JP3316816B2 - イオンチャンネル通門の競合阻害によるアナライト検出 - Google Patents
イオンチャンネル通門の競合阻害によるアナライト検出Info
- Publication number
- JP3316816B2 JP3316816B2 JP51259494A JP51259494A JP3316816B2 JP 3316816 B2 JP3316816 B2 JP 3316816B2 JP 51259494 A JP51259494 A JP 51259494A JP 51259494 A JP51259494 A JP 51259494A JP 3316816 B2 JP3316816 B2 JP 3316816B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ligand
- membrane
- gramicidin
- binding
- analyte
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000012491 analyte Substances 0.000 title claims description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 6
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 title description 10
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 title 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 27
- ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N gramicidina Chemical group C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 ZWCXYZRRTRDGQE-SORVKSEFSA-N 0.000 claims description 21
- 108010026389 Gramicidin Proteins 0.000 claims description 18
- 229960004905 gramicidin Drugs 0.000 claims description 16
- 239000002555 ionophore Substances 0.000 claims description 14
- 230000000236 ionophoric effect Effects 0.000 claims description 14
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 10
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 3
- 230000004907 flux Effects 0.000 claims 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 10
- BGHCVCJVXZWKCC-UHFFFAOYSA-N tetradecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC BGHCVCJVXZWKCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LXQOQPGNCGEELI-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O LXQOQPGNCGEELI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 4
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 1-oleoylglycerol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(O)CO RZRNAYUHWVFMIP-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Natural products CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- RZRNAYUHWVFMIP-HXUWFJFHSA-N glycerol monolinoleate Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@H](O)CO RZRNAYUHWVFMIP-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 1-fluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(F)C([N+]([O-])=O)=C1 LOTKRQAVGJMPNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQSMEVHEYXACJP-DSHASFMGSA-N Gramicidin B Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCCO)C1=CC=CC=C1 LQSMEVHEYXACJP-DSHASFMGSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- DFYDBKOGNVKSGO-XIQFXCCNSA-N ON1C(CCC1=O)=O.C(CCCC[C@@H]1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)(=O)NCCCCCC(=O)O Chemical compound ON1C(CCC1=O)=O.C(CCCC[C@@H]1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)(=O)NCCCCCC(=O)O DFYDBKOGNVKSGO-XIQFXCCNSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N chembl557217 Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC=O)C(C)C)CC(C)C)C(=O)NCCO)=CNC2=C1 NDAYQJDHGXTBJL-MWWSRJDJSA-N 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- -1 lysine ester Chemical class 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings
- G01N33/5438—Electrodes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/5432—Liposomes or microcapsules
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/806—Electrical property or magnetic property
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Separation Using Semi-Permeable Membranes (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measurement Of The Respiration, Hearing Ability, Form, And Blood Characteristics Of Living Organisms (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 本発明はその伝導性（condactance）が通門され（be
gated）ることができるイオノフォアを含む（incorpora
ting）膜に関するものである。
gated）ることができるイオノフォアを含む（incorpora
ting）膜に関するものである。
伝導性が通門されるイオノフォアを含む膜の概念、そ
のような膜のバイオセンサーにおける用途は、国際特許
出願WO89/01159号、WO90/08783号、PCT/AU89/00352号、
PCT/AU92/00132号およびPCT/AU93/00509号に開示されて
いる。これらの文献の各々の開示は、ここに参考として
含まれる。
のような膜のバイオセンサーにおける用途は、国際特許
出願WO89/01159号、WO90/08783号、PCT/AU89/00352号、
PCT/AU92/00132号およびPCT/AU93/00509号に開示されて
いる。これらの文献の各々の開示は、ここに参考として
含まれる。
国際出願WO90/08783号においてなされ開示された研究
の間、本発明者によりなされた観察から本発明は生まれ
たものである。この先の出願では、ビオチン化された
（biotinylated）グラミシジンイオンチャンネルの脂質
膜中の伝導性（conduction）が、グラミシジンに付着し
たビチオンによるストレプタビジン（streptavidin）の
結合により著しく減少すること、およびこの系において
伝導性を変化させることは、膜イオンチャンネルに結合
したストレプタビジンの量に直接関係することが示され
た。この観察から本発明者は、イオノフォアを含む膜を
用いるアナライト検出のための一般的なメカニズムを開
発した。
の間、本発明者によりなされた観察から本発明は生まれ
たものである。この先の出願では、ビオチン化された
（biotinylated）グラミシジンイオンチャンネルの脂質
膜中の伝導性（conduction）が、グラミシジンに付着し
たビチオンによるストレプタビジン（streptavidin）の
結合により著しく減少すること、およびこの系において
伝導性を変化させることは、膜イオンチャンネルに結合
したストレプタビジンの量に直接関係することが示され
た。この観察から本発明者は、イオノフォアを含む膜を
用いるアナライト検出のための一般的なメカニズムを開
発した。
従って、第１の態様において、本発明は、アナライト
（analyte）の検出に使用される膜であって、その膜
は、自己集合（self−assembling）両親媒性分子が密に
詰められた配列、複数のイオノフォア、膜表面に隣接し
たイオノフォア末端に付着した第１と第２のリガンドを
含むものであり、第１のリガンドのその結合相手との結
合が、イオノフォアを介して膜を越えるイオン流動を阻
害すること、および第２のリガンドのその結合相手との
結合が、第１のリガンドのその結合相手との結合を阻害
することを特徴とするものである。
（analyte）の検出に使用される膜であって、その膜
は、自己集合（self−assembling）両親媒性分子が密に
詰められた配列、複数のイオノフォア、膜表面に隣接し
たイオノフォア末端に付着した第１と第２のリガンドを
含むものであり、第１のリガンドのその結合相手との結
合が、イオノフォアを介して膜を越えるイオン流動を阻
害すること、および第２のリガンドのその結合相手との
結合が、第１のリガンドのその結合相手との結合を阻害
することを特徴とするものである。
本発明の好適な実施態様において、第１のリガンドは
ビチオンで、その結合相手はストレプタビジンである。
ビチオンで、その結合相手はストレプタビジンである。
本発明のさらに好適な実施態様において、イオノフォ
アはグラミシジンまたはグラミシジンアナログである。
アはグラミシジンまたはグラミシジンアナログである。
典型的に、第２のリガンドは、膜が検出のために用い
られるアナライトである。しかしながら、第２のリガン
ドはイオノフォアからイオノフォアまで変化できること
は可能である。このようにして膜は、１より多いアナラ
イトの存在を検出するために用いられることができるで
あろう。
られるアナライトである。しかしながら、第２のリガン
ドはイオノフォアからイオノフォアまで変化できること
は可能である。このようにして膜は、１より多いアナラ
イトの存在を検出するために用いられることができるで
あろう。
本発明の特性がより明確に理解されるように、本発明
の膜の作用を、通門メカニズムの作用の以下の図式的説
明を参照して記載する。
の膜の作用を、通門メカニズムの作用の以下の図式的説
明を参照して記載する。
図１は、チャンネル（10）のＣ末端に付着した２つの
リガンド（12と14）を有する修飾されたグラミシジンイ
オンチャンネル（10）を示す。１つのリガンド（12）は
ビオチンで、グラミシジン（10）伝導性を減少させるよ
うにストレプタビジン（16）に結合することができる。
第２のリガンド（14）は、ビオチンリガンド（12）に接
近して（in close proximity）連結しているが、これは
所望のアナライト、アナライトのエピトープ部分、上記
いずれかの構造的アナログまたはアナライトに対する抗
体と競合的に結合が可能ないかなるリガンドでもよい。
第２のリガンド（14）に結合する種が全く存在しないと
き、ストレプタビジン（16）のビオチンリガンド（12）
への結合は、チャンネル（10）通門をもたらす。
リガンド（12と14）を有する修飾されたグラミシジンイ
オンチャンネル（10）を示す。１つのリガンド（12）は
ビオチンで、グラミシジン（10）伝導性を減少させるよ
うにストレプタビジン（16）に結合することができる。
第２のリガンド（14）は、ビオチンリガンド（12）に接
近して（in close proximity）連結しているが、これは
所望のアナライト、アナライトのエピトープ部分、上記
いずれかの構造的アナログまたはアナライトに対する抗
体と競合的に結合が可能ないかなるリガンドでもよい。
第２のリガンド（14）に結合する種が全く存在しないと
き、ストレプタビジン（16）のビオチンリガンド（12）
への結合は、チャンネル（10）通門をもたらす。
図２は、抗アナライト抗体（18）の上記系への添加効
果を示している。抗体（18）の第２のリガンド（14）へ
の付着は、それ自体はチャンネル（10）の伝導性に影響
をもたらさないが、ストレプタビジン（16）のビオチン
リガンド（12）への結合を立体的に（sterically）阻害
する。したがって結合した抗体（18）を有するチャンネ
ル（10）は全て、通門され得ない。
果を示している。抗体（18）の第２のリガンド（14）へ
の付着は、それ自体はチャンネル（10）の伝導性に影響
をもたらさないが、ストレプタビジン（16）のビオチン
リガンド（12）への結合を立体的に（sterically）阻害
する。したがって結合した抗体（18）を有するチャンネ
ル（10）は全て、通門され得ない。
アナライト濃度を測定するこの系の用途は図３に示
す。試料溶液中に遊離アナライト（20）が存在すると
き、抗アナライト抗体（18）抗原結合部位は、溶液アナ
ライト（20）により、アナライト濃度に比例して、占め
られるであろう。これらの抗体（18）は、イオンチャン
ネル（10）上の第２のリガンド（14）に結合するのを阻
害され、試料溶液中に存在するアナライト（20）の量に
比例して、イオンチャンネル（10）分画は、ストレプタ
ビジン（16）による通門が可能とされるであろう。した
がって、チャンネル（10）通門の大きさ（amplitude）
はアナライト（20）濃度を反映するであろう。
す。試料溶液中に遊離アナライト（20）が存在すると
き、抗アナライト抗体（18）抗原結合部位は、溶液アナ
ライト（20）により、アナライト濃度に比例して、占め
られるであろう。これらの抗体（18）は、イオンチャン
ネル（10）上の第２のリガンド（14）に結合するのを阻
害され、試料溶液中に存在するアナライト（20）の量に
比例して、イオンチャンネル（10）分画は、ストレプタ
ビジン（16）による通門が可能とされるであろう。した
がって、チャンネル（10）通門の大きさ（amplitude）
はアナライト（20）濃度を反映するであろう。
本発明の特性がより明確に理解されるように、その好
適な態様を、以下の実施例を参照して記載する。
適な態様を、以下の実施例を参照して記載する。
実施例 グラミシジン Ｎ−ε−（2,4−ジニトロフェニル）−
Ｎ−α−（Ｎ−ビオチニル）−６−アミノ−カプロイ
ル）リジン エステル（GaKDXB）の調製 グラミシジンＤ（Sigma,105mg）、Ｎ−α−BOC−Ｎ−
ε−ベンジルオキシカルボニルリジン（207mg）、ジシ
クロヘキシルカルボジイミド（127mg）および４−（N,N
−ジメチルアミノ）ピリジン（11mg）の、乾燥ジクロロ
メタン（30ml）中の混合物を、還流下で２時間加熱し、
ついで室温において一晩攪拌した。混合物はついでろ過
し、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルカラム上のクロ
マトグラフにかけ、ジクロロメタン／メタノール／水／
酢酸（400:50:4:1）で溶出しその後（400:60:6）で溶出
した。エールリッヒ試薬活性分画を合わせて、乾燥する
まで蒸発させた。残渣をジクロロメタン（5ml）、メタ
ノール（5ml）、水（0.1ml）、および酢酸（0.1ml）の
混合物中に溶解し、木炭（100mg）上10％パラジウムを
用いて水素雰囲気下で３日間攪拌した。混合物はろ過
し、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルカラム上のクロ
マトグラフにかけ、ジクロロメタン／メタノール／水
（400:50:4）で溶出しその後（400:60:6）で溶出し、グ
ラミシジン Ｎ−α−BOC−リジン エステル（78mg）
の、極性のあるエールリッヒ試薬反応性分画を得た。
Ｎ−α−（Ｎ−ビオチニル）−６−アミノ−カプロイ
ル）リジン エステル（GaKDXB）の調製 グラミシジンＤ（Sigma,105mg）、Ｎ−α−BOC−Ｎ−
ε−ベンジルオキシカルボニルリジン（207mg）、ジシ
クロヘキシルカルボジイミド（127mg）および４−（N,N
−ジメチルアミノ）ピリジン（11mg）の、乾燥ジクロロ
メタン（30ml）中の混合物を、還流下で２時間加熱し、
ついで室温において一晩攪拌した。混合物はついでろ過
し、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルカラム上のクロ
マトグラフにかけ、ジクロロメタン／メタノール／水／
酢酸（400:50:4:1）で溶出しその後（400:60:6）で溶出
した。エールリッヒ試薬活性分画を合わせて、乾燥する
まで蒸発させた。残渣をジクロロメタン（5ml）、メタ
ノール（5ml）、水（0.1ml）、および酢酸（0.1ml）の
混合物中に溶解し、木炭（100mg）上10％パラジウムを
用いて水素雰囲気下で３日間攪拌した。混合物はろ過
し、乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルカラム上のクロ
マトグラフにかけ、ジクロロメタン／メタノール／水
（400:50:4）で溶出しその後（400:60:6）で溶出し、グ
ラミシジン Ｎ−α−BOC−リジン エステル（78mg）
の、極性のあるエールリッヒ試薬反応性分画を得た。
ジクロロメタン（4ml）とメタノール（2ml）混合物中
のグラミシジン Ｎ−α−BOCリジン エステル（78m
g）の溶液は、2,4−ジニトロフルオロベンゼン（50μ
ｌ）で処理した。混合物は２時間攪拌し、ついで乾燥す
るまで蒸発させた。残渣はシリカゲル上のクロマトグラ
フにかけメタノール／ジクロロメタン（5:95、150ml）
で溶出し、そこからジクロロメタン／メタノール／水
（400/40/4）、（200ml）で溶出し、ジクロロメタン／
メタノール／水により最初に溶出される黄色の分画（20
0ml）を合わせ、乾燥するまで蒸発させて、グラミシジ
ン Ｎ−α−BOC−Ｎ−ε−2,4−ジニトロフェニルリジ
ン エステル（34mg）を得た。
のグラミシジン Ｎ−α−BOCリジン エステル（78m
g）の溶液は、2,4−ジニトロフルオロベンゼン（50μ
ｌ）で処理した。混合物は２時間攪拌し、ついで乾燥す
るまで蒸発させた。残渣はシリカゲル上のクロマトグラ
フにかけメタノール／ジクロロメタン（5:95、150ml）
で溶出し、そこからジクロロメタン／メタノール／水
（400/40/4）、（200ml）で溶出し、ジクロロメタン／
メタノール／水により最初に溶出される黄色の分画（20
0ml）を合わせ、乾燥するまで蒸発させて、グラミシジ
ン Ｎ−α−BOC−Ｎ−ε−2,4−ジニトロフェニルリジ
ン エステル（34mg）を得た。
グラミシジン Ｎ−α−BOC−Ｎ−ε−2,4−ジニトロ
フェニルリジン エステル（18mg）の溶液は、トリフル
オロ酢酸（3ml）中に溶解させ、３分間攪拌し、ついで
溶液を乾燥するまで蒸発させた。残渣はトルエン（5m
l）で層とし（layered）乾燥するまで蒸発させた（工程
を３回繰り返した）。残渣はジクロロメタン（4ml）と
メタノール（2ml）の混合物中に取り上げ（taken u
p）、混合物はトリエチルアミンでpH9に調整した。つい
でＮ−ビオチニル−６−アミノカプロン酸Ｎ−ヒドロキ
シコハク酸イミドエステル（10mg）を溶液に添加し、混
合物を室温にて一晩攪拌した。ついで混合物は乾燥する
まで蒸発させ、ついでシリカゲル上のクロマトグラフに
かけジクロロメタン／メタノール（95:5、150ml）で溶
出し、ついでジクロロメタン／メタノール／水（400:4
0:4、200ml）で溶出した。ジクロロメタン／メタノール
／水溶媒混合物で溶出された最初の３つの（黄色）分画
を合わせ、乾燥するまで蒸発させて、グラミシジン Ｎ
−ε−2,4−ジニトロフェニル−Ｎ−α−（Ｎ−ビオチ
ニル−６−アミノ−カプロイル）リジン エステルの黄
色粉末（34mg）を得た。
フェニルリジン エステル（18mg）の溶液は、トリフル
オロ酢酸（3ml）中に溶解させ、３分間攪拌し、ついで
溶液を乾燥するまで蒸発させた。残渣はトルエン（5m
l）で層とし（layered）乾燥するまで蒸発させた（工程
を３回繰り返した）。残渣はジクロロメタン（4ml）と
メタノール（2ml）の混合物中に取り上げ（taken u
p）、混合物はトリエチルアミンでpH9に調整した。つい
でＮ−ビオチニル−６−アミノカプロン酸Ｎ−ヒドロキ
シコハク酸イミドエステル（10mg）を溶液に添加し、混
合物を室温にて一晩攪拌した。ついで混合物は乾燥する
まで蒸発させ、ついでシリカゲル上のクロマトグラフに
かけジクロロメタン／メタノール（95:5、150ml）で溶
出し、ついでジクロロメタン／メタノール／水（400:4
0:4、200ml）で溶出した。ジクロロメタン／メタノール
／水溶媒混合物で溶出された最初の３つの（黄色）分画
を合わせ、乾燥するまで蒸発させて、グラミシジン Ｎ
−ε−2,4−ジニトロフェニル−Ｎ−α−（Ｎ−ビオチ
ニル−６−アミノ−カプロイル）リジン エステルの黄
色粉末（34mg）を得た。
膜の構築 ガラス基材上の蒸発させたばかりの（freshly evapor
ated）金電極の上に、開放端円筒状テフロンスリーブ
（sleeve）（直径4mm、高さ10mm）を置いた。テフロン
スリーブは金属の締め金で固定し、ガラス−テフロン界
面をしっかり封止した。モノオレイン酸グリセロール
（140mM）、貯蔵（reservoir）リピドＡ（23−（20′−
オキソ−19′−オキサエイコサ−（Ｚ）−９′−エン）
−70−フェニル−20,25,28,42,45−ペンタオキソ−24−
アザ−19,29,32,35,38,41,46,47,52,55−デカオキサ−5
8,59−ジチアヘキサコンタ（dithiahexaconta）−
（Ｚ）−９−エン、詳しくはPCT/AU93/00509に記載され
ている）（140μＭ）およびグラミシジンＢ（図５に示
され、より詳しくはPCT/AU93/00509に記載されている）
（1.4μＭ）の、テトラデカンとエタノール（1:9）の混
合物（２μｌ）中の溶液を、テフロンウェルアセンブリ
中に入れ、その後直ちに塩化ナトリウム溶液（0.1M,100
μｌ）を入れた。ついでアセンブリは一晩静置させた。
ついで水溶液をシュリンゲにより除去し、ウェルは水
（100μｌ）で洗浄し、ついでエタノール（３×100μ
ｌ）で洗浄した。アセンブリは乾燥させ、ついでテトラ
デカンとエタノール混合物（1:9、５μｌ）中の、モノ
オレイン酸グリセロール）140mM）とグラミシジン Ｎ
−ε−2,4−ジニトロフェニル−Ｎ−α−（Ｎ−ビオチ
ニル−６−アミノ−カプロイル）リジン エステル（14
μＭ）溶液を添加した。直ちに塩化ナトリウム（0.1M,1
00μｌ）をウェルに添加し、ウェルはついで５×100μ
ｌ量の0.1M塩化ナトリウムでパージした。膜アセンブリ
はついで100μｌ量の0.1M塩化ナトリウム下で一晩静置
させた。
ated）金電極の上に、開放端円筒状テフロンスリーブ
（sleeve）（直径4mm、高さ10mm）を置いた。テフロン
スリーブは金属の締め金で固定し、ガラス−テフロン界
面をしっかり封止した。モノオレイン酸グリセロール
（140mM）、貯蔵（reservoir）リピドＡ（23−（20′−
オキソ−19′−オキサエイコサ−（Ｚ）−９′−エン）
−70−フェニル−20,25,28,42,45−ペンタオキソ−24−
アザ−19,29,32,35,38,41,46,47,52,55−デカオキサ−5
8,59−ジチアヘキサコンタ（dithiahexaconta）−
（Ｚ）−９−エン、詳しくはPCT/AU93/00509に記載され
ている）（140μＭ）およびグラミシジンＢ（図５に示
され、より詳しくはPCT/AU93/00509に記載されている）
（1.4μＭ）の、テトラデカンとエタノール（1:9）の混
合物（２μｌ）中の溶液を、テフロンウェルアセンブリ
中に入れ、その後直ちに塩化ナトリウム溶液（0.1M,100
μｌ）を入れた。ついでアセンブリは一晩静置させた。
ついで水溶液をシュリンゲにより除去し、ウェルは水
（100μｌ）で洗浄し、ついでエタノール（３×100μ
ｌ）で洗浄した。アセンブリは乾燥させ、ついでテトラ
デカンとエタノール混合物（1:9、５μｌ）中の、モノ
オレイン酸グリセロール）140mM）とグラミシジン Ｎ
−ε−2,4−ジニトロフェニル−Ｎ−α−（Ｎ−ビオチ
ニル−６−アミノ−カプロイル）リジン エステル（14
μＭ）溶液を添加した。直ちに塩化ナトリウム（0.1M,1
00μｌ）をウェルに添加し、ウェルはついで５×100μ
ｌ量の0.1M塩化ナトリウムでパージした。膜アセンブリ
はついで100μｌ量の0.1M塩化ナトリウム下で一晩静置
させた。
2,4−ジニトロアニリンのアッセイ ウサギ抗ジニトロフェニル（DNP）抗体の市販の調製
物（Dakopatt、7mg/ml全抗血清）を0.1M塩化ナトリウム
溶液中に1:10に希釈した。ついで90μｌの抗DNP抗体の
1:10希釈液と、HClでpH4.5の酸性としておいた10μｌの
2,4ジニトロアニリンの水溶液を含む試料シリーズを調
製した。2,4−ジニトロアニリンの溶液中の最終的な濃
度は、２連の溶液で（in twofold serial dilutions）2
5μＭから１μＭの範囲であった。溶液は一晩静置させ
た。
物（Dakopatt、7mg/ml全抗血清）を0.1M塩化ナトリウム
溶液中に1:10に希釈した。ついで90μｌの抗DNP抗体の
1:10希釈液と、HClでpH4.5の酸性としておいた10μｌの
2,4ジニトロアニリンの水溶液を含む試料シリーズを調
製した。2,4−ジニトロアニリンの溶液中の最終的な濃
度は、２連の溶液で（in twofold serial dilutions）2
5μＭから１μＭの範囲であった。溶液は一晩静置させ
た。
2,4−ジニトロアニリンの各濃度について３セットの
センサー膜、これは上述のごとく調製されたACインピー
ダンス分光計でモニターされるものであるが、これを2,
4−ジニトロアニリン−抗DNP抗体溶液（５μｌ）で処理
した。10分後、ストレプタビジン溶液（0.5mg/ml、２μ
ｌ）を添加した。ストレプタビジンに反応して最大のイ
ンピーダンスを与える頻度において、直前とストレプタ
ビジン添加５分後とのACインピーダンス値の比は、膜に
添加した最初の試料中に存在した2,4−ジニトロアニリ
ンの量に比例した（図４）。
センサー膜、これは上述のごとく調製されたACインピー
ダンス分光計でモニターされるものであるが、これを2,
4−ジニトロアニリン−抗DNP抗体溶液（５μｌ）で処理
した。10分後、ストレプタビジン溶液（0.5mg/ml、２μ
ｌ）を添加した。ストレプタビジンに反応して最大のイ
ンピーダンスを与える頻度において、直前とストレプタ
ビジン添加５分後とのACインピーダンス値の比は、膜に
添加した最初の試料中に存在した2,4−ジニトロアニリ
ンの量に比例した（図４）。
同時継続国際特許出願PCT/AU93/00509には、膜二重層
（membrane bilayers）の調製においてテトラデカンの
排除が有利であるかもしれないことが開示されている。
しかしながらこの点で、本システムにおいてテトラデカ
ンの膜溶液からの排除が有利であるかどうかは明白では
ない。
（membrane bilayers）の調製においてテトラデカンの
排除が有利であるかもしれないことが開示されている。
しかしながらこの点で、本システムにおいてテトラデカ
ンの膜溶液からの排除が有利であるかどうかは明白では
ない。
当業者によって容易に理解されるように、第１および
第２のリガンドは、当該分野で知られる多くの結合性分
子のいかなるものであってよい。しかしながら、その結
合相手と結合する第２のリガンドが存在しなくても、第
１のリガンドがその結合相手に結合するのを阻害するほ
ど第２のリガンドは大きくないという要件が存在する。
もちろんそのような条件において、イオンチャンネルの
意味ある通門はおこらない。
第２のリガンドは、当該分野で知られる多くの結合性分
子のいかなるものであってよい。しかしながら、その結
合相手と結合する第２のリガンドが存在しなくても、第
１のリガンドがその結合相手に結合するのを阻害するほ
ど第２のリガンドは大きくないという要件が存在する。
もちろんそのような条件において、イオンチャンネルの
意味ある通門はおこらない。
上述したように、本発明の通門メカニズムは、ストレ
プタビジン−ビオチン化グラミシジン通門の阻害に制限
されるものではない。立体的に干渉され（be interfere
d）得るいかなる通門プロセスもこのアプローチに従う
であろう。例えば、グラミシジンイオンチャンネルの通
門は、第１のリガンドを介する隣接するグラミシジンイ
オンチャンネルの架橋により達成されることが予想され
よう。この例において、第１のリガンドは、酸化条件下
で、隣接するグラミシジン残基上の対応するグループと
架橋し、それによりグラミシジンイオンチャンネルを介
して膜を越えるイオンを阻害するグループを含むことが
できよう。ついで第２のリガンドのその結合相手との結
合が、架橋と同時に生ずる通門を阻害し、さらに、上記
ビオチン−ストレプタビジンの例からの類推から、他の
一般的な検出スキームを提供できるであろう。
プタビジン−ビオチン化グラミシジン通門の阻害に制限
されるものではない。立体的に干渉され（be interfere
d）得るいかなる通門プロセスもこのアプローチに従う
であろう。例えば、グラミシジンイオンチャンネルの通
門は、第１のリガンドを介する隣接するグラミシジンイ
オンチャンネルの架橋により達成されることが予想され
よう。この例において、第１のリガンドは、酸化条件下
で、隣接するグラミシジン残基上の対応するグループと
架橋し、それによりグラミシジンイオンチャンネルを介
して膜を越えるイオンを阻害するグループを含むことが
できよう。ついで第２のリガンドのその結合相手との結
合が、架橋と同時に生ずる通門を阻害し、さらに、上記
ビオチン−ストレプタビジンの例からの類推から、他の
一般的な検出スキームを提供できるであろう。
特定の実施態様で示された発明に対し、広く記載され
た発明の思想または範囲から離れることなく、数多くの
変更および／または修正がなされ得ることは当業者によ
り認識されるであろう。本実施態様は、したがって、あ
らゆる意味において単なる例示であり、制限的ではない
と考慮されるべきものである。
た発明の思想または範囲から離れることなく、数多くの
変更および／または修正がなされ得ることは当業者によ
り認識されるであろう。本実施態様は、したがって、あ
らゆる意味において単なる例示であり、制限的ではない
と考慮されるべきものである。
フロントページの続き (72)発明者 キング，ライオネル ジョージ オーストラリア国 2113 ニュー サウ ス ウェールズ ノース ライド ビー トライス ストリート 27 (56)参考文献 特表 平４−504714（ＪＰ，Ａ) 特表 平３−503209（ＪＰ，Ａ) 特表 平４−500124（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/53 - 33/579 G01N 27/333
Claims (3)
- 【請求項１】アナライトの検出に使用される膜であっ
て、自己集合両親媒性分子が密に詰められた配列、複数
のイオノフォア、および膜表面に隣接したイオノフォア
末端に付着した第１と第２のリガンドを含むものであ
り、第１のリガンドのその結合相手との結合がイオノフ
ォアを介して膜を越えるイオン流動を阻害すること、お
よび第２のリガンドのその結合相手との結合が第１のリ
ガンドのその結合相手との結合を阻害することを特徴と
する上記膜。 - 【請求項２】上記第１のリガンドがビオチンである請求
の範囲第１項に記載の膜。 - 【請求項３】上記イオノフォアがグラミシジンまたはグ
ラミシジンアナログである請求の範囲第１項または第２
項に記載の膜。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AU6171 | 1992-12-03 | ||
| AUPL617192 | 1992-12-03 | ||
| PCT/AU1993/000620 WO1994012875A1 (en) | 1992-12-03 | 1993-12-02 | Analyte detection by competitive inhibition of ion channel gating |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08504943A JPH08504943A (ja) | 1996-05-28 |
| JP3316816B2 true JP3316816B2 (ja) | 2002-08-19 |
Family
ID=3776575
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51259494A Expired - Fee Related JP3316816B2 (ja) | 1992-12-03 | 1993-12-02 | イオンチャンネル通門の競合阻害によるアナライト検出 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5591647A (ja) |
| EP (1) | EP0672251A4 (ja) |
| JP (1) | JP3316816B2 (ja) |
| AU (1) | AU663243B2 (ja) |
| CA (1) | CA2150915C (ja) |
| WO (1) | WO1994012875A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2183837T3 (es) * | 1993-04-21 | 2003-04-01 | Ambri Ltd | Amplificador de superficie. |
| AT402935B (de) * | 1994-10-19 | 1997-09-25 | Pittner Fritz | Biorekognitions-gesteuerter, ionenfluss-modulirender biosensor |
| AUPM950094A0 (en) * | 1994-11-16 | 1994-12-08 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Detection device and method |
| US5879878A (en) * | 1995-06-20 | 1999-03-09 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Method of producing a first layer electrode membrane for a biosensor |
| AUPN366995A0 (en) * | 1995-06-20 | 1995-07-13 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Self-assembly of bilayer membrane sensors |
| AU1360297A (en) * | 1996-01-11 | 1997-08-01 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Ion channel sensor typing |
| WO1997029366A1 (en) * | 1996-02-08 | 1997-08-14 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Enzyme detection biosensors |
| AUPO714897A0 (en) * | 1997-06-03 | 1997-06-26 | Australian Membrane And Biotechnology Research Institute | Model membrane systems |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8622788D0 (en) * | 1986-09-22 | 1986-10-29 | Atomic Energy Authority Uk | Sensor |
| AU617687B2 (en) * | 1987-07-27 | 1991-12-05 | Ambri Limited | Receptor membranes |
| WO1989001159A1 (en) * | 1987-07-27 | 1989-02-09 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Or | Receptor membranes |
| EP0310361A3 (en) * | 1987-09-30 | 1989-05-24 | Beckman Instruments, Inc. | Tridentate conjugate and method of use thereof |
| WO1990002327A1 (en) * | 1988-08-18 | 1990-03-08 | AUSTRALIAN MEMBRANE AND BIOTECHNOLOGY RESEARCH INSTITUTE LTD., Commonwealth Scientific and Industrial Research Organization | Improvements in sensitivity and selectivity of ion channel membrane biosensors |
| AU623747B2 (en) * | 1989-01-27 | 1992-05-21 | Ambri Limited | Receptor membranes and ionophore gating |
-
1993
- 1993-12-02 JP JP51259494A patent/JP3316816B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-12-02 US US08/436,236 patent/US5591647A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-12-02 AU AU56188/94A patent/AU663243B2/en not_active Ceased
- 1993-12-02 WO PCT/AU1993/000620 patent/WO1994012875A1/en not_active Application Discontinuation
- 1993-12-02 CA CA002150915A patent/CA2150915C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-12-02 EP EP94901688A patent/EP0672251A4/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5591647A (en) | 1997-01-07 |
| CA2150915C (en) | 2004-11-23 |
| CA2150915A1 (en) | 1994-06-09 |
| AU5618894A (en) | 1994-06-22 |
| EP0672251A4 (en) | 1998-05-20 |
| AU663243B2 (en) | 1995-09-28 |
| JPH08504943A (ja) | 1996-05-28 |
| EP0672251A1 (en) | 1995-09-20 |
| WO1994012875A1 (en) | 1994-06-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3852036T2 (de) | Rezeptormembranen. | |
| DE69714584T2 (de) | Immunoassays zum nachweis von antiphospholipid-antikörpern | |
| US5766960A (en) | Receptor membranes | |
| Mirsky et al. | Capacitive monitoring of protein immobilization and antigen–antibody reactions on monomolecular alkylthiol films on gold electrodes | |
| US5958791A (en) | Interdigitated electrode arrays for liposome-enhanced immunoassay and test device | |
| DE69716454T2 (de) | Nachweisverfahren mit hilfe von fluoreszent-energietransferliganden auf lipidfilmen | |
| DE69635607T2 (de) | Liposom-verstärkter immunoaggregations-test und testvorrichtung | |
| US5234566A (en) | Sensitivity and selectivity of ion channel biosensor membranes | |
| US7718388B2 (en) | Universal biosensor and methods of use | |
| Lee et al. | Disposable liposome immunosensor for theophylline combining an immunochromatographic membrane and a thick-film electrode | |
| JP3316816B2 (ja) | イオンチャンネル通門の競合阻害によるアナライト検出 | |
| CA2228519A1 (en) | Composite membrane sensor | |
| Zhang et al. | A highly selective fluorescence nanosensor based on the dual-function molecularly imprinted layer coated quantum dots for the sensitive detection of diethylstilbestrol/cypermethrin in fish and seawater | |
| EP0762122A1 (de) | Optischer Festphasenbiosensor auf Basis von Streptavidin und Biotin | |
| Fu et al. | Molecular imprinted electrochemical sensor for ovalbumin detection based on boronate affinity and signal amplification approach | |
| EP1015885A2 (de) | Aufreinigung von substanzen aus einer biologischen probe | |
| AU617687B2 (en) | Receptor membranes | |
| US6316273B1 (en) | Biosensor for detection of small molecule analytes | |
| DE3100061A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von liganden mittels kompetitionsreaktion | |
| Bäumner et al. | Liposome-based immunosensors. 1. Influence of hapten spacer length on liposome binding efficiency | |
| US20030143726A1 (en) | Biosensor involving the use of optically sensitive moieties | |
| AU779295B2 (en) | Improved biosensor involving the use of optically sensitive moieties | |
| Tiefenauer et al. | Avidin modified glassy carbon electrodes: Towards a multivalent immunosensor | |
| Roberts | The development, characterization, and use of liposome reagents for rapid analysis of environmental toxicants | |
| Lim et al. | Separation of porphyrins from biological materials by high pressure liquid chromatography |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| S201 | Request for registration of exclusive licence |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R314201 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |