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JP2024532413A - 高分子量修飾ｄｓＲＮＡ組成物 - Google Patents

高分子量修飾ｄｓＲＮＡ組成物 Download PDF

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JP2024532413A JP2024513327A JP2024513327A JP2024532413A JP 2024532413 A JP2024532413 A JP 2024532413A JP 2024513327 A JP2024513327 A JP 2024513327A JP 2024513327 A JP2024513327 A JP 2024513327A JP 2024532413 A JP2024532413 A JP 2024532413A
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アランチェット，ジュアン，ピー．
クライン，ジェーソン
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ナノスール エルエルシー
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Abstract

２’－ＯＨ位において高分子量ポリアルキルオキシ修飾を有する転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）を記載する。この修飾は、化合物のより大きいバイオアベイラビリティ、化合物の優れた安定性を可能にし、ヌクレアーゼに対するより大きい安定性を可能にする。ＭｄｓＲＮＡは、容易に拡張可能な方法で経済的に製造することができる。ＭｄｓＲＮＡが高分子量ポリアルキルオキシポリマーを含むように修飾されるように、化学修飾ヌクレオチドを有するＭｄｓＲＮＡの組成物を記載する。これらのＭｄｓＲＮＡを効率的に作製するための合成方法及びＭｄｓＲＮＡを使用する方法を記載する。

Description

関連出願
本願は、２０２１年８月３１日出願の米国仮特許出願第６３／２３９，１６５号による優先権を主張するものである。上記出願の全教示は、参照により本明細書に組み込まれる。
ＸＭＬの資料の参照による組み込み
本願は、本願と同時に提出される以下のｅＸｔｅｎｓｉｂｌｅ Ｍａｒｋｕｐ Ｌａｎｇｕａｇｅ（ＸＭＬ）ファイル中に含まれる配列表を参照により組み込む：
ａ）ファイル名：５５８１１００３００１．ｘｍｌ；２０２２年８月２９日に２７８，５１７バイトのサイズで作成された。
昆虫は、ヒトの生活を支持する全ての陸生環境を支配することから、通常は、食物、繊維、及び他の天然資源に対する人類の最も重要な競合者である。昆虫は、作物の葉を噛み、植物汁液を吸い出し、根、茎又は葉の中で子を産み、植物病原体を拡散させることにより、農産食品製造に対する直接的影響を有する。昆虫は、天然繊維を常食とし、木造材料を破壊し、貯蔵穀物を破壊し、そして崩壊の過程を促進する。
昆虫の経済的影響は、昆虫が破壊する製品の市場価値や昆虫が及ぼす損害のコストだけでなく、有害生物激増の予防及び制御にかかる金及び資源によって評価される。これら損失に見合うドル価値は、特にヒトの健康及び福祉に悪影響を及ぼす場合、計算することがほぼ不可能であるが、経済学者は、昆虫が、先進工業大国における国民総生産のおよそ１０％、そして一部の開発途上国における国民総生産の最大２５％を消費又は破壊することに一般に同意している。
昆虫集団を制御するための１つの可能な方法は、天然に存在する生物学的プロセスであり、このプロセスにより二本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）が配列特異的方法で標的遺伝子発現をサイレンシング（ノックダウン）する、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の使用である。細胞酵素は、ｄｓＲＮＡを使用して、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）及び非翻訳ＲＮＡを含む一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）を標的化及び切断する。ＲＮＡｉは、植物、昆虫、ダニ類、真菌及び動物を含む多くの真核生物内で起こることが既知であり、遺伝子発現の選択的且つ効率的な調節のための大きな可能性を提供する。
ｄｓＲＮＡは、ｍＲＮＡ又は非翻訳ＲＮＡの配列に相補的な配列を含むアンチセンス鎖、及びガイド鎖配列に相補的な配列を含み、ｍＲＮＡ又は非翻訳ＲＮＡの配列と実質的に同一であるセンス鎖を有する。センス及びアンチセンス配列は、別個のＲＮＡ鎖又は単一の鎖上に存在し得る。単一の鎖上に存在する場合、相補的な配列は、ハイブリダイズしないヘアピン又はループ配列によって接続される。
先行技術に記載される、作物を冒す標的化される植物、昆虫、ダニ類、及び真菌に対するＲＮＡｉ媒介による遺伝子抑制は、外因的に供給される非修飾ｄｓＲＮＡ（ＵｄｓＲＮＡ）を使用して達成されている（米国特許第９，１２１，０２２号明細書；Ｉｖａｓｈｕｔａ ｅｔ ａｌ．２０１５；米国特許出願公開第２０１６０２１５２９０号明細書；Ｋｏｃｈ ｅｔ ａｌ．２０１６）。ｄｓＲＮＡが昆虫内でＲＮＡｉを誘導するのに使用され、昆虫の食餌中に供給される場合、効率的な取り込み及び加工のために時には６０塩基対（ｂｐ）又はより長いｄｓＲＮＡが必要であることが見出されている（Ｂｏｌｏｇｎｅｓｉ ｅｔ ａｌ．２０１２）。
約３０塩基対（ｂｐ）を超える長さのＵｄｓＲＮＡの調製は、インビトロ転写（Ｔｉｍｍｏｎｓ ２００６）及び発酵（Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ．１９９８）により達成されている。ＵｄｓＲＮＡの調製及び精製のための商業的に実現可能な大規模方法が記載されている（Ａｒｈａｎｃｅｔ ｅｔ ａｌ．，米国特許第９８２２３６１Ｂ２号明細書）。しかしながら、ＵｄｓＲＮＡは、環境及び宿主内のヌクレアーゼによる分解に感受性であり、遺伝子発現の阻害の有効性が低減されている（Ｂａｕｍ ２０１６）。
ＤｓＲＮＡ分解は、化学的手段により修飾されたヌクレオチドを有する小型（＜３０ｂｐ）干渉ｄｓＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の化学合成を用いることにより、インビトロ及びインビボ研究において及びヒト治療法のために対処されている（Ｋｕ ｅｔ ａｌ．２０１５）。化学修飾ヌクレオチドを有するｓｉＲＮＡの製剤は、単鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）鎖の伸長において付加される各ヌクレオチドに関する保護－脱保護の連続的な化学反応を含む（Ｍｉｃｕｒａ ２００２）。そのようなプロセスの複雑さ及び出費は、ＲＮＡｉを誘発する約３０ｂｐよりも長いＲＮＡ分子（ＲＮＡｉトリガー）において有意に増大する。リボースの２’－ＯＨ位で化学修飾されたヌクレオチドを使用した、昆虫を標的とする化学的に合成されるｓｉＲＮＡも記載されているが（Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１３）、数グラムを超える量又は約３０ｂｐを超える長さの化学修飾ｄｓＲＮＡを調製するためには、修飾ｓｉＲＮＡの費用及び合成の複雑さは、経済的に実現可能でも又は十分に拡張可能でもない。
分析目的のためのｓｓＲＮＡの転写後化学修飾は、Ｍｅｒｉｎｏ（２００５）によっても記載されている。Ｍｅｒｉｎｏは、１０％ＤＭＳＯを含む水性媒体中でｓｓＲＮＡをＮ－メチルイサト酸無水物（ＮＭＩＡ）と反応させて、一本鎖ヌクレオチドにおけるＮ－メチル－アントラニル酸の２’－Ｏ－エステルを生成した。この方法による誘導体化は非効率であった。反応容器内の１５％未満のｓｓＲＮＡ鎖が修飾され、修飾されたものは、平均で、ｓｓＲＮＡ鎖当たりＮＭＩＡの単一の２’－Ｏ－エステルを有した。これらの条件下で、ｄｓＲＮＡは、８０倍超の低い効率で反応し、ステム領域内の０．１８％未満のヌクレオチドが修飾され、ステム末端の１ヌクレオチド内（即ち、単鎖領域の１ヌクレオチド内）のみで修飾された。同様の結果が他の反応関与体とのＲＮＡの反応に関して観察されている（Ｎｏｄｉｎ ２０１５）。１－メチル－７－ニトロイサト酸無水物（１Ｍ７）、シアン化ベンゾイル（ＢｚＣＮ）、２－メチル－３－フロ酸イミダゾリド（ＦＡＩ）及び２－メチルニコチン酸イミダゾリド（ＮＡＩ）は、ＲＮＡの２’－リボースエステルを転写後に生成するのに使用されたが、同様に低い割合の修飾を有し、修飾は不対ヌクレオチドのリボース又はそれらに隣接する対ヌクレオチドで主に起こった。
非修飾のポリリボ核酸は、例外的に不安定な分子である。ＤＮＡと異なり、それは、ＲＮＡポリマーを加水分解に対して感受性にするリボースの２’位置にヒドロキシル基を含む。２’－ＯＨの脱プロトン化と、それに続くリン骨格上の２’酸素の求核攻撃は、リボヌクレアーゼＡを含む多様な核酸分解酵素によるホスホジエステル結合の切断の主要な分子機構である（Ｅｌｌｉｏｔ ａｎｄ Ｌａｄｏｍｅｒｙ，２０１１）。核酸分解に対する核酸骨格の安定化は、ｓｉＲＮＡベースの治療法の進化に関してもほぼ同様で、成功を決定づける課題となっている（Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ．，２０１４）。ＲＮＡ安定性の課題は、核酸の消化に関与する多様なエンドヌクレアーゼ及びホスホジエステラーゼによる核酸分解活性に富む腸管環境において特に重要である（Ｗｈｉｔｔ ａｎｄ Ｓａｖａｇｅ，１９８８；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。ＲＮＡ分子を安定化するための高度に有効な方法は、２’－Ｏ基の誘導体化である。ナノアセンブリ（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．２０１０）及びＲＮＡｉサイレンシング分子（Ｋｈｖｏｒｏｖａ ａｎｄ Ｗａｔｔｓ，２０１７）を含む、この位置での多様な修飾は、多様なＲＮＡ分子の酵素的安定性を改善することが実証されている。これらの修飾は、一般に低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）の化学合成中に適用される。
ｄｓＲＮＡの使用において、特に２’－ＯＨ位に化学修飾（具体的にはポリアルキルオキシポリマー）を有する場合、多くの進歩がなされている一方で、過去に利用可能であった場合より効率的であり、より可溶性であり、より生体利用可能である化学修飾ｄｓＲＮＡ組成物が求められている。また、これらの化学修飾ｄｓＲＮＡ組成物を大規模生産を可能にする効率的方法で作製する合成方法が求められている。
２’－ＯＨ位において高分子量ポリアルキルオキシ修飾を有する転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）を本明細書に記載する。この修飾は、化合物のより大きいバイオアベイラビリティ、化合物の優れた安定性を可能にし、ヌクレアーゼに対するより大きい安定性を可能にする。本明細書に記載のとおり、これらのＭｄｓＲＮＡは、容易に拡張可能な方法で経済的に製造することができる。
本開示は、ＭｄｓＲＮＡが、高分子量ポリアルキルオキシポリマーを含むように修飾され、場合により低分子量（ＬＭＷ）部分（ＬＭＷ修飾ヌクレオチド）を含むために２’－Ｏ化学修飾ヌクレオチドを更に含むように、化学修飾ヌクレオチドを有する修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）の組成物を記載する。本開示はまた、これらの修飾ＭｄｓＲＮＡを効率的に作製するための合成方法を記載する。
したがって、一態様では、本開示は、転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
Figure 2024532413000001
 又はその許容可能な塩（式中、Ｂ及びＲ１は本明細書で定義される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物を提供する。
本態様の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、全てのヌクレオチドの約３０％以下が高分子量ポリアルキルオキシポリマーで修飾されていることを含む。別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、全てのヌクレオチドの少なくとも約２％がＬＭＷ部分で修飾されていることを更に含む。一実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、全てのヌクレオチドの約２％～約５０％がＬＭＷ部分で修飾されていることを更に含む。ある実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約３：５：２の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約３：６．５：０．５の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約１：７：２の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．５：９：０．５の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．３：４：５．７の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．０１：４：５．９９の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．０６：０：９６．４の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。
別の態様では、本開示は、転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
Figure 2024532413000002
 又はその許容可能な塩（式中、Ｂ及びＲ１は本明細書で定義される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物を調製する方法を提供する。
本明細書に記載の組成物の実施形態を作製するための方法を開示する。組成物を調製する方法のある実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、全てのヌクレオチドの約３０％以下が高分子量ポリアルキルオキシポリマーで修飾されていることを含む。組成物を調製する方法の別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、全てのヌクレオチドの少なくとも約２％がＬＭＷ部分で修飾されていることを更に含む。一実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、全てのヌクレオチドの約２％～約５０％がＬＭＷ部分で修飾されていることを更に含む。組成物を調製する方法のある実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約３：５：２の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。組成物を調製する方法の別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約３：６．５：０．５の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。組成物を調製する方法の更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約１：７：２の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。組成物を調製する方法の更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．５：９：０．５の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。組成物を調製する方法の更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．３：４：５．７の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。組成物を調製する方法の更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．０１：４：５．９９の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。組成物を調製する方法の更に別の実施形態では、二重鎖ＲＮＡの転写後化学修飾は、約０．０６：０：９６．４の比での高分子量修飾ヌクレオチド対ＬＭＷ修飾ヌクレオチド対非修飾ヌクレオチドを含む。
さらなる態様では、本開示は、本明細書に記載される組成物、標的昆虫、真菌、雑草又はダニ類、及び配列のいずれかを用いて、昆虫、真菌、雑草又はダニ類における目的のポリヌクレオチドの発現を修飾する方法を提供する。
前述は、実施形態例の以下のより特定の説明から明らかであろう。
図１は、式（Ｉ）の選択化合物の投与後のコナガ幼虫の累積的死亡率を示す。 図２は、Ｃ２処理、非修飾ｄｓＳＮＦ７、並びに修飾ｄｓＳＮＦ７の処理ＮＳ２（ＰＥＧ－ｄｓＳＮＦ７）及びＮＳ５（ＮＭＩＡ－ｄｓＳＮＦ７）について、田畑におけるキャベツ葉上のｄｓＲＮＡ含量の減少を示す。 図３は、式（Ｉ）の選択化合物の投与後、３日後（３ＤＡ－Ａ）及び４日後（４ＤＡ－Ａ）の田畑のコナガ幼虫の死亡率を示す。 図４は、１０ｋの活性化ＰＥＧで修飾された３００ｂｐのｄｓＲＮＡのアガロースゲル電気泳動分析を示す。ライン：１－ＤＮＡラダー；２－元のｄｓＲＮＡ；３－１０ｋＰＥＧ－ＭｄｓＲＮＡ反応混合物。
定義
本明細書で使用される用語「約」は、ほぼ～、およそ～、～辺り、又は～の範囲内を意味するように本明細書で用いられる。用語「約」を数値範囲と組み合わせて使用する場合、それは、記載される数値を上回る境界及び下回る境界を延長することによって、その範囲を修飾する。一般に、用語「約」は、２０パーセントの上又は下への（より高い又はより低い）変動による、規定値を上回る及び下回る数値を修飾するために本明細書で用いられる。
本明細書で使用される用語「配列」又は「ヌクレオチド配列」は、標準的なヌクレオチド命名法を使用した文字の連続で記載され、本明細書に記載される修飾ヌクレオチドに重要な、核酸塩基、ヌクレオチド及び／又はヌクレオシドの連続又は順序を指す。本明細書に記載する配列は、５’末端から３’末端へと列記される。当業者であれば、理解するであろう。逆相補鎖（即ち、３’末端から５’末端へと記載される）は、完全な逆相補鎖又は約１１ヌクレオチド長～約６０ヌクレオチド長の隣接ヌクレオチドのストレッチを含む鎖であり得、ここで約１１～約６０隣接ヌクレオチドのようなストレッチの各々は、本明細書に記載される配列における等しい長さのストレッチの逆相補鎖である。
いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、少なくとも４０、少なくとも３０、少なくとも５０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、又は少なくとも１００の長さの塩基対である。ＭｄｓＲＮＡセンス鎖は、センス配列を含み、ＭｄｓＲＮＡアンチセンス鎖は、アンチセンス配列を含む。アンチセンス配列は、標的遺伝子の転写されたｍＲＮＡ又は非翻訳ＲＮＡ（即ち、発現されたＲＮＡ）中に存在するヌクレオチド配列に１００％（完全に）相補的又は少なくとも９０％（実質的に）相補的又は少なくとも８０％（部分的に）相補的である。センス配列は、アンチセンス配列に１００％（完全に）相補的又は少なくとも９０％（実質的に）相補的又は少なくとも８０％（部分的に）相補的である。センス配列はまた、標的遺伝子のｍＲＮＡ又は非翻訳ＲＮＡ中に存在するヌクレオチド配列（標的配列）と１００％同一、少なくとも９０％同一、又は少なくとも８０％同一であってもよい。センス配列及び対応するアンチセンス配列は、相互に、部分的に（少なくとも８０％）、実質的に（９０％）、又は完全に（１００％）相補的である。いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡと標的遺伝子の転写されたｍＲＮＡ又は非翻訳ＲＮＡ配列中の対応する配列との間の相補性（アンチセンス配列）又は同一性（センス配列）の領域は、３０を超える、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、又は少なくとも１００ヌクレオチドの長さである。いくつかの実施形態では、アンチセンス配列は、３０を超える、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、又は少なくとも１００ヌクレオチドの長さの隣接配列であって、標的遺伝子の転写されたｍＲＮＡ又は非翻訳ＲＮＡ中の対応する隣接配列に１００％相補的又は少なくとも８０％相補的である隣接配列を含む。ＭｄｓＲＮＡのセンス及びアンチセンス配列は、同じ長さ又は６０の異なる長さのいずれかであり得る。好適なセンス及びアンチセンス配列は、当該技術分野で容易に利用可能な既知の方法を用いて同定される。
本明細書で使用される用語「ヌクレオチド」は、プリン又はピリミジン塩基対部分を含む１塩基対単位（例えば、式Ｉの単位又は非修飾リボース）を指す。この用語は、付着されたサブユニット間結合の存在下又は非存在下のヌクレオチド単位を指してもよいが、「荷電サブユニット」を指す場合、典型的には電荷はサブユニット間結合の中に存在する。
プリン又はピリミジン塩基対部分は、本明細書中で単に「核酸塩基」、「塩基（ｂａｓｅ）」又は「塩基（ｂａｓｅｓ）」とも称され、アデニン、シトシン、グアニン、ウラシル、チミン又はイノシンであってもよい。ピリジン－４－オン、ピリジン－２－オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６－トリメトキシベンゼン、３－メチルウラシル、ジヒドロウリジン、ナフチル、アミノフェニル、５－アルキルシチジン（例えば、５－メチルシチジン）、５－アルキルウリジン（例えば、リポチミジン）、５－ハロウリジン（例えば、５－ブロモウリジン）又は６－アザピリミジン又は６－アルキルビリミジン（例えば、６－メチルウリジン）、プロピン、キューソシン（ｑｕｅｓｏｓｉｎｅ）、２－チオウリジン、４－チオウリジン、ワイブトシン、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、４－アセチルチジン（ａｃｅｔｙｌｔｉｄｉｎｅ）、５－（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５’－カルボキシメチルアミノメチル－２－チオウリジン、５－カルボキシメチルアミノメチルウリジン、β－Ｄ－ガラクトシルケオシン、１－メチルアデノシン、１－メチルイノシン、２，２－ジメチルグアノシン、３－メチルシチジン、２－メチルアデノシン、２－メチルグアノシン、Ｎ６－メチルアデノシン、７－メチルグアノシン、５－メトキシアミノメチル－２－チオウリジン、５－メチルアミノメチルウリジン、５－メチルカルボニルメチルウリジン、５－メチルオキシウリジン、５－メチル－２－チオウリジン、２－メチルチオ－Ｎ６－イソペンテニルアデノシン、１３－Ｄ－マンノシルケオシン、ウリジン－５－オキシ酢酸、２－チオシチジン、トレオニン誘導体及びその他等の塩基も含まれる（Ｂｕｒｇｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３５：１４０９０；Ｕｈｌｍａｎ＆Ｐｅｙｍａｎ，上記）。この態様における「修飾塩基」は、上で例示されるとおり、アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）、及びウラシル（Ｕ）以外のヌクレオチド塩基を意味し；そのような塩基は、アンチセンス分子中の任意の位置で使用することができる。当業者は、オリゴマーの使用に応じて、Ｔｓ及びＵｓが互換可能であることを認識するであろう。例えば、よりＲＮＡ様である２’－Ｏ－メチルアンチセンスオリゴヌクレオチド等の他のアンチセンス化学の場合、Ｔ塩基は、Ｕとして表示されてもよい。
本明細書で使用されるとき、「修飾ヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’－ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡにおけるヌクレオチドの少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％が、合成後修飾されている。修飾ヌクレオチドは、非限定的に、リボース２’－ＯＨ置換を有するヌクレオチドを含む。「独立して」は、修飾ヌクレオチドの各々が、高分子量ポリアルキルオキシポリマー、及び存在する場合の低分子量部分から選択される、同じ修飾を有し得る、又は互いと異なる修飾を有し得ることは理解されるべきである。
「非修飾」ｄｓＲＮＡは、化学修飾されていないＲＮＡ分子である。
本明細書で使用される用語「ポリアルコキシ」又は「ポリアルキルオキシ」は、本明細書で互換可能に使用する場合、反復アルコキシ単位によって特徴づけられる好適な水溶性ポリマーを指す。そのようなポリマーの選択であるが非限定的な例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポロクサマー、ヒアルロン酸、ポリビニルアルコール、ポリオキサゾリン、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリアクリル酸、ポリアクリルアミド、ポリアクリレート、ポリメタクリルレート、ポリオルガノホスファゼン、ポリシロキサン、ポリビニルピロリドン、ポリシアノアクリレート、ポリエステル、又は上記の任意の誘導体が挙げられる。
ある実施形態では、本明細書で使用される用語「ポリアルコキシ」又は「ポリアルキルオキシ」は、好適な線状又は分岐ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーを指す。いくつかの実施形態では、ポリアルコキシは、線状又は分岐ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）ポリマーである。いくつかの実施形態では、ポリアルキルオキシは、ポロクサマーである。いくつかの実施形態では、ポリマーは、エチレングリコール－プロピレングリコールブロック共重合体ポロクサマーである。別の実施形態では、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）－ブロック－ポリ（プロピレングリコール）－ブロック－ポリ（エチレングリコール）、ＰＥＧ－ＰＰＧ－ＰＥＧポロクサマーである。更に別の実施形態では、ポリマーは、エチレンオキシド－プロピレンオキシドのトリブロック共重合体である。いくつかの実施形態では、ポリアルキルオキシは、少なくとも約４００Ｄａ、少なくとも約１ｋＤａ、少なくとも約５ｋＤａ、又は少なくとも約１０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、ポリアルキルオキシの分子量は、約４００Ｄａ～約４０ｋＤａ又は約５ｋＤａ～約４０ｋＤａである。
本明細書で使用される用語「ポロクサマー」は、ポリオキシエチレンの２つの親水性鎖によって隣接されるポリオキシプロピレンの中央疎水性鎖からなる非イオン性トリブロック共重合体を指す。ポロクサマーの選択であるが非限定的な例として、ポロクサマー４０７、３３８、１８８、１８４、及び４０１（即ち、Ｆ１２７、Ｆ１０８、Ｌ６８、Ｌ６４及びＬ１２１プルロニック（登録商標）、ＢＡＳＦ）が挙げられる。最初の２つの数字に１００を掛けると、ポリオキシプロピレンコアのおよその分子量が得られ、最終の数字に１０を掛けると、ポリオキシエチレン含量の百分率が得られる。「Ｌ」は液体を表し、「Ｆ」はフレーク固体を表す。
本開示の得られるポリマー修飾ｄｓＲＮＡの両親媒性特性、即ち、親水性基及び親油性基の両方の存在は、植物組織及び標的細胞膜を通じた溶解度、吸収及び透過性、並びにヌクレアーゼに対する耐性等のそれらの物理的及び化学的特性を調節する。最も有効なＭｄｓＲＮＡを生成したポリマーは、８～２７の範囲の親水性－親油性（Ｌｉｐｏｈｉｌｉｃ）平衡（ＨＬＢ）数を有する。一実施形態では、ＨＬＢは、約２～約３０である。別の実施形態では、ＨＬＢは、約１５～約２７である。
本明細書で使用される用語「高分子量ポリアルキルオキシ」は、少なくとも約４００Ｄａの分子量を有するポリアルキルオキシ基を含む化合物、置換基、又は他の化学的部分を指す。いくつかの実施形態では、ポリアルキルオキシの分子量は、少なくとも約１ｋＤａである。いくつかの実施形態では、ポリアルキルオキシの分子量は、少なくとも約５ｋＤａである。別の実施形態では、ポリアルキルオキシの分子量は、少なくとも約１０ｋＤａである。別の実施形態では、ポリアルキルオキシの分子量は、約４００Ｄａ～約４０ｋＤａである。更に別の実施形態では、ポリアルキルオキシの分子量は、約５ｋＤａ～約４０ｋＤａである。
本明細書で使用される用語「低分子量（ＬＭＷ）修飾ヌクレオチド」は、２’－ＯＨ低分子量修飾を有するヌクレオチドである。低分子量修飾は、１，０００ダルトン以下の部分である。例えば本明細書中で式ＩＩＩにおけるＲ２として同定されるときの修飾の例として、非限定的に、Ｃ１～Ｃ２５アルキル、Ｃ１～Ｃ２５アルケニル、Ｃ１～Ｃ２５アルキニル、Ｃ５～Ｃ１２アリール又はＣ５～Ｃ１２ヘテロアリールが挙げられ、これらのいずれもが、場合により、ハロ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、又はＣ１～Ｃ１２アルコキシから選択される１つ以上の置換基（即ち、本明細書で記載されるＲ２）で置換される。いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡ中のヌクレオチドの少なくとも約２％、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、又は少なくとも約９０％は、ＬＭＷ修飾ヌクレオチドで転写後に化学修飾される。いくつかの実施形態では、化学修飾は、（Ｎ－メチルイサト酸無水物（ＮＭＩＡ）による修飾からの）Ｎ－メチル－アントラニル酸のエステル、（Ｎ－ベンジリサト酸無水物（ＮＢＩＡ）による修飾からの）Ｎ－ベンジル－アントラニル酸のエステル、ジメチルフロイル、脂肪酸のエステル（例えば、非限定的に、ラウリル、オレイン酸、リノール酸等のＣ１～Ｃ１８）、酢酸、プロピオン酸、アミノ酸のエステル（例えば、チロシン、トリプトファン、ロイシン）、低分子量ＰＥＧ、窒素含有部分である。
理論に制限されるものではないが、組成物の植物、最終的には標的昆虫への送達において、ＬＭＷ部分の存在により、組成物が有機溶媒により十分に溶解し得ると考えられる。組成物は、最終利用者にとって経済的な量で、一層濃縮させることができる。更に、用途の組成物の領域における分解速度は、高分子ポリアルキルオキシポリマーで修飾されていないＭｄｓＲＮＡ中の空間内を充填することによって低下することが示されている。換言すれば、高分子量ポリアルキルオキシポリマーで修飾されていないヌクレオチドは、本明細書に記載されるとおり、低分子量部分で修飾することができる。ヌクレオチドの低分子量部分での修飾の程度は、種々の利益の中でも、組成物の分解速度、溶解度及び濃度に関する所望の特性に依存することになる。
本明細書で使用される用語「アルキル」又は「アルキル基」は、任意の炭素原子から水素原子を除去することにより、アルカンから誘導される一価基、－ＣｎＨ２ｎ＋１を記載する。アルキル基は、直鎖又は分枝鎖又は環状であり得、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ヘキシル等を含む。本明細書で使用されるとき、低級アルキル基は、主鎖中に１～２５個の炭素原子を含む。
本明細書で使用される用語「アルケニル」は、１つの炭素－炭素二重結合を有し、一般式－ＣｎＨ２ｎ－１を有する非環式分枝状又は非分枝状炭化水素である。水素原子の１つ以上は、置換され得る。アルキル基は、直鎖又は分枝鎖であり得、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、ヘキセニル等を含む。本明細書で使用されるとき、アルケニルは、主鎖中に２～２５個の炭素原子を含む。
本明細書で使用される用語「アルコキシド」又は「アルコキシ」は、アルコールのコンジュゲート基部である。アルコールは、直鎖、分枝状、環式であり得、アリールオキシ化合物を含み、メトキシ、エトキシ、イソプロイルオキシ（ｉｓｏｐｒｏｙｌｏｘｙ）、ブトキシ等を含む。
本明細書で使用される用語「アルキニル」は、炭素－炭素三重結合及び一般式－ＣｎＨ２ｎ－３を有する非環式分枝状又は非分枝状炭化水素である。それらは、直鎖又は分枝鎖であり得、エチニル、プロピニル、ブチニル、イソブチニル、ヘキシニル等を含む。本明細書で使用されるとき、低級アルキニルは、主鎖中に２～２５個の炭素原子を含む。
本明細書で使用される用語「アリール」又は「Ａｒ」は、単独で又は他の基の一部として、場合により置換されたホモ環式芳香族基を示す。アリール基は、フェニル、ビフェニル、ナフチル、置換フェニル、置換ビフェニル又は置換ナフチル等の、環部分に５～１２個の炭素を含む単環式又は二環式基であり得る。
本明細書で使用される用語「ヘテロアリール」は、単独で又は他の基の一部として、少なくとも１つの環に少なくとも１つのヘテロ原子を有する、場合により置換された芳香族基を示す。いくつかの実施形態では、ヘテロ芳香族基は、各環に５又は６個の原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ芳香族基は、環に１又は２個の酸素原子及び／又は１～４個の窒素原子を含み、炭素を介して分子の残りの部分に結合している。例示的な基としては、フリル、ベンゾフリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、トリアゾニル、テトラゾリル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリル、イソインドリル、インドリジニル、ベンゾイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、テトラゾロピリダジニル、カルバゾリル、プリニル、キノリニル、イソキノリニル、イミダゾピリジル等が挙げられる。例示的な置換基としては、以下の基の１つ以上が挙げられる：ヒドロカルビル、置換ヒドロカルビル、アルキル、アルコキシ、アシル、アシルオキシ、アルケニル、アルケノキシ、アリール、アリールオキシ、アミノ、アミド、アセタール、カルバミル、カルボシクロ、シアノ、エステル、エーテル、ハロゲン、ヘテロシクロ、ヒドロキシル、ケト、ケタール、ホスホロ（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）、ニトロ及びチオ。
用語「ヘテロ原子」は、炭素及び水素以外の原子を指す。
本明細書で使用される用語「ハロゲン」又は「ハロ」は、単独で又は他の基の一部として、塩素、臭素、フッ素又はヨウ素を指す。
本明細書で使用される用語「より大きい安定性」は、非修飾ｄｓＲＮＡ又は低分子量ポリアルキルオキシで修飾されたＭｄｓＲＮＡと比較するときの本願の化合物を指す。いくつかの実施形態では、より大きい安定性は、農業分野、植物組織内、植物の葉上等における持続性の増加を意味する。いくつかの実施形態では、より大きい安定性は、インビボ半減期の増加を意味する。いくつかの実施形態では、より大きい安定性は、生理学的病態に対する耐性増強を意味する。他の実施形態では、より大きい安定性は、ヌクレアーゼに対する耐性増強を意味する。
本明細書で使用されるとき、「許容可能な塩」は、健全な判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答等を伴わず、ヒト、低級動物、及び植物の組織と接触状態での使用に好適であり、合理的なリスク・ベネフィット比に見合う、好適な無機酸及び有機酸並びに無機塩基及び有機塩基から誘導される塩を指す。
本開示の化合物の塩は、従来の化学的方法によって、塩基性又は酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸又は塩基形態を、水中若しくは有機溶媒中、又はその２つの混合物中の化学量論量の適切な塩基又は酸と反応させることによって調製することができる。
本明細書で使用される用語「拡張可能な」は、標的化学物質の量を商業的に重要な量で生成するプロセスの性能を指す。例えば、本願のプロセスは、数百ミリグラムスケールでの化合物の生成を可能にし得る。いくつかの例では、本願のプロセスは、グラムスケールでの化合物の生成を可能にし得る。いくつかの例では、本願のプロセスは、キログラムスケールでの生成を可能にし得る。いくつかの例では、本願のプロセスは、１，０００キログラムスケールでの生成を可能にし得る。
本明細書で使用される用語「活性化剤（ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ）」又は「活性化剤（ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）」は、標的部分の求核性又は求電子性を増加させる化合物を指す。電子密度の変化は、活性化基からのイオン又は共有結合の結果であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される活性化剤は、標的カルボニルの求電子性を増加させる。活性化剤の非限定的な例としては、ルイス酸、陽子、及びカップリング試薬が挙げられる。カップリング試薬の非限定的な例としては、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリピロリジノホスホ二ウムヘキサフルオロリン酸塩（ＰｙＢＯＰ）、（２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、ヘキサフルオロホスフェートベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）、Ｎ，Ｎ’－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、及び１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート、ヘキサフルオロホスフェートアザベンゾトリアゾールテトラメチルウロニウム（ＨＡＴＵ）が挙げられる。
本明細書で使用される用語「好適な脱離基」は、異方性結合切断において一対の電子と脱離する分子断片を指す。脱離基は、活性化のエネルギーを低下させることによって反応を促進することに役立つ。好適な脱離基の非限定的な例としては、ハロゲン化物、トシル化又はメシル化アルコール、擬ハロゲン化物、アミン、ヘテロ環等が挙げられる。特定の実施形態では、好適な脱離基は、イミダゾールである。
本明細書で使用される用語「無水溶媒」は、溶媒の水含量を低減するため、物理的又は化学的に処理されている溶媒を指す。無水溶媒は、約１重量％未満の水、約０．３重量％未満の水、又は約０．１重量％未満の水を含有してもよい。
組成物
ＭｄｓＲＮＡは、全てのリボース環の約３０％以下が２’－ＯＨ位において高分子量ポリアルキルオキシポリマーで化学修飾されている、及び場合により、全てのヌクレオチドの少なくとも約２％がＬＭＷ修飾部分で化学修飾されているように記載する。ＭｄｓＲＮＡは、配列特異的方法で、例えばＲＮＡ干渉又はアンチセンス機構を介して、遺伝子発現を阻害する能力がある。
したがって、ある態様では、本明細書で提供されるのは、転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
Figure 2024532413000003
 又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ１は、
Figure 2024532413000004
 から選択される（式中、ｙは１～８の整数であり、ｘは１２～１０００の整数であり、ａは１２～１０００の整数であり、ｂは１２～１０００の整数であり、ｃは１２～１０００の整数である））を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物である。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
Figure 2024532413000005
 又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ１は、
Figure 2024532413000006
 から選択される（式中、ｙは１～８の整数であり、ｘは１２～１０００の整数であり、ａは１２～１０００の整数であり、ｂは１２～１０００の整数であり、ｃは１２～１０００の整数である））を含み；且つ
場合により、全てのヌクレオチドの少なくとも約２％が、独立して式（ＩＩＩ）：
Figure 2024532413000007
 のＬＭＷ修飾ヌクレオチド又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ２５アルキル、Ｃ１～Ｃ２５アルケニル、Ｃ１～Ｃ２５アルキニル、Ｃ５～Ｃ１２アリール又はＣ５～Ｃ１２ヘテロアリールから選択され、ここでＲ２は、場合により、ハロ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、又はＣ１～Ｃ１２アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物である。
組成物のこの態様の実施形態は、以下に従う。
ある実施形態では、Ｒ１は、以下から選択される。
Figure 2024532413000008
別の実施形態では、ｘは、８０～１０００の整数である。
別の実施形態では、ｘは、５０～９００の整数である。
別の実施形態では、ａは、８０～１０００の整数である。
更に別の実施形態では、ｂは、８０～１０００の整数である。
さらなる実施形態では、ｃは、８０～１０００の整数である。
ある実施形態では、Ｒ１は、５，０００～１５，０００Ｄａの分子量を有する。
ある実施形態では、Ｒ１は、５，０００～４０，０００Ｄａの分子量を有する。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポロクサマー４０７、３３８、１８８、１８４、４０１又はそれらの任意の組み合わせである。
ある実施形態では、ａは１０１であり、ｂは５６であり、ｃは１０１である。
ある実施形態では、Ｒ１は、約２～約３０の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。別の実施形態では、Ｒ１は、約１５～約２７の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。
ある実施形態では、Ｒ２は、Ｎ－メチルアントラノイル（ＮＭＡ）、Ｎ－ベンジルアントラノイル（ＮＢＡ）、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、オクタノイル、ラウロイル、リノレイル、オレイル、ニコチノイル又はベンゾイルである。
ある実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2024532413000009
 であり、Ｒ２は、Ｎ－メチルアントラノイルである。
ある実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2024532413000010
 であり、Ｒ２は、ラウロイルである。
ある実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2024532413000011
 であり、Ｒ２は、リノレイルである。
ある実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2024532413000012
 であり、Ｒ２は、オレイルである。
実施形態では、式（Ｉ）対式（ＩＩＩ）対非修飾ヌクレオチドの比は、約３：５：２；３：６．５：０．５；１：７：２；．０５：９：０．５；１．３：４：５．７；０．０１：４：５．９９；０．０６：０：９６．４である。
実施形態では、全てのヌクレオチドの約２％～約５０％は、ＬＭＷ部分で修飾される。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、標的昆虫内での発現されたＲＮＡに相補的な配列を含む。例えば、本開示の産物及び方法において有用な有効な配列又は標的遺伝子は、標的遺伝子の発現を阻害し、昆虫の中腸に作用し、死亡率を増加させ、成長阻害を誘導し、又は加齢発達を停止させることになる。
ある実施形態では、標的昆虫は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、マイマイガ、ヒアリ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ ｉｎｖｉｃｔａ）、ツマジロクサヨトウ、コロラドハムシ、アブラナノミハムシ（Ｃａｎｏｌａ ｆｌｅａ ｂｅｅｔｌｅ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）、又は西洋トウモロコシルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ）である。別の実施形態では、標的昆虫は、エンドウヒゲナガアブラムシ（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ）、ダイズアブラムシ、ピエゾドルス・ギルディニ（Ｐｉｅｚｏｄｏｒｕｓ ｇｕｉｌｄｉｎｉｉ）である。別の実施形態では、標的は、バロアダニ（Ｖｅｒｒｏａ ｍｉｔｅ）等のダニ類である。別の実施形態では、標的は、オオホナガアオゲイトウ等の雑草である。更に別の実施形態では、標的は、オオホナガアオゲイトウ、フサリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）（ジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ））又はボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）等の真菌である。したがって、本開示の組成物中で使用されるＭｄｓＲＮＡは、これらの昆虫における標的遺伝子又は領域の発現を阻害し得るヌクレオチド配列となる。例えば、ＭｄｓＲＮＡは、非限定的に、ＡＣｈＥ２、Ｐ４５０、Ｐ４５０ ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、ＤＯＵＸ、タンパク質ＭＥＳＨ転写物変異体Ｘ１、毒液カルボキシルエステラーゼ（ｃａｒｂｏｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ）－６及びＶＰＡＳＥ－Ｅ等の、コナガにおける標的領域に相補的な配列を含む。別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、非限定的に、Ｐ４５０ ＣＹＰ９Ａ５８、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、Ｄｒｅｄｄ、ＶＰＡＳＥ、タンパク質ＭＥＳＨ転写物変異体Ｘ１、Ｐ４５０ ＣＹＰ３２１Ａ８、Ｐ４５０ ＣＹＰ６Ｂ２－ｌｉｋｅ等の、ツマジロクサヨトウにおける標的領域に相補的な配列を含む。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、非限定的にＳＮＦ７等の西洋トウモロコシルートワームにおける標的領域に相補的な配列を含む。
ある実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、配列番号１～２６９の１つ及びその逆相補鎖から選択される配列を含む。特定の実施形態では、配列は、配列番号１３又は２４８～２５１の１つ及びその逆相補鎖から選択される。ある実施形態では、標的昆虫は、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）であり、配列番号１～２６９のいずれか１つを用いて標的化され得る。ある実施形態では、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）は、配列番号１３又は２４８～２５１のいずれか１つを用いて標的化される。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、転写後修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
Figure 2024532413000013
 又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ１は、約４００Ｄａ～約１５ｋＤａの分子量を有する線状又は分岐ポリアルキルオキシである）を含み、
場合により、全てのヌクレオチドの少なくとも約２％が、独立して式（ＩＩＩ）：
Figure 2024532413000014
 のＬＭＷ修飾ヌクレオチド又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；且つ
Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ２５アルキル、Ｃ１～Ｃ２５アルケニル、Ｃ１～Ｃ２５アルキニル、Ｃ５～Ｃ１２アリール又はＣ５～Ｃ１２ヘテロアリールから選択され、ここでＲ２は、場合により、ハロ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、又はＣ１～Ｃ１２アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物である。
組成物のこの態様の実施形態は、以下に従う。
ある実施形態では、Ｒ１は、約１ｋＤａ～約１５ｋＤａの分子量を有する線状又は分岐のポリアルキルオキシ又はポロクサマーである。
別の実施形態では、Ｒ１は、約５ｋＤａ～約１５ｋＤａの分子量を有する線状又は分岐のポリアルキルオキシ又はポロクサマーである。
別の実施形態では、Ｒ１は、約５ｋＤａ～約１０ｋＤａの分子量を有する線状又は分岐のポリアルキルオキシ又はポロクサマーである。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポリエチレングリコールポリマーである。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポロクサマーである。ある実施形態では、ポロクサマーは、ポリ（エチレングリコール）－ブロック－ポリ（プロピレングリコール）－ブロック－ポリ（エチレングリコール）を含むトリブロックポリマーである。
ある実施形態では、Ｒ１は、約２～約３０の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。別の実施形態では、Ｒ１は、約１５～約２７の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。
ある実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ２５アルキルである。ある実施形態では、Ｃ１～Ｃ２５アルキルは、ハロ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、又はＣ１～Ｃ１２アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換される。ある実施形態では、Ｃ１～Ｃ２５アルキルは、ハロ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、又はＣ１～Ｃ１２アルコキシから選択される１つ、２つ、又は３つの置換基で置換される。
ある実施形態では、Ｒ２は、Ｎ－メチルアントラノイル（ＮＭＡ）、Ｎ－ベンジルアントラノイル（ＮＢＡ）、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、オクタノイル、ラウロイル、リノレイル、オレイル、ニコチノイル又はベンゾイルである。
実施形態では、式（Ｉ）対式（ＩＩＩ）対非修飾ヌクレオチドの比は、約３：５：２；３：６．５：０．５；１：７：２；．０５：９：０．５；１．３：４：５．７；０．０１：４：５．９９；０．０６：０：９６．４である。
実施形態では、全てのヌクレオチドの約２％～約５０％は、ＬＭＷ部分で修飾される。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、本明細書で考察するとおり、標的の昆虫、雑草、真菌又はダニ類における発現されたＲＮＡに相補的な配列、本開示の配列表及び例を含む。
ある実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2024532413000015
 （式中、ｙは１～８の整数であり、ｘは１２～１０００の整数であり、ａは１２～１０００の整数であり、ｂは１２～１０００の整数であり、ｃは１２～１０００の整数である）から選択される。
ある実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2024532413000016
 から選択され、ここで全てのヌクレオチドの少なくとも２％は、独立して、上で定義される式（ＩＩＩ）のＬＭＷ修飾ヌクレオチドを含む。
別の実施形態では、ｘは、８０～１０００の整数である。
別の実施形態では、ｘは、５０～９００の整数である。
別の実施形態では、ａは、８０～１０００の整数である。
更に別の実施形態では、ｂは、８０～１０００の整数である。
さらなる実施形態では、ｃは、８０～１０００の整数である。
ある実施形態では、Ｒ１は、５，０００～１５，０００Ｄａの分子量を有する。
ある実施形態では、Ｒ１は、５，０００～４０，０００Ｄａの分子量を有する。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポロクサマー４０７、３３８、１８８、１８４、４０１、又はそれらの任意の組み合わせである。
ある実施形態では、ａは１０１であり、ｂは５６であり、ｃは１０１である。
ある実施形態では、Ｒ１は、約２～約３０の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。別の実施形態では、Ｒ１は、約１５～約２７の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。
ある実施形態では、Ｒ２は、Ｎ－メチルアントラノイル（ＮＭＡ）、Ｎ－ベンジルアントラノイル（ＮＢＡ）、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、オクタノイル、ラウロイル、リノレイル、オレイル、ニコチノイル又はベンゾイルである。
実施形態では、式（Ｉ）対式（ＩＩＩ）対非修飾ヌクレオチドの比は、約３：５：２；３：６．５：０．５；１：７：２；．０５：９：０．５；１．３：４：５．７；０．０１：４：５．９９；０．０６：０：９６．４である。
実施形態では、全てのヌクレオチドの約２％～約５０％は、ＬＭＷ部分で修飾される。
ある実施形態では、ＭｄｓＲＮＡの配列は、１３又は２４８～２５１の１つから選択される。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、標的の昆虫、雑草、真菌又はダニ類における又は本明細書で考察される標的のいずれかにおける発現されたＲＮＡに相補的な配列、並びに本開示の配列表及び例を含む。
ある実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024532413000017
 又はその許容可能な塩であり、ここで各変数は上で定義される。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024532413000018
 又はその許容可能な塩であり、ここで各変数は上で定義される。
更に別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024532413000019
 又はその許容可能な塩であり、ここで各変数は上で定義される。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024532413000020
 又はその許容可能な塩であり、ここで各変数は上で定義される。別の実施形態では、末端の－Ｈは、－ＣＨ３で置換され得る。
さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024532413000021
 又はその許容可能な塩であり、ここで各変数は上で定義される。別の実施形態では、末端の－Ｈは、－ＣＨ３で置換され得る。
別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024532413000022
 又はその許容可能な塩であり、ここで各変数は上で定義される。別の実施形態では、末端の－Ｈは、－ＣＨ３で置換され得る。
さらなる実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、
Figure 2024532413000023
 又はその許容可能な塩であり、ここで各変数は上で定義される。別の実施形態では、末端の－Ｈは、－ＣＨ３で置換され得る。
いくつかの実施形態では、式Ｉの各Ｂは同じである。
別の実施形態では、式Ｉの各Ｂは異なる。
いくつかの実施形態では、式Ｉの各Ｒ１は同じである。
いくつかの実施形態では、式Ｉの各Ｒ１は異なる。
いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡにおける塩基対は、少なくとも約４０、少なくとも約５０、少なくとも約６０、少なくとも約７０、少なくとも約８０、少なくとも約９０、少なくとも約１００、少なくとも約２００、少なくとも約３５０、少なくとも約４００、少なくとも約５００、少なくとも約６００、少なくとも約７００、少なくとも約８００、少なくとも約９００、又は少なくとも約１，０００の長さである。ある実施形態では、ＭｄｓＲＮＡにおける塩基対は、約４０塩基対～約１，０００塩基対である。別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、約５０塩基対～約９００塩基対である。ある実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、約７０塩基対～約８００塩基対である。別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、約８０塩基対～約７００塩基対である。ある実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、約９０塩基対～約６００塩基対である。ある実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、約１００ヌクレオチド～約５００ヌクレオチドである。別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、約２００塩基対～約４００塩基対である。
本開示の産物及び方法において有用な標的配列を選択し、最低のグアニン－シトシン（ＧＣ）含量、例えば、標的の昆虫、真菌又は雑草のＧＣ含量の約６０％以下及び好ましくは約４０％以下を標的とすることで、穏やかな反応条件下で最高レベルの修飾が可能になる。別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、グアニン－シトシン含量が低い配列を標的にする。ある実施形態では、グアニン－シトシン含量は、約５０％以下である。ある実施形態では、グアニン－シトシン含量は、約４０％以下である。ある実施形態では、グアニン－シトシン含量は、約３０％～約４０％である。ある実施形態では、グアニン－シトシン含量は、約３０％、約３５％、約４０％、約５０％又は約５５％である。ヌクレオチドの修飾の程度は、ｄｓＲＮＡのＧＣ含量に依存する。修飾の程度（例えば、修飾可能なヌクレオチドの百分率）は、約２％～約９０％の範囲であり得、ここで約２％～約３０％は、高分子量ポリアルキルオキシポリマーであり得、約２％～約９０％は、低分子量充填剤部分であり得る。
理論に束縛されるものではないが、例えば、６０℃未満の温度で、又はセンス及びアンチセンス鎖を解離させることができる溶媒若しくは共溶媒の低い濃度で、例えば７０％未満のＤＭＳＯ濃度で、又は６０℃未満の温度及び７０％未満のＤＭＳＯで、ｄｓＲＮＡにおけるセンス及びアンチセンス鎖が部分的にしか解離されない（即ち、部分的にしかジップされない）ような反応条件である場合、ｄｓＲＮＡの完全に対合したストレッチの最初又は末端から１０未満の隣接ヌクレオチドに位置づけられたヌクレオチドにおけるリボースは、優先的に修飾することができ、即ち、１０を超える隣接ヌクレオチド離れて位置づけられたヌクレオチドにおけるリボースより広い範囲まで修飾することができると考えられる。例えば、そのような部分的にジップしない反応条件下で、３００ｂｐのｄｓＲＮＡ中の１～１０位及び２９０～３００位のヌクレオチド中のリボースは、１１～２８９位のリボースより広い範囲まで修飾することができる。
転写後修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）化合物は、その環境及び宿主において、ヌクレアーゼによる分解を有意により受けにくい。ＭｄｓＲＮＡは、ＲＮＡｉ機構によって、標的宿主内に存在するポリヌクレオチドの発現を下方調節する。ＭｄｓＲＮＡ化合物は、その２’ＯＨ基のＨ原子の一部が、異なる化学的部分で、例えば、ベンゾイル、ラウロイル、オレイル、リノレイル、Ｎ－メチルアントラノイル、ニコチノイル、又はフロイルで置換されているＵｄｓＲＮＡからなる（米国特許第１０，１３１，９１１号明細書）。これらの化学的部分は、一般に非毒性であり、いずれにしてもその環境下で最終分解を受けやすく、それにより負の環境影響が低減される。ＭｄｓＲＮＡは、ＵｄｓＲＮＡと同様に非毒性であると予想される。
いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡセンス鎖は、アンチセンス鎖に接続される。センス鎖は、ハイブリダイズしないヘアピン又はループ配列を介してアンチセンス鎖に接続され得る。ループ配列は、約４～約１００又はそれを超えるヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態では、ループは、１５０以上のヌクレオチド長である（Ｈａｕｇｅ ｅｔ ａｌ．２００９）。いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、非限定的に：プロモーター配列、５’配列、３’配列、ターミネーター配列、及びポリＡ配列を含む１つ以上の追加の配列を更に含む。
プロモーターは、遺伝子の転写を開始するＤＮＡの領域（配列）である。プロモーターは、細菌プロモーター、古細菌プロモーター、真核生物プロモーター、又はＰｏｌ Ｉ、Ｐｏｌ ＩＩ若しくはＰｏｌｌ ＩＩＩプロモーターであり得る。いくつかの実施形態では、細菌プロモーターは、転写開始部位から約３５単位上流に配列５’－ＴＴＧＡＣＡ－３’を含み、転写開始部位から約１０ｂｐ上流に配列５’－ＴＡＴＡＡＴ－３’を含む。異なる発現システムとの使用に好適な他のプロモーターは、当該技術分野で周知である。
本開示の特定の実施形態は、より高分子のポリアルキルオキシポリマーがサブユニット間結合の２’－ＯＨ位に共有結合されることを必要とする。本開示の好ましい実施形態は、低い百分率（例えば、約３０％未満）の全サブユニットがそのようなポリマーで置換されることを必要とする。いくつかの実施形態では、そのようなポリマーで置換されるべき全サブユニットの百分率は、約１％である。いくつかの実施形態では、置換サブユニットの百分率は、約１％～約３０％である。他の実施形態では、置換サブユニットの百分率は、約１％～約５％である。さらに他の実施形態では、置換サブユニットの百分率は、約１％未満である。別の実施形態では、置換サブユニットの百分率は、約０．１％～約１％である。本開示の化合物は、２’－ＯＨ位により低重量のポリアルキルオキシポリマーを有する化合物に対して等価な又は優れた特性を示す。
いかなる理論にも束縛されるものではないが、本開示の化合物は、本化合物がより十分な溶解度、増強されたバイオアベイラビリティを有し、ヌクレアーゼに対して耐性であることから、より低い重量のポリアルキルオキシポリマー化合物を有する化合物に対して等価な又は優れた特性を示す。意外にも、ＰＥＧ及び類似基が膜の通過を阻止することが既知である一方で、本化合物は、細胞膜を容易に通過する。また、意外にも、本開示のポリアルキルオキシポリマーは、低い百分率レベル（例えば、約１％～約３０％）であっても、有意により高い百分率のＰＥＧ又はＰＥＧ型置換を有する他の化合物に有利な安定性特性を付与する（例えば、本化合物は、約１％～約３０％でエキソヌクレアーゼに対して耐性である）。
いかなる理論にも束縛されるものではないが、本開示の化合物（即ち、高分子量ポリアルキルオキシポリマーを有する化合物）は、カルボン酸エステラーゼによる加水分解に対して耐性である。これは、ポリアルキルオキシポリマーがエステラーゼの触媒ポケットに対して立体的に大きすぎることに起因し得る。ポリアルキルオキシポリマーが大きくなると、非修飾ヌクレオチドの２’ＯＨ基と更に水素結合し、それ故、本明細書に記載されるとおり、たとえ低レベルの修飾であっても、立体障害を更にもたらすことがある。最終的に、本明細書に記載されるとおり、ＭｄｓＲＮＡ鎖の修飾が、分子の立体障害に起因し、ＭｄｓＲＮＡ鎖の末端で優先的に生じることがある。したがって、ＭｄｓＲＮＡ鎖は、エキソヌクレアーゼに対して耐性である一方で、エンドヌクレアーゼであっても利用可能であり、本開示の化合物がＲＮＡｉプロセスにより容易に移入することを可能にする。
標的の昆虫、真菌、雑草又はダニ類についての組成物、組成物を作製する方法、ヌクレオチド配列及び使用に関する、本開示のこのセクション及びその他のセクションにおける実施形態及び態様は、本明細書中で本開示に包含されることが意図される。
選択された配列
ある実施形態では、配列は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）アセチルコリンエステラーゼ２ ｍＲＮＡ、ジェンバンクＡＹ０６１９７５．１ヌクレオチド＃ｓ：５１２～８１１である；
Figure 2024532413000024
別の実施形態では、配列は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）アセチルコリンエステラーゼ１ ｍＲＮＡ、ジェンバンク：ＡＹ９７０２９３．１ヌクレオチド＃ｓ：８８９～１１８８である；
Figure 2024532413000025
別の実施形態では、配列は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チロシンヒドロキシラーゼｍＲＮＡ、ジェンバンク：ＪＮ４１０８２９．１ヌクレオチド＃ｓ：３０１～６００である；
Figure 2024532413000026
別の実施形態では、配列は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）インテグリンベータ１ ｍＲＮＡ、ジェンバンク：ＧＱ１７８２９０．１ヌクレオチド＃ｓ：５３１～８３０である；
Figure 2024532413000027
別の実施形態では、配列は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ－ｌｉｋｅ ｍＲＮＡ（ＸＭ＿０１１５５５９０４．１）ヌクレオチド＃ｓ：３２１～６２０である；
Figure 2024532413000028
別の実施形態では、配列は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）ペプチドグリカン認識タンパク質ｍＲＮＡ、ジェンバンク：ＥＵ３９９２４０．１ヌクレオチド＃ｓ：３１～３３０である；
Figure 2024532413000029
別の実施形態では、配列は、空胞性ＡＴＰ合成酵素サブユニットＥにおけるコナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）ｍＲＮＡ、ジェンバンク：ＡＢ１８９０３２．１（ＮＭ＿００１３０５５３２．１と同一）ヌクレオチド＃ｓ：６４～３６３である；
Figure 2024532413000030
別の実施形態では、配列は、西洋トウモロコシルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１１４３３７３０１）、ｍＲＮＡ配列 ＩＤ：ＸＭ＿０２８２８７７１０．１である；
Figure 2024532413000031
別の実施形態では、配列は、エンドウヒゲナガアブラムシ（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ ジェンバンク＃：ＸＭ＿００８１８５０７８．２ヌクレオチド＃ｓ：５４０～７２４である；
Figure 2024532413000032
別の実施形態では、配列は、ソレノプシス・インビクタ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ ｉｎｖｉｃｔａ）の（ＲＩＦＡ）アクチン筋肉（ＬＯＣ１０５２０５８１６、ジェンバンク：ＸＭ＿０１１１７５３３７．１ヌクレオチド＃４６５～７６３である；
Figure 2024532413000033
更に別の実施形態では、配列は、ジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ）単離ＮＸ３チトクロムＰ４５０ ５１Ｂ遺伝子 ジェンバンク：ＦＪ２１６４０２．１ヌクレオチド位置８０４～１０２３である；
Figure 2024532413000034
別の実施形態では、配列は、フサリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）ＰＨ－１チトクロムＰ４５０ ５１ ＮＣＢＩ参照配列：ＸＭ＿０１１３２７０３８．１ヌクレオチド位置１６３～４００である；
Figure 2024532413000035
イオン溶媒和による高分子量ポリアルキルオキシポリマーの調製方法
別の態様では、本明細書で提供されるのは、転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
Figure 2024532413000036
 又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ１は、
Figure 2024532413000037
 から選択される（式中、ｙは１～８の整数であり、ｘは１２～１０００の整数であり、ａは１２～１０００の整数であり、ｂは１２～１０００の整数であり、ｃは１２～１０００の整数である））を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物を調製する方法であって、
（ａ）式（ＩＩ）の化合物：
Figure 2024532413000038
 を活性化剤と接触させ、式（ＩＩＡ）の化合物
Figure 2024532413000039
 （式中、Ｘは好適な脱離基である）
を形成することと；
（ｂ）式（ＩＡ）の化合物：
Figure 2024532413000040
 を式（ＩＩＡ）の化合物と接触させ、式（Ｉ）の化合物を形成することと、
を含む方法である。
別の態様では、本明細書で提供されるのは、転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
Figure 2024532413000041
 又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ１は、
Figure 2024532413000042
 から選択される（式中、ｙは１～８の整数であり、ｘは１２～１０００の整数であり、ａは１２～１０００の整数であり、ｂは１２～１０００の整数であり、ｃは１２～１０００の整数である））を含み；且つ
場合により、全てのヌクレオチドの少なくとも約２％が、独立して式（ＩＩＩ）：
Figure 2024532413000043
 のＬＭＷ修飾ヌクレオチド又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ２５アルキル、Ｃ１～Ｃ２５アルケニル、Ｃ１～Ｃ２５アルキニル、Ｃ５～Ｃ１２アリール又はＣ５～Ｃ１２ヘテロアリールから選択され、ここでＲ２は、場合により、ハロ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、又はＣ１～Ｃ１２アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物を調製する方法であって、
（ａ）式（ＩＩ）の化合物：
Figure 2024532413000044
 を活性化剤と接触させ、式（ＩＩＡ）の化合物：
Figure 2024532413000045
 （式中、Ｘは好適な脱離基である）
を形成することと；
（ｂ）式（ＩＡ）の化合物：
Figure 2024532413000046
 を式（ＩＩＡ）の化合物と接触させ、式（Ｉ）の化合物を形成することと；
（ｃ）場合により、式（Ｖ）の化合物：
Figure 2024532413000047
 を活性化剤と接触させ、式（ＶＡ）の化合物：
Figure 2024532413000048
 （式中、Ｘは好適な脱離基である）
を形成することと；
（ｄ）場合により、式（ＩＡ）の化合物：
Figure 2024532413000049
 を式（ＶＡ）の化合物と接触させ、式（ＩＩＩ）の化合物を形成することと、
を含む方法である。
ある実施形態では、（ａ）及び（ｂ）は、無水溶媒中で実施される。
ある実施形態では、（ｃ）及び（ｄ）は、無水溶媒中で実施される。
ある実施形態では、無水溶媒は、ＤＭＳＯ又はＤＣＭから選択される。
別の実施形態では、（ａ）及び（ｂ）は、精製を介在させずに実施される。
別の実施形態では、（ｃ）及び（ｄ）は、精製を介在させずに実施される。
更に別の実施形態では、（ａ）及び（ｂ）の間に精製ステップが存在する。
別の実施形態では、（ｃ）及び（ｄ）の間に精製ステップが存在する。
ある実施形態では、イオン性溶媒が（ａ）後に添加される。
ある実施形態では、イオン性溶媒が（ｃ）後に添加される。
ある実施形態では、イオン性溶媒は、ベンジルトリブチル塩化アンモニウム又はベンジルトリメチル塩化アンモニウムから選択される。
別の実施形態では、活性化剤は、カルボニルジイミダゾールである。
更に別の実施形態では、好適な脱離基は、
Figure 2024532413000050
 （式中、
Figure 2024532413000051
 は、式（ＩＩＡ）のカルボニルへの付着の共有結合点を表す）
である。
更に別の実施形態では、好適な脱離基は、
Figure 2024532413000052
 （式中、
Figure 2024532413000053
 は、式（ＶＡ）のカルボニルへの付着の共有結合点を表す）
である。
さらなる実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり１０未満の当量の比の式（ＩＩＡ）の化合物を有する。
さらなる実施形態では、（ｄ）は、ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり約２当量～約５０当量の比の式（ＶＡ）の化合物を有する。
別の実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり２未満の当量の比の式（ＩＩＡ）の化合物を有する。
別の実施形態では、（ｄ）は、ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり約４当量～約２５当量の比の式（ＶＡ）の化合物を有する。
別の実施形態では、式（ＩＩ）の化合物は、無水物である。
別の実施形態では、式（Ｖ）の化合物は、無水物である。
更に別の実施形態では、Ｒ１は、
Figure 2024532413000054
 から選択される。
別の実施形態では、ｘは、８０～１０００の整数である。
別の実施形態では、ｘは、５０～９００の整数である。
別の実施形態では、ａは、１８０～１０００の整数である。
更に別の実施形態では、ｂは、８０～１０００の整数である。
さらなる実施形態では、ｃは、８０～１０００の整数である。
ある実施形態では、Ｒ１は、５，０００～１０，０００Ｄａの分子量を有する。
ある実施形態では、Ｒ１は、５，０００～４０，０００Ｄａの分子量を有する。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。
ある実施形態では、Ｒ１は、ポロクサマー４０７、３３８、１８８、１８４、４０１、又はそれらの任意の組み合わせである。
ある実施形態では、ａは１０１であり、ｂは５６であり、ｃは１０１である。
ある実施形態では、Ｒ１は、約２～約３０の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。別の実施形態では、Ｒ１は、約８～約２７の範囲のＨＬＢを伴うＨＭＷポリマーである。
ある実施形態では、ステップ（ｃ）及び（ｄ）は、存在する。
ある実施形態では、ステップ（ｂ）及び（ｄ）は、経時的に実施される。
ある実施形態では、ステップ（ｂ）及び（ｄ）は、同時に実施される。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、本開示において詳細に考察したとおり、非限定的に、標的（昆虫、真菌、雑草又はダニ類）、標的配列及び標的領域等の、標的の昆虫、真菌、雑草又はダニ類における発現されたＲＮＡに相補的な配列を含む。
別の実施形態では、Ｒ２は、Ｎ－メチルアントラノイル（ＮＭＡ）、Ｎ－ベンジルアントラノイル（ＮＢＡ）、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、オクタノイル、ラウロイル、リノレイル、オレイル、ニコチノイル又はベンゾイルから選択される。
標的の昆虫、真菌、雑草又はダニ類についての組成物、組成物を作製する方法、ヌクレオチド配列及び使用に関する、本開示の他のセクションにおける実施形態は、本明細書で本開示に包含されることが意図される。
いくつかの実施形態では、開示された調製方法は、コスト及びスケーラビリティの両方において、以前の方法より優れている。以前の合成方法では、過剰な溶媒希釈の必要性を低減するため、水又は別の好適な極性プロトン性溶媒が必要であった。しかし、これは、必要なポリアルキルオキシポリマー無水物の有意な分解を引き起こした。以前の方法では、時として、ｄｓＲＮＡの１ｂｐ当たり２００相当の当量の修飾基が使用された。イオン性溶媒の添加は、使用される溶媒の量を低減し、出発物質の分解を低減し、所望産物の効率的合成を可能にするといった優れた想定外の利益を提供している。方法のいくつかの実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡの１ｂｐ当たり０．０５未満の当量の比の式（ＩＩＡ）の化合物（例えば、ポリアルキルオキシポリマー）を有する。方法の別の実施形態では、（ｂ）は、０．１未満の当量の比の式（ＩＩＡ）の化合物を有する。方法の特定の実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡの１ｂｐ当たり約０．２、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、又は約１．０の当量の比の式（ＩＩＡ）の化合物を有する。
いかなる特定の理論にも束縛されたくないが、イオン性溶媒は、相間移動触媒として作用していない。むしろ、イオン性溶媒は、意外にも優れた溶媒和物として作用している。イオン性溶媒はまた、分子上の電荷をシールドすることによって、ｄｓＲＮＡの「アンジップ」を補助することに役立つ。そのようなイオン性溶媒のこのような使用は、先行技術において報告されていない。
したがって、ある実施形態では、イオン性溶媒は、一本鎖ＲＮＡ上の得られる電荷をシールドすることによって、ｄｓＲＮＡの解離を改善する。
イオン溶媒和による低分子量修飾の調製方法
別の態様では、本明細書で提供されるのは、転写後修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（ＶＩ）：
Figure 2024532413000055
 又はその許容可能な塩（式中、
Ｂは、核酸塩基であり；
Ｒ３は、アミノ酸、脂肪酸、アルキル；置換アルキル；アルケニル；置換アルケニル；アルキニル；置換アルキニル；アリール；置換アリール；Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、若しくはＣ１～Ｃ１０アルキニル（アルキル及びアルケニルは、線状、分岐又は環状であり得る）；水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；ブチル；イソブチル；ｔｅｒｔ－ブチル；ペンチル；ヘキシル；シクロヘキシル；ヘプチル；オクチル；ノニル；デシル；ビニル；アリル；エチニル；ベンジル；シンナミル；Ｃ６～Ｃ１４アリール；Ｃ６～Ｃ１４置換アリール；ヘテロシクリル；Ｃ５～Ｃ１４ヘテロシクリル；フェニル；モノ若しくはジ置換フェニル（置換基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、メチルスルホニル、及びトリフルオロメチルから選択される）；２－ニトロフェニル；４－ニトロフェニル；２；４－ジニトロフェニル；２－トリフルオロメチルフェニル；４－トリフルオロメチルフェニル；スチリル；Ｃ８～Ｃ１６置換スチリル；２－アミノフェニル；モノ若しくはジ置換２－アミノフェニル（置換基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、メチルスルホニル、及びトリフルオロメチルから選択される）；Ｎ－アルキル－２－アミノフェニル若しくはＮ－アリール－２－アミノフェニル（アルキルは式－ＣｍＨ２ｍ＋１を有し（式中、ｍは１２以下の整数である）、アリールは芳香族部分である）；２－アミノ－３－メチル－フェニル；２－アミノ－５－クロロフェニル；２－メチル－５－クロロフェニル；Ｎ－メチル－２－アミノフェニル；Ｎ－エチル－２－アミノフェニル；Ｎ－プロピル－２－アミノフェニル；Ｎ－ブチル－２－アミノフェニル；Ｎ－ペンチル－２－アミノフェニル；Ｎ－メチル－２－アミノ－４－ニトロフェニル；２－メチル－３－フリル；２－メチルニコチル（ｍｅｔｈｙｌｎｉｃｏｔｙｌ）若しくはＮ－トリフルオロメチル－２－アミノフェニル；シラニル；置換シラニル；Ｃ１～Ｃ１０アルキルシラニル；Ｃ３～Ｃ１２トリアルキルシラニル；Ｃ２～Ｃ１２アルコキシアルキル；Ｃ２～Ｃ１２アルコキシアルケニル；Ｃ２～Ｃ１２アルキルチオアルキル；アルキルスルホニル；Ｃ１～Ｃ１０アルキルスルホニル；Ｃ１～Ｃ１０ハロアルキル；Ｃ１～Ｃ１０ハロアルケニル若しくはＣ１～Ｃ１０アミノアルキル；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐＣＨ３、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐＨ、若しくは－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐＣＯＯＲ４（式中、ｐは２～８の整数であり、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アリール、若しくは置換アリールである）；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＣＯＯＨ；－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）６ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＣＯＯＭｅ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＯＭｅ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）６ＯＭｅ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＯＭｅ；－ＣＨ２ＯＣＨ３；－ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３；又は－ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物を調製する方法であって、
（ａ）式（ＩＶ）の化合物：
Figure 2024532413000056
 を活性化剤と接触させ、式（ＩＶＡ）の化合物
Figure 2024532413000057
 （式中、Ｘは好適な脱離基である）
を形成することと；
（ｂ）式（ＶＩＡ）の化合物：
Figure 2024532413000058
 を式（ＩＶＡ）の化合物と接触させ、式（ＶＩ）の化合物を形成することと、
を含む方法である。
ある実施形態では、（ａ）及び（ｂ）は、無水溶媒中で実施される。
ある実施形態では、無水溶媒は、ＤＭＳＯ又はＤＣＭから選択される。
別の実施形態では、（ａ）及び（ｂ）は、精製を介在させずに実施される。
更に別の実施形態では、（ａ）及び（ｂ）の間に精製ステップが存在する。
ある実施形態では、イオン性溶媒は、（ａ）の後に添加される。
ある実施形態では、イオン性溶媒は、ベンジルトリブチル塩化アンモニウム又はベンジルトリメチル塩化アンモニウムから選択される。
別の実施形態では、活性化剤は、カルボニルジイミダゾールである。
更に別の実施形態では、好適な脱離基は、
Figure 2024532413000059
 （式中、
Figure 2024532413000060
 は、式（ＩＶＡ）のカルボニルへの付着の共有結合点を表す）
である。
さらなる実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり約２当量～約５０当量の比の式（ＩＶＡ）の化合物を有する。
別の実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり約４当量～約２５当量の比の式（ＩＶＡ）の化合物を有する。
別の実施形態では、式（ＩＶ）の化合物は、無水物である。
別の実施形態では、Ｒ３は、Ｎ－メチルアントラノイル（ＮＭＡ）、Ｎ－ベンジルアントラノイル（ＮＢＡ）、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、オクタノイル、ラウロイル、リノレイル、オレイル、ニコチノイル又はベンゾイルから選択される。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、本開示において詳細に考察したとおり、非限定的に、標的（昆虫、真菌、雑草又はダニ類）、標的配列及び標的領域等の、標的の昆虫、真菌、雑草又はダニ類における発現されたＲＮＡに相補的な配列を含む。
標的の昆虫、真菌、雑草又はダニ類についての組成物、組成物を作製する方法、ヌクレオチド配列及び使用に関する、本開示の他のセクションにおける実施形態は、本開示に包含されることが意図される。
いくつかの実施形態では、開示された調製方法は、コスト及びスケーラビリティの両方において、以前の方法より優れている。以前の合成方法では、過剰な溶媒希釈の必要性を低減するため、水又は別の好適な極性プロトン性溶媒が必要であった。しかし、これは、必要な無水物の有意な分解を引き起こした。以前の方法では、時として、ｄｓＲＮＡの１ｂｐ当たり２００相当の当量の修飾基が使用された。イオン性溶媒の添加は、使用される溶媒の量を低減し、出発物質の分解を低減し、所望産物の効率的合成を可能にするといった優れた想定外の利益を提供している。方法のいくつかの実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡの１ｂｐ当たり０．０５未満の当量の比の式（ＩＶＡ）の化合物を有する。方法の別の実施形態では、（ｂ）は、０．１未満の当量の比（ｒａｔｉｏｎ）の式（ＩＶＡ）の化合物を有する。方法の特定の実施形態では、（ｂ）は、ｄｓＲＮＡの１ｂｐ当たり０．２の当量の比の式（ＩＶＡ）の化合物を有する。
いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、イオン性溶媒は、相間移動触媒として作用していない。むしろ、イオン性溶媒は、意外にも優れた溶媒和物として作用している。イオン性溶媒はまた、分子上の電荷をシールドすることによって、ｄｓＲＮＡの「アンジップ」を補助することに役立つ。そのようなイオン性溶媒のこのような使用は、先行技術において報告されていない。
低分子量組成物は、米国特許第１０，１３１，９１１号明細書、米国特許第１０，６４０，７６９号明細書、及び米国特許第１１，１７４，４８０号明細書に記載されており、これらの全教示は、参照により組み込まれる。
使用方法
本開示の別の態様では、本明細書で提供されるのは、昆虫における目的のポリヌクレオチドの発現を修飾する方法であって、本開示の組成物を投与することを含む方法である。
いくつかの実施形態では、標的遺伝子は、標的遺伝子の発現の阻害が、動物、真菌若しくは雑草を殺滅し、動物、真菌若しくは雑草の成長若しくは食欲を阻害し、又は、動物、真菌若しくは雑草の繁殖を遅延させるように選択される。標的遺伝子の発現の阻害は、動物、真菌若しくは雑草を制御し、動物、真菌若しくは雑草を殺滅し、動物、真菌若しくは雑草の成長若しくは食欲を阻害し、又は、動物、真菌若しくは雑草の繁殖を遅延させることができる。いくつかの実施形態では、昆虫、真菌又は植物は、農業的に有意なものである。いくつかの実施形態では、農業的に有意な動物、真菌又は植物は、昆虫、真菌又は雑草である。ある実施形態では、発現修飾は、標的昆虫の出生率を低減する。いくつかの実施形態では、記載されるＭｄｓＲＮＡを使用して、農業又は都市環境における動物、真菌若しくは植物を制御し、動物、真菌若しくは植物を殺滅し、動物、真菌若しくは植物の成長、食欲若しくは給餌を阻害し、又は、動物、真菌若しくは植物の繁殖を遅延させることができる。いくつかの実施形態では、植物標的遺伝子は、植物内の遺伝子の発現の阻害が、植物成長、生存能、品質又は収穫高を増大させるように選択される。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、標的昆虫における発現されたＲＮＡに相補的な配列を含む。例えば、本開示の産物及び方法において有用である有効な配列又は標的遺伝子は、標的遺伝子の発現を阻害し、昆虫の中腸に作用し、死亡率を増加させるか若しくは成長阻害を誘導し、又は加齢発達を停止させることになる。
ある実施形態では、標的昆虫は、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、マイマイガ、ヒアリ（Ｓｏｌｅｎｏｐｓｉｓ ｉｎｖｉｃｔａ）、ツマジロクサヨトウ、コロラドハムシ、アブラナノミハムシ（Ｃａｎｏｌａ ｆｌｅａ ｂｅｅｔｌｅ）、ネッタイシマカ（Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ）、又は西洋トウモロコシルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ）である。別の実施形態では、標的昆虫は、エンドウヒゲナガアブラムシ（Ａｃｙｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｐｉｓｕｍ）、ダイズアブラムシ、ピエゾドルス・ギルディニ（Ｐｉｅｚｏｄｏｒｕｓ ｇｕｉｌｄｉｎｉｉ）である。別の実施形態では、標的は、バロアダニ（Ｖｅｒｒｏａ ｍｉｔｅ）等のダニ類である。別の実施形態では、標的は、オオホナガアオゲイトウ等の雑草である。更に別の実施形態では、標的は、オオホナガアオゲイトウ、フサリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）（ジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ））又はボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）等の真菌である。したがって、本開示の組成物中で使用されるＭｄｓＲＮＡは、これらの昆虫における標的遺伝子又は領域の発現を阻害し得るヌクレオチド配列となる。例えば、ＭｄｓＲＮＡは、非限定的に、ＡＣｈＥ２、Ｐ４５０、ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１、ＤＯＵＸ、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、タンパク質ＭＥＳＨ転写物変異体Ｘ１、毒液カルボキシルエステラーゼ（ｃａｒｂｏｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ）－６及びＶＰＡＳＥ－Ｅ等の、コナガにおける標的領域に相補的な配列を含む。別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、非限定的に、Ｐ４５０、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、ＶＰＡＳＥ、Ｄｒｅｄｄ、タンパク質ＭＥＳＨ転写物変異体Ｘ１、Ｐ４５０ ＣＹＰ９Ａ５８、Ｐ４５０ ＣＹＰ３２１Ａ８、Ｐ４５０ ＣＹＰ６Ｂ２－ｌｉｋｅ等の、ツマジロクサヨトウにおける標的領域に相補的な配列を含む。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、非限定的にＳＮＦ７等の西洋トウモロコシルートワームにおける標的領域に相補的な配列を含む。
ある実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、配列番号１～２６９の１つ及びその完全又は不完全な逆相補鎖から選択される配列を含む。特定の実施形態では、配列は、配列番号１３又は２４８～２５１の１つ及びその完全又は不完全な逆相補鎖から選択される。ある実施形態では、標的昆虫は、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）であり、配列番号１～２６９のいずれか１つ及び特定された各配列に対するその完全又は不完全な逆相補鎖を用いて標的化され得る。ある実施形態では、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）は、配列番号１３又は２４８～２５１のいずれか１つを用いて標的化される。
ある実施形態では、標的昆虫は、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）である。ある実施形態では、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）は、ヨトウムシ、コーンイヤーワーム、モンシロチョウ、又はコットンボールワームである。
別の実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）におけるＰ４５０、ＣＹＰ６ＦＢ１ｖ１、ＭＥＳＨ、ＡＣｈＥ２、ＶＰＡＳＥ、ＤＯＭＥＬＥＳＳ、ＤＯＵＸ又は毒液標的領域に相補的な配列を含む。
ある実施形態では、少なくとも約３０％の標的昆虫の制御の処置。ある実施形態では、少なくとも約５０％の標的昆虫の制御の処置。ある実施形態では、処置は、約５０％を超える標的昆虫の制御を示す。ある実施形態では、処置は、約５０％～約９０％の標的昆虫の制御を示す。ある実施形態では、処置は、約５０％～約７５％の標的昆虫の制御を示す。ある実施形態では、処置は、約３０％～約５０％の標的昆虫の制御を示す。
本明細書に記載される組成物及び方法は、例示として提供される以下の例において更に例示され、限定することは意図されない。割合の変動及び示される成分の要素の代替が、当業者に明らかとなり、本開示の実施形態の範囲内であることは理解されるであろう。理論上の態様は、出願人が提示された理論によって束縛されることを求めないことを理解した上で提示される。全ての部分又は量は、特に特定されない限り、体重当たりである。
農業／農薬組成物
いくつかの実施形態では、記載されるＭｄｓＲＮＡを含む組成物が記載される。いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡ含有組成物は、農業用途用に配合される（農薬組成物）。
本明細書で使用されるとき、農薬組成物は、有効量の少なくとも１つのＭｄｓＲＮＡ及び場合により１つ以上の許容可能な担体又は賦形剤を含む。担体及び賦形剤は、安全性に関して適切に評価されており、組成物中に意図的に含められるＭｄｓＲＮＡ以外の物質である。賦形剤は、ａ）製造中のＭｄｓＲＮＡの加工を補助する、ｂ）ＭｄｓＲＮＡの安定性若しくはバイオアベイラビリティを保護し、支持し若しくは向上させる、ｃ）生成物の同定を補助する、及び／又はｄ）貯蔵若しくは使用中のＭｄｓＲＮＡの送達の全般的な安全性、有効性の任意の他の特質を向上させるように作用することができる。許容可能な担体又は賦形剤は、不活性物質であり得又はあり得ない。本明細書で使用されるとき、「有効量」は、意図される結果を生じるためのＭｄｓＲＮＡの量を指す。
担体及び賦形剤としては、非限定的に：吸収促進剤、抗付着剤（ａｎｔｉ－ａｄｈｅｒｅｎｔ）、消泡剤、抗酸化剤、結合剤、結合剤、緩衝剤（ｐＨ調整剤）、キレート化剤、コーティング剤、着色剤、送達向上剤、デキストラン、右旋糖、希釈剤、錠剤崩壊剤、分散剤、乳化剤、増量剤、充填剤、泡制御剤、流動促進剤、保水剤、滑沢剤、油、色素、ポリマー、保存剤、生理食塩水、塩、溶媒、糖、界面活性剤、懸濁剤、徐放マトリクス、甘味剤、増粘剤、等張化剤、ビヒクル、撥水剤、及び湿潤剤が挙げられる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、１つ以上の補助剤又は界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の補助剤又は界面活性剤は、独立して、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、抗凝集剤（ａｎｔｉ－ｃｏｎｄｅｎｓａｔｅ）、増粘剤、乳化剤、展着剤、スティッカー（ｓｔｉｃｋｅｒ）、オルガノシラン、脂肪酸エステル及び油から選択される。特定の実施形態では、１つ以上の補助剤又は界面活性剤は、場合により、非イオン性有機シリコーン界面活性剤（例えば、Ｈｅｌｅｎａ社製のＫＩＮＥＴＩＣ（登録商標）；非イオン性有機シリコーンベースの浸潤剤（ｗｅｔｔｅｒ）／展着剤／浸透剤のスプレー助剤）、ＤＹＮＥ－ＡＭＩＣ（登録商標）（Ｈｅｌｅｎａ社製；高度に改良されたメチル化種子油を専用の有機シリコーンベースの非イオン界面活性剤と組み合わせた混合物）及びＳＩＬＷＥＴ（登録商標）（Ｍｏｍｅｎｔｉｖｅ製；非イオン界面活性剤）から選択される。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は：除草剤、殺真菌剤、殺虫剤、殺ダニ剤及び肥料から選択される１つ以上の薬剤を含む。
記載されるＭｄｓＲＮＡ及びＭｄｓＲＮＡを含む組成物は、このような材料を植物上に又は餌中に適用することを容易にするため、及び田畑内又は都市環境内で使用するために、当業者に既知の多数の異なる方法で加工され得る。本明細書に開示する、記載されるＭｄｓＲＮＡ及びＭｄｓＲＮＡを含む組成物は、キット、容器、パック又はディスペンサー内に包装又は収容され得る。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、２つ以上の異なるＭｄｓＲＮＡを含む。ＭｄｓＲＮＡは、同じ標的遺伝子に相補的な異なるアンチセンス配列、同じ若しくは異なる宿主における異なる標的（ｔｒａｇｅｔ）遺伝子に相補的な異なるアンチセンス配列、異なる若しくは同様の長さ、又は異なる若しくは同様の転写後修飾を有することができる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、乳化可能な農業用濃縮物である。いくつかの実施形態では、乳化可能な農業用濃縮物は、非限定的に；担体、又は有機溶媒、界面活性剤、賦形剤、除草剤、殺真菌剤、殺虫剤、肥料、又はそれらの組み合わせであり得る少なくとも１つの薬剤を更に含む。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、１つ以上の除草剤を含む。好適な除草剤の非限定的な例としては、非限定的に、イミダゾリノン、アセトクロール、アシフルオルフェン、アクロニフェン、アクロレイン、ＡＫＨ－７０８８、アラクロール、アロキシジム、アメトリン、アミドスルフロン、アミトロール、アンモニウムスルファメート、アニロホス、アシュラム、アトラジン、アザフェニジン、アジムスルフロン、ＢＡＳ ６２０Ｈ、ＢＡＳ ６５４ ００Ｈ、ＢＡＹ ＦＯＥ ５０４３、ベナゾリン、ベンフルラリン、ベンフレセート、ベンスルフロン－メチル、ベンスライド、ベンタゾン、ベンゾフェナップ、ビフェノックス、ビラナホス、ビスピリバック－ナトリウム、ブロマシル、ブロモブチド、ブロモフェノキシム、ブロモキシニル、ブタクロール、ブタミホス、ブトラリン、ブトロキシジム、ブチレート、カフェンストロール、カルベタミド、カルフェントラゾン－エチル、クロルメトキシフェン、クロラムベン、クロルブロムロン、クロリダゾン、クロリムロン－エチル、クロロ酢酸、クロロトルロン、クロルプロファム、クロルスルフロン、クロルタール－ジメチル、クロルチアミド、シンメチリン、シノスルフロン、クレトジム、クロジナホップ－プロパルギル、クロマゾン、クロメプロップ、クロピラリド、クロランスラム－メチル、シアナジン、シクロエート、シクロスルファムロン、シクロキシジム、シハロホップ－ブチル、２，４－Ｄ、ダイムロン、ダラポン、ダゾメット、２，４ＤＢ、デスメジファム、デスメトリン、ジカンバ、ジクロベニル、ジクロルプロップ、ジクロルプロップ－Ｐ、ジクロホップ－メチル、ジフェンゾクアットメチルスルフェート、ジフルフェニカン、ジメフロン、ジメピペレート、ジメタクロル、ジメタメトリン、ジメテナミド、ジメチピン、ジメチルアルシン酸、ジニトラミン、ジノカップ、ジノテルブ、ジフェナミド、ジクアットジブロミド、ジチオピル、ジウロン、ＤＮＯＣ、ＥＰＴＣ、エスプロカルブ、エタルフルラリン、エタメツルフロン－メチル、エトフメセート、エトキシスルフロン、エトベンザニド、フェノキサプロップ－Ｐ－エチル、フェヌロン、硫酸第一鉄、フラムプロップ－Ｍ、フラザスルフロン、フルアジホップ－ブチル、フルアジホップ－Ｐ－ブチル、フルクロラリン、フルメツラム、フルミクロラク－ペンチル、フルミオキサジン、フルオメツロン、フルオログリコフェン－エチル、フルポキサム、フルプロパネート、フルピルスルフロン－メチル－ナトリウム、フルレノール、フルリドン、フルロクロリドン、フルロキシピル、フルルタモン、フルチアセト－メチル、ホメサフェン、フォサミン、グルホシネート－アンモニウム、グリホセート、グリホシネート、ハロスルフロン－メチル、ハロキシホップ、ＨＣ－２５２、ヘキサジノン、イマザメタベンズ－メチル、イマザモックス、イマザピル、イマザキン、イマゼタピル、イマゾスルロン、イミダジリノン、インダノファン、イノキシニル、イソプロツロン、イソウロン、イソキサベン、イソキサフルトール、ラクトフェン、レナシル、リヌロン、ＭＣＰＡ、ＭＣＰＡ－チオエチル、ＭＣＰＢ、メコプロップ、メコプロップ－Ｐ、メフェナセット、メタミトロン、メタザクロル、メタベンズチアズロン、メチルアルソン酸、メチルジムロン、メチルイソチオシナネート、メトベンズロン、メトブロムロン、メトラクロル、メトスラム、メトクスロン、メトリブジン、メトスルフロン－メチル、モリネート、モノリニュロン、ナプロアニリド、ナプロパミド、ナプタラム、ネブロン、ニコスルフロン、ノナン酸、ノルフルラゾン、オレイン酸（脂肪酸）、オルベンカルブ、オリザリン、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキサスルフロン、オキシフロルフェン、パラクアットジクロリド、ペブレート、ペンジメタリン、ペンタクロロフェノール、ペンタノクロル、ペントキサゾン、石油、フェンメディファム、ピクロラム、ピペロホス、プレチラクロール、プリミスルフロン－メチル、プロジアミン、プロメトン、プロメトリン、プロパクロル、プロパニル、プロパキザホップ、プロパジン、プロファム、プロピソクロル、プロピザミド、プロスルホカルブ、プロスルフロン、ピラフルフェン－エチル、ピラゾリネート、ピラゾスルフロン－エチル、ピラゾキシフェン、ピリブチカルブ、ピリデート、ピリミノバック－メチル、ピリチオバック－ナトリウム、キンクロラク、キンメラク、キノクラミン、キザロホップ、キザロホップ－Ｐ、リムスルフロン、セトキシジム、シズロン、シマジン、シメトリン、塩素酸ナトリウム、ＳＴＳ系（スルホニルウレア）、スルコトリオン、スルフェントラゾン、スルホメツロン－メチル、スルホスルフロン、硫酸、タール油、２，３，６－ＴＢＡ、ＴＣＡ－ナトリウム、テブタム、テブチウロン、テルバシル、テルブメトン、テルブチラジン、テルブトリン、テニルクロール、チアゾピル、チフェンスルフロン－メチル、チオベンカルブ、チオカルバジル、トラルコキシジム、トリ－アラート、トリアスルフロン、トリアジフラム、トリベヌロン－メチル、トリクロピル、トリエタジン、トリフルラリン、トリフルスルフロン－メチル、ベルノレート及びそれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、１つ以上の殺真菌剤を含む。好適な殺真菌剤としては、非限定的に、３，３’－エチレンビス（テトラヒドロ－４，６－ジメチル－２Ｈ－１，３，５－チアジアジン－２－チオン）、亜鉛又はマンガンエチレンビス（ジチオカルバメート）、ビス（ジメチルジチオカルバモイル）ジスルフィド、亜鉛プロピレン－ビス－（ジチオカルバメート）、ビス（ジメチルジチオカルバモイル）エチレンジアミン、ニッケルジメチル－ジチオカルバメート、メチル１－（ブチルカルバモイル）－２－ベンゾイミダゾールカルバメート、１，２－ビス（３－メトキシカルボニル－２－チオウレイド）ベンゼン、１－イソプロピルカルバモイル－３－（３，５－ジクロロフェニル）－ヒダントイン、カリウムＮ－ヒドロキシメチル－Ｎ－メチルジチオカルバメート及び５－メチル－１０－ブトキシカルボニルアミノ－１０，１１－デヒドロジベンゾ（ｂ，ｆ）アゼピン等のカルバミン酸塩殺真菌剤；亜鉛ビス（１－ヒドロキシ－２（１Ｈ）ピリジンチオネート）及び２－ピリジンチオール－１－オキシドナトリウム塩等のピリジン殺真菌剤；Ｏ，Ｏ－ジイソプロピルＳ－ベンジルホスホロチオエート及びＯ－エチルＳ，Ｓ－ジフェニルジチオホスフェート等のリン殺真菌剤；Ｎ－（２，６－ジエチルフェニル）フタルイミド及びＮ－（２，６－ジエチルフェニル）－４－メチルフタルイミド等のフタルイミド殺真菌剤；Ｎ－トリクロロメチルチオ－４－シクロヘキセン－１，２－ジカルボキシイミド及びＮ－テトラクロロエチルチオ－４－シクロヘキセン－１，２－ジカルボキシイミド等のジカルボキシイミド殺真菌剤；５，６－ジヒドロ－２－メチル－１，４－オキサチン－３－カルボキサニリド－４，４－ジオキシド及び５，６－ジヒドロ－２－メチル－１，４－オキサチン－３－カルボキサニリド等のオキサチン殺真菌剤；２，３－ジクロロ－１，４－ナフトキノン、２－オキシ－３－クロロ－１，４－ナフトキノン銅硫酸塩等のナフトキノン殺真菌剤；ペンタクロロニトロベンゼン；１，４－ジクロロ－２，５－ジメトキシベンゼン；５－メチル－ｓ－トリアゾール（３，４－ｂ）ベンゾチアゾール；２－（チオシアノメチルチオ）ベンゾチアゾール；３－ヒドロキシ－５－メチルイソオキサゾール；Ｎ－２，３－ジクロロフェニルテトラクロロフタルアミド酸；５－エトキシ－３－トリクロロメチル－１－２，４－チアジアゾール；２，４－ジクロロ－６－（Ｏ－クロロアニリノ）－１，３，５－トリアジン；２，３－ジシアノ－１，４－ジチオ－アントラキノン；銅８－キノリネート、ポリオキシン；バリダマイシン；シクロヘキシミド；メタンアルソン酸鉄；ジイソプロピル－１，３－ジチオラン－２－イリデンマロネート；３－アリルオキシ－１，２－ベンゾイソチアゾール－１，１－ジオキシド；カスガマイシン；ブラストサイジンＳ；４，５，６，７－テトラ－クロロフタリド；３－（３，５－ジクロロフェニル）－５－エテニル－５－メチルオキサゾリジン－２，４－ジオン；Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）－１，２－ジメチルシクロプロパン－１，２－ジカルボキシイミド；Ｓ－ｎ－ブチル－５’－パラ－ｔ－ブチルベンジル－Ｎ－３－ピリジルジチオカルボニルイミデート；４－クロロフェノキシ－３，３－ジメチル－１－（１Ｈ，１，３，４－トリアゾール－１－イル）－２－ブタノン；メチル－Ｄ，Ｌ－Ｎ－（２，６－ジメチルフェニル）－Ｎ－（２’－メトキシアセチル）アラニネート；Ｎ－プロピル－Ｎ－［２－（２，４，６－トリクロロフェノキシ）エチル］ホスホロ（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）－１－カルボキサミド；Ｎ－（３，５－ジクロロフェニル）－スクシンイミド；テトラクロロイソフタロニトリル；２－ジメチルアミノ－４－メチル－５－ｎ－ブチル－６－ヒドロキシピリミジミン；２，６－ジクロロ－４－ニトロアニリン；３－メチル－４－クロロベンゾチアゾール－２－オン；１，２，５，６－テトラヒドロ－４Ｈ－ピロロ［３，２，１－Ｉ，ｊ］ホスホロ（ｐｈｏｓｐｈｏｒ）－２－オン；３’－イソプロポキシ－２－メチル－ベンズアニリド；１－［２－（２，４－ジクロロフェニル）－４－エチル－１，３－ジオキソラン－２－イルメチル］－１Ｈ，１，２，４－トリアゾール；１，２－ベンゾイソチアゾリン－３－オン；塩基性塩化銅；塩基性硫酸銅；Ｎ’－ジクロロフルオロメチルチオ－Ｎ，Ｎ－ジメチル－Ｎ－フェニルスルファミド；エチル－Ｎ－（３－ジメチルアミノ－プロピル）チオカルバメート塩酸塩；ピオマイシン（ｐｉｏｍｙｃｉｎ）；Ｓ，Ｓ－６－メチルキノキサリン－２，３－ジイルジチオ－カーボネート；亜鉛及びマンネブ（ｍａｎｎｅｂ）の複合体；ジ－亜鉛ビス（ジメチルジチオカルバメート）エチレンビス（ジチオカルバメート）及びグリホセート；クロロタロニル系殺真菌剤、アゾキシストロビン、ピラクロストロビン及びトリフロキシストロビン等のストロビルリン系殺真菌剤；並びにミクロブタニル、プロピコナゾール、テブコナゾール、テトラコナゾール等のトリアゾール系殺真菌剤、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、１つ以上の殺虫剤を含む。好適な殺虫剤としては、非限定的に、Ｏ，Ｏ－ジエチルＯ－（２－イソプロピル－４－メチル－６－ピリミジニル）ホスホロチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＳ－２－［（エチルチオ）エチル］ホスホロジチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＯ－（３－メチル－４－ニトロフェニル）－チオホスフェート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＳ－（Ｎ－メチルカルバモイルメチル）－ホスホロジチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＳ－（Ｎ－メチル－Ｎ－ホルミルカルバモイルメチル）ホスホロ－ジチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＳ－２－［（エチルチオ）エチル］ホスホロジチオエート、Ｏ，Ｏ－ジエチルＳ－２－［（エチルチオ）エチル］ホスホロジチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチル－１－ヒドロキシ－２，２，２－トリクロロエチルホスホネート、Ｏ，Ｏ－ジエチル－Ｏ－（５－フェニル－３－イソオキサゾリル）ホスホロチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＯ－（２，５－ジクロロ－４－ブロモフェニル）ホスホロチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＯ－（３－メチル－４－メチルメルカプトフェニル）－チオホスフェート、Ｏ－エチルＯ－ｐ－シアノフェニルフェニル－ホスホロチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチル－Ｓ－（１，２－ジカルボエトキシエチル）ホスホロジチオエート、２－クロロ－（２，４，５－トリクロロフェニル）ビニルジメチルホスフェート、２－クロロ－１－（２，４－ジクロロフェニル）－ビニルジメチルホスフェート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＯ－ｐ－シアノフェニルホスホロチオエート、２，２－ジクロロビニルジメチルホスフェート、Ｏ，Ｏ－ジエチルＯ－２，４－ジクロロフェニルホスホロチオエート、エチルメルカプトフェニルアセテートＯ，Ｏ－ジメチルホスホロ－ジチオエート、Ｓ－［（６－クロロ－２－オキソ－３－ベンゾオキサゾリニル）メチル］Ｏ，Ｏ－ジエチルホスホロジチオエート、２－クロロ－１－（２，４－ジクロロフェニル）ビニルジエチルホスフェート、Ｏ，Ｏ－ジエチルＯ－（３－オキソ－２－フェニル－２Ｈ－ピリダジン－６－イル）ホスホロチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＳ－（１－メチル－２－エチルスルフィニル）－エチルホスホロチオレート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＳ－フタルイミドメチルホスホロジチオエート、Ｏ，Ｏ－ジエチルＳ－（Ｎ－エトキシカルボニル－Ｎ－メチルカルバモイルメチル）ホスホロジチオエート、Ｏ，Ｏ－ジメチルＳ－［２－メトキシ－１，３，４－チアジアゾール－５－（４Ｈ）－Ｉ－（４）－メチル］ジチオホスフェート、２－メトキシ－４Ｈ－１，３，２－ベンゾオキサホスホリン２－スルフィド、Ｏ，Ｏ－ジエチルＯ－（３，５，６－トリクロロ－２－ピリジル）ホスホロチエート、Ｏ－エチルＯ－２，４－ジクロロフェニルチオノベンゼンホスホネート、Ｓ－［４，６－ジアミノ－ｓ－トリアジン－２－イル－メチル］Ｏ，Ｏ－ジメチルホスホロジチオエート、Ｏ－エチルＯ－ｐ－ニトロフェニルフェニルホスホロチオエート、Ｏ，Ｓ－ジメチルＮ－アセチルホスホロアミドチオエート、２－ジエチルアミノ－６－メチルピリジミン－４－イル－ジエチルホスホロチオネート、２－ジエチルアミノ－６－メチルピリジミン－４－イル－ジメチルホスホロチオネート、Ｏ，Ｏ－ジエチルＯ－Ｎ－（メチルスルフィニル）フェニルホスホロ－チオエート、Ｏ－エチルＳ－プロピルＯ－２，４－ジクロロフェニルホスホロジチオエート及びｃｉｓ－３－（ジメトキシホスフィノキシ）Ｎ－メチル－ｃｉｓ－クロトンアミド等のリン酸殺虫剤；１－ナフチルＮ－メチルカルバメート、Ｓ－メチルＮ－［メチルカルバモイルオキシ］チオアセトイミデート、ｍ－トリルメチルカルバメート、３，４－キシリルメチルカルバメート、３，５－キシリルメチルカルバメート、２－ｓｅｃ－ブチルフェニルＮ－メチルカルバメート、２，３－ジヒドロ－２，２－ジメチル－７－ベンゾフラニルメチル－カルバミン酸塩、２－イソプロポキシフェニルＮ－メチルカルバメート、１，３－ビス（カルバモイルチオ）－２－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）プロパン塩酸塩及び２－ジエチルアミノ－６－メチルピリジミン－４－イル－ジメチルカルバメート等のカルバミン酸塩殺虫剤；並びにＮ，Ｎ－ジメチルＮ’－（２－メチル－４－クロロフェニル）ホルムアミジン塩酸塩、硫酸ニコチン、ミルベマイシン、６－メチル－２，３－キノキサリンジチオ環状Ｓ，Ｓ－ジチオカーボネート、２，４－ジニトロ－６－ｓｅｃ－ブチルフェニルジメチル－アクリレート、１，１－ビス（ｐ－クロロフェニル）２，２，２－トリクロロエタノール、２－（ｐ－ｔｅｒｔ－ブチルフェノキシ）イソプロピル－２’－クロロエチルスルファイト、アゾキシベンゼン、ジ－（ｐ－クロロフェニル）－シクロプロピルカルビノール、ジ［トリ（２，２－ジメチル－２－フェニルエチル）スズ］オキシド、１－（４－クロロフェニル）－３－（２，６－ジフルオロベンゾイル）ウレア、Ｓ－トリシクロヘキシルスズＯ，Ｏ－ジイソプロピルホスホロジチオエート等の他の殺虫剤、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、１つ以上の肥料を含む。多様な肥料が組成物中に含ませるのに好適である。肥料は、単一栄養素肥料（Ｎ、Ｐ又はＫ）、二成分肥料（例えばＮＰ、ＮＫ又はＰＫ）、ＮＰＫ肥料又は多栄養素肥料（例えば、カルシウム、マグネシウム、硫黄、銅、鉄、マンガン、モリブデン、亜鉛、ホウ素、ケイ素、コバルト又はバナジウムの１つ以上を提供することができる）であり得る。肥料は、天然起源又は合成起源のものであり得る。肥料は、液体又は固体であり得、遅延又は制御放出を提供してもよい。
いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、組成物中に５０重量％未満、含まれる。いくつかの実施形態では、農業組成物中のＭｄｓＲＮＡの量は、組成物の５重量％未満である。いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、約１重量％未満、約０．９重量％未満、約０．８重量％未満、約０．７重量％未満、約０．６重量％未満、約０．５重量％未満、約０．４重量％未満、約０．３重量％未満、約０．２重量％未満、約０．１重量％未満、約０．０５重量％未満、約０．０１重量％未満又は約０．００１重量％未満の量で組成物中に存在する。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、液体として配合される。液体製剤は、下記に記載される重量割合で、ＭｄｓＲＮＡ及び他の薬剤を全成分の溶解が達成されるまで液体中で混合することにより調製され得る。液体は、水性、イオン性又は有機液体であり得る。好適な液体としては、非限定的に、水、アルコール（例えば、メタノール及びエタノール）、ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトン及びシクロヘキサノン）、芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、エチルベンゼン及びメチルナフタレン）、脂肪族炭化水素（例えば、ヘキサン及びケロシン）、エステル（例えば、酢酸エチル及び酢酸ブチル）、ニトリル（例えば、アセトニトリル及びイソブチロニトリル）、エーテル（例えば、ジオキサン及びジイソプロピルエーテル）、酸アミド（例えば、ジメチルホルムアミド及びジメチルアセトアミド）及びハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロエタン、トリクロロエチレン及び四塩化炭素）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、液体製剤は、水性製剤である。いくつかの実施形態では、水性製剤は、水、ＭｄｓＲＮＡ及び他の薬剤のみを含む。いくつかの実施形態では、追加の化合物、溶媒又は補助剤が水性製剤に提供される。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、粉末又は細粉として配合される。粉末又は細粉は、粉末又は細粉を作物に直接適用する（即ち、作物への散布により）のに好適であるよう顆粒化することができ、又は水等の溶媒に最終的に溶解されるために顆粒化することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、凍結乾燥物である。典型的には、ＭｄｓＲＮＡ及び他の薬剤は、一緒に凍結乾燥される。いくつかの実施形態では、１つ以上のＭｄｓＲＮＡ及び他の薬剤は、別々に凍結乾燥され得る。
多様な好適な固体及びガス状担体が、組成物中に使用され得る。好適な固体担体としては、非限定的に、粘土（例えば、カオリン粘土、珪藻土、合成水和二酸化ケイ素、アタパルジャイト粘土、ベントナイト及び酸粘土）、タルク、増量剤、無機鉱物（例えば絹雲母、粉末化石英、粉末化硫黄、活性炭、炭酸カルシウム及び水和シリカ）の微粉末又は顆粒、及び化学肥料用の塩（例えば、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、ウレア及び塩化アンモニウム）が挙げられる。好適なガス状担体としては、例えば、ブタンガス、二酸化炭素及びフルオロカーボンガスが挙げられる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は分散剤を含む。分散剤の例としては、非限定的にメチルセルロース、ポリビニルアルコール、リグニンスルホン酸ナトリウム、高分子アルキルナフタレンスルホネート、ナトリウムナフタレンスルホネート、ポリメチレンビスナフタレンスルホネート、中性化ポリオキシエチル化誘導体及び環置換アルキルフェノールホスフェートが挙げられる。安定剤を使用して安定なエマルションを生成することもできる。例示的な安定剤としては、非限定的にマグネシウム、ケイ酸アルミニウム及びキサンタンゴムが挙げられる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、スプレーとしてエアロゾルの形態で配合される。エアロゾルスプレーとして配合される場合、組成物は一般に噴射剤と共に圧力下で容器に入れられる。好適な噴射剤の例としては、フルオロトリクロロメタン及びジクロロジフルオロメタンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、農薬組成物は、種子を含む。いくつかの実施形態では、農薬組成物は、抗真菌薬ＭｄｓＲＮＡ及び種子を含む。いくつかの実施形態では、農薬組成物は、ＭｄｓＲＮＡ、種子を含み、更に殺真菌剤を含む。
いくつかの実施形態では、殺真菌性組成物（殺真菌剤を含む農薬組成物）中のＭｄｓＲＮＡの量は、殺真菌性組成物の約５重量％未満、約１重量％未満、約０．９重量％未満、約０．８重量％未満、約０．７重量％未満、約０．６重量％未満、約０．５重量％未満、約０．４重量％未満、約０．３重量％未満、約０．２重量％未満、約０．１重量％未満、約０．０５重量％未満、約０．０１重量％未満又は約０．００１重量％未満である。殺真菌性組成物の重量は、種子の重量を含まない。
いくつかの実施形態では、殺真菌性組成物は、種皮中に存在し、又は種子の内部に存在する。いくつかの実施形態では、殺真菌性組成物は、該組成物が種子の外面を完全に又は部分的に覆うように種子上に形成される。種子を被覆する方法は、当該技術分野にて既知のものを含む。
農業有害生物の制御方法
いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡ又はＭｄｓＲＮＡを含む組成物を使用して農業有害生物を制御し又は農業有害生物侵入を処置する。ＭｄｓＲＮＡは、有害生物に、又は有害生物により占められる範囲に、又は有害生物の食物源に投与され得る。
いくつかの実施形態では、有害生物を処置又は制御するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、有害生物は、昆虫、真菌、ダニ類又は雑草である。本方法は、１つ以上の記載されるＭｄｓＲＮＡを含む組成物を、処理するべき範囲に適用することを含む。いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡは、５重量％未満の量で組成物中に存在する。いくつかの実施形態では、組成物は、表面に直接適用される。いくつかの実施形態では、表面は、その上で標的化昆虫又は真菌有害生物が給餌される植物表面である。
いくつかの実施形態では、標的宿主内の標的遺伝子の遺伝子発現レベル及び／又はｍＲＮＡレベルは、ＭｄｓＲＮＡ又はＭｄｓＲＮＡ含有組成物の適用後、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％低減される。いくつかの実施形態では、農業有害生物の死亡率は、ＭｄｓＲＮＡ又はＭｄｓＲＮＡ含有組成物の適用後、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％増大する。
本明細書で使用されるとき、有害生物の制御とは、ＭｄｓＲＮＡによる処置の非存在下で測定された作物損害、収穫高罹患率、成長、食欲、摂取又は繁殖の低下と比較して、作物損害、若しくは有害生物を原因とする収穫高の低下を低減し、又は有害生物の罹患率を増大させ、有害生物の成長若しくは食欲若しくは摂取を阻害し、又は有害生物の繁殖を遅延させることを意味する。
作物用途
いくつかの実施形態では、雑草以外の標的植物における標的遺伝子の発現を低減する方法が記載される。方法は、記載されるＭｄｓＲＮＡの１つ以上を含む組成物を植物に適用することを含む。いくつかの実施形態では、植物は、作物植物である。作物植物は、利益又は生存のために成長及び収穫され得る植物である。作物植物は、非限定的に、食物植物、園芸植物、花卉園芸植物又は工業用植物であり得る。いくつかの実施形態では、植物は、栽培植物である。植物は、研究室、温室、苗畑、田畑、果樹園又は他の農業環境、庭園又は他の天然若しくは都市環境内に存在し得る。いくつかの実施形態では、標的植物は、特定の状況又は位置に望ましいと見なされる植物である。
昆虫侵入
いくつかの実施形態では、動物は、昆虫である。いくつかの実施形態では、昆虫は、鞘翅類（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａｎ）（カブトムシ等）である。鞘翅類（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａｎ）は、非限定的に、キクイムシ、ニレハムシ、ツヤハダゴマダラカミキリ、シバンムシ、アメリカマツノキクイムシ、キムネクロナガハムシ又はコロラドハムシであり得る。いくつかの実施形態では、昆虫は、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）（チョウ又はガ等）である。鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）は、非限定的に、ヨトウムシ、コーンイヤーワーム、モンシロチョウ又はコットンボールワームであり得る。いくつかの実施形態では、昆虫は、膜翅類（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａｎ）（ハバチ、スズメバチ、ミツバチ、アリ等）である。膜翅類（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａｎ）は、非限定的に、カミアリ、アルゼンチンアリ、オオアリ、ハキリアリ、サスライアリ、ウィートステムソーフライ（ｗｈｅａｔ ｓｔｅｍ ｓａｗｆｌｙ）、カラマツハラアカハバチ、マツハバチ又はトコジラミであり得る。いくつかの実施形態では、昆虫は、双翅類（Ｄｉｐｔｅｒａｎ）（ハエ等）である。双翅類（Ｄｉｐｔｅｒａｎ）は、ハエ、蚊、ブヨ又は潜葉性昆虫であり得るがこれに限定される。いくつかの実施形態では、昆虫は、半翅類（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａｎ）（トゥルーバグ等）である。半翅類（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａｎ）は、非限定的に、アブラムシ、ヨコバイ、害虫（ｂｕｇ）、コナジラミ、コナカイガラムシ又はノミであり得る。いくつかの実施形態では、昆虫は、西洋トウモロコシルートワームである。
いくつかの実施形態では、昆虫は、１つ以上の従来の既知の殺虫剤に対する耐性を有する昆虫である。いくつかの実施形態では、ヒアリ等の昆虫は、生物多様性に対して負の影響（Ｗｏｊｃｉｋ ｅｔ ａｌ．２００１及び／又は殺虫剤に対する耐性（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．２０１６）を有する可能性がある。いくつかの実施形態では、蚊等の昆虫は、非限定的に：マラリア、デング熱、ジカ熱及びチクングニア熱等の疾病の媒介物として、ヒトの健康に影響を与える可能性がある（Ｈｅｍｉｎｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．２００４）。いくつかの実施形態では、ミカンキジラミ（Ａｓｉａｎ ｃｉｔｒｕｓ ｐｓｙｌｌｉｄ）等の昆虫は、カンキツグリーニング病の媒介物である（Ｔｉｗａｒｉ ｅｔ ａｌ．２０１１）（Ｔｉｗａｒｉ ｅｔ ａｌ．２０１１）。
鞘翅類（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａｎ）、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）、膜翅類（Ｈｙｍｅｎｏｐｔｅｒａｎ）、双翅類（Ｄｉｐｔｅｒａｎ）及び半翅類（Ｈｅｍｉｐｔｅｒａｎ）昆虫有害生物は、直接注入により又はｓｉＲＮＡ前駆体で処理した植物物質上の給餌により導入されるＲＮＡｉに感受性であることが既知である。ネイキッドＲＮＡの田畑適用は、一般に、環境特異的及び非特異的分解に対するＲＮＡの感受性に起因して実用的ではない（Ｂａｕｍ ２０１６）。更に、ＲＮＡは、給餌の過程中、及び昆虫の腸内の通過中に分解を非常に受けやすい。例えば、一般的には、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）は鞘翅類（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａ〉よりも遥かに激しくＲＮＡを分解するように思われ、このことはＲＮＡｉ媒介による制御方法に対するそれらの比較的乏しい感受性の原因であり得る。記載されるＭｄｓＲＮＡの安定性は、ＲＮＡｉ経路へ送達される前にＭｄｓＲＮＡを宿主ヌクレアーゼから保護し、非特異的環境分解を制限する役割を果たす。にもかかわらず、記載されるＭｄｓＲＮＡは、環境面での安全を考慮するように十分に生分解性である。
１つ以上のＭｄｓＲＮＡを含む組成物は、昆虫感染を予防するために、感染に先立って植物に適用することができる。組成物はまた、昆虫感染を処置するために、感染の徴候の出現後に適用されてもよい。組成物は、処置される植物部分に応じて多様な方法で適用することができる。例として、組成物は、種子の昆虫感染を予防するために、種まきの前に植物種子に適用することができる。組成物は、新たに種まきした種子の昆虫侵入を防止するために、種まきの時又は種まきの直前に土壌に適用することができる（即ち、発芽前として）。いくつかの実施形態では、組成物は、昆虫侵入の処置又は予防のいずれかのために、植物の発芽後に植物に、又は、発芽後に植物の葉に適用することができる（即ち、発芽後として）。例示的な実施形態では、適用は発芽期、実生成長期、栄養成長期及び生殖成長期中に行われる。いくつかの実施形態では、適用は、栄養成長期及び生殖成長期中に行われる。
発芽前種子への組成物の適用は、フィルムコーティング、ペレット化、カプセル化、ドラムコーティング及び流動床コーティング等の様々な種子被覆技術を含むことができる。発芽後植物への適用は、噴霧又は農薬散布技術を含むことができる。
有効量の組成物は、当該技術分野で一般に既知のいくつかの方法によって、植物又は種子に適用することができる。当業者が認識するように、「有効量」を含む組成物の量は、植物及びその生成段階、真菌標的、並びに環境条件に応じて様々であり得、及び様々であろう。一般的に言えば、典型的な適用の場合、植物又はその子孫は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０重量％の活性成分の濃度を提供するのに十分な組成物の量で処置される。本方法は、植物又はその子孫に対する組成物の１回を超える適用を含むことが想定される。例えば、適用回数は、約１～約５回以上の範囲であり得る。本明細書に詳細に記載される適用は、植物の生活環の同じ又は異なる段階で行われ得る。
真菌感染
いくつかの実施形態では、ＭｄｓＲＮＡを使用して真菌感染を処置又は予防する。いくつかの実施形態では、真菌は、非限定的に、ヒポクレア属（Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅｓａｎ）、ベンチュリア属（Ｖｅｎｔｕｒｉａ）、ポドスフェラ属（Ｐｏｄｏｓｐｈａｅｒａ）、エリシフェ属（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ）、モノリニア属（Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ）、ミコスフェレラ属（Ｍｙｃｏｓｐｈａｅｒｅｌｌａ）、ウンシヌラ属（Ｕｎｃｉｎｕｌａ）；担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅ）、ヘミレイア属（Ｈｅｍｉｌｅｉａ）、リゾクトニア属（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）、プッチニア属（Ｐｕｃｃｉｎｉａ）、不完全菌（Ｆｕｎｇｉ ｉｍｐｅｒｆｅｃｔｉ）、ボトリティス属（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）、ヘルミントスポリウム属（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）、リンコスポリウム属（Ｒｈｙｎｃｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）、フサリウム属（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）、セプトリア属（Ｓｅｐｔｏｒｉａ）、セルコスポラ属（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、ピリクラリア属（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ）、シュードセルコスポレラ属（Ｐｓｅｕｄｏｃｅｒｃｏｓｐｏｒｅｌｌａ）、卵菌（Ｏｏｍｙｃｅｔｅ ｆｕｎｇｉ）、フィトフトラ属（Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ）、ペロノスポラ属（Ｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）、ブレミア属（Ｂｒｅｍｉａ）、ピシウム属（Ｐｙｔｈｉｕｍ）、プラスモパラ属（Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ）、ダイズさび病菌（Ｐｈａｋｏｐｓｏｒａ Ｐａｃｈｙｒｈｉｚｉ）、Ｐ・メイボミアエ（Ｐ．ｍｅｉｂｏｍｉａｅ）、スクレロフトラ・マクロスポラ（Ｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｍａｃｒｏｓｐｏｒａ）、スクレロフトラ・レイイシエ（Ｓｃｌｅｒｏｐｈｔｈｏｒａ ｒａｙｉｓｓｉａｅ）、スクレロスポラ・グラミニコラ（Ｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、ペロノスクレロスポラ・ソルギ（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｓｏｒｇｈｉ）、ペロノスクレロスポラ・フィリピネシス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｎｓｉｓ）、ペロノスクレロスポラ・サッカリ（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｓａｃｃｈａｒｉ） ペロノスクレロスポラ・メイディス（Ｐｅｒｏｎｏｓｃｌｅｒｏｓｐｏｒａ ｍａｙｄｉｓ）、フィソペラ・ゼアエ（Ｐｈｙｓｏｐｅｌｌａ ｚｅａｅ）、セルコスポラ・ゼアエ－メイディス（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｚｅａｅ－ｍａｙｄｉｓ）、コレトトリチャム・グラミニコーラ（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｒａｍｉｎｉｃｏｌａ）、ハイボタンタケ目（Ｈｙｐｏｃｒｅａｌｅ）、ジベレラ・ゼアエ（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ｚｅａｅ）、エクセロヒルム・ツルキクム（Ｅｘｓｅｒｏｈｉｌｕｍ ｔｕｒｃｉｃｕｍ）、カバティエル・ゼアエ（Ｋａｂａｔｉｅｌｌｕ ｚｅａｅ）、ビポラリス・メイディス（Ｂｉｐｏｌａｒｉｓ ｍａｙｄｉｓ）、ギベレラ・アベナセア（Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ ａｖｅｎａｃｅａ）、フサリウム・クルモラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ）、フサリウム・オキシスポラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ）、フサリウム・スポロトリチオイデス（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｏｒｏｔｒｉｃｈｉｏｉｄｅｓ）又はフサリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）であり得る。いくつかの実施形態では、フサリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）の処理は、マイコトキシンの産生、脱メチル化阻害剤（ＤＭＩ）に基づく殺真菌剤に対する耐性の出現の危険性、又はテブコナゾールのような従来のＤＭＩに関する発癌性の懸念を低減することができる。
いくつかの実施形態では、記載される農薬組成物は、真菌感染を予防するために、感染に先立って植物に適用することができる。いくつかの実施形態では、記載される農薬組成物は、真菌感染を処置するために、感染の徴候の出現後に植物に適用することができる。組成物は、処置される植物部分に応じて多様な方法で適用することができる。例として、組成物は、種子の真菌感染を予防するために、種まきの前に植物種子に適用することができる。組成物は、新たに種まきした種子の微生物侵入を防止するために、種まきの時又は種まきの直前に土壌に適用することができる（即ち、発芽前として）。いくつかの実施形態では、組成物は、微生物侵入の処置又は予防のいずれかのために、植物の発芽後に植物に、又は、発芽後に植物の葉に適用することができる（即ち、発芽後として）。例示的な実施形態では、適用は発芽期、実生成長期、栄養成長期及び生殖成長期中に行われる。より典型的には、適用は、栄養成長期及び生殖成長期中に行われる。
発芽前種子への組成物の適用は、フィルムコーティング、ペレット化、カプセル化、ドラムコーティング及び流動床コーティング等の様々な種子被覆技術を含むことができる。発芽後植物への適用は、噴霧又は農薬散布技術を含むことができる。
有効量の組成物は、当該技術分野で一般に既知のいくつかの方法によって、植物又は種子に適用することができる。当業者が認識するように、「有効量」を含む組成物の量は、植物及びその生成段階、真菌標的並びに環境条件に応じて様々であり得、及び様々であろう。一般的に言えば、典型的な適用の場合、植物又はその子孫は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５，０００ｍｇ／ｋｇの活性成分の濃度を提供するのに十分な組成物の量で処置される。本方法は、植物又はその子孫に対する組成物の１回を超える適用を含むことが想定される。例えば、適用回数は、約１～約５回以上の範囲であり得る。本明細書に詳細に記載される適用は、植物の生活環の同じ又は異なる段階で行われ得る。
雑草
本開示の組成物を使用して、雑草の成長を制御し、予防し、除去し、遅延させることができる。雑草は、特定の状況又は位置において望ましくないと考えられる植物である。雑草は、非限定的に、オオホナガアオゲイトウ（Ｐａｌｍｅｒ Ａｍａｒａｎｔｈ）、シロザ（Ｃｏｍｍｏｎ Ｌａｍｂｓｑｕａｒｔｅｒｓ）、ヒメムカシヨモギ（Ｈｏｒｓｅｗｅｅｄ）、アサガオ（Ｍｏｒｎｉｎｇ Ｇｌｏｒｙ）、アマランサス（Ｗａｔｅｒｈｅｍｐ）、ショクヨウガヤツリ（Ｎｕｔｓｅｄｇｅ）、ホウキギ（Ｋｏｃｈｉａ）、ブタクサ（Ｃｏｍｍｏｎ Ｒａｇｗｅｅｄ）、オオブタクサ（Ｇｉａｎｔ Ｒａｇｗｅｅｄ）又はベラドンナ（Ｎｉｇｈｔｓｈａｄｅ）であり得る。
実施例１．高分子量ポリアルキルオキシポリマーｄｓＲＮＡのＤＭＳＯ中での調製
ＰＥＧの活性化
１当量のＰＥＧ－酢酸を５０ｍｇ／ｍｌでジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、この溶液に１．０５当量のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を添加した。反応混合物を、アルゴン下で少なくとも２時間、好ましくは一晩撹拌した。次に、この溶液を、イオン溶媒和に従い、ｄｓＲＮＡに直接添加した。
ｄｓＲＮＡと活性化ＰＥＧとの反応
ベンジルトリエチル塩化アンモニウム（ベンジル－ＴｒｉＢＡ－Ｃｌ）を２００ｍＭでＤＭＳＯに溶解した。この溶液の一定分量を、反応チューブ内の凍結乾燥ｄｓＲＮＡに添加した。チューブを振盪機内で６５℃になるまで１時間かけて加温した。次に、温度を５５℃まで低下させ、触媒量のピリジン、続いて２００μｇ／μＬのＤＭＡＰ溶液を添加した。２００ｕｇ／ｕＬの活性化ＰＥＧ溶液を１～３回に分けて添加した。混合物を、５５℃で９０分間維持し、次にｐＨ４．５の５００ｍＭのクエン酸塩でクエンチし、水で４０ｍＬに希釈した。得られた粗ＰＥＧ－ｄｓＲＮＡを含む混合物を、タンジェンシャルフローフィルトレーション、ＴＦＦを用いて精製し、９０％を超える純度でＭｄｓＲＮＡを得た。
以下のＭｄｓＲＮＡを、上記の手順に従って調製した。
Figure 2024532413000061
図４でわかるように、活性化された１０ｋＰＥＧ／ｄｓＲＮＡ反応混合物のアガロースゲル（２％）分析（ライン３）では、３００ｂｐの分子と１０ｋＰＥＧポリマーの例えば１、２、３、４つの鎖との共有結合修飾が示される。元の非修飾ｄｓＲＮＡ分子は、全てが反応中に消費される。
実施例２．高分子量ポリアルキルオキシポリマーｄｓＲＮＡの活性化反応のためのＤＣＭを用いる調製
１当量のＰＥＧ－酢酸を３００ｍｇ／ｍｌでジクロロメタン（ＤＣＭ）に溶解し、この溶液に１．０５当量のＣＤＩを添加した。反応混合物を、アルゴン下で少なくとも２時間、好ましくは一晩撹拌した。次に、反応混合物を新しいＤＣＭで５ｍｇ／ｍｌに希釈し、０．５体積の１Ｎ ＨＣＬ、続いて０．５体積の飽和ＮａＣｌで抽出した。次に、水層を酢酸エチル、続いてＤＣＭで洗浄した。組み合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸発させ、粘稠性液体を得た。粘稠性液体を２体積のアセトニトリル（ＣＡＮ）で粉砕し、アルゴン流下で取り除き、水を除去し、次に高ｖａｃ及びＰ２Ｏ５下で数時間乾燥させた。得られた固体を、イオン溶媒和法に従い、ｄｓＲＮＡと反応させた。以下のＭｄｓＲＮＡを、この手順に従って調製した。
Figure 2024532413000062
実施例３．高分子量ポリアルキルオキシポリマーｄｓＲＮＡのＤＭＳＯ中での調製
ポリアルキルオキシポリマーＰＥＧの活性化
ポリアロキシ（ｐｏｌｙａｌｏｘｙ）ポリマーをリンカーと反応させ、ポリマー鎖の一端に反応性ＣＯＯＨを導入した。１当量のポリアルキルオキシポリマーを１，４－ジオキサンに溶解させた。ＤＭＡＰ（０．５当量）、ＤＩＥＡ（３当量）、及び対応する無水物（１．５．当量）を添加し、反応混合物を室温で一晩撹拌した。次に、混合物をＤＣＭで希釈し、炭酸水素ナトリウム、鹹水で抽出した。有機層を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧で濃縮した。得られたゴムを新しいＤＣＭで粉砕し、固体ポリアルキルオキシ－ＣＯＯＨを濾過により収集した。
１当量のポリアルキルオキシ（ｐｏｙａｌｋｙｌｏｘｙ）－ＣＯＯＨを５０ｍｇ／ｍｌでジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、この溶液に１．０５当量のカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を添加した。反応混合物を、アルゴン下で少なくとも２時間、好ましくは一晩撹拌した。次に、この溶液をｄｓＲＮＡに直接添加した。
上記の調製方法を用いて、以下の活性化ポリアルキルオキシポリマーを調製し、それを使用して、所望のＭｄｓＲＮＡを得た：メトキシＰＥＧ酢酸（ＭＰＥＧＡ）１Ｋ、２Ｋ、５Ｋ、及び１０Ｋ；メトキシＰＥＧ酢酸（ＭＰＥＧＡ－Ｙ）４０Ｋ、Ｙ形状；メトキシＰＥＧコハク酸（ＭＰＥＧＳ）５Ｋ；メトキシＰＥＧグルタミン酸（ＭＰＥＧＧ）５Ｋ；メトキシＰＥＧ３，３－メチルグルタミン酸（ＭＰＥＧＭ）５Ｋ；カルバモイルＰＥＧ ５Ｋ（ＣＰＥＧ）、ポロキサレンスクシニック（Ｐｏｌｏｘａｌｅｎｅ ｓｕｃｃｉｎｉｃ）Ｌ６４、２、９Ｋ；ポロキサレンスクシニックＬ６８；ポロキサレンスクシニックＬ１２１；ポロキサレンスクシニックＦ１０８、１４Ｋ；ポロキサレンスクシニックＦ１２７、１２．５Ｋ。
ｄｓＲＮＡと活性化ポリアルキルオキシポリマーＰＥＧとの反応
ベンジルトリブチル塩化アンモニウムを、２００ｍＭでＤＭＳＯに溶解させた。この溶液の一定分量を、反応チューブ内の凍結乾燥ｄｓＲＮＡに添加した。チューブを振盪機内で６５℃になるまで１時間かけて加温した。次に、温度を５５℃に低下させ、触媒量のピリジン、続いて２００μｇ／μＬのＤＭＡＰ溶液を添加した。２００ｕｇ／ｕＬの活性化ポリアルキルオキシポリマー溶液を少しずつ添加した。混合物を、５５℃で９０分間維持し、次にｐＨ４．５の５００ｍＭのクエン酸塩でクエンチし、水で４０ｍＬに希釈した。得られた粗Ｍ－ｄｓＲＮＡを含む混合物を、タンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）を用いて精製し、９０％を超える純度でＭｄｓＲＮＡを得た。ＭｄｓＲＮＡを、非変性アガロースゲル及び変性ポリアクリルアミドゲルによるゲル電気泳動によって特徴づけた。
修飾の程度（％修飾）、即ち、ｄｓＲＮＡ中の塩基の総数に対するポリマーでエステル化された塩基の数の比を、加水分解／ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法の組み合わせによって判定した。精製産物の水溶液と０．５Ｍ ＮａＯＨ溶液との混合物を９９℃で加熱時に、ＭｄｓＲＮＡサンプルの加水分解物を得た。得られたポリアルキルオキシポリマー及びＲＮＡヌクレオチドを、Ｃ１８ １００Ａ ＬＣカラム（２５０×４．６ｍｍ）及びＥＬＳＤを備えた島津製作所製ＬＣ－２０３０Ｃ ＨＰＬＣを用いて定量化した。ｄｓＲＮＡ出発物質及びポリアルキルオキシポリマーを標準として用いて、較正曲線を作成した。
ＭｄｓＲＮＡの殺虫活性を、葉ディスクアッセイを用いてスクリーニングした。コナガ（ＤＢＭ）（Ｐ．ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）を標的化するＭｄｓＲＮＡを、ＤＢＭ幼虫に対してキャベツ葉ディスクを用いて試験した。ＭｄｓＲＮＡ処理物を、補助剤を用いて水に溶解し、希釈し、所望の濃度を得た。所望の処理溶液を、新しいキャベツ葉ディスク（直径３．５ｃｍ）の両面上に噴霧した。各処理を適用し、３回繰り返し、水のみを対照とした。ディスクを容器内の湿ったペーパータオル上に載せた。コナガ（Ｐ．ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）の卵（８～１２個）を各処理ディスクに移し、容器を２６℃及び７２％相対湿度（ＲＨ）でインキュベートした。２日目、３日目、及び４日目、新しい処理ディスクを準備し、その後は毎日、未処理ディスクを準備した。５日目及び８日目、幼虫死亡率及び発育阻止を記録した。％有効性及び標準偏差を各処理について計算し、処理を以下のような１～３のスケールで評価するために使用した：％有効性０～３０％の等級＝１；％有効性３０～５０％の等級＝２、％有効性＞５０％の等級＝３。等級が３である処理は、さらなる最適化試験に進めた。
ツマジロクサヨトウ（ＦＡＷ）（Ｓ．ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）を標的化するＭｄｓＲＮＡを、ＤＢＭ幼虫に対してコーン葉スクエア（９ｃｍ２）を用いて試験した。ＦＡＷの卵１個を各コーン葉上に載せ、容器を上記のとおりにインキュベートした。処理当たり最低１０回の繰り返し及び陰性対照を実行した。４日目、５日目、及び６日目、新しい処理葉スクエアを準備し、その後は毎日、未処理ディスクを準備した。８日目及び１１日目、幼虫死亡率及び発育阻止を記録した。％有効性を各処理について計算し、処理を以下のような１～３のスケールで評価するために使用した：％有効性０～３０％の等級＝１；％有効性３０～５０％の等級＝２、％有効性＞５０％の等級＝３。等級が３である処理は、さらなる最適化試験に進めた。
以下のＭｄｓＲＮＡを、上記の手順に従って調製した。
Figure 2024532413000063
Figure 2024532413000064
Figure 2024532413000065
Figure 2024532413000066
Figure 2024532413000067
実施例４．高分子量ポリアルキルオキシポリマー－ＮＭＩＡ ｄｓＲＮＡの調製
ＭＰＥＧＡ－ｄｓＡＣｈＥ２を調製し、入力０．１でメトキシＰＥＧ酢酸１０Ｋを使用して、実施例３に記載した手順に従って精製した。ベンジル－ＴｒｉＢＡ－Ｃｌを２００ｍＭでＤＭＳＯに溶解した。この溶液の一定分量（３．４ｍＬ）を、反応チューブ内の凍結乾燥ＭＰＥＧＡ－ｄｓＡＣｈＥ（３４ｍｇ）に添加した。チューブを振盪機内で６５℃になるまで１時間かけて加温した。次に、温度を５５℃まで低下させ、１１０μＬのピリジン、続いて２００μｇ／μＬのＤＭＡＰ溶液５００μＬ及び２００μｇ／μＬのＮＭＩＡ溶液４４２μＬを添加した。５分後、別のＮＭＩＡ溶液４４２μＬを添加した（入力＝１０、ＮＭＩＡ／モルのモルでのＲＮＡヌクレオチド）。混合物を、５５℃で９０分間維持し、次に５００ｍＭのクエン酸塩でクエンチし、水で４０ｍＬに希釈した。得られた粗ＰＥＧ－ＮＭＡ－ｄｓＡＣｈＥ２を含む混合物を、タンジェンシャルフローフィルトレーション、ＴＦＦを用いて精製し、９０％を超える純度でＭｄｓＲＮＡを得た。ＰＥＧ－ＮＭＡ－ｄｓＡＣｈＥ２を、非変性アガロースゲル及び変性ポリアクリルアミドゲルによるゲル電気泳動によって特徴づけた。ＨＰＬＣによる％修飾：ＰＥＧ１％、ＮＭＩＡ３７％。
実施例５．高分子量ポリアルキルオキシポリマー－ＦＡ ｄｓＲＮＡの調製
実施例４に記載の手順と同様の手順に従い、ＭＰＥＧＡ－Ｐ４５０ ５Ｋ（１１５）を活性化ラウリル（ＬＡＵ）、オレイン（ＯＬＥ）及びリノール（ＬＩＮ）脂肪酸と反応させ、表４に記載するＭＰＥＧＡ－ＦＡ－Ｐ４５０材料を得た。
Figure 2024532413000068
実施例６．キャベツディスクアッセイ
修飾ｄｓＲＮＡ材料の殺虫活性を、キャベツ葉ディスクバイオアッセイを用いてＤＢＭ幼虫に対して試験し、ＤＢＭ卵を田畑から収集した。キャベツ葉をステージ４～５で収集した。昆虫、細粉等を除去するため、ノズルを使用して水道水で洗浄することにより、葉を調製した。次に、葉をペーパータオルで拭いた。直径が３．５ｃｍの葉ディスクを、金属カッターを使用してキャベツ葉からくり抜いた。所望の処理溶液の水溶液を、５００ｐｐｍ又は１５０ｐｐｍの濃度で調製し、６０ｕＬをディスクの両面に噴霧した。処理を葉ディスクの両面に適用後、次に４つの直径１ｃｍのディスクを処理した３．５ｃｍからくり抜いた。得られる処理した直径１ｃｍのディスクをアッセイで使用した。３匹のコナガ（Ｐ．ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）卵を、ペトリ皿内に置いた各処理ディスク上に載せた。プレートを２６℃及び７２％の室内湿度（ＲＨ）でインキュベートした。４８時間後、新生仔１匹のみを、新しい（第２の）処理ディスクに移した。第２の処理ディスクの２４時間後、第３の処理ディスクを準備した。次に、最大１０日にわたって毎日、幼虫に未処理ディスクを提供した。インキュベーション後２日目から毎日、死亡率を記録した。死亡率は、実験期間中、各試験について計算し、５日後及び７又は９日後の累積的死亡率を計算した。インキュベーションの７日後、２齢又は１齢幼虫の数を死亡幼虫数に加えた。ＤＢＭ幼虫についての一部のＰＥＧ－Ｐ４５０（１１５）例の有効性を図１に示す。田畑で収集したＤＢＭ卵についての２つのＰＥＧ－ｄｓＲＮＡ例の有効性に対する優れた市販品の有効性を図３及び表５に示す。
Figure 2024532413000069
実施例７．イオン溶媒和法を用いたＮＭＡ ｄｓＲＮＡの調製
ベンジルトリブチル塩化アンモニウムを２００ｍＭでＤＭＳＯに溶解した。この溶液の一定分量を、反応チューブ内の凍結乾燥ｄｓＲＮＡに添加した。チューブを振盪機内で６５℃になるまで１時間かけて加温した。次に、温度を５５Ｃまで低下させ、１１０ｕＬのピリジン、続いて２００ｕｇ／ｕＬのＤＭＡＰ溶液と２回に分けて２００ｕｇ／ｕＬのＮ－メチルイサト酸無水物（ＮＭＩＡ）溶液を添加した。混合物を、５５℃で９０分間維持し、次に５００ｍＭのクエン酸塩でクエンチし、水で希釈した。得られた粗ＮＭＡ－ｄｓＲＮＡを含む混合物を、タンジェンシャルフローフィルトレーション、ＴＦＦを用いて精製し、９０％を超える純度でＭｄｓＲＮＡを得た。以下のＮＭＡ－ｄｓＲＮＡを上記の手順に従って調製した：ＮＭＡ－Ｐ４５０（１１５）（３７％ＮＭＡ）、ＮＭＡ－ＶＰＡＳＥ（７）（８１％ＮＭＡ）、ＮＭＩＡ－ＡＣｈＥ（１）（４０％、８０％ＮＭＡ）、ＮＭＡ－Ｂ１（４）、ＮＭＡ－ＴＨ（３）。また、この手順を用いて、ＮＢＡ、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、及びオクタノイルにおけるｄｓＲＮＡ類似体を調製した。この手順は、非限定的にラウロイル、リノレイル等の他の修飾に用いることができる。
実施例８．キャベツ植物田畑におけるＰＥＧ－ｄｓＲＮＡの持続性
田畑におけるＲＮＡｉ活性成分の寿命は、高度な殺虫剤の開発において常に最重視されている。ＲＮＡは、酵素分解に対して脆弱である、非常に不安定な分子であることが既知である。田畑におけるｄｓＲＮＡの半減期の推定値は、大豆植物への葉面処理後、０．５～０．７日の範囲である（Ｂａｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。天然ｄｓＲＮＡ及び２’－Ｏ修飾ｄｓＲＮＡについて、キャベツ葉上に噴霧されたｄｓＲＮＡ配列の時間減衰を、小区画野外試験において試験していた。
スプレーに曝露したキャベツ葉サンプルを、葉のパンチャーを使用し、曝露後のこれら時点で収集した：０日（１時間）、１、２、３、及び５日。各データ点当たり、各プロットからの１２の個別植物から得られた１２の葉サークルを収集し、ドライアイス上で直ぐに凍結させた。次に、虫（ｂａｇ）を、分析の準備ができるまで、ドライアイス又は－８０℃の冷凍庫内で貯蔵する必要がある。
この試験で使用されるｄｓＲＮＡは、以前にフィールド散布試験（ｆｉｅｌｄ ｄｉｓｓｉｐａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ）において報告されているｄｓＳＮＦ７配列である（Ｂａｃｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０２０）。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎによって市販された核酸検出プラットフォームのＱｕａｎｔＧｅｎｅは、スプレー後にキャベツ植物葉面のｄｓＲＮＡ配列を定量するために用いられる好ましい分析法であった。配列及び対応するＱｕａｎｔｉｇｅｎｅプローブセットは、以前に公表された（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。配列は、コナガ（ＤＢＭ）に特異的でなく、ここではあくまで分析を目的として使用する。未処理（非修飾）ｄｓＳＮＦ７、処理Ｃ２を、比較として使用した。
２つの修飾基を使用した：Ｎ－メチルアントラノイル及びＰＥＧＡ。これら２つの基で修飾したｄｓＲＮＡは、以前の試験においてＤＢＭに対する例外的な生物学的活性を示した（例えば、実施例３、表３を参照されたい）。処理ＮＳ２（ＰＥＧＡ－ＮＭＡ－ｄｓＳＮＦ７、ＭｄｓＲＮＡ９０、表３）は、ＮＳ５（ＮＭＡ－ｄｓＳＮＦ７、ＮＭＡが約１００％）を含む全ての他のｄｓＲＮＡとは異なるプロファイルを示し、試験時間枠内でほとんど崩壊しないことを示す、高度に安定化したＭｄｓＲＮＡ画分の存在を示唆した（図２を参照されたい）。
配列－鱗翅類（ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａ）のｄｓＲＮＡ配列
配列番号１～１２は、上に提供される。
ＩＤ１．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ．ＮＣＢＩ参照配列：ＮＭ＿００１３０５５３２．１．５１～１５０
Figure 2024532413000070
 ＩＤ２．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ１５１～２５０
Figure 2024532413000071
 ＩＤ３．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ２５１～３５０
Figure 2024532413000072
 ＩＤ４．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ３５１～４５０
Figure 2024532413000073
 ＩＤ５．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ４５１～５５０
Figure 2024532413000074
 ＩＤ６．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ５５１～６５０
Figure 2024532413000075
 ＩＤ７．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ６５１～７５０
Figure 2024532413000076
 ＩＤ８．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ１５０１～１６００
Figure 2024532413000077
 ＩＤ９．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ１６０１～１７００
Figure 2024532413000078
 ＩＤ１０．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ１４０１～１５００
Figure 2024532413000079
 ＩＤ１１．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ５１～１６６
Figure 2024532413000080
 ＩＤ１２．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ１４７６～１６４９
Figure 2024532413000081
 ＩＤ１３．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ配列
Figure 2024532413000082
 ＩＤ１４．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：７１～２２０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000083
 ＩＤ１５．ＮＭ＿００１３０５５３２．１｜：５１～２００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼサブユニットＥ（ＬＯＣ１０５３８９０１０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000084
 ＩＤ１６．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ配列はサブユニット（ｓｕｂｍｉｔ）Ａ及びＥの両方を包含する
Figure 2024532413000085
 ＩＤ１７．１０１～２００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000086
 ＩＤ１８．２０１～３００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000087
 ＩＤ１９．３０１～４００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000088
 ＩＤ２０．４０１～５００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000089
 ＩＤ２１．５０１～６００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000090
 ＩＤ２２．６０１～７００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000091
 ＩＤ２３．８０１～９００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000092
 ＩＤ２４．９０１～１０００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000093
 ＩＤ２５．１００１～１１００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000094
 ＩＤ２５－２．３５１～５００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000095
 ＩＤ２５－３．９５１～１１００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000096
 ＩＤ２５－４．ＸＭ＿０１１５５９２４５．２｜：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ３５１～５００、９５１～１１００
Figure 2024532413000097
 ＩＤ２６．１０１～２５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）株ＤＢＭ１Ａｃ－Ｓマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼキナーゼキナーゼ４アイソフォームＸ１（ＭＡＰ４Ｋ４）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ、交互スプライシング
Figure 2024532413000098
 ＩＤ２７．９０１～１０５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）株ＤＢＭ１Ａｃ－Ｓマイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼキナーゼキナーゼ４アイソフォームＸ１（ＭＡＰ４Ｋ４）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ、交互スプライシング
Figure 2024532413000099
 ＩＤ２８．５１～１５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000100
 ＩＤ２９．３０１～４００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000101
 ＩＤ３０．４０１～５００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000102
 ＩＤ３１．５０１～６００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000103
 ＩＤ３２．６０１～７００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000104
 ＩＤ３３．６０１～７００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000105
 ＩＤ３４．８０１～９００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000106
 ＩＤ３５．９０１～１０００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000107
 ＩＤ３６．１００１～１１００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000108
 ＩＤ３７．１１０１～１２００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000109
 ＩＤ３８．１２０１～１３００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000110
 ＩＤ４０．１３０１～１４００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000111
 ＩＤ４１．１４０１～１５００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000112
 ＩＤ４２．１５０１～１６００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000113
 ＩＤ４３．１６０１～１７００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000114
 ＩＤ４４．１７０１～１８００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000115
 ＩＤ４５．１８０１～１９００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000116
 ＩＤ４６．１９０１～２０００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000117
 ＩＤ４６－１．１０１～２００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000118
 ＩＤ４６－２．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000119
 ＩＤ４６－３．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１配列ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000120
 ＩＤ４７．１５１～２５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000121
 ＩＤ４８．２５１～３５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000122
 ＩＤ４９．３５１～４５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000123
 ＩＤ５０．４５１～５５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000124
 ＩＤ５１．５５１～６５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000125
 ＩＤ５２．６５１～７５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000126
 ＩＤ５３．７５１～８５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（ＧＳＳ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000127
 ＩＤ５４．８５１～９５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000128
 ＩＤ５４．９５１～１０５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000129
 ＩＤ５７．１０５１～１１５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000130
 ＩＤ５８．１１５１～１２５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000131
 ＩＤ５９．１２５１～１３５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000132
 ＩＤ６０．１３５１～１４５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000133
 ＩＤ６１．１４５１～１５５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000134
 ＩＤ６２．１５５１～１６５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000135
 ＩＤ６３．１６５１～１７５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000136
 ＩＤ６３－２．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000137
 ＩＤ６４．ＡＹ９０４３４２．１：１６０～４６０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）フェロモン生合成活性化神経ペプチド（ＰＢＡＮ）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000138
 ＩＤ６５．１５１～２５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000139
 ＩＤ６６．２５１～３５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000140
 ＩＤ６７．３５１～４５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000141
 ＩＤ６８．４５１～５５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000142
 ＩＤ６９．５５１～６５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000143
 ＩＤ７０．６５１～７５１予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000144
 ＩＤ７１．７５１～８５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000145
 ＩＤ７２．８５１～９５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000146
 ＩＤ７３．９５１～１０５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000147
 ＩＤ７４．１０５１～１１５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000148
 ＩＤ７５．２０１～３５０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000149
 ＩＤ７６．８２６～９７５予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000150
 ＩＤ７７．８２６～９７５予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000151
 ＩＤ７８．２０１～３５０、８２６～９７５予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１０５３９６９２９）、目的配列ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000152
 ＩＤ７９．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：１０１～２００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000153
 ＩＤ８０．２０１～３００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000154
 ＩＤ８１．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：３０１～４００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000155
 ＩＤ８２．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：４０１～５００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000156
 ＩＤ８３．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：５０１～６００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000157
 ＩＤ８４．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：６０１～７００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000158
 ＩＤ８５．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：１５０１～１６００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000159
 ＩＤ８６．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：１６０１～１７００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000160
 ＩＤ８７．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：１７０１～１８００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000161
 ＩＤ８８．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：１８０１～１９００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000162
 ＩＤ８９．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：１９０１～２０００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000163
 ＩＤ９０．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：２００１～２１００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000164
 ＩＤ９１．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：２１０１～２２００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000165
 ＩＤ９２．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：２３０１～２４００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000166
 ＩＤ９３．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：２４０１～２５００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000167
 ＩＤ９４．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：２６０１～２７００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000168
 ＩＤ９５．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：７１～２２０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000169
 ＩＤ９６．ＸＭ＿０３８１１３９７７．１｜：１９７１～２１２０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000170
 ＩＤ９７．３００ＢＰ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１０５３９２３２２）、転写物変異体Ｘ１、配列ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000171
 ＩＤ９８．ＡＹ９７１３７４．１｜：６７６～９７５ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000172
 ＩＤ９９．１０１～２００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000173
 ＩＤ１００．２０１～３００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000174
 ＩＤ１０１．３０１～４００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000175
 ＩＤ１０２．ＡＹ９７１３７４．１｜：４０１～５００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000176
 ＩＤ１０３．ＡＹ９７１３７４．１｜：５０１～６００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000177
 ＩＤ１０４．ＡＹ９７１３７４．１｜：６０１～７００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000178
 ＩＤ１０５．７０１～８００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000179
 ＩＤｓ１０６．８０１～９００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000180
 ＩＤ１０７．１２０１～１３００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000181
 ＩＤ１０８．１３０１～１４００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000182
 ＩＤ１０９．ＡＹ９７１３７４．１｜：１４０１～１５００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000183
 ＩＤ１０９－２ ＡＹ９７１３７４．１｜：７００～８４９ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000184
 ＩＤ１０９－３ ＡＹ９７１３７４．１｜：１１５１～１３００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000185
 ＩＤ１０９－３．ＡＹ９７１３７４．１｜：１１５１～１３００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）目的配列ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000186
 ＩＤ１０９．４．ＡＹ９７１３７４．１｜：６５０～７０７ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＡＣＡＧＧＴＣＡＣＣＴＴＴＴＡＴＴＴＧＡＴＧＡＡＡＧＡＣＣＡＡＴＴＧＣＡＧＧＣＧＴＧＡＡＧＡＡＴＧＴＣＣＴＣＡＧＡＴ（配列番号１３０）
ＩＤ１０９．５．ＡＹ９７１３７４．１｜：７６５～８２２ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＡＣＣＧＴＴＴＣＴＴＣＣＧＡＴＣＴＧＴＴＡＴＡＣＴＴＧＡＣＧＴＴＡＴＡＡＡＣＡＧＴＣＧＴＡＡＣＧＧＣＧＣＣＡＡＡＴＣ（配列番号１３１）
ＩＤ１０９．６ＡＹ９７１３７４．１｜：８２３～８８０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＴＴＣＧＡＧＧＡＡＴＧＡＣＡＴＧＧＴＧＧＡＴＣＴＴＡＴＴＴＣＣＧＡＴＴＧＧＡＡＧＡＡＧＡＡＣＡＡＡＴＡＣＡＴＡＡＣＧ（配列番号１３２）
ＩＤ１０９．７ＡＹ９７１３７４．１｜：１１５９～１２１６ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＣＣＧＣＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＣＴＣＡＴＧＡＧＡＧＡＧＡＴＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＴＡＣＡＣＧＣＴＡ（配列番号１３３）
ＩＤ１０９．８ＡＹ９７１３７４．１｜：１２１７～１２７４ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＣＣＧＡＡＴＧＧＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＡＡＧＡＡＧＧＧＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＣＡＴＡＴＴＣＣＴＧＴＴＴＡＴＣＡＴＴＴＧＣ（配列番号１３４）
ＩＤ１０９．９ＡＹ９７１３７４．１｜：８８１～９３８ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＧＧＡＧＡＣＡＧＴＡＴＴＧＡＴＡＡＴＧＧＣＡＴＡＧＡＣＧＧＴＧＧＡＡＡＣＡＡＧＡＡＧＧＴＧＣＧＴＡＴＣＧＡＡＧＴＣＧ（配列番号１３５）
ＩＤ１０９－１０ ９３９～９９６ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＡＣＧＡＣＧＡＡＣＴＴＴＴＧＧＴＧＡＧＣＣＡＡＴＧＴＧＴＧＣＴＧＴＴＣＴＴＣＣＡＡＧＣＴＧＧＣＴＴＣＣＡＧＣＣＡＡＧ（配列番号１３６）
ＩＤ１０９－１１ １１０１～１１５８ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＴＧＣＡＧＡＣＣＧＡＣＴＧＣＧＴＧＡＣＣＧＣＣＣＴＧＣＣＴＴＴＣＣＴＣＧＣＣＣＡＧＴＧＣＡＴＧＧＡＧＧＡＡＴＣＣＣＴ（配列番号１３７）
ＩＤ１０９－１１ １１５９～１２１６ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＣＣＧＣＡＴＧＴＡＴＣＣＴＣＣＡＧＴＣＴＣＧＧＴＧＣＴＣＡＴＧＡＧＡＧＡＧＡＴＴＴＡＣＡＡＡＧＡＣＴＡＣＡＣＧＣＴＡ（配列番号１３８）
ＩＤ１０９－１２ １２１７～１２７４ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＣＣＧＡＡＴＧＧＴＧＴＧＣＡＴＣＴＡＡＡＧＡＡＧＧＧＧＡＴＧＡＴＧＡＴＡＣＡＴＡＴＴＣＣＴＧＴＴＴＡＴＣＡＴＴＴＧＣ（配列番号１３９）
ＩＤ１０９－１３ １２７５～１３３３ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＡＴＣＡＣＡＡＴＣＣＧＡＡＧＴＡＴＴＴＣＣＣＧＧＡＧＣＣＣＧＡＧＧＴＧＴＴＴＣＧＴＣＣＧＧＡＧＣＧＧＴＴＴＴＣＴＧＡＡ（配列番号１４０）
ＩＤ１０９－１４ １３３４～１３９０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＧＡＡＧＧＡＣＧＧＡＡＡＡＧＴＡＴＴＧＴＣＣＣＧＴＡＴＡＣＣＴＡＣＴＴＧＣＣＣＴＴＴＧＧＧＧＡＣＧＧＧＣＣＧＡＧＧ（配列番号１４１）
ＩＤＰ１．１０１～２５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000187
 ＩＤＰ２．２５１～４００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000188
 ＩＤＰ３．４０１～５５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
ＣＡＧＡＣＡＡＴＴＴＴＡＡＡＡＡＣＴＴＴＴＡＣＣＡＣＡＧＡＧＧＴＧＴＴＧＡＡＡＴＣＧＣＴＡＡＧＡＡＡＧＡＴＡＡＡＣＴＡＧＣＡＣＡＡＡＡＴＧＴ（配列番号１４４）
コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）、ｍＲＮＡ
ＡＣＣＴＴＴＣＣＴＧＡＡＣＧＧＣＡＧＴＣＧＧＴＧＧＡＡＡＣＴＴＡＴＧＡＧＡＣＡＡＡＡＡＡＴＧＡＣＧＣＣＧＣＴＧＴＣＡＣＴＡＧＴＧＣＧＡＡＧＣＴＧＡＡＧＡＡＣＡ（配列番号１４５）
ＩＤＰ４．５５１～７００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000189
 ＩＤＰ５．７０１～８５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000190
 ＩＤＰ６．８５１～１０００ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000191
 ＩＤＰ７．７５１～１０５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000192
 ＩＤＰ８．４５０～７５１ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０ ６ｋ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３９２１６７）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000193
 ＩＤ１１０．ＫＣ７８９７５１．１｜：７２～１４３２ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000194
 ＩＤ１１１．３０１～４００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000195
 ＩＤ１１２．７０１～８００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
ＡＡＧＣＴＴＴＣＡＡＣＧＡＧＡＴＣＧＡＡＧＡＣＴＴＣＴＴＣＡＴＴＧＧＴＴＣＡＡＴＡＡＧＴＣＡＡＧＴＧＡＴＧＡＡＡＴＣＡＡＧＡＧＡＡＣＡＡＧＡＡＡＡＴＧＴＡＡＡＧＡＧＡＣＡＣＧＡＣＴＴＴＧＣＴＧＡＡＡＴ（配列番号１５３）
ＩＤ１１３．１１０１～１２００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000196
 ＩＤ１１４．ＭＮ４８０６６１．１｜：５５～１５００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹＰ６ＡＥ４４ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000197
 ＩＤ１１５．ＭＮ４８０６６１．１｜：７０１～１００１ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹＰ６ＡＥ４４ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000198
 ＩＤ１１６．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ ＮＣＢＩ参照配列：ＸＭ＿０３５５９１１１６．１
Figure 2024532413000199
Figure 2024532413000200
 ＩＤ１１７．１０１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000201
 ＩＤ１１８．１１０１～１２００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000202
 ＩＤ１１９．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹＰ９Ａ５８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ ジェンバンク：ＭＮ４８０６６６．１｜：１０１～２５０、１１０１～１２５０
Figure 2024532413000203
 ＩＤ１２０．１０１～２００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000204
 ＩＤ１２１．２０１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000205
 ＩＤ１２２．１０１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000206
 ＩＤ１２３．３０１～４００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000207
 ＩＤ１２５．１２０１～１３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000208
 ＩＤ１２６．１３０１～１４００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000209
 ＩＤ１２７．１０１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000210
 ＩＤ１２９．予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000211
 ＩＤ１３０．２０１～３００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000212
 ＩＤ１３３．８０１～９００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000213
 ＩＤ１３５．１２０１～１３００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000214
 ＩＤ．１７４９～２０４９ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）株ＤＢＭ１Ａｃ－Ｓ ＡＢＣトランスポーターサブファミリーＨメンバー１（ＡＢＣＨ１） ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ 配列ＩＤ：ＫＰ２６０７８５．１
Figure 2024532413000215
 ＩＤ１３７．｜ＭＮ４８０６６６．１｜：１０１～２５０ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹＰ９Ａ５８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000216
 ＩＤ１３８．１１０１～１２５０ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹＰ９Ａ５８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000217
 ＩＤ１３９．１５１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＡＢＣトランスポーターＧファミリーメンバー２０－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７０５８２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000218
 ＩＤ１４０．ＸＭ＿０３５５８６２１１．１｜：２８０１～３０００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＡＢＣトランスポーターＧファミリーメンバー２０－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７０５８２）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000219
 ＩＤ１４１．２０１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＰＢＡＮ型神経ペプチド（ＬＯＣ１１８２８１０２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000220
 ＩＤ１４２．２５１～３５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＰＢＡＮ型神経ペプチド（ＬＯＣ１１８２８１０２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000221
 ＩＤ１４３．３５１～４５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＰＢＡＮ型神経ペプチド（ＬＯＣ１１８２８１０２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000222
 ＩＤ１４４．４５１～５５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＰＢＡＮ型神経ペプチド（ＬＯＣ１１８２８１０２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000223
 ＩＤ１４５．５５１～６５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＰＢＡＮ型神経ペプチド（ＬＯＣ１１８２８１０２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000224
 ＩＤ１４６．５５１～７００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＰＢＡＮ型神経ペプチド（ＬＯＣ１１８２８１０２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000225
 ＩＤ１４７．ＸＭ＿０３５６０１４５２．１｜：２０１～４００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）ＰＢＡＮ型神経ペプチド（ＬＯＣ１１８２８１０２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000226
 ＩＤ１４９．１５１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７９２２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000227
 ＩＤ１５０．８０１～９５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７９２２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000228
 ＩＤ１５１．１５１～３００、及び８０１～９５０ 提示されたツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７９２２２）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000229
 ＩＤ１５２．３０１～４５０及び１８５１～２０００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）サイトカイン受容体ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000230
 ＩＤ１５３．３０１～４５０ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）サイトカイン受容体ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000231
 ＩＤ１５４．１８５１～２０００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）サイトカイン受容体ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000232
 ＩＤ１５５．２０１～３００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）サイトカイン受容体ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000233
 ＩＤ１５６．３０１～４００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）サイトカイン受容体ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000234
 ＩＤ１５７．４０１～５００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）サイトカイン受容体ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000235
 ＩＤ１５８．１０１～２００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000236
 ＩＤ１５９．２０１～３００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000237
 ＩＤ１６０．３０１～４００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000238
 ＩＤ１６１．４０１～５００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000239
 ＩＤ１６２．８０１～９００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000240
 ＩＤ１６３．９０１～１０００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000241
 ＩＤ１６４．１００１～１１００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000242
 ＩＤ１６５．１４０１～１５００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000243
 ＩＤ１６６．１４５１～１５５０ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000244
 ＩＤ１６７．１５０１～１６００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000245
 ＩＤ１６８．１６０１～１７００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000246
 ＩＤ１６９．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000247
 ＩＤ１７０．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｄｒｅｄｄ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000248
 ＩＤ１７１．２００～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000249
 ＩＤ１７２．３００～４００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000250
 ＩＤ１７３．４００～５００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000251
 ＩＤ１７４．５００～６００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000252
 ＩＤ１７５．予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ ４１００～４２００
Figure 2024532413000253
 ＩＤ１７６．６００～７００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000254
 ＩＤ１７７．２６００～２７００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000255
 ＩＤ１７８．２７００～２８００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000256
 ＩＤ１７９．３８００～３９００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000257
 ＩＤ１８０．３９００～４０００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000258
 ＩＤ１８１．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000259
 ＩＤ１８１．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000260
 ＩＤ１８２．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）二重オキシダーゼ様（ＬＯＣ１１８２６９１４１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000261
 ＩＤ１８３．１０１～２００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000262
 ＩＤ１８４．２０１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000263
 ＩＤ１８５．３０１～４００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000264
 ＩＤ１８６．４０１～５００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000265
 ＩＤ１８７．５０１～６００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000266
 ＩＤ１８８．６０１～７００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000267
 ＩＤ１８９．６５１～７５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000268
 ＩＤ１９０．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000269
 ＩＤ１９１．２０１～５００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ１－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２６１９３１）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000270
 ＩＤ１９２．１０１～２００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000271
 ＩＤ１９３．２０１～３００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000272
 ＩＤ１９４．３０１～４００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000273
 ＩＤ１９５．４０１～５００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000274
 ＩＤ１９６．１９０１～２０００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000275
 ＩＤ１９７．２００１～２１００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000276
 ＩＤ１９８．２０１～３５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000277
 ＩＤ１９９．１９０１～２０５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000278
 ＩＤ２００．２０１～３５０、１９０１～１０５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）タンパク質ｍｅｓｈ（ＬＯＣ１１８２７１０３３）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000279
 ＩＤ２０２．ＭＴ５４４３８０．１｜：１０１～４００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）クローンＳｆ＿１７４４５タンパク質ｍｅｓｈ ｍＲＮＡ、部分ｃｄｓ
Figure 2024532413000280
 ＩＤ２０３．３０１～４００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000281
 ＩＤ２０４．４０１～５００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000282
 ＩＤ２０５．７０１～８００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000283
 ＩＤ２０６．８０１～９００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000284
 ＩＤ２０７．１３５１～１４５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000285
 ＩＤ２１１．ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000286
 ＩＤ２１２．４０１～５００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｖ－ＡＴＰアーゼサブユニットＡ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000287
 ＩＤ２１３．１３０１～１４００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｖ－ＡＴＰアーゼサブユニットＡ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000288
 ＩＤ２１４．１５０１～１６００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｖ－ＡＴＰアーゼサブユニットＡ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000289
 ＩＤ２１８．１００～１５９、１～６０、ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｖ型プロトンＡＴＰアーゼ触媒サブユニットＡ（ＬＯＣ１１８２６７５０１）、転写物変異体Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、及びＸ４
Figure 2024532413000290
 ＩＤ２１９．ＸＭ＿０３５５９１１１６．１｜：１００～１６００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ６Ｂ２－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１１８２７３９１５）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000291
 ＩＤ２２０．３０１～４００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000292
 ＩＤ２２１．７０１～８００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000293
 ＩＤ２２２．１１０１～１２００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹ３２１Ａ８ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000294
 ＩＤ２２３．５０１～６００予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000295
 ＩＤ．６１～３６０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）プロフェノロキシダーゼ１ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ ジェンバンク：ＫＴ００６１３４．１
Figure 2024532413000296
 ＩＤ．ＢＩ－Ｐ４５０ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）チトクロムＰ４５０（ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１）ｍＲＮＡ、ジェンバンク：ＡＹ９７１３７４．１ｎｔ＃ｓ４７１～５２０、５５６～６０５、６２９～６７８、７５２～８０２、８５６～９０５、１３１７～１３６６．
Figure 2024532413000297
 ＩＤ．２０１～５００ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）チトクロムＰ４５０ ＣＹＰ６ＡＥ４４ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ配列ＩＤ：ＭＮ４８０６６１．１
Figure 2024532413000298
 ＩＤ．１６０１～１７８９ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）株ＤＢＭ１Ａｃ－Ｓ ＡＢＣトランスポーターサブファミリーＨメンバー１（ＡＢＣＨ１）ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ配列ＩＤ：ＫＰ２６０７８５．１
Figure 2024532413000299
 ＩＤ．３３２～６３２ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）幼若ホルモンエポキシドヒドロラーゼｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ ジェンバンク：ＪＸ２９７８１４．２
Figure 2024532413000300
 ＩＤ．Ｍ＿０１１５５３５２５．１｜：１６１～４６０予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）タンパク質ｍｅｓｈ－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３８３４７８）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000301
 ＸＭ＿０１１５５３５２５．１｜：３３００～３５９９予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）タンパク質ｍｅｓｈ－ｌｉｋｅ（ＬＯＣ１０５３８３４７８）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000302
 ＩＤ２５－２．３５１～５００予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）毒液カルボキシルエステラーゼ－６（ＬＯＣ１０５３８８３５０）、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000303
 ＩＤ．４～３０３ ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）Ｖ－ＡＴＰアーゼサブユニットＥ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
配列ＩＤ：ＭＴ７０７６１８．１
Figure 2024532413000304
 ＩＤ．コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）空胞性ＡＴＰ合成酵素サブユニットＥのｍＲＮＡ、ジェンバンク：ＡＢ１８９０３２．１ １９１～２４０、５０５～５５４、６８３～８１２、８７５～９２４、１０９１～１１４０、１１７２～１２２２
Figure 2024532413000305
 ＩＤ．３０１～４００、４０１～５００、１３５１～１４５０予測：ツマジロクサヨトウ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ） 未同定ＬＯＣ１１８２６３８０１（ＬＯＣ１１８２６３８０１）、転写物変異体Ｘ１、Ｘ２、及びＸ３、ｍＲＮＡ
Figure 2024532413000306
 ＩＤ．２５２～４９１ 西洋トウモロコシルートワーム（Ｄｉａｂｒｏｔｉｃａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ ｖｉｒｇｉｆｅｒａ）荷電多胞体タンパク質４ｂ（ＬＯＣ１１４３３７３０１）、ｍＲＮＡ配列ＩＤ：ＸＭ＿０２８２８７７１０．１
Figure 2024532413000307
 ＩＤ．８７～３８６予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）サイトカイン受容体様（ＬＯＣ１０５３８０２２９）、ｍＲＮＡ配列ＩＤ：ＸＭ＿０１１５４９７４６．３ Ｄｏｍｅｌｅｓｓ：
Figure 2024532413000308
 ＩＤ．７７～３７６予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）カスパーゼ－８（ＬＯＣ１０５３９０３２４）、ｍＲＮＡ配列ＩＤ：ＸＭ＿０１１５６１６０９．３ Ｄｒｅｄｄ：
Figure 2024532413000309
 ＩＤ．９６～３９５ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）グルタチオンシンテターゼ（Ｇｓｓ）、ｍＲＮＡ配列ＩＤ：ＮＭ＿００１３０９０５４．２ＧＳＳ１：
Figure 2024532413000310
 ＩＤ．予測：コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）二重オキシダーゼ（ＬＯＣ１０５３８９４３７）、ｍＲＮＡ配列ＩＤ：ＸＭ＿０４８６２２３８２．１ Ｄｕｏｘ
Figure 2024532413000311
 ＩＤ．ＭＨ８９９２１５．１｜：４６１～７６１ コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）キチナーゼ５ ｍＲＮＡ、完全ｃｄｓ
Figure 2024532413000312
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Ｔａｎｇ，Ｂｏｗｅｎ，ｅｔ ａｌ．“Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ α－ｅｓｔｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｌａｔｈｉｏｎ ｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｂｒａｄｙｓｉａ ｏｄｏｒｉｐｈａｇａ．”Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６８．２２（２０２０）：６０７６－６０８３．
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本明細書に引用される全ての特許、公開された出願及び参考文献の教示内容は、それら全体が参照により組み込まれる。

Claims (58)

  1. 転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、全てのヌクレオチドの約３０％以下が、独立して式（Ｉ）：
    Figure 2024532413000313
     又はその許容可能な塩（式中、
    Ｂは、核酸塩基であり；
    Ｒ１は、
    Figure 2024532413000314
     から選択される（式中、ｙは１～８の整数であり、ｘは１２～１０００の整数であり、ａは１２～１０００の整数であり、ｂは１２～１０００の整数であり、ｃは１２～１０００の整数である））を含み；且つ
    場合により、全てのヌクレオチドの少なくとも２％が、独立して式（ＩＩＩ）：
    Figure 2024532413000315
     のＬＭＷヌクレオチド又はその許容可能な塩（式中、
    Ｂは、核酸塩基であり；
    Ｒ２は、Ｃ１～Ｃ２５アルキル、Ｃ１～Ｃ２５アルケニル、Ｃ１～Ｃ２５アルキニル、Ｃ５～Ｃ１２アリール又はＣ５～Ｃ１２ヘテロアリールから選択され、ここでＲ２は、場合により、ハロ、Ｃ１～１２アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、又はＣ１～Ｃ１２アルコキシから選択される１つ以上の置換基で置換される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物。
  2. Ｒ１は、
    Figure 2024532413000316
     から選択される、請求項１に記載の組成物。
  3. Ｘは、８０～１０００の整数である、請求項１又は請求項２に記載の組成物。
  4. ａは、８０～１０００の整数である、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. ｂは、８０～１０００の整数である、請求項１～４のいずれか一項に記載の組成物。
  6. ｃは、８０～１０００の整数である、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. Ｒ１は、５，０００～４０，０００Ｄａの分子量を有する、請求項１～６のいずれか一項に記載の組成物。
  8. 前記ＭｄｓＲＮＡは、標的昆虫における発現されたＲＮＡに相補的な配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. 前記ＭｄｓＲＮＡは、コナガのＡＣｈＥ２、Ｐ４５０、ＤＯＭＥＬＥＳＳ、ＤＯＵＸ、ＭＥＳＨ、Ｐ４５０ ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１、毒液又はＶＰＡＳＥ；西洋トウモロコシルートワームのＳＮＦ７；ツマジロクサヨトウのＰ４５０、ＣＹＰ９Ａ５８、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、Ｄｒｅｄｄ、ＶＰＡＳＥ及びタンパク質ＭＥＳＨにおける標的領域に相補的な配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の組成物。
  10. 請求項１に記載の転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）を含む組成物を調製する方法であって、
    （ａ）式（ＩＩ）の化合物：
    Figure 2024532413000317
     を活性化剤と接触させ、式（ＩＩＡ）の化合物
    Figure 2024532413000318
     （式中、Ｘは好適な脱離基である）
    を形成することと；
    （ｂ）式（ＩＡ）の化合物：
    Figure 2024532413000319
     を式（ＩＩＡ）の化合物と接触させ、式（Ｉ）の化合物を形成することと；
    （ｃ）場合により、式（ＩＩ）の化合物：
    Figure 2024532413000320
     を活性化剤と接触させ、式（ＩＶＡ）の化合物
    Figure 2024532413000321
     （式中、Ｘは好適な脱離基である）
    を形成することと；
    （ｄ）場合により、式（ＩＡ）の化合物：
    Figure 2024532413000322
     を式（ＩＶＡ）の化合物と接触させ、式（ＩＩＩ）の化合物を形成することと、
    を含む方法。
  11. （ａ）、（ｂ）、（ｃ）、又は（ｄ）は、実質的に無水溶媒中で実施される、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記無水溶媒は、ＤＭＳＯ又はＤＣＭから選択される、請求項１１に記載の方法。
  13. （ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）は、精製を介在させずに実施される、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. （ａ）、（ｂ）、（ｃ）、及び（ｄ）の間に精製ステップが存在する、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の方法。
  15. （ａ）又は（ｃ）後に、イオン性溶媒が添加される、請求項１０～１４のいずれか一項に記載の方法。
  16. 前記イオン性溶媒は、ベンジルトリブチル塩化アンモニウム又はベンジルトリメチル塩化アンモニウムから選択される、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記活性化剤は、カルボニルジイミダゾールである、請求項１０～１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 前記好適な脱離基は、
    Figure 2024532413000323
     である、請求項１０～１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. （ｂ）は、前記ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり１０未満の当量の比の式（ＩＩＡ）の化合物を有し、且つ（ｄ）は、前記ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり２～５０当量の比の式（ＶＡ）の化合物を有する、請求項１０～１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. （ｂ）は、前記ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり２未満の当量の比の式（ＩＩＡ）の化合物を有し、且つ（ｄ）は、前記ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり４当量～２５当量の比の式（ＶＡ）の化合物を有する、請求項１０～１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. Ｒ１は、
    Figure 2024532413000324
     である、請求項１０～２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. ｘは、８０～１０００の整数である、請求項１０～２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. ａは、８０～１０００の整数である、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の方法。
  24. ｂは、８０～１０００の整数である、請求項１０～２３のいずれか一項に記載の方法。
  25. ｃは、８０～１０００の整数である、請求項１０～２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. Ｒ１は、５，０００～４０，０００Ｄａの分子量を有する、請求項１０～２５のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記ＭｄｓＲＮＡは、標的昆虫における発現されたＲＮＡに相補的な配列を含む、請求項１０～２６のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記ＭｄｓＲＮＡは、コナガのＡＣｈＥ２、Ｐ４５０、ＤＯＭＥＬＥＳＳ、ＤＯＵＸ、ＭＥＳＨ、Ｐ４５０ ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１、毒液又はＶＰＡＳＥ；西洋トウモロコシルートワームのＳＮＦ７；ツマジロクサヨトウのＰ４５０、ＣＹＰ９Ａ５８、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、Ｄｒｅｄｄ、ＶＰＡＳＥ及びタンパク質ＭＥＳＨにおける標的領域に相補的な配列を含む、請求項１０～２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 転写後化学修飾二重鎖ＲＮＡ（ＭｄｓＲＮＡ）であって、ヌクレオチドの少なくとも約２％が、独立して式（ＶＩ）：
    Figure 2024532413000325
     又はその許容可能な塩（式中、
    Ｂは、核酸塩基であり；
    Ｒ３は、アミノ酸、脂肪酸、アルキル；置換アルキル；アルケニル；置換アルケニル；アルキニル；置換アルキニル；アリール；置換アリール；Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、若しくはＣ１～Ｃ１０アルキニル（アルキル及びアルケニルは、線状、分岐又は環状であり得る）；水素；メチル；エチル；プロピル；イソプロピル；ブチル；イソブチル；ｔｅｒｔ－ブチル；ペンチル；ヘキシル；シクロヘキシル；ヘプチル；オクチル；ノニル；デシル；ビニル；アリル；エチニル；ベンジル；シンナミル；Ｃ６～Ｃ１４アリール；Ｃ６～Ｃ１４置換アリール；ヘテロシクリル；Ｃ５～Ｃ１４ヘテロシクリル；フェニル；モノ若しくはジ置換フェニル（置換基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、メチルスルホニル、及びトリフルオロメチルから選択される）；２－ニトロフェニル；４－ニトロフェニル；２；４－ジニトロフェニル；２－トリフルオロメチルフェニル；４－トリフルオロメチルフェニル；スチリル；Ｃ８～Ｃ１６置換スチリル；２－アミノフェニル；モノ若しくはジ置換２－アミノフェニル（置換基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、ハロゲン、ニトロ、メチルスルホニル、及びトリフルオロメチルから選択される）；Ｎ－アルキル－２－アミノフェニル若しくはＮ－アリール－２－アミノフェニル（アルキルは式－ＣｍＨ２ｍ＋１を有し（式中、ｍは１２以下の整数である）、アリールは芳香族部分である）；２－アミノ－３－メチル－フェニル；２－アミノ－５クロロフェニル；２－メチル－５－クロロフェニル；Ｎ－メチル－２－アミノフェニル；Ｎ－エチル－２－アミノフェニル；Ｎプロピル－２－アミノフェニル；Ｎ－ブチル２－アミノフェニル；Ｎペンチル－２－アミノフェニル；Ｎ－メチル－２－アミノ－４－ニトロフェニル；２－メチル－３－フリル；２－メチルニコチル若しくはＮ－トリフルオロメチル－２－アミノフェニル；シラニル；置換シラニル；Ｃ１～Ｃ１０アルキルシラニル；Ｃ３～Ｃ１２トリアルキルシラニル；Ｃ２～Ｃ１２アルコキシアルキル；Ｃ２～Ｃ１２アルコキシアルケニル；Ｃ２～Ｃ１２アルキルチオアルキル；アルキルスルホニル；Ｃ１～Ｃ１０アルキルスルホニル；Ｃ１～Ｃ１０ハロアルキル；Ｃ１～Ｃ１０ハロアルケニル若しくはＣ１～Ｃ１０アミノアルキル；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐＣＨ３、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐＨ、若しくは－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐＣＯＯＲ４（式中、ｐは２～８の整数であり、Ｒ４は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アリール、若しくは置換アリールである）；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＣＯＯＨ；－ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）６ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＯＨ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＣＯＯＭｅ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）４ＯＭｅ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）６ＯＭｅ；－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）８ＯＭｅ；－ＣＨ２ＯＣＨ３；－ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ３；又は－ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される）を含む二重鎖ＲＮＡを含む、ＭｄｓＲＮＡを含む組成物を調製する方法であって、
    （ａ）式（ＩＶ）の化合物：
    Figure 2024532413000326
     を活性化剤と接触させ、式（ＩＶＡ）の化合物
    Figure 2024532413000327
     （式中、Ｘは好適な脱離基である）
    を形成することと；
    （ｂ）式（ＶＩＡ）の化合物：
    Figure 2024532413000328
     を式（ＩＶＡ）の化合物と接触させ、式（ＶＩ）の化合物を形成することと、
    を含む方法。
  30. （ａ）又は（ｂ）は、無水溶媒中で実施される、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記無水溶媒は、ＤＭＳＯ又はＤＣＭから選択される、請求項３０に記載の方法。
  32. （ａ）及び（ｂ）は、精製を介在させずに実施される、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。
  33. （ａ）及び（ｂ）の間に精製ステップが存在する、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の方法。
  34. （ａ）後に、イオン性溶媒が添加される、請求項２９～３３のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記イオン性溶媒は、ベンジルトリブチル塩化アンモニウム又はベンジルトリメチル塩化アンモニウムから選択される、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記活性化剤は、カルボニルジイミダゾールである、請求項２９～３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記好適な脱離基は、
    Figure 2024532413000329
     である、請求項２９～３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. （ｂ）は、前記ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり２～５０当量の比の式（ＩＶＡ）の化合物を有する、請求項２９～３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. （ｂ）は、前記ｄｓＲＮＡのヌクレオチド当たり４～２５当量の比の式（ＩＶＡ）の化合物を有する、請求項２９～３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. Ｒ３は、Ｎ－メチルアントラノイル（ＮＭＡ）、Ｎ－ベンジルアントラノイル（ＮＢＡ）、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、オクタノイル、ラウロイル、リノレイル、オレオイル、ニコチノイル又はベンゾイルである、請求項２９～３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記ＭｄｓＲＮＡは、標的昆虫における発現されたＲＮＡに相補的な配列を含む、請求項２９～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記ＭｄｓＲＮＡは、コナガのＡＣｈＥ２、Ｐ４５０、ＤＯＭＥＬＥＳＳ、ＤＯＵＸ、ＭＥＳＨ、Ｐ４５０ ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１、毒液又はＶＰＡＳＥ；西洋トウモロコシルートワームのＳＮＦ７；ツマジロクサヨトウのＰ４５０、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、Ｄｒｅｄｄ、ＶＰＡＳＥ及びタンパク質ＭＥＳＨにおける標的領域に相補的な配列を含む、請求項２９～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 以下：昆虫、ダニ類、真菌又は雑草のいずれかにおける目的のポリヌクレオチドの発現を修飾する方法であって、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む方法。
  44. 前記発現は、コナガのＡＣｈＥ２、Ｐ４５０、ＤＯＭＥＬＥＳＳ、ＤＯＵＸ、ＭＥＳＨ、Ｐ４５０ ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１、毒液又はＶＰＡＳＥ；西洋トウモロコシルートワームのＳＮＦ７；ツマジロクサヨトウのＰ４５０、ＶＰＡＳＥ、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、Ｄｒｅｄｄ、及びタンパク質ＭＥＳＨ中の標的領域においてなされる、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記標的領域は、Ｐ４５０ ＣＹＰ６ＢＦ１ｖ１中、ＭＥＳＨ転写物変異体Ｘ１中又は毒液カルボキシルエステラーゼ－６中に存在する、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記発現は、ツマジロクサヨトウのＰ４５０ ＣＹＰ９Ａ５８、Ｐ４５０ ＣＹＰ３２１Ａ８、Ｐ４５０ ＣＹＰ６Ｂ２－ｌｉｋｅ、サイトカイン受容体ＤＯＭＥＬＥＳＳ、Ｄｒｅｄｄ、及びタンパク質ＭＥＳＨ転写物変異体Ｘ１中の標的領域においてなされる、請求項４４に記載の方法。
  47. 前記発現は、西洋トウモロコシルートワームのＳＮＦ７中の標的領域においてなされる、請求項４３に記載の方法。
  48. 前記修飾された発現は、死亡率を増加させ、又は成長阻害を誘導し、又は加齢発達を停止させ、又は前記標的昆虫の繁殖を低減する、請求項４３～４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記修飾された発現は、鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）昆虫の繁殖を低減する、請求項４３～４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記鱗翅類（Ｌｅｐｉｄｏｐｔｅｒａｎ）昆虫は、コナガ、マイマイガ、又はツマジロクサヨトウである、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記発現は、死亡率を増加させ、又は成長阻害を誘導し、又は加齢発達を停止させ、又は鞘翅類（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａｎ）昆虫の繁殖を低減する、請求項４３～４８のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記鞘翅類（Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａｎ）昆虫は、コロラドハムシ、アブラナノミハムシ（Ｃａｎｏｌａ ｆｌｅａ ｂｅｅｔｌｅ）又は西洋トウモロコシルートワームである、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記雑草は、オオホナガアオゲイトウ（Ｐａｌｍｅｒ Ａｍａｒａｎｔｈ）である、請求項４３に記載の方法。
  54. 前記真菌は、フサリウム・グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）又はボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）である、請求項４３に記載の方法。
  55. 前記ダニ類は、バロアダニである、請求項４３に記載の方法。
  56. 全ての前記ヌクレオチドの少なくとも約２％～約５０％は、独立して式（ＩＩＩ）のＬＭＷヌクレオチドを含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
  57. Ｒ２は、Ｎ－メチルアントラノイル（ＮＭＡ）、Ｎ－ベンジルアントラノイル（ＮＢＡ）、ジメチルフロイル、－Ｔｙｒ、－Ｔｒｐ、－Ｌｅｕ、オクタノイル、ラウロイル、リノレイル、オレオイル、ニコチノイル又はベンゾイルである、請求項１～９及び５６のいずれか一項に記載の組成物。
  58. 全ての前記ヌクレオチドの少なくとも約２％～約５０％は、独立して式（ＩＩＩ）のＬＭＷヌクレオチドを含む、請求項１０～５５のいずれか一項に記載の方法。
JP2024513327A 2021-08-31 2022-08-31 高分子量修飾ｄｓＲＮＡ組成物 Pending JP2024532413A (ja)

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