバーフィルム４０によって覆われることなく露出している領域を露出領域１０Ａと称する。
Modification of Cover Film In the above-described embodiment, as shown in FIG. 1, when viewed from the normal direction of the base sheet 10, each outer edge 11, 12, 13, 14 of the base sheet 10 and An example in which the outer edges 41, 42, 43, and 44 of the cover film 40 substantially coincide with each other is shown. However, the present invention is not limited to this, and the cover film 40 is configured such that when the base sheet 10 covers the culture layer 30 and the frame body 20, the region of the upper surface of the base sheet 10 is at least partially exposed. It may be. For example, when the direction from the first outer edge 11 to the second outer edge 12 of the base sheet 10 is the first direction, the dimensions of the cover film 40 in the first direction are as shown in FIGS. It may be smaller than the dimension of the substrate sheet 10 in the direction. In the following description, a region exposed without being covered by the cover film 40 in the region of the upper surface of the base sheet 10 is referred to as an exposed region 10A.
本変形例によれば、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１Ａを作業領域５ａから保管領域５ｂに搬送する搬送工程の際、基材シート１０の露出領域１０Ａに上方から力を印加することによって、微生物培養具１Ａを搬送することができる。例えば、指を露出領域１０Ａに当接させ、そして指を用いて作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることによって、微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送する。この場合、指は基材シート１０の露出領域１０Ａにのみ当接し、カバーフィルム４０には接触しない。従って、カバーフィルム４０に対して応力が印加されることを防ぎながら、微生物培養具１Ａを移動させることができる。このため、ゲル化される前の培養層３０に、カバーフィルム４０を介して何らかの応力が印加されることがない。従って、培養層３０がゲル化することを待つことなく、微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送することができる。このことにより、検査に要する時間を短縮することができる。 According to this modification, a force is applied from above to the exposed area 10A of the base sheet 10 during the transporting process of transporting the microorganism culture tool 1A inoculated with the test liquid 35A from the work area 5a to the storage area 5b. Therefore, the microorganism culture tool 1A can be transported. For example, the microorganism culture tool 1A is conveyed to the storage area 5b by bringing the finger into contact with the exposed area 10A and dragging the microorganism culture tool 1A on the work table 5 using the finger. In this case, the finger contacts only the exposed area 10 </ b> A of the base sheet 10 and does not contact the cover film 40. Accordingly, the microorganism culture tool 1A can be moved while preventing stress from being applied to the cover film 40. For this reason, any stress is not applied to the culture layer 30 before gelation via the cover film 40. Therefore, the microorganism culture tool 1A can be transported to the storage area 5b without waiting for the culture layer 30 to gel. As a result, the time required for the inspection can be shortened.
若しくは、図示はしないが、第１方向におけるカバーフィルム４０の寸法は、第１方向における基材シート１０の寸法よりも大きくなっていてもよい。例えば、カバーフィルム４０の第２外縁４２が基材シート１０の第２外縁１２よりも外方に位置するよう、カバーフィルム４０が基材シート１０の第２外縁１２を超えて延びていてもよい。これによって、上述の供給工程において、カバーフィルム４０をめくり上げる際、カバーフィルム４０の第２外縁１２近傍の領域が掴みやすいものとなる。従って、供給工程を容易化することができる。 Or although not shown in figure, the dimension of the cover film 40 in a 1st direction may be larger than the dimension of the base material sheet 10 in a 1st direction. For example, the cover film 40 may extend beyond the second outer edge 12 of the base sheet 10 so that the second outer edge 42 of the cover film 40 is positioned outward from the second outer edge 12 of the base sheet 10. . Thereby, when the cover film 40 is turned up in the above-described supplying step, the area in the vicinity of the second outer edge 12 of the cover film 40 is easily grasped. Accordingly, the supply process can be facilitated.
また上述の本実施の形態および変形例において、カバーフィルム４０の一部分を基材シート１０の一部分に接合する接合部２５が設けられる例を示した。しかしながら、これに限られることはなく、接合部２５を設けることなく微生物培養具１を構成してもよい。すなわち、カバーフィルム４０が基材シート１０に対して接合されていなくてもよい。例えば図１０に示すように、カバーフィルム４０は、被覆工程の際に準備される独立した部材であってもよい。本変形例においても、カバーフィルム４０が被検液３５Ａに接触することにより、被検液３５Ａを培養層３０の全域に行き渡らせることができる。 Moreover, in this Embodiment and the above-mentioned modification, the example provided with the junction part 25 which joins a part of cover film 40 to a part of base material sheet 10 was shown. However, it is not restricted to this, You may comprise the microorganism culture tool 1 without providing the junction part 25. FIG. That is, the cover film 40 may not be bonded to the base sheet 10. For example, as shown in FIG. 10, the cover film 40 may be an independent member prepared in the covering process. Also in this modification, the test solution 35A can be spread over the entire culture layer 30 by the cover film 40 coming into contact with the test solution 35A.
また上述の本実施の形態において、カバーフィルム４０の基材シート１０側の面が、撥水性を有する撥水層４８から構成されている例を示した。しかしながら、カバーフィルム４０に含まれる基材４６自体が撥水性を有する場合、図１１に示すように、カバーフィルム４０の基材シート１０側の面が基材４６によって構成されていてもよい。この場合、図１１に示すように、基材４６の面のうち基材シート１０とは反対側に位置する面の上に印刷層４７が設けられていてもよい。例えば、撥水性を有する基材としてはポリプロピレン樹脂、ポリアミド樹脂などが挙げられる。 Further, in the above-described embodiment, the example in which the surface of the cover film 40 on the base sheet 10 side is configured by the water-repellent water-repellent layer 48 is shown. However, when the base material 46 itself included in the cover film 40 has water repellency, the base film 10 side surface of the cover film 40 may be constituted by the base material 46 as shown in FIG. In this case, as shown in FIG. 11, the print layer 47 may be provided on the surface of the base material 46 that is located on the side opposite to the base material sheet 10. For example, the base material having water repellency includes polypropylene resin, polyamide resin, and the like.
また、カバーフィルム４０のうち少なくとも第２外縁４２を含む領域の色と、基材シート１０のうち平面図で見た場合に上記第２外縁４２を含む領域に隣接する領域の色と、が異なっていてもよい。例えば図１２に示すように、カバーフィルム４０のうち第２外縁４２を含むよう第２外縁４２に沿って延びる、符号４０Ｃで示される領域を、基材シート１０とは異なる色で着色された着色領域４０Ｃとしてもよい。これによって、カバーフィルム４０をめくり上げる際に基材シート１０とカバーフィルム４０との境界が認識され易くなり、このことにより、カバーフィルム４０を、より掴み易いものとすることができる。 Further, the color of the region including at least the second outer edge 42 in the cover film 40 is different from the color of the region adjacent to the region including the second outer edge 42 when viewed in plan view in the base sheet 10. It may be. For example, as shown in FIG. 12, a color indicated by a reference numeral 40 </ b> C extending along the second outer edge 42 so as to include the second outer edge 42 in the cover film 40 is colored with a color different from that of the base sheet 10. The region 40C may be used. Accordingly, when the cover film 40 is turned up, the boundary between the base sheet 10 and the cover film 40 is easily recognized, and thus the cover film 40 can be more easily grasped.
なお、上述した実施の形態に対するいくつかの変形例を説明してきたが、当然に、複数の変形例を適宜組み合わせて適用することも可能である。 In addition, although some modified examples with respect to the above-described embodiment have been described, naturally, a plurality of modified examples can be applied in combination as appropriate.
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail using an Example, this invention is not limited to this Example.
（実施例１）
基材シート１０として、合成樹脂を主原料とした合成紙（ユポ・コーポレーション製、ユポ）を準備した。基材シート１０の厚みは２７０μｍであり、基材シート１０の長さ（第１外縁１１から第２外縁１２までの寸法）は９０ｍｍであり、基材シート１０の幅（第３外縁１３から第４外縁１４までの寸法）は７２ｍｍであった。
Example 1
As the base sheet 10, a synthetic paper (manufactured by YUPO Corporation, YUPO) using a synthetic resin as a main raw material was prepared. The thickness of the base sheet 10 is 270 μm, the length of the base sheet 10 (the dimension from the first outer edge 11 to the second outer edge 12) is 90 mm, and the width of the base sheet 10 (from the third outer edge 13 to the second outer edge 13). 4 to the outer edge 14) was 72 mm.
基材シート１０の上面に、エチレン酢酸ビニル系のホットメルト樹脂からなる円形状の枠体２０を設けた。枠体２０の幅（枠体２０の外縁と内縁との間の間隔）は１ｍｍであり、枠体２０の内径（内縁によって形成される円の直径）は５０ｍｍであり、枠体２０の高さは７５０μｍであった。 A circular frame 20 made of an ethylene vinyl acetate-based hot melt resin was provided on the upper surface of the base sheet 10. The width of the frame body 20 (interval between the outer edge and the inner edge of the frame body 20) is 1 mm, the inner diameter of the frame body 20 (diameter of a circle formed by the inner edge) is 50 mm, and the height of the frame body 20 Was 750 μm.
基材シート１０の上面であって、枠体２０によって囲まれた領域内に、培養層３０を形成するための培地液３０Ａを塗布した。培地液３０Ａは、ゲル化剤、栄養成分、固着剤および可塑剤を含む固形分と、溶剤とから構成されていた。各成分の内訳は以下の通りであった。
ゲル化剤：グアーガム：サイリウムシードガムを７：３質量部で混合したもの
栄養成分：たんぱく質、糖類、無機塩類
固着剤：ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）
可塑剤：グリセリン
溶剤：メタノール
また、培地液３０Ａに含まれる固形分の主要な成分の重量は以下の通りであった。
ゲル化剤＋栄養成分＋ＰＶＰ：２８１．２ｇ
グリセリン：３６．０ｇ
グリセリンの、培地液３０Ａの固形分の全体に対する重量％は１１％であった。また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比は７：３であった。
A medium solution 30 </ b> A for forming the culture layer 30 was applied to the upper surface of the substrate sheet 10 and in the region surrounded by the frame body 20. The medium solution 30A was composed of a solid content including a gelling agent, a nutrient component, a fixing agent and a plasticizer, and a solvent. The breakdown of each component was as follows.
Gelling agent: Guar gum: 7: 3 parts by mass of psyllium seed gum Nutritional component: Protein, sugar, inorganic salt Fixing agent: Polyvinylpyrrolidone (PVP)
Plasticizer: Glycerin Solvent: Methanol Also, the weight of the main component of the solid content contained in the medium solution 30A was as follows.
Gelling agent + nutrient component + PVP: 281.2g
Glycerin: 36.0g
The weight percent of glycerin relative to the total solid content of the medium 30A was 11%. Moreover, the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent was 7: 3.
塗布した培地液３０Ａを乾燥させ、これによって、基材シート１０の上に培養層３０を形成した。得られた培養層３０の厚みは２５０μｍであった。 The applied medium solution 30A was dried, whereby the culture layer 30 was formed on the base sheet 10. The thickness of the obtained culture layer 30 was 250 μm.
基材シート１０の上面に、基材シート１０の第１外縁１１に沿って、長さ６ｍｍ、幅７２ｍｍの両面テープからなる接合部２５を設けた。 On the upper surface of the base sheet 10, a joining portion 25 made of a double-sided tape having a length of 6 mm and a width of 72 mm was provided along the first outer edge 11 of the base sheet 10.
次に、カバーフィルム４０として、基材４６、印刷層４７および撥水層４８を有するカバーフィルム４０（図４参照）を準備した。基材４６は、厚み４０μｍの透明な配向ポリプロピレンから構成されていた。印刷層４７における枡目線４０ａの間隔は１０ｍｍとした。撥水層４８は、ポリアミドを主成分とした樹脂から構成されていた。カバーフィルム４０の長さ（第１外縁４１から第２外縁４２までの寸法）は９５ｍｍであり、幅（第３外縁４３から第４外縁４４までの寸法）は７２ｍｍであった。次に、カバーフィルム４０の第１外縁４１近傍の部分を、接合部２５を介して基材シート１０に接合した。このようにして、微生物培養具１を作製した。 Next, as the cover film 40, a cover film 40 (see FIG. 4) having a substrate 46, a printed layer 47, and a water repellent layer 48 was prepared. The base material 46 was made of transparent oriented polypropylene having a thickness of 40 μm. The spacing between the grid lines 40a in the printed layer 47 was 10 mm. The water repellent layer 48 was made of a resin mainly composed of polyamide. The length of the cover film 40 (the dimension from the first outer edge 41 to the second outer edge 42) was 95 mm, and the width (the dimension from the third outer edge 43 to the fourth outer edge 44) was 72 mm. Next, the portion in the vicinity of the first outer edge 41 of the cover film 40 was bonded to the base sheet 10 via the bonding portion 25. Thus, the microorganism culture tool 1 was produced.
（実施例２）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を６：４としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
(Example 2)
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 1 except that the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent was 6: 4.
（実施例３）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を５：５としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
(Example 3)
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 1 except that the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent was 5: 5.
（実施例４）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を８：２としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
Example 4
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 1 except that the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent was 8: 2.
（比較例１）
ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を４：６としたこと以外は、実施例１と同様にして、微生物培養具１を作製した。
(Comparative Example 1)
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 1, except that the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent was 4: 6.
（実施例５）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を１０％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
(Example 5)
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 2 except that the weight percent of glycerin relative to the entire solid content of the medium 30A was 10%.
（実施例６）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を１５％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
(Example 6)
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 2 except that the weight percent of glycerin relative to the entire solid content of the medium 30A was 15%.
（比較例２）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を８％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
(Comparative Example 2)
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 2 except that the weight percentage of glycerin relative to the entire solid content of the medium 30A was 8%.
（比較例３）
培地液３０Ａの固形分の全体に対するグリセリンの重量％を２０％としたこと以外は、実施例２と同様にして、微生物培養具１を作製した。
(Comparative Example 3)
A microorganism culture device 1 was produced in the same manner as in Example 2 except that the weight percentage of glycerin relative to the entire solid content of the medium 30A was 20%.
＜＜培養性能評価＞＞
実施例１乃至４および比較例１で得られた微生物培養具１を用いて、各微生物培養具１における、被検液中の菌を培養する性能を評価した。まず、被検液３５Ａとして、好気性細菌であるProteus mirabilisの濃度１００〜１５０ｃｆｕ／ｍｌの菌液を準備した。次に、実施例１乃至４および比較例１で得られた各微生物培養具１の培養層３０の上に１ｍｌの被検液３５Ａを供給した。その後、枠体２０および培養層３０の上にカバーフィルム４０を被せ、これによって、培養層３０の全域に被検液３５Ａを拡げた。培養層３０がゲル化した後、被検液３５Ａが接種された微生物培養具１Ａを孵卵器に入れ、４８時間にわたって３５度で菌を培養した。その後、培養された菌の数を測定し、これによって各微生物培養具１の培養性能を評価した。
<< Culture performance evaluation >>
Using the microorganism culture device 1 obtained in Examples 1 to 4 and Comparative Example 1, the performance of cultivating the bacteria in the test solution in each microorganism culture device 1 was evaluated. First, as a test solution 35A, a bacterial solution having a concentration of 100 to 150 cfu / ml of Proteus mirabilis, which is an aerobic bacterium, was prepared. Next, 1 ml of the test solution 35A was supplied onto the culture layer 30 of each microorganism culture device 1 obtained in Examples 1 to 4 and Comparative Example 1. Thereafter, the cover film 40 was placed on the frame 20 and the culture layer 30, thereby spreading the test solution 35 </ b> A over the entire culture layer 30. After the culture layer 30 was gelled, the microorganism culture tool 1A inoculated with the test solution 35A was placed in an incubator, and the bacteria were cultured at 35 degrees for 48 hours. Thereafter, the number of cultured bacteria was measured, and thereby the culture performance of each microorganism culture device 1 was evaluated.
培養性能の評価は、比較のために実施した、寒天平板混釈法を用いて同一の被検液中の菌を培養した場合に観察された菌の数に基づいてなされた。具体的には、寒天平板混釈法の場合の菌数の８０％以上の菌数が観察された場合をレベル１とし、７０％以上の菌数が観察された場合をレベル２とし、７０％未満の菌数が観察された場合をレベル３とした。評価結果を表１に示す。 The evaluation of the culture performance was made based on the number of bacteria observed when the bacteria in the same test solution were cultured using the agar plate mixing method, which was carried out for comparison. Specifically, the level 1 is the case where 80% or more of the number of bacteria in the agar plate pour method is observed, the level 2 is the case where the number of bacteria is 70% or more, 70% Level 3 was observed when less than the number of bacteria was observed. The evaluation results are shown in Table 1.
＜＜視認性評価＞＞
実施例１乃至６および比較例１乃至３で得られた微生物培養具１を用いて、上述の培養性能評価の場合と同様にして、被検液３５Ａ中の菌を培養した。次に、発色指示薬に反応して発色したコロニーを目視で観察し、各コロニーを視認できるかどうか、すなわち計数できるかどうかを確認した。発色指示薬としては、ＴＴＣを用いた。このＴＴＣは、カバーフィルム４０の下面に設けられていた。確認結果に基づいて、各微生物培養具１の視認性を、レベル１〜３で評価した。評価結果を表１および表２に示す。
<< Visibility evaluation >>
Using the microorganism culture device 1 obtained in Examples 1 to 6 and Comparative Examples 1 to 3, the bacteria in the test solution 35A were cultured in the same manner as in the above-described culture performance evaluation. Next, colonies that developed color in response to the coloring indicator were visually observed to confirm whether each colony was visible, that is, whether it could be counted. TTC was used as the color development indicator. This TTC was provided on the lower surface of the cover film 40. Based on the confirmation results, the visibility of each microorganism culture device 1 was evaluated at levels 1 to 3. The evaluation results are shown in Tables 1 and 2.
なお、上述のレベル１〜３は、ガス産生菌によって発生したガス５１とコロニー５０とが重なることによって視認性が阻害されている程度、若しくは、培養層３０に発生している滲み５２によって視認性が阻害されている程度に基づいて決定された。図１３に、ガス５１の程度とレベル１〜３との関係についての指標を示す。図１３に示されている３つの画像のうち、左側の画像が、ガス５１に起因する視認性の阻害がほとんど生じていない、レベル１として評価される例であり、中央の画像が、ガス５１に起因する視認性の阻害が若干生じている、レベル２として評価される例であり、右側の画像が、ガス５１に起因する視認性の阻害が著しく生じている、レベル３として評価される例である。また図１４に、滲み５２の程度とレベル１〜３との関係についての指標を示す。図１４に示されている３つの画像のうち、左側の画像が、滲み５２に起因する視認性の阻害がほとんど生じていない、レベル１として評価される例であり、中央の画像が、滲み５２に起因する視認性の阻害が若干生じている、レベル２として評価される例であり、右側の画像が、滲み５２に起因する視認性の阻害が著しく生じている、レベル３として評価される例である。 In addition, the above-mentioned levels 1 to 3 are such that the visibility is hindered by the overlap of the gas 51 generated by the gas-producing bacteria and the colony 50 or the bleeding 52 generated in the culture layer 30. Was determined based on the degree of inhibition. FIG. 13 shows an index about the relationship between the degree of the gas 51 and the levels 1 to 3. Among the three images shown in FIG. 13, the image on the left is an example evaluated as level 1 in which there is almost no inhibition of visibility due to the gas 51, and the center image is the gas 51. This is an example evaluated as level 2 in which the visibility hindrance caused by the gas is slightly generated, and the right image is evaluated as level 3 in which the hindrance in the visibility due to the gas 51 is significantly generated. It is. FIG. 14 shows an index about the relationship between the degree of bleeding 52 and levels 1 to 3. Of the three images shown in FIG. 14, the image on the left is an example evaluated as level 1 in which the visibility hindrance due to the blur 52 hardly occurs, and the center image is the blur 52. This is an example evaluated as level 2 in which the visibility hindrance is slightly caused by the image, and the image on the right side is evaluated as level 3 in which the visibility hindrance is significantly caused by the blur 52. It is.
＜＜反り評価＞＞
実施例２，５，６および比較例２，３で得られた微生物培養具１について、基材シート１０の反り（カール）の程度を評価した。具体的には、微生物培養具１を作業台５上に載置し、このとき、微生物培養具１の基材シート１０の各外縁１１，１２，１３，１４のうち作業台５から最も浮き上がっている外縁について、作業台５の上面からの距離を測定した。結果を表２に示す。なおカールが生じる原因としては、培養層３０と基材シート１０との熱収縮率の差や、培地液３０Ａや被検液３５Ａ中の溶媒が蒸発することに起因する培養層３０の収縮などが考えられる。
<< Warpage evaluation >>
The degree of warpage (curl) of the substrate sheet 10 was evaluated for the microorganism culture devices 1 obtained in Examples 2, 5, and 6 and Comparative Examples 2 and 3. Specifically, the microorganism culture tool 1 is placed on the work table 5, and at this time, among the outer edges 11, 12, 13, and 14 of the base material sheet 10 of the microorganism culture tool 1, the microorganism culture tool 1 floats most from the work table 5. For the outer edge, the distance from the upper surface of the work table 5 was measured. The results are shown in Table 2. The causes of curling include a difference in thermal contraction rate between the culture layer 30 and the base sheet 10, and contraction of the culture layer 30 due to evaporation of the solvent in the medium solution 30A and the test solution 35A. Conceivable.
微生物培養具１Ａを保管領域５ｂへ搬送する方法の１つとして、微生物培養具１Ａの外縁近傍に上方から力を印加しながら作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることが考えられる。また上述の変形例のように基材シート１０に露出領域１０Ａが形成されている場合、露出領域１０Ａに上方から力を印加しながら作業台５上で微生物培養具１Ａを引きずることも考えられる。従って、仮に基材シート１０の外縁におけるカールが大きいと、微生物培養具１Ａを引きずる際に微生物培養具１Ａが浮き上がったり傾いたりしてしまうことが考えられる。従って、カールの量は、一定の限度、例えば３ｍｍを超えないことが好ましい。 As one method for transporting the microorganism culture tool 1A to the storage area 5b, it is conceivable to drag the microorganism culture tool 1A on the work table 5 while applying a force from above to the vicinity of the outer edge of the microorganism culture tool 1A. Further, when the exposed region 10A is formed on the base sheet 10 as in the above-described modified example, it is conceivable to drag the microorganism culture tool 1A on the work table 5 while applying a force to the exposed region 10A from above. Therefore, if the curl at the outer edge of the base material sheet 10 is large, it is conceivable that the microorganism culturing tool 1A is lifted or inclined when the microorganism culturing tool 1A is dragged. Therefore, it is preferable that the amount of curl does not exceed a certain limit, for example 3 mm.
表１に示されているように、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を７：３〜５：５の範囲内とした場合、培養性能および視認性の両方をレベル２以上にすることができた。一方、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を８：２にした場合、視認性がレベル３に低下した。グアーガムの比率が高くなることにより、培養層３０が脆くなり、この結果、菌から生じるガス５１によって培養層３０が部分的に裂けてしまったことが考えられる。また、ゲル化剤におけるグアーガムの重量部とサイリウムシードガムの重量部との比を４：６にした場合、培養性能がレベル３に低下した。サイリウムシードガムの比率が高くなることにより、培養層３０の弾性率が向上したため菌が発育しにくくなったと考えられる。 As shown in Table 1, when the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent is within the range of 7: 3 to 5: 5, both culture performance and visibility Could be level 2 or higher. On the other hand, when the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent was 8: 2, the visibility decreased to level 3. As the ratio of guar gum increases, the culture layer 30 becomes brittle. As a result, it is considered that the culture layer 30 is partially broken by the gas 51 generated from the bacteria. In addition, when the ratio of the weight part of guar gum to the weight part of psyllium seed gum in the gelling agent was 4: 6, the culture performance was lowered to level 3. It is thought that the increase in the ratio of the psyllium seed gum improved the elastic modulus of the culture layer 30 and made it difficult for the bacteria to grow.
表２に示されているように、培地液３０Ａの固形分、すなわち培養層３０の全固形分に対するグリセリンの固形分の比率を１０〜１５重量％とした場合、カールを３ｍｍ以下にするとともに、視認性の両方をレベル２以上にすることができた。一方、培養層３０の全固形分に対するグリセリンの固形分の比率を８重量％にした場合、カールが３．４ｍｍとなった。グリセリンの重量％が低くなることにより、培養層３０の柔軟性が低くなり、この結果、培養層３０が収縮し易くなったことが考えられる。また、培養層３０の全固形分に対するグリセリンの固形分の比率を２０重量％にした場合、認性がレベル３に低下した。グリセリンの比率が高くなることにより、培養層３０に滲み５２が生じ易くなったことが考えられる。 As shown in Table 2, when the solid content of the medium solution 30A, that is, the ratio of the solid content of glycerin to the total solid content of the culture layer 30 is 10 to 15% by weight, the curl is set to 3 mm or less, Both visibility could be level 2 or higher. On the other hand, when the ratio of the solid content of glycerin to the total solid content of the culture layer 30 was 8% by weight, the curl was 3.4 mm. It is conceivable that the lower the weight percent of glycerin, the lower the flexibility of the culture layer 30 and, as a result, the culture layer 30 easily contracts. In addition, when the ratio of the solid content of glycerin to the total solid content of the culture layer 30 was 20% by weight, the acceptability decreased to level 3. It is conceivable that bleeding 52 is likely to occur in the culture layer 30 by increasing the ratio of glycerin.
１，１Ａ 微生物培養具
１０ 基材シート
２０ 枠体
２５ 接合部
３０ 培養層
３０Ａ 培地液
３５Ａ 被検液
４０ カバーフィルム
４０Ｃ 着色領域
４６ 基材
４７ 印刷層
４８ 撥水層
５０ コロニー
５１ ガス
５２ 滲み
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1,1A Microorganism culture tool 10 Base material sheet 20 Frame body 25 Joint part 30 Culture layer 30A Medium solution 35A Test liquid 40 Cover film 40C Coloring region 46 Base material 47 Print layer 48 Water-repellent layer 50 Colony 51 Gas 52 Bleeding
Claims (3)
前記基材シートの上面に設けられ、微生物を培養するよう構成された培養層と、
前記培養層を覆うことができるカバーフィルムと、を備え、
前記培養層は、少なくともゲル化剤および栄養成分を有し、
前記ゲル化剤は、少なくともグアーガムおよびサイリウムシードガムを含み、
前記ゲル化剤における前記グアーガムの重量部と前記サイリウムシードガムの重量部との比が、７：３〜５：５の範囲内である、微生物培養具。 A base sheet;
A culture layer provided on an upper surface of the base sheet and configured to culture microorganisms;
A cover film capable of covering the culture layer,
The culture layer has at least a gelling agent and a nutrient component,
The gelling agent includes at least guar gum and psyllium seed gum,
The microorganism culture device in which the ratio of the weight part of the guar gum to the weight part of the psyllium seed gum in the gelling agent is within the range of 7: 3 to 5: 5 .
前記培養層の固形分の全体に対する前記可塑剤の重量％が、１０〜１５％の範囲内である、請求項１に記載の微生物培養具。 The culture layer further includes a plasticizer,
The microorganism culture device according to claim 1 , wherein a weight percent of the plasticizer with respect to the total solid content of the culture layer is within a range of 10 to 15%.
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