JP5852653B2

JP5852653B2 - 退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤

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Publication number: JP5852653B2
Application number: JP2013526989A
Authority: JP
Inventors: フンスーヨー; コップラスシュルタ; ジンノース
Original assignee: ブレイントロピアカンパニーリミテッド; フンスーヨー
Priority date: 2010-09-03
Filing date: 2011-05-18
Publication date: 2016-02-03
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Description

本発明は、パーキンソン病、アルツハイマー型認知症（老人性認知症）、脳卒中、ルーゲーリック病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、脊髄小脳変性症、小脳萎縮症、多発性硬化症、外傷後ストレス障害、記憶喪失症などの退行性神経系脳疾患の予防又は治療のための薬剤に関するものである。

パーキンソン病、アルツハイマー型認知症、脳卒中などに代表される退行性神経系脳疾患は、神経細胞の損傷及び消失につながる細胞死がその窮極的原因であるものと知られている。例えば、パーキンソン病の場合には、中脳の黒質にあるドーパミン性神経細胞が選択的に消失することによって、運動機能組織に関与する基底核の機能異常をもたらし、持続的な震え、硬直、動作緩慢、姿勢不安定などの運動機能障害を誘発する（Nimi et al., Clinical and physiological characteristics of autonomic failure with Parkinson's disease. Clin Autonom res 9（1999）,139-144; Dawson et al., Molecular pathways of neurodegeneration in Parkinson's disease. Science（2003）, 819-822）。

退行性神経系脳疾患の神経細胞死の主な原因として、活性酸素が指摘されている。活性酸素とは、呼吸過程で体内に入った酸素が酸化過程に利用されることによって、様々な代謝過程で生成され、生体組織を攻撃して細胞を損傷させる酸化力の強い酸素をいう。このような活性酸素は、生体細胞内ＤＮＡ、細胞構成タンパク質、脂質などに不可逆的な損傷を与える（Valko et al., Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease. Int J Biochem Cell Biol. 39（2007）, 44-84）。特に、脳細胞で活性酸素が多く生成されると、それによる酸化ストレスが細胞内のミトコンドリアの構造及び機能に変化を起こすことによって、パーキンソン病、アルツハイマー型認知症などの神経系脳疾患をもたらすことになる（Knott et al., Mitochondrial fragmentation in neurodegeneration. Nat rev Neurosci., 9（2008）, 505-18）。

その他にも、最近、パーキンソン病を含む退行性神経系脳疾患において、興奮性脳神経伝達物質であるグルタミン酸（glutamate）及び異常蓄積されたタンパク質の役割についても研究結果が多数報告されている。グルタミン酸は、生理学的に重要な役割を果たすが、過量に分泌されると、神経細胞の損傷を引き起こし、パーキンソン病を含む退行性神経系脳疾患を引き起こす病因に関与するものと知られている（Samuel et al., Localization of N-methyl-D-aspartate receptors in the rat striatum: effects of specific lesions on the [3H] 3-（2-carboxypiperazin-4-yl）propyl-1-phosphonic acid binding. J Neurochem1型認知症990;54:1926-1933; Weihmuller et al., Elevated NMDA receptors in Parkinsonian striatum. Neuroreport 1992;3:997-980）。また、退行性神経系脳疾患に関して特徴的な異常タンパク質の蓄積を観察することができるが、例えばパーキンソン病の場合には、アルファシヌクレイン（α-synuclein）タンパク質がパーキンソン病の病理学的マーカーであるレビー小体を構成する主要成分であることが明らかとなった（Spillantini et al., Alpha-synuclein in Lewy bodies. Nature 388（1997）, 839-840）。このようなタンパク質は、それ自体が毒性を示し、活性酸素を生成させて間接的にも毒性を示して細胞死滅の原因となる。

現在、パーキンソン病の治療法がなく、単にドーパミン（dopamine）の前駆物質であるエルドーパ（L-dopa）又はドーパミン受容体促進剤が症状を好転させる薬剤として知られている。しかしながら、これら治療薬物も持続的なドーパミン性神経細胞の損失を抑制することができず、結局５〜６年以内にその効果も急激に減少し、運動障害を含む副作用が増加するため、疾病の後期にはオン−オフ（ｏｎ−ｏｆｆ）現象として知られているエルドーパの問題が急激に増大し、発病から１０〜１５年後には死亡に至る（Vautier S, Milane A, Fernandez C, Buyse M, Chacun H, Farinotti R, Interactions between antiparkinsonian drugs and ABCB1/P-glycoprotein at the blood-brain barrier in a rat brain endothelial cell model. Neurosci Lett. 442(2008), 19-23; Molecular mechanisms of 6-hydroxydopamine-induced cytotoxicity in PC12 cells: Involvement of hydrogen peroxide-dependent and -independent action. Free Radical Biology & Medicine 42(2007), 675-685）。

その一方で、パーキンソン病は、一般的に運動障害が代表的な症状と知られているが、自律神経系異常、感覚神経系障害、及び認知症を含む多様な程度の認知機能障害も観察される（Morris et al., Planning and spatial working memory in Parkinson's disease. J Neurol Neurosurg Psychiatry, (1988) 757-66; Robbins et al., Cognitive deficits in progressive supranuclear palsy, Parkinson's disease, and multiple system atrophy in tests sensitive to frontal lobe dysfunction. J Neurol Neurosurg Psychiatry, (1994) 79-88 ）。従来からパーキンソン病は、主に運動障害を示す疾患とみなされてきたため、認知機能障害については軽視され、あまり評価されてこなかったことが事実である。しかしながら、現在は、進行されたパーキンソン病患者からみられる認知機能障害や認知症の発現は、核心的な特徴ではないが、パーキンソン病にみられる明らかな異常所見とみなされている（Emre, Dementia associated with Parkinson's disease. Lancet Neurol., (2003) 229-37; Emre, Dementia in Parkinson's disease: cause and treatment. Curr Opin Neurol., (2004) 399-404 ）。実際には、約２０〜４０％のパーキンソン病患者から認知症が同時に発症しており、認知症の発症率が健康なヒトの６倍に達するものと知られている（Mortimer et al., Relationship of motor symptoms to intelectual deficits in Parkinson's disease. Neurology, (1982) 133-7; Emre, Dementia associated with Parkinson's disease. Lancet Neurol., (2003) 229-37）。

しかしながら、様々な研究によって、パーキンソン病による認知症において、認知機能の好転のためのエルドーパの投与には限界があると報告されている。覚醒及び感情に対する肯定的な作用と共にドーパミン性神経伝達による情報処理過程とワーキングメモリなどで一部有用な効果を示すだけであり、窮極的な認知機能の低下を遅延させることはできないものと知られている（Pillon et al., Cognitive deficits and dementia in Parkinson's disease. 2 ed. Amsterdam; Elsevier Science; 2001）。

従って、パーキンソン病の正確な分子レベルでの病理機序に基づいて疾病の進行過程を予防するか、或いは遅延させることができる神経保護治療剤の開発と共にパーキンソン病の認知症の症状及び各種退行性神経系脳疾患を改善することができる薬物の開発が至急な実情である。

本発明者は、パーキンソン病のような退行性神経系脳疾患の予防又は治療のための研究を繰り返し行った結果、有効成分としての化学式１で示す化合物が、強力な活性酸素除去効果と、神経細胞保護効果と、運動障害の改善及び減退した記憶力の増進効果とを有することを確認し、これに基づいて本発明を完成するに至った。

本発明は、パーキンソン病及びこれと共通する病理機序を有するアルツハイマー型認知症又はルーゲーリック病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、脊髄小脳変性症、小脳萎縮症、多発性硬化症、神経細胞の消失によって発生する老人性認知症、脳卒中、外傷後ストレス障害、記憶喪失症のような退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤を提供することをその目的としている。

前記目的を果たすために、下記化学式１で示す化合物からなる退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤を提供する。

（式中、Ｒは、炭素数１乃至２のアルキル基である。）

前記化学式１で示す化合物は、メチルパラベン及びエチルパラベンからなる群から選択される１種以上であってもよい。

前記化学式１で示す化合物は、メチルパラベンであることが好ましい。

本発明による薬剤は、化学式１で示す化合物からなり、活性酸素を除去する抗酸化効果、アルファシヌクレイン及び活性酸素、興奮性神経伝達物質による細胞死滅の抑制、運動障害の改善、並びに減退した記憶力の増進に有用な効果がある。

また、本発明の薬剤は、パーキンソン病及びこれと共通する病理機序を有するアルツハイマー型認知症又はルーゲーリック病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、脊髄小脳変性症、小脳萎縮症、多発性硬化症、神経細胞の消失によって発生する老人性認知症、脳卒中、外傷後ストレス障害、記憶喪失症のような退行性神経系脳疾患の予防又は治療に有用である。

メチルパラベンをＨＰＬＣで分析したグラフである。メチルパラベンの濃度による活性酸素の量をＥＳＲ分光計で測定したグラフである。メチルパラベンの濃度による活性酸素阻害能を示すグラフである。メチルパラベンの活性酸素に対する細胞保護効果を示すグラフである。メチルパラベンの興奮性脳神経伝達物質に対する細胞保護効果を示すグラフである。メチルパラベンのアルファシヌクレインに対する細胞保護効果を示すグラフである。メチルパラベンの投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）による運動障害の改善効果（手術１週目及び２週目）を示すグラフである。メチルパラベンの投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）による回転運動障害の改善効果を示すグラフである。メチルパラベンの投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）による記憶増進効果（Ｙ字迷路試験）を示すグラフである。メチルパラベンの投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）による記憶増進効果（受動的回避試験）を示すグラフである。

本発明は、活性酸素除去、神経細胞保護、運動障害の改善、及び減退した記憶力の増進効果を有する化学式１で示すパラベンを含む、パーキンソン病、アルツハイマー型認知症、脳卒中、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、脊髄小脳変性症、小脳萎縮症、多発性硬化症、外傷後ストレス障害、記憶喪失症などの退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤に関するものである。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明の退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤は、下記化学式１で示す化合物からなることを特徴とする。

（式中、Ｒは、炭素数１乃至２のアルキル基である。）

化学式１で示す化合物はパラベン（paraben）化合物であって、パラベン（paraben）はパラヒドロキシ安息香酸エステル（p-hydroxybenzoate）とも称され、これまでは人体に害を及ぼさない水準の濃度で、その微生物生育の抑制効果に基づいて、食品類（ジャム類、醤油、酢、飲料、ソース、果実、野菜など）、医薬品類又は化粧品類の保存剤或いは防腐剤として用いられていた。

しかしながら、本発明では、化学式１で示す化合物、すなわちパラベン化合物は、新たな作用及び効果（活性酸素を除去する抗酸化効果、アルファシヌクレイン、活性酸素及び興奮性神経伝達物質による細胞死滅の抑制効果、神経細胞保護効果、運動障害の改善及び減退した記憶力の増進効果）によって退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤の唯一の有効成分として適用される。

化学式１で示す化合物は、それぞれ下記化学式２乃至７で示すメチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、イソプロピルパラベン、イソブチルパラベンであることが好ましく、化学式２のメチルパラベンがさらに好ましい。これらは、単独又は２種以上混合して用いることができる。

化学式１で示す化合物は、特定の方法で得られたものである必要はない。例えば、フェノールと二酸化炭素とを高温、高圧で反応させた後、反応物をアルコールでエステル化して合成したものであってもよく、三枝九葉草（Epimedium Koreanum Nakai）又はブルーベリー（Vaccinium corymbosum）の抽出物から分離されたものであってもよい。

化学式１で示す化合物を天然物の抽出物から分離する方法は、特に限定されず、例えば乾燥した天然物を細かく粉砕した後、粉砕物の重量の約２〜２０倍のアルコール水溶液を用いて熱水抽出、冷浸抽出、超音波抽出、還流冷却抽出、薬湯器による抽出などの抽出方法によって溶媒抽出し、この溶媒抽出物を溶媒分画した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー処理する方法で分離することができる。

本発明では、化学式１で示す化合物としてシグマ社の製品を購入して用いてもよく、その他の様々な製薬会社の製品を購入して用いてもよい。

本発明の退行性神経系脳疾患は、パーキンソン病及びこれと共通する病理機序を有するアルツハイマー型認知症又はルーゲーリック病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、脊髄小脳変性症、小脳萎縮症、多発性硬化症、神経細胞の消失によって発生する老人性認知症、脳卒中、記憶喪失症及び外傷後ストレス障害などの退行性神経系脳疾患の中から選択される単独又は混合型疾患であり得る。

本発明の薬剤は、通常の方法を通じて製剤化することができる。例えば、製剤形態は、経口投与のための顆粒剤、散剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、錠剤、カプセル剤、トローチ剤又は丸剤であることがよく、非経口投与のための経皮吸収剤、ローション剤、軟膏剤、貼付剤、カタプラズマ剤、ペースト剤、懸濁剤、液剤、注射剤又は座剤であってもよい。

また、薬剤は、当分野において通常用いられる適切な担体又は賦形剤などをさらに含むことができる。担体としては、医薬的に許容可能なものであって、水、食塩水、溶液や懸濁液を形成するリン酸、酢酸、クエン酸、酒石酸及びその他の緩衝液のような緩衝液、天然又は合成生分解性重合体又は共重合体を含む液体、固体又は半固体担体を例示することができる。賦形剤としては、微細結晶セルロース、ラクトース、デンプン、炭酸カルシウム、糖、デキストロース、二塩基性リン酸カルシウム二水化物、三塩基性リン酸カルシウム、カオリン、マルトデキストリン又はマンニトールのような希釈剤と、アカシア、アルギン酸、カルボマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ゼラチン、グアーガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マルトデキストリン、メチルセルロース、ポリメタクリレート、ポビドン又はアルギン酸ナトリウムのような結合剤と、ゲル化されたデンプン、アルギン酸、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン又はナトリウムデンプングリコール酸塩のような崩壊剤と、アルコール、安息香酸ナトリウム、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール又はエチルレンジアミンテトラ酢酸のようなキレート剤及び酸化防止剤と、メチルパラベン又はプロピルパラベンのような抗菌剤と、グルコン酸、乳酸、クエン酸又は酢酸、グルコン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム又は酢酸ナトリウムのような緩衝剤と、二酸化チタン、酸化第一鉄又は酸化第二鉄のような着色剤と、スクロース又はアスパルテームのような甘味料及び香辛料などを例示することができる。

本発明の薬剤の有効成分の量は、医師又は熟練者によって定めることができ、患者の状態及び体重、疾病の程度、薬物の形態、肝臓及び腎臓の機能、投与経路及び期間によって変わり得る。例えば、唯一の有効成分であるパラベン化合物１００乃至２００μｇ/ｋｇの量を１日１回乃至数回投与することができる。世界保健機関（World Health Organization、ＷＨＯ）は、パラベン化合物、例えばメチルパラベン、エチルパラベン、及びプロピルパラベンの１日の適正摂取量を１０ｍｇ/ｋｇと定めている。

以下、本発明の理解を助けるために、好適な実施例を提示するが、これら実施例は本発明を例示するものであるだけで、添付された特許請求の範囲を制限するわけではなく、本発明の範疇及び技術思想の範囲内において実施例に対し変更が多様であること且つ修正が可能であることは、当業者にとって明らかなものであり、このような変更及び修正が添付された特許請求の範囲に属するのも当然のことである。

［実施例］
実施例１．メチルパラベンの合成
フェノール（phenol）と二酸化炭素（carbon dioxide）とを、１００気圧、１２５℃下で反応させた後、硫酸を添加してパラヒドロキシ安息香酸を合成した。これをまたメタノールと同一のアルコールによってエステル化（esterification）してメチルパラベン（ＭＰ）を合成した。

また、合成されたメチルパラベン（ＭＰ）を高性能液体クロマトグラフィー（High-performance liquid chromatography、ＨＰＬＣ）で分析し、その結果を図１に示した。

なお、合成されたメチルパラベン（ＭＰ）を食塩水（ＰＢＳ）に希釈させ、試験分析に利用した。

実施例２．ヒドロキシ（hydroxyl）ラジカル除去能試験
メチルパラベン（ＭＰ）の活性酸素除去能を確認するために、フェントン（Fenton）反応[Ｈ_２Ｏ_２＋ＦｅＳＯ_４]を用いて、ヒドロキシラジカルを発生させた。このように発生されたヒドロキシラジカルは、ニトロンスピントラップ（nitrone spin trap（ＤＭＰＯ））によって捕捉され、捕捉されたＤＭＰＯ−ＯＨ付加体は、電子スピン共鳴（electron spin resonance、ＥＳＲ）分光計によって測定した。ＥＳＲスペクトルは、反応試薬[リン酸塩緩衝液（ｐＨ７．４）、４．５ＭＤＭＰＯ１０μｌ、０．６ｍＭＦｅＳＯ_４７５μｌ、２．８ＭＨ_２Ｏ_２７５μｌ]、メチルパラベン及びビタミンＣ（ＶｉｔＣ）を反応させた後、ＥＳＲ分光計（ＪＥＳ−ＦＡ、ＪＥＯＬ社製）を利用して測定し、その結果を図２に示した。ここで、ＥＳＲ分光計は、パラメーター[磁場３４０ｍＴ、電力１．００ｍＷ、周波数９．１９ＧＨｚ、振幅変調０．２ｍＴ、ゲイン（増幅率）２００、スキャン時間２分、スキャン幅１０ｍＴ、時間定数０．０３秒、及び温度２０℃]を利用して分析した。

図２に示すように、ＥＳＲ分光計で分析した結果、メチルパラベン（ＭＰ）が添加された場合、活性酸素の量が減少し、その濃度が増加するほど活性酸素の減少量はさらに大きいことが示された。

また、図３にメチルパラベン（ＭＰ）の濃度による活性酸素阻害能の値を平均値±平均誤差（ｎ＝４）の値で示す。（＊）で示したものは、対照群との差に有意性があるということを示し、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験によって得られる値である（ｐ＜０．０５）。その結果、メチルパラベン（ＭＰ）が添加された場合、活性酸素阻害能が増加し、その濃度が１００μｇ/ｍｌである場合には、ＶｉｔＣとほとんど類似した活性酸素阻害能を示した。

実施例３．アルファシヌクレイン、活性酸素及び興奮性脳神経伝達物質に対する細胞保護活性試験
培養細胞において、メチルパラベン（ＭＰ）が細胞死を誘発する活性酸素、興奮性脳神経伝達物質、アルファシヌクレインに対する細胞保護効果があるか否かを調査するために、細胞保護活性試験を実施した。活性酸素と、興奮性脳神経伝達物質と、アルファシヌクレインとは、パーキンソン病及び退行性脳疾患において神経細胞の広範囲な損傷の原因として指摘されている。

９６ウェルプレートの各ウェルにヒトの神経癌由来のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞（５×１０^３個、１０％ＦＢＳ添加されたＤＭＥＭバッジ）を入れ、３７℃で２４時間培養した。その後、メチルパラベン（ＭＰ）１、１０、１００ｎｇ/ｍｌ、ビタミンＥ（ＶｉｔＥ）５０μＭ又はＭＫ−８０１１０μＭを添加し、４時間培養した。また、対照群として、薬物を添加せずに培養した培養液も準備した。４時間の培養後、活性酸素を誘発する過酸化水素水（Ｈ_２Ｏ_２）３００ｍＭ、興奮性脳神経伝達物質であるグルタミン酸（glutamate）２ｍＭ、アルファシヌクレイン２μＭをさらに添加した後、再び２４時間培養した。培養後、リン酸緩衝食塩水（phosphate buffered saline、ＰＢＳ）で洗浄し、細胞増殖試薬（cell proliferation reagent、ＷＳＴ−１）を１０％入れた培養液を１００μｌ入れ、癌条件において１時間、３７℃の培養器で反応させた後、４５０ｎｍ波長で吸光度を測定した。その結果をそれぞれ図４乃至６に示す。ここで、それぞれの値は平均値±平均誤差（ｎ＝６）の値で示した。

図４、５、及び６において、（♯）で示したものは、対照群との差に有意性があるということを示し、（＊）で示したものは、過酸化水素処理群と、グルタミン酸処理群又はアルファシヌクレイン処理群との差に有意性があるということを示し、これらの値は、一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験によって得られる値である（ｐ＜０．０５）。また、（＊＊）で示したものは、過酸化水素処理群と、グルタミン酸処理群又はアルファシヌクレイン処理群との差に有意性があるということを示し、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験によって得られる値であり（ｐ＜０．０１）、（＊＊＊）で示したものは、過酸化水素処理群、グルタミン酸処理群又はアルファシヌクレイン処理群との差に有意性があるということを示し、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験によって得られる値である（ｐ＜０．００１）。その結果、対照群と比較して、メチルパラベン（ＭＰ）１０、１００ｎｇ/ｍｌが添加された場合、活性酸素や興奮性脳神経伝達物質、アルファシヌクレインによる細胞死を有意的に抑制していることがわかり、陽性対照群として用いられたＶｉｔＥ５０μＭ又はＭＫ−８０１１０μＭと類似した効果を示したことがわかった。すなわち、この結果を通じて、メチルパラベン（ＭＰ）が活性酸素や興奮性脳神経伝達物質、アルファシヌクレインに対する細胞保護効果があることがわかり、これを通じてパーキンソン病モデルの運動障害及び認知症の病状を改善する効果もあるものと予測される。

実施例４．パーキンソン病モデルの製作
メチルパラベン（ＭＰ）のパーキンソン病治療剤としての効果を検証するために水酸化ドーパミン（６−ＯＨＤＡ）を用いてパーキンソン病の動物モデルを作成した。試験動物としては、２０〜２５ｇのＣ５７ＢＬ／６系マウス（mouse）を用いた。カテコールアミン（catecholamine）神経系のうちドーパミン性神経細胞を選択的に破壊し、ノルアドレナリン（noradrenaline）神経細胞を保護するための前処理としてデシプラミン（desipramine）２５ｍｇ/ｋｇを手術の１時間前に腹腔内に投与した。麻酔を行った後、マウスを試験動物用脳定位手術器具（stereotaxic instrumental device、David-Kopf frame）に固定させた。頭皮を２ｃｍほど切開し、電気ドリルを利用して右頭蓋骨に小さな穴を開けた。シリンジ（Ｈａｍｉｌｔｏｎ製）を利用して０．２％アスコルビン酸に混合した水酸化ドーパミンを１０μｇ/２．５μｌの濃度で注入し、右側黒質−線條体の座標は、Paxinos及びWatsonのatlasを参考とし、ＡＰ＋０．８mm、ＭＬ −２．０mm、ＤＶ −３．３mmとした。水酸化ドーパミンが逆流しないように、５分間に亘って徐々に注入し、除去した後、頭皮を縫合した。薬物処理群であるメチルパラベン（ＭＰ）１００又は２００μｇ/ｋｇとデプレニル（deprenyl）１０ｍｇ/ｋｇとを手術の３０分前に腹腔内に投与し、メチルパラベン（ＭＰ）とデプレニルとを２週間毎日投与した。正常対照群は、水酸化ドーパミンを溶解した溶媒であるアスコルビン酸を０．２％（ｗ／ｖ）含む生理食塩水を同一の手術部位に注射することの他に麻酔及び手術の全過程をパーキンソン病誘発試験群と同様に行った。

実施例５．回転円筒検査
メチルパラベン（ＭＰ）がパーキンソン病モデルの運動障害を改善することができるか否かを調査するために、回転円筒検査（rotarod test）を行い、パーキンソン病の手術後１４日目となる日に評価した。回転円筒検査とは、マウスを回転する円筒の上で走らせ、落ちずに乗っていられる時間を測定する検査のことをいう。円筒の回転速度は、１０ｒｐｍであり、５分の適応期間を与えた後、１０分に亘って実施した。円筒の上で走った時間は、３回繰り返し測定した平均値として求め、平均値±平均誤差（ｎ＝６）の値を示した。

図７には、メチルパラベン（ＭＰ）の投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）による運動障害の改善効果を示す。（♯）で示したものは、対照群との差に有意性があるということを示し、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値であって（ｐ＜０．０５）、（＊）で示したものは、水酸化ドーパミン処理群との差に有意性があり、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値である（ｐ＜０．０５）。

実施例６．回転運動の観察
前記方法で手術したマウスに適切に黒質−線条体経路に病変が発生し、半身パーキンソン病（hemi-Parkinsonism）が発病するが、メチルパラベン（ＭＰ）のパーキンソン病の治療効果を検証するその他の方法として、マウスを選別するために２週が経過した後、アポモルヒネ（apomorphine）０．５ｍｇ/ｋｇを皮下に投与し、回転運動を評価した。回転運動の評価は、回転モータ（rotomotor）が設けられたパープレックス（perplex）半球で実施し、１０分間の適応後、このマウスにおいてアポモルヒネの投与時に１時間それぞれ病変の同側（ipsilateral）及び対側（contralateral）における回転数を測定し、各値を平均値±平均誤差（ｎ＝６）の値で示した。

図８には、メチルパラベン（ＭＰ）の投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）による回転運動障害の改善効果を示す。（♯）で示したものは、対照群との差に有意性があるということを示し、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値であり（ｐ＜０．０５）、（＊）で示したものは、水酸化ドーパミン処理群との差に有意性があり、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値である（ｐ＜０．０５）。

実施例７．Ｙ字形迷路試験
Ｙ字形迷路測定装置は、３個の通路（arm）を設け、アルファベットＹ字形を示しており、各通路は長さ３５ｃｍ、高さ９ｃｍ、幅５ｃｍであり、同一の角度で位置する。試験動物の頭部分がＹ字形迷路の一つの通路の端に向かうように置いて、８分間自由に通路を歩き回るようにする。動物の動作を記録し、通路に動物の後足まで入った場合を通過したもの（arm entry）とみなす。動物の動作を交差回数（alternation）で示すが、交差回数は、動物が連続的に３個の通路を通過した時に一回交差したものとみなす。自発的な交差行動量は、実際交差回数と最大限可能な交差回数（すなわち、総交差回数から２を引いた値）の百分率である。

図９には、メチルパラベン（ＭＰ）の投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）によるＹ字迷路試験での記憶増進効果を示す。（♯）で示したものは、対照群との差に有意性があるということを示し、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値であり（ｐ＜０．０５）、（＊）で示したものは、水酸化ドーパミン処理群との差に有意性があり、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値である（ｐ＜０．０５）。

実施例８．受動的回避試験
試験器具は、横×縦×高さが５０×１５×４０ｃｍであり、底には導電網が敷かれているシャトルボックス（Shuttle box）を利用した。また、ボックスは仕切りドア（connecting guillotine door：１０×１０ｃｍ）を用いて半分に分けて２５×１５ｃｍの部屋を２個設けた。各部屋には、２０Ｗの電球で照明をつけるようにした。騷音が６０ｄＢ以下であり、照明を暗くした部屋で試験を実施した。

仕切りで離隔された２個の部屋のうち、一方の（Ａ）にマウスを入れ、１５００ｌｕｘの照明をつけて、仕切りを開けた。そうすると、マウスは部屋の中を観察して照明のない他方の部屋（Ｂ）に入るが、この時に自動的に仕切りが閉まるようにした。照明をつけ、仕切りが開けられる時から仕切りが閉まる時までの時間を測定することによって、遅延時間（latency time）を測定するが、このような過程を繰り返し遂行すればマウスは部屋Ａから部屋Ｂに移動する。このような試みを繰り返し、マウスが２０秒以内に部屋Ａから部屋Ｂに移動するようになると、訓練過程を完了した。翌日に前記訓練を経たマウスを部屋Ａに入れ部屋Ｂに移動すると、照明が消えた状態で部屋の下のステンレス網（stainless grid）を介して０．２５ｍＡの電流を２秒間流してマウスの足裏にショックを与えた。

マウスは、暗い部屋と足裏のショック（foot-shock）との関係を記憶することになり、２４時間後に部屋Ａに入れると、照明がつけられても部屋Ｂに入ることを避けるようになる。この時の遅延時間（latency time）を比較した。１日後に、マウスを部屋Ａに入れ、部屋Ａに照明をつけて、部屋Ｂに移動する前までの時間を測定した。最大測定時間を５分にした。

図１０には、メチルパラベン（ＭＰ）の投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）による受動的回避試験での記憶増進効果を示す。（♯）で示したものは、対照群との差に有意性があるということを示し、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値であり（ｐ＜０．０５）、（＊）で示したものは、水酸化ドーパミン処理群との差に有意性があり、この値は一元分散分析（one-way ＡＮＯＶＡ）試験から得られる値である（ｐ＜０．０５）。

図７乃至１０に示すように、対照群と比較すると、メチルパラベン（ＭＰ）を投与（１００、２００μｇ/ｋｇ）した群において、パーキンソン病モデル作成によって減退した運動能力及び記憶力を、有意性を有するように増進させる効果があることが確認された。このような結果からみて、メチルパラベン（ＭＰ）は抗酸化作用及び退行性神経系脳疾患から生成される毒性物質から神経細胞を保護する作用を通じて、運動障害及び認知疾患のような症状から示される減退した記憶力を増進させる効果があることがわかった。

Claims

唯一の有効成分として下記化学式１で示す化合物からなる退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤。

（式中、Ｒは炭素数１乃至２のアルキル基である。）
前記化学式１で示す化合物は、メチルパラベンである、請求項１に記載の退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤。
退行性神経系脳疾患は、パーキンソン病、アルツハイマー型認知症、老人性認知症、脳卒中、ルーゲーリック病、ピック病、クロイツフェルト・ヤコブ病、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、脊髄小脳変性症、小脳萎縮症、多発性硬化症、外傷後ストレス障害及び記憶喪失症からなる群から選択される疾患である、請求項１に記載の退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤。
顆粒剤、散剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、丸剤、注射剤又は座剤として剤形化される、請求項１に記載の退行性神経系脳疾患の予防又は治療用薬剤。