JP5612239B2 - Ｈｔｌｖエンベロープのレセプターとしてのｇｌｕｔ１及びその使用 - Google Patents

Description

発明の詳細な説明

本発明は、偏在する脊椎動物の、配列番号２によって表わされるグルコース輸送担体ＧＬＵＴ１、又はそれ由来のフラグメント若しくは配列の使用であって、腫瘍マーカーとして使用される場合は、癌の試験管内での診断のため、又はＰＴＬＶに感染した個体に関連した病態、若しくは細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した病態の予防、若しくは治療のための薬剤の調製のために有用な化合物のスクリーニング、又は細胞表面上のＧＬＵＴ１の試験管内での検出のための、使用に関する。また、本発明は、ＧＬＵＴ１又はそれ由来のフラグメント若しくは配列を含む医薬組成物、及びその使用、例えばＰＴＬＶに感染した個体に関連する病態の予防又は治療のフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）使用に関する。

ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）は、白血病及び神経症候群に関連している。ＨＴＬＶの生理病理学におけるウイルスエンベロープの役割は、明らかでなく、そしてすべての脊椎動物の細胞株に見られる、エンベロープレセプターは同定されていない。

ＨＴＬＶエンベロープ糖タンパク質は、試験管内でシンシチウム形成を誘導するが、その生理病理学的な効果は不明である。ＨＴＬＶエンベロープ介在性のシンシチウム形成に対して耐性の細胞も含め、すべての脊椎動物の細胞株は、機能的なＨＴＬＶエンベロ−プレセプターを発現している。我々は、ＨＴＬＶレセプター結合ドメインの発現が、グルコースの消費を減少させることにより、乳酸産生を減少させるが、一方、結合欠損エンベロープ変異体はグルコース代謝を変化させないことを見出した。グルコース欠乏は、ＨＴＬＶのレセプターの発現を増加させるが、栄養感受性反応を連想させる。従って、偏在する脊椎動物のグルコース輸送担体、ＧＬＵＴ１の過剰発現は、ＨＴＬＶエンベロープ結合及びＨＴＬＶエンベロープと同じ場所に局在するＧＬＵＴ−１を特異的に増加させる。更に、ＨＴＬＶエンベロープの結合は、ヒト赤血球で最も高いが、ヒト赤血球では、ＧＬＵＴ１を強く発現しており、そしてそれが、唯一のグルコース輸送担体イソフォームである。これらの結果は、ＧＬＵＴ−１がＨＴＬＶエンベロープのレセプターであり、このリガンド／レセプター相互作用が、ＨＴＬＶ感染の免疫及び神経障害に関与していることを示している。

従って、本発明は、配列番号２で表わされる偏在する脊椎動物のグルコース輸送担体ＧＬＵＴ１、又は霊長類Ｔ細胞白血病ウイルス（ＰＴＬＶ）のエンベロープタンパク質に結合することのできる、それ由来のフラグメント若しくは配列の使用、あるいはＧＬＵＴ１の発現細胞の以下のための使用であって、
−ＧＬＵＴ１に対する特異的な結合できることにより選択される有効な化合物の以下のためのスクリーニングであり、
＊個体のＰＴＬＶ感染に関連する病態の予防又は治療のための化合物の調製、
＊細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した病態の予防又は治療のための化合物の調製、
＊細胞表面のＧＬＵＴ１の試験管内での検出、
−ＰＴＬＶ若しくはその変異体、又はＰＴＬＶエンベロープタンパク質若しくはそのフラグメントの検出、濃縮、及び／又は精製、であり
−ＰＴＬＶ、例えば、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２、ＳＴＬＶ−１、ＳＴＬＶ−２、ＳＴＬＶ−３、又はその変異株による個体又は動物感染に関連する病態、あるいはＰＴＬＶＳＵ−関連配列の個体又は動物での存在に関連する病態の、予防又は治療のための薬剤の調製、
−腫瘍マーカーとして使用される場合の、試験管内での癌の診断、のための使用である。

説明の目的のために、ＧＬＵＴ１に結合可能な前記化合物の一例として、ＧＬＵＴ１に結合可能なＰＴＬＶのＲＢＤ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）由来のＥＧＦＰ−タグのついたＧＬＵＴ１結合化合物を用いた以下の方法に従って、前記スクリーニングされた化合物は、前記ＧＬＵＴ１又はＧＬＵＴ１のフラグメントとの特異的結合能によって選択される。

ＰＴＬＶのＲＢＤ（ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎ）由来のＥＧＦＰ−タグのついたＧＬＵＴ１結合化合物を、生の、又は固定された、浮遊性又は付着性の細胞にと接触させる。適当なバッファーで洗浄後、細胞を３０分、室温でインキュベートし洗浄する。そして蛍光顕微鏡用の適当な担体に付着させるか、又は蛍光分析細胞選別装置で個別の細胞を浮遊させた状態で、解析又は定量する。あるいは、ＰＴＬＶ ＲＢＤ由来の非蛍光ＧＬＵＴ−１結合成分を、前記のように細胞と接触させ、二次蛍光色素結合試薬、例えば、ＰＴＬＶ ＲＢＤ、又は前記ＰＴＬＶ ＲＢＤ成分に付着している非蛍光色素タグに結合する蛍光色素結合二次抗体で、検出される。

本発明は、より具体的には、前記定義された、以下から選ばれるＧＬＵＴ１のフラグメントの使用に関する。
−配列番号２５： ＮＡＰＱＫＶＩＥＥＦＹ
−配列番号２６： ＮＱＴＷＶＨＲＹＧＥＳＩＬＰＴＴＬＴＴＬＷＳ
−配列番号２７： ＫＳＦＥＭＬＩＬＧＲ
−配列番号２８： ＤＳＩＭＧＮＫＤＬ
−配列番号２９： ＹＳＴＳＩＦＥＫＡＧＶＱＱＰ
−配列番号３０： ＥＱＬＰＷＭＳＹＬＳ
−配列番号３１： ＱＹＶＥＱＬＣ
−配列番号３２： ＩＶＧＭＣＦＱＹＶＥＱＬＣ

これらのＧＬＵＴ１フラグメントは、ＭｕｅｃｋｌｅｒとＭａｋｅｐｅａｃｅ（Ｍｕｅｃｋｌｅｒ， Ｍ．， ａｎｄ Ｃ． Ｍａｋｅｐｅａｃｅ． １９９７． Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅ ｔｈａｔ ｌｉｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｘｏｆａｃｉａｌ ｖｅｓｔｉｂｕｌｅ ａｎｄ ｅｘｏｆａｃｉａｌ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ＧＬＵＴ１ ｓｕｇａｒ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｐａｔｈｗａｙ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２７２（４８）：３０１４１−６．）によって記載された、ヒトＧＬＵＴ１の推定上の細胞外ループに相当する。

また、本発明は、前記定義されたＧＬＵＴ１に対する特異的結合能によって選択された化合物であって、個体のＰＴＬＶ感染に関連する病態、例えば、成人Ｔ細胞白血病に対応する病態である、ＨＴＬＶ―I関連脊髄症／熱帯性痙攣性不全対麻痺（ＨＡＭ／ＴＰＳ）、及び他のＨＴＬＶ関連症候群、例えば、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）白血病（Ｌｏｕｇｈｒａｎ， Ｔ． Ｐ．， Ｋ． Ｇ． Ｈａｄｌｏｃｋ， Ｒ． Ｐｅｒｚｏｖａ， Ｔ． Ｃ． Ｇｅｎｔｉｌｅ， Ｑ． Ｙａｎｇ， Ｓ． Ｋ． Ｆｏｕｎｇ， ａｎｄ Ｂ． Ｊ． Ｐｏｉｅｓｚ． １９９８． Ｅｐｉｔｏｐｅ ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ＨＴＬＶ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｓｅｒｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ＬＧＬ ｌｅｕｋａｅｍｉａ． Ｂｒ Ｊ Ｈａｅｍａｔｏｌ． １０１（２）：３１８−２４．）、ブドウ膜炎（Ｍｏｃｈｉｚｕｋｉ， Ｍ．， Ａ． Ｏｎｏ， Ｅ． Ｉｋｅｄａ， Ｎ． Ｈｉｋｉｔａ， Ｔ． Ｗａｔａｎａｂｅ， Ｋ． Ｙａｍａｇｕｃｈｉ， Ｋ． Ｓａｇａｗａ， ａｎｄ Ｋ． Ｉｔｏ． １９９６． ＨＴＬＶ−Ｉ ｕｖｅｉｔｉｓ． Ｊ Ａｃｑｕｉｒ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｉｃ Ｓｙｎｄｒ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｏｌ． １３ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ５０−６．）、感染性皮膚炎（Ｌａ Ｇｒｅｎａｄｅ， Ｌ．， Ｒ． Ａ． Ｓｃｈｗａｒｔｚ， ａｎｄ Ｃ． Ｋ． Ｊａｎｎｉｇｅｒ． １９９６． Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｏｐｉｃｓ： ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉａｌ ｅｍｐｈａｓｉｓ ｏｎ ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ， ａ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ Ｔ−ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ−Ｉ． Ｃｕｔｉｓ． ５８（２）：１１５−８．）、関節症（Ｎｉｓｈｉｏｋａ， Ｋ．， Ｔ． Ｓｕｍｉｄａ， ａｎｄ Ｔ． Ｈａｓｕｎｕｍａ． １９９６． Ｈｕｍａｎ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎ ａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ ａｎｄ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ． Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ． ３９（８）：１４１０−８．）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（菌状息肉腫）（１．Ｈａｌｌ， Ｗ． Ｗ．， Ｃ． Ｒ． Ｌｉｕ， Ｏ． Ｓｃｈｎｅｅｗｉｎｄ， Ｈ． Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ｍ． Ｈ． Ｋａｐｌａｎ， Ｇ． Ｒｏｕｐｅ， ａｎｄ Ａ． Ｖａｈｌｎｅ． １９９１． Ｄｅｌｅｔｅｄ ＨＴＬＶ−Ｉ ｐｒｏｖｉｒｕｓ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｃｕｔａｎｅｏｕｓ ｌｅｓｉｏｎｓ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｅｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ． ２５３（５０１７）：３１７−２０． ２． Ｚｕｃｋｅｒ−Ｆｒａｎｋｌｉｎ， Ｄ．， Ｂ． Ａ． Ｐａｎｃａｋｅ， Ｍ． Ｍａｒｍｏｒ， ａｎｄ Ｐ． Ｍ． Ｌｅｇｌｅｒ． １９９７． Ｒｅｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ （ＨＴＬＶ−Ｉ／ＩＩ） ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ． Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ． ９４（１２）：６４０３−７）、多発性筋炎（Ｓａｉｔｏ Ｍ， Ｈｉｇｕｃｈｉ Ｉ， Ｓａｉｔｏ Ａ， Ｉｚｕｍｏ Ｓ， Ｕｓｕｋｕ Ｋ， Ｂａｎｇｈａｍ ＣＲ， Ｏｓａｍｅ Ｍ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌ ｃｌｏｎｏｔｙｐｅｓ ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ−ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｈｕｍａｎ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ １ ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ． Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． ２００２ Ｎｏｖ １；１８６（９）：１２３１−４１）、及びＰＴＬＶ又はＰＴＬＶの配列が有している、潜在的な他の突発性疾患の、予防又は治療の薬剤としての、前記定義されたＧＬＵＴ１に対する特異的結合能によって選択される化合物の使用に関する。

本発明は、より具体的には、個体のＰＴＬＶ感染に関連する病態の予防又は治療の薬剤の調製のための以下から選択される化合物であって、
−アンドロゲン性ステロイド（３６： Ｍａｙ ＪＭ， Ｄａｎｚｏ ＢＪ． Ｐｈｏｔｏｌａｂｅｌｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｗｉｔｈ ａｎｄｒｏｇｅｎｉｃ ｓｔｅｒｏｉｄｓ． Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ． １９８８ Ａｕｇ １８；９４３（２）：１９９−２１０）、
−サイトカラシンＢ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ）、フォルスコリン（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）ジピリダモール（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ）、イソブチルメチルキサンチン（ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ）（２０： Ｈｅｌｌｗｉｇ Ｂ， Ｊｏｏｓｔ ＨＧ． Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ−（ＧＬＵＴ１）， ｌｉｖｅｒ−（ＧＬＵＴ２）， ａｎｄ ａｄｉｐｏｃｙｔｅ−ｔｙｐｅ （ＧＬＵＴ４） ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｂｙ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｌｉｇａｎｄｓ ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ， ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ， ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ， ａｎｄ ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ． Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １９９１ Ｓｅｐ；４０（３）：３８３−９）、
−エタノール（Ｋｒａｕｓｓ ＳＷ， Ｄｉａｍｏｎｄ Ｉ， Ｇｏｒｄｏｎ ＡＳ． Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｂｙ ｅｔｈａｎｏｌ ｏｆ ｔｈｅ ｔｙｐｅ １ ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｖｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ （ＧＬＵＴ１）． Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． １９９４ Ｊｕｎ；４５（６）：１２８１−６）、
−ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）（Ｖｅｒａ ＪＣ， Ｒｅｙｅｓ ＡＭ， Ｃａｒｃａｍｏ ＪＧ， Ｖｅｌａｓｑｕｅｚ ＦＶ， Ｒｉｖａｓ ＣＩ， Ｚｈａｎｇ ＲＨ， Ｓｔｒｏｂｅｌ Ｐ， Ｉｒｉｂａｒｒｅｎ Ｒ， Ｓｃｈｅｒ ＨＩ， Ｓｌｅｂｅ ＪＣ， ｅｔ ａｌ． Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ｉｓ ａ ｎａｔｕｒａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｈｅｘｏｓｅ ａｎｄ ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ， ＧＬＵＴ１． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． １９９６ Ａｐｒ １２；２７１（１５）：８７１９−２４）、
−カドミウム（Ｌａｃｈａａｌ Ｍ， Ｌｉｕ Ｈ， Ｋｉｍ Ｓ， Ｓｐａｎｇｌｅｒ ＲＡ， Ｊｕｎｇ ＣＹ． Ｃａｄｍｉｕｍ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ＧＬＵＴ１ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｗｈｉｌｅ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｉｔｓ ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｆｆｉｎｉｔｙ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． １９９６ Ｎｏｖ ２６；３５ （４７）：１４９５８−６２）、
−バルビツレート（ｅｌ−Ｂａｒｂａｒｙ Ａ， Ｆｅｎｓｔｅｒｍａｃｈｅｒ ＪＤ， Ｈａｓｐｅｌ ＨＣ． Ｂａｒｂｉｔｕｒａｔｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＧＬＵＴ−１ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｈｅｘｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅｓ ｅｘｈｉｂｉｔｓ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｕｎｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ ｓｕｇａｒ ｆｌｕｘ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ． １９９６ Ｄｅｃ ３；３５（４８）：１５２２２−７）、
−デヒドロアスコルビン酸（ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）（Ｒｕｍｓｅｙ ＳＣ， Ｋｗｏｎ Ｏ， Ｘｕ ＧＷ， Ｂｕｒａｎｔ ＣＦ， Ｓｉｍｐｓｏｎ Ｉ， Ｌｅｖｉｎｅ Ｍ． Ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ＧＬＵＴ１ ａｎｄ ＧＬＵＴ３ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． １９９７ Ｊｕｌ ２５；２７２（３０）：１８９８２−９）、
−トリサイクリック抗うつ剤（ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓ） （Ｐｉｎｋｏｆｓｋｙ ＨＢ， Ｄｗｙｅｒ ＤＳ， Ｂｒａｄｌｅｙ ＲＪ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＧＬＵＴ１ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ａｎｄ ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓ． Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ． ２０００；６６（３）：２７１−８．）、
−エストラジオール（ｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）及び抗エストゲン（ｔｈｅ ａｎｔｉ−ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ）、ファスロデックス（ｆａｓｌｏｄｅｘ：ＩＣＩ １８２７８０）、タモキフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）（Ａｆｚａｌ Ｉ， Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ Ｐ， Ｎａｆｔａｌｉｎ ＲＪ． Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＡＴＰ， ｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ， ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉ−ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ， ｆａｓｌｏｄｅｘ （ＩＣＩ １８２７８０） ａｎｄ ｔａｍｏｘｉｆｅｎ， ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ， ＧＬＵＴ１． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ． ２００２ Ａｕｇ １；３６５（Ｐｔ ３）：７０７−１９）、
−ペルオキシソームプロリフレーター活性レセプターのガンマアゴニスト（ｇａｍｍａ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ＰＰＡＲ）、例えば、チアゾリジンジオン（ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ） 〔トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）又はシグリタゾン（ｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ） 〕（"ＴＺＤｓ ｍｏｄｉｆｙ ａｓｔｒｏｃｙｔｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ａｎｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ， ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｉｎ ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｈｅｒｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｉｓ ｒｅｄｕｃｅｄ" ｆｒｏｍ Ｄｅｌｌｏ Ｒｕｓｓｏ Ｃ， Ｇａｖｒｉｌｙｕｋ Ｖ， Ｗｅｉｎｂｅｒｇ Ｇ， Ａｌｍｅｉｄａ Ａ， Ｂｏｌａｎｏｓ ＪＰ， Ｐａｌｍｅｒ Ｊ， Ｐｅｌｌｉｇｒｉｎｏ Ｄ， Ｇａｌｅａ Ｅ， Ｆｅｉｎｓｔｅｉｎ ＤＬ．． Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇａｍｍａ ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ２００３ Ｆｅｂ ２１；２７８（８）：５８２８−３６）の化合物の使用に関する。

また、本発明は、細胞表面上のＧＬＵＴ１過剰発現に関連する病態の、予防又は治療の薬剤調製のための、前記定義したＧＬＵＴ１に対する特異的結合能によって選択された化合物の使用であって、前記病態が、例えば、
−癌、例えば：
．扁平上皮癌（Ｋｕｎｋｅｌ Ｍ， Ｒｅｉｃｈｅｒｔ ＴＥ， Ｂｅｎｚ Ｐ， Ｌｅｈｒ ＨＡ， Ｊｅｏｎｇ ＪＨ， Ｗｉｅａｎｄ Ｓ， Ｂａｒｔｅｎｓｔｅｉｎ Ｐ， Ｗａｇｎｅｒ Ｗ， Ｗｈｉｔｅｓｉｄｅ ＴＬ． Ｃａｎｃｅｒ． ２００３ Ｆｅｂ １５；９７（４）：１０１５−２４）
．下咽頭癌（Ｍｉｎｅｔａ Ｈ， Ｍｉｕｒａ Ｋ， Ｔａｋｅｂａｙａｓｈｉ Ｓ， Ｍｉｓａｗａ Ｋ， Ａｒａｋｉ Ｋ， Ｍｉｓａｗａ Ｙ， Ｕｅｄａ Ｙ． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ２００２ Ｎｏｖ−Ｄｅｃ；２２（６Ｂ）：３４８９−９４）、
．乳癌（Ｂｒｏｗｎ ＲＳ， Ｗａｈｌ ＲＬ．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｕｔ−１ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ． Ａｎ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ． Ｃａｎｃｅｒ． １９９３ Ｎｏｖ １５；７２（１０）：２９７９−８５）、
．子宮頚癌（ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｒｉｎｏｍａ） （Ｍｅｎｄｅｚ ＬＥ， Ｍａｎｃｉ Ｎ， Ｃａｎｔｕａｒｉａ Ｇ， Ｇｏｍｅｚ−Ｍａｒｉｎ Ｏ， Ｐｅｎａｌｖｅｒ Ｍ， Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇｅｒ Ｐ， Ｎａｄｊｉ Ｍ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ−１ ｉｎ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓ． Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ． ２００２ Ａｕｇ；８６（２）：１３８−４３）、
．卵巣癌（Ｃａｎｔｕａｒｉａ Ｇ， Ｆａｇｏｔｔｉ Ａ， Ｆｅｒｒａｎｄｉｎａ Ｇ， Ｍａｇａｌｈａｅｓ Ａ， Ｎａｄｊｉ Ｍ， Ａｎｇｉｏｌｉ Ｒ， Ｐｅｎａｌｖｅｒ Ｍ， Ｍａｎｃｕｓｏ Ｓ， Ｓｃａｍｂｉａ Ｇ．ＧＬＵＴ−１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｏｖａｒｉａｎ ｃａｒｃｉｎｏｍａ： ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ． Ｃａｎｃｅｒ． ２００１ Ｓｅｐ １；９２（５）：１１４４−５０）、
．肺癌（Ｉｔｏ Ｔ， Ｎｏｇｕｃｈｉ Ｙ， Ｓａｔｏｈ Ｓ， Ｈａｙａｓｈｉ Ｈ， Ｉｎａｙａｍａ Ｙ， Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｈ． Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｖｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｉｓｏｆｏｒｍｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ： ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃ ｔｙｐｅ， ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｇｒａｄｅ， ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｓｔａｇｅ． Ｍｏｄ Ｐａｔｈｏｌ． １９９８ Ｍａｙ；１１（５）：４３７−４３． Ｙｏｕｎｅｓ Ｍ， Ｂｒｏｗｎ ＲＷ， Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎ Ｍ， Ｇｏｎｄｏ Ｍ， Ｃａｇｌｅ ＰＴ． Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｇｌｕｔ１ ａｎｄ Ｇｌｕｔ３ ｉｎ ｓｔａｇｅ Ｉ ｎｏｎｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ． Ｃａｎｃｅｒ． １９９７ Ｓｅｐ １５；８０（６）：１０４６−５１）、
．膵癌（Ｒｅｓｋｅ ＳＮ， Ｇｒｉｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒ ＫＧ， Ｇｌａｔｔｉｎｇ Ｇ， Ｐｏｒｔ Ｍ， Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄｔ Ｍ， Ｇａｎｓａｕｇｅ Ｆ， Ｂｅｇｅｒ ＨＧ． Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ １ ａｎｄ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＦＤＧ ｕｐｔａｋｅ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ． １９９７ Ｓｅｐ；３８（９）：１３４４−８）、
．インスリノーマ（１： Ｂｏｄｅｎ Ｇ， Ｍｕｒｅｒ Ｅ， Ｍｏｚｚｏｌｉ Ｍ． Ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｉｎｓｕｌｉｎｏｍａ． Ａｎｎ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ． １９９４ Ｊｕｌ １５；１２１（２）：１０９−１２、
−炎症性状態
−免疫病又は自己免疫病、例えば、
．自己免疫性心筋炎（Ｔｏｋｉｔａ Ｎ， Ｈａｓｅｇａｗａ Ｓ， Ｔｓｕｊｉｍｕｒａ Ｅ， Ｙｕｔａｎｉ Ｋ， Ｉｚｕｍｉ Ｔ， Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ Ｔ． Ｓｅｒｉａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ １４Ｃ−ｄｅｏｘｙｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ２０１Ｔｌ ｕｐｔａｋｅ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｍｙｏｃａｒｄｉｔｉｓ ｉｎ ｒａｔｓ． Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ． ２００１ Ｆｅｂ；４２（２）：２８５−９１）、
．ＣＤ２８Ｔ細胞活性化のフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）免疫病又は自己免疫病 （Ｆｒａｕｗｉｒｔｈ ＫＡ， Ｒｉｌｅｙ ＪＬ， Ｈａｒｒｉｓ ＭＨ， Ｐａｒｒｙ ＲＶ， Ｒａｔｈｍｅｌｌ ＪＣ， Ｐｌａｓ ＤＲ， Ｅｌｓｔｒｏｍ ＲＬ， Ｊｕｎｅ ＣＨ， Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＣＢ． Ｔｈｅ ＣＤ２８ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ． Ｉｍｍｕｎｉｔｙ． ２００２ Ｊｕｎ；１６（６）：７６９−７７）、
．免疫調節のフレーム（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）の免疫病又は自己免疫病（Ｍｏｒｉｇｕｃｈｉ Ｓ， Ｋａｔｏ Ｍ， Ｓａｋａｉ Ｋ， Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｓ， Ｓｈｉｍｉｚｕ Ｅ． Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｍｉｔｏｇｅｎ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｏｆ ｓｐｌｅｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｏｂｅｓｅ Ｚｕｃｋｅｒ ｒａｔｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ １ （ＧＬＵＴ−１）． Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ． １９９８ Ｊｕｎ；６７（６）：１１２４−９）、
−中枢神経系の障害、例えば、進行性グルコース輸送担体タンパク１型（ＧＬＵＴ１）欠乏症候群（ｒｅｖｉｅｗ ｉｎ Ｋｌｅｐｐｅｒ Ｊ， Ｖｏｉｔ Ｔ． Ｅｕｒ Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ． ２００２ Ｊｕｎ；１６１（６）：２９５−３０４．）である、化合物の使用に関する。

本発明は、より具体的には、細胞表面のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連する、病態の予防又は治療の薬剤の調製のための、以下の中から選択される化合物の使用であって、
−ＰＴＬＶのエンベロープタンパク質に相当するポリペプチド又はＧＬＵＴ１に結合することができるフラグメント若しくはそれ由来の配列、
−グルコース又は誘導体、例えば、ガラクトース、２−フッ化デオキシグルコース、２−デオキシグルコース、３−０−メチルグルコース、
−前記アンドロゲン性ステロイド、サイトケラシンＢ（ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ）、フォルスコリン（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）、ジピリダモール（ｄｉｐｙｒｉｄａｍｏｌｅ）、イソブチルメチルキサンチン（ｉｓｏｂｕｔｙｌｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈｉｎｅ）エタノール、ゲニステイン（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）、カドミウム、バルビツレート（ｂａｒｂｉｔｕｒａｔｅ）デヒドロアスコルビン酸（ｄｅｈｙｄｒｏａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、トリサイクリック抗うつ剤（ｔｒｉｃｙｃｌｉｃ ａｎｔｉｄｅｐｒｅｓｓａｎｔｓ）エストラジオール（ｏｅｓｔｒａｄｉｏｌ）抗エストゲン（ａｎｔｉ−ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ）ファスロデックス（ｆａｓｌｏｄｅｘ：ＩＣＩ １８２７８０）、タモキフェン（ｔａｍｏｘｉｆｅｎ）、ペルオキシソームプロリフレーター活性レセプターのガンマアゴニスト（ｇａｍｍａ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ＰＰＡＲ）、例えば、チアゾリジンジオン（ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｎｅｄｉｏｎｅ）、トログリタゾン（ｔｒｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）、ピオグリタゾン（ｐｉｏｇｌｉｔａｚｏｎｅ）又はシグリタゾン（ｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ）である、化合物の使用に関する。

本発明は、より具体的には、病態の予防又は治療の薬剤の調製のため、及び前記病態の試験管内での診断のための、配列番号２で表される、脊椎動物に偏在するグルコーストランスポーターＧＬＵＴ１への特異的な結合能で選択される、ＰＴＬＶのエンベロープ蛋白に相当するポリペプチド、又はそれ由来のフラグメント、若しくは配列の使用、あるいは細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した前記ポリペプチドをコードしている、ヌクレオチド配列の使用に関する。

本発明は、より具体的には、前記定義された、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２に相当する前記ＧＬＵＴ１のフラグメントの少なくとも１つと結合することのできるポリペプチドの使用に関する。

本発明は、より具体的には、前記定義された、少なくとも配列番号３２に相当するＧＬＵＴ１のフラグメントと結合することのできるポリペプチドの使用に関する。

本発明は、より具体的には、前記で定義された、以下から選択される前記ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの使用に関する。
−配列番号４に対応するＨＴＬＶ―１、又は配列番号６に対応するＨＴＬＶ―２、又は配列番号８に対応するＳＴＬＶ―１、又は配列番号１０に対応するＳＴＬＶ―２、又は配列番号１２に対応するＳＴＬＶ―３のエンベロープタンパク質、
−前記ＰＴＬＶのエンベロープタンパク質、例えば、配列番号４、６、８、１０、１２の、Ｎ末端の１〜９０の位置、又は７５〜９０の位置に位置するアミノ酸によって、及びＣ末端の１３５〜２４５の位置、又は１３５〜１５０の位置に位置するアミノ酸によって区切られるポリペプチドに対応するＰＴＬＶのエンベロープタンパク質のフラグメント、
−以下のポリペプチドに対応する、ＰＴＬＶのエンベロープタンパク質のフラグメント：
＊配列番号４に対応するＨＴＬＶ−１のＭＴ−２株のエンベロープタンパク質の、Ｎ末端の８３〜８９に位置するアミノ酸によって、及びＣ末端の１３９〜１４５に位置するアミノ酸によって区切られる前記ポリペプチド、
＊配列番号６に対応するＨＴＬＶ−２のＮＲＡ株のエンベロープタンパク質の、Ｎ末端の７９〜８５に位置するアミノ酸によって、及びＣ末端の１３５〜１４１に位置するアミノ酸によって区切られる前記ポリペプチド、
＊配列番号８に対応するＳＴＬＶ−１のエンベロープタンパク質の、Ｎ末端の８３〜８９に位置するアミノ酸によって、及びＣ末端の１３９〜１４５に位置するアミノ酸によって区切られる前記ポリペプチド、
＊配列番号１０に対応するＳＴＬＶ−２のエンベロープタンパク質の、Ｎ末端の７９〜８５に位置するアミノ酸によって、及びＣ末端の１３５〜１４１に位置するアミノ酸によって区切られる前記ポリペプチド、
＊配列番号１２に対応するＳＴＬＶ−３のエンベロープタンパク質の、Ｎ末端の８２〜８８に位置するアミノ酸によって、及びＣ末端の１３８〜１４４に位置するアミノ酸によって区切られる前記ポリペプチド、
＊以下の配列番号１４の配列を有する、ＨＴＬＶ−１の変異株のエンベロープタンパク質に対応するポリペプチド、
I K K P N P N G G G Y Y L A S Y S D
P C S L K C P Y L G C Q S W T C P Y
T G A V S S P Y W K F Q Q D V
＊以下の配列番号１６の配列を有する、ＨＴＬＶ−１の変異株のエンベロープタンパク質に対応するポリペプチド、
V K K P N R N G G G Y Y L A S Y S D
P C S L K C P Y L G C Q S W T C P Y
T G A V S S P Y W K F Q Q D V
＊以下の配列番号１８の配列を有する、ＨＴＬＶ−１の変異株のエンベロープタンパク質に対応するポリペプチド、
I K K P N R N G G G Y Y L A S Y S D
P C S L K C P Y L G C Q S W T C P Y
T G A V S S P Y W K F Q Q D V
＊以下の配列番号２０の配列を有するＨＴＬＶ−１の変異株のエンベロープタンパク質に対応するポリペプチド、
I K K P N R N G G G Y Y L A S Y S D
P C S L K C P Y L G C Q S W T C P Y
T G P V S S P Y W K F Q Q D V
＊以下の配列番号２２の配列を有するＨＴＬＶ−１の変異株のエンベロープタンパク質に対応するポリペプチド、
I K K P N R N G G G Y H S A S Y S D P
C S L K C P Y L G C Q S W T C P Y A G
A V S S P Y W K F Q Q D V N F T Q E V
＊以下の配列番号２４の配列を有するＨＴＬＶ−２の変異株のエンベロープタンパク質に対応するポリペプチド、
I R K P N R Q G L G Y Y S P S Y N D
P C S L Q C P Y L G S Q S W T C P Y
T A P V S T P S W N F H S D V。

本発明は、より具体的には、以下の病態の治療又は検出を特徴とする、前記ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの使用であって、病態が
−固形腫瘍、例えば、脳腫瘍、扁平上皮癌、下咽頭癌、乳癌、頚癌、卵巣癌、膵癌、インスリノーマ、
−炎症状態、例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、
−免疫病又は自己免疫病、例えば、自己免疫性心筋炎、又はＣＤ２８Ｔ細胞活性化のフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）免疫病又は自己免疫病、又は免疫調節のフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）免疫病又は自己免疫病、又は全身性紅斑性狼瘡、
−中枢神経の障害、例えば、進行性グルコース輸送担体タンパク１型（ＧＬＵＴ１）欠乏症候群、
である前記ＧＬＵＴ１結合ポリぺプチドの使用に関する。

本発明は、具体的には、前記ＧＬＵＴ１に対する特異的結合能によって選択された化合物、及びより具体的には、前記定義されたＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの使用であって、その使用が細胞表面のＧＬＵＴ１過剰発現に関連する病態の、試験管内での診断方法のフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）、細胞表面上のＧＬＵＴ１の試験管内での検出のためであり、前記の方法が以下の工程を含む、使用に関する。
−個体からの生物学的検体（例えば、腫瘍バイオプシー検体、又は細胞、又は組織検体、又は疑似異常ＧＬＵＴ１発現プロファイルを有する検体）を化合物、そしてより具体的には前記定義されたＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドと接触させる工程であって、前記化合物又はＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドが場合により標識され、又は標識分子によって認識されることができるものである、工程
−生物学的な検体に含まれる細胞に結合した前記化合物、又はＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの濃度を決定し、そして健常人からの生物学的な検体に含まれる細胞に対する前記化合物、又は前記ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの結合の濃度と比較する工程。

本発明は、より具体的には、使用される化合物が、ＧＬＵＴ１に対する特異的結合能によって選択される前記化合物から選ばれることを特徴とする、癌の試験管内の診断のための、前記定義された化合物の使用に関する。

本発明は、より具体的には、前記ポリペプチドをその表面に含む薬剤ベクターの調製のための、前記定義されたＧＬＵＴ１結合性ポリペプチド又は前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の使用に関し、前記ベクターは細胞表面のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した病態の予防又は治療のために、ＧＬＵＴ１過剰発現細胞を標的とするのに有用であり、前記病態に対する活性分子を含むか、又はそれらの病態の遺伝子治療のフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）遺伝子を含むものである。

本発明は、より具体的には、前記定義された関連病態の予防又は治療のために、ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドをそれらの表面に含む薬剤ベクターを調整するための、前記定義されたＧＬＵＴ１結合性ポリペプチド又は前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の使用に関し、前記ベクターは、ＧＬＵＴ１過剰発現腫瘍細胞、又は炎症機構に関連する細胞、又は免疫システムの活性化細胞、又は中枢神経系の細胞を標的とするために有用である。

本発明は、より具体的には、前記定義された薬剤ベクターの調整のための、ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチド、又は前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の使用に関し、前記病態に対する活性分子は抗腫瘍分子、あるいは炎症状態、免疫病若しくは自己免疫病、又は中枢神経の障害に対する分子である。

本発明は、前記定義されたＧＬＵＴ１に対する特異的な結合能によって選択されたポリペプチド化合物、例えば、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、又はそのフラグメント、をコードするヌクレオチド配列の使用に関し、前記ヌクレオチド配列の一個又は数個の置換によって、ＧＬＵＴ１に対する結合能ができない、変異ポリペプチドをコードしている変異ヌクレオチド配列の調整のための、ヌクレオチド配列の使用に関する。

本発明は、また、前記定義された、ＧＬＵＴ１に対する結合能のない変異ポリペプチドであって、
−非変異ポリペプチドに特異的に結合することのできる化合物のスクリーニングのフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）陰性対照として、そのため、ＰＴＬＶの個体の感染に関連する病態の予防又は治療のための薬剤の調製のフレームで（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）信頼され使用されるものであり、
−個体のＰＴＬＶ感染に関連する病態の予防又は治療のための薬剤の調製のための、変異ポリペプチドの使用に関する。

本発明は、より具体的には、前記定義されたポリペプチドに相当する変異ポリペプチドであって、
−配列番号４に対応するＨＴＬＶ−１のエンベロープタンパク質の中の１０６の位置のＤ、及び／又は１１４の位置のＹ、
−配列番号６に対応するＨＴＬＶ−２のエンベロープタンパク質の中の１０２の位置のＤ、及び／又は１１０の位置のＹ、
−配列番号８に対応するＳＴＬＶ−１のエンベロープタンパク質の中の１０６の位置のＤ、及び／又は１１４の位置のＹ、
−配列番号１０に対応するＳＴＬＶ−２のエンベロープタンパク質の中の１０２の位置のＤ、及び／又は１１０の位置のＹ、
−配列番号１２に対応するＳＴＬＶ−３のエンベロープタンパク質の中の１０５の位置のＤ、及び／又は１１３の位置のＹ、
−配列番号１４、１６、１８、２０、２２、及び２４に対応するポリペプチドの１８の位置のＤ、及び／又は２６の位置のＹ、
が、野生型又は野生型でない他のアミノ酸、例えば、前記のＤ及び／又はＡ残基がＡに置換された前記ポリペプチドに相当する変異ポリペプチドの使用に関する。

本発明は、また、前記変異ポリペプチドを発現したトランスジェニック哺乳類細胞の調製のための、前記定義されたＧＬＵＴ１に対する結合能のない変異ポリペプチド相当をコードする変異ヌクレオチドの使用に関し、前記細胞はＰＴＬＶに関して陰性のトランスドミナントな効果を有し、そのため、生物において感染及びその後の伝播を防ぐ細胞である。

本発明は、また、医薬的に許容可能な担体とともに、配列番号２で表わされるＧＬＵＴ１又はそれ由来のフラグメント若しくは配列を含む医薬組成物に関し、前記フラグメント又は由来配列は、霊長類Ｔ細胞白血病ウイルス（ＰＴＬＶ）のエンベロープタンパク質に結合できるものである医薬組成物に関する。

本発明は、より具体的には、医薬的に許容可能な担体とともに、前記定義されたポリペプチドに相当する変異ポリペプチドであって、
−配列番号４に対応するＨＴＬＶ−１のエンベロープタンパク質の中の１０６の位置のＤ、及び／又は１１４の位置のＹ、
−配列番号６に対応するＨＴＬＶ−２のエンベロープタンパク質の中の１０２の位置のＤ、及び／又は１１０の位置のＹ、
−配列番号１２に対応するＳＴＬＶ−３のエンベロープタンパク質の中の１０５の位置のＤ、及び／又は１１３の位置のＹ、
−配列番号１４、１６、１８、２０、２２、及び２４に対応するポリペプチドの１８の位置のＤ、及び／又は２６の位置のＹ、
が、野生型の又は野生型でない他のアミノ酸、例えば、前記のＤ及び／又はＡ残基がＡに置換された、前記ポリペプチドに相当する変異ポリペプチドを含む医薬組成物に関する。

また、本発明は、前記で定義されたＧＬＵＴ１に結合できない変異ポリペプチドを発現したトランスジェニック哺乳動物細胞であって、前記細胞が、ＰＴＬＶに関する陰性トランスドミナント効果を有し、そのため、生物において感染及びその後の伝播を防ぐトランスジェニック哺乳動物細胞に関する。

本発明は、より具体的には、医薬的に許容可能な担体とともに、前記で定義されたトランスジェニック（ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ）哺乳類細胞を含む医薬組成物に関する。

また、本発明は、細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連する病態においてＧＬＵＴ１過剰発現細胞を標的とする有用な、例えば、前記定義した治療用ベクターであって、前記ベクターは、前記定義されたポリペプチドの中から選ばれたＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドをその表面に含み、及び前記定義された前記病態に対する活性分子、又は遺伝子治療のフレームの（ｉｎ ｔｈｅ ｆｒａｍｅ ｏｆ）遺伝子を含むベクターに関する。

本発明は、より具体的には、医薬的に許容可能な担体とともに、前記定義された治療用ベクターを含む医薬組成物に関する。

また、本発明は、化合物のスクリーニング方法であって、
＊個体のＰＴＬＶ感染に関連する病態の予防又は治療のための薬剤の調製、
＊細胞表面のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連する病態の予防又は治療のための薬剤の調製、
＊細胞表面のＧＬＵＴ１の試験管内での検出、
のためであって、前記方法が：
−配列番号２で表わされるＧＬＵＴ１、又はそれ由来のフラグメント、若しくは配列であって、前記フラグメント又は由来配列が霊長類Ｔ細胞白血病ウイルス（ＰＴＬＶ）のエンベロープタンパク質と結合可能なフラグメント又は由来配列、と接触させる工程
−ＧＬＵＴ１又はそれ由来のフラグメント若しくは配列に特異的に結合可能な化合物を、例えば、前期方法に従って、選択する工程
を含む化合物のスクリーニング方法に関する。

本発明は、より具体的には、細胞表面のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連する病態の予防又は治療、及び前記病態の試験管内での診断に有用な化合物のスクリーニング方法であって、前記工程を含むスクリーニング方法に関する。

また、本発明は、細胞表面のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連する病態の試験管内の診断方法であって、
−個体からの、生物学的検体（例えば、生検材料、又は細胞、又は組織検体、又は擬似異常ＧＬＵＴ１発現を示す検体）及び化合物、又はより具体的には前記で定義されたＧＬＵＴ１に対する特異的な結合によって選択されたポリペプチドであって、前記化合物又はポリペプチドが、場合により標識されるか、又は標識分子に認識されることができるものとを、接触させる工程、
−生物学的検体に含まれる細胞に結合した前記化合物又はポリペプチドの濃度を決定し、そして、健常人からの生物学的検体に含まれる細胞に対して結合している前記化合物の濃度と比較する工程、
を含むことを特徴とする診断方法。

本発明は、より具体的には、前記病態の試験管内での診断のための、前記定義された、方法に関する。

また、本発明は、前記の細胞表面のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連する病態の試験管内の診断キットであって、化合物、及びより具体的には、前記で定義されたＧＬＵＴ１に対する特異的な結合能によって選択されたポリペプチドであって、前記化合物又はポリペプチドが場合により標識されるか、及び所望により、生物学的検体の細胞表面に最初に存在している、ＧＬＵＴ１に結合している化合物又はポリペプチドの検出のための試薬を含んでいるキットに関する。

本発明を、これ以後、ＰＴＬＶ ＲＢＤの特異的レセプターとしてのＧＬＵＴ１の同定の詳細な記載とともに、更に説明する。

ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）タイプ１及び２は、風土病又は散発性の感染因子として、世界中のすべての地域に存在している［Ｓｌａｔｔｅｒｙ， １９９９］。成人Ｔ細胞白血病及びＨＴＬＶ―I関連脊髄症／熱帯性痙攣性不全対麻痺（ＴＰＳ／ＨＡＭ）におけるＨＴＬＶ−１の病因学的な関与が解明されてきた［Ｐｏｉｅｓｚ， １９８０； Ｙｏｓｈｉｄａ， １９８２； Ｇｅｓｓａｉｎ， １９８５； Ｏｓａｍｅ， １９８６］。感染患者のＴ細胞に対して、ＨＴＬＶが明らかに限定した親和性を示すことは［Ｃａｖｒｏｉｓ， １９９６ ； Ｈａｎｏｎ， ２０００］、ウイルスのコードしているエンベロープタンパク質（ＥＮＶ）が試験管内で検査されたすべての脊椎動物細胞に対して結合及び侵入する能力を有していることと対照的である［Ｓｕｔｔｏｎ， １９９６ ； Ｔｒｅｊｏ， ２０００； Ｋｉｍ， ２００３］。レトロウイルス感染は、ＥＮＶと細胞のレセプターの間の初期の相互作用に依存している。他のレトロウイルスの、細胞のレセプター及び共レセプターの同定は、生物及び集団内でのレトロウイルスの伝播や蔓延と共に、レトロウイルスの生理病理学的な側面を解明に寄与してきた［Ｂｅｒｇｅｒ， １９９９； Ｃｌａｐｈａｍ， ２００１； Ｗｅｉｓｓ， ２００２］。しかしながら、ＨＴＬＶ ＥＮＶ及びＨＴＬＶ関連疾患の関係は、明らかではなく、ＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２ ＥＮＶのレセプターの同定は、未解明のままであった。

多くの、細胞表面成分が、ＨＴＬＶ ＥＮＶ介在性シンシチウム形成に関与していることが示されてきている［Ｎｉｙｏｇｉ， ２００１； Ｄａｅｎｋｅ， １９９９； Ｈｉｌｄｒｅｔｈ， １９９７］。それにもかかわらず、ＨＴＬＶ ＥＮＶ依存性膜融合及びシンシチウム形成は、レセプターの結合それ自体とは、明らかに異なっている［Ｄｅｎｅｓｖｒｅ， １９９６； Ｄａｅｎｋｅ， ２０００； Ｋｉｍ， ２０００； Ｋｉｍ， ２００３］。ＨＴＬＶ ＥＮＶレセプターの研究にとって、レセプターの偏在性が、ひとつの障害となっていた［Ｓｕｔｔｏｎ， １９９６； Ｔｒｅｊｏ， ２０００； Ｊａｓｓａｌ， ２００１； Ｋｉｍ， ２００３］。加えて、細胞培養において、ＨＴＬＶ ＥＮＶが発現すると激しいシンシチウム形成が起きることが、効率的で永続的なＥＮＶの発現を妨げてきた。ＨＴＬＶのアミノ末端のドメインは、ストライキング構造（ｓｔｒｉｋｉｎｇ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）及びマウス白血病ウイルスのＥＮＶと機能的な相同性を共用しているという我々の知見に基づいて、我々は、ＨＴＬＶ ＥＮＶレセプター結合ドメイン（ＲＢＤ）を同定し、そしてシンシチウム形成の問題を解決する、ＨＴＬＶ ＥＮＶを基礎とする手段を獲得した［Ｋｉｍ， ２０００； Ｋｉｍ， ２００３］。このようにして、我々は、ＥＮＶ ＢＲＤ及びＨＴＬＶレセプター間の特異的相互作用を、解明することができるようになった。これらの手段を利用し、我々は、既にＨＴＬＶレセプターが、Ｔ細胞レセプターが活性化された後においてのみ、生体内での主要なＨＴＬＶの感染源である、Ｔリンパ球の表面上に発現していることを示してきた［Ｍａｎｅｌ， ２００３］。

ここで、我々は、ＨＴＬＶレセプター結合ドメインと同様にＨＴＬＶエンベロープが細胞培養中で発現した後は、急激な代謝の変化があることを示した。これらの変化は、乳酸（Ｌａｃｔａｔｅ）産生の減少、並びにグルコース消費及び摂取の減少により、細胞培養液の酸性化が起こらないことを特徴としている。複数の膜ｓｐａｎｉｎｎｉｇ輸送担体（ｍｕｌｔｉｐｌｅ−ｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｐａｎｎｉｎｇ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ）のファミリーに属している、ＭＬＶ及び多くのガンマレトロウイルスに関連したＥＮＶレセプターで知られているだけでなく［Ｏｖｅｒｂａｕｇｈ， ２００１］、これらの発見は、我々に、偏在する乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）及びグルコース輸送関連分子がＨＴＬＶのレセプターであることを調べさせた。我々は、すべての脊椎動物に存在し、偏在しているＧＬＵＴ−１グルコース輸送担体がＨＴＬＶのレセプターの成分に必須で、特異的なことを示した。更に、不完全なＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２ＲＢＤだけでなく、全長のＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２エンベロ−プ及びＧＬＵＴ−１との相互作用が、グルコース代謝を変化させている。

《ＨＴＬＶエンベロープは乳酸（ｌａｃｔａｔｅ）代謝を変化させる》
通常、培養液中の細胞増殖は、培地ｐＨ指示薬のフェノールレッドが存在下するために、赤から黄色への色調の変化で示される環境の酸性化を伴って起こる。高度にシンシチウムを形成するＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２のエンベロープ又はＭＬＶ ＥＮＶにＨＴＬＶ−１ ＲＢＤを組み入れたシンシチウム形成を起こさないキメラエンベロープ（Ｈ_１８３ＦＥｎｖ）のいずれのトランスフェクションによっても、培養液は容易には酸性化せず、トランスフェクション後、数日間赤の色調を保っていた（図１ａ）。更に、またＧＦＰ、ＨＡタグ又はｒＦｃタグとの不完全な可溶性ＨＴＬＶ ＲＢＤ融合タンパク質の発現も、培地の酸性化を阻害した。対照的に、ＨＴＬＶ ＲＢＤを有さない、ＶＳＶ−Ｇ及びエボラ糖タンパク質はもちろんであるが、異なるＭＬＶグループ、ネコ、ブタ、レンチウイルス、及びジャグジエクト（Ｊａａｇｓｉｅｋｔｅ）レトロウイルスＥｎｖｓのエンベロープを含むエンベロープ構築物は、この効果を示さなかった。（ｉ）シンシチウムを形成する広い宿主域を有するＭＬＶ ＥＮＶ（Ｒペプチドを欠失しているＡ−ＭＬＶ）（図１ａ）を発現している細胞では、培地の酸性化が、観察されたが、（ｉｉ）ＨＴＬＶ ＥＮＶ介在性のシンシチウム形成に抵抗性の細胞（ＮＩＨ３Ｔ３ ＴＫ⁻ 細胞）でＨＴＬＶ ＥＮＶを発現させた場合は、培地の酸性化が、阻害されることから［Ｋｉｍ， ２００３］、ＨＴＬＶ−１又はＨＴＬＶ−２ ＥＮＶ発現に関連して酸性化が起こらないのは、それらのシンシチウム活性の間接的な関与ではなかった。

細胞培養液のｐＨの低下は、まず第一に、乳酸の細胞外への蓄積によっておこる［Ｗａｒｂｕｒｇ， １９５６］。乳酸は、試験管内での嫌気性解糖の主な副産物であり、そしてＨ＋／ｌａｃｔａｔｅ ｓｙｍｐｏｒｔｅｒによって、排出される［Ｈａｌｅｓｔｒａｐ， １９９９］。我々は、様々なレトロウイルスのエンベロープ及びＲＢＤをトランスフェクションした後、培養上清中の乳酸含有量をモニターした。乳酸の蓄積は、対照又はＭＬＶ ＥＮＶをトランスフェクトされた細胞より、Ｈ_１８３ＦＥｎｖ− 及び ＨＴＬＶ ＲＢＤをトランスフェクトした細胞では、平均して３倍低かった（図１ｂ）。この細胞外でのＨＴＬＶ ＲＢＤトランスフェクション後の乳酸蓄積の減少は、ＤＮＡの濃度に依存していた。更に、我々は、ＨＴＬＶ ＲＢＤトランスフェクション後の乳酸の蓄積の減少が、新鮮な培地の添加後、早くも４時間後には見られることがわかった。（図１ｃ）。

《リセプター結合及び乳酸代謝》
ＨＴＬＶエンベロープレセプターの結合及び細胞外の酸性化の低下及び乳酸蓄積の間に直接的な関連が存在するかを調べるために、我々は、レセプター結合能機能が正常でないＨＴＬＶ−１ ＲＢＤ（Ｈ１_ＲＢＤ)変異株の作成を試みた。この目的のために、霊長類Ｔリンパ球向性ウイルスで高度に保存されたＨ１_ＲＢＤの２つの異なる位置、Ｄ１０６及びＹ１１４に、一個のアラニンの置換が導入された変異株を得た。Ｄ１０６Ａ及びＹ１１４ＡのＲＢＤのいずれの変異株ともに、野生株Ｈ１_ＲＤＢと同じように効率的に発現され分泌されたけれども（図２ａ）、ＦＡＣＳ解析による検出では、それらのＨＴＬＶレセプターに対する結合は、著しく減少（Ｄ１０６Ａ）又は検出できなかった（Ｙ１１４Ａ）。更に、結合能のないＹ１１４Ａ ＲＢＤ変異体を発現している細胞では、ＨＴＬＶレセプターに関連している乳酸代謝の変化である、乳酸蓄積は減少せず、Ｄ１０６ ＲＢＤを含んでいる細胞では最小の減少であった（図２ｃ）。同じ対立遺伝子を持つ、Ｈ２_ＲＢＤで、同じような結果が見られた。このような結果は、乳酸関連代謝の変化及びＨＴＬＶ ＥＮＶレセプター結合の直接的に関連していることを支持している。

ＭＣＴ１モノカルボキシレート輸送担体（ｍｏｎｏｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ）が、細胞膜へ乳酸を輸送することによって、細胞培養において、細胞外に乳酸が蓄積する［Ｇａｒｃｉａ， １９９４］。ＨＴＬＶ及びＭＬＶは細胞外エンベロープの共通の機構を共有していること［Ｋｉｍ， ２０００］、及びＭＬＶ Ｅｎｖのためのレセプターがマルチスパンニング（ｍｕｌｔｉｓｐａｎｎｉｎｇ）代謝輸送担体であるために、我々は、ＨＴＬＶ ＲＢＤがＭＣＴ１に結合しているかどうかを評価した。更に、Ｔ細胞でのＨＴＬＶレセプターの発現に関する我々のデータと同じように［Ｍａｎｅｌ， ２００３］、ＭＣＴ１シャペロンＣＤ１４７の発現が［Ｋｉｒｋ， ２０００］Ｔ細胞が活性化される間増加する［Ｋａｓｉｎｒｅｒｋ， １９９２］。しかしながら、ＨＴＬＶ Ｅｎｖのレセプターとしての、ＭＣＴ１とＣＤ１４７分子の役割について考えると、ＭＣＴ１及びＣＤ１４７の単独又は組み合わせた過剰発現は、Ｈ１ＲＢＤ結合の増加は起こさなかった。

《ＨＴＬＶレセプター及びグルコース代謝》
細胞外乳酸蓄積の減少に加えて、ＨＴＬＶ ＲＢＤの発現は、乳酸輸送の上流の代謝変化である細胞内の乳酸濃度の減少も引き起こす。細胞培養における乳酸の蓄積は、嫌気的解糖によるグルコースの分解に由来している。そのため、我々は、ＨＴＬＶ ＲＢＤの発現において観察される乳酸蓄積の減少が、グルコース代謝と関連するかどうかを評価した。我々は、細胞タンパク質の濃度で補正したグルコース消費を測定した。Ｈ_１８３ＦＥｎｖ全長エンベロープ又はＨ１_ＲＢＤのようなＨＴＬＶ ＲＢＤが発現している細胞のグルコース消費は、対照細胞と比較すると顕著に減少しており（図３ａ）、そしてこの減少は、早くもトランスフェクション８時間後には検出可能であった。グルコ−ス消費の減少が、細胞表面へのグルコース輸送の減少によるものであるかを調べるために、我々は、対照細胞及びＨＴＬＶ ＲＢＤを発現している細胞の、２−デオキシグルコース及びフルクトースの摂取を測定した（図３ｂ）。我々は、ＨＴＬＶ−１又はＨＴＬＶ−２ ＲＢＤのいずれかを発現していることにより、約４倍の２−デオキシグルコースの減少が観察されたが、Ａ−ＭＬＶ ＲＢＤは軽微な影響のみであった。グルコース摂取の阻害剤である、サイトケラシンＢ及びフロテリン（ｐｈｌｏｔｅｒｉｎ）もまた、グルコースの摂取を阻害した。これらの結果は、３−Ｏ−メチルグルコースの輸送ともあてはまる。ＨＴＬＶ−１、又はＨＴＬＶ−２ ＲＢＤの存在している、同じ細胞でのフルクトースの摂取は、変化は見られなかったが、Ａ−ＭＬＶ ＲＢＤでは、わずかな減少を示した。次に、我々は、付着性のヒト２９３細胞及び浮遊性のジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）Ｔ細胞両方において、ＨＴＬＶレセプターを利用する上において、グルコ−ス欠乏の効果を調べた。グルコース欠乏下で細胞を一昼夜培養することによって、Ｈ１_ＲＢＤの結合は、いずれの細胞でも確実に２倍に増加した。このグルコース欠乏の効果は、ＨＴＬＶに特異的であって、広指向性ｎＭＬＶ ＲＢＤ（Ａ_ＲＢＤ）の結合は、わずかに影響を受けたのみであった（図３ｃ）。この現象は、一般的な代謝物の輸送のフィードバック機構、基質が欠乏することにより細胞表面上の利用可能な輸送担体が増加することを思い出させる［Ｍａｒｔｉｎｅａｕ， １９７２］。

《ＨＴＬＶ−１エンベロープはグルコ−ス輸送担体１に結合する》
ＨＴＬＶエンベロープがグルコース輸送担体に直接、結合することによって、グルコースの消費を阻害するという単純なモデルにより、前記の代謝の効果を説明することが可能である。異なるグルコース輸送担体候補の評価によって、ＧＬＵＴ−１が、ＨＴＬＶレセプターのすべての公知の性質を網羅している唯一のもののようである。確かに、ＧＬＵＴ−１の発現は、グルコース欠乏によって増加し、そしてすべての脊椎動物細胞でグルコースの輸送担体である［Ｍｕｅｃｋｌｅｒ， １９８５］。一方で、フルクトースはＧＬＵＴ−５によって、輸送される。更に、ＧＬＵＴ−１は休止期のプライマリーＴ細胞には発現しておらず、そしてその発現は、Ｔ細胞の活性化によって誘導されるが［Ｒａｔｈｍｅｌｌ， ２０００； Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ， １９９４］、その動態は、我々がＨＴＬＶレセプターで報告した動態と非常に似ている［Ｍａｎｅｌ， ２００３］。ヒトの赤血球は、マウスと異なり、高いＧＬＵＴ−１を発現していることが報告されているため［Ｍｕｅｃｋｌｅｒ， １９９４］、我々は、新鮮な分離赤血球における、ＨＴＬＶレセプターの利用について評価を行なった。ヒト赤血球へのＨ１_ＲＢＤの結合は、非常に効率的であり、他の調べた細胞で観察されたものより高いレベルであったが、一方、Ａ_ＲＢＤの結合は、最小限に止まっていた（図４ａ）。そして、マウス及びヒトの赤血球でのＡ_ＲＢＤの結合は同じレベルにもかかわらず、マウスの赤血球では、高いＨ１_ＲＢＤ結合は、確認できなかった。加えて、プライマリーヒト肝細胞はＧＬＵＴ−１を発現しておらず、従って、我々はＡ_ＲＢＤのプライマリーヒト肝細胞での結合を容易に確認できたが、Ｈ１_ＲＢＤ結合については、確認できなかった。

ＧＬＵＴ−１に対するＨＴＬＶエンベロープの結合能を、直接的に調べるために、我々はタグの付いたＧＬＵＴ−１発現ベクターを作製し、ＨｅＬａ細胞にこのタンパク質を過剰発現させた。ＧＬＵＴ−１の過剰発現で、Ｈ１_ＲＢＤ及びＨ２_ＲＢＤの結合が、いずれも劇的に増加した（図４ｂ）。この相互作用は、ＧＬＵＴ−１に結合しないＨＴＬＶ−１のカウンターパート、Ｄ１０６Ａ、と同様に、ＨＴＬＶ−２結合欠損変異体Ｄ１０２Ａにおいて特異的であった（図４ｂ）。更に、広い宿主域を持ち、ＭＬＶエンベロープレセプターである無機リン酸塩の輸送担体であるＰｉＴ２［Ｍｉｌｌｅｒ， １９９４］の過剰発現に対して、Ｈ１_ＲＢＤ及びＨ２_ＲＢＤの結合は、バックグラウンドレベルであった。対照的にＡ_ＲＢＤの結合は、ＧＬＵＴ−１の過剰発現後には増加しなかったが、期待通りに、この結合の相互作用は、ＰｉＴ２のトランスフェクションによって増加した（図４ｂ）。ＧＬＵＴ−３は、ＧＬＵＴ−１に非常に近縁のアイソフォームであり、ＧＬＵＴ−１と同様の動態により、グルコースを輸送している。そのため、我々は、タグつきのＧＬＵＴ−３発現ベクターを作製した。２９３Ｔ細胞において、ＧＬＵＴ−１及びＧＬＵＴ−３を同じように過剰発現させたが、ＧＬＵＴ−３はＨ１_ＲＢＤの結合を全く誘導しなかった。このことは、ＧＬＵＴ−１過剰発現細胞におけるＨ１_ＲＢＤの結合の増加は、グルコース摂取の増加による間接的な結果ではないことを示唆している。ＧＬＵＴ−１をトランスフェクトした細胞が、Ｈ１_ＲＢＤ結合の増加に、直接的に関与しているかを確認するために、我々は、蛍光タグを付けたＧＬＵＴ−１及びＧＬＵＴ−３を作製し、ＦＡＣＳ解析により、ＧＬＵＴ過剰発現細胞を独自に（ｕｎｉｑｕｅｖｏｃａｌｌｙ）に同定した。この結果として、ＧＬＵＴ−１−ＤｓＲｅｄ２の過剰発現細胞のみが、Ｈ１_ＲＢＤ結合の顕著な増加を示したが、ＧＬＵＴ−３−ＤｓＲｅｄ２の過剰発現は、Ｈ１_ＲＢＤ結合に影響しなかった（図４ｄ）。そのため、我々は、ＨＴＬＶ糖タンパク質がＧＬＵＴ−１タンパク質と直接作用しているかについて実験した。この目的のために、Ｈ１_ＲＢＤが、ＧＬＵＴ−１を免疫沈降できるかについて評価した。図４ｅに示すように、ＧＬＵＴ−１はＨ１_ＲＢＤと共発現している場合は、抗ウサギＦｃビーズの免疫沈降で容易に検出できたが、単独での発現及びＨ１_ＲＢＤＹ１１４Ａ変異体との共発現の場合は、検出できなかった。更に、蛍光顕微鏡の解析では、ＧＦＰ−タグＨＴＬＶ−２ＲＢＤはＧＬＵＴ−１と同じ場所に局在したが、ＰｉＴ２とは局在しなかった。従って、ＧＬＵＴ−１輸送担体は、ＨＴＬＶエンベロープレセプターの必須な成分である。

ＧＬＵＴ−１とそのリガンドであるサイトカラシンＢの相互作用は、グルコースの輸送を阻害している［Ｋａｓａｈａｒａ， １９７７］。我々は、ＧＬＵＴ−１に対するＨＴＬＶエンベロープの結合は、グルコース消費及び摂取を阻害することを示したので、サイトカラシンＢが、ＨＴＬＶ ＲＢＤの結合を阻害するかどうかについて確かめた。確かに、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）Ｔ細胞をサイトカラシンＢ処理すると、Ｈ１_ＲＢＤの結合を劇的に阻害するが、一方、Ａ_ＲＢＤの結合は影響を受けなかった（図５ａ）。このように、ＨＴＬＶエンベロープの結合と同様に、ＧＬＵＴ−１の直接のグルコース輸送は、サイトカラシンＢリガンドによっても同じように阻害される。要するに、これらのデータは、ＧＬＵＴ−１が、ＨＴＬＶエンベロープのレセプターであることを示している。

ウイルスレセプターは、進入及びその後の感染を可能にしている。現在、ＧＬＵＴ−１発現の欠如している細胞システムは、存在していない。そのため、我々は、ＨＴＬＶ感染が、エンベロープレセプターのレベルで特異的に阻害される系を開発した。この系において、ＨＴＬＶ−２ ＲＢＤの過剰発現はＨＴＬＶ粒子の侵入の感染を妨害し、少なくとも２ｌｏｇのＨＴＬＶ量を特異的に減少させたが、一方、対照のＡ−ＭＬＶのウイルス量に、影響はなかった。ＧＬＵＴ−１が、ＨＴＬＶの侵入レセプターであるかどうかを決定するために、我々は、阻害するＨ２_ＲＢＤに加えて、ＧＬＵＴ−１、ＧＬＵＴ−３、又はＰｉｔ２を過剰発現させた。Ｐｉｔ２及びＧＬＵＴ−３は、ＨＴＬＶ量に影響を与えなかったが、ＧＬＵＴ−１は、Ｈ２_ＲＢＤによって引き起こされる感染に対する妨害を軽減した（図５ｂ）。驚くべきことに、Ｐｉｔ２と異なり、ＧＬＵＴ−１及びＧＬＵＴ−３は共に、ＨＴＬＶ ＲＢＤによって誘導されるグルコース代謝の変化を軽減している。このように、ＧＬＵＴ−１は、ＨＴＬＶの侵入レセプターである。

《考察》
ここで、我々は、ＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２のエンベロープが、それらのレセプター結合ドメインを介して、ＧＬＵＴ−１と相互作用していることを示した。この相互作用は、グルコースの消費及びグルコースの摂取を強く阻害しており、乳酸産生の減少及び細胞外環境の酸性化の防止につながっている。レセプター結合部位を特異的に変異させたＨＴＬＶ−１及びＨＴＬＶ−２のいずれの変異株においても、グルコース消費の阻害は解除され、このことは、ＨＴＬＶエンベロープのレセプター結合部位及びグルコース輸送の間の直接的な関係を示している。グルコースの枯渇は、ＨＴＬＶエンベロープの結合が増加することによって、速やかに進行し、グルコースの利用と細胞表面のＨＴＬＶレセプターの発現の間の、栄養感受性ネガティブフィードバックが強く起こる。更に、ＧＬＵＴ−１をレセプターであるとする証拠が、蓄積してきており、ＧＬＵＴ−１の過剰発現でＨＴＬＶ ＲＢＤの結合が増加するが、ＧＬＵＴ−３では増加しないこと、Ｈ１_ＲＢＤによって、ＧＬＵＴ−１が免疫沈降されるが、レセプター結合変異体であるＨ１_ＲＢＤＹ１１４Ａでは免疫沈降されないこと、ＧＬＵＴ−１が主要なグルコース輸送担体アイソフォームであるヒト赤血球でＨＴＬＶ ＲＢＤは強く結合するが、ＧＬＵＴ−１がほとんど発現していないヒト初代肝細胞やマウス赤血球では、ＨＴＬＶ ＲＢＤは結合しない。最後に、ＧＬＵＴ−１はＨＴＬＶ ＲＢＤによって誘導される感染の妨害を特異的に回避できた。ＧＬＵＴ−１は、ＨＴＬＶ−１のレセプターとして知られている他のすべての特徴に一致している。確かに、ＧＬＵＴ２−４のアイソフォームでなく、以前レセプターとして証明された［Ｍａｎｅｌ， ２００３］、ＧＬＵＴ−１は、休止期のＴリンパ球には発現しておらず［Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ， １９９４； Ｋｏｒｇｕｎ， ２００２］、免疫的［Ｆｒａｕｗｉｒｔｈ， ２００２； Ｙｕ， ２００３］又は薬剤［Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ， １９９４］による活性化によって誘導される。更に、ＧＬＵＴ−１のオルソローガス（ｏｒｔｈｏｌｏｇｕｅｓ）は、脊椎動物では高度に保存されているが、脊椎動物と昆虫の間では、かなりの違いがある［Ｅｓｃｈｅｒ， １９９９］。

ＧＬＵＴ−１は、このように、レトロウイルスエンベロープのレセプターとして知られていた、マルチメンブラン−スパンニング（ｍｕｌｔｉｍｅｍｂｒａｎｅ ｓｐａｎｎｉｎｇ）代謝輸送担体の新しいメンバーの１つである。驚くべきことに、現在までのこのようなレセプターを認識している、すべてのエンベロープは、いわゆる単一の遺伝的構成のレトロウイルス、例えば、ＭＬＶ、猫白血病ウイルス、豚内在性レトロウイルス及びギボンアペ白血病ウイルス（ｇｉｂｂｏｎ ａｐｅ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）［Ｏｖｅｒｂａｕｇｈ， ２００１］によってコードされていた。ところが一方、ＨＴＬＶは、いくつかの制御遺伝子を更にコードしている、いわゆる複合レトロウイルスである。しかしながら、そのゲノムＲＮＡの系統発生学上ではかなりの違いを有するのとは対照的に、ＨＴＬＶ及びＭＬＶのエンベロープは、それぞれのレセプター結合ドメインの、高度に保存された、いくつかのアミノ酸モチーフを用い、類似のモジュール機構を利用している［Ｋｉｍ， ２０００］。

ＨＴＬＶの伝搬には細胞と細胞の接触が必要であることがわかっており、そして細胞骨格が、この伝搬過程に重要な役割を果たしていることがわかっている［Ｉｇａｋｕｒａ， ２００３］。確かに、我々は、ＨＴＬＶレセプターは、細胞全体にわたって発現しているが、特異的に移動膜領域（ｍｏｂｉｌｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｉｏｎ）及び細胞と細胞の接触部位に集中していることを観察していた。そのため、ＨＴＬＶレセプターは、細胞骨格に結びついていることが予想されていた。重要なことであるが、ＧＬＵＴ−１の細胞質内での結合相手である、ＰＤＺドメインを有しているＧＬＵＴ１ＣＢＰは、細胞骨格でＧＬＵＴ−１と関連していることが報告されてきている［Ｂｕｎｎ， １９９９］。そのため、ＨＴＬＶのエンベロープ、その細胞骨格に連係した細胞内分子、例えば、ＧＬＵＴ−１、ＧＬＵＴ１ＣＢＰ、及びそれらと中間で相互作用する細胞成分、それぞれの役割を評価することが注目されてきている。

ＨＴＬＶレセプターの発現は、グルコースの枯渇によって誘導されるため、局所的にグルコースが不足している細胞、例えば、リンパ節のリンパ球において、ＨＴＬＶの伝搬はより効率的に起こる［Ｙｕ， ２００３］。更に、ここで示したように、ＨＴＬＶを保持する能力のある循環赤血球は、そのような組織にＨＴＬＶを運搬する手段として提供される。

ＨＴＬＶエンベロープのレセプターとしてのＧＬＵＴ−１が同定されたことによって、試験管内の細胞株でレセプターが普遍的に発現していること、及びそれと逆説的な、生体内での限定的なＨＴＬＶのＴリンパ球へのトロピズムに関して何らかの糸口を提供している。グルコース消費の遮断に伴う迅速で、劇的な代謝の変化は、感染初期の生体内でのＨＴＬＶエンベロープの発現によって起こるようである。そのため、初期にはＨＴＬＶの広範なトロピズムのために、ＨＴＬＶの感染は広がるが、感染後の早い時期に、ＧＬＵＴ−１活性に高度に依存している細胞の大部分は急速に除去されると、我々は考えている。一方対照的に、非常に低い代謝率であり、更にグルコース摂取に依存していない休止期のＴリンパ球は、この影響を受けないため生体内で維持される。更に、ＨＴＬＶ感染後の、局所的グルコースへの接触の不均衡が、特異的な病理生理学的変化を誘導することがある［Ａｋａｏｋａ， ２００１］。この点において、ＨＴＬＶ関連神経病原性、及びＧＬＵＴ−１介在性グルコース消費における神経細胞の特異的な依存性、の間の潜在的な関連の研究に関心が集まっている［Ｓｉｅｇｅｌ， １９９８］。

《方法》
［細胞培養］
２９３Ｔヒト胚性腎細胞及びＨｅＬａ子宮頚癌細胞は、高濃度のグルコース（４．５ ｇ／Ｌ）のＤｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ （ＤＭＥＭ）に、ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）Ｔ細胞は、ＲＰＭＩに、それぞれ１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％空気雰囲気下で培養した。グルコース枯渇実験は、細胞を、グルコースを除いたＤＭＥＭ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）又はグルコースを除いたＲＰＭＩ（Ｄｕｔｓｃｈｅｒ）に１０％の滅菌ウシ胎児血清（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加して培養し、そして実験時に、グルコース（１ｇ／Ｌ）を添加した。

［発現ベクター］
ＨＴＬＶ―１の全長発現ベクター（ｐＣＥＬ／２［Ｄｅｎｅｓｖｒｅ， １９９５］）及びフレンド狭宿主性ＭＬＶの全長発現ベクター（ｐＣＥＬ／Ｆ ［Ｄｅｎｅｓｖｒｅ， １９９５］）は、以前に報告している。ＨＴＬＶ−２のエンベロープは、ｔａｘ、ｒｅｘ及びｅｎｖ遺伝子及び３’ＬＴＲを含んでいるＨＴＥ２［Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ， １９９８］からのフラグメントを、ｐＣＩＳベクター［Ｂａｔｔｉｎｉ， １９９９］に組み込んだ（ｐＣＳＩＸ．Ｈ２）。広宿主性ＭＬＶのエンベロープ全長発現ベクター（ｐＣＳＩ．Ａ）、又はそのＲペプチドの欠失体（ｐＣＳＩ．ＡΔＲ）、及びＦ−ＭＬＶエンベロープに、ＨＴＬＶ−１レセプター結合ドメインのＮ末端１８３アミノ酸を含んだＨ_１８３ＦＥｎｖ、同様に、ｐＣＳＩ由来の不完全なエンベロープ発現ベクター、ＨＴＬＶ−１ＳＵの最初の２１５残基（Ｈ１_ＲＢＤ）、ＨＴＬＶ−２―ＳＵの最初の１７８残基（Ｈ２_ＲＢＤ）、又は広宿主性マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）ＳＵの最初の３９７残基（Ａ_ＲＢＤ）、ウサギＩｇＧのＣ末のＦｃタグ（ｒＦｃ）又はＥＧＦＰ（Ｈ２_ＲＢＤ−ＧＦＰ）に結合させたものを作製した。ＨＴＬＶ−１及び２ ＲＢＤの構築のすべての点変異は、ｑｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ ｓｉｔｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ法を用いて導入し、変異は配列を決定することで確認した。ヒトＧｌｕｔ−１ 及びＧｌｕｔ−３のｃＤＮＡは、ｐＬｉｂ ＨｅＬａ ｃＤＮＡライブラリー（（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）から、ＰＣＲによって増幅し、ｐＣＳＩベクターの改良ベクターである、ｐＣＨＩＸに組み込んだ。ｐＣＨＩＸはファクターＸａ切断部位、２コピーのヘマグルチニン（ＨＡ）タグ及びヒスチジンタグを有している。得られた構築物（ｐＣＨＩＸ．ｈＧＬＵＴ１）は、Ｃ末にＨＡ−Ｈｉｓタグを有するＧＬＵＴ−１をコードしている。また、ＧＬＵＴ−１及びＧＬＵＴ−３も、ＤｓＲｅｄ２のＣ末タグを有しているｐＣＳＩの改良ベクターに挿入した。同様に、ヒトＣＤ１４７は２９３Ｔ細胞の全ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲで増幅し、ＨＡ−Ｈｉｓタグを有するｐＣＨＩＸベクターに組み込んだ。

［エンベロープ発現と代謝測定］
改良されたカルシウムリン酸変法を用いて、２９３Ｔ細胞に、種々のエンベロープ発現ベクターをトランスフェクトした。トランスフェクション後、一昼夜おいて、細胞をリン酸塩バッファー（ＰＢＳ）で洗浄し、新鮮な培地を加えた。培地は、指示時間のポイントで回収し、０．４５μｍのポアサイズのフィルターを通し、乳酸とグルコースを酵素診断キット（Ｓｉｇｍａ）で測定した。測定値は、溶解バッファー（５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ ８．０， １５０ ｍＭ ＮａＣｌ， ０．１％ ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌｆａｔｅ， １．０％ Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０， ０．５％ ｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ）で細胞を可溶化し、遠心した後に、ブラッドフォード法を用いて細胞タンパク量を測定し、標準化した。

［ヘキソース（ｈｅｘｏｓｅ）摂取試験］
２−デオキシ−Ｄ［１−^３Ｈ］グルコース、 Ｄ［Ｕ−^１４Ｃ］フルクトース及び３−Ｏ−［^１４Ｃ］メチル−Ｄ−グルコースは、アマシャムから購入した。ヘキソースの摂取試験は、Ｈａｒｒｉｓｏｎ（ＲＥＦ ＨＡＲＲＩＳＯＮ １９９１）らの方法に従った。トランスフェクション後、ウエルあたり約２５０，０００細胞を２４ウェルプレートで培養した。次の日、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、血清を含まないＤＭＥＭで培養し、血清およびグルコースを含まないＤＭＥＭで１回洗浄し、そして５００μＬの血清及びグルコースを含まないＤＭＥＭに阻害物質（２０ μＭ ｃｙｔｏｃｈａｌａｓｉｎ Ｂ， ３００ μＭ ｐｈｌｏｒｅｔｉｎ； ＳＩＧＭＡ）を加えて、２０分培養した。摂取は、標識されたヘキソース（２ μＣｉ／ｍｌ ｆｏｒ ２−２−ｄｅｏｘｙ−Ｄ［１−^３Ｈ］ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ０，２ μＣｉ／ｍｌ ｆｏｒ Ｄ［Ｕ−^１４Ｃ］ｆｒｕｃｔｏｓｅ ａｎｄ ３−Ｏ−［^１４Ｃ］ｍｅｔｈｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｅ）を最終濃度０．１ｍＭの濃度で添加することにより開始し、細胞を更に５分間培養する。それから、細胞を５００μＬの血清およびグルコースを含まないＤＭＥＭに再懸濁し、１回血清およびグルコースを含まないＤＭＥＭで洗浄し、４００μＬの０．１％ＳＤＳで可溶化する。３μＬを使い、ブラッドフォード法でタンパク量を標準化し、残りを、^３Ｈ又は^１４Ｃをベックマンカウンターの液体シンチレーターで、検出に使用した。

［ウエスタンブロット］
野生型又は変異型ＨＴＬＶ−１ ＲＢＤｓ、及び／又はＧＬＵＴ−１又はＧＬＵＴ−２を発現している、２９３Ｔ細胞からの培養液（１０μＬ）をＳＤＳ−１５％アクリルアミドゲルで電気泳動し、ニトロセルロース（Ｐｒｏｔｒａｎ； Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ＆ Ｓｃｈｕｅｌｌ）に転写し、５％粉ミルク及び０．５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳでブロッキングし、１：５０００倍に希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ標識抗ウサギ免疫グロブリン、又は１：２０００倍に希釈した抗ＨＡ １２ＣＡＳ（Ｒｏｃｈｅ）モノクローナル抗体に続き、１：５０００倍に希釈した西洋わさびペルオキシダーゼ標識抗マウス免疫グロブリンを結合させ、高感度化学発光キット（アマシャム）を用い、可視化した。

［結合試験］
結合試験は、以前に報告した方法［Ｍａｎｅｌ， ２００３］に従って、行なった。簡単には、５ ｘ １０^５細胞（２９３Ｔ、ＨｅＬａ、Ｊｕｒｋａｔ 又は 新しく分離したヒト赤血球）を、５００μＬのＨ１_ＲＢＤ、Ｈ２_ＲＢＤ又はＡＲＢＤの上清と３７℃、３０分間培養し、ＰＢＡ（１％ ＢＳＡ， ０．１％ ｓｏｄｉｕｍ ａｚｉｄｅ ｉｎ ＰＢＳ）で洗浄し、そしてフルオレセインイソチアシアネートで標識したヒツジ抗ウサギＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ）とインキュベートした。測定のため、サイトカラシンＢ（２０ mＭ； Ｓｉｇｍａ）を測定１時間前に添加した。結合は、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で解析し、データ解析は、ＣｅｌｌＱｕｅｓｔ （Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）及びＷｉｎＭＤＩ （Ｓｃｒｉｐｐｓ）ソフトウエアを用いた。

［感染］
２９３Ｔ細胞は、６ウエルプレートでトランスフェクトし、一日後に、フルクトース（５μ／Ｌ）及び非必須アミノ酸を添加した高グルコースＤＭＥＭに替えた。次の日、ＨＴＬＶ−２又はＡ−ＭＬＶいずれかのエンベロープを有するシュードタイプのＭＬＶ粒子を含む上清を添加することにより、感染を開始させた。翌日、新鮮な培地を加え、そして、２４時間後に細胞を固定し、アルカリ性フォスファターゼ活性で染色し、暗い感染フォーカスを測定した。ｐＬＡＰＳＮ， ｐＧａｇＰｏｕｌｅ 及びｐＣＳＩＸ．Ｈ２ 又は ｐＣＳＩ．Ａのいずれかを２９３Ｔ細胞にトランスフェクトすることによって、ウイルス粒子が得られ、２４時間後に０．４５μｍフィルターによって上清を回収した。

ＨＴＬＶレセプター結合ドメインの発現が細胞の代謝を変化させる。ａ、対照ＤＮＡ又はシンシチウム形成能のある野生型ＨＴＬＶ−１Ｅｎｖ及びＨＴＬＶ−２ Ｅｎｖを含むＥｎｖ発現ベクター、シンシチウム形成能のないキメラＨ_１８３ＦＥｎｖ、及びシンシチウム形成能のあるＡ−ＭＬＶ ΔＲ Ｅｎｖによるトランスフェクション一日後の２９３Ｔ細胞の、培地の酸性化及びシンシチウム形成。ｂ、無関係のＤＮＡ（対照）、Ｆ−ＭＬＶ Ｅｎｖ、Ｈ_１８３ＦＥｎｖ、ＨＴＬＶ−１ ＲＢＤ（Ｈ１_ＲＢＤ）、又は広宿主性ＭＬＶ ＲＢＤ（Ａ_ＲＢＤ）発現ベクターをトランスフェクション後２日の、２９３Ｔ細胞培養液中の細胞外乳酸及びグルコースを測定した。乳酸とグルコースの濃度は、細胞タンパク量で補正した。ｃ、無関係のＤＮＡ（対照）、Ｈ１_ＲＢＤ、Ｈ２_ＲＢＤ、又はＡ_ＲＢＤ発現ベクターを２９３Ｔ細胞へのトランスフェクション後の２−デオキシグルコース及びフルクトースの摂取。また対照細胞はグルコース輸送担体阻害物質である、サイトカラシン及びフロレチンとインキュベートした。データは３つの測定の平均であり、２回又は３回の独立した実験の代表例である。ｄ、グルコース存在下又は非存在下で一昼夜培養した、２９３Ｔ（１）及びジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）Ｔ細胞（２）上のＨＴＬＶ及び広宿主性のＭＬＶレセプターの発現をＨ１_ＲＢＤ及びＡ_ＲＢＤの結合でそれぞれ測定した。 ＨＴＬＶレセプターの特徴は、ＧＬＵＴ１の特徴に関連する。ａ、ヒト初代肝細胞と、ヒト及びマウス赤血球の表面のＨＴＬＶ及び広宿主性ＭＬＶレセプターの発現。ｂ、Ｇｌｕｔ−１阻害剤サイトカラシンＢの非存在下及び存在下でのジャーカット細胞へのＨ１_ＲＢＤ及びＨ２_ＲＢＤ結合。 ＨＴＬＶリセプター結合は、変化した乳酸代謝と相関する。ａ、２９３Ｔ細胞に、Ｈ１_ＲＢＤ及び誘導変異体Ｄ１０６Ａ若しくはＹ１１４Ａをトランスフェクションした後、それぞれの発現を上清のウエスタンブロットによって測定した。ｂ、ＨｅＬａ細胞での、ＨＴＬＶレセプターに対する、Ｈ１_ＲＢＤ及びＤ１０６Ａ若しくはＹ１１４Ａ変異体の結合。ｃ：無関係のＤＮＡ（対照）、Ｈ１_ＲＢＤ又はＤ１０６Ａ及びＹ１１４Ａ変異体をトランスフェクション一日後の、２９３Ｔ細胞の培地中の細胞外乳酸。データは３つの独立した試験の代表例である。 ＧＬＵＴ−１は、ＨＴＬＶエンベロープのレセプターである。ａ、対照２９３Ｔ細胞、ＧＬＵＴ―１又はＰｉＴ２のいずれかを過剰発現した、２９３Ｔ細胞に対する、Ｈ１_ＲＢＤ、Ｈ２_ＲＢＤ、Ｈ２_ＲＢＤＤ１０２Ａ変異体、及びＡ_ＲＢＤの結合。ｂ、ＧＬＵＴ−１―ＨＡ又はＧＬＵＴ−３−ＨＡを過剰発現した細胞に対するＨ２_ＲＢＤ−ＥＧＦＰの結合、及び対応する抗ＨＡ抗体を使用したイムノブロット。ｃ、無関係の構築物、ＧＬＵＴ−１単独、Ｈ１ＲＢＤ単独、Ｈ１ＲＢＤ Ｙ１１４Ａ単独、ＧＬＵＴ−１にＨ１_ＲＢＤ又はＧＬＵＴ−１にＨ１_ＲＢＤＹ１１４Ａ発現ベクターのいずれかをトランスフェクトした２９３Ｔ細胞からのＧＬＵＴ−１−ＨＡの免疫沈降。免疫沈降は、抗ウサギＦｃビーズ及び抗ＨＡ抗体のプローブで行なった。全細胞の抽出物は、抗ウサギＦｃ又は抗ＨＡ抗体でブロットした。 ＧＬＵＴ−１はＨＴＬＶの侵入レセプターである。無関係の、又は妨害するＨ２_ＲＢＤ発現ベクター単独、あるいはＧＬＵＴ−１、ＧＬＵＴ−３若しくはＰｉｔ２発現ベクターを追加してトランスフェクションした後の２９３Ｔ細胞のＨＴＬＶ−２又はＡ−ＭＬＶエンベロープを有するシュードタイプＭＬＶ粒子の感染タイター。 参照文献1. 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Claims (7)

1. ＰＴＬＶのエンベロープタンパク質のポリペプチド、又はそれ由来のフラグメント、あるいは前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の、
   細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した病態の試験管内での検出のための使用であって、
   前記ポリペプチドは、脊椎動物に偏在する配列番号２のグルコーストランスポーターＧＬＵＴ１に特異的に結合するそれらの能力で選択され、以下の中から選択されるＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドである、前記使用：
   −配列番号４に記載されたＨＴＬＶ―１、又は配列番号６に記載されたＨＴＬＶ―２、又は配列番号８に記載されたＳＴＬＶ―１、又は配列番号１０に記載されたＳＴＬＶ―２のエンベロープタンパク質、
   −配列番号４における１〜２１５アミノ酸を有するＨＴＬＶ―１のエンベロープタンパク質のフラグメント、又は配列番号６における１〜１７８アミノ酸を有するＨＴＬＶ―２のエンベロープタンパク質のフラグメント。
2. 前記病態が、以下の病態であることを特徴とする、請求項１に記載のＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの使用：
   −固形腫瘍、
   −炎症状態、
   −免疫病又は自己免疫病、
   −中枢神経の障害。
3. 細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した請求項２で定義した病態の試験管内での検出のためのＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの使用であって、前記方法が以下の工程を含む請求項１又２に記載の使用：
   −個体からの生体サンプルをＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドと接触させる工程であって、前記ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドが、場合により標識され、又は標識分子によって認識されることができるものである工程
   −生体サンプルに含まれる細胞に結合した前記ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの濃度を決定し、そして健常人の生体サンプルに含まれる細胞に対する前記ＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドの結合の濃度と比較する工程。
4. 細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した病態の、試験管内での検出方法であって、
   −個体からの生体サンプルを、請求項１で定義されたＧＬＵＴ１に特異的に結合できることによって選択されたポリペプチドであって、前記ポリペプチドが場合によって標識され、又は標識分子によって認識されることができるものであるポリペプチドと接触させる工程、
   −生体サンプルに含まれる細胞に結合する前記ポリペプチドの濃度を決定し、そして健常人の生体サンプルに含まれる細胞に結合する前記ポリペプチの濃度と比較する工程、
   を含むことを特徴とする検出方法。
5. 請求項２で定義された病態の試験管内での検出のための、請求項４に記載の方法。
6. 請求項１で定義されたＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドを含み、前記請求項１で定義されたＧＬＵＴ１結合性ポリペプチドが場合により標識化されているキットであって、
   請求項４又は５に記載の方法による、細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した病態の試験管内での検出用キット。
7. 生物学的検体の細胞表面上に最初に存在しているＧＬＵＴ１に対するポリペプチドの結合を検出するための試薬を更に含む、請求項６に記載の、細胞表面上のＧＬＵＴ１の過剰発現に関連した病態の試験管内での検出用キット。

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