JP3624754B2 - 微細物体の操作方法 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、微生物や動植物細胞などの微細物体の捕捉や移動の操作を行う微細物体の操作方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
生化学分野等における各種試験や分析では、試料中に存在する微生物や動植物細胞などの微細物体の中から特定の微細物体を識別して捕捉し、採取する操作が行われる。近年微細物体の捕捉に光ピンセットが用いられるようになっている。この光ピンセットは集光された光の光圧力によって微細物体を捕捉可能な光学的トラップを形成するものであり、試料溶液中などに存在する微細物体をこの光学的トラップ内に捕捉するものである。この捕捉方法によれば、非接触・非破壊で微細物体を捕捉することができ、光を走査させることにより捕捉した微細物体を試料中の任意の位置に移動させることができるなど、多くの長所を有している。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
ところで試料溶液中の微細物体の中には、容器の底に密集した状態で存在する場合があるが、その密集の中から目的とする微細物体のみを捕捉することは難しく、作業に時間を費やしていた。
【０００４】
そこで本発明は、目的の微細物体を効率よく捕捉できる微細物体の操作方法を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
請求項１記載の微細物体の操作方法は、レンズで集光された光の光圧力を利用して容器に収納された試料内の微細物体を操作する微細物体の操作方法であって、微細物体を捕捉するに先だって前記レンズへ入射する光の状態を変化させることにより前記捕捉範囲が実質的に消滅した光を微細物体に前記容器の底から照射して微細物体を浮揚させるようにした。
【００１１】
請求項２記載の微細物体の操作方法は、請求項１記載の微細物体の操作方法であって、前記レンズへ入射する光の状態の変化を、前記レンズに入射する光を絞る絞り手段によって行うようにした。
【００１２】
請求項３記載の微細物体の操作方法は、請求項１記載の微細物体の操作方法であって、前記レンズへ入射する光の状態の変化を、前記レンズによる集光位置を移動させる移動手段によって行うようにした。
【００１３】
請求項４記載の微細物体の操作方法は、請求項１記載の微細物体の操作方法であって、前記レンズへ入射する光の状態の変化を、前記光源より入射する光を偏光させる偏光手段によって行うようにした。
【００１４】
本発明によれば、密集状態にある微細物体の中から目的とする微細物体を作業性よく効率よく捕捉することができる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
次に本発明の実施の形態を図面を参照して説明する。図１は本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置の断面図、図２は同微細物体の操作装置の部分断面図、図３は同微細物体の操作装置による捕捉範囲の説明図、図４は同微細物体操作処理のフロー図、図５は同微細物体の操作装置の部分断面図、図６，図７は同微細物体操作処理の工程説明図、図８は同微細物体の操作装置の固定絞り板の平面図、図９は同微細物体の操作装置の部分断面図、図１０は同微細物体の操作装置の偏光板の平面図である。
【００１６】
まず図１を参照して微細物体の操作装置の構造を説明する。図１において、透明な容器１中には試料である液体２が収納されており、液体２中には微生物や動植物細胞などの微細物体３が多数浮遊状態で存在している。これらの微細物体３は、捕捉や移動などの操作対象となるものである。容器１は保持テーブル４上に載置され保持されており、保持テーブル４は容器保持部となっている。
【００１７】
保持テーブル４は移動ステージ５に装着されている。移動ステージ５はＸステージ５ｘ、Ｙステージ５ｙおよびＺステージ５ｚにより構成されており、ＸＹＺドライバ６によって駆動される。移動ステージ５を駆動することにより、容器１中の液体２はＸ方向、Ｙ方向およびＺ方向に移動する。なお、ここで用いられるＸＹＺ座標は、以下に説明する光学系に固定されており、容器１はこの座標系に対して相対的に移動する。すなわち、容器１の底面のＺ座標ＺｓはＺステージ５ｚの移動によって変化し、光学系の光軸の容器１内におけるＸ方向、Ｙ方向の位置は、Ｘステージ５ｘ、Ｙステージ５ｙの移動によって変化する。
【００１８】
保持テーブル４の下方には、レーザトラップ部１０が配設されている。レーザトラップ部１０の光学ケース１１の上部には対物レンズ１２（各請求項記載のレンズに該当する）が装着されており、対物レンズ１２の下方にはハーフミラー１３が斜め方向に配設されている。光学ケース１１の側部にはレンズ１４，１５より成るレーザ光学系が設けられており、レンズ１５には光源であるレーザ照射部１６から照射されたレーザ光が入射する。このレーザ光はレーザ光学系を介してハーフミラー１３に水平方向から入射し、上方に反射されて対物レンズ１２に入射する。
【００１９】
レンズ１４とレンズ１５の間には、光切り替えユニット２３が設けられている。光切り替えユニット２３は、対物レンズ１２に入射する光の状態を変化させるものであり、ここでは図５に示すように絞り板２３ａを備えた可変絞り装置２３Ａで構成されている。可変絞り装置２３Ａは絞り調整部２３ｂを備えており、絞り調整部２３ｂで絞り板２３ａの開口２３ｃを調整することにより、開口２３ｃは図５（ａ）に示すように開放状態に、また図５（ｂ）に示すように絞り込み状態に設定され、これにより対物レンズ１２に入射する光の状態を変化させることができる。この光の状態を変化させることによる作用効果については後述する。
【００２０】
保持テーブル４に設けられた開口部４ａを対物レンズ１２に対して位置合わせした状態で、レーザ照射部１６からレーザ光を照射することにより、対物レンズ１２に入射したレーザ光は透明な容器１の底面を透して液体２内に入光する。そしてこのレーザ光は液体２中で集光し、この集光したレーザ光によって光学的トラップによる捕捉範囲（後述）が形成される。この捕捉範囲では、微細物体３を光圧力によって非接触で捕捉することができる。
【００２１】
ハーフミラー１３の下方には撮像レンズ１７およびカメラ１８が配設されている。カメラ１８は、対物レンズ１２およびハーフミラー１３を透して容器１の液体２中の微細物体を撮像する。この撮像時のカメラ１８のピントは、前述の捕捉範囲付近に設定される。この捕捉範囲は、光学系に固定のＸＹＺ座標系上で固定されており、捕捉範囲の代表点位置を示す捕捉位置（ｘｔ，ｙｔ，ｚｔ）の周辺で所定の広がりを持つ領域である。
【００２２】
カメラ１８には画像処理部１９が接続されており、カメラ１８によって得られた撮像データは画像処理部１９に送られる。そしてここで撮像データを画像処理することにより、液体２中の微細物体３を識別し、複数の微細物体の中から目的とする微細物体を特定する探索処理を行う。この探索処理により、捕捉対象の微細物体３の液体２中での位置が検出される。この位置検出結果は制御部２０に送られ、この位置検出結果に基づいて制御部２０によってＸＹＺドライバ６を制御して移動ステージ５を駆動することにより、容器１内の捕捉対象の微細物体３を所定位置に位置決めすることができる。また、移動ステージ５を駆動することにより、レーザトラップ部１０によって液体２中に形成された捕捉範囲に対して容器１を相対的に移動させることができる。すなわち、移動ステージ５は捕捉範囲を容器１に対して相対的に移動させる移動手段となっている。
【００２３】
制御部２０には入力部２１および出力部２２が接続されている。入力部２１はキーボードやマウスなどの入力手段を備えており、操作コマンドや各種データの入力を行う。表示部２２は撮像された微細物体の画像を画面表示すると共に、操作入力時の操作画面を表示する。
【００２４】
次に図２、図３を参照してレーザトラップ部１０による容器１の液体２中での光学的トラップの捕捉範囲形成について説明する。図２（ａ）に示すように、対物レンズ１２に下方から入射したレーザ光は、対物レンズ１２によって集光された状態で容器１の液体２内に入射する。このレーザ光が液体２内の微細物体３に照射されると、微細物体３には光圧力が作用する。この光圧力によって一般には微細物体３を照射方向（レーザ光が進む方向）に移動させる方向の力が作用する。
【００２５】
このとき、対物レンズ１２として開口数ＮＡの大きなレンズを用いてレーザ光を急激に集束させると、図２（ｂ）に示すように、集光点Ｆの前方（対物レンズ１２から遠ざかる方向）の特定位置には、微細物体３に作用する光圧力がつり合う領域、すなわちレーザ光の照射方向の光圧力と、照射方向と反対方向で集光点Ｆに向かう光圧力とがつり合う領域が生じ、この領域内に位置した微細物体３はレーザ光によりトラップされた状態となる。そしてこのトラップ状態でレーザ光を液体２内で走査させると、微細物体３はトラップ状態のまま移動する。このレーザ光によるトラップが可能な領域は、前述の捕捉位置（ｘｔ，ｙｔ，ｚｔ）の周辺で所定の広がりを持っており、微細物体３の捕捉範囲Ｔとなっている。
【００２６】
上述のように、捕捉範囲Ｔを形成するにはレーザ光の集束の度合いが大きいことが必要であり、図２（ｃ）に示すように開口数ＮＡが小さいレンズ１２’を用いた場合には、レーザ光の集束の度合いが弱いため捕捉範囲Ｔは形成されない。この場合には、レーザ光が照射された微細物体には、常に照射方向に移動させる方向の力が作用するので、図２（ｃ）に示すように、集光点Ｆの前方でも後方でも関係なく、レーザ光が照射された微細物体は対物レンズ１２から遠ざかる方向に移動し、捕捉されることはない。
【００２７】
図３は、捕捉範囲Ｔが形成される場合において、微細物体３が捕捉範囲Ｔの近傍に位置している場合の微細物体３の挙動を示すものである。図３（ａ）は、微細物体３が捕捉範囲Ｔのさらに前方（対物レンズ１２から遠ざかる方向）に位置した状態を示している。この状態でレーザ光を照射すると、微細物体３には照射されたレーザ光の光圧力によって照射方向へ微細物体を移動させる力が作用する。この結果微細物体３は液体２中でレーザ光の照射方向（捕捉範囲Ｔからさらに遠ざかる方向）に移動する。このとき、容器１を対物レンズ１２に対して相対的に接近させる動作を併用することにより、レーザ光の照射のみによる移動と比較して、さらに効率よく微細物体３を液体２内で移動させることができる。
【００２８】
図３（ｂ）は微細物体３を捕捉範囲Ｔの手前側（捕捉範囲Ｔと対物レンズ１２との間）に位置させた状態を示している。この状態でも微細物体３には照射されるレーザ光の光圧力により照射方向に移動させる力が作用するが、この場合には微細物体３の移動方向には捕捉範囲Ｔが位置しているため、時間の経過とともに微細物体３は捕捉範囲Ｔに接近しやがて捕捉範囲Ｔ内に移動して捕捉される。すなわち、図３（ｂ）に示す状態に微細物体３を位置させれば、その後はレーザ光の照射を継続するのみで、微細物体３は自動的に捕捉範囲Ｔまで移動して捕捉される。
【００２９】
言い換えれば捕捉範囲Ｔ内に微細物体３を正確に位置決めしなくても、図３（ｂ）に示す捕捉範囲Ｔと対物レンズ１２との間の捕捉準備範囲Ｒ内に微細物体３を位置させれば、後は微細物体３の捕捉は自動的に行うことができる。捕捉準備範囲Ｒは捕捉範囲Ｔよりもはるかに広いため、この自動捕捉を利用することにより、従来の光学的トラップによる捕捉時に求められた微細物体３と捕捉範囲Ｔとの位置決め精度を大幅に緩和することが可能となる。
【００３０】
図３（ｃ）はこの自動捕捉時の捕捉動作を促進する方法を示すものであり、レーザ光の照射を継続するとともに、捕捉範囲Ｔを微細物体３に対して相対的に近づける方向に移動させるものである。これにより、微細物体３のみを移動させる場合と比較して捕捉範囲Ｔに微細物体３が到達して捕捉されるのに要する時間を短縮できる。
【００３１】
次に対物レンズ１２に入射する光の状態を変化させることによって生じる微細物体３への光圧力の変化について、図５を参照して説明する。図５（ａ）に示す絞り板２３ａの開放状態では、図２（ａ）に示す場合と同様に、対物レンズ１２によってレーザ光は集束されて光圧力による捕捉範囲Ｔが形成される。これに対し図５（ｂ）に示す絞り込み状態では、図２（ｃ）に示す場合と同様に対物レンズ１２によって集光されるレーザ光は集光角度が小さいことから捕捉範囲Ｔを形成しない。
【００３２】
すなわちレーザ光学系に可変絞り装置２３Ａを設けることにより、同一の対物レンズ１２を用いて、レーザ光による捕捉範囲Ｔの形成をコントロールすることができる。したがって、微細物体の操作において、微細物体を捕捉する際には図５（ａ）に示すように絞りを開放して捕捉範囲を形成し、また微細物体の移動を行う場合には、図５（ｂ）に示すように絞り込み状態に設定して捕捉範囲を実質的に消滅させることにより、同一の対物レンズを備えた単一の光ピンセット装置を用いて、微細物体の捕捉、移動の切り替えを行うことが可能となる。可変絞り装置２３Ａは絞り手段であり、捕捉範囲を実質的に消滅させる切り替え手段となっている。
【００３３】
次にこの微細物体の捕捉装置による微細物体捕捉処理を図６、図７を参照して図４のフローに沿って説明する。ここでは、容器１の底面に密集した状態で多数存在する微細物体３の中から捕捉の対象となる微細物体３ａを探索して捕捉する処理を示している。図６、図７は捕捉処理における表示部２２の表示画面３１の表示状態と、そのときの容器１内の微細物体３と捕捉範囲との位置関係を示したものである。図６、図７においては、実線で示すレーザ光Ｌのみが実際の照射状態を示しており、破線で示すレーザ光Ｌは照射状態や捕捉範囲Ｔを図示するための仮想線である。
【００３４】
図６（ｂ）に示すように、目的とする微細物体３ａの近傍に捕捉したくない微細物体が多数存在する場合があり、いきなり目的とする微細物体３ａを捕捉しようとしても捕捉したくない微細物体まで同時に捕捉してしまう可能性が極めて高い。このような場合は、目的の微細物体をその近傍の微細物体ごと容器１の底より浮揚させ、微細物体の分布をまばらにした状態で目的の微細物体３ａのみを捕捉する。
【００３５】
まず最初に、レーザ照射がＯＦＦの状態で、目的となる微細物体３を探索する（ＳＴ１）。この探索は、移動ステージ５を駆動して撮像位置を移動させながらカメラ１８によって撮像された微細物体３の画像を画像処理部１９で認識し、識別することによって行う。図６（ａ）は探索の結果、容器１の底面上の多数の微細物体３の中から目的となる微細物体３ａの画像３３が表示画面３１内で特定された状態を示している。表示画面３１の中央には捕捉範囲の代表点である捕捉位置（ｘｔ，ｙｔ）を示すマーク３２が表示されている。この後、探索され特定された微細物体３ａの位置座標（ｘ０，ｙ０）を制御部２０の記憶装置に記憶する（ＳＴ２）。なお、画像処理を用いて目的となる微細物体３の自動探索を行うかわりに、表示部２２の表示画面上で作業者が目視により目的となる微細物体３を識別してティーチングして微細物体３ａの位置座標を制御部２０の記憶装置に記憶させてもよい。
【００３６】
次に図６（ｂ）に示すように、微細物体３ａのＸＹ座標における位置座標（ｘ０，ｙ０）が捕捉位置（ｘｔ，ｙｔ）に位置するように移動ステージ５を移動させる（ＳＴ３）。これにより、容器１内の底面上の微細物体３はレーザ光が照射される位置に位置する。次いで可変絞り装置２３Ａの絞り調整部２３ｂによって開口２３ｃを絞り込み状態にする（ＳＴ４）。その後レーザ照射部１６によるレーザ照射をＯＮにする（ＳＴ５）。これにより、微細物体３にはレーザ光が照射される。このとき、対物レンズ１２に入射するレーザ光は絞り込まれた状態であり、前述のように集光角度が小さいことから捕捉範囲を形成せず、図６（ｃ）に示すように微細物体３はレーザ光の光圧力により液体２内を上方に移動する。これにより、液体２中における微細物体の分布がまばらとなり、目的とする微細物体３ａの近傍には微細物体が存在しないスペースが生じる。
【００３７】
この後表示画面３１によって目的の微細物体３が液体２中に浮揚したことを確認する（ＳＴ６）。この確認は、微細物体３が移動することによってカメラ１８のピント位置から外れ、表示画面３１上で微細物体の像３３がピンボケ状態になることを観察することにより行われる。
【００３８】
この後、再びレーザ照射をＯＦＦにし（ＳＴ７）、次いで可変絞り装置２３Ａの絞り調整部２３ｂによって開口２３ｃを開放状態にする（ＳＴ８）。すなわち、対物レンズ１２に入射するレーザ光の状態を捕捉範囲の形成が可能な状態に切り替える。次いでこの後ＳＴ１と同様に目的となる微細物体３ａを探索し（ＳＴ９）、微細物体３ａの位置を認識してこの時点での位置座標（ｘ０，ｙ０，ｚ０）を検出する。そして探索された微細物体３ａが１個のみであることを確認した後、捕捉位置（ｘｔ，ｙｔ，ｚｔ）が微細物体３ａの位置座標（ｘ０，ｙ０，ｚ０）と一致するよう、移動ステージ５を移動する（ＳＴ１０）。そして図７（ａ）に示すように、微細物体３ａが捕捉範囲Ｔ内に位置決めされたならば、図７（ｂ）に示すように、再びレーザ照射をＯＮにして捕捉範囲Ｔ内に微細物体３を捕捉する（ＳＴ１１）。これにより、容器１の底面上に存在する多数の微細物体の中から、目的とする微細物体３ａのみが捕捉される。
【００３９】
上記微細物体の操作方法は、光の集光のさせ方で、光圧力による微細物体に対する作用が異なるという特性を利用して、単一の光ピンセット装置を用いて、微細物体の捕捉を効率よく行うことを可能としたものである。すなわち、容器の底に密集した状態で存在する微細物体の中から目的の微細物体３をする場合には、容器の底に位置している目的の微細物体３ａにレーザ光を下方から（容器の底から）照射して目的の微細物体３ａとその周囲の微細物体３を試料溶液中に浮揚させ、分布がまばらになったところで目的の微細物体３ａを捕捉する。
【００４０】
このとき、微細物体３ａを浮揚させる場合に用いられるレーザ光としては、捕捉範囲を実質的に消滅させた光を使用する。これにより、レーザ光が照射された微細物体は捕捉されることなく光の進行方法（照射方向）へ移動する。さらには、レーザ光の光圧による移動は従来の捕捉状態で移動させる場合と比較して移動速度を大きく設定することが可能なため、操作効率を向上させるという効果をも併せて得ることができる。
【００４１】
図８は捕捉範囲を実質的に消滅させる切り替え手段の第２実施例を示している。図８は異なる形状の２種類の固定絞り板を示している。図８（ａ）に示す固定絞り板２３Ｂは、中央に円環状の開口部２３ｅが設けられており、この開口部２３ｅから対物レンズ１２に入射するレーザ光は入射範囲が広いため大きな集光角度で集光され、捕捉範囲を形成する。これに対し、図８（ｂ）に示す固定絞り板２３Ｃには小さい開口径の開口部２３ｆが設けられているため、対物レンズ１２に入射するレーザ光は絞り込まれて狭い範囲にしか入射せず、捕捉範囲が実質的に消滅する。このように形状が異なる少なくとも２種類の固定絞り板２３Ｂ，２３Ｃを使い分ける方法によっても、第１例に示す可変絞りと同様の効果を得ることができる。
【００４２】
図９に示す第３実施例では、レーザ光学系のレンズ１４を水平方向に移動可能としたものである。レンズ１４は移動機構２３ｄによって移動し、これにより対物レンズ１２による集光位置が変化する。図９（ａ）に示す状態では、集光位置Ｆ１が対物レンズ１２に接近しており集光角度が大きいため捕捉範囲Ｔが形成される。これに対し図９（ｂ）に示す状態では、レンズ１４がハーフミラー１３から離れて位置している。このため対物レンズ１２による集光位置Ｆ２は対物レンズ１２から離れた位置にあって集光角度が小さく、捕捉範囲は形成されない。
【００４３】
すなわち、移動機構２３ｄによるレンズ１４の移動位置を制御することにより、同様に捕捉範囲を実質的に消滅させることができる。したがってレンズ１４および移動機構２３ｄは切り替え手段であり、対物レンズ１２による集光位置を移動させる移動手段となっている。
【００４４】
図１０は切り替え手段の第４実施例であり、光源であるレーザ照射部１６より入射するレーザ光を特定方向に偏光させることにより、捕捉範囲の形成をコントロールする例を示している。特開平５−９３８７１に開示されているように、光トラップに使用するレーザ光の偏光状態を変化させることでトラップする力を可変にすることが可能である。よってレーザ光の偏光状態を適切に設定し、状態を切り替えることにより捕捉範囲を実質的に消滅させたり現出させることが可能となる。図１０（ａ）に示す偏光板２３Ｄは、中央点に対して点対称の放射方向に光を偏向させる特性を有している。この偏光板２３Ｄを通過して対物レンズ１２に入射する光の偏光軸は光軸を中心に放射状に偏光していることから、対物レンズ１２によって集光されたレーザ光は微細物体に入射し易くなり、円周方向の全ての光が捕捉範囲形成に有効に作用し、捕捉力が増加する。
【００４５】
これに対し図１０（ｂ）に示す偏光板２３Ｅでは、偏向軸の向きが一方向に向いた直線偏光となっている。このため、偏光板２３Ｅを通過して対物レンズ１２に入射するレーザ光のうち偏光板２３Ｅの上部２３Ｅａと下部２３Ｅｂを通過したレーザ光はその偏光方向から微細物体に入射しにくくなり、したがって捕捉範囲の形成にほとんど寄与しない。そして偏光板２３Ｅの中央部分２３Ｅｃを通過した光のみが中心点に向かって光圧力を集中させる作用を有するが、偏光板２３Ｅを通過するレーザ光全体としての光圧力の集中は弱く、実質的に捕捉範囲を形成するまでには至らない。したがって、捕捉範囲を実質的に消滅させる場合は、対物レンズ１２とレーザ照射部１１との間にレーザ光を直線偏光させるような偏光板を挿入すればよい。このように偏光特性の異なる複数の偏光板を準備し、これらを用途に応じて交換することによっても、レーザ光による捕捉範囲の形成、消滅を制御することができる。
【００４６】
以上のように本発明の微細物体の操作装置では、光ピンセットの捕捉範囲を消滅させた状態でも微細物体を光の照射方向へ移動させることができるので、従来に比べて効率よく微細物体を操作（捕捉、移動）することができる。特に密集した微細物体の中から目的の微細物体を捕捉する場合において顕著な効果が期待できる。
【００４７】
【発明の効果】
本発明によれば、密集状態にある微細物体の中から目的とする微細物体を作業性よく効率よく捕捉することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置の断面図
【図２】本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置の部分断面図
【図３】本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置による捕捉範囲の説明図
【図４】本発明の一実施の形態の微細物体操作処理のフロー図
【図５】本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置の部分断面図
【図６】本発明の一実施の形態の微細物体操作処理の工程説明図
【図７】本発明の一実施の形態の微細物体操作処理の工程説明図
【図８】本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置の固定絞り板の平面図
【図９】本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置の部分断面図
【図１０】本発明の一実施の形態の微細物体の操作装置の偏光板の平面図
【符号の説明】
１ 容器
２ 液体
３ 微細物体
４ 保持テーブル
５ 移動ステージ
６ ＸＹＺドライバ
１０ レーザトラップ部
１２ 対物レンズ
１４ レンズ
２０ 制御部
２３ 光切り替えユニット
２３Ａ 可変絞り装置
２３ａ 絞り板
２３Ｂ、２３Ｃ 固定絞り板
２３Ｄ、２３Ｅ 偏光板
２３ｄ 移動機構

Claims (4)

1. レンズで集光された光の光圧力を利用して容器に収納された試料内の微細物体を操作する微細物体の操作方法であって、微細物体を捕捉するに先だって前記レンズへ入射する光の状態を変化させることにより前記捕捉範囲が実質的に消滅した光を微細物体に前記容器の底から照射して微細物体を浮揚させることを特徴とする微細物体の操作方法。
2. 前記レンズに入射する光の状態の変化を、前記レンズに入射する光を絞る絞り手段によって行うことを特徴とする請求項１記載の微細物体の操作方法。
3. 前記レンズに入射する光の状態の変化を、前記レンズによる集光位置を変化させる移動手段によって行うことを特徴とする請求項１記載の微細物体の操作方法。
4. 前記レンズに入射する光の状態の変化を、前記光源より入射する光を偏光させる偏光手段によって行うことを特徴とする請求項１記載の微細物体の操作方法。

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