【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、植物のいもち病抵
抗性遺伝子および該遺伝子がコードするタンパク質、並
びにそれらの利用に関する。
【0002】
【従来の技術】いもち病は糸状菌(Magnaporthe grise
a)によって引き起こされるイネなどの重要病害の一つ
である。この病害により、わが国はもとよりイネを栽培
する多くの国々において重大な減収が生じている。特に
低温、多湿の条件では、その被害は甚大である。農薬に
よる防除とともに抵抗性品種の育成がこの病害回避への
主な取り組みとなっている。本来イネにはいもち病菌に
対して抵抗性を示す性質を有する系統が存在している。
これらの系統・品種はいもち病菌の特定のレースに対し
て抵抗性にする遺伝子をもっており、古くからこれらの
遺伝子の遺伝解析が行われている。現在では、約30種の
いもち病抵抗性遺伝子が同定されている(Kinoshita. R
ice Genet. Newsl. 7:16-57(1990) 、Iwata. Rice Gene
t. Newsl. 13:12-35(1996)、Iwata. Rice Genet. News
l. 14:7-22(1997))。これらの遺伝子を利用して高度抵
抗性品種の育成が試みられ、多数の抵抗性品種が育成さ
れてきた。しかしながら一方では、新しいいもち病菌の
レースが出現し、導入された抵抗性遺伝子では対応でき
なくなるなどの問題(抵抗性品種の崩壊)も生じるな
ど、分子レベルでのいもち病抵抗性の発現機構あるいは
いもち病菌と抵抗性遺伝子の相互作用等不明な点は多
い。
【0003】抵抗性遺伝子Pi-bはイネ第2染色体の長腕
末端部分に存在する遺伝子であり、これまでに同定され
ている日本のいもち病菌のレースのうち、033bを除く全
てに対して抵抗性を示す(表1)。
【0004】
【表1】
この遺伝子はインドネシアとマレーシアのインド型品
種、Engkatek、Milek Kuning, TjinaおよびTjahajaなど
が保有していたものであり、宮城県古川農試において感
受性品種ササニシキを遺伝的背景にもつPi-bの同質遺伝
子系統東北IL9号が育成されている。
【0005】しかしながらこれまでのところ抵抗性の発
現機構は明らかにされておらず、Pi-b遺伝子も単離され
ていない。
【0006】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、いもち病抵
抗性遺伝子Pi-b、これと機能的に同等な遺伝子、および
これら遺伝子がコードするタンパク質を提供することを
課題とする。また、本発明は、これら遺伝子を利用して
いもち病抵抗性植物を作出することを課題とする。
【0007】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、いもち病
抵抗性遺伝子Pi-bを広大な染色体の領域から単離するた
めに、マップベースクローニングの手法を利用して鋭意
研究を行い、遂に所期の遺伝子を単離することに成功し
た。具体的には、まず、分子マーカーを用いた連鎖解析
を行い、Pi-b遺伝子が存在する染色体上の領域を特定の
分子マーカーで挟まれる領域に絞り込んだ。次いで、絞
り込んだ遺伝子周辺の領域につき、コスミドクローンの
整列化による物理的地図の作成を行い、これらクローン
の塩基配列を決定して、数種の植物の抵抗性遺伝子に共
通に認められるヌクレオチド結合部位(NBS)を有するP
i-b候補遺伝子の領域を見出した。次いで、いもち病抵
抗性品種からcDNAライブラリーを調製し、上記候補ゲノ
ム領域をプローブとしてcDNAライブラリーのスクリーニ
ングを行い、該ゲノム領域に対応するcDNAを単離した。
さらに、単離したcDNAの塩基配列情報を基に調製したオ
リゴヌクレオチドをプライマーとして、いもち病感受性
品種および抵抗性品種のそれぞれから単離したmRNAに対
してRT-PCRを行うことにより、単離したPi-b候補cDNAの
発現パターンの解析を行った。その結果、抵抗性品種特
異的にcDNAの増幅が認められたことから、本発明者ら
は、単離したcDNAクローンが目的のPi-b遺伝子であるこ
とを見出した。また、このように単離した遺伝子といも
ち病抵抗性との間に密接な関係が認められことから、本
発明者らは、単離した遺伝子やその類似遺伝子を利用し
ていもち病抵抗性植物の作出を行うことが可能であるこ
とを見出した。
【0008】即ち、本発明は、いもち病抵抗性遺伝子Pi
-b、その類似遺伝子、これら遺伝子によりコードされる
タンパク質、並びにこれら遺伝子を利用したいもち病抵
抗性植物の作出などに関し、より具体的には、
(1) 配列番号:1に記載のアミノ酸配列からなるタ
ンパク質、または該タンパク質中のアミノ酸配列におい
て1若しくは複数のアミノ酸が置換、欠失、および/若
しくは付加したアミノ酸配列を有し、植物にいもち病抵
抗性を付与するタンパク質、(2)
(1)に記載のタンパク質をコードするDNA、(3)
(2)に記載のDNAを含むベクター、(4)
(3)に記載のベクターが導入された宿主細
胞、(5)
植物細胞である、(4)に記載の宿主細胞、(6)
(4)に記載の宿主細胞を培養する工程を含
む、(1)に記載のタンパク質の製造方法、(7)
(5)に記載の宿主細胞を含む形質転換イネ植
物体、(8)
(1)に記載のタンパク質に結合する抗体、(9)
配列番号:4から7のいずれかに記載の塩基
配列からなるDNA、に関する。
【0009】
【発明の実施の形態】本発明は、植物にいもち病抵抗性
を付与するタンパク質に関する。本発明のタンパク質に
含まれる「Pi-b」遺伝子がコードするタンパク質(以
下、「Pi-b」タンパク質と称する)のアミノ酸配列を配
列番号:1に示す。「Pi-b」遺伝子は、いもち病抵抗性
という形質をイネに付与するタンパク質をコードする遺
伝子として、これまでイネ第2染色体という広大な領域
にいずれかの場所に存在するものとして知られていた
が、本発明者らは、その存在領域を解明し、単一の遺伝
子として単離することに初めて成功した。「Pi-b」タン
パク質は、日本のいもち病菌のレースのうち、033bを除
く全てに対してイネに抵抗性を付与する性質を有し、抵
抗性を示すレースはこれまでに単離された中で最も広範
である(表1)。このような「Pi-b」タンパク質の特性
は、「Pi-b」タンパク質若しくはこれと同等の機能を有
するタンパク質が、植物のいもち病抵抗性品種の作出に
特に適していることを示唆するものである。
【0010】「Pi-b」タンパク質と機能的に同等なタン
パク質は、例えば、以下の方法により調製することが可
能である。当業者によく知られた方法としては、例え
ば、「Pi-b」タンパク質のアミノ酸に変異を導入する方
法が挙げられる。即ち、当業者であれば、例えば、site
-directed mutagenesis法(Kramer, W.& Fritz,H.-J. O
ligonucleotide-directed construcyion of mutagenesi
s via gapped duplex DNA.Methods in Enzymology, 15
4: 350-367, 1987)を利用して、「Pi-b」タンパク質
(配列番号:1)中のアミノ酸配列を改変し、「Pi-b」
タンパク質と同等の機能を有する改変タンパク質を調製
することが可能である。また、アミノ酸の変異は自然界
において生じることもある。本発明のタンパク質には、
このように天然型の「Pi-b」タンパク質において1もし
くは複数のアミノ酸が置換、欠失もしくは付加したアミ
ノ酸配列を有し、天然型のタンパク質と同等の機能を有
するタンパク質も含まれる。タンパク質におけるアミノ
酸の改変部位および改変個数は、改変後のタンパク質が
天然型の「Pi-b」タンパク質と同等の機能を有する限
り、特に制限はない。アミノ酸の改変は、通常、50アミ
ノ酸以内であり、好ましくは30アミノ酸以内であり、さ
らに好ましくは10アミノ酸以内であり、さらに好ましく
は3アミノ酸以内である。ここで「天然型の「Pi-b」タ
ンパク質と同等の機能を有する」とは、改変後のタンパ
ク質が植物にいもち病に対する抵抗性を付与する機能を
有することを指す。「植物にいもち病に対する抵抗性を
付与する」とは、タンパク質が少なくとも植物の一品種
に対し、少なくとも一つのいもち病のレースに対する抵
抗性を付与することを指す。抵抗性が付与される植物と
しては、好ましくはイネ科の植物であり、特にイネが好
ましい。タンパク質が植物にいもち病抵抗性を付与する
か否かは、例えば、(i)幼植物(例えば、イネの3〜4週
間の苗)に特定のいもち病菌から胞子を形成させ、その
胞子をけん濁した液を直接幼苗に噴霧して接種する、(i
i)次いで、接種直後から約24時間、湿度100%、25℃の状
態で保持し、その後2週間程度、通常の条件で栽培す
る、(iii)過敏感反応による特異的な壊死斑が形成され
病斑の伸展が止まる(抵抗性遺伝子を有する個体)か、
病斑が拡大し最終的に壊死する(抵抗性遺伝子を持たな
い個体)かを観察する、ことにより判定することが可能
である。
【0011】また、機能的に同等なタンパク質を調製す
るために、当業者によく知られた他の方法としては、ハ
イブリダイゼーション技術(Southern, E.M.: Journal
of Molecular Biology, Vol. 98, 503, 1975.)やポリ
メラーゼ連鎖反応(PCR)技術(Saiki, R. K. et al. S
cience, vol.230, 1350-1354, 1985、Saiki, R. K. eta
l. Science, vol.239, 487-491, 1988)が挙げられる。
即ち、当業者にとっては、「Pi-b」遺伝子の塩基配列
(配列番号:2または3)もしくはその一部をプローブ
として、また「Pi-b」遺伝子(配列番号:2または3)
に特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプ
ライマーとして、イネ若しくは他の植物から「Pi-b」遺
伝子と高い相同性を有するDNAを単離して、該DNAから
「Pi-b」タンパク質と同等の機能を有するタンパク質を
得ることは通常行いうることである。このようにハイブ
リダイズ技術やPCR技術により単離しうる「Pi-b」タン
パク質と同等の機能を有するタンパク質もまた本発明の
タンパク質に含まれる。ここで「「Pi-b」タンパク質と
同等の機能を有する」とは、ハイブリダイズ技術やPCR
技術により単離されるタンパク質が、植物にいもち病に
対する抵抗性を付与する機能を有することを指す。ハイ
ブリダイズ技術やPCR技術により遺伝子を単離するため
の植物としては、イネ以外に、例えば、オオムギ、コム
ギ、アワ、キビ、ヒエ、ハトムギなどいもち病菌の宿主
となりうる作物が挙げられる(作物病害事典 1988 岸国
平編 全国農村教育教会参照)。単離された遺伝子がコ
ードするタンパク質が「Pi-b」タンパク質と同等の機能
を有す場合、通常、「Pi-b」タンパク質とアミノ酸配列
において高い相同性を有する。高い相同性とは、好まし
くは30%以上の相同性、さらに好ましくは50%以上の相
同性、さらに好ましくは70%以上の相同性、さらに好ま
しくは90%以上の相同性を指す。
【0012】本発明のタンパク質は、当業者に公知の方
法により、遺伝子組み換え技術を利用して調製した組み
換えタンパク質として、また天然のタンパク質として調
製することができる。組み換えタンパク質は、後述する
が、例えば、本発明のタンパク質をコードするDNAを適
当な発現ベクターに挿入し、該ベクターを適当な細胞に
導入し、該形質転換細胞から精製することにより調製す
ることが可能である。また、天然のタンパク質は、例え
ば、調製した組み換えタンパク質若しくはその部分ペプ
チドを適当な免疫動物に免疫することにより調製した抗
体を結合したアフィニティーカラムに、本発明のタンパ
ク質を発現している細胞(例えば、イネ細胞など)など
から調製した抽出液を接触させて、該カラムに結合する
タンパク質を精製することにより調製することができ
る。
【0013】また、本発明は、上記本発明のタンパク質
をコードするDNAに関する。本発明のDNAは、本発明のタ
ンパク質をコードし得るものであれば特に制限はなく、
ゲノムDNA、cDNA、および化学合成DNAなどが含まれる。
本発明のDNAに含まれる「Pi-b」cDNAの塩基配列および
「Pi-b」ゲノムDNAの塩基配列をそれぞれ配列番号:2
および配列番号:3に示す。
【0014】ゲノムDNAおよびcDNAの調製は、当業者に
とって常套手段を利用して行うことが可能である。ゲノ
ムDNAは、例えば、いもち病抵抗性遺伝子を有するイネ
品種(例えば、東北IL9号)の葉組織からゲノムDNAを抽
出し、ゲノミックライブラリー(ベクターとしては、プ
ラスミド、ファージ、コスミド、BACなどが利用でき
る)を作成し、これを展開して、本発明タンパク質をコ
ードするDNA(例えば、配列番号:1、2)を基に調製
したプローブを用いてコロニーハイブリダイゼーション
あるいはプラークハイブリダイゼーションを行うことに
より調製することが可能である。また、本発明タンパク
質をコードするDNA(例えば、配列番号:1、2)に特
異的なプライマーを作成し、これを利用したPCRをおこ
なうことによって調製することも可能である。また、cD
NAは、例えば、いもち病抵抗性遺伝子を有するイネ品種
(例えば、東北IL9号)の葉組織から抽出したmRNAを基
にcDNAを合成し、これをλZAP等のベクターに挿入してc
DNAライブラリーを作成し、これを展開して、上記と同
様にコロニーハイブリダイゼーションあるいはプラーク
ハイブリダイゼーションを行うことにより、また、PCR
を行うことにより調製することが可能である。
【0015】本発明のDNAは、例えば、組み換えタンパ
ク質の調製やいもち病抵抗性の形質転換植物体の作出な
どに利用することが可能である。組み換えタンパク質を
調製する場合には、通常、本発明のタンパク質をコード
するDNAを適当な発現ベクターに挿入し、該ベクターを
適当な細胞に導入し、形質転換細胞を培養して発現させ
たタンパク質を精製する。組み換えタンパク質は、精製
を容易にするなどの目的で、他のタンパク質との融合タ
ンパク質として発現させることも可能である。例えば、
大腸菌を宿主としてマルトース結合蛋白質との融合蛋白
質として調製する方法(米国New England BioLabs社発
売のベクターpMALシリーズ)、グルタチオン-S-トラン
スフェラーゼ(GST)との融合蛋白質として調製する方法
(AmershamPharmacia Biotech社発売のベクターpGEXシ
リーズ)、ヒスチジンタグを付加して調製する方法(No
vagen社のpETシリーズ)などを利用することが可能であ
る。宿主細胞としては、組み換えタンパク質の発現に適
した細胞であれば特に制限はなく、上記の大腸菌の他、
例えば、酵母、種々の動植物細胞、昆虫細胞などを用い
ることが可能である。宿主細胞へのベクターの導入に
は、当業者に公知の種々の方法を用いることが可能であ
る。例えば、大腸菌への導入には、カルシウムイオンを
利用した導入方法(Mandel, M. & Higa, A. Journal of
Molecular Biology, Vol.53, 158-162,(1970)、Hanaha
n, D. Journal of Molecular Biology, Vol.166, 557-5
80,(1983))を用いることができる。宿主細胞内で発現
させた組み換えタンパク質は、当業者に公知の方法によ
り精製することが可能である。組み換えタンパク質を上
記したマルトース結合蛋白質などとの融合タンパク質と
して発現させた場合には、容易にアフィニティー精製を
行うことが可能である。
【0016】また、本発明のDNAを利用していもち病抵
抗性の形質転換植物体を作製する場合には、本発明のタ
ンパク質をコードするDNAを適当なベクターに挿入し
て、これを植物細胞に導入し、これにより得られた形質
転換植物細胞を再生させる。用いられるベクターとして
は、植物細胞内で挿入遺伝子を発現させることが可能な
ものであれば特に制限はない。例えば、植物細胞内での
恒常的な遺伝子発現を行うためのプロモーター(例え
ば、カリフラワーモザイクウイルスの35Sプロモータ
ー)を有するベクターや外的な刺激により誘導的に活性
化されるプロモーターを有するベクターを用いることも
可能である。ベクターを挿入する植物細胞としては、特
に制限はないが、イネ科植物の細胞が好ましい。イネ以
外に、例えば、オオムギ、コムギ、アワ、キビ、ヒエ、
ハトムギなどが挙げられる。なお、ここでいう「植物細
胞」には、種々の形態の植物細胞、例えば、懸濁培養細
胞、プロトプラスト、葉の切片、カルスなどが含まれ
る。植物細胞へのベクターの導入は、ポリエチレングリ
コール法、電気穿孔法(エレクトロポーレーション)、
アグロバクテリウムを介する方法、パーティクルガン法
など当業者に公知の種々の方法を用いることができる。
形質転換植物細胞からの植物体の再生は、植物細胞の種
類に応じて当業者に公知の方法で行うことが可能である
(Toki et al. (1995)Plant Physiol. 100:1503-1507参
照)。
【0017】また、本発明は、上記本発明のタンパク質
に結合する抗体に関する。本発明の抗体には、ポリクロ
ーナル抗体およびモノクローナル抗体が含まれる。ポリ
クローナル抗体は、精製した本発明のタンパク質若しく
はその一部のペプチドをウサギなどの免疫動物に免疫
し、一定期間のにちに血液を採取し、血ぺいを除去する
ことにより調製することが可能である。また、モノクロ
ーナル抗体は、上記タンパク質若しくはペプチドで免疫
した動物の抗体産生細胞と骨腫瘍細胞とを融合させ、目
的とする抗体を産生する単一クローンの細胞(ハイブリ
ドーマ)を単離し、該細胞から抗体を得ることにより調
製することができる。これにより得られた抗体は、本発
明のタンパク質の精製や検出などに利用することが可能
である。
【0018】また、本発明は、本発明のタンパク質をコ
ードするDNAと特異的にハイブリダイズする、少なくと
も15ヌクレオチドの鎖長を有するDNAに関する。ここで
「特異的にハイブリダイズする」とは、通常のハイブリ
ダイゼーション条件下、好ましくはストリンジェントな
ハイブリダイゼーション条件下で、本発明のタンパク質
をコードするDNAとハイブリダイズし、他のタンパク質
をコードするDNAとハイブリダイズしないことを指す。
このようなDNAは、例えば、本発明のタンパク質をコー
ドするDNAを検出または単離するためのプローブとし
て、また増幅するためのプライマーとして利用すること
が可能である。例えば、配列番号:2または3に記載の
塩基配列からなるDNAに相補的な少なくとも15ヌクレオ
チドの配列を含むDNAが挙げられる。
【0019】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが本発明はこれら実施例に制限されるものでは
ない。
【0020】[実施例1] 低精度の連鎖解析
まずPi-bのイネ第2染色体高密度連鎖地図上でのおよそ
の位置を明らかにするために、DNAマーカーによる連鎖
解析を行った。材料にはササニシキに東北IL9号を交配
して得たF1 にササニシキの戻し交配を2回行なって得た
F1の自殖による分離集団94個体を用いた。この連鎖解析
の結果、Pi-bは第2染色体のRFLPマーカーC278BとC739
の間に存在し、R1792, R257およびR2821とは共分離した
(日本育種学会第87回講演会、図1)。
【0021】[実施例2] 高精度連鎖解析
遺伝子単離を実行可能にするため大規模分離集団の解析
を行なった。上記分離集団94個体の中から、Pi-b遺伝子
座がヘテロである個体を20個体選抜し、その自殖種子を
合わせた約20000粒を分離集団とした(日本育種学会第8
9回講演会)。この解析では、作業の効率化を図るため
にプールサンプリング法を適用した(Churchill et al.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:16-20(1993))。
【0022】連鎖解析の精度を高めるためには、解析集
団の大規模化と同時に目標遺伝子近傍に存在するDNAマ
ーカーを増加させることが不可欠である。そこで、低精
度連鎖解析により特定されたPi-b遺伝子を含むYACクロ
ーンのサブクローニングをおこなって、Pi-b遺伝子周辺
のDNAマーカーを増やした(Monna et al.Theor.Appl.Ge
net. 94:170-176(1997))。この大規模集団の連鎖解析
の結果、Pi-b遺伝子の存在領域をRFLPマーカーS1916とG
7030の間に絞りこんだ。またPi-b遺伝子とは3種類のRFL
PマーカーG7010、G7021およびG7023が共分離した(図
2)。
【0023】[実施例3] コスミドクローンによるPi-b
遺伝子領域の整列化
Pi-b遺伝子領域をさらに絞り込むために、コスミドクロ
ーンによる整列化を行なった。抵抗性遺伝子を保有する
東北IL9号のゲノムDNAをCTAB法により抽出し、制限酵素
断Sau3Aによって部分分解した。この産物からショ糖密
度勾配遠心により約30kb〜50kbの断片を分画した。この
分画DNA断片とコスミドベクターSuperCos(Stratagene
社製、Wahl et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA 84:2160-2164)を用いてコスミドライブラリーを作
成した。このコスミドライブラリーに対して、Pi-b近傍
のDNAクローンをプローブ(S1916, G7010, G7021, G702
3, G7030の5種)にして選抜を行なったところ、6種類の
コスミドクローンCOS140、COS147、COS117、COS137、CO
S205およびCOS207が選抜された。これらのクローンの制
限酵素地図を作成しそれらの重なりを調べたところ、3
種類のクローンCOS140、COS147およびCOS117によってカ
バーされるゲノム領域にPi-bが存在することが明らかと
なった(図2)。
【0024】[実施例4] 塩基配列解析による候補遺伝
子領域の特定
Pi-b遺伝子を含むと考えられる3種の整列化コスミドク
ローンのサブクローニングを行ない、部分的な塩基配列
を解析した。得られた塩基配列を公開されているヌクレ
オチドデータベースに対して類似性検索BLASTを行なっ
たところ、COS140から得られた2.3 kbクローンおよびCO
S147から得られた4.6 kbクローンの部分塩基配列がアラ
ビドプシスの病害抵抗性遺伝子RPM1の他、数種の植物の
抵抗性遺伝子に共通に認められるヌクレオチド結合部位
(NBS)を有することが明らかとなった。従って、これ
らの塩基配列はPi-b遺伝子の候補領域として有望である
と考えられた。
【0025】[実施例5] 発現遺伝子の単離と塩基配列
の解析
塩基配列の解析により明らかとなった候補領域が抵抗性
品種東北IL9号において発現しているかどうかを調べる
ために、発現遺伝子(cDNA)の単離を試みた。抵抗性品
種東北IL9号を播種し、第4葉期にいもち病菌TH68-141
(レース003)を常法により接種し、6時間、12時間およ
び24時間後の3回に渡って葉を採取した。このサンプル
からmRNAを抽出し、cDNAライブラリーを作成した。この
ライブラリーに対して候補ゲノム領域である2.3kbの断
片をさらにサブクローニングして得られた1kbの断片を
プローブ(配列番号:3の3471から4507)にしてcDNAクロ
ーンを選抜したところ、8種類のクローンが選抜され
た。塩基配列解析の結果、これらのクローンのうちc23
の塩基配列がコスミドクローンCOS140の塩基配列と完全
に一致していたことから、候補ゲノム領域は東北IL9号
において発現していることを確認した。選抜されたc23
は約4kbの長さをもつクローンであり、ほぼ遺伝子の全
域を含んでいると考えられた。このクローンの全塩基配
列を決定した(配列番号:2)。
【0026】[実施例6] 候補cDNAの発現パターンの解
析
感受性品種ササニシキならびに抵抗性品種東北IL9号に
ついて、候補cDNA領域の発現パターンの違いを明らかに
した。上記2品種の第4葉期にいもち病菌レース003を接
種し、6時間、12時間および24時間経過した葉を採取し
た後、mRNAを抽出してRT-PCRの鋳型とした。cDNAクロー
ンc23の塩基配列情報からその領域を特異的に増幅でき
るプライマー「配列番号:4/5'-AGGGAAAAATGGAAATGTG
C-3'(アンチセンス)」、「配列番号:5/ 5'-AGTAACCT
TCTGCTGCCCAA-3'」を設計し、RT-PCRをおこなった。PCR
は、94度で2分、「94度で1分、55度で2分、72度で3分」
を30サイクル、72度で7分の条件で行った。その結果、
感受性品種ササニシキのmRNAではまったく増幅されない
のに対して、抵抗性品種東北IL9号では増幅が認められ
た(図3)。このことからcDNAクローンc23は抵抗性品
種に特異的に発現していることが示唆された。またc23
の領域に隣接するNBSを含む4.6kbの断片(NBSを含む)
についても、特異的なプライマー「配列番号:6/5'-T
TACCATCCCAGCAATCAGC-3'(センス)」、「配列番号:7
/5'-AGACACCCTGCCACACAACA-3'(アンチセンス)」を設
計してRT-PCRを行ったところ。この領域は感受性品種サ
サニシキおよび抵抗性品種東北IL9号のいずれでも増幅
されなかった(図3)。したがってc23に対応するゲノ
ム領域がPi-b遺伝子座である可能性が強く示唆された。
【0027】[実施例7] Pi-bの候補遺伝子のゲノム塩
基配列の解析
cDNAクローン c23に対応するゲノム領域の完全な塩基配
列を決定した。コスミドクローンCOS140を5種類の制限
酵素によってサブクローン化し、それらの両端に塩基配
列をできるかぎり決定した。また解析できなかった領域
についてはデリーション法により断片サイズを小さくし
て、塩基配列を決定した。決定した領域は10.3kbである
(配列番号:3)。
【0028】[実施例8] Pi-b遺伝子の構造
Pi-bの候補cDNAであるc23は全長3925塩基対で、2つの
イントロンによって分断された3つのエキソンからなる3
618塩基対のORFをもつ。Pi-b転写産物は1206のアミノ酸
残基からなる蛋白質で(配列番号:1)、多くの抵抗性
遺伝子に認められる二つのNBS(アミノ酸386-395[P-ル
ープ]およびアミノ酸474-484[キナーゼ2a])と三つの保
存領域(アミノ酸503-513[ドメイン1]、572-583[ドメイ
ン22]および631-638[ドメイン3])をもつ。これらはRPM
1を代表とする既知の抵抗性遺伝子の保存領域と高い相
同性を示した(図4)。またこの遺伝子の3’側には12
回くり返す不完全なロイシンに富む領域(LRR:アミノ
酸755-1058)が存在した。これらの構造は、既報のNBS-
LRRクラスの抵抗性遺伝子と極めて高い類似性を示し
た。以上の結果から、解析したcDNAおよびそれに対応す
るゲノム領域はイネいもち病抵抗性遺伝子Pi-bであると
判断した。
【0029】
【発明の効果】本発明により、いもち病抵抗性遺伝子Pi
-bおよびこれと機能的に同等な遺伝子、これら遺伝子が
コードするタンパク質が提供された。本発明のいもち病
抵抗性遺伝子は、広範ないもち病菌に対する抵抗性を植
物体に付与することができる。このため、例えば、イネ
など有用農作物に導入することにより病害を抑制し、農
作物の収穫量を増大させる上で大いに貢献しうる。
【0030】
【配列表】
(1)出願人氏名又は名称:農林水産省農業生物資源研究所長 中川原 捷洋
社団法人 農林水産先端技術産業振興センター
(2)発明の名称:いもち病抵抗性遺伝子
(3)整理番号:MOA−001
(4)出願番号:
(5)出願日:
(6)配列の数:7
配列番号 : 1
配列の長さ : 1205
配列の型 : アミノ酸
トポロジー : 直鎖状
配列の種類 : タンパク質
配 列
Met Met Arg Ser Phe Met Met Glu Ala His
1 5 10
Glu Glu Gln Asp Asn Ser Lys Val Val Lys Thr Trp Val Lys Gln Val
15 20 25
Arg Asp Thr Ala Tyr Asp Val Glu Asp Ser Leu Gln Asp Phe Ala Val
30 35 40
His Leu Lys Arg Pro Ser Trp Trp Arg Phe Pro Arg Thr Leu Leu Glu
45 50 55
Arg His Arg Val Ala Lys Gln Met Lys Glu Leu Arg Asn Lys Val Glu
60 65 70
Asp Val Ser Gln Arg Asn Val Arg Tyr His Leu Ile Lys Gly Ser Ala
75 80 85 90
Lys Ala Thr Ile Asn Ser Thr Glu Gln Ser Ser Val Ile Ala Thr Ala
95 100 105
Ile Phe Gly Ile Asp Asp Ala Arg Arg Ala Ala Lys Gln Asp Asn Gln
110 115 120
Arg Val Asp Leu Val Gln Leu Ile Asn Ser Glu Asp Gln Asp Leu Lys
125 130 135
Val Ile Ala Val Trp Gly Thr Ser Gly Asp Met Gly Gln Thr Thr Ile
140 145 150
Ile Arg Met Ala Tyr Glu Asn Pro Asp Val Gln Ile Arg Phe Pro Cys
155 160 165 170
Arg Ala Trp Val Arg Val Met His Pro Phe Ser Pro Arg Asp Phe Val
175 180 185
Gln Ser Leu Val Asn Gln Leu His Ala Thr Gln Gly Val Glu Ala Leu
190 195 200
Leu Glu Lys Glu Lys Thr Glu Gln Asp Leu Ala Lys Lys Phe Asn Gly
205 210 215
Cys Val Asn Asp Arg Lys Cys Leu Ile Val Leu Asn Asp Leu Ser Thr
220 225 230
Ile Glu Glu Trp Asp Gln Ile Lys Lys Cys Phe Gln Lys Cys Arg Lys
235 240 245 250
Gly Ser Arg Ile Ile Val Ser Ser Thr Gln Val Glu Val Ala Ser Leu
255 260 265
Cys Ala Gly Gln Glu Ser Gln Ala Ser Glu Leu Lys Gln Leu Ser Ala
270 275 280
Asp Gln Thr Leu Tyr Ala Phe Tyr Asp Lys Gly Ser Gln Ile Ile Glu
285 290 295
Asp Ser Val Lys Pro Val Ser Ile Ser Asp Val Ala Ile Thr Ser Thr
300 305 310
Asn Asn His Thr Val Ala His Gly Glu Ile Ile Asp Asp Gln Ser Met
315 320 325 330
Asp Ala Asp Glu Lys Lys Val Ala Arg Lys Ser Leu Thr Arg Ile Arg
335 340 345
Thr Ser Val Gly Ala Ser Glu Glu Ser Gln Leu Ile Gly Arg Glu Lys
350 355 360
Glu Ile Ser Glu Ile Thr His Leu Ile Leu Asn Asn Asp Ser Gln Gln
365 370 375
Val Gln Val Ile Ser Val Trp Gly Met Gly Gly Leu Gly Lys Thr Thr
380 385 390
Leu Val Ser Gly Val Tyr Gln Ser Pro Arg Leu Ser Asp Lys Phe Asp
395 400 405 410
Lys Tyr Val Phe Val Thr Ile Met Arg Pro Phe Ile Leu Val Glu Leu
415 420 425
Leu Arg Ser Leu Ala Glu Gln Leu His Lys Gly Ser Ser Lys Lys Glu
430 435 440
Glu Leu Leu Glu Asn Arg Val Ser Ser Lys Lys Ser Leu Ala Ser Met
445 450 455
Glu Asp Thr Glu Leu Thr Gly Gln Leu Lys Arg Leu Leu Glu Lys Lys
460 465 470
Ser Cys Leu Ile Val Leu Asp Asp Phe Ser Asp Thr Ser Glu Trp Asp
475 480 485 490
Gln Ile Lys Pro Thr Leu Phe Pro Leu Leu Glu Lys Thr Ser Arg Ile
495 500 505
Ile Val Thr Thr Arg Lys Glu Asn Ile Ala Asn His Cys Ser Gly Lys
510 515 520
Asn Gly Asn Val His Asn Leu Lys Val Leu Lys His Asn Asp Ala Leu
525 530 535
Cys Leu Leu Ser Glu Lys Val Phe Glu Glu Ala Thr Tyr Leu Asp Asp
540 545 550
Gln Asn Asn Pro Glu Leu Val Lys Glu Ala Lys Gln Ile Leu Lys Lys
555 560 565 570
Cys Asp Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Ile Gly Gly Phe Leu Ala
575 580 585
Asn Arg Pro Lys Thr Pro Glu Glu Trp Arg Lys Leu Asn Glu Asn Ile
590 595 600
Asn Ala Glu Leu Glu Met Asn Pro Glu Leu Gly Met Ile Arg Thr Val
605 610 615
Leu Glu Lys Ser Tyr Asp Gly Leu Pro Tyr His Leu Lys Ser Cys Phe
620 625 630
Leu Tyr Leu Ser Ile Phe Pro Glu Asp Gln Ile Ile Ser Arg Arg Arg
635 640 645 650
Leu Val His Arg Trp Ala Ala Glu Gly Tyr Ser Thr Ala Ala His Gly
655 660 665
Lys Ser Ala Ile Glu Ile Ala Asn Gly Tyr Phe Met Glu Leu Lys Asn
670 675 680
Arg Ser Met Ile Leu Pro Phe Gln Gln Ser Gly Ser Ser Arg Lys Ser
685 690 695
Ile Asp Ser Cys Lys Val His Asp Leu Met Arg Asp Ile Ala Ile Ser
700 705 710
Lys Ser Thr Glu Glu Asn Leu Val Phe Arg Val Glu Glu Gly Cys Ser
715 720 725 730
Ala Tyr Ile His Gly Ala Ile Arg His Leu Ala Ile Ser Ser Asn Trp
735 740 745
Lys Gly Asp Lys Ser Glu Phe Glu Gly Ile Val Asp Leu Ser Arg Ile
750 755 760
Arg Ser Leu Ser Leu Phe Gly Asp Trp Lys Pro Phe Phe Val Tyr Gly
765 770 775
Lys Met Arg Phe Ile Arg Val Leu Asp Phe Glu Gly Thr Arg Gly Leu
780 785 790
Glu Tyr His His Leu Asp Gln Ile Trp Lys Leu Asn His Leu Lys Phe
795 800 805 810
Leu Ser Leu Arg Gly Cys Tyr Arg Ile Asp Leu Leu Pro Asp Leu Leu
815 820 825
Gly Asn Leu Arg Gln Leu Gln Met Leu Asp Ile Arg Gly Thr Tyr Val
830 835 840
Lys Ala Leu Pro Lys Thr Ile Ile Lys Leu Gln Lys Leu Gln Tyr Ile
845 850 855
His Ala Gly Arg Lys Thr Asp Tyr Val Trp Glu Glu Lys His Ser Leu
860 865 870
Met Gln Arg Cys Arg Lys Val Gly Cys Ile Cys Ala Thr Cys Cys Leu
875 880 885 890
Pro Leu Leu Cys Glu Met Tyr Gly Pro Leu His Lys Ala Leu Ala Arg
895 900 905
Arg Asp Ala Trp Thr Phe Ala Cys Cys Val Lys Phe Pro Ser Ile Met
910 915 920
Thr Gly Val His Glu Glu Glu Gly Ala Met Val Pro Ser Gly Ile Arg
925 930 935
Lys Leu Lys Asp Leu His Thr Leu Arg Asn Ile Asn Val Gly Arg Gly
940 945 950
Asn Ala Ile Leu Arg Asp Ile Gly Met Leu Thr Gly Leu His Lys Leu
955 960 965 970
Gly Val Ala Gly Ile Asn Lys Lys Asn Gly Arg Ala Phe Arg Leu Ala
975 980 985
Ile Ser Asn Leu Asn Lys Leu Glu Ser Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly
990 995 1000
Met Pro Gly Leu Cys Gly Cys Leu Asp Asp Ile Ser Ser Pro Pro Glu
1005 1010 1015
Asn Leu Gln Ser Leu Lys Leu Tyr Gly Ser Leu Lys Thr Leu Pro Glu
1020 1025 1030
Trp Ile Lys Glu Leu Gln His Leu Val Lys Leu Lys Leu Val Ser Thr
1035 1040 1045 1050
Arg Leu Leu Glu His Asp Val Ala Met Glu Phe Leu Gly Glu Leu Pro
1055 1060 1065
Lys Val Glu Ile Leu Val Ile Ser Pro Phe Lys Ser Glu Glu Ile His
1070 1075 1080
Phe Lys Pro Pro Gln Thr Gly Thr Ala Phe Val Ser Leu Arg Val Leu
1085 1090 1095
Lys Leu Ala Gly Leu Trp Gly Ile Lys Ser Val Lys Phe Glu Glu Gly
1100 1105 1110
Thr Met Pro Lys Leu Glu Arg Leu Gln Val Gln Gly Arg Ile Glu Asn
1115 1120 1125 1130
Glu Ile Gly Phe Ser Gly Leu Glu Phe Leu Gln Asn Ile Asn Glu Val
1135 1140 1145
Gln Leu Ser Val Trp Phe Pro Thr Asp His Asp Arg Ile Arg Ala Ala
1150 1155 1160
Arg Ala Ala Gly Ala Asp Tyr Glu Thr Ala Trp Glu Glu Glu Val Gln
1165 1170 1175
Glu Ala Arg Arg Lys Gly Gly Glu Leu Lys Arg Lys Ile Arg Glu Gln
1180 1185 1190
Leu Ala Arg Asn Pro Asn Gln Pro Ile Ile Thr
1195 1200 1205
配列番号 : 2
配列の長さ : 3925
配列の型 : 核酸
鎖の数 : 二本鎖
トポロジー : 直鎖状
配列の種類 : cDNA to mRNA
配列の特徴
特徴を表す記号 : CDS
存在位置 : 82 .. 3696
特徴を決定した方法 : E
配 列
GCAAAATCTG CATTTGCTGA GGAGGTGGCC TTGCAGCTTG GTATCCAGAA AGACCACACA 60
TTTGTTGCAG ATGAGCTTGA G ATG ATG AGG TCT TTC ATG ATG GAG GCG CAC 111
Met Met Arg Ser Phe Met Met Glu Ala His
1 5 10
GAG GAG CAA GAT AAC AGC AAG GTG GTC AAG ACT TGG GTG AAG CAA GTC 159
Glu Glu Gln Asp Asn Ser Lys Val Val Lys Thr Trp Val Lys Gln Val
15 20 25
CGT GAC ACT GCC TAT GAT GTT GAG GAC AGC CTC CAG GAT TTC GCT GTT 207
Arg Asp Thr Ala Tyr Asp Val Glu Asp Ser Leu Gln Asp Phe Ala Val
30 35 40
CAT CTT AAG AGG CCA TCC TGG TGG CGA TTT CCT CGT ACG CTG CTC GAG 255
His Leu Lys Arg Pro Ser Trp Trp Arg Phe Pro Arg Thr Leu Leu Glu
45 50 55
CGG CAC CGT GTG GCC AAG CAG ATG AAG GAG CTT AGG AAC AAG GTC GAG 303
Arg His Arg Val Ala Lys Gln Met Lys Glu Leu Arg Asn Lys Val Glu
60 65 70
GAT GTC AGC CAG AGG AAT GTG CGG TAC CAC CTC ATC AAG GGC TCT GCC 351
Asp Val Ser Gln Arg Asn Val Arg Tyr His Leu Ile Lys Gly Ser Ala
75 80 85 90
AAG GCC ACC ATC AAT TCC ACT GAG CAA TCT AGC GTT ATT GCT ACA GCC 399
Lys Ala Thr Ile Asn Ser Thr Glu Gln Ser Ser Val Ile Ala Thr Ala
95 100 105
ATA TTC GGC ATT GAC GAT GCA AGG CGT GCC GCA AAG CAG GAC AAT CAG 447
Ile Phe Gly Ile Asp Asp Ala Arg Arg Ala Ala Lys Gln Asp Asn Gln
110 115 120
AGA GTG GAT CTT GTC CAA CTA ATC AAC AGT GAG GAT CAG GAC CTA AAA 495
Arg Val Asp Leu Val Gln Leu Ile Asn Ser Glu Asp Gln Asp Leu Lys
125 130 135
GTG ATC GCG GTC TGG GGA ACA AGT GGT GAT ATG GGC CAA ACA ACA ATA 543
Val Ile Ala Val Trp Gly Thr Ser Gly Asp Met Gly Gln Thr Thr Ile
140 145 150
ATC AGG ATG GCT TAT GAG AAC CCA GAT GTC CAA ATC AGA TTC CCA TGC 591
Ile Arg Met Ala Tyr Glu Asn Pro Asp Val Gln Ile Arg Phe Pro Cys
155 160 165 170
CGT GCA TGG GTA AGG GTG ATG CAT CCT TTC AGT CCA AGA GAC TTT GTC 639
Arg Ala Trp Val Arg Val Met His Pro Phe Ser Pro Arg Asp Phe Val
175 180 185
CAG AGC TTG GTG AAT CAG CTT CAT GCA ACC CAA GGG GTT GAA GCT CTG 687
Gln Ser Leu Val Asn Gln Leu His Ala Thr Gln Gly Val Glu Ala Leu
190 195 200
TTG GAG AAA GAG AAG ACA GAA CAA GAT TTA GCT AAG AAA TTC AAT GGA 735
Leu Glu Lys Glu Lys Thr Glu Gln Asp Leu Ala Lys Lys Phe Asn Gly
205 210 215
TGT GTG AAT GAT AGG AAG TGT CTA ATT GTG CTT AAT GAC CTA TCC ACC 783
Cys Val Asn Asp Arg Lys Cys Leu Ile Val Leu Asn Asp Leu Ser Thr
220 225 230
ATT GAA GAG TGG GAC CAG ATT AAG AAA TGC TTC CAA AAA TGC AGG AAA 831
Ile Glu Glu Trp Asp Gln Ile Lys Lys Cys Phe Gln Lys Cys Arg Lys
235 240 245 250
GGA AGC CGA ATC ATA GTG TCA AGC ACT CAA GTT GAA GTT GCA AGC TTA 879
Gly Ser Arg Ile Ile Val Ser Ser Thr Gln Val Glu Val Ala Ser Leu
255 260 265
TGT GCT GGG CAA GAA AGC CAA GCC TCA GAG CTA AAG CAA TTG TCT GCT 927
Cys Ala Gly Gln Glu Ser Gln Ala Ser Glu Leu Lys Gln Leu Ser Ala
270 275 280
GAT CAG ACC CTT TAC GCA TTC TAC GAC AAG GGT TCC CAA ATT ATA GAG 975
Asp Gln Thr Leu Tyr Ala Phe Tyr Asp Lys Gly Ser Gln Ile Ile Glu
285 290 295
GAT TCA GTG AAG CCA GTG TCT ATC TCG GAT GTG GCC ATC ACA AGT ACA 1023
Asp Ser Val Lys Pro Val Ser Ile Ser Asp Val Ala Ile Thr Ser Thr
300 305 310
AAC AAT CAT ACA GTG GCC CAT GGT GAG ATT ATA GAT GAT CAA TCA ATG 1071
Asn Asn His Thr Val Ala His Gly Glu Ile Ile Asp Asp Gln Ser Met
315 320 325 330
GAT GCT GAT GAG AAG AAG GTG GCT AGA AAG AGT CTT ACT CGC ATT AGG 1119
Asp Ala Asp Glu Lys Lys Val Ala Arg Lys Ser Leu Thr Arg Ile Arg
335 340 345
ACA AGT GTT GGT GCT TCG GAG GAA TCA CAA CTT ATT GGG CGA GAG AAA 1167
Thr Ser Val Gly Ala Ser Glu Glu Ser Gln Leu Ile Gly Arg Glu Lys
350 355 360
GAA ATA TCT GAA ATA ACA CAC TTA ATT TTA AAC AAT GAT AGC CAG CAG 1215
Glu Ile Ser Glu Ile Thr His Leu Ile Leu Asn Asn Asp Ser Gln Gln
365 370 375
GTT CAG GTG ATC TCT GTG TGG GGA ATG GGT GGC CTT GGA AAA ACC ACC 1263
Val Gln Val Ile Ser Val Trp Gly Met Gly Gly Leu Gly Lys Thr Thr
380 385 390
CTA GTA AGC GGT GTT TAT CAA AGC CCA AGG CTG AGT GAT AAG TTT GAC 1311
Leu Val Ser Gly Val Tyr Gln Ser Pro Arg Leu Ser Asp Lys Phe Asp
395 400 405 410
AAG TAT GTT TTT GTC ACA ATC ATG CGT CCT TTC ATT CTT GTA GAG CTC 1359
Lys Tyr Val Phe Val Thr Ile Met Arg Pro Phe Ile Leu Val Glu Leu
415 420 425
CTT AGG AGT TTG GCT GAG CAA CTA CAT AAA GGA TCT TCT AAG AAG GAA 1407
Leu Arg Ser Leu Ala Glu Gln Leu His Lys Gly Ser Ser Lys Lys Glu
430 435 440
GAA CTG TTA GAA AAT AGA GTC AGC AGT AAG AAA TCA CTA GCA TCG ATG 1455
Glu Leu Leu Glu Asn Arg Val Ser Ser Lys Lys Ser Leu Ala Ser Met
445 450 455
GAG GAT ACC GAG TTG ACT GGG CAG TTG AAA AGG CTT TTA GAA AAG AAA 1503
Glu Asp Thr Glu Leu Thr Gly Gln Leu Lys Arg Leu Leu Glu Lys Lys
460 465 470
AGT TGC TTG ATT GTT CTA GAT GAT TTC TCA GAT ACC TCA GAA TGG GAC 1551
Ser Cys Leu Ile Val Leu Asp Asp Phe Ser Asp Thr Ser Glu Trp Asp
475 480 485 490
CAG ATA AAA CCA ACG TTA TTC CCC CTG TTG GAA AAG ACA AGC CGA ATA 1599
Gln Ile Lys Pro Thr Leu Phe Pro Leu Leu Glu Lys Thr Ser Arg Ile
495 500 505
ATT GTG ACT ACA AGA AAA GAG AAT ATT GCC AAC CAT TGC TCA GGG AAA 1647
Ile Val Thr Thr Arg Lys Glu Asn Ile Ala Asn His Cys Ser Gly Lys
510 515 520
AAT GGA AAT GTG CAC AAC CTT AAA GTT CTT AAA CAT AAT GAT GCA TTG 1695
Asn Gly Asn Val His Asn Leu Lys Val Leu Lys His Asn Asp Ala Leu
525 530 535
TGC CTC TTG AGT GAG AAG GTA TTT GAG GAG GCT ACA TAT TTG GAT GAT 1743
Cys Leu Leu Ser Glu Lys Val Phe Glu Glu Ala Thr Tyr Leu Asp Asp
540 545 550
CAG AAC AAT CCA GAG TTG GTT AAA GAA GCA AAA CAA ATC CTA AAG AAG 1791
Gln Asn Asn Pro Glu Leu Val Lys Glu Ala Lys Gln Ile Leu Lys Lys
555 560 565 570
TGC GAT GGA CTG CCC CTT GCA ATA GTT GTC ATA GGT GGA TTC TTG GCA 1839
Cys Asp Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Ile Gly Gly Phe Leu Ala
575 580 585
AAC CGA CCA AAG ACC CCA GAA GAG TGG AGA AAA TTG AAC GAG AAT ATC 1887
Asn Arg Pro Lys Thr Pro Glu Glu Trp Arg Lys Leu Asn Glu Asn Ile
590 595 600
AAT GCT GAG TTG GAA ATG AAT CCA GAG CTT GGA ATG ATA AGA ACC GTC 1935
Asn Ala Glu Leu Glu Met Asn Pro Glu Leu Gly Met Ile Arg Thr Val
605 610 615
CTT GAA AAA AGC TAT GAT GGT TTA CCA TAC CAT CTC AAG TCA TGT TTT 1983
Leu Glu Lys Ser Tyr Asp Gly Leu Pro Tyr His Leu Lys Ser Cys Phe
620 625 630
TTA TAT CTG TCC ATT TTC CCT GAA GAC CAG ATC ATT AGT CGA AGG CGT 2031
Leu Tyr Leu Ser Ile Phe Pro Glu Asp Gln Ile Ile Ser Arg Arg Arg
635 640 645 650
TTG GTG CAT CGT TGG GCA GCA GAA GGT TAC TCA ACT GCA GCA CAT GGG 2079
Leu Val His Arg Trp Ala Ala Glu Gly Tyr Ser Thr Ala Ala His Gly
655 660 665
AAA TCT GCC ATT GAA ATA GCT AAC GGC TAC TTC ATG GAA CTC AAG AAT 2127
Lys Ser Ala Ile Glu Ile Ala Asn Gly Tyr Phe Met Glu Leu Lys Asn
670 675 680
AGA AGC ATG ATT TTA CCA TTC CAG CAA TCA GGT AGC AGC AGG AAA TCA 2175
Arg Ser Met Ile Leu Pro Phe Gln Gln Ser Gly Ser Ser Arg Lys Ser
685 690 695
ATT GAC TCT TGC AAA GTC CAT GAT CTC ATG CGT GAC ATC GCC ATC TCA 2223
Ile Asp Ser Cys Lys Val His Asp Leu Met Arg Asp Ile Ala Ile Ser
700 705 710
AAG TCA ACG GAG GAA AAC CTT GTT TTT AGG GTG GAG GAA GGC TGC AGC 2271
Lys Ser Thr Glu Glu Asn Leu Val Phe Arg Val Glu Glu Gly Cys Ser
715 720 725 730
GCG TAC ATA CAT GGT GCA ATT CGT CAT CTT GCT ATA AGT AGC AAC TGG 2319
Ala Tyr Ile His Gly Ala Ile Arg His Leu Ala Ile Ser Ser Asn Trp
735 740 745
AAG GGA GAT AAG AGT GAA TTC GAG GGC ATA GTG GAC CTG TCC CGA ATA 2367
Lys Gly Asp Lys Ser Glu Phe Glu Gly Ile Val Asp Leu Ser Arg Ile
750 755 760
CGA TCG TTA TCT CTG TTT GGG GAT TGG AAG CCA TTT TTT GTT TAT GGC 2415
Arg Ser Leu Ser Leu Phe Gly Asp Trp Lys Pro Phe Phe Val Tyr Gly
765 770 775
AAG ATG AGG TTT ATA CGA GTG CTT GAC TTT GAA GGG ACT AGA GGT CTA 2463
Lys Met Arg Phe Ile Arg Val Leu Asp Phe Glu Gly Thr Arg Gly Leu
780 785 790
GAA TAT CAT CAC CTT GAT CAG ATT TGG AAG CTT AAT CAC CTA AAA TTC 2511
Glu Tyr His His Leu Asp Gln Ile Trp Lys Leu Asn His Leu Lys Phe
795 800 805 810
CTT TCT CTA CGA GGA TGC TAT CGT ATT GAT CTA CTG CCA GAT TTA CTG 2559
Leu Ser Leu Arg Gly Cys Tyr Arg Ile Asp Leu Leu Pro Asp Leu Leu
815 820 825
GGC AAC CTG AGG CAA CTC CAG ATG CTA GAC ATC AGA GGT ACA TAT GTA 2607
Gly Asn Leu Arg Gln Leu Gln Met Leu Asp Ile Arg Gly Thr Tyr Val
830 835 840
AAG GCT TTG CCA AAA ACC ATC ATC AAG CTT CAG AAG CTA CAG TAC ATT 2655
Lys Ala Leu Pro Lys Thr Ile Ile Lys Leu Gln Lys Leu Gln Tyr Ile
845 850 855
CAT GCT GGG CGC AAA ACA GAC TAT GTA TGG GAG GAA AAG CAT AGT TTA 2703
His Ala Gly Arg Lys Thr Asp Tyr Val Trp Glu Glu Lys His Ser Leu
860 865 870
ATG CAG AGG TGT CGT AAG GTG GGA TGT ATA TGT GCA ACA TGT TGC CTC 2751
Met Gln Arg Cys Arg Lys Val Gly Cys Ile Cys Ala Thr Cys Cys Leu
875 880 885 890
CCT CTT CTT TGC GAA ATG TAT GGC CCT CTC CAT AAG GCC CTA GCC CGG 2799
Pro Leu Leu Cys Glu Met Tyr Gly Pro Leu His Lys Ala Leu Ala Arg
895 900 905
CGT GAT GCG TGG ACT TTC GCT TGC TGC GTG AAA TTC CCA TCT ATC ATG 2847
Arg Asp Ala Trp Thr Phe Ala Cys Cys Val Lys Phe Pro Ser Ile Met
910 915 920
ACG GGA GTA CAT GAA GAG GAA GGC GCT ATG GTG CCA AGT GGG ATT AGA 2895
Thr Gly Val His Glu Glu Glu Gly Ala Met Val Pro Ser Gly Ile Arg
925 930 935
AAA CTG AAA GAC TTG CAC ACA CTA AGG AAC ATA AAT GTC GGA AGG GGA 2943
Lys Leu Lys Asp Leu His Thr Leu Arg Asn Ile Asn Val Gly Arg Gly
940 945 950
AAT GCC ATC CTA CGA GAT ATC GGA ATG CTC ACA GGA TTA CAC AAG TTA 2991
Asn Ala Ile Leu Arg Asp Ile Gly Met Leu Thr Gly Leu His Lys Leu
955 960 965 970
GGA GTG GCT GGC ATC AAC AAG AAG AAT GGA CGA GCG TTT CGC TTG GCC 3039
Gly Val Ala Gly Ile Asn Lys Lys Asn Gly Arg Ala Phe Arg Leu Ala
975 980 985
ATT TCC AAC CTC AAC AAG CTG GAA TCA CTG TCT GTG AGT TCA GCA GGG 3087
Ile Ser Asn Leu Asn Lys Leu Glu Ser Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly
990 995 1000
ATG CCG GGC TTG TGT GGT TGC TTG GAT GAT ATA TCC TCG CCT CCG GAA 3135
Met Pro Gly Leu Cys Gly Cys Leu Asp Asp Ile Ser Ser Pro Pro Glu
1005 1010 1015
AAC CTA CAG AGC CTC AAG CTG TAC GGC AGT TTG AAA ACG TTG CCG GAA 3183
Asn Leu Gln Ser Leu Lys Leu Tyr Gly Ser Leu Lys Thr Leu Pro Glu
1020 1025 1030
TGG ATC AAG GAG CTC CAG CAT CTC GTG AAG TTA AAA CTA GTG AGT ACT 3231
Trp Ile Lys Glu Leu Gln His Leu Val Lys Leu Lys Leu Val Ser Thr
1035 1040 1045 1050
AGG CTA TTG GAG CAC GAC GTT GCT ATG GAA TTC CTT GGG GAA CTA CCG 3279
Arg Leu Leu Glu His Asp Val Ala Met Glu Phe Leu Gly Glu Leu Pro
1055 1060 1065
AAG GTG GAA ATT CTA GTT ATT TCA CCG TTT AAG AGT GAA GAA ATT CAT 3327
Lys Val Glu Ile Leu Val Ile Ser Pro Phe Lys Ser Glu Glu Ile His
1070 1075 1080
TTC AAG CCT CCG CAG ACT GGG ACT GCT TTT GTA AGC CTC AGG GTG CTC 3375
Phe Lys Pro Pro Gln Thr Gly Thr Ala Phe Val Ser Leu Arg Val Leu
1085 1090 1095
AAG CTT GCA GGA TTA TGG GGC ATC AAA TCA GTG AAG TTT GAG GAA GGA 3423
Lys Leu Ala Gly Leu Trp Gly Ile Lys Ser Val Lys Phe Glu Glu Gly
1100 1105 1110
ACA ATG CCC AAA CTT GAG AGG CTG CAG GTC CAA GGG CGA ATA GAA AAT 3471
Thr Met Pro Lys Leu Glu Arg Leu Gln Val Gln Gly Arg Ile Glu Asn
1115 1120 1125 1130
GAA ATT GGC TTT TCT GGG TTA GAG TTT CTC CAA AAC ATC AAC GAA GTC 3519
Glu Ile Gly Phe Ser Gly Leu Glu Phe Leu Gln Asn Ile Asn Glu Val
1135 1140 1145
CAG CTC AGT GTT TGG TTT CCC ACG GAT CAT GAT AGG ATA AGA GCC GCG 3567
Gln Leu Ser Val Trp Phe Pro Thr Asp His Asp Arg Ile Arg Ala Ala
1150 1155 1160
CGC GCC GCG GGC GCT GAT TAT GAG ACT GCC TGG GAG GAA GAG GTA CAG 3615
Arg Ala Ala Gly Ala Asp Tyr Glu Thr Ala Trp Glu Glu Glu Val Gln
1165 1170 1175
GAA GCA AGG CGC AAG GGA GGT GAA CTG AAG AGG AAA ATC CGA GAA CAG 3663
Glu Ala Arg Arg Lys Gly Gly Glu Leu Lys Arg Lys Ile Arg Glu Gln
1180 1185 1190
CTT GCT CGG AAT CCA AAC CAA CCC ATC ATT ACC TGAGCTCCTT TGGAGTTACT 3716
Leu Ala Arg Asn Pro Asn Gln Pro Ile Ile Thr
1195 1200 1205
TTGCCGTGCT CCATACTATC CTACAAGTGA GATCCTCTGC AGTACTGCAT GCTCACTGAC 3776
ATGTGGACCC GAGGGGCTGT GGGGCCCACA TGTCAGTGAG CAGTACTGTG CAGTACTGCA 3836
GAGGACCTGC ATCCACTATC CTATATTATA ATGGATTGTA CTATCGATCC AACTATTCAG 3896
ATTAACTCTA TACTAGTGAA CTTATTTTT 3925
配列番号 : 3
配列の長さ : 10322
配列の型 : 核酸
鎖の数 : 二本鎖
トポロジー : 直鎖状
配列の種類 : Genomic DNA
配列の特徴
特徴を表す記号 : exon
存在位置 : 3630 .. 4586
特徴を決定した方法 : E
特徴を表す記号 : exon
存在位置 : 5927 .. 6682
特徴を決定した方法 : E
特徴を表す記号 : exon
存在位置 : 6991 .. 8973
特徴を決定した方法 : E
配 列
CGGCCGCATA ATACGACTCA CTATAGGGAT CTCCTCTAGA GTTACTTTGC CGTGCTCCAT 60
ACTATCCTAT TCTATATTGG ATTATACTAT CGATCCAACG ATTCAGATTA ACTCTATACT 120
AGTGAAGTCT ACACTTATGG TATGGGTAAT ATACATATGT AGTATAGTAT AGCATAAGGG 180
TATTTCATTT TGCAGGTTAG CCGTTTATCT GCTGGTGCTC CTCTTGCTGT AGTAGTGTTG 240
TTGGTGTTGC TGCTGATGAC CTAAAATGCT TGCATGTTTC TATCATGTTC TCCATAATGT 300
AGTATCATGT ACTCCATCTT CCTTGTTGGT TTTTGTCCAT AATCTCCACC TTGGCAGCTT 360
GCATCATCTT ACTCTCGAGC TTGTCCACCT TGAGATTCAA CTCCTGGAAC GCGGCTCCCA 420
GTTCATCCAC CCTCTTCTCC ACGGCAGGAA TCCGTGACTC CACCGTACGC TTGAGATCTT 480
GGTACTCCGC CCTGGTGCGC TCATCAGCCT CAACTCGTTT CTTCTCATTC CCTTCCACAA 540
GTTGCAGAAG GAGGTCCAAC TTCTTATCAG TCTCCATGGC CTCGGATCTG GATCAGGTAC 600
CTACTGCTCT CGCTCCGAAT TCCGCGAACC TTAGGGGGCA AGTTTCCTTT TCGCGGTGCC 660
GATCCGAAGA TCAGCTCCAA TCCACCCCAA GGAACAATTT CACCGCAGAA TCAAGAGAAT 720
TTGAGAAGCA AGAGAGGCTC TGATACCAGA TTGTCAGGAT CTCAAGAAAT CAGCAAAGAA 780
CAACAAGAAC ACACAAGGAT TCAGGCAACT AGTTTGGATT GATCTGCTCC AACCCAACAG 840
GATTGAGCCT TCCGCCGCCA CCGCCACCGA GTTGCCAGTT CATAGTTGTC TTTCTCGAGT 900
TCATCTTATT TATACAGTAG TATCTCCCTA CTCACACGAC ACACACAGTA GCCAGCTGTA 960
CAACAGATAG CTGGGCTACG CAACCCACTC GGACCCATGG TAACGAGGAT TGGGCTTTGG 1020
CCCTCTTGTG GGTCTTGCTC TTCCTGGAGT AGTAGTCTGT ATCTCCTCCT CCTGGACTTC 1080
AGCTTCTGCT TCATCAGGTT CTCCTTCTTC AGGTTCCTTC TCTCCCTGTT CAGCTTCTGC 1140
TTCATCAGGT TCTCCTTCTT CAGTACCCAT AGTGACAGGC AGGTTCCTGA CAAAATTCTG 1200
CTCGTTTGCG ACCAATGGTA GTGATCATAG TTGCAACCAG GAGGGGGGGG GGGGAAATCG 1260
CCGTCCCCTC CGCTCCTCTC CCGTCGTCCC CAACGCCTCG TTCGCGCATT TCGTTGAACA 1320
CCATGACGGC GCCGAATTCG CAGTGTCCGC ACATCTCCTC CTCCCCCGTC CTCTCCAAAC 1380
CCCAAACCCT ATCTCCACCC CCGAGGCAGG CGCCCCCATG CACTTGTAAG TCGATTGGAT 1440
GTCCTGTCCC AGAAGACATA TCGAGCGAGG AGGCGGAGGG GGACGAAGGG AACATATCGA 1500
GCGAGGAAGC GGAGGGTGGA TCGGCATCCC CCATTTCAAG GTACTATACT AGTCCATTAT 1560
AGTAGTAGTG CTTTTGCATC TTAGAAAAAA AAATATGTTC ATTAGCCATT GAGAGCTTCT 1620
GAAGTTGTTG ATTTTGTTCC AACCCCAACT GTGAGTTTCA GTTCAGGTCA TCCACTGATT 1680
TTCACTATGC CAATTCTCTG AAACAACTTT ACCACTGTCA CATGAACACA CTGAAACAGT 1740
TTGGTGTAGA CGTGTAGTGA AGAATGTAGC ATATATACCT TCACTTAATT TTTCTTGCAA 1800
TTATTGGCCA TTACTAGTTA TGCGAGGTAG AAGTGTTCTA AGGTACTGTA TCATTTTTAT 1860
GTACTAATTA ATTAAGTTTA ATAAAAACTT TTATTATCTA AAAATAAATG ACTATTACTA 1920
GCTCGGTACT CCCTTTATTT TATATTATAA GACGTTTTGA TTTTTTTATA TACAACTTTC 1980
TTTAAGTTTG ATTATACTTA TAAAAAATTA GCAAACATAT ATATTTTTTT TACATTAATA 2040
GTGCAAGTGA GCACGCTTAA ATGCATTGTA CTTCCTTCGT AAAAAAACAT CAAACTTTTA 2100
CGGACGAATA TGGATAAATG CATATCTAAA TTCATCCTCA ATAATTGATT CTTTTTGGAG 2160
GAGTACAATT GGTTGGTGCG CTTTGTCCTT GGACCCTACA ATAATGATGA TTGTTTCTTT 2220
AATCTATTGA CCTTGACTTA CCACATGGGC TATGTTTATC CCTTCCTGAA TCCTGAGCAC 2280
TGACTACCGA GGCACCGAGT GTGAGCGGCA ACGGCGGTCA GGGAGCAGGC GTGGCTCGTC 2340
GGCGAGCGGC TACGGGCAAC GGCGCCTTGG CGTCAGGCAT CCGCCGTCAC TCACCTCAAG 2400
CTTGCGGGCT CTGCGACCAC CCTCTCATAG TCATAGGCCA CAGAAGGTGT AGTAGTACTT 2460
CATACATTTC GAGCAGTTTC TTTCAGATTG TTTGTTTTTG AGCTTCTAAT TTTGGGATGC 2520
ATTAGATAGT GATGAAAGCC TGAATTATTG GAATTTTGGT GTTGGTACTC ACACTCTCAC 2580
AGTCAGAACA TACTCCTATA TATTTTGCAG CACATTTGCC TTGTGCGTGC TGTTCGTCTG 2640
TTCCACTCGT GAACATCAGA CGCGAAGATT ATAGATTCAC CCCTGTTCAC AGATTCAGGT 2700
ACTGCCAATT GCCTGGATGA ACACCAGTCC ATTTGCTCTC TTTCGCCTTA CAATTTTTCT 2760
CTGCATTGTA CTAGCAGCCG TAGCTCGAAA GCCTCGAATA TGATTCCTTT TCAAGATTTT 2820
ATATTTATGG AATATAATTC ACTTTTAAGA TGCCTTGATG GTGAAATAGT AGACATGTGA 2880
GACTCCAAAT CTCGTCCTAA AAGAGCATGG AGGTAAAAAA AGAAAAAGGT AGACATCGCT 2940
ATTGTAGACA TGGAGAGCTG GAATACGATT ACTTTCAAGA TATTATATTC AATGAGCATT 3000
CATTCTTACA CATATGCCAC AAAGGTAAAA AAAAACAGAG AAAGAGAGAG AGAGGGGAAA 3060
GAAGCCAAGT TCTTTCTTCT ACTATCATTT AGGTTGAGTT CGTTTGTTAA GGTTCCCAAC 3120
CTACGATTCC TCGTTTCCCG CGTGCACGAT TCCCAAACTA CTAAATGGTA TGCTTTTTAA 3180
AATATTTCGT AGAAAAATTG CTTTAAAAAA TCATATTAAT TTATTTTTTA AGTTGTTTAG 3240
CTAATACTCA ATTAATCATG CATTAATTTG CCGCTCCGTT TTAGTGGAAG TCATCTGAAA 3300
GGATCAAAGG AAGCAACACC AAGTCCTTAT TTCGACTCCG ACTCTCTCAC TCTCGCCATT 3360
TATTCTTTTC TTTCTGTTAT TTTAAAAGTT GCTACTTTAG CTTCAGCCAC GTGAATTCTT 3420
GATATTTCAT TATTTTTCTC ATCAAACAAT AGCATCTTCT TCTGGAAATC GAATTCAGGG 3480
CTTATATGTT GCTTATTCTG ATATATAGGT CTGTCACGAG GCGTATGATC ATCAACTCTG 3540
CCACAAAATC CATTCAAAAA TAGAACAGAG CAATGGAGGC GACGGCGCTG AGTGTGGGCA 3600
AATCCGTGCT GAATGGAGCG CTTGGCTACG CAAAATCTGC ATTTGCTGAG GAGGTGGCCT 3660
TGCAGCTTGG TATCCAGAAA GACCACACAT TTGTTGCAGA TGAGCTTGAG ATG ATG 3716
Met Met
1
AGG TCT TTC ATG ATG GAG GCG CAC GAG GAG CAA GAT AAC AGC AAG GTG 3764
Arg Ser Phe Met Met Glu Ala His Glu Glu Gln Asp Asn Ser Lys Val
5 10 15
GTC AAG ACT TGG GTG AAG CAA GTC CGT GAC ACT GCC TAT GAT GTT GAG 3812
Val Lys Thr Trp Val Lys Gln Val Arg Asp Thr Ala Tyr Asp Val Glu
20 25 30
GAC AGC CTC CAG GAT TTC GCT GTT CAT CTT AAG AGG CCA TCC TGG TGG 3860
Asp Ser Leu Gln Asp Phe Ala Val His Leu Lys Arg Pro Ser Trp Trp
35 40 45 50
CGA TTT CCT CGT ACG CTG CTC GAG CGG CAC CGT GTG GCC AAG CAG ATG 3908
Arg Phe Pro Arg Thr Leu Leu Glu Arg His Arg Val Ala Lys Gln Met
55 60 65
AAG GAG CTT AGG AAC AAG GTC GAG GAT GTC AGC CAG AGG AAT GTG CGG 3956
Lys Glu Leu Arg Asn Lys Val Glu Asp Val Ser Gln Arg Asn Val Arg
70 75 80
TAC CAC CTC ATC AAG GGC TCT GCC AAG GCC ACC ATC AAT TCC ACT GAG 4004
Tyr His Leu Ile Lys Gly Ser Ala Lys Ala Thr Ile Asn Ser Thr Glu
85 90 95
CAA TCT AGC GTT ATT GCT ACA GCC ATA TTC GGC ATT GAC GAT GCA AGG 4052
Gln Ser Ser Val Ile Ala Thr Ala Ile Phe Gly Ile Asp Asp Ala Arg
100 105 110
CGT GCC GCA AAG CAG GAC AAT CAG AGA GTG GAT CTT GTC CAA CTA ATC 4100
Arg Ala Ala Lys Gln Asp Asn Gln Arg Val Asp Leu Val Gln Leu Ile
115 120 125 130
AAC AGT GAG GAT CAG GAC CTA AAA GTG ATC GCG GTC TGG GGA ACA AGT 4148
Asn Ser Glu Asp Gln Asp Leu Lys Val Ile Ala Val Trp Gly Thr Ser
135 140 145
GGT GAT ATG GGC CAA ACA ACA ATA ATC AGG ATG GCT TAT GAG AAC CCA 4196
Gly Asp Met Gly Gln Thr Thr Ile Ile Arg Met Ala Tyr Glu Asn Pro
150 155 160
GAT GTC CAA ATC AGA TTC CCA TGC CGT GCA TGG GTA AGG GTG ATG CAT 4244
Asp Val Gln Ile Arg Phe Pro Cys Arg Ala Trp Val Arg Val Met His
165 170 175
CCT TTC AGT CCA AGA GAC TTT GTC CAG AGC TTG GTG AAT CAG CTT CAT 4292
Pro Phe Ser Pro Arg Asp Phe Val Gln Ser Leu Val Asn Gln Leu His
180 185 190
GCA ACC CAA GGG GTT GAA GCT CTG TTG GAG AAA GAG AAG ACA GAA CAA 4340
Ala Thr Gln Gly Val Glu Ala Leu Leu Glu Lys Glu Lys Thr Glu Gln
195 200 205 210
GAT TTA GCT AAG AAA TTC AAT GGA TGT GTG AAT GAT AGG AAG TGT CTA 4388
Asp Leu Ala Lys Lys Phe Asn Gly Cys Val Asn Asp Arg Lys Cys Leu
215 220 225
ATT GTG CTT AAT GAC CTA TCC ACC ATT GAA GAG TGG GAC CAG ATT AAG 4436
Ile Val Leu Asn Asp Leu Ser Thr Ile Glu Glu Trp Asp Gln Ile Lys
230 235 240
AAA TGC TTC CAA AAA TGC AGG AAA GGA AGC CGA ATC ATA GTG TCA AGC 4484
Lys Cys Phe Gln Lys Cys Arg Lys Gly Ser Arg Ile Ile Val Ser Ser
245 250 255
ACT CAA GTT GAA GTT GCA AGC TTA TGT GCT GGG CAA GAA AGC CAA GCC 4532
Thr Gln Val Glu Val Ala Ser Leu Cys Ala Gly Gln Glu Ser Gln Ala
260 265 270
TCA GAG CTA AAG CAA TTG TCT GCT GAT CAG ACC CTT TAC GCA TTC TAC 4580
Ser Glu Leu Lys Gln Leu Ser Ala Asp Gln Thr Leu Tyr Ala Phe Tyr
275 280 285 290
GAC AAG GTAATATACT TGCTCTTCAA GCATACCTCT CGATATCATT TTTAATTCAG 4636
Asp Lys
TTATGCCTTT AGTAATTTCT AATTCAATTG TGTATAGGCT AGTTGAAGTG CGTGGGAGTT 4696
ACCATTCCAT TAGAAACACA TGACCTAATG CAACTAACAA GTGCTCCTCC TGTTCTCTCT 4756
CATTTGCCTT TTGGGAATGC ATGCACTCAA CATTTTAAGA TTACAGCCAA AATATATGTA 4816
TTTGGATTTG TCAAAACAAA GATGTATGCT AGAAAAAGAA ATGGTCTAAT ACAGGTTTAC 4876
AAATAAGACA ACGATGCAAA AAGGGCAACT AAAAACATAT TGATTCCCTC ATCTGCCACT 4936
GCAATTGCCT TAAATTCTAG TCCATTCTAC TATCTCCGTT TCATATTATA AGTCACTCTA 4996
GTTTTTTTCC AGTCAAACTT CTTTAGTTTG ACCAAGTTTA TACAAAAATT TAGCAACATA 5056
TCCAACACGA AATTAGTTTC ATTAAATGTA GCATTGAATA TATTTTGATA GTATGTTTGT 5116
TTTGTGTTGA AAATGCTGCT ATATTTTTTA AAAAAACTTG GTCAAACCTA AACAAGTTTG 5176
ACTAGGAGAA AAGTCGAAAC GACTTATAAT ATGAAATAGA GGGAGAATGT TCGAAGTTTG 5236
GCTAACGGTC AATGCTAGTG CTTTAAGTGG GTAAGCCGCA AATCCAATTA TAGGCCAAAA 5296
TACATGGGTT TGTGGCTTAT TTTGGCTATA AGTGGGTTTC GCGGGTTAGC CACTTACACC 5356
CCTAGTCAAT GCTAATGAAA GTAGAAGTGA TGCTATTCAA GGAAAATGTA TTGGATACCG 5416
AGATTGCCTT GAATAAAGAA TAAAATTGAG GTAGTAGATT GGATAATAGA TTGACCCACA 5476
AAATTGTACA AGTATGTAAT GTAGCACAAG TCCTCTTTGC ACAATTAAAA TTTTGAAGCT 5536
CCTATTTCAC AAATAATTTT GATATGGATT AATTGATTTC ATATCCAATT CGCACAGTTT 5596
ATTGAATTTG GAGATTTATT TCCTCTATAT GTGAGAGATG ATTGTAAAAT GGGCAAATCT 5656
AGCAAATGCA TCCTCTCATC CTTTGGATTA AATGTAGTGT ACTTATCCCA TTATTTTAAA 5716
GTTAAATTAA TACATATTTT ATTGAACAGT CAGATATACG TTTTTCAAAA TAGGATCCAA 5776
AACTAAGGTT TATACTAGAC TGCAAATTAA TGAAAGGAAT TATCATTATT GTTTTGTATA 5836
CTTTCATGAC CGAAAACAAG GCTAAACACT ATCCATGTAT GAAAATTTAA GGCTAAAAGT 5896
TGTTCTTAAT CATTGCTCCC TTTTGTTTAG GGT TCC CAA ATT ATA GAG GAT TCA 5950
Gly Ser Gln Ile Ile Glu Asp Ser
295 300
GTG AAG CCA GTG TCT ATC TCG GAT GTG GCC ATC ACA AGT ACA AAC AAT 5998
Val Lys Pro Val Ser Ile Ser Asp Val Ala Ile Thr Ser Thr Asn Asn
305 310 315
CAT ACA GTG GCC CAT GGT GAG ATT ATA GAT GAT CAA TCA ATG GAT GCT 6046
His Thr Val Ala His Gly Glu Ile Ile Asp Asp Gln Ser Met Asp Ala
320 325 330
GAT GAG AAG AAG GTG GCT AGA AAG AGT CTT ACT CGC ATT AGG ACA AGT 6094
Asp Glu Lys Lys Val Ala Arg Lys Ser Leu Thr Arg Ile Arg Thr Ser
335 340 345
GTT GGT GCT TCG GAG GAA TCA CAA CTT ATT GGG CGA GAG AAA GAA ATA 6142
Val Gly Ala Ser Glu Glu Ser Gln Leu Ile Gly Arg Glu Lys Glu Ile
350 355 360
TCT GAA ATA ACA CAC TTA ATT TTA AAC AAT GAT AGC CAG CAG GTT CAG 6190
Ser Glu Ile Thr His Leu Ile Leu Asn Asn Asp Ser Gln Gln Val Gln
365 370 375 380
GTG ATC TCT GTG TGG GGA ATG GGT GGC CTT GGA AAA ACC ACC CTA GTA 6238
Val Ile Ser Val Trp Gly Met Gly Gly Leu Gly Lys Thr Thr Leu Val
385 390 395
AGC GGT GTT TAT CAA AGC CCA AGG CTG AGT GAT AAG TTT GAC AAG TAT 6286
Ser Gly Val Tyr Gln Ser Pro Arg Leu Ser Asp Lys Phe Asp Lys Tyr
400 405 410
GTT TTT GTC ACA ATC ATG CGT CCT TTC ATT CTT GTA GAG CTC CTT AGG 6334
Val Phe Val Thr Ile Met Arg Pro Phe Ile Leu Val Glu Leu Leu Arg
415 420 425
AGT TTG GCT GAG CAA CTA CAT AAA GGA TCT TCT AAG AAG GAA GAA CTG 6382
Ser Leu Ala Glu Gln Leu His Lys Gly Ser Ser Lys Lys Glu Glu Leu
430 435 440
TTA GAA AAT AGA GTC AGC AGT AAG AAA TCA CTA GCA TCG ATG GAG GAT 6430
Leu Glu Asn Arg Val Ser Ser Lys Lys Ser Leu Ala Ser Met Glu Asp
445 450 455 460
ACC GAG TTG ACT GGG CAG TTG AAA AGG CTT TTA GAA AAG AAA AGT TGC 6478
Thr Glu Leu Thr Gly Gln Leu Lys Arg Leu Leu Glu Lys Lys Ser Cys
465 470 475
TTG ATT GTT CTA GAT GAT TTC TCA GAT ACC TCA GAA TGG GAC CAG ATA 6526
Leu Ile Val Leu Asp Asp Phe Ser Asp Thr Ser Glu Trp Asp Gln Ile
480 485 490
AAA CCA ACG TTA TTC CCC CTG TTG GAA AAG ACA AGC CGA ATA ATT GTG 6574
Lys Pro Thr Leu Phe Pro Leu Leu Glu Lys Thr Ser Arg Ile Ile Val
495 500 505
ACT ACA AGA AAA GAG AAT ATT GCC AAC CAT TGC TCA GGG AAA AAT GGA 6622
Thr Thr Arg Lys Glu Asn Ile Ala Asn His Cys Ser Gly Lys Asn Gly
510 515 520
AAT GTG CAC AAC CTT AAA GTT CTT AAA CAT AAT GAT GCA TTG TGC CTC 6670
Asn Val His Asn Leu Lys Val Leu Lys His Asn Asp Ala Leu Cys Leu
525 530 535 540
TTG AGT GAG AAG GTAATATAAG TGTGCTCCAT TTTTCTTGGT TTGATATTCT 6722
Leu Ser Glu Lys
TTTAATCATT TGAGTTATCC AATCAAGATG ATATTTGTGC ATGCAGAAAT AGCATATACT 6782
AGATTCATAT ACAACTTAAT CTGTTCTCAC AACAATAGCA ATGCAGTTCC TAAAATGACC 6842
TGCATTGGAT GGACGTTAGA TGTGACTTTG TTTTTGTATG TAATGGTGGC CTTCATTCCT 6902
TAGTTTTAAT AGTAAAGACG TATTTCTAAA TTTAATTTTT TTTGTTTTAC TTTAGAGCAC 6962
AATAAAGCTT AAATTGTATC AATGTCAG GTA TTT GAG GAG GCT ACA TAT TTG 7014
Val Phe Glu Glu Ala Thr Tyr Leu
545 550
GAT GAT CAG AAC AAT CCA GAG TTG GTT AAA GAA GCA AAA CAA ATC CTA 7062
Asp Asp Gln Asn Asn Pro Glu Leu Val Lys Glu Ala Lys Gln Ile Leu
555 560 565
AAG AAG TGC GAT GGA CTG CCC CTT GCA ATA GTT GTC ATA GGT GGA TTC 7110
Lys Lys Cys Asp Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Ile Gly Gly Phe
570 575 580
TTG GCA AAC CGA CCA AAG ACC CCA GAA GAG TGG AGA AAA TTG AAC GAG 7158
Leu Ala Asn Arg Pro Lys Thr Pro Glu Glu Trp Arg Lys Leu Asn Glu
585 590 595 600
AAT ATC AAT GCT GAG TTG GAA ATG AAT CCA GAG CTT GGA ATG ATA AGA 7206
Asn Ile Asn Ala Glu Leu Glu Met Asn Pro Glu Leu Gly Met Ile Arg
605 610 615
ACC GTC CTT GAA AAA AGC TAT GAT GGT TTA CCA TAC CAT CTC AAG TCA 7254
Thr Val Leu Glu Lys Ser Tyr Asp Gly Leu Pro Tyr His Leu Lys Ser
620 625 630
TGT TTT TTA TAT CTG TCC ATT TTC CCT GAA GAC CAG ATC ATT AGT CGA 7302
Cys Phe Leu Tyr Leu Ser Ile Phe Pro Glu Asp Gln Ile Ile Ser Arg
635 640 645
AGG CGT TTG GTG CAT CGT TGG GCA GCA GAA GGT TAC TCA ACT GCA GCA 7350
Arg Arg Leu Val His Arg Trp Ala Ala Glu Gly Tyr Ser Thr Ala Ala
650 655 660
CAT GGG AAA TCT GCC ATT GAA ATA GCT AAC GGC TAC TTC ATG GAA CTC 7398
His Gly Lys Ser Ala Ile Glu Ile Ala Asn Gly Tyr Phe Met Glu Leu
665 670 675 680
AAG AAT AGA AGC ATG ATT TTA CCA TTC CAG CAA TCA GGT AGC AGC AGG 7446
Lys Asn Arg Ser Met Ile Leu Pro Phe Gln Gln Ser Gly Ser Ser Arg
685 690 695
AAA TCA ATT GAC TCT TGC AAA GTC CAT GAT CTC ATG CGT GAC ATC GCC 7494
Lys Ser Ile Asp Ser Cys Lys Val His Asp Leu Met Arg Asp Ile Ala
700 705 710
ATC TCA AAG TCA ACG GAG GAA AAC CTT GTT TTT AGG GTG GAG GAA GGC 7542
Ile Ser Lys Ser Thr Glu Glu Asn Leu Val Phe Arg Val Glu Glu Gly
715 720 725
TGC AGC GCG TAC ATA CAT GGT GCA ATT CGT CAT CTT GCT ATA AGT AGC 7590
Cys Ser Ala Tyr Ile His Gly Ala Ile Arg His Leu Ala Ile Ser Ser
730 735 740
AAC TGG AAG GGA GAT AAG AGT GAA TTC GAG GGC ATA GTG GAC CTG TCC 7638
Asn Trp Lys Gly Asp Lys Ser Glu Phe Glu Gly Ile Val Asp Leu Ser
745 750 755 760
CGA ATA CGA TCG TTA TCT CTG TTT GGG GAT TGG AAG CCA TTT TTT GTT 7686
Arg Ile Arg Ser Leu Ser Leu Phe Gly Asp Trp Lys Pro Phe Phe Val
765 770 775
TAT GGC AAG ATG AGG TTT ATA CGA GTG CTT GAC TTT GAA GGG ACT AGA 7734
Tyr Gly Lys Met Arg Phe Ile Arg Val Leu Asp Phe Glu Gly Thr Arg
780 785 790
GGT CTA GAA TAT CAT CAC CTT GAT CAG ATT TGG AAG CTT AAT CAC CTA 7782
Gly Leu Glu Tyr His His Leu Asp Gln Ile Trp Lys Leu Asn His Leu
795 800 805
AAA TTC CTT TCT CTA CGA GGA TGC TAT CGT ATT GAT CTA CTG CCA GAT 7830
Lys Phe Leu Ser Leu Arg Gly Cys Tyr Arg Ile Asp Leu Leu Pro Asp
810 815 820
TTA CTG GGC AAC CTG AGG CAA CTC CAG ATG CTA GAC ATC AGA GGT ACA 7878
Leu Leu Gly Asn Leu Arg Gln Leu Gln Met Leu Asp Ile Arg Gly Thr
825 830 835 840
TAT GTA AAG GCT TTG CCA AAA ACC ATC ATC AAG CTT CAG AAG CTA CAG 7926
Tyr Val Lys Ala Leu Pro Lys Thr Ile Ile Lys Leu Gln Lys Leu Gln
845 850 855
TAC ATT CAT GCT GGG CGC AAA ACA GAC TAT GTA TGG GAG GAA AAG CAT 7974
Tyr Ile His Ala Gly Arg Lys Thr Asp Tyr Val Trp Glu Glu Lys His
860 865 870
AGT TTA ATG CAG AGG TGT CGT AAG GTG GGA TGT ATA TGT GCA ACA TGT 8022
Ser Leu Met Gln Arg Cys Arg Lys Val Gly Cys Ile Cys Ala Thr Cys
875 880 885
TGC CTC CCT CTT CTT TGC GAA ATG TAT GGC CCT CTC CAT AAG GCC CTA 8070
Cys Leu Pro Leu Leu Cys Glu Met Tyr Gly Pro Leu His Lys Ala Leu
890 895 900
GCC CGG CGT GAT GCG TGG ACT TTC GCT TGC TGC GTG AAA TTC CCA TCT 8118
Ala Arg Arg Asp Ala Trp Thr Phe Ala Cys Cys Val Lys Phe Pro Ser
905 910 915 920
ATC ATG ACG GGA GTA CAT GAA GAG GAA GGC GCT ATG GTG CCA AGT GGG 8166
Ile Met Thr Gly Val His Glu Glu Glu Gly Ala Met Val Pro Ser Gly
925 930 935
ATT AGA AAA CTG AAA GAC TTG CAC ACA CTA AGG AAC ATA AAT GTC GGA 8214
Ile Arg Lys Leu Lys Asp Leu His Thr Leu Arg Asn Ile Asn Val Gly
940 945 950
AGG GGA AAT GCC ATC CTA CGA GAT ATC GGA ATG CTC ACA GGA TTA CAC 8262
Arg Gly Asn Ala Ile Leu Arg Asp Ile Gly Met Leu Thr Gly Leu His
955 960 965
AAG TTA GGA GTG GCT GGC ATC AAC AAG AAG AAT GGA CGA GCG TTT CGC 8310
Lys Leu Gly Val Ala Gly Ile Asn Lys Lys Asn Gly Arg Ala Phe Arg
970 975 980
TTG GCC ATT TCC AAC CTC AAC AAG CTG GAA TCA CTG TCT GTG AGT TCA 8358
Leu Ala Ile Ser Asn Leu Asn Lys Leu Glu Ser Leu Ser Val Ser Ser
985 990 995 1000
GCA GGG ATG CCG GGC TTG TGT GGT TGC TTG GAT GAT ATA TCC TCG CCT 8406
Ala Gly Met Pro Gly Leu Cys Gly Cys Leu Asp Asp Ile Ser Ser Pro
1005 1010 1015
CCG GAA AAC CTA CAG AGC CTC AAG CTG TAC GGC AGT TTG AAA ACG TTG 8454
Pro Glu Asn Leu Gln Ser Leu Lys Leu Tyr Gly Ser Leu Lys Thr Leu
1020 1025 1030
CCG GAA TGG ATC AAG GAG CTC CAG CAT CTC GTG AAG TTA AAA CTA GTG 8502
Pro Glu Trp Ile Lys Glu Leu Gln His Leu Val Lys Leu Lys Leu Val
1035 1040 1045
AGT ACT AGG CTA TTG GAG CAC GAC GTT GCT ATG GAA TTC CTT GGG GAA 8550
Ser Thr Arg Leu Leu Glu His Asp Val Ala Met Glu Phe Leu Gly Glu
1050 1055 1060
CTA CCG AAG GTG GAA ATT CTA GTT ATT TCA CCG TTT AAG AGT GAA GAA 8598
Leu Pro Lys Val Glu Ile Leu Val Ile Ser Pro Phe Lys Ser Glu Glu
1065 1070 1075 1080
ATT CAT TTC AAG CCT CCG CAG ACT GGG ACT GCT TTT GTA AGC CTC AGG 8646
Ile His Phe Lys Pro Pro Gln Thr Gly Thr Ala Phe Val Ser Leu Arg
1085 1090 1095
GTG CTC AAG CTT GCA GGA TTA TGG GGC ATC AAA TCA GTG AAG TTT GAG 8694
Val Leu Lys Leu Ala Gly Leu Trp Gly Ile Lys Ser Val Lys Phe Glu
1100 1105 1110
GAA GGA ACA ATG CCC AAA CTT GAG AGG CTG CAG GTC CAA GGG CGA ATA 8742
Glu Gly Thr Met Pro Lys Leu Glu Arg Leu Gln Val Gln Gly Arg Ile
1115 1120 1125
GAA AAT GAA ATT GGC TTT TCT GGG TTA GAG TTT CTC CAA AAC ATC AAC 8790
Glu Asn Glu Ile Gly Phe Ser Gly Leu Glu Phe Leu Gln Asn Ile Asn
1130 1135 1140
GAA GTC CAG CTC AGT GTT TGG TTT CCC ACG GAT CAT GAT AGG ATA AGA 8838
Glu Val Gln Leu Ser Val Trp Phe Pro Thr Asp His Asp Arg Ile Arg
1145 1150 1155 1160
GCC GCG CGC GCC GCG GGC GCT GAT TAT GAG ACT GCC TGG GAG GAA GAG 8886
Ala Ala Arg Ala Ala Gly Ala Asp Tyr Glu Thr Ala Trp Glu Glu Glu
1165 1170 1175
GTA CAG GAA GCA AGG CGC AAG GGA GGT GAA CTG AAG AGG AAA ATC CGA 8934
Val Gln Glu Ala Arg Arg Lys Gly Gly Glu Leu Lys Arg Lys Ile Arg
1180 1185 1190
GAA CAG CTT GCT CGG AAT CCA AAC CAA CCC ATC ATT ACC TGAGCTCCTT 8983
Glu Gln Leu Ala Arg Asn Pro Asn Gln Pro Ile Ile Thr
1195 1200 1205
TGGAGTTACT TTGCCGTGCT CCATACTATC CTACAAGTGA GATCCTCTGC AGTACTGCAT 9043
GCTCACTGAC ATGTGGACCC GAGGGGCTGT GGGGCCCACA TGTCAGTGAG CAGTACTGTG 9103
CAGTACTGCA GAGGACCTGC ATCCACTATC CTATATTATA ATGGATTGTA CTATCGATCC 9163
AACTATTCAG ATTAACTCTA TACTAGTGAA CTTATTTTTT TTTGCCGGGC CGGCAAATAG 9223
CTGGTCGATG TATATTAAGA ATAAGAAAGG GAATGTACAA GATAGCGCGG TGCGTCAATG 9283
CACCACCATT ACAGACGTAA AAGGAAAGCT AAAATCTCAC AGAATGAGTT GCTACAGAGT 9343
GACACATGGG GCTAACAAGA CCTGCAGCTA TCCAAGTCTC CCATTCATCC CCCATGGCAG 9403
AACAGAACTG GGGAACCGTT GCCGCGATCC CTTCAAACAC CCTTGCGTTT CGCTCTTTCG 9463
AAATCAACCA GGTTACAAGG ATCACCCTTG CATCGAACGT TTTGCGGTCA ACCTTAGCAA 9523
CAGATTTCCG GGCTGCAAGC CACCAATCAG CAAAATCAGC CGACGATGAG GAGCACGAAA 9583
GGACCAGGCG TGTGCGCACC TGACCTCAAA TCTCCTGGGT GTAAGAGCAG CCCACGAAGA 9643
TGTGCTGGCA GGTTTCCCCG TCATTGGAGC AGAAATAGCA CACCGGAGCA AGCTTCCATC 9703
TGTGACGTTG TAGATTGTTG GCAGTGAGGC AAGCATTGCG CTCGGCGAGA AACATAAAGA 9763
ACTTACATCT CGCCGGGGCA AGAGACTTCC AAATAATGGT ATACATATGT AGTATATAGT 9823
ATAGTATAGT ATAGTATAAG GGTATTCATT TTGCAGGTTA GCGGTTATCT GCTGCTGTTC 9883
CTCCTGCTGC GGCGTGCTGG AGTAGTGTTG TTGGTGGTGG TGCTGATGAC CTAAAATGCT 9943
TGCTTGTTTC TATCAAGTTC TCCAGAATGT AGTATGTACT GCATCTTGTT GATTTTTGTC 10003
CATAAACGGA TTGCATTATC TGTATATGAC CCAATCAACA ATAAACGGTG TTGCATTTTG 10063
TTCCTAAAAG CTCTTAGAGT CTGACCAGTT ATCTCTGTAC GCATCTTCAT GCTGTTCTTT 10123
GGGCACTGGT CATGGTTAAA TCACAGTTCA CCGAAACTTA TTTTCTGTAG ACTTATTCTG 10183
AAATACTGAG AAATTGAAAT GTAGTAACTA TTGTCTGTAG ACTGCTTTCT CGTTTTTCTT 10243
TTGCGGTCGC CATCTCCAGT CAGTATCTAC AGAAGAAGAG CCAATGCAGC CTATTGTCCT 10303
TTTTTTGCCG GGTCGGCCG 10322
配列番号 : 4
配列の長さ : 20
配列の型 : 核酸
鎖の数 : 一本鎖
トポロジー : 直鎖状
配列の種類 : 他の核酸 合成DNA
配 列
AGGGAAAAAT GGAAATGTGC 20
配列番号: 5
配列の長さ : 20
配列の型 : 核酸
鎖の数 : 一本鎖
トポロジー : 直鎖状
配列の種類 : 他の核酸 合成DNA
配 列
AGTAACCTTC TGCTGCCCAA 20
配列番号: 6
配列の長さ : 20
配列の型 : 核酸
鎖の数 : 一本鎖
トポロジー : 直鎖状
配列の種類 : 他の核酸 合成DNA
配 列
TTACCATCCC AGCAATCAGC 20
配列番号: 7
配列の長さ : 20
配列の型 : 核酸
鎖の数 : 一本鎖
トポロジー : 直鎖状
配列の種類 : 他の核酸 合成DNA
配 列
AGACACCCTG CCACACAACA 20
A
【図面の簡単な説明】
【図1】低精度の連鎖解析によるPi-b座の推定領域を示
す。
【図2】高精度連鎖解析よるPi-b座の推定領域を示す。
【図3】いもち病感受性品種および抵抗性品種における
Pi-b候補cDNAの発現パターンを、RT-PCRにより解析した
結果を示す電気泳動写真である。Aは、cDNAクローン
「c23」の二つ目のイントロンを挟むプライマーを用い
て検出した結果である。Bは、「c23」の領域に隣接す
るNBSを含む4.6kbの断片に特異的なプライマーを用いて
検出した結果である。図中のレーン1はササニシキゲノ
ムDNA、2は東北IL9号のゲノムDNA、3は東北IL9号由来の
コスミドクローン#40、4は東北IL9号由来のコスミドク
ローン#147、5は東北IL9号由来のcDNA「c23」のプラス
ミドDNA、6は無処理の東北IL9号の葉から調製したmRNA
(160ng)、7はいもち病菌接種12時間後の東北IL9号の葉
から調製したmRNA、8はいもち病菌接種24時間後の東北I
L9号の葉から調製したmRNA、9はいもち病菌接種4日後の
東北IL9号の葉から調製したmRNA、10はササニシキの葉
から調製したmRNA、11はいもち病菌接種12から24時間後
のササニシキの葉から調製したmRNA、12は滅菌水、をそ
れぞれ用いて検出した。サイズマーカーは上から1.4K、
1.0K、0.9K、0.6Kである。
【図4】既知の抵抗性遺伝子の保存領域とPi-b遺伝子と
を比較した図である。
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(51)Int.Cl.7 識別記号 FI
C12P 21/02 C12R 1:91
// C12P 21/08 C12P 21/02
(C12N 15/09 ZNA C12N 15/00 ZNAA
C12R 1:91) 5/00 C
(C12P 21/02
C12R 1:91)
(72)発明者 片寄 裕一
茨城県つくば市観音台2丁目1−2 農
林水産省農業生物資源研究所内
(72)発明者 佐々木 卓治
茨城県つくば市観音台2丁目1−2 農
林水産省農業生物資源研究所内
(72)発明者 王 子軒
茨城県つくば市上横場一杯塚446−1
社団法人農林水産先端技術産業振興セン
ター 農林水産先端技術研究所内
(72)発明者 山内 歌子
茨城県つくば市上横場一杯塚446−1
社団法人農林水産先端技術産業振興セン
ター 農林水産先端技術研究所内
(72)発明者 石丸 理佐
茨城県つくば市上横場一杯塚446−1
社団法人農林水産先端技術産業振興セン
ター 農林水産先端技術研究所内
(56)参考文献 特開 平7−163371(JP,A)
特開 平10−262682(JP,A)
Theor Appl Genet,
1997年,Vol.94,No.2,p.
170−176
Plant Cell Physio
l,1996年,Vol.37,No.1,
p.9−18
(58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名)
C12N 15/00 - 15/90
A01H 1/00 - 17/00
BIOSIS/WPI(DIALOG)
GenBank/EMBL/DDBJ/G
eneSeq