JP2024515189A - 細胞免疫療法におけるキメラ共刺激受容体、ケモカイン受容体、及びそれらの使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）及び／またはケモカイン受容体を含むキメラ受容体、ＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体を調製するための方法、ならびにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体を発現する腫瘍浸潤リンパ球、骨髄浸潤リンパ球、及び末梢血リンパ球の治療的集団を含み、固形腫瘍がんを含むがんの治療のための治療的性能及び他の利点が増加する組成物を提供する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２１年４月１９日に出願された米国仮特許第６３／１７６，６７５号、２０２１年７月２０日に出願された米国仮特許第６３／２２３，９２５号、２０２１年１０月１１日に出願された米国仮特許第６３／２５４，２９７号、及び２０２１年１１月３０日に出願された米国仮特許第６３／２８４，１７７号の優先権を主張し、これらの各々の開示全体は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる。

固形腫瘍がんの治療は、特に化学療法、標的療法、及びニボルマブ、ペムブロリズマブ、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブなどのチェックポイント阻害剤、ならびにこれらの免疫療法（ニボルマブ及びイピリムマブなど）の組み合わせ、またはこれらの免疫療法と化学療法との組み合わせを使用する療法を含む、一般的に使用される初期療法に応答しない患者にとって、依然として困難である。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の養子移入を使用した巨大な不応性がんの治療は、初期療法に失敗した患者を含む、予後不良の固形腫瘍がん患者の治療に対する強力なアプローチとなる。Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００６，６，３８３－３９３。免疫療法を成功させるには多数の活性ＴＩＬが必要であり、商品化には堅牢かつ信頼性の高いプロセスが必要である。これは、細胞拡張に関する技術、物流、及び規制上の問題のために達成することが困難であった。ＩＬ－２系ＴＩＬ拡張とそれに続く「急速拡張プロセス」（ＲＥＰ）は、その速度及び効率のためにＴＩＬ拡張の好ましい方法になっている。Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２００２，２９８，８５０－５４、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００５，２３，２３４６－５７、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８，２６，５２３３－３９、Ｒｉｄｄｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９２，２５７，２３８－４１、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６，３３２－４２。ＲＥＰは、フィーダー細胞としての、多くの場合、複数のドナーに由来する照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ、単核細胞（ＭＮＣ）としても知られる）の大過剰（例えば、２００倍）、ならびに抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）及び高用量のＩＬ－２を必要とするが、１４日間にわたってＴＩＬの１，０００倍の拡張をもたらし得る。Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６，３３２－４２。ＲＥＰ手順を受けたＴＩＬは、最前線及び後の治療設定の両方において、黒色腫、頭頸部癌、非小細胞肺癌、及び子宮頸癌を有する患者の宿主免疫抑制に続いて養子細胞療法を成功させた。Ｊｉｍｅｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｓｔｅｒ ３５３，ＳＩＴＣ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｎｏｖ．９－１４，２０２０、Ｓａｒｎａｉｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｒａｌ Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｔ ＡＳＣＯ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｙ ２９－３０，２０２０、Ｊａｚａｅｒｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｓｔｅｒ １８２，ＡＳＣＯ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｙ ３１－Ｊｕｎｅ ４，２０１９。

キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）は、活性化を促進するためにＴ細胞などのエフェクター細胞に共刺激シグナルを提供するように設計された遺伝子操作されたキメラ受容体である。Ｓａｄｅｌａｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２０１３，３，３８８－３９８、Ｌｉａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ Ｒｅｓ．２０２０，８，５７。ＣＣＲは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）修飾Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）産物に基づくＴ細胞療法に最も一般的に関連付けられ、ＣＡＲと組み合わせて使用して活性化を高めることができる。しかしながら、ＣＣＲは、例えば、活性化のために腫瘍関連抗原または他の抗原を使用する、固形腫瘍がんにおけるポリクローナルＴＩＬ療法を含む、他の出現しつつある細胞療法とともに広範囲に探索されていない。現在のＴＩＬ療法は安全性及び有効性を実証しているが、特に局所進行性または転移性固形腫瘍がんを有する患者にとって、とりわけ改善された有効性、奏効期間、及び安全性を有するＴＩＬ療法に対する重要な満たされていないニーズが存在する。

本発明は、固形腫瘍患者の治療に使用するために、ＣＣＲ及びその組成物を使用して、強化された特性を有するＴＩＬを作製及び使用するための方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾してＣＣＲを発現させることと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾してＣＣＲを発現させることと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＩＬ－１３Ｒα２、ＦＡＳ、ＴＧＦβＲＩＩ、及びＭＵＣ１６からなる群から選択されるタンパク質に結合する。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞外ドメインは、ＰＤ－１ドメインである。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２１Ｒ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２１Ｒ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通ドメインは、ＣＤ３α、ＣＤ３β、ＣＤζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγの膜貫通領域からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２１Ｒ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通ドメインは、ＣＤ３α、ＣＤ３β、ＣＤζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγの膜貫通領域からなる群から選択され、ステップ（ｄ）は、ＣＣＲを発現するように、レンチウイルスを使用してＴＩＬを遺伝子修飾することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２１Ｒ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通ドメインは、ＣＤ３α、ＣＤ３β、ＣＤζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγの膜貫通領域からなる群から選択され、ステップ（ｄ）は、ＣＣＲを発現するように、レンチウイルスを使用してＴＩＬを遺伝子修飾することをさらに含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法であって、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２１Ｒ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通ドメインは、ＣＤ３α、ＣＤ３β、ＣＤζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγの膜貫通領域からなる群から選択され、ステップ（ｄ）は、ＣＣＲを発現するように、レンチウイルスを使用してＴＩＬを遺伝子修飾することをさらに含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾され、がんは、ＴＩＬの投与によって治療される固形腫瘍がんである。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、肉腫、膵臓癌、肝臓癌、神経膠芽細胞腫、胃腸癌、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択され、患者は、ヒトである。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤を使用して、ＴＩＬと組み合わせてさらに治療され、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ドスタリマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、レチファンリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、非小細胞肺がんであり、患者は、
１）＜１％のＰＤ－Ｌ１の所定の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、
２）１％～４９％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコア、または
３）１つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも１つを有する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、非小細胞肺がんであり、患者は、＜１％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳを有する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、患者は、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療のために適応されていないがんを有する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、患者は、１つ以上のドライバー変異の非存在を有し、１つ以上のドライバー変異は、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、化学療法剤または化学療法レジメンによる治療に対して不応性または耐性である。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤による治療に対して不応性または耐性であり、ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤は、ベバシズマブ、ラニビズマブ、イクルクマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤による治療に対して不応性または耐性であり、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ドスタリマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、レチファンリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＣＴＬＡ－４阻害剤による治療に対して不応性または耐性であり、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ザリフレリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－２は、最初に、第１の細胞培養培地中及び第２の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ～６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＯＫＴ－３抗体は、最初に、第２の細胞培養培地中に約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第１の細胞培養培地は、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第２の細胞培養培地は、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得る。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップを含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で及びフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いて、フルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で３日間投与するステップを含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与した翌日から開始するＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得る。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与したのと同じ日に開始するＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得る。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、許容範囲まで８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを含む高用量ＩＬ－２レジメンである。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、ベンペガルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、ＴＨＯＲ－７０７、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、ネムバロイキンアルファ、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、配列番号２９及び配列番号３８からなる群から選択される重鎖と、配列番号３７及び配列番号３９からなる群から選択される軽鎖と、を含む抗体、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、治療上有効なＴＩＬ集団が投与され、約２×１０^９～約１５×１０^１０ＴＩＬを含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第１の拡張は、１１日以内の期間にわたって行われる。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第２の拡張は、１１日以内の期間にわたって行われる。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、抗ＣＤ１９ドメイン、抗ＣＤ２０ドメイン、抗ＣＤ２２ドメイン、抗ＣＤ２４ドメイン、抗ＣＤ３３ドメイン、抗ＣＤ３８ドメイン、抗ＣＤ３９ドメイン、抗ＣＤ７３ドメイン、抗ＣＤ１２３ドメイン、抗ＣＤ１３８ドメイン、抗ＣＤ２２８ドメイン、抗ＬＲＲＣ１５ドメイン、抗ＣＥＡドメイン、抗ＦＲαドメイン、抗ＥＰＣＡＭドメイン、抗ＰＤ－Ｌ１ドメイン、抗ＰＳＭＡドメイン、抗ｇｐ１００ドメイン、抗ＭＵＣ１ドメイン、抗ＭＣＳＰドメイン、抗ＥＧＦＲドメイン、抗ＧＤ２ドメイン、抗ＴＲＯＰ－２ドメイン、抗ＧＰＣ３ドメイン、抗ＭＩＣＡドメイン、抗ＭＩＣＢドメイン、抗ＶＩＳＴＡドメイン、抗ＵＬＢＰドメイン、抗ＨＥＲ２ドメイン、抗ＭＣＭ５ドメイン、抗ＦＡＰドメイン、抗５Ｔ４ドメイン、抗ＬＦＡ－１ドメイン、抗Ｂ７－Ｈ３ドメイン、及び抗ＭＵＣ１６ドメインからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
細胞外ドメインは、ＰＤ－１ドメインである。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外ドメインと、
ｉｉ．任意選択で、ヒンジドメインと、
ｉｉｉ．任意選択で、膜貫通ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
細胞内ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物であって、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞外タンパク質ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物であって、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞外タンパク質ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、抗ＣＤ１９ドメイン、抗ＣＤ２０ドメイン、抗ＣＤ２２ドメイン、抗ＣＤ２４ドメイン、抗ＣＤ３３ドメイン、抗ＣＤ３８ドメイン、抗ＣＤ３９ドメイン、抗ＣＤ７３ドメイン、抗ＣＤ１２３ドメイン、抗ＣＤ１３８ドメイン、抗ＣＤ２２８ドメイン、抗ＬＲＲＣ１５ドメイン、抗ＣＥＡドメイン、抗ＦＲαドメイン、抗ＥＰＣＡＭドメイン、抗ＰＤ－Ｌ１ドメイン、抗ＰＳＭＡドメイン、抗ｇｐ１００ドメイン、抗ＭＵＣ１ドメイン、抗ＭＣＳＰドメイン、抗ＥＧＦＲドメイン、抗ＧＤ２ドメイン、抗ＴＲＯＰ－２ドメイン、抗ＧＰＣ３ドメイン、抗ＭＩＣＡドメイン、抗ＭＩＣＢドメイン、抗ＶＩＳＴＡドメイン、抗ＵＬＢＰドメイン、抗ＨＥＲ２ドメイン、抗ＭＣＭ５ドメイン、抗ＦＡＰドメイン、抗５Ｔ４ドメイン、抗ＬＦＡ－１ドメイン、抗Ｂ７－Ｈ３ドメイン、及び抗ＭＵＣ１６ドメインからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞外タンパク質ドメインは、ＰＤ－１ドメインである。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞内タンパク質ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞内タンパク質ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通タンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞内タンパク質ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通タンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、ヒンジタンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞内タンパク質ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通タンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、ヒンジタンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、組成物は、腫瘍浸潤リンパ球をさらに含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞内タンパク質ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通タンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、ヒンジタンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、組成物は、骨髄浸潤リンパ球をさらに含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物を含み、ＣＣＲは、
ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含み、
細胞内タンパク質ドメインは、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、膜貫通タンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、ヒンジタンパク質ドメインは、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択され、組成物は、末梢血リンパ球をさらに含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾される。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾され、がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾してケモカイン受容体を発現させることと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾され、がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、含み、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾され、がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、含み、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質であり、ステップ（ｄ）は、ケモカイン受容体を発現するように、レンチウイルスまたはレトロウイルスを使用してＴＩＬを遺伝子修飾することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾され、がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、含み、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質であり、ステップ（ｄ）は、ケモカイン受容体を発現するように、レンチウイルスまたはレトロウイルスを使用してＴＩＬを遺伝子修飾することをさらに含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾され、がんは、ＴＩＬの投与によって治療される固形腫瘍がんである。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、肉腫、膵臓癌、肝臓癌、神経膠芽細胞腫、胃腸癌、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択され、患者は、ヒトである。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤を使用して、ＴＩＬと組み合わせてさらに治療され、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ドスタリマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、レチファンリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、非小細胞肺がんであり、患者は、
１）＜１％のＰＤ－Ｌ１の所定の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、
２）１％～４９％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコア、または
３）１つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも１つを有する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、非小細胞肺がんであり、患者は、＜１％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳを有する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、患者は、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療のために適応されていないがんを有する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、患者は、１つ以上のドライバー変異の非存在を有し、１つ以上のドライバー変異は、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、化学療法剤または化学療法レジメンによる治療に対して不応性または耐性である。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤による治療に対して不応性または耐性であり、ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤は、ベバシズマブ、ラニビズマブ、イクルクマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤による治療に対して不応性または耐性であり、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ドスタリマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、レチファンリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、がんは、ＣＴＬＡ－４阻害剤による治療に対して不応性または耐性であり、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ザリフレリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＩＬ－２は、最初に、第１の細胞培養培地中及び第２の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ～６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、ＯＫＴ－３抗体は、最初に、第２の細胞培養培地中に約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第１の細胞培養培地は、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第２の細胞培養培地は、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、この方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得る。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップを含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で及びフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で３日間投与するステップを含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与した翌日から開始するＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得る。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与したのと同じ日に開始するＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得る。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、許容範囲まで８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを含む高用量ＩＬ－２レジメンである。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、ベンペガルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、ＴＨＯＲ－７０７、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、ネムバロイキンアルファ、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、方法は、ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含み得、ＩＬ－２レジメンは、配列番号２９及び配列番号３８からなる群から選択される重鎖と、配列番号３７及び配列番号３９からなる群から選択される軽鎖と、を含む抗体、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、治療上有効なＴＩＬ集団が投与され、約２×１０^９～約１５×１０^１０ＴＩＬを含む。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第１の拡張は、１１日以内の期間にわたって行われる。

前述の実施形態のうちのいずれかにおいて、第２の拡張は、１１日以内の期間にわたって行われる。

いくつかの実施形態では、本発明は、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、請求項９４に記載の組成物、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質である。

いくつかの実施形態では、請求項９４または９５に記載の組成物、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される。

いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体を含む組成物を提供し、組成物は、腫瘍浸潤リンパ球、骨髄浸潤リンパ球、または末梢血リンパ球をさらに含む。

ステップＡ～Ｆの概要を提供する例示的なＧｅｎ２（プロセス２Ａ）チャート。 ＴＩＬ製造のためのＧｅｎ２（プロセス２Ａ）の実施形態のプロセスフローチャート。 ＴＩＬ製造のためのＧｅｎ２（プロセス２Ａ）の実施形態のプロセスフローチャート。 ＴＩＬ製造のためのＧｅｎ２（プロセス２Ａ）の実施形態のプロセスフローチャート。 凍結保存されたＴＩＬの例示的な製造プロセス（約２２日）の実施形態の図を示す。 ２２日間のＴＩＬ製造プロセスであるプロセス２Ａの実施形態の図を示す。 ＴＩＬ製造のためのプロセス１Ｃ及びＧｅｎ２（プロセス２Ａ）の例示的な実施形態からのステップＡ～Ｆの比較表。 ＴＩＬ製造のためのプロセス１Ｃの実施形態とＧｅｎ２（プロセス２Ａ）の実施形態との詳細な比較。 例示的なＧｅｎ３型ＴＩＬ製造プロセス。 ＴＩＬ製造のための２Ａプロセス（およそ２２日プロセス）とＧｅｎ３プロセス（およそ１４日～１６日プロセス）の実施形態との比較を示す。 ステップＡ～Ｆの概要を提供する例示的なプロセスＧｅｎ３チャート（およそ１４日～１６日プロセス）。 ３つのプロセスバリエーションの各々について、ステップＡ～Ｆ（およそ１４日～１６日プロセス）の概要とともに３つの例示的なＧｅｎ３プロセスを提供するチャート。 ステップＡ～Ｆの概要を提供する例示的な修正Ｇｅｎ２様プロセス（およそ２２日プロセス）。 Ｇｅｎ２（プロセス２Ａ）とＧｅｎ３プロセスとの比較のための実験フローチャートを提供する。 様々なＧｅｎ２（プロセス２Ａ）とＧｅｎ３．１プロセス実施形態との比較を示す。 Ｇｅｎ２、Ｇｅｎ２．１及びＧｅｎ３．０プロセスの実施形態の様々な特徴を説明する表。 Ｇｅｎ３．１と称される、Ｇｅｎ３プロセスの実施形態のための培地条件の概要。 Ｇｅｎ２、Ｇｅｎ２．１及びＧｅｎ３．０プロセスの実施形態の様々な特徴を説明する表。 Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３．０プロセスの実施形態の様々な特徴を比較する表。 記載された拡張プロセスの様々な実施形態における培地の使用を提供する表。 Ｇｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ３拡張プラットフォームを使用して造血器悪性腫瘍からＴ細胞を拡張するための方法の例示的な実施形態の概略図。 構造Ｉ－Ａ及びＩ－Ｂを提供する。円筒は、個々のポリペプチド結合ドメインを指す。構造Ｉ－Ａ及びＩ－Ｂは、例えば、４－１ＢＢＬまたは４－１ＢＢに結合する抗体から誘導される３つの線形に結合したＴＮＦＲＳＦ結合ドメインを含み、これらを折り畳んで三価タンパク質を形成し、次いでこれをＩｇＧ１－Ｆｃ（ＣＨ３及びＣＨ２ドメインを含む）によって第２の三価タンパク質に結合し、次いでこれを使用して、三価タンパク質のうちの２つをジスルフィド結合（小さい長楕円）によって一緒に結合し、構造を安定化し、６つの受容体及びシグナル伝達タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインを一緒にして、シグナル伝達複合体を形成することができるアゴニストを提供する。円筒として示されるＴＮＦＲＳＦ結合ドメインは、例えば、親水性残基及び柔軟性のためのＧｌｙ及びＳｅｒ配列、ならびに溶解性のためのＧｌｕ及びＬｙｓを含み得るリンカーによって結合されたＶ_Ｈ鎖及びＶ_Ｌ鎖を含む、ｓｃＦｖドメインであり得る。 Ｇｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ３．１プロセス（１６日プロセス）の例示的な実施形態のプロセス概要を提供する。 Ｇｅｎ３．１プロセス（１６～１７日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 例示的なＧｅｎ２プロセス及び例示的なＧｅｎ３プロセスの比較表。 調製タイムラインを示すＧｅｎ３プロセス（１６～１７日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ３プロセス（１４～１６日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の例示的な実施形態の概略図。 Ｇｅｎ２、Ｇｅｎ２．１、及びＧｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の実施形態の比較。 Ｇｅｎ２、Ｇｅｎ２．１、及びＧｅｎ３プロセス（１６日プロセス）の実施形態の比較。 Ｇｅｎ３実施形態の構成要素。 Ｇｅｎ３実施形態のフローチャート比較（Ｇｅｎ３．０、Ｇｅｎ３．１対照、Ｇｅｎ３．１試験）。 Ｇｅｎ３プロセス（１６～１７日プロセス）の例示的な実施形態の構成要素が示される。 承認基準表 例示的なｓｃＦｖ ＣＣＲ構築物の図。 例示的なＰＤ－１スイッチＣＣＲ設計。 代替のＣＤ２８シグナル伝達ドメインを有する例示的なＰＤ－１スイッチＣＣＲ設計。 例示的なＣＣＲ構築物設計。 ＩｇＧ４ヒンジドメイン及び膜貫通ドメインと、ＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインと、本発明の実施形態とを含む、抗ＴＲＯＰ－２（Ｖ_Ｌ－リンカー－Ｖ_Ｈ）ＣＣＲのＴＩＬにおけるＣＣＲのレンチウイルス発現のための例示的なベクター設計。 ＣＤ８αヒンジドメイン及び膜貫通ドメインと、ＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインと、本発明の実施形態とを含む、抗ＦＡＰ（Ｖ_Ｌ－リンカー－Ｖ_Ｈ）ＣＣＲのＴＩＬにおけるＣＣＲのレンチウイルス発現のための例示的なベクター設計。 ＣＤ８αヒンジドメイン及び膜貫通ドメインと、ＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインと本発明の実施形態とを含む、３８Ａ１抗体を使用する抗ＰＤ－Ｌ１（Ｖ_Ｌ－リンカー－Ｖ_Ｈ）ＣＣＲのＴＩＬにおけるＣＣＲのレンチウイルス発現のための例示的なベクター設計。 ＴＩＬにおけるＣＸＣＲ１のレトロウイルス発現のための例示的なベクター設計、及び本発明の実施形態。 ＴＩＬにおけるＣＣＲ８のレトロウイルス発現のための例示的なベクター設計、及び本発明の実施形態。 子宮頸癌腫瘍消化物のフローサイトメトリー分析。ＥＰＣＡＭフィコエリトリン（ＰＥ）／ＴＲＯＰ－２ ＰＥ。 ＥＰＣＡＭアロフィコシアニン（ＡＰＣ）／ＴＲＯＰ－２ ＰＥの子宮頸癌腫瘍消化物のフローサイトメトリー分析。 頭頸部扁平上皮癌消化物におけるＥＰＣＡＭ／ＴＲＯＰ－２の発現。 非小細胞肺癌腫瘍消化物におけるＥＰＣＡＭ／ＴＲＯＰ－２の発現。 Ｇｅｎ２ ＲＥＰ調製物からのＴＩＬ調製物における細胞頻度分布。９つの異なるＴＩＬを解凍し、２つの異なる日に特性評価のために染色し、ＰＢＭＣを対照として使用した。 Ｇｅｎ２ ＲＥＰ調製物からのＴＩＬ調製物における細胞頻度分布。９つの異なるＴＩＬを解凍し、２つの異なる日に特性評価のために染色し、ＰＢＭＣを対照として使用した。 ＣＤ８^＋ＴＩＬ上のケモカイン受容体を示すフローサイトメトリーの結果。 ＣＤ４^＋ＴＩＬ上のケモカイン受容体を示すフローサイトメトリーの結果。 本発明のキメラ共刺激受容体の例示的な実施形態。ＰＤ－１または抗ＰＤ－１（３８Ａ１）ｓｃＦｖ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を使用する６つのＣＣＲ構築物を示す。ＴＭは、膜貫通ドメインを指し、ＩＣＮは、細胞内ドメインを指す。 本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である、ｐＱＣＸＩＸベクター骨格のマップ。 ＨＥＫレポーター細胞におけるＣＣＲ構築物「ＣＣＲ４」及び「ＣＣＲ５」（図５１に示されるとおり）の発現。 本発明のキメラ共刺激受容体の例示的な実施形態。 本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメイン（配列番号６５８）の両方を使用した、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列のドメインマップ。 本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメイン（配列番号６５９）の両方を使用した、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列のドメインマップ。 ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒβ膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒγ膜貫通及び細胞内）（配列番号６６０）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列のドメインマップ。 ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８Ｒ１－膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ－膜貫通及び細胞内）（配列番号６６１）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列のドメインマップ。 ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）（配列番号６６２）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である、アミノ酸配列のドメインマップ。 ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）（配列番号６６３）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である、アミノ酸配列のドメインマップ。 本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である、ｐＬｅｎｔｉベクターのマップ。 （Ａ）ビエピトープＣＣＲ８（３８Ａ１ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－Ｔ２Ａ－１９Ｈ９ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ）で形質転換され、ストレプトアビジン蛍光染色後にビオチン抱合ＰＤ－Ｌ１タンパク質とインキュベートされたＨＥＫ－ＩＬ－１８レポーター細胞の結果、及び（Ｂ）ＣＣＲ１２（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－Ｔ２Ａ－ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ）で形質転換され、ストレプトアビジン蛍光染色後にビオチン抱合ＴＲＯＰ２タンパク質とインキュベートされたＨＥＫ－ＩＬ－１８レポーター細胞の結果。ＣＣＲ８及びＣＣＲ１２の両方の発現は、これらの結果によって実証される。 ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞を、競合ｈＰＤ－Ｌ１結合抗体１９Ｈ９の存在下で、示された（ｘ軸）濃度の、ＰＤ－Ｌ１を標的とする３８Ａ１－ＩｇＧ４－ＨＡ（ヘマグルチニン）抗体とインキュベートした。２時間のインキュベーション後、細胞を洗浄し、抗ＨＡ－ＡＰＣ（アロフィコシアニン）で染色した。ｘ軸は、滴定した３８Ａ１－ＩｇＧ４－ＨＡ抗体の濃度を示し、Ｙ軸は、全ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞のＰＤ－Ｌ１陽性染色細胞の％を示す。 ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞を、競合ｈＰＤ－Ｌ１結合抗体３８Ａ１の存在下で、示された（ｘ軸）濃度の、ＰＤ－Ｌ１を標的とする１９Ｈ９－ＩｇＧ４－Ｆｌａｇ抗体とインキュベートした。２時間のインキュベーション後、細胞を洗浄し、抗Ｆｌａｇ－ＡＦ４８８で染色した。図６４では、ｘ軸は、滴定した１９Ｈ９－ＩｇＧ４－Ｆｌａｇ抗体の濃度を示し、ｙ軸は、全ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞のＰＤ－Ｌ１陽性染色細胞の％を示す。 各軸上の示された抗体の染色を伴うフローサイトメトリー結果。 ｐａｎ－ＡＫＴ阻害剤イパタセルチブ（０．３μＭ及び１μＭ）の２つの異なる濃度でのＴＩＬ拡張及び生存率に対するＡＫＴ阻害剤（ＡＫＴｉ）処置の効果は、ＲＥＰ前及びＲＥＰ中（青色のバー）、またはＲＥＰ段階中のみ（紫色のバー）のいずれかに添加される。２２日間の拡張プロセスの終了時のＴＩＬの倍率拡張及び生存率を示す。凍結保存細胞での拡張プロセス後のＣＤ８^＋、ＣＤ４^＋及びＣＤ４^＋（Ｆｏｘｐ３^＋）細胞の頻度も示される。 ２つのＰＤ－Ｌ１抗体（３８Ａ１及び１９Ｈ９）の遮断有効性を評価するための実験設計。 ２つのＰＤ－Ｌ１抗体（３８Ａ１及び１９Ｈ９）の遮断有効性を評価するための実験の結果。 対照及びＡＫＴ阻害剤（ＡＫＴｉ）処置したＴＩＬのＴ細胞サブセット。治療後のＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋ＴＩＬにおけるＴ_ＣＭ（ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＣＲ７^＋）、Ｔ_ＥＭ（ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＣＲ７^－）及びＴ_ＥＭＲＡ（ＣＤ４５^＋ＣＣＲ７^－）細胞の頻度を示し、＊は、ｐ＜０．０５を示す。 対照及びＡＫＴ阻害剤（ＡＫＴｉ）処置したＴＩＬ上のサイトカイン及びケモカイン受容体の発現。凍結保存された対照またはＡＫＴｉ処置したＴＩＬを、フローサイトメトリーで分析した。ＩＬ－７Ｒ^＋及びＣＸＣＲ３^＋ＣＤ８^＋ＴＩＬの代表的なヒストグラム及び頻度であり、＊は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１を示す。 フローサイトメトリーによって評価される、対照及びＡＫＴ阻害剤（ＡＫＴｉ）処置したＣＤ８^＋ＴＩＬにおけるＣＤ６９及びＣＤ３９の単一及び二重陽性集団の分布であり、＊は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１を示す。 ＣＤ６９^－ＣＤ３９^－及びＣＤ６９^＋ＣＤ３９^＋ＣＤ８^＋ＴＩＬにおける阻害受容体及び転写因子の発現；ＣＤ６９^－ＣＤ３９^－及びＣＤ６９^＋ＣＤ３９^＋細胞におけるＰＤ１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、及びＴＩＧＩＴならびにＴｂｅｔ、Ｅｏｍｅｓ、ＢＡＴＦ、及びＴＯＸの頻度であり、＊は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１を示し、＊＊＊＊は、ｐ＜０．０００１を示す。ＣＤ６９^－ＣＤ３９^－及びＣＤ６９^＋ＣＤ３９^＋ＣＤ８^＋ＴＩＬ上のＣＤ６２Ｌ発現の代表的なヒストグラム及び頻度を示す。 一晩の刺激後の対照及びＡＫＴ阻害剤（ＡＫＴｉ）処置したＴＩＬにおけるマーカー発現。凍結保存された対照及び１μＭのＡＫＴｉでＲＥＰ前及びＲＥＰの両方で処置したＴＩＬを、１：５のビーズ対細胞比で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで一晩刺激した。ＣＤ６９^－ＣＤ３９^－及びＣＤ６９^＋ＣＤ３９^＋細胞の頻度、ならびにＣＤ８^＋ＴＩＬ上の転写因子発現であり、＊は、ｐ＜０．０５を示し、＊＊は、ｐ＜０．０１を示し、＊＊＊は、ｐ＜０．００１を示す。 対照及びＡＫＴ阻害剤（ＡＫＴｉ）処置したＣＤ８^＋ＴＩＬにおけるサイトカイン発現であり、＊は、ｐ＜０．０５を示す。 同種異系細胞傷害性アッセイの結果。左パネルには、凍結保存された対照及び１ｕＭのＡＫＴ阻害剤（イパタセルチブ）でＲＥＰ前及びＲＥＰの両方の間に処置されたＴＩＬを、１０：１のエフェクター対標的細胞の比でＫＩＬＲ（登録商標）ＴＨＰ－１細胞（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ，ＵＳＡ）と２４時間共培養して、同種異系設定での細胞傷害性を測定した結果を示す。右パネルは、１：１のビーズ対細胞の比で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより５日毎に刺激された、対照及びＡＫＴ阻害剤（ＡＫＴｉ）処置したＴＩＬからの結果を示す。第３の刺激の３日後、細胞を洗浄し、ビーズを除去し、細胞を、ＫＩＬＲ ＴＨＰ－１細胞と１０：１のエフェクター対標的細胞の比で２４時間共培養した。 デシタビンの濃度の増加に伴う、対照ＴＩＬ（灰色のバー）及びデシタビン処置したＴＩＬの拡張、生存率、及びＴ細胞分布データを示す。処置は、ＲＥＰ段階中のみ（青色のバー）またはＲＥＰ前及びＲＥＰ段階中（緑色のバー）のいずれかに加えた。パネルＡは、２２日間の拡張プロセスの終了時のＴＩＬの倍率拡張及び生存率を示す。パネルＢは、凍結保存された細胞上での拡張プロセス後のフローサイトメトリーによるＣＤ８^＋、ＣＤ４^＋、及びＣＤ４^＋（Ｆｏｘｐ３＋）細胞の頻度を示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。 対照及びデシタビン処置したＴＩＬにおけるＴ細胞サブセット。Ｔ_ＣＭ（ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＣＲ７^＋）、Ｔ_ＥＭ（ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＣＲ７^－）、及びＴ_ＥＭＲＡ（ＣＤ４５^＋ＣＣＲ７^－）細胞の頻度は、拡張後のパネルＡ（ＣＤ８^＋）及びパネルＢ（ＣＤ４^＋）ＴＩＬに示されている。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。 デシタビン処置したＴＩＬ上の表面マーカーの発現。対照の凍結保存ＴＩＬまたはデシタビン処置した凍結保存ＴＩＬを解凍し、フローサイトメトリー分析のために染色した。パネルＡは、ＣＤ８^＋ＴＩＬにおけるＣＤ２５、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、及びＩＬ－７Ｒの発現を示す。パネルＢは、ＣＤ８^＋ＴＩＬ上の阻害性受容体ＰＤ－１及びＴＩＧＩＴの発現を示す。ＣＤ４^＋ＴＩＬについて同様の結果が観察された。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。 デシタビン処置したＴＩＬにおける転写因子の発現。対照またはデシタビン処置した凍結保存ＴＩＬを解凍し、フローサイトメトリー分析のために染色した。ＣＤ８^＋ＴＩＬにおけるＥｏｍｅｓ、ＫＬＦ２、ＢＡＴＦ、及びＴ－ｂｅｔの発現を示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。 インビトロ刺激後の対照及びデシタビン処置したＴＩＬにおけるサイトカイン発現。凍結保存された対照及びデシタビン処置したＴＩＬを、１：５のビーズ対細胞比で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで一晩刺激した。ＣＤ８^＋ＴＩＬ上のＩＦＮ－γ（ＩＦＮγ）、ＴＮＦ－α（ＴＮＦα）、及びグランザイムＢ（ＧＺＭＢ）の発現を示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。 対照及びデシタビン処置したＴＩＬの細胞傷害性。パネルＡでは、凍結保存された対照ＴＩＬ及び１００ｎＭのＤＡＣによりＲＥＰ処置したＴＩＬを、１０：１のエフェクター：標的細胞比でＫＩＬＲ（登録商標）ＴＨＰ－１細胞（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ，ＵＳＡ）と２４時間共培養して、同種異系設定での細胞傷害性を測定した。パネルＢでは、対照及びデシタビン処置したＴＩＬを、ＴｒａｎｓＡｃｔｔｍ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で５日毎に刺激した。第３の刺激の１日後、細胞を洗浄し、１０：１のエフェクター対標的細胞比でＫＩＬＲ ＴＨＰ－１細胞と２４時間共培養して、細胞傷害性を測定した。＊Ｐ＜０．０５。 対照ＴＩＬ及びデシタビン処置したＴＩＬを、ＴｒａｎｓＡｃｔｔｍ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で５日毎に刺激した。第３の刺激の１日後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー分析のために染色した。反復刺激後のＴＩＬにおけるＩＬ－７Ｒ、ＰＤ－１、及びＴＩＭ３の発現をパネルＡに示し、反復刺激後のＴＩＬにおける転写因子の発現レベルをパネルＢに示す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１。 ＰＤ－Ｌ１を標的とするＣＣＲ７．２ビエピトープＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＰＤ－Ｌ１を標的とするＣＣＲ８．２ビエピトープＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＴＲＯＰ－２を標的とするＣＣＲ１１．２ビエピトープＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＴＲＯＰ－２を標的とするＣＣＲ１２．２ビエピトープＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＰＤ－Ｌ１標的化ＣＣＲ（ＣＣＲ８及びＣＣＲ８．２）を使用したＨｅＫＩＬ－１８レポーターラ株実験の結果であり、代替の膜貫通（ＴＭ）ドメインの使用によるＩＬ－１８シグナル伝達の増強を示す。ＣＣＲ８は、本明細書に記載の一般構造３８Ａ１ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－ＩＣ－Ｔ２Ａ－１９Ｈ９ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ－ＩＣを有するビエピトープＣＣＲである。ＣＣＲ８．２は、一般構造３８Ａ１ｓｃＦｖ－ＩＬ－１８Ｒ１ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－ＩＣ－Ｔ２Ａ－１９Ｈ９ｓｃＦＶ－ＩＬ－１８ＲＡＰＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ－ＩＣを有するビエピトープＣＣＲである。 ＰＤ－Ｌ１標的化ＣＣＲ（ＣＣＲ１２及びＣＣＲ１２．２）を使用したＨｅＫＩＬ－１８レポーター株実験の結果であり、代替の膜貫通（ＴＭ）ドメインの使用によるＩＬ－１８シグナル伝達の増強を示す。ＣＣＲ１２は、本明細書に記載の一般構造ｃＡＲ４７Ａ６．４ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－ＩＣ－Ｔ２Ａ－ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ－ＣＤ２８ＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ－ＩＣを有するビエピトープＣＣＲである。ＣＣＲ１２．２は、一般構造ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ－ＩＬ－１８Ｒ１ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－ＩＣ－Ｔ２Ａ－ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ－ＩＬ－１８ＲＡＰＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ－ＩＣを有するビエピトープＣＣＲである。 異なる濃度のＩＬ－１８対照と比較して示される、ＰＤ－Ｌ１標的化ＣＣＲ実験（図８７に示される）の結果。 異なる濃度のＩＬ－１８対照と比較して示される、ＴＲＯＰ－２標的化ＣＣＲ実験（図８８に示される）の結果。 主に、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）細胞内ドメインを有する構築物のための例示的なＣＣＲ設計であり、これもまた本発明の実施形態である。ＥＣは細胞外を指し、ＴＭは膜貫通を指し、ＳＰはシグナルペプチドを指し、ＩＣは細胞内を指す。 ＦＡＳを標的とするＣＣＲ１３ ＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＰＤ－１を標的とするＣＣＲ１４ ＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＴＧＦβＲＩＩを標的とするＣＣＲ１５ ＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であって、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＰＤ－１を標的とするＣＣＲ１４ ＣＣＲ（ＣＤ２８細胞内ドメインを有する）のｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＣＣＲ構築物をｐＬｅｎｔｉ－ＩＲＥＳ－ＧＦＰレンチウイルスプラスミドに挿入した。ＴＩＬをレンチウイルスによって形質導入し、２日間静置し、次いで１１日間のＲＥＰ拡張プロセスを使用して拡張した。ここに示されるＣＣＲ構築物の表面発現は、フローサイトメトリーによって検出された。 ＣＣＲを発現するＲＥＰ後のＴＩＬの拡張、生存率及び殺傷有効性。 ＬＴＢＲ細胞内ドメインを有する構築物のための例示的なＣＣＲ設計であり、これもまた本発明の実施形態である。ＥＣは細胞外を指し、ＴＭは膜貫通を指し、ＳＰはシグナルペプチドを指し、ＩＣは細胞内を指す。 ＦＡＳを標的とするＣＣＲ１７ ＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＰＤ－１を標的とするＣＣＲ１８ ＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であり、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。 ＴＧＦβＲＩＩを標的とするＣＣＲ１９ ＣＣＲのｐＬｅｎｔｉ骨格を使用したベクター設計であって、これもまた本発明の異なるＣＣＲ及びケモカイン受容体ベクターの実施形態である。

配列表の簡単な説明
配列番号１は、ムロモナブの重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号２は、ムロモナブの軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３は、組換えヒトＩＬ－２タンパク質のアミノ酸配列である。

配列番号４は、アルデスロイキンのアミノ酸配列である。

配列番号５は、ＩＬ－２形態である。

配列番号６は、ネムバロイキンアルファのアミノ酸配列である。

配列番号７は、ＩＬ－２形態である。

配列番号８は、ムチンドメインポリペプチドである。

配列番号９は、組換えヒトＩＬ－４タンパク質のアミノ酸配列である。

配列番号１０は、組換えヒトＩＬ－７タンパク質のアミノ酸配列である。

配列番号１１は、組換えヒトＩＬ－１５タンパク質のアミノ酸配列である。

配列番号１２は、組換えヒトＩＬ－２１タンパク質のアミノ酸配列である。

配列番号１３は、ＩＬ－２配列である。

配列番号１４は、ＩＬ－２ムテイン配列である。

配列番号１５は、ＩＬ－２ムテイン配列である。

配列番号１６は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２である。

配列番号１７は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２である。

配列番号１８は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３である。

配列番号１９は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２カバットである。

配列番号２０は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２カバットである。

配列番号２１は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３カバットである。

配列番号２２は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２クロチアである。

配列番号２３は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２クロチアである。

配列番号２４は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３クロチアである。

配列番号２５は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ１＿ＩＬ－２ ＩＭＧＴである。

配列番号２６は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ２ ＩＭＧＴである。

配列番号２７は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＨＣＤＲ３ ＩＭＧＴである。

配列番号２８は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＶ_Ｈ鎖である。

配列番号２９は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１の重鎖である。

配列番号３０は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ１カバットである。

配列番号３１は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ２カバットである。

配列番号３２は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ３カバットである。

配列番号３３は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ１ ｃｈｏｔｈｉａである。

配列番号３４は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ２ ｃｈｏｔｈｉａである。

配列番号３５は、ＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１のＬＣＤＲ３ ｃｈｏｔｈｉａである。

配列番号３６は、Ｖ_Ｌ鎖である。

配列番号３７は、軽鎖である。

配列番号３８は、軽鎖である。

配列番号３９は、軽鎖である。

配列番号４０は、ヒト４－１ＢＢのアミノ酸配列である。

配列番号４１は、マウス４－１ＢＢのアミノ酸配列である。

配列番号４２は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖である。

配列番号４３は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖である。

配列番号４４は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号４５は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号４６は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ１である。

配列番号４７は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ２である。

配列番号４８は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の重鎖ＣＤＲ３である。

配列番号４９は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ１である。

配列番号５０は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ２である。

配列番号５１は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウトミルマブ（ＰＦ－０５０８２５６６）の軽鎖ＣＤＲ３である。

配列番号５２は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖である。

配列番号５３は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖である。

配列番号５４は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖可変領域（ＶＨ）である。

配列番号５５は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖可変領域（ＶＬ）である。

配列番号５６は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ１である。

配列番号５７は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ２である。

配列番号５８は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の重鎖ＣＤＲ３である。

配列番号５９は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ１である。

配列番号６０は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ２である。

配列番号６１は、４－１ＢＢアゴニストモノクローナル抗体ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３）の軽鎖ＣＤＲ３である。

配列番号６２は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のＦｃドメインである。

配列番号６３は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号６４は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号６５は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号６６は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号６７は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号６８は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号６９は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号７０は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号７１は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号７２は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号７３は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質のＦｃドメインである。

配列番号７４は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号７５は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号７６は、ＴＮＦＲＳＦアゴニスト融合タンパク質またはｓｃＦｖのリンカーである。

配列番号７７は、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）アミノ酸配列である。

配列番号７８は、４－１ＢＢＬポリペプチドの可溶性部分である。

配列番号７９は、４－１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４－１－１バージョン１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号８０は、４－１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４－１－１バージョン１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号８１は、４－１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４－１－１バージョン２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号８２は、４－１ＢＢアゴニスト抗体４Ｂ４－１－１バージョン２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号８３は、４－１ＢＢアゴニスト抗体Ｈ３９Ｅ３－２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号８４は、４－１ＢＢアゴニスト抗体Ｈ３９Ｅ３－２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号８５は、ヒトＯＸ４０のアミノ酸配列である。

配列番号８６は、マウスＯＸ４０のアミノ酸配列である。

配列番号８７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖である。

配列番号８８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖である。

配列番号８９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号９０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号９１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖ＣＤＲ１である。

配列番号９２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖ＣＤＲ２である。

配列番号９３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の重鎖ＣＤＲ３である。

配列番号９４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖ＣＤＲ１である。

配列番号９５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖ＣＤＲ２である。

配列番号９６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体タボリキシズマブ（ＭＥＤＩ－０５６２）の軽鎖ＣＤＲ３である。

配列番号９７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖である。

配列番号９８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖である。

配列番号９９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１００は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１０１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１０２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１０３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の重鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１０４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１０５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１０６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１１Ｄ４の軽鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１０７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖である。

配列番号１０８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖である。

配列番号１０９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１１０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１１１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１１２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１１３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の重鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１１４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１１５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１１６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体１８Ｄ８の軽鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１１７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１１８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１１９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の重鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１２０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の重鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１２１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の重鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１２２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の軽鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１２３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の軽鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１２４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１１９－１２２の軽鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１２５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１２６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１２７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の重鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１２８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の重鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１２９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の重鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１３０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の軽鎖ＣＤＲ１である。

配列番号１３１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の軽鎖ＣＤＲ２である。

配列番号１３２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体Ｈｕ１０６－２２２の軽鎖ＣＤＲ３である。

配列番号１３３は、ＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号１３４は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドの可溶性部分である。

配列番号１３５は、ＯＸ４０Ｌポリペプチドの代替可溶性部分である。

配列番号１３６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体００８の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１３７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体００８の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１３８は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０１１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１３９は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０１１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１４０は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１４１は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２１の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１４２は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２３の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１４３は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体０２３の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１４４は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１４５は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１４６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１４７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１４８は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１４９は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１５０は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１５１は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１５２は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１５３は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１５４は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１５５は、ヒト化ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１５６は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）である。

配列番号１５７は、ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体の軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）である。

配列番号１５８は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号１５９は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号１６０は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号１６１は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号１６２は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１６３は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１６４は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１６５は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１６６は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１６７は、ＰＤ－１阻害剤ニボルマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１６８は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号１６９は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号１７０は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号１７１は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号１７２は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１７３は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１７４は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１７５は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１７６は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１７７は、ＰＤ－１阻害剤ペムブロリズマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１７８は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号１７９は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号１８０は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号１８１は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号１８２は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１８３は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１８４は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１８５は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１８６は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１８７は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤デュルバルマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１８８は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号１８９は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号１９０は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号１９１は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号１９２は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１９３は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１９４は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１９５は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号１９６は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号１９７は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アベルマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号１９８は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号１９９は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２００は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号２０１は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号２０２は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２０３は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２０４は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２０５は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２０６は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２０７は、ＰＤ－Ｌ１阻害剤アテゾリズマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２０８は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２０９は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２１０は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号２１１は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号２１２は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２１３は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２１４は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２１５は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２１６は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２１７は、ＣＴＬＡ－４阻害剤イピリムマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２１８は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２１９は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２２０は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号２２１は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号２２２は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２２３は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２２４は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２２５は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２２６は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２２７は、ＣＴＬＡ－４阻害剤トレメリムマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２２８は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２２９は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２３０は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）アミノ酸配列である。

配列番号２３１は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）アミノ酸配列である。

配列番号２３２は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２３３は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２３４は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２３５は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２３６は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２３７は、ＣＴＬＡ－４阻害剤ザリフレリマブの軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２３８は、ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列である。

配列番号２３９は、ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列である。

配列番号２４０は、ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列である。

配列番号２４１は、ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列である。

配列番号２４２は、ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列である。

配列番号２４３は、ｓｃＦｖリンカーのアミノ酸配列である。

配列番号２４４は、ＰＤ－１細胞外ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号２４５は、ＰＤ－１細胞外及び膜貫通ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号２４６は、ＰＤ－１細胞外ドメイン及びＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号２４７は、ＰＤ－１細胞外及び膜貫通ドメインのヌクレオチド配列である。

配列番号２４８は、ＰＤ－１細胞外ドメイン及びＣＤ２８膜貫通ドメインのヌクレオチド配列である。

配列番号２４９は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体３８Ａ１のアミノ酸配列である。

配列番号２５０は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号２５１は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号２５２は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号２５３は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号２５４は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号２５５は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号２５６は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号２５７は、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１可変軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号２５８は、ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体１９Ｈ９のアミノ酸配列である。

配列番号２５９は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号２６０は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号２６１は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号２６２は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号２６３は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号２６４は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号２６５は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号２６６は、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９可変軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号２６７は、抗ＣＥＡ可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２６８は、抗ＣＥＡ可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２６９は、抗ＣＥＡ重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２７０は、抗ＣＥＡ重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２７１は、抗ＣＥＡ重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２７２は、抗ＣＥＡ軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２７３は、抗ＣＥＡ軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２７４は、抗ＣＥＡ軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２７５は、抗ＣＤ７３可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２７６は、抗ＣＤ７３可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２７７は、抗ＣＤ７３重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２７８は、抗ＣＤ７３重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２７９は、抗ＣＤ７３重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２８０は、抗ＣＤ７３軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２８１は、抗ＣＤ７３軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２８２は、抗ＣＤ７３軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２８３は、抗ＣＤ７３可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２８４は、抗ＣＤ７３可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２８５は、抗ＣＤ７３重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２８６は、抗ＣＤ７３重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２８７は、抗ＣＤ７３重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２８８は、抗ＣＤ７３軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号２８９は、抗ＣＤ７３軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号２９０は、抗ＣＤ７３軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号２９１は、抗ＴＲＯＰ－２可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９２は、抗ＴＲＯＰ－２可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９３は、抗ＴＲＯＰ－２可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９４は、抗ＴＲＯＰ－２可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９５は、抗ＴＲＯＰ－２可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９６は、抗ＴＲＯＰ－２可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９７は、抗ＴＲＯＰ－２可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９８は、抗ＴＲＯＰ－２可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号２９９は、抗ＴＲＯＰ－２可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３００は、抗ＴＲＯＰ－２可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３０１は、抗ＴＲＯＰ－２重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３０２は、抗ＴＲＯＰ－２重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３０３は、抗ＴＲＯＰ－２重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３０４は、抗ＴＲＯＰ－２軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３０５は、抗ＴＲＯＰ－２軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３０６は、抗ＴＲＯＰ－２軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３０７は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ７Ｅ６可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３０８は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ７Ｅ６可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３０９は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ７Ｅ６可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１０は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ７Ｅ６及びｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１１は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ及びｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１２は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１３は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ６Ｇ１１可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１４は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ６Ｇ１１可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１５は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１６は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１７は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦ可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１８は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦ可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３１９は、抗ＴＲＯＰ－２抗体可変重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号３２０は、抗ＴＲＯＰ－２抗体可変重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号３２１は、抗ＴＲＯＰ－２抗体可変重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号３２２は、抗ＴＲＯＰ－２抗体可変軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号３２３は、抗ＴＲＯＰ－２抗体可変軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号３２４は、抗ＴＲＯＰ－２抗体可変軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号３２５は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ７Ｅ６可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３２６は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ７Ｅ６可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３２７は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ７Ｅ６可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３２８は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ７Ｅ６可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３２９は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３０は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３１は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ６Ｇ１１可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３２は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｍ６Ｇ１１可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３３は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３４は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３５は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦ可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３６は、抗ＴＲＯＰ－２抗体ｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３３７は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号３３８は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３３９は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３４０は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３４１は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３４２は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３４３は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３４４は、抗ＴＲＯＰ－２サシツズマブ軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３４５は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体３－１７Ｉ ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。

配列番号３４６は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体７－Ｆ１７ ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。

配列番号３４７は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体１２－Ｃ１５ ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。

配列番号３４８は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体１６－Ｇ５ ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。

配列番号３４９は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体１７－Ｃ２０ ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。

配列番号３５０は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体２４－Ｇ６ ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。

配列番号３５１は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号３５２は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３５３は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３５４は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３５５は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３５６は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３５７は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３５８は、抗ＥＰＣＡＭ抗体重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３５９は、抗ＥＰＣＡＭ抗体重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３６０は、抗ＥＰＣＡＭ抗体重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３６１は、抗ＥＰＣＡＭ抗体軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３６２は、抗ＥＰＣＡＭ抗体軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３６３は、抗ＥＰＣＡＭ抗体軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３６４は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体３－１７Ｉ ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３６５は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体７－Ｆ１７ ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３６６は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体１２－Ｃ１５ ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３６６は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体１６－Ｇ５ ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３６７は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体１７－Ｃ２０ ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３６８は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ抗体２４－Ｇ６ ｓｃＦｖをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３６９は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７０は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７１は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７２は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７３は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７４は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７５は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７６は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号３７７は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変重鎖アミノ酸配列である。

配列番号３７８は、抗ＥＰＣＡＭ抗体可変軽鎖アミノ酸配列である。

配列番号３７９は、抗ＥＰＣＡＭ抗体重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３８０は、抗ＥＰＣＡＭ抗体重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３８１は、抗ＥＰＣＡＭ抗体重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３８２は、抗ＥＰＣＡＭ抗体軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３８３は、抗ＥＰＣＡＭ抗体軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３８４は、抗ＥＰＣＡＭ抗体軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号３８５は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３８６は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３８７は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３８８は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３８９は、抗組織因子抗体ＴＦ２７８可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９０は、抗組織因子抗体ＴＦ２７８可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９１は、抗組織因子抗体ＴＦ２７７可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９２は、抗組織因子抗体ＴＦ２７７可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９３は、抗組織因子抗体ＴＦ３９２可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９４は、抗組織因子抗体ＴＦ３９２可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９５は、抗組織因子抗体ＴＦ９可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９６は、抗組織因子抗体ＴＦ９可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号３９７は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号３９８は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号３９９は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４００は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号４０１は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号４０２は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４０３は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号４０４は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号４０５は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４０６は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号４０７は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号４０８は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４０９は、抗組織因子抗体ＴＦ９重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号４１０は、抗組織因子抗体ＴＦ９重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号４１１は、抗組織因子抗体ＴＦ９重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４１２は、抗組織因子抗体ＴＦ９軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号４１３は、抗組織因子抗体ＴＦ９軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号４１４は、抗組織因子抗体ＴＦ９軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４１５は、抗組織因子抗体可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４１６は、抗組織因子抗体可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４１７は、抗組織因子抗体可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４１８は、抗組織因子抗体可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４１９は、抗組織因子抗体可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４２０は、抗組織因子抗体可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４２１は、抗組織因子抗体可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４２２は、抗組織因子抗体可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４２３は、抗組織因子抗体可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４２４は、抗組織因子抗体可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４２５は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４２６は、抗組織因子抗体ＴＦ２６０可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４２７は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４２８は、抗組織因子抗体ＴＦ１９６可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４２９は、抗組織因子抗体ＴＦ２７８可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３０は、抗組織因子抗体ＴＦ２７８可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３１は、抗組織因子抗体ＴＦ２７７可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３２は、抗組織因子抗体ＴＦ２７７可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３３は、抗組織因子抗体ＴＦ３９２可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３４は、抗組織因子抗体ＴＦ３９２可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３５は、抗組織因子抗体ＴＦ９可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３６は、抗組織因子抗体ＴＦ９可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４３７は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４３８は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４３９は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４４０は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４４１は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体重鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号４４２は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体重鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号４４３は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体重鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４４４は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体軽鎖ＣＤＲ１アミノ酸配列である。

配列番号４４５は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体軽鎖ＣＤＲ２アミノ酸配列である。

配列番号４４６は、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ抗体軽鎖ＣＤＲ３アミノ酸配列である。

配列番号４４７は、シブロツズマブに基づく抗ＦＡＰ ｓｃＦｖのアミノ酸配列である。

配列番号４４８は、抗ＦＡＰ抗体シブロツズマブ可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４４９は、抗ＦＡＰ抗体シブロツズマブ可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４５０は、抗ＦＡＰ抗体ＦＡＰ５可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４５１は、抗ＦＡＰ抗体ＦＡＰ５可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４５２は、抗ＦＡＰ抗体シブロツズマブ可変重鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４５３は、抗ＦＡＰ抗体シブロツズマブ可変軽鎖をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号４５４は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４５５は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４５６は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４５７は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４５８は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４５９は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４６０は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４６１は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ｂ８軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４６２は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４６３は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４６４は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４６５は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４６６は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４６７は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４６８は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４６９は、抗ＶＩＳＴＡ抗体２Ｃ１２軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４７０は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４７１は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４７２は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４７３は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４７４は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４７５は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４７６は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４７７は、抗ＶＩＳＴＡ抗体１Ａ１２軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４７８は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４７９は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４８０は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４８１は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４８２は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４８３は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４８４は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４８５は、抗ＶＩＳＴＡ抗体３Ｃ５軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４８６は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４８７は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４８８は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４８９は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４９０は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４９１は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４９２は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４９３は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＭ２５軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４９４は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４９５は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号４９６は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号４９７は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号４９８は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号４９９は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５００は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５０１は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５０２は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５０３は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５０４は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５０５は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５０６は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５０７は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５０８は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５０９は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５１０は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５１１は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５１２は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５１３は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５１４は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５１５は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５１６は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５１７は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５１８は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５１９は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５２０は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５２１は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５２２は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５２３は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５２４は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５２５は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｈｕ１３９．１０軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５２６は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５２７は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５２８は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５２９は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５３０は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５３１は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５３２は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５３３は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５３４は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５３５は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５３６は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５３７は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５３８は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５３９は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５４０は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５４１は、抗ＬＲＲＣ１５抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５４２は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５４３は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５４４は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５４５は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５４６は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５４７は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖ＣＤＲ１のアミノ酸配列である。

配列番号５４８は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖ＣＤＲ２のアミノ酸配列である。

配列番号５４９は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖ＣＤＲ３のアミノ酸配列である。

配列番号５５０は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５５１は、抗Ｂ７－Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列である。

配列番号５５２は、ＰＤ－１膜貫通ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５５３は、ＣＤ２８膜貫通ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５５４は、ＣＤ２７膜貫通ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５５５は、ＣＤ８α膜貫通ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５５６は、ＣＤ８αヒンジドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５５７は、ＩＬ－２Ｒβヒンジドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５５８は、ＩｇＧ１膜貫通及びヒンジドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５５９は、ＩｇＧ１ヒンジドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５６０は、ＩｇＧ４ヒンジドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５６１は、ＩｇＤヒンジドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５６２は、ＰＤ－１膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５６３は、ＣＤ２８膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５６４は、ＣＤ２７膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５６５は、ＣＤ８α膜貫通ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５６６は、ＣＤ８αヒンジドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５６７は、ＩＬ－２Ｒβヒンジドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５６８は、ＩｇＧ１膜貫通及びヒンジドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５６９は、ＩｇＧ１ヒンジドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５７０は、ＩｇＧ４ヒンジドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５７１は、ＩｇＤヒンジドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５７２は、ＣＤ２８細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５７３は、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５７４は、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５７５は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５７６は、ＣＤ２７細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５７７は、ＣＤ３ζ細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５７８は、ＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５７９は、ＩＬ－２Ｒγ細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８０は、ＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８１は、ＩＬ－７Ｒα細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８２は、ＩＬ－１２Ｒ１細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８３は、ＩＬ－１２Ｒ２細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８４は、ＩＬ－１５Ｒα細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８５は、ＩＬ－２１Ｒ細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８６は、ＬＴＢＲ細胞内ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号５８７は、リンカーのアミノ酸配列である。

配列番号５８８は、ＣＤ２８細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５８９は、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９０は、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９１は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９２は、ＣＤ２７細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９３は、ＣＤ３ζ細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９４は、ＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９５は、ＩＬ－２Ｒγ細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９６は、ＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９７は、ＩＬ－７Ｒα細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９８は、ＩＬ－１２Ｒ１細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号５９９は、ＩＬ－１２Ｒ２細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６００は、ＩＬ－１５Ｒα細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６０１は、ＩＬ－２１Ｒ細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６０２は、ＬＴＢＲ細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６０３は、リンカーをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６０４は、ＥＦ－１プロモーターのヌクレオチド配列である。

配列番号６０５は、ＣＭＶプロモーターについてのヌクレオチド配列である。

配列番号６０６は、ＭＳＣＶプロモーターのヌクレオチド配列である。

配列番号６０７は、ＮＦＡＴプロモーターのヌクレオチド配列である。

配列番号６０８は、Ｔ２Ａ自己切断ペプチド（ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ由来）のアミノ酸配列である。

配列番号６０９は、Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（ブタテシオウイルス－１ ２Ａ由来）のアミノ酸配列である。

配列番号６１０は、Ｅ２Ａ自己切断ペプチド（ウマ鼻炎Ａウイルスに由来する）のアミノ酸配列である。

配列番号６１１は、Ｆ２Ａ自己切断ペプチド（口蹄疫ウイルスに由来する）のアミノ酸配列である。

配列番号６１２は、リンカーのアミノ酸配列である。

配列番号６１３は、Ｔ２Ａ自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６１４は、Ｐ２Ａ自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６１５は、Ｅ２Ａ自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６１６は、Ｆ２Ａ自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６１７は、ＩＲＥＳドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６１８は、（抗ＴＲＯＰ２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ）を含むＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６１９は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６２０は、本明細書に記載される３８Ａ１抗ＰＤ－Ｌ１ドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６２１は、本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメインの両方を使用して、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）を含む２つのＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６２２は、本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメインの両方を使用して、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）を含む２つのＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６２３は、ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒβ膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒγ膜貫通及び細胞内）を含む２つのＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６２４は、ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８Ｒ１－膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ－膜貫通及び細胞内）を含む２つのＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６２５は、ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）を含む２つのＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６２６は、ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）を含む２つのＣＣＲをコードするベクターについてのヌクレオチド配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６２７は、ＣＸＣＲ１ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６２８は、ＣＸＣＲ２バリアント１及び２ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６２９は、ＣＸＣＲ３バリアント１ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３０は、ＣＸＣＲ３バリアント２ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３１は、ＣＸＣＲ４バリアント１ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３２は、ＣＸＣＲ４バリアント２ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３３は、ＣＸＣＲ４バリアント３ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３４は、ＣＸＣＲ４バリアント４ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３５は、ＣＸＣＲ４バリアント５ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３６は、ＣＸＣＲ５バリアント１ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３７は、ＣＸＣＲ５バリアント２ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３８は、ＣＣＲ２バリアントＡドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６３９は、ＣＣＲ２バリアントＢドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６４０は、ＣＣＲ４ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６４１は、ＣＣＲ６バリアント１及び２ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６４２は、ＣＣＲ７バリアント１ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６４３は、ＣＣＲ７バリアント２ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６４４は、ＣＣＲ７バリアント３、４、及び５ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６４５は、ＣＣＲ８ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６４６は、ＣＸＣＲ１ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６４７は、ＣＸＣＲ２バリアント１ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６４８は、ＣＸＣＲ２バリアント２ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６４９は、ＣＸＣＲ３バリアント１ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５０は、ＣＸＣＲ３バリアント２ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５１は、ＣＸＣＲ４バリアント１ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５２は、ＣＸＣＲ４バリアント２ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５３は、ＣＸＣＲ４バリアント３ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５４は、ＣＸＣＲ４バリアント４ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５５は、ＣＸＣＲ４バリアント５ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５６は、ＣＸＣＲ５バリアント１ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５７は、ＣＸＣＲ５バリアント２ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５８は、ＣＣＲ２バリアントＡドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６５９は、ＣＣＲ２バリアントＢドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６０は、ＣＣＲ４ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６１は、ＣＣＲ６バリアント１ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６２は、ＣＣＲ６バリアント２ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６３は、ＣＣＲ７バリアント１ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６４は、ＣＣＲ７バリアント２ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６５は、ＣＣＲ７バリアント３ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６６は、ＣＣＲ７バリアント４ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６７は、ＣＣＲ７バリアント５ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６８は、ＣＣＲ８ドメインをコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６６９は、ＣＸＣＲ１ケモカイン受容体をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６７０は、ＣＣＲ８ケモカイン受容体をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６７１は、本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメインの両方を使用して、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６７２は、本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメインの両方を使用して、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６７３は、ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒβ膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒγ膜貫通及び細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６７４は、ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８Ｒ１－膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ－膜貫通及び細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６７５は、ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６７６は、ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ－膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰは、シグナルペプチドを指す。

配列番号６７７は、ＣＣＲ７．２：ｃｈＰＤ－Ｌ１－ＩＬ－２Ｒ（ＳＰ－３８Ａ１ｓｃＦｖ－ＩＬ２Ｒβ１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－２Ｒβ－ＩＣ－Ｔ２Ａ－ＳＰ－１９Ｈ９ｓｃＦｖ－ＩＬ２Ｒγ１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－２Ｒγ－ＩＣ）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰはシグナルペプチドを指し、ＥＣは細胞外を指し、ＴＭは膜貫通を指し、ＩＣは細胞内を指す。

配列番号６７８は、ＣＣＲ８．２：ｃｈＰＤ－Ｌ１－ＩＬ－１８Ｒ（ＳＰ－３８Ａ１ｓｃＦｖ－ＩＬ－１８Ｒ１１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－ＩＣ－Ｔ２Ａ－ＳＰ－１９Ｈ９ｓｃＦｖ－ＩＬ－１８ＲＲＡＰ１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ－ＩＣ）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰはシグナルペプチドを指し、ＥＣは細胞外を指し、ＴＭは膜貫通を指し、ＩＣは細胞内を指す。

配列番号６７９は、ＣＣＲ１１．２：ＴＲＯＰ２－ＩＬ－２Ｒ（ＳＰ－ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ－ＩＬ２Ｒβ１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－２Ｒβ－ＩＣ－Ｔ２Ａ－ＳＰ－ＫＭ４０９７ｓｃＦＶ－ＩＬ２Ｒγ１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－２Ｒγ－ＩＣ）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰはシグナルペプチドを指し、ＥＣは細胞外を指し、ＴＭは膜貫通を指し、ＩＣは細胞内を指す。

配列番号６８０は、ＣＣＲ１２．２：ＴＲＯＰ２－ＩＬ－１８Ｒ（ＳＰ－ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ－ＩＬ－１８Ｒ１１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－１８Ｒ１－ＩＣ－Ｔ２Ａ－ＳＰ－ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ－ＩＬ－１８ＲＲＡＰ１２ａａＥＣ－ＴＭ－ＩＬ－１８ＲＡＰ－ＩＣ）を含む２つのＣＣＲのアミノ酸配列である。ＳＰはシグナルペプチドを指し、ＥＣは細胞外を指し、ＴＭは膜貫通を指し、ＩＣは細胞内を指す。

配列番号６８１は、ＣＣＲ７．２をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６８２は、ＣＣＲ８．２をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６８３は、ＣＣＲ１１．２をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６８４は、ＣＣＲ１２．２をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６８５は、ＣＣＲ７．２をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６８６は、ＣＣＲ８．２をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６８７は、ＣＣＲ１１．２をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６８８は、ＣＣＲ１２．２をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号６８９は、ＣＣＲ１３（ｃｈ Ｆａｓ－４－１ＢＢ）のアミノ酸配列である。

配列番号６９０は、ＣＣＲ１４（ｃｈ ＰＤ－１－４－１ＢＢ）のアミノ酸配列である。

配列番号６９１は、ＣＣＲ１５（ＴＧＦβＲＩＩ－４－１ＢＢ）のアミノ酸配列である。

配列番号６９２は、ＣＣＲ１６（ｃｈ ＰＤ－１－ＣＤ２８）のアミノ酸配列である。

配列番号６９３は、ＦＡＳ結合ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６９４は、ＴＧＦβＲＩＩ結合ドメインのアミノ酸配列である。

配列番号６９５は、ＣＣＲ１３（ｃｈ Ｆａｓ－４－１ＢＢ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６９６は、ＣＣＲ１４（ｃｈ ＰＤ－１－４－１ＢＢ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６９７は、ＣＣＲ１５（ＴＧＦβＲＩＩ－４－１ＢＢ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６９８は、ＣＣＲ１６（ｃｈ ＰＤ－１－ＣＤ２８）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号６９９は、ＣＣＲ１３（ｃｈ Ｆａｓ－４－１ＢＢ）をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号７００は、ＣＣＲ１４（ｃｈ ＰＤ－１－４－１ＢＢ）をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号７０１は、ＣＣＲ１５（ｃｈ ＴＧＦβＲＩＩ－４－１ＢＢ）をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号７０２は、ＣＣＲ１６（ｃｈ ＰＤ－１－ＣＤ２８）をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号７０３は、ＣＣＲ１７（ｃｈ Ｆａｓ－ＬＴＢＲ）のアミノ酸配列である。

配列番号７０４は、ＣＣＲ１８（ｃｈ ＰＤ－１－ＬＴＢＲ）のアミノ酸配列である。

配列番号７０５は、ＣＣＲ１９（ｃｈ ＴＧＦβＲＩＩ－ＬＴＢＲ）のアミノ酸配列である。

配列番号７０６は、ＣＣＲ１７（ｃｈ Ｆａｓ－ＬＴＢＲ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７０７は、ＣＣＲ１８（ｃｈ ＰＤ－１－ＬＴＢＲ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７０８は、ＣＣＲ１９（ｃｈ ＴＧＦβＲＩＩ－ＬＴＢＲ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７０９は、ＣＣＲ１７（ｃｈ Ｆａｓ－ＬＴＢＲ）をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号７１０は、ＣＣＲ１８（ｃｈ ＰＤ－１－ＬＴＢＲ）をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号７１１は、ＣＣＲ１９（ｃｈ ＴＧＦβＲＩＩ－ＬＴＢＲ）をコードするベクターのヌクレオチド配列である。

配列番号７１２は、ＣＣＲ２０（ｃｈ １９Ｈ９－４－１ＢＢ）のアミノ酸配列である。

配列番号７１３は、ＣＣＲ２１（ｃｈ １９Ｈ９－ＬＴＢＲ）のアミノ酸配列である。

配列番号７１４は、ＣＣＲ２２（ｃｈ １９Ｈ９－４－１ＢＢバージョン２）のアミノ酸配列である。

配列番号７１５は、ＣＣＲ２３（ｃｈ １９Ｈ９－ＬＴＢＲバージョン２）のアミノ酸配列である。

配列番号７１６は、ＣＣＲ２４（ｃｈ １９Ｈ９－ＬＴＢＲ－４－１ＢＢ）のアミノ酸配列である。

配列番号７１７は、ＣＣＲ２５（ｃｈ １９Ｈ９－４－１ＢＢ－ＬＴＢＲ）のアミノ酸配列である。

配列番号７１８は、ＣＣＲ２０（ｃｈ １９Ｈ９－４－１ＢＢ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７１９は、ＣＣＲ２１（ｃｈ １９Ｈ９－ＬＴＢＲ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７２０は、ＣＣＲ２２（ｃｈ １９Ｈ９－４－１ＢＢバージョン２）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７２１は、ＣＣＲ２３（ｃｈ １９Ｈ９－ＬＴＢＲバージョン２）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７２２は、ＣＣＲ２４（ｃｈ １９Ｈ９－ＬＴＢＲ－４－１ＢＢ）をコードするヌクレオチド配列である。

配列番号７２３は、ＣＣＲ２５（ｃｈ １９Ｈ９－４－１ＢＢ－ＬＴＢＲ）をコードするヌクレオチド配列である。

Ｉ．導入
急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）によってエクスビボで培養されたＴＩＬを利用した養子細胞療法は、黒色腫などのがんを有する患者の宿主免疫抑制後の養子細胞療法に成功している。現在のＴＩＬ製造プロセス及び処置プロセスは、期間、コスト、無菌性に関する懸念、及び本明細書に記載の他の因子によって限定される。実行可能な治療選択肢がほとんどまたはまったく残っていない患者を治療する際に使用するのに適したＴＩＬ製造プロセス及びかかるプロセスに基づく治療法を提供することが緊急に必要である。本発明は、ＣＣＲまたはケモカイン受容体を使用して修飾されたＴＩＬを生成する際に使用するための製造プロセス及び製品を提供することによって、本明細書に記載の他の修飾の中でも、それらの有効性、効力、安全性、幹細胞性、または他の性能尺度を改善することによって、この必要性を満たす。

ＩＩ．定義
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じである。本明細書で参照されるすべての特許及び刊行物は、参照によりそれらの全体が組み込まれる。

本明細書で使用される「同時投与」、「同時投与すること」、「組み合わせて投与される」、「組み合わせて投与すること」、「同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」、及び「同時（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ）」という用語は、対象への２つ以上の医薬品有効成分（本発明の好ましい実施形態では、例えば、複数のＴＩＬ）の投与を包含し、医薬品有効成分及び／またはそれらの代謝物の両方が、対象において同時に存在するようにする。同時投与には、別々の組成物での同時投与、別々の組成物での異なる時間での投与、または２つ以上の医薬品有効成分が存在する組成物での投与が含まれる。別々の組成物での同時投与及び両方の薬剤が存在する組成物での投与が好ましい。

「インビボ」という用語は、対象の体内で起こる事象を指す。

「インビトロ」という用語は、対象の体外で起こる事象を指す。インビトロアッセイには、生きている細胞または死んでいる細胞が用いられる細胞ベースのアッセイが包含され、無傷の細胞が用いられない無細胞アッセイも含み得る。

「エクスビボ」という用語は、対象の体から除去された細胞、組織、及び／または器官に対する治療または処置の実施を伴う事象を指す。適切には、細胞、組織、及び／または器官は、外科手術または治療の方法で対象の体に戻され得る。

「急速拡張」という用語は、１週間の期間にわたって少なくとも約３倍（または４、５、６、７、８、もしくは９倍）、より好ましくは１週間の期間にわたって少なくとも約１０倍（または２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、もしくは９０倍）、あるいは最も好ましくは１週間の期間にわたって少なくとも約１００倍の抗原特異的ＴＩＬの数の増加を意味する。本明細書では、いくつかの急速拡張プロトコルが説明されている。

本明細書における「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」とは、対象の血流を離れて腫瘍に移動した白血球として最初に取得された細胞の集団を意味する。ＴＩＬには、ＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１及びＴｈ１７ ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、ならびにＭ１マクロファージが含まれるが、これらに限定されない。ＴＩＬには、一次ＴＩＬ及び二次ＴＩＬの両方が含まれる。「一次ＴＩＬ」は、本明細書に概説されるように患者組織試料から得られるもの（「新たに採取された」と称されることもある）であり、「二次ＴＩＬ」は、本明細書で考察される拡張または増殖された任意のＴＩＬ細胞集団であり、バルクＴＩＬ及び拡張ＴＩＬ（「ＲＥＰ ＴＩＬ」または「ｐｏｓｔ－ＲＥＰ ＴＩＬ」）が含まれるが、これらに限定されない。ＴＩＬ細胞集団には、遺伝子修飾ＴＩＬが含まれ得る。

本明細書における「細胞の集団」（ＴＩＬを含む）とは、共通の形質を共有するいくつかの細胞を意味する。一般に、集団は、概して１×１０^６～１×１０^１０の数の範囲であり、異なるＴＩＬ集団は、異なる数を含む。例えば、ＩＬ－２の存在下での一次ＴＩＬの初期成長は、およそ１×１０^８細胞のバルクＴＩＬの集団をもたらす。ＲＥＰ拡張は、一般に、注入用の１．５×１０^９～１．５×１０^１０細胞の集団を提供するために行われる。

本明細書における「凍結保存されたＴＩＬ」とは、一次、バルク、または拡張（ＲＥＰ ＴＩＬ）のいずれかのＴＩＬが、約－１５０℃～－６０℃の範囲で処理及び保管されることを意味する。凍結保存のための一般的な方法は、実施例を含む本明細書の他の場所にも記載されている。明確にするために、「凍結保存されたＴＩＬ」は、一次ＴＩＬのソースとして使用される可能性のある凍結組織試料と区別することができる。

本明細書における「解凍された凍結保存ＴＩＬ」とは、以前に凍結保存され、その後、細胞培養温度またはＴＩＬが患者に投与され得る温度を含むがこれらに限定されない、室温以上に戻るように処理されたＴＩＬの集団を意味する。

ＴＩＬは、一般に、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義されるか、または腫瘍に浸潤して治療を達成するそれらの能力によって機能的に定義されるかのいずれかであり得る。ＴＩＬは、一般に、ＣＤ４、ＣＤ８、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）αβ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ－１、及びＣＤ２５のうちの１つ以上のバイオマーカーの発現によって分類され得る。さらに及び代替的に、ＴＩＬは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤する能力により機能的に定義され得る。

「凍結保存培地（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ）」または「凍結保存培地（ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ）」という用語は、細胞の凍結保存に使用できる任意の培地を指す。かかる培地は、７％～１０％のＤＭＳＯを含む培地を含むことができる。例示的な培地には、ＣｒｙｏＳｔｏｒ ＣＳ１０、Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍａｓｏｌ、及びそれらの組み合わせが含まれる。「ＣＳ１０」という用語は、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓまたはＢｉｏｌｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓから入手した凍結保存培地を指す。ＣＳ１０培地は、商品名「ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０」と称され得る。ＣＳ１０培地は、ＤＭＳＯを含む無血清の動物成分を含まない培地である。

「セントラルメモリーＴ細胞」という用語は、ヒトではＣＤ４５Ｒ０＋であり、ＣＣＲ７（ＣＣＲ７^高）及びＣＤ６２Ｌ（ＣＤ６２^高）を構成的に発現するＴ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型には、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒ）、及びＩＬ－１５Ｒも含まれる。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子には、ＢＣＬ－６、ＢＣＬ－６Ｂ、ＭＢＤ２、及びＢＭＩ１が含まれる。セントラルメモリーＴ細胞は、ＴＣＲトリガー後、エフェクター分子としてＩＬ－２及びＣＤ４０Ｌを主に分泌する。セントラルメモリーＴ細胞は、血液中のＣＤ４コンパートメントで優勢であり、ヒトではリンパ節及び扁桃腺において比例して濃縮される。

「エフェクターメモリーＴ細胞」という用語は、セントラルメモリーＴ細胞と同様にＣＤ４５Ｒ０＋であるが、ＣＣＲ７の構成的発現を失い（ＣＣＲ７^低）、ＣＤ６２Ｌ発現が不均一であるかまたは低い（ＣＤ６２Ｌ^低）、ヒトまたは哺乳動物Ｔ細胞のサブセットを指す。セントラルメモリーＴ細胞の表面表現型には、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＣＤ１２７（ＩＬ－７Ｒ）、及びＩＬ－１５Ｒも含まれる。セントラルメモリーＴ細胞の転写因子には、ＢＬＩＭＰ１が含まれる。エフェクターメモリーＴ細胞は、インターフェロンガンマ、ＩＬ－４、及びＩＬ－５を含む、抗原刺激後に高レベルの炎症性サイトカインを急速に分泌する。エフェクターメモリーＴ細胞は、血液中のＣＤ８コンパートメントで優勢であり、ヒトでは肺、肝臓、及び腸において比例して濃縮される。ＣＤ８＋エフェクターメモリーＴ細胞は、大量のパーフォリンを担持する。

「閉鎖系」という用語は、外部環境に対して閉鎖されている系を指す。細胞培養法に適した任意の閉鎖系を、本発明の方法で用いることができる。閉鎖系には、例えば、密閉Ｇ容器が含まれるが、これに限定されない。腫瘍セグメントが閉鎖系に付加されると、ＴＩＬを患者に投与する準備ができるまで、系は外部環境に開かれない。

腫瘍を破壊するためのプロセスを説明するために本明細書で使用される「断片化すること」、「断片」、及び「断片化された」という用語は、腫瘍組織を破砕、スライス、分割、及び細切するなどの機械的断片化法、ならびに腫瘍組織の物理的構造を破壊するための任意の他の方法を含む。

「末梢血単核細胞」及び「ＰＢＭＣ」という用語は、リンパ球（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）及び単球を含む、丸い核を有する末梢血細胞を指す。抗原提示細胞として使用される場合（ＰＢＭＣは抗原提示細胞の一種である）、末梢血単核細胞は、好ましくは、照射された同種異系末梢血単核細胞である。

「末梢血リンパ球」及び「ＰＢＬ」という用語は、末梢血から拡張したＴ細胞を指す。いくつかの実施形態では、ＰＢＬは、ドナーからの全血またはアフェレーシス産物から分離される。いくつかの実施形態では、ＰＢＬは、ＣＤ３＋ＣＤ４５＋のＴ細胞表現型などのＴ細胞表現型の正または負の選択によって、ドナー由来の全血またはアフェレーシス産物から分離される。

「抗ＣＤ３抗体」という用語は、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体におけるＣＤ３受容体に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む、抗体またはそのバリアント、例えば、モノクローナル抗体を指す。抗ＣＤ３抗体には、ムロモナブとしても知られるＯＫＴ－３が含まれる。抗ＣＤ３抗体には、Ｔ３及びＣＤ３εとしても知られるＵＨＣＴ１クローンも含まれる。他の抗ＣＤ３抗体には、例えば、オテリキシズマブ、テプリズマブ、及びビシリズマブが含まれる。

「ＯＫＴ－３」（本明細書では「ＯＫＴ３」とも称される）という用語は、成熟Ｔ細胞のＴ細胞抗原受容体におけるＣＤ３受容体に対するヒト、ヒト化、キメラ、またはマウス抗体を含む、モノクローナル抗体またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを指し、市販の形態、例えば、ＯＫＴ－３（３０ｎｇ／ｍＬ、ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＣＤ３ ｐｕｒｅ、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）及びムロモナブ、またはそれらのバリアント、保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、またはバイオシミラーを含む。ムロモナブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を表１に示す（配列番号１及び配列番号２）。ＯＫＴ－３を産生することができるハイブリドーマは、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに寄託され、ＡＴＣＣ受託番号ＣＲＬ８００１が割り当てられている。ＯＫＴ－３を産生することができるハイブリドーマは、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）にも寄託され、カタログ番号８６０２２７０６が割り当てられている。

「ＩＬ－２」（本明細書では「ＩＬ２」とも称される）という用語は、インターロイキン－２として知られるＴ細胞成長因子を指し、ヒト及び哺乳動物形態、それらの保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、バイオシミラー、及びバリアントを含む、ＩＬ－２のすべての形態を含む。ＩＬ－２は、例えば、Ｎｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２，３９８３－８８及びＭａｌｅｋ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，２６，４５３－７９に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－２のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号３）。例えば、ＩＬ－２という用語は、アルデスロイキン（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ、単回使用バイアル当たり２２００万ＩＵで複数の供給業者から市販されている）などのヒト組換えＩＬ－２形態、ならびにＣｅｌｌＧｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．，Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ，ＮＨ，ＵＳＡ（ＣＥＬＬＧＲＯ ＧＭＰ）またはＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡによって市販されている組換えＩＬ－２形態（カタログ番号ＣＹＴ－２０９－ｂ）及び他のベンダーからの他の商用同等物を包含する。アルデスロイキン（デス－アラニル－１、セリン－１２５ヒトＩＬ－２）は、およそ１５ｋＤａの分子量を有する非グリコシル化ヒト組換えＩＬ－２形態である。本発明での使用に好適なアルデスロイキンのアミノ酸配列を表２に示す（配列番号４）。ＩＬ－２という用語はまた、ペグ化ＩＬ２プロドラッグベンペガルデスロイキン（ＮＫＴＲ－２１４、平均６個のリジン残基が［（２，７－ビス｛［メチルポリ（オキシエチレン）］カルバモイル｝－９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ］カルボニル）で置換されたＮ^６である、配列番号４のようなペグ化ヒト組換えＩＬ－２）を含む、本明細書に記載のＩＬ－２のペグ化形態も包含し、Ｎｅｋｔａｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から入手可能であるか、または国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／１３２４９６Ａ１号の実施例１９に記載の方法、または米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０２７５１３３Ａ１号の実施例１に記載の方法など、当該技術分野で知られている方法によって調製することができ、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適なベンペガルデスロイキン（ＮＫＴＲ－２１４）及び他のペグ化ＩＬ－２分子は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３２８７９１Ａ１号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０６５０８６Ａ１号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適な複合化ＩＬ－２の代替形態は、米国特許第４，７６６，１０６号、同第５，２０６，３４４号、同第５，０８９，２６１号、及び同第４，９０２，５０２号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適なＩＬ－２の製剤は、米国特許第６，７０６，２８９号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、Ｓｙｎｔｈｏｒｘ，Ｉｎｃ．から入手可能なＴＨＯＲ－７０７である。本発明での使用に好適なＴＨＯＲ－７０７及びＩＬ－２の追加の代替形態の調製ならびに特性は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０１８１２２０Ａ１号及び同第ＵＳ２０２０／０３３０６０１Ａ１号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、単離及び精製ＩＬ－２ポリペプチドと、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されるアミノ酸位置で単離及び精製ＩＬ－２ポリペプチドに結合する複合部分と、を含む、インターロイキン２（ＩＬ－２）複合体であり、アミノ酸残基の番号付けは配列番号５に対応する。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｔ３７、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｒ３８及びＫ６４から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｅ６１、Ｅ６２、及びＥ６８から選択される。いくつかの実施形態では、アミノ酸位置は、Ｅ６２である。いくつかの実施形態では、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されるアミノ酸残基は、リジン、システイン、またはヒスチジンにさらに変異する。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基は、システインに変異する。いくつかの実施形態では、アミノ酸残基は、リジンに変異する。いくつかの実施形態では、Ｋ３５、Ｔ３７、Ｒ３８、Ｔ４１、Ｆ４２、Ｋ４３、Ｆ４４、Ｙ４５、Ｅ６１、Ｅ６２、Ｅ６８、Ｋ６４、Ｐ６５、Ｖ６９、Ｌ７２、及びＹ１０７から選択されるアミノ酸残基は、非天然アミノ酸にさらに変異する。いくつかの実施形態では、非天然アミノ酸は、Ｎ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）、Ｎ６－プロパルギルエトキシ－Ｌ－リジン（ＰｒａＫ）、ＢＣＮ－Ｌ－リジン、ノルボルネンリジン、ＴＣＯ－リジン、メチルテトラジンリジン、アリルオキシカルボニルリジン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、２－アミノ－８－オキソオクタン酸、ｐ－アセチル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジドメチル－Ｌ－フェニルアラニン（ｐＡＭＦ）、ｐ－ヨード－Ｌ－フェニルアラニン、ｍ－アセチルフェニルアラニン、２－アミノ－８－オキソノナン酸、ｐ－プロパルギルオキシフェニルアラニン、ｐ－プロパルギル－フェニルアラニン、３－メチル－フェニルアラニン、Ｌ－ドーパ、フッ素化フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アジド－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－アシル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ベンゾイル－Ｌ－フェニルアラニン、ｐ－ブロモフェニルアラニン、ｐ－アミノ－Ｌ－フェニルアラニン、イソプロピル－Ｌ－フェニルアラニン、Ｏ－アリルチロシン、Ｏ－メチル－Ｌ－チロシン、Ｏ－４－アリル－Ｌ－チロシン、４－プロピル－Ｌ－チロシン、ホスホノチロシン、トリ－Ｏ－アセチル－ＧｌｃＮＡｃｐ－セリン、Ｌ－ホスホセリン、ホスホノセリン、Ｌ－３－（２－ナフチル）アラニン、２－アミノ－３－（（２－（（３－（ベンジルオキシ）－３－オキソプロピル）アミノ）エチル）セラニル）プロパン酸、２－アミノ－３－（フェニルセラニル）プロパン酸、またはセレノシステインを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２複合体は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２受容体α（ＩＬ－２Ｒα）サブユニットに対する減少した親和性を有する。いくつかの実施形態では、減少した親和性は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、ＩＬ－２Ｒαに対する結合親和性の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、または９９％を超える減少である。いくつかの実施形態では、減少した親和性は、野生型ＩＬ－２ポリペプチドと比較して、約１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、３０倍、５０倍、１００倍、２００倍、３００倍、５００倍、１０００倍以上である。いくつかの実施形態では、複合部分は、ＩＬ－２とＩＬ－２Ｒαとの結合を損なうかまたは遮断する。いくつかの実施形態では、複合部分は、水溶性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、水溶性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ（プロピレングリコール）（ＰＰＧ）、エチレングリコール及びプロピレングリコールのコポリマー、ポリ（オキシエチル化ポリオール）、ポリ（オレフィンアルコール）、ポリ（ビニルピロリドン）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリルアミド）、ポリ（ヒドロキシアルキルメタクリレート）、ポリ（サッカライド）、ポリ（α－ヒドロキシ酸）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリホスファゼン、ポリオキサゾリン（ＰＯＺ）、ポリ（Ｎ－アクリロイルモルホリン）、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、ＰＥＧを含む。いくつかの実施形態では、ＰＥＧは、直鎖状ＰＥＧまたは分岐状ＰＥＧである。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、ポリサッカライドを含む。いくつかの実施形態では、ポリサッカライドは、デキストラン、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、ヒアルロン酸（ＨＡ）、アミロース、ヘパリン、ヘパランサルフェート（ＨＳ）、デキストリン、またはヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）を含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、グリカンを含む。いくつかの実施形態では、水溶性ポリマーの各々は、独立して、ポリアミンを含む。いくつかの実施形態では、複合部分は、タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、タンパク質を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、アルブミン、トランスフェリン、またはトランスサイレチンを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、Ｆｃ部分を含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、ＩｇＧのＦｃ部分を含む。いくつかの実施形態では、複合部分は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態では、タンパク質の各々は、独立して、ＸＴＥＮペプチド、グリシンリッチホモアミノ酸ポリマー（ＨＡＰ）、ＰＡＳポリペプチド、エラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ）、ＣＴＰペプチド、またはゼラチン様タンパク質（ＧＬＫ）ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、単離及び精製ＩＬ－２ポリペプチドは、グルタミル化によって修飾される。いくつかの実施形態では、複合部分は、単離及び精製ＩＬ－２ポリペプチドと直接的に結合される。いくつかの実施形態では、複合部分は、リンカーを介して単離及び精製されたＩＬ－２ポリペプチドと間接的に結合される。いくつかの実施形態では、リンカーは、ホモ二官能性リンカーを含む。いくつかの実施形態では、ホモ二官能性リンカーは、ロマント試薬ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）ＤＳＰ、３′３′－ジチオビス（スルホスクシンイミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）、ジスクシンイミジルスベラート（ＤＳＳ）、ビス（スルホスクシンイミジル）スベラート（ＢＳ）、ジスクシンイミジルタータラート（ＤＳＴ）、ジスルホスクシンイミジルタータラート（スルホＤＳＴ）、エチレングリコビス（スクシンイミジルスクシネート）（ＥＧＳ）、ジスクシンイミジルグルタラート（ＤＳＧ）、Ｎ，Ｎ′－ジスクシンイミジルカーボナート（ＤＳＣ）、ジメチルアジピミデート（ＤＭＡ）、ジメチルピメリミデート（ＤＭＰ）、ジメチルスベリミデート（ＤＭＳ）、ジメチル－３，３′－ジチオビスプロピオンイミデート（ＤＴＢＰ）、１，４－ジ－（３′－（２′－ピリジルジチオ）プロピオンアミド）ブタン（ＤＰＤＰＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ハロゲン化アリール含有化合物（ＤＦＤＮＢ）、例えば、１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンまたは１，３－ジフルオロ－４，６－ジニトロベンゼン、４，４′－ジフルオロ－３，３′－ジニトロフェニルスルホン（ＤＦＤＮＰＳ）、ビス－［β－（４－アジドサリチルアミド）エチル］ジスルフィド（ＢＡＳＥＤ）、ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、１，４－ブタンジオールジグリシジルエーテル、アジピン酸ジヒドラジド、カルボヒドラジド、ｏ－トルイジン、３，３′－ジメチルベンジジン、ベンジジン、α，α′－ｐ－ジアミノジフェニル、ジヨード－ｐ－キシレンスルホン酸、Ｎ，Ｎ′－エチレン－ビス（ヨードアセトアミド）、またはＮ，Ｎ′－ヘキサメチレンビス（ヨードアセトアミド）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ヘテロ二官能性リンカーを含む。いくつかの実施形態では、ヘテロ二官能性リンカーは、Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ｓＰＤＰ）、長鎖Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＬＣ－ｓＰＤＰ）、水溶性長鎖Ｎ－スクシンイミジル３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（スルホ－ＬＣ－ｓＰＤＰ）、スクシンイミジルオキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン（ｓＭＰＴ）、スルホスクシンイミジル－６－［α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルアミド］ヘキサノエート（スルホ－ＬＣ－ｓＭＰＴ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、スルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ｓＭＣＣ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢ）、ｍ－マレイミドベンゾイル－Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＭＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ｓＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ－ｓＩＡＢ）、スクシンイミジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（ｓＭＰＢ）、スルホスクシンイミジル－４－（ｐ－マレイミドフェニル）ブチレート（スルホ－ｓＭＰＢ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチリルオキシ）スクシンイミドエステル（ＧＭＢ）、Ｎ－（γ－マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ－ＧＭＢ）、スクシンイミジル６－（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＸ）、スクシンイミジル６－［６－（（（ヨードアセチル）アミノ）ヘキサノイル）アミノ］ヘキサノエート（ｓｌＡＸＸ）、スクシンイミジル４－（（（ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓＩＡＣ）、スクシンイミジル６－（（（（（４－ヨードアセチル）アミノ）メチル）シクロヘキサン－１－カルボニル）アミノ）ヘキサノエート（ｓＩＡＣＸ）、ｐ－ニトロフェニルヨードアセテート（ＮＰＩＡ）、カルボニル反応性及びスルフヒドリル反応性架橋剤、例えば、４－（４－Ｎ－マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシル－ヒドラジド－８（Ｍ２Ｃ２Ｈ）、３－（２－ピリジルジチオ）プロピオニルヒドラジド（ＰＤＰＨ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（ＮＨｓ－ＡｓＡ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジドサリチル酸（スルホ－ＮＨｓ－ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル－（４


－アジドサリチルアミド）ヘキサノエート（スルホ－ＮＨｓ－ＬＣ－ＡｓＡ）、スルホスクシンイミジル－２－（ｐ－アジドサリチルアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオネート（ｓＡｓＤ）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル－４－アジドベンゾエート（ＨｓＡＢ）、Ｎ－ヒドロキシスルホスクシンイミジル－４－アジドベンゾエート（スルホ－ＨｓＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジル－６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（ｓＡＮＰＡＨ）、スルホスクシンイミジル－６－（４’－アジド－２’－ニトロフェニルアミノ）ヘキサノエート（スルホ－ｓＡＮＰＡＨ）、Ｎ－５－アジド－２－ニトロベンゾイルオキシスクシンイミド（ＡＮＢ－ＮＯ）、スルホスクシンイミジル－２－（ｍ－アジド－ｏ－ニトロベンズアミド）－エチル－１，３’－ジチオプロピオネート（ｓＡＮＤ）、Ｎ－スクシンイミジル－４（４－アジドフェニル）１，３’－ジチオプロピオネート（ｓＡＤＰ）、Ｎ－スルホスクシンイミジル（４－アジドフェニル）－１，３’－ジチオプロピオネート（スルホ－ｓＡＤＰ）、スルホスクシンイミジル４－（ｐ－アジドフェニル）ブチレート（スルホ－ｓＡＰＢ）、スルホスクシンイミジル２－（７－アジド－４－メチルクマリン－３－アセトアミド）エチル－１，３’－ジチオプロピオネート（ｓＡＥＤ）、スルホスクシンイミジル７－アジド－４－メチルクマリン－３－アセテート（スルホ－ｓＡＭＣＡ）、ｐ－ニトロフェニルジアゾピルベート（ｐＮＰＤＰ）、ｐ－ニトロフェニル－２－ジアゾ－３，３，３－トリフルオロプロピオネート（ＰＮＰ－ＤＴＰ）、１－（ρ－アジドサリチルアミド）－４－（ヨードアセトアミド）ブタン（ＡｓＩＢ）、Ｎ－［４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチル］－３’－（２’－ピリジルジチオ）プロピオンアミド（ＡＰＤＰ）、ベンゾフェノン－４－ヨードアセトアミド、ｐ－アジドベンゾイルヒドラジド（ＡＢＨ）、４－（ρ－アジドサリチルアミド）ブチルアミン（ＡｓＢＡ）、またはｐ－アジドフェニルグリオキサール（ＡＰＧ）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、任意選択でジペプチドリンカーを含む、切断可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、ジペプチドリンカーは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ａｌａ、またはＶａｌ－Ｌｙｓを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、切断不可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、任意選択で、マレイミドカプロイル（ｍｃ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ｓＭＣＣ）、またはスルホスクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（スルホ－ｓＭＣＣ）を含むマレイミド基を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、スペーサーをさらに含む。いくつかの実施形態では、スペーサーは、ｐ－アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢＣ）、その誘導体、または類似体を含む。いくつかの実施形態では、複合部分は、ＩＬ－２複合体の血清半減期を延長することができる。いくつかの実施形態では、追加の複合部分は、ＩＬ－２複合体の血清半減期を延長することができる。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、本明細書に記載のＩＬ－２形態のうちのいずれかの断片である。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０１８１２２０Ａ１号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０３３０６０１Ａ１号に開示されているようにペグ化されている。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合部分に共有結合したＮ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含む、ＩＬ－２複合体であり、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号５と少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＡｚＫは、配列番号５内のアミノ酸位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号５に対して１残基のＮ末端欠失を含む。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、ＩＬ－２Ｒアルファ鎖会合を欠いているが、中間親和性ＩＬ－２Ｒベータ－ガンマシグナル伝達複合体との正常な結合を保持している。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合部分に共有結合したＮ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含む、ＩＬ－２複合体であり、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号５と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＡｚＫは、配列番号５内のアミノ酸位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合部分に共有結合したＮ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含む、ＩＬ－２複合体であり、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＡｚＫは、配列番号５内のアミノ酸位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位でアミノ酸を置換する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む複合部分に共有結合したＮ６－アジドエトキシ－Ｌ－リジン（ＡｚＫ）を含むＩＬ－２ポリペプチドを含む、ＩＬ－２複合体であり、ＩＬ－２ポリペプチドは、配列番号５と少なくとも９８％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、ＡｚＫは、配列番号５内のアミノ酸位置に関して、Ｋ３５位、Ｆ４２位、Ｆ４４位、Ｋ４３位、Ｅ６２位、Ｐ６５位、Ｒ３８位、Ｔ４１位、Ｅ６８位、Ｙ４５位、Ｖ６９位、またはＬ７２位でアミノ酸を置換する。

いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、ＡＬＫＳ－４２３０（配列番号６）としても知られるネムバロイキンアルファであり、Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｉｎｃ．から入手可能である。ネムバロイキンアルファは、ペプチジルリンカー（^６０ＧＧ^６１）を介してヒトインターロイキン２断片（６２－１３２）と融合し、ペプチジルリンカー（^１３３ＧＳＧＧＧＳ^１３８）を介してヒトインターロイキン２受容体α鎖断片（１３９－３０３）と融合し、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で産生され、グリコシル化されている、ヒトインターロイキン２断片（１－５９）、バリアント（Ｃｙｓ^１２５＞Ｓｅｒ^５１）；Ｇ_２ペプチドリンカー（６０－６１）を介してヒトインターロイキン２（ＩＬ－２）（４－７４）－ペプチド（６２－１３２）と融合し、ＧＳＧ_３Ｓペプチドリンカー（１３３－１３８）を介してヒトインターロイキン２受容体α鎖（ＩＬ２Ｒサブユニットアルファ、ＩＬ２Ｒα、ＩＬ２ＲＡ）（１－１６５）－ペプチド（１３９－３０３）と融合し、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞で産生され、アルファグリコシル化されている、ヒトインターロイキン２（ＩＬ－２）（７５－１３３）－ペプチド［Ｃｙｓ^１２５（５１）＞Ｓｅｒ］－変異体（１－５９）としても知られている。ネムバロイキンアルファのアミノ酸配列は、配列番号６に示されている。いくつかの実施形態では、ネムバロイキンアルファは、以下の翻訳後修飾を示す：以下の位置でのジスルフィド架橋：３１－１１６、１４１－２８５、１８４－２４２、２６９－３０１、１６６－１９７、または１６６－１９９、１６８－１９９または１６８－１９７（配列番号６の番号付けを使用する）、及び以下の位置でのグリコシル化部位：配列番号６の番号付けを使用する、Ｎ１８７、Ｎ２０６、Ｔ２１２。ネムバルイキンアルファの調製及び特性、ならびに本発明での使用に好適な追加の代替形態のＩＬ－２は、米国特許出願公開第２０２１／００３８６８４Ａ１号及び米国特許第１０，１８３，９７９号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、配列番号６と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９０％の配列同一性を有するタンパク質である。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、配列番号６で示されるアミノ酸配列またはその保存的アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、配列番号７のアミノ酸２４～４５２、またはそのバリアント、断片、もしくは誘導体を含む融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、配列番号７のアミノ酸２４～４５２と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、またはそのバリアント、断片、もしくは誘導体を含む融合タンパク質である。本発明での使用に好適な他のＩＬ－２形態は、米国特許第１０，１８３，９７９号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。任意選択で、いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、ムチンドメインポリペプチドリンカーによって第２の融合パートナーと連結された第１の融合パートナーを含む融合タンパク質であり、第１の融合パートナーは、ＩＬ－１Ｒα、またはＩＬ－１Ｒαと少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性を有し、ＩＬ－Ｒαの受容体アンタゴニスト活性を有するタンパク質であり、第２の融合パートナーは、Ｆｃ領域を含む免疫グロブリンの全部または一部を含み、ムチンドメインポリペプチドリンカーは、配列番号８、または配列番号８と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、融合タンパク質の半減期は、ムチンドメインポリペプチドリンカーの非存在下での第２の融合パートナーとの第１の融合パートナーの融合と比較して改善される。

いくつかの実施形態では、本発明での使用に好適なＩＬ－２形態は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と、Ｖ_ＨまたはＶ_ＬのＣＤＲに移植されたＩＬ－２分子またはその断片と、を含む抗体サイトカイン移植タンパク質を含み、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に拡張させる。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と、Ｖ_ＨまたはＶ_ＬのＣＤＲに移植されたＩＬ－２分子またはその断片と、を含み、ＩＬ－２分子は、ムテインであり、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に拡張させる。ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、米国特許出願公開第２０２０／０２７０３３４Ａ１号に記載されている抗体の投与を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、Ｖ_ＨまたはＶ_ＬのＣＤＲに移植されたＩＬ－２分子またはその断片と、を含み、ＩＬ－２分子は、ムテインであり、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に拡張させ、抗体は、配列番号３９を含むＩｇＧクラス軽鎖及び配列番号３８を含むＩｇＧクラス重鎖、配列番号３７を含むＩｇＧクラスの軽鎖及び配列番号２９を含むＩｇＧクラスの重鎖、配列番号３９を含むＩｇＧクラス軽鎖及び配列番号２９を含むＩｇＧクラス重鎖、配列番号３７を含むＩｇＧクラス軽鎖及び配列番号３８を含むＩｇＧクラス重鎖からなる群から選択されるＩｇＧクラス重鎖及びＩｇＧクラス軽鎖をさらに含む。

ある実施形態では、ＩＬ－２分子またはその断片は、Ｖ_ＨのＨＣＤＲ１に移植され、ＩＬ－２分子は、ムテインである。ある実施形態では、ＩＬ－２分子またはその断片は、Ｖ_ＨのＨＣＤＲ２に移植され、ＩＬ－２分子は、ムテインである。ある実施形態では、ＩＬ－２分子またはその断片は、Ｖ_ＨのＨＣＤＲ３に移植され、ＩＬ－２分子は、ムテインである。ある実施形態では、ＩＬ－２分子またはその断片は、Ｖ_ＬのＬＣＤＲ１に移植され、ＩＬ－２分子は、ムテインである。ある実施形態では、ＩＬ－２分子またはその断片は、Ｖ_ＬのＬＣＤＲ２に移植され、ＩＬ－２分子は、ムテインである。ある実施形態では、ＩＬ－２分子またはその断片は、Ｖ_ＬのＬＣＤＲ３に移植され、ＩＬ－２分子は、ムテインである。

ＩＬ－２分子の挿入は、ＣＤＲのＮ末端領域もしくはその近く、ＣＤＲの中間領域、またはＣＤＲのＣ末端領域もしくはその近くであり得る。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、ＣＤＲに組み込まれたＩＬ－２分子を含み、ＩＬ２配列はＣＤＲ配列をフレームシフトしない。いくつかの実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、ＣＤＲに組み込まれたＩＬ－２分子を含み、ＩＬ－２配列はＣＤＲ配列のすべてまたは一部を置き換える。ＩＬ－２分子による置き換えは、ＣＤＲのＮ末端領域、ＣＤＲの中間領域、またはＣＤＲのＣ末端領域もしくはその近くであり得る。ＩＬ－２分子による置き換えは、ＣＤＲ配列のわずか１個もしくは２個のアミノ酸、またはＣＤＲ配列全体であり得る。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２分子は、ペプチドリンカーなしで、ＣＤＲ配列とＩＬ－２配列との間に追加のアミノ酸なしで、ＣＤＲに直接的に移植される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２分子は、ペプチドリンカーを用いて、ＣＤＲ配列とＩＬ－２配列との間に１つ以上の追加のアミノ酸を伴って、ＣＤＲに間接的に移植される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩＬ－２分子は、ＩＬ－２ムテインである。いくつかの事例では、ＩＬ－２ムテインは、Ｒ６７Ａ置換を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、配列番号１４または配列番号１５のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ムテインは、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０２７０３３４Ａ１号の表１のアミノ酸配列を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号１６、配列番号１９、配列番号２２及び配列番号２５からなる群から選択されるＨＣＤＲ１を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号７、配列番号１０、配列番号１３及び配列番号１６からなる群から選択されるＨＣＤＲ１を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号１７、配列番号２０、配列番号２３、及び配列番号２６からなる群から選択されるＨＣＤＲ２からなる群から選択されるＨＣＤＲ１を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号１８、配列番号２１、配列番号２４及び配列番号２７からなる群から選択されるＨＣＤＲ３を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ領域を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶ_Ｈ領域及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む重鎖領域及び配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、米国特許出願公開第２０２０／０２７０３３４Ａ１号のＩｇＧ．ＩＬ２Ｆ７１Ａ．Ｈ１もしくはＩｇＧ．ＩＬ２Ｒ６７Ａ．Ｈ１、またはそのバリアント、誘導体、もしくは断片、またはその保存的アミノ酸置換体、またはそれと少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％の配列同一性を有するタンパク質を含む。ある実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質の抗体成分は、免疫グロブリン配列、フレームワーク配列、またはパリビズマブのＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質は、アルデスロイキンまたは同等の分子などであるがこれらに限定されない野生型ＩＬ－２分子よりも長い血清半減期を有する。ある実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質は、表３に記載される配列を有する。

「ＩＬ－４」（本明細書では「ＩＬ４」とも称される）という用語は、インターロイキン４として知られるサイトカインを指し、これは、Ｔｈ２ Ｔ細胞、ならびに好酸球、好塩基球、及び肥満細胞によって産生される。ＩＬ－４は、ナイーブヘルパーＴ細胞（Ｔｈ０細胞）からＴｈ２ Ｔ細胞への分化を調節する。Ｓｔｅｉｎｋｅ ａｎｄ Ｂｏｒｉｓｈ，Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．２００１，２，６６－７０。ＩＬ－４によって活性化されると、Ｔｈ２ Ｔ細胞は、その後、正のフィードバックループで追加のＩＬ－４を産生する。ＩＬ－４は、Ｂ細胞増殖及びクラスＩＩ ＭＨＣ発現も刺激し、Ｂ細胞からのＩｇＥ及びＩｇＧ_１発現へのクラス切り替えを誘導する。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－４は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２１１）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＣＴＰ００４３）を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－４のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号９）。

「ＩＬ－４」（本明細書では「ＩＬ４」とも称される）という用語は、インターロイキン４として知られるサイトカインを指し、これは、Ｔｈ２ Ｔ細胞、ならびに好酸球、好塩基球、及び肥満細胞によって産生される。ＩＬ－４は、ナイーブヘルパーＴ細胞（Ｔｈ０細胞）からＴｈ２ Ｔ細胞への分化を調節する。Ｓｔｅｉｎｋｅ ａｎｄ Ｂｏｒｉｓｈ，Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．２００１，２，６６－７０。ＩＬ－４によって活性化されると、Ｔｈ２ Ｔ細胞は、その後、正のフィードバックループで追加のＩＬ－４を産生する。ＩＬ－４は、Ｂ細胞増殖及びクラスＩＩ ＭＨＣ発現も刺激し、Ｂ細胞からのＩｇＥ及びＩｇＧ_１発現へのクラス切り替えを誘導する。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－４は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２１１）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＣＴＰ００４３）を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－４のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号５）。

「ＩＬ－７」（本明細書では「ＩＬ７」とも称される）という用語は、インターロイキン７として知られるグリコシル化組織由来のサイトカインを指し、これは、間質細胞及び上皮細胞、ならびに樹状細胞から得ることができる。Ｆｒｙ ａｎｄ Ｍａｃｋａｌｌ，Ｂｌｏｏｄ ２００２，９９，３８９２－９０４。ＩＬ－７は、Ｔ細胞の発達を刺激することができる。ＩＬ－７は、ＩＬ－７受容体アルファ及び共通ガンマ鎖受容体からなるヘテロ二量体であるＩＬ－７受容体に結合し、これは、胸腺内でのＴ細胞発生及び末梢内での生存に重要な一連のシグナルである。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－７は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２５４）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号Ｇｉｂｃｏ ＰＨＣ００７１）を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－７のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号６）。

「ＩＬ－１５」（本明細書では「ＩＬ１５」とも称される）という用語は、インターロイキン－１５として知られるＴ細胞成長因子を指し、ヒト及び哺乳動物形態、保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、バイオシミラー、及びバリアントを含む、ＩＬ－２のすべての形態を含む。ＩＬ－１５は、例えば、Ｆｅｈｎｉｇｅｒ ａｎｄ Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，Ｂｌｏｏｄ ２００１，９７，１４－３２に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ－１５は、β及びγシグナル伝達受容体サブユニットをＩＬ－２と共有する。組換えヒトＩＬ－１５は、１２．８ｋＤａの分子量を有する１１４個のアミノ酸（及びＮ末端メチオニン）を含む単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトＩＬ－１５は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－２３０－ｂ）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ－１５組換えタンパク質、カタログ番号３４－８１５９－８２）を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－１５のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号７）。

「ＩＬ－２１」（本明細書では「ＩＬ２１」とも称される）という用語は、インターロイキン－２１として知られる多面発現性サイトカインタンパク質を指し、ヒト及び哺乳動物形態、保存的アミノ酸置換物、グリコフォーム、バイオシミラー、及びバリアントを含む、ＩＬ－２１のすべての形態を含む。ＩＬ－２１は、例えば、Ｓｐｏｌｓｋｉ ａｎｄ Ｌｅｏｎａｒｄ，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｉｓｃ．２０１４，１３，３７９－９５に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＩＬ－２１は、主にナチュラルキラーＴ細胞及び活性化ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞によって産生される。組換えヒトＩＬ－２１は、１５．４ｋＤａの分子量を有する１３２個のアミノ酸を含む単一の非グリコシル化ポリペプチド鎖である。組換えヒトＩＬ－２１は、ＰｒｏＳｐｅｃ－Ｔａｎｙ ＴｅｃｈｎｏＧｅｎｅ Ｌｔｄ．，Ｅａｓｔ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ（カタログ番号ＣＹＴ－４０８－ｂ）及びＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ（ヒトＩＬ－２１組換えタンパク質、カタログ番号１４－８２１９－８０）を含む、複数の供給業者から市販されている。本発明での使用に好適な組換えヒトＩＬ－２１のアミノ酸配列を表２に示す（配列番号８）。

「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」、または「治療量」が示される場合、投与される本発明の組成物の正確な量は、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度、及び健康状態の個人差を考慮して、医師によって決定され得る。一般に、本明細書に記載される腫瘍浸潤リンパ球（例えば、二次ＴＩＬまたは遺伝子修飾された細胞傷害性リンパ球）は、体重１ｋｇ当たり１０^４～１０^１１細胞（例えば、体重１ｋｇ当たり１０^５～１０^６、１０^５～１０^１０、１０^５～１０^１１、１０^６～１０^１０、１０^６～１０^１１、１０^７～１０^１１、１０^７～１０^１０、１０^８～１０^１１、１０^８～１０^１０、１０^９～１０^１１、または１０^９～１０^１０細胞）（それらの範囲内のすべての整数値を含む）の投与量で投与され得る。ＴＩＬ（場合によっては、遺伝子修飾細胞傷害性リンパ球を含む）組成物もまた、これらの投与量で複数回投与され得る。ＴＩＬ（場合によっては、遺伝子操作したＴＩＬを含む）は、免疫療法で一般的に知られている注入技法を使用することによって投与することができる（例えば、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．１９８８，３１９，１６７６を参照）。特定の患者に最適な投薬量及び治療レジーム（ｒｅｇｉｍｅ）は、患者を疾患の兆候について監視し、適宜に治療を調整することによって、医学分野の技術者によって容易に決定され得る。

「血液学的悪性腫瘍」、「血液系悪性腫瘍」という用語または相関する意味の用語は、血液、骨髄、リンパ節、及びリンパ系の組織を含むが、これらに限定されない、哺乳動物の造血組織及びリンパ組織のがん及び腫瘍を指す。血液学的悪性腫瘍は、「液体腫瘍」とも称される。血液学的悪性腫瘍には、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性リンパ腫（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）、ホジキンリンパ腫、及び非ホジキンリンパ腫が含まれ得るが、これらに限定されない。「Ｂ細胞血液学的悪性腫瘍」という用語は、Ｂ細胞を冒す血液学的悪性腫瘍を指す。

「液体腫瘍」という用語は、本来流体である異常な細胞塊を指す。液体腫瘍癌には、白血病、骨髄腫、及びリンパ腫、ならびに他の血液学的悪性腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。液体腫瘍から取得されたＴＩＬは、本明細書では骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）とも称され得る。末梢血中で循環する液体腫瘍を含む液体腫瘍から得られるＴＩＬは、本明細書ではＰＢＬとも称され得る。ＭＩＬ、ＴＩＬ、及びＰＢＬという用語は、本明細書で互換的に使用され、細胞が由来する組織タイプに基づいてのみ異なる。

本明細書で使用される「微小環境」という用語は、全体としての固形もしくは血液学的腫瘍微小環境、または微小環境内の細胞の個々のサブセットを指し得る。本明細書で使用される腫瘍微小環境は、Ｓｗａｒｔｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，２０１２，７２，２４７３に記載されるように、「腫瘍性形質転換を促進し、腫瘍成長及び浸潤を支持し、腫瘍を宿主免疫から保護し、治療抵抗性を助長し、かつ優勢な転移を成功させるニッチを提供する、細胞、可溶性因子、シグナル伝達分子、細胞外マトリックス、及び機械的手がかり」の複合混合物を指す。腫瘍はＴ細胞によって認識されるべき抗原を発現するが、微小環境による免疫抑制のため、免疫系による腫瘍クリアランスはまれである。

ある実施形態では、本発明は、ＴＩＬ集団でがんを治療する方法を含み、患者は、本発明によるＴＩＬの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ集団が提供され得、患者は、本発明によるＴＩＬの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。ある実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド６０ｍｇ／ｋｇ／日で２日間（ＴＩＬ注入の２７日前及び２６日前）、ならびにフルダラビン２５ｍｇ／ｍ２／日で５日間（ＴＩＬ注入の２７日前～２３日前）である。ある実施形態では、本発明による骨髄非破壊的化学療法及びＴＩＬ注入（０日目）後、患者は、生理学的許容範囲まで８時間毎に７２０，０００ＩＵ／ｋｇでＩＬ－２の静脈内注入を受ける。

実験的発見は、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、制御性Ｔ細胞及び免疫系の競合要素（「サイトカインシンク」）を排除することによって治療有効性を増強する上で重要な役割を果たすことを示す。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、本発明のＴＩＬを導入する前に、患者に対してリンパ球枯渇ステップ（「免疫抑制コンディショニング」と称されることもある）を利用する。

「有効量」または「治療有効量」という用語は、疾患治療を含むが、これに限定されない、意図された用途を達成するのに十分である、本明細書に記載の化合物または化合物の組み合わせの量を指す。治療有効量は、意図される用途（インビトロもしくはインビボ）、または治療される対象及び病状（例えば、対象の体重、年齢、及び性別）、病状の重症度、または投与方法に応じて異なり得る。この用語は、標的細胞において特定の応答（例えば、血小板粘着及び／または細胞遊走の低減）を誘導する用量にも適用される。特定の用量は、選択された特定の化合物、従うべき投薬レジメン、化合物が他の化合物と組み合わせて投与されるか、投与のタイミング、それが投与される組織、及び化合物が運ばれる物理的送達系に応じて異なる。

「治療」、「治療すること」、「治療する」などの用語は、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを指す。その効果は、その疾患または症状を完全にまたは部分的に予防するという観点において予防的であり得、及び／または疾患及び／またはその疾患に起因する副作用の部分的または完全な治癒という観点において治療的であり得る。「治療」は、本明細書で使用される場合、哺乳動物、特にヒトにおける疾患の任意の治療を包含し、（ａ）疾患にかかりやすい可能性があるが、まだ疾患を有すると診断されていない対象に疾患が生じるのを予防すること、（ｂ）疾患を抑制すること、すなわち、その発症または進行を抑止すること、及び（ｃ）疾患を軽減すること、すなわち、疾患の退行を引き起こし、及び／または１つ以上の疾患症状を軽減することを含む。「治療」は、疾患または状態がない場合でさえも、薬理学的効果を提供するための薬剤の送達を包含するようにも意図されている。例えば、「治療」は、病状がない場合、例えば、ワクチンの場合に免疫応答を誘発するか、または免疫を与えることができる組成物の送達を包含する。

「異種」という用語は、核酸またはタンパク質の一部に関して使用される場合、核酸またはタンパク質が、自然界では互いに同じ関係では見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す。例えば、核酸は、典型的には、組換え的に産生され、新たな機能的核酸、例えば、ある供給源からのプロモーター及び別の供給源からのコード領域、または異なる供給源からのコード領域を作製するように配置された無関係の遺伝子由来の２つ以上の配列を有する。同様に、異種タンパク質は、そのタンパク質が、自然界では互いに同じ関係では見出されない２つ以上の部分配列を含むことを示す（例えば、融合タンパク質）。

２つ以上の核酸またはポリペプチドの文脈における「配列同一性」、「同一性パーセント」、及び「配列同一性パーセント」（もしくはそれらの同義語、例えば「９９％同一」）という用語は、同じであるか、または配列同一性の一部としていかなる保存的アミノ酸置換も考慮せずに、最大一致のために比較し整列させた場合（必要に応じてギャップを導入する）、特定のパーセンテージの同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する２つ以上の配列または部分配列を指す。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定することができる。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを取得するために使用され得る様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当該技術分野で知られている。配列同一性パーセントの決定に好適なプログラムには、例えば、米国政府の国立生物工学情報センターのＢＬＡＳＴウェブサイトから入手可能なＢＬＡＳＴプログラム一式が含まれる。２つの配列間の比較は、ＢＬＡＳＴＮまたはＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのいずれかを使用して実行することができる。ＢＬＡＳＴＮは、核酸配列を比較するために使用され、ＢＬＡＳＴＰは、アミノ酸配列を比較するために使用される。ＤＮＡＳＴＡＲから入手可能なＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）、またはＭｅｇＡｌｉｇｎは、配列を整列させるために使用することができる追加の公的に入手可能なソフトウェアプログラムである。当業者であれば、特定のアラインメントソフトウェアによって最大アラインメントに適切なパラメータを決定することができる。ある特定の実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメータが使用される。

本明細書で使用される場合、「バリアント」という用語は、参照抗体のアミノ酸配列内または隣接する特定の位置における１つ以上の置換、欠失、及び／または付加により参照抗体のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む抗体または融合タンパク質を包含するが、これらに限定されない。バリアントは、参照抗体のアミノ酸配列と比較して、そのアミノ酸配列に１つ以上の保存的置換を含み得る。保存的置換は、例えば、同様に荷電したまたは非荷電のアミノ酸の置換を含み得る。バリアントは、参照抗体の抗原に特異的に結合する能力を保持している。バリアントという用語は、ペグ化抗体またはタンパク質も含む。

本明細書における「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」とは、対象の血流を離れて腫瘍に移動した白血球として最初に取得された細胞の集団を意味する。ＴＩＬには、ＣＤ８^＋細胞傷害性Ｔ細胞（リンパ球）、Ｔｈ１及びＴｈ１７ ＣＤ４^＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、樹状細胞、ならびにＭ１マクロファージが含まれるが、これらに限定されない。ＴＩＬには、一次ＴＩＬ及び二次ＴＩＬの両方が含まれる。「一次ＴＩＬ」は、本明細書に概説されるように患者組織試料から得られるもの（「新たに採取された」と称されることもある）であり、「二次ＴＩＬ」は、本明細書で考察されるように拡張または増殖された任意のＴＩＬ細胞集団であり、本明細書で考察されるバルクＴＩＬ、拡張ＴＩＬ（「ＲＥＰ ＴＩＬ」）、ならびに「ｒｅＲＥＰ ＴＩＬ」が含まれるが、これらに限定されない。ｒｅＲＥＰ ＴＩＬは、例えば、第２の拡張ＴＩＬまたは第２の追加の拡張ＴＩＬ（例えば、ｒｅＲＥＰ ＴＩＬと称されるＴＩＬを含む、図８のステップＤに記載されているものなど）を含み得る。

ＴＩＬは、一般に、細胞表面マーカーを使用して生化学的に定義されるか、または腫瘍に浸潤して治療を達成するそれらの能力によって機能的に定義されるかのいずれかであり得る。ＴＩＬは、一般に、ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲαβ、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ５６、ＣＣＲ７、ＣＤ４５Ｒａ、ＣＤ９５、ＰＤ－１、及びＣＤ２５のうちの１つ以上のバイオマーカーの発現によって分類され得る。さらに及び代替的に、ＴＩＬは、患者への再導入時に固形腫瘍に浸潤する能力により機能的に定義され得る。ＴＩＬは、効力によってさらに特徴付けられ得、例えば、インターフェロン（ＩＦＮ）放出が、約５０ｐｇ／ｍＬを超える、約１００ｐｇ／ｍＬを超える、約１５０ｐｇ／ｍＬを超える、または約２００ｐｇ／ｍＬを超える場合、ＴＩＬは強力であるとみなされ得る。

「デオキシリボヌクレオチド」という用語は、天然及び合成の、未修飾及び修飾デオキシリボヌクレオチドを包含する。修飾には、糖部分、塩基部分、及び／またはオリゴヌクレオチド中のデオキシリボヌクレオチド間の結合への変更が含まれる。

「ＲＮＡ」という用語は、少なくとも１つのリボヌクレオチド残基を含む分子を定義する。「リボヌクレオチド」という用語は、ｂ－Ｄ－リボフラノース部分の２′位にヒドロキシル基を有するヌクレオチドを定義する。ＲＮＡという用語には、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、部分的に精製されたＲＮＡなどの単離されたＲＮＡ、本質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ、組換え的に産生されたＲＮＡ、ならびに１つ以上のヌクレオチドの付加、欠失、置換、及び／または変化によって天然に存在するＲＮＡとは異なる変化したＲＮＡが含まれる。本明細書に記載のＲＮＡ分子のヌクレオチドはまた、非天然に存在するヌクレオチドまたは化学的に合成されたヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドなどの非標準ヌクレオチドを含み得る。これらの変化したＲＮＡは、類似体または天然に存在するＲＮＡの類似体と称され得る。

「薬学的に許容される担体」または「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤、ならびに不活性成分を含むよう意図されている。医薬品有効成分のためのかかる薬学的に許容される担体または薬学的に許容される賦形剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の薬学的に許容される担体または薬学的に許容される賦形剤が医薬品有効成分と適合しない場合を除いて、本発明の治療用組成物におけるその使用が企図される。他の薬物などの追加の医薬品有効成分を、記載された組成物及び方法に組み込むこともできる。

「約」及び「およそ」という用語は、値の統計的に有意な範囲内を意味する。かかる範囲は、所与の値または範囲の１桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、なおより好ましくは１０％以内、さらにより好ましくは５％以内であり得る。「約」または「およそ」という用語によって包含される許容偏差は、研究中の特定のシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。さらに、本明細書で使用される場合、「約」及び「およそ」という用語は、寸法、サイズ、配合、パラメータ、形状、ならびに他の量及び特徴が正確でなく、かつ正確である必要はないが、公差、変換係数、四捨五入、測定誤差など、及び当業者に知られている他の要因を反映して、必要に応じて、およそであってもよく、及び／またはそれよりも大きくても小さくてもよいことを意味する。一般に、寸法、サイズ、配合、パラメータ、形状、または他の量もしくは特徴は、そのように明示的に述べられているかにかかわらず、「約」または「およそ」である。非常に異なるサイズ、形状、及び寸法の実施形態が記載された配置を採用し得ることに留意されたい。

添付の特許請求の範囲で使用される場合、「含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」という移行用語は、元の形式及び補正された形式で、存在する場合、列挙されていない追加のクレーム要素またはステップが特許請（複数可）求の範囲から除外されるかに関して特許請求の範囲を定義する。「含む」という用語は、包括的または自由形式であるよう意図されており、いずれの追加の列挙されていない要素、方法、ステップ、または材料も除外しない。「からなる」という用語は、特許請求の範囲で指定されたもの以外のいずれの要素、ステップ、または材料も除外し、後者の場合、指定された材料（複数可）に通常関連する不純物も除外する。「から本質的になる」という用語は、特許請求の範囲を、特定の要素、ステップ、または材料（複数可）、及び特許請求された本発明の基本的及び新規の特徴（複数可）に実質的に影響を及ぼさないに限定する。本発明を具体化する本明細書に記載のすべての組成物、方法、及びキットは、代替の実施形態では、「含む」、「から本質的になる」、及び「からなる」という移行用語のうちのいずれかによってより具体的に定義され得る。

「抗体」及びその複数形の「抗体」という用語は、免疫グロブリン全体及び任意の抗原結合断片（「抗原結合部分」）またはその一本鎖を指す。「抗体」はさらに、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重鎖（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｈと略される）及び重鎖定常領域で構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の３つのドメインで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＶ_Ｌと略される）及び軽鎖定常領域で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Ｌで構成される。抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）または超可変領域（ＨＶＲ）と称され、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域が点在し得る、超可変性の領域にさらに細分化することができる。各Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序で配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、１つまたは複数の抗原エピトープと相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的な補体系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

「抗原」という用語は、免疫応答を誘導する物質を指す。いくつかの実施形態では、抗原は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子によって提示される場合、抗体またはＴＣＲによって結合されることができる分子である。本明細書で使用される「抗原」という用語はまた、Ｔ細胞エピトープを包含する。抗原は、追加として免疫系によって認識されることができる。いくつかの実施形態では、抗原は、体液性免疫応答または細胞性免疫応答を誘導することができ、Ｂリンパ球及び／またはＴリンパ球の活性化につながる。場合によっては、これは、抗原がＴｈ細胞エピトープを含むか、またはそれに結合されることを必要とし得る。抗原はまた、１つ以上のエピトープ（例えば、Ｂ－及びＴ－エピトープ）を有し得る。いくつかの実施形態では、抗原は、好ましくは、典型的には非常に特異的かつ選択的な方法で、対応する抗体またはＴＣＲと反応し、他の抗原によって誘導され得る多数の他の抗体またはＴＣＲとは反応しない。

「モノクローナル抗体」、「ｍＡｂ」、「モノクローナル抗体組成物」という用語、またはそれらの複数形は、単一分子組成の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一の結合特異性及び親和性を示す。特定の受容体に特異的なモノクローナル抗体は、試験対象に好適な抗原を注入し、次いで、所望の配列または機能的特徴を有する抗体を発現するハイブリドーマを単離するという当該技術分野における知識及び技術を使用して作製することができる。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの好ましい供給源として機能する。一旦単離されると、ＤＮＡは、発現ベクターに入れられ、次いで、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされて、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を取得することができる。抗体の組換え産生については、以下でより詳細に説明する。

本明細書で使用される、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」（または単に「抗体部分」もしくは「断片」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される結合断片の例には、（ｉ）Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_Ｌ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片、（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって結合された２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ′）２断片、（ｉｉｉ）Ｖ_Ｈ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｖ）抗体の単一アームのＶ_Ｌ及びＶ_ＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌドメインからなり得るドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９８９，３４１，５４４－５４６）、ならびに（ｖｉ）単離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。Ｆｖ断片の２つのドメイン、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈは、別々の遺伝子によってコードされるが、これらは、組換え方法を使用して、Ｖ_Ｌ及びＶ_Ｈ領域が対合して、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる一価分子を形成する単一タンパク質鎖としてそれらを作製することを可能にする合成リンカーによって接合され得、例えば、Ｂｉｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４２，４２３－４２６、及びＨｕｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１９８８，８５，５８７９－５８８３）を参照されたい。かかるｓｃＦｖ抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」または「抗原結合断片」という用語に包含されることを意図している。これらの抗体断片は、当業者に知られている従来の技法を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。ある実施形態では、ｓｃＦｖタンパク質ドメインは、Ｖ_Ｈ部分及びＶ_Ｌ部分を含む。ｓｃＦｖ分子は、Ｖ_ＬドメインがｓｃＦｖ分子のＮ末端部分である場合、Ｖ_Ｌ－Ｌ－Ｖ_Ｈ、またはＶ_ＨドメインがｓｃＦｖ分子のＮ末端部分である場合、Ｖ_Ｈ－Ｌ－Ｖ_Ｌのいずれかとして示される。ｓｃＦｖ分子を作製し、好適なペプチドリンカーを設計するための方法は、米国特許第４，７０４，６９２号、米国特許第４，９４６，７７８号、Ｒ．Ｒａａｇ ａｎｄ Ｍ．Ｗｈｉｔｌｏｗ，“Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｈａｉｎ Ｆｖｓ．”ＦＡＳＥＢ Ｖｏｌ ９：７３－８０（１９９５）及びＲ．Ｅ．Ｂｉｒｄ ａｎｄ Ｂ．Ｗ．Ｗａｌｋｅｒ，Ｓｉｎｇｌｅ Ｃｈａｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ，ＴＩＢＴＥＣＨ，Ｖｏｌ ９：１３２－１３７（１９９１）に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方が、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことを意図している。さらに、抗体が定常領域を含む場合、定常領域はまた、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロでのランダムもしくは部位特異的変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異）。本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を含むことを意図しない。

「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する単一の結合特異性を示す抗体を指す。実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマによって産生される。

本明細書で使用される「組換えヒト抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作成、または単離されるすべてのヒト抗体、例えば（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子またはそれから調製されたハイブリドーマ（以下でさらに説明される）についてトランスジェニックまたはトランス染色体である動物（マウスなど）から単離された抗体、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、及び（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む、任意の他の手段によって調製、発現、作成、または単離された抗体を含む。かかる組換えヒト抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態では、かかる組換えヒト抗体は、インビトロ変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞変異誘発）に供され得、したがって、組換え抗体のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌ配列に由来し、関連しているが、インビボでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に自然に存在しない可能性がある配列である。

本明細書で使用される場合、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。

「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」という句は、本明細書では「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と交換可能に使用される。

「ヒト抗体誘導体」という用語は、抗体と別の医薬品有効成分または抗体とのコンジュゲートを含む、ヒト抗体の任意の修飾形態を指す。「コンジュゲート」、「抗体薬物コンジュゲート」、「ＡＤＣ」、または「免疫コンジュゲート」という用語は、別の治療部分にコンジュゲートされた抗体またはその断片を指し、これは当該技術分野において使用可能な方法を使用して、本明細書に記載の抗体にコンジュゲートされ得る。

「ヒト化抗体」、「ヒト化抗体（複数）」、及び「ヒト化」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列に移植されている抗体を指すことを意図している。追加のフレームワーク領域の修飾は、ヒトフレームワーク配列内で行うことができる。非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）または非ヒト霊長類の１５超可変領域からの残基によって置き換えられる。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体の性能をさらに向上させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的すべてを含むことになる。ヒト化抗体はまた、任意選択で、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少なくとも一部を含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９８６，３２１，５２２－５２５、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ１９８８，３３２，３２３－３２９、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．１９９２，２，５９３－５９６を参照されたい。本明細書に記載される抗体はまた、エフェクター機能及び／またはＦｃＲ結合の改善（例えば、低減）を与えることが知られている任意のＦｃバリアントを用いるように修飾され得る。Ｆｃバリアントは、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ１９８８／０７０８９Ａ１号、同第ＷＯ１９９６／１４３３９Ａ１号、同第ＷＯ１９９８／０５７８７Ａ１号、同第ＷＯ１９９８／２３２８９Ａ１号、同第ＷＯ１９９９／５１６４２Ａ１号、同第ＷＯ９９／５８５７２Ａ１号、同第ＷＯ２０００／０９５６０Ａ２号、同第ＷＯ２０００／３２７６７Ａ１号、同第ＷＯ２０００／４２０７２Ａ２号、同第ＷＯ２００２／４４２１５Ａ２号、同第ＷＯ２００２／０６０９１９Ａ２号、同第ＷＯ２００３／０７４５６９Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０１６７５０Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０２９２０７Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０３５７５２Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０６３３５１Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０７４４５５Ａ２号、同第ＷＯ２００４／０９９２４９Ａ２号、同第ＷＯ２００５／０４０２１７Ａ２号、同第ＷＯ２００５／０７０９６３Ａ１号、同第ＷＯ２００５／０７７９８１Ａ２号、同第ＷＯ２００５／０９２９２５Ａ２号、同第ＷＯ２００５／１２３７８０Ａ２号、同第ＷＯ２００６／０１９４４７Ａ１号、同第ＷＯ２００６／０４７３５０Ａ２号、及び同第ＷＯ２００６／０８５９６７Ａ２号、ならびに米国特許第５，６４８，２６０号、同第５，７３９，２７７号、同第５，８３４，２５０号、同第５，８６９，０４６号、同第６，０９６，８７１号、同第６，１２１，０２２号、同第６，１９４，５５１号、同第６，２４２，１９５号、同第６，２７７，３７５号、同第６，５２８，６２４号、同第６，５３８，１２４号、同第６，７３７，０５６号、同第６，８２１，５０５号、同第６，９９８，２５３号、及び同第７，０８３，７８４号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるアミノ酸置換のうちのいずれか１つを含み得る。

「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことを意図している。

「二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片である。断片は、同じポリペプチド鎖（Ｖ_Ｈ－Ｖ_ＬまたはＶ_Ｌ－Ｖ_Ｈ）中に軽鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｌ）に接続された重鎖可変ドメイン（Ｖ_Ｈ）を含む。同じ鎖上の２つのドメインをペアリングするには短すぎるリンカーを使用すると、ドメインは別のチェーンの相補ドメインとペアリングさせられ、２つの抗原結合部位が作成される。二重特異性抗体は、例えば、欧州特許第ＥＰ４０４，０９７号、国際特許公開第ＷＯ９３／１１１６１号、及びＢｏｌｌｉｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１９９３，９０，６４４４－６４４８においてより完全に記載されている。

「グリコシル化」という用語は、抗体の修飾誘導体を指す。非グリコシル化抗体は、グリコシル化を欠いている。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるように変化され得る。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変化させることによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の排除をもたらす、１つ以上のアミノ酸置換を行ない、それによってその部位でのグリコシル化を排除することができる。米国特許第５，７１４，３５０号及び同第６，３５０，８６１号に記載されているように、非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高める可能性がある。加えてまたは代替的に、改変した種類のグリコシル化を有する抗体、例えば、フコシル残基の量が低減した低フコシル化抗体または二分ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体が作製され得る。かかるグリコシル化パターンの変化は、抗体の能力を増加させることが実証されている。かかる炭水化物修飾は、例えば、抗体をグリコシル化機構が変化した宿主細胞で発現させることによって達成され得る。グリコシル化機構が変化した細胞については、当該技術分野で説明されており、本発明の組換え抗体を発現させ、それによりグリコシル化が変化した抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９細胞株で発現される抗体が、それらの炭水化物上のフコースを欠くように、細胞株Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９は、フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８（アルファ（１，６）フコシルトランスフェラーゼ）を欠く。Ｍｓ７０４、Ｍｓ７０５、及びＭｓ７０９ ＦＵＴ８－／－細胞株は、２つの置換ベクターを使用したＣＨＯ／ＤＧ４４細胞中のＦＵＴ８遺伝子の標的破壊によって作成された（例えば、米国特許公開第２００４／０１１０７０４号またはＹａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８７，６１４－６２２を参照）。別の例として、欧州特許第ＥＰ１，１７６，１９５号は、フコシルトランスフェラーゼをコードし、それによりかかる細胞株で発現される抗体が、アルファ１，６結合関連酵素を低減または排除することによって低フコシル化を示す、機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を説明しており、抗体のＦｃ領域に結合するＮ－アセチルグルコサミンにフコースを付加するための酵素活性が低いか、または酵素活性を有しない細胞株、例えばラット骨髄腫細胞株ＹＢ２／０（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６６２）についても説明している。国際特許公開第ＷＯ０３／０３５８３５号は、フコースをＡｓｎ（２９７）結合型炭水化物に付着させる能力が低減し、さらにその宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化ももたらすバリアントＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃ１３細胞について説明している（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２，２７７，２６７３３－２６７４０も参照）。国際特許公開第ＷＯ９９／５４３４２号は、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作され、それにより操作された細胞株で発現される抗体が、二分性ＧｌｃＮａｃ構造の増加を示し、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす、細胞株について記載している（Ｕｍａｎａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９９，１７，１７６－１８０も参照）。代替てきに、フコシダーゼ酵素を使用して、抗体のフコース残基を切断でき得る。例えば、フコシダーゼアルファ－Ｌ－フコシダーゼは、Ｔａｒｅｎｔｉｎｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９７５，１４，５５１６－５５２３に記載されているように、抗体からフコシル残基を除去する。

「ペグ化」は、１つ以上のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に付着する条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）と反応させる、修飾抗体またはその断片を指す。ペグ化は、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させることができる。好ましくは、ペグ化は、反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアシル化反応またはアルキル化反応を介して実行される。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（Ｃ_１～Ｃ_１０）アルコキシ－もしくはアリールオキシ－ポリエチレングリコール、またはポリエチレングリコール－マレイミドなどの、他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のうちのいずれかを包含することが意図される。ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体であり得る。ペグ化のための方法は、当該技術分野で知られており、例えば欧州特許第ＥＰ０１５４３１６号及び同第ＥＰ０４０１３８４号、ならびに米国特許第５，８２４，７７８号（各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、本発明の抗体に適用することができる。

「バイオシミラー」という用語は、モノクローナル抗体またはタンパク質を含む、臨床的に不活性な成分にわずかな違いがあるにもかかわらず、米国で認可された参照バイオ製品と非常に類似しており、製品の安全性、純度、及び効力に関してバイオ製品と参照製品との間に臨床的に意味のある差異がない、バイオ製品を意味する。さらに、類似のバイオまたは「バイオシミラー」医薬品は、欧州医薬品庁によって既に使用が許可されている別のバイオ医薬品に類似したバイオ医薬品である。「バイオシミラー」という用語は、他の国及び地域の規制機関によっても同義的に使用されている。バイオ製品またはバイオ医薬品は、細菌または酵母などの生物源によって作製された、またはそれに由来する医薬品である。それらは、ヒトインスリンもしくはエリスロポエチンなどの比較的小さな分子、またはモノクローナル抗体などの複雑な分子からなり得る。例えば、参照ＩＬ－２タンパク質がアルデスロイキン（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ）である場合、アルデスロイキンに関して薬物規制当局によって承認されたタンパク質は、アルデスロイキンの「バイオシミラー」であるか、またはアルデスロイキンの「そのバイオシミラー」である。欧州では、類似のバイオまたは「バイオシミラー」医薬品は、欧州医薬品庁（ＥＭＡ）によって既に使用が許可されている別のバイオ医薬品に類似したバイオ医薬品である。欧州における同様の生物学的用途に関連する法的根拠は、補正されたＲｅｇｕｌａｔｉｏｎ（ＥＣ）Ｎｏ ７２６／２００４の第６条及びＤｉｒｅｃｔｉｖｅ ２００１／８３／ＥＣの第１０（４）条であり、したがって欧州では、バイオシミラーは、Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ（ＥＣ）Ｎｏ ７２６／２００４の第６条及びＤｉｒｅｃｔｉｖｅ ２００１／８３／ＥＣの第１０（４）条の下で、認可または認可申請の対象について認可、承認され得る。すでに認可されているオリジナルのバイオ医薬品は、欧州では「参照医薬品」と称されることがある。バイオシミラーとみなされる製品に対する要件のうちのいくつかは、バイオシミラー医薬品に関するＣＨＭＰガイドラインに概説されている。さらに、モノクローナル抗体バイオシミラーに関連するガイドラインを含む製品固有のガイドラインは、ＥＭＡによって製品毎に提供され、そのウェブサイトで公開されている。本明細書に記載のバイオシミラーは、品質特徴、生物活性、作用機序、安全性プロファイル、及び／または有効性の点で、参照医薬品に類似している可能性がある。さらに、バイオシミラーは、参照医薬品と同じ状態を治療するために使用され得るか、または使用を意図され得る。したがって、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した品質特徴を有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した生物活性を有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した安全性プロファイルを有するとみなされ得る。代替的に、またはさらに、本明細書に記載のバイオシミラーは、参照医薬品と類似または非常に類似した効力を有するとみなされ得る。本明細書に記載されているように、欧州におけるバイオシミラーは、ＥＭＡによって認可された参照医薬品と比較される。しかしながら、場合によっては、バイオシミラーは、特定の研究で欧州経済領域外で認可されたバイオ医薬品（ＥＥＡ認可されていない「コンパレーター」）と比較される場合がある。かかる研究には、例えば、特定の臨床研究及びインビボ非臨床研究が含まれる。本明細書で使用される場合、「バイオシミラー」という用語は、ＥＥＡ認可されていないコンパレーターと比較された、または比較され得るバイオ医薬品にも関する。特定のバイオシミラーは、抗体、抗体断片（例えば、抗原結合部分）、及び融合タンパク質などのタンパク質である。タンパク質バイオシミラーは、ポリペプチドの機能に有意な影響を及ぼさない、アミノ酸構造にわずかな修飾（例えば、アミノ酸の欠失、付加、及び／または置換を含む）を有するアミノ酸配列を有し得る。バイオシミラーは、その参照医薬品のアミノ酸配列に対して９７％以上、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。バイオシミラーは、その違いが医薬品の安全性及び／または有効性の変化をもたらさないならば、１つ以上の翻訳後修飾、例えば、限定されないが、参照医薬品の翻訳後修飾とは異なる、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び／または切断を含み得る。バイオシミラーは、参照医薬品と同一または異なるグリコシル化パターンを有し得る。特に、排他的ではないが、バイオシミラーは、その違いが参照医薬品に関連する安全性の懸念に対処するか、対処することを意図している場合、異なるグリコシル化パターンを有し得る。加えて、バイオシミラーは、医薬品の安全性及び有効性が損なわれないならば、例えば、その強度、剤形、製剤、賦形剤、及び／または提示において参照医薬品から逸脱する可能性がある。バイオシミラーは、参照医薬品と比較して、例えば薬物動態（ＰＫ）及び／または薬力学的（ＰＤ）プロファイルの違いを含み得るが、それでも、認可される、または認可に適しているとみなされるように、参照医薬品と十分に類似しているとみなされる。特定の状況において、バイオシミラーは、参照医薬品と比較して異なる結合特徴を示し、異なる結合特徴は、ＥＭＡなどの規制当局によって類似のバイオ製品としての認可の障壁ではないとみなされる。「バイオシミラー」という用語は、他の国及び地域の規制機関によっても同義的に使用されている。

ＩＩＩ．Ｇｅｎ２ ＴＩＬ製造プロセス
これらの特徴のうちのいくつかを含む、Ｇｅｎ２として知られる（プロセス２Ａとしても知られる）ＴＩＬプロセスの例示的なファミリーが、図１及び２に示される。Ｇｅｎ２の実施形態を図２に示す。

本明細書で考察されるように、本発明は、患者への移植前に凍結保存されたＴＩＬを再刺激して、それらの代謝活性、ひいては相対的健康を向上させることに関するステップ、及び当該代謝健康を試験する方法を含み得る。本明細書で一般に概説されるように、ＴＩＬは、一般に、患者試料から採取され、患者への移植前にそれらの数を拡張するように操作される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、以下で考察されるように、任意で遺伝子操作され得る。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、凍結保存され得る。解凍した時点で、それらが再刺激されて、患者への注入前に代謝を高めることができる。

いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図で詳細に考察されるように、第１の拡張（ＲＥＰ前と称されるプロセス、ならびに図１にステップＡとして示されるプロセスを含む）は、３～１４日に短縮され、第２の拡張（ＲＥＰと称されるプロセス、ならびに図１にステップＢとして示されるプロセスを含む）は、７～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張（例えば、図１にステップＢとして記載される拡張）は、１１日に短縮され、第２の拡張（例えば、図１にステップＤとして記載される拡張）は、１１日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図で詳細に考察されるように、第１の拡張と第２の拡張との組み合わせ（例えば、図１にステップＢ及びステップＤとして記載される拡張）は、２２日に短縮される。

以下の「ステップ」表記Ａ、Ｂ、Ｃなどは、図１を参照し、本明細書に記載のある特定の実施形態を参照する。以下及び図１におけるステップの順序は例示であり、ステップの任意の組み合わせまたは順序、ならびに追加のステップ、ステップの繰り返し、及び／またはステップの省略は、本出願及び本明細書に開示される方法によって企図される。

Ａ．ステップＡ：患者の腫瘍試料を取得する
一般に、ＴＩＬは、最初に患者の腫瘍試料から取得され、その後、本明細書に記載されるさらなる操作のためにより大きい集団に拡張され、任意選択で凍結保存され、本明細書に概説されるように再刺激され、任意選択でＴＩＬ健康の指標として表現型及び代謝パラメータについて評価される。

患者の腫瘍試料は、一般に外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または腫瘍細胞とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段を介して、当該技術分野で知られている方法を使用して取得することができる。いくつかの実施形態では、多病変サンプリングが使用される。いくつかの実施形態では、外科的切除、針生検、コア生検、小生検、または腫瘍細胞とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を取得するための他の手段は、多病変サンプリングを含む（すなわち、患者の１つ以上の腫瘍引用及び／または場所、ならびに同じ場所または近接した１つ以上の腫瘍から試料を取得する）。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む、任意の固形腫瘍に由来し得る。腫瘍試料は、血液系悪性腫瘍から取得された腫瘍などの液体腫瘍であり得る。固形腫瘍は、肺組織のものであり得る。いくつかの実施形態では、有用なＴＩＬは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）から得られる。

取得された時点で、腫瘍試料は、一般に、鋭的解剖を使用して１～約８ｍｍ^３の小片に断片化され、約２～３ｍｍ^３が特に有用である。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、酵素腫瘍消化物を使用してこれらの断片から培養される。かかる腫瘍消化物は、酵素培地（例えば、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０緩衝液、２ｍＭグルタミン酸、１０ｍｃｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０単位／ｍＬ ＤＮａｓｅ、及び１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ）中でのインキュベーション、続いて、機械的解離（例えば、組織解離機を使用する）によって産生され得る。腫瘍消化物は、腫瘍を酵素培地に入れ、腫瘍をおよそ１分間機械的に解離させ、続いて５％ ＣＯ_２中３７℃で３０分間インキュベートし、続いて小さな組織片のみが存在するまで、前述の条件下で機械的解離及びインキュベーションのサイクルを繰り返すことによって産生することができる。このプロセスの最後に、細胞懸濁液中に多数の赤血球または死細胞が含まれている場合、ＦＩＣＯＬＬ分岐親水性多糖類を使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものなどの当該技術分野で知られている代替の方法を使用することができる。前述の方法のうちのいずれかが、ＴＩＬを拡張する方法またはがんを治療する方法について本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかにおいて使用され得る。

腫瘍解離酵素混合物には、１つ以上の解離（消化）酵素、例えば、限定されないが、コラゲナーゼ（任意のブレンドまたはコラゲナーゼの種類を含む）、Ａｃｃｕｔａｓｅ（商標）、Ａｃｃｕｍａｘ（商標）、ヒアルロニダーゼ、中性プロテアーゼ（ディスパーゼ）、キモトリプシン、キモパパイン、トリプシン、カゼイナーゼ、エラスターゼ、パパイン、ＸＩＶ型プロテアーゼ（プロナーゼ）、デオキシリボヌクレアーゼＩ（ＤＮａｓｅ）、トリプシン阻害剤、任意の他の解離酵素またはタンパク質分解酵素、及びそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。

いくつかの実施形態では、解離酵素は、凍結乾燥酵素から再構成される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥酵素は、ＨＢＳＳなどの滅菌緩衝液の量で再構成される。

いくつかの事例では、コラゲナーゼ（アニマルフリー１型コラゲナーゼなど）を、１０ｍＬの滅菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液で再構成する。凍結乾燥ストック酵素は、２８９２ＰＺ Ｕ／バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、５ｍＬ～１５ｍＬの緩衝液中で再構成される。いくつかの実施形態では、再構成後のコラゲナーゼストックは、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬの範囲、例えば、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約３５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約３００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２１０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２２０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２３０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２４０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２６０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２７０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２８０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２８９．２ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約３００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約３５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、または約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬである。

いくつかの実施形態では、中性プロテアーゼは、１ｍＬの滅菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥ストック酵素は、１７５ＤＭＣＵ／バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、再構成後の中性プロテアーゼストックは、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬの範囲、例えば、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約３５０ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約３００ＤＭＣ／ｍＬ、約１５０ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ、約１１０ＤＭＣ／ｍＬ、約１２０ＤＭＣ／ｍＬ、約１３０ＤＭＣ／ｍＬ、約１４０ＤＭＣ／ｍＬ、約１５０ＤＭＣ／ｍＬ、約１６０ＤＭＣ／ｍＬ、約１７０ＤＭＣ／ｍＬ、約１７５ＤＭＣ／ｍＬ、約１８０ＤＭＣ／ｍＬ、約１９０ＤＭＣ／ｍＬ、約２００ＤＭＣ／ｍＬ、約２５０ＤＭＣ／ｍＬ、約３００ＤＭＣ／ｍＬ、約３５０ＤＭＣ／ｍＬ、または約４００ＤＭＣ／ｍＬである。

いくつかの実施形態では、ＤＮＡｓｅ Ｉは、１ｍＬの滅菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥したストック酵素は、４ＫＵ／バイアルの濃度であった。いくつかの実施形態では、再構成後のＤＮａｓｅ Ｉストックは、約１ＫＵ／ｍＬ～１０ＫＵ／ｍＬ、例えば、約１ＫＵ／ｍＬ、約２ＫＵ／ｍＬ、約３ＫＵ／ｍＬ、約４ＫＵ／ｍＬ、約５ＫＵ／ｍＬ、約６ＫＵ／ｍＬ、約７ＫＵ／ｍＬ、約８ＫＵ／ｍＬ、約９ＫＵ／ｍＬ、または約１０ＫＵ／ｍＬの範囲である。

いくつかの実施形態では、酵素のストックは可変であり、濃度を決定する必要があり得る。いくつかの実施形態では、凍結乾燥ストックの濃度を検証することができる。いくつかの実施形態では、消化カクテルに添加される酵素の最終量は、決定されたストック濃度に基づいて調整される。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、約４．７ｍｌの滅菌ＨＢＳＳ中に約１０．２ｕｌの中性プロテアーゼ（０．３６ＤＭＣ Ｕ／ｍＬ）、２１．３μＬのコラゲナーゼ（１．２ＰＺ／ｍＬ）及び２５０ｕｌのＤＮＡｓｅ Ｉ（２００Ｕ／ｍＬ）を含む。

上に示されるように、いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、固形腫瘍に由来する。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、断片化されない。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は断片化されず、全腫瘍として酵素消化に供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で１～２時間消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で１～２時間、３７℃、５％ＣＯ_２で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で１～２時間、３７℃、５％ＣＯ_２で回転を伴って消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、３７℃、５％ＣＯ_２で一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、全腫瘍が酵素と組み合わされて、腫瘍消化反応混合物が形成される。

いくつかの実施形態では、腫瘍は、滅菌緩衝液中の凍結乾燥酵素で再構成される。いくつかの実施形態では、緩衝液は、滅菌ＨＢＳＳである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、コラゲナーゼを含む。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、コラゲナーゼＩＶである。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼの作業ストックは、１００ｍｇ／ｍＬの１０倍作業ストックである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、ＤＮＡｓｅを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡｓｅの作業ストックは、１０，０００ＩＵ／ｍＬの１０倍作業ストックである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、ヒアルロニダーゼを含む。いくつかの実施形態では、ヒアルロニダーゼの作業ストックは、１０ｍｇ／ｍＬの１０倍作業ストックである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、１０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ、１０００ＩＵ／ｍＬのＤＮＡｓｅ、及び１ｍｇ／ｍＬのヒアルロニダーゼを含む。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、１０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ、５００ＩＵ／ｍＬのＤＮＡｓｅ、及び１ｍｇ／ｍＬのヒアルロニダーゼを含む。

一般に、採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。

いくつかの実施形態では、断片化は、例えば、解剖及び消化を含む物理的断片化を含む。いくつかの実施形態では、断片化は、物理的断片化である。いくつかの実施形態では、断片化は、解剖である。いくつかの実施形態では、断片化は、消化によるものである。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、最初に、患者から取得された酵素腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養され得る。ある実施形態では、ＴＩＬは、最初に、患者から得られた酵素腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養され得る。

腫瘍が固形腫瘍であるいくつかの実施形態では、腫瘍試料が、例えば、ステップＡ（図１に提供される）で取得された後、腫瘍は物理的断片化を受ける。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存前に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存後に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、腫瘍を得た後に、いずれの凍結保存もない場合に起こる。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、１０、２０、３０、４０個またはそれ以上の断片または小片が、第１の拡張のために各容器内に配置される。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、３０または４０個の断片または小片が、第１の拡張のために各容器内に配置される。いくつかの実施形態では、腫瘍は断片化され、４０個の断片または小片が、第１の拡張のために各容器内に配置される。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約４～約５０個の断片を含み、各断片は、約２７ｍｍ^３の体積を有する。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約１３００ｍｍ^３～約１５００ｍｍ^３の総体積を伴う約３０～約６０個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約１３５０ｍｍ^３の総体積を伴う約５０個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約１グラム～約１．５グラムの総質量を伴う約５０個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約４個の断片を含む。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍断片から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、鋭的解剖によって取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３～１０ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３～８ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約２ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約３ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約４ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約５ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約６ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約７ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約８ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約９ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１０ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、１～４ｍｍ×１～４ｍｍ×１～４ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、１ｍｍ×１ｍｍ×１ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、２ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍は、４ｍｍ×４ｍｍ×４ｍｍである。

いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性、壊死性、及び／または脂肪性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の壊死性組織の量を最小化するために切除される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の脂肪性組織の量を最小化するために切除される。

いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、腫瘍の内部構造を維持するために行われる。いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、メスでのこ引き動作を行うことなく行われる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍消化物から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、ＲＰＭＩ１６４０（２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮａｓｅ、及び１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ）であるが、これに限定されない酵素培地中でのインキュベーション、続いて、機械的解離（ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）によって生成された。腫瘍を酵素培地に入れた後、腫瘍は、およそ１分間機械的に解離され得る。その後、溶液が５％ＣＯ_２中３７℃で３０分間インキュベートされ、その後、およそ１分間再び機械的に破壊され得る。５％ ＣＯ_２中３７℃で３０分間再びインキュベートした後、腫瘍を、およそ１分間、３回目に機械的に破壊することができる。いくつかの実施形態では、大きい組織片が存在する場合、３回目の機械的破壊後、５％ＣＯ_２中３７℃でさらに３０分間インキュベートするかにかかわらず、１回または２回の追加の機械的解離が試料に適用された。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液が多数の赤血球または死細胞を含む場合、最終インキュベーションの終わりに、Ｆｉｃｏｌｌを使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。

いくつかの実施形態では、第１の拡張ステップの前に採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。

いくつかの実施形態では、細胞は、試料採取後に任意選択で凍結され、ステップＢに記載される拡張に入る前に凍結保存され得、これは、以下でさらに詳細に説明され、図１にも例示される。

１．胸水Ｔ細胞及びＴＩＬ
いくつかの実施形態では、試料は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのＴ細胞ＴＩＬの供給源は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、試料は、胸水由来試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのＴＩＬの供給源は、胸水由来試料である。例えば、米国特許公開第２０１４／０２９５４２６号に記載されている方法を参照されたく、これはすべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬと思われる、及び／またはＴＩＬを含む任意の胸腔内液または胸水を利用することができる。かかる試料は、ＮＳＣＬＣもしくはＳＣＬＣなどの原発性または転移性肺癌に由来し得る。いくつかの実施形態では、試料は、別の臓器、例えば、乳房、卵巣、結腸、または前立腺に由来する二次転移性がん細胞であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜浸出液である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜漏出液である。他の生体試料は、例えば、腹部からの腹水または膵嚢胞液を含む、ＴＩＬを含有する他の漿液を含み得る。腹水及び胸腔内液は、非常に類似した化学系を伴い、腹部及び肺の両方が、悪性腫瘍における同じ物質の胸膜空間及び腹部空間に中皮線及び流体形態を有し、いくつかの実施形態では、かかる流体は、ＴＩＬを含有する。本開示が胸水を例示するいくつかの実施形態では、同じ方法が、胸腔内液またはＴＩＬを含有する他の嚢胞液を使用して同様の結果で実行されてもよい。

いくつかの実施形態では、胸腔内液は、患者から直接除去された未処理の形態である。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、接触ステップの前に、ＥＤＴＡまたはヘパリンチューブなどの標準的な採血管に入れられる。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、接触ステップの前に、標準的なＣｅｌｌＳａｖｅ（登録商標）チューブ（Ｖｅｒｉｄｅｘ）に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、生存ＴＩＬの数の減少を避けるために、患者から採取した直後にＣｅｌｌＳａｖｅチューブに入れられる。生存ＴＩＬの数は、４℃であっても、未処理の胸腔内液中に放置されると、２４時間以内に大幅に減少する可能性がある。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの除去後１時間、５時間、１０時間、１５時間、または最大２４時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、４℃で、患者からの除去後１時間、５時間、１０時間、１５時間、または最大２４時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。

いくつかの実施形態では、選択された対象からの胸腔内液試料は、希釈され得る。一実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：１０である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：９である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：８である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：５である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：２である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：１である。いくつかの実施形態では、希釈剤には、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、別の緩衝液、または生理学的に許容される希釈剤が含まれる。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの収集及び希釈の直後にＣｅｌｌＳａｖｅチューブ内に入れられ、生存ＴＩＬの減少を回避し、これは、４℃であっても、未処理の胸腔内液中に放置された場合、２４～４８時間以内に有意に生じ得る。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、患者からの除去及び希釈後１時間、５時間、１０時間、１５時間、２４時間、３６時間、最大４８時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、４℃で、患者からの除去及び希釈後１時間、５時間、１０時間、１５時間、２４時間、３６時間、最大４８時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。

さらに別の実施形態では、胸腔内液試料は、さらなる処理ステップの前に、従来の手段によって濃縮される。いくつかの実施形態では、胸腔内液のこの前処理は、方法を実施する実験室への輸送のために、またはその後の分析のために（例えば、採取後２４～４８時間より後に）胸水を凍結保存しなければならない状況において好ましい。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、それが対象から採取された後に胸腔内液試料を遠心分離し、遠心分離物またはペレットを緩衝液中に再懸濁することによって調製される。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、輸送または後の分析及び／または処理のために凍結保存される前に、複数の遠心分離及び再懸濁に供される。

いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、濾過法を使用することによって、さらなる処理ステップの前に濃縮される。いくつかの実施形態では、接触ステップで使用される胸腔内液試料は、胸腔内液が膜を通過することを可能にするが腫瘍細胞を保持する、既知で本質的に均一な孔径を含むフィルターをとおして流体を濾過することによって調製される。いくつかの実施形態では、膜の細孔の直径は、少なくとも４μＭであり得る。別の実施形態では、細孔直径は、５μＭ以上であり得、他の実施形態では、６、７、８、９、または１０μＭのうちのいずれかであり得る。濾過後、膜によって保持されたＴＩＬを含む細胞を、膜から適切な生理学的に許容される緩衝液にすすいでもよい。次いで、このように濃縮されたＴＩＬを含む細胞は、方法の接触ステップで使用することができる。

いくつかの実施形態では、胸腔内液試料（例えば、未処理の胸腔内液を含む）、希釈胸腔内液、または再懸濁細胞ペレットは、試料中に存在する無核赤血球を特異的に溶解する溶解試薬と接触させる。いくつかの実施形態では、このステップは、胸腔内液がかなりの数のＲＢＣを含む状況で、さらなる処理ステップの前に行われる。好適な溶解試薬には、単一の溶解試薬もしくは溶解試薬及びクエンチ試薬、または溶解剤、クエンチ試薬及び固定試薬が含まれる。好適な溶解システムは市販されており、ＢＤ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（商標）システム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）が含まれる。他の溶解システムには、Ｖｅｒｓａｌｙｓｅ（商標）システム、ＦＡＣＳｌｙｓｅ（商標）システム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）、Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｐ（商標）システム、またはＥｒｙｔｈｒｏｌｙｓｅ ＩＩシステム（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）、または塩化アンモニウムシステムが含まれる。いくつかの実施形態では、溶解試薬は、赤血球の効率的な溶解、ならびに胸水におけるＴＩＬ及びＴＩＬの表現型特性の保存のような主要な要件によって異なり得る。溶解のための単一の試薬を利用することに加えて、本明細書に記載の方法に有用な溶解システムは、第２の試薬、例えば、方法の残りのステップ中に溶解試薬の効果をクエンチまたは遅延させるもの、例えばＳｔａｂｉｌｙｓｅ（商標）試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）を含むことができる。溶解試薬の選択または方法の好ましい実施に応じて、従来の固定試薬を使用することもできる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、未処理、希釈または多重遠心分離または処理された胸腔内液試料は、本明細書で提供されるようにさらに処理及び／または拡張される前に、約－１４０℃の温度で凍結保存される。

Ｂ．ステップＢ：第１の拡張
いくつかの実施形態では、本方法は、対象／患者への投与時に複製サイクルを増加させることができ、したがって、より古いＴＩＬ（すなわち、対象／患者への投与前により多くの複製ラウンドをさらに受けたＴＩＬ）よりも追加の治療的利益を提供し得る、若いＴＩＬを得ることを提供する。若いＴＩＬの特徴は、文献、例えば、Ｄｏｎｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２，７５，１５７－１６７、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０，１６，６１２２－６１３１、Ｈｕａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００５，２８，２５８－２６７、Ｂｅｓｓｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３，１９，ＯＦ１－ＯＦ９、Ｂｅｓｓｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９，３２，４１５－４２３、Ｒｏｂｂｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７３，７１２５－７１３０、Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２００７，３０，１２３－１２９、Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００５，２８，５３－６２、及びＴｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２００８，３１，７４２－７５１に記載されており、それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

Ｔリンパ球及びＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント：Ｖ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（接合）、及びＣ（一定）は、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるＴＩＬを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、新たに採取されたＴＩＬ及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、新たに採取されたＴＩＬ及び／または図５及び／または図６に例示されるようにプロセス１Ｃと称される方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第１の拡張で取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び／またはＴ細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、Ｔ細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体のうちの１つにある。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及び／またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）の発現が増加する。

例えば、図１のステップＡに記載されるものなどの腫瘍断片の解剖または消化後に、結果として得られた細胞は、腫瘍及び他の細胞よりもＴＩＬの成長を好む条件下で、ＩＬ－２を含む血清中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を有する不活性化ヒトＡＢ血清を含む培地中２ｍＬのウェル中でインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に３～１４日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８バルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、７～１４日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８バルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、１０～１４日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８バルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、約１１日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８バルクＴＩＬ細胞を生じる。

好ましい実施形態では、ＴＩＬの拡張は、以下及び本明細書に記載の初期バルクＴＩＬ拡張ステップ（例えば、ＲＥＰ前と称されるプロセスを含み得る、図１のステップＢに記載のものなど）、続いて以下のステップＤ及び本明細書に記載の第２の拡張（ステップＤ、急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）ステップと称されるプロセスを含む）、続いて任意の凍結保存、続いて以下及び本明細書に記載の第２のステップＤ（再刺激ＲＥＰステップと称されるプロセスを含む）を使用して行われ得る。このプロセスから取得されたＴＩＬは、本明細書に記載の表現型特徴及び代謝パラメータについて任意で特徴付けられ得る。

ＴＩＬ培養物が２４ウェルプレートで開始される実施形態では、例えば、Ｃｏｓｔａｒ ２４ウェル細胞培養クラスター、平底（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）を使用して、ＩＬ－２（６０００ＩＵ／ｍＬ、Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）を含む２ｍＬの完全培地（ＣＭ）中の１×１０^６個の腫瘍消化細胞または１つの腫瘍断片を、各ウェルに播種することができる。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３～１０ｍｍ^３である。

いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、培養培地の略語である「ＣＭ」と称される。いくつかの実施形態では、ステップＢのＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、及び１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充した、ＧｌｕｔａＭＡＸを含むＲＰＭＩ１６４０からなる。培養物が４０ｍＬ容量及び１０ｃｍ^２ガス透過性シリコン底部（例えば、Ｇ－Ｒｅｘ１０、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，ＭＮ）を有するガス透過性フラスコ内で開始される実施形態では（図１）、各フラスコに、ＩＬ－２を含む１０～４０ｍＬのＣＭ中の１０～４０×１０^６個の生きた腫瘍消化細胞または５～３０個の腫瘍断片を装填した。Ｇ－Ｒｅｘ１０及び２４ウェルプレートの両方を、５％ＣＯ_２中３７℃の加湿インキュベーター内でインキュベートし、培養開始から５日後、培地の半分を取り除き、新たなＣＭ及びＩＬ－２と交換し、５日後、培地の半分を２～３日毎に交換した。

腫瘍断片の調製後、結果として得られた細胞（すなわち、断片）は、腫瘍及び他の細胞よりもＴＩＬの成長を好む条件下で、ＩＬ－２を含む血清中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を有する不活性化ヒトＡＢ血清を含む培地中２ｍＬのウェル中（または、いくつかの事例では、本明細書で概説されるように、ａＡＰＣ細胞集団の存在下）でインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に１０～１４日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８個のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、第１の拡張中の成長培地は、ＩＬ－２またはそのバリアントを含む。いくつかの実施形態では、ＩＬは、組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき２０～３０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき２０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき２５×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき３０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、４～８×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、５～７×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、６×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、実施例５に記載されるように調製される。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１０，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、または約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２～約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２～約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２～約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、１０００～２０００ＩＵ／ｍＬ、２０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、３０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、４０００～５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００～６０００ＩＵ／ｍＬ、６０００～７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００～８０００ＩＵ／ｍＬ、または８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、または約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－１５をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、または約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２１をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

ある実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、及び約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ～１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～２０ｎｇの間、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ～４０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、及び５０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ－３抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ－３抗体は、ムロモナブである。

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４－１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは４－１ＢＢアゴニストであり、４－１ＢＢアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、ＥＵ－１０１、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、０．１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、２０μｇ／ｍＬ～４０μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。

いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、細胞培養培地は、ＩＬ－２を約３０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で、及びＯＫＴ－３を約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度でさらに含み、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストが、４－１ＢＢアゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、培養培地の略語である「ＣＭ」と称される。いくつかの実施形態では、それは、ＣＭ１（培養培地１）と称される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、及び１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充した、ＧｌｕｔａＭＡＸを含むＲＰＭＩ１６４０からなる。培養物が４０ｍＬ容量及び１０ｃｍ^２ガス透過性シリコン底部（例えば、Ｇ－Ｒｅｘ１０、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，ＭＮ）を有するガス透過性フラスコ内で開始される実施形態では（図１）、ＩＬ－２を含む１０～４０ｍＬのＣＭ中の１０～４０×１０^６個の生きた腫瘍消化細胞または５～３０個の腫瘍断片を、各フラスコに入れた。Ｇ－Ｒｅｘ１０及び２４ウェルプレートの両方を、５％ＣＯ_２中３７℃の加湿インキュベーター内でインキュベートし、培養開始から５日後、培地の半分を取り除き、新たなＣＭ及びＩＬ－２と交換し、５日後、培地の半分を２～３日毎に交換した。いくつかの実施形態では、ＣＭは、実施例に記載されるＣＭ１であり、実施例１を参照されたい。いくつかの実施形態では、第１の拡張は、初期細胞培養培地または第１の細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、初期細胞培養培地または第１の細胞培養培地は、ＩＬ－２を含む。

いくつかの実施形態では、実施例及び図で考察されるように、第１の拡張（例えば、ＲＥＰ前と称されることもあるものを含み得る、図１のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含む）プロセスは、３～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、実施例で考察され、かつ図４及び図５に示されるように、例えば、図１のステップＢに記載される拡張も含む、第１の拡張（例えば、ＲＥＰ前と称されることもあるものを含み得る、図１のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含む）は、７～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップＢの第１の拡張は、１０～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張は、例えば、図１のステップＢに記載される拡張において考察されるように、１１日に短縮される。

いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、３日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、４日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、５日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、６日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、７日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、８日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、９日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１０日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１１日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１２日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１３日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、３日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、４日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、５日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、６日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、７日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、８日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、９日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１０日～１１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１１日間続行することができる。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１の組み合わせは、第１の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図１よる、かつ本明細書に記載されるステップＢのプロセス中を含む、第１の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の組み合わせは、第１の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図１による、かつ本明細書に記載されるステップＢのプロセス中に含まれ得る。

いくつかの実施形態では、実施例及び図で考察されるように、第１の拡張（ＲＥＰ前と称されるプロセスを含む、例えば、図１によるステップＢ）プロセスは、３～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップＢの第１の拡張は、７～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、ステップＢの第１の拡張は、１０～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第１の拡張は、１１日に短縮される。

いくつかの実施形態では、第１の拡張、例えば、図１によるステップＢは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０またはＧ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。

１．サイトカイン及び他の添加物
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にＩＬ－２を含む培養培地を使用する。

あるいは、ＴＩＬの急速拡張及び／または第２の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１７／０１０７４９０Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＩＬ－２、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１のうちの２つ以上の組み合わせを用いて追加として可能である。したがって、可能な組み合わせには、ＩＬ－２及びＩＬ－１５、ＩＬ－２及びＩＬ－２１、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１、ならびにＩＬ－２またはＩＬ－１５及びＩＬ－２１が含まれ、後者は、多くの実施形態において特定の用途を見出す。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにＴ細胞の生成に特に有利に働く。

ある実施形態では、ステップＢはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＫＴ－３抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含み得る。ある実施形態では、ステップＢはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、４－１ＢＢアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。ある実施形態では、ステップＢはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＸ－４０アゴニストの、培養培地への添加を含み得る。他の実施形態では、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）－ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターＩ－アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３０７７９６Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ステップＢ中の培養培地で使用されてもよい。

Ｃ．ステップＣ：第１の拡張から第２の拡張へと移行
いくつかの事例では、例えば、図１に示されるステップＢから取得されたＴＩＬ集団を含む、第１の拡張から取得されたバルクＴＩＬ集団は、以下で考察されるプロトコルを使用して、直ちに凍結保存され得る。あるいは、第２のＴＩＬ集団と称される第１の拡張から取得されたＴＩＬ集団は、以下で考察されるように、第２の拡張（ＲＥＰと称されることもある拡張を含み得る）に供され、その後、凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾ＴＩＬが治療に使用される場合、第１のＴＩＬ集団（バルクＴＩＬ集団と称されることもある）または第２のＴＩＬ集団（いくつかの実施形態では、ＲＥＰ ＴＩＬ集団と称される集団を含み得る）は、拡張前または第１の拡張後及び第２の拡張前に、好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。

いくつかの実施形態では、第１の拡張から（例えば、図１に示されるステップＢから）取得されたＴＩＬは、選択のために表現型決定されるまで保管される。いくつかの実施形態では、第１の拡張から（例えば、図１に示されるステップＢから）取得されたＴＩＬは保管されず、第２の拡張に直接進む。いくつかの実施形態では、第１の拡張から取得されたＴＩＬは、第１の拡張後及び第２の拡張前に凍結保存されない。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約３日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約４日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約４日～１０日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約７日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから約１４日で起こる。

いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日～１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから３日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから４日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから５日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから６日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから７日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから８日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから９日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１０日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１１日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１２日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１３日～１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１４日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから２日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから３日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから４日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから５日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから６日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから７日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから８日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから９日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１０日～１１日で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こってから１１日で起こる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、第１の拡張後及び第２の拡張前に保管されず、ＴＩＬは、第２の拡張に直接進む（例えば、いくつかの実施形態では、図１に示されるステップＢからステップＤへの移行中に保管されない）。いくつかの実施形態では、移行は、本明細書に記載されるように、閉鎖系内で起こる。いくつかの実施形態では、第１の拡張由来のＴＩＬである第２のＴＩＬ集団は、移行期間なしで第２の拡張に直接進む。

いくつかの実施形態では、第１の拡張から第２の拡張への移行、例えば、図１によるステップＣは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０またはＧ－ＲＥＸ－１００バイオリアクターである。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。

Ｄ．ステップＤ：第２の拡張
いくつかの実施形態では、ＴＩＬ細胞集団は、採取及び初期バルク処理後、例えば、図１に示される、ステップＡ及びステップＢ、ならびにステップＣと称される移行後に数が拡張される）。このさらなる拡張は、本明細書では第２の拡張と称され、これは、当該技術分野で一般に急速拡張プロセス（ＲＥＰ）と称される拡張プロセス、ならびに図１のステップＤに示されるプロセスを含み得る。第２の拡張は、一般に、フィーダー細胞、サイトカイン源、及び抗ＣＤ３抗体を含むいくつかの成分を含む培養培地を使用して、ガス透過性容器内で達成される。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの第２の拡張または第２のＴＩＬ拡張（ＲＥＰと称されることもある拡張、ならびに図１のステップＤに示されるプロセスを含み得る）は、当業者に知られている任意のＴＩＬフラスコまたは容器を使用して行われ得る。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約７日～約１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約８日～約１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約９日～約１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１０日～約１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１１日～約１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１２日～約１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１３日～約１４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、約１４日間続行することができる。

ある実施形態では、第２の拡張は、本開示の方法（例えば、ＲＥＰと称される拡張、ならびに図１のステップＤに示されるプロセスを含む）を使用して、ガス透過性容器内で行われ得る。例えば、ＴＩＬは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）の存在下で非特異的Ｔ細胞受容体刺激を使用して、急速に拡張され得る。非特異的Ｔ細胞受容体刺激は、例えば、抗ＣＤ３抗体、例えば約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪもしくはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡから市販）またはＵＨＣＴ－１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから市販）を含み得る。ＴＩＬは、がんのエピトープ（複数可）などの抗原性部分を含む、第２の拡張中に１つ以上の抗原を含むことによって、インビトロでＴＩＬのさらなる刺激を誘導するように拡張することができ、これは、ベクター、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチド、例えば、０．３μＭ ＭＡＲＴ－１：２６－３５（２７Ｌ）またはｇｐｌ００：２０９－２１７（２１０Ｍ）から、任意選択で３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２またはＩＬ－１５などのＴ細胞成長因子の存在下で任意で発現され得る。他の好適な抗原には、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼがん抗原、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＳＳＸ－２、及びＶＥＧＦＲ２、またはそれらの抗原性部分が含まれ得る。ＴＩＬは、ＨＬＡ－Ａ２を発現する抗原提示細胞にパルスされたがんの同じ抗原（複数可）で再刺激することによっても急速に拡張され得る。あるいは、ＴＩＬは、例えば、例として照射された自己リンパ球または照射されたＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球及びＩＬ－２でさらに再刺激され得る。いくつかの実施形態では、再刺激は、第２の拡張の一部として起こる。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、照射された自己リンパ球の存在下で、または照射されたＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球及びＩＬ－２を用いて起こる。

ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、１０００～２０００ＩＵ／ｍＬ、２０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、３０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、４０００～５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００～６０００ＩＵ／ｍＬ、６０００～７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００～８０００ＩＵ／ｍＬ、または８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

ある実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、及び約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ～１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～２０ｎｇの間、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ～４０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、及び５０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ－３抗体を含まない。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ－３抗体は、ムロモナブである。

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４－１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは４－１ＢＢアゴニストであり、４－１ＢＢアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、ＥＵ－１０１、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、０．１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、２０μｇ／ｍＬ～４０μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。

いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、細胞培養培地は、ＩＬ－２を約３０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で、及びＯＫＴ－３を約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度でさらに含み、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストが、４－１ＢＢアゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１の組み合わせは、第２の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図１による、かつ本明細書に記載されるステップＤのプロセス中を含む、第２の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の組み合わせは、第２の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図１による、かつ本明細書に記載されるステップＤのプロセス中に含まれ得る。

いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、抗原提示フィーダー細胞、及び任意でＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む補充された細胞培養培地において実施され得る。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、補充された細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、補充された細胞培養培地は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、第２の細胞培養培地は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ、抗原提示フィーダー細胞とも称される）を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞（すなわち、抗原提示細胞）を含む細胞培養培地中で起こる。

いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、または約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－１５をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、または約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２１をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）は、ＰＢＭＣである。ある実施形態では、急速拡張及び／または第２の拡張におけるＴＩＬのＰＢＭＣ及び／または抗原提示細胞に対する比率は、約１：２５、約１：５０、約１：１００、約１：１２５、約１：１５０、約１：１７５、約１：２００、約１：２２５、約１：２５０、約１：２７５、約１：３００、約１：３２５、約１：３５０、約１：３７５、約１：４００、または約１：５００である。ある実施形態では、急速拡張及び／または第２の拡張におけるＴＩＬのＰＢＭＣに対する比率は、１：５０～１：３００である。ある実施形態では、急速拡張及び／または第２の拡張におけるＴＩＬのＰＢＭＣに対する比率は、１：１００～１：２００である。

ある実施形態では、ＲＥＰ及び／または第２の拡張は、バルクＴＩＬが１５０ｍＬの培地中の１００倍または２００倍過剰の不活性化フィーダー細胞、３０ｍｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体、及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２と混合されているフラスコ内で行われる。細胞が代替の成長チャンバに移されるまで、培地交換が行われる（一般に、新鮮な培地との呼吸による３分の２の培地交換）。代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、Ｇ－ＲＥＸフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。

いくつかの実施形態では、実施例及び図で考察されるように、第２の拡張（ＲＥＰプロセスと称されるプロセスを含み得る）は、７～１４日に短縮される。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、１１日に短縮される。

ある実施形態では、ＲＥＰ及び／または第２の拡張は、以前に記載されたＴ－１７５フラスコ及びガス透過性バッグ（Ｔｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００８，３１，７４２－５１、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，２６，３３２－４２）またはガス透過性培養器具（Ｇ－Ｒｅｘフラスコ）を使用して行われ得る。いくつかの実施形態では、第２の拡張（急速拡張と称される拡張を含む）は、Ｔ－１７５フラスコ内で行われ、１５０ｍＬの培地に懸濁された約１×１０^６個のＴＩＬが、各Ｔ－１７５フラスコに添加され得る。ＴＩＬは、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３を補充した、１：１のＣＭとＡＩＭ－Ｖ培地との混合物中で培養され得る。Ｔ－１７５フラスコを、５％ ＣＯ_２中３７℃でインキュベートすることができる。培地の半分が、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む５０／５０培地を使用して５日目に交換され得る。いくつかの実施形態では、７日目に、２つのＴ－１７５フラスコからの細胞が３Ｌバッグ内で組み合わせられ得、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む３００ｍＬのＡＩＭ Ｖが、３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に添加された。各バッグ内の細胞の数を、毎日または隔日カウントし、新鮮な培地を添加して、０．５～２．０×１０^６細胞／ｍＬの間の細胞計数を維持した。

ある実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張、ならびに図１のステップＤで参照される拡張を含み得る）は、１００ｃｍのガス透過性シリコン底部（Ｇ－Ｒｅｘ１００、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，ＭＮ，ＵＳＡから市販されている）を有する５００ｍＬ容量のガス透過性フラスコ内で行われ得る。５×１０^６または１０×１０^６ＴＩＬは、５％ヒトＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）を補充した４００ｍＬの５０／５０培地中、ＰＢＭＣで培養され得る。Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコは、５％ＣＯ_２中３７℃でインキュベートされ得る。５日目に、２５０ｍＬの上清が除去され、遠心分離ボトルに入れられ、１５００ｒｐｍ（４９１×ｇ）で１０分間遠心分離される。ＴＩＬペレットが、５％ヒトＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬの新鮮な培地で再懸濁され、元のＧ－Ｒｅｘ１００フラスコに戻し添加され得る。ＴＩＬがＧ－Ｒｅｘ１００フラスコ内で連続的に拡張される場合、７日目に、各Ｇ－Ｒｅｘ１００内のＴＩＬが、各フラスコに存在する３００ｍＬの培地に懸濁され得、細胞懸濁液が３つの１００ｍＬアリコートに分割され得、それを使用して、３つのＧ－Ｒｅｘ１００フラスコに播種することができる。その後、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖが各フラスコに添加され得る。Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコが５％ＣＯ_２中３７℃でインキュベートされ、４日後に、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖが、各Ｇ－ＲＥＸ１００フラスコに添加され得る。培養１４日目に、細胞が採取され得る。

ある実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）は、バルクＴＩＬが１５０ｍＬの培地中の１００倍または２００倍過剰の不活性化フィーダー細胞、３０ｍｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体、及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２と混合されているフラスコで行われる。いくつかの実施形態では、培地交換は、細胞が代替の成長チャンバに移されるまで行われる。いくつかの実施形態では、培地の３分の２が、新鮮な培地と呼吸によって交換される。いくつかの実施形態では、代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、Ｇ－ＲＥＸフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。

ある実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）が行われ、ＴＩＬが優れた腫瘍反応性のために選択されるステップをさらに含む。当該技術分野で知られている任意の選択方法が使用され得る。例えば、米国特許出願公開第２０１６／００１００５８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法が、優れた腫瘍反応性のためのＴＩＬの選択に使用され得る。

任意選択で、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準的なアッセイを使用して、第２の拡張（ＲＥＰ拡張と称される拡張を含む）後に行われ得る。例えば、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするトリパンブルー排除アッセイが、バルクＴＩＬの試料上で行われ得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ試料は、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２自動セルカウンター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌａｗｒｅｎｃｅ，ＭＡ）を使用して計数され、生存率が決定され得る。いくつかの実施形態では、生存率は、標準のＣｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２ Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｒプロトコルに従って決定される。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）は、以前に記載されているＴ－１７５フラスコ及びガス透過性バッグ（Ｔｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，３１：７４２－７５１及びＤｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．２００３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２６：３３２－３４２）またはガス透過性Ｇ－Ｒｅｘフラスコを使用して行われ得る。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、フラスコを使用して行われる。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ガス透過性Ｇ－Ｒｅｘフラスコを使用して行われる。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、Ｔ－１７５フラスコ内で行われ、約１×１０^６個のＴＩＬが約１５０ｍＬの培地に懸濁され、これが各Ｔ－１７５フラスコに添加される。ＴＩＬは、「フィーダー」細胞として１対１００の比で照射された（５０Ｇｙ）同種異系ＰＢＭＣと培養され、細胞が、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３を補充した、１：１のＣＭとＡＩＭ－Ｖ培地との混合物（５０／５０培地）中で培養された。Ｔ－１７５フラスコを、５％ ＣＯ_２中３７℃でインキュベートする。いくつかの実施形態では、培地の半分が、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む５０／５０培地を使用して５日目に交換される。いくつかの実施形態では、７日目に、２つのＴ－１７５フラスコからの細胞が３Ｌバッグ内で組み合わせられ、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む３００ｍＬのＡＩＭ－Ｖが、３００ｍＬのＴＩＬ懸濁液に添加される。各バッグ内の細胞の数が毎日または隔日計数され得、新鮮な培地が添加されて、約０．５～約２．０×１０^６細胞／ｍＬの細胞計数を維持することができる。

いくつかの実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）は、１００ｃｍ^２のガス透過性シリコン底部（Ｇ－Ｒｅｘ１００、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ）（図１）を有する５００ｍＬ容量のフラスコ内で行われ、約５×１０^６または１０×１０^６ＴＩＬが、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３を補充した、４００ｍＬの５０／５０培地中、１対１００の比で照射された同種異系ＰＢＭＣと培養される。Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコは、５％ＣＯ_２中３７℃でインキュベートされる。いくつかの実施形態では、５日目に、２５０ｍＬの上清が除去され、遠心分離ボトルに入れられ、１５００ｒｐｍ（４９１ｇ）で１０分間遠心分離される。その後、ＴＩＬペレットが、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬの新鮮な５０／５０培地に再懸濁され、元のＧ－Ｒｅｘ１００フラスコに戻し添加され得る。ＴＩＬがＧ－Ｒｅｘ１００フラスコ内で連続的に拡張される実施形態では、７日目に、各Ｇ－Ｒｅｘ１００内のＴＩＬが、各フラスコ内に存在する３００ｍＬの培地に懸濁され、細胞懸濁液が３つの１００ｍＬアリコートに分割されて、それを使用して、３つのＧ－Ｒｅｘ１００フラスコに播種された。その後、５％ヒトＡＢ血清及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖが各フラスコに添加される。Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコが５％ＣＯ_２中３７℃でインキュベートされ、４日後に、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬのＡＩＭ－Ｖが、各Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコに添加される。培養１４日目に、細胞が採取される。

Ｔリンパ球及びＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント：Ｖ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（接合）、及びＣ（一定）は、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるＴＩＬを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第２の拡張において取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び／またはＴ細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、Ｔ細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体のうちの１つにある。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及び／またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）の発現が増加する。

いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地（例えば、ＣＭ２または第２の細胞培養培地と称されることもある）は、以下でさらに詳細に考察されるように、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、ならびに抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）を含む。

いくつかの実施形態では、第２の拡張、例えば、図１によるステップＤは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０またはＧ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。

１．フィーダー細胞及び抗原提示細胞
ある実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順（例えば、図１のステップＤに記載されるような拡張、ならびにＲＥＰと称されるものを含む）は、ＲＥＰ ＴＩＬ拡張中及び／または第２の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、実施例に記載されるように、ＲＥＰ手順で使用され、これは、照射された同種異系ＰＢＭＣの複製無能力を評価するための例示的なプロトコルを提供する。

いくつかの実施形態では、１４日目の生細胞の総数が、ＲＥＰの０日目及び／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された初期の生細胞数よりも少ない場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。

いくつかの実施形態では、７日目及び１４日目のＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された生細胞の総数が、ＲＥＰの０日目及び／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。

いくつかの実施形態では、７日目及び１４日目のＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された生細胞の総数が、ＲＥＰの０日目及び／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、５～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び１０００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、１０～５０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２０００～５０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、２０～４０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２０００～４０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、２５～３５ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２５００～３５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。

いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、ＰＢＭＣである。いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、人工抗原提示フィーダー細胞である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、約１：２５、約１：５０、約１：１００、約１：１２５、約１：１５０、約１：１７５、約１：２００、約１：２２５、約１：２５０、約１：２７５、約１：３００、約１：３２５、約１：３５０、約１：３７５、約１：４００、または約１：５００である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、１：５０～１：３００である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、１：１００～１：２００である。

ある実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約２．５×１０^９フィーダー細胞：約１００×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約２．５×１０^９フィーダー細胞：約５０×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約２．５×１０^９フィーダー細胞：約２５×１０^６ＴＩＬを必要とする。

ある実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、第２の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。ある実施形態では、人工抗原提示（ａＡＰＣ）細胞がＰＢＭＣの代わりに使用される。

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、図及び実施例に記載される例示的な手順を含む、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順で使用される。

ある実施形態では、人工抗原提示細胞は、ＰＢＭＣの代替物として、またはＰＢＭＣと組み合わせて、第２の拡張において使用される。

２．サイトカイン及び他の添加物
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にＩＬ－２を含む培養培地を使用する。

あるいは、ＴＩＬの急速拡張及び／または第２の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１７／０１０７４９０Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＩＬ－２、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１のうちの２つ以上の組み合わせを用いて追加として可能である。したがって、可能な組み合わせには、ＩＬ－２及びＩＬ－１５、ＩＬ－２及びＩＬ－２１、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１、ならびにＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１が含まれ、後者は多くの実施形態において特定の用途を見出す。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにＴ細胞の生成に特に有利に働く。

ある実施形態では、ステップＤはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＫＴ－３抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含み得る。ある実施形態では、ステップＤはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、４－１ＢＢアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。ある実施形態では、ステップＤはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＸ－４０アゴニストの、培養培地への添加を含み得る。加えて、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）－ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターＩ－アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３０７７９６Ａ１号（この開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ステップＤ中の培養培地で使用されてもよい。

Ｅ．ステップＥ：ＴＩＬを採取する
第２の拡張ステップ後、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、図１に提供されるように、１、２、３、４つ、またはそれ以上の拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、図１に提供されるように、２つの拡張ステップ後に採取される。

ＴＩＬは、例えば、遠心分離を含む、任意の適切な滅菌様式で採取され得る。ＴＩＬを採取するための方法は、当該技術分野で周知であり、いずれかのかかる既知の方法が本プロセスで用いられ得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、自動化システムを使用して採取される。

細胞採取機及び／または細胞処理システムは、例えば、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、Ｔｏｍｔｅｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、及びＩｎｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃを含む、様々な供給源から市販されている。任意の細胞ベースの採取機が本方法とともに用いられ得る。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び／または細胞処理システムは、膜ベースの細胞採取機である。いくつかの実施形態では、細胞採取は、ＬＯＶＯシステム（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉによって製造されたもの）などの細胞処理システムによるものである。「ＬＯＶＯ細胞処理システム」という用語は、細胞を含む溶液を、滅菌及び／または閉鎖系環境で回転膜または回転フィルターなどの膜またはフィルターをとおしてポンプ輸送し、連続フローを可能にし、細胞を処理して、ペレット化せずに上清または細胞培養培地を除去する、任意のベンダーによって製造された任意の機器または装置も指す。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び／または細胞処理システムは、滅菌閉鎖系内で、細胞分離、洗浄、流体交換、濃縮、及び／または他の細胞処理ステップを行うことができる。

いくつかの実施形態では、採取、例えば、図１によるステップＥは、閉鎖系バイオリアクターから行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０またはＧ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。

いくつかの実施形態では、図１によるステップＥは、本明細書に記載のプロセスに従って行われる。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、閉鎖系の無菌性及び閉鎖性を維持するために、滅菌条件下でシリンジを介してアクセスされる。いくつかの実施形態では、実施例に記載の閉鎖系が用いられる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、実施例に記載の方法に従って採取される。いくつかの実施形態では、１日目～１１日目の間のＴＩＬは、実施例における１１日目のＴＩＬ採取のような、本明細書で言及されるステップにおいて記載される方法を使用して採取される。いくつかの実施形態では、１２日目～２２日目の間のＴＩＬは、実施例における２２日目のＴＩＬ採取のような、本明細書で言及されるステップにおいて記載される方法を使用して採取される。

Ｆ．ステップＦ：最終製剤及び輸液容器への移行
図１に例示的な順序で提供され、かつ上及び本明細書で詳細に概説されるステップＡ～Ｅが完了した後、細胞は、注入バッグまたは無菌バイアルなどの患者への投与に使用するために容器に移される。いくつかの実施形態では、治療的に十分な数のＴＩＬが上記の拡張方法を使用して得られると、それらは、患者への投与に使用するために容器に移される。

ある実施形態では、本開示のＡＰＣを使用して拡張されたＴＩＬは、薬学的組成物として患者に投与される。ある実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のＴＩＬ懸濁液である。本開示のＰＢＭＣを使用して拡張されたＴＩＬは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ３０～６０分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。

ＩＶ．Ｇｅｎ３ ＴＩＬ製造プロセス
いかなる特定の理論にも限定されることなく、本発明の方法に記載される、Ｔ細胞の活性化をプライミングする、プライミングによる第１の拡張と、それに続くＴ細胞の活性化を促進する急速な第２の拡張により、「より若い」表現型を保持する拡張されたＴ細胞の調製が可能になると考えられ、したがって、本発明の拡張されたＴ細胞が、他の方法によって拡張されたＴ細胞よりも高いがん細胞に対する細胞傷害性を示すことが予想される。特に、本発明の方法によって教示される、抗ＣＤ３抗体（例えば、ＯＫＴ－３）、ＩＬ－２、及び任意選択で抗原提示細胞（ＡＰＣ）への曝露によってプライミングされ、その後、追加の抗ＣＤ－３抗体（例えば、ＯＫＴ－３）、ＩＬ－２、及びＡＰＣへのその後の曝露によって促進されるＴ細胞の活性化が、培養下でＴ細胞の成熟を限定または回避し、成熟度の低い表現型を有するＴ細胞集団を産生し、これらのＴ細胞が、培養下での拡張によってあまり疲弊せず、より高いがん細胞に対する細胞傷害性を示すと考えられる。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）Ｔ細胞を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養でのＴ細胞を、第１の容器よりも大きい第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移し、小規模培養由来のＴ細胞を、第２の容器内でのより大規模な培養で約４～７日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成する。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）Ｔ細胞を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での第１の小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）第１の小規模培養由来のＴ細胞を、第１の容器とサイズが等しい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第２の容器内で、第１の小規模培養由来のかかる第２の容器に移されたＴ細胞の一部が、第２の小規模培養で約４～７日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）Ｔ細胞を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来のＴ細胞を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移されたＴ細胞の一部が、より大規模な培養で約４～７日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）Ｔ細胞を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来のＴ細胞を、第１の容器よりもサイズが大きい２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移されたＴ細胞の一部が、より大規模な培養で約５日間培養される。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張は、プライミングによる第１の拡張によってもたらされるＴ細胞の活性化が減少、軽減、衰退、または沈静化し始めた後に行われる。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張は、プライミングによる第１の拡張によってもたらされるＴ細胞の活性化が、正確にまたは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％減少した後に行われる。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張は、プライミングによる第１の拡張によってもたらされるＴ細胞の活性化が、正確にまたは約１％～１００％の範囲のパーセンテージ減少した後に行われる。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張は、プライミングによる第１の拡張によってもたらされるＴ細胞の活性化が、正確にまたは約１％～１０％、１０％～２０％、２０％～３０％、３０％～４０％、４０％～５０％、５０％～６０％、６０％～７０％、７０％～８０％、８０％～９０％、または９０％～１００％の範囲のパーセンテージ減少した後に行われる。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張は、プライミングによる第１の拡張によってもたらされるＴ細胞の活性化が、少なくとも正確にまたは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９％減少した後に行われる。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張は、プライミングによる第１の拡張によってもたらされるＴ細胞の活性化が、最大で正確にまたは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００％減少した後に行われる。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張によってもたらされるＴ細胞の活性化の減少は、抗原による刺激に応答してＴ細胞によって放出されるインターフェロンガンマの量の減少によって決定される。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、最大で正確にまたは約７日または約８日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、最大で正確にまたは約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、最大で正確にまたは約１１日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、最大で正確にまたは約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、または１１日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、または１１日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、正確にまたは約１日～正確にまたは約７日の期間中に行われ、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、正確にまたは約１日～正確にまたは約１１日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、最大で正確にまたは約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日の期間中に行われ、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、最大で正確にまたは約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、または１１日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、正確にまたは約１日～正確にまたは約８日の期間中に行われ、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、正確にまたは約１日～正確にまたは約９日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、８日の期間中に行われ、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、９日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、正確にまたは約１日～正確にまたは約７日の期間中に行われ、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、正確にまたは約１日～正確にまたは約９日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞のプライミングによる第１の拡張は、７日の期間中に行われ、Ｔ細胞の急速な第２の拡張は、９日の期間中に行われる。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）である。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）である。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、がんに罹患しているドナーから取得される。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、がんに罹患している患者から切除された腫瘍から取得されたＴＩＬである。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、血液系悪性腫瘍に罹患している患者の骨髄から取得されたＭＩＬである。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ドナー由来の末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から取得されたＰＢＬである。いくつかの実施形態では、ドナーは、がんに罹患している。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択されるがんである。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ドナーは、腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態では、腫瘍は、液体腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ドナーは、血液系悪性腫瘍に罹患している。

本開示の特定の態様では、免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞は、ＦＩＣＯＬＬ分離などの当業者に知られている任意の数の技法を使用して対象から収集された血液の単位から得ることができる。好ましい一態様では、個体の循環血液由来の細胞は、アフェレーシスによって取得される。アフェレーシス産物は、典型的には、リンパ球、例えば、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、血小板を含む。一態様では、アフェレーシスによって収集された細胞が洗浄されて、血漿画分が除去され、任意選択で、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝液または培地に入れられ得る。一実施形態では、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄される。代替の実施形態では、洗浄溶液は、カルシウムを欠き、マグネシウムを欠き得るか、またはすべてではないが多くの二価カチオンを欠き得る。一態様では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、かつ単球を枯渇させることによって、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ勾配による遠心分離によって、または対向流遠心溶出法によって末梢血リンパ球から単離される。

いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、ドナー由来のリンパ球が濃縮された全血またはアフェレーシス産物から分離されたＰＢＬである。いくつかの実施形態では、ドナーは、がんに罹患している。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択されるがんである。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭腫ウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、胃腸癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ドナーは、腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態では、腫瘍は、液体腫瘍である。いくつかの実施形態では、腫瘍は、固形腫瘍である。いくつかの実施形態では、ドナーは、血液系悪性腫瘍に罹患している。いくつかの実施形態では、ＰＢＬは、正または負の選択法を使用することによって、すなわち、Ｔ細胞表現型について、マーカー（複数可）、例えば、ＣＤ３＋ＣＤ４５＋を使用してＰＢＬを除去することによって、または非Ｔ細胞表現型細胞を除去してＰＢＬを残すことによって、リンパ球が濃縮された全血またはアフェレーシス産物から単離される。他の実施形態では、ＰＢＬは、勾配遠心分離によって単離される。ドナー組織からＰＢＬを単離した時点で、ＰＢＬのプライミングによる第１の拡張は、本明細書に記載される方法のうちのいずれかのプライミングによる第１の拡張ステップに従って、プライミングによる第１の拡張培養下で好適な数の単離されたＰＢＬ（いくつかの実施形態では、およそ１×１０^７ＰＢＬ）を播種することによって開始され得る。

これらの特徴のうちのいくつかを含む、プロセス３として知られる（本明細書ではＧＥＮ３とも称される）例示的なＴＩＬプロセスは、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示され、本発明のこの実施形態の、Ｇｅｎ２を超える利点のうちのいくつかが、図１、２、３０、及び３１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に記載される。プロセス３の２つの実施形態は、図１及び３０（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示される。Ｇｅｎ２またはＧｅｎ２Ａは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許公開第２０１８／０２８０４３６号にも記載されている。Ｇｅｎ３プロセスは、２０１８年１１月５日に提出されたＵＳＳＮ６２／７５５，９５４（１１６９８３－５０４５－ＰＲ）にも記載されている。

本明細書で考察され、かつ一般に概説されるように、ＴＩＬは、患者試料から採取され、本明細書に記載され、かつＧｅｎ３と称されるＴＩＬ拡張プロセスを使用して患者に移植する前に、それらの数を拡張するように操作される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、以下で考察されるように、任意で遺伝子操作され得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、拡張前または拡張後に凍結保存され得る。解凍した時点で、それらが再刺激されて、患者への注入前に代謝を高めることができる。

いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第１の拡張（本明細書において急速拡張前（ＲＥＰ前）と称されるプロセス、ならびに図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして示されるプロセスを含む）は、１～８日に短縮され、急速な第２の拡張（本明細書において急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）と称されるプロセス、ならびに図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤとして示されるプロセスを含む）は、１～９日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第１の拡張（本明細書において急速拡張前（ＲＥＰ前）と称されるプロセス、ならびに図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして示されるプロセスを含む）は、１～８日に短縮され、急速な第２の拡張（本明細書において急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）と称されるプロセス、ならびに図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤとして示されるプロセスを含む）は、１～８日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第１の拡張（本明細書において急速拡張前（ＲＥＰ前）と称されるプロセス、ならびに図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして示されるプロセスを含む）は、１～７日に短縮され、急速な第２の拡張（本明細書において急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）と称されるプロセス、ならびに図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤとして示されるプロセスを含む）は、１～９日に短縮される。いくつかの実施形態では、以下ならびに実施例及び図において詳細に考察されるように、プライミングによる第１の拡張（本明細書において急速拡張前（ＲＥＰ前）と称されるプロセス、ならびに図１（特に、例えば図１Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして示されるプロセスを含む）は、１～７日間であり、急速な第２の拡張（本明細書において急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）と称されるプロセス、ならびに図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤとして示されるプロセスを含む）は、１～１０日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図１（特に、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、８日間に短縮され、急速な第２の拡張（例えば、図１（特に、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載されるような拡張）は、７～９日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、８日間であり、急速な第２の拡張（例えば、図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、８～９日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、７日に短縮され、急速な第２の拡張（例えば、図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、７～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、８日に短縮され、急速な第２の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、８日間であり、急速な第２の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、９日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、８日間であり、急速な第２の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、１０日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、７日間であり、急速な第２の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、７～１０日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、７日間であり、急速な第２の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、８～１０日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、７日間であり、急速な第２の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、９～１０日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢとして記載される拡張）は、７日に短縮され、急速な第２の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＤに記載される拡張）は、７～９日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張と急速な第２の拡張（例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）においてステップＢ及びステップＤとして記載される拡張）との組み合わせは、以下ならびに実施例及び図面において詳細に考察されるように、１４～１６日間である。特に、本発明のある特定の実施形態が、ＩＬ－２の存在下での抗ＣＤ３抗体、例えば、ＯＫＴ－３への曝露、または少なくともＩＬ－２及び抗ＣＤ３抗体、例えば、ＯＫＴ－３の存在下での抗原への曝露によってＴＩＬが活性化される、プライミングによる第１の拡張ステップを含むと考えられる。ある特定の実施形態では、上記のようにプライミングによる第１の拡張ステップで活性化されるＴＩＬは、第１のＴＩＬ集団であり、すなわち、一次細胞集団である。

以下の「ステップ」指定Ａ、Ｂ、Ｃなどは、図８（特に、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃ）における非限定的な例を参照し、本明細書に記載される特定の非限定的な実施形態を参照している。以下及び図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）におけるステップの順序は例示であり、ステップの任意の組み合わせまたは順序、ならびに追加のステップ、ステップの繰り返し、及び／またはステップの省略は、本出願及び本明細書に開示される方法によって企図される。

Ａ．ステップＡ：患者の腫瘍試料を取得する
一般に、ＴＩＬは、最初に患者の腫瘍試料（「一次ＴＩＬ」）から、またはＴＩＬ様の特徴を有する末梢血リンパ球を含む末梢血リンパ球などの循環リンパ球から得られ、その後、本明細書に記載されるように、さらなる操作のためにより大きな集団に拡張され、任意選択で凍結保存され、任意選択でＴＩＬの健康の指標として表現型及び代謝パラメータについて評価される。

患者の腫瘍試料は、一般に、外科的切除、針生検、または腫瘍細胞とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を得るための他の手段により、当該技術分野で知られている方法を使用して得ることができる。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む、任意の固形腫瘍に由来し得る。腫瘍試料は、血液系悪性腫瘍から取得された腫瘍などの液体腫瘍であり得る。固形腫瘍は、乳癌、膵臓癌、前立腺癌、結腸直腸癌、肺癌、脳癌、腎癌、胃癌、及び皮膚癌を含むが、これらに限定されない（扁平上皮癌、基底細胞癌、及び黒色腫を含むが、これらに限定されない）、任意の種類のがんであり得る。いくつかの実施形態では、がんは、子宮頸癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭ）、胃腸癌、卵巣癌、肉腫、膵臓癌、膀胱癌、乳癌、トリプルネガティブ乳癌、及び非小細胞肺癌から選択される。いくつかの実施形態では、悪性黒色腫腫瘍が特に高レベルのＴＩＬを有することが報告されているため、有用なＴＩＬは、悪性黒色腫腫瘍から取得される。

取得された時点で、腫瘍試料は、一般に、鋭的解剖を使用して１～約８ｍｍ^３の小片に断片化され、約２～３ｍｍ^３が特に有用である。ＴＩＬは、酵素腫瘍消化物を使用してこれらの断片から培養される。かかる腫瘍消化物は、酵素培地（例えば、Ｒｏｓｗｅｌｌ Ｐａｒｋ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＲＰＭＩ）１６４０緩衝液、２ｍＭグルタミン酸、１０ｍｃｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０単位／ｍＬ ＤＮａｓｅ、及び１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ）中でのインキュベーション、続いて、機械的解離（例えば、組織解離機を使用する）によって産生され得る。腫瘍消化物は、腫瘍を酵素培地に入れ、腫瘍をおよそ１分間機械的に解離させ、続いて５％ ＣＯ_２中３７℃で３０分間インキュベートし、続いて小さな組織片のみが存在するまで、前述の条件下で機械的解離及びインキュベーションのサイクルを繰り返すことによって産生することができる。このプロセスの最後に、細胞懸濁液中に多数の赤血球または死細胞が含まれている場合、ＦＩＣＯＬＬ分岐親水性多糖類を使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。米国特許出願公開第２０１２／０２４４１３３Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものなどの当該技術分野で知られている代替の方法を使用することができる。前述の方法のうちのいずれかが、ＴＩＬを拡張する方法またはがんを治療する方法について本明細書に記載される実施形態のうちのいずれかにおいて使用され得る。

上に示されるように、いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、固形腫瘍に由来する。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は、断片化されない。いくつかの実施形態では、固形腫瘍は断片化されず、全腫瘍として酵素消化に供される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で１～２時間消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で１～２時間、３７℃、５％ＣＯ_２で消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ、ＤＮａｓｅ、及びヒアルロニダーゼを含む酵素混合物中で１～２時間、３７℃、５％ＣＯ_２で回転を伴って消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、３７℃、５％ＣＯ_２で一定の回転を伴って一晩消化される。いくつかの実施形態では、全腫瘍が酵素と組み合わされて、腫瘍消化反応混合物が形成される。

いくつかの実施形態では、腫瘍は、滅菌緩衝液中の凍結乾燥酵素で再構成される。いくつかの実施形態では、緩衝液は、滅菌ＨＢＳＳである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、コラゲナーゼを含む。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、コラゲナーゼＩＶである。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼの作業ストックは、１００ｍｇ／ｍＬの１０倍作業ストックである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、ＤＮＡｓｅを含む。いくつかの実施形態では、ＤＮＡｓｅの作業ストックは、１０，０００ＩＵ／ｍＬの１０倍作業ストックである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、ヒアルロニダーゼを含む。いくつかの実施形態では、ヒアルロニダーゼの作業ストックは、１０ｍｇ／ｍＬの１０倍作業ストックである。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、１０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ、１０００ＩＵ／ｍＬのＤＮＡｓｅ、及び１ｍｇ／ｍＬのヒアルロニダーゼを含む。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、１０ｍｇ／ｍＬのコラゲナーゼ、５００ＩＵ／ｍＬのＤＮＡｓｅ、及び１ｍｇ／ｍＬのヒアルロニダーゼを含む。

一般に、腫瘍から取得された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに取得された」または「新たに単離された」細胞集団と呼ばれる。ある特定の実施形態では、新たに取得されたＴＩＬ細胞集団は、抗原提示細胞、ＩＬ－１２、及びＯＫＴ－３を含む細胞培養培地に曝露される。

いくつかの実施形態では、断片化には、例えば、解剖及び消化を含む物理的断片化が含まれる。いくつかの実施形態では、断片化は、物理的断片化である。いくつかの実施形態では、断片化は、解剖である。いくつかの実施形態では、断片化は、消化によるものである。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、最初に、患者から取得された酵素腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養され得る。ある実施形態では、ＴＩＬは、最初に、患者から得られた酵素腫瘍消化物及び腫瘍断片から培養され得る。

腫瘍が固形腫瘍であるいくつかの実施形態では、腫瘍試料が、例えば、ステップＡ（図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供される）で得られた後、腫瘍は物理的断片化を受ける。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存前に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、凍結保存後に起こる。いくつかの実施形態では、断片化は、腫瘍を得た後に、いずれの凍結保存もない場合に起こる。いくつかの実施形態では、断片化ステップは、インビトロまたはエクスビボプロセスである。いくつかの実施形態では、腫瘍が断片化され、１０、２０、３０、４０個、またはそれ以上の断片または小片が、プライミングによる第１の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、腫瘍が断片化され、３０個または４０個の断片または小片が、プライミングによる第１の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、腫瘍が断片化され、４０個の断片または小片が、プライミングによる第１の拡張のために各容器に入れられる。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約４～約５０個の断片を含み、各断片は、約２７ｍｍ^３の体積を有する。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約１３００ｍｍ^３～約１５００ｍｍ^３の総体積を伴う約３０～約６０個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約１３５０ｍｍ^３の総体積を伴う約５０個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約１グラム～約１．５グラムの総質量を伴う約５０個の断片を含む。いくつかの実施形態では、複数の断片は、約４個の断片を含む。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍断片から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、鋭的解剖によって取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３～１０ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３～８ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約２ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約３ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約４ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約５ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約６ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約７ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約８ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約９ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１０ｍｍ^３である。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、１～４ｍｍ×１～４ｍｍ×１～４ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、１ｍｍ×１ｍｍ×１ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、２ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、３ｍｍ×３ｍｍ×３ｍｍである。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、４ｍｍ×４ｍｍ×４ｍｍである。

いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性、壊死性、及び／または脂肪性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の出血性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の壊死性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、各小片上の脂肪性組織の量を最小限に抑えるために断片化される。ある特定の実施形態では、腫瘍の断片化ステップは、インビトロまたはエクスビボ方法である。

いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、腫瘍の内部構造を維持するために行われる。いくつかの実施形態では、腫瘍の断片化は、メスでのこ引き動作を行うことなく行われる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍消化物から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、ＲＰＭＩ１６４０（２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮａｓｅ、及び１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ）であるが、これに限定されない酵素培地中でのインキュベーション、続いて、機械的解離（ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）によって生成された。腫瘍を酵素培地に入れた後、腫瘍は、およそ１分間機械的に解離され得る。その後、溶液が５％ＣＯ_２中３７℃で３０分間インキュベートされ、その後、およそ１分間再び機械的に破壊され得る。５％ ＣＯ_２中３７℃で３０分間再びインキュベートした後、腫瘍を、およそ１分間、３回目に機械的に破壊することができる。いくつかの実施形態では、大きい組織片が存在する場合、３回目の機械的破壊後、５％ＣＯ_２中３７℃でさらに３０分間インキュベートするかにかかわらず、１回または２回の追加の機械的解離が試料に適用された。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液が多数の赤血球または死細胞を含む場合、最終インキュベーションの終わりに、Ｆｉｃｏｌｌを使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張ステップ前の細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに取得された」または「新たに単離された」細胞集団と呼ばれる。

いくつかの実施形態では、細胞は、試料単離後（例えば、腫瘍試料を得た後及び／または腫瘍試料から細胞懸濁液を得た後）、任意選択で凍結され得、ステップＢに記載の拡張に入る前に凍結保存され得、これは以下でさらに詳細に説明されるとともに、図８（特に、例えば図８Ｂ）に例示される。

１．コア／小生検由来のＴＩＬ
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、最初に、コア生検または同様の手順によって取得された患者腫瘍試料（「一次ＴＩＬ」）から得られ、その後、本明細書に記載されるように、さらなる操作のためにより大きい集団に拡張され、任意で凍結保存され、任意で表現型及び代謝パラメータについて評価される。

いくつかの実施形態では、患者の腫瘍試料は、一般に、小生検、コア生検、針生検、または腫瘍細胞とＴＩＬ細胞との混合物を含有する試料を得るための他の手段により、当該技術分野で知られている方法を使用して取得することができる。一般に、腫瘍試料は、原発腫瘍、浸潤性腫瘍、または転移性腫瘍を含む、任意の固形腫瘍に由来し得る。腫瘍試料は、血液系悪性腫瘍から取得された腫瘍などの液体腫瘍であり得る。いくつかの実施形態では、試料は、複数の小さい腫瘍試料または生検に由来し得る。いくつかの実施形態では、試料は、同じ患者由来の単一の腫瘍からの複数の腫瘍試料を含むことができる。いくつかの実施形態では、試料は、同じ患者由来の１、２、３、または４つの腫瘍からの複数の腫瘍試料を含むことができる。いくつかの実施形態では、試料は、同じ患者由来の複数の腫瘍からの複数の腫瘍試料を含むことができる。固形腫瘍は、肺癌及び／または非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）であり得る。

一般に、腫瘍コアまたは断片から取得された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに取得された」または「新たに単離された」細胞集団と呼ばれる。ある特定の実施形態では、新たに取得されたＴＩＬ細胞集団は、抗原提示細胞、ＩＬ－２、及びＯＫＴ－３を含む細胞培養培地に曝露される。

いくつかの実施形態では、腫瘍が転移性であり、かつ原発性病変が過去に効率的に治療／除去された場合、転移性病変のうちの１つの除去が必要とされ得る。いくつかの実施形態では、最も侵襲性の低いアプローチは、皮膚病変、または利用可能な場合、首または腋窩領域のリンパ節を除去することである。いくつかの実施形態では、皮膚病変が除去されるか、またはその小生検が除去される。いくつかの実施形態では、リンパ節またはその小生検が除去される。いくつかの実施形態では、肺もしくは肝臓の転移性病変、または腹腔内リンパ節もしくは胸部リンパ節、または小生検が、それらのものであってもよく、使用され得る。

いくつかの実施形態では、腫瘍は、黒色腫である。いくつかの実施形態では、黒色腫の小生検は、ほくろまたはその一部分を含む。

いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検である。いくつかの実施形態では、パンチ生検は、皮膚に押し込まれた円形の刃で取得される。いくつかの実施形態では、パンチ生検は、疑わしいほくろの周りの皮膚に押し込まれた円形の刃で得られる。いくつかの実施形態では、パンチ生検は、皮膚に押し込まれた円形の刃で得られ、丸い皮膚片が採取される。いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検であり、腫瘍の丸い部分が採取される。

いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検であり、ほくろまたは増殖全体が除去される。いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検であり、ほくろまたは増殖全体が、正常に見える皮膚の小縁とともに除去される。

いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検であり、ほくろまたは増殖の最も不規則な部分のみが採取される。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検であり、切開生検は、疑わしいほくろが非常に大きい場合など、他の技法を達成することができない場合に使用される。

いくつかの実施形態では、小生検は、肺生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、気管支鏡検査によって取得される。一般に、気管支鏡検査では、患者は麻酔をかけられ、小さい用具が鼻または口を通り、喉を下って気管支通路に入り、そこで小さい用具を使用していくらかの組織を採取する。気管支鏡検査によって腫瘍または成長に到達できないいくつかの実施形態では、経胸腔針生検が用いられ得る。一般に、経胸腔針生検の場合も、患者は麻酔をかけられ、針が皮膚をとおして疑わしい場所に直接挿入されて、小さい組織試料を採取する。いくつかの実施形態では、経胸壁針生検は、介入放射線医学（例えば、針をガイドするためのＸ線またはＣＴ走査の使用）を必要とし得る。いくつかの実施形態では、小生検は、針生検によって取得される。いくつかの実施形態では、小生検は、超音波内視鏡検査によって得られる（例えば、照明を備えた内視鏡であり、口をとおして食道に配置される）。いくつかの実施形態では、小生検は、外科的に取得される。

いくつかの実施形態では、小生検は、頭頸部生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、切開生検であり、小さい組織片が異常に見える領域から切り取られる。いくつかの実施形態では、異常な領域に容易にアクセスできる場合、試料は、入院することなく採取され得る。いくつかの実施形態では、腫瘍が口または喉のより深くにある場合、生検は、全身麻酔を用いて手術室で行われる必要があり得る。いくつかの実施形態では、小生検は、切除生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、全領域が除去される切除生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、細針吸引（ＦＮＡ）である。いくつかの実施形態では、小生検は、細針吸引（ＦＮＡ）であり、シリンジに取り付けられた非常に細い針を使用して、腫瘍または塊から細胞を抽出（吸引）する。いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、パンチ生検であり、パンチ鉗子を使用して、疑わしい領域の一片を採取する。

いくつかの実施形態では、小生検は、子宮頸部生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、膣鏡検査によって取得される。一般に、膣鏡検査は、拡大双眼鏡に取り付けられた照明付き拡大器具（膣鏡）の使用を採用し、その後、これを使用して、子宮頸部の表面の小さい切片を生検する。いくつかの実施形態では、小生検は、円錐切除／錐体生検である。いくつかの実施形態では、小生検は、円錐切除／錐体生検であり、子宮頸部からより大きい組織片を採取するために外来手術が必要になる場合がある。いくつかの実施形態では、錐体生検は、診断の確認を助けることに加えて、錐体生検が初期治療となり得る。

「固形腫瘍」という用語は、通常、嚢胞または液体領域を含まない異常な組織塊を指す。固形腫瘍は、良性または悪性であり得る。「固形腫瘍癌」という用語は、悪性、腫瘍性、またはがん性の固形腫瘍を指す。固形腫瘍癌には、肺の癌が含まれる。いくつかの実施形態では、がんは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。固形腫瘍の組織構造には、実質（がん細胞）を含む相互依存的組織区画、及びがん細胞が分散しており、かつ支持微小環境を提供し得る支持間質細胞が含まれる。

いくつかの実施形態では、腫瘍由来の試料は、細針吸引物（ＦＮＡ）、コア生検、小生検（例えば、パンチ生検を含む）として取得される。いくつかの実施形態では、試料は、最初にＧ－Ｒｅｘ１０に入れられる。いくつかの実施形態では、１つまたは２つのコア生検及び／または小生検試料が存在する場合、試料は、最初にＧ－Ｒｅｘ１０に入れられる。いくつかの実施形態では、３、４、５、６、８、９、または１０個以上のコア生検及び／または小生検試料が存在する場合、試料は、最初にＧ－Ｒｅｘ１００に入れられる。いくつかの実施形態では、３、４、５、６、８、９、または１０個以上のコア生検及び／または小生検試料が存在する場合、試料は、最初にＧ－Ｒｅｘ５００に入れられる。

ＦＮＡは、例えば、ＮＳＣＬＣを含む肺腫瘍から得ることができる。いくつかの実施形態では、ＦＮＡは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者由来の肺腫瘍などの肺腫瘍から取得される。いくつかの事例では、ＮＳＣＬＣを有する患者は、外科的治療を以前に受けたことがある。

本明細書に記載のＴＩＬは、ＦＮＡ試料から得られ得る。いくつかの事例では、ＦＮＡ試料は、１８ゲージ針～２５ゲージ針の範囲の細いゲージ針を使用して、患者から得られるか、または単離される。細いゲージ針は、１８ゲージ、１９ゲージ、２０ゲージ、２１ゲージ、２２ゲージ、２３ゲージ、２４ゲージ、または２５ゲージであり得る。いくつかの実施形態では、患者由来のＦＮＡ試料は、少なくとも４００，０００個のＴＩＬ、例えば、４００，０００個のＴＩＬ、４５０，０００個のＴＩＬ、５００，０００個のＴＩＬ、５５０，０００個のＴＩＬ、６００，０００個のＴＩＬ、６５０，０００個のＴＩＬ、７００，０００個のＴＩＬ、７５０，０００個のＴＩＬ、８００，０００個のＴＩＬ、８５０，０００個のＴＩＬ、９００，０００個のＴＩＬ、９５０，０００個のＴＩＬ、またはそれ以上を含み得る。

いくつかの事例では、本明細書に記載のＴＩＬは、コア生検試料から取得される。いくつかの事例では、コア生検試料は、１１ゲージ針～１６ゲージ針の範囲の外科用または医療用針を使用して、患者から得られるか、または単離される。針は、１１ゲージ、１２ゲージ、１３ゲージ、１４ゲージ、１５ゲージ、または１６ゲージであり得る。いくつかの実施形態では、患者由来のコア生検試料は、少なくとも４００，０００個のＴＩＬ、例えば、４００，０００個のＴＩＬ、４５０，０００個のＴＩＬ、５００，０００個のＴＩＬ、５５０，０００個のＴＩＬ、６００，０００個のＴＩＬ、６５０，０００個のＴＩＬ、７００，０００個のＴＩＬ、７５０，０００個のＴＩＬ、８００，０００個のＴＩＬ、８５０，０００個のＴＩＬ、９００，０００個のＴＩＬ、９５０，０００個のＴＩＬ、またはそれ以上を含み得る。

一般に、採取された細胞懸濁液は、「一次細胞集団」または「新たに採取された」細胞集団と呼ばれる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍消化物から得られない。いくつかの実施形態では、固形腫瘍コアは、断片化されない。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、腫瘍消化物から取得される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、ＲＰＭＩ１６４０（２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮａｓｅ、及び１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼ）であるが、これに限定されない酵素培地中でのインキュベーション、続いて、機械的解離（ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）によって生成された。腫瘍を酵素培地に入れた後、腫瘍は、およそ１分間機械的に解離され得る。その後、溶液が５％ＣＯ_２中３７℃で３０分間インキュベートされ、その後、およそ１分間再び機械的に破壊され得る。５％ ＣＯ_２中３７℃で３０分間再びインキュベートした後、腫瘍を、およそ１分間、３回目に機械的に破壊することができる。いくつかの実施形態では、大きい組織片が存在する場合、３回目の機械的破壊後、５％ＣＯ_２中３７℃でさらに３０分間インキュベートするかにかかわらず、１回または２回の追加の機械的解離が試料に適用された。いくつかの実施形態では、細胞懸濁液が多数の赤血球または死細胞を含む場合、最終インキュベーションの終わりに、Ｆｉｃｏｌｌを使用した密度勾配分離が行われて、これらの細胞を除去することができる。

いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ集団を取得することは、多病変サンプリング法を含む。

腫瘍解離酵素混合物には、１つ以上の解離（消化）酵素、例えば、限定されないが、コラゲナーゼ（任意のブレンドまたはコラゲナーゼの種類を含む）、Ａｃｃｕｔａｓｅ（商標）、Ａｃｃｕｍａｘ（商標）、ヒアルロニダーゼ、中性プロテアーゼ（ディスパーゼ）、キモトリプシン、キモパパイン、トリプシン、カゼイナーゼ、エラスターゼ、パパイン、ＸＩＶ型プロテアーゼ（プロナーゼ）、デオキシリボヌクレアーゼＩ（ＤＮａｓｅ）、トリプシン阻害剤、任意の他の解離酵素またはタンパク質分解酵素、及びそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。

いくつかの実施形態では、解離酵素は、凍結乾燥酵素から再構成される。いくつかの実施形態では、凍結乾燥酵素は、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）などの滅菌緩衝液の量で再構成される。

いくつかの事例では、コラゲナーゼ（アニマルフリー１型コラゲナーゼなど）を、１０ｍＬの滅菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液で再構成する。凍結乾燥ストック酵素は、２８９２ＰＺ Ｕ／バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、コラゲナーゼは、５ｍＬ～１５ｍＬの緩衝液中で再構成される。いくつかの実施形態では、再構成後のコラゲナーゼストックは、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬの範囲、例えば、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約３５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約３００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ～約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約１５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２１０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２２０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２３０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２４０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２６０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２７０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２８０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約２８９．２ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約３００ＰＺ Ｕ／ｍＬ、約３５０ＰＺ Ｕ／ｍＬ、または約４００ＰＺ Ｕ／ｍＬである。

いくつかの実施形態では、中性プロテアーゼは、１ｍＬの滅菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥ストック酵素は、１７５ＤＭＣＵ／バイアルの濃度であり得る。いくつかの実施形態では、再構成後の中性プロテアーゼストックは、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬの範囲、例えば、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約３５０ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ～約３００ＤＭＣ／ｍＬ、約１５０ＤＭＣ／ｍＬ～約４００ＤＭＣ／ｍＬ、約１００ＤＭＣ／ｍＬ、約１１０ＤＭＣ／ｍＬ、約１２０ＤＭＣ／ｍＬ、約１３０ＤＭＣ／ｍＬ、約１４０ＤＭＣ／ｍＬ、約１５０ＤＭＣ／ｍＬ、約１６０ＤＭＣ／ｍＬ、約１７０ＤＭＣ／ｍＬ、約１７５ＤＭＣ／ｍＬ、約１８０ＤＭＣ／ｍＬ、約１９０ＤＭＣ／ｍＬ、約２００ＤＭＣ／ｍＬ、約２５０ＤＭＣ／ｍＬ、約３００ＤＭＣ／ｍＬ、約３５０ＤＭＣ／ｍＬ、または約４００ＤＭＣ／ｍＬである。

いくつかの実施形態では、ＤＮＡｓｅ Ｉは、１ｍＬの滅菌ＨＢＳＳまたは別の緩衝液中で再構成される。凍結乾燥したストック酵素は、４ＫＵ／バイアルの濃度であった。いくつかの実施形態では、再構成後のＤＮａｓｅ Ｉストックは、約１ＫＵ／ｍＬ～１０ＫＵ／ｍＬ、例えば、約１ＫＵ／ｍＬ、約２ＫＵ／ｍＬ、約３ＫＵ／ｍＬ、約４ＫＵ／ｍＬ、約５ＫＵ／ｍＬ、約６ＫＵ／ｍＬ、約７ＫＵ／ｍＬ、約８ＫＵ／ｍＬ、約９ＫＵ／ｍＬ、または約１０ＫＵ／ｍＬの範囲である。

いくつかの実施形態では、酵素のストックは変化する可能性があるため、凍結乾燥ストックの濃度を確認し、それに応じて消化カクテルに追加される酵素の最終量を修正する。

いくつかの実施形態では、酵素混合物は、約４．７ｍＬの滅菌ＨＢＳＳ中に約１０．２ｕｌの中性プロテアーゼ（０．３６ＤＭＣ Ｕ／ｍＬ）、２１．３ｕｌのコラゲナーゼ（１．２ＰＺ／ｍＬ）及び２５０ｕｌのＤＮＡｓｅ Ｉ（２００Ｕ／ｍＬ）を含む。

２．胸水Ｔ細胞及びＴＩＬ
いくつかの実施形態では、試料は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのＴ細胞またはＴＩＬの供給源は、胸腔内液試料である。いくつかの実施形態では、試料は、胸水由来試料である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセスによる拡張のためのＴＩＬの供給源は、胸水由来試料である。例えば、米国特許公開第２０１４／０２９５４２６号に記載されている方法を参照されたく、これはすべての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬと思われる、及び／またはＴＩＬを含む任意の胸腔内液または胸水を利用することができる。かかる試料は、ＮＳＣＬＣもしくはＳＣＬＣなどの原発性または転移性肺癌に由来し得る。いくつかの実施形態では、試料は、別の臓器、例えば、乳房、卵巣、結腸、または前立腺に由来する二次転移性がん細胞であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜浸出液である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用する試料は、胸膜漏出液である。他の生体試料は、例えば、腹部からの腹水または膵嚢胞液を含む、ＴＩＬを含有する他の漿液を含み得る。腹水及び胸腔内液は、非常に類似した化学系を伴い、腹部及び肺の両方が、悪性腫瘍における同じ物質の胸膜空間及び腹部空間に中皮線及び流体形態を有し、いくつかの実施形態では、かかる流体は、ＴＩＬを含有する。本開示が胸水を例示するいくつかの実施形態では、同じ方法が、胸腔内液またはＴＩＬを含有する他の嚢胞液を使用して同様の結果で実行されてもよい。

いくつかの実施形態では、胸腔内液は、患者から直接除去された未処理の形態である。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、接触ステップの前に、ＥＤＴＡまたはヘパリンチューブなどの標準的な採血管に入れられる。いくつかの実施形態では、未処理の胸腔内液は、接触ステップの前に、標準的なＣｅｌｌＳａｖｅ（登録商標）チューブ（Ｖｅｒｉｄｅｘ）に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、生存ＴＩＬの数の減少を避けるために、患者から採取した直後にＣｅｌｌＳａｖｅチューブに入れられる。生存ＴＩＬの数は、４℃であっても、未処理の胸腔内液中に放置されると、２４時間以内に大幅に減少する可能性がある。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの除去後１時間、５時間、１０時間、１５時間、または最大２４時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、試料は、４℃で、患者からの除去後１時間、５時間、１０時間、１５時間、または最大２４時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。

いくつかの実施形態では、選択された対象からの胸腔内液試料は、希釈され得る。一実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：１０である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：９である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：８である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：５である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：２である。別の実施形態では、希釈は、胸腔内液対希釈剤が１：１である。いくつかの実施形態では、希釈剤には、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、別の緩衝液、または生理学的に許容される希釈剤が含まれる。いくつかの実施形態では、試料は、患者からの収集及び希釈の直後にＣｅｌｌＳａｖｅチューブ内に入れられ、生存ＴＩＬの減少を回避し、これは、４℃であっても、未処理の胸腔内液中に放置された場合、２４～４８時間以内に有意に生じ得る。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、患者からの除去及び希釈後１時間、５時間、１０時間、１５時間、２４時間、３６時間、最大４８時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、４℃で、患者からの除去及び希釈後１時間、５時間、１０時間、１５時間、２４時間、３６時間、最大４８時間以内に適切な収集チューブ内に入れられる。

さらに別の実施形態では、胸腔内液試料は、さらなる処理ステップの前に、従来の手段によって濃縮される。いくつかの実施形態では、胸腔内液のこの前処理は、方法を実施する実験室への輸送のために、またはその後の分析のために（例えば、採取後２４～４８時間より後に）胸水を凍結保存しなければならない状況において好ましい。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、それが対象から採取された後に胸腔内液試料を遠心分離し、遠心分離物またはペレットを緩衝液中に再懸濁することによって調製される。いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、輸送または後の分析及び／または処理のために凍結保存される前に、複数の遠心分離及び再懸濁に供される。

いくつかの実施形態では、胸腔内液試料は、濾過法を使用することによって、さらなる処理ステップの前に濃縮される。いくつかの実施形態では、接触ステップで使用される胸腔内液試料は、胸腔内液が膜を通過することを可能にするが腫瘍細胞を保持する、既知で本質的に均一な孔径を含むフィルターをとおして流体を濾過することによって調製される。いくつかの実施形態では、膜の細孔の直径は、少なくとも４μＭであり得る。別の実施形態では、細孔直径は、５μＭ以上であり得、他の実施形態では、６、７、８、９、または１０μＭのうちのいずれかであり得る。濾過後、膜によって保持されたＴＩＬを含む細胞を、膜から適切な生理学的に許容される緩衝液にすすいでもよい。次いで、このように濃縮されたＴＩＬを含む細胞は、方法の接触ステップで使用することができる。

いくつかの実施形態では、胸腔内液試料（例えば、未処理の胸腔内液を含む）、希釈胸腔内液、または再懸濁細胞ペレットは、試料中に存在する無核赤血球を特異的に溶解する溶解試薬と接触させる。いくつかの実施形態では、このステップは、胸腔内液がかなりの数のＲＢＣを含む状況で、さらなる処理ステップの前に行われる。好適な溶解試薬には、単一の溶解試薬もしくは溶解試薬及びクエンチ試薬、または溶解剤、クエンチ試薬及び固定試薬が含まれる。好適な溶解システムは市販されており、ＢＤ Ｐｈａｒｍ Ｌｙｓｅ（商標）システム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）が含まれる。他の溶解システムには、Ｖｅｒｓａｌｙｓｅ（商標）システム、ＦＡＣＳｌｙｓｅ（商標）システム（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）、Ｉｍｍｕｎｏｐｒｅｐ（商標）システム、またはＥｒｙｔｈｒｏｌｙｓｅ ＩＩシステム（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）、または塩化アンモニウムシステムが含まれる。いくつかの実施形態では、溶解試薬は、赤血球の効率的な溶解、ならびに胸水におけるＴＩＬ及びＴＩＬの表現型特性の保存のような主要な要件によって異なり得る。溶解のための単一の試薬を利用することに加えて、本明細書に記載の方法に有用な溶解システムは、第２の試薬、例えば、方法の残りのステップ中に溶解試薬の効果をクエンチまたは遅延させるもの、例えばＳｔａｂｉｌｙｓｅ（商標）試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．）を含むことができる。溶解試薬の選択または方法の好ましい実施に応じて、従来の固定試薬を使用することもできる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、未処理、希釈または多重遠心分離または処理された胸腔内液試料は、本明細書で提供されるようにさらに処理及び／または拡張される前に、約－１４０℃の温度で凍結保存される。

３．末梢血から末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を拡張する方法
ＰＢＬ方法１。本発明のある実施形態では、ＰＢＬは、本明細書に記載のプロセスを使用して拡張される。本発明のある実施形態では、この方法は、全血からＰＢＭＣ試料を得ることを含む。ある実施形態では、この方法は、非ＣＤ１９＋画分の負の選択を使用して、ＰＢＭＣから純粋なＴ細胞を単離することによってＴ細胞を濃縮することを含む。ある実施形態では、この方法は、非ＣＤ１９＋画分の磁気ビーズベースの負の選択を使用して、ＰＢＭＣから純粋なＴ細胞を単離することによってＴ細胞を濃縮することを含む。

本発明のある実施形態では、ＰＢＬ方法１は、以下のように行われる。０日目に、凍結保存されたＰＢＭＣ試料を解凍し、ＰＢＭＣをカウントする。Ｔ細胞を、ヒトＰａｎ Ｔ細胞単離キット及びＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して単離する。

ＰＢＬ方法２。本発明のある実施形態では、ＰＢＬは、全血からＰＢＭＣ試料を得ることを含むＰＢＬ法２を使用して拡張される。ＰＢＭＣ由来のＴ細胞は、ＰＢＭＣを３７℃で少なくとも３時間インキュベートし、その後、非接着細胞を単離することによって濃縮される。

本発明のある実施形態では、ＰＢＬ方法２は、以下のように行われる。０日目に、凍結保存されたＰＭＢＣ試料を解凍し、ＰＢＭＣ細胞を、ＣＭ－２培地中の６ウェルプレートに６００万細胞／ウェルで播種し、３７℃で３時間インキュベートする。３時間後、ＰＢＬである非接着細胞を取り出し、カウントする。

ＰＢＬ方法３。本発明のある実施形態では、ＰＢＬは、末梢血からＰＢＭＣ試料を得ることを含むＰＢＬ法３を使用して拡張される。Ｂ細胞は、ＣＤ１９＋選択を使用して単離され、Ｔ細胞は、ＰＢＭＣ試料の非ＣＤ１９＋画分の負の選択を使用して選択される。

本発明のある実施形態では、ＰＢＬ方法３は、以下のように行われる。０日目に、末梢血から取得された凍結保存されたＰＢＭＣを解凍し、カウントする。ＣＤ１９＋Ｂ細胞を、ＣＤ１９ Ｍｕｌｔｉｓｏｒｔキット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して選別する。非ＣＤ１９＋細胞画分のうち、Ｔ細胞を、ヒトＰａｎ Ｔ細胞単離キット及びＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して精製する。

ある実施形態では、ＰＢＭＣは、全血試料から単離される。ある実施形態では、ＰＢＭＣ試料は、ＰＢＬを拡張するための出発材料として使用される。ある実施形態では、試料は、拡張プロセス前に凍結保存される。別の実施形態では、新鮮な試料が、ＰＢＬを拡張するための出発材料として使用される。本発明のある実施形態では、Ｔ細胞は、当該技術分野で知られている方法を使用してＰＢＭＣから単離される。ある実施形態では、Ｔ細胞は、ヒトＰａｎ Ｔ細胞単離キット及びＬＳカラムを使用して単離される。本発明のある実施形態では、Ｔ細胞は、当該技術分野で知られている抗体選択方法、例えば、ＣＤ１９の負の選択を使用して、ＰＢＭＣから単離される。

本発明のある実施形態では、ＰＢＭＣ試料は、非接着細胞を特定するのに有効な所望の温度である期間インキュベートされる。本発明のある実施形態では、インキュベーション時間は、約３時間である。本発明のある実施形態では、温度は、約３７℃である。その後、非接着細胞は、上記のプロセスを使用して拡張される。

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ試料は、キナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤を含むレジメンで任意選択で前治療された対象または患者由来のものである。いくつかの実施形態では、腫瘍試料は、キナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤を含むレジメンで前治療された対象または患者由来のものである。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ試料は、キナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤を含むレジメンで前治療されており、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、または１年間、またはそれ以上治療を受けた対象または患者由来のものである。別の実施形態では、ＰＢＭＣは、イブルチニブなどのＩＴＫ阻害剤レジメンを現在受けている患者に由来する。

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ試料は、キナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤を含むレジメンで前治療されており、キナーゼ阻害剤またはイブルチニブなどのＩＴＫ阻害剤での治療に不応性である対象または患者由来のものである。

いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ試料は、キナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤を含むレジメンで前治療されたが、もはやキナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤での治療を受けていない対象または患者由来のものである。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣ試料は、キナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤を含むレジメンで前治療されたが、もはやキナーゼ阻害剤またはＩＴＫ阻害剤での治療を受けておらず、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、または少なくとも１年間、またはそれ以上治療を受けていない対象または患者由来のものである。別の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＩＴＫ阻害剤に以前に曝露されたが、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、または少なくとも１年以内に治療されていない患者に由来する。

本発明のある実施形態では、０日目に、細胞がＣＤ１９＋について選択され、それに応じて選別される。本発明のある実施形態では、選択は、抗体結合ビーズを使用して行われる。本発明のある実施形態では、純粋なＴ細胞が、０日目にＰＢＭＣから単離される。

本発明のある実施形態では、イブルチニブまたは他のＩＴＫ阻害剤で前治療されていない患者の場合、１０～１５ｍＬのバフィーコートは、約５×１０^９個のＰＢＭＣを産生し、これは、次いで、約５．５×１０^７個のＰＢＬを産生する。

本発明のある実施形態では、イブルチニブまたは他のＩＴＫ阻害剤で前治療された患者の場合、拡張プロセスは、約２０×１０^９個のＰＢＬを産生する。本発明のある実施形態では、４０．３×１０^６個のＰＢＭＣは、約４．７×１０^５個のＰＢＬを産生する。

前述の実施形態のうちのいずれにおいても、ＰＢＭＣは、全血試料から、アフェレーシスによって、バフィーコートから、またはＰＢＭＣを得るための当該技術分野で知られている任意の他の方法から得られ得る。

前述の実施形態のうちのいずれにおいても、ＰＢＬは、本明細書に記載のＣＣＲを発現するように遺伝子修飾され得る。いくつかの実施形態では、ＰＢＬは、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０３４７３５０Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載される方法を使用して調製される。

４．骨髄由来のＰＢＭＣから骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）を拡張する方法
ＭＩＬ方法３。本発明のある実施形態では、この方法は、骨髄からＰＢＭＣを得ることを含む。０日目に、ＰＢＭＣがＣＤ３＋／ＣＤ３３＋／ＣＤ２０＋／ＣＤ１４＋について選択され、選別され、非ＣＤ３＋／ＣＤ３３＋／ＣＤ２０＋／ＣＤ１４＋細胞画分が超音波処理され、超音波処理された細胞画分の一部が選択された細胞画分に戻し追加される。

本発明のある実施形態では、ＭＩＬ方法３は、以下のように行われる。０日目に、凍結保存されたＰＢＭＣ試料を解凍し、ＰＢＭＣをカウントする。細胞を、ＣＤ３、ＣＤ３３、ＣＤ２０、及びＣＤ１４抗体で染色し、選別されたＳ３ｅ細胞（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して選別する。細胞を、免疫細胞画分（またはＭＩＬ画分）（ＣＤ３＋ＣＤ３３＋ＣＤ２０＋ＣＤ１４＋）及びＡＭＬ芽球画分（非ＣＤ３＋ＣＤ３３＋ＣＤ２０＋ＣＤ１４＋）の２つの画分に選別する。

本発明のある実施形態では、ＰＢＭＣは、骨髄から得られる。ある実施形態では、ＰＢＭＣは、アフェレーシス、吸引、針生検、または当該技術分野で知られている他の同様の手段により骨髄から得られる。ある実施形態では、ＰＢＭＣは、新鮮である。別の実施形態では、ＰＢＭＣは、凍結保存される。

本発明のある実施形態では、ＭＩＬは、１０～５０ｍＬの骨髄穿刺液から拡張される。本発明のある実施形態では、１０ｍＬの骨髄穿刺液が患者から取得される。別の実施形態では、２０ｍＬの骨髄穿刺液が患者から取得される。別の実施形態では、３０ｍＬの骨髄穿刺液が患者から取得される。別の実施形態では、４０ｍＬの骨髄穿刺液が患者から取得される。別の実施形態では、５０ｍＬの骨髄穿刺液が患者から取得される。

本発明のある実施形態では、約１０～５０ｍＬの骨髄穿刺液から産生されたＰＢＭＣの数は、約５×１０^７～約１０×１０^７個のＰＢＭＣである。別の実施形態では、産生されたＰＭＢＣの数は、約７×１０^７個のＰＢＭＣである。

本発明のある実施形態では、約５×１０^７～約１０×１０^７個のＰＢＭＣは、約０．５×１０^６～約１．５×１０^６個のＭＩＬを産生する。本発明のある実施形態では、約１×１０^６個のＭＩＬが産生される。

本発明のある実施形態では、骨髄吸引物から得られた１２×１０^６個のＰＢＭＣは、およそ１．４×１０^５個のＭＩＬを産生する。

前述の実施形態のうちのいずれにおいても、ＰＢＭＣは、全血試料から、骨髄から、アフェレーシスによって、バフィーコートから、またはＰＢＭＣを得るための当該技術分野で知られている任意の他の方法から得られ得る。

前述の実施形態のうちのいずれにおいても、ＭＩＬは、本明細書に記載のＣＣＲを発現するように遺伝子修飾され得る。いくつかの実施形態では、ＭＩＬは、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０３４７３５０Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載される方法を使用して調製される。

Ｂ．ステップＢ：プライミングによる第１の拡張
いくつかの実施形態では、本方法は、より古いＴＩＬ（すなわち、対象／患者への投与前により多くの複製ラウンドをさらに受けたＴＩＬ）よりも追加の治療的利益を提供し得る、より若いＴＩＬを提供する。若いＴＩＬの特徴は、文献、例えば、Ｄｏｎｉａ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２，７５，１５７－１６７、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０，１６，６１２２－６１３１、Ｈｕａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００５，２８，２５８－２６７、Ｂｅｓｓｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３，１９，ＯＦ１－ＯＦ９、Ｂｅｓｓｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９，３２，４１５－４２３、Ｒｏｂｂｉｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７３，７１２５－７１３０、Ｓｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２００７，３０，１２３－１２９、Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００５，２８，５３－６２、及びＴｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２００８，３１，７４２－７５１に記載されており、それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＡに記載されるものなどの腫瘍断片及び／または腫瘍断片の解剖または消化後に、得られた細胞は、腫瘍及び他の細胞よりもＴＩＬの成長を好む条件下で、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びフィーダー細胞（例えば、抗原提示フィーダー細胞）を含有する血清中で培養される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びフィーダー細胞は、腫瘍消化物及び／または腫瘍断片とともに培養開始時に（例えば、０日目に）追加される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物及び／または腫瘍断片は、１容器当たり最大６０個の断片及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む容器内でインキュベートされる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、数日間、一般に１～８日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、数日間、一般に１～７日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張は、１～８日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張は、１～７日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第１の拡張は、５～８日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第１の拡張は、５～７日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第１の拡張は、約６～８日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に、約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第１の拡張は、約６～７日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に、約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第１の拡張は、約７～８日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に、約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞を生じる。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第１の拡張は、約７日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞をもたらす。いくつかの実施形態では、このプライミングによる第１の拡張は、約８日間起こり、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞をもたらす。

好ましい実施形態では、ＴＩＬの拡張は、以下及び本明細書に記載されるプライミングによる第１の拡張ステップ（例えば、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるプロセスを含み得、０日目及び／または培養開始からのフィーダー細胞を含有する、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなど）、続いて以下のステップＤ及び本明細書に記載される急速な第２の拡張（ステップＤ、急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）ステップと称されるプロセスを含む）、続いて任意選択で凍結保存、続いて以下及び本明細書に記載される第２のステップＤ（再刺激ＲＥＰステップと称されるプロセスを含む）を使用して行うことができる。このプロセスから取得されたＴＩＬは、本明細書に記載の表現型特徴及び代謝パラメータについて任意で特徴付けられ得る。いくつかの実施形態では、腫瘍断片は、約１ｍｍ^３～１０ｍｍ^３である。

いくつかの実施形態では、第１の拡張培養培地は、培養培地の略語である「ＣＭ」と称される。いくつかの実施形態では、ステップＢのＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、及び１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充した、ＧｌｕｔａＭＡＸを含むＲＰＭＩ１６４０からなる。

いくつかの実施形態では、２４０個以下の腫瘍断片が存在する。いくつかの実施形態では、４つ以下の容器に入れられた２４０個以下の腫瘍断片が存在する。いくつかの実施形態では、容器は、ＧＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコである。いくつかの実施形態では、６０個以下の腫瘍断片が１つの容器に入れられる。いくつかの実施形態では、各容器は、１容器当たり５００ｍＬ以下の培地を含む。いくつかの実施形態では、培地は、ＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、培地は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、培地は、抗原提示フィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、ＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、容器は、ＧＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコである。いくつかの実施形態では、培地は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇのＯＫＴ－３、及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３、及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。

腫瘍断片の調製後、結果として得られた細胞（すなわち、一次細胞集団である断片）は、腫瘍及び他の細胞よりもＴＩＬの成長を好み、かつ０日目の培養開始からＴＩＬプライミング及び加速された成長を可能にする条件下で、ＩＬ－２、抗原提示フィーダー細胞、及びＯＫＴ－３を含む培地中で培養される。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物及び／または腫瘍断片は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、ならびに抗原提示フィーダー細胞及びＯＫＴ－３とインキュベートされる。この一次細胞集団は、数日間、一般に１～８日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞をもたらす。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張中の成長培地は、ＩＬ－２またはそのバリアント、ならびに抗原提示フィーダー細胞及びＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、この一次細胞集団は、数日間、一般に１～７日間培養され、その結果、バルクＴＩＬ集団、一般に約１×１０^８のバルクＴＩＬ細胞をもたらす。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張中の成長培地は、ＩＬ－２またはそのバリアント、ならびに抗原提示フィーダー細胞及びＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２は、組換えヒトＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）である。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき２０～３０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき２０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき２５×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、１ｍｇバイアルにつき３０×１０^６ＩＵ／ｍｇの比活性を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、４～８×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、５～７×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、６×１０^６ＩＵ／ｍｇのＩＬ－２の最終濃度を有する。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２ストック溶液は、実施例Ｃに記載されるように調製される。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約１０，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、または約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約９，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２～約５，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約８，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２～約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約７，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２～約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、ＩＬ－２をさらに含む。好ましい実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、１０００～２０００ＩＵ／ｍＬ、２０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、３０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、４０００～５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００～６０００ＩＵ／ｍＬ、６０００～７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００～８０００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、または約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、ＩＬ－１５をさらに含む。好ましい実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、または約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２１をさらに含む。好ましい実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、ＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、及び約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ～１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～２０ｎｇの間、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ～４０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、及び５０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、１５ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ－３抗体は、ムロモナブである。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、細胞培養培地中に１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４－１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは４－１ＢＢアゴニストであり、４－１ＢＢアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、ＥＵ－１０１、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、０．１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、２０μｇ／ｍＬ～４０μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。

いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、ＩＬ－２を約３０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で、及びＯＫＴ－３を約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度でさらに含み、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストが、４－１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、プライミングによる第１の拡張細胞培養培地は、ＩＬ－２を約６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で、及びＯＫＴ－３を約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度でさらに含み、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストが、４－１ＢＢアゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培養培地は、培養培地の略語である「ＣＭ」と称される。いくつかの実施形態では、それは、ＣＭ１（培養培地１）と称される。いくつかの実施形態では、ＣＭは、１０％ヒトＡＢ血清、２５ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、及び１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシンを補充した、ＧｌｕｔａＭＡＸを含むＲＰＭＩ１６４０からなる。いくつかの実施形態では、ＣＭは、実施例に記載されるＣＭ１である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張は、初期細胞培養培地または第１の細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張培地または初期細胞培養培地または第１の細胞培養培地は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞（本明細書ではフィーダー細胞とも称される）を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される拡張プロセスで使用される培地は、無血清培地または合成培地である。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び／または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、血清含有培地のロット間の変動に部分的に起因する実験変動を防止及び／または減少させるために使用される。

いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び／または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地には、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ、ＣＴＳ（商標）ＡＩＭ－Ｖ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＴＳ（商標）ＡＩＭ－Ｖ ＳＦＭ、ＬｙｍｐｈｏＯＮＥ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｘｅｎｏ－Ｆｒｅｅ Ｍｅｄｉｕｍ、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、イーグル基礎培地（ＢＭＥ）、ＲＰＭＩ１６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、最小必須培地（αＭＥＭ）、グラスゴー最小必須培地（Ｇ－ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地が含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、血清サプリメントまたは血清代替物には、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｅｒｕｍ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ、１つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のビタミン、１つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、１つ以上のコラーゲン前駆体、１つ以上の抗生物質、及び１つ以上の微量元素のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－プロリン、Ｌ－ヒドロキシプロリン、Ｌ－セリン、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリン、チアミン、還元型グルタチオン、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ａｇ^＋、Ａｌ^３＋、Ｂａ^２＋、Ｃｄ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｃｒ^３＋、Ｇｅ^４＋、Ｓｅ^４＋、Ｂｒ、Ｔ、Ｍｎ^２＋、Ｐ、Ｓｉ^４＋、Ｖ^５＋、Ｍｏ^６＋、Ｎｉ^２＋、Ｒｂ^＋、Ｓｎ^２＋、及びＺｒ^４＋を含有する化合物からなる群から選択される１つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、Ｌ－グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び／または２－メルカプトエタノールをさらに含む。

いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔは、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ、ＣＴＳ（商標）ＡＩＭ－Ｖ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＳＴ（商標）ＡＩＭ－Ｖ ＳＦＭ、ＬｙｍｐｈｏＯＮＥ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｘｅｎｏ－Ｆｒｅｅ Ｍｅｄｉｕｍ、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、イーグル基礎培地（ＢＭＥ）、ＲＰＭＩ１６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、最小必須培地（αＭＥＭ）、グラスゴー最小必須培地（Ｇ－ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地を含むが、これらに限定されない、従来の成長培地とともに使用される。

いくつかの実施形態では、無血清または合成培地中の総血清代替物濃度（ｖｏｌ％）は、総無血清または合成培地の約１体積％、２体積％、３体積％、４体積％、５体積％、６体積％、７体積％、８体積％、９体積％、１０体積％、１１体積％、１２体積％、１３体積％、１４体積％、１５体積％、１６体積％、１７体積％、１８体積％、１９体積％、または２０体積％である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約３％である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約５％である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約１０％である。

いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）のいずれの製剤も、本発明において有用である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭは、１ＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍと、２６ｍＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が補充されている。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、５５ｍＭの２－メルカプトエタノールとともに、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が補充されている。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が補充されており、培地中の２－メルカプトエタノールの最終濃度は、５５μＭである。

いくつかの実施形態では、合成培地は、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）のいずれの製剤も、本発明において有用である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭは、１ＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍと、２６ｍＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、５５ｍＭの２－メルカプトエタノールとともに、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が補充されている。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されている。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されており、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されており、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び５５ｍＭの２－メルカプトエタノールが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び５５ｍＭの２－メルカプトエタノールが補充されており、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び５５ｍＭの２－メルカプトエタノールが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び約２ｍＭのグルタミンが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び約２ｍＭのグルタミンが補充されており、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び約２ｍＭのグルタミンが補充されており、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が補充されており、培地中の２－メルカプトエタノールの最終濃度は、５５μＭである。

いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、０．５ｍＭ～約９ｍＭ、１ｍＭ～約８ｍＭ、２ｍＭ～約７ｍＭ、３ｍＭ～約６ｍＭ、または４ｍＭ～約５ｍＭの濃度でグルタミン（すなわち、ＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標））が補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約２ｍＭの濃度でグルタミン（すなわち、ＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標））が補充されている。

いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約５ｍＭ～約１５０ｍＭ、１０ｍＭ～約１４０ｍＭ、１５ｍＭ～約１３０ｍＭ、２０ｍＭ～約１２０ｍＭ、２５ｍＭ～約１１０ｍＭ、３０ｍＭ～約１００ｍＭ、３５ｍＭ～約９５ｍＭ、４０ｍＭ～約９０ｍＭ、４５ｍＭ～約８５ｍＭ、５０ｍＭ～約８０ｍＭ、５５ｍＭ～約７５ｍＭ、６０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約６５ｍＭの濃度で２－メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約５５ｍＭの濃度で２－メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、培地中の２－メルカプトエタノールの最終濃度は、５５μＭである。

いくつかの実施形態では、参照により本明細書に組み込まれる国際ＰＣＴ公開第ＷＯ／１９９８／０３０６７９号に記載されている合成培地は、本発明において有用である。その刊行物には、無血清真核細胞培養培地が記載されている。無血清真核細胞培養培地には、無血清培養下で細胞の成長を支持することができる無血清サプリメントを補充した基礎細胞培養培地が含まれる。無血清真核細胞培養培地サプリメントは、１つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のビタミン、１つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、１つ以上のコラーゲン前駆体、１つ以上の微量元素、及び１つ以上の抗生物質からなる群から選択される１つ以上の成分を含むか、またはそれらを組み合わせることによって取得される。いくつかの実施形態では、合成培地は、Ｌ－グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び／またはベータ－メルカプトエタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンまたはアルブミン代替物と、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のビタミン、１つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、１つ以上のコラーゲン前駆体、及び１つ以上の微量元素からなる群から選択される１つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－プロリン、Ｌ－ヒドロキシプロリン、Ｌ－セリン、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリン、チアミン、還元型グルタチオン、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ａｇ^＋、Ａｌ^３＋、Ｂａ^２＋、Ｃｄ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｃｒ^３＋、Ｇｅ^４＋、Ｓｅ^４＋、Ｂｒ、Ｔ、Ｍｎ^２＋、Ｐ、Ｓｉ^４＋、Ｖ^５＋、Ｍｏ^６＋、Ｎｉ^２＋、Ｒｂ^＋、Ｓｎ^２＋、及びＺｒ^４＋を含有する化合物からなる群から選択される１つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、イーグル基礎培地（ＢＭＥ）、ＲＰＭＩ１６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、最小必須培地（αＭＥＭ）、グラスゴー最小必須培地（Ｇ－ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、合成培地中のグリシンの濃度は、約５～２００ｍｇ／Ｌの範囲であり、Ｌ－ヒスチジンの濃度は、約５～２５０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－イソロイシンの濃度は、約５～３００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－メチオニンの濃度は、約５～２００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－フェニルアラニンの濃度は、約５～４００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－プロリンの濃度は、約１～１０００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－ヒドロキシプロリンの濃度は、約１～４５ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－セリンの濃度は、約１～２５０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－スレオニンの濃度は、約１０～５００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－トリプトファンの濃度は、約２～１１０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－チロシンの濃度は、約３～１７５ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－バリンの濃度は、約５～５００ｍｇ／Ｌであり、チアミンの濃度は、約１～２０ｍｇ／Ｌであり、還元型グルタチオンの濃度は、約１～２０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸塩の濃度は、約１～２００ｍｇ／Ｌであり、鉄飽和トランスフェリンの濃度は、約１～５０ｍｇ／Ｌであり、インスリンの濃度は、約１～１００ｍｇ／Ｌであり、亜セレン酸ナトリウムの濃度は、約０．０００００１～０．０００１ｍｇ／Ｌであり、アルブミン（例えば、ＡｌｂｕＭＡＸ（登録商標）Ｉ）の濃度は、約５０００～５０，０００ｍｇ／Ｌである。

いくつかの実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、以下の表４の「１×培地中の濃度範囲」という見出しの下の列にリストされた濃度範囲で存在する。他の実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、以下の表４の「１×培地の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされた最終濃度で存在する。他の実施形態では、合成培地は、無血清サプリメントを含む基礎細胞培地である。これらの実施形態のうちのいくつかでは、無血清サプリメントは、以下の表４の「サプリメント中の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされたタイプ及び濃度の非微量部分成分を含む。

いくつかの実施形態では、合成培地の浸透圧は、約２６０～３５０ｍＯｓｍｏｌである。いくつかの実施形態では、浸透圧は、約２８０～３１０ｍＯｓｍｏｌである。いくつかの実施形態では、合成培地には、最大約３．７ｇ／Ｌ、または約２．２ｇ／Ｌの重炭酸ナトリウムが補充されている。合成培地には、Ｌ－グルタミン（最終濃度約２ｍＭ）、１つ以上の抗生物質、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、最終濃度約１００μＭ）、２－メルカプトエタノール（最終濃度約１００μＭ）がさらに補充されていてもよい。

いくつかの実施形態では、Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，ＣｌｉｎＴｒａｎｓｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１５，４（１），ｅ３１（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載される合成培地は、本発明において有用である。簡潔には、ＲＰＭＩまたはＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒを基礎細胞培地として使用し、０、２％、５％、または１０％のいずれかのＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔを補充した。

ある実施形態では、第１及び／または第２のガス透過性容器内の細胞培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。ある実施形態では、第１及び／または第２のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ－メルカプトエタノール（ＢＭＥまたはβＭＥ、２－メルカプトエタノールとしても知られる、ＣＡＳ６０－２４－２）を欠いている。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることがあるものを含み得る）プロセスは、実施例及び図において考察されるように、１～８日間である。いくつかの実施形態では、第１のプライミング拡張（例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、２～８日間である。いくつかの実施形態では、第１のプライミング拡張（例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、３～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、実施例及び図において考察されるように、４～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、実施例及び図において考察されるように、１～７日間である。いくつかの実施形態では、第１のプライミング拡張（例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、２～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、２～７日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、３～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、３～７日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、４～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、４～７日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、５～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、５～７日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、６～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、６～７日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、７～８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、８日間である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＢに記載されるものなどのプロセスを含み、これは、ＲＥＰ前またはプライミングＲＥＰと称されることもあるものを含み得る）プロセスは、７日間である。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから１日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから１日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから２日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから２日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから３日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから３日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから４日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから４日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから５日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから５日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから６日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから６日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから７日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１のＴＩＬ拡張は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから７日間続行することができる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬのプライミングによる第１の拡張は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、１日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、２日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、３日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、３日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、４日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、４日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、５日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、５日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、６日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、６日～７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、７日～８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、７日間続行することができる。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１の組み合わせは、プライミングによる第１の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）による、ならびに本明細書に記載されるステップＢプロセス中を含む、第１の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の組み合わせは、プライミングによる第１の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）による、及び本明細書に記載されるステップＢプロセス中に含まれ得る。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）によるステップＢは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが容器として用いられる。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１０またはＧ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、Ｇ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、Ｇ－ＲＥＸ－１０である。

１．フィーダー細胞及び抗原提示細胞
実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図１（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ４～８日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ４～７日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ５～８日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ５～７日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ６～８日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ６～７日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ７または８日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ７日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要とせず、むしろ８日目の任意の時点でプライミングによる第１の拡張中に追加される。

実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ）からのステップＢに記載されるもの、ならびにｐｒｅ－ＲＥＰまたはプライミングＲＥＰと称されるものなどの拡張を含む））は、ＴＩＬ拡張の開始時及びプライミングによる第１の拡張中にフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）を必要する。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、同種異系の健康な献血者由来の標準の全血単位から取得される末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。いくつかの実施形態では、２．５×１０^８のフィーダー細胞が、プライミングによる第１の拡張中に使用される。いくつかの実施形態では、容器当たり２．５×１０^８のフィーダー細胞が、プライミングによる第１の拡張中に使用される。いくつかの実施形態では、ＧＲＥＸ－１０当たり２．５×１０^８のフィーダー細胞が、プライミングによる第１の拡張中に使用される。いくつかの実施形態では、ＧＲＥＸ－１００当たり２．５×１０^８のフィーダー細胞が、プライミングによる第１の拡張中に使用される。

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、実施例に記載されるように、ＲＥＰ手順で使用され、これは、照射された同種異系ＰＢＭＣの複製無能力を評価するための例示的なプロトコルを提供する。

いくつかの実施形態では、１４日目の総生細胞数が、プライミングによる第１の拡張の０日目に培養された初期の生細胞数よりも少ない場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。

いくつかの実施形態では、７日目のＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された総生細胞数が、プライミングによる第１の拡張の０日目に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。

いくつかの実施形態では、７日目のＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された総生細胞数が、プライミングによる第１の拡張の０日目に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、５～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び１０００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、１０～５０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２０００～５０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、２０～４０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２０００～４０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、２５～３５ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２５００～３５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、１５ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、１５ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。

いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、ＰＢＭＣである。いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、人工抗原提示フィーダー細胞である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、約１：２５、約１：５０、約１：１００、約１：１２５、約１：１５０、約１：１７５、約１：２００、約１：２２５、約１：２５０、約１：２７５、約１：３００、約１：３２５、約１：３５０、約１：３７５、約１：４００、または約１：５００である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、１：５０～１：３００である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、１：１００～１：２００である。

ある実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順は、約２．５×１０^８フィーダー細胞：約１００×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順は、約２．５×１０^８フィーダー細胞：約５０×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順は、約２．５×１０^８フィーダー細胞：約２５×１０^６ＴＩＬを必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張には、約２．５×１０^８のフィーダー細胞が必要である。さらに別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張は、急速な第２の拡張で使用されるフィーダー細胞の数の４分の１、３分の１、１２分の５、または半分を必要とする。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張における培地は、ＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張における培地は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張における培地は、抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張における培地は、容器当たり２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張における培地は、ＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり３０ｎｇのＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、容器は、ＧＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコである。いくつかの実施形態では、培地は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３、及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３、及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり５００ｍＬの培養培地及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞当たり１５μｇのＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり５００ｍＬの培養培地及び１５μｇのＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、容器は、ＧＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコである。いくつかの実施形態では、培地は、５００ｍＬの培養培地、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３、及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり５００ｍＬの培養培地、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、１５μｇのＯＫＴ－３、及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり５００ｍＬの培養培地及び２．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞当たり１５μｇのＯＫＴ－３を含む。

ある実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張手順は、第２の拡張中にＴＩＬを超える過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、同種異系の健康な献血者由来の標準の全血単位から取得される末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。ある実施形態では、人工抗原提示（ａＡＰＣ）細胞がＰＢＭＣの代わりに使用される。

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、図及び実施例に記載される例示的な手順を含む、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順で使用される。

ある実施形態では、人工抗原提示細胞は、ＰＢＭＣの代替物として、またはＰＢＭＣと組み合わせて、プライミングによる第１の拡張において使用される。

２．サイトカイン及び他の添加物
本明細書に記載の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にＩＬ－２を含む培養培地を使用する。

あるいは、ＴＩＬのプライミングによる第１の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１７／０１０７４９０Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＩＬ－２、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１のうちの２つ以上の組み合わせを用いて追加として可能である。したがって、可能な組み合わせには、ＩＬ－２及びＩＬ－１５、ＩＬ－２及びＩＬ－２１、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１、ならびにＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１が含まれ、後者は多くの実施形態で特に有用である。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにＴ細胞の生成に特に有利に働く。

ある実施形態では、ステップＢはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＫＴ－３抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含み得る。ある実施形態では、ステップＢはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、４－１ＢＢアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。ある実施形態では、ステップＢはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＸ－４０アゴニストの、培養培地への添加を含み得る。加えて、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）－ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターＩ－アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３０７７９６Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ステップＢ中の培養培地で使用されてもよい。

Ｃ．ステップＣ：プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行
場合によっては、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されるようにステップＢから得られるＴＩＬ集団を含む、プライミングによる第１の拡張から得られたバルクＴＩＬ母集団（ｐｒｅ－ＲＥＰと称されることもある拡張を含み得る）は、急速な第２の拡張（これは、急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）と称されることもある拡張を含み得る）に供され、次いで、以下で考察されるように凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾ＴＩＬが療法に使用される場合、プライミングによる第１の拡張由来の拡張ＴＩＬ集団または急速な第２の拡張由来の拡張ＴＩＬ集団は、拡張ステップ前またはプライミングによる第１の拡張後及び急速な第２の拡張前に好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から（例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されるようにステップＢから）取得されたＴＩＬは、選択のために表現型決定されるまで保存される。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から（例えば、図１（特に、例えば、図１Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されるようにステップＢから）取得されたＴＩＬは保存されず、急速な第２の拡張に直接進行する。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から取得されたＴＩＬは、プライミングによる第１の拡張後及び急速な第２の拡張前に凍結保存されない。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、腫瘍の断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約３日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約３日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約４日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約４日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約５日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約５日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約６日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約６日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約７日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから約８日で起こる。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、または８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから１日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから１日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから２日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから２日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから３日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから３日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから４日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから４日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから５日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから５日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから６日～７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから６日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから７日～８日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき、及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから７日で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、断片化が起こったとき、及び／またはプライミングによる第１の拡張ステップが開始されたときから８日で起こる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、第１の初期拡張後、及び急速な第２の拡張前に保存されず、ＴＩＬは、急速な第２の拡張に直接進行する（例えば、いくつかの実施形態では、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されるようにステップＢからステップＤへの移行中の保存がない）。いくつかの実施形態では、移行は、本明細書に記載されるように、閉鎖系内で起こる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張由来のＴＩＬである第２のＴＩＬ集団は、移行期間なしで急速な第２の拡張に直接進む。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）によるステップＣは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、単一のバイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、用いられる単一のバイオリアクターは、例えば、ＧＲＥＸ－１０またはＧＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、閉鎖系バイオリアクターは、単一のバイオリアクターである。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張から急速な第２の拡張への移行は、容器サイズのスケールアップを伴う。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張は、急速な第２の拡張よりも小さい容器内で行われる。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張は、ＧＲＥＸ－１００内で行われ、急速な第２の拡張は、ＧＲＥＸ－５００内で行われる。

Ｄ．ステップＤ：急速な第２の拡張
いくつかの実施形態では、ＴＩＬ細胞集団は、採取及びプライミングによる第１の拡張後、ステップＡ及びステップＢ、ならびに図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ））に示されるようにステップＣと称される移行後に数がさらに拡張される。このさらなる拡張は、本明細書では急速な第２の拡張または急速拡張と称され、これは、当該技術分野で一般に急速拡張プロセス（急速拡張プロトコルまたはＲＥＰ、及び図８（特に、例えば図８Ｂ）のステップＤに示されるプロセス）と称される拡張プロセスを含み得る。急速な第２の拡張は、一般に、フィーダー細胞、サイトカイン源、及び抗ＣＤ３抗体を含む、いくつかの成分を含む培養培地を使用して、ガス透過性容器内で達成される。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張開始の１日、２日、３日、または４日後（すなわち、Ｇｅｎ３プロセス全体の８、９、１０、または１１日目）に、ＴＩＬは、より大容量の容器に移される。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの急速な第２の拡張（ＲＥＰと称されることもある拡張、ならびに図１（特に、例えば図１Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＤに示されるプロセスを含み得る）は、当業者に知られている任意のＴＩＬフラスコまたは容器を使用して行うことができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、または１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約２日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第１のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約２日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約２日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約２日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約３２日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約３日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約４日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約４日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約５日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約５日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約６日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約６日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約７日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約７日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約８日～約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約８日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約９日～約１０日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約１日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約２日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約３日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約４日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約５日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約６日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約７日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約８日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約９日間続行することができる。いくつかの実施形態では、第２のＴＩＬ拡張は、急速な第２の拡張の開始後、約１０日間続行することができる。

実施形態では、急速な第２の拡張は、本開示の方法（例えば、ＲＥＰと称される拡張、ならびに図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＤに示されるプロセスを含む）を使用して、ガス透過性容器内で行うことができる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びフィーダー細胞（本明細書では「抗原提示細胞」とも称される）の存在下での急速な第２の拡張において拡張される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びフィーダー細胞の存在下での急速な第２の拡張において拡張され、フィーダー細胞は、プライミングによる第１の拡張において存在するフィーダー細胞の濃度の２倍、２．４倍、２．５倍、３倍、３．５倍、または４倍である最終濃度まで追加される。例えば、ＴＩＬは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）またはインターロイキン－１５（ＩＬ－１５）の存在下で非特異的Ｔ細胞受容体刺激を使用して、急速に拡張され得る。非特異的Ｔ細胞受容体刺激は、例えば、抗ＣＤ３抗体、例えば約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３、マウスモノクローナル抗ＣＤ３抗体（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪもしくはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡから市販）またはＵＨＣＴ－１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡから市販）を含み得る。ＴＩＬは、がんのエピトープ（複数可）などの抗原性部分を含む、第２の拡張中に１つ以上の抗原を含むことによって、インビトロでＴＩＬのさらなる刺激を誘導するように拡張することができ、これは、ベクター、例えば、ヒト白血球抗原Ａ２（ＨＬＡ－Ａ２）結合ペプチド、例えば、０．３μＭ ＭＡＲＴ－１：２６－３５（２７Ｌ）またはｇｐｌ００：２０９－２１７（２１０Ｍ）から、任意選択で３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２またはＩＬ－１５などのＴ細胞成長因子の存在下で任意で発現され得る。他の好適な抗原には、例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼがん抗原、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＳＳＸ－２、及びＶＥＧＦＲ２、またはそれらの抗原性部分が含まれ得る。ＴＩＬは、ＨＬＡ－Ａ２を発現する抗原提示細胞にパルスされたがんの同じ抗原（複数可）で再刺激することによっても急速に拡張され得る。あるいは、ＴＩＬは、例えば、例として照射された自己リンパ球または照射されたＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球及びＩＬ－２でさらに再刺激され得る。いくつかの実施形態では、再刺激は、第２の拡張の一部として起こる。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、照射された自己リンパ球の存在下で、または照射されたＨＬＡ－Ａ２＋同種異系リンパ球及びＩＬ－２を用いて起こる。

ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、約１０００ＩＵ／ｍＬ、約１５００ＩＵ／ｍＬ、約２０００ＩＵ／ｍＬ、約２５００ＩＵ／ｍＬ、約３０００ＩＵ／ｍＬ、約３５００ＩＵ／ｍＬ、約４０００ＩＵ／ｍＬ、約４５００ＩＵ／ｍＬ、約５０００ＩＵ／ｍＬ、約５５００ＩＵ／ｍＬ、約６０００ＩＵ／ｍＬ、約６５００ＩＵ／ｍＬ、約７０００ＩＵ／ｍＬ、約７５００ＩＵ／ｍＬ、または約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、１０００～２０００ＩＵ／ｍＬ、２０００～３０００ＩＵ／ｍＬ、３０００～４０００ＩＵ／ｍＬ、４０００～５０００ＩＵ／ｍＬ、５０００～６０００ＩＵ／ｍＬ、６０００～７０００ＩＵ／ｍＬ、７０００～８０００ＩＵ／ｍＬ、または８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。

ある実施形態では、細胞培養培地は、ＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、約０．１ｎｇ／ｍＬ、約０．５ｎｇ／ｍＬ、約１ｎｇ／ｍＬ、約２．５ｎｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ、約７．５ｎｇ／ｍＬ、約１０ｎｇ／ｍＬ、約１５ｎｇ／ｍＬ、約２０ｎｇ／ｍＬ、約２５ｎｇ／ｍＬ、約３０ｎｇ／ｍＬ、約３５ｎｇ／ｍＬ、約４０ｎｇ／ｍＬ、約５０ｎｇ／ｍＬ、約６０ｎｇ／ｍＬ、約７０ｎｇ／ｍＬ、約８０ｎｇ／ｍＬ、約９０ｎｇ／ｍＬ、約１００ｎｇ／ｍＬ、約２００ｎｇ／ｍＬ、約５００ｎｇ／ｍＬ、及び約１μｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、０．１ｎｇ／ｍＬ～１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ～５ｎｇ／ｍＬ、５ｎｇ／ｍＬ～１０ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ～２０ｎｇの間、２０ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬ、３０ｎｇ／ｍＬ～４０ｎｇ／ｍＬ、４０ｎｇ／ｍＬ～５０ｎｇ／ｍＬ、及び５０ｎｇ／ｍＬ～１００ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、１５ｎｇ／ｍＬ～３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、３０ｎｇ／ｍＬ～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３抗体を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、約６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ－３抗体は、ムロモナブである。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、ＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、培地は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、容器当たり７．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、ＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張培地中に、容器当たり５００ｍＬの培養培地及び３０μｇのＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、容器は、ＧＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコである。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張培地中に、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３、及び７．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり５００ｍＬの培養培地、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０μｇのＯＫＴ－３、及び７．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、ＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、培地は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、培地は、容器当たり５×１０^８～７．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、ＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、容器当たり５００ｍＬの培養培地及び３０μｇのＯＫＴ－３を含む。いくつかの実施形態では、容器は、ＧＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコである。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ－３、及び５×１０^８～７．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張における培地は、容器当たり５００ｍＬの培養培地、ならびに６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０μｇのＯＫＴ－３、及び５×１０^８～７．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞を含む。

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、細胞培養培地中に１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４－１ＢＢアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは４－１ＢＢアゴニストであり、４－１ＢＢアゴニストは、ウレルマブ、ウトミルマブ、ＥＵ－１０１、融合タンパク質、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、バイオシミラー、及び組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、０．１μｇ／ｍＬ～１００μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。いくつかの実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、２０μｇ／ｍＬ～４０μｇ／ｍＬの細胞培養培地中濃度を達成するのに十分な濃度で追加される。

いくつかの実施形態では、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストに加えて、細胞培養培地は、ＩＬ－２を約３０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で、及びＯＫＴ－３を約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度でさらに含み、１つ以上のＴＮＦＲＳＦアゴニストが、４－１ＢＢアゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１の組み合わせは、第２の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）による、ならびに本明細書に記載されるステップＤプロセス中を含む、第２の拡張中に含まれ得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の組み合わせは、第２の拡張中に組み合わせとして用いられる。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、ならびにそれらの任意の組み合わせは、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）による、及び本明細書に記載されるステップＤプロセス中に含まれ得る。

いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、抗原提示フィーダー細胞、及び任意でＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む補充された細胞培養培地において実施され得る。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、補充された細胞培養培地中で起こる。いくつかの実施形態では、補充された細胞培養培地は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞を含む。いくつかの実施形態では、第２の細胞培養培地は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ、抗原提示フィーダー細胞とも称される）を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示フィーダー細胞（すなわち、抗原提示細胞）を含む細胞培養培地中で起こる。

いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１６０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１４０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、約１２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５、または約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約４００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５～約１００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－１５をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１８０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－１５を含む。

いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約４ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約３ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１、または約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約１０ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１～約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、第２の拡張培養培地は、約２ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、約０．５ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。ある実施形態では、細胞培養培地は、ＩＬ－２１をさらに含む。好ましい実施形態では、細胞培養培地は、約１ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２１を含む。

いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）は、ＰＢＭＣである。ある実施形態では、急速拡張及び／または第２の拡張におけるＴＩＬのＰＢＭＣ及び／または抗原提示細胞に対する比率は、約１：１０、約１：１５、約１：２０、約１：２５、約１：３０、約１：３５、約１：４０、約１：４５、約１：５０、約１：７５、約１：１００、約１：１２５、約１：１５０、約１：１７５、約１：２００、約１：２２５、約１：２５０、約１：２７５、約１：３００、約１：３２５、約１：３５０、約１：３７５、約１：４００、または約１：５００である。ある実施形態では、急速拡張及び／または第２の拡張におけるＴＩＬのＰＢＭＣに対する比率は、１：５０～１：３００である。ある実施形態では、急速拡張及び／または第２の拡張におけるＴＩＬのＰＢＭＣに対する比率は、１：１００～１：２００である。

ある実施形態では、ＲＥＰ及び／または急速な第２の拡張は、バルクＴＩＬを１００倍または２００倍過剰の不活性化フィーダー細胞と混合してフラスコ内で行われ、フィーダー細胞濃度は、１５０ｍＬ培地中のプライミングによる第１の拡張、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗ＣＤ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２におけるフィーダー細胞濃度の少なくとも１．１倍（１．１×）、１．２倍、１．３倍、１．４倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、１．８倍、１．８倍、２倍、２．１倍、２．２倍、２．３倍、２．４倍、２．５倍、２．６倍、２．７倍、２．８倍、２．９倍、３．０倍、３．１倍、３．２倍、３．３倍、３．４倍、３．５倍、３．６倍、３．７倍、３．８倍、３．９倍または４．０倍である。培地交換（一般に、使用済み培地の３分の２の吸引及び等量の新鮮な培地との交換による、３分の２培地交換）は、細胞が代替の成長チャンバに移されるまで行われる。代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、Ｇ－ＲＥＸフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張（ＲＥＰプロセスと称されるプロセスを含み得る）は、実施例及び図で論じられるように、７～９日間である。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、７日間である。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、８日間である。いくつかの実施形態では、第２の拡張は、９日間である。

ある実施形態では、第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張、ならびに図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＤで参照される拡張を含み得る）は、１００ｃｍのガス透過性シリコン底部（Ｇ－Ｒｅｘ１００、Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｎｅｗ Ｂｒｉｇｈｔｏｎ，ＭＮ，ＵＳＡから市販）を有する５００ｍＬ容量のガス透過性フラスコ内で行うことができ、５×１０^６または１０×１０^６ＴＩＬは、５％ヒトＡＢ血清、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、及び３０ｎｇ／ｍＬの抗ＣＤ３（ＯＫＴ３）が補充された４００ｍＬの５０／５０培地中でＰＢＭＣとともに培養され得る。Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコは、５％ＣＯ_２中３７℃でインキュベートされ得る。５日目に、２５０ｍＬの上清が除去され、遠心分離ボトルに入れられ、１５００ｒｐｍ（４９１×ｇ）で１０分間遠心分離される。ＴＩＬペレットが、５％ヒトＡＢ血清、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５０ｍＬの新鮮な培地で再懸濁され、元のＧＲＥＸ－１００フラスコに戻し追加され得る。ＴＩＬがＧＲＥＸ－１００フラスコで連続して拡張される場合、１０日目または１１日目に、ＴＩＬは、ＧＲＥＸ－５００などのより大きいフラスコに移され得る。培養１４日目に、細胞が採取され得る。培養１５日目に、細胞が採取され得る。培養１６日目に、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、培地交換は、細胞が代替の成長チャンバに移されるまで行われる。いくつかの実施形態では、培地の３分の２は、使用済み培地の吸引及び等体積の新鮮な培地との交換によって交換される。いくつかの実施形態では、代替の成長チャンバには、以下でより完全に考察されるように、ＧＲＥＸフラスコ及びガス透過性容器が含まれる。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される拡張プロセスで使用される培地は、無血清培地または合成培地である。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び／または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、血清含有培地のロット間の変動に部分的に起因する実験変動を防止及び／または減少させるために使用される。

いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、基礎細胞培地ならびに血清サプリメント及び／または血清代替物を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地には、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ、ＣＴＳ（商標）ＡＩＭ－Ｖ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＴＳ（商標）ＡＩＭ－Ｖ ＳＦＭ、ＬｙｍｐｈｏＯＮＥ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｘｅｎｏ－Ｆｒｅｅ Ｍｅｄｉｕｍ、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、イーグル基礎培地（ＢＭＥ）、ＲＰＭＩ１６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、最小必須培地（αＭＥＭ）、グラスゴー最小必須培地（Ｇ－ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地が含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、血清サプリメントまたは血清代替物には、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｅｒｕｍ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、ＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ、１つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のビタミン、１つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、１つ以上のコラーゲン前駆体、１つ以上の抗生物質、及び１つ以上の微量元素のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－プロリン、Ｌ－ヒドロキシプロリン、Ｌ－セリン、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリン、チアミン、還元型グルタチオン、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ａｇ^＋、Ａｌ^３＋、Ｂａ^２＋、Ｃｄ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｃｒ^３＋、Ｇｅ^４＋、Ｓｅ^４＋、Ｂｒ、Ｔ、Ｍｎ^２＋、Ｐ、Ｓｉ^４＋、Ｖ^５＋、Ｍｏ^６＋、Ｎｉ^２＋、Ｒｂ^＋、Ｓｎ^２＋、及びＺｒ^４＋を含有する化合物からなる群から選択される１つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、Ｌ－グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び／または２－メルカプトエタノールをさらに含む。

いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔは、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ、ＣＴＳ（商標）ＡＩＭ－Ｖ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＳＴ（商標）ＡＩＭ－Ｖ ＳＦＭ、ＬｙｍｐｈｏＯＮＥ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｘｅｎｏ－Ｆｒｅｅ Ｍｅｄｉｕｍ、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、イーグル基礎培地（ＢＭＥ）、ＲＰＭＩ１６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、最小必須培地（αＭＥＭ）、グラスゴー最小必須培地（Ｇ－ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地を含むが、これらに限定されない、従来の成長培地とともに使用される。

いくつかの実施形態では、無血清または合成培地中の総血清代替物濃度（ｖｏｌ％）は、総無血清または合成培地の約１体積％、２体積％、３体積％、４体積％、５体積％、６体積％、７体積％、８体積％、９体積％、１０体積％、１１体積％、１２体積％、１３体積％、１４体積％、１５体積％、１６体積％、１７体積％、１８体積％、１９体積％、または２０体積％である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約３％である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約５％である。いくつかの実施形態では、総血清代替物濃度は、無血清または合成培地の総体積の約１０％である。

いくつかの実施形態では、無血清または合成培地は、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）のいずれの製剤も、本発明において有用である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭは、１ＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍと、２６ｍＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、５５ｍＭの２－メルカプトエタノールとともに、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が補充されている。

いくつかの実施形態では、合成培地は、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）のいずれの製剤も、本発明において有用である。ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭは、１ＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍと、２６ｍＬのＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔとの組み合わせであり、これらは使用前に一緒に混合される。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、５５ｍＭの２－メルカプトエタノールとともに、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）が補充されている。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されている。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されており、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、５５ｍＭの２－メルカプトエタノール、及び２ｍＭのＬ－グルタミンが補充されており、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び５５ｍＭの２－メルカプトエタノールが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び５５ｍＭの２－メルカプトエタノールが補充されており、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び５５ｍＭの２－メルカプトエタノールが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び約２ｍＭのグルタミンが補充されており、約１０００ＩＵ／ｍＬ～約８０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び約２ｍＭのグルタミンが補充されており、約３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭには、約３％のＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（ＳＲ）（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び約２ｍＭのグルタミンが補充されており、約６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をさらに含む。

いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約０．１ｍＭ～約１０ｍＭ、０．５ｍＭ～約９ｍＭ、１ｍＭ～約８ｍＭ、２ｍＭ～約７ｍＭ、３ｍＭ～約６ｍＭ、または４ｍＭ～約５ｍＭの濃度でグルタミン（すなわち、ＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標））が補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約２ｍＭの濃度でグルタミン（すなわち、ＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標））が補充されている。

いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約５ｍＭ～約１５０ｍＭ、１０ｍＭ～約１４０ｍＭ、１５ｍＭ～約１３０ｍＭ、２０ｍＭ～約１２０ｍＭ、２５ｍＭ～約１１０ｍＭ、３０ｍＭ～約１００ｍＭ、３５ｍＭ～約９５ｍＭ、４０ｍＭ～約９０ｍＭ、４５ｍＭ～約８５ｍＭ、５０ｍＭ～約８０ｍＭ、５５ｍＭ～約７５ｍＭ、６０ｍＭ～約７０ｍＭ、または約６５ｍＭの濃度で２－メルカプトエタノールが補充されている。いくつかの実施形態では、無血清培地または合成培地には、約５５ｍＭの濃度で２－メルカプトエタノールが補充されている。

いくつかの実施形態では、国際特許出願公開第ＷＯ１９９８／０３０６７９号及び米国特許出願公開第ＵＳ２００２／００７６７４７Ａ１号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載される合成培地は、本発明において有用である。その刊行物には、無血清真核細胞培養培地が記載されている。無血清真核細胞培養培地には、無血清培養下で細胞の成長を支持することができる無血清サプリメントを補充した基礎細胞培養培地が含まれる。無血清真核細胞培養培地サプリメントは、１つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のビタミン、１つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、１つ以上のコラーゲン前駆体、１つ以上の微量元素、及び１つ以上の抗生物質からなる群から選択される１つ以上の成分を含むか、またはそれらを組み合わせることによって取得される。いくつかの実施形態では、合成培地は、Ｌ－グルタミン、重炭酸ナトリウム、及び／またはベータ－メルカプトエタノールをさらに含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンまたはアルブミン代替物と、１つ以上のアミノ酸、１つ以上のビタミン、１つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、１つ以上の抗酸化剤、１つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、１つ以上のコラーゲン前駆体、及び１つ以上の微量元素からなる群から選択される１つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、合成培地は、アルブミンと、グリシン、Ｌ－ヒスチジン、Ｌ－イソロイシン、Ｌ－メチオニン、Ｌ－フェニルアラニン、Ｌ－プロリン、Ｌ－ヒドロキシプロリン、Ｌ－セリン、Ｌ－スレオニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－チロシン、Ｌ－バリン、チアミン、還元型グルタチオン、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸塩、鉄飽和トランスフェリン、インスリン、ならびに微量元素部分Ａｇ^＋、Ａｌ^３＋、Ｂａ^２＋、Ｃｄ^２＋、Ｃｏ^２＋、Ｃｒ^３＋、Ｇｅ^４＋、Ｓｅ^４＋、Ｂｒ、Ｔ、Ｍｎ^２＋、Ｐ、Ｓｉ^４＋、Ｖ^５＋、Ｍｏ^６＋、Ｎｉ^２＋、Ｒｂ^＋、Ｓｎ^２＋、及びＺｒ^４＋を含有する化合物からなる群から選択される１つ以上の成分と、を含む。いくつかの実施形態では、基礎細胞培地は、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、最小必須培地（ＭＥＭ）、イーグル基礎培地（ＢＭＥ）、ＲＰＭＩ１６４０、Ｆ－１０、Ｆ－１２、最小必須培地（αＭＥＭ）、グラスゴー最小必須培地（Ｇ－ＭＥＭ）、ＲＰＭＩ成長培地、及びイスコフ改変ダルベッコ培地からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、合成培地中のグリシンの濃度は、約５～２００ｍｇ／Ｌの範囲であり、Ｌ－ヒスチジンの濃度は、約５～２５０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－イソロイシンの濃度は、約５～３００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－メチオニンの濃度は、約５～２００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－フェニルアラニンの濃度は、約５～４００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－プロリンの濃度は、約１～１０００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－ヒドロキシプロリンの濃度は、約１～４５ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－セリンの濃度は、約１～２５０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－スレオニンの濃度は、約１０～５００ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－トリプトファンの濃度は、約２～１１０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－チロシンの濃度は、約３～１７５ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－バリンの濃度は、約５～５００ｍｇ／Ｌであり、チアミンの濃度は、約１～２０ｍｇ／Ｌであり、還元型グルタチオンの濃度は、約１～２０ｍｇ／Ｌであり、Ｌ－アスコルビン酸－２－リン酸塩の濃度は、約１～２００ｍｇ／Ｌであり、鉄飽和トランスフェリンの濃度は、約１～５０ｍｇ／Ｌであり、インスリンの濃度は、約１～１００ｍｇ／Ｌであり、亜セレン酸ナトリウムの濃度は、約０．０００００１～０．０００１ｍｇ／Ｌであり、アルブミン（例えば、ＡｌｂｕＭＡＸ（登録商標）Ｉ）の濃度は、約５０００～５０，０００ｍｇ／Ｌである。

いくつかの実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表４の「１×培地中の濃度範囲」という見出しの下の列にリストされた濃度範囲で存在する。他の実施形態では、合成培地中の非微量元素部分成分は、表４の「１×培地の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされた最終濃度で存在する。他の実施形態では、合成培地は、無血清サプリメントを含む基礎細胞培地である。これらの実施形態のうちのいくつかでは、無血清サプリメントは、表４の「サプリメント中の好ましい実施形態」という見出しの下の列にリストされたタイプ及び濃度の非微量部分成分を含む。

いくつかの実施形態では、合成培地の浸透圧は、約２６０～３５０ｍＯｓｍｏｌである。いくつかの実施形態では、浸透圧は、約２８０～３１０ｍＯｓｍｏｌである。いくつかの実施形態では、合成培地には、最大約３．７ｇ／Ｌ、または約２．２ｇ／Ｌの重炭酸ナトリウムが補充されている。合成培地には、Ｌ－グルタミン（最終濃度約２ｍＭ）、１つ以上の抗生物質、非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ、最終濃度約１００μＭ）、２－メルカプトエタノール（最終濃度約１００μＭ）がさらに補充されていてもよい。

いくつかの実施形態では、Ｓｍｉｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１５，４（１），ｅ３１（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）は、本発明において有用である。簡潔には、ＲＰＭＩまたはＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒを基礎細胞培地として使用し、０、２％、５％、または１０％のいずれかのＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔを補充した。

ある実施形態では、第１及び／または第２のガス透過性容器内の細胞培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。ある実施形態では、第１及び／または第２のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ－メルカプトエタノール（ＢＭＥまたはβＭＥ、２－メルカプトエタノールとしても知られる、ＣＡＳ６０－２４－２）を欠いている。

ある実施形態では、急速な第２の拡張（ＲＥＰと称される拡張を含む）が行われ、優れた腫瘍反応性のためにＴＩＬが選択されるステップをさらに含む。当該技術分野で知られている任意の選択方法が使用され得る。例えば、米国特許出願公開第２０１６／００１００５８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている方法が、優れた腫瘍反応性のためのＴＩＬの選択に使用され得る。

任意選択で、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準のアッセイを使用して、急速な第２の拡張（ＲＥＰ拡張と称される拡張を含む）後に行われ得る。例えば、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするトリパンブルー排除アッセイが、バルクＴＩＬの試料上で行われ得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ試料は、Ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２自動セルカウンター（Ｎｅｘｃｅｌｏｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌａｗｒｅｎｃｅ，ＭＡ）を使用して計数され、生存率が決定され得る。いくつかの実施形態では、生存率は、標準のＣｅｌｌｏｍｅｔｅｒ Ｋ２ Ｉｍａｇｅ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｅｒプロトコルに従って決定される。

Ｔリンパ球及びＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント：Ｖ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（接合）、及びＣ（一定）は、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるＴＩＬを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第２の拡張において取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び／またはＴ細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、Ｔ細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体のうちの１つにある。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及び／またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）の発現が増加する。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張培養培地（例えば、ＣＭ２または第２の細胞培養培地とも称される）は、以下でさらに詳細に論じられるように、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、ならびに抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張培養培地（例えば、ＣＭ２または第２の細胞培養培地とも称される）は、以下でさらに詳細に論じられるように、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｕｇ／フラスコのＯＫＴ－３、ならびに７．５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張培養培地（例えば、ＣＭ２または第２の細胞培養培地とも称される）は、以下でさらに詳細に論じられるように、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、ならびに抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）を含む。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張培養培地（例えば、ＣＭ２または第２の細胞培養培地とも称される）は、以下でさらに詳細に論じられるように、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２、３０ｕｇ／フラスコのＯＫＴ－３、ならびに５×１０^８の抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）を含む。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）によるステップＤは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが容器として用いられる。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１００またはＧ－ＲＥＸ－５００である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、Ｇ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、Ｇ－ＲＥＸ－５００である。

１．フィーダー細胞及び抗原提示細胞
実施形態では、本明細書に記載される急速な第２の拡張手順（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＤに記載されるような拡張、ならびにＲＥＰと称されるものを含む）は、ＲＥＰ ＴＩＬ拡張中及び／または急速な第２の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、健康な献血者由来の標準の全血単位から得られる末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、実施例に記載されるように、ＲＥＰ手順で使用され、これは、照射された同種異系ＰＢＭＣの複製無能力を評価するための例示的なプロトコルを提供する。

いくつかの実施形態では、７日目または１４日目の総生細胞数が、ＲＥＰの０日目及び／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された初期の生細胞数よりも少ない場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。

いくつかの実施形態では、７日目及び１４日目のＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された総生細胞数が、ＲＥＰの０日目及び／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。

いくつかの実施形態では、７日目及び１４日目のＯＫＴ３及びＩＬ－２の存在下で培養された総生細胞数が、ＲＥＰの０日目及び／または第２の拡張の０日目（すなわち、第２の拡張の開始日）に培養された初期の生細胞数から増加しなかった場合、ＰＢＭＣは、複製能力がないとみなされ、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順での使用が認められる。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び１０００～６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２０００～５０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２０００～４０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び２５００～３５００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、３０～６０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養される。

いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、ＰＢＭＣである。いくつかの実施形態では、抗原提示フィーダー細胞は、人工抗原提示フィーダー細胞である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、約１：１０、約１：２５、約１：５０、約１：１００、約１：１２５、約１：１５０、約１：１７５、約１：２００、約１：２２５、約１：２５０、約１：２７５、約１：３００、約１：３２５、約１：３５０、約１：３７５、約１：４００、または約１：５００である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、１：５０～１：３００である。ある実施形態では、第２の拡張におけるＴＩＬの抗原提示フィーダー細胞に対する比率は、１：１００～１：２００である。

ある実施形態では、本明細書に記載の急速な第２の拡張手順は、約５×１０^８フィーダー細胞：約１００×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。ある実施形態では、本明細書に記載の急速な第２の拡張手順は、約７．５×１０^８フィーダー細胞：約１００×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。別の実施形態では、本明細書に記載の急速な第２の拡張手順は、約５×１０^８フィーダー細胞：約５０×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。別の実施形態では、本明細書に記載の急速な第２の拡張手順は、約７．５×１０^８フィーダー細胞：約５０×１０^６ＴＩＬの比率を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約５×１０^８フィーダー細胞：約２５×１０^６ＴＩＬを必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載の第２の拡張手順は、約７．５×１０^８フィーダー細胞：約２５×１０^６ＴＩＬを必要とする。さらに別の実施形態では、急速な第２の拡張は、急速な第２の拡張の２倍の数のフィーダー細胞を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張が約２．５×１０^８フィーダー細胞を必要とする場合、急速な第２の拡張は、約５×１０^８フィーダー細胞を必要とする。さらに別の実施形態では、本明細書に記載のプライミングによる第１の拡張が約２．５×１０^８フィーダー細胞を必要とする場合、急速な第２の拡張は、約７．５×１０^８フィーダー細胞を必要とする。さらに他の実施形態では、急速な第２の拡張は、プライミングによる第１の拡張の２倍（ｔｗｏ ｔｉｍｅｓ）（２．０倍（２．０Ｘ））、２．５倍、３．０倍、３．５倍、または４．０倍の数のフィーダー細胞を必要とする。

ある実施形態では、本明細書に記載の急速な第２の拡張手順は、急速な第２の拡張中に過剰のフィーダー細胞を必要とする。多くの実施形態では、フィーダー細胞は、同種異系の健康な献血者由来の標準の全血単位から取得される末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ勾配分離などの標準の方法を使用して取得される。ある実施形態では、人工抗原提示（ａＡＰＣ）細胞がＰＢＭＣの代わりに使用される。いくつかの実施形態では、ＰＢＭＣは、プライミングによる第１の拡張に追加されたＰＢＭＣの２倍の濃度で、急速な第２の拡張に追加される。

一般に、同種異系ＰＢＭＣは、照射または熱処理のいずれかによって不活性化され、図及び実施例に記載される例示的な手順を含む、本明細書に記載のＴＩＬ拡張手順で使用される。

ある実施形態では、人工抗原提示細胞は、ＰＢＭＣの代替物として、またはＰＢＭＣと組み合わせて、急速な第２の拡張において使用される。

２．サイトカイン及び他の添加物
本明細書に記載の急速な第２の拡張方法は、一般に、当該技術分野で知られているように、高用量のサイトカイン、特にＩＬ－２を含む培養培地を使用する。

あるいは、ＴＩＬの急速な第２の拡張のためにサイトカインの組み合わせを使用することは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１７／０１０７４９０Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＩＬ－２、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１のうちの２つ以上の組み合わせを用いて追加として可能である。したがって、可能な組み合わせには、ＩＬ－２及びＩＬ－１５、ＩＬ－２及びＩＬ－２１、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１、ならびにＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１が含まれ、後者は多くの実施形態で特に有用である。サイトカインの組み合わせの使用は、リンパ球、特にそこに記載されているようにＴ細胞の生成に特に有利に働く。

ある実施形態では、ステップＤはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＫＴ－３抗体またはムロモナブの、培養培地への添加を含み得る。ある実施形態では、ステップＤはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、４－１ＢＢアゴニストの、培養培地への添加を含んでもよい。ある実施形態では、ステップＤはまた、本明細書の他の箇所に記載されるように、ＯＸ－４０アゴニストの、培養培地への添加を含み得る。加えて、チアゾリジンジオン化合物などの増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）－ガンマアゴニストを含む、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマコアクチベーターＩ－アルファアゴニストなどの添加剤は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３０７７９６Ａ１号（この開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ステップＤ中の培養培地で使用されてもよい。

Ｅ．ステップＥ：ＴＩＬを採取する
急速な第２の拡張ステップ後、細胞が採取され得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供されるように、１、２、３、４、またはそれ以上の拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供されるように、２つの拡張ステップ後に採取される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、２つの拡張ステップ、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供されるように、１回のプライミングによる第１の拡張及び１回の急速な第２の拡張の後に採取される。

ＴＩＬは、任意の適切な滅菌様式で、例えば、遠心分離によって採取され得る。ＴＩＬを採取するための方法は、当該技術分野で周知であり、任意のかかる既知の方法が本プロセスとともに用いられ得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、自動化システムを使用して採取される。

細胞採取機及び／または細胞処理システムは、例えば、Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ、Ｔｏｍｔｅｃ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、及びＩｎｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃを含む、様々な供給源から市販されている。任意の細胞ベースの採取機が本方法とともに用いられ得る。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び／または細胞処理システムは、膜ベースの細胞採取機である。いくつかの実施形態では、細胞採取は、ＬＯＶＯシステム（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉによって製造されたもの）などの細胞処理システムによるものである。「ＬＯＶＯ細胞処理システム」という用語は、細胞を含む溶液を、滅菌及び／または閉鎖系環境で回転膜または回転フィルターなどの膜またはフィルターをとおしてポンプ輸送し、連続フローを可能にし、細胞を処理して、ペレット化せずに上清または細胞培養培地を除去する、任意のベンダーによって製造された任意の機器または装置も指す。いくつかの実施形態では、細胞採取機及び／または細胞処理システムは、滅菌閉鎖系内で、細胞分離、洗浄、流体交換、濃縮、及び／または他の細胞処理ステップを行うことができる。

いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）によるステップＤは、閉鎖系バイオリアクター内で行われる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるように、閉鎖系がＴＩＬ拡張のために用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが用いられる。いくつかの実施形態では、バイオリアクターが容器として用いられる。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１００またはＧ－ＲＥＸ－５００である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、Ｇ－ＲＥＸ－１００である。いくつかの実施形態では、用いられるバイオリアクターは、Ｇ－ＲＥＸ－５００である。

いくつかの実施形態では、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）によるステップＥは、本明細書に記載のプロセスに従って行われる。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、閉鎖系の無菌性及び閉鎖性を維持するために、滅菌条件下でシリンジを介してアクセスされる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような閉鎖系が用いられる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、本明細書に記載の方法に従って採取される。いくつかの実施形態では、１４～１６日目のＴＩＬが本明細書に記載の方法を使用して採取される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、本明細書に記載の方法を使用して１４日目に採取される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、本明細書に記載の方法を使用して１５日目に採取される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、本明細書に記載の方法を使用して１６日目に採取される。

Ｆ．ステップＦ：最終製剤及び輸液容器への移行
図８（特に、例えば図８Ｂ）に例示的な順序で提供され、かつ上及び本明細書で詳細に概説されるステップＡ～Ｅが完了した後、細胞は、注入バッグまたは無菌バイアルなどの患者への投与に使用するために容器に移される。いくつかの実施形態では、治療的に十分な数のＴＩＬが上記の拡張方法を使用して得られると、それらは、患者への投与に使用するために容器に移される。

ある実施形態では、本開示の方法を使用して拡張されたＴＩＬは、薬学的組成物として患者に投与される。ある実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のＴＩＬ懸濁液である。本明細書に開示されるように拡張されたＴＩＬは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ３０～６０分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。

Ｖ．さらなるＧｅｎ２、Ｇｅｎ３、及び他のＴＩＬ製造プロセスの実施形態
このセクションは、ＣＣＲ、ケモカイン受容体、及び本発明の他の実施形態とともに使用され得るＧｅｎ２、Ｇｅｎ３、及び他のＴＩＬ製造プロセスの代替的な実施形態を説明する。

Ａ．ＰＢＭＣフィーダー細胞比
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用される培地（例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）を参照）は、抗ＣＤ３抗体、例えばＯＫＴ－３を含む。ＩＬ－２と組み合わせた抗ＣＤ３抗体は、ＴＩＬ集団におけるＴ細胞活性化及び細胞分裂を誘導する。この効果は、全長抗体、ならびにＦａｂ及びＦ（ａｂ′）２断片で見ることができ、前者が一般に好まれ、例えば、Ｔｓｏｕｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８５，１３５，１７１９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

ある実施形態では、ＰＢＭＣフィーダー層の数は、以下のように計算される。

Ａ．Ｔ細胞の体積（１０μｍ直径）：Ｖ＝（４／３）πｒ^３＝５２３．６μＭ^３

Ｂ．４０μｍ（４細胞）の高さを有するＧ－Ｒｅｘ１００（Ｍ）のカラム：Ｖ＝（４／３）πｒ^３＝４×１０^１２μｍ^３

Ｃ．カラムＢを充填するために必要な細胞数：４×１０^１２μｍ^３／５２３．６μｍ^３＝７．６×１０^８μｍ^３＊０．６４＝４．８６×１０^８

Ｄ．四次元空間で最適に活性化され得る細胞の数：４．８６×１０^８／２４＝２０．２５×１０^６

Ｅ．Ｇ－ＲＥＸ５００に外挿されるフィーダー及びＴＩＬの数：ＴＩＬ：１００×１０^６及びフィーダー：２．５×１０^９

この計算では、１００ｃｍ^２の底部を有するシリンジ中でのＴＩＬの活性化のために二十面体形状を提供するのに必要な単核細胞の数の近似値が使用される。この計算は、Ｊｉｎ，ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１２，３５，２８３－２９２に記載されているように、ＮＣＩ実験データを密接に反映するＴ細胞の閾値活性化について、約５×１０^８の実験結果を導き出す。（Ｃ）では、乗数（０．６４）は、Ｊａｅｇｅｒ ａｎｄ Ｎａｇｅｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９２，２５５，１５２３－３によって計算された等価球のランダム充填密度である。（Ｄ）において、除数２４は、Ｍｕｓｉｎ，Ｒｕｓｓ．Ｍａｔｈ．Ｓｕｒｖ．，２００３，５８，７９４－７９５に記載される、四次元空間内の同様のオブジェクトと接触する可能性のある等価球の数または「ニュートン数」である。

ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給される抗原提示フィーダー細胞の数は、急速な第２の拡張中に外因的に供給される抗原提示フィーダー細胞の数のおよそ半分である。ある特定の実施形態では、この方法は、急速な第２の拡張の細胞培養培地と比較しておよそ５０％少ない抗原提示細胞を含む細胞培養培地中でプライミングによる第１の拡張を行うことを含む。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給される抗原提示フィーダー細胞（ＡＰＣ）の数は、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数よりも多い。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２０：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約１０：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約９：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約８：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約７：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約６：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．９：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．８：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．７：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．６：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．２：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．１：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約１０：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．９：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．８：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．７：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．６：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．２：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数と、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．１：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数の、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数に対する比率は、正確にまたは約２：１である。

別の実施形態では、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数の、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数に対する比率は、正確にまたは約１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、２：１、２．１：１、２．２：１、２．３：１、２．４：１、２．５：１、２．６：１、２．７：１、２．８：１、２．９：１、３：１、３．１：１、３．２：１、３．３：１、３．４：１、３．５：１、３．６：１、３．７：１、３．８：１、３．９：１、４：１、４．１：１、４．２：１、４．３：１、４．４：１、４．５：１、４．６：１、４．７：１、４．８：１、４．９：１、または５：１である。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約１×１０^８、１．１×１０^８、１．２×１０^８、１．３×１０^８、１．４×１０^８、１．５×１０^８、１．６×１０^８、１．７×１０^８、１．８×１０^８、１．９×１０^８、２×１０^８、２．１×１０^８、２．２×１０^８、２．３×１０^８、２．４×１０^８、２．５×１０^８、２．６×１０^８、２．７×１０^８、２．８×１０^８、２．９×１０^８、３×１０^８、３．１×１０^８、３．２×１０^８、３．３×１０^８、３．４×１０^８、または３．５×１０^８ＡＰＣであり、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約３．５×１０^８、３．６×１０^８、３．７×１０^８、３．８×１０^８、３．９×１０^８、４×１０^８、４．１×１０^８、４．２×１０^８、４．３×１０^８、４．４×１０^８、４．５×１０^８、４．６×１０^８、４．７×１０^８、４．８×１０^８、４．９×１０^８、５×１０^８、５．１×１０^８、５．２×１０^８、５．３×１０^８、５．４×１０^８、５．５×１０^８、５．６×１０^８、５．７×１０^８、５．８×１０^８、５．９×１０^８、６×１０^８、６．１×１０^８、６．２×１０^８、６．３×１０^８、６．４×１０^８、６．５×１０^８、６．６×１０^８、６．７×１０^８、６．８×１０^８、６．９×１０^８、７×１０^８、７．１×１０^８、７．２×１０^８、７．３×１０^８、７．４×１０^８、７．５×１０^８、７．６×１０^８、７．７×１０^８、７．８×１０^８、７．９×１０^８、８×１０^８、８．１×１０^８、８．２×１０^８、８．３×１０^８、８．４×１０^８、８．５×１０^８、８．６×１０^８、８．７×１０^８、８．８×１０^８、８．９×１０^８、９×１０^８、９．１×１０^８、９．２×１０^８、９．３×１０^８、９．４×１０^８、９．５×１０^８、９．６×１０^８、９．７×１０^８、９．８×１０^８、９．９×１０^８、または１×１０^９ＡＰＣである。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約１．５×１０^８ＡＰＣ～正確にまたは約３×１０^８ＡＰＣの範囲から選択され、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約４×１０^８ＡＰＣ～正確にまたは約７．５×１０^８ＡＰＣの範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約２×１０^８ＡＰＣ～正確にまたは約２．５×１０^８ＡＰＣの範囲から選択され、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約４．５×１０^８ＡＰＣ～正確にまたは約５．５×１０^８ＡＰＣの範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約２．５×１０^８ＡＰＣであり、急速な第２の拡張中に外因的に供給されるＡＰＣの数は、正確にまたは約５×１０^８ＡＰＣである。

ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目に添加されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、プライミングによる第１の拡張の７日目（例えば、この方法の７日目）に添加されるＰＢＭＣの数のおよそ半分である。ある特定の実施形態では、方法は、プライミングによる第１の拡張の０日目に抗原提示細胞を第１のＴＩＬ集団に追加することと、７日目に抗原提示細胞を第２のＴＩＬ集団に追加することとを含み、０日目に追加される抗原提示細胞の数は、プライミングによる第１の拡張の７日目（例えば、方法の７日目）に追加される抗原提示細胞の数のおよそ５０％である。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＰＢＭＣの数よりも多い。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、約１．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約４．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約１．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約３×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約１．０×１０^６、１．１×１０^６、１．２×１０^６、１．３×１０^６、１．４×１０^６、１．５×１０^６、１．６×１０^６、１．７×１０^６、１．８×１０^６、１．９×１０^６、２×１０^６、２．１×１０^６、２．２×１０^６、２．３×１０^６、２．４×１０^６、２．５×１０^６、２．６×１０^６、２．７×１０^６、２．８×１０^６、２．９×１０^６、３×１０^６、３．１×１０^６、３．２×１０^６、３．３×１０^６、３．４×１０^６、３．５×１０^６、３．６×１０^６、３．７×１０^６、３．８×１０^６、３．９×１０^６、４×１０^６、４．１×１０^６、４．２×１０^６、４．３×１０^６、４．４×１０^６、または４．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約７．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約６．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約４．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約５．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約４．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２、２．６×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２、２．７×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２、２．８×１０^６、２．９×１０^６、３×１０^６、３．１×１０^６、３．２×１０^６、３．３×１０^６、３．４×１０^６、３．５×１０^６、３．６×１０^６、３．７×１０^６、３．８×１０^６、３．９×１０^６、４×１０^６、４．１×１０^６、４．２×１０^６、４．３×１０^６、４．４×１０^６、４．５×１０^６、４．６×１０^６、４．７×１０^６、４．８×１０^６、４．９×１０^６、５×１０^６、５．１×１０^６、５．２×１０^６、５．３×１０^６、５．４×１０^６、５．５×１０^６、５．６×１０^６、５．７×１０^６、５．８×１０^６、５．９×１０^６、６×１０^６、６．１×１０^６、６．２×１０^６、６．３×１０^６、６．４×１０^６、６．５×１０^６、６．６×１０^６、６．７×１０^６、６．８×１０^６、６．９×１０^６、７×１０^６、７．１×１０^６、７．２×１０^６、７．３×１０^６、７．４×１０^６、または７．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約１．０×１０^６、１．１×１０^６、１．２×１０^６、１．３×１０^６、１．４×１０^６、１．５×１０^６、１．６×１０^６、１．７×１０^６、１．８×１０^６、１．９×１０^６、２×１０^６、２．１×１０^６、２．２×１０^６、２．３×１０^６、２．４×１０^６、２．５×１０^６、２．６×１０^６、２．７×１０^６、２．８×１０^６、２．９×１０^６、３×１０^６、３．１×１０^６、３．２×１０^６、３．３×１０^６、３．４×１０^６、３．５×１０^６、３．６×１０^６、３．７×１０^６、３．８×１０^６、３．９×１０^６、４×１０^６、４．１×１０^６、４．２×１０^６、４．３×１０^６、４．４×１０^６、または４．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で培養フラスコに播種され、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２、２．６×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２、２．７×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２、２．８×１０^６、２．９×１０^６、３×１０^６、３．１×１０^６、３．２×１０^６、３．３×１０^６、３．４×１０^６、３．５×１０^６、３．６×１０^６、３．７×１０^６、３．８×１０^６、３．９×１０^６、４×１０^６、４．１×１０^６、４．２×１０^６、４．３×１０^６、４．４×１０^６、４．５×１０^６、４．６×１０^６、４．７×１０^６、４．８×１０^６、４．９×１０^６、５×１０^６、５．１×１０^６、５．２×１０^６、５．３×１０^６、５．４×１０^６、５．５×１０^６、５．６×１０^６、５．７×１０^６、５．８×１０^６、５．９×１０^６、６×１０^６、６．１×１０^６、６．２×１０^６、６．３×１０^６、６．４×１０^６、６．５×１０^６、６．６×１０^６、６．７×１０^６、６．８×１０^６、６．９×１０^６、７×１０^６、７．１×１０^６、７．２×１０^６、７．３×１０^６、７．４×１０^６、または７．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約１．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約４．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種され、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約７．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約１．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種され、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約６×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約３×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種され、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約４×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～正確にまたは約５．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約２×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で培養フラスコに播種され、急速な第２の拡張において外因的に供給されるＡＰＣは、正確にまたは約４×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で培養フラスコに播種される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＰＢＭＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２０：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＰＢＭＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約１０：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＰＢＭＣの数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約９：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約８：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約７：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約６：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．９：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．８：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．７：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．６：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．２：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２．１：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約１．１：１～正確にまたは約２：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約１０：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．９：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．８：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．７：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．６：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．５：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．４：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．３：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．２：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数と、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数との比率は、正確にまたは約２：１～正確にまたは約２．１：１の範囲から選択される。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数の、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数に対する比率は、正確にまたは約２：１である。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数の、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数に対する比率は、正確にまたは約１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、２：１、２．１：１、２．２：１、２．３：１、２．４：１、２．５：１、２．６：１、２．７：１、２．８：１、２．９：１、３：１、３．１：１、３．２：１、３．３：１、３．４：１、３．５：１、３．６：１、３．７：１、３．８：１、３．９：１、４：１、４．１：１、４．２：１、４．３：１、４．４：１、４．５：１、４．６：１、４．７：１、４．８：１、４．９：１、または５：１である。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約１×１０^８、１．１×１０^８、１．２×１０^８、１．３×１０^８、１．４×１０^８、１．５×１０^８、１．６×１０^８、１．７×１０^８、１．８×１０^８、１．９×１０^８、２×１０^８、２．１×１０^８、２．２×１０^８、２．３×１０^８、２．４×１０^８、２．５×１０^８、２．６×１０^８、２．７×１０^８、２．８×１０^８、２．９×１０^８、３×１０^８、３．１×１０^８、３．２×１０^８、３．３×１０^８、３．４×１０^８、または３．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）であり、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約３．５×１０^８、３．６×１０^８、３．７×１０^８、３．８×１０^８、３．９×１０^８、４×１０^８、４．１×１０^８、４．２×１０^８、４．３×１０^８、４．４×１０^８、４．５×１０^８、４．６×１０^８、４．７×１０^８、４．８×１０^８、４．９×１０^８、５×１０^８、５．１×１０^８、５．２×１０^８、５．３×１０^８、５．４×１０^８、５．５×１０^８、５．６×１０^８、５．７×１０^８、５．８×１０^８、５．９×１０^８、６×１０^８、６．１×１０^８、６．２×１０^８、６．３×１０^８、６．４×１０^８、６．５×１０^８、６．６×１０^８、６．７×１０^８、６．８×１０^８、６．９×１０^８、７×１０^８、７．１×１０^８、７．２×１０^８、７．３×１０^８、７．４×１０^８、７．５×１０^８、７．６×１０^８、７．７×１０^８、７．８×１０^８、７．９×１０^８、８×１０^８、８．１×１０^８、８．２×１０^８、８．３×１０^８、８．４×１０^８、８．５×１０^８、８．６×１０^８、８．７×１０^８、８．８×１０^８、８．９×１０^８、９×１０^８、９．１×１０^８、９．２×１０^８、９．３×１０^８、９．４×１０^８、９．５×１０^８、９．６×１０^８、９．７×１０^８、９．８×１０^８、９．９×１０^８、または１×１０^９ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）である。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約１×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）～正確にまたは約３．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の範囲から選択され、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約３．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）～正確にまたは約１×１０^９ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約１．５×１０^８ＡＰＣ～正確にまたは約３×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の範囲から選択され、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約４×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）～正確にまたは約７．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約２×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）～正確にまたは約２．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の範囲から選択され、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約４．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）～正確にまたは約５．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約２．５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）であり、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の数は、正確にまたは約５×１０^８ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）である。

ある実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目に添加されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）層の数は、急速な第２の拡張の７日目に添加されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）層の数のおよそ半分である。ある特定の実施形態では、方法は、プライミングによる第１の拡張の０日目に抗原提示細胞層を第１のＴＩＬ集団に追加することと、７日目に抗原提示細胞を第２のＴＩＬ集団に追加することとを含み、０日目に追加される抗原提示細胞層の数は、７日目に追加される抗原提示細胞層の数のおよそ５０％である。

別の実施形態では、急速な第２の拡張の７日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）層の数は、プライミングによる第１の拡張の０日目に外因的に供給されるＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）層の数よりも多い。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約２細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約４細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約１細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、第３の急速拡張の７日目は、正確にまたは約２細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約１．５細胞層～正確にまたは約２．５細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約３細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約１細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約２細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約１細胞層～正確にまたは約２細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約３細胞層～正確にまたは約１０細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約２細胞層～正確にまたは約３細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約４細胞層～正確にまたは約８細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約２細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約４細胞層～正確にまたは約８細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、正確にまたは約１、２、または３細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、正確にまたは約３、４、５、６、７、８、９、または１０細胞層の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こる。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：１０の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：８の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：７の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：６の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：５の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：４の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：３の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１～約１：２の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．２～約１：８の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．３～約１：７の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．４～約１：６の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．５～約１：５の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．６～約１：４の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．７～約１：３．５の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．８～約１：３の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．９～約１：２．５の範囲から選択される。

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数の、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に対する比は、正確にまたは約１：２．

別の実施形態では、プライミングによる第１の拡張の０日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数に等しい第１の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、急速な第２の拡張の７日目は、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数に等しい第２の平均厚さを有する層状ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の存在下で起こり、ＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第１の層の数とＡＰＣ（例えば、ＰＢＭＣを含む）の第２の層の数との比率は、約１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．１、１：２．２、１：２．３、１：２．４、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、１：３、１：３．１、１：３．２、１：３．３、１：３．４、１：３．５、１：３．６、１：３．７、１：３．８、１：３．９、１：４、１：４．１、１：４．２、１：４．３、１：４．４、１：４．５、１：４．６、１：４．７、１：４．８、１：４．９、１：５、１：５．１、１：５．２、１：５．３、１：５．４、１：５．５、１：５．６、１：５．７、１：５．８、１：５．９、１：６、１：６．１、１：６．２、１：６．３、１：６．４、１：６．５、１：６．６、１：６．７、１：６．８、１：６．９、１：７、１：７．１、１：７．２、１：７．３、１：７．４、１：７．５、１：７．６、１：７．７、１：７．８、１：７．９、１：８、１：８．１、１：８．２、１：８．３、１：８．４、１：８．５、１：８．６、１：８．７、１：８．８、１：８．９、１：９、１：９．１、１：９．２、１：９．３、１：９．４、１：９．５、１：９．６、１：９．７、１：９．８、１：９．９、または１：１０から選択される。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張におけるＡＰＣの数は、約１．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約４．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択され、急速な第２の拡張におけるＡＰＣの数は、約２．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約７．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張におけるＡＰＣの数は、約１．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択され、急速な第２の拡張におけるＡＰＣの数は、約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約６．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される。

いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張におけるＡＰＣの数は、約２．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約３．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択され、急速な第２の拡張におけるＡＰＣの数は、約４．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約５．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される。

Ｂ．任意選択の細胞培地成分
１．抗ＣＤ３抗体
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の拡張方法で使用される培養培地（ＲＥＰと称されるものを含む、例えば、図１及び８（特に、例えば図８Ｂ）を参照）は、抗ＣＤ３抗体を含む。ＩＬ－２と組み合わせた抗ＣＤ３抗体は、ＴＩＬ集団におけるＴ細胞活性化及び細胞分裂を誘導する。この効果は、全長抗体、ならびにＦａｂ及びＦ（ａｂ′）２断片で見ることができ、前者が一般に好まれ、例えば、Ｔｓｏｕｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８５，１３５，１７１９（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

当業者によって理解されるように、マウス、ヒト、霊長類、ラット、及びイヌ抗体を含むが、これらに限定されない、様々な哺乳動物由来の抗ヒトＣＤ３ポリクローナル及びモノクローナル抗体を含む、本発明での使用が見出されるいくつかの好適な抗ヒトＣＤ３抗体が存在する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体ムロモナブであるＯＫＴ３が使用される（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪまたはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡから市販されている）。いくつかの実施形態では、ＯＫＴ－３などの抗ＣＤ３抗体は、腫瘍断片または消化物が第１のガス透過性フラスコ、バッグ、または他の容器の培地に添加された直後に、（Ｇｅｎ３方法の）ＲＥＰ前段階または初期ＲＥＰ段階中に添加される。

当業者によって理解されるように、マウス、ヒト、霊長類、ラット、及びイヌ抗体を含むが、これらに限定されない、様々な哺乳動物由来の抗ヒトＣＤ３ポリクローナル及びモノクローナル抗体を含む、本発明での使用が見出されるいくつかの好適な抗ヒトＣＤ３抗体が存在する。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体ムロモナブであるＯＫＴ３が使用される（Ｏｒｔｈｏ－ＭｃＮｅｉｌ，Ｒａｒｉｔａｎ，ＮＪまたはＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡから市販されている）。

２．４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニスト
ある実施形態では、第１の拡張及び／または急速な第２の拡張の細胞培養培地は、ＴＮＦＲＳＦアゴニストを含む。ある実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）アゴニストである。４－１ＢＢアゴニストは、当該技術分野で知られている任意の４－１ＢＢ結合分子であり得る。４－１ＢＢ結合分子は、ヒトまたは哺乳動物４－１ＢＢに結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。４－１ＢＢアゴニストまたは４－１ＢＢ結合分子は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。４－１ＢＢアゴニストまたは４－１ＢＢ結合分子は、重鎖及び軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語は、抗体（全長抗体を含む）、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、及び抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ′）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびに４－１ＢＢに結合する抗体の操作された形態、例えば、ｓｃＦｖ分子も含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、完全ヒト抗体である抗原結合タンパク質である。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物に使用するための４－１ＢＢアゴニストには、抗４－１ＢＢ抗体、ヒト抗４－１ＢＢ抗体、マウス抗４－１ＢＢ抗体、哺乳動物抗４－１ＢＢ抗体、モノクローナル抗４－１ＢＢ抗体、ポリクローナル抗４－１ＢＢ抗体、キメラ抗４－１ＢＢ抗体、抗４－１ＢＢアドネクチン、抗４－１ＢＢドメイン抗体、一本鎖抗４－１ＢＢ断片、重鎖抗４－１ＢＢ断片、軽鎖抗４－１ＢＢ断片、抗４－１ＢＢ融合タンパク質、及びそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、またはバイオシミラーが含まれる。アゴニスト抗４－１ＢＢ抗体は、強力な免疫応答を誘導することが知られている。Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，ＰＬＯＳ Ｏｎｅ ２０１３，８，ｅ６９６７７。好ましい実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、アゴニスト、抗４－１ＢＢヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体（すなわち、単一の細胞株に由来する抗体）である。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ＥＵ－１０１（Ｅｕｔｉｌｅｘ Ｃｏ．Ｌｔｄ．）、ウトミルマブ、もしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、もしくはバイオシミラーである。好ましい実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ウトミルマブもしくはウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、もしくはバイオシミラーである。

好ましい実施形態では、４－１ＢＢアゴニストまたは４－１ＢＢ結合分子は、融合タンパク質である場合もある。好ましい実施形態では、三量体または六量体４－１ＢＢアゴニスト（３つまたは６つのリガンド結合ドメインを有する）などの多量体４－１ＢＢアゴニストは、典型的に２つのリガンド結合ドメインを有するアゴニストモノクローナル抗体と比較して、優れた受容体（４－１ＢＢＬ）クラスター化及び内部細胞シグナル伝達複合体形成を誘導し得る。３つのＴＮＦＲＳＦ結合ドメイン及びＩｇＧ１－Ｆｃを含み、かつ任意選択でこれらの融合タンパク質のうちの２つ以上をさらに結合する三量体（三価）または六量体（もしくは六価）またはそれ以上の融合タンパク質は、例えば、Ｇｉｅｆｆｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１３，１２，２７３５－４７に記載されている。

アゴニスト４－１ＢＢ抗体及び融合タンパク質は、強い免疫応答を誘導することが知られている。好ましい実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、毒性を低減するのに十分な様式で４－１ＢＢ抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、抗体依存性細胞毒性（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）、例えば、ＮＫ細胞細胞傷害性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を抑制するアゴニスト４－１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を抑制するアゴニスト４－１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を抑制するアゴニスト４－１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、Ｆｃ領域機能性を抑制するアゴニスト４－１ＢＢモノクローナル抗体または融合タンパク質である。

いくつかの実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、高い親和性及びアゴニスト活性でヒト４－１ＢＢ（配列番号４０）に結合することを特徴とする。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ヒト４－１ＢＢ（配列番号４０）に結合する結合分子である。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、マウス４－１ＢＢ（配列番号４１）に結合する結合分子である。４－１ＢＢアゴニストまたは結合分子が結合する４－１ＢＢ抗原のアミノ酸配列を表５に要約する。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約１００ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約９０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約８０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約７０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約６０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約５０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約４０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、またはヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約３０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する４－１ＢＢアゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約７．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約７．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約８×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約８．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約９×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約９．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、またはヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約１×１０^６１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する４－１ＢＢアゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．１×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．２×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．３×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．４×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．５×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．６×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．７×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．８×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２．９×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、またはヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約３×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、４－１ＢＢアゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス及び方法は、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約９ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約８ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約７ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約６ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約５ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約４ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約３ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約２ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウス４－１ＢＢに約１ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、４－１ＢＢアゴニストを含む。

好ましい実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ＰＦ－０５０８２５６６もしくはＭＯＲ－７４８０としても知られるウトミルマブ、またはその断片、誘導体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。ウトミルマブは、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．から入手可能である。ウトミルマブは、免疫グロブリンＧ２－ガンマ、抗［ホモサピエンスＴＮＦＲＳＦ９（腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーメンバー９、４－１ＢＢ、Ｔ細胞抗原ＩＬＡ、ＣＤ１３７）］、ホモサピエンス（完全ヒト）モノクローナル抗体である。ウトミルマブのアミノ酸配列を表６に示す。ウトミルマブは、Ａｓｎ５９及びＡｓｎ２９２にグリコシル化部位、２２－９６位（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）、１４３－１９９位（Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌ）、２５６－３１６位（Ｃ_Ｈ２）、及び３６２－４２０位（Ｃ_Ｈ３）に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、２２′－８７′位（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）及び１３６′－１９５′位（Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌ）に軽鎖鎖内ジスルフィド架橋、ＩｇＧ２Ａアイソフォーム２１８－２１８、２１９－２１９、２２２－２２２、及び２２５－２２５位、ＩｇＧ２Ａ／Ｂアイソフォーム２１８－１３０、２１９－２１９、２２２－２２２、及び２２５－２２５位、ならびにＩｇＧ２Ｂアイソフォーム２１９－１３０（２）、２２２－２２２、及び２２５－２２５位に鎖間重鎖－重鎖ジスルフィド架橋、ならびにＩｇＧ２Ａアイソフォーム１３０－２１３′（２）位、ＩｇＧ２Ａ／Ｂアイソフォーム２１８－２１３′位、及び１３０－２１３′位、ならびにＩｇＧ２Ｂアイソフォーム２１８－２１３′（２）位に鎖間重鎖－軽鎖ジスルフィド架橋を含む。ウトミルマブならびにそのバリアント及び断片の調製及び特性は、米国特許第８，８２１，８６７号、同第８，３３７，８５０号、及び同第９，４６８，６７８号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／０３２４３３Ａ１（これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ウトミルマブの前臨床特徴は、Ｆｉｓｈｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ．＆Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１２，６１，１７２１－３３に記載されている。様々な血液学的及び固形腫瘍適応症におけるウトミルマブの現在の臨床試験には、米国国立衛生研究所のｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０２４４４７９３、ＮＣＴ０１３０７２６７、ＮＣＴ０２３１５０６６、及びＮＣＴ０２５５４８１２が含まれる。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、配列番号４２によって示される重鎖及び配列番号４３によって示される軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号４２及び配列番号４３に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４２及び配列番号４３に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４２及び配列番号４３に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４２及び配列番号４３に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４２及び配列番号４３に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４２及び配列番号４３に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ウトミルマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニスト重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号４４に示される配列を含み、４－１ＢＢアゴニスト軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４５に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４４及び配列番号４５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４４及び配列番号４５に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４４及び配列番号４５に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４４及び配列番号４５に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号４４及び配列番号４５に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、配列番号４４及び配列番号４５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖ抗体を含む。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号４６、配列番号４７、及び配列番号４８に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号４９、配列番号５０、及び配列番号５１に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ウトミルマブに関して薬物規制当局によって承認された４－１ＢＢアゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して１つ以上の翻訳後修飾を含む４－１ＢＢ抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出された４－１ＢＢアゴニスト抗体であり、４－１ＢＢアゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。４－１ＢＢアゴニスト抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合ＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウトミルマブである。

好ましい実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ＢＭＳ－６６３５１３及び２０Ｈ４．９．ｈ４ａとしても知られるモノクローナル抗体ウレルマブ、またはそれらの断片、誘導体、バリアント、もしくはバイオシミラーである。ウレルマブは、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ，Ｉｎｃ．及びＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．から入手可能である。ウレルマブは、免疫グロブリンＧ４－カッパ、抗［ホモサピエンスＴＮＦＲＳＦ９（腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９、４－１ＢＢ、Ｔ細胞抗原ＩＬＡ、ＣＤ１３７）］、ホモサピエンス（完全ヒト）モノクローナル抗体である。ウレルマブのアミノ酸配列を表７に示す。ウレルマブは、２９８位（及び２９８′′）にＮ－グリコシル化部位、２２－９５位（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）、１４８－２０４位（Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌ）、２６２－３２２位（Ｃ_Ｈ２）、及び３６８－４２６位（Ｃ_Ｈ３）（２２′′－９５′′、１４８′′－２０４′′、２６２′′－３２２′′、及び３６８′′－４２６′′位）に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、２３′－８８′位（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）及び１３６′－１９６′位（Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌ）（２３′′′－８８′′′及び１３６′′′－１９６′′′位）に軽鎖鎖内ジスルフィド架橋、２２７－２２７′′位及び２３０－２３０′′位に鎖間重鎖－重鎖ジスルフィド架橋ならびに１３５－２１６′及び１３５′′－２１６′′′に鎖間重鎖－軽鎖ジスルフィド架橋を含む。ウレルマブならびにそのバリアント及び断片の調製及び特性は、米国特許第７，２８８，６３８号及び同第８，９６２，８０４号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ウレルマブの前臨床及び臨床特徴は、Ｓｅｇａｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１６に記載されており、ｈｔｔｐ：／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５８／１０７８－０４３２．ＣＣＲ－１６－１２７２で入手可能である。様々な血液学的及び固形腫瘍適応症におけるウレルマブの現在の臨床試験には、米国国立衛生研究所のｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０１７７５６３１、ＮＣＴ０２１１００８２、ＮＣＴ０２２５３９９２、及びＮＣＴ０１４７１２１０が含まれる。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、配列番号５２によって示される重鎖及び配列番号５３によって示される軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号５２及び配列番号５３に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５２及び配列番号５３に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５２及び配列番号５３に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５２及び配列番号５３に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５２及び配列番号５３に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５２及び配列番号５３に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ウレルマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニスト重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号５４に示される配列を含み、４－１ＢＢアゴニスト軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５５に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、各々が、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖ抗体を含む。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、それぞれ、配列番号５６、配列番号５７、及び配列番号５８に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号５９、配列番号６０、及び配列番号６１に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ウレルマブに関して薬物規制当局によって承認された４－１ＢＢアゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して１つ以上の翻訳後修飾を含む４－１ＢＢ抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出された４－１ＢＢアゴニスト抗体であり、４－１ＢＢアゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。４－１ＢＢアゴニスト抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合ＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ウレルマブである。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、１Ｄ８、３Ｅｌｏｒ、４Ｂ４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ３０９８０９）、Ｈ４－１ＢＢ－Ｍ１２７（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ５５２５３２）、ＢＢＫ２（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ＭＳ６２１ＰＡＢＸ）、１４５５０１（Ｌｅｉｎｃｏ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｂ５９１）、ＡＴＣＣ番号ＨＢ－１１２４８として寄託された細胞株によって産生され、米国特許第６，９７４，８６３号に開示される抗体、５Ｆ４（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ３１ １５０３）、Ｃ６５－４８５（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ５５９４４６）、米国特許出願公開第ＵＳ２００５／００９５２４４号に開示される抗体、米国特許第７，２８８，６３８号に開示される抗体（例えば、２０Ｈ４．９－ＩｇＧｌ（ＢＭＳ－６６３０３１））、米国特許第６，８８７，６７３号に開示される抗体（例えば、４Ｅ９もしくはＢＭＳ－５５４２７１）、米国特許第７，２１４，４９３号に開示される抗体、米国特許第６，３０３，１２１号に開示される抗体、米国特許第６，５６９，９９７号に開示される抗体、米国特許第６，９０５，６８５号に開示される抗体（例えば、４Ｅ９もしくはＢＭＳ－５５４２７１）、米国特許第６，３６２，３２５号に開示される抗体（例えば、１Ｄ８もしくはＢＭＳ－４６９４９２、３Ｈ３もしくはＢＭＳ－４６９４９７、または３Ｅｌ）、米国特許第６，９７４，８６３号に開示される抗体（例えば、５３Ａ２）、米国特許第６，２１０，６６９号に開示される抗体（例えば、１Ｄ８、３Ｂ８、もしくは３Ｅｌ）、米国特許第５，９２８，８９３号に開示される抗体、米国特許第６，３０３，１２１号に開示される抗体、米国特許第６，５６９，９９７号に開示される抗体、国際特許出願公開第ＷＯ２０１２／１７７７８８号、同第ＷＯ２０１５／１１９９２３号、及び同第ＷＯ２０１０／０４２４３３号に開示される抗体、ならびにそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、またはバイオシミラーからなる群から選択され、前述の特許または特許出願公開の各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、国際特許出願公開第ＷＯ２００８／０２５５１６Ａ１号、同第ＷＯ２００９／００７１２０Ａ１号、同第ＷＯ２０１０／００３７６６Ａ１号、同第ＷＯ２０１０／０１００５１Ａ１号、及び同第ＷＯ２０１０／０７８９６６Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／００２７２１８Ａ１号、同第ＵＳ２０１５／０１２６７０９Ａ１号、同第ＵＳ２０１１／０１１１４９４Ａ１号、同第ＵＳ２０１５／０１１０７３４Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１５／０１２６７１０Ａ１号、ならびに米国特許第９，３５９，４２０号、同第９，３４０，５９９号、同第８，９２１，５１９号、及び同第８，４５０，４６０号に記載される４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質であり、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、構造Ｉ－Ａ（Ｃ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）もしくは構造Ｉ－Ｂ（Ｎ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）に示されるような４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、もしくはバイオシミラーである（図１８を参照）。構造Ｉ－Ａ及びＩ－Ｂにおいて、円筒は、個々のポリペプチド結合ドメインを指す。構造Ｉ－Ａ及びＩ－Ｂは、例えば、４－１ＢＢＬ（４－１ＢＢリガンド、ＣＤ１３７リガンド（ＣＤ１３７Ｌ）、もしくは腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＳＦ９））または４－１ＢＢに結合する抗体に由来する３つの直線的に連結されたＴＮＦＲＳＦ結合ドメインを含み、これらが折り重なって三価タンパク質を形成し、その後、これがＩｇＧ１－Ｆｃ（Ｃ_Ｈ３及びＣ_Ｈ２ドメインを含む）によって第２の三価タンパク質に連結され、その後、これを使用して、三価タンパク質のうちの２つをジスルフィド結合（小さく長細い楕円）によって一緒に連結し、構造を安定化し、６つの受容体及びシグナル伝達タンパク質の細胞内シグナル伝達ドメインを一緒にして、シグナル伝達複合体を形成することができるアゴニストを提供する。円筒として示されるＴＮＦＲＳＦ結合ドメインは、例えば、親水性残基及び柔軟性のためのＧｌｙ及びＳｅｒ配列、ならびに溶解性のためのＧｌｕ及びＬｙｓを含み得るリンカーによって結合されたＶ_Ｈ鎖及びＶ_Ｌ鎖を含む、ｓｃＦｖドメインであり得る。ｄｅ Ｍａｒｃｏ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｆａｃｔｏｒｉｅｓ，２０１１，１０，４４、Ａｈｍａｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．＆Ｄｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２，９８０２５０、Ｍｏｎｎｉｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，２０１３，２，１９３－２０８、または本明細書の他の場所に組み込まれている参照文献に記載されるものなどの任意のｓｃＦｖドメイン設計が使用され得る。この形態の融合タンパク質構造は、米国特許第９，３５９，４２０号、同第９，３４０，５９９号、同第８，９２１，５１９号、及び同第８，４５０，４６０号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

図１８に示される構造Ｉ－Ａの他のポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表８に見出される。Ｆｃドメインは、好ましくは、完全な定常ドメイン（配列番号６２のアミノ酸１７～２３０）、完全なヒンジドメイン（配列番号６２のアミノ酸１～１６）、またはヒンジドメインの一部（例えば、配列番号６２のアミノ酸４～１６）を含む。Ｃ末端Ｆｃ抗体を結合するための好ましいリンカーは、追加のポリペプチドの融合に好適なリンカーを含む、配列番号６３～配列番号７２に示される実施形態から選択され得る。

図１８に示される構造Ｉ－Ｂの他のポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表９に見出される。Ｆｃ抗体断片が構造Ｉ－ＢにあるようなＴＮＲＦＳＦ融合タンパク質のＮ末端に融合される場合、Ｆｃモジュールの配列は、好ましくは、配列番号７３に示されるものであり、リンカー配列は、好ましくは、配列番号７４～配列番号７６に示される実施形態から選択される。

ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、ウトミルマブの可変重鎖及び可変軽鎖、ウレルマブの可変重鎖及び可変軽鎖、ウトミルマブの可変重鎖及び可変軽鎖、表１０に記載の可変重鎖及び可変軽鎖から選択される可変重鎖及び可変軽鎖、前述の可変重鎖及び可変軽鎖の任意の組み合わせ、ならびにそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含む。

ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、４－１ＢＢＬ配列を含む１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含む。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、配列番号７７による配列を含む１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含む。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、可溶性４－１ＢＢＬ配列を含む１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含む。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、配列番号７８による配列を含む１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含む。

ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号４３及び配列番号４４に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、リンカーによって結合されている。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号５４及び配列番号５５に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－Ｂによる４－１ＢＢアゴニスト融合タンパク質は、各々が表１０に示されるＶ_Ｈ配列及びＶ_Ｌ配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上の４－１ＢＢ結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、（ｉ）第１の可溶性４－１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性４－１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、及び（ｖ）第３の可溶性４－１ＢＢ結合ドメインを含む４－１ＢＢアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端及び／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインである。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、（ｉ）第１の可溶性４－１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性４－１ＢＢ結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、及び（ｖ）第３の可溶性４－１ＢＢ結合ドメインを含む４－１ＢＢアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端及び／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインであり、可溶性４－１ＢＢドメインは各々、茎領域（三量体化に寄与し、細胞膜まである特定の距離を提供するが、４－１ＢＢ結合ドメインの一部ではない）を欠き、第１及び第２のペプチドリンカーは独立して、３～８アミノ酸長を有する。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、（ｉ）第１の可溶性腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、及び（ｖ）第３の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインを含む４－１ＢＢアゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインは各々、茎領域を欠き、第１及び第２のペプチドリンカーは独立して、３～８アミノ酸長であり、各ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインは、４－１ＢＢ結合ドメインである。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、前述のＶ_Ｌドメインのうちのいずれかに連結された前述のＶ_Ｈドメインのうちのいずれかを含む４－１ＢＢアゴニストｓｃＦｖ抗体である。

ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から市販されているＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ４－１ＢＢアゴニスト抗体カタログ番号７９０９７－２である。ある実施形態では、４－１ＢＢアゴニストは、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ，ＵＳＡ）から市販されているＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ ４－１ＢＢアゴニスト抗体カタログ番号ＭＯＭ－１８１７９である。

３．ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニスト
ある実施形態では、ＴＮＦＲＳＦアゴニストは、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）アゴニストである。ＯＸ４０アゴニストは、当該技術分野で知られている任意のＯＸ４０結合分子であり得る。ＯＸ４０結合分子は、ヒトまたは哺乳動物ＯＸ４０に結合することができるモノクローナル抗体または融合タンパク質であり得る。ＯＸ４０アゴニストまたはＯＸ４０結合分子は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、またはサブクラスの免疫グロブリン分子の免疫グロブリン重鎖を含み得る。ＯＸ４０アゴニストまたはＯＸ４０結合分子は、重鎖及び軽鎖の両方を有し得る。本明細書で使用される場合、結合分子という用語は、抗体（全長抗体を含む）、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体、及び抗体断片、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ′）断片、Ｆａｂ発現ライブラリーによって産生された断片、上記のうちのいずれかのエピトープ結合断片、ならびにＯＸ４０に結合する抗体の操作された形態、例えば、ｓｃＦｖ分子も含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、完全ヒト抗体である抗原結合タンパク質である。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ヒト化抗体である抗原結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法及び組成物に使用するためのＯＸ４０アゴニストには、抗ＯＸ４０抗体、ヒト抗ＯＸ４０抗体、マウス抗ＯＸ４０抗体、哺乳動物抗ＯＸ４０抗体、モノクローナル抗ＯＸ４０抗体、ポリクローナル抗ＯＸ４０抗体、キメラ抗ＯＸ４０抗体、抗ＯＸ４０アドネクチン、抗ＯＸ４０ドメイン抗体、一本鎖抗ＯＸ４０断片、重鎖抗ＯＸ４０断片、軽鎖抗ＯＸ４０断片、抗ＯＸ４０融合タンパク質、及びそれらの断片、誘導体、複合体、バリアント、またはバイオシミラーが含まれる。好ましい実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、アゴニスト、抗ＯＸ４０ヒト化、または完全ヒトモノクローナル抗体（すなわち、単一の細胞株に由来する抗体）である。

好ましい実施形態では、ＯＸ４０アゴニストまたはＯＸ４０結合分子は、融合タンパク質である場合もある。ＯＸ４０Ｌに融合されたＦｃドメインを含むＯＸ４０融合タンパク質は、例えば、Ｓａｄｕｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００９，１８２，１４８１－８９に記載されている。好ましい実施形態では、三量体または六量体ＯＸ４０アゴニスト（３つまたは６つのリガンド結合ドメインを有する）などの多量体ＯＸ４０アゴニストは、典型的に２つのリガンド結合ドメインを有するアゴニストモノクローナル抗体と比較して、優れた受容体（ＯＸ４０Ｌ）クラスター化及び内部細胞シグナル伝達複合体形成を誘導し得る。３つのＴＮＦＲＳＦ結合ドメイン及びＩｇＧ１－Ｆｃを含み、かつ任意選択でこれらの融合タンパク質のうちの２つ以上をさらに結合する三量体（三価）または六量体（もしくは六価）またはそれ以上の融合タンパク質は、例えば、Ｇｉｅｆｆｅｒｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ２０１３，１２，２７３５－４７に記載されている。

アゴニストＯＸ４０抗体及び融合タンパク質は、強い免疫応答を誘導することが知られている。Ｃｕｒｔｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１３，７３，７１８９－９８。好ましい実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、毒性を低減するのに十分な様式でＯＸ４０抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体依存性細胞毒性（ｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）、例えば、ＮＫ細胞細胞傷害性（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）を抑制するアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を抑制するアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を抑制するアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｆｃ領域機能性を抑制するアゴニストＯＸ４０モノクローナル抗体または融合タンパク質である。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、高い親和性及びアゴニスト活性でヒトＯＸ４０（配列番号８５）に結合することを特徴とする。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ヒトＯＸ４０（配列番号８５）に結合する結合分子である。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、マウスＯＸ４０（配列番号８６）に結合する結合分子である。ＯＸ４０アゴニストまたは結合分子が結合するＯＸ４０抗原のアミノ酸配列を表１１に要約する。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１００ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約６０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約５０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約４０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する、またはヒトもしくはマウスＯＸ４０に約３０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するＯＸ４０アゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、またはヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１×１０^６１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するＯＸ４０アゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．１×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．２×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．３×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．４×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．５×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．６×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．７×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．８×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２．９×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、またはヒトもしくはマウスＯＸ４０に約３×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ＯＸ４０アゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、記載される組成物、プロセス、及び方法は、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１０ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約９ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約８ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約７ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約６ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約５ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約４ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約３ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約２ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ヒトもしくはマウスＯＸ４０に約１ｎＭ以下のＩＣ_５０で結合する、ＯＸ４０アゴニストを含む。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＭＥＤＩ０５６２またはＭＥＤＩ－０５６２としても知られるタボリキシズマブである。タボリキシズマブは、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ，Ｉｎｃ．の子会社であるＭｅｄＩｍｍｕｎｅから入手可能である。タボリキシズマブは、免疫グロブリンＧ１－カッパ、抗［ホモサピエンスＴＮＦＲＳＦ４（腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーメンバー４、ＯＸ４０、ＣＤ１３４）］、ヒト化及びキメラモノクローナル抗体である。タボリキシズマブのアミノ酸配列を表１２に示す。タボリキシズマブは、３０１及び３０１′′位にＮ－グリコシル化部位（フコシル化複合二分岐ＣＨＯ型グリカンを有する）、２２－９５位（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）、１４８－２０４位（Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌ）、２６５－３２５位（Ｃ_Ｈ２）、及び３７１－４２９位（Ｃ_Ｈ３）（及び２２′′－９５′′、１４８′′－２０４′′、２６５′′－３２５′′、及び３７１′′－４２９′′位）に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、２３′－８８′位（Ｖ_Ｈ－Ｖ_Ｌ）及び１３４′－１９４′位（Ｃ_Ｈ１－Ｃ_Ｌ）（及び２３′′′－８８′′′及び１３４′′′－１９４′′′位）に軽鎖鎖内ジスルフィド架橋、２３０－２３０”及び２３３－２３３”位に重鎖鎖内ジスルフィド架橋、ならびに２２４－２１４′及び２２４′′－２１４′′′に鎖間重鎖－軽鎖ジスルフィド架橋を含む。様々な固形腫瘍適応症におけるタボリキシズマブの現在の臨床試験には、米国国立衛生研究所のｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌｓ．ｇｏｖ識別子ＮＣＴ０２３１８３９４及びＮＣＴ０２７０５４８２が含まれる。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、配列番号８７によって示される重鎖及び配列番号８８によって示される軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号８７及び配列番号８８に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８７及び配列番号８８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８７及び配列番号８８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８７及び配列番号８８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８７及び配列番号８８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８７及び配列番号８８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、タボリキシズマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号８９に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号９０に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８９及び配列番号９０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８９及び配列番号９０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８９及び配列番号９０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８９及び配列番号９０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号８９及び配列番号９０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、配列番号８９及び配列番号９０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖ抗体を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号９１、配列番号９２、及び配列番号９３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号９４、配列番号９５、及び配列番号９６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、タボリキシズマブに関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して１つ以上の翻訳後修飾を含むＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合ＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、タボリキシズマブである。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．から入手可能な完全ヒト抗体である１１Ｄ４である。１１Ｄ４の調製及び特性は、米国特許第７，９６０，５１５号、同第８，２３６，９３０号、及び同第９，０２８，８２４号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。１１Ｄ４のアミノ酸配列を表１３に示す。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、配列番号９７によって示される重鎖及び配列番号９８によって示される軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号９７及び配列番号９８に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９７及び配列番号９８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９７及び配列番号９８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９７及び配列番号９８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９７及び配列番号９８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９７及び配列番号９８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１１Ｄ４の重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号９９に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１００に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９９及び配列番号１００に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９９及び配列番号１００に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９９及び配列番号１００に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９９及び配列番号１００に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号９９及び配列番号１００に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶＨ領域及びＶＬ領域を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号１０１、配列番号１０２、及び配列番号１０３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１０４、配列番号１０５、及び配列番号１０６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１１Ｄ４に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して１つ以上の翻訳後修飾を含むＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合ＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１１Ｄ４である。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ．から入手可能な完全ヒト抗体である１８Ｄ８である。１８Ｄ８の調製及び特性は、米国特許第７，９６０，５１５号、同第８，２３６，９３０号、及び同第９，０２８，８２４号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。１８Ｄ８のアミノ酸配列を表１４に示す。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、配列番号１０７によって示される重鎖及び配列番号１０８によって示される軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号１０７及び配列番号１０８に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０７及び配列番号１０８に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０７及び配列番号１０８に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０７及び配列番号１０８に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０７及び配列番号１０８に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０７及び配列番号１０８に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１８Ｄ８の重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１０９に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１１０に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０９及び配列番号１１０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０９及び配列番号１１０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０９及び配列番号１１０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０９及び配列番号１１０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１０９及び配列番号１１０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号１１１、配列番号１１２、及び配列番号１１３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１１４、配列番号１１５、及び配列番号１１６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、１８Ｄ８に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して１つ以上の翻訳後修飾を含むＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合ＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、１８Ｄ８である。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ｐｌｃ．から入手可能なヒト化抗体であるＨｕ１１９－１２２である。Ｈｕ１１９－１２２の調製及び特性は、米国特許第９，００６，３９９号及び同第９，１６３，０８５号、ならびに国際特許公開第ＷＯ２０１２／０２７３２８号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。Ｈｕ１１９－１２２のアミノ酸配列を表１５に示す。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１１９－１２２の重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１１７に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１１８に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１７及び配列番号１１８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１７及び配列番号１１８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１７及び配列番号１１８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１７及び配列番号１１８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１１７及び配列番号１１８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号１１９、配列番号１２０、及び配列番号１２１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１２２、配列番号１２３、及び配列番号１２４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１１９－１２２に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して１つ以上の翻訳後修飾を含むＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９－１２２である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９－１２２である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合ＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９－１２２である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１１９－１２２である。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ｐｌｃ．から入手可能なヒト化抗体であるＨｕ１０６－２２２である。Ｈｕ１０６－２２２の調製及び特性は、米国特許第９，００６，３９９号及び同第９，１６３，０８５号、ならびに国際特許公開第ＷＯ２０１２／０２７３２８号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。Ｈｕ１０６－２２２のアミノ酸配列を表１６に示す。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１０６－２２２の重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１２５に示される配列を含み、ＯＸ４０アゴニスト軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１２６に示される配列、及びその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１２５及び配列番号１２６に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１２５及び配列番号１２６に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１２５及び配列番号１２６に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１２５及び配列番号１２６に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、各々が、それぞれ、配列番号１２５及び配列番号１２６に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、それぞれ、配列番号１２７、配列番号１２８、及び配列番号１２９に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１３０、配列番号１３１、及び配列番号１３２に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびにそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｈｕ１０６－２２２に関して薬物規制当局によって承認されたＯＸ４０アゴニストバイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーモノクローナル抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列と少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ参照医薬品または参照バイオ製品と比較して１つ以上の翻訳後修飾を含むＯＸ４０抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６－２２２である。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可されたまたは認可を得るために提出されたＯＸ４０アゴニスト抗体であり、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６－２２２である。ＯＸ４０アゴニスト抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合ＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６－２２２である。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、Ｈｕ１０６－２２２である。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニスト抗体は、ＭＥＤＩ６４６９（９Ｂ１２とも称される）である。ＭＥＤＩ６４６９は、マウスモノクローナル抗体である。Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６，２９，５７５－５８５。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６，２９，５７５－５８５に記載されているように、Ｂｉｏｖｅｓｔ Ｉｎｃ．（Ｍａｌｖｅｒｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）に寄託された９Ｂ１２ハイブリドーマによって産生された抗体であり、その開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗体は、ＭＥＤＩ６４６９のＣＤＲ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＭＥＤＩ６４６９の重鎖可変領域配列及び／または軽鎖可変領域配列を含む。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｌ１０６ ＢＤ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品番号３４０４２０）である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体Ｌ１０６（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品番号３４０４２０）のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体Ｌ１０６（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製品番号３４０４２０）の重鎖可変領域配列及び／または軽鎖可変領域配列を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号２００７３）である。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号２００７３）のＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、抗体ＡＣＴ３５（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログ番号２００７３）の重鎖可変領域配列及び／または軽鎖可変領域配列を含む。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＩｎＶｉｖｏＭＡｂ、ＢｉｏＸｃｅｌｌ Ｉｎｃ（Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ）から市販されているマウスモノクローナル抗体抗ｍＣＤ１３４／ｍＯＸ４０（クローンＯＸ８６）である。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、国際特許出願公開第ＷＯ９５／１２６７３号、同第ＷＯ９５／２１９２５号、同第ＷＯ２００６／１２１８１０号、同第ＷＯ２０１２／０２７３２８号、同第ＷＯ２０１３／０２８２３１号、同第ＷＯ２０１３／０３８１９１号、及び同第ＷＯ２０１４／１４８８９５号、欧州特許出願第ＥＰ０６７２１４１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／１３６０３０号、同第ＵＳ２０１４／３７７２８４号、同第ＵＳ２０１５／１９０５０６号、及び同第ＵＳ２０１５／１３２２８８号（クローン２０Ｅ５及び１２Ｈ３を含む）、ならびに米国特許第７，５０４，１０１号、同第７，５５０，１４０号、同第７，６２２，４４４号、同第７，６９６，１７５号、同第７，９６０，５１５号、同第７，９６１，５１５号、同第８，１３３，９８３号、同第９，００６，３９９号、及び同第９，１６３，０８５号（各々の開示は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＯＸ４０アゴニストから選択される。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、構造Ｉ－Ａ（Ｃ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）もしくは構造Ｉ－Ｂ（Ｎ末端Ｆｃ抗体断片融合タンパク質）に示されるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質、またはそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、もしくはバイオシミラーである。構造Ｉ－Ａ及びＩ－Ｂの特性は、上記及び米国特許第９，３５９，４２０号、同第９，３４０，５９９号、同第８，９２１，５１９号、及び同第８，４５０，４６０号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。図１８に示される構造Ｉ－Ａのポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表９に見出される。Ｆｃドメインは、好ましくは、完全な定常ドメイン（配列番号６２のアミノ酸１７～２３０）、完全なヒンジドメイン（配列番号６２のアミノ酸１～１６）、またはヒンジドメインの一部（例えば、配列番号６２のアミノ酸４～１６）を含む。Ｃ末端Ｆｃ抗体を結合するための好ましいリンカーは、追加のポリペプチドの融合に好適なリンカーを含む、配列番号６３～配列番号７２に示される実施形態から選択され得る。同様に、図１８に示される構造Ｉ－Ｂのポリペプチドドメインのアミノ酸配列は、表１０に見出される。Ｆｃ抗体断片が構造Ｉ－ＢにあるようなＴＮＲＦＳＦ融合タンパク質のＮ末端に融合される場合、Ｆｃモジュールの配列は、好ましくは、配列番号７３に示されるものであり、リンカー配列は、好ましくは、配列番号７４～配列番号７６に示される実施形態から選択される。

ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、タボリキシズマブの可変重鎖及び可変軽鎖、１１Ｄ４の可変重鎖及び可変軽鎖、１８Ｄ８の可変重鎖及び可変軽鎖、Ｈｕ１１９－１２２の可変重鎖及び可変軽鎖、Ｈｕ１０６－２２２の可変重鎖及び可変軽鎖、表１７に記載の可変重鎖及び可変軽鎖から選択される可変重鎖及び可変軽鎖、前述の可変重鎖及び可変軽鎖の任意の組み合わせ、ならびにそれらの断片、誘導体、コンジュゲート、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。

ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、ＯＸ４０Ｌ配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、配列番号１３３による配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、可溶性ＯＸ４０Ｌ配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、配列番号１３４による配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、配列番号１３５による配列を含む１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含む。

ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号８９及び配列番号９０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号９９及び配列番号１００に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号１０９及び配列番号１１０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号１２７及び配列番号１２８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が、それぞれ、配列番号１２５及び配列番号１２６に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。ある実施形態では、構造Ｉ－ＡまたはＩ－ＢによるＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質は、各々が表１７に示されるＶ_Ｈ配列及びＶ_Ｌ配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含むｓｃＦｖドメインである１つ以上のＯＸ４０結合ドメインを含み、Ｖ_ＨドメインとＶ_Ｌドメインはリンカーによって結合されている。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、（ｉ）第１の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、及び（ｖ）第３の可溶性ＯＸ４０結合ドメインを含むＯＸ４０アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端及び／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインである。ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、（ｉ）第１の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＯＸ４０結合ドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、及び（ｖ）第３の可溶性ＯＸ４０結合ドメインを含むＯＸ４０アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、Ｎ末端及び／またはＣ末端に追加のドメインをさらに含み、追加のドメインは、ＦａｂまたはＦｃ断片ドメインであり、可溶性ＯＸ４０ドメインは各々、茎領域（三量体化に寄与し、細胞膜まである特定の距離を提供するが、ＯＸ４０結合ドメインの一部分ではない）を欠き、第１及び第２のペプチドリンカーは独立して、３～８アミノ酸長を有する。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、（ｉ）第１の可溶性腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｉ）第１のペプチドリンカー、（ｉｉｉ）第２の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメイン、（ｉｖ）第２のペプチドリンカー、及び（ｖ）第３の可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインを含むＯＸ４０アゴニスト一本鎖融合ポリペプチドであり、可溶性ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインは各々、茎領域を欠き、第１及び第２のペプチドリンカーは独立して、３～８アミノ酸長であり、ＴＮＦスーパーファミリーサイトカインドメインは、ＯＸ４０結合ドメインである。

いくつかの実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＭＥＤＩ６３８３である。ＭＥＤＩ６３８３は、ＯＸ４０アゴニスト融合タンパク質であり、米国特許第６，３１２，７００号に記載されているように調製することができ、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、前述のＶ_Ｌドメインのうちのいずれかに連結された前述のＶ_Ｈドメインのうちのいずれかを含むＯＸ４０アゴニストｓｃＦｖ抗体である。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ，ＵＳＡ）から市販されているＣｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ ＯＸ４０アゴニストモノクローナル抗体ＭＯＭ－１８４５５である。

ある実施形態では、ＯＸ４０アゴニストは、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｉｎｃ．（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）から市販されているＯＸ４０アゴニスト抗体クローンＢｅｒ－ＡＣＴ３５である。

４．ＡＫＴ阻害剤及びＤＮＡ低メチル化剤
ある実施形態では、Ｇｅｎ２またはＧｅｎ３のいずれかのプロセス、または本明細書に記載の他のプロセスの第１の拡張及び／または急速な第２の拡張の細胞培養培地は、ＡＫＴ阻害剤を含む。ＴＩＬ、ＭＩＬ、及びＰＢＬ拡張プロセスにおけるＡＫＴ阻害剤の使用は、国際特許公開第ＷＯ２０２０／０９６９２７Ａ１号に記載されており、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に開示されるＡＫＴ阻害剤は、本明細書に開示されるプロセスに関連して、本明細書に開示されるＣＣＲ及びケモカイン受容体とともに使用されてもよく、またはＣＣＲもしくはケモカイン受容体修飾を使用せずに、本明細書に開示されるプロセス（Ｇｅｎ２もしくはＧｅｎ３プロセスなど）と単独で使用されてもよい。

好適なＡＫＴ阻害剤としては、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、及び／またはＡＫＴ３阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、アフレセルチブ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグ、及びそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、イパタセルチブ、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグ、及びそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、アフレセルチブ（ａｆｕｒｅｓｅｒｔｉｂ）、ウプロセルチブ（ｕｐｒｏｓｅｒｔｉｂ）、イパタセルチブ（ｉｐａｔａｓｅｒｔｉｂ）、ボルセルチブ（ｂｏｒｕｓｓｅｒｔｉｂ）、カピバセルチブ（ｃａｐｉｖａｓｅｒｔｉｂ）、ミランセルチブ（ｍｉｒａｎｓｅｒｔｉｂ）、オリドニニン（ｏｒｉｄｏｎｉｎ）、ベボリセルチブ（ｖｅｖｏｒｉｓｅｒｔｉｂ）、ＡＴ７８６７、ＡＴ１３１４８、ＢＡＹ１１２５９７６、ＧＳＫ－６９０６９３、ＭＫ－２２０６、ＬＹ２９４００２、ＰＦ－０４６９１５０２またはそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、断片化または消化された腫瘍が培養物に添加された直後など、Ｇｅｎ２プロセスのＲＥＰ前段階中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、Ｇｅｎ２プロセスのＲＥＰ段階中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、Ｇｅｎ３プロセスのプライミング段階中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、Ｇｅｎ３プロセスのＲＥＰ段階中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬ製造プロセスのＲＥＰ段階中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、ＴＩＬ拡張中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、本明細書に記載される遺伝子修飾ステップを含むＴＩＬ拡張プロセス中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、ＣＣＲまたはケモカイン受容体に対する形質導入ステップを含むＴＩＬ拡張プロセス中に培地に添加される。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、アロステリックＡＫＴ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、共有結合性ＡＫＴ阻害剤である。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬ拡張中のＡＫＴ阻害剤の使用は、分化したＣＤ３９^－ＣＤ６９^－細胞を有するＴＩＬをもたらす。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ拡張中のＡＫＴ阻害剤の使用は、ＣＣＲまたはケモカイン受容体の発現のために修飾された、例えば、Ｇｅｎ２またはＧｅｎ３プロセスを使用して、ＡＫＴ阻害剤を使用せずに調製されたＣＤ３９^－ＣＤ６９^－細胞の量の少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％（すなわち、２倍）のＴＩＬをもたらす。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ拡張中のＡＫＴ阻害剤の使用は、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％（すなわち、倍増）のＩＦＮγ^＋ＴＮＦα^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞を有するＴＩＬをもたらす。

ある実施形態では、本発明は、ＣＣＲまたはケモカイン受容体を含むＴＩＬを含む治療用ＴＩＬ組成物を含み、ＴＩＬは、遺伝子（ＰＤＣＤ１など）のノックアウトまたはノックダウンによってタンパク質（ＰＤ－１など）の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに任意選択で修飾され、及び／またはＴＩＬはＡＫＴ阻害剤で調製され、ＡＫＴ阻害剤を使用せずに調製されたＴＩＬと比較してＣＤ３９^－ＣＤ６９^－細胞の量が増加することを示す。

ある実施形態では、Ｇｅｎ２またはＧｅｎ３プロセス、または本明細書に記載の他のプロセスの第１の拡張及び／または急速な第２の拡張の細胞培養培地は、単独で、またはＡＫＴ阻害剤に加えて、ならびに単独で、または本明細書に開示されるＣＣＲ及びケモカイン受容体と併せて、デシタビン、またはその塩、共結晶、溶媒和物、もしくは水和物を含む。

Ｃ．任意選択の細胞生存率分析
任意選択で、細胞生存率アッセイは、当該技術分野で知られている標準のアッセイを使用して、プライミングによる第１の拡張（初期バルク拡張と称されることもある）後に行われ得る。したがって、ある特定の実施形態では、方法は、プライミングによる第１の拡張後に細胞生存率アッセイを行うことを含む。例えば、死細胞を選択的に標識し、生存率の評価を可能にするトリパンブルー排除アッセイが、バルクＴＩＬの試料上で行われ得る。生存率の試験に使用する他のアッセイには、アラマーブルーアッセイ及びＭＴＴアッセイが含まれるが、これらに限定されない。

１．細胞計数、生存率、フローサイトメトリー
いくつかの実施形態では、細胞計数及び／または生存率が測定される。ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ５６などであるが、これらに限定されないマーカー、ならびに本明細書に開示または記載される任意の他のマーカーの発現は、ＦＡＣＳＣａｎｔｏ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、例えば、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）から市販されているものであるが、これに限定されない抗体を用いたフローサイトメトリーによって測定され得る。細胞は、使い捨てのｃチップ血球計数器（ＶＷＲ，Ｂａｔａｖｉａ，ＩＬ）を使用して手動でカウントすることができ、生存率は、トリパンブルー染色を含むが、これに限定されない、当該技術分野で知られている任意の方法を使用して評価することができる。細胞生存率は、米国特許出願公開第２０１８／０２８２６９４号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に基づいてアッセイされ得る。細胞生存率は、米国特許公開第２０１８／０２８０４３６号または国際特許公開第ＷＯ／２０１８／０８１４７３号（いずれもあらゆる目的のためにそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に基づいてアッセイすることもできる。

いくつかの事例では、バルクＴＩＬ集団は、以下で考察されるプロトコルを使用して直ちに凍結保存され得る。あるいは、以下で論じられるように、バルクＴＩＬ集団がＲＥＰに供されて、凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾ＴＩＬが療法に使用される場合、バルクまたはＲＥＰ ＴＩＬ集団が好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。

２．細胞培養
ある実施形態では、上で考察され、図１及び図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に例示されたものを含む、ＴＩＬを拡張するための方法は、約５，０００ｍＬ～約２５，０００ｍＬの細胞培地、約５，０００ｍＬ～約１０，０００ｍＬの細胞培地、または約５，８００ｍＬ～約８，７００ｍＬの細胞培地を使用することを含み得る。いくつかの実施形態では、培地は、無血清培地である。いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張における培地は、無血清である。いくつかの実施形態では、第２の拡張における培地は、無血清である。［．］いくつかの実施形態では、プライミングによる第１の拡張及び第２の拡張（急速な第２の拡張とも称される）における培地は、両方とも無血清である。ある実施形態では、ＴＩＬの数を拡張することは、わずか１種類の細胞培養培地を使用する。任意の好適な細胞培養培地、例えば、ＡＩＭ－Ｖ細胞培地（Ｌ－グルタミン、５０μＭの硫酸ストレプトマイシン、及び１０μＭの硫酸ゲンタマイシン）細胞培養培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）が使用され得る。これに関して、本発明の方法は、ＴＩＬの数を拡張するために必要な培地の量及び培地の種類の数を有利に減少させる。ある実施形態では、ＴＩＬの数を拡張することは、３日または４日に１回以下の頻度で細胞にフィードすることを含み得る。ガス透過性容器内で細胞の数を拡張することは、細胞を拡張するために必要なフィード頻度を減少させることによって、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化する。

ある実施形態では、第１及び／または第２のガス透過性容器内の細胞培養培地は、濾過されていない。濾過されていない細胞培地の使用は、細胞の数を拡張するために必要な手順を簡素化することができる。ある実施形態では、第１及び／または第２のガス透過性容器内の細胞培地は、ベータ－メルカプトエタノール（ＢＭＥ）を欠いている。

実施形態では、哺乳動物から腫瘍組織試料を取得することと、プライミングによる第１の拡張として約１～８日間、例えば約７日間、またはプライミングによる第１の拡張として約８日間にわたってＩＬ－２、１Ｘ抗原提示フィーダー細胞、及びＯＫＴ－３を含む細胞培地を含有する第１のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養することと、ＴＩＬを第２のガス透過性容器に移し、ＩＬ－２、２Ｘ抗原提示フィーダー細胞、及びＯＫＴ－３を含む細胞培地を含有する第２のガス透過性容器内でＴＩＬの数を約７～９日間、例えば、約７日間、約８日間、または約９日間にわたって拡張することと、を含む方法の期間。

ある実施形態では、哺乳動物から腫瘍組織試料を取得することと、プライミングによる第１の拡張として約１～７日間、例えば約７日間にわたってＩＬ－２、１Ｘ抗原提示フィーダー細胞、及びＯＫＴ－３を含む細胞培地を含有する第１のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養することと、ＴＩＬを［ａ］第２のガス透過性容器に移し、ＩＬ－２、２Ｘ抗原提示フィーダー細胞、及びＯＫＴ－３を含む細胞培地を含有する第２のガス透過性容器内でＴＩＬの数を約７～１４日間、または約７～９日間、例えば、約７日間、約８日間、または約９日間、約１０日間、または約１１日間にわたって拡張することと、を含む方法の期間。

ある実施形態では、哺乳動物から腫瘍組織試料を取得することと、プライミングによる第１の拡張として約１～７日間、例えば、約７日間にわたってＩＬ－２、１×抗原提示フィーダー細胞、及びＯＫＴ－３を含む細胞培地を収容する第１のガス透過性容器内で腫瘍組織試料を培養することと、ＴＩＬを第２のガス透過性容器に移し、ＩＬ－２、２×抗原提示フィーダー細胞、及びＯＫＴ－３を含む細胞培地を収容する第２のガス透過性容器内でＴＩＬの数を約７～１１日間、例えば約７日間、約８日間、約９日間、約１０日間、または約１１日間にわたって拡張することと、を含む方法の期間。

ある実施形態では、ＴＩＬは、ガス透過性容器内で拡張される。ガス透過性容器は、米国特許出願公開第２００５／０１０６７１７Ａ１号に記載されるものを含む、当該技術分野で知られている方法、組成物、及びデバイスを使用して、ＰＢＭＣを使用してＴＩＬを拡張するために使用されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬは、ガス透過性バッグ内で拡張される。ある実施形態では、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ２５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などのガス透過性バッグ内のＴＩＬを拡張する細胞拡張システムを使用して拡張される。ある実施形態では、ＴＩＬは、Ｘｕｒｉ Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｗ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）としても知られるＷＡＶＥ Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ Ｓｙｓｔｅｍなどのガス透過性バッグ内でＴＩＬを拡張する細胞拡張システムを使用して拡張される。ある実施形態では、細胞拡張システムは、約１００ｍＬ、約２００ｍＬ、約３００ｍＬ、約４００ｍＬ、約５００ｍＬ、約６００ｍＬ、約７００ｍＬ、約８００ｍＬ、約９００ｍＬ、約１Ｌ、約２Ｌ、約３Ｌ、約４Ｌ、約５Ｌ、約６Ｌ、約７Ｌ、約８Ｌ、約９Ｌ、及び約１０Ｌからなる群から選択される体積を有するガス透過性細胞バッグを含む。

ある実施形態では、ＴＩＬは、Ｇ－Ｒｅｘフラスコ（Ｗｉｌｓｏｎ Ｗｏｌｆ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇから市販されている）内で拡張され得る。かかる実施形態は、細胞集団が約５×１０^５細胞／ｃｍ^２～１０×１０^６及び３０×１０^６細胞／ｃｍ^２まで拡張するのを可能にする。ある実施形態では、これは、フィードなしである。ある実施形態では、これは、培地がＧ－Ｒｅｘフラスコ内の約１０ｃｍの高さに存在する限り、フィードなしである。ある実施形態では、これは、フィードなしであるが、１つ以上のサイトカインの添加を伴う。ある実施形態では、サイトカインを培地と混合する必要なしに、サイトカインがボーラスとして添加され得る。かかる容器、装置、及び方法は、当該技術分野で知られており、ＴＩＬを拡張するために使用されており、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３７７７３９Ａ１号、国際公開第ＷＯ２０１４／２１００３６Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１１５６１７Ａ１号、国際公開第ＷＯ２０１３／１８８４２７Ａ１、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／０１３６２２８Ａ１号、米国特許第ＵＳ８，８０９，０５０Ｂ２号、国際公開第ＷＯ２０１１／０７２０８８Ａ２号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１６／０２０８２１６Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／０２４４１３３Ａ１号、国際公開第ＷＯ２０１２／１２９２０１Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１３／０１０２０７５Ａ１号、米国特許第ＵＳ８，９５６，８６０Ｂ２号、国際公開第ＷＯ２０１３／１７３８３５Ａ１号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／０１７５９６６Ａ１号に記載されるものを含み、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。かかるプロセスも、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１２，３５：２８３－２９２に記載されている。

Ｄ．ＴＩＬにおける遺伝子の任意選択のノックダウンまたはノックアウト
いくつかの実施形態では、本発明の拡張ＴＩＬは、タンパク質発現を一過的に変化させるために、各々本明細書で提供されるように、閉鎖滅菌製造プロセス中を含む、拡張ステップ前、拡張ステップ中、または拡張ステップ後にさらに操作される。いくつかの実施形態では、一過的に変化したタンパク質発現は、一過性の遺伝子編集によるものである。いくつかの実施形態では、本発明の拡張ＴＩＬは、ＴＩＬにおけるタンパク質発現を一過的に変化させることができる転写因子（ＴＦ）及び／または他の分子で処理される。いくつかの実施形態では、タンパク質発現を一過的に変化させることができるＴＦ及び／または他の分子は、腫瘍抗原の発現の変化及び／またはＴＩＬ集団における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の数の変化を提供する。

ある特定の実施形態では、方法は、ＴＩＬ集団を遺伝子編集することを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、及び／または第３のＴＩＬ集団を遺伝子編集することを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のタンパク質の発現の促進または１つ以上のタンパク質の発現の阻害、ならびに一組のタンパク質の促進及び別の組のタンパク質の阻害の両方の組み合わせの同時発生のために、リボ核酸（ＲＮＡ）挿入、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）または低分子（もしくは短）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）のＴＩＬ集団への挿入などのヌクレオチド挿入による遺伝子編集を含む。

いくつかの実施形態では、本発明の拡張ＴＩＬは、タンパク質発現の一過性の変化を受ける。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、第１の拡張前にバルクＴＩＬ集団において生じる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、第１の拡張後にバルクＴＩＬ集団において生じる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、第２の拡張前にバルクＴＩＬ集団において生じる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、第２の拡張後に生じる。

ある実施形態では、ＴＩＬ集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、エレクトロポレーションステップを含む。エレクトロポレーション法は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｔｓｏｎｇ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．１９９１，６０，２９７－３０６及び米国特許出願公開第２０１４／０２２７２３７Ａ１号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションステップを含む。リン酸カルシウムトランスフェクション法（リン酸カルシウムＤＮＡ沈殿、細胞表面コーティング、及びエンドサイトーシス）は、当該技術分野で知られており、Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９７３，５２，４５６－４６７、Ｗｉｇｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９７９，７６，１３７３－１３７６、及びＣｈｅｎ ａｎｄ Ｏｋａｙａｒｅａ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９８７，７，２７４５－２７５２、ならびに米国特許第５，５９３，８７５号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、リポソームトランスフェクションステップを含む。リポソームトランスフェクション法、例えば、カチオン性脂質Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－ｎ，ｎ，ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）及びジオレオイルホスホチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）の１：１（ｗ／ｗ）リポソーム製剤を用いる方法は、当該技術分野において既知であり、Ｒｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９１，１０，５２０－５２５及びＦｅｌｇｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８７，８４，７４１３－７４１７、ならびに米国特許第５，２７９，８３３号、同第５，９０８，６３５号、同第６，０５６，９３８号、同第６，１１０，４９０号、同第６，５３４，４８４号、及び同第７，６８７，０７０号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団におけるタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、米国特許第５，７６６，９０２号、同第６，０２５，３３７号、同第６，４１０，５１７号、同第６，４７５，９９４号、及び同第７，１８９，７０５号に記載されている方法を使用するトランスフェクションステップを含み、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬを含む、本発明のＴＩＬは、国際特許出願第ＷＯ２０１９／１３６４５６Ａ１号または同第ＷＯ２０１９／２１０１３１Ａ１号に記載の方法を使用して、１つ以上の遺伝子の発現を一過性または永続的に抑制するようにさらに修飾され、ＴＩＬを遺伝的に編集して、ＰＤ－１及びＣＴＬＡ－４をコードする遺伝子などの特定の標的遺伝子をノックアウトするためにそこに記載されている方法を含む、各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、幹細胞メモリーＴ細胞（ＴＳＣＭ）の増加をもたらす。ＴＳＣＭは、抗原を経験したセントラルメモリーＴ細胞の初期前駆細胞である。ＴＳＣＭは、一般に、幹細胞を定義する長期生存、自己再生、及び多分化能を示し、一般に、効果的なＴＩＬ製品の生成に望ましいものである。ＴＳＣＭは、養子細胞移植のマウスモデルにおいて他のＴ細胞サブセットと比較して増強された抗腫瘍活性を示している。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、高い割合のＴＳＣＭを含む組成を有するＴＩＬ集団をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＳＣＭパーセンテージの少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＩＬ集団中のＴＳＣＭの少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のＴＳＣＭを有するＴＩＬ集団をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％のＴＳＣＭを有する治療的ＴＩＬ集団をもたらす。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、抗原を経験したＴ細胞の幼若化をもたらす。いくつかの実施形態では、幼若化には、例えば、増加した増殖、増加したＴ細胞活性化、及び／または増加した抗原認識が含まれる。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、腫瘍由来のＴＣＲレパートリーを保存するために、Ｔ細胞の大部分における発現を変化させる。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、腫瘍由来のＴＣＲレパートリーを変化させない。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、腫瘍由来のＴＣＲレパートリーを維持する。

いくつかの実施形態では、タンパク質の一過性の変化は、特定の遺伝子の発現の変化をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１（ＰＤＣＤ１またはＣＣ２７９とも称される）、ＴＧＦＢＲ２、ＣＣＲ４／５、ＣＢＬ－Ｂ（ＣＢＬＢ及びＣｂｌ－ｂとしても知られる）、ＣＩＳＨ、ＣＣＲ（キメラ共刺激受容体）、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＮＯＴＣＨ１／２ ＩＣＤ、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＳＣＲ３、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１α）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ１－β）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＸＣＬ１／ＣＸＣＬ８、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ１７、ＣＸＣＬ１／ＣＸＣＬ８、ＶＨＬ、ＣＤ４４、ＰＩＫ３ＣＤ、ＳＯＣＳ１、胸腺細胞選択関連高移動度群（ＨＭＧ）ボックス（ＴＯＸ）、アンキリンリピートドメイン１１（ＡＮＫＲＤ１１）、ＢＣＬ６コリプレッサー（ＢＣＯＲ）、及び／またはｃＡＭＰタンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）を含むが、これらに限定されない遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ＴＧＦＢＲ２、ＣＣＲ４／５、ＣＢＬ－Ｂ、ＣＩＳＨ、ＣＣＲ（キメラ共刺激受容体）、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＮＯＴＣＨ１／２ ＩＣＤ、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＳＣＲ３、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１α）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ１－β）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＸＣＬ１／ＣＸＣＬ８、ＣＣＬ２２、ＣＣＬ１７、ＣＸＣＬ１／ＣＸＣＬ８、ＶＨＬ、ＣＤ４４、ＰＩＫ３ＣＤ、ＳＯＣＳ１、胸腺細胞選択関連高移動度群（ＨＭＧ）ボックス（ＴＯＸ）、アンキリンリピートドメイン１１（ＡＮＫＲＤ１１）、ＢＣＬ６コリプレッサー（ＢＣＯＲ）、及び／またはｃＡＭＰタンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）からなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＧＦＢＲ２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ４／５を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＢＬ－Ｂを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＩＳＨを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ（キメラ共刺激受容体）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＩＬ－２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＩＬ－１２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＩＬ－１５を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＩＬ－２１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＮＯＴＣＨ１／２ ＩＣＤを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＩＭ－３を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＬＡＧ－３を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、ＴＩＧＩＴを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＧＦβを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ４を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ５を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＳＣＲ３を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１α）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＬ４（ＭＩＰ１－β）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＬ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＬ８を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＬ２２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＬ１７を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、ＶＨＬを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ４４を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＩＫ３ＣＤを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＳＯＣＳ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、胸腺細胞選択関連高移動度群（ＨＭＧ）ボックス（ＴＯＸ）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、アンキリンリピートドメイン１１（ＡＮＫＲＤ１１）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、ＢＣＬ６コリプレッサー（ＢＣＯＲ）を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ｃＡＭＰタンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）を標的とする。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ケモカイン受容体の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、一過性タンパク質発現によって過剰発現されるケモカイン受容体は、ＣＣＬ２（ＭＣＰ－１）、ＣＣＬ３（ＭＩＰ－１α）、ＣＣＬ４（ＭＩＰ１－β）、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ８、ＣＣＬ２２、及び／またはＣＣＬ１７を含むが、これらに限定されないリガンドを有する受容体を含む。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβＲ２、及び／またはＴＧＦβの発現の低下及び／または減少をもたらす（例えば、ＴＧＦβ経路の遮断をもたらすことを含む）。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＢＬ－Ｂの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＩＳＨの発現の低下及び／または減少をもたらす。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、例えば、腫瘍部位へのＴＩＬの輸送または移動を改善するために、ケモカイン受容体の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ（キメラ共刺激受容体）の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、及び／またはＣＳＣＲ３からなる群から選択されるケモカイン受容体の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、膜結合インターロイキンを含む、インターロイキンの発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１からなる群から選択されるインターロイキンの発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。例えば、いくつかの実施形態では、膜結合ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１（ｍｂＩＬ－２、ｍｂＩＬ－１２、ｍｂＩＬ－１５、及び／またはｍｂＩＬ－２１、ならびに一本鎖ｍｂＩＬ－１２などの一本鎖バリアント）のエレクトロポレーションは、単独で、または本明細書に記載のＣＣＲ及びケモカイン受容体と組み合わせて、また単独で、または本明細書に記載の遺伝子のノックダウンもしくはノックアウトと組み合わせて、本発明のＴＩＬに含まれ得る。前述に関連する組成物及び方法は、本明細書及びＺｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ ２０２０，８，ｅ０００２１０、国際特許公開第ＷＯ２０２０／１２３７１６Ａ１号、及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１７／０２９１９３４Ａ１号（これらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＮＯＴＣＨ１／２ ＩＣＤの発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＶＨＬの発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ４４の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＩＫ３ＣＤの発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＳＯＣＳ１の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ｃＡＭＰタンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）の発現の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ｃＡＭＰタンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）の発現の低下及び／または減少をもたらす。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される２つの分子の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ならびにＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つの分子の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、ＴＩＭ－３、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ならびにＬＡＧ－３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、ＴＩＭ－３、及びそれらの組み合わせのうちの１つの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１及びＬＡＧ－３の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１及びＣＩＳＨの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１及びＣＢＬ－Ｂの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＬＡＧ－３及びＣＩＳＨの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＬＡＧ－３及びＣＢＬ－Ｂの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＩＳＨ及びＣＢＬ－Ｂの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＩＭ－３及びＰＤ－１の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＩＭ－３及びＬＡＧ－３の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＩＭ－３及びＣＩＳＨの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＩＭ－３及びＣＢＬ－Ｂの発現の低下及び／または減少をもたらす。

いくつかの実施形態では、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される接着分子は、ガンマレトロウイルスまたはレンチウイルス法によって、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、または採取されたＴＩＬ集団に挿入される（例えば、接着分子の発現が増加する）。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の低下及び／または減少、ならびにＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の低下及び／または減少、ならびにＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、ＰＧＣ１α、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはｃ－Ｊｕｎを含むが、これらに限定されない遺伝子を標的とするタンパク質発現の安定したまたは一過性の変化のためにさらに遺伝子修飾される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ＣＤ４０Ｌ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子を標的とするタンパク質発現の変化のためにさらに遺伝子修飾される。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＨＰＫ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＹＡＰ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＴＰＮ２２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＢＬ－Ｂを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＧＣ１アルファを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ３を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ４を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ５を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ６を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸ３ＣＲ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ１を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ２を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ４を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ５を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ６を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ７を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ８を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ９を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ１０を標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性変化は、ＢＡＴＦを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ｃ－Ｊｕｎを標的とする。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ４０Ｌを標的とする。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分子の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される２つ以上の分子の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される３つ以上の分子の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される４つ以上の分子の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８、ＨＰＫ１及び／またはＹＡＰ１の発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＨＰＫ１の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＹＡＰ１の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＴＰＮ２２の発現の低下及び／または減少、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＢＬ－Ｂの発現の低下及び／または減少、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の分子の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される２つ以上の分子の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化はＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される３つ以上の分子の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化はＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される４つ以上の分子の増加及び／または過剰発現をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される５つ以上の分子の増加及び／または過剰発現をもたらす。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＤ３８の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＨＰＫ１の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＹＡＰ１の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＴＰＮ２２の発現の低下及び／または減少、ならびにＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＢＬ－Ｂの発現の低下及び／または減少、ならびにＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせの発現の増加及び／または増強をもたらす。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸ３ＣＲ１、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、ｃ－Ｊｕｎ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される分子の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＰＧＣ１アルファの発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファの発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ１の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ２の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ３の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ４の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ５の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸＣＲ６の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＸ３ＣＲ１の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ１の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ２の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ４の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ５の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ６の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ７の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ８の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ９の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＣＣＲ１０の発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＢＡＴＦの発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ｃ－Ｊｕｎの発現の増加及び／または増強、ならびにＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、ＣＢＬ－Ｂ、及びそれらの組み合わせの発現の低下及び／または減少をもたらす。

いくつかの実施形態では、発現が約５％、約１０％、約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８０％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９０％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９９％減少する。

いくつかの実施形態では、発現が約５％、約１０％、約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８５％、約９０％、または約９５％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８０％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８５％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９０％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９５％増加する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９９％増加する。

いくつかの実施形態では、タンパク質発現の一過性の変化は、ＴＩＬにおけるタンパク質発現を一過的に変化させることができる転写因子（ＴＦ）及び／または他の分子でのＴＩＬの処理によって誘導される。いくつかの実施形態では、ＳＱＺベクターを含まないマイクロ流体プラットフォームが、タンパク質発現を一過的に変化させることができる転写因子（ＴＦ）及び／または他の分子の細胞内送達のために用いられる。かかる方法は、転写因子を含むタンパク質をＴ細胞を含む様々な初代ヒト細胞に送達する能力を示し、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／００９３０７３Ａ１号、同第ＵＳ２０１８／０２０１８８９Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１９／００１７０７２Ａ１号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。かかる方法は、ＴＩＬ集団を、転写因子（ＴＦ）及び／または一過性タンパク質発現を誘導することができる他の分子に曝露するために本発明で用いることができ、一過性タンパク質発現を誘導することができる当該ＴＦ及び／または他の分子は、腫瘍抗原の発現の増加及び／またはＴＩＬ集団における腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の数の増加をもたらし、それ故に、ＴＩＬ集団の再プログラミング及び再プログラミングされていないＴＩＬ集団と比較して再プログラミングされたＴＩＬ集団の治療的有効性の増加をもたらす。いくつかの実施形態では、再プログラミングは、本明細書に記載されるように、ＴＩＬ開始集団またはＴＩＬ前集団（すなわち、再プログラミング前の）集団と比較して、エフェクターＴ細胞及び／またはセントラルメモリーＴ細胞の亜集団の増加をもたらす。

いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）には、ＴＣＦ－１、ＮＯＴＣＨ１／２ ＩＣＤ、ＭＹＢ、ＢＡＴＦ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはＣ－Ｊｕｎが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、ＴＣＦ－１である。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、ＮＯＴＣＨ１／２ ＩＣＤである。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、ＭＹＢである。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、ＢＡＴＦである。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、ｃ－Ｊｕｎである。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、ＣＤ４０Ｌである。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、さらなるＴＩＬ再プログラミングを誘導するために、市販のＫＮＯＣＫＯＵＴ Ｓｅｒｕｍ Ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ（Ｇｉｂｃｏ／ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）などの誘導多能性幹細胞培養物（ｉＰＳＣ）とともに投与される。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、さらなるＴＩＬ再プログラミングを誘導するために、ｉＰＳＣカクテルとともに投与される。いくつかの実施形態では、転写因子（ＴＦ）は、ｉＰＳＣカクテルなしで投与される。いくつかの実施形態では、再プログラミングは、ＴＳＣＭのパーセンテージの増加をもたらす。いくつかの実施形態では、再プログラミングは、ＴＳＣＭのパーセンテージの約５％、約１０％、約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％ＴＳＣＭの増加をもたらす。

いくつかの実施形態では、上記のようにタンパク質発現を一過的に変化させる方法は、ＣＣＲを発現することが本明細書の他の箇所に記載されるような遺伝子修飾などの、ＴＩＬの集団を遺伝子修飾する方法と組み合わせられてもよく、１つ以上のタンパク質の産生のための遺伝子の安定した組み込みステップを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾するステップを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、及び／または第３のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、レトロウイルス形質導入ステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、レンチウイルス形質導入ステップを含む。レンチウイルス形質導入系は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｌｅｖｉｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ‘ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２００６，１０３，１７３７２－７７、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７，１５，８７１－７５、Ｄｕｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９９８，７２，８４６３－７１、及び米国特許第６，６２７，４４２号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、ガンマレトロウイルス形質導入ステップを含む。ガンマレトロウイルス形質導入系は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｃｅｐｋｏ ａｎｄ Ｐｅａｒ，Ｃｕｒ．Ｐｒｏｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９６，９．９．１－９．９．１６に記載されており、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、トランスポゾン媒介遺伝子導入ステップを含む。トランスポゾン媒介遺伝子導入系は、当該技術分野で知られており、トランスポザーゼが、ＤＮＡ発現ベクターとしてまたは発現可能なＲＮＡもしくはタンパク質として提供される系を含み、これにより、トランスポザーゼ、例えば、ｍＲＮＡ（例えば、キャップ及びポリＡ尾部を含むｍＲＮＡ）として提供されるトランスポザーゼの長期発現がトランスジェニック細胞で起こらないようになる。ＳＢ１０、ＳＢ１１、及びＳＢ１００ｘなどのサケ科型Ｔｅｌ様トランスポザーゼ（ＳＢまたはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼ）を含む好適なトランスポゾン媒介遺伝子導入系、ならびに増加した酵素活性を有する操作された酵素は、例えば、Ｈａｃｋｅｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１０，１８，６７４－８３及び米国特許第６，４８９，４５８号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬ中のタンパク質発現の一過性の変化は、短干渉ＲＮＡまたはサイレンシングＲＮＡとして知られることもある、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、一般に１９～２５塩基対長の二本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）において使用され、相補的なヌクレオチド配列を有する特定の遺伝子の発現に干渉する。ｓｉＲＮＡを使用して、本発明によりＣＣＲにも修飾されるＴＩＬにおける遺伝子を一過的にノックダウンすることができる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬにおけるタンパク質発現の一過性の変化は、高パーセンテージの２′－ＯＨ置換（典型的にはフッ素または－ＯＣＨ_３）を有する化学的に合成された非対称ｓｉＲＮＡ二重鎖である自己送達ＲＮＡ干渉（ｓｄＲＮＡ）によって誘導され、これはテトラエチレングリコール（ＴＥＧ）リンカーを使用してその３′末端でコレステロールに複合された、２０ヌクレオチドアンチセンス（ガイド）鎖及び１３～１５塩基センス（パッセンジャー）鎖を含む。短干渉ＲＮＡまたはサイレンシングＲＮＡとして知られることもある、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、一般に１９～２５塩基対長の二本鎖ＲＮＡ分子である。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）において使用され、相補的なヌクレオチド配列を有する特定の遺伝子の発現に干渉する。ｓｄＲＮＡは、共有結合及び疎水的に修飾されたＲＮＡｉ化合物であり、細胞に侵入するために送達媒体を必要としない。ｓｄＲＮＡは、一般に、最小限の二本鎖領域を有する非対称の化学修飾された核酸分子である。ｓｄＲＮＡ分子は、典型的に一本鎖領域及び二本鎖領域を含み、分子の一本鎖領域及び二本鎖領域の両方に様々な化学修飾を含み得る。加えて、ｓｄＲＮＡ分子は、本明細書に記載されているように、従来の高度なステロール型分子などの疎水性複合体に結合することができる。ｓｄＲＮＡ及びかかるｓｄＲＮＡを作製するための関連方法は、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１６／０３０４８７３Ａ１号、同第ＵＳ２０１９／０２１１３３７Ａ１号、同第ＵＳ２００９／０１３１３６０Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１９／００４８３４１Ａ１号、ならびに米国特許第１０，６３３，６５４号及び同第１０，９１３，９４８Ｂ２号（これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）にも広く記載されている。ｓｄＲＮＡ構造、化学、標的化位置、配列の好み等を最適化するために、ｓｄＲＮＡ力価予測用のアルゴリズムが開発及び利用されている。これらの分析に基づいて、機能的なｓｄＲＮＡ配列は、一般に、１μＭの濃度で７０％を超える発現の減少を有すると定義されており、確率は４０％を超える。

二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＲＮＡ）は、一般に、ＲＮＡの相補鎖の対、一般にセンス（パッセンジャー）鎖及びアンチセンス（ガイド）鎖を含む任意の分子を定義するために使用することができ、一本鎖オーバーハング領域を含み得る。ｓｉＲＮＡとは対照的に、ｄｓＲＮＡという用語は、一般に、ダイサーを含む切断酵素系の作用によりより大きいｄｓＲＮＡ分子から放出されるｓｉＲＮＡ分子の配列を含む前駆体分子を指す。

いくつかの実施形態では、方法は、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡの使用を含む、ＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬを含む、ＴＩＬの集団におけるタンパク質発現の一過性の変化を含む。ｓｉＲＮＡ及びｓｄＲＮＡを使用する方法は、Ｋｈｖｏｒｏｖａ ａｎｄ Ｗａｔｔｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０１７，３５，２３８－２４８、Ｂｙｒｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｃｕｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２０１３，２９，８５５－８６４、及びＬｉｇｔｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１８，２６，１４８２－９３（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ある実施形態では、ｓｉＲＮＡの送達は、エレクトロポレーションまたは細胞膜破壊（スクイーズまたはＳＱＺ法など）を使用して達成される。ある実施形態では、ＴＩＬ集団へのｓｄＲＮＡの送達は、エレクトロポレーション、ＳＱＺ、または他の方法を使用せず、代わりに、ＴＩＬ集団が培地中１μＭ／１０，０００ＴＩＬの濃度でｓｄＲＮＡに曝露される１～３日の期間を使用して達成される。ある特定の実施形態では、方法は、ＴＩＬ集団を培地中１μＭ／１０，０００ＴＩＬの濃度のｓｄＲＮＡに１～３日間曝露することを含む、ＴＩＬ集団へのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡの送達を含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団へのｓｄＲＮＡの送達は、ＴＩＬ集団が培地中１０μＭ／１０，０００ＴＩＬの濃度でｓｄＲＮＡに曝露される１～３日の期間を使用して達成される。ある実施形態では、ＴＩＬ集団へのｓｄＲＮＡの送達は、ＴＩＬ集団が培地中５０μＭ／１０，０００ＴＩＬの濃度でｓｄＲＮＡに曝露される１～３日の期間を使用して達成される。ある実施形態では、ＴＩＬ集団へのｓｄＲＮＡの送達は、ＴＩＬ集団が培地中０．１μＭ／１０，０００ＴＩＬ～５０μＭ／１０，０００ＴＩＬの濃度でｓｄＲＮＡに曝露される１～３日の期間を使用して達成される。ある実施形態では、ＴＩＬ集団へのｓｄＲＮＡの送達は、ＴＩＬ集団が培地中０．１μＭ／１０，０００ＴＩＬ～５０μＭ／１０，０００ＴＩＬの濃度でｓｄＲＮＡに曝露される１～３日の期間を使用して達成され、ｓｄＲＮＡへの曝露は、培地に新鮮なｓｄＲＮＡを添加することによって２、３、４、または５回行われる。他の好適なプロセスは、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０１１／００３９９１４Ａ１号、同第ＵＳ２０１３／０１３１１４１Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１３／０１３１１４２Ａ１号、ならびに米国特許第９，０８０，１７１号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、製造中にＴＩＬ集団に挿入される。いくつかの実施形態では、ｓｄＲＮＡは、ＮＯＴＣＨ１／２ ＩＣＤ、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４ ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＴＧＦβ、ＴＧＦＢＲ２、ｃＡＭＰプロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）、ＢＡＦＦ ＢＲ３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及び／またはＰＴＰＮ２２に干渉するＲＮＡをコードする。いくつかの実施形態では、発現の減少は、例えば、フローサイトメトリー及び／またはｑＰＣＲによって評価される、遺伝子サイレンシングのパーセンテージに基づいて決定される。いくつかの実施形態では、発現が約５％、約１０％、約１０％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８５％、約９０％、または約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８０％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約８５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９０％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９５％減少する。いくつかの実施形態では、発現が少なくとも約９９％減少する。

ｓｉＲＮＡの化学修飾に基づく自己送達可能なＲＮＡｉ技術を本発明の方法とともに用いて、本明細書に記載されるように、ｓｄＲＮＡをＴＩＬに首尾よく送達することができる。非対称ｓｉＲＮＡ構造及び疎水性リガンドとの骨格修飾の組み合わせ（例えば、Ｌｉｇｔｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１８，２６，１４８２－９３及び米国特許出願公開第２０１６／０３０４８７３Ａ１（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）を参照）は、ｓｄＲＮＡのヌクレアーゼ安定性を利用して、培養培地に単純に添加することによって、追加の製剤及び方法なしに、ｓｄＲＮＡが培養された哺乳類細胞に浸透することを可能にする。この安定性により、単に培地中のｓｄＲＮＡの活性濃度を維持することによって、標的遺伝子活性の一定レベルのＲＮＡｉを介した減少を支援することができる。理論に拘束されることはないが、ｓｄＲＮＡの骨格安定化は、非分裂細胞で数ヶ月間続く可能性のある遺伝子発現効果の延長された低減を提供する。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの９５％を超えるトランスフェクション効率及び様々な特定のｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡによる標的の発現の減少が起こる。いくつかの実施形態では、いくつかの未修飾リボース残基を含むｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＲＮＡｉ効果の効力及び／または寿命を増加させるために、完全に修飾された配列で置き換えられた。いくつかの実施形態では、発現効果の減少は、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間、５日間、６日間、７日間、または８日間以上維持される。いくつかの実施形態では、発現効果の減少は、ＴＩＬのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ処理後１０日以上で低下する。いくつかの実施形態では、標的発現の発現の７０％を超える減少が維持される。いくつかの実施形態では、標的発現の発現の７０％を超える減少が維持されるＴＩＬ。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路における発現の減少により、ＴＩＬがより強力なインビボ効果を示すことが可能になり、これは、いくつかの実施形態では、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の抑制効果の回避に起因する。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡによるＰＤ－１の発現の減少は、ＴＩＬ増殖の増加をもたらす。

いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、標的遺伝子の発現の７０％の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、標的遺伝子の発現の７５％の減少を示す。
いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、標的遺伝子の発現の８０％の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、標的遺伝子の発現の８５％の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、標的遺伝子の発現の９０％の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、標的遺伝子の発現の９５％の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、標的遺伝子の発現の９９％の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約０．２５μＭ～約４μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約０．２５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約０．５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約０．７５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約１．０μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約１．２５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約１．５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約１．７５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約２．０μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約２．２５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約２．５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約２．７５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約３．０μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約３．２５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約３．５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約３．７５μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。いくつかの実施形態では、本発明で使用されるｓｄＲＮＡ配列は、約４．０μＭの濃度で送達された場合、標的遺伝子の発現の減少を示す。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチド剤は、治療剤の安定性及び／または有効性を増加させ、かつ治療される細胞または組織へのオリゴヌクレオチドの効率的な送達をもたらすための１つ以上の修飾を含む。かかる修飾には、２’－Ｏ－メチル修飾、２’－Ｏ－フルロ修飾、ジホスホロチオエート修飾、２’Ｆ修飾ヌクレオチド、２’－Ｏ－メチル修飾、及び／または２’デオキシヌクレオチドが含まれ得る。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、例えば、ステロール、コレステロール、ビタミンＤ、ナフチル、イソブチル、ベンジル、インドール、トリプトファン、及び／またはフェニルを含む１つ以上の疎水性修飾を含むように修飾される。いくつかの実施形態では、化学修飾ヌクレオチドは、ホスホロチオエート、２’－Ｏ－メチル、２’デオキシ、疎水性修飾及びホスホロチオエートの組み合わせである。いくつかの実施形態では、糖が修飾され得、修飾された糖には、Ｄ－リボース、２’－Ｏ－アルキル（２’－Ｏ－メチル及び２’－０－エチルを含む）、すなわち、２’－アルコキシ、２’－アミノ、２’－Ｓ－アルキル、２’－ハロ（２’－フルオロを含む）、Ｔ－メトキシエトキシ、２’－アリルオキシ（－ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２）、２’－プロパルギル、２’－プロピル、エチニル、エテニル、プロペニル、及びシアノなどが含まれ得るが、これらに限定されない。一実施形態では、糖部分は、ヘキソースであり得、Ａｕｇｕｓｔｙｎｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．１９９２，１８，４７１１（この開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているようにオリゴヌクレオチドに組み込まれ得る。

いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドは、その全長にわたって二本鎖であり、すなわち、分子のいずれかの末端にも一本鎖配列が突出しておらず、すなわち、平滑末端である。いくつかの実施形態では、個々の核酸分子は、異なる長さであり得る。言い換えれば、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドは、その全長にわたって二本鎖ではない。例えば、２つの別個の核酸分子が使用される場合、アンチセンス配列を含むそれらの分子の一方、例えば、第１の分子は、それにハイブリダイズする（分子の一部分を一本鎖のままにする）第２の分子よりも長い可能性がある。いくつかの実施形態では、単一の核酸分子が使用される場合、いずれかの末端の分子の一部分は、一本鎖のままであり得る。

いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドは、ミスマッチ及び／またはループもしくはバルジを含むが、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約７０％にわたって二本鎖である。いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約８０％にわたって二本鎖である。別の実施形態では、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約９０％～９５％にわたって二本鎖である。いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドは、オリゴヌクレオチドの長さの少なくとも約９６％～９８％にわたって二本鎖である。いくつかの実施形態では、本発明の二本鎖オリゴヌクレオチドは、少なくともまたは最大１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５のミスマッチを含む。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドは、例えば、米国特許第５，８４９，９０２号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように３’または５’結合を修飾することによって、ヌクレアーゼから実質的に保護され得る。例えば、オリゴヌクレオチドは、「ブロッキング基」を含めることによって耐性にすることができる。本明細書で使用される場合、「ブロッキング基」という用語は、合成のための保護基またはカップリング基のいずれかとして（例えば、ＦＩＴＣ、プロピル（ＣＨ_２－ＣＨ_２－ＣＨ_３）、グリコール（－０－ＣＨ_２－ＣＨ_２－Ｏ－）ホスフェート（ＰＯ_３ ^２’’）、リン酸水素、もしくはホスホロアミダイト）、オリゴヌクレオチドまたはヌクレオモノマーに結合され得る置換基（例えば、ＯＨ基以外）を指す。「ブロッキング基」は、修飾ヌクレオチド及び非ヌクレオチドエキソヌクレアーゼ耐性構造を含む、オリゴヌクレオチドの５’及び３’末端を保護する「末端ブロッキング基」または「エキソヌクレアーゼブロッキング基」も含み得る。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ内の隣接するポリヌクレオチドの少なくとも一部分は、代替の結合、例えば、ホスホロチオエート結合によって結合されている。

いくつかの実施形態では、化学修飾は、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡの細胞取り込みの少なくとも１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、１７５、１８０、１８５、１９０、１９５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、または５００増強をもたらし得る。いくつかの実施形態では、Ｃ残基またはＵ残基の少なくとも一方が疎水性修飾を含む。いくつかの実施形態では、複数のＣ及びＵが疎水性修飾を含む。いくつかの実施形態では、Ｃ及びＵの少なくとも１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または少なくとも９５％が疎水性修飾を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｃ及びＵのすべてが疎水性修飾を含む。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ分子は、プロトン化可能なアミンの組み込みにより増強されたエンドソーム放出を示す。いくつかの実施形態では、プロトン化可能なアミンは、センス鎖（ＲＩＳＣ負荷後に廃棄される分子の一部分）に組み込まれる。いくつかの実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ化合物は、二重鎖領域（１０～１５塩基長の効率的なＲＩＳＣ侵入に必要）及び４～１２ヌクレオチド長の一本鎖領域を１３ヌクレオチド二重鎖とともに含む非対称化合物を含む。いくつかの実施形態では、６ヌクレオチドの一本鎖領域が用いられる。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡの一本鎖領域は、２～１２個のホスホロチオエートヌクレオチド間結合（ホスホロチオエート修飾と称される）を含む。いくつかの実施形態では、６～８個のホスホロチオエートヌクレオチド間結合が用いられる。いくつかの実施形態では、本発明のｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ化合物は、安定性を提供し、かつＲＩＳＣ侵入と互換性がある固有の化学修飾パターンを含む。ガイド鎖は、例えば、ＲＩＳＣ侵入に干渉することなく安定性を確証する任意の化学修飾によって修飾することもできる。いくつかの実施形態では、ガイド鎖における化学修飾パターンは、２’Ｆが修飾され、かつ５’末端がリン酸化されたＣ及びＵヌクレオチドの大部分を含む。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡのヌクレオチドの少なくとも３０％が修飾されている。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡのヌクレオチドの少なくとも３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％が修飾されている。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡのヌクレオチドの１００％が修飾されている。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ分子は、最小の二本鎖領域を有する。いくつかの実施形態では、二本鎖である分子の領域は、８～１５ヌクレオチド長の範囲である。いくつかの実施形態では、二本鎖である分子の領域は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、二本鎖領域は、１３ヌクレオチド長である。ガイド鎖とパッセンジャー鎖との間に１００％の相補性が存在する場合もあれば、ガイド鎖とパッセンジャー鎖との間に１つ以上の不一致が存在する場合もある。いくつかの実施形態では、二本鎖分子の一端で、分子は、平滑末端であるか、または１ヌクレオチドのオーバーハングを有するかのいずれかである。分子の一本鎖領域は、いくつかの実施形態では、４～１２ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、一本鎖領域は、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態では、一本鎖領域は、４ヌクレオチド長未満または１２ヌクレオチド長超であることもできる。ある特定の実施形態では、一本鎖領域は、６または７ヌクレオチド長である。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ分子は、増加した安定性を有する。いくつかの事例では、化学修飾されたｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡ分子は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４時間以上、または２４時間超（任意の中間値を含む）の培地中での半減期を有する。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄ－ＲＮＡは、１２時間以上の培地中での半減期を有する。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、効力の増加及び／または毒性の低減のために最適化されている。いくつかの実施形態では、ガイド鎖及び／またはパッセンジャー鎖のヌクレオチド長、及び／またはガイド鎖及び／またはパッセンジャー鎖におけるホスホロチオエート修飾の数が、いくつかの態様では、ＲＮＡ分子の効力に影響を与え得る一方で、２’－フルオロ（２’Ｆ）修飾の２’－０－メチル（２’ＯＭｅ）修飾での置き換えは、いくつかの態様では、分子の毒性に影響を与え得る。いくつかの実施形態では、分子の２’Ｆ含有量の減少は、分子の毒性を低減すると予測される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ分子におけるホスホロチオエート修飾の数は、細胞への分子の取り込み、例えば、細胞への分子の受動的取り込みの効率に影響を及ぼし得る。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、２′Ｆ修飾を有しないが、それにもかかわらず、細胞取り込み及び組織浸透における同等の有効性を特徴とする。

いくつかの実施形態では、ガイド鎖は、およそ１８～１９ヌクレオチド長であり、およそ２～１４個のリン酸修飾を有する。例えば、ガイド鎖は、リン酸修飾された２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４個、または１４個超のヌクレオチドを含み得る。ガイド鎖は、ＲＩＳＣの侵入に干渉することなく増加した安定性を付与する１つ以上の修飾を含み得る。ホスホロチオエート修飾ヌクレオチドなどのリン酸修飾ヌクレオチドは、３’末端にあるか、５’末端にあるか、またはガイド鎖全体に広がっている可能性がある。いくつかの実施形態では、ガイド鎖の３’末端１０ヌクレオチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のホスホロチオエート修飾ヌクレオチドを含む。ガイド鎖は、分子全体に位置し得る２’Ｆ及び／または２’ＯＭｅ修飾も含み得る。いくつかの実施形態では、ガイド鎖の１位のヌクレオチド（ガイド鎖の最も５’側のヌクレオチド）は、２’ＯＭｅ修飾及び／またはリン酸化されている。ガイド鎖内のＣ及びＵヌクレオチドは、２’Ｆ修飾されていてもよい。例えば、１９ｎｔガイド鎖の２～１０位（または異なる長さのガイド鎖における対応する位置）のＣ及びＵヌクレオチドは、２’Ｆ修飾されていてもよい。ガイド鎖内のＣ及びＵヌクレオチドは、２’ＯＭｅ修飾されている場合もある。例えば、１９ｎｔガイド鎖の１１～１８位（または異なる長さのガイド鎖における対応する位置）のＣ及びＵヌクレオチドは、２’ＯＭｅ修飾されていてもよい。いくつかの実施形態では、ガイド鎖の最も３’側の末端のヌクレオチドは修飾されていない。ある特定の実施形態では、ガイド鎖内のＣ及びＵの大部分は２’Ｆ修飾されており、ガイド鎖の５’末端はリン酸化されている。他の実施形態では、１位及び１１～１８位のＣまたはＵは２’ＯＭｅ修飾されており、ガイド鎖の５’末端はリン酸化されている。他の実施形態では、位置１及び位置１１～１８のＣｓまたはＵｓは２’ＯＭｅ修飾されており、ガイド鎖の５’末端はリン酸化されており、２～１０位のＣまたはＵは２’Ｆ修飾されている。

自己送達可能なＲＮＡｉ技術は、追加の製剤または技法を必要とすることなくＲＮＡｉ剤（ｓｉＲＮＡ、ｓｄＲＮＡ、または他のＲＮＡｉ剤のいずれか）で細胞を直接トランスフェクトする方法を提供する。トランスフェクションが困難な細胞株をトランスフェクトする能力、高いインビボ活性、及び使用の単純さは、従来のｓｉＲＮＡベースの技法に優る重大な機能的利点を提示する組成物及び方法の特徴であり、したがって、ｓｄＲＮＡ法は、本発明のＴＩＬにおける標的遺伝子の発現を減少させる方法に関連するいくつかの実施形態で用いられる。ｓｄＲＮＡ法により、化学合成された化合物をエクスビボ及びインビボの両方で広範囲の一次細胞及び組織に直接送達することが可能になる。本明細書における本発明のいくつかの実施形態に記載のｓｄＲＮＡは、Ａｄｖｉｒｎａ ＬＬＣ（Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ，ＵＳＡ）から市販されている。

ｓｉＲＮＡ及びｓｄＲＮＡは、疎水的に修飾されたｓｉＲＮＡ－アンチセンスオリゴヌクレオチドハイブリッド構造として形成され得、例えば、Ｂｙｒｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ．，２０１３，２９，８５５－８６４（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドは、滅菌エレクトロポレーションを使用して本明細書に記載のＴＩＬに送達され得る。ある特定の実施形態では、方法は、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドを送達するためにＴＩＬ集団の滅菌エレクトロポレーションを含む。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドは、膜貫通送達システムと組み合わせて細胞に送達され得る。いくつかの実施形態では、この膜貫通送達システムは、脂質、ウイルスベクターなどを含む。いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチド剤は、自己送達ＲＮＡｉ剤であり、いかなる送達剤も必要としない。特定の実施形態では、方法は、ＴＩＬの集団にｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡオリゴヌクレオチドを送達するための膜貫通送達システムの使用を含む。

オリゴヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド組成物は、本明細書に記載のＴＩＬと接触し（例えば、接触させられ、本明細書では投与または送達されるとも称される）、ＴＩＬによって取り込まれる（ＴＩＬによる受動的取り込みを含む）。ｓｄＲＮＡは、第１の拡張中（例えば、ステップＢ）、第１の拡張後（例えば、ステップＣ中）、第２の拡張前または拡張中（例えば、ステップＤの前またはステップＤ中）、ステップＤ後及びステップＥにおける採取前、ステップＦにおける採取中または採取後、ステップＦにおける最終製剤化及び／または注入バッグへの移行前または最中、ならびにステップＦにおける任意の凍結保存ステップ前に、本明細書に記載のＴＩＬに添加され得る。さらに、ｓｄＲＮＡは、ステップＦにおける任意の凍結保存ステップから解凍した後に添加され得る。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及び／またはＰＴＰＮ２２を含む、本明細書に記載の１つ以上のｓｄＲＮＡ標的遺伝子が、１００ｎＭ～２０ｍＭ、２００ｎＭ～１０ｍＭ、５００ｎｍ～１ｍＭ、１μＭ～１００μＭ、及び１μＭ～１００μＭからなる群から選択される濃度でＴＩＬ及び他の薬剤を含む細胞培養培地に添加され得る。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＩＳＨ、及びＣＢＬ－Ｂを含む、本明細書に記載の１つ以上のｓｄＲＮＡ標的遺伝子は、０．１μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、０．５μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、０．７５μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、１μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、１．２５μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、１．５μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、２μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、５μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地、または１０μＭ ｓｄＲＮＡ／１０，０００ＴＩＬ／１００μＬ培地からなる群から選択される量でＴＩＬ及び他の薬剤を含む細胞培養培地に添加され得る。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及び／またはＰＴＰＮ２２を含む、本明細書に記載の１つ以上のｓｄＲＮＡ標的遺伝子は、ＲＥＰ前段階またはＲＥＰ段階中に１日２回、１日１回、２日毎、３日毎、４日毎、５日毎、６日毎、または７日毎にＴＩＬ培養物に添加され得る。

ｓｄＲＮＡを含む本発明のオリゴヌクレオチド組成物は、例えば、細胞培養培地にｓｄＲＮＡを高濃度で溶解し、かつ受動的取り込みが起こるのに十分な時間を許容することによって、拡張プロセス中に本明細書に記載のＴＩＬと接触することができる。ある特定の実施形態では、本発明の方法は、ＴＩＬ集団を、本明細書に記載のオリゴヌクレオチド組成物と接触させることを含む。ある特定の実施形態では、この方法は、オリゴヌクレオチド、例えば、ｓｄＲＮＡを細胞培養培地に溶解することと、細胞培養培地をＴＩＬ集団と接触させることとを含む。ＴＩＬは、本明細書に記載の第１の集団、第２の集団、及び／または第３の集団であり得る。

いくつかの実施形態では、オリゴヌクレオチドの細胞への送達は、リン酸カルシウム、ＤＭＳＯ、グリセロールもしくはデキストラン、エレクトロポレーションを含む好適な技術分野で認識される方法によって、またはトランスフェクションによって、例えば、当該技術分野で知られている方法、例えば、米国特許第４，８９７，３５５号、同第５，４５９，１２７号、同第５，６３１，２３７号、同第５，９５５，３６５号、同第５，９７６，５６７号、同第１０，０８７，４６４号、及び同第１０，１５５，９４５号、ならびにＢｅｒｇａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９９３，２１，３５６７（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載される方法を使用して、カチオン性、アニオン性、もしくは中性脂質組成物またはリポソームを使用して増強され得る。

いくつかの実施形態では、１つを超えるｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡが、標的遺伝子の発現を減少させるために使用されるいくつかの実施形態では、ＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＢＬ－Ｂ、ＬＡＧ－３、ＣＩＳＨ、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及び／またはＰＴＰＮ２２を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡのうちの１つ以上が一緒に使用される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１ ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、１つを超える遺伝子標的の発現を減少させるために、ＴＩＭ－３、ＣＢＬ－Ｂ、ＬＡＧ－３、及び／またはＣＩＳＨのうちの１つ以上とともに使用される。いくつかの実施形態では、ＬＡＧ－３ ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、両方の標的の遺伝子発現を減少させるために、ＣＩＳＨを標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡと組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、本明細書におけるＰＤ－１、ＴＩＭ－３、ＣＢＬ－Ｂ、ＬＡＧ－３、及び／またはＣＩＳＨのうちの１つ以上を標的とするｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、Ａｄｖｉｒｎａ ＬＬＣ（Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ，ＵＳＡ）または複数の他のベンダーから市販されている。

いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１を標的とし、別のｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、ＰＴＰＮ２２、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、ＴＩＭ－３、及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、ｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１、ならびにＬＡＧ－３、ＣＩＳＨ、ＣＢＬ－Ｂ、ＴＩＭ－３のうちの１つ、及びそれらの組み合わせから選択される遺伝子を標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＬＡＧ－３を標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＩＳＨを標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＢＬ－Ｂを標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＬＡＧ－３を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＩＳＨを標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＬＡＧ－３を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＢＬ－Ｂを標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＩＳＨを標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＢＬ－Ｂを標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＴＩＭ－３を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＰＤ－１を標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＴＩＭ－３を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＬＡＧ－３を標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＴＩＭ－３を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＩＳＨを標的とする。いくつかの実施形態では、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＴＩＭ－３を標的とし、１つのｓｉＲＮＡまたはｓｄＲＮＡは、ＣＢＬ－Ｂを標的とする。

本明細書で考察されたように、本発明の実施形態は、それらの治療効果を増強するために遺伝子編集を介して遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を提供する。本発明の実施形態は、１つ以上のタンパク質の発現の促進及び１つ以上のタンパク質の発現の阻害の両方、ならびにそれらの組み合わせのために、ＴＩＬ集団へのヌクレオチド挿入（ＲＮＡまたはＤＮＡ）による遺伝子編集を包含する。本発明の実施形態は、ＴＩＬを治療用集団に拡張するための方法も提供し、方法は、ＴＩＬを遺伝子編集することを含む。ＴＩＬ集団を遺伝子修飾するために使用され得るいくつかの遺伝子編集技術が存在し、それらは本発明による使用に好適である。かかる方法は、以下に記載の方法、ならびに本明細書の他の場所に記載のウイルス及びトランスポゾン方法を含む。ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを遺伝子修飾してＣＣＲを発現させる方法はまた、かかる遺伝子の安定したノックアウトまたはかかる遺伝子の一過性ノックダウンのいずれかを介して遺伝子の発現を抑制する修飾を含んでもよい。

ある実施形態では、この方法は、本明細書に記載の第１の集団、第２の集団、及び／または第３の集団におけるＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法を含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、１つ以上のタンパク質の産生または阻害（例えば、サイレンシング）のために遺伝子の安定した組み込みステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、エレクトロポレーションステップを含む。エレクトロポレーション法は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｔｓｏｎｇ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．１９９１，６０，２９７－３０６及び米国特許出願公開第２０１４／０２２７２３７Ａ１号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第５，０１９，０３４号、同第５，１２８，２５７号、同第５，１３７，８１７号、同第５，１７３，１５８号、同第５，２３２，８５６号、同第５，２７３，５２５号、同第５，３０４，１２０号、同第５，３１８，５１４号、同第６，０１０，６１３号、及び同第６，０７８，４９０号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものなどの当該技術分野で知られている他のエレクトロポレーション法が使用され得る。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、滅菌エレクトロポレーション法である。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、パルスエレクトロポレーション法である。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのＤＣ電気パルス列は、以下の特徴のうちの１つ、２つ、または３つを有する：（１）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス振幅が互いに異なる、（２）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス幅が互いに異なる、及び（３）少なくとも３つのパルスのうちの２つの第１のセットの第１のパルス間隔が、少なくとも３つのパルスのうちの２つの第２のセットの第２のパルス間隔とは異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス振幅が互いに異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス幅が互いに異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つの第１のセットの第１のパルス間隔が、少なくとも３つのパルスのうちの２つの第２のセットの第２のパルス間隔とは異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬにおける細孔形成を誘導するステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つのＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのＤＣ電気パルス列は、以下の特徴のうちの１つ、２つ、または３つを有する：（１）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス振幅が互いに異なる、（２）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス幅が互いに異なる、及び（３）少なくとも３つのパルスのうちの２つの第１のセットの第１のパルス間隔が、少なくとも３つのパルスのうちの２つの第２のセットの第２のパルス間隔とは異なり、これにより、誘導された細孔が比較的長期間にわたって持続され、ＴＩＬの生存率が維持される。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションステップを含む。リン酸カルシウムトランスフェクション法（リン酸カルシウムＤＮＡ沈殿、細胞表面コーティング、及びエンドサイトーシス）は、当該技術分野で知られており、Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９７３，５２，４５６－４６７、Ｗｉｇｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９７９，７６，１３７３－１３７６、及びＣｈｅｎ ａｎｄ Ｏｋａｙａｒｅａ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９８７，７，２７４５－２７５２、ならびに米国特許第５，５９３，８７５号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、リポソームトランスフェクションステップを含む。リポソームトランスフェクション法、例えば、カチオン性脂質Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－ｎ，ｎ，ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）及びジオレオイルホスホチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）の１：１（ｗ／ｗ）リポソーム製剤を用いる方法は、当該技術分野において既知であり、Ｒｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９１，１０，５２０－５２５及びＦｅｌｇｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８７，８４，７４１３－７４１７、ならびに米国特許第５，２７９，８３３号、同第５，９０８，６３５号、同第６，０５６，９３８号、同第６，１１０，４９０号、同第６，５３４，４８４号、及び同第７，６８７，０７０号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、米国特許第５，７６６，９０２号、同第６，０２５，３３７号、同第６，４１０，５１７号、同第６，４７５，９９４号、及び同第７，１８９，７０５号に記載の方法を使用するトランスフェクションステップを含み、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＴＩＬは、本明細書に記載のＴＩＬの第１の集団、第２の集団、及び／または第３の集団であり得る。

ある実施形態によれば、遺伝子編集プロセスは、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子での二本鎖または一本鎖切断の生成を媒介するプログラム可能なヌクレアーゼの使用を含み得る。かかるプログラム可能なヌクレアーゼは、特定のゲノム遺伝子座に切断を導入することによって正確なゲノム編集を可能にし、すなわち、ゲノム内の特定のＤＮＡ配列の認識に依存して、ヌクレアーゼドメインをこの位置に標的し、標的配列での二本鎖切断の生成を媒介する。ＤＮＡの二本鎖切断は、その後、内因性修復機構を切断部位に動員して、非相同末端結合（ＮＨＥＪ）または相同指向修復（ＨＤＲ）のいずれかによるゲノム編集を媒介する。したがって、切断の修復は、標的遺伝子産物を破壊する（例えば、サイレンス、抑制、または増強する）挿入／欠失変異の導入をもたらす可能性がある。

部位特異的ゲノム編集を可能にするために開発されたヌクレアーゼの主要なクラスには、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様ヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、及びＣＲＩＳＰＲ関連ヌクレアーゼ（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９）が含まれる。これらのヌクレアーゼシステムは、ＤＮＡ認識のモードに基づいて大きく２つのカテゴリーに分類され得、ＺＦＮ及びＴＡＬＥＮは、タンパク質－ＤＮＡ相互作用を介して特定のＤＮＡ結合を達成するが、Ｃａｓ９などのＣＲＩＳＰＲシステムは、標的ＤＮＡと直接塩基対を形成する短いＲＮＡガイド分子によって、かつタンパク質－ＤＮＡ相互作用によって特定のＤＮＡ配列を標的とする。例えば、Ｃｏｘ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１５，Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．２を参照されたい。

本発明のＴＩＬ拡張法に従って使用され得る遺伝子編集法の非限定的な例には、ＣＲＩＳＰＲ法、ＴＡＬＥ法、及びＺＦＮ法が含まれ、これらは以下でより詳細に説明される。ある実施形態によれば、ＴＩＬを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態（例えば、Ｇｅｎ２）に従って、または米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０２９９６４４Ａ１号及び同第ＵＳ２０２０／０１２１７１９Ａ１号、ならびに米国特許第１０，９２５，９００号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように実行することができ、方法は、増強された治療効果を提供することができるＴＩＬを生成するために、ＣＲＩＳＰＲ法、ＴＡＬＥ法、またはＺＦＮ法のうちの１つ以上によって、ＴＩＬの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。ある実施形態によれば、遺伝子編集されたＴＩＬは、インビトロでそれらを修飾されていないＴＩＬと比較することによって、例えば、修飾されていないＴＩＬと比較してインビトロでのエフェクター機能、サイトカインプロファイルなどを評価することによって、治療効果の改善について評価され得る。ある特定の実施形態では、この方法は、ＣＲＩＳＰＲ法、ＴＡＬＥ法、及び／またはＺＦＮ法を使用してＴＩＬ集団を遺伝子編集することを含む。

本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションは、ＣＲＩＳＰＲシステム、ＴＡＬＥＮシステム、及びＺＦＮシステムなどの遺伝子編集システムの送達のために使用される。本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションシステムは、フローエレクトロポレーションシステムである。本発明のいくつかの実施形態との使用に好適な、好適なフローエレクトロポレーションシステムの例は、市販のＭａｘＣｙｔｅ ＳＴＸシステムである。本発明との使用に好適であり得る、ＢＴＸ－Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓから入手可能なＡｇｉｌｅＰｕｌｓｅシステムもしくはＥＣＭ８３０、Ｃｅｌｌａｘｅｓｓ Ｅｌｅｋｔｒａ（Ｃｅｌｌｅｃｔｒｉｃｏｎ）、Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（Ｌｏｎｚａ／Ａｍａｘａ）、ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ ＭＸｃｅｌｌ（ＢＩＯＲＡＤ）、ｉＰｏｒａｔｏｒ－９６（Ｐｒｉｍａｘ）、またはｓｉＰＯＲＴｅｒ９６（Ａｍｂｉｏｎ）などのいくつかの代替の市販エレクトロポレーション機器が存在する。本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションシステムは、ＴＩＬ拡張法の残りとともに、滅菌閉鎖系を形成する。本発明のいくつかの実施形態では、エレクトロポレーションシステムは、本明細書に記載のパルスエレクトロポレーションシステムであり、ＴＩＬ拡張法の残りとともに、滅菌閉鎖系を形成する。

ＴＩＬを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態（例えば、Ｇｅｎ２）に従って、または米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０２９９６４４Ａ１号及び同第ＵＳ２０２０／０１２１７１９Ａ１号、ならびに米国特許第１０，９２５，９００号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように実施することができ、方法は、ＣＲＩＳＰＲ法（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９またはＣＲＩＳＰＲ／Ｃｐｆ１）によってＴＩＬの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。特定の実施形態によれば、ＴＩＬ拡張プロセス中のＣＲＩＳＰＲ法の使用は、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的ＴＩＬ集団の少なくとも一部分においてサイレンスまたは減少させる。あるいは、ＴＩＬ拡張プロセス中のＣＲＩＳＰＲ法の使用は、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的ＴＩＬ集団の少なくとも一部分において増強させる。

ＣＲＩＳＰＲは、ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ（クラスター化された定期的に間隔をあけた短いパリンドロミックリピート）の略語である。遺伝子編集のためにＣＲＩＳＰＲシステムを使用する方法は、本明細書ではＣＲＩＳＰＲ法とも称される。ＲＮＡ及びＣａｓタンパク質を組み込み、かつ本発明に従って使用され得るＣＲＩＳＰＲシステムには、３つの型：Ｉ型、ＩＩ型、及びＩＩＩ型がある。ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ（Ｃａｓ９によって例示される）は、最もよく特徴付けられているシステムのうちの１つである。

ＣＲＩＳＰＲ技術は、細菌及び古細菌（単細胞微生物のドメイン）の自然防御機構から適合された。これらの生物は、ＣＲＩＳＰＲ由来のＲＮＡ及びＣａｓ９を含む様々なＣａｓタンパク質を使用して、外来侵入物のＤＮＡを切り刻んで破壊することによって、ウイルス及び他の異物による攻撃を阻止する。ＣＲＩＳＰＲは、ヌクレオチド反復配列及びスペーサーの存在という２つの異なる特徴を有するＤＮＡの特殊な領域である。ヌクレオチドの反復配列は、ＣＲＩＳＰＲ領域全体に分布しており、外来ＤＮＡ（スペーサー）の短いセグメントが反復配列の間に散在している。ＩＩ型ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムでは、スペーサーは、ＣＲＩＳＰＲゲノム遺伝子座内に組み込まれ、転写され、短いＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）に処理される。これらのｃｒＲＮＡは、トランス活性化ｃｒＲＮＡ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）にアニーリングし、Ｃａｓタンパク質による病原性ＤＮＡの配列特異的切断及びサイレンシングを指示する。Ｃａｓ９タンパク質による標的認識には、ｃｒＲＮＡ内の「シード」配列、及びｃｒＲＮＡ結合領域の上流にある保存されたジヌクレオチドを含むプロトスペーサー隣接モチーフ（ＰＡＭ）配列が必要である。これにより、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムが再標的されて、ｃｒＲＮＡを再設計することにより、実質的にいずれのＤＮＡ配列も切断することができる。天然システムにおけるｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡは、遺伝子操作で使用するために、およそ１００ヌクレオチドの単一ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）に簡略化され得る。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼを発現するプラスミドと必要なｃｒＲＮＡ成分を同時送達することにより、ヒト細胞に直接運搬可能である。Ｃａｓタンパク質の異なるバリアント（例えば、Ｃｐｆ１などのＣａｓ９のオルソログ）を使用して、標的の制限を低減することができる。

ＣＲＩＳＰＲ法によりＴＩＬを永久に遺伝子編集することによってサイレンスまたは阻害され得る遺伝子の非限定的な例には、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ－３）、Ｃｉｓｈ、ＴＧＦβ、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＰＤＣＤ１、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３、ＴＯＸ、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及びＰＴＰＮ２２が含まれる。

ＣＲＩＳＰＲ法によりＴＩＬを永続的に遺伝子編集することによって増強され得る遺伝子の非限定的な例には、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ－２、ＩＬ１２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＣＲ１、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、及びｃ－Ｊｕｎが含まれる。

ＣＲＩＳＰＲ法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の例は、米国特許第８，６９７，３５９号、同第８，９９３，２３３号、同第８，７９５，９６５号、同第８，７７１，９４５号、同第８，８８９，３５６号、同第８，８６５，４０６号、同第８，９９９，６４１号、同第８，９４５，８３９号、同第８，９３２，８１４号、同第８，８７１，４４５号、同第８，９０６，６１６号、及び同第８，８９５，３０８号に記載されており、各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９及びＣＲＩＳＰＲ／Ｃｐｆ１を発現するためのプラスミドなどのＣＲＩＳＰＲ法を行うための資源は、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔなどの企業から市販されている。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ集団の遺伝子修飾は、米国特許第ＵＳ９７９０４９０号に記載されているＣＲＩＳＰＲ／Ｃｐｆ１システムを使用して行うことができ、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。

ＴＩＬを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態（例えば、Ｇｅｎ２）に従って、または米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０２９９６４４Ａ１号及び同第ＵＳ２０２０／０１２１７１９Ａ１号、ならびに米国特許第１０，９２５，９００号に記載されているように実施することができ、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれ、方法は、ＴＡＬＥ法によってＴＩＬの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。特定の実施形態によれば、ＴＩＬ拡張プロセス中のＴＡＬＥ法の使用は、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的ＴＩＬ集団の少なくとも一部分においてサイレンスまたは減少させる。あるいは、ＴＩＬ拡張プロセス中のＴＡＬＥ法の使用は、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的ＴＩＬ集団の少なくとも一部分において増強させる。

ＴＡＬＥは、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）を含む、転写活性化因子様エフェクタータンパク質を表す。遺伝子編集のためにＴＡＬＥシステムを使用する方法は、本明細書ではＴＡＬＥ法とも称され得る。ＴＡＬＥは、植物病原菌Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ属由来の天然に存在するタンパク質であり、各々単一の塩基対を認識する一連の３３～３５アミノ酸反復ドメインで構成されるＤＮＡ結合ドメインを含む。ＴＡＬＥ特異性は、反復可変二残基（ＲＶＤ）として知られる２つの超可変アミノ酸によって決定される。モジュラーＴＡＬＥ反復配列は、隣接するＤＮＡ配列を認識するために一緒に結合される。ＤＮＡ結合ドメイン内の特定のＲＶＤは、標的遺伝子座内の塩基を認識し、予測可能なＤＮＡ結合ドメインを組み立てるための構造的特徴を提供する。ＴＡＬＥのＤＮＡ結合ドメインは、ＩＩＳ型ＦｏｋＩエンドヌクレアーゼの触媒ドメインに融合して、標的可能なＴＡＬＥヌクレアーゼを作製する。部位特異的変異を誘導するために、１４～２０塩基対のスペーサー領域によって分離された２つの個々のＴＡＬＥＮアームがＦｏｋＩモノマーを密接に接近させて二量体化し、標的とされる二本鎖切断を産生する。

様々な組み立て方法を利用したいくつかの大規模な系統的研究により、ＴＡＬＥ反復配列を組み合わせて、実質的にすべてのユーザ定義配列を認識することができることが示されている。カスタム設計されたＴＡＬＥアレイも、Ｃｅｌｌｅｃｔｉｓ Ｂｉｏｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅ）、Ｔｒａｎｓｐｏｓａｇｅｎ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＫＹ，ＵＳＡ）、及びＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡ）から市販されている。本発明での使用に好適なＴＡＬＥ法及びＴＡＬＥＮ法は、米国特許公開第ＵＳ２０１１／０２０１１１８Ａ１号、同第ＵＳ２０１３／０１１７８６９Ａ１号、同第ＵＳ２０１３／０３１５８８４Ａ１号、同第ＵＳ２０１５／０２０３８７１Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１６／０１２０９０６Ａ１号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

ＴＡＬＥ法によりＴＩＬを永久に遺伝子編集することによってサイレンスまたは阻害され得る遺伝子の非限定的な例には、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ－３）、Ｃｉｓｈ、ＴＧＦβ、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＰＤＣＤ１、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３、ＴＯＸ、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及びＰＴＰＮ２２が含まれる。

ＴＡＬＥ法によりＴＩＬを永続的に遺伝子編集することによって増強され得る遺伝子の非限定的な例には、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ－２、ＩＬ１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＣＲ１、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ及びｃ－Ｊｕｎが含まれる。

ＴＡＬＥ法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の例は、米国特許第８，５８６，５２６号に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。

ＴＩＬを治療的集団に拡張するための方法は、本明細書に記載の方法のいずれかの実施形態に従って、または米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０２９９６４４Ａ１号及び同第ＵＳ２０２０／０１２１７１９Ａ１号、ならびに米国特許第１０，９２５，９００号に記載されているように実施することができ、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれ、方法は、ジンクフィンガーまたはジンクフィンガーヌクレアーゼ法によってＴＩＬの少なくとも一部を遺伝子編集することをさらに含む。特定の実施形態によれば、ＴＩＬ拡張プロセス中のジンクフィンガー法の使用は、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的ＴＩＬ集団の少なくとも一部においてサイレンスまたは減少させる。あるいは、ＴＩＬ拡張プロセス中のジンクフィンガー法の使用は、１つ以上の免疫チェックポイント遺伝子の発現を、治療的ＴＩＬ集団の少なくとも一部において増強させる。

個々のジンクフィンガーは、保存されたββα立体配置でおよそ３０個のアミノ酸を含む。αらせんの表面上のいくつかのアミノ酸は、典型的には、異なる選択性レベルでＤＮＡの主溝の３ｂｐと接触する。ジンクフィンガーは、２つのタンパク質ドメインを有する。第１のドメインは、ＤＮＡ結合ドメインであり、真核生物転写因子を含み、ジンクフィンガーを含む。第２のドメインは、ヌクレアーゼドメインであり、ＦｏｋＩ制限酵素を含み、ＤＮＡの触媒的切断を担っている。

個々のＺＦＮのＤＮＡ結合ドメインは、典型的には、３～６個の個々のジンクフィンガー反復配列を含み、各々９～１８塩基対を認識することができる。ジンクフィンガードメインが目的の標的部位に特異的である場合、合計１８塩基対を認識する３フィンガーＺＦＮの対でさえ、理論的には、哺乳動物ゲノムの単一遺伝子座を標的とすることができる。新たなジンクフィンガーアレイを生成するための１つの方法は、既知の特異性を有するより小さいジンクフィンガー「モジュール」を組み合わせることである。最も一般的なモジュラーアセンブリプロセスは、各々３塩基対のＤＮＡ配列を認識することができる３つの別個のジンクフィンガーを組み合わせて、９塩基対の標的部位を認識することができる３フィンガーアレイを生成することを含む。あるいは、オリゴマー化プールエンジニアリング（ＯＰＥＮ）などの選択ベースのアプローチを使用して、隣接するフィンガー間のコンテキスト依存的相互作用を考慮したランダム化ライブラリーから新たなジンクフィンガーアレイを選択することができる。操作されたジンクフィンガーは、Ｓａｎｇａｍｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）及びＳｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）から市販されている。

ジンクフィンガー法によりＴＩＬを永続的に遺伝子編集することによってサイレンスまたは阻害され得る遺伝子の非限定的な例には、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ－３）、Ｃｉｓｈ、ＴＧＦβ、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＰＰＰ２ＣＡ、ＰＰＰ２ＣＢ、ＰＴＰＮ６、ＰＴＰＮ２２、ＰＤＣＤ１、ＢＴＬＡ、ＣＤ１６０、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、ＣＲＴＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ７、ＳＩＧＬＥＣ９、ＣＤ２４４、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＴＮＦＲＳＦ１０Ａ、ＣＡＳＰ８、ＣＡＳＰ１０、ＣＡＳＰ３、ＣＡＳＰ６、ＣＡＳＰ７、ＦＡＤＤ、ＦＡＳ、ＳＭＡＤ２、ＳＭＡＤ３、ＳＭＡＤ４、ＳＭＡＤ１０、ＳＫＩ、ＳＫＩＬ、ＴＧＩＦ１、ＩＬ１０ＲＡ、ＩＬ１０ＲＢ、ＨＭＯＸ２、ＩＬ６Ｒ、ＩＬ６ＳＴ、ＥＩＦ２ＡＫ４、ＣＳＫ、ＰＡＧ１、ＳＩＴ１、ＦＯＸＰ３、ＰＲＤＭ１、ＢＡＴＦ、ＧＵＣＹ１Ａ２、ＧＵＣＹ１Ａ３、ＧＵＣＹ１Ｂ２、ＧＵＣＹ１Ｂ３、ＴＯＸ、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、ＣＤ３８、ＨＰＫ１、ＹＡＰ１、及びＰＴＰＮ２２が含まれる。

ジンクフィンガー法によりＴＩＬを永続的に遺伝子編集することによって増強され得る遺伝子の非限定的な例には、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸ３ＣＲ１、ＩＬ－２、ＩＬ１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、ＰＧＣ１アルファ、ＮＴ－ＰＧＣ１アルファ、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＣＲ１、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＢＡＴＦ、及びｃ－Ｊｕｎが含まれる。

ジンクフィンガー法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の例は、米国特許第６，５３４，２６１号、同第６，６０７，８８２号、同第６，７４６，８３８号、同第６，７９４，１３６号、同第６，８２４，９７８号、同第６，８６６，９９７号、同第６，９３３，１１３号、同第６，９７９，５３９号、同第７，０１３，２１９号、同第７，０３０，２１５号、同第７，２２０，７１９号、同第７，２４１，５７３号、同第７，２４１，５７４号、同第７，５８５，８４９号、同第７，５９５，３７６号、同第６，９０３，１８５号、及び同第６，４７９，６２６号に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。

ジンクフィンガー法によって標的遺伝子配列の発現を変化させるための、本発明の実施形態に従って使用され得るシステム、方法、及び組成物の他の例は、Ｂｅａｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ，２０１５，２３ １３８０－１３９０に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、高親和性ＴＣＲ、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＨＥＲ２、もしくはＮＹ－ＥＳＯ－１などの腫瘍関連抗原で標的とされるＴＣＲ、または腫瘍関連細胞表面分子（例えば、メソセリン）もしくは系統制限細胞表面分子（例えば、ＣＤ１９）に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むが、これらに限定されない追加の機能を含むように任意選択で遺伝子操作される。ある特定の実施形態では、この方法は、高親和性ＴＣＲ、例えば、ＭＡＧＥ－１、ＨＥＲ２、もしくはＮＹ－ＥＳＯ－１などの腫瘍関連抗原で標的とされるＴＣＲ、または腫瘍関連細胞表面分子（例えば、メソセリン）もしくは系統制限細胞表面分子（例えば、ＣＤ１９）に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含むようにＴＩＬ集団を遺伝子操作することを含む。適切には、ＴＩＬ集団は、本明細書に記載の第１の集団、第２の集団及び／または第３の集団であり得る。

いくつかの実施形態では、ＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体を発現するように修飾されたＴＩＬを含む本発明のＴＩＬは、任意選択で、例えば、米国特許出願公開第ＵＳ２０２１／００５２６４７Ａ１号またはＵＳ２０２０／０１７２８７９Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、膜結合ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、及び／またはＩＬ－２１を発現するように遺伝子操作される。

Ｅ．ＴＩＬ製造のための閉鎖系
本発明は、ＴＩＬ培養プロセス中に閉鎖系の使用を提供する。かかる閉鎖系は、微生物汚染の防止及び／または低減を可能にし、より少数のフラスコの使用を可能にし、コスト削減を可能にする。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、２つの容器を使用する。

かかる閉鎖系は当該技術分野でよく知られており、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｂｅｒ／ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．ｈｔｍ及びｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ＢｉｏｌｏｇｉｃｓＢｌｏｏｄＶａｃｃｉｎｅｓ／ＧｕｉｄａｎｃｅＣｏｍｐｌｉａｎｃｅＲｅｇｕｌａｔｏｒｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ／Ｇｕｉｄａｎｃｅｓ／Ｂｌｏｏｄ／ｕｃｍ０７６７７９．ｈｔｍで見つけることができる。

滅菌接続装置（ＳＴＣＤ）は、互換性のある２本の管間の滅菌溶接をもたらす。この手順により、様々な容器と管径との滅菌接続が可能になる。いくつかの実施形態では、閉鎖系には、例えば、実施例Ｇに記載のルアーロック系及びヒートシール系が含まれる。いくつかの実施形態では、閉鎖系は、閉鎖系の無菌性及び閉鎖性を維持するために、滅菌条件下でシリンジを介してアクセスされる。いくつかの実施形態では、実施例Ｇに記載の閉鎖系が用いられる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、本明細書に記載される方法に従って、最終製品製剤容器に製剤化される。

いくつかの実施形態では、閉鎖系は、腫瘍断片が得られてから、ＴＩＬを患者に投与するかまたは凍結保存する準備が整うまで、１つの容器を使用する。いくつかの実施形態では、２つの容器が使用される場合、第１の容器は密閉Ｇ容器であり、ＴＩＬ集団が遠心分離され、第１の密閉Ｇ容器を開かずに注入バッグに移される。いくつかの実施形態では、２つの容器が使用される場合、注入バッグは、ＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌを含有する注入バッグである。閉鎖系または閉鎖ＴＩＬ細胞培養系は、腫瘍試料及び／または腫瘍断片が追加されると、系が外部からしっかりと密閉され、細菌、真菌、及び／またはいずれの他の微生物汚染も侵入しない閉鎖環境を形成することを特徴とする。

いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％～約１００％である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％～約９５％である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％～約９０％である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約１０％～約９０％である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約１５％～約８５％である。いくつかの実施形態では、微生物汚染の低減は、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％、約９９％、または約１００％である。

閉鎖系は、微生物汚染の不在下で及び／または微生物汚染が大幅に低減された状態で、ＴＩＬの成長を可能にする。

さらに、ＴＩＬ細胞培養環境のｐＨ、二酸化炭素分圧、及び酸素分圧は各々、細胞が培養されるにつれて変化する。したがって、細胞培養に適切な培地を循環させても、ＴＩＬ増殖に最適な環境として閉鎖環境を常に一定に維持する必要がある。この目的のために、閉鎖環境の培養液中のｐＨ、二酸化炭素分圧、及び酸素分圧の物理的要因がセンサーによって監視されること、そのシグナルが培養環境の入口に設置されたガス交換器を制御するために使用されること、及び閉鎖環境のガス分圧が細胞培養環境を最適化するように培養液の変化に応じてリアルタイムで調整されることが望ましい。いくつかの実施形態では、本発明は、閉鎖環境のｐＨ、二酸化炭素分圧、及び酸素分圧を測定する監視装置を備えたガス交換器を閉鎖環境の入口に組み込み、かつ監視装置からのシグナルに基づいてガス濃度を自動的に調整することによって細胞培養環境を最適化する閉鎖細胞培養系を提供する。

いくつかの実施形態では、閉鎖環境内の圧力は、連続的または断続的に制御される。すなわち、閉鎖環境内の圧力を、例えば、圧力維持装置によって変化させることができ、それ故に、空間が正圧状態でＴＩＬの成長に好適であることを確実にするか、または負圧状態で流体の浸出を促進し、ひいては細胞増殖を促進する。さらに、負圧を断続的に加えることにより、閉鎖環境内の体積の一時的な収縮によって、閉鎖環境内の循環液体を均一かつ効率的に置き換えることが可能である。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの増殖に最適な培養成分を置換または追加することができ、ＩＬ－２及び／またはＯＫＴ３などの因子、ならびに組み合わせを追加することができる。

Ｆ．ＴＩＬの任意選択の凍結保存
バルクＴＩＬ集団（例えば、第２のＴＩＬ集団）または拡張されたＴＩＬ集団（例えば、第３のＴＩＬ集団）のいずれかが任意選択で凍結保存され得る。いくつかの実施形態では、凍結保存は、治療的ＴＩＬ集団に起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、第２の拡張後に採取されたＴＩＬに起こる。いくつかの実施形態では、凍結保存は、図１及び／または８の例示的なステップＦ（特に、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃ）においてＴＩＬ上で起こる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、注入バッグ内で凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、注入バッグに入れる前に凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、凍結保存され、注入バッグに入っていない。いくつかの実施形態では、凍結保存は、凍結保存培地を使用して行われる。いくつかの実施形態では、凍結保存培地は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する。これは、一般に、ＴＩＬ集団を凍結溶液、例えば、８５％補体不活性化ＡＢ血清及び１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に入れることによって達成される。溶液中の細胞が極低温バイアルに入れられ、－８０℃で２４時間保存され、任意選択で凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移される。Ｓａｄｅｇｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３，５２，９７８－９８６を参照されたい。

適切な場合、細胞が冷凍庫から取り出され、溶液のおよそ５分の４が解凍されるまで３７℃の水浴中で解凍される。細胞は、一般に、完全培地中に再懸濁され、任意で１回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、解凍されたＴＩＬは、当該技術分野で知られているように計数され、生存率について評価され得る。

好ましい実施形態では、ＴＩＬ集団は、ＣＳ１０凍結保存培地（ＣｒｙｏＳｔｏｒ １０、ＢｉｏＬｉｆｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬ集団は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含有する凍結保存培地を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬ集団は、１：１（体積：体積）比のＣＳ１０及び細胞培養培地を使用して凍結保存される。好ましい実施形態では、ＴＩＬ集団は、約１：１（体積：体積）比のＣＳ１０及び細胞培養培地を使用して凍結保存され、追加のＩＬ－２をさらに含む。

上で考察されたように、また図１及び／または８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されるステップＡ～Ｅで例示されるように、凍結保存は、ＴＩＬ拡張プロセス全体の様々な時点で起こり得る。いくつかの実施形態では、第１の拡張後のＴＩＬの拡張集団（例えば、ステップＢに従って提供される、または図１もしくは８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）のステップＤによる１回以上の第２の拡張後のＴＩＬの拡張集団を凍結保存することができる。凍結保存は、一般に、ＴＩＬ集団を凍結溶液、例えば、８５％補体不活性化ＡＢ血清及び１５％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に入れることによって達成され得る。溶液中の細胞が極低温バイアルに入れられ、－８０℃で２４時間保存され、任意選択で凍結保存のためにガス状窒素冷凍庫に移される。Ｓａｄｅｇｈｉ，ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｃａ ２０１３，５２，９７８－９８６を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、５％ ＤＭＳＯ中で凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、５％ ＤＭＳＯを加えた細胞培養培地中で凍結保存される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、実施例６に提供される方法に従って凍結保存される。

適切な場合、細胞が冷凍庫から取り出され、溶液のおよそ５分の４が解凍されるまで３７℃の水浴中で解凍される。細胞は、一般に、完全培地中に再懸濁され、任意で１回以上洗浄される。いくつかの実施形態では、解凍されたＴＩＬは、当該技術分野で知られているように計数され、生存率について評価され得る。

いくつかの事例では、以下で考察されるプロトコルを使用して、ステップＢのＴＩＬ集団が直ちに凍結保存され得る。あるいは、バルクＴＩＬ集団がステップＣ及びステップＤに供され、ステップＤの後に凍結保存され得る。同様に、遺伝子修飾されたＴＩＬが治療に使用される場合、ステップＢまたはステップＤのＴＩＬ集団が好適な治療のために遺伝子修飾に供され得る。

Ｇ．拡張ＴＩＬの表現型特徴
いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、本明細書及び実施例に記載されているものを含む、拡張後の多数の表現型マーカーの発現について分析される。ある実施形態では、１つ以上の表現型マーカーの発現が調べられる。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＢにおける第１の拡張後に分析される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＣにおける移行中に分析される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＣによる移行中及び凍結保存後に分析される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＤによる第２の拡張後に分析される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの表現型特徴は、ステップＤによる２回以上の拡張後に分析される。

いくつかの実施形態では、マーカーは、ＣＤ８及びＣＤ２８からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＣＤ８の発現が調べられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の発現が調べられる。いくつかの実施形態では、ＣＤ８及び／またはＣＤ２８の発現は、他のプロセス（例えば、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供されるＧｅｎ３プロセス）と比較して、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供される２Ａプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたＴＩＬ上でより高い。いくつかの実施形態では、ＣＤ８の発現は、他のプロセス（例えば、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ）に提供されるＧｅｎ３プロセス）と比較して、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供される２Ａプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたＴＩＬ上でより高い。いくつかの実施形態では、ＣＤ２８の発現は、他のプロセス（例えば、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供されるＧｅｎ３プロセス）と比較して、例えば図８（特に、例えば図８Ａ）に提供される２Ａプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたＴＩＬ上でより高い。いくつかの実施形態では、高いＣＤ２８発現は、より若く、より持続的なＴＩＬ表現型を示す。ある実施形態では、１つ以上の調節マーカーの発現が測定される。

ある実施形態では、ＣＤ８及び／またはＣＤ２８に基づく第１のＴＩＬ集団、第２のＴＩＬ集団、第３のＴＩＬ集団、または採取されたＴＩＬ集団の選択は、本明細書に記載の腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を拡張するための方法のいずれのステップ中にも行われない。

いくつかの実施形態では、セントラルメモリー細胞のパーセンテージは、他のプロセス（例えば、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供されるＧｅｎ３プロセス）と比較して、例えば図８（特に、例えば図８Ａ）に提供される２Ａプロセスと比較して、本発明のプロセスに従って産生されたＴＩＬ上でより高い。いくつかの実施形態では、セントラルメモリー細胞のメモリーマーカーは、ＣＣＲ７及びＣＤ６２Ｌからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋ＴＩＬメモリーサブセットは、異なるメモリーサブセットに分類され得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋ＴＩＬは、ナイーブ（ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋）ＴＩＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋ＴＩＬは、セントラルメモリー（ＣＭ、ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ６２Ｌ＋）ＴＩＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋ＴＩＬは、エフェクターメモリー（ＥＭ、ＣＤ４５ＲＡ－ＣＤ６２Ｌ－）ＴＩＬを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ４＋及び／またはＣＤ８＋ＴＩＬは、ＲＡ＋エフェクターメモリー／エフェクター（ＴＥＭＲＡ／ＴＥＦＦ、ＣＤ４５ＲＡ＋ＣＤ６２Ｌ＋）ＴＩＬを含む。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、グランザイムＢ、パーフォリン、及びグラニュライシンからなる群から選択されるもう１つのマーカーを発現する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、グランザイムＢを発現する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、パーフォリンを発現する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、グラニュライシンを発現する。

ある実施形態では、再刺激されたＴＩＬは、サイトカイン放出アッセイを使用して、サイトカイン放出についても評価され得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）分泌について評価され得る。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、例えば、図８（特に、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に提供されるように、ステップＤの後の急速な第２の拡張ステップの後のＥＬＩＳＡアッセイによって測定される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの健康は、ＩＦＮ－ガンマ（ＩＦＮ－γ）分泌によって測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、活性なＴＩＬを示す。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ産生の効力アッセイが用いられる。ＩＦＮ－γ産生は、細胞傷害能の別の尺度である。ＩＦＮ－γ産生は、ＣＤ３、ＣＤ２８、及びＣＤ１３７／４－１ＢＢに対する抗体で刺激されたＴＩＬの培地中のサイトカインＩＦＮ－γのレベルを決定することによって測定され得る。これらの刺激されたＴＩＬからの培地中のＩＦＮ－γレベルは、ＩＦＮ－γ放出を測定することによって決定され得る。いくつかの実施形態では、例えば図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）ＴＩＬに提供されるようなＧｅｎ３プロセスのステップＤにおけるＩＦＮ－γ産生の増加は、例えば、図８（特に、例えば図８Ａ）に提供される２Ａプロセスは、ステップＤ ＴＩＬの細胞傷害能の増加を示している。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、１倍、２倍、３倍、４倍、または５倍以上増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、１倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、２倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、３倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、４倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、５倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡキットを使用して測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、エクスビボでのＴＩＬ中で測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、例えば図８Ｂの方法を含む、本発明の方法によって産生されたＴＩＬを含む、ＴＩＬにおいてエクスビボで測定される。

いくつかの実施形態では、少なくとも１倍、２倍、３倍、４倍、または５倍以上のＩＦＮ－γ分泌が可能なＴＩＬは、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるＴＩＬである。いくつかの実施形態では、少なくとも１倍多くのＩＦＮ－γ分泌が可能なＴＩＬは、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるＴＩＬである。いくつかの実施形態では、少なくとも２倍多くのＩＦＮ－γ分泌が可能なＴＩＬは、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるＴＩＬである。いくつかの実施形態では、少なくとも３倍多くのＩＦＮ－γ分泌が可能なＴＩＬは、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるＴＩＬである。いくつかの実施形態では、少なくとも４倍多くのＩＦＮ－γ分泌が可能なＴＩＬは、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるＴＩＬである。いくつかの実施形態では、少なくとも５倍多くのＩＦＮ－γ分泌が可能なＴＩＬは、例えば、図８Ｂ及び／または図８Ｃの方法を含む、本発明の拡張方法によって産生されるＴＩＬである。

Ｔリンパ球及びＢリンパ球の多様な抗原受容体は、限られた数であるが、多数の遺伝子セグメントの体細胞組換えによって産生される。これらの遺伝子セグメント：Ｖ（可変）、Ｄ（多様性）、Ｊ（接合）、及びＣ（一定）は、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体（ＴＣＲ）の結合特異性及び下流での適用を決定する。本発明は、Ｔ細胞レパートリー多様性を示し、かつ増加させるＴＩＬを生成するための方法を提供する。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって得られたＴＩＬは、新たに採取されたＴＩＬ及び／または例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、本方法によって取得されたＴＩＬは、新たに採取されたＴＩＬ及び／または図８（特に、例えば図８Ａ）に例示されるようにＧｅｎ２と称される方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、第１の拡張で取得されたＴＩＬは、Ｔ細胞レパートリー多様性の増加を示す。いくつかの実施形態では、多様性の増加は、免疫グロブリン多様性及び／またはＴ細胞受容体多様性の増加である。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン重鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、免疫グロブリンにあり、免疫グロブリン軽鎖にある。いくつかの実施形態では、多様性は、Ｔ細胞受容体にある。いくつかの実施形態では、多様性は、アルファ、ベータ、ガンマ、及びデルタ受容体からなる群から選択されるＴ細胞受容体のうちの１つにある。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファ及び／またはベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファの発現が増加する。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）ベータの発現が増加する。いくつかの実施形態では、ＴＣＲａｂ（すなわち、ＴＣＲα／β）の発現が増加する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のプロセス（例えば、Ｇｅｎ３プロセス）は、他のプロセス、例えば、試料内の固有のペプチドＣＤＲの数に基づくＧｅｎ２と称されるプロセスと比較して、より高いクローン多様性を示す（例えば、図１２～１４を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの活性化及び疲弊は、１つ以上のマーカーを調べることによって決定され得る。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊は、多色フローサイトメトリーを使用して決定され得る。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊のマーカーには、ＣＤ３、ＰＤ－１、２Ｂ４／ＣＤ２４４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＢＴＬＡ、ＫＬＲＧ、ＴＩＭ－３、ＣＤ１９４／ＣＣＲ４、ＣＤ４、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１８３、ＣＤ６９、ＣＤ９５、ＣＤ１２７、ＣＤ１０３、及び／またはＬＡＧ－３）からなる群から選択される１つ以上のマーカーが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊のマーカーには、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、Ｋｉ６７、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ、及び／またはＴＩＭ－３からなる群から選択される１つ以上のマーカーが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、活性化及び疲弊のマーカーには、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、Ｋｉ６７、ＬＡＧ－３、ＣＤ１０３＋／ＣＤ６９＋、ＣＤ１０３＋／ＣＤ６９－、ＰＤ－１、ＴＩＧＩＴ及び／またはＴＩＭ－３からなる群から選択される１つ以上のマーカーが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マーカー（活性化及び疲弊マーカーを含む）は、Ｔ細胞の活性化、阻害、または機能を調べるために決定及び／または分析され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞マーカーには、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ３、ＦｏｘＰ３、Ｔｉｍ－３、ＰＤ－１、ＣＤ１０３、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＢＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、Ｋｉ６７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ４５、ＣＤ４、及び／またはＣＤ５９からなる群から選択される１つ以上のマーカーが含まれ得るが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、表現型特徴付けは、凍結保存後に調べられる。

Ｈ．追加のプロセスの実施形態
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療的ＴＩＬ集団に拡張するための方法であって、（ａ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得することと、（ｂ）ＩＬ－２及びＯＫＴ－３を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによってプライミングによる第１の拡張を行うことであって、プライミングによる第１の拡張を約１～７日間または約１～８日間行って第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が多い、プライミングによる第１の拡張を行うことと、（ｃ）第２のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び外因性抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む細胞培養培地と接触させて急速な第２の拡張を行って第３のＴＩＬ集団を産生することであって、急速な第２の拡張を約１～１１日間または約１～１０日間行って第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団である、第３のＴＩＬ集団を産生することと、（ｄ）ステップ（ｃ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間、または約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりも大きい第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移すこととによって、培養のスケールアップを達成し、第２の容器内で、小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団が、より大規模な培養で約４～７日間、または約４～８日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での第１の小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器とサイズが等しい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第２の容器内で、第１の小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、第２の小規模培養で約４～７日間、または約４～８日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間、または約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、より大規模な培養で約４～７日間、または約４～８日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりもサイズが大きい２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、より大規模な培養で約５～７日間培養される。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療的ＴＩＬ集団に拡張するための方法であって、（ａ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得することと、（ｂ）ＩＬ－２及びＯＫＴ－３を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによってプライミングによる第１の拡張を行うことであって、プライミングによる第１の拡張が約１～８日間行われて第２のＴＩＬ集団が取得され、第２のＴＩＬ集団は第１のＴＩＬ集団よりも数が多い、プライミングによる第１の拡張を行うことと、（ｃ）第２のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３及び外因性抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む細胞培養培地と接触させることによって急速な第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、急速な第２の拡張が約１～８日間行われて第３のＴＩＬ集団が取得され、第３のＴＩＬ集団が治療的ＴＩＬ集団である、第３のＴＩＬ集団を産生することと、（ｄ）ステップ（ｃ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりも大きい第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移すこととによって、培養のスケールアップを達成し、第２の容器内で、小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団が、より大規模な培養で約４～８日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での第１の小規模培養で約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器とサイズが等しい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第２の容器内で、第１の小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、第２の小規模培養で約４～６日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、より大規模な培養で約４～６日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、より大規模な培養で約４～５日間培養される。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療的ＴＩＬ集団に拡張するための方法であって、（ａ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得することと、（ｂ）ＩＬ－２及びＯＫＴ－３を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによってプライミングによる第１の拡張を行うことであって、プライミングによる第１の拡張が約１～７日間行われて第２のＴＩＬ集団が取得され、第２のＴＩＬ集団は第１のＴＩＬ集団よりも数が多い、プライミングによる第１の拡張を行うことと、（ｃ）第２のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３及び外因性抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む細胞培養培地と接触させることによって急速な第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、急速な第２の拡張が約１～１１日間行われて第３のＴＩＬ集団が取得され、第３のＴＩＬ集団が治療的ＴＩＬ集団である、第３のＴＩＬ集団を産生することと、（ｄ）ステップ（ｃ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、急速な第２の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりも大きい第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移すこととによって、培養のスケールアップを達成し、第２の容器内で、小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団が、より大規模な培養で約４～７日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での第１の小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器とサイズが等しい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第２の容器内で、第１の小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、第２の小規模培養で約４～７日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、より大規模な培養で約４～７日間培養される。いくつかの実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（１）第２のＴＩＬ集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（２）第１の小規模培養由来の第２のＴＩＬ集団を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第２のＴＩＬ集団の一部が、より大規模な培養で約５日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１の初期拡張が、第１のＴＩＬ集団を、外因性抗原提示細胞（ＡＰＣ）をさらに含む培養培地と接触させることによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ（ｃ）における培養培地中のＡＰＣの数が、ステップ（ｂ）における培養培地中のＡＰＣの数よりも多い、方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において培養培地に追加の外因性ＡＰＣが補充されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２０：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約１０：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約９：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約８：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約７：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約６：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約５：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約４：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約３：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．９：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．８：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．７：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．６：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．５：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．４：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．３：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．２：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２．１：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約１．１：１～約２：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約１０：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約５：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約４：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約３：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．９：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．８：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．７：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．６：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．５：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．４：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．３：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．２：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数とステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数との比率が、約２：１～約２．１：１の範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されるＡＰＣの数の、ステップ（ｂ）において添加されるＡＰＣの数に対する比率が、正確にまたは約２：１になるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張において添加されるＡＰＣの数の、ステップ（ｂ）において添加されるＡＰＣの数に対する比率が、正確にまたは約１．１：１、１．２：１、１．３：１、１．４：１、１．５：１、１．６：１、１．７：１、１．８：１、１．９：１、２：１、２．１：１、２．２：１、２．３：１、２．４：１、２．５：１、２．６：１、２．７：１、２．８：１、２．９：１、３：１、３．１：１、３．２：１、３．３：１、３．４：１、３．５：１、３．６：１、３．７：１、３．８：１、３．９：１、４：１、４．１：１、４．２：１、４．３：１、４．４：１、４．５：１、４．６：１、４．７：１、４．８：１、４．９：１、または５：１になるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１の初期拡張において添加されるＡＰＣの数が、正確にまたは約１×１０^８、１．１×１０^８、１．２×１０^８、１．３×１０^８、１．４×１０^８、１．５×１０^８、１．６×１０^８、１．７×１０^８、１．８×１０^８、１．９×１０^８、２×１０^８、２．１×１０^８、２．２×１０^８、２．３×１０^８、２．４×１０^８、２．５×１０^８、２．６×１０^８、２．７×１０^８、２．８×１０^８、２．９×１０^８、３×１０^８、３．１×１０^８、３．２×１０^８、３．３×１０^８、３．４×１０^８、または３．５×１０^８ＡＰＣになるように、かつ急速な第２の拡張において添加されるＡＰＣの数が、正確にまたは約３．５×１０^８、３．６×１０^８、３．７×１０^８、３．８×１０^８、３．９×１０^８、４×１０^８、４．１×１０^８、４．２×１０^８、４．３×１０^８、４．４×１０^８、４．５×１０^８、４．６×１０^８、４．７×１０^８、４．８×１０^８、４．９×１０^８、５×１０^８、５．１×１０^８、５．２×１０^８、５．３×１０^８、５．４×１０^８、５．５×１０^８、５．６×１０^８、５．７×１０^８、５．８×１０^８、５．９×１０^８、６×１０^８、６．１×１０^８、６．２×１０^８、６．３×１０^８、６．４×１０^８、６．５×１０^８、６．６×１０^８、６．７×１０^８、６．８×１０^８、６．９×１０^８、７×１０^８、７．１×１０^８、７．２×１０^８、７．３×１０^８、７．４×１０^８、７．５×１０^８、７．６×１０^８、７．７×１０^８、７．８×１０^８、７．９×１０^８、８×１０^８、８．１×１０^８、８．２×１０^８、８．３×１０^８、８．４×１０^８、８．５×１０^８、８．６×１０^８、８．７×１０^８、８．８×１０^８、８．９×１０^８、９×１０^８、９．１×１０^８、９．２×１０^８、９．３×１０^８、９．４×１０^８、９．５×１０^８、９．６×１０^８、９．７×１０^８、９．８×１０^８、９．９×１０^８、または１×１０^９ＡＰＣになるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、一次の第１の拡張において添加されたＡＰＣの数が、約１×１０^８ＡＰＣ～約３．５×１０^８ＡＰＣの範囲から選択され、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数が、約３．５×１０^８ＡＰＣ～約１×１０^９ＡＰＣの範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、一次の第１の拡張において添加されたＡＰＣの数が、約１．５×１０^８ＡＰＣ～約３×１０^８ＡＰＣの範囲から選択され、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数が、約４×１０^８ＡＰＣ～約７．５×１０^８ＡＰＣの範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、一次の第１の拡張において添加されたＡＰＣの数が、約２×１０^８ＡＰＣ～約２．５×１０^８ＡＰＣの範囲から選択され、急速な第２の拡張において添加されたＡＰＣの数が、約４．５×１０^８ＡＰＣ～約５．５×１０^８ＡＰＣの範囲から選択されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、正確にまたは約２．５×１０^８ＡＰＣが第１の初期拡張に添加され、かつ正確にまたは約５×１０^８ＡＰＣが急速な第２の拡張に添加されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞が末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の腫瘍断片が複数の別個の容器に分配され、それらの別個の容器の各々内で、第１のＴＩＬ集団がステップ（ａ）において得られ、第２のＴＩＬ集団がステップ（ｂ）において得られ、第３のＴＩＬ集団がステップ（ｃ）において得られ、ステップ（ｃ）における複数の容器からの治療的ＴＩＬ集団が組み合わせられて、ステップ（ｄ）からの採取されたＴＩＬ集団を産生するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の腫瘍が複数の別個の容器に均一に分配されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が少なくとも２個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が２～２０個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が２～１５個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が２～１０個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が２～５個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の別個の容器が２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の別個の容器を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、プライミングによる第１の拡張がステップ（ｂ）において第１のＴＩＬ集団で行われる各容器の場合、ステップ（ｃ）における急速な第２の拡張が、同じ容器内でかかる第１のＴＩＬ集団から産生された第２のＴＩＬ集団で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、別個の容器の各々が第１のガス透過性表面積を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の腫瘍断片が単一の容器に分配されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、単一の容器が第１のガス透過性表面積を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、ステップ（ｂ）において、第１の初期拡張が、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ（ｃ）において添加されるＡＰＣの数が、ステップ（ｂ）において添加されるＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１細胞層～正確にまたは約３細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化される、方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１．５細胞層～正確にまたは約２．５細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約２細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約３細胞層～正確にまたは約１０細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約４細胞層～正確にまたは約８細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約３、４、５、６、７、８、９、または１０細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、プライミングによる第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を含む第１の容器内で行われ、ステップ（ｃ）において、急速な第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を含む第２の容器内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２の容器が第１の容器よりも大きいように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、ステップ（ｂ）において、第１の初期拡張が、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ（ｃ）において添加されるＡＰＣの数が、ステップ（ｂ）において添加されるＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１細胞層～正確にまたは約３細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化される、方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１．５細胞層～正確にまたは約２．５細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約２細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約３細胞層～正確にまたは約１０細胞層の平均厚さで第２のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約４細胞層～正確にまたは約８細胞層の平均厚さで第２のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約３、４、５、６、７、８、９、または１０細胞層の平均厚さで第２のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、約４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８細胞層の平均厚さで第２のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、プライミングによる第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を含む第１の容器内で行われ、ステップ（ｃ）において、急速な第２の拡張が、第１の容器内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、ステップ（ｂ）において、第１の初期拡張が、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ（ｃ）において添加されるＡＰＣの数が、ステップ（ｂ）において添加されるＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１細胞層～正確にまたは約３細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化される、方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約１．５細胞層～正確にまたは約２．５細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約２細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、ＡＰＣが、約１、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、または３細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約３細胞層～正確にまたは約１０細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約４細胞層～正確にまたは約８細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約３、４、５、６、７、８、９、または１０細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において、ＡＰＣが、正確にまたは約４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７、７．１、７．２、７．３、７．４、７．５、７．６、７．７、７．８、７．９、または８細胞層の平均厚さで第１のガス透過性表面積上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：１０の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：９の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：８の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：７の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：６の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：５の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：４の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：３の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．１～約１：２の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．２～約１：８の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．３～約１：７の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．４～約１：６の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．５～約１：５の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．６～約１：４の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．７～約１：３．５の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．８～約１：３の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：１．９～約１：２．５の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することにより一次の第１の拡張が行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、ステップ（ｃ）において添加されたＡＰＣの数は、ステップ（ｂ）において添加されたＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されたＡＰＣの平均層数とステップ（ｃ）において層状化されたＡＰＣの平均層数との比率は、約１：２の範囲から選択される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１の初期拡張が、第１のＴＩＬ集団の細胞培養培地に追加の抗原提示細胞（ＡＰＣ）を補充することによって行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法であって、ステップ（ｃ）において添加されるＡＰＣの数が、ステップ（ｂ）において添加されるＡＰＣの数よりも多く、ステップ（ｂ）において層状化されるＡＰＣの層の平均数の、ステップ（ｃ）において層状化されるＡＰＣの層の平均数に対する比率が、正確にまたは約１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２、１：２．１、１：２．２、１：２．３、１：２．４、１：２．５、１：２．６、１：２．７、１：２．８、１：２．９、１：３、１：３．１、１：３．２、１：３．３、１：３．４、１：３．５、１：３．６、１：３．７、１：３．８、１：３．９、１：４、１：４．１、１：４．２、１：４．３、１：４．４、１：４．５、１：４．６、１：４．７、１：４．８、１：４．９、１：５、１：５．１、１：５．２、１：５．３、１：５．４、１：５．５、１：５．６、１：５．７、１：５．８、１：５．９、１：６、１：６．１、１：６．２、１：６．３、１：６．４、１：６．５、１：６．６、１：６．７、１：６．８、１：６．９、１：７、１：７．１、１：７．２、１：７．３、１：７．４、１：７．５、１：７．６、１：７．７、１：７．８、１：７．９、１：８、１：８．１、１：８．２、１：８．３、１：８．４、１：８．５、１：８．６、１：８．７、１：８．８、１：８．９、１：９、１：９．１、１：９．２、１：９．３、１：９．４、１：９．５、１：９．６、１：９．７、１：９．８、１：９．９、または１：１０から選択される、方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数の第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数に対する比率が、正確にまたは約１．５：１～正確にまたは約１００：１であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数の第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数に対する比率が、正確にまたは約５０：１であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数の第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数に対する比率が、正確にまたは約２５：１であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数の第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数に対する比率が、正確にまたは約２０：１であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数の第１のＴＩＬ集団中のＴＩＬの数に対する比率が、正確にまたは約１０：１であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＴＩＬ集団の数が、第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも正確にまたは約５０倍多いように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＴＩＬ集団の数が、第１のＴＩＬ集団よりも少なくとも正確にまたは約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０倍多いように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）における第２の期間の開始の正確にまたは約２日または正確にまたは約３日後に、細胞培養培地に追加のＩＬ－２が補充されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｄ）において採取されたＴＩＬ集団を凍結保存するステップをさらに含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｄ）の後に、ステップ（ｄ）からの採取されたＴＩＬ集団を、任意選択でＨｙｐｏＴｈｅｒｍｏｓｏｌを含有する注入バッグに移す追加のステップ（ｅ）を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｅ）において採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存するステップを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、凍結保存プロセスが、１：１の採取されたＴＩＬ集団の凍結保存培地に対する比率を使用して行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞が末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＰＢＭＣが照射され、かつ同種異系であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において細胞培養に添加されるＡＰＣの総数が２．５×１０^８であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において細胞培養に添加されるＡＰＣの総数が５×１０^８であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＡＰＣがＰＢＭＣであるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＰＢＭＣが照射され、かつ同種異系であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞が人工抗原提示細胞であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｄ）での採取が膜ベースの細胞処理システムを使用して行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｄ）での採取がＬＯＶＯ細胞処理システムを使用して行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約５～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約１０～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約１５～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約２０～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約２５～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約３０～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約３５～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約４０～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約４５～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約５０～正確にまたは約６０個の断片を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、複数の断片が１容器当たり正確にまたは約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、または６０個の断片（複数可）を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２７ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２０ｍｍ^３～正確にまたは約５０ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２１ｍｍ^３～正確にまたは約３０ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２２ｍｍ^３～正確にまたは約２９．５ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２３ｍｍ^３～正確にまたは約２９ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２４ｍｍ^３～正確にまたは約２８．５ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２５ｍｍ^３～正確にまたは約２８ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２６．５ｍｍ^３～正確にまたは約２７．５ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、各断片が正確にまたは約２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、または５０ｍｍ^３の体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の断片が正確にまたは約３０～正確にまたは約６０個の断片を含み、正確にまたは約１３００ｍｍ^３～正確にまたは約１５００ｍｍ^３の総体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の断片が正確にまたは約５０個の断片を含み、正確にまたは約１３５０ｍｍ^３の総体積を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、複数の断片が正確にまたは約５０個の断片を含み、正確にまたは約１グラム～正確にまたは約１．５グラムの総質量を有するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、細胞培養培地がＧ容器またはＸｕｒｉセルバッグである容器内に提供されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、細胞培養培地中のＩＬ－２濃度が約１０，０００ＩＵ／ｍＬ～約５０００ＩＵ／ｍＬであるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、細胞培養培地中のＩＬ－２濃度が約６，０００ＩＵ／ｍＬであるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、凍結保存培地がジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、凍結保存培地が７％～１０％ＤＭＳＯを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）における第１の期間が正確にまたは約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日の期間内に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）における第２の期間が正確にまたは約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、または１１日の期間内に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）における第１の期間及びステップ（ｃ）における第２の期間が各々、正確にまたは約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日の期間内に個別に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）における第１の期間及びステップ（ｃ）における第２の期間が各々、正確にまたは約５日、６日、または７日の期間内に個別に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）における第１の期間及びステップ（ｃ）における第２の期間が各々、正確にまたは約７日の期間内に個別に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１４日～正確にまたは約１８日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１５日～正確にまたは約１８日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１６日～正確にまたは約１８日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１７日～正確にまたは約１８日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１４日～正確にまたは約１７日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１５日～正確にまたは約１７日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１６日～正確にまたは約１７日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１４日～正確にまたは約１６日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１５日～正確にまたは約１６日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１４日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１５日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１６日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１７日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１８日で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１４日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１５日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１６日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）～（ｄ）が合計で正確にまたは約１８日以内で行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｄ）で採取された治療的ＴＩＬ集団が、ＴＩＬの治療上有効な投与量に十分なＴＩＬを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量に十分なＴＩＬの数が、正確にまたは約２．３×１０^１０～正確にまたは約１３．７×１０^１０であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）における第３のＴＩＬ集団が、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）における第３のＴＩＬ集団が、１６日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍～５倍以上のインターフェロンガンマ産生を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）における第３のＴＩＬ集団が、１７日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍～５倍以上のインターフェロンガンマ産生を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）における第３のＴＩＬ集団が、１８日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍～５倍以上のインターフェロンガンマ産生を提供するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）の第３のＴＩＬ集団から得られたエフェクターＴ細胞及び／またはセントラルメモリーＴ細胞が、ステップ（ｂ）の第２の細胞集団から得られたエフェクターＴ細胞及び／またはセントラルメモリーＴ細胞と比較して増加したＣＤ８及びＣＤ２８発現を示すように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器が密閉容器であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がＧ容器であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がＧＲＥＸ－１０であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がＧＲＥＸ－１００であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、方法に列挙された各容器がＧＲＥＸ－５００であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法によって作製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療用集団を提供する。

別の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供し、この治療的ＴＩＬ集団は、第１のＴＩＬ拡張が抗原提示細胞（ＡＰＣ）またはＯＫＴ３を添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供する。

別の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供し、この治療的ＴＩＬ集団は、第１のＴＩＬ拡張が抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供する。

別の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供し、この治療的ＴＩＬ集団は、第１のＴＩＬ拡張がＯＫＴ３を添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供する。

別の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供し、この治療的ＴＩＬ集団は、第１のＴＩＬ拡張が抗原提示細胞（ＡＰＣ）もＯＫＴ３も添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供する。

別の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供し、この治療的ＴＩＬ集団は、１６日以上のプロセスによってプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供する。

別の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供し、この治療的ＴＩＬ集団は、１７日以上のプロセスによってプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供する。

別の実施形態では、本発明は、患者の腫瘍組織から調製された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供し、この治療的ＴＩＬ集団は、１８日以上のプロセスによってプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、増加した有効性、増加したインターフェロンガンマ産生、及び／または増加したポリクローン性を提供する。

別の実施形態では、本発明は、増加したインターフェロンガンマ産生を提供する、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。

別の実施形態では、本発明は、増加したポリクローン性を提供する、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載された治療的ＴＩＬ集団を提供する。

別の実施形態では、本発明は、増加した有効性を提供する、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。

別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１６日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１７日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１８日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１６日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１７日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１８日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１６日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも３倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１７日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも３倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。別の実施形態では、本発明は、治療的ＴＩＬ集団が、１８日以上のプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも３倍多いインターフェロンガンマ産生が可能であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも３倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ拡張が抗原提示細胞（ＡＰＣ）を添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ拡張がＯＫＴ３を添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の治療的集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ拡張がＡＰＣを添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である治療的ＴＩＬ集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ拡張がＯＫＴ３を添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である治療的ＴＩＬ集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも２倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ拡張がＡＰＣを添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも３倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である治療的ＴＩＬ集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも１倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ拡張がＯＫＴ３を添加せずに行われるプロセスによって調製されたＴＩＬと比較して、少なくとも３倍多いインターフェロンガンマ産生が可能である治療的ＴＩＬ集団を提供する。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように、または上記のステップＡ～Ｆに従って（また、例えば、図８（特に、例えば図８Ｂ及び／または図８Ｃ）に示されているように）、本明細書に記載される拡張プロセスに起因する少なくとも３倍多いインターフェロンガンマ産生が可能になる。

別の実施形態では、本発明は、腫瘍断片が、小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物であるように修正された、上記の該当する前の段落のいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、腫瘍断片がコア生検であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、腫瘍断片が細針吸引物であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、腫瘍断片が小生検（例えば、パンチ生検を含む）であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、腫瘍断片がコア針生検であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、（ｉ）方法が、対象由来の腫瘍組織の１つ以上の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から第１のＴＩＬ集団を取得することを含み、（ｉｉ）方法が、プライミングによる第１の拡張ステップを行う前に、ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を約３日間培養するステップを行うことを含み、（ｉｉｉ）方法が、プライミングによる第１の拡張を約８日間行うことを含み、及び（ｉｖ）方法が、急速な第２の拡張を約１１日間行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約２２日で完了する。

別の実施形態では、本発明は、（ｉ）方法が、対象由来の腫瘍組織の１つ以上の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から第１のＴＩＬ集団を取得することを含み、（ｉｉ）方法が、プライミングによる第１の拡張ステップを行う前に、ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を約３日間培養するステップを行うことを含み、（ｉｉｉ）方法が、プライミングによる第１の拡張を約８日間行うことを含み、かつ（ｉｖ）方法が、第２のＴＩＬ集団の培養物を約５日間培養し、培養物を最大５つの継代培養物に分割し、かつ継代培養物を約６日間培養することによって、急速な第２の拡張を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、最大５つの継代培養物が各々、第２のＴＩＬ集団の培養が急速な第２の拡張で開始される容器と同じサイズのまたはそれよりも大きい容器内で培養される。前述の実施形態のうちのいくつかでは、第２のＴＩＬ集団の培養物は、最大５つの継代培養物間で均等に分けられる。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約２２日で完了する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約２０個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のコア生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約２０個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の細針吸引物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約２０個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のコア針生検から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴＩＬ集団が、対象由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、（ｉ）方法が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個のコア生検から第１のＴＩＬ集団を得ることを含み、（ｉｉ）方法が、第１のプライミング拡張ステップを行う前に、ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を約３日間培養するステップを行うことを含み、（ｉｉｉ）方法が、第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む培養培地中で約８日間培養することによって第１のプライミング拡張ステップを行い、第２のＴＩＬ集団を得ることを含み、かつ（ｉｖ）方法が、第２のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びＡＰＣを含む培養培地中で約１１日間培養することによって第２の急速拡張ステップを行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約２２日で完了する。

別の実施形態では、本発明は、（ｉ）方法が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個のコア生検から第１のＴＩＬ集団を得ることを含み、（ｉｉ）方法が、第１のプライミング拡張ステップを行う前に、ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を約３日間培養するステップを行うことを含み、（ｉｉｉ）方法が、第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む培養培地中で約８日間培養することによって第１のプライミング拡張ステップを行い、第２のＴＩＬ集団を得ることを含み、かつ（ｉｖ）方法が、第２のＴＩＬ集団の培養物を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びＡＰＣを含む培養培地中で約５日間培養し、培養物を最大５つの継代培養物に分割し、かつ継代培養物の各々を、ＩＬ－２を含む培養培地中で約６日間培養することによって、第２の急速拡張を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、最大５つの継代培養物が各々、第２のＴＩＬ集団の培養が急速な第２の拡張で開始される容器と同じサイズのまたはそれよりも大きい容器内で培養される。前述の実施形態のうちのいくつかでは、第２のＴＩＬ集団の培養物は、最大５つの継代培養物間で均等に分けられる。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約２２日で完了する。

別の実施形態では、本発明は、（ｉ）方法が、対象由来の腫瘍組織の１～約１０個のコア生検から第１のＴＩＬ集団を得ることを含み、（ｉｉ）方法が、プライミングによる第１の拡張ステップを行う前に、Ｇ－Ｒｅｘ１００Ｍフラスコ内の０．５ＬのＣＭ１培養培地中６０００ＩＵ ＩＬ－２／ｍＬを含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を約３日間培養するステップを行うことを含み、（ｉｉｉ）方法が、６０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬ ＯＫＴ－３、及び約１０^８個のフィーダー細胞を含む０．５ＬのＣＭ１培養培地を添加し、約８日間培養することによって、プライミングによる第１の拡張を行うことを含み、かつ（ｉｖ）方法が、（ａ）第２のＴＩＬ集団を、３０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２、３０ｎｇ／ｍＬ ＯＫＴ－３、及び５×１０^９個のフィーダー細胞を有する５ＬのＣＭ２培養培地を含むＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳフラスコに移し、約５日間培養し、（ｂ）１０^９個のＴＩＬを、３０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２を有する５ＬのＡＩＭ－Ｖ培地を含む最大５つのＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳフラスコの各々に移すことによって培養物を最大５つの継代培養物に分割し、継代培養物を約６日間培養することによって、急速な第２の拡張を行うことを含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。前述の実施形態のうちのいくつかでは、方法のこれらのステップは、約２２日で完了する。

別の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を拡張する方法であって、（ａ）第１のＴ細胞集団を培養することによってドナーから取得された第１のＴ細胞集団のプライミングによる第１の拡張を行って成長をもたらし、第１のＴ細胞集団の活性化をプライミングすることと、（ｂ）ステップ（ａ）においてプライミングされた第１のＴ細胞集団の活性化が減衰し始めた後、第１のＴ細胞集団を培養することによって第１のＴ細胞集団の急速な第２の拡張を行って成長をもたらし、第１のＴ細胞集団の活性化を促進して第２のＴ細胞集団を取得することと、（ｃ）第２のＴ細胞集団を採取することと、を含む、Ｔ細胞を拡張する方法を提供する。別の実施形態では、急速な第２の拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養での第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりも大きい第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移し、小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第２の容器内でのより大規模な培養で約４～７日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成する。別の実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での第１の小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）第１の小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器とサイズが等しい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成し、各第２の容器内で、第１の小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、第２の小規模培養で約４～７日間培養される。別の実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、より大規模な培養で約４～７日間培養される。別の実施形態では、急速拡張ステップは、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりもサイズが大きい２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、より大規模な培養で約５日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、急速な第２の拡張のステップが、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ－１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養での第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりも大きい第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移し、小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第２の容器内でのより大規模な培養で約５～７日間培養することとによって、培養のスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、急速拡張のステップが、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での第１の小規模培養で約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）第１の小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器とサイズが等しい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウトを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、各第２の容器内で、第１の小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、第２の小規模培養で約５～７日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、急速拡張のステップが、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約２～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりもサイズが大きい少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、より大規模な培養で約５～７日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、急速拡張のステップが、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりもサイズが大きい２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、より大規模な培養で約５～６日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、急速拡張のステップが、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりもサイズが大きい２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、より大規模な培養で約５日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、急速拡張のステップが、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりもサイズが大きい２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、より大規模な培養で約６日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、急速拡張のステップが、複数のステップに分けられて、（ａ）第１のＴ細胞集団を、第１の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ容器内での小規模培養で約３～４日間培養することによって急速な第２の拡張を行うことと、その後、（ｂ）小規模培養由来の第１のＴ細胞集団を、第１の容器よりもサイズが大きい２、３、または４個の第２の容器、例えば、Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳ容器に移して配分することとによって、培養のスケールアウト及びスケールアップを達成するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供し、各第２の容器内で、小規模培養由来のかかる第２の容器に移された第１のＴ細胞集団の一部が、より大規模な培養で約７日間培養される。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）のプライミングによる第１の拡張が最大７日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大８日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大９日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大１０日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大１１日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）におけるプライミングによる第１の拡張が７日の期間中に行われ、かつステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大９日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）におけるプライミングによる第１の拡張が７日の期間中に行われ、かつステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大１０日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）におけるプライミングによる第１の拡張が７日または８日の期間中に行われ、かつステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大９日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）におけるプライミングによる第１の拡張が７日または８日の期間中に行われ、かつステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大１０日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）におけるプライミングによる第１の拡張が８日の期間中に行われ、かつステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大９日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）におけるプライミングによる第１の拡張が８日の期間中に行われ、かつステップ（ｂ）の急速な第２の拡張が最大８日の期間中に行われるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＴ細胞集団がＯＫＴ－３及びＩＬ－２を含む第１の培養培地中で培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１の培養培地が４－１ＢＢアゴニスト、ＯＫＴ－３、及びＩＬ－２を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１の培養培地がＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１の培養培地が４－１ＢＢアゴニスト、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第１のＴ細胞集団がＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第２の培養培地中で培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２の培養培地が４－１ＢＢアゴニスト、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含むように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＴ細胞集団が、第１のガス透過性表面を含む容器内の第１の培養培地中で培養され（ここで、第１の培養培地が、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第１の抗原提示細胞（ＡＰＣ）集団を含み、第１のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第１のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化される）、ステップ（ｂ）において、第１のＴ細胞集団が、容器内の第２の培養培地中で培養される（ここで、第２の培養培地が、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第２のＡＰＣ集団を含み、第２のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第２のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化され、第２のＡＰＣ集団が、第１のＡＰＣ集団よりも多い）ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＴ細胞集団が、第１のガス透過性表面を含む容器内の第１の培養培地中で培養され（ここで、第１の培養培地が、４－１ＢＢアゴニスト、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第１の抗原提示細胞（ＡＰＣ）集団を含み、第１のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第１のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化される）、ステップ（ｂ）において、第１のＴ細胞集団が、容器内の第２の培養培地中で培養される（ここで、第２の培養培地が、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第２のＡＰＣ集団を含み、第２のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第２のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化され、第２のＡＰＣ集団が、第１のＡＰＣ集団よりも多い）ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＴ細胞集団が、第１のガス透過性表面を含む容器内の第１の培養培地中で培養され（ここで、第１の培養培地が、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第１の抗原提示細胞（ＡＰＣ）集団を含み、第１のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第１のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化される）、ステップ（ｂ）において、第１のＴ細胞集団が、容器内の第２の培養培地中で培養される（ここで、第２の培養培地が、４－１ＢＢアゴニスト、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第２のＡＰＣ集団を含み、第２のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第２のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化され、第２のＡＰＣ集団が、第１のＡＰＣ集団よりも多い）ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＴ細胞集団が、第１のガス透過性表面を含む容器内の第１の培養培地中で培養され（ここで、第１の培養培地が、４－１ＢＢアゴニスト、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第１の抗原提示細胞（ＡＰＣ）集団を含み、第１のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第１のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化される）、ステップ（ｂ）において、第１のＴ細胞集団が、容器内の第２の培養培地中で培養される（ここで、第２の培養培地が、４－１ＢＢアゴニスト、ＯＫＴ－３、ＩＬ－２、及び第２のＡＰＣ集団を含み、第２のＡＰＣ集団が、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であり、第２のＡＰＣ集団が、第１のガス透過性表面上に層状化され、第２のＡＰＣ集団が、第１のＡＰＣ集団よりも多い）ように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２のＡＰＣ集団中のＡＰＣの数の第１のＡＰＣ集団中のＡＰＣの数に対する比率が約２：１であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＡＰＣ集団中のＡＰＣの数が約２．５×１０^８あり、第２のＡＰＣ集団中のＡＰＣの数が約５×１０^８であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が、２層のＡＰＣの平均厚さで第１のガス透過性表面上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が、４～８層のＡＰＣから選択される平均厚さで第１のガス透過性表面上に層状化されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において第１のガス透過性表面上に層状化されたＡＰＣの平均層数の、ステップ（ａ）において第１のガス透過性表面上に層状化されたＡＰＣの平均層数に対する比率は、２：１である。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が約１．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約４．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が約１．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が約２．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約３．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が正確にまたは約２．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が約２．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約７．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約６．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が約４．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約５．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が正確にまたは約４．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が約１．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約４．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種され、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が、約２．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約７．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が約１．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種され、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が、約３．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約６．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が約２．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約３．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種され、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が、約４．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２～約５．５×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の範囲から選択される密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ａ）において、第１のＡＰＣ集団が正確にまたは約２．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で第１のガス透過性表面に播種され、ステップ（ｂ）において、第２のＡＰＣ集団が正確にまたは約４．０×１０^６ＡＰＣ／ｃｍ^２の密度で第１のガス透過性表面に播種されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＡＰＣが末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＰＢＭＣが照射され、第１のＴ細胞集団のドナーに対して外因性であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞が腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞が骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞が末梢血リンパ球（ＰＢＬ）であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団がドナーの全血からの分離によって得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団がドナーのアフェレーシス産物からの分離によって得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、Ｔ細胞表現型の正または負の選択によってドナーの全血またはアフェレーシス産物から分離されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞表現型がＣＤ３＋及びＣＤ４５＋であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団のプライミングによる第１の拡張を行う前に、Ｔ細胞がＮＫ細胞から分離されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。別の実施形態では、Ｔ細胞は、第１のＴ細胞集団からのＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の除去によって、第１のＴ細胞集団中のＮＫ細胞から分離される。別の実施形態では、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞は、ＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞画分を除去し、かつ陰性画分を回収するゲーティング戦略を使用して、第１のＴ細胞集団を細胞選別に供することによって、第１のＴ細胞集団から除去される。別の実施形態では、前述の方法は、高いＮＫ細胞パーセンテージを特徴とする第１のＴ細胞集団におけるＴ細胞の拡張のために利用される。別の実施形態では、前述の方法は、高いＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞パーセンテージを特徴とする第１のＴ細胞集団におけるＴ細胞の拡張のために利用される。別の実施形態では、前述の方法は、多数のＮＫ細胞の存在を特徴とする腫瘍組織におけるＴ細胞の拡張のために利用される。別の実施形態では、前述の方法は、多数のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞を特徴とする腫瘍組織におけるＴ細胞の拡張のために利用される。別の実施形態では、前述の方法は、多数のＮＫ細胞の存在を特徴とする腫瘍に罹患している患者から得られた腫瘍組織におけるＴ細胞の拡張のために利用される。別の実施形態では、前述の方法は、多数のＣＤ３－ＣＤ５６＋細胞の存在を特徴とする腫瘍に罹患している患者から得られた腫瘍組織におけるＴ細胞の拡張のために利用される。別の実施形態では、前述の方法は、卵巣癌に罹患している患者から得られた腫瘍組織におけるＴ細胞の拡張のために利用される。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団からの約１×１０^７Ｔ細胞を容器内に播種して、かかる容器内で一次の第１の拡張を開始するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が複数の容器に分布し、各容器において、第１のＴ細胞集団からの約１×１０^７Ｔ細胞を播種して、かかる容器内で一次の第１の拡張を開始するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ステップ（ｃ）において採取された第２のＴ細胞集団が治療的ＴＩＬ集団であるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１つ以上の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）、コア生検、コア針生検、または細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１つ以上のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～２０個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～１０個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のコア生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１つ以上の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～２０個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～１０個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の細針吸引物から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１つ以上の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の小生検（例えば、パンチ生検を含む）から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１つ以上のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～２０個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１～１０個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第１のＴ細胞集団が、ドナー由来の腫瘍組織の１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のコア針生検から得られるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療的ＴＩＬ集団に拡張するための方法であって、ｉ）ＩＬ－２を含む第１の細胞培養倍地中で腫瘍試料を約３日間培養することによって対象における腫瘍の１つ以上の小生検、コア生検、または針生検から得られた腫瘍試料から第１のＴＩＬ集団を得る及び／または受容することと、（ｉｉ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第２の細胞培養倍地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１のプライミング拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１のプライミング拡張が第１のガス透過性表面積を含む容器内で行われ、第１のプライミング拡張が約７日または８日間の第１の期間行われて、第２のＴＩＬ集団が得られ、第２のＴＩＬ集団は第１のＴＩＬ集団よりも数が多い、第２のＴＩＬ集団を産生することと、（ｉｉｉ）第２のＴＩＬ集団の第２の細胞培養倍地に追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びＡＰＣを補充することによって第２の急速拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の急速拡張において添加されるＡＰＣの数が、ステップ（ｉｉ）において添加されるＡＰＣの数の少なくとも２倍であり、第２の急速拡張が約１１日間の第２の期間行われて、第３のＴＩＬ集団が得られ、第３のＴＩＬ集団が治療的ＴＩＬ集団であり、第２の急速拡張が第２のガス透過性表面積を含む容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）から得られた治療的ＴＩＬ集団を採取することと、（ｖ）ステップ（ｉｖ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことと、を含む、方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療的ＴＩＬ集団に拡張するための方法であって、（ｉ）ＩＬ－２を含む第１の細胞培養倍地中で腫瘍試料を約３日間培養することによって対象における腫瘍の１つ以上の小生検、コア生検、または針生検から取得された腫瘍試料から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、（ｉｉ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第２の細胞培養倍地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによってプライミングによる第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、プライミングによる第１の拡張が約７日または８日間の第１の期間行われて、第２のＴＩＬ集団が取得され、第２のＴＩＬ集団は第１のＴＩＬ集団よりも数が多い、第２のＴＩＬ集団を産生することと、（ｉｉｉ）第２のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及びＡＰＣを含む第３の細胞培養培地と接触させることによって急速な第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、急速な第２の拡張が約１１日間の第２の期間行われて、第３のＴＩＬ集団が取得され、第３のＴＩＬ集団が治療的ＴＩＬ集団である、第３のＴＩＬ集団を産生することと、（ｉｖ）ステップ（ｉｉｉ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、を含む、方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２の期間の５日目の後に、培養物が２つ以上の継代培養物に分割され、各継代培養物に追加量の第３の培養培地が補充され、約６日間培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２の期間の５日目の後に、培養物が２つ以上の継代培養物に分割され、各継代培養物にＩＬ－２を含む第４の培養培地が補充され、約６日間培養されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、第２の期間の５日目の後に、培養物が最大５つの継代培養物に分割されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、方法におけるすべてのステップが約２２日で完了するように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載の方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、Ｔ細胞を拡張する方法であって、（ｉ）第１のＴ細胞集団を培養することによって、ドナーにおける腫瘍の１つ以上の小生検、コア生検、または針生検から取得された腫瘍細胞由来の第１のＴ細胞集団のプライミングによる第１の拡張を行って成長をもたらし、第１のＴ細胞集団の活性化をプライミングすることと、（ｉｉ）ステップ（ａ）においてプライミングされた第１のＴ細胞集団の活性化が減衰し始めた後に、第１のＴ細胞集団を培養することによって第１のＴ細胞集団の急速な第２の拡張を行って成長をもたらし、第１のＴ細胞集団の活性化を促進して第２のＴ細胞集団を取得することと、（ｉｖ）第２のＴ細胞集団を採取することと、を含む、Ｔ細胞を拡張する方法を提供する。いくつかの実施形態では、腫瘍試料は、複数のコア生検から得られる。いくつかの実施形態では、複数のコア生検は、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０個のコア生検からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔ細胞またはＴＩＬが腫瘍消化物から取得されるように修正された、上記の該当する前段落のうちのいずれかに記載される方法。いくつかの実施形態では、腫瘍消化物は、例えば、ＲＰＭＩ１６４０、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ、１０ｍｇ／ｍＬゲンタマイシン、３０Ｕ／ｍＬ ＤＮａｓｅ、及び１．０ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼであるが、これらに限定されない酵素培地中で腫瘍をインキュベートすること、続いて、機械的解離（ＧｅｎｔｌｅＭＡＣＳ，Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ａｕｂｕｒｎ，ＣＡ）によって生成される。いくつかの実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ（任意のブレンドまたはタイプのコラゲナーゼを含む）、Ａｃｃｕｔａｓｅ（商標）、Ａｃｃｕｍａｘ（商標）、ヒアルロニダーゼ、中性プロテアーゼ（ディスパーゼ）、キモトリプシン、キモパパイン、トリプシン、カゼイナーゼ、エラスターゼ、パパイン、プロテアーゼタイプＸＩＶ（プロナーゼ）、デオキシリボヌクレアーゼＩ（ＤＮａｓｅ）、トリプシン阻害剤、任意の他の解離酵素またはタンパク質分解酵素、及びこれらの任意の組み合わせ等の１つ以上の解離（消化）酵素を含むが、これらに限定されない腫瘍解離酵素混合物の中に配置される。他の実施形態では、腫瘍は、コラゲナーゼ（任意のブレンドまたはタイプのコラゲナーゼを含む）、中性プロテアーゼ（ディスパーゼ）及びデオキシリボヌクレアーゼＩ（ＤＮａｓｅ）を含む腫瘍解離酵素混合物中に配置される。

ＶＩ．薬学的組成物、投与量、及び投薬レジメン
ある実施形態では、本開示の方法を使用して拡張及び／または遺伝子修飾された（ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む）ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、薬学的組成物として患者に投与される。ある実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のＴＩＬ懸濁液である。本開示のＰＢＭＣを使用して拡張されたＴＩＬは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ３０～６０分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。

任意の好適な用量のＴＩＬが投与され得る。いくつかの実施形態では、特にがんが黒色腫である場合、約２．３×１０^１０～約１３．７×１０^１０のＴＩＬが投与され、平均約７．８×１０^１０ＴＩＬである。ある実施形態では、約１．２×１０^１０～約４．３×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約３×１０^１０～約１２×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約４×１０^１０～約１０×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約５×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約６×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約７×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約２．３×１０^１０～約１３．７×１０^１０である。いくつかの実施形態では、特にがんが黒色腫である場合、治療上有効な投与量は、約７．８×１０^１０のＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１．２×１０^１０～約４．３×１０^１０のＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約３×１０^１０～約１２×１０^１０のＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約４×１０^１０～約１０×１０^１０のＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約５×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約６×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約７×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬである。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物で提供されるＴＩＬの数は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、３×１０^８、４×１０^８、５×１０^８、６×１０^８、７×１０^８、８×１０^８、９×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１×１０^１１、２×１０^１１、３×１０^１１、４×１０^１１、５×１０^１１、６×１０^１１、７×１０^１１、８×１０^１１、９×１０^１１、１×１０^１２、２×１０^１２、３×１０^１２、４×１０^１２、５×１０^１２、６×１０^１２、７×１０^１２、８×１０^１２、９×１０^１２、１×１０^１３、２×１０^１３、３×１０^１３、４×１０^１３、５×１０^１３、６×１０^１３、７×１０^１３、８×１０^１３、及び９×１０^１３である。ある実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの数は、１×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、５×１０^９～１×１０^１０、１×１０^１０～５×１０^１０、５×１０^１０～１×１０^１１、５×１０^１１～１×１０^１２、１×１０^１２～５×１０^１２、及び５×１０^１２～１×１０^１３の範囲内である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、例えば、薬学的組成物の１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖ未満である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、薬学的組成物の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖ超である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、薬学的組成物の約０．０００１％～約５０％、約０．００１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０２％～約２９％、約０．０３％～約２８％、約０．０４％～約２７％、約０．０５％～約２６％、約０．０６％～約２５％、約０．０７％～約２４％、約０．０８％～約２３％、約０．０９％～約２２％、約０．１％～約２１％、約０．２％～約２０％、約０．３％～約１９％、約０．４％～約１８％、約０．５％～約１７％、約０．６％～約１６％、約０．７％～約１５％、約０．８％～約１４％、約０．９％～約１２％、または約１％～約１０％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの範囲内である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、薬学的組成物の約０．００１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０２％～約４．５％、約０．０３％～約４％、約０．０４％～約３．５％、約０．０５％～約３％、約０．０６％～約２．５％、約０．０７％～約２％、約０．０８％～約１．５％、約０．０９％～約１％、約０．１％～約０．９％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの範囲内である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ、または０．０００１ｇ以下である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、または１０ｇ超である。

本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬは、広い投与量範囲にわたって有効である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象の性別及び年齢、治療される対象の体重、ならびに主治医の選好及び経験に依存するであろう。適切な場合、ＴＩＬの臨床的に確立された投与量が使用される場合もある。ＴＩＬの投与量などの本明細書の方法を使用して投与される薬学的組成物の量は、治療されるヒトまたは哺乳動物、障害または状態の重症度、投与速度、医薬品有効成分の性質、及び処方医師の裁量に依存するであろう。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、単回用量で投与され得る。かかる投与は、注射、例えば、静脈内注射によるものであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、複数回用量で投与され得る。投薬は、１年に１回、２回、３回、４回、５回、６回、または６回超であり得る。投薬は、月１回、２週間に１回、週１回、または隔日に１回であり得る。ＴＩＬの投与は、必要な限り継続することができる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、３×１０^８、４×１０^８、５×１０^８、６×１０^８、７×１０^８、８×１０^８、９×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１×１０^１１、２×１０^１１、３×１０^１１、４×１０^１１、５×１０^１１、６×１０^１１、７×１０^１１、８×１０^１１、９×１０^１１、１×１０^１２、２×１０^１２、３×１０^１２、４×１０^１２、５×１０^１２、６×１０^１２、７×１０^１２、８×１０^１２、９×１０^１２、１×１０^１３、２×１０^１３、３×１０^１３、４×１０^１３、５×１０^１３、６×１０^１３、７×１０^１３、８×１０^１３、及び９×１０^１３である。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、１×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、５×１０^９～１×１０^１０、１×１０^１０～５×１０^１０、５×１０^１０～１×１０^１１、５×１０^１１～１×１０^１２、１×１０^１２～５×１０^１２、及び５×１０^１２～１×１０^１３の範囲内である。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約４．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約３．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ～約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ～約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ～約１．７ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約１．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約１．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．５５ｍｇ／ｋｇ～約０．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．６５ｍｇ／ｋｇ～約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ～約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ～約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１．８５ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ～約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ～約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ～約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．１５ｍｇ／ｋｇ～約３．６ｍｇ／ｋｇ、約２．３ｍｇ／ｋｇ～約３．４ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ～約３．３ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ～約３．１５ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、または約２．８５ｍｇ／ｋｇ～約２．９５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約３００ｍｇ、約２０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約５ｍｇ～約４５ｍｇ、約１０ｍｇ～約４０ｍｇ、約１５ｍｇ～約３５ｍｇ、約２０ｍｇ～約３０ｍｇ、約２３ｍｇ～約２８ｍｇ、約５０ｍｇ～約１５０ｍｇ、約６０ｍｇ～約１４０ｍｇ、約７０ｍｇ～約１３０ｍｇ、約８０ｍｇ～約１２０ｍｇ、約９０ｍｇ～約１１０ｍｇ、または約９５ｍｇ～約１０５ｍｇ、約９８ｍｇ～約１０２ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１６０ｍｇ～約２４０ｍｇ、約１７０ｍｇ～約２３０ｍｇ、約１８０ｍｇ～約２２０ｍｇ、約１９０ｍｇ～約２１０ｍｇ、約１９５ｍｇ～約２０５ｍｇ、または約１９８～約２０７ｍｇの範囲内である。

ＴＩＬの有効量は、鼻腔内経路及び経皮経路を含む、同様の有用性を有する薬剤の認められた投与様式のうちのいずれかによって、動脈内注射によって、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、局所、移植によって、または吸入によって、単回用量または複数回用量のいずれかで投与され得る。

別の実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団を含む注入バッグを提供する。

別の実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団及び薬学的に許容される担体を含む腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載のＴＩＬ組成物を含む注入バッグを提供する。

別の実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団の凍結保存された調製物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載の治療的ＴＩＬ集団及び凍結保存された培地を含む腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、凍結保存培地がＤＭＳＯを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、凍結保存培地が７～１０％のＤＭＳＯを含むように修正された、上記の前段落のうちのいずれかに記載のＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、上記の前段落のうちのいずれかに記載のＴＩＬ組成物の凍結保存された調製物を提供する。

ある実施形態では、本開示の方法を使用して拡張されたＴＩＬは、薬学的組成物として患者に投与される。ある実施形態では、薬学的組成物は、滅菌緩衝液中のＴＩＬ懸濁液である。本開示のＰＢＭＣを使用して拡張されたＴＩＬは、当該技術分野で知られている任意の好適な経路によって投与され得る。いくつかの実施形態では、Ｔ細胞は、単回の動脈内または静脈内注入として投与され、これは、好ましくは、およそ３０～６０分続く。他の好適な投与経路には、腹腔内、髄腔内、及びリンパ内投与が含まれる。

任意の好適な用量のＴＩＬが投与され得る。いくつかの実施形態では、特にがんがＮＳＣＬＣである場合、約２．３×１０^１０～約１３．７×１０^１０のＴＩＬが投与され、平均は約７．８×１０^１０のＴＩＬである。ある実施形態では、約１．２×１０^１０～約４．３×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約３×１０^１０～約１２×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約４×１０^１０～約１０×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約５×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約６×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、約７×１０^１０～約８×１０^１０のＴＩＬが投与される。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約２．３×１０^１０～約１３．７×１０^１０である。いくつかの実施形態では、特にがんがＮＳＣＬＣである場合、治療上有効な投与量は、約７．８×１０^１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約１．２×１０^１０～約４．３×１０^１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約３×１０^１０～約１２×１０^１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約４×１０^１０～約１０×１０^１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約５×１０^１０～約８×１０^１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約６×１０^１０～約８×１０^１０ＴＩＬである。いくつかの実施形態では、治療上有効な投与量は、約７×１０^１０～約８×１０^１０ＴＩＬである。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物で提供されるＴＩＬの数は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、３×１０^８、４×１０^８、５×１０^８、６×１０^８、７×１０^８、８×１０^８、９×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１×１０^１１、２×１０^１１、３×１０^１１、４×１０^１１、５×１０^１１、６×１０^１１、７×１０^１１、８×１０^１１、９×１０^１１、１×１０^１２、２×１０^１２、３×１０^１２、４×１０^１２、５×１０^１２、６×１０^１２、７×１０^１２、８×１０^１２、９×１０^１２、１×１０^１３、２×１０^１３、３×１０^１３、４×１０^１３、５×１０^１３、６×１０^１３、７×１０^１３、８×１０^１３、及び９×１０^１３である。ある実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの数は、１×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、５×１０^９～１×１０^１０、１×１０^１０～５×１０^１０、５×１０^１０～１×１０^１１、５×１０^１１～１×１０^１２、１×１０^１２～５×１０^１２、及び５×１０^１２～１×１０^１３の範囲内である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、例えば、薬学的組成物の１００％、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖ未満である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、薬学的組成物の９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１９．７５％、１９．５０％、１９．２５％、１９％、１８．７５％、１８．５０％、１８．２５％、１８％、１７．７５％、１７．５０％、１７．２５％、１７％、１６．７５％、１６．５０％、１６．２５％、１６％、１５．７５％、１５．５０％、１５．２５％、１５％、１４．７５％、１４．５０％、１４．２５％、１４％、１３．７５％、１３．５０％、１３．２５％、１３％、１２．７５％、１２．５０％、１２．２５％、１２％、１１．７５％、１１．５０％、１１．２５％、１１％、１０．７５％、１０．５０％、１０．２５％、１０％、９．７５％、９．５０％、９．２５％、９％、８．７５％、８．５０％、８．２５％、８％、７．７５％、７．５０％、７．２５％、７％、６．７５％、６．５０％、６．２５％、６％、５．７５％、５．５０％、５．２５％、５％、４．７５％、４．５０％、４．２５％、４％、３．７５％、３．５０％、３．２５％、３％、２．７５％、２．５０％、２．２５％、２％、１．７５％、１．５０％、１２５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、０．１％、０．０９％、０．０８％、０．０７％、０．０６％、０．０５％、０．０４％、０．０３％、０．０２％、０．０１％、０．００９％、０．００８％、０．００７％、０．００６％、０．００５％、０．００４％、０．００３％、０．００２％、０．００１％、０．０００９％、０．０００８％、０．０００７％、０．０００６％、０．０００５％、０．０００４％、０．０００３％、０．０００２％、または０．０００１％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖ超である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、薬学的組成物の約０．０００１％～約５０％、約０．００１％～約４０％、約０．０１％～約３０％、約０．０２％～約２９％、約０．０３％～約２８％、約０．０４％～約２７％、約０．０５％～約２６％、約０．０６％～約２５％、約０．０７％～約２４％、約０．０８％～約２３％、約０．０９％～約２２％、約０．１％～約２１％、約０．２％～約２０％、約０．３％～約１９％、約０．４％～約１８％、約０．５％～約１７％、約０．６％～約１６％、約０．７％～約１５％、約０．８％～約１４％、約０．９％～約１２％、または約１％～約１０％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの範囲内である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの濃度は、薬学的組成物の約０．００１％～約１０％、約０．０１％～約５％、約０．０２％～約４．５％、約０．０３％～約４％、約０．０４％～約３．５％、約０．０５％～約３％、約０．０６％～約２．５％、約０．０７％～約２％、約０．０８％～約１．５％、約０．０９％～約１％、約０．１％～約０．９％ｗ／ｗ、ｗ／ｖ、またはｖ／ｖの範囲内である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの量は、１０ｇ、９．５ｇ、９．０ｇ、８．５ｇ、８．０ｇ、７．５ｇ、７．０ｇ、６．５ｇ、６．０ｇ、５．５ｇ、５．０ｇ、４．５ｇ、４．０ｇ、３．５ｇ、３．０ｇ、２．５ｇ、２．０ｇ、１．５ｇ、１．０ｇ、０．９５ｇ、０．９ｇ、０．８５ｇ、０．８ｇ、０．７５ｇ、０．７ｇ、０．６５ｇ、０．６ｇ、０．５５ｇ、０．５ｇ、０．４５ｇ、０．４ｇ、０．３５ｇ、０．３ｇ、０．２５ｇ、０．２ｇ、０．１５ｇ、０．１ｇ、０．０９ｇ、０．０８ｇ、０．０７ｇ、０．０６ｇ、０．０５ｇ、０．０４ｇ、０．０３ｇ、０．０２ｇ、０．０１ｇ、０．００９ｇ、０．００８ｇ、０．００７ｇ、０．００６ｇ、０．００５ｇ、０．００４ｇ、０．００３ｇ、０．００２ｇ、０．００１ｇ、０．０００９ｇ、０．０００８ｇ、０．０００７ｇ、０．０００６ｇ、０．０００５ｇ、０．０００４ｇ、０．０００３ｇ、０．０００２ｇ、または０．０００１ｇ以下である。

いくつかの実施形態では、本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬの量は、０．０００１ｇ、０．０００２ｇ、０．０００３ｇ、０．０００４ｇ、０．０００５ｇ、０．０００６ｇ、０．０００７ｇ、０．０００８ｇ、０．０００９ｇ、０．００１ｇ、０．００１５ｇ、０．００２ｇ、０．００２５ｇ、０．００３ｇ、０．００３５ｇ、０．００４ｇ、０．００４５ｇ、０．００５ｇ、０．００５５ｇ、０．００６ｇ、０．００６５ｇ、０．００７ｇ、０．００７５ｇ、０．００８ｇ、０．００８５ｇ、０．００９ｇ、０．００９５ｇ、０．０１ｇ、０．０１５ｇ、０．０２ｇ、０．０２５ｇ、０．０３ｇ、０．０３５ｇ、０．０４ｇ、０．０４５ｇ、０．０５ｇ、０．０５５ｇ、０．０６ｇ、０．０６５ｇ、０．０７ｇ、０．０７５ｇ、０．０８ｇ、０．０８５ｇ、０．０９ｇ、０．０９５ｇ、０．１ｇ、０．１５ｇ、０．２ｇ、０．２５ｇ、０．３ｇ、０．３５ｇ、０．４ｇ、０．４５ｇ、０．５ｇ、０．５５ｇ、０．６ｇ、０．６５ｇ、０．７ｇ、０．７５ｇ、０．８ｇ、０．８５ｇ、０．９ｇ、０．９５ｇ、１ｇ、１．５ｇ、２ｇ、２．５、３ｇ、３．５、４ｇ、４．５ｇ、５ｇ、５．５ｇ、６ｇ、６．５ｇ、７ｇ、７．５ｇ、８ｇ、８．５ｇ、９ｇ、９．５ｇ、または１０ｇ超である。

本発明の薬学的組成物中に提供されるＴＩＬは、広い投与量範囲にわたって有効である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象の性別及び年齢、治療される対象の体重、ならびに主治医の選好及び経験に依存するであろう。適切な場合、ＴＩＬの臨床的に確立された投与量が使用される場合もある。ＴＩＬの投与量などの本明細書の方法を使用して投与される薬学的組成物の量は、治療されるヒトまたは哺乳動物、障害または状態の重症度、投与速度、医薬品有効成分の性質、及び処方医師の裁量に依存するであろう。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、単回用量で投与され得る。かかる投与は、注射、例えば、静脈内注射によるものであり得る。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、複数回用量で投与され得る。投薬は、１年に１回、２回、３回、４回、５回、６回、または６回超であり得る。投薬は、月１回、２週間に１回、週１回、または隔日に１回であり得る。ＴＩＬの投与は、必要な限り継続することができる。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約１×１０^６、２×１０^６、３×１０^６、４×１０^６、５×１０^６、６×１０^６、７×１０^６、８×１０^６、９×１０^６、１×１０^７、２×１０^７、３×１０^７、４×１０^７、５×１０^７、６×１０^７、７×１０^７、８×１０^７、９×１０^７、１×１０^８、２×１０^８、３×１０^８、４×１０^８、５×１０^８、６×１０^８、７×１０^８、８×１０^８、９×１０^８、１×１０^９、２×１０^９、３×１０^９、４×１０^９、５×１０^９、６×１０^９、７×１０^９、８×１０^９、９×１０^９、１×１０^１０、２×１０^１０、３×１０^１０、４×１０^１０、５×１０^１０、６×１０^１０、７×１０^１０、８×１０^１０、９×１０^１０、１×１０^１１、２×１０^１１、３×１０^１１、４×１０^１１、５×１０^１１、６×１０^１１、７×１０^１１、８×１０^１１、９×１０^１１、１×１０^１２、２×１０^１２、３×１０^１２、４×１０^１２、５×１０^１２、６×１０^１２、７×１０^１２、８×１０^１２、９×１０^１２、１×１０^１３、２×１０^１３、３×１０^１３、４×１０^１３、５×１０^１３、６×１０^１３、７×１０^１３、８×１０^１３、及び９×１０^１３である。いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、１×１０^６～５×１０^６、５×１０^６～１×１０^７、１×１０^７～５×１０^７、５×１０^７～１×１０^８、１×１０^８～５×１０^８、５×１０^８～１×１０^９、１×１０^９～５×１０^９、５×１０^９～１×１０^１０、１×１０^１０～５×１０^１０、５×１０^１０～１×１０^１１、５×１０^１１～１×１０^１２、１×１０^１２～５×１０^１２、及び５×１０^１２～１×１０^１３の範囲内である。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約４．３ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約３．６ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約３．２ｍｇ／ｋｇ、約０．３５ｍｇ／ｋｇ～約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約２．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ～約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ～約１．７ｍｇ／ｋｇ、約０．１５ｍｇ／ｋｇ～約１．３ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ～約１．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．４５ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ、約０．５５ｍｇ／ｋｇ～約０．８５ｍｇ／ｋｇ、約０．６５ｍｇ／ｋｇ～約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ～約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ～約２．１５ｍｇ／ｋｇ、約０．８５ｍｇ／ｋｇ～約２ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ～約１．８５ｍｇ／ｋｇ、約１．１５ｍｇ／ｋｇ～約１．７ｍｇ／ｋｇ、約１．３ｍｇ／ｋｇ～約１．６ｍｇ／ｋｇ、約１．３５ｍｇ／ｋｇ～約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２．１５ｍｇ／ｋｇ～約３．６ｍｇ／ｋｇ、約２．３ｍｇ／ｋｇ～約３．４ｍｇ／ｋｇ、約２．４ｍｇ／ｋｇ～約３．３ｍｇ／ｋｇ、約２．６ｍｇ／ｋｇ～約３．１５ｍｇ／ｋｇ、約２．７ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、約２．８ｍｇ／ｋｇ～約３ｍｇ／ｋｇ、または約２．８５ｍｇ／ｋｇ～約２．９５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。

いくつかの実施形態では、ＴＩＬの有効な投与量は、約１ｍｇ～約５００ｍｇ、約１０ｍｇ～約３００ｍｇ、約２０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約２５ｍｇ～約２００ｍｇ、約１ｍｇ～約５０ｍｇ、約５ｍｇ～約４５ｍｇ、約１０ｍｇ～約４０ｍｇ、約１５ｍｇ～約３５ｍｇ、約２０ｍｇ～約３０ｍｇ、約２３ｍｇ～約２８ｍｇ、約５０ｍｇ～約１５０ｍｇ、約６０ｍｇ～約１４０ｍｇ、約７０ｍｇ～約１３０ｍｇ、約８０ｍｇ～約１２０ｍｇ、約９０ｍｇ～約１１０ｍｇ、または約９５ｍｇ～約１０５ｍｇ、約９８ｍｇ～約１０２ｍｇ、約１５０ｍｇ～約２５０ｍｇ、約１６０ｍｇ～約２４０ｍｇ、約１７０ｍｇ～約２３０ｍｇ、約１８０ｍｇ～約２２０ｍｇ、約１９０ｍｇ～約２１０ｍｇ、約１９５ｍｇ～約２０５ｍｇ、または約１９８～約２０７ｍｇの範囲内である。

ＴＩＬの有効量は、鼻腔内経路及び経皮経路を含む、同様の有用性を有する薬剤の認められた投与様式のうちのいずれかによって、動脈内注射によって、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉内、皮下、局所、移植によって、または吸入によって、単回用量または複数回用量のいずれかで投与され得る。

ＶＩＩ．患者を治療する方法
治療方法は、ＴＩＬの最初のＴＩＬ収集及び培養から始まり、任意選択で、１つ以上のＣＣＲ及び／または１つ以上のケモカイン受容体を発現するように本明細書に記載されるように修飾される。かかる治療方法は両方とも、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１２，３５（３）：２８３－２９２によって当該技術分野で説明されている。治療方法の実施形態は、実施例を含む以下の節全体に記載されている。

本明細書に記載の方法に従って、例えば、上記のステップＡ～Ｆに記載されるように（または例えば、図１に示されるように）産生される拡張ＴＩＬは、がんを有する患者の治療における特定の用途を見出す（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｇｏｆｆ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１６，３４（２０）：２３８９－２３９、及び補足内容に記載される）。いくつかの実施形態では、ＴＩＬは、以前に記載されたように、転移性黒色腫の切除された沈着物から増殖された（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ２００３，２６：３３２－３４２を参照されたい）。新鮮な腫瘍は、滅菌条件下で解剖され得る。代表的な試料は、正式な病理学的分析のために収集され得る。２ｍｍ^３～３ｍｍ^３の単一断片が使用され得る。いくつかの実施形態では、患者当たり５、１０、１５、２０、２５、または３０個の試料が取得される。いくつかの実施形態では、患者当たり２０、２５、または３０個の試料が取得される。いくつかの実施形態では、患者当たり２０、２２、２４、２６、または２８個の試料が取得される。いくつかの実施形態では、患者当たり２４個の試料が取得される。試料は、２４ウェルプレートの個々のウェル内に配置され、高用量ＩＬ－２（６，０００ＩＵ／ｍＬ）を含む成長培地中で維持され、腫瘍の破壊及び／またはＴＩＬの増殖について監視され得る。処理後に生細胞が残っている腫瘍は、本明細書に記載されるように、単一細胞懸濁液中に酵素的に消化され、凍結保存され得る。

いくつかの実施形態では、成功裏に成長したＴＩＬは、表現型分析（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、及びＣＤ５６）のためにサンプリングされ、利用可能な場合、自己腫瘍に対して試験され得る。一晩の共培養によりインターフェロンガンマ（ＩＦＮ－γ）レベルが２００ｐｇ／ｍＬを超え、バックグラウンドの２倍になった場合、ＴＩＬは反応性があるとみなされ得る。（Ｇｏｆｆ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，２０１０，３３：８４０－８４７、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。いくつかの実施形態では、自己反応性または十分な成長パターンの証拠を有する培養物は、急速拡張（ＲＥＰ）と称されることもある第２の拡張を含む、第２の拡張のために選択され得る。いくつかの実施形態では、高い自己反応性（例えば、第２の拡張中の高い増殖）を有する拡張ＴＩＬが、追加の第２の拡張のために選択される。いくつかの実施形態では、高い自己反応性を有するＴＩＬが、追加の第２のＲＥＰ拡張のために選択される。

注入バッグＴＩＬの凍結保存試料の細胞表現型は、表面マーカーＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＣＲ７、及びＣＤ４５ＲＡ（ＢＤ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）のフローサイトメトリー（例えば、ＦｌｏｗＪｏ）、ならびに本明細書に記載の方法のうちのいずれかによって分析され得る。血清サイトカインは、標準的な酵素結合免疫吸着アッセイ技術を使用することにより測定された。血清ＩＦＮ－ｇの上昇は、１００ｐｇ／ｍＬ超及び４ ３ベースラインレベルを超えると定義された。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば本明細書で例示される方法によって産生されるＴＩＬは、ＴＩＬの臨床効果の驚くべき改善を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図１に例示される方法によって産生されるＴＩＬは、例えば、図１に例示されるもの以外の方法を含む、本明細書に記載されるもの以外の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、増加した臨床効果を示す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるもの以外の方法は、プロセス１Ｃ及び／または第１世代（Ｇｅｎ１）と称される方法を含む。いくつかの実施形態では、増加した有効性は、ＤＣＲ、ＯＲＲ、及び／または他の臨床応答によって測定される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法、例えば図１に例示される方法によって産生されるＴＩＬは、例えば、図１に例示されるもの以外の方法、例えば、Ｇｅｎ１プロセスを含む、本明細書に記載されるもの以外の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、同様の応答時間および安全性プロファイルを示す。

いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－ガンマ（ＩＦＮ－γ）は、治療有効性及び／または増加した臨床的有効性を示す。いくつかの実施形態では、ＴＩＬで治療された対象の血液中のＩＦＮ－γは、活性なＴＩＬを示す。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ産生の効力アッセイが用いられる。ＩＦＮ－γ産生は、細胞傷害能の別の尺度である。ＩＦＮ－γ産生は、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象のエクスビボでの血液、血清、またはＴＩＬ中のサイトカインＩＦＮ－γのレベルを決定することによって測定することができる。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γの増加は、本発明の方法によって産生されたＴＩＬで治療された患者における治療有効性を示す。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍、２倍、３倍、４倍、または５倍以上増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、２倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、３倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、４倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γ分泌は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、５倍増加する。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡキットを使用して測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象のエクスビボでのＴＩＬにおいて測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象の血液において測定される。いくつかの実施形態では、ＩＦＮ－γは、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されたＴＩＬで治療された対象のＴＩＬ血清において測定される。

いくつかの実施形態では、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されるＴＩＬは、例えばプロセス１Ｃ法と称される方法などの、図１に例示されていないものを含む他の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、増加したポリクローン性を示す。いくつかの実施形態では、有意に改善されたポリクローン性及び／または増加したポリクローン性は、治療有効性及び／または増加した臨床的有効性を示す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、Ｔ細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性の増加は、本発明の方法によって産生されたＴＩＬの投与に関する治療有効性を示すことができる。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、１倍、２倍、１０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、２倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、５００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０００倍増加する。

有効性の尺度には、当該技術分野で知られており、本明細書にも記載されている、疾患制御率（ＤＣＲ）ならびに全応答率（ＯＲＲ）が含まれ得る。

Ａ．がんを治療する方法
本明細書に記載の組成物及び方法は、疾患を治療するための方法で使用され得る。ある実施形態では、それらは、成人患者または小児患者における、がんなどの過剰増殖性障害の治療に使用するためのものである。それらは、本明細書及び以下の段落に記載される他の障害の治療にも使用され得る。

いくつかの実施形態では、過剰増殖性障害は、がんである。いくつかの実施形態では、過剰増殖性障害は、固形腫瘍がんである。いくつかの実施形態では、固形腫瘍癌は、肛門癌、膀胱癌、乳癌（トリプルネガティブ乳癌を含む）、骨癌、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）によって引き起こされるがん、中枢神経系関連癌（上衣腫、髄芽腫、神経芽腫、松果体芽腫、及び未分化神経外胚葉性腫瘍を含む）、子宮頸癌（扁平上皮癌、腺扁平上皮癌、及び子宮頸部腺癌）、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、食道癌、食道胃接合癌、胃癌、消火器癌、消化管間質腫瘍、神経膠芽細胞腫、神経膠腫、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、下咽頭癌、喉頭癌、鼻咽頭癌、中咽頭癌、及び咽頭癌）、腎臓癌、肝臓癌、肺癌（非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）及び小細胞肺癌）、黒色腫（ブドウ膜黒色腫、脈絡膜黒色腫、毛様体黒色腫、または虹彩黒色腫を含む）、中皮腫（悪性胸膜中皮腫を含む）、卵巣癌、膵臓癌（膵管腺癌を含む）、陰茎癌、直腸癌、腎癌、腎細胞癌、肉腫（ユーイング肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、ならびに他の骨及び軟部組織肉腫を含む）、甲状腺癌（未分化甲状腺癌を含む）、子宮癌、ならびに膣癌からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、過剰増殖性障害は、血液学的悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、血液学的悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、本発明は、がん患者を治療する方法を含み、がんは、血液学的悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用して、がんを有する患者を治療する方法を含み、がんは、血液学的悪性腫瘍である。いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＣＣＲを発現するように修飾されたＭＩＬまたはＰＢＬを使用して、がんを有する患者を治療する方法を含み、がんは、血液学的悪性腫瘍である。

ある実施形態では、がんは、化学療法、放射線療法、または免疫療法を含む少なくとも１つの前療法による治療に対して再発するか、または不応性である、固形腫瘍がん及び血液学的悪性腫瘍を含む、前述のがんのうちの１つである。ある実施形態では、がんは、化学療法、放射線療法、及び／または免疫療法を含む少なくとも２つの以前の療法による治療に対して再発するか、または不応性である、前述のがんのうちの１つである。ある実施形態では、がんは、化学療法、放射線療法、及び／または免疫療法を含む少なくとも３つの以前の療法による治療に対して再発するか、または不応性である前述のがんのうちの１つである。

いくつかの実施形態では、がんは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）癌である。したがって、ＭＳＩ－Ｈ及びｄＭＭＲ癌ならびに試験は、Ｋａｗａｋａｍｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｔｒｅａｔ．Ｏｐｔｉｏｎｓ Ｏｎｃｏｌ．２０１５，１６，３０に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用してがんを有する患者を治療する方法を含み、患者は、ヒトである。いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用してがんを有する患者を治療する方法を含み、患者は、非ヒトである。いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用してがんを有する患者を治療する方法を含み、患者は、伴侶動物である。いくつかの実施形態では、本発明は、１つ以上のＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用してがんを有する患者を治療する方法を含み、患者は、霊長類、ウマ、イヌ、またはネコ科動物である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、がんは、ＢＲＡＦ阻害剤及び／またはＭＥＫ阻害剤による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、がんは、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エンコラフェニブ、ソラフェニブ、及びそれらの薬学的に許容される塩または溶媒和物からなる群から選択されるＢＲＡＦ阻害剤による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、がんは、トラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ピマセルチニブ、レファメチニブ、及びそれらの薬学的に許容される塩または溶媒和物からなる群から選択されるＭＥＫ阻害剤による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、がんは、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エンコラフェニブ、ソラフェニブ、及びそれらの薬学的に許容される塩または溶媒和物からなる群から選択されるＢＲＡＦ阻害剤、ならびにトラメチニブ、コビメチニブ、ビニメチニブ、セルメチニブ、ピマセルチニブ、レファメチニブ、及びそれらの薬学的に許容される塩または溶媒和物からなる群から選択されるＭＥＫ阻害剤による治療に対して不応性である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がん患者を治療する方法を含み、がんは、小児癌である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、がんは、ブドウ膜黒色腫である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、ブドウ膜黒色腫は、脈絡膜黒色腫、毛様体黒色腫、または虹彩黒色腫である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、小児癌は、神経芽腫である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、小児癌は、肉腫である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、肉腫は、骨肉腫である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、肉腫は、軟部組織肉腫である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、軟部組織肉腫は、横紋筋肉腫、ユーイング肉腫、または未分化神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、小児癌は、中枢神経系（ＣＮＳ）関連癌である。いくつかの実施形態では、小児癌は、化学療法による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、小児癌は、放射線療法による治療に対して不応性である。いくつかの実施形態では、小児癌は、ジヌツキシマブによる治療に対して不応性である。

いくつかの実施形態では、本発明は、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＣＮＳ関連がんは、髄芽腫、松果芽腫、神経膠腫、上衣腫、または神経膠芽細胞腫である。

本明細書に記載の組成物及び方法は、がんを治療するための方法において使用することができ、がんは、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体による治療に対して不応性または耐性である。いくつかの実施形態では、患者は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対する一次不応性患者である。いくつかの実施形態では、患者は、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対する事前の応答を示さない。いくつかの実施形態では、患者は、患者のがんの進行に続く、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対する事前の応答を示す。いくつかの実施形態では、がんは、少なくとも１つの化学療法剤と組み合わせた抗ＣＴＬＡ－４抗体及び／または抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体に対して不応性である。いくつかの実施形態では、以前の化学療法剤は、カルボプラチン、パクリタキセル、ペメトレキセド、及び／またはシスプラチンである。いくつかの実施形態では、化学療法剤（複数可）は、白金ダブレット化学療法剤である。いくつかの実施形態では、白金ダブレット療法は、シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第１の化学療法剤と、ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはナブ－パクリタキセルを含む）からなる群から選択される第２の化学療法剤と、を含む。いくつかの実施形態では、白金ダブレット化学療法剤は、ペメトレキセドと組み合わされている。

いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、ＰＤ－Ｌ１陰性であり、及び／または本明細書の他の場所に記載されるように、腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）が１％未満でＰＤ－Ｌ１を発現するがんを有する患者に由来する。

いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体及び白金ダブレット療法を含む併用療法に対して不応性であり、白金ダブレット療法は、
ｉ）シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第１の化学療法剤と、
ｉｉ）ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはｎａｂ－パクリタキセルを含む）からなる群から選択される第２の化学療法剤と、を含む。

いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、ペメトレキセド、及び白金ダブレット療法を含む併用療法に対して不応性であり、白金ダブレット療法は、
ｉ）シスプラチン及びカルボプラチンからなる群から選択される第１の化学療法剤と、
ｉｉ）ビノレルビン、ゲムシタビン、及びタキサン（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、またはｎａｂ－パクリタキセルを含む）からなる群から選択される第２の化学療法剤と、を含む。

いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－１抗体で処理されている。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体で処理されている。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、治療ナイーブである。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－１抗体で治療されていない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体で治療されていない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、以前に化学療法剤で治療されている。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、以前に化学療法剤で治療されているが、もはや化学療法剤で治療されていない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ナイーブである。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、低いＰＤ－Ｌ１の発現を有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、治療ナイーブのＮＳＣＬＣを有するか、または化学療法治療後であるが、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ナイーブである。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、治療ナイーブまたは化学療法治療後であるが、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ナイーブであり、低いＰＤ－Ｌ１の発現を有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有する。いくつかの実施形態では、対象は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有し、低いＰＤ－Ｌ１の発現を有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、検出可能なＰＤ－Ｌ１の発現を有しない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、治療ナイーブまたは化学療法治療後であるが、抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ナイーブであり、検出可能なＰＤ－Ｌ１の発現を有しない。いくつかの実施形態では、患者は、ベースラインで巨大腫瘤病変を有し、検出可能なＰＤ－Ｌ１の発現を有しない。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ患者は、治療ナイーブのＮＳＣＬＣまたは化学療法後（例えば、化学療法剤後）であるが、ＰＤ－Ｌ１の発現が低く、及び／またはベースラインで巨大腫瘤病変を有する抗ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ナイーブである。いくつかの実施形態では、最大腫瘍直径が横方向または冠状面のいずれかで測定された７ｃｍより大きい場合、巨大腫瘤病変が示される。いくつかの実施形態では、巨大腫瘤病変は、２０ｍｍ以上の短軸直径を有する腫れたリンパ節がある場合に示される。いくつかの実施形態では、化学療法剤は、ＮＳＣＬＣの標準治療の治療薬を含む。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１発現は、腫瘍割合スコアによって決定される。いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣ腫瘍を有する対象は、＜１％の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）を有する。いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣ腫瘍を有する対象は、≧１％ ＴＰＳを有する。いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣを有する対象は、抗ＰＤ－１及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、該抗ＰＤ－１及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性ＮＳＣＬＣを有する対象は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、該抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療の前に決定された。

いくつかの実施形態では、例えば図１に記載されるものを含む、本発明の方法によって調製されるＴＩＬは、例えばプロセス１Ｃ法と称される方法などの、図１に例示されていないものを含む他の方法によって産生されるＴＩＬと比較して、増加したポリクローン性を示す。いくつかの実施形態では、有意に改善されたポリクローン性及び／または増加したポリクローン性は、がん治療に対する治療有効性及び／または増加した臨床的有効性を示す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、Ｔ細胞レパートリーの多様性を指す。いくつかの実施形態では、ポリクローン性の増加は、本発明の方法によって産生されたＴＩＬの投与に関する治療有効性を示すことができる。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬと比較して、１倍、２倍、１０倍、１００倍、５００倍、または１０００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、２倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、５００倍増加する。いくつかの実施形態では、ポリクローン性は、未治療の患者と比較して、及び／または例えば、図１に具体化されるもの以外の方法を含む、本明細書で提供されるもの以外の方法を使用して調製されたＴＩＬで治療された患者と比較して、１０００倍増加する。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１発現は、本明細書に記載の１つのさらなる試験方法を使用して、腫瘍割合スコアによって決定される。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ腫瘍を有する対象または患者は、＜１％の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）を有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣ腫瘍は、≧１％ ＴＰＳを有する。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣを有する対象または患者は、抗ＰＤ－１及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗ＰＤ－１及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣを有する対象または患者は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性または耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍を有する対象または患者は、＜１％の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）を有する。いくつかの実施形態では、不応性または耐性ＮＳＣＬＣ腫瘍を有する対象または患者は、≧１％ ＴＰＳを有する。いくつかの実施形態では、不応性または耐性ＮＳＣＬＣを有する対象または患者は、抗ＰＤ－１及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗ＰＤ－１及び／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療の前に決定された。いくつかの実施形態では、不応性または耐性ＮＳＣＬＣを有する対象または患者は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体で以前に治療されており、腫瘍割合スコアは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療の前に決定された。

いくつかの実施形態では、ＮＳＣＬＣは、１％未満（ＴＰＳ＜１％）のＰＤ－Ｌ１タンパク質についての任意の強度での部分的または完全な膜染色を示す、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１療法の前に採取された患者からの腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）または生存腫瘍細胞のパーセンテージを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、＜５０％、＜４５％、＜４０％、＜３５％、＜３０％、＜２５％、＜２０％、＜１５％、＜１０％、＜９％、＜８％、＜７％、＜６％、＜５％、＜４％、＜３％、＜２％、＜１％、＜０．９％、＜０．８％、＜０．７％、＜０．６％、＜０．５％、＜０．４％、＜０．３％、＜０．２％、＜０．１％、＜０．０９％、＜０．０８％、＜０．０７％、＜０．０６％、＜０．０５％、＜０．０４％、＜０．０３％、＜０．０２％、及び＜０．０１％からなる群から選択されるＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、約５０％、約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％、約１５％、約１０％、約９％、約８％、約７％、約６％、約５％、約４％、約３％、約２％、約１％、約０．９％、約０．８％、約０．７％、約０．６％、約０．５％、約０．４％、約０．３％、約０．２％、約０．１％、約０．０９％、約０．０８％、約０．０７％、約０．０６％、約０．０５％、約０．０４％、約０．０３％、約０．０２％，及び約０．０１％からなる群から選択されるＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～１％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．９％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．８％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．７％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．６％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．５％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．４％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．３％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．２％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ある実施形態では、ＮＳＣＬＣは、０％～０．１％のＴＰＳを示すＮＳＣＬＣである。ＴＰＳは、当該技術分野で知られている方法、例えば、Ｈｉｒｓｃｈ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｔｈｏｒａｃ．Ｏｎｃｏｌ．２０１７，１２，２０８－２２２に記載される方法、あるいはペムブロリズマブまたは他の抗ＰＤ－１もしくは抗ＰＤ－Ｌ１療法による治療前のＴＰＳの決定に使用される方法によって測定され得る。米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認されたＴＰＳの測定のための方法を使用することもできる。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１は、エクソソームＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１は、循環腫瘍細胞上に見出される。

いくつかの実施形態では、部分的な膜染色は、１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９９％、またはそれ以上を含む。いくつかの実施形態では、完了した膜染色は、およそ１００％の膜染色を含む。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１の試験は、患者の血清中のＰＤ－Ｌ１のレベルを測定することを伴い得る。これらの実施形態では、患者の血清中のＰＤ－Ｌ１の測定は、腫瘍の不均一性の不確実性及び連続生検の患者の不快感を除去する。

いくつかの実施形態では、ベースラインまたは標準レベルと比較して、可溶性ＰＤ－Ｌ１の上昇は、ＮＳＣＬＣにおける予後の悪化と相関する。例えば、Ｏｋｕｍａ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌｕｎｇ Ｃａｎｃｅｒ，２０１８，１９，４１０－４１７、Ｖｅｃｃｈｉａｒｅｌｌｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ，２０１８，９，１７５５４－１７５６３を参照されたい。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１は、エクソソームＰＤ－Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１は、循環腫瘍細胞上に発現される。

ある実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによって、ＮＳＣＬＣを治療する方法を提供し、対象または患者は、
ｉ．＜１％のＰＤ－Ｌ１所定の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、
ｉｉ．１％～４９％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコア、または
ｉｉｉ．１つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも１つを有し、
ドライバー変異は、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択され、この方法は、
（ａ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第１の拡張を行うことと、
（ｄ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行が、系を開くことなく起こる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取するステップであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｇ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｈ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。

ある実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによって、ＮＳＣＬＣを治療する方法を提供し、この方法は、

（ａ）ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－Ｌ１発現及び腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）について患者の腫瘍を試験することと、

（ｂ）１つ以上のドライバー変異の所定の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択される、試験することと、

（ｃ）患者が、約１％～約４９％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、

（ｄ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｅ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第１の拡張を行うことと、
（ｇ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が、系を開くことなく起こる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｈ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
（ｉ）ステップ（ｅ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｊ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｋ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。

ある実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによって、ＮＳＣＬＣを治療する方法を提供し、この方法は、

（ａ）ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－Ｌ１発現及び腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）について患者の腫瘍を試験することと、

（ｂ）１つ以上のドライバー変異の所定の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択される、試験することと、

（ｃ）患者が、約１％未満のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、

（ｄ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｅ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｅ）からステップ（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、第１の拡張を行うことと、
（ｇ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が、系を開くことなく起こる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｈ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
（ｉ）ステップ（ｅ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｊ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｋ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。

ある実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによって、ＮＳＣＬＣを治療する方法を提供し、この方法は、

（ａ）ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－Ｌ１発現及び腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）について患者の腫瘍を試験することと、

（ｂ）１つ以上のドライバー変異の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、またはＲＥＴ融合からなる群から選択される、試験することと、

（ｃ）患者が、約１％～約４９％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、

（ｄ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｅ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第１の拡張を行うことと、
（ｇ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が、系を開くことなく起こる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｈ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
（ｉ）ステップ（ｅ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｊ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｋ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。

ある実施形態では、本発明は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療を必要とする対象または患者に腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の集団を投与することによって、ＮＳＣＬＣを治療する方法を提供し、この方法は、

（ａ）ＰＤ－Ｌ１のＰＤ－Ｌ１発現及び腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）について患者の腫瘍を試験することと、

（ｂ）１つ以上のドライバー変異の非存在について患者を試験することであって、ドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、またはＲＥＴ融合からなる群から選択される、試験することと、

（ｃ）患者が、約１％未満のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳスコアを有していることを判定し、また患者がドライバー変異を有しないことを判定することと、

（ｄ）対象から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、対象または患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｅ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｆ）ＩＬ－２を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行って、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第１の拡張を行うことと、
（ｇ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ－２、ＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が、系を開くことなく起こる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｈ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
（ｉ）ステップ（ｅ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｊ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｋ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから対象または患者に投与することと、を含む。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の、本明細書に記載のＴＩＬ組成物を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、それぞれ、治療上有効な投与量の治療的ＴＩＬ集団及び本明細書に記載のＴＩＬ組成物を投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが対象に投与されるように修正された、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。好適な骨髄非破壊的リンパ枯渇レジメンが、本明細書に記載されている。

別の実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップを含むように修正された、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。

ある実施形態では、本発明は、本明細書に記載のＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体を発現するように任意選択で遺伝子修飾された、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用して、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供し、この方法は、アパミスタマブ－^１３１Ｉ、またはそのバリアント、断片、もしくはバイオシミラーを含むリンパ枯渇レジメンを投与するステップをさらに含む。ＩＯＭＡＢ－ＡＣＴとしても知られるアパミスタマブ－^１３１Ｉは、Ａｃｔｉｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃから入手可能な抗ＣＤ４５抗体である。

ある実施形態では、本発明は、本明細書に記載のＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体を発現するように任意選択で遺伝子修飾された、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用して、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供し、この方法は、アレムツズマブ、またはそのバリアント、断片、もしくはバイオシミラーを含むリンパ枯渇レジメンを投与するステップをさらに含む。ＬＥＭＴＲＡＤＡとしても知られるアレムツズマブは、Ｓａｎｏｆｉ，Ｉｎｃ．から入手可能である。

ある実施形態では、本発明は、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用して、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供し、本明細書に記載のＣＣＲの使用は、ＩＬ－２レジメンでステップ対象を置き換え、ＩＬ－２レジメンが、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬ療法と併せて対象に投与されないようにする。ある実施形態では、本発明は、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用して、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供し、ＩＬ－２レジメンは、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬ療法と併せて対象に投与されない。ある実施形態では、本発明は、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用して、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供し、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＣＣＲを発現するように修飾され、ＩＬ－２レジメンは、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬ療法と併せて対象に投与されない。ある実施形態では、本発明は、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを使用して、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供し、本明細書に記載のＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体と、ＩＬ－２Ｒ細胞内ドメイン（ＩＬ－２Ｒβ及びＩＬ－２Ｒγドメインを含む）との使用が用いられ、ＩＬ－２レジメンは、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬ療法と併せて対象に投与されない。

別の実施形態では、本発明は、対象にＴＩＬ細胞を投与した翌日に開始する、高用量のＩＬ－２レジメンで対象を治療するステップをさらに含むように修正された、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、高用量ＩＬ－２レジメンが、許容範囲まで８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入として投与される６００，０００または７２０，０００ＩＵ／ｋｇを含むように修正された、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが固形腫瘍である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、胃腸癌、腎癌、または腎細胞癌である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、ＨＮＳＣＣ、子宮頸癌、ＮＳＣＬＣ、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、及び胃腸癌である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが黒色腫である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんがＨＮＳＣＣである、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが子宮頸癌である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんがＮＳＣＬＣである、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）である、本明細書に記載のがんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが胃腸癌である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが高頻度変異癌である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが小児高頻度変異癌である、がんを有する対象を治療するための方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の治療的ＴＩＬ集団を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法で使用するための、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団を提供する。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量のＴＩＬ組成物を対象に投与することを含む、がんを有する対象を治療するための方法で使用するための、本明細書に記載のＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団または本明細書に記載のＴＩＬ組成物を対象に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが対象に投与されるように修正された、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団または本明細書に記載のＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間を投与するステップを含むように修正された、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ＴＩＬ細胞を患者に投与した翌日から開始する、高用量ＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含むように修正された、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、高用量ＩＬ－２レジメンが、許容範囲まで８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入として投与される６００，０００または７２０，０００ＩＵ／ｋｇを含むように修正された、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが固形腫瘍であるように修正された、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、卵巣癌、子宮頸癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺癌、膀胱癌、乳癌、ヒト乳頭癌ウイルスによって引き起こされる癌、頭頸部癌（頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を含む）、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、胃腸癌、腎癌、または腎細胞癌である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが黒色腫、ＨＮＳＣＣ、子宮頸癌、ＮＳＣＬＣ、神経膠芽細胞腫（ＧＢＭを含む）、及び胃腸癌である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが黒色腫である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんがＨＮＳＣＣである、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが子宮頸癌である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんがＮＳＣＬＣである、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが神経膠芽細胞腫である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが胃腸癌である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが高頻度変異癌である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

別の実施形態では、本発明は、がんが小児高頻度変異癌である、がんの治療のための治療的ＴＩＬ集団またはＴＩＬ組成物を提供する。

いくつかの実施形態では、がんは、高頻度変異癌または高頻度変異癌の表現型である。高頻度変異癌は、Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ２０１７，１７１，１０４２－１０５６（すべての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる）に広く記載されている。いくつかの実施形態では、高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり９～１０個の変異を含む。いくつかの実施形態では、小児高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり９．９１個の変異を含む。いくつかの実施形態では、成人高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり９個の変異を含む。いくつかの実施形態では、増強された高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり１０～１００個の変異を含む。いくつかの実施形態では、増強された小児高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり１０～１００個の変異を含む。いくつかの実施形態では、増強された成人高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり１０～１００個の変異を含む。いくつかの実施形態では、超高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり１００個を超える変異を含む。いくつかの実施形態では、小児超高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり１００個を超える変異を含む。いくつかの実施形態では、成人超高頻度変異腫瘍は、１メガベース（Ｍｂ）当たり１００個を超える変異を含む。

いくつかの実施形態では、超変異腫瘍は、複製修復経路に変異を有する。いくつかの実施形態では、高頻度変異腫瘍は、複製修復関連ＤＮＡポリメラーゼに変異を有する。いくつかの実施形態では、高頻度変異腫瘍は、マイクロサテライト不安定性を有する。いくつかの実施形態では、超高頻度変異腫瘍は、複製修復関連ＤＮＡポリメラーゼに変異を有し、マイクロサテライト不安定性を有する。いくつかの実施形態では、腫瘍における高頻度変異は、免疫チェックポイント阻害剤への応答と相関している。いくつかの実施形態では、高頻度変異腫瘍は、免疫チェックポイント阻害剤での治療に対して耐性である。いくつかの実施形態では、高頻度変異腫瘍は、本発明のＴＩＬを使用して治療され得る。いくつかの実施形態では、腫瘍における高頻度変異は、環境要因（外因性曝露）によって引き起こされる。例えば、紫外線光は、悪性黒色腫における多数の変異の主な原因になる可能性がある（例えば、Ｐｆｅｉｆｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｔａｔ．Ｒｅｓ．２００５，５７１，１９－３１、Ｓａｇｅ，Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．１９９３，５７，１６３－１７４を参照）。いくつかの実施形態では、腫瘍における高頻度変異は、直接変異原曝露に起因する、肺腫瘍及び喉頭腫瘍、ならびに他の腫瘍の場合、タバコの煙中の６０を超える発がん物質によって引き起こされ得る（例えば、Ｐｌｅａｓａｎｃｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１０，４６３，１８４－１９０を参照）。いくつかの実施形態では、腫瘍における高頻度変異は、アポリポタンパク質Ｂ ｍＲＮＡ編集酵素触媒ポリペプチド様（ＡＰＯＢＥＣ）ファミリーメンバーの調節不全によって引き起こされ、これは、広範囲のがんにおいてＣからＴへの移行のレベルの増加をもたらすことが示されている（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２０１３，４５，９７０－９７６を参照）。いくつかの実施形態では、腫瘍における高頻度変異は、主要な複製酵素Ｐｏｌ３及びＰｏｌｄ１によって行われる校正を損なう変異によるＤＮＡ複製修復欠陥によって引き起こされる。いくつかの実施形態では、腫瘍における高頻度変異は、結腸直腸癌、子宮内膜癌、及び他のがんにおける高頻度変異に関連するＤＮＡミスマッチ修復の欠陥によって引き起こされる（例えば、Ｋａｎｄｏｔｈ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１３，４９７，６７－７３、Ｍｕｚｎｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１２，４８７，３３０－３３７を参照）。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ複製修復変異は、構成的または二対立遺伝子ミスマッチ修復欠損症（ＣＭＭＲＤ）、リンチ症候群、及びポリメラーゼ校正関連ポリポーシス（ＰＰＡＰ）などのがん好発症候群にも見られる。

ある実施形態では、本発明は、ＴＩＬ集団でがんを治療する方法を含み、がんは、高頻度変異癌である。ある実施形態では、本発明は、ＴＩＬ集団でがんを治療する方法を含み、がんは、増強された高頻度変異癌である。ある実施形態では、本発明は、ＴＩＬ集団でがんを治療する方法を含み、がんは、超高頻度変異癌である。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量の治療的ＴＩＬ集団を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法における本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団の使用を提供する。

別の実施形態では、本発明は、治療上有効な投与量のＴＩＬ組成物を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法における前段落のうちのいずれかに記載のＴＩＬ組成物の使用を提供する。

別の実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンを対象に投与することと、次いで治療上有効な投与量の、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団または本明細書に記載のＴＩＬ組成物を対象に投与することと、を含む、患者におけるがんを治療する方法における、本明細書に記載の治療的ＴＩＬ集団または本明細書に記載のＴＩＬ組成物の使用を提供する。

１．ドライバー変異に基づいてがんを治療する方法
本明細書で使用される場合、「ドライバー変異」及び／または「アクショナブルな変異」及び／または「発がん性ドライバー変異」という語句は、典型的には、発がん性ドライバー（すなわち、がんドライバーまたはがん誘導物質）とみなされる変異を指す。これらの変異のうちの１つ以上の存在は、伝統的に、標的療法の標的として利用されてきた。多くの場合、ドライバー変異は、例えば、チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）を含む標的治療部分での治療のために検査及び／または分析される。かかるドライバー変異は、いくつかの実施形態では、第１選択の治療的処置に対する応答に影響を及ぼすか、または作用することができる。本明細書に記載のＴＩＬ療法方法及び組成物は、かかるドライバー変異が患者または対象に存在するか否かにかかわらず、治療に有効である。かかるドライバー変異は、全エクソーム配列決定または特定のドライバー変異の検出を標的とする方法を含む、当該技術分野で知られている任意の方法によって試験及び決定することができる。

いくつかの実施形態では、がんは、１つ以上のドライバー変異の存在または非存在を示すがんである。いくつかの実施形態では、がんは、１つ以上のドライバー変異の存在を示す。いくつかの実施形態では、がんは、１つ以上のドライバー変異の非存在を示す。いくつかの実施形態では、がんは、１つ以上のドライバー変異の非存在または存在について分析されている。いくつかの実施形態では、１つ以上のドライバー変異は存在しない。いくつかの実施形態では、がん治療は、１つ以上のドライバー変異の存在または非存在とは無関係である。いくつかの実施形態では、がんは、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｋ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択される１つ以上のドライバー変異を示す。いくつかの実施形態では、がんは、＜１％のＰＤ－Ｌ１ ＴＰＳを示し、１つ以上のドライバー変異の所定の非存在を有する。

いくつかの実施形態では、がんは、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療のために適応されていないがんである。

いくつかの実施形態では、がんは、＜１％のＰＤ－Ｌ１ ＴＰＳを示し、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療のために適応されていない。

いくつかの実施形態では、がんは、ＮＳＣＬＣであり、ＥＧＦＲ変異は、ＮＳＣＬＣから小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）への腫瘍形質転換をもたらす。

いくつかの実施形態では、がん（またはその生検）は、高腫瘍変異負荷（高ＴＭＢ、＞１０ｍｕｔ／ｋｂ）及び／またはマイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ－高）を示す。いくつかの実施形態では、がん（またはその生検）は、高腫瘍変異負荷（高ＴＭＢ、＞１０ｍｕｔ／ｋｂ）を示す。いくつかの実施形態では、がん（またはその生検）は、マイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ－高）を示す。腫瘍変異負荷を評価するための方法及びシステムは、当該技術分野で知られている。かかる方法及びシステムの例示的な開示は、米国特許第９，７９２，４０３号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１８／０３６３０６６Ａ１号、国際特許出願公開第ＷＯ２０１３／０７０６３４Ａ１号及びＷＯ２０１８／１０６８８４Ａ１号、ならびにＭｅｔｚｋｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１０，１１，３１－４６に見出すことができ、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ変異には、例えば、Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ１９Ｄｅｌ、Ｌ８５８Ｒ、エクソン２０挿入、ｄｅｌＥ７０９－Ｔ７１０ｉｎｓＤ、Ｉ７４４＿Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５＿Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫ、Ｅ７０９Ｘ、Ｅ７０９Ｋ、Ｅ７０９Ａ、エクソン１８欠失、Ｇ７１９Ｘ、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｓ７６８Ｉ、Ｌ７４７Ｐ、Ａ７６３＿７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ａ７６３＿７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＤＮＰエクソン２０挿入、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨエクソン２０挿入、Ｓ７６８Ｉ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ＩｎｓＡＳＶ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｉ７４４＿Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、及び／またはＥＧＦＲキナーゼドメイン重複（ＥＧＦＲ－ＫＤＤ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ変異には、Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ１９Ｄｅｌ、Ｌ８５８Ｒ、エクソン２０挿入、ｄｅｌＥ７０９－Ｔ７１０ｉｎｓＤ、Ｉ７４４＿Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｋ７４５＿Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫ、Ｅ７０９Ｘ、Ｅ７０９Ｋ、Ｅ７０９Ａ、エクソン１８欠失、Ｇ７１９Ｘ、Ｇ７１９Ａ、Ｇ７１９Ｓ、Ｌ８６１Ｑ、Ｓ７６８Ｉ、Ｌ７４７Ｐ、Ａ７６３＿７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ａ７６３＿７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＤＮＰエクソン２０挿入、Ｈ７７３＿Ｖ７７４ｉｎｓＮＰＨエクソン２０挿入、Ｓ７６８Ｉ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＳＶＤ、Ｖ７６９＿Ｄ７７０ＩｎｓＡＳＶ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６ｉｎｓＩＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｋ７４５＿Ｅ７４６ｉｎｓＴＰＶＡＩＫ、ｐ．Ｉ７４４＿Ｋ７４５ｉｎｓＫＩＰＶＡＩ、Ｄ７７０＿Ｎ７７１ｉｎｓＮＰＧ、Ｐ７７２＿Ｈ７７３ｉｎｓＰＮＰ、Ａ７６３＿Ｙ７６４ｉｎｓＦＱＥＡ、及びＥＧＦＲキナーゼドメイン重複（ＥＧＦＲ－ＫＤＤ）からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ変異は、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ１９Ｄｅｌ／Ｔ７９０Ｍ、Ｇ７１９Ｘ／Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｘ／Ｓ７６８Ｉ（またはＳ７６８Ｉ／Ｇ７１９Ｘ）、Ｓ７６８Ｉ／Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８５８Ｒ／Ｅ７０９Ａ、及び／またはＥ７４６＿Ｔ７５１ｄｅｌｉｎｓＡ＋Ｔ７９０Ｍを含むが、これらに限定されない二重変異である。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ変異は、Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍ、Ｅｘ１９Ｄｅｌ／Ｔ７９０Ｍ、Ｇ７１９Ｘ／Ｌ８６１Ｑ、Ｇ７１９Ｘ／Ｓ７６８Ｉ（またはＳ７６８Ｉ／Ｇ７１９Ｘ）、Ｓ７６８Ｉ／Ｌ８５８Ｒ、Ｌ８５８Ｒ／Ｅ７０９Ａ、及びＥ７４６＿Ｔ７５１ｄｅｌｉｎｓＡ＋Ｔ７９０Ｍからなる群から選択される二重変異である。ＥＧＦＲ変異に関する追加の特性及び方法は、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０２０６１８Ａ１号（参照により本明細書に組み込まれる）に提供される。

いくつかの実施形態では、ＡＬＫ変異には、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント１（ＡＢ２７４７２２．１；ＢＡＦ７３６１１．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント２（ＡＢ２７５８８９．１；ＢＡＦ７３６１２．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント３ａ（ＡＢ３７４３６１．１；ＢＡＧ５５００３．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント３ｂ（ＡＢ３７４３６２．１；ＢＡＧ５５００４．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント４（ＡＢ３７４３６３．１；ＢＡＧ７５１４７．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント５ａ（ＡＢ３７４３６４．１；ＢＡＧ７５１４８．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント５ｂ（ＡＢ３７４３６５．１；ＢＡＧ７５１４９．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント６（ＡＢ４６２４１１．１；ＢＡＨ５７３３５．１）、ＥＭＬ４－ＡＬＫバリアント７（ＡＢ４６２４１２．１；ＢＡＨ５７３３６．１）、ＫＩＦ５Ｂ－ＡＬＫ（ＡＢ４６２４１３．１；ＢＡＨ５７３３７．１）、ＮＰＭ－ＡＬＫ、ＴＰＭ３－ＡＬＫ、ＴＦＧＸＬ－ＡＬＫ、ＴＥＧＬ－ＡＬＫ、ＴＦＧＳ－ＡＬＫ、Ａ１１Ｃ－ＡＬＫ、ＣＬＴＣ－ＡＬＫ、ＭＳＮ－ＡＬＫ、ＴＰＭ４－ＡＬＫ、ＭＹＨ９－ＡＬＫ、ＲＡＮＢＰ２－ＡＬＫ、ＡＬ０１７－ＡＬＫ、及びＣＡＲＳ－ＡＬＫが含まれるが、これらに限定されない（例えば、Ｐｕｌｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９：３３０－３５８を参照）。さらに、熟練者は、ＡＬＫキナーゼとその融合パートナーとの間の特定の融合事象に応じて、ＡＬＫキナーゼバリアントが生じ得ることを理解するであろう（例えば、ＥＭＬ４は、例えば、Ｈｏｒｎ ａｎｄ Ｐａｏ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００９，２７，４２４７－４２５３（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、少なくともエクソン２、６ａ、６ｂ、１３、１４、及び／または１５を融合することができる。

ＡＬＫ変異のさらなる例は、米国特許第９，０１８，２３０号及び第９，４５８，５０８号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、本発明のＲＯＳ１変異は、ＲＯＳ１融合であり、ＲＯＳ１タンパク質のキナーゼドメインを含むＲＯＳ１ポリペプチドの一部（またはそれをコードするポリヌクレオチド）が別のポリペプチド（またはそれをコードするポリヌクレオチド）の全部または一部に融合し、その第２のポリペプチドまたはポリヌクレオチドの名前が融合において命名される。いくつかの実施形態では、ＲＯＳ１変異は、ＲＯＳ１融合タンパク質（例えば、ＩＨＣによって）及び／またはＲＯＳ融合遺伝子（例えば、ＦＩＳＨによって）、及び／またはＲＯＳ１ ｍＲＮＡ（例えば、ｑＲＴ－ＰＣＲによって）として決定され、好ましくはＳＬＣ３４Ａ２－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３２及び３４に融合されたＳＬＣ３４Ａ２エクソン１３ｄｅｌ２０４６及び４）、ＣＤ７４－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３２及び３４に融合されたＣＤ７４エクソン６）、ＥＺＲ－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３４に融合されたＥＺＲエクソン１０）、ＴＰＭ３－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３５に融合されたＴＰＭ３エクソン８）、ＬＲＩＧ３－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３５に融合されたＬＲＩＧ３エクソン１６）、ＳＤＣ４－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３２に融合されたＳＤＣ４エクソン２及び４ならびにＲＯＳ１エクソン３４に融合されたＳＤＣ４エクソン４）、ＦＩＧ－ＲＯＳ１としても知られるＧＯＰＣ－ＲＯＳ１（ＲＯＳ１エクソン３５に融合されたＧＯＰＣエクソン８及びＲＯＳ１エクソン３６に融合されたＧＯＰＣエクソン４）、ならびにＲＯＳ１^{Ｇ２０３２Ｒ}としても知られるＧ２０３２Ｒらなる群から選択されるＲＯＳ１融合タンパク質を示す。

ＲＯＳ１変異及びＲＯＳ融合のさらなる開示は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０２２１７３７Ａ１号、同第ＵＳ２０１５／００５６１９３Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１０／０１４３９１８Ａ１号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／０９３９２８Ａ１号に提供されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＲＥＴ変異は、ＲＥＴ融合または点変異である。

いくつかの実施形態では、ＲＥＴ点変異には、Ｈ６６５０、Ｋ６６６Ｅ、Ｋ６６６Ｍ、Ｓ６８６Ｎ、Ｇ６９１Ｓ、Ｒ６９４Ｑ、Ｍ７００Ｌ、Ｖ７０６Ｍ、Ｖ７０６Ａ、Ｅ７１３Ｋ、Ｇ７３６Ｒ、Ｇ７４８Ｃ、Ａ７５０Ｐ、Ｓ７６５Ｐ、Ｐ７６６Ｓ、Ｅ７６８Ｑ、Ｅ７６８Ｄ、Ｌ７６９Ｌ、Ｒ７７０Ｑ、Ｄ７７１Ｎ、Ｎ７７７Ｓ、Ｖ７７８１、Ｑ７８１Ｒ、Ｌ７９０Ｆ、Ｙ７９１Ｆ、Ｙ７９１Ｎ、Ｖ８０４Ｌ、Ｖ８０４Ｍ、Ｖ８０４Ｅ、Ｅ８０５Ｋ、Ｅ８０６Ｃ、Ｙ８０６Ｅ、Ｙ８０６Ｆ、Ｙ８０６Ｓ、Ｙ８０６Ｇ、Ｙ８０６Ｃ、Ｅ８１８Ｋ、Ｓ８１９Ｉ、Ｇ８２３Ｅ、Ｙ８２６Ｍ、Ｒ８３３Ｃ、Ｐ８４１Ｌ、Ｐ８４１Ｐ、Ｅ８４３Ｄ、Ｒ８４４Ｗ、Ｒ８４４Ｑ、Ｒ８４４Ｌ、Ｍ８４８Ｔ、１８５２Ｍ、Ａ８６６Ｗ、Ｒ８７３Ｗ、Ａ８７６Ｖ、Ｌ８８１Ｖ、Ａ８８３Ｆ、Ａ８８３Ｓ、Ａ８８３Ｔ、Ｅ８８４Ｋ、Ｒ８８６Ｗ、Ｓ８９１Ａ、Ｒ８９７０、Ｄ８９８Ｖ、Ｅ９０１Ｋ、５９０４Ｆ、Ｓ９０４Ｃ２、Ｋ９０７Ｅ、Ｋ９０７Ｍ、Ｒ９０８Ｋ、Ｇ９１１Ｄ、Ｒ９１２Ｐ、Ｒ９１２Ｑ、Ｍ９１８Ｔ、Ｍ９１８Ｖ、Ｍ９１８Ｌ６、Ａ９１９Ｖ、Ｅ９２１Ｋ、Ｓ９２２Ｐ、Ｓ９２２Ｙ、Ｔ９３０Ｍ、Ｆ９６１Ｌ、Ｒ９７２Ｇ、Ｒ９８２Ｃ、Ｍ１００９Ｖ、Ｄ１０１７Ｎ、Ｖ１０４１６、及びＭ１０６４Ｔが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＲＥＴ融合は、ＲＥＴと、ＢＣＲ、ＢＣＲ、ＣＬＩＰ１、ＫＩＦＳＢ、ＣＣＤＣ６、ＰＴＣｌｅｘ９、ＮＣＯＡ４、ＴＲＩＭ３３、ＥＲＣ１、ＦＧＦＲＩＯＰ、ＭＢＤ１、ＲＡＢ６１Ｐ２、ＰＲＫＡＲＩＡ、ＴＲＩＭ２４、ＫＴＮ１、ＧＯＬＧＡ５、ＨＯＯＫ３、ＫＩＡＡ１４６８、ＴＲＩＭ２７、ＡＫＡＰ１３、ＦＫＢＰ１５、ＳＰＥＣＣＩＬ、ＴＢＬ１ＸＲ１、ＣＥＰ５５、ＣＵＸ１、ＡＣＢＤ５、ＭＹＨ１３、ＰＩＢＦ１、ＫＩＡＡ１２１７、及びＭＰＲＩＰからなる群から選択される融合パートナーとの間の融合である。

ＲＥＴ変異の追加の開示は、参照によりそれら全体が本明細書に組み込まれる米国特許第１００３５７８９号に提供されている。

いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ変異は、ＢＲＡＦ Ｖ６００Ｅ／Ｋ変異である。他の実施形態では、ＢＲＡＦ変異は、非Ｖ６００Ｅ／Ｋ変異である。

いくつかの実施形態では、非Ｖ６００Ｅ／Ｋ ＢＲＡＦ変異は、キナーゼ活性化変異、キナーゼ障害変異、またはキナーゼ意義不明変異、及びそれらの組み合わせである。いくつかの実施形態では、キナーゼ活性化変異は、Ｒ４６２１、１４６３Ｓ、Ｇ４６４Ｅ、Ｇ４６４Ｒ、Ｇ４６４Ｖ、Ｇ４６６Ａ、Ｇ４６９Ａ、Ｎ５８ ｉｓ、Ｅ５８６Ｋ、Ｆ５９５Ｌ、Ｌ５９７Ｑ、Ｌ５９７Ｒ、Ｌ５９７５、Ｌ５９７Ｖ、Ａ５９８Ｖ、Ｔ５９９Ｅ、Ｖ６００Ｒ、Ｋ６０１Ｅ、５６０２Ｄ、Ａ７２８Ｖ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、キナーゼ障害変異は、Ｇ４６６Ｅ、Ｇ４６６Ｒ、Ｇ４６６Ｖ、Ｙ４７２Ｃ、Ｋ４８３Ｍ、Ｄ５９４Ａ、Ｄ５９４Ｅ、Ｄ５９４Ｇ、Ｄ５９４Ｈ、Ｄ５９４Ｎ、Ｄ５９４Ｖ、Ｇ５９６Ｒ、Ｔ５９９Ａ、５６０２Ａ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、キナーゼ意義不明変異は、Ｔ４４０１、５４６７Ｌ、Ｇ４６９Ｅ、Ｇ４６９Ｒ、Ｇ４６９５、Ｇ４６９Ｖ、Ｌ５８４Ｆ、Ｌ５８８Ｆ、Ｖ６００ Ｋ６ＯｌｄｅｌｉｎｓＥ、５６０５１、Ｑ６０９Ｌ、Ｅ６１１Ｑ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、非Ｖ６００Ｅ／Ｋ ＢＲＡＦ変異は、Ｄ５９４、Ｇ４６９、Ｋ６０１Ｅ、Ｌ５９７、Ｔ５９９重複、Ｌ４８５Ｗ、Ｆ２４７Ｌ、Ｇ４６６Ｖ、ＢＲＡＦ融合、ＢＲＡＦ－ＡＧＡＰ３再配列、ＢＲＡＦエクソン１５スライスバリアント、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、Ｍｅｔ変異は、点変異、欠失変異、挿入変異、逆行、異常スプライシング、ミスセンス変異、またはｃ－Ｍｅｔタンパク質の少なくとも１つの生物活性の増加を引き起こす遺伝子拡大、チロシンキナーゼ活性、例えば、改善された受容体ホモログ二量体化、形成のリガンド結合、体及びヘテロ二量体の増強等を含む。Ｍｅｔ変異は、ｃ－Ｍｅｔ遺伝子の任意の部分に位置し得る。一実施形態では、変異は、ｃ－ＭＥＴ遺伝子によってコードされるｃ－ＭＥＴタンパク質のキナーゼドメインにある。いくつかの実施形態では、ｃ－Ｍｅｔ変異は、Ｎ３７５、Ｖ１３、Ｖ９２３、Ｒ１７５、Ｖ１３６、Ｌ２２９、Ｓ３２３、Ｒ９８８、Ｓ１０５８／Ｔ１０１０及びＥ１６８における点変異である。

いくつかの実施形態では、ＥＲＢＢ２変異は、ＥＲＢＢ２のアミノ酸配列における点変異である。いくつかの実施形態では、ＥＲＢＢ２の点変異は、アミノ酸置換を引き起こす点変異、ｍＲＮＡスプライシングを引き起こす点変異、または上流領域における点変異である。ここで、変異は、Ｑ５６８Ｅ、Ｐ６０１Ｒ、Ｉ６２８Ｍ、Ｐ８８５Ｓ、Ｒ１４３Ｑ、Ｒ４３４Ｑ、及びＥ８７４Ｋからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を引き起こすヌクレオチド変異を含む。

いくつかの実施形態では、ＥＲＢＢ２変異は、ＥＲＢＢ２増幅である。いくつかの実施形態では、ＥＲＢＢ２増幅は、Ｖ６５９Ｅ、Ｇ３０９Ａ、Ｇ３０９Ｅ、Ｓ３１０Ｆ、Ｄ７６９Ｈ、Ｄ７６９Ｙ、Ｖ７７７Ｌ、Ｐ７８０ｉｎｓ、Ｐ７８０－Ｙ７８１ｉｎｓＧＳＰ、Ｖ８４２Ｉ、Ｒ８９６Ｃ、Ｋ７５３Ｅ、及びＬ７５５Ｓからなる群から選択される点変異を含み、ポリメラーゼ連鎖反応または当該技術分野で知られている他の配列決定技法、例えばＢｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１３，３（２），２２４－２３７、及びＺｕｏ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１６，２２（１９），４８５９－４８６９（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものによって検出され得る。

いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、ＢＲＣＡ１及び／またはＢＲＣＡ２、好ましくはＢＲＣＡ１、及び／またはタンパク質生成物がＤＮＡ損傷部位においてＢＲＣＡ１及び／またはＢＲＣＡ２と会合する１つ以上の他の遺伝子（ＡＴＭ、ＡＴＲ、Ｃｈｋ２、Ｈ２ＡＸ、５３ＢＰ１、ＮＦＢＤ１、Ｍｒｅ１１、Ｒａｄ５０、ニブリン、ＢＲＣＡ１関連環ドメイン（ＢＡＲＤ１）、Ａｂｒａｘａｓ、及びＭＳＨ２を含む）における変異である。これらの遺伝子のうちの１つ以上の変異は、ＢＲＣＡ１及び／またはＢＲＣＡ２の変異を模倣する遺伝子発現パターンをもたらし得る。

ある特定の実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、非同義変異を含む。いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、ナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、フレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、スプライシング変異を含む。いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、変異体ｍＲＮＡとして、また最終的には変異体タンパク質として発現される。いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ１／２タンパク質は、機能的である。他の実施形態では、ＢＲＣＡ１／２タンパク質は、低下した活性を有する。他の実施形態では、ＢＲＣＡ１／２タンパク質は、非機能的である。

置換に関して本明細書で使用される場合、変異に関しての「＝」記号は、一般に、同義置換、サイレントコドン、及び／またはサイレント置換を指す。特に、同義置換（サイレント置換またはサイレントコドンとも呼ばれる）は、タンパク質をコードする遺伝子のエクソンにおける、あるヌクレオチド塩基の別のヌクレオチド塩基の置換を指し、生成されたアミノ酸配列は修飾されない。これは、遺伝子コードが「縮退」であるという事実、すなわち、いくつかのアミノ酸が２つ以上の３塩基対コドンによってコードされるという事実に起因する。所与のアミノ酸のコドンのうちのいくつかは、同じアミノ酸をコードする他のものとはわずか１塩基対だけ異なるため、野生型塩基を代替物のうちの１つに置き換える点変異は、遺伝子の翻訳中に同じアミノ酸を細長いポリペプチド鎖に組み込むことをもたらす。いくつかの実施形態では、非コードＤＮＡに影響を及ぼす同義の置換及び変異は、しばしばサイレント変異とみなされるが、変異がサイレントであり、いかなる影響もないとは限らない。例えば、同義変異は、転写、スプライシング、ｍＲＮＡ輸送、及び翻訳に影響を及ぼし得、それらのいずれも結果として生じる表現型を変化させることができ、同義変異を非サイレントにする。希少なコドンに対するｔＲＮＡの基質特異性は、翻訳のタイミングに影響を及ぼし、順番にタンパク質の共翻訳折り畳みに影響を及ぼす可能性がある。これは、多くの種で観察されているコドン使用バイアスに現れている。非同義の置換／変異は、保存的（類似の生理化学的特性を有するアミノ酸への変化）、半保存的（例えば、正に荷電したアミノ酸に対して陰性）、またはラジカル（大幅に異なるアミノ酸）として任意に分類され得るアミノ酸の変化をもたらす。いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、Ｐ８７１Ｌ、Ｋ１１８３Ｒ、Ｄ６９３Ｎ、Ｓ１６３４Ｇ、Ｅ１０３８Ｇ、Ｓ１０４０Ｎ、Ｓ６９４＝（＝：サイレンスコドン）、Ｍ１６７３Ｉ、Ｑ３５６Ｒ、Ｓ１４３６＝、Ｌ７７１＝、Ｋ６５４Ｓｆｓ＊４７、Ｓ１９８Ｎ、Ｒ４９６Ｈ、Ｒ８４１Ｗ、Ｒ１３４７Ｇ、Ｈ６１９Ｎ、Ｓ１５３３Ｉ、Ｌ３０＝、Ａ６２２Ｖ、Ｙ６５５Ｖｆｓ＊１８、Ｒ４９６Ｃ、Ｅ５９７Ｋ、Ｒ１４４３＊、Ｅ２３Ｖｆｓ＊１７、Ｌ３０Ｆ、Ｅ１１１Ｇｆｓ＊３、Ｋ３３９Ｒｆｓ＊２、Ｌ５１２Ｆ、Ｄ６９３Ｎ、Ｐ８７１Ｓ、Ｓ１１４０Ｇ、Ｑ１２４０＊、Ｐ１７７０Ｓ、Ｒ７＝、Ｌ５２Ｆ、Ｔ１７６Ｍ、Ａ２２４Ｓ、Ｌ３４７＝、Ｓ５６１Ｆ、Ｅ５９７＊、Ｋ８２０Ｅ、Ｋ８９３Ｒｆｓ＊１０７、Ｅ９６２Ｋ、Ｍ１０１４Ｉ、Ｒ１０２８Ｈ、Ｅ１２５８Ｄ、Ｅ１３４６Ｋ、Ｒ１３４７Ｔ、Ｌ１４３９Ｆ、Ｈ１４７２Ｒ、Ｑ１４８８＊、Ｓ１５７２Ｃ、Ｅ１６０２Ｋ、Ｒ１６１０Ｃ、Ｌ１６２１＝、Ｑ１６２５＊、Ｑ１６２５＝、Ｄ１７５４Ｎ、Ｒ１７７２Ｑ、Ｒ１８５６＊、及びそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されないＢＲＣＡ１変異である。

いくつかの実施形態では、ＢＲＣＡ変異は、Ｖ２４６６Ａ、Ｎ２８９Ｈ、Ｎ９９１Ｄ、Ｓ４５５＝（＝：サイレンスコドン）、Ｎ３７２Ｈ、Ｈ７４３＝、Ｖ１２６９＝、Ｓ２４１４＝、Ｖ２１７１＝、Ｌ１５２１＝、Ｔ３０３３Ｎｆｓ＊１１、Ｋ１１３２＝、Ｔ３０３３Ｌｆｓ＊２９、Ｒ２８４２Ｃ、Ｎ１７８４Ｔｆｓ＊７、Ｋ３３２６＊、Ｋ３３２６＊、Ｄ１４２０Ｙ、Ｉ６０５Ｙｆｓ＊９、Ｉ３４１２Ｖ、Ａ２９５１Ｔ、Ｔ３０８５Ｎｆｓ＊２６、Ｒ２６４５Ｎｆｓ＊３、Ｓ１０１３＊、Ｔ１９１５Ｍ、Ｆ３０９０＝、Ｖ３２４４Ｉ、Ａ１３９３Ｖ、Ｒ２０３４Ｃ、Ｌ１３５６＝、Ｅ２９８１Ｒｆｓ＊３７、Ｎ１７８４Ｋｆｓ＊３、Ｋ３４１６Ｎｆｓ＊１１、Ｋ１６９１Ｎｆｓ＊１５、Ｓ１９８２Ｒｆｓ＊２２、及びそれらの任意の組み合わせを含むが、これらに限定されないＢＲＣＡ２変異である。

いくつかの実施形態では、ＮＲＡＳ変異には、Ｅ６３Ｋ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ｄ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｌ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１３Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１２Ａ、Ｑ６１Ｌ、Ｇ１３Ｖ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｈ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｃ、Ｑ６１Ｐ、Ｇ１３Ｓ、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｄ、Ａ１８Ｔ、Ｑ６１Ｘ、Ｇ６０Ｅ、Ｇ１２Ｓ、Ｑ６１＝（＝：サイレンスコドン）、Ｑ６１Ｅ、Ｑ６１Ｒ、Ａ１４６Ｔ、Ａ５９Ｔ、Ａ５９Ｄ、Ｑ６１＝、Ｒ６８Ｔ、Ａ１４６Ｔ、Ｇ１２Ａ、Ｅ６２Ｑ、Ｇ７５＝、Ａ９１Ｖ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

Ｅ１３２Ｋいくつかの実施形態では、ＰＩＫ３ＣＡ変異は、置換変異、欠失変異、及び挿入変異を含む。いくつかの実施形態では、変異は、ＰＩＫ３ＣＡのヘリカルドメイン及びそのキナーゼにおいて起こる。他の実施形態では、ＰＩＫ３ＣＡのＰ８５ＢＤドメインにおいて。いくつかの実施形態では、ＰＩＫ３ＣＡ変異は、エクソン１、２、４、５、７、９、１３、１８、及び２０にある。いくつかの実施形態では、ＰＩＫ３ＣＡ変異は、エクソン９及び２０にある。さらに他の実施形態では、ＰＩＫ３ＣＡ変異は、上記の任意の変異の組み合わせである。これらのエクソンの任意の組み合わせを、任意選択で、他のエクソンの試験と併せて試験することができる。変異の試験は、コード配列全体に沿って行うことができ、または変異がクラスター化することが見出された領域に焦点を当てることができる。変異の特定のホットスポットは、ＰＩＫ３ＣＡコード配列の１６２４、１６３３、１６３６、及び３１４０位のヌクレオチドで生じる。

いくつかの実施形態では、ＰＩＫ３ＣＡ変異のサイズは、１～３ヌクレオチドの範囲で小さい。いくつかの実施形態では、ＰＩＫ３ＣＡ変異には、Ｇ１６２４Ａ、Ｇ１６３３Ａ、Ｃ１６３６Ａ、Ａ３１４０Ｇ、Ｇ１１３Ａ、Ｔ１２５８Ｃ、Ｇ３１２９Ｔ、Ｃ３１３９Ｔ、Ｅ５４２Ｋ、Ｅ５４５Ｋ、Ｑ５４６Ｒ、Ｈ１０４７Ｌ、Ｈ１０４７Ｒ、及びＧ２７０２Ｔが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＭＡＰ２Ｋ１変異は、体細胞ＭＡＰ２Ｋ１変異、任意選択で、ＭＥＫ１レベルを上方制御するＭＡＰ２Ｋ１変異である。いくつかの実施形態では、ＭＡＰ２Ｋ１変異は、ＲＡＳ／ＭＡＰＫ経路に関連する１つ以上の遺伝子における変異であり、ＨＲＡＳ、ＫＲＡＳ、ＮＲＡＳ、ＡＲＡＦ、ＢＲＡＦ、ＲＡＦｌ、ＭＡＰ２Ｋ２、ＭＡＰＫｌ、ＭＡＰＫ３、ＭＡＰ３Ｋ３を含む。ある特定の実施形態では、ＭＡＰ２Ｋ１変異は、ＲＡＳＡ、ＰＴＥＮ、ＥＮＧ、ＡＣＶＲＬ１、ＳＭＡＤ４、ＧＤＦ２、またはそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の遺伝子にある。

いくつかの実施形態では、ＭＡＰ２Ｋ１変異には、Ｐ１２４Ｓ、Ｑ５６Ｐ、Ｋ５７Ｎ、Ｅ２０３Ｋ、Ｇ２３７＊、Ｐ１２４Ｌ、Ｇ１２８Ｄ、Ｄ６７Ｎ、Ｋ５７Ｅ、Ｅ１０２＿Ｉ１０３ｄｅｌ、Ｃ１２１Ｓ、Ｋ５７Ｔ、Ｋ５７Ｎ、Ｑ５６Ｐ、Ｐ１２４Ｌ、Ｋ５７Ｎ、Ｇ１２８Ｖ、Ｑ５８＿Ｅ６２ｄｅｌ、Ｆ５３Ｌ、Ｉ１２６＝、Ｉ１０３＿Ｋ１０４ｄｅｌ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＫＲＡＳ変異は、非同義変異を含む。いくつかの実施形態では、ＫＲＡＳ変異は、ナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態では、ＫＲＡＳ変異は、フレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態では、ＫＲＡＳ変異は、スプライシング変異を含む。いくつかの実施形態では、ＫＲＡＳ変異は、変異体ｍＲＮＡとして、また最終的には変異体タンパク質として発現される。いくつかの実施形態では、変異型ＫＲＡＳタンパク質は、機能的である。他の実施形態では、変異型ＫＲＡＳタンパク質は、低下した活性を有する。他の実施形態では、変異型ＫＲＡＳタンパク質は、非機能的である。

いくつかの実施形態では、ＫＲＡＳ変異には、Ｇ１２Ｄ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ１３Ｄ、Ｇ１２Ｃ、Ｇ１２Ａ、Ｇ１２Ｓ、Ｇ１２Ｒ、Ｇ１３Ｃ、Ｑ６１Ｈ、Ａ１４６Ｔ、Ｑ６１Ｒ、Ｑ６１Ｈ、Ｑ６１Ｌ、Ｇ１３Ｓ、Ａ１４６Ｖ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１３Ｒ、Ｇ１２Ｆ、Ｋ１１７Ｎ、Ｇ１３Ａ、Ｇ１３Ｖ、Ａ５９Ｔ、Ｖ１４Ｉ、Ｋ１１７Ｎ、Ｑ２２Ｋ、Ｑ６１Ｐ、Ａ１４６Ｐ、Ｇ１３Ｄ、Ｌ１９Ｆ、Ｌ１９Ｆ、Ｑ６１Ｋ、Ｇ１２Ｖ、Ｇ６０＝、Ｇ１２＝、Ｇ１３＝、Ａ１８Ｄ、Ｔ５８Ｉ、Ｑ６１Ｅ、Ｅ６３Ｋ、Ｇ１２Ｌ、Ｇ１３Ｖ、Ａ５９Ｇ、Ｇ６０Ｄ、Ｇ１０Ｒ、Ｇ１０ｄｕｐ、Ｄ５７Ｎ、Ａ５９Ｅ、Ｖ１４Ｇ、Ｄ３３Ｅ、Ｇ１２Ｉ、Ｇ１３ｄｕｐ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない（＝は、サイレンスコーディングを示す）。

いくつかの実施形態では、ＮＦ１変異は、置換変異、欠失変異、ミスセンス変異、異常なスプライシング変異、及び挿入変異を含む。いくつかの実施形態では、ＮＦ１変異は、機能喪失（ＬＯＦ）変異である。いくつかの実施形態では、ＮＦ１変異は、Ｒ１９４７Ｘ（Ｃ５８３９Ｔ）、Ｒ３０４Ｘ、エクソン３７変異、エクソン４ｂ変異、エクソン７変異、エクソン１０ｂ変異、及びエクソン１０ｃ変異（例えば、１５７０Ｇ→Ｔ，Ｅ５２４Ｘ）からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ＣＤＫＮ２Ａ変異には、Ｒ２４Ｐ、Ｄ１０８Ｇ、Ｄ１０８Ｎ、Ｄ１０８Ｙ、Ｇ１２５Ｒ、Ｐ１１４Ｌ、Ｒ８０＊、Ｒ５８＊、Ｈ８３Ｙ、Ｗ１１０＊、Ｐ１１４Ｌ、Ｅ８８＊、Ｗ１１０＊、Ｅ１２０＊、Ｄ１０８Ｙ、Ｄ８４Ｙ、Ｄ８４Ｎ、Ｅ６９＊、Ｐ８１Ｌ、Ｑ５０＊、Ｌ７８Ｈｆｓ＊４１、Ｄ１０８Ｎ、Ｓ１２＊、Ｐ４８Ｌ、Ｅ６１＊、Ｙ４４＊、Ｅ８８Ｋ、Ｒ８０＊、Ｄ８４Ｇ、Ｌ１６Ｐｆｓ＊９、Ｙ１２９＊、Ｄ１０８Ｈ，Ａ１４８Ｔ、Ａ３６Ｇ、Ａ１０２Ｖ、Ｗ１５＊、Ｈ８３Ｒ、Ａ５７Ｖ、Ｅ３３＊、Ｄ７４Ｙ、Ａ７６Ｖ、Ｅ１５３Ｋ、Ｄ７４Ｎ、Ｈ８３Ｄ、Ｖ８２Ｍ、Ｒ５８＊、Ｙ１２９＊、Ｅ１１９＊、Ｙ４４＊、Ｄ７４Ａ、Ｔ１８＿Ａ１９ｄｕｐ、Ｙ４４Ｌｆｓ＊７６、Ｌ３２＿Ｌ３７ｄｅｌ、Ｖ２８＿Ｅ３３ｄｅｌ、Ｄ１４＿Ｌ１６ｄｅｌ、Ａ６８Ｔ、またはそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＰＴＥＮ変異は、非同義変異を含む。いくつかの実施形態では、ＰＴＥＮ変異は、ナンセンス変異を含む。いくつかの実施形態では、ＰＴＥＮ変異は、フレームシフト変異を含む。いくつかの実施形態では、ＰＴＥＮ変異は、スプライシング変異を含む。いくつかの実施形態では、変異型ＰＴＥＮは、ｍＲＮＡ及び最終的にはタンパク質として発現される。いくつかの実施形態では、変異型ＰＴＥＮタンパク質は、機能的である。他の実施形態では、変異型ＰＴＥＮタンパク質は、低下した活性を有する。他の実施形態では、変異型ＰＴＥＮタンパク質は、非機能的である。いくつかの実施形態では、ＰＴＥＮ変異には、Ｒ１３０Ｑ、Ｒ１３０Ｇ、Ｔ３１９＊、Ｒ２３３＊、Ｒ１３０＊、Ｋ２６７Ｒｆｓ＊９、Ｎ３２３Ｍｆｓ＊２１、Ｎ３２３Ｋｆｓ＊２、Ｒ１７３Ｃ、Ｒ１７３Ｈ、Ｒ３３５＊、Ｑ１７１＊、Ｑ２４５＊、Ｅ７＊、Ｄ２６８Ｇｆｓ＊３０、Ｒ１３０Ｑ、Ｑ２１４＊、Ｒ１３０Ｌ、Ｃ１３６Ｒ、Ｑ２９８＊、Ｑ１７＊、Ｈ９３Ｒ、Ｐ２４８Ｔｆｓ＊５、Ｉ３３ｄｅｌ、Ｒ２３３＊、Ｅ２９９＊、Ｇ１３２Ｄ、Ｙ６８Ｈ、Ｔ３１９Ｋｆｓ＊２４、Ｎ３２９Ｋｆｓ＊１４、Ｖ１６６Ｓｆｓ＊１４、Ｖ２９０＊、Ｔ３１９Ｎｆｓ＊６、Ｒ１４２Ｗ、Ｐ３８Ｓ、Ａ１２６Ｔ、Ｈ６１Ｒ、Ｆ２７８Ｌ、Ｓ２２９＊、Ｒ１３０Ｐ、Ｇ１２９Ｒ、Ｒ１３０Ｑｆｓ＊４、Ｐ２４６Ｌ、Ｒ１３０＊、Ｇ１６５Ｒ、Ｃ１３６Ｙ、Ｒ１７３Ｃ、Ｉ１０１Ｔ、Ｙ１５５Ｃ、Ｄ９２Ｅ、Ｋ１６４Ｒｆｓ＊３、Ｎ１８４Ｅｆｓ＊６、Ｇ１２９Ｅ，Ｒ１３０Ｇ、Ｇ３６Ｒ、Ｆ３４１Ｖ、Ｈ１２３Ｙ、Ｃ１２４Ｓ、Ｍ３５ＶＧ１２７Ｅ、Ｇ１６５Ｅ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＴＰ５３変異には、Ｒ１７５Ｈ、Ｇ２４５Ｓ、Ｒ２４８Ｑ、Ｒ２４８Ｗ、Ｒ２４９Ｓ、Ｒ２７３Ｃ、Ｒ２７３Ｈ、Ｒ２８２Ｗ、Ｃ１３５Ｙ、Ｃ１４１Ｙ、Ｐ１５１Ｓ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ１５８Ｌ、Ｙ１６３Ｃ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｃ１７６Ｆ、Ｈ１７９Ｒ、Ｈ１７９Ｙ、Ｈ１７９Ｑ、Ｙ２０５Ｃ、Ｙ２２０Ｃ、Ｙ２３４Ｃ、Ｍ２３７Ｉ、Ｃ２３８Ｙ、Ｓ２４１Ｆ、Ｇ２４５Ｄ、Ｇ２４５Ｃ、Ｒ２４８Ｌ、Ｒ２４９Ｍ、Ｖ２７２Ｍ、Ｒ２７３Ｌ、Ｐ２７８Ｌ、Ｒ２８０Ｔ、Ｅ２８５Ｋ、Ｅ２８６Ｋ、Ｒ１５８Ｈ、Ｃ１７６Ｙ、Ｉ１９５Ｔ、Ｇ２１４Ｒ、Ｇ２４５Ｖ、Ｇ２６６Ｒ、Ｇ２６６Ｅ、Ｐ２７８Ｓ、Ｒ２８０Ｋ、またはそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかのさらなる実施形態では、ＴＰ５３変異は、Ｇ２４５Ｓ；Ｒ２４９Ｓ；Ｒ２７３Ｃ；Ｒ２７３Ｈ；Ｃ１４１Ｙ、Ｖ１５７Ｆ、Ｒ１５８Ｌ、Ｙ１６３Ｃ、Ｖ１７３Ｌ、Ｖ１７３Ｍ、Ｙ２０５Ｃ、Ｙ２２０Ｃ、Ｇ２４５Ｃ、Ｒ２４９Ｍ、Ｖ２７２Ｍ、Ｒ２７３Ｌ、及びＥ２８６Ｋからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＴＰ５３変異は、上記の変異のうちの１つ以上を含む。

いくつかの実施形態では、ＣＲＥＢＢＰ変異には、Ｒ１４４６Ｃ、Ｒ１４４６Ｈ、Ｓ１６８０ｄｅｌ、Ｉ１０８４Ｓｆｓ＊１５、Ｐ１９４８Ｌ、Ｉ１０８４Ｎｆｓ＊３、？Ｒ３８６＊、Ｓ８９３Ｌ、Ｒ１３４１＊、Ｐ１４２３Ｌｆｓ＊３６、Ｐ１４８８Ｌ、Ｙ１５０３Ｈ、Ｒ１６６４Ｃ、Ａ１８２４Ｔ、Ｒ１１７３＊、Ｒ１３６０＊、Ｙ１４５０Ｃ、Ｈ２２２８Ｄ、Ｓ７１Ｌ、Ｐ９２８＝、Ｄ１４３５Ｎ、Ｗ１５０２Ｃ、Ｙ１５０３Ｄ、Ｒ４８３＊、Ｒ６０１Ｑ、Ｓ９４５Ｌ、Ｒ１１０３＊、Ｒ１２８８Ｗ、Ｒ１３９２＊、Ｃ１４０８Ｙ、Ｄ１４３５Ｇ、Ｒ１４４６Ｌ、Ｈ１４８５Ｙ、Ｑ１４９１Ｋ、Ｑ９６＊、Ｌ３６１Ｍ、Ｌ５２４Ｗｆｓ＊６、Ｑ５４０＊、Ｑ１０７３＊、Ａ１１００Ｖ、Ｒ１１６９Ｃ、Ｃ１２３７Ｙ、Ｒ１３４７Ｗ、Ｇ１４１１Ｅ、Ｗ１４７２Ｃ、Ｉ１４８３Ｆ、Ｐ１４８８Ｔ、Ｒ１４９８＊、Ｙ１５０３Ｆ、Ｑ１８５６＊、Ｒ１９８５Ｃ、Ｒ２１０４Ｃ、Ｓ２３２８Ｌ、Ｖ２３４９＝、Ｓ２３７７Ｌ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＫＭＴ２Ｃ変異には、Ｄ３４８Ｎ、Ｐ３５０＝、Ｒ３８０Ｌ、Ｃ３９１＊、Ｐ３０９Ｓ、Ｃ９８８Ｆ、Ｙ９８７Ｈ、Ｓ９９０Ｇ、Ｋ２７９７Ｒｆｓ＊２６、Ｖ３４６＝、Ｒ８９４Ｑ、Ｒ２８４Ｑ、Ｓ８０６＝、Ｒ１６９０＝、Ｐ９８６＝、Ａ１６８５Ｓ、Ｇ３１５Ｓ、Ｑ７５５＊、Ｒ９０９Ｋ、Ｔ３１６Ｓ、Ｓ７７２Ｌ、Ｇ８３８Ｓ、Ｌ２９１Ｆ、Ｐ３３５＝、Ｃ９８８Ｆ、Ｑ２６８０＝、Ｅ７６５Ｇ、Ｋ３３９Ｎ、Ｙ８１６＊、Ｒ５２６Ｐ、Ｎ７２９Ｄ、Ｇ８４５Ｅ、Ｉ８１７Ｎｆｓ＊１１、Ｇ８９２Ｒ、Ｃ１１０３＊、Ｓ３６６０Ｌ、Ｆ４４９６Ｌｆｓ＊２１、Ｇ３１５Ｃ、Ｒ８８６Ｃ、Ｄ３４８Ｎ、Ｓ７９３＝、Ｖ９１９Ｌ、Ｒ２４８１Ｓ、Ｒ２８８４＊、Ｒ４５４９Ｃ、Ｍ３０５Ｄｆｓ＊２８、Ｔ３１６Ｓ、Ｐ３７７＝、Ｉ４５５Ｍ、Ｔ８２０Ｉ、Ｓ９６５＝、Ｓ７３０Ｙ、Ｐ８６０Ｓ、Ｑ８７３Ｈｆｓ＊４０、Ｒ９０４＊、Ｒ２６１０Ｑ、Ｒ４４７８＊、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＫＭＴ２Ｄ変異には、Ｌ１４１９Ｐ、Ｅ６４０Ｄ、Ｅ５４１Ｄ、Ｅ４５５Ｄ、Ｔ２１３１Ｐ、Ｋ１４２０Ｒ、Ｐ２３５４Ｌｆｓ＊３０、Ｇ２４９３＝、Ｑ３６１２＝、Ｉ９４２＝、Ｔ１１９５Ｈｆｓ＊１７、Ｐ４１７０＝、Ｐ１１９４Ｈ、Ｇ１２３５Ｖｆｓ＊９５、Ｐ４５６３＝、Ｐ６４７Ｈｆｓ＊２８３、Ｌ４４９＿Ｐ４５７ｄｅｌ、Ｐ３５５７＝、Ｑ３６０３＝、Ｒ１７０２＊、Ｐ６４８Ｔｆｓ＊２、Ｒ５５０１＊、Ｒ４１９８＊、Ｒ４４８４＊、Ｒ８３Ｑ、Ｒ１９０３＊、，Ｒ２６８５＊、Ｒ４２８２＊、Ｌ５３２６＝、Ｒ５４３２Ｗ、Ｒ２７３４＊、Ｑ２８００＊、Ｒ２８３０＊、Ｑ３７４５ｄｕｐ、Ｓ４０１０Ｐ、Ｒ４９０４＊、Ｇ５１８２Ａｆｓ＊６１、Ｒ５２１４Ｈ、Ｒ１６１５＊、Ｑ２３８０＊、Ｒ２６８７＊、Ｒ２７７１＊、Ｖ３０８９Ｗｆｓ＊３０、Ｑ３７９９Ｇｆｓ＊２１２、Ｒ４５３６＊、Ｒ５０３０Ｃ、Ｒ５０４８Ｃ、Ｒ５４３２Ｑ、Ａ２２１Ｌｆｓ＊４０、Ａ４７６Ｔ、Ａ２１１９Ｌｆｓ＊２５，Ｐ２５５７Ｌ、Ｒ２８０１＊、Ｑ３９１３＊、Ｒ４４２０Ｗ、Ｇ４６４１＝、Ｒ５０９７＊、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＡＲＩＤ１Ａ変異には、が含まれるが、これらに限定されない。例えば、対象は、Ｃ８８４＊（＊：ナンセンス変異）、Ｅ９６６Ｋ、Ｑ１４１１＊、Ｆ１７２０ｆｓ（ｆｓ：フレームシフト）、Ｇ１８４７ｆｓ、Ｃ１８７４ｆｓ、Ｄ１９５７Ｅ、Ｑ１４３０、Ｒ１７２１ｆｓ、Ｇ１２５５Ｅ、Ｇ２８４ｆｓ、Ｒ１７２２＊、Ｍ２７４ｆｓ、Ｇ１８４７ｆｓ、Ｐ５５９ｆｓ、Ｒ１２７６＊、Ｑ２１７６ｆｓ、Ｈ２０３ｆｓ、Ａ５９１ｆｓ、Ｑ１３２２＊、Ｓ２２６４＊、Ｑ５８６＊、Ｑ５４８ｆｓ、及びＮ７５６ｆｓからなる群から選択されるＡＲＩＤ１Ａの変異を有する。

いくつかの実施形態では、ＲＢ１変異には、Ｒ３２０Ｘ、Ｒ４６７Ｘ、Ｒ５７９Ｘ、Ｒ４５５Ｘ、Ｒ３５８Ｘ、Ｒ２５１Ｘ、Ｒ７８７Ｘ、Ｒ５５２Ｘ、Ｒ２５５Ｘ、Ｒ５５６Ｘ、Ｙ７９０Ｘ、Ｑ５７５Ｘ、Ｅ３２３Ｘ、Ｒ６６１Ｗ、Ｒ５７９＊、Ｒ４５５＊、Ｒ５５６＊、Ｒ７８７＊、Ｒ６６１Ｗ、Ｒ４４５＊、Ｒ４６７＊、Ｑ２１７＊、Ｑ４７１＊、Ｗ１９５＊、Ｑ３９５＊、Ｉ６８０Ｔ、Ｅ１３７＊、Ｒ２５５＊、Ｑ３４４＊、Ｑ６２＊、Ｅ４４０Ｋ、Ａ４８８Ｖ、Ｐ７７７Ｌｆｓ＊３３、Ｅ３２２Ｋ、Ｒ６５６Ｗ、Ｇ６１７Ｒｆｓ＊３６、Ｃ２２１＊、Ｅ４４０＊、Ｑ９３＊、Ｑ５０４＊、Ｅ１２５＊、Ｓ８３４＊、Ｅ３２３＊、Ｑ６８５＊、Ｓ８２９＊、Ｗ５１６＊、Ｇ４３５＊、Ｑ２５７＊、Ｅ７９＊、Ｓ５６７Ｌ、Ｖ６５４Ｍ、Ｖ６５４Ｓｆｓ＊１４、Ｇ１００Ｅｆｓ＊１１、Ｋ７１５＊、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＡＴＭ変異は、１０７４４Ａ＞Ｇ；１０７４４Ａ＞Ｇ、１１４８２Ｇ＞Ａ、ＩＶＳ３－５５８Ａ＞Ｔ、１４６Ｃ＞Ｇ、３８１ｄｅｌＡ、ＩＶＳ８－３ｄｅｌＧＴ、１０２８ｄｅｌＡＡＡＡ、１１２０Ｃ＞Ｔ、１９３０ｉｎｓ１６、ＩＶＳ１６＋２Ｔ＞Ｃ、２５７２Ｔ＞Ｃ、ＩＶＳ２１＋１Ｇ＞Ａ、３０８５ｄｅｌＡ、３３８１ｄｅｌＴＧＡＣ、３６０２ｄｅｌＴＴ、４０５２ｄｅｌＴ、４３９６Ｃ＞Ｔ、５１８８Ｃ＞Ｔ、５２９０ｄｅｌＣ、５５４６ｄｅｌＴ、５７９１Ｇ＞ＣＣＴ、６０４７Ａ＞Ｇ、ＩＶＳ４４－１Ｇ＞Ｔ、６６７２ｄｅｌＧＣ／６６７７ｄｅｌＴＡＣＧ、６７３６ｄｅｌｌ １／６７４９ｄｅｌ７、７１５９ｉｎｓＡＧＣＣ、７６７１ｄｅｌＧＴＴＴ、７７０５ｄｅｌ１４、７８６５Ｃ＞Ｔ、７９７９ｄｅｌＴＧＴ、８１７７Ｃ＞Ｔ、８５４５Ｃ＞Ｔ、８５６５Ｔ＞Ａ、ＩＶＳ６４＋１Ｇ＞Ｔ、及び９０１０ｄｅｌ２８を含むが、これらに限定されない、ＡＴＭ遺伝子配列における変異である。

本発明のいくつかの実施形態では、ＳＥＴＤ２変異は、ＮＣＢＩ受託番号ＮＭ＿０１４１５９のｍＲＮＡ配列の転写開始コドン位置が１に設定されたときの、ＳＥＴＤ２タンパク質をコードする遺伝子配列の変化である。いくつかの実施形態では、７５５８番目のＧ（グアニン）は、Ｔ（チミン）で置換され、４７７４番目のＣ（シトシン）は、Ｔによって置換され、１２１０番目のＡ（アデニン）は、Ｔによって置換され、４８８３番目は、Ｇによって置換され、５２９０番目のＣは、Ｔによって置換され、７０７２番目のＣは、Ｔによって置換され、４１４４番目のＧは、Ｔによって置換され、１２９７のＣは、Ｔによって置換され、７５５番目のＴは、Ｇによって置換され、７２６１のＴは、Ｇによって置換され、６７００は、Ｔによって置換され、２５３６番目のＣは、Ｔによって置換され、７４３８番目のＣは、Ｔによって置換されるか、または３８６６位でのＡの挿入、６７１２位でのＴの挿入、７５７２位でのＴの挿入、９１３番目のＡの欠失、５６１９番目のＣの欠失、塩基４６０３～４６０４の欠失、第１の塩基の欠失、１９３６番目のＣの欠失、３０９４～３１１８塩基の欠失、５２８９位におけるＡの挿入、及び６３２３～６３３３塩基の欠失が存在する。

いくつかの実施形態では、ＦＬＴ３変異には、（Ｑ５６９＿Ｅ６４８）ｉｎｓ、Ｄ８３５Ｘ、（Ｑ５６９＿Ｅ６４８）ｄｅｌｉｎｓ、（Ｄ８３５＿Ｉ８３６）、Ｄ８３５Ｙ、Ｄ８３５Ｖ、Ｄ８３５Ｙ、Ｄ８３５Ｈ、Ｔ２２７Ｍ、Ｉ８３６ｄｅｌ、Ｎ６７６Ｋ、Ｄ８３５Ｅ、Ｙ５９７＿Ｅ５９８ｉｎｓＤＹＶＤＦＲＥＹ、Ｄ８３５Ｅ、Ｄ８３５ｄｅｌ、Ｆ５９４＿Ｄ６００ｄｕｐ、Ａ６８０Ｖ、Ｄ８３９Ｇ、Ｄ９６＝、Ｄ８３５Ｈ、Ｖ４９１Ｌ、Ｄ８３５Ｅ、Ｑ９８９＊、Ｄ８３５Ｖ、Ｌ５６１＝、Ｉ８３６ｄｅｌ、Ｐ９８６Ａｆｓ＊２７、Ｄ７Ｇ、Ｄ３２４Ｎ、Ｓ４５１Ｆ、Ｄ８３５Ｎ、Ｌ５７６Ｐ、Ｙ５９７＿Ｅ５９８ｉｎｓＤＶＤＦＲＥＹ、Ｖ４９１Ｌ、Ｎ８４１Ｔ、Ｄ３２４Ｎ、Ｙ５７２Ｃ、Ｒ５９５＿Ｌ６０１ｄｕｐ、Ｋ６６３Ｒ、Ｎ６７６Ｋ、Ｆ６９１Ｌ、Ｄ８３５Ａ、Ｉ８３６Ｈ、Ｎ８４１Ｋ、Ｓ９９３Ｌ、Ｌ８３２Ｆ、Ｉ８３６Ｍ、Ａ６６Ｖ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＰＴＰＮ１１変異には、ｃ Ｅ７６Ｋ、Ａ７２Ｖ、Ａ７２Ｔ、Ｄ６１Ｙ、Ｄ６１Ｖ、Ｇ６０Ｖ、Ｅ６９Ｋ、Ｅ７６Ｇ、Ｇ５０７Ｖ、Ｓ５０６Ｌ、Ｇ５０７Ａ、Ｔ７３Ｉ、Ｅ７６Ａ、Ｅ７６Ｑ、Ｓ５０６Ｐ、Ｄ６１Ｎ、Ｆ７１Ｌ、Ｅ７６Ｖ、Ｆ７１Ｌ、Ａ７２Ｄ、Ｖ４３２Ｍ、Ｔ４７２Ｍ、Ｐ４９５Ｌ、Ｎ５８Ｙ、Ｆ２８５Ｓ、Ｓ５０６Ａ、Ｓ１８９Ａ、Ａ４６５Ｔ、Ｒ５０２Ｗ、Ｇ５０７Ｒ、Ｔ５１１Ｋ、Ｄ６１Ｈ、Ｄ６１Ｇ、Ｇ５０７Ｅ、Ｇ６０Ｒ、Ｇ６０Ａ、Ｑ５１４Ｌ、Ｅ１３９Ｄ、Ｙ１９７＊、Ｎ３０８Ｄ、Ｑ５１４Ｈ、Ｑ５１４Ｈ、Ｎ５８Ｓ、Ｅ１２３Ｄ、Ｌ２０６＝、Ａ４６５Ｇ、Ｐ４９５Ｓ、Ｇ５０７Ｒ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１変異には、Ｎ５７７Ｋ、Ｋ６８７Ｅ、Ｎ５７７Ｋ、Ｄ１６６ｄｅｌ、Ｔ３７１Ｍ、Ｒ４７６Ｗ、Ｔ３５０＝、Ｅ４９８Ｋ、Ｎ５７７Ｄ、Ｄ６８３Ｇ、Ｒ８７Ｃ、Ａ１５４Ｄ、Ｎ３０３＝、Ａ３７４Ｖ、Ｄ５５０＝、Ｓ６３３＝、Ｖ６９５Ｌ、Ｇ７２８＝、Ｒ７６５Ｗ、Ｐ８０３Ｓ、Ｗ１９Ｃ、Ｐ５６＝、Ｒ１１３Ｃ、Ｖ１４９Ｉ、Ｓ１５８Ｌ、Ｄ１６６ｄｕｐＲ２２０Ｃ、Ｎ２２４Ｋｆｓ＊８、Ｄ２４９Ｎ、Ｒ２８１Ｗ、Ｒ２８１Ｑ、Ａ２９９Ｓ、Ｓ４２４Ｌ、Ｓ４６１Ｆ、Ｓ４６７Ｆ、Ｒ５０６Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＥＰ３００変異には、Ｄ１３９９Ｎ、Ｙ１４１４Ｃ、Ｍ１４７０Ｃｆｓ＊２６、Ｙ１１１１＊、Ｈ２３２４Ｐｆｓ＊５５、Ｒ１６２７Ｗ、Ｎ２２０９＿Ｑ２２１３ｄｅｌｉｎｓＫ、Ｑ２２６８ｄｅｌ、Ｌ４１５Ｐ、Ｍ１４７０Ｎｆｓ＊３、Ｅ１５１４Ｋ、Ｃ１２０１Ｙ、Ｐ１４５２Ｌ、Ｓ９５２＊、Ｃ１１６４Ｙ、Ｄ１３９９Ｙ、Ｓ５０７Ｇ、Ｑ８２４＊、Ｄ１５０７Ｎ、Ｈ２３２４Ｔｆｓ＊２９、Ｐ９２５Ｔ、Ｐ１４４０Ｌ、Ｗ１４６６Ｃ、Ｐ１５０２Ｌ、Ａ１６２９Ｖ、Ｒ１６４５＊、Ｎ１７００Ｔｆｓ＊９、Ｐ１８６９Ｌ、Ｑ６５＊、Ａ１７１Ｖ、Ｒ２０２＊、Ｒ５８０Ｑ、Ａ６２７Ｖ、Ｑ１０８２＊、Ｎ１２３６Ｋｆｓ＊２、Ｎ１２８６Ｓ、Ｒ１３１２＊、Ｒ１３５６＊、Ｃ１３８５Ｆ、Ｈ１４５１Ｌ、Ｒ１４６２＊、Ｙ１４６７Ｎ、Ｙ１４６７Ｈ、Ｒ１４７８Ｈ、Ｒ１６２７Ｑ、Ｒ８６＊、Ｒ３７０Ｈ、Ｒ３９７＊、Ｒ７５４Ｃ、Ｐ８４２Ｓ、Ｉ９９７Ｖ、Ｅ１０１４＊、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＭＹＣ変異には、Ｅ６１Ｔ、Ｅ６８Ｉ、Ｒ７４Ｑ、Ｒ７５Ｎ、Ｗ１３５Ｅ、Ｗ１３６Ｅ、Ｖ３９４Ｄ、Ｌ４２０Ｐ、Ｗ９６Ｅ、Ｖ３２５Ｄ、Ｌ３５１Ｐ、４１アミノ酸がＮ末端で欠失したＭＹＣタンパク質（ｄＮ２ＭＹＣ）、Ｎ２６Ｓ、Ｓ１６１Ｌ、Ｐ７４Ｌ、Ｖ７Ｍ、Ｆ１５３Ｓ、Ｅ５４Ｄ、Ｐ２４６、Ｌ１６４Ｖ、Ｐ７４Ｓ、Ａ５９Ｖ、Ｔ７３Ｉ、Ｐ７２Ｔ、Ｔ７３Ａ、Ｈ３７４Ｒ、Ｐ１７Ｓ、Ｔ７３Ｎ、Ｓ２６４Ｎ、Ｐ７２Ｓ、Ｑ５２ｄｅｌ、Ｓ２１Ｔ、Ｐ７４Ａ、Ｓ１０７Ｎ、Ｐ７５Ｓ、Ｓ７７Ｐ、Ｐ２６１Ｓ、Ｐ７４Ｑ、Ｓ１９０Ｒ、Ａ５９Ｔ、Ｆ１５３Ｃ、Ｐ７５Ｈ、Ｔ７３Ｉ、Ｓ７７Ｆ、Ｎ１１Ｓ、Ｓ２１Ｎ、Ｐ７８Ｌ、Ｐ７２Ｌ、Ｎ９Ｋ、Ｓ１９０Ｎ、Ｓ２６７Ｆ、Ｔ７３Ｐ、Ｐ７８Ｓ、Ｇ１０５Ｄ、Ｓ１８７Ｃ、Ｌ７１Ｍ、Ｑ１０Ｈ、Ｌ１９１ｘ、Ｑ５０ｘ、Ｌ１９１Ｆ、Ｒ２５Ｋ、Ｆ１３０Ｌ、Ｙ２７Ｓ、Ｄ１９５Ｎ、Ｄ２Ｇ、Ｖ２０Ａ、Ｖ６Ｇ、Ｖ２０Ｉ、Ｄ２Ｈ、Ｐ７５Ａ、Ｇ１５２Ｄ、Ｐ７４Ｔ、Ｃ４０Ｙ、Ｅ８Ｋ、Ｑ４８ｘ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＥＺＨ２変異は、変化したヒストンメチル化パターンに関連付けられる。いくつかの実施形態では、ＥＺＨ２変異は、アミノ酸Ｙ６４１（Ｙ６４６、触媒ドメインに相当する）のＦ、Ｎ、Ｈ、ＳまたはＣのいずれかへの変換をもたらし、Ｈ３Ｋ２７の高トリメチル化をもたらし、リンパ誘発を駆動する。いくつかの実施形態では、ＥＺＨ２変異は、ＥＺＨ２ ＳＥＴドメイン変異、ＥＺＨ２の過剰発現、他のＰＲＣ２サブユニットの過剰発現、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）の機能変異の喪失、及びＭＬＬ２の機能の喪失を含む。ＥＺＨ２ Ｙ６４６変異に対してヘテロ接合である細胞は、ＥＺＨ２タンパク質に対してホモ接合野生型（ＷＴ）である細胞、またはＹ６４６変異に対してホモ接合である細胞と比較して、Ｈ３Ｋ２７の高トリメチル化をもたらす。

いくつかの実施形態では、ＥＺＨ２変異には、Ｙ６４６Ｆ、Ｙ６４６Ｎ、Ｄ１８５Ｈ、Ｙ６４６Ｆ、Ｙ６４６Ｓ、Ｙ６４６Ｈ、Ｒ６９０Ｈ、Ｙ６４６Ｘ、Ｅ７４５Ｋ、Ｙ６４６Ｃ、Ｖ６２６Ｍ、Ｖ６７９Ｍ、Ｒ６９０Ｈ、Ｒ６８４Ｈ、Ａ６８２Ｇ、Ｅ２４９Ｋ、Ｇ１５９Ｒ、Ｒ２８８Ｑ、Ｎ３２２Ｓ、Ａ６９２Ｖ、Ｒ６９０Ｃ、Ｄ７３０＊（挿入フレームシフト）、Ｓ６９５Ｌ、Ｒ６８４Ｃ、Ｍ６６７Ｔ、Ｒ２８８＊、Ｓ６４４＊、Ｄ１９２Ｎ、Ｋ５５０Ｔ、Ｑ６５３Ｅ、Ｄ６６４Ｇ、Ｒ３４７Ｑ、Ｙ６４６Ｃ、Ｇ６６０Ｒ、Ｒ２１３Ｃ、Ａ２５５Ｔ、Ｓ５３８Ｌ、Ｎ６９３Ｋ、Ｉ５５Ｍ、Ｒ５６１Ｈ、Ａ６９２Ｖ、Ｋ５１５Ｒ、Ｙ７３３＊、Ｒ６３＊、Ｑ５７０＊、Ｑ３２８＊、Ｒ２５Ｑ、Ｔ４６７Ｐ、Ａ６５６Ｖ、Ｔ５７３Ｉ、Ｃ５７１Ｙ、Ｅ７２５Ｋ、Ｒ１６Ｗ、Ｐ５７７Ｌ、Ｆ１４５Ｓ、Ｖ６８０Ｍ、Ｇ６８６Ｄ、Ｇ１３５Ｒ、Ｋ６３４Ｅ、Ｓ６５２Ｆ、Ｒ２９８Ｃ、Ｇ６４８Ｅ、Ｒ５６６Ｈ、Ｌ１４９Ｒ、Ｒ５０２Ｑ、Ｙ７３１Ｄ、Ｒ３１３Ｗ、Ｎ６７５Ｋ、Ｓ６５２Ｃ、Ｔ３７４Ｈｆｓ＊３、Ｎ１５２Ｉｆｓ＊１５、Ｅ４０１Ｋｆｓ＊２２、Ｋ４０６Ｍｆｓ＊１７、Ｅ２４６＊、Ｓ６２４Ｃ、Ｉ１４６Ｔ、Ｖ６２６Ｍ、Ｌ６７４Ｓ、Ｈ６９４Ｒ、Ａ５８１Ｓ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＪＡＫ２変異は、Ｇ１９２０Ｔ変異、Ｇ１９２０Ｔ／Ｃ１９２２Ｔ変異、またはＧ１９２０Ａ変異と組み合わせたＴ１９２３Ｃ変異を含むが、これらに限定されないＪＡＫ２遺伝子の変異である。いくつかの実施形態では、ＪＡＫ２変異は、Ｖ６１７Ｆ、Ｖ６１７Ｉ、Ｒ６８３Ｇ、Ｎ５４２＿Ｅ５４３ｄｅｌ、Ｅ５４３＿Ｄ５４４ｄｅｌ、Ｒ６８３Ｓ、Ｒ６８３Ｘ、Ｆ５３７＿Ｋ５３９ｄｅｌｉｎｓＬ（フレーム中の欠失）、Ｋ５３９Ｌ、Ｎ１１０８Ｓ、Ｒ１１１３Ｈ、Ｒ１０６３Ｈ、Ｒ４８７Ｃ、Ｉ５４０Ｍｆｓ＊３（欠失－フレームシフト）、Ｒ８６７Ｑ、Ｋ５３９Ｌ、Ｇ５７１Ｓ、Ｒ１１１３Ｃ、Ｒ９３８Ｑ、Ｒ２２８Ｑ、Ｌ８３０＊、Ｅ１０８０＊、Ｋ５３９Ｌ、Ｃ６１８Ｒ、Ｒ５６４Ｑ、Ｄ１０３６Ｈ、Ｌ１０８８Ｓ、Ｈ５３８Ｎｆｓ＊４、Ｄ８７３Ｎ、Ｖ３９２Ｍ、Ｉ６８２Ｆ、Ｌ３９３Ｖ、Ｍ５３５Ｉ、Ｃ６１８Ｒ、Ｔ８７５Ｎ、Ｌ６１１Ｖ、Ｄ３１９Ｎ、Ｌ６１１Ｓ、Ｇ９２１Ｓ、Ｈ５３８Ｙ、Ｓ１０３５Ｌ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない１つ以上の置換を含む、変異体ＪＡＫ２タンパク質である。

いくつかの実施形態では、ＦＢＸＷ７変異は、Ｗ２４４＊（＊：停止コドン）Ｒ２２２＊、Ｒ２７８＊、Ｅ１９２Ａ、Ｓ２８２＊、Ｅ１１３Ｄ、Ｒ４６５Ｈ／Ｃ、７２６＋１ Ｇ＞Ａスプライス、Ｒ５０５Ｃ、Ｒ４７９Ｑ、Ｒ４６５Ｃ、Ｒ３６７＊、Ｒ４９９Ｖｆｓ＊２５（ｆｓ＊：フレームシフト）、Ｒ６５８＊、Ｄ６００Ｙ、Ｄ５２０Ｎ、Ｄ５２０Ｙ、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される点変異である。さらなる実施形態では、ＦＢＸＷ７変異は、Ｒ４７９Ｑ及びＳ５８２Ｌ、Ｒ４６５Ｈ及びＳ５８２Ｌ、Ｄ５２０Ｎ、Ｄ５２０Ｙ及びＲ１４Ｑ、ならびにＲ３６７＊及びＳ５８２Ｌを含むが、これらに限定されない二重または三重変異である。

いくつかの実施形態では、ＣＣＮＤ３変異には、Ｓ２５９Ａ、Ｒ２７１Ｐｆｓ＊５３（挿入により引き起こされたフレームシフト）、Ｅ５１＊、Ｑ２６０＊、Ｐ１９９Ｓ、Ｔ２８３Ａ、Ｔ２８３Ｐ、Ｖ２８７Ｄ、Ｄ２８６＿Ｔ２８８ｄｅｌ、Ｒ２７１Ｇｆｓ＊３３、Ｑ２７６＊、Ｒ２４１Ｑ、Ｄ２３８Ｇ、Ｒ３３Ｐ、Ｉ２９０Ｋ、Ｉ２９０Ｔ、Ｉ２９０Ｒ、Ｐ２６７ｆｓ、Ｐ２８４Ｓ、Ｐ２８４Ｌ、Ｐ１００Ｓ、Ｅ２５３Ｄ、Ｓ２６２Ｉ、Ｒ１４Ｗ、Ｒ１１４Ｌ、Ｄ２３８Ｎ、Ａ２６６Ｅ、Ｒ１６７Ｗ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＧＮＡ１１変異には、Ｑ２０９Ｌ、Ｒ１８３Ｃ、Ｔ２５７＝、Ｒ１８３Ｃ、Ｇ２０８Ａｆｓ＊１６、Ｑ２０９Ｈ、Ｒ１８３Ｃ、Ｑ２０９Ｐ、Ｑ２０９Ｒ、Ｑ２０９Ｈ、？Ｔ９６＝、Ｒ２１０Ｗ、Ｒ２５６Ｑ、Ｔ３３４＝、Ｇ４８Ｄ、Ｓ５３Ｇ、Ｑ２０９Ｐ、Ｒ２１３Ｑ、及びそれらの任意の組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＧＮＡ１１変異は、エクソン４において２つの変異、例えば、Ｖ１８２における変異及びＴ１７５における変異、またはエクソン５において１つ以上の変異を有する。

２．ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１阻害剤との併用
いくつかの実施形態では、がんを有する患者に提供されるＴＩＬ療法は、治療的ＴＩＬ集合単独による治療を含んでもよく、またはＴＩＬならびに１つ以上のＰＤ－１及び／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤を含む併用治療を含んでもよい。

プログラム死１（ＰＤ－１）は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）Ｔ細胞、活性化単球、及び樹状細胞によって発現される２８８アミノ酸の膜貫通免疫チェックポイント受容体タンパク質である。ＣＤ２７９としても知られるＰＤ－１は、ＣＤ２８ファミリーに属し、ヒトでは第２染色体上のＰｄｃｄ１遺伝子によってコードされる。ＰＤ－１は、１つの免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリードメイン、膜貫通領域、ならびに免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）及び免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を含む細胞内ドメインからなる。ＰＤ－１とそのリガンド（ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２）は、Ｋｅｉｒ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，２６，６７７－７０４に記載されるように、免疫寛容において重要な役割を果たすことが知られている。ＰＤ－１は、Ｔ細胞の免疫応答を負に調節する阻害シグナルを提供する。ＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１またはＣＤ２７４としても知られる）及びＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣまたはＣＤ２７３としても知られる）は、腫瘍細胞及び間質細胞上に発現され、ＰＤ－１を発現する活性化Ｔ細胞が遭遇する可能性があり、Ｔ細胞の免疫抑制につながる。ＰＤ－Ｌ１は、ヒト第９染色体上のＣｄ２７４遺伝子によってコードされる２９０アミノ酸の膜貫通タンパク質である。例えば、Ｔｏｐａｌｉａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．２０１２，３６６，２４４３－５４に記載される最近の臨床研究で実証されているように、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤ－Ｌ１阻害剤、及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤の使用による、ＰＤ－１とそのリガンドＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２との間の相互作用をブロックすることで、免疫抵抗を克服することができる。ＰＤ－Ｌ１は、多くの腫瘍細胞株上で発現されるが、ＰＤ－Ｌ２は、主に樹状細胞及びいくつかの腫瘍株上で発現される発現される。Ｔ細胞（活性化後にＰＤ－１を誘導的に発現する）に加えて、ＰＤ－１は、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、活性化単球、樹状細胞上でも発現される。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－１遮断薬であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるＰＤ－１阻害剤または遮断剤のうちの１つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、ＰＤ－１阻害剤に関して互換的に使用される。誤解を避けるために、抗体であるＰＤ－１阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、ＰＤ－１阻害剤への本明細書での言及はまた、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。

好ましい実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、抗体（すなわち、抗ＰＤ－１抗体）、Ｆａｂ断片を含むその断片、またはその一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ポリクローナル抗体である。好ましい実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ＰＤ－１との結合について競合し、及び／またはＰＤ－１上のエピトープに結合する。実施形態では、抗体は、ＰＤ－１との結合について競合し、及び／またはＰＤ－１上のエピトープに結合する。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ヒトＰＤ－１に約１００ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約９０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約８０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約７０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約６０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約５０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約４０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約３０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約２０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－１に約１０ｐＭ以下のＫＤで結合する、またはヒトＰＤ－１に約１ｐＭ以下のＫＤで結合するものである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ヒトＰＤ－１に約７．５×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約７．５×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約８×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約８．５×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約９×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約９．５×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する、またはヒトＰＤ－１に約１×１０６ １／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するものである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ヒトＰＤ－１に約２×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．１×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．２×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．３×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．４×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．５×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．６×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、またはヒトＰＤ－１に約２．７×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．８×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、ヒトＰＤ－１に約２．９×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する、またはヒトＰＤ－１に約３×１０－５ １／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するものである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、約１０ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約９ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約８ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約７ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約６ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約５ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約４ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約３ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約２ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、または約１ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害するものである。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．からＯＰＤＩＶＯとして市販されている）、またはそれらのバイオシミラー、抗原結合断片、コンジュゲート、もしくはバリアントである。ニボルマブは、ＰＤ－１受容体を遮断する完全ヒトＩｇＧ４抗体である。ある実施形態では、抗ＰＤ－１抗体は、免疫グロブリンＧ４カッパ、抗（ヒトＣＤ２７４）抗体である。ニボルマブには、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）登録番号９４６４１４－９４－４が割り当てられており、５Ｃ４、ＢＭＳ－９３６５５８、ＭＤＸ－１１０６、及びＯＮＯ－４５３８としても知られている。ニボルマブの調製及び特性は、米国特許第８，００８，４４９号及び国際特許公開第ＷＯ２００６／１２１１６８号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。様々な形態のがんにおけるニボルマブの臨床的安全性及び有効性は、Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２０１４，２，８４６－５６、Ｐａｇｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，２０１４，６５，１８５－２０２、及びＷｅｂｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１３，３１，４３１１－４３１８に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ニボルマブのアミノ酸配列を表１８に示す。ニボルマブは、２２－９６、１４０－１９６、２５４－３１４、３６０－４１８、２２’’－９６’’、１４０’’－１９６’’、２５４’’－３１４’’、及び３６０’’－４１８’’における重鎖内ジスルフィド結合；２３’－８８’、１３４’－１９４’、２３’’’－８８’’’、及び１３４’’’－１９４’’’における軽鎖内ジスルフィド結合；１２７－２１４’、１２７’’－２１４’’’における重鎖－軽鎖間ジスルフィド結合；２１９－２１９’’及び２２２－２２２’’における重鎖－重鎖間ジスルフィド結合；ならびに２９０、２９０’’におけるＮ－グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ ８４．４）を有する。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、配列番号１５８によって与えられる重鎖及び配列番号１５９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ、配列番号１５８及び配列番号１５９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５８及び配列番号１５９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５８及び配列番号１５９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５８及び配列番号１５９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１５８及び配列番号１５９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号４６３及び配列番号１５９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１６０に示される配列を含み、ＰＤ－１阻害剤軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１６１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６０及び配列番号１６１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６０及び配列番号１６１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６０及び配列番号１６１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６０及び配列番号１６１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６０及び配列番号１６１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ、配列番号１６２、配列番号１６３、及び配列番号１６４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１６５、配列番号１６６、及び配列番号１６７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＰＤ－１上の同じエピトープに結合する。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ－１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ－１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ－１抗体であり、抗ＰＤ－１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。抗ＰＤ－１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ニボルマブである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ニボルマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、切除不能または転移性黒色腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、切除不能または転移性黒色腫を治療するために投与され、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、切除不能または転移性黒色腫を治療するために投与され、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、切除不能または転移性黒色腫を治療するために、約１ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同じ日にイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量、次いで２４０ｍｇを２週間毎、または４８０ｍｇを４週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、黒色腫のアジュバント治療のために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、黒色腫のアジュバント治療のために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、黒色腫のアジュバント治療のために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、２週間毎に約３ｍｇ／ｋｇで、６週間毎に１ｍｇ／ｋｇのイピリムマブとともに投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、３週間毎に約３６０ｍｇで、６週間毎に１ｍｇ／ｋｇのイピリムマブ及び２サイクルのプラチナダブレット化学療法とともに投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇまたは４週間毎に４８０ｍｇ投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、小細胞肺癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、悪性胸膜中皮腫を治療するために、３週間毎に約３６０ｍｇ／ｋｇ、６週間毎に１ｍｇ／ｋｇのイピリムマブとともに投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、進行性腎細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、進行性腎細胞癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、進行性腎細胞癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、進行性腎細胞癌を治療するために、約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同じ日にイピリムマブ約１ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量、次いで２４０ｍｇを２週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、進行性腎細胞癌を治療するために、約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同じ日にイピリムマブ約１ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量、次いで２４０ｍｇを２週間毎、４８０ｍｇを４週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、古典的ホジキンリンパ腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、古典的ホジキンリンパ腫を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、古典的ホジキンリンパ腫を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、頭頸部の再発性または転移性扁平上皮癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、頭頸部の再発性または転移性扁平上皮癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、頭頸部の再発性または転移性扁平上皮癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、局所進行性または転移性尿路上皮癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、局所進行性または転移性尿路上皮癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、成人及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、４０ｋｇ以上の成人及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、≧４０ｋｇの成人及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、４０ｋｇ未満の小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために、２週間毎に約３ｍｇ／ｋｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、≧４０ｋｇの成人及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために、約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同じ日にイピリムマブ１ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量、次いで２４０ｍｇを２週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、≧４０ｋｇの成人及び小児患者における高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために、約３ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同じ日にイピリムマブ１ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量、次いで４８０ｍｇを４週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために、約１ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同じ日にイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量、次いで２４０ｍｇを２週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、肝細胞癌を治療するために、約１ｍｇ／ｋｇで投与され、続いて同じ日にイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量、次いで４８０ｍｇを４週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ニボルマブは、食道扁平上皮癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、食道扁平上皮癌を治療するために、２週間毎に約２４０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブは、食道扁平上皮癌を治療するために、４週間毎に約４８０ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ニボルマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

別の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブ（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ（Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪ，ＵＳＡ）からＫＥＹＴＲＵＤＡとして市販されている）、またはそれらの抗原結合断片、コンジュゲート、もしくはバリアントを含む。ペムブロリズマブには、ＣＡＳ登録番号１３７４８５３－９１－４が割り当てられており、ラムブロリズマブ、ＭＫ－３４７５、及びＳＣＨ－９００４７５としても知られている。ペムブロリズマブは、免疫グロブリンＧ４、抗（ヒトタンパク質ＰＤＣＤ１（プログラム細胞死１））（ヒト－ハツカネズミモノクローナル重鎖）、ヒト－ハツカネズミモノクローナル軽鎖、二量体構造を有するジスルフィドを有する。ペムブロリズマブの構造は、免疫グロブリンＧ４、抗（ヒトプログラム細胞死１）；ヒト化マウスモノクローナルκ軽鎖二量体（２２６－２２６’’：２２９－２２９’’）－ビスジスルフィドを有するヒト化マウスモノクローナル［２２８－Ｌ－プロリン（Ｈ１０－Ｓ＞Ｐ）］γ４重鎖（１３４－２１８’）－ジスルフィドとしても記載され得る。ペムブロリズマブの特性、使用、及び調製は、国際特許公開第ＷＯ２００８／１５６７１２Ａ１号、米国特許第８，３５４，５０９号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１０／０２６６６１７Ａ１号、同第ＵＳ２０１３／０１０８６５１Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１３／０１０９８４３Ａ２に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。様々な形態のがんにおけるペムブロリズマブの臨床的安全性及び有効性は、Ｆｕｅｒｓｔ，Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｔｉｍｅｓ，２０１４，３６，３５－３６、Ｒｏｂｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ，２０１４，３８４，１１０９－１７、及びＴｈｏｍａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２０１４，１４，１０６１－１０６４に記載されている。ペムブロリズマブのアミノ酸配列を表１９に示す。ペムブロリズマブは、ジスルフィド架橋：２２－９６、２２’’－９６’’、２３’－９２’、２３’’’－９２’’’、１３４－２１８’、１３４’’－２１８’’’、１３８’－１９８’、１３８’’’－１９８’’’、１４７－２０３、１４７’’－２０３’’、２２６－２２６’’、２２９－２２９’’、２６１－３２１、２６１’’－３２１’’、３６７－４２５、及び３６７’’－４２５’’、ならびにグリコシル化部位（Ｎ）：Ａｓｎ－２９７及びＡｓｎ－２９７’’を含む。ペムブロリズマブは、Ｆｃ領域に安定化Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４／カッパアイソタイプであり、この変異をＩｇＧ４ヒンジ領域に挿入すると、ＩｇＧ４抗体で典型的に観察される半分子の形成が防止される。ペムブロリズマブは、各重鎖のＦｃドメイン内のＡｓｎ２９７で不均一にグリコシル化されており、無傷の抗体の分子量はおよそ１４９ｋＤａになる。ペムブロリズマブの優性グリコフォームは、フコシル化アガラクト二分性グリカンフォーム（Ｇ０Ｆ）である。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、配列番号１６８によって与えられる重鎖及び配列番号１６９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ、配列番号１６８及び配列番号１６９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６８及び配列番号１６９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６８及び配列番号１６９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６８及び配列番号１６９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６８及び配列番号１６９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１６８及び配列番号１６９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１７０に示される配列を含み、ＰＤ－１阻害剤軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１７１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７０及び配列番号１７１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７０及び配列番号１７１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７０及び配列番号１７１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７０及び配列番号１７１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７０及び配列番号１７１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、それぞれ、配列番号１７２、配列番号１７３、及び配列番号１７４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１７５、配列番号１７６、及び配列番号１７７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＰＤ－１上の同じエピトープに結合する。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ－１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ－１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ－１抗体であり、抗ＰＤ－１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。抗ＰＤ－１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ペムブロリズマブである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ニボルマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペムブロリズマブまたはそのバイオシミラーであり、ペムブロリズマブは、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、黒色腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、黒色腫を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、黒色腫を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＮＳＣＬＣを治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＮＳＣＬＣを治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＮＳＣＬＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＳＣＬＣを治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＳＣＬＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＨＮＳＣＣを治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＨＮＳＣＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）または原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）または原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。ペムブロリズマブは、古典的ホジキンリンパ腫（ｃＨＬ）または原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）を治療するために、小児の場合、３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、尿路上皮癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、尿路上皮癌を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲ癌を治療するために、成人の場合、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲ癌を治療するために、小児の場合、３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損結腸直腸癌（ｄＭＭＲ ＣＲＣを治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲ ＣＲＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、胃癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、胃癌を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、食道癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、食道癌を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、子宮頸癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、子宮頸癌を治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、肝細胞癌（ＨＣＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＨＣＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、メルケル細胞癌（ＭＣＣ）を治療するために、成人の場合、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＭＣＣを治療するために、成人の場合、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＭＣＣを治療するために、小児の場合、３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、腎細胞癌（ＲＣＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＲＣＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで、経口で１日２回のアキシチニブ５ｍｇとともに投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、子宮内膜癌を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、子宮内膜癌を治療するために、ＭＳＩ－ＨまたはｄＭＭＲではない腫瘍に対して、６週間毎に約４００ｍｇで、経口で１日１回のレンバチニブ２０ｍｇとともに投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、高遺伝子変異量（ＴＭＢ－Ｈ）癌を治療するために、成人の場合、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＴＭＢ－Ｈ癌を治療するために、成人の場合、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＴＭＢ－Ｈ癌を治療するために、小児の場合、３週間毎に約２ｍｇ／ｋｇ（最大２００ｍｇ）で投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、皮膚扁平上皮癌（ｃＳＣＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ｃＳＣＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を治療するために、３週間毎に約２００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブは、ＴＮＢＣを治療するために、６週間毎に約４００ｍｇで投与される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

ある実施形態では、患者または対象が成人である場合、すなわち、成人適応症の治療、及び６週間毎の４００ｍｇの追加の投薬レジメンが用いられ得る。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、３、４、または５日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブ投与は、ＩＬ－２投与後１、２、または３日で開始される。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。いくつかの実施形態では、ペムブロリズマブはまた、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）投与することができる。

ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤または抗ＰＤ－１抗体は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ，Ｉｎｃ．から市販されている、セミプリマブ、またはその断片、バリアント、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーである。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤または抗ＰＤ－１抗体は、Ｎｏｖａｒｔｉｓ ＡＧ ａｎｄ Ｂｅｉｇｅｎｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．から市販されている、チスレリズマブ、またはその断片、バリアント、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーである。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤または抗ＰＤ－１抗体は、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．から市販されている、シンチリマブ、またはその断片、バリアント、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーである。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤または抗ＰＤ－１抗体は、Ｊｕｎｓｈｉ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．及びＣｏｈｅｒｕｓ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．から市販されている、トリパリマブ、またはその断片、バリアント、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーである。ある実施形態では、ＰＤ－１阻害剤または抗ＰＤ－１抗体は、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ｐｌｃ．から市販されている、ドスタルリマブ、またはその断片、バリアント、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーである。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、抗ｍ－ＰＤ－１クローンＪ４３（カタログ番号ＢＥ００３３－２）及びＲＭＰ１－１４（カタログ番号ＢＥ０１４６）（Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ ＵＳＡ）などの市販の抗ＰＤ－１モノクローナル抗体である。いくつかの市販の抗ＰＤ－１抗体が、当業者に知られている。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，３５４，５０９号または米国特許出願公開第２０１０／０２６６６１７Ａ１号、同第２０１３／０１０８６５１Ａ１号、同第２０１３／０１０９８４３Ａ２号に開示されている抗体であり、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，２８７，８５６号、同第８，５８０，２４７号、及び同第８，１６８，７５７号、ならびに米国特許出願公開第２００９／００２８８５７Ａ１号、同第２０１０／０２８５０１３Ａ１号、同第２０１３／００２２６００Ａ１号、及び同第２０１１／０００８３６９Ａ１号に記載されている抗ＰＤ－１抗体であり、それらの教示は参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，７３５，５５３Ｂ１号に開示されている抗ＰＤ－１抗体であり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ＣＴ－０１１としても知られるピジリズマブであり、これは米国特許第８，６８６，１１９号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、米国特許第８，９０７，０５３号、同第９，０９６，６４２号、及び同第９，０４４，４４２号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／００８７５８１号に記載されるものなどの小分子またはペプチドもしくはペプチド誘導体；米国特許出願公開第２０１５／００７３０２４号に記載されるものなどの１，２，４－オキサジアゾール化合物及び誘導体；米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／００７３０４２号に記載されるものなどの環状ペプチド模倣化合物及び誘導体；米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／０１２５４９１号に記載されるものなどの環状化合物及び誘導体；国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／０３３３０１号に記載されるものなどの１，３，４－オキサジアゾール及び１，３，４－チアジアゾール化合物ならびに誘導体；国際特許出願公開第ＷＯ２０１５／０３６９２７号及びＷＯ２０１５／０４４９０号に記載されるものなどのペプチド系化合物及び誘導体、または米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０２９４８９８号に記載されるものなどの大環状ペプチド系化合物及び誘導体であり得、各々の開示は参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、当該技術分野で知られている任意のＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２阻害剤、アンタゴニスト、または遮断薬であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２阻害剤、アンタゴニスト、または遮断剤のうちの１つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２阻害剤に関して交換可能に使用される。誤解を避けるために、抗体であるＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物、プロセス、及び方法は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、小分子である。好ましい実施形態では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、抗体（すなわち、抗ＰＤ－１抗体）、Ｆａｂ断片を含むその断片、またはその一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ポリクローナル抗体である。好ましい実施形態では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２との結合について競合し、及び／またはＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２上のエピトープに結合する。実施形態では、抗体は、ＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２との結合について競合し、及び／またはＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２上のエピトープに結合する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＰＤ－Ｌ１阻害剤は、化合物が、ＰＤ－Ｌ２受容体を含む他の受容体と結合または相互作用するよりも実質的に低い濃度でＰＤ－Ｌ１と結合または相互作用するという点で、ＰＤ－Ｌ１に対して選択的である。特定の実施形態では、化合物は、ＰＤ－Ｌ２受容体に対するより少なくとも約２倍高い濃度、約３倍高い濃度、約５倍高い濃度、約１０倍高い濃度、約２０倍高い濃度、約３０倍高い濃度、約５０倍高い濃度、約１００倍高い濃度、約２００倍高い濃度、約３００倍高い濃度、または約５００倍高い濃度である結合定数でＰＤ－Ｌ１受容体に結合する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＰＤ－Ｌ２阻害剤は、化合物が、ＰＤ－Ｌ１受容体を含む他の受容体と結合または相互作用するよりも実質的に低い濃度でＰＤ－Ｌ２と結合または相互作用するという点で、ＰＤ－Ｌ２に対して選択的である。特定の実施形態では、化合物は、ＰＤ－Ｌ１受容体に対するより少なくとも約２倍高い濃度、約３倍高い濃度、約５倍高い濃度、約１０倍高い濃度、約２０倍高い濃度、約３０倍高い濃度、約５０倍高い濃度、約１００倍高い濃度、約２００倍高い濃度、約３００倍高い濃度、または約５００倍高い濃度である結合定数でＰＤ－Ｌ２受容体に結合する。

いかなる理論にも縛られることなく、腫瘍細胞はＰＤ－Ｌ１を発現し、Ｔ細胞はＰＤ－１を発現すると考えられている。しかしながら、腫瘍細胞によるＰＤ－Ｌ１の発現は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の阻害剤または遮断剤の有効性には必要とされない。実施形態では、腫瘍細胞は、ＰＤ－Ｌ１を発現する。別の実施形態では、腫瘍細胞は、ＰＤ－Ｌ１を発現しない。いくつかの実施形態では、方法は、ＴＩＬと組み合わせて、本明細書に記載されるものなどのＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１抗体の組み合わせを含むことができる。ＰＤ－１及びＰＤ－Ｌ１抗体とＴＩＬとの組み合わせの投与は、同時または連続的であり得る。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約１００ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約９０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約８０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約７０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約６０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約５０ｐＭ以下のＫＤで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約４０ｐＭ以下のＫＤで結合する、またはヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約３０ｐＭ以下のＫＤで結合するものである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約７．５×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約８×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約８．５×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約９×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約９．５×１０５ １／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合する、またはヒトＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２に約１×１０６ １／Ｍ・ｓ以上のｋａｓｓｏｃで結合するものである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２に約２×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－１に約２．１×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－１に約２．２×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－１に約２．３×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－１に約２．４×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－１に約２．５×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－１に約２．６×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、ヒトＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ１に約２．７×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合する、またはヒトＰＤ－Ｌ１もしくはＰＤ－Ｌ２に約３×１０－５ １／ｓ以下のｋｄｉｓｓｏｃで結合するものである。

いくつかの実施形態では、ＰＤ－Ｌ１及び／またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、約１０ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約９ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約８ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約７ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約６ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約５ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約４ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約３ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、約２ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断もしくは阻害し、またはヒトＰＤ－１を遮断し、もしくは約１ｎＭ以下のＩＣ５０でのヒトＰＤ－１へのヒトＰＤ－Ｌ１もしくはヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断するものである。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＥＤＩ４７３６としても知られるデュルバルマブ（これは、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ ｐｌｃ．の子会社であるＭｅｄｉｍｍｕｎｅ，ＬＬＣ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）から市販されている）、またはその抗原結合断片、コンジュゲート、もしくはバリアントである。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、米国特許第８，７７９，１０８号または米国特許出願公開第２０１３／００３４５５９号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。デュルバルマブの臨床的有効性は、Ｐａｇｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，２０１４，６５，１８５－２０２、Ｂｒａｈｍｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０１４，３２，５ｓ（補足、要約８０２１）、及びＭｃＤｅｒｍｏｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｖ．，２０１４，４０，１０５６－６４に記載されている。デュルバルマブの調製及び特性は、米国特許第８，７７９，１０８号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。デュルバルマブのアミノ酸配列を表２０に示す。デュルバルマブモノクローナル抗体は、２２－９６、２２’’－９６’’、２３’－８９’、２３’’’－８９’’’、１３５’－１９５’、１３５’’’－１９５’’’、１４８－２０４、１４８’’－２０４’’、２１５’－２２４、２１５’’’－２２４’’’、２３０－２３０’’、２３３－２３３’’、２６５－３２５、２６５’’－３２５’’、３７１－４２９、及び３７１’’－４２９’におけるジスルフィド結合、ならびにＡｓｎ－３０１及びＡｓｎ－３０１’’におけるＮ－グリコシル化部位を含む。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１７８によって与えられる重鎖及び配列番号１７９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１７８及び配列番号１７９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７８及び配列番号１７９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７８及び配列番号１７９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７８及び配列番号１７９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７８及び配列番号１７９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１７８及び配列番号１７９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、デュルバルマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号１８０に示される配列を含み、ＰＤ－Ｌ１阻害剤軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１８１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１８２、配列番号１８３、及び配列番号１８４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１８５、配列番号１８６、及び配列番号１８７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＰＤ－Ｌ１上の同じエピトープに結合する。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ペムブロリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ－Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ－Ｌ１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、デュルバルマブである。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ／ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏから市販されている）としても知られるアベルマブ、またはその抗原結合断片、コンジュゲート、もしくはバリアントである。アベルマブの調製及び特性は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１号に記載されており、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。アベルマブのアミノ酸配列を表２１に示す。アベルマブは、２２－９６、１４７－２０３、２６４－３２４、３７０－４２８、２２’’－９６’’、１４７’’－２０３’’、２６４’’－３２４’’、及び３７０’’－４２８’’における重鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３－Ｃ１０４）；２２’－９０’、１３８’－１９７’、２２’’’－９０’’’、及び１３８’’’－１９７’’’における軽鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３－Ｃ１０４）；２２３－２１５’及び２２３’’－２１５’’’における重鎖－軽鎖内ジスルフィド結合（ｈ５－ＣＬ１２６）；２２９－２２９’’及び２３２－２３２’’における重鎖－重鎖内ジスルフィド結合（ｈ１１、ｈ１４）；３００、３００’’におけるＮ－グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ Ｎ８４．４）；フコシル化複合体二分性ＣＨＯ型グリカン；ならびに４５０及び４５０′におけるＨ ＣＨＳ Ｋ２ Ｃ末端リジンクリッピングを有する。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１８８によって与えられる重鎖及び配列番号１８９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１８８及び配列番号１８９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８８及び配列番号１８９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８８及び配列番号１８９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８８及び配列番号１８９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８８及び配列番号１８９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１８８及び配列番号１８９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アベルマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１９０に示される配列を含み、ＰＤ－Ｌ１阻害剤軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１９１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１９２、配列番号１９３、及び配列番号１９４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１９５、配列番号１９６、及び配列番号１９７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＰＤ－Ｌ１上の同じエピトープに結合する。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アベルマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ－Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ－Ｌ１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アベルマブである。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＭＰＤＬ３２８０ＡまたはＲＧ７４４６としても知られるアテゾリズマブ（Ｒｏｃｈｅ Ｈｏｌｄｉｎｇ ＡＧ（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）の子会社であるＧｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．からＴＥＣＥＮＴＲＩＱとして市販されている）、またはその抗原結合断片、コンジュゲート、もしくはバリアントである。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、米国特許第８，２１７，１４９号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０５６Ａ１号、同第２０１３／００４５２００Ａ１号、同第２０１３／００４５２０１Ａ１号、同第２０１３／００４５２０２Ａ１号、または同第２０１４／００６５１３５Ａ１号に開示されている抗体であり、その開示は参照により本明細書に具体的に組み込まれる。アテゾリズマブの調製及び特性は、米国特許第８，２１７，１４９号に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。アテゾリズマブのアミノ酸配列を表２２に示す。アテゾリズマブは、２２－９６、１４５－２０１、２６２－３２２、３６８－４２６、２２’’－９６’’、１４５’’－２０１’’、２６２’’－３２２’’、及び３６８’’－４２６’’における重鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３－Ｃ１０４）；２３’－８８’、１３４’－１９４’、２３’’’－８８’’’、及び１３４’’’－１９４’’’における軽鎖内ジスルフィド結合（Ｃ２３－Ｃ１０４）；２２１－２１４’及び２２１’’－２１４’’’における重鎖－軽鎖内ジスルフィド結合（ｈ５－ＣＬ１２６）；２２７－２２７’’及び２３０－２３０’’における重鎖－重鎖内ジスルフィド結合（ｈ１１、ｈ１４）；ならびに２９８及び２９８’におけるＮ－グリコシル化部位（Ｈ ＣＨ２ Ｎ８４．４＞Ａ）を有する。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、配列番号１９８によって与えられる重鎖及び配列番号１９９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号１９８及び配列番号１９９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９８及び配列番号１９９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９８及び配列番号１９９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９８及び配列番号１９９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９８及び配列番号１９９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号１９８及び配列番号１９９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、アテゾリズマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２００に示される配列を含み、ＰＤ－Ｌ１阻害剤軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２０１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、それぞれ、配列番号２０２、配列番号２０３、及び配列番号２０４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２０５、配列番号２０６、及び配列番号２０７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＰＤ－Ｌ１上の同じエピトープに結合する。

実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＰＤ－Ｌ１バイオシミラーモノクローナル抗体である。実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、ＰＤ－Ｌ１抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＰＤ－Ｌ１抗体であり、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、アテゾリズマブである。

ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤または抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、Ｉｎｃｙｔｅ，Ｉｎｃ．から入手可能である、レチファンリマブ、またはその断片、バリアント、コンジュゲート、もしくはバイオシミラーである。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１４／０３４１９１７Ａ１号に記載されている抗体を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。別の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１への結合についてこれらの抗体のうちのいずれかと競合する抗体も含まれる。実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３５５５９としても知られるＭＤＸ－１１０５であり、これは米国特許第７，９４３，７４３号に開示されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第７，９４３，７４３号に開示されている抗ＰＤ－Ｌ１抗体から選択される。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、ＩＮＶＩＶＯＭＡＢ抗ｍ－ＰＤ－Ｌ１クローン１０Ｆ．９Ｇ２（カタログ番号ＢＥ０１０１、Ｂｉｏ Ｘ Ｃｅｌｌ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ Ｌｅｂａｎｏｎ，ＮＨ，ＵＳＡ）などの市販のモノクローナル抗体である。実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＡＦＦＹＭＥＴＲＩＸ ＥＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ（ＭＩＨ１）などの市販のモノクローナル抗体である。いくつかの市販の抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、当業者に知られている。

実施形態では、ＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＢＩＯＬＥＧＥＮＤ ２４Ｆ．１０Ｃ１２マウスＩｇＧ２ａ、κアイソタイプ（カタログ番号３２９６０２ Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、ＳＩＧＭＡ抗ＰＤ－Ｌ２抗体（カタログ番号ＳＡＢ３５００３９５，Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、または当業者に知られている他の市販のＰＤ－Ｌ２抗体などの市販のモノクローナル抗体である。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＩＬレジメンを投与するステップを含む、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＴＩＬレジメンは、ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含み、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、及び（ｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、及び（ｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含むキットを含む。

３．ＣＴＬＡ－４阻害剤との併用
いくつかの実施形態では、がんを有する患者に提供されるＴＩＬ療法は、治療的ＴＩＬ集合単独による治療を含んでもよく、またはＴＩＬ及び１つ以上のＣＴＬＡ－４阻害剤を含む併用治療を含んでもよい。

細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ－４）は、免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、ヘルパーＴ細胞の表面で発現する。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ２８依存性Ｔ細胞活性化の負の制御因子であり、適応免疫応答のチェックポイントとして機能する。Ｔ細胞共刺激タンパク質ＣＤ２８と同様に、ＣＴＬＡ－４結合抗原は、細胞上でＣＤ８０及びＣＤ８６を提示する。ＣＴＬＡ－４は抑制シグナルをＴ細胞に伝達し、ＣＤ２８は刺激シグナルを伝達する。ヒトＣＴＬＡ－４に対するヒト抗体は、ウイルス感染及び細菌感染を治療または予防すること、ならびにがんを治療するためのものなど、多くの疾患状態における免疫刺激調節因子として記載されている（ＷＯ０１／１４４２４及びＷＯ００／３７５０４）。イピリムマブ（ＭＤＸ－０１０）及びトレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６）を含むが、これらに限定されない、様々な種類の固形腫瘍の治療のためのいくつかの完全ヒト抗ヒトＣＴＬＡ－４モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、臨床試験で研究されている。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、当技術分野で知られている任意のＣＴＬＡ－４阻害剤またはＣＴＬＡ－４遮断剤であり得る。特に、次の段落でより詳細に記載されるＣＴＬＡ－４阻害剤または遮断剤のうちの１つである。「阻害剤」、「アンタゴニスト」、及び「遮断剤」という用語は、本明細書では、ＣＴＬＡ－４阻害剤に関して互換的に使用される。誤解を避けるために、抗体であるＣＴＬＡ－４阻害剤への本明細書での言及は、化合物またはその抗原結合断片、バリアント、複合体、もしくはバイオシミラーを指し得る。誤解を避けるために、ＣＴＬＡ－４阻害剤への本明細書での言及はまた、小分子化合物またはその薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物、水和物、共結晶、もしくはプロドラッグを指し得る。

本発明の方法で使用するための好適なＣＴＬＡ－４阻害剤には、抗ＣＴＬＡ－４抗体、ヒト抗ＣＴＬＡ－４抗体、マウス抗ＣＴＬＡ－４抗体、哺乳動物抗ＣＴＬＡ－４抗体、ヒト化抗ＣＴＬＡ－４抗体、モノクローナル抗ＣＴＬＡ－４抗体、ポリクローナル抗ＣＴＬＡ－４抗体、キメラ抗ＣＴＬＡ－４抗体、ＭＤＸ－０１０（イピリムマブ）、トレメリムマブ、抗ＣＤ２８抗体、抗ＣＴＬＡ－４アドネクチン、抗ＣＴＬＡ－４ドメイン抗体、一本鎖抗ＣＴＬＡ－４断片、重鎖抗ＣＴＬＡ－４断片、軽鎖抗ＣＴＬＡ－４断片、共刺激経路を刺激するＣＴＬＡ－４の阻害剤、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００１／０１４４２４号に開示される抗体、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００４／０３５６０７号に開示される抗体、米国特許出願公開第２００５／０２０１９９４号に開示される抗体、ならびに付与された欧州特許第ＥＰ１２１２４２２Ｂ１号に開示された抗体が含まれるが、これらに限定されず、各々の開示が参照により本明細書に組み込まれる。さらなるＣＴＬＡ－４抗体は、米国特許第５，８１１，０９７号、同第５，８５５，８８７号、同第６，０５１，２２７号、及び同第６，９８４，７２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号及び同第ＷＯ００／３７５０４号、ならびに米国公開第２００２／００３９５８１号及び同第２００２／０８６０１４号に記載されており、各々の開示が参照により本明細書に組み込まれる。本発明の方法で使用することができる他の抗ＣＴＬＡ－４抗体には、例えば、ＷＯ９８／４２７５２、米国特許第６，６８２，７３６号及び同第６，２０７，１５６号、Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５（１７）：１００６７－１００７１（１９９８）、Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２２（１４５）：Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．２５０５（２００４）（抗体ＣＰ－６７５２０６）、Ｍｏｋｙｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５８：５３０１－５３０４（１９９８）、ならびに米国特許第５，９７７，３１８号、同第６，６８２，７３６号、同第７，１０９，００３号、及び同第７，１３２，２８１号に開示されるものが含まれ、これらの各々の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

さらなるＣＴＬＡ－４阻害剤には、ＣＤ２８抗原がその同族リガンドと結合する能力を妨害すること、ＣＴＬＡ－４がその同族リガンドと結合する能力を阻害すること、共刺激経路を介してＴ細胞応答を増強すること、Ｂ７がＣＤ２８及び／またはＣＴＬＡ－４と結合する能力を破壊すること、Ｂ７が共刺激経路を活性化する能力を破壊すること、ＣＤ８０がＣＤ２８及び／またはＣＴＬＡ－４と結合する能力を破壊すること、ＣＤ８０が共刺激経路を活性化する能力を破壊すること、ＣＤ８６がＣＤ２８及び／またはＣＴＬＡ－４と結合する能力を破壊すること、ＣＤ８６が共刺激経路を活性化する能力を破壊すること、及び共刺激経路を一般に活性化されることから破壊することが可能である任意の阻害剤が含まれるが、これらに限定されない。これには、共刺激経路の他のメンバーのなかでもＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４の小分子阻害剤、共刺激経路の他のメンバーのなかでもＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４に対する抗体、共刺激経路の他のメンバーのなかでもＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４に指向するアンチセンス分子、共刺激経路の他のメンバーのなかでもＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４に指向するアドネクチン、他のＣＴＬＡ－４阻害剤のなかでも共刺激経路の他のメンバーのなかでもＣＤ２８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＴＬＡ－４のＲＮＡｉ阻害剤（一本鎖及び二本鎖の両方）が必ず含まれる。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、約１０^－６Ｍ以下、１０^－７Ｍ以下、１０^－８Ｍ以下、１０^－９Ｍ以下、１０^－１０Ｍ以下、１０^－１１Ｍ以下、１０^－１２Ｍ以下、例えば、１０^－１３Ｍ～１０^－１６Ｍ、またはエンドポイントとして前述の値のうちの任意の２つを有する任意の範囲内のＫ_ｄでＣＴＬＡ－４に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、同じアッセイを使用して比較した場合、イピリムマブのＫｄの１０倍以下のＫｄでＣＴＬＡ－４と結合する。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、同じアッセイを使用して比較した場合、イピリムマブとほぼ同じかまたはそれ以下（例えば、最大１０倍低いか、または最大１００倍低い）のＫｄでＣＴＬＡ－４と結合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０またはＣＤ８６とのＣＴＬＡ－４結合のＣＴＬＡ－４阻害剤による阻害のＩＣ５０値は、同じアッセイを使用して比較した場合、それぞれＣＤ８０またはＣＤ８６とのＣＴＬＡ－４結合のイピリムマブ媒介阻害より１０倍以下で大きい。いくつかの実施形態では、ＣＤ８０またはＣＤ８６とのＣＴＬＡ－４結合のＣＴＬＡ－４阻害剤による阻害のＩＣ５０値は、同じアッセイを使用して比較した場合、それぞれＣＤ８０またはＣＤ８６とのＣＴＬＡ－４結合のイピリムマブ媒介性阻害とほぼ同じかまたはそれ以下（例えば、最大１０倍低い、または最大１００倍低い）である。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、好適な対照と比較して、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％、例えば、５０％～７５％、７５％～９０％、または９０％～１００％の間でＣＴＬＡ－４の発現を阻害する、及び／または生物学的活性を減少させるのに十分な量で使用される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４経路阻害剤は、好適な対照と比較して、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％、例えば、５０％～７５％、７５％～９０％、または９０％～１００％の間でＣＴＬＡ－４のＣＤ８０、ＣＤ８６、またはその両方との結合を減少させることにより、ＣＴＬＡ－４の生物学的活性を減少させるのに十分な量で使用される。対象となる薬剤の効果を評価または定量化する状況下における好適な対照は、典型的には、対象となる薬剤、例えば、ＣＴＬＡ－４経路阻害剤に曝露されていないか、または治療されていない（または僅かな量に曝露されているか、または治療されている）同等の生物学的システム（例えば、細胞または対象）である。いくつかの実施形態では、生物学的システムは、それ自体の対照として機能し得る（例えば、生物学的システムは、薬剤への曝露または治療の前に評価され得、曝露または治療が開始または終了した後の状態と比較され得る。いくつかの実施形態では、歴史的対照が使用され得る。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．からＹｅｒｖｏｙとして市販されている）、またはそのバイオシミラー、抗原結合断片、コンジュゲート、もしくはバリアントである。当該技術分野で知られているように、イピリムマブは、機能的ヒトレパートリーを生成するための重鎖及び軽鎖をコードするヒト遺伝子を有するトランスジェニックマウスに由来する完全ヒトＩｇＧ １κ抗体である、抗ＣＴＬＡ－４抗体を指す。イピリムマブは、そのＣＡＳ登録番号４７７２０２－００－９及びＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号で参照することもでき、その全体がすべての目的で参照により本明細書に組み込まれる。それは抗体１０ＤＩとして開示されている。具体的には、イピリムマブは、軽鎖可変領域及び重鎖可変領域（配列番号２１１を含む軽鎖可変領域を有し、配列番号２１０を含む重鎖可変領域を有する）を含む。イピリムマブの薬学的組成物は、イピリムマブ及び１つ以上の希釈剤、ビヒクル、または賦形剤を含有するすべての薬学的に許容される組成物を含む。イピリムマブを含有する薬学的組成物の例は、国際特許出願公開第ＷＯ２００７／６７９５９号に記載されている。イムピリムマブは、静脈内（ＩＶ）投与され得る。

実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、配列番号２０８によって与えられる重鎖及び配列番号２０９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ、配列番号２０８及び配列番号２０９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２０８及び配列番号２０９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２０８及び配列番号２０９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２０８及び配列番号２０９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２０８及び配列番号２０９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２０８及び配列番号２０９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２１０に示される配列を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２１１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１０及び配列番号２１１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１０及び配列番号２１１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１０及び配列番号２１１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１０及び配列番号２１１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１０及び配列番号２１１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ、配列番号２１２、配列番号２１３、及び配列番号２１４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２１５、配列番号２１６、及び配列番号２１７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＣＴＬＡ－４上の同じエピトープに結合する。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブに関して薬物規制当局によって承認されたＣＴＬＡ－４バイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、抗ＣＴＬＡ－４抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。イピリムマブのアミノ酸配列を表２３に示す。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＣＴＬＡ－４抗体であり、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、イピリムマブである。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブまたはそのバイオシミラーであり、イピリムマブは、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、イピリムマブは、切除不能または転移性黒色腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、切除不能または転移性黒色腫を治療するために、３週間毎に約ｍｇ／ｋｇで最大４用量投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、イピリムマブは、黒色腫のアジュバント治療のために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、黒色腫のアジュバント治療のために、約１０ｍｇ／ｋｇで３週間毎に４用量、続いて１０ｍｇ／ｋｇで１２週間毎に最大３年間投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、イピリムマブは、進行性腎細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、進行性腎細胞癌を治療するために、約１ｍｇ／ｋｇで投与され、直後に同じ日にニボルマブ３ｍｇ／ｋｇを３週間毎に４用量投与される。いくつかの実施形態では、４用量の組み合わせを完了した後、ニボルマブは、進行性腎細胞癌及び／または腎細胞癌の標準的な投薬レジメンに従って単剤として投与され得る。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、イピリムマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌を治療するために、約１ｍｇ／ｋｇで静脈内に３０分間にわたって投与され、直後に同じ日にイピリムマブ３ｍｇ／ｋｇを静脈内に３０分間にわたって３週間毎に４用量投与される。いくつかの実施形態では、４用量の組み合わせを完了した後、高頻度マイクロサテライト不安定性（ＭＳＩ－Ｈ）またはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）転移性結腸直腸癌の標準的な投薬レジメンに従って推奨されるように単剤としてニボルマブを投与する。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、イピリムマブは、肝細胞癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、肝細胞癌を治療するために、約３ｍｇ／ｋｇで静脈内に３０分間にわたって投与され、直後に同じ日にニボルマブ１ｍｇ／ｋｇを静脈内に３０分間にわたって３週間毎に４用量投与される。いくつかの実施形態では、４用量の組み合わせを完了した後、肝細胞癌のための標準的な投薬レジメンに従って単剤としてニボルマブを投与する。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、イピリムマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、６週間毎に約１ｍｇ／ｋｇで、２週間毎に３ｍｇ／ｋｇのニボルマブとともに投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、転移性非小細胞肺癌を治療するために、６週間毎に約１ｍｇ／ｋｇで、３週間毎に３６０ｍｇのニボルマブ及び２サイクルのプラチナダブレット化学療法とともに投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、イピリムマブは、悪性胸膜中皮腫を治療するために投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブは、悪性胸膜中皮腫を治療するために、６週間毎に約１ｍｇ／ｋｇで、３週間毎に３６０ｍｇのニボルマブとともに投与される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、イピリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

トレメリムマブ（ＣＰ－６７５，２０６としても知られる）は、完全ヒトＩｇＧ２モノクローナル抗体であり、ＣＡＳ番号７４５０１３－５９－６を有する。トレメリムマブは、米国特許第６，６８２，７３６号（参照により本明細書に組み込まれる）において抗体１１．２．１として開示されている。トレメリムマブの重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号２１８及び２１９に示す。トレメリムマブは、黒色腫及び乳癌を含む種々の腫瘍の治療のための臨床試験において研究されており、トレメリムマブは、０．０１及び１５ｍｇ／ｋｇの用量範囲で４週間または１２週間毎に単回用量または複数回用量として静脈内投与される。本発明によって提供されるレジメンでは、トレメリムマブは、局所的に、特に皮内または皮下に投与される。皮内または皮下投与されるトレメリムマブの有効量は、典型的には、人当たり５～２００ｍｇ／用量の範囲である。いくつかの実施形態では、トレメリムマブの有効量は、用量当たり人当たり１０～１５０ｍｇ／用量の範囲である。いくつかの特定の実施形態では、トレメリムマブの有効量は、人当たり約１０、２５、３７．５、４０、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、または２００ｍｇ／用量である。

実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、配列番号２１８によって与えられる重鎖及び配列番号２１９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ、配列番号２１８及び配列番号２１９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１８及び配列番号２１９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１８及び配列番号２１９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１８及び配列番号２１９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１８及び配列番号２１９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２１８及び配列番号２１９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２２０に示される配列を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２２１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２０及び配列番号２２１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２０及び配列番号２２１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２０及び配列番号２２１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２０及び配列番号２２１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２０及び配列番号２２１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ、配列番号２２２、配列番号２２３、及び配列番号２２４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２２５、配列番号２２６、及び配列番号２２７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＣＴＬＡ－４上の同じエピトープに結合する。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブに関して薬物規制当局によって承認された抗ＣＴＬＡ－４バイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、抗ＣＴＬＡ－４抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。トレメリムマブのアミノ酸配列を表２４に示す。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＣＴＬＡ－４抗体であり、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、トレメリムマブである。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約１．５ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約２．５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約３．５ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約４．５ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約５．５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約６．５ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約７．５ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約８．５ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約９．５ｍｇ／ｋｇ、または約１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、トレメリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、トレメリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約２００ｍｇ～約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、約２００ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４８０ｍｇ、または約５００ｍｇの用量で投与される。いくつかの実施形態では、トレメリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、トレメリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、トレメリムマブまたはそのバイオシミラーであり、トレメリムマブは、２週間毎、３週間毎、４週間毎、５週間毎、または６週間毎に投与される。いくつかの実施形態では、トレメリムマブ投与は、切除前１、２、３、４、または５週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。いくつかの実施形態では、トレメリムマブ投与は、切除前１、２、または３週間で（すなわち、対象または患者から腫瘍試料を取得する前に）開始される。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、Ａｇｅｎｕｓからのザリフレリマブ、またはそのバイオシミラー、抗原結合断片、コンジュゲート、もしくはバリアントである。ザリフレリマブは、完全ヒトモノクローナル抗体である。ザリフレリマブには、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ Ｓｅｒｖｉｃｅ（ＣＡＳ）登録番号２１４８３２１－６９－９が割り当てられており、ＡＧＥＮ１８８４としても知られている。ザリフレリマブの調製及び特性は、米国特許第１０，１４４，７７９号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／００２４３５０Ａ１号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。

実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、配列番号２２８によって与えられる重鎖及び配列番号２２９によって与えられる軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ、配列番号２２８及び配列番号２２９に示される配列を有する重鎖及び軽鎖、またはそれらの抗原結合断片、Ｆａｂ断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、バリアント、もしくはコンジュゲートを含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２８及び配列番号２２９に示される配列と少なくとも９９％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２８及び配列番号２２９に示される配列と少なくとも９８％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２８及び配列番号２２９に示される配列と少なくとも９７％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２８及び配列番号２２９に示される配列と少なくとも９６％同一である重鎖及び軽鎖を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２２８及び配列番号２２９に示される配列と少なくとも９５％同一である重鎖及び軽鎖を含む。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ザリフレリマブの重鎖及び軽鎖ＣＤＲまたは可変領域（ＶＲ）を含む。ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）は、配列番号２３０に示される配列を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２３１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２３０及び配列番号２３１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２３０及び配列番号２３１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２３０及び配列番号２３１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２３０及び配列番号２３１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、各々が、それぞれ、配列番号２３０及び配列番号２３１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、それぞれ、配列番号２３１、配列番号２３３、及び配列番号２３４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２３５、配列番号２３６、及び配列番号２３７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。実施形態では、抗体は、前述の抗体のうちのいずれかと結合するために競合し、及び／またはＣＴＬＡ－４上の同じエピトープに結合する。

ある実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ザリフレリマブに関して薬物規制当局によって承認されたＣＴＬＡ－４バイオシミラーモノクローナル抗体である。ある実施形態では、バイオシミラーは、参照医薬品または参照バイオ製品のアミノ酸配列に対して少なくとも９７％の配列同一性、例えば、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、参照医薬品または参照バイオ製品と比較して、１つ以上の翻訳後修飾を含む、抗ＣＴＬＡ－４抗体を含み、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。いくつかの実施形態では、１つ以上の翻訳後修飾は、グリコシル化、酸化、脱アミド化、及び切断のうちの１つ以上から選択される。ザリフレリマブのアミノ酸配列を表２５に示す。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、認可された、または認可のために提出された抗ＣＴＬＡ－４抗体であり、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、参照医薬品または参照バイオ製品の製剤とは異なる製剤で提供され、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。抗ＣＴＬＡ－４抗体は、米国ＦＤＡ及び／または欧州連合のＥＭＡなどの薬物規制当局によって認可され得る。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。いくつかの実施形態では、バイオシミラーは、１つ以上の賦形剤をさらに含む組成物として提供され、１つ以上の賦形剤は、参照医薬品または参照バイオ製品に含まれる賦形剤と同じまたは異なるものであり、参照医薬品または参照バイオ製品は、ザリフレリマブである。

さらなる抗ＣＴＬＡ－４抗体の例には、ＡＧＥＮ１１８１、ＢＭＳ－９８６２１８、ＢＣＤ－１４５、ＯＮＣ－３９２、ＣＳ１００２、ＲＥＧＮ４６５９、及びＡＤＧ１１６が含まれるが、これらに限定されず、これらは当業者に即知である。

いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、以下の特許公開のうちのいずれかに開示される抗ＣＴＬＡ－４抗体である：ＵＳ２０１９／００４８０９６Ａ１、ＵＳ２０２０／０２２３９０７、ＵＳ２０１９／０２０１３３４、ＵＳ２０１９／０２０１３３４、ＵＳ２００５／０２０１９９４、ＥＰ１２１２４２２Ｂ１、ＷＯ２０１８／２０４７６０、ＷＯ２０１８／２０４７６０、ＷＯ２００１／０１４４２４、ＷＯ２００４／０３５６０７、ＷＯ２００３／０８６４５９、ＷＯ２０１２／１２０１２５、ＷＯ２０００／０３７５０４、ＷＯ２００９／１００１４０、ＷＯ２００６／０９６４９、ＷＯ２００５／０９２３８０、ＷＯ２００７／１２３７３７、ＷＯ２００６／０２９２１９、ＷＯ２０１０／０９７９５９７、ＷＯ２００６／１２１６８、及びＷＯ１９９７／０２０５７４（これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる）。さらなるＣＴＬＡ－４抗体は、米国特許第５，８１１，０９７号、同第５，８５５，８８７号、同第６，０５１，２２７号、及び同第６，９８４，７２０号、ＰＣＴ公開第ＷＯ０１／１４４２４号及び同第ＷＯ００／３７５０４号、ならびに米国公開第２００２／００３９５８１号及び同第２００２／０８６０１４号、及び／または米国特許第５，９７７，３１８号、同第６，６８２，７３６号、同第７，１０９，００３号、及び同第７，１３２，２８１号に記載されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態では、抗ＣＴＬＡ－４抗体は、例えば、ＷＯ９８／４２７５２、米国特許第６，６８２，７３６号及び同第６，２０７，１５６号、Ｈｕｒｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８（９５）：１００６７－１００７１（１９９８）、Ｃａｍａｃｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，２００４，２２，１４５（Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．２５０５（２００４）（抗体ＣＰ－６７５２０６）、またはＭｏｋｙｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９９８，５８，５３０１－５３０４（１９９８）に開示されており、これらの各々は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ＷＯ１９９６／０４０９１５（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるＣＴＬＡ－４リガンドである。

いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、ＣＴＬＡ－４発現の核酸阻害剤である。例えば、抗ＣＴＬＡ－４ＲＮＡｉ分子は、ＰＣＴ公開第ＷＯ１９９９／０３２６１９及びＷＯ２００１／０２９０５８、米国公開第２００３／００５１２６３号、同第２００３／００５５０２０号、同第２００３／００５６２３５号、同第２００４／２６５８３９号、同第２００５／０１００９１３号、同第２００６／００２４７９８号、同第２００８／００５０３４２号、同第２００８／００８１３７３号、同第２００８／０２４８５７６号、同第２００８／０５５４４３号、及び／または米国特許第６，５０６，５５９号、同第７，２８２，５６４号、同第７，５３８，０９５号、及び同第７，５６０，４３８号（参照により本明細書に組み込まれる）において記載された分子の形態を取り得る。いくつかの事例では、抗ＣＴＬＡ－４ＲＮＡｉ分子は、欧州特許第ＥＰ１３０９７２６号（参照により本明細書に組み込まれる）において記載された二本鎖ＲＮＡｉ分子の形態を取る。いくつかの事例では、抗ＣＴＬＡ－４ＲＮＡｉ分子は、米国特許第７，０５６，７０４号及び同第７，０７８，１９６号（参照により本明細書に組み込まれる）において記載された二本鎖ＲＮＡｉ分子の形態を取る。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、国際特許出願公開第ＷＯ２００４／０８１０２１（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されたアプタマーである。

他の実施形態では、本発明の抗ＣＴＬＡ－４ＲＮＡｉ分子は、米国特許第５，８９８，０３１号、同第６，１０７，０９４号、同第７，４３２，２４９号、及び同第７，４３２，２５０号、ならびに欧州出願第ＥＰ０９２８２９０号（参照により本明細書に組み込まれる）において記載されたＲＮＡ分子である。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＩＬレジメンを投与するステップを含む、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＴＩＬレジメンは、ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤を投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、及び（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、及び（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含むキットを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＩＬレジメンを投与するステップを含む、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＴＩＬレジメンは、ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤及びＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含む組成物を含む。

４．患者のリンパ球枯渇プレコンディショニング
ある実施形態では、本発明は、ＴＩＬ集団でがんを治療する方法を含み、患者は、本開示によるＴＩＬの注入前に骨髄非破壊的化学療法で前治療される。ある実施形態では、本発明は、骨髄非破壊的化学療法で前治療された患者のがんの治療に使用するためのＴＩＬ集団を含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団は、注入による投与用である。ある実施形態では、骨髄非破壊的化学療法は、シクロホスファミド６０ｍｇ／ｋｇ／日で２日間（ＴＩＬ注入の２７日前及び２６日前）、ならびにフルダラビン２５ｍｇ／ｍ^２／ｄで５日間（ＴＩＬ注入の２７日前～２３日前）である。ある実施形態では、本開示による骨髄非破壊的化学療法及びＴＩＬ注入（０日目）後、患者は、生理学的許容範囲まで８時間毎に７２０，０００ＩＵ／ｋｇで静脈内的にＩＬ－２（ＰＲＯＬＥＵＫＩＮとして市販されている、アルデスロイキン）の静脈内注入を受ける。ある特定の実施形態では、ＴＩＬ集団は、ＩＬ－２と組み合わせてがんを治療する際に使用するためのものであり、ＩＬ－２は、ＴＩＬ集団の後に投与される。

実験結果は、腫瘍特異的Ｔリンパ球の養子移入前のリンパ球枯渇が、制御性Ｔ細胞及び免疫系の競合要素（「サイトカインシンク」）を排除することによって治療有効性を増強する上で重要な役割を果たすことを示している。したがって、本発明のいくつかの実施形態は、本発明のＴＩＬを導入する前に、患者に対してリンパ球枯渇ステップ（「免疫抑制コンディショニング」と称されることもある）を利用する。

一般に、リンパ球枯渇は、フルダラビンまたはシクロホスファミド（マホスファミドと称される活性形態）及びそれらの組み合わせの投与を使用して達成される。かかる方法は、Ｇａｓｓｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１１，６０，７５－８５、Ｍｕｒａｎｓｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．Ｏｎｃｏｌ．，２００６，３，６６８－６８１、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８，２６，５２３３－５２３９、及びＤｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００５，２３，２３４６－２３５７に記載されており、これらはすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、フルダラビンは、０．５μｇ／ｍＬ～１０μｇ／ｍＬのフルダラビン濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１μｇ／ｍＬのフルダラビン濃度で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日以上投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、１０ｍｇ／ｋｇ／日、１５ｍｇ／ｋｇ／日、２０ｍｇ／ｋｇ／日、２５ｍｇ／ｋｇ／日、３０ｍｇ／ｋｇ／日、３５ｍｇ／ｋｇ／日、４０ｍｇ／ｋｇ／日、または４５ｍｇ／ｋｇ／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で２～７日間投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で４～５日間投与される。いくつかの実施形態では、フルダラビン治療は、２５ｍｇ／ｋｇ／日で４～５日間投与される。

いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性形態であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により、０．５μｇ／ｍＬ～１０μｇ／ｍＬの濃度で得られる。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの活性形態であるマホスファミドは、シクロホスファミドの投与により、１μｇ／ｍＬの濃度で取得される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日以上投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、１００ｍｇ／ｍ^２／日、１５０ｍｇ／ｍ^２／日、１７５ｍｇ／ｍ^２／日、２００ｍｇ／ｍ^２／日、２２５ｍｇ／ｍ^２／日、２５０ｍｇ／ｍ^２／日、２７５ｍｇ／ｍ^２／日、または３００ｍｇ／ｍ^２／日の投与量で投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、静脈内（すなわち、ｉ．ｖ．）投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、３５ｍｇ／ｋｇ／日で２～７日間投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、２５０ｍｇ／ｍ^２／日で４～５日間ｉ．ｖ．投与される。いくつかの実施形態では、シクロホスファミド治療は、２５０ｍｇ／ｍ^２／日で４日間ｉ．ｖ．投与される。

いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、患者にフルダラビンとシクロホスファミドを一緒に投与することによって行われる。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、２５ｍｇ／ｍ^２／日でｉ．ｖ．投与され、シクロホスファミドは、２５０ｍｇ／ｍ^２／日で４日間にわたってｉ．ｖ投与される。

ある実施形態では、リンパ球枯渇は、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与することによって行われる。

ある実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、フルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の２日間に投与され、リンパ球枯渇は合計５日間で行われる。

ある実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、フルダラビンを約２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の２日間に投与され、リンパ球枯渇は合計５日間で行われる。

ある実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、フルダラビンを約２０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の２日間に投与され、リンパ球枯渇は合計５日間で行われる。

ある実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約４０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、フルダラビンを約２０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の２日間に投与され、リンパ球枯渇は合計５日間で行われる。

ある実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを約４０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、フルダラビンを約１５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与することによって行われ、シクロホスファミド及びフルダラビンは、両方とも最初の２日間に投与され、リンパ球枯渇は合計５日間で行われる。

ある実施形態では、リンパ球枯渇が、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で、フルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で３日間投与することによって行われる。

ある実施形態では、シクロホスファミドは、メスナとともに投与される。ある実施形態では、メスナは、１５ｍｇ／ｋｇで投与される。メスナが注入されるある実施形態では、連続的に注入される場合、メスナは、およそ２時間にわたってシクロホスファミドとともに注入することができ（－５日目及び／または－４日目）、次いで残りの２２時間は３ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で、各シクロホスファミド用量と同時に開始して２４時間にわたって注入することができる。

ある実施形態では、リンパ球枯渇は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与した翌日から開始するＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。

ある実施形態では、リンパ球枯渇は、第３のＴＩＬ集団を患者に投与したのと同じ日に開始するＩＬ－２レジメンで患者を治療するステップをさらに含む。

いくつかの実施形態では、リンパ球枯渇は、５日間のプレコンディショニング治療を含む。いくつかの実施形態では、該日は、－５日から－１日、または０日から４日として示される。いくつかの実施形態では、レジメンは、－５日目及び－４日目（すなわち、０日目及び１日目）にシクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、－５日目及び－４日目（すなわち、０日目及び１日目）に静脈内シクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、－５日目及び－４日目（すなわち、０日目及び１日目）に６０ｍｇ／ｋｇの静脈内シクロホスファミドを含む。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドは、メスナとともに投与される。いくつかの実施形態では、レジメンは、フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、静脈内フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、２５ｍｇ／ｍ^２の静脈内フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、－５日目及び－１日目（すなわち、０～４日目）に２５ｍｇ／ｍ^２の静脈内フルダラビンをさらに含む。いくつかの実施形態では、レジメンは、－５日目及び－１日目（すなわち、０～４日目）に２５ｍｇ／ｍ^２の静脈内フルダラビンをさらに含む。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で、フルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップを含む。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ２／日の用量で、フルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で３日間投与するステップを含む。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表２６に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表２７に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表２８に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表２９に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表３０に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表３１に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表３２に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、表３３に従って投与される。

いくつかの実施形態では、骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンの前述の実施形態で使用されるＴＩＬ注入は、本明細書に記載のＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含む、本明細書に記載の任意のＴＩＬ組成物であり得、また、ＴＩＬ注入の代わりにＭＩＬ及びＰＢＬの注入、ならびに本明細書に記載のＩＬ－２レジメンの追加及び併用療法（ＰＤ－１及び／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤など）の投与を含み得る。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入日の１日前、２日前、または３日前の経過にわたって１００ｍｇ／ｍ^２の総用量まで投与されるメルファランを含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入日の１日前、２日前、または３日前の経過にわたって２００ｍｇ／ｍ^２の総用量まで投与されるメルファランを含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入日の１日前、２日前、または３日前の経過にわたって１００ｍｇ／ｍ^２の総用量まで投与されるメルファラン、及び３０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与されるフルダラビンを含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入日の１日前、２日前、または３日前の経過にわたって２００ｍｇ／ｍ^２の総用量まで投与されるメルファラン、及び３０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与されるフルダラビンを含む。

いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、抗ＣＤ４５抗体の投与を含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、抗ＣＤ４５抗体－薬物コンジュゲートの投与を含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、抗ＣＤ４５抗体－放射性同位体コンジュゲートの投与を含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、アパミスタマブ－^１３１Ｉの投与を含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入の２～９日前の間に２５ｍＣｉ、５０ｍＣｉ、７５ｍＣｉ、１００ｍＣｉ、１５０ｍＣｉ、または２００ｍＣｉの用量で投与されるアパミスタマブ－^１３１Ｉを含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入の２～９日前の間に２５ｍＣｉ～２００ｍＣｉの用量で投与されるアパミスタマブ－^１３１Ｉを含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入の４～８日前の間に５０ｍＣｉ～１５０ｍＣｉの用量で投与されるアパミスタマブ－^１３１Ｉを含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入の約６日前に約７５ｍＣｉの用量で投与されるアパミスタマブ－^１３１Ｉを含む。いくつかの実施形態では、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンは、ＴＩＬ注入の約７日前に約１００ｍＣｉの用量で投与されるアパミスタマブ－^１３１Ｉを含む。

いくつかの実施形態では、骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンの前述の実施形態で使用されるＴＩＬ注入は、本明細書に記載のＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含む、本明細書に記載の任意のＴＩＬ組成物であり得、また、ＴＩＬ注入の代わりにＭＩＬ及びＰＢＬの注入、ならびに抗ＣＤ５２抗体アレムツズマブ、またはそのバリアント、断片、抗体－薬物コンジュゲート、もしくはバイオシミラーを含む代替リンパ球枯渇レジメンの追加を含み得る。

５．ＩＬ－２レジメン
実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、高用量ＩＬ－２レジメンを含み、高用量ＩＬ－２レジメンは、治療的ＴＩＬ集団の治療有効部分を投与した翌日から静脈内投与されるアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを含み、アルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントが、０．０３７ｍｇ／ｋｇまたは０．０４４ｍｇ／ｋｇＩＵ／ｋｇ（患者の体重）の用量で、耐性まで８時間毎に最大１４用量にわたって１５分のボーラス静脈内注入を使用して投与される。９日間の休止後、このスケジュールは、さらに１４用量、合計最大２８用量にわたって繰り返され得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２は、１、２、３、４、５、または６用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２は、最大６用量の最大投与量で投与される。

ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、デクレッシェンドＩＬ－２レジメンを含む。デクレッシェンドＩＬ－２レジメンは、Ｏ′Ｄａｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９９９，１７，２７５２－６１、及びＥｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ２０００，８８，１７０３－９に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、デクレッシェンドＩＬ－２レジメンは、６時間にわたって静脈内投与される１８×１０^６ＩＵ／ｍ^２アルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくはバリアント、続いて１２時間にわたって静脈内投与される１８×１０^６ＩＵ／ｍ^２、続いて２４時間にわたって静脈内投与される１８×１０^６ＩＵ／ｍ^２、続いて７２時間かけて静脈内投与される４．５×１０^６ＩＵ／ｍ^２を含む。この治療サイクルは、２８日毎に最大４サイクル繰り返され得る。いくつかの実施形態では、デクレッシェンドＩＬ－２レジメンは、１日目の１８，０００，０００ＩＵ／ｍ^２、２日目の９，０００，０００ＩＵ／ｍ^２、３日目及び４日目の４，５００，０００ＩＵ／ｍ^２を含む。

ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、低用量ＩＬ－２レジメンを含む。Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ－Ｖｉｌｌａｒ ａｎｄ Ｈａｆｌｅｒ，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０００，１９，６６５－６７３、Ｈａｒｔｅｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２０１３，１，２９５－３０５、及びＲｏｓｅｎｚｗａｉｇ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．２０１９，７８，２０９－２１７（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている低用量ＩＬ－２レジメンを含む、当該技術分野で知られている任意の低用量ＩＬ－２レジメンを使用することができる。ある実施形態では、低用量ＩＬ－２レジメンは、ｍ^２当たり１８×１０^６ＩＵのアルデスロイキン、またはそのバイオシミラーもしくはバリアントを２４時間当たり５日間の連続的注入として、その後ＩＬ－２療法なしで２～６日間、その後任意選択でアルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントを静脈内にさらに５日間、２４時間当たりｍ^２当たり１８×１０^６ＩＵの連続的注入として、その後任意選択でＩＬ－２療法なしで３週間投与することを含み、その後追加のサイクルが投与され得る。

ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎にペグ化ＩＬ－２を投与することを含む。ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎に、ベンペガルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。

ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎に、ＴＨＯＲ－７０７、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。

ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４、または２１日毎に、ネムバロイキンアルファ、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。

ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、抗体骨格に移植されたＩＬ－２断片の投与を含む。ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、ＩＬ－２低親和性受容体に結合する抗体－サイトカイン移植タンパク質の投与を含む。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と、Ｖ_ＨまたはＶ_ＬのＣＤＲに移植されたＩＬ－２分子またはその断片と、を含み、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に拡張させる。ある実施形態では、抗体サイトカイン移植タンパク質は、相補性決定領域ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３を含む、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と、Ｖ_ＨまたはＶ_ＬのＣＤＲに移植されたＩＬ－２分子またはその断片と、を含み、ＩＬ－２分子は、ムテインであり、抗体サイトカイン移植タンパク質は、制御性Ｔ細胞よりもＴエフェクター細胞を優先的に拡張させる。ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、０．１０ｍｇ／日～５０ｍｇ／日の用量で、１、２、４、６、７、１４または２１日毎に、配列番号２９及び配列番号３８からなる群から選択される重鎖と、配列番号３７及び配列番号３９からなる群から選択される軽鎖と、を含む抗体、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを投与することを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体サイトカイン移植タンパク質は、アルデスロイキン（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標））または同等の分子などであるがこれらに限定されない野生型ＩＬ－２分子よりも長い血清半減期を有する。

ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、抗体骨格に移植されたＩＬ－２断片の投与を含む。ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、ＩＬ－２低親和性受容体に結合する抗体－サイトカイン移植タンパク質の投与を含む。ある実施形態では、ＩＬ－２レジメンは、ＩＬ－２Ｒα受容体への結合に影響を及ぼすことなく、アルデスロイキンと比較して、ＩＬ－２Ｒβ及び／またはＩＬ－２Ｒγ受容体への結合が強化された抗体－サイトカイン移植タンパク質の投与を含む。

いくつかの実施形態では、骨髄破壊的リンパ球枯渇レジメンの前述の実施形態で使用されるＴＩＬ注入は、本明細書に記載の任意のＴＩＬ組成物であり得、また、ＴＩＬ注入の代わりにＭＩＬ及びＰＢＬの注入、ならびに本明細書に記載のＩＬ－２レジメンの追加及び併用療法（ＰＤ－１及び／またはＰＤ－Ｌ１阻害剤など）の投与を含み得る。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＩＬレジメンを投与するステップを含む、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＴＩＬレジメンは、ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含み、ＩＬ－２レジメンを投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、及び（ｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、及び（ｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含むキットを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＩＬレジメンを投与するステップを含む、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＴＩＬレジメンは、ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含み、ＩＬ－２レジメン及びＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、及び（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを含むキットを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＩＬレジメンを投与するステップを含む、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＴＩＬレジメンは、ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含み、ＣＴＬＡ－４阻害剤及びＩＬ－２レジメンを投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＣＴＬＡ－４阻害剤、及び（ｉｉｉ）ＩＬ－２レジメンを含むキットを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＩＬレジメンを投与するステップを含む、がんを有する患者を治療する方法を含み、ＴＩＬレジメンは、ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品を含み、ＩＬ－２レジメン、ＣＴＬＡ－４阻害剤、及びＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれかを投与するステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれか、及び（ｉｖ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ＣＣＲを発現するように遺伝子修飾されたＴＩＬ製品、（ｉｉ）ＩＬ－２レジメン、（ｉｉｉ）ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤のいずれか、及び（ｉｖ）ＣＴＬＡ－４阻害剤を含むキットを含む。

ＶＩＩＩ．キメラ共刺激受容体
いくつかの実施形態では、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３を含む前述の製造プロセス、ならびにＴＩＬ、ＭＩＬ、及びＰＢＬを作製する他のプロセスは、本明細書に記載の１つ以上のＣＣＲを発現するためのＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬのウイルスまたは非ウイルス形質導入を含むステップを含むように修飾されてもよい。ある実施形態において、ＣＣＲは、細胞外結合ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞外結合ドメイン及び１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態において、ＣＣＲは、細胞外結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態において、ＣＣＲは、細胞外結合ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、複数の連結したドメインを含有する単一のポリペプチドである。いくつかの実施形態では、ＣＣＲは、スイッチ受容体である。いくつかの実施形態では、ＣＣＲは、米国特許出願公開第２０１９／０３８８４６８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている抗体の投与を含む。他の実施形態では、ＣＣＲは、国際特許出願公開第ＷＯ２０２０／１５２４５１Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている１つ以上のポリペプチドドメインを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬ製造プロセスと組み合わせて使用される本発明のＣＣＲは、図３４に示されるフォーマットである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬ製造プロセスと組み合わせて使用される本発明のＣＣＲＣＣＲは、図３４に示される互いに作動可能に連結された図３４に示されるドメインを含む。

Ａ．細胞外ドメイン
ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、腫瘍関連タンパク質に結合する細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、細胞外ドメインは、腫瘍関連細胞表面分子に結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、腫瘍関連細胞外分子に結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、腫瘍関連抗原に結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ２７４としても知られ、ＰＤＣＤ１によってコードされるＰＤ－Ｌ１に結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ２７４としても知られるＰＤ－Ｌ１に結合するＰＤ－１ドメインである。ある実施形態では、細胞外ドメインは、腫瘍関連抗原に結合し、腫瘍関連抗原は、ネオアンチゲンである。ある実施形態では、細胞外ドメインは、腫瘍関連抗原に結合し、腫瘍関連抗原は、ペプチド主要組織適合性複合体である。ある実施形態では、細胞外ドメインは、腫瘍関連抗原に結合し、腫瘍関連抗原は、熱ショックタンパク質ペプチド複合体である。ある実施形態では、細胞外ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ（ＣＤ３２６）、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、及びＭＵＣ１６からなる群から選択されるタンパク質に結合する。

いくつかの実施形態では、細胞外結合は、腫瘍関連抗原に結合することができるｓｃＦｖを含む。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ（ＣＤ３２６）、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、Ｂ７－Ｈ３、及びＭＵＣ１６からなる群から選択されるタンパク質に結合することができるＶ_Ｈ鎖及びＶ_Ｌ鎖を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、保存的アミノ酸置換などを通じて、機能的に等価な分子を生成するための、本明細書に開示されるｓｃＦｖアミノ酸配列の修飾を含む。例えば、ＣＣＲ内に含まれるｓｃＦｖ結合ドメインのＶ_ＨまたはＶ_Ｌは、ｓｃＦｖの開始Ｖ_ＨまたはＶ_Ｌフレームワーク領域の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の同一性を保持するように修飾することができる。本発明はまた、機能的に等価な分子を生成するために、ＣＣＲ構築物全体の修飾、ＣＣＲ構築物の様々なドメインの１つ以上のアミノ酸配列におけるかかる修飾を含む。

ある実施形態では、細胞外ドメインは、ヒト腫瘍関連抗原に結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウス腫瘍関連細胞表面分子に結合する。

いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約１００ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約９０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約８０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約７０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約６０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約５０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約４０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約３０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合するか、またはヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約１０ｐＭ以下のＫ_Ｄで結合する。

いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約７．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約７．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約８×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約８．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約９×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約９．５×１０^５１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合するか、またはヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約１×１０^６１／Ｍ・ｓ以上のｋ_{ａｓｓｏｃ}で結合する。

いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．１×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．２×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．３×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．４×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．５×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．６×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．７×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．８×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、ヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約２．９×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合するか、またはヒトもしくはマウス腫瘍関連抗原に約３×１０^－５１／ｓ以下のｋ_{ｄｉｓｓｏｃ}で結合する。

ＣＣＲの細胞外ｓｃＦｖドメインとして本明細書に記載のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインと併せて使用するのに好適なリンカー配列を表３４に示す。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、リンカー配列によってＶ_Ｌ結合ドメインに連結されたＶ_Ｈ結合ドメインを含むｓｃＦｖを含む細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、以下のフォーマットである。（Ｖ_Ｈ）－（ｓｃＦｖリンカー）－（Ｖ_Ｌ）－（構築物の残部）いくつかの実施形態では、本発明のｓｃＦｖは、以下のフォーマットである。（Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（Ｖ_Ｈ）－（構築物の残部）いくつかの実施形態では、リンカーは、表３４に示されるリンカーから選択される。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２３８、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２３９、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２４０、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２４１、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２４２、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号２４３、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。

ＣＣＲの細胞外ｓｃＦｖドメインとして本明細書に記載のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインと併せて使用するのに好適な追加のリンカー配列を表８に示す。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号６３、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号６４、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号６５、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号６６、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号６７、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号６８、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号６９、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号７０、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号７１、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号７２、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。

ＣＣＲの細胞外ドメインとして本明細書に記載のｓｃＦｖ中のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインと併せて使用するのに好適な追加のリンカー配列を表９に示す。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号７４、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号７５、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号７６、またはその保存的アミノ酸置換、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、もしくは９５％超の相同性を有する配列である。

ＣＣＲの細胞外ドメインのｓｃＦｖドメインの構築での使用に好適な代替リンカー配列は、Ｂｉｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４２，４２３－４２６に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、シグナルペプチドを含む。理論に縛られることなく、シグナルペプチドを含むＣＣＲは、細胞内で発現すると、小胞体に向かい、続いて細胞表面に向かい、そこで発現され得る。ある実施形態では、シグナルペプチドは、ＣＣＲのアミノ末端にあってもよい。当該技術分野で知られている任意の好適なシグナルペプチドは、米国特許第９，８５６，３２２号及び米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３２１４０４Ａ１号、同第ＵＳ２０１９／０００２５７３Ａ１号、同第ＵＳ２０２０／００２４３４２Ａ９号、及び同第ＵＳ２０２０／００７８３９９Ａ１号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているものなどの本発明のＣＣＲとともに使用され得る。他の好適なシグナルペプチドは、実施例を含む本明細書の他の箇所に記載されている。

１．細胞外ＰＤ－１ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＰＤ－１ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む融合タンパク質を含み、細胞外ドメインは、ＰＤ－１などの阻害ポリペプチドの細胞外ドメインの少なくとも一部であり、ＴＩＬ集団において免疫応答の活性化を防止するか、またはアポトーシスを誘導する陰性シグナルと関連付けられ、細胞内ドメインは、ＣＤ２８などの免疫細胞を活性化する陽性シグナルと関連付けられる刺激ポリペプチドの細胞内ドメインの少なくとも一部であり、さらに、融合タンパク質は、当該細胞上に表示されるとき、当該陰性シグナルを免疫細胞内の当該陽性シグナルに切り替えて、陰性免疫応答を陽性免疫応答に変換することができる。

例示的なＰＤ－１ドメインのアミノ酸配列を表３５に提供する。これらのドメインを使用する例示的なＰＤ－１ ＣＣＲ構築物を図３５に示す。ある実施形態において、本発明のＣＣＲは、図３５または図３６に示される細胞外ＰＤ－１ドメインを含む。かかるドメイン（それらの調製、特徴付け、及び使用のための方法を含む、ＰＤ－１スイッチＣＣＲ構築物とも称される）を使用するＰＤ－１ドメイン及びＣＣＲ構築物もまた、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３４５２１９Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本発明の実施形態では、ＰＤ－１スイッチＣＣＲ構築物は、Ｇｅｎ２、Ｇｅｎ３、またはＧｅｎ２プロセスのＲＥＰ前段階とＲＥＰ段階との間の期間を含む、Ｇｅｎ２、Ｇｅｎ３、または他のＴＩＬ製造プロセス中にＴＩＬに形質導入される。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号２４４、またはその保存的アミノ酸置換を含む細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号２４４、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、または９８％超の相同性を有する配列を含む細胞外ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号２４５、またはその保存的アミノ酸置換を含む細胞外及び膜貫通ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号２４５、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、または９８％超の相同性を有する配列を含む細胞外及び膜貫通ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号２４６、またはその保存的アミノ酸置換を含む細胞外及び膜貫通ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号２４６、またはそれと８０％超、８５％超、９０％超、９５％超、または９８％超の相同性を有する配列を含む細胞外及び膜貫通ドメインを含む。

例示的なＰＤ－１ドメインをコードするヌクレオチド配列を表３６に提供する。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外及び膜貫通ドメインを含み、細胞外及び膜貫通ドメインは、配列番号２４７のヌクレオチド配列によってコードされるＰＤ－１ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外及び膜貫通ドメインを含み、細胞外及び膜貫通ドメインは、配列番号２４７の同一性の少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を保持するドメインを含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、表３６のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外及び膜貫通ドメインを含み、細胞外及び膜貫通ドメインは、配列番号２４８のヌクレオチド配列によってコードされるＰＤ－１及びＣＤ２８ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外及び膜貫通ドメインを含み、細胞外及び膜貫通ドメインは、配列番号２４８の同一性の少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、少なくとも約７３％、少なくとも約７４％、少なくとも約７５％、少なくとも約７６％、少なくとも約７７％、少なくとも約７８％、少なくとも約７９％、少なくとも約８０％、少なくとも約８１％、少なくとも約８２％、少なくとも約８３％、少なくとも約８４％、少なくとも約８５％、少なくとも約８６％、少なくとも約８７％、少なくとも約８８％、少なくとも約８９％、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％を保持するドメインを含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、表３６のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１６，７６，１５７８－９０（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているようなＰＤ－１スイッチ構築物を含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／１１９２９８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているようなＰＤ－１スイッチ構築物を含む。

２．細胞外ＰＤ－Ｌ１結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＰＤ－Ｌ１結合ｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含む細胞外抗ＰＤ－Ｌ１ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１及び１９Ｈ９を含み、かかる抗体をコードするヌクレオチド配列を含むその特性及び調製は、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０２９８７７０Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。例示的な抗ＰＤ－Ｌ１結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表３７に提供する。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２５０、配列番号２５９、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択され、Ｖ_Ｌドメインは、配列番号２５１、配列番号２６０、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体３８Ａ１、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２４９に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２５０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２５１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５０及び配列番号２５１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号２５２、配列番号２５３、及び／または配列番号２５４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２５５、配列番号２５６、及び／または配列番号２５７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体１９Ｈ９、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２５８に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２５９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２６０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２５９及び配列番号２６０に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号２６１、配列番号２６２、及び／または配列番号２６３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２６４、配列番号２６５、及び／または配列番号２６６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、デュルバルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号１８０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１８１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１８０及び配列番号１８１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号１８２、配列番号１８３、及び／または配列番号１８４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１８５、配列番号１８６、及び／または配列番号１８７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、アベルマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号１９０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号１９１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号１９０及び配列番号１９１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号１９２、配列番号１９３、及び／または配列番号１９４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号１９５、配列番号１９６、及び／または配列番号１９７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、アテゾリズマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２００に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２０１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２００及び配列番号２０１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号２０２、配列番号２０３、及び／または配列番号２０４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２０５、配列番号２０６、及び／または配列番号２０７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／００４８０８５Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

ある実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１結合ドメインは、米国特許第１０，６０４，５８１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

３．細胞外ＣＥＡ結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、本明細書では抗ＣＥＡドメインとも称されるがん芽腫抗原（ＣＥＡ）結合ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＣＤ６６結合ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＣＤ６６ａ結合ドメイン、ＣＤ６６ｂ結合ドメイン、ＣＤ６６ｃ結合ドメイン、ＣＤ６６ｄ結合ドメイン、ＣＤ６６ｅ結合ドメイン、及びＣＤ６６ｆ結合ドメインからなる群から選択されるＣＤ６６結合ドメインを含む。ある実施形態では、ＣＥＡまたはＣＤ６６結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、ＣＥＡ結合ドメインは、マウスＣＥＡに結合する。ある実施形態では、ＣＥＡ結合ドメインは、ヒトＣＥＡに結合する。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＣＥＡ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。ある実施形態では、ＣＥＡ結合ドメインは、米国特許第８，４７０，９９４号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＣＤＲ、Ｖ_Ｈ、及びＶ_Ｌドメインから調製されたｓｃＦｖ抗体を含む。例示的なＣＥＡ結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表３８に示す。

ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２６７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２６８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２６７及び配列番号２６８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号２６９、配列番号２７０、及び／または配列番号２７１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２７２、配列番号２７３、及び／または配列番号２７４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＣＥＡ結合ドメインは、国際特許出願公開第ＷＯ２０２０／１５２４５１Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらのバリアント、断片もしくは誘導体、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

ある実施形態では、抗ＣＥＡ結合ドメインは、米国特許出願公開第ＵＳ２００９／０１１７１０８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらのバリアント、断片、もしくは誘導体、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

ある実施形態では、抗ＣＥＡ結合ドメインは、米国特許第５，０８１，２３５号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらのバリアント、断片、もしくは誘導体、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

ある実施形態では、抗ＣＥＡ結合ドメインは、米国特許第１０，８６５，２４３号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらのバリアント、断片、もしくは誘導体、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

４．細胞外ＣＤ７３結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、本明細書では抗ＣＤ７３ドメインとも称されるＣＤ７３結合ドメインを含む。エクト－５′－ヌクレオチダーゼまたはエクト－５′ＮＴとしても知られるＣＤ７３は、内皮細胞及び造血細胞のサブセットにおいて発現されるグリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合細胞表面酵素である。Ｒｅｓｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１９９８，１６１，９５－１０９。ＣＤ７３は、多くのがんの増殖及び移動を調節し、抗腫瘍Ｔ細胞の調節を通じて免疫抑制効果を有することが示されている、アデノシンなどのヌクレオシドへの細胞外ヌクレオシド一リン酸の脱リン酸化を触媒することが知られている。Ｚｈａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０，７０，６４０７－１１）。ＣＤ７３は、結腸癌、肺癌、膵臓癌、卵巣癌、膀胱癌、白血病、神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、甲状腺癌、食道癌、前立腺癌及び乳癌を含む多くの異なるがんで発現される。Ｊｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１０，７０，２２４５－５５、Ｓｔａｇｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２０１０，１０７，１５４７－５２。さらに、がんにおけるＣＤ７３の発現は、増殖、移動、血管新生、浸潤、転移、及び患者生存期間の短縮に関連している。ある実施形態では、ＣＤ７３結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、ＣＤ７３結合ドメインは、マウスＣＤ７３に結合する。ある実施形態では、ＣＤ７３結合ドメインは、ヒトＣＤ７３に結合する。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＣＤ７３ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３結合ドメインは、米国特許第１０，２８７，３６２号、同第１０，５５６，９６８号、及び同第１０，８６４，２６９号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＶ_Ｈ及び／またはＶ _Ｌ配列、重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。例示的なＣＤ７３結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表３９に提供する。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２７５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２７６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２７５及び配列番号２７６に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号２７７、配列番号２７８、及び／または配列番号２７９に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２８０、配列番号２８１、及び／または配列番号２８２に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３結合ドメインは、米国特許第９，３８８，２４９号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＶ _Ｈ及び／またはＶ _Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。追加の例示的なＣＤ７３結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表４０に提供する。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２８３に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２８４に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号２８３及び配列番号２８４に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号２７７、配列番号２７８、及び／または配列番号２７９に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号２８０、配列番号２８１、及び／または配列番号２８２に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３結合ドメインは、米国特許第１０，８２２，４２６号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３結合ドメインは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０２８４２９３Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

ある実施形態では、抗ＣＤ７３結合ドメインは、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０３９２２４３Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。

５．細胞外ＴＲＯＰ－２結合ドメイン
ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ヒトＴＲＯＰ－２に結合することができるドメインである。ある実施形態では、細胞外ドメインは、トロホブラスト細胞表面抗原－２、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー２、またはＴＡＣＳＴＤ２によってコードされる上皮糖タンパク質－１抗原（ＥＧＰ－１）としても知られるヒトＴＲＯＰ－２に結合する。ＴＲＯＰ－２の機能及びＥＲＫ－ＭＡＰＫ経路及びＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ経路の活性化を含む腫瘍病因におけるその役割は、Ｃｕｂａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ ２０１０，９，２５３、Ｇｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｒｅｐ．２０１８，１８，１７８２－８８、及びＭｃＤｏｕｇａｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２０１５，２４４，９９－１０９（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスまたはヒトＴＲＯＰ－２に結合する。ある実施形態では、細胞外ＴＲＯＰ－２結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメインは、マウスＴＲＯＰ－２に結合する。ある実施形態では、ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメインは、ヒトＴＲＯＰ－２に結合する。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＴＲＯＰ－２ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

ある実施形態では、ＣＣＲは、ＴＲＯＰ－２に結合し、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、もしくはＣＤＲドメインを含む細胞外ｓｃＦｖドメイン、またはかかるドメインをコードするヌクレオチドを含み、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／０２３７５１８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。例示的なＴＲＯＰ－２結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表４１に提供する。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、配列番号２９６、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、配列番号３００、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と９９％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と９８％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と９７％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と９６％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と９５％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と９０％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と８５％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、配列番号２９１、配列番号２９２、配列番号２９３、配列番号２９４、配列番号２９５、及び配列番号２９６からなる群から選択される配列と８０％同一であるＶ_Ｈ領域、ならびに配列番号２９７、配列番号２９８、配列番号２９９、及び配列番号３００からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号３０１、配列番号３０２、及び／または配列番号３０３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号３０４、配列番号３０５、及び／または配列番号３０６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、ＣＣＲは、ＴＲＯＰ－２に結合する細胞外ｓｃＦｖドメインを含み、配列番号２９２によるＶ_Ｈ鎖を含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号２９８に記載のＶ_Ｈ鎖を含む細胞外ｓｃＦｖドメインを含み、少なくとも１つのアミノ酸修飾が、９位のＡｌａをＰｒｏで置換するか、１２位のＬｙｓをＶａｌで置換するか、２０位のＶａｌをＩｌｅで置換するか、３８位のＡｒｇをＬｙｓで置換するか、４８位のＩｌｅをＭｅｔで置換するか、６７位のＡｒｇをＬｙｓで置換するか、６８位のＡｌａをＶａｌで置換するか、７０位のＩｌｅをＬｅｕで置換するか、９５位のＴｙｒをＰｈｅで置換するか、または１１２位のＶａｌをＬｅｕで置換する少なくとも１つのアミノ酸修飾が、配列番号２９２のアミノ酸配列に導入される。ある実施形態では、細胞外ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、ＣＣＲは、ＴＲＯＰ－２に結合する細胞外ｓｃＦｖドメインを含み、配列番号２９８によるＶ_Ｌ鎖を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２結合ドメインは、米国特許第９，３９９，０７４号に開示されているＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含み、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２結合ドメインは、米国特許第９，３９９，０７４号に開示されているように、抗体ｍ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｍ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦについてのＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、あるいはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２結合ドメインは、米国特許第９，３９９，０７４号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている抗体ｍ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ１９、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ２８、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ３０、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ１、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ２、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ３、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ４、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ５、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＮ、ｍ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１、またはｈ６Ｇ１１＿ＦＫＧ＿ＳＦについてのＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、あるいはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。例示的なＴＲＯＰ－２結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表４２に提供する。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ｍ７Ｅ６の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３０７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３０８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０７及び配列番号３０８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ｈ７Ｅ６の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３０９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３１０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３０９及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３１１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３１０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１０に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３１１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３１２に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１１及び配列番号３１２に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ｍ６Ｇ１１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３１３に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３１４に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１３及び配列番号３１４に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ｈ６Ｇ１１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３１５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３１６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１５及び配列番号３１６に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３１７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３１８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３１７及び配列番号３１８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号３１９、配列番号３２０、及び／または配列番号３２１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号３２２、配列番号３２３、及び／または配列番号３２４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ｍ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧ、ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬ、ｍ６Ｇ１１、ｈ６Ｇ１１、及びｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦのｓｃＦｖドメインの例示的なＴＲＯＰ－２結合Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインをコードするヌクレオチド配列は、表４３に提供され、米国特許第９，３９９，０７４号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。ある実施形態では、表４３のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体ｍ７Ｅ６の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３２５に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３２６に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２５及び配列番号３２６に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３２５及び／または配列番号３２６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体ｈ７Ｅ６の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３２７に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３２８に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２７及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３２７及び／または配列番号３２８は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３２９に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３２８に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３２８に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、表４３のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３２９及び／または配列番号３２８は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体ｈ７Ｅ６＿ＳＶＧＬの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３２９に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３３０に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３２９及び配列番号３３０に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３２９及び／または配列番号３３０は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体ｍ６Ｇ１１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３３１に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３３２に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３１及び配列番号３３２に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３３１及び／または配列番号３３２は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体ｈ６Ｇ１１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３３３に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３３４に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３３及び配列番号３３４に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３３３及び／または配列番号３３４は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体ｈ６Ｇ１１－ＦＫＧ＿ＳＦの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３３５に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３３６に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３５及び配列番号３３６に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３３５及び／または配列番号３３６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、ＣＣＲは、ＴＲＯＰ－２に結合する細胞外ｓｃＦｖドメインを含み、サシツズマブのＶ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、もしくはＣＤＲドメイン、またはそれらの断片、誘導体、もしくはバリアントを含む。抗ＴＲＯＰ－２モノクローナル抗体であるサシツズマブ、及びそのＶ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、ＣＤＲならびにそのアミノ酸及びヌクレオチド配列を含む他の関連ドメインの調製及び特性は、米国特許第９，７７０，５１７号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本発明のＣＣＲで使用するための例示的なＴＲＯＰ－２結合ドメインのアミノ酸配列を表４４に提供する。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、サシツズマブのＶ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメイン、またはそれらの断片、バリアント、誘導体、もしくはバイオシミラーを含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３３７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３３８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３３７及び配列番号３３８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、サシツズマブの重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはサシツズマブの軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号３３９、配列番号３４０、及び／または配列番号３４１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号３４２、配列番号３４３、及び／または配列番号３４４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、ＣＣＲは、ＴＲＯＰ－２に結合し、米国特許第９，０６２，１００号、同第９，６７０，２８７号、同第９，８５０，３１２号、及び同第１０，２０２，４６１号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０１４４５５９Ａ１号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている、細胞外ｓｃＦｖドメイン、あるいはＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ、重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３ドメインを含む。

ある実施形態では、ＣＣＲは、米国特許出願公開第ＵＳ２００８／０１３１４２８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている抗体ＡＲ４７Ａ６．４．２からＴＲＯＰ－２に結合する、細胞外ｓｃＦｖドメイン、またはＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３ドメインを含む。

６．細胞外ＥＰＣＡＭ結合ドメイン
ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＥＰＣＡＭに結合可能なドメインであり、ＥＰＣＡＭは、上皮細胞接着分子、腫瘍関連カルシウムシグナルトランスデューサー１またはＴＡＣＳＴＤ１、ＣＤ３２６、及び１７－Ａ１抗原としても知られている。ＥＰＣＡＭに結合することができるドメインは、本明細書では、抗ＥＰＣＡＭドメインとも称される。ある実施形態では、細胞外ドメインは、ヒトＥＰＣＡＭに結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスＥＰＣＡＭに結合する。ある実施形態では、細胞外ＥＰＣＡＭ結合ドメインは、ヒトＥＰＣＡＭまたはマウスＥＰＣＡＭに結合するｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＥＰＣＡＭ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

いくつかの実施形態では、ＥＰＣＡＭ結合ドメインは、各々が米国特許第８，６３７，０１７号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている抗体３－１７Ｉ ｓｃＦｖ、７－Ｆ１７ ｓｃＦｖ、１２－Ｃ１５ ｓｃＦｖ、１６－Ｇ５ ｓｃＦｖ、１７－Ｃ２０ ｓｃＦｖ、及び２４－Ｇ６ ｓｃＦｖのｓｃＦｖドメイン、ならびにその断片、バリアント、及び誘導体を含む。本発明のＣＣＲで使用するための例示的なＥＰＣＡＭ結合ドメインのアミノ酸配列を表４５に提供する。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体３－１７Ｉ ｓｃＦｖ、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４５に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体７－Ｆ１７ ｓｃＦｖ、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４６に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体１２－Ｃ１５ ｓｃＦｖ、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４７に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体１６－Ｇ５ ｓｃＦｖ、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４８に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体１７－Ｃ２０ ｓｃＦｖ、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３４９に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体２４－Ｇ６ ｓｃＦｖ、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５０に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９９％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９８％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９７％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９６％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３５１ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３５２、配列番号３５３、配列番号３５４、配列番号３５５、配列番号３５６、配列番号３５７ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号３５８、配列番号３５９、及び／または配列番号３６０に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号３６１、配列番号３６２、及び／または配列番号３６３に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

抗体３－１７Ｉ ｓｃＦｖ、７－Ｆ１７ ｓｃＦｖ、１２－Ｃ１５ ｓｃＦｖ、１６－Ｇ５ ｓｃＦｖ、１７－Ｃ２０ ｓｃＦｖ及び２４－Ｇ６ ｓｃＦｖに対する例示的なＥＰＣＡＭ結合ｓｃＦｖドメインをコードするヌクレオチド配列、ならびにそれらの断片、バリアント及び誘導体、ならびに追加のｓｃＦｖドメインに対するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインをコードするヌクレオチド配列は、表４６に提供され、米国特許第８，６３７，０１７号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。ある実施形態では、表４６のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体３－１７Ｉ ｓｃＦｖを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６４に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３６４は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体７－Ｆ１７ ｓｃＦｖを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６５に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３６５は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体１２－Ｃ１５ ｓｃＦｖを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６６に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３６６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体１６－Ｇ５ ｓｃＦｖを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６７に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３６７は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体１７－Ｃ２０ ｓｃＦｖを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６８に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３６８は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるｓｃＦｖ抗体２４－Ｇ６ ｓｃＦｖを含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３６９に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号３６９は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７２、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９９％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９８％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９７％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９６％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、配列番号３７０ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号３７１、配列番号３７２、配列番号３７３、配列番号３７４、配列番号３７５、配列番号３７６ならびにその断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。

いくつかの実施形態では、ＥＰＣＡＭ結合ドメインは、米国特許第９，３８８，２４９号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のｓｃＦｖ、ＶＨ、ＶＬ、及びＣＤＲドメインを含む。本発明のＣＣＲで使用するための例示的なＥＰＣＡＭ結合ドメインのアミノ酸配列を表４７に提供する。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３７７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３７８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３７７及び配列番号３７８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号３７９、配列番号３８０、及び／または配列番号３８１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号３８２、配列番号３８３、及び／または配列番号３８４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ結合ドメインは、米国特許第９，３８８，２４９号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている追加のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。

ある実施形態では、抗ＥＰＣＡＭ結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１９／０２３３５３６Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている追加のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。

７．細胞外組織因子結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、本明細書では抗ＴＦドメインとも称される組織因子（ＴＦ）結合ドメインを含む。ＴＦは、第ＶＩＩａ因子と併せて血液凝固を開始する、２１９アミノ酸残基の細胞外領域、２３アミノ酸残基の膜貫通領域、及び２１アミノ酸残基の細胞質領域を有する膜貫通糖タンパク質である。ＴＦは、肺癌、膵臓癌、乳癌、結腸癌、及び胃癌において発現される。Ｈｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．１９９４，６，３２１－３２７、Ｃａｌｌａｎｄｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ １９９２，７０，１１９４－２０１。ＴＦの異常に高い発現は、臨床的に、結腸直腸癌、ＮＳＣＬＣ、及び乳癌を含む多くの腫瘍の低分化と関連することが示されている。Ｓｈｉｇｅｒｎｏｒｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．１９９８，８０，８９４－８９８、Ｓｅｔｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ ２０００，８８，２９５－３０１、Ｓａｗａｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １９９９，７９，４７２－４７７、Ｋｉｒｓｃｈｍａｎｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．１９９９，５５，１２７－１３６、Ｓｃｈｗｉｒｚｋｅ，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９９，１９，１８０１－１８１４。ある実施形態では、ＴＦ結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、ＣＣＲは、ヒトＴＦに結合する細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスＴＦに結合する。ある実施形態では、細胞外ＴＦ結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＴＦ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

ある実施形態では、ＴＦ結合ドメインは、米国特許第７，９９３，６４４号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＣＤＲ、Ｖ_Ｈ、及びＶ_Ｌドメインから調製されたｓｃＦｖ抗体を含む。ある実施形態では、ｓｃＦｖドメインは、抗体ＴＦ２６０、ＴＦ１９６、ＴＦ２７８、ＴＦ２７７、ＴＦ３９２、またはＴＦ９のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、またはＣＤＲドメインを含み、これらの各々の調製及び特性は、米国特許第７，９９３，６４４号に記載されており、参照により本明細書に組み込まれ、ＴＦ２６０、ＴＦ１９６、ＴＦ２７８、ＴＦ２７７、ＴＦ３９２、またはＴＦ９の各々のＶ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、及びＣＤＲドメインを含む。ある実施形態では、ｓｃＦｖは、ｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、またはチソツマブのＣＤＲドメイン、またはそのバリアント、断片、もしくは誘導体を含み、その構造は、本発明の実施形態で使用され得る他のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、またはＣＤＲドメインとともに、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０１６９３１１Ａ１号、同第ＵＳ２０１９／０３１５８８０Ａ１号、同第ＵＳ２０２０／０２４６４７７Ａ１号、及び同第ＵＳ２０２１／００３０８８８Ａ１号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ある実施形態では、ｓｃＦｖは、米国特許第９，１６８，３１４号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗体を含む。ある実施形態では、ｓｃＦｖは、米国特許第７，８２４，６７７号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗体を含む。例示的なＴＦ結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表４８に示す。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ＴＦ２６０の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３８５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３８６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８５及び配列番号３８６に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ＴＦ１９６の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３８７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３８８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８７及び配列番号３８８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ＴＦ２７８の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３８９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３９０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３８９及び配列番号３９０に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ＴＦ２７７の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３９１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３９２に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９１及び配列番号３９２に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ＴＦ３９４の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３９３に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３９４に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９３及び配列番号３９４に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ｓｃＦｖ抗体ＴＦ９の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３９５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３９６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号３９５及び配列番号３９６に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号３８５、配列番号３８７、配列番号３８９、配列番号３９１、配列番号３９３、配列番号３９５、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号３８６、配列番号３８８、配列番号３９０、配列番号３９２、配列番号３９４、配列番号３９６、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号３９７、配列番号３９８、及び／または配列番号３９９に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４００、配列番号４０１、及び／または配列番号４０２に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４０３、配列番号４０４、及び／または配列番号４０５に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４０６、配列番号４０７、及び／または配列番号４０８に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４０９、配列番号４１０、及び／または配列番号４１１に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４１２、配列番号４１３、及び／または配列番号４１４に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４１５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４１６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１５及び配列番号４１６に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４１７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４１８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１７及び配列番号４１８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４１９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４２０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４１９及び配列番号４２０に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４２１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４２２に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２１及び配列番号４２２に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４１５、配列番号４１７、配列番号４１９、配列番号４２１、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４１６、配列番号４１８、配列番号４２０、配列番号４２２、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４２３に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４２４に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２３及び配列番号４２４に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ＴＦ２６０、ＴＦ１９６、ＴＦ２７８、ＴＦ２７７、ＴＦ３９２、及びＴＦ９のｓｃＦｖドメインの例示的なＴＦ結合Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインをコードするヌクレオチド配列は、表４９に提供され、米国特許第７，９９３，６４４号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。ある実施形態では、表４９のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされる抗体ＴＦ２６０の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４２５に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４２６に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２５及び配列番号４２６に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号４２５及び／または配列番号４２６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされる抗体ＴＦ１９６の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４２７に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４２８に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２７及び配列番号４２８に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号４２７及び／または配列番号４２８は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされる抗体ＴＦ２７８の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４２９に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４３０に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４２９及び配列番号４３０に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号４２９及び／または配列番号４３０は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされる抗体ＴＦ２７７の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４３１に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４３２に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３１及び配列番号４３２に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号４３１及び／または配列番号４３２は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされる抗体ＴＦ３９２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４３３に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４３４に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３３及び配列番号４３４に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号４３３及び／または配列番号４３４は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされる抗体ＴＦ９の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４３５に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４３６に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３５及び配列番号４３６に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号４３５及び／または配列番号４３６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

８．細胞外ＬＦＡ－１結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、本明細書では抗ＬＦＡ－１ドメインとも称される、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）として知られるＴ細胞インテグリンに結合可能なドメインを含む。ＬＦＡ－１のアルファサブユニットは、ＣＤ１１ａとして知られており、そのリガンドとしては、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ－２、ＩＣＡＭ－３、ＩＣＡＭ－４、ＩＣＡＭ－５、及びＪＡＭ－Ａが挙げられる。ＬＦＡ－１は、Ｗａｌｌｉｎｇ ａｎｄ Ｋｉｍ，Ｆｒｏｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２０１８，９，１－１０により詳細に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、細胞外ドメインは、ヒトＬＦＡ－１に結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスＬＦＡ－１に結合する。ある実施形態では、細胞外ＬＦＡ－１結合ドメインは、ヒトＬＦＡ－１またはマウスＬＦＡ－１に結合するｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＬＦＡ－１ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。ある実施形態では、細胞外ドメインは、ヒトＣＤ１１ａ（本明細書では抗ＣＤ１１ａとも称される）に結合する。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスＣＤ１１ａに結合する。ある実施形態では、細胞外ＣＤ１１ａ結合ドメインは、ヒトＣＤ１１ａまたはマウスＣＤ１１ａに結合するｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＣＤ１１ａ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲのＬＦＡ－１結合ドメインまたはＣＤ１１ａ結合ドメインは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１５／００７９０７５Ａ１号に記載されている抗体のｓｃＦｖドメインを含む。本発明のＣＣＲで使用するための例示的なＬＦＡ－１またはＣＤ１１ａ結合ドメインのアミノ酸配列を表５０に提供する。

ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４３７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４３８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３７及び配列番号４３８に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４３９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４４０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４３９及び配列番号４４０に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４３７、配列番号４３９、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４３８、配列番号４４０、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。

ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１または抗ＣＤ１１ａ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４４１、配列番号４４２、及び／または配列番号４４３に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、それぞれ、配列番号４４４、配列番号４４５、及び／または配列番号４４６に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換と、を含む。

ある実施形態では、抗ＬＦＡ－１結合ドメインまたは抗ＣＤ１１ａ結合ドメインは、ｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、またはオズリモマブ（ｏｄｕｌｉｍｏｍａｂ）の重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、またはその誘導体、バリアント、もしくは断片、またはそのヒト化バリアントを含む。オズリモマブは、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．（Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ，ＵＳＡ）から市販されている。

ある実施形態では、追加のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む抗ＬＦＡ－１結合ドメインまたは抗ＣＤ１１ａ結合ドメインは、米国特許第５，２８４，９３１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている抗体から得られる。ある実施形態では、追加のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む抗ＬＦＡ－１結合ドメインは、Ｍ１７／４．４（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２１７）、ＴＳ２／１８．１．１（ＡＴＣＣ ＨＢ－１９５）、ＴＳ１／２２．１．１．１３（ＡＴＣＣ ＨＢ－２０２）、ＴＳ１／１８．１．２．１１（ＡＴＣＣ ＨＢ－２０３）、ＬＭ２／１．６．１１（ＡＴＣＣ ＨＢ－２０４）、ＴＳ２／９．１．４．３（ＡＴＣＣ ＨＢ－２０５）、２Ｅ６（ＡＴＣＣ ＨＢ－２２６）、ＢＥ２９Ｇ１（ＡＴＣＣ ＨＢ－２３３）、ＴＳ２／１６．２．１（ＡＴＣＣ ＨＢ－２４３）、ＴＳ２／４．１．１（ＡＴＣＣ ＨＢ－２４４）、ＴＳ２／７．１．１（ＡＴＣＣ ＨＢ－２４５）、Ｓ６Ｆ１（ＡＴＣＣ ＨＢ－９５７９）、Ｍ５／１１４．１５．２（ＡＴＣＣ ＩＩＢ－１２０）、Ｍ１／７０．１５．１１．５ＨＬ（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１２８）、ＦＤ４４１．８（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２１３）、Ｍ１７／４．４．１１．９（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２１７）、Ｍ１８／２．ａ．１２．７（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２１８）、Ｍ１７／５．２（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２３７）、及びＭ５／４９．４．１（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－２３８）を含む、ＡＴＣＣを含む細胞株によって産生された抗体から得られる。

ある実施形態では、抗ＬＦＡ結合ドメインまたは抗ＣＤ１１ａ結合ドメインは、米国特許出願公開第２００８／００３８２５９Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む、追加の抗体を含む。

９．細胞外ＦＡＰ結合ドメイン
ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ヒトＦＡＰに結合することができるドメインである。ある実施形態では、細胞外ドメインは、線維芽細胞活性化タンパク質及び線維芽細胞活性化タンパク質αとしても知られるヒトＦＡＰに結合する。デスモプラジアを含む固形腫瘍における腫瘍間質におけるＦＡＰの機能及びその役割、ならびに乳癌、肺癌、結腸癌、膵臓癌、及び他の腫瘍において見出されるがん関連線維芽細胞におけるその発現は、Ｌｉｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｂｉｏｌ．＆Ｔｈｅｒ．２０１２，１３，１２３－１２９（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ある実施形態では、細胞外ＦＡＰ結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメインは、マウスＦＡＰに結合する。ある実施形態では、ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメインは、ヒトＦＡＰに結合する。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＦＡＰ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＦＡＰ結合ドメインを含む。ある実施形態では、ＦＡＰ結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１９／０２３３５３６Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載の抗ＦＡＰ結合ドメインである。ある実施形態では、抗ＦＡＰ結合ドメインは、ｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいはＢＩＢＨ１としても知られるシブロツズマブの重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含み、これらは米国特許出願公開第ＵＳ２００３／０１０３９６８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ある実施形態では、抗ＦＡＰ結合ドメインは、ｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいはＦＡＰ５の重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含み、これらは米国特許出願公開第ＵＳ２００９／０３０４７１８Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。例示的なＦＡＰ結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表５１に提供する。

ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも９９％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも９８％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも９７％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも９６％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも９５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも９０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも８５％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４４７に示される配列と少なくとも８０％同一であるｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４４８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４４９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４４８及び配列番号４４９に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４５０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４５１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５０及び配列番号４５１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４４８、配列番号４５０、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４４９、配列番号４５１、及びそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。

ある実施形態では、抗ＦＡＰ結合ドメインは、ｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ _Ｌ配列、あるいはＯＭＴＸ－７０５の重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列（Ｏｎｃｏｍａｔｒｙｘ ＳＬから入手可能）を含み、これらは米国特許第１０，８６４，２７８号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

ｓｃＦｖドメインの例示的なＦＡＰ結合Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメイン、ならびにＣＤＲドメインをコードするヌクレオチド配列は、表５２に提供され、米国特許出願公開第ＵＳ２００３／０１０３９６８Ａ１号、同第ＵＳ２００９／０３０４７１８Ａ１号、及び同第ＵＳ２０１９／０２３３５３６Ａ１号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）にさらに記載されている。ある実施形態では、表５２のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされる抗体シブロツズマブの重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及び／またはＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４５２に示される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４５３に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＴＦ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５２及び配列番号４５３に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされるＶ_Ｈ領域及び／またはＶ_Ｌ領域を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号４５２及び／または配列番号４５３は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

１０．細胞外ＶＩＳＴＡ結合ドメイン
ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ｃ１０ｏｒｆ５４、ＰＤ－１Ｈ、及びＢ７－Ｈ５としても知られる、Ｖドメイン含有Ｔ細胞活性化Ｉｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ）に結合することができるドメインであり、これは、理論に拘束されることなく、抗腫瘍免疫応答を阻害すると考えられる免疫チェックポイント遺伝子である。ＶＩＳＴＡ及びその特性は、Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１１，２０８，５７７－９２、Ｎｏｗａｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２０１７，２７６，６６－７９、及びＤｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．Ｃａｎｃｅｒ，２０１６，４，８６（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。ＶＩＳＴＡは、骨髄細胞及びＴリンパ球上で発現され、その過剰発現は、初期のＴ細胞の活性化及び増殖の抑制、ならびにサイトカイン産生の低減と関連付けられる。ＶＩＳＴＡは、抗原提示細胞上のリガンド及びＴ細胞上の受容体の両方として機能する。ＶＩＳＴＡはまた、中皮腫及び胸膜中皮腫などのある特定の肺癌において過剰発現することが知られている。ある実施形態では、ＣＣＲは、ヒトＶＩＳＴＡに結合する細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスＶＩＳＴＡに結合する。ある実施形態では、細胞外ＶＩＳＴＡ結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＶＩＳＴＡ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

ある実施形態では、ｓｃＦｖドメインは、抗体１Ｂ８、２Ｃ１２、１Ａ１２、または３Ｃ５のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、またはＣＤＲドメインを含み、これらの各々の調製及び特性は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０４０７４４９Ａ１号に記載されており、参照により本明細書に組み込まれ、１Ｂ８、２Ｃ１２、１Ａ１２、または３Ｃ５の各々のＶ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、及びＣＤＲドメイン、ならびにそれらのバリアント、誘導体、及び断片を含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲのＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０４０７４４９Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載のＶ_Ｈドメイン及びＶ _Ｌドメインを含むｓｃＦｖ抗体を含む。例示的なＶＩＳＴＡ結合Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインのアミノ酸配列を表５３に提供する。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体１Ｂ８の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４５４に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４５５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４５４及び配列番号４５５に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体１Ｂ１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４５６、配列番号４５７、及び／または配列番号４５８に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４５９、配列番号４６０、及び／または配列番号４６１に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体２Ｃ１２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４６２に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４６３に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４６２及び配列番号４６３に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体２Ｃ１２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４６４、配列番号４６５、及び／または配列番号４６６に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４６７、配列番号４６８、及び／または配列番号４６９に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体１Ａ１２の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４７０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４７１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７０及び配列番号４７１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体２Ｃ１２の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４７２、配列番号４７３、及び／または配列番号４７４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４７５、配列番号４７６、及び／または配列番号４７７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体３Ｃ５の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４７８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４７９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４７８及び配列番号４７９に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、抗体３Ｃ５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４８０、配列番号４８１、及び／または配列番号４８２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４８３、配列番号４８４、及び／または配列番号４８５に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、及びそれらの断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９９％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９８％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９７％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９６％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４５４、配列番号４６２、配列番号４７０、配列番号４７８、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４５５、配列番号４６３、配列番号４７１、配列番号４７９、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。

ある実施形態では、ｓｃＦｖドメインは、抗体１Ｂ８、２Ｃ１２、１Ａ１２、３Ｃ５、２Ｂ７、２Ｃ１２（Ｈ）、２Ｃ１２（Ｌ）、１Ｃ９、１Ｄ１０、及びそれらのバリアント、誘導体、及び断片のｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ、Ｖ_Ｌ、またはＣＤＲドメインを含み、これらの各々の調製及び特性は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０４０７４４９Ａ１号に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。本発明での使用に好適な代替ＶＩＳＴＡ結合ドメインの構築に用いられ得る他の配列は、米国特許出願公開第ＵＳ２０２０／０４０７４４９Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。

ある実施形態では、抗ＶＩＳＴＡ結合ドメインは、米国特許出願公開第２０１７／０３０６０２４Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。

１１．細胞外ＬＲＲＣ１５結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ロイシンリッチ反復を含有するタンパク質１５（ＬＲＲＣ１５）結合ドメインを含む。ＬＲＲＣ１５は、２つの既知のアイソフォームを有する細胞表面タンパク質であり、Ｐｕｒｃｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１８，７８，４０５９－７２（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、乳房、頭頸部、肺、及び膵臓の腫瘍を含む多くの固形腫瘍における間質及びがん関連線維芽細胞上、ならびに肉腫、黒色腫、及び神経膠芽腫を含む間葉系起源のがん細胞のサブセット上で直接発現することが知られている。ある実施形態では、ＣＣＲは、ヒトＬＲＲＣ１５に結合する細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスＬＲＲＣ１５に結合する。ある実施形態では、細胞外ＬＲＲＣ１５結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗ＬＲＲＣ１５ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５結合ドメインは、米国特許第１０，１８８，６６０号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＶ _Ｈ及び／またはＶ _Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５結合ドメインは、各々が米国特許第１０，１８８，６６０号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている抗体ｈｕＭ２５、ｈｕＡＤ２０８．４．１、ｈｕＡＤ２０８．１２．１、ｈｕＡＤ２０８．１４．１、ｈｕ１３９．１０、ｍｕＡＤ２１０．４０．９、またはｍｕＡＤ２０９．９．１についてのＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列、あるいはかかる配列をコードするヌクレオチドを含む。例示的なＬＲＲＣ１５結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表５４に提供する。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＭ２５の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４８６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４８７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４８６及び配列番号４８７に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＭ２５の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４８８、配列番号４８９、及び／または配列番号４９０に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４９１、配列番号４９２、及び／または配列番号４９３に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４９４に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４９５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号４９４及び配列番号４９５に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＡＤ２０８．４．１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号４９６、配列番号４９７、及び／または配列番号４９８に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号４９９、配列番号５００、及び／または配列番号５０１に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号５０２に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５０３に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５０２及び配列番号５０３に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＡＤ２０８．１２．１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号５０４、配列番号５０５、及び／または配列番号５０６に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号５０７、配列番号５０８、及び／または配列番号５０９に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号５１０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５１１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１０及び配列番号５１１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕＡＤ２０８．１４．１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号５１２、配列番号５１３、及び／または配列番号５１４に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号５１５、配列番号５１６、及び／または配列番号５１７に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕ１３９．１０の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号５１８に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５１９に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５１８及び配列番号５１９に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｈｕ１３９．１０の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号５２０、配列番号５２１、及び／または配列番号５２２に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号５２３、配列番号５２４、及び／または配列番号５２５に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号５２６に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５２７に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５２６及び配列番号５２７に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｍｕＡＤ２１０．４０．９の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号５２８、配列番号５２９、及び／または配列番号５３０に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号５３１、配列番号５３２、及び／または配列番号５３３に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号５３４に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５３５に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５３４及び配列番号５３５に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、抗体ｍｕＡＤ２０９．９．１の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号５３６、配列番号５３７、及び／または配列番号５３８に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号５３９、配列番号５４０、及び／または配列番号５４１に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列によってコードされ、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、バリアント、及び保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９９％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９８％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９７％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９６％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と９０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８５％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。ある実施形態では、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖドメインは、配列番号４８６、配列番号４９４、配列番号５０２、配列番号５１０、配列番号５１８、配列番号５２６、配列番号５３４、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と８０％同一であるＶ_Ｈ領域と、配列番号４８７、配列番号４９５、配列番号５０３、配列番号５１１、配列番号５１９、配列番号５２７、配列番号５３５、ならびにそれらの断片、誘導体、及びバリアントからなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｌ領域と、を含む。

１２．細胞外Ｂ７－Ｈ３結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られる）結合ドメインを含む。Ｂ７－Ｈ３（Ｂ７相同性３）は、抗原提示細胞上で発現される細胞表面糖タンパク質であり、Ｃａｓｔｅｌｌａｎｏｓ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７，６，６６－７５（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、免疫回避及びがんの進行の両方において役割を果たすことが知られている。ヒトにおけるエクソン重複は、単一のＩｇＶ－ＩｇＣ様ドメイン（２ＩｇＢ７－Ｈ３アイソフォーム）またはいくつかの保存されたシステイン残基を含有するＩｇＶ－ＩｇＣ－ＩｇＶ－ＩｇＣ様ドメイン（４ＩｇＢ７－Ｈ３アイソフォーム）のいずれかを有する２つのＢ７－Ｈ３アイソフォームの発現をもたらす。ヒト組織及び細胞株における優勢なＢ７－Ｈ３アイソフォームは、Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４，１７２，２３５２－５９（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているような４ＩｇＢ７－Ｈ３である。ある実施形態では、ＣＣＲは、ヒトＢ７－Ｈ３に結合する細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、ヒト４ＩｇＢ７－Ｈ３に結合する細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、ヒト２ＩｇＢ７－Ｈ３に結合する細胞外ドメインを含む。ある実施形態では、細胞外ドメインは、マウスＢ７－Ｈ３に結合する。ある実施形態では、細胞外Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、ｓｃＦｖドメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示される構築物を含み、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインは、抗Ｂ７－Ｈ３ Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインであり、リンカーは、本明細書に記載されるとおりである。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、米国特許第１０，７３０，９４５号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、抗体ＢＲＣＡ８４Ｄ（ＢＲＣＡ８４Ｄ－１及びＢＲＣＡ８４Ｄ－２、ならびにそれらのバリアントを含む）、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ＴＥＳ７、ＯＶＣＡ２２、ＧＢ８、またはＳＧ２７、ヒト化またはマウス（それらのバリアントを含む）についてのＶ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３配列、またはかかる配列をコードするヌクレオチドを含み、各々が米国特許第１０，７３０，９４５号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されている。例示的なＢ７－Ｈ３結合ｓｃＦｖドメインのアミノ酸配列を表５５に提供する。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、抗体ＢＲＣＡ８４Ｄ（ＢＲＣＡ８４Ｄ－１及びＢＲＣＡ８４Ｄ－２、ならびにそれらのバリアントを含む）、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ＴＥＳ７、ＯＶＣＡ２２、ＧＢ８、またはＳＧ２７（ヒト化もしくはマウスバリアントを含む）の重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）ドメイン及び／または軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）ドメイン、またはそれらのバリアント、誘導体、断片、もしくは保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号５４２に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５４３に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５４２及び配列番号５４３に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、ヒト化またはマウスバリアントの両方を含む、抗体ＢＲＣＡ８４Ｄ（ＢＲＣＡ８４Ｄ－１及びＢＲＣＡ８４Ｄ－２、ならびにそれらのバリアントを含む）、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ＴＥＳ７、ＯＶＣＡ２２、ＧＢ８、またはＳＧ２７の重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、ならびに軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、それぞれ、配列番号５４４、配列番号５４５、及び／または配列番号５４６に示される配列を有する重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換、及び／またはそれぞれ、配列番号５４７、配列番号５４８、及び／または配列番号５４９に示される配列を有する軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３ドメイン、またはそれらの保存的アミノ酸置換を含む。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、配列番号５５０に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、配列番号５５１に示される配列、またはその保存的アミノ酸置換を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも９９％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも９８％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも９７％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも９６％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも９５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも９０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも８５％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖドメインは、各々が、それぞれ、配列番号５５０及び配列番号５５１に示される配列と少なくとも８０％同一であるＶ_Ｈ領域及びＶ_Ｌ領域を含む。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３ｓｃＦｖドメインは、Ｖ_Ｈドメイン及びＶ_Ｌドメインを含み、Ｖ_Ｈドメインは、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ＢＲＣＡ８４Ｄ－１、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ－２ＶＨ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ－３ＶＨ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ－４ＶＨ、ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ、またはそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）は、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ＢＲＣＡ８４Ｄ－２ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ－３ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ－４ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ－５ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ－６ＶＬ、ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ、またはそれらの保存的アミノ酸置換からなる群から選択される配列を含み、各々は米国特許第１０，７３０，９４５号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているとおりである。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、米国特許第９，３７１，３９５号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、米国特許第１０，５０１，５４４号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。

ある実施形態では、抗Ｂ７－Ｈ３結合ドメインは、米国特許出願公開第２０２０／０３３８２０９Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。

１３．他の細胞外結合ドメイン
ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＣＤ４４結合ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＣＤ４４結合ドメインは、米国特許第７，３６１，３４７号、同第９，３８８，２４９号及び同第１１，２２０，５４４号、ならびに米国特許公開第ＵＳ２００４／００４８３１９Ａ１号、同第ＵＳ２００５／０２１４２８３Ａ１号、同第ＵＳ２００７／０２３７７６１Ａ１号、同第ＵＳ２０１０／００９２４８４Ａ１号、同第ＵＳ２０１２／０２０１７５１Ａ１号、及び同第ＵＳ２０２０／０２９１１１３Ａ１号（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。当該技術分野で知られている他の好適な抗ＣＤ４４結合ドメインを使用してもよい。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＣＤ４０結合ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＣＤ４０結合ドメインは、国際特許公開第ＷＯ２０１８／０２７０２５Ａ１号、米国特許公開第２０２１／０１８８９９２Ａ１号及び同第２０１５／０１１０７８３Ａ１号、ならびに米国特許第１１，００１，６３７号及び同第１０，５７７，４２５号（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。ＣＤ４０結合ドメインはまた、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）ドメインの結合または細胞外部分を含む。当該技術分野で知られている他の好適な抗ＣＤ４０結合ドメインを使用してもよい。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＡＬＣＡＭ（ＣＤ１６６）結合ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＡＬＣＡＭ（抗ＣＤ１６６）結合ドメインは、米国特許第９，３８８，２４９号及び同第１１，２２０，５４４号、ならびに米国特許公開第ＵＳ２００４／００４８３１９Ａ１号、同第ＵＳ２０２０／０２９１１１３Ａ１号（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。当該技術分野で知られている他の好適な抗ＡＬＣＡＭ結合ドメインを使用してもよい。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＩＬ－１３Ｒα結合ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＩＬ－１３Ｒα１結合ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＩＬ－１３Ｒα２結合ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＩＬ－１３Ｒα結合ドメインは、米国特許第６，４２８，７８８号、同第７，９９４，３０２号、同第８，２２１，７５５号、同第９，３１５，５７５号、同第８，３１８，９１０号、同第９，６５０，４３８号、同第９，８２８，４２８号、及び同第９，５８７，０２６号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０００８９６６Ａ１号、同第ＵＳ２０２１／００００８７５Ａ１号、及び同第２０１９／０３５９７２３Ａ１号（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。当該技術分野で知られている他の好適な抗ＩＬ－１３Ｒα、ＩＬ－１３Ｒα１、またはＩＬ－１３Ｒα２結合ドメインを使用することもできる。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、形質転換成長因子β受容体（ＴＧＦβＲ）結合ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＴＧＦβＲＩＩ（本明細書ではＴＧＦβＲ２とも称される）結合ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＧＦβＲ結合ドメインは、米国特許第６，２０１，１０８号及び第７，５７９，１８６号、米国特許出願公開第ＵＳ２０１２／０１７７６６６Ａ１号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２０２１／１３３１６７Ａ１号（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。ＴＧＦβＲ結合ドメインはまた、ＴＧＦβドメインの結合または細胞外部分を含む。当該技術分野で知られている他の好適な抗ＴＧＦβＲ結合ドメインを使用してもよい。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）結合ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＴＧＦβ結合ドメインは、米国特許第１０，９４７，３０３号、同第９，７１４，２８５号号、及び同第９，６７６，８６３号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２０２１／００６１８９７Ａ１号（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及び／またはＣＤＲ３配列を含む。ＴＧＦβ結合ドメインはまた、ＴＧＦβＲＩＩドメインを含む、ＴＧＦβＲドメインの結合または細胞外部分を含む。当該技術分野で知られている他の好適な抗ＴＧＦβ結合ドメインを使用してもよい。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメインを含み、細胞外ドメインは、ＦＡＳ（またはＦａｓ）結合ドメインを含む。ある実施形態では、抗ＦＡＳ結合ドメインは、米国特許第６，０８６，８７７号、同第６，７４６，６７３号、及び同第６，９７２，３２３号、ならびに米国特許出願公開第ＵＳ２００６／００８３７３８Ａ１号及び同第ＵＳ２０１０／０２３３１５７Ａ１号（それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているｓｃＦｖ、Ｖ_Ｈ及び／またはＶ_Ｌ配列、あるいは重鎖及び／または軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及び／またはＣＤＲ３配列を含む。当該技術分野で知られている他の好適な抗ＦＡＳ結合ドメインを使用してもよい。

ある実施形態では、本明細書に開示される細胞外ドメインのうちのいずれかを使用して、本明細書の他の箇所に記載されるように、ビエピトープ結合ＣＣＲ構築物を作製してもよい。

Ｂ．膜貫通ドメイン及びヒンジドメイン
ある実施形態では、ＣＣＲは、膜貫通ドメインを含む。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、一方の端部でＣＣＲの細胞外ドメインに連結され、他方の端部では、ＣＣＲの少なくとも１つの細胞内ドメインに連結される。ある実施形態では、膜貫通ドメインは、一方の端部でＣＣＲの細胞外ドメインに連結され、他方の端部では、ＣＣＲの少なくとも１つの細胞内ドメインに連結される。別の実施形態では、ＣＣＲは、ＣＣＲのスペーサーまたはヒンジドメインと融合され、それ自体がＣＣＲの細胞外ドメインと融合される膜貫通ドメインを含むように設計される。ある実施形態では、ＣＣＲ内のドメインのうちの１つと自然に会合する膜貫通ドメインが使用される。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、例えば、いかなる理論にも拘束されることなく、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小限に抑えるために、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへの、かかるドメインの結合を回避するようにアミノ酸置換によって選択または修飾され得る。

本発明のＣＣＲとともに使用する膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体（ＣＤ３ζを含む）のアルファ（α）、ベータ（β）、またはゼータ（ζ）鎖、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（ＣＤ８αを含む）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、及びＩＬ－２Ｒγの少なくとも膜貫通領域（複数可）に由来し得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、合成的であってもよく、ロイシン及びバリンなどの主に疎水性の残基を含んでもよい。いくつかの実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン、及びバリンの三重項は、合成膜貫通ドメインの各末端に位置決めされる。任意選択で、いくつかの実施形態では、２～１０アミノ酸長の短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、膜貫通ドメインとＣＣＲの細胞内ドメインとの間の連結を形成してもよく、いくつかの実施形態では、このリンカーは、本明細書の他の箇所に記載されるように、グリシン－セリン二重項を含んでもよい。本発明のＣＣＲ構築物に有用な好適な非限定的膜貫通ドメインを表５６に示す。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、膜貫通ドメイン及び任意選択でヒンジドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、図３４に示されるように、膜貫通ドメイン及び任意選択でヒンジドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、Ｔ細胞受容体（ＣＤ３ζを含む）のアルファ（α）、ベータ（β）、またはゼータ（ζ）鎖、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（ＣＤ８αを含む）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ならびにそれらのバリアント、断片、及び誘導体からなる群の膜貫通領域から選択される膜貫通ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲの膜貫通ドメインは組換えであってもよく、その場合、ロイシン及びバリンなどの主に疎水性の残基を含み、いくつかの実施形態では、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンの三重項は、組換え膜貫通ドメインの各末端に位置してもよい。ある実施形態では、ＣＣＲは、ヒンジドメインを含む。ある実施形態では、ヒンジドメインは、スペーサードメインである。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、ヒトタンパク質に由来するヒンジドメインまたはスペーサードメインを含む。ある実施形態では、ヒンジドメインまたはスペーサードメインは、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置し、細胞外ドメインと膜貫通ドメインとに連結される。いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、ヒンジドメインなしで、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、ヒンジドメインの有無にかかわらず、膜貫通ドメインを含む細胞外ドメイン及び細胞内ドメインを含む。

場合によっては、膜貫通ドメインは、ヒトタンパク質からのヒンジ領域などのヒンジドメインを介してＣＣＲの細胞外領域に結合することができる。例えば、いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＩｇＧ４ヒンジまたはＣＤ８αヒンジなどのヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、Ｔ細胞受容体のアルファ（α）、ベータ（β）、またはゼータ（ζ）鎖、ＣＤ３イプシロン（ＣＤ３ε）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ならびにそれらのバリアント、断片、及び誘導体からなる群のヒンジ領域から選択されるヒンジドメインドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５２のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５２で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５２で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５２で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５２で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５２で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５２で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５２で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５２で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＰＤ－１膜貫通ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５３で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５３で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５３で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５３で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５３で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５３で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５３で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５３で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ２８膜貫通ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５４のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５４で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５４で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５４で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５４で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５４で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５４で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５４で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５４で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ２７膜貫通ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５５のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５５で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５５で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５５で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５５で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５５で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５５で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５５で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５５で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ８α膜貫通ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５６のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５６で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５６で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５６で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５６で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５６で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５６で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５６で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５６で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ８αヒンジドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５７のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５７で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５７で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５７で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５７で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５７で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５７で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５７で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５７で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβ膜貫通ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５８のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５８で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５８で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５８で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５８で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５８で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５８で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５８で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５８で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１膜貫通ドメイン及びヒンジドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５５９のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５５９で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５５９で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５５９で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５５９で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５５９で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５５９で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５５９で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５５９で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ１ヒンジドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５６０のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５６０で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５６０で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５６０で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５６０で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５６０で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５６０で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５６０で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５６０で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＧ４ヒンジドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５６１のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５６１で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５６１で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５６１で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５６１で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５６１で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５６１で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５６１で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５６１で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩｇＤヒンジドメインを含む。

本発明のＣＣＲとの使用のための例示的な膜貫通ドメイン及びヒンジドメインをコードするヌクレオチド配列を表５７に提供する。ある実施形態では、表５７のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、ヌクレオチド配列によってコードされるドメインを含み、かかるドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ（α）、ベータ（β）、またはゼータ（ζ）鎖、ＣＤ３イプシロン（ε）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ならびにそれらのバリアント、断片、及び誘導体からなる群から選択される。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２に示される配列によってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチドによってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチドによってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチドによってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチドによってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチドによってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチドによってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチドによってコードされる。ある実施形態では、膜貫通ドメイン及び／またはヒンジドメインは、配列番号５６２、配列番号５６３、配列番号５６４、配列番号５６５、配列番号５６６、配列番号５６７、配列番号５６８、配列番号５６９、配列番号５７０、及び配列番号５７１からなる群から選択される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチドによってコードされる。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、ヒンジドメインは、２～４０個のアミノ酸を含むリンカーによって膜貫通ドメインに連結される。いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、ヒンジドメインは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号５８７、ならびにそれらの断片、バリアント、及び誘導体からなる群から選択されるリンカーによって膜貫通ドメインに連結される。米国特許第９，３９４，３６８号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているリンカーなどの代替のリンカーもまた、本明細書に開示されるか、または当該技術分野で知られているように使用することができる。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、ｓｃＦｖドメインを含み、ヒンジドメインは、２～４０個のアミノ酸を含むリンカーによってｓｃＦｖドメインに連結される。いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、ｓｃＦｖドメインを含み、ヒンジドメインは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号５８７、ならびにそれらの断片、バリアント、及び誘導体からなる群から選択されるリンカーによってｓｃＦｖドメインに連結される。米国特許第９，３９４，３６８号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているリンカーなどの代替のリンカーもまた、本明細書に開示されるか、または当該技術分野で知られているように使用することができる。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、ｓｃＦｖドメインを含み、膜貫通ドメインは、２～４０個のアミノ酸を含むリンカーによってｓｃＦｖドメインに連結される。いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインを含み、細胞外ドメインは、ｓｃＦｖドメインを含み、膜貫通ドメインは、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号５８７、ならびにそれらの断片、バリアント、及び誘導体からなる群から選択されるリンカーによってｓｃＦｖドメインに連結される。米国特許第９，３９４，３６８号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているリンカーなどの代替のリンカーもまた、本明細書に開示されるか、または当該技術分野で知られているように使用することができる。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４）膜貫通ドメインを含む膜貫通ドメインを含む。好適なＣＤ４０Ｌ膜貫通ドメインは、Ａｌｏｕｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１４，１５（１２），２２３４２－２２３６４及び米国特許第１０，２８７，３５４号に記載されており、それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

Ｃ．細胞内ドメイン
ある実施形態では、ＣＣＲは、本明細書ではシグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン、またはエンドドメインとも称される細胞内ドメインを含む。かかる細胞内ドメインは、Ｔ細胞に共刺激活性化シグナルを提供し得るか、または本発明において有用なＴ細胞における代替シグナル伝達経路を活性化し得る。ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞質である細胞内ドメインを含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、細胞質及び膜貫通である細胞内ドメインを含む。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ（α）、ベータ（β）、またはゼータ（ζ）鎖（ＣＤ３ζを含む）、ＣＤ３イプシロン（ε）、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８（ＣＤ８αを含む）、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５，ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（ＴＮＦＲＳＦ９、４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭ）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ３５７（ＧＩＴＲ）、ＥｐｈＢ６、ＳＴＡＴ３、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ１８－Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－２１Ｒ、及びＬＴＢＲ（リンホトキシンβ受容体、ＴＮＦＲＳＦ３）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、（シグナルペプチドを除く）前述のタンパク質配列のうちの１つの全長は、細胞内ドメインで用いられる。いくつかの実施形態では、前述のタンパク質配列のうちの１つの切断部分または複数の部分は、細胞内ドメインに用いられる。ある実施形態では、細胞内ドメインは、完全長ＣＤ２８配列である。本発明のＣＣＲ構築物に有用な好適な非限定的細胞内ドメインを表５８に示す。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７２のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７２で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７２で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７２で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７２で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７２で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７２で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７２で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７２で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７３で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７３で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７３で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７３で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７３で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７３で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７３で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７３で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７４のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７４で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７４で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７４で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７４で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７４で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７４で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７４で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７４で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７５のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７５で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７５で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７５で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７５で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７５で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７５で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７５で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７５で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７６のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７６で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７６で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７６で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７６で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７６で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７６で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７６で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７６で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ２７細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７７のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７７で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７７で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７７で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７７で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７７で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７７で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７７で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７７で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ３ζ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７８のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７８で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７８で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７８で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７８で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７８で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７８で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７８で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７８で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５７９のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５７９で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５７９で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５７９で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５７９で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５７９で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５７９で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５７９で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５７９で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２Ｒγ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８０のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５８０で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８０で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８０で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８０で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８０で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８０で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８０で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８０で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８１のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５８１で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８１で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８１で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８１で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８１で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８１で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８１で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８１で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－７Ｒα細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８２のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５８２で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８２で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８２で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８２で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８２で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８２で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８２で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８２で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－１２Ｒ１細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５８３で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８３で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８３で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８３で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８３で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８３で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８３で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８３で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－１２Ｒ２細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８４のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５８４で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８４で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８４で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８４で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８４で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８４で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８４で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８４で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－１５Ｒα細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８５のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５８５で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８５で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８５で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８５で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８５で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８５で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８５で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８５で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ－２１Ｒ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８６のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号５８６で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８６で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８６で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８６で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８６で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８６で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８６で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８６で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＬＴＢＲ細胞内ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、膜貫通ドメインに直接連結されてもよい。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、リンカーを介して膜貫通ドメインに連結されてもよい。任意選択で、いくつかの実施形態では、２～１０アミノ酸長の短いオリゴまたはポリペプチドリンカーは、膜貫通ドメインとＣＣＲの細胞内ドメインとの間の連結を形成してもよく、いくつかの実施形態では、このリンカーは、本明細書の他の箇所に記載されるように、グリシン－セリン二重項、または他の代替リンカーを含んでもよい。いくつかの実施形態では、リンカーは、配列番号５８７、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７４、配列番号７５、及び配列番号７６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

本発明のＣＣＲとの使用のための例示的な細胞内ドメインをコードするヌクレオチド配列を表５９に提供する。ある実施形態では、表５９のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８８のアミノ酸配列、または配列番号５８８で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８８で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８８で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８８で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８８で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８８で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８８で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８８で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むＣＤ２８細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５８９のアミノ酸配列、または配列番号５８９で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５８９で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５８９で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５８９で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５８９で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５８９で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５８９で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５８９で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＯＸ４０細胞内ドメインとも称されるＣＤ１３４細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９０のアミノ酸配列、または配列番号５９０で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９０で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９０で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９０で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９０で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９０で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９０で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９０で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＣＯＳ細胞内ドメインとも称されるＣＤ２７８細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９１のアミノ酸配列、または配列番号５９１で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９１で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９１で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９１で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９１で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９１で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９１で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９１で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、４－１ＢＢ細胞内ドメインとも称されるＣＤ１３７細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９２のアミノ酸配列、または配列番号５９２で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９２で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９２で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９２で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９２で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９２で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９２で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９２で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＣＤ２７細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９３のアミノ酸配列、または配列番号５９３で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９３で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９３で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９３で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９３で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９３で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９３で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９３で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＣＤ３ζ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９４のアミノ酸配列、または配列番号５９４で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９４で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９４で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９４で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９４で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９４で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９４で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９４で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９５のアミノ酸配列、または配列番号５９５で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９５で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９５で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９５で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９５で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９５で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９５で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９５で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－２Ｒγ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９６のアミノ酸配列、または配列番号５９６で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９６で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９６で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９６で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９６で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９６で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９６で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９６で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９７のアミノ酸配列、または配列番号５９７で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９７で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９７で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９７で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９７で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９７で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９７で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９７で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－７Ｒα細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９８のアミノ酸配列、または配列番号５９８で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９８で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９８で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９８で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９８で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９８で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９８で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９８で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－１２Ｒ１細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号５９９のアミノ酸配列、または配列番号５９９で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号５９９で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５９９で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号５９９で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号５９９で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５９９で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号５９９で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号５９９で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－１２Ｒ２細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号６００のアミノ酸配列、または配列番号６００で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６００で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６００で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６００で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６００で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６００で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６００で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６００で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－１５Ｒα細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号６０１のアミノ酸配列、または配列番号６０１で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６０１で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６０１で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６０１で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６０１で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６０１で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６０１で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６０１で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－２１Ｒ細胞内ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号６０２のアミノ酸配列、または配列番号６０２で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６０２で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６０２で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６０２で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６０２で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６０２で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６０２で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６０２で示される配列と少なくとも８０％同一である配列を含むヌクレオチドによってコードされる、ＩＬ－２１Ｒ細胞内ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＩＬ－２１ＲＡＰ（インターロイキン１８受容体アクセサリータンパク質）細胞内ドメインを含む。ＩＬ－１８ＲＡＰドメインは、以下の実施例に記載されており、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３５０９７４Ａ１号（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）にも開示されている。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０３５０９７４Ａ１号における配列番号１０の配列を含むヌクレオチドによってコードされるＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内ドメイン、またはその配列と少なくとも９９％同一、その配列と少なくとも９８％同一、その配列と少なくとも９７％同一、その配列と少なくとも９６％同一、その配列と少なくとも９５％同一、その配列と少なくとも９０％同一、その配列と少なくとも８５％同一、またはその配列と少なくとも８０％同一の配列を含む。

いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、配列番号６０３の配列を含むヌクレオチドによってコードされるリンカーを介して膜貫通ドメインに連結されてもよい。いくつかの実施形態では、細胞内ドメインは、膜貫通ドメイン及び細胞外ドメインの短い部分（例えば、１～１５アミノ酸長）を含むように拡張されてもよく、次いで細胞外結合ドメインの残りの部分に作動可能に連結されてもよい。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＳＴＡＴ３シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインまたは共刺激ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ経路シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインを含む。好適なＳＴＡＴ３及びＪＡＫ－ＳＴＡＴドメインは、Ｋａｇｏｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２０１８，２４，３５２－３５９及び米国特許第１０，８２２，３９２号に記載されており、それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０ＬまたはＣＤ１５４）シグナル伝達ドメインを含む細胞内ドメインまたは共刺激ドメインを含む。好適なＣＤ４０Ｌシグナル伝達ドメインは、Ａｌｏｕｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｓｃｉ．２０１４，１５（１２），２２３４２－２２３６４及び米国特許第１０，２８７，３５４号に記載されており、それらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

Ｄ．遺伝子発現方法
いくつかの実施形態では、ＣＣＲまたはケモカイン受容体を発現するようにＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、１つ以上のタンパク質の産生のために遺伝子の安定した組込みステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、ウイルス形質導入ステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、レトロウイルス形質導入ステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、ガンマレトロウイルス形質導入ステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、アデノウイルス形質導入ステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、アデノ関連ウイルス形質導入ステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、単純ヘルペスウイルス形質導入ステップを含む。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、ポックスウイルス形質導入ステップを含む。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、ＨＩＶ－１を含むヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）を使用したレンチウイルス形質導入を含む、レンチウイルス形質導入ステップを含む。レンチウイルス形質導入系及び他の好適なウイルス形質導入系は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｌｅｖｉｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２００６，１０３，１７３７２－７７、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７，１５，８７１－７５、Ｄｕｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９９８，７２，８４６３－７１、及び米国特許第５，３５０，６７４号、同第５，５８５，３６２号、及び同第６，６２７，４４２号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、ガンマレトロウイルス形質導入ステップを含む。ガンマレトロウイルス形質導入系は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｃｅｐｋｏ ａｎｄ Ｐｅａｒ，Ｃｕｒ．Ｐｒｏｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９６，９．９．１－９．９．１６、Ｈａｗｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１９９４，１，１３６－３８に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ｐＱＣＸＩＸレトロウイルスベクターを使用してＴＩＬ集団を遺伝子修飾し、本発明のＣＣＲまたはケモカイン受容体を発現させる。当該技術分野で知られている他のウイルス系は、ＴＩＬ集団を修飾してＣＣＲを安定的または一過的に発現させるために同様に用いられ得る。

いくつかの実施形態では、ＣＣＲを発現するようにＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、特に、Ｍｉｌｏｎｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００９，１７，１４５３－１４６４に提供される自己不活性化レンチウイルスをベクター含む、レンチウイルスの少なくとも一部に由来するレンチウイルスベクターを調製するステップを含む。臨床で使用され得るレンチウイルスベクターの他の例としては、例えば、Ｏｘｆｏｒｄ ＢｉｏＭｅｄｉｃａのＬＥＮＴｒＶＥＣＴＯＲ（商標）遺伝子送達技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステム、及び類似のシステムが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、導入遺伝子を運ぶレンチウイルスベクターは、水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）プラスミドと組み合わされ、これは、特定の細胞表面受容体及びプラスミドではなく、形質膜の遍在するリン脂質成分に結合するラブドウイルスエンベロープタンパク質の発現を引き起こす。いくつかの実施形態では、導入遺伝子を運ぶレンチウイルスベクターは、Ｇａｇ／Ｐｏｌ及びＲｅｖパッケージングプラスミドと組み合わされる。いくつかの実施形態では、レンチウイルスパッケージングは、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株などの２９３Ｔ細胞株、またはそのバリアント、誘導体、もしくは子孫を使用して行われる。

ある実施形態では、ウイルスまたはレンチウイルスベクター骨格は、Ｚｈａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．２００６，１３，１５１－９（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ＰＧＥＭ．６４Ａである。ある実施形態では、レンチウイルスベクター骨格は、Ｌｏｉｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２，２９５，８６８－７２（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているように、ｐＦＵＧＷである。ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、トランス遺伝子の発現を駆動するウシ成長ホルモンポリＡ配列を含む。ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、Ｋｏｚａｋリボソーム開始配列を含む。ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節要素（ＷＰＲＥ）を含む。ある実施形態では、レンチウイルスベクターは、ｐＦＵＧＷプラスミドに由来する長い末端反復（ＬＴＲ）配列を含む。ある実施形態では、ウイルスまたはレンチウイルスベクター骨格は、ｐＲＲＬＳＩＮである。ある実施形態では、ウイルスまたはレンチウイルスベクター骨格は、ｐＬｅｎｔｉである。ある実施形態では、ウイルスまたはレトロウイルスベクター骨格は、ｐＱＣＸＩＸである。

ある実施形態では、ウイルスまたはレンチウイルスベクター骨格は、プロモーターをさらに含む。ある実施形態では、プロモーターは、ヒト伸長成長因子－１、またはＥＦ－１プロモーターである。ある実施形態では、プロモーターは、ＥＦ－１α（ＥＦ－１ａまたはＥＦ－１アルファとしても知られる）プロモーターである。ある実施形態では、プロモーターは、配列番号６０４のＥＦ－１プロモーター、またはその機能的部分もしくは機能的バリアントである。ある実施形態では、プロモーターは、即時初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター配列であり、これは、それに作用可能に連結された任意のポリヌクレオチド配列の高レベルの発現を駆動することができる強力な構成的プロモーター配列である。ある実施形態では、プロモーターは、配列番号６０５のＣＭＶプロモーター、またはその機能的部分もしくは機能的バリアントである。ある実施形態では、ウイルスベクター骨格は、プロモーターをさらに含み、プロモーターは、マウス胚性幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）プロモーターである。ある実施形態では、プロモーターは、配列番号６０６のＭＳＣＶプロモーター、またはその機能的部分もしくは機能的バリアントである。ある実施形態では、ウイルスまたはレンチウイルスベクター骨格は、プロモーターをさらに含み、プロモーターは、活性化Ｔ細胞（ＮＦＡＴ）プロモーターの核因子である。好適なＮＦＡＴプロモーターは、米国特許第８，５５６，８８２号及びＭｅｒｌｅｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１３，２０，２４８－２５４（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、ＮＦＡＴ１、ＮＦＡＴ２、ＮＦＡＴ３、及びＮＦＡＴ４応答性要素を含む１つ以上のＮＦＡＴ結合モチーフを含み得る。ある実施形態では、ＮＦＡＴプロモーターは、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、または最大１２個の結合モチーフを含む。ある実施形態では、ＮＦＡＴプロモーターは、最大１２個の結合モチーフを含む。ある実施形態では、ＮＦＡＴプロモーターは、４、５、６、または７個の結合モチーフを含む。ある実施形態では、ＮＦＡＴプロモーターは、６つの結合モチーフを含む。ある実施形態では、プロモーターは、配列番号６０７のＮＦＡＴプロモーター、またはその機能的部分もしくは機能的バリアントである。

ある実施形態では、プロモーターは、ＥＦ－１プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ＬＴＲプロモーター、ＭＳＣＶプロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）プロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス即時初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、及びクレアチンキナーゼプロモーターからなる群から選択される。ある実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターである。ある実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターであり、いくつかの実施形態では、かかる発現が所望されるときにそれが作動可能に連結されるポリヌクレオチド配列の発現をオンにするか、または発現が所望されないときに発現をオフにすることができる。ある実施形態では、誘導性プロモーターは、メタロチオニンプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、及びテトラサイクリンプロモーターからなる群から選択される。好適なプロモーターの例示的な非限定的配列を表６０に提供する。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０４のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６０４は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０５のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６０５は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０６のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６０６は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用されるプロモータードメインは、配列番号６０７のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６０７は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

一実施形態では、ベクターは、本明細書に記載の核酸分子のＲＮＡを転写するベクターを含む、インビトロ転写ベクターである。一実施形態では、ベクターの核酸配列は、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１１０、約１２０、約１３０、約１４０、約１５０、約１６０、約１７０、約１８０、約１９０、または約２００のアデノシン塩基を含むポリアデニル化またはポリ（Ａ）尾部をさらに含む。一実施形態では、ベクター内の核酸配列は、ヒトベータ－グロブリンに由来する３’ＵＴＲの少なくとも１つの反復を含む３’非翻訳領域（ＵＴＲ）をさらに含む。

本発明はまた、細胞に直接トランスフェクトすることができるＲＮＡ構築物も含む。トランスフェクションで使用するためのｍＲＮＡを生成するための方法は、特別に設計されたプライマーを用いたテンプレートのインビトロ転写（ＩＶＴ）、続いてポリ（Ａ）を添加して、３’及び５’ＵＴＲ、５’キャップ、及び／または内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、発現される核酸、ならびに典型的には５０～２０００塩基長のポリＡ尾部を含有する構築物を産生することを伴う。そのように産生されたＲＮＡは、異なる種類の細胞を効率的にトランスフェクトすることができる。ある実施形態では、テンプレートは、本明細書に記載されるＣＣＲの配列を含む。ある実施形態では、ＲＮＡ ＣＣＲベクターは、エレクトロポレーションによってＴ細胞に形質導入される。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲをコードする適切な導入遺伝子で置換された米国特許出願公開第ＵＳ２０１９／０２９８７７０Ａ１号に開示されているベクター発現系を使用することができ、これらのベクター発現系の開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、トランスポゾン媒介遺伝子導入ステップを含む。トランスポゾン媒介遺伝子導入系は、当該技術分野で知られており、トランスポザーゼが、ＤＮＡ発現ベクターとしてまたは発現可能なＲＮＡもしくはタンパク質として提供される系を含み、これにより、トランスポザーゼ、例えば、ｍＲＮＡ（例えば、キャップ及びポリＡ尾部を含むｍＲＮＡ）として提供されるトランスポザーゼの長期発現がトランスジェニック細胞で起こらないようになる。ＳＢ１０、ＳＢ１１、及びＳＢ１００ｘなどのサケ科型Ｔｅｌ様トランスポザーゼ（ＳＢまたはＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポザーゼ）を含む好適なトランスポゾン媒介遺伝子導入系、ならびに増加した酵素活性を有する操作された酵素は、例えば、Ｈａｃｋｅｔｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒａｐｙ ２０１０，１８，６７４－８３及び米国特許第６，４８９，４５８号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ＣＣＲは、ＴＩＬ集団によって一過的に発現される。いくつかの実施形態では、ＣＣＲは、ＲＮＡのエレクトロポレーションを介してＴＩＬ集団によって一過的に発現される。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、エレクトロポレーションステップを含む。エレクトロポレーション法は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｔｓｏｎｇ，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．１９９１，６０，２９７－３０６及び米国特許出願公開第２０１４／０２２７２３７Ａ１号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第５，０１９，０３４号、同第５，１２８，２５７号、同第５，１３７，８１７号、同第５，１７３，１５８号、同第５，２３２，８５６号、同第５，２７３，５２５号、同第５，３０４，１２０号、同第５，３１８，５１４号、同第６，０１０，６１３号、及び同第６，０７８，４９０号（それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものなどの当該技術分野で知られている他のエレクトロポレーション法が使用され得る。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、滅菌エレクトロポレーション法である。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、パルスエレクトロポレーション法である。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのＤＣ電気パルス列は、以下の特徴のうちの１つ、２つ、または３つを有する：（１）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス振幅が互いに異なる、（２）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス幅が互いに異なる、及び（３）少なくとも３つのパルスのうちの２つの第１のセットの第１のパルス間隔が、少なくとも３つのパルスのうちの２つの第２のセットの第２のパルス間隔とは異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス振幅が互いに異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス幅が互いに異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬの定義及び制御された永続的または一時的変更を変える、操作する、または引き起こすステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つの単一オペレーターが制御する、独立してプログラムされたＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つの第１のセットの第１のパルス間隔が、少なくとも３つのパルスのうちの２つの第２のセットの第２のパルス間隔とは異なる。ある実施形態では、エレクトロポレーション法は、ＴＩＬをパルス電場で処理して、ＴＩＬにおける細孔形成を誘導するステップを含むパルスエレクトロポレーション法であり、１００Ｖ／ｃｍ以上の電界強度を有する、少なくとも３つのＤＣ電気パルス列をＴＩＬに適用するステップを含み、少なくとも３つのＤＣ電気パルス列は、以下の特徴のうちの１つ、２つ、または３つを有する：（１）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス振幅が互いに異なる、（２）少なくとも３つのパルスのうちの少なくとも２つのパルス幅が互いに異なる、及び（３）少なくとも３つのパルスのうちの２つの第１のセットの第１のパルス間隔が、少なくとも３つのパルスのうちの２つの第２のセットの第２のパルス間隔とは異なり、これにより、誘導された細孔が比較的長期間にわたって持続され、ＴＩＬの生存率が維持される。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、リン酸カルシウムトランスフェクションステップを含む。リン酸カルシウムトランスフェクション法（リン酸カルシウムＤＮＡ沈殿、細胞表面コーティング、及びエンドサイトーシス）は、当該技術分野で知られており、Ｇｒａｈａｍ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅｒ Ｅｂ，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １９７３，５２，４５６－４６７、Ｗｉｇｌｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９７９，７６，１３７３－１３７６、及びＣｈｅｎ ａｎｄ Ｏｋａｙａｒｅａ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１９８７，７，２７４５－２７５２、ならびに米国特許第５，５９３，８７５号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、リポソームトランスフェクションステップを含む。リポソームトランスフェクション法、例えば、カチオン性脂質Ｎ－［１－（２，３－ジオレイルオキシ）プロピル］－ｎ，ｎ，ｎ－トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）及びジオレオイルホスホチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）の１：１（ｗ／ｗ）リポソーム製剤を用いる方法は、当該技術分野において既知であり、Ｒｏｓｅ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９１，１０，５２０－５２５及びＦｅｌｇｎｅｒ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８７，８４，７４１３－７４１７、ならびに米国特許第５，２７９，８３３号、同第５，９０８，６３５号、同第６，０５６，９３８号、同第６，１１０，４９０号、同第６，５３４，４８４号、及び同第７，６８７，０７０号に記載されており、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。ある実施形態では、ＴＩＬ集団を遺伝子修飾する方法は、米国特許第５，７６６，９０２号、同第６，０２５，３３７号、同第６，４１０，５１７号、同第６，４７５，９９４号、及び同第７，１８９，７０５号に記載の方法を使用するトランスフェクションステップを含み、これらの各々の開示は参照により本明細書に組み込まれる。

一実施形態によると、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療的ＴＩＬ集団に拡張するための方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得することと、
（ｂ）腫瘍断片を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３（例えば、ＯＫＴ－３は拡張プロセスの開始日に開始して細胞培地中に存在し得る）を含む細胞培養培地中で第１のＴＩＬ集団を培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ－２培地、任意選択でＯＫＴ－３、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充または置換することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行が、系を開くことなく起こる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｅ）ステップ（ｄ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することであって、ステップ（ｄ）からステップ（ｅ）への移行が、系を開くことなく起こる、採取することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｇ）ステップ（ｅ）～（ｆ）の間の任意の時点で、１つ以上のキメラ共刺激受容体を安定的または一過的に発現させるように、ＴＩＬの少なくとも一部を遺伝的に修飾することと、を含む。

上記の実施形態のステップ（ｇ）に記載されるように、遺伝子修飾プロセスは、ＴＩＬ拡張方法中の任意の時点で実行されてもよく、これは、遺伝子修飾が、拡張方法のステップのうちのいずれかの前、最中、または後に、例えば、上記の方法で概説されたステップ（ａ）～（ｆ）のうちのいずれかの間、または上記の方法で概説されたステップ（ａ）～（ｆ）のうちのいずれかの前もしくは後に、ＴＩＬ上で実行されてもよいことを意味する。ある特定の実施形態によれば、ＴＩＬは、拡張方法中に収集され（例えば、拡張方法は、ＴＩＬの少なくとも一部について「一時停止」され）、収集されたＴＩＬは、遺伝子修飾プロセスに供され、場合によっては、その後、拡張プロセスを継続するために拡張方法に戻され（例えば、培地に戻され）、それにより最終的に注入バッグに移される治療的ＴＩＬ集団の少なくとも一部が永続的に遺伝子編集される。ある実施形態では、遺伝子修飾プロセスは、ＴＩＬを活性化し、活性化されたＴＩＬに対して遺伝子修飾ステップを行い、本明細書に記載のプロセスに従って遺伝子修飾ＴＩＬを拡張することによって、拡張の前に実行されてもよい。前述の実施形態のうちのいずれにおいても、遺伝子修飾プロセスは、本明細書に記載のＣＣＲの発現を引き起こし得る。拡張プロセスの代替実施形態は、上記に示される方法とは異なり得ることに留意すべきである。代替実施形態は、同じステップ（ａ）～（ｇ）を有し得ないか、または異なる数のステップを有し得る。特定の実施形態にかかわらず、遺伝子編集プロセスは、ＴＩＬ拡張方法中の任意の時点で実行されてもよい。例えば、代替実施形態は、２つを超える急速拡張を含み得、第３または第４の拡張中にＴＩＬに対して遺伝子編集が実施され得る。

いくつかの実施形態では、遺伝子編集プロセスは、本明細書に記載のＴＩＬ製造のためのプロセスの第１の集団、第２の集団、及び第３の集団のうちの１つ以上からのＴＩＬ上で実行される。例えば、遺伝子編集は、第１のＴＩＬ集団上で、または第１の集団から収集されたＴＩＬの一部上で実行されてもよく、遺伝子編集プロセスに続いて、それらのＴＩＬをその後、拡張プロセスに戻してもよい（例えば、培養培地に戻してもよい）。あるいは、遺伝子編集は、第２もしくは第３の集団からのＴＩＬ上で、または第２もしくは第３の集団から収集されたＴＩＬの一部上で実行されてもよく、遺伝子編集プロセスに続いて、それらのＴＩＬをその後、拡張プロセスに戻してもよい（例えば、培養培地に戻してもよい）。別の実施形態によれば、遺伝子編集は、ＴＩＬが培養培養培地中に残っている間、及び拡張が実行されている間に行われる。

いくつかの実施形態では、遺伝子編集プロセスは、第１の拡張からのＴＩＬ、または第２の拡張からのＴＩＬ、またはその両方で実行される。例えば、第１の拡張または第２の拡張中に、遺伝子編集は、培養培地から収集されたＴＩＬ上で実行され得、遺伝子編集プロセスの後、それらのＴＩＬは、その後、例えば、それらを培養培地に再導入することによって、拡張方法に戻され得る。

いくつかの実施形態では、遺伝子編集プロセスは、第１の拡張後及び第２の拡張前にＴＩＬの少なくとも一部上で実行される。例えば、第１の拡張後に、遺伝子編集は、培養培地から収集されたＴＩＬ上で実行され得、遺伝子編集プロセスの後、それらのＴＩＬは、その後、例えば、それらを第２の拡張のための培養培地に再導入することによって、拡張方法に戻され得る。

いくつかの実施形態では、遺伝子編集プロセスは、ステップ（ｃ）の前（例えば、ステップ（ａ）～（ｂ）のうちのいずれかの前、最中、もしくは後）、ステップ（ｄ）の前（例えば、ステップ（ａ）～（ｃ）のうちのいずれかの前、最中、もしくは後）、ステップ（ｅ）の前（例えば、ステップ（ａ）～（ｄ）のうちのいずれかの前、最中、もしくは後）、またはステップ（ｆ）の前（例えば、ステップ（ａ）～（ｅ）のうちのいずれかの前、最中、もしくは後）に実行される。

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、開始日（０日目）、または第１の拡張の１日目に開始するＯＫＴ－３を含んでもよく、その結果、遺伝子編集は、０日目及び／または１日目に細胞培養培地中でＯＫＴ－３に曝露した後にＴＩＬ上で実行される。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、第１の拡張中及び／または第２の拡張中にＯＫＴ－３を含み、ＯＫＴ－３が細胞培養培地に導入される前に、遺伝子編集が実行される。あるいは、細胞培養培地は、第１の拡張中及び／または第２の拡張中にＯＫＴ－３を含み、ＯＫＴ－３が細胞培養培地中に導入された後に、遺伝子編集が実行される。

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、開始日（０日目）、または第１の拡張の１日目に開始する４－１ＢＢアゴニストまたはＯＸ４０アゴニストを含んでもよく、その結果、遺伝子編集は、０日目及び／または１日目に細胞培養培地中で４－１ＢＢアゴニストまたはＯＸ４０アゴニストに曝露した後にＴＩＬ上で実行される。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、第１の拡張中及び／または第２の拡張中に４－１ＢＢアゴニストまたはＯＸ４０アゴニストを含み、４－１ＢＢアゴニストまたはＯＸ４０アゴニストが細胞培養培地に導入される前に、遺伝子編集が実行される。いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、第１の拡張中及び／または第２の拡張中に４－１ＢＢアゴニストまたはＯＸ４０アゴニストを含み、４－１ＢＢアゴニストまたはＯＸ４０アゴニストが細胞培養培地中に導入された後に、遺伝子編集が実行される。

いくつかの実施形態では、細胞培養培地は、開始日（０日目）、または第１の拡張の１日目に開始するＩＬ－２を含んでもよく、その結果、遺伝子編集は、０日目及び／または１日目に細胞培養培地中でＩＬ－２に曝露した後にＴＩＬ上で実行される。別の実施形態によれば、細胞培養培地は、第１の拡張中及び／または第２の拡張中にＩＬ－２を含み、ＩＬ－２が細胞培養培地に導入される前に、遺伝子編集が実行される。あるいは、細胞培養培地は、第１の拡張中及び／または第２の拡張中にＩＬ－２を含み、ＩＬ－２が細胞培養培地中に導入された後に、遺伝子編集が実行される。

上述のように、ＯＫＴ－３、４－１ＢＢアゴニスト及びＩＬ－２のうちの１つ以上は、第１の拡張の０日目または１日目に開始する細胞培地中に含まれてもよい。一実施形態によれば、ＯＫＴ－３は、第１の拡張の０日目または１日目に開始する細胞培地中に含まれ、及び／または４－１ＢＢアゴニストは、第１の拡張の０日目または１日目に開始する細胞培地中に含まれ、及び／またはＩＬ－２は、第１の拡張の０日目または１日目に開始する細胞培地中に含まれる。ある実施例によれば、細胞培養培地は、第１の拡張の０日目または１日目に開始するＯＫＴ－３及び４－１ＢＢアゴニストを含む。別の実施例によれば、細胞培養培地は、第１の拡張の０日目または１日目に開始するＯＫＴ－３、４－１ＢＢアゴニスト、及びＩＬ－２を含む。当然のことながら、本明細書に記載の様々な実施形態に記載されるように、ＯＫＴ－３、４－１ＢＢアゴニスト及びＩＬ－２のうちの１つ以上を、拡張プロセス中の１つ以上の追加の時点で細胞培地に添加してもよい。

一実施形態によると、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を治療的ＴＩＬ集団に拡張するための方法は、
（ａ）任意選択で、凍結保存された複数の腫瘍断片または凍結保存された腫瘍消化物を解凍した後、患者から取得された腫瘍試料を、複数の腫瘍断片または腫瘍消化物へと処理することによって、患者から切除された腫瘍からの第１のＴＩＬ集団を取得することと、
（ｂ）腫瘍断片または腫瘍消化物を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２を含み、任意選択で４－１ＢＢアゴニスト抗体を含む細胞培養培地中で約２～５日間培養することによって第１の拡張を行うことと、
（ｄ）ＯＫＴ－３を添加して、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約１～３日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、第２のＴＩＬ集団が、第１のＴＩＬ集団よりも数が少なくとも５０倍多く、ステップ（ｃ）からステップ（ｄ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｅ）任意選択で、ＴＩＬのかかる部分を一時的な容器に移すことによって、ＴＩＬの少なくとも一部を遺伝子修飾して、１つ以上のキメラ共刺激受容体を安定的または一過的に発現させることと、
（ｆ）任意選択で、第２のＴＩＬ集団を約１日～約５日間静置することと、
（ｇ）第２のＴＩＬ集団の細胞培養培地を追加のＩＬ－２、任意選択でＯＫＴ－３抗体、任意選択でＯＸ４０抗体、及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）で補充することによって第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約７～１１日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、ステップ（ｆ）からステップ（ｇ）への移行が、系を開くことなく起こる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｈ）ステップ（ｇ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取して、採取されたＴＩＬ集団を提供することであって、ステップ（ｇ）からステップ（ｈ）への移行が、系を開くことなく起こり、採取されたＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団である、採取することと、
（ｉ）採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｈ）から（ｉ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｊ）ジメチルスルホキシドベースの凍結保存培地を使用して、採取されたＴＩＬ集団を凍結保存することと、を含む。

一実施形態によれば、前述の方法を使用して、がんを有するヒト対象の治療のために自己採取されたＴＩＬ集団を提供することができる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためのＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、２Ａ自己切断ペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。２Ａ自己切断ペプチドをコードするベクターを、本発明のＣＣＲ及びケモカインとともに用いて、翻訳中にリボソームスキッピングを誘導し、ポリタンパク質を生成してもよい。理論に拘束されることなく、２Ａ自己切断ペプチドを含むＣＣＲまたはケモカイン受容体をコードするベクターは、細胞内で発現すると、２つのＣＣＲまたはＣＣＲ及び別のタンパク質などの２つのタンパク質に切断され得る。例示的及び非限定的な２Ａ自己切断ペプチドドメインのアミノ酸配列を表６１に提供する。配列番号６０８は、Ｔ２Ａ自己切断ペプチド（ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ由来）のアミノ酸配列であり、配列番号６０９は、Ｐ２Ａ自己切断ペプチド（ブタテスコウイルス１ ２Ａ由来）のアミノ酸配列であり、配列番号６１０は、Ｅ２Ａ自己切断ペプチド（ウマ鼻炎Ａウイルス由来）のアミノ酸配列であり、配列番号６１１は、Ｆ２Ａ自己切断ペプチド（口蹄疫ウイルス由来）のアミノ酸配列である。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０８のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６０９のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１０のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも９７％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも９６％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１１のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

前述の２Ａ自己切断ペプチドドメインはまた、Ｎ末端で、ＧＳＧリンカー（配列番号６１２）などのリンカーと組み合わせてもよい。代替リンカーとしては、配列番号２３８、配列番号２３９、配列番号２４０、配列番号２４１、配列番号２４２、配列番号２４３、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７４、それらの保存的アミノ酸置換、それらのバリアント、または当該技術分野で知られている他のリンカー（Ｂｉｒｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，２４２，４２３－４２６（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるものを含む）が挙げられる。

好適な２Ａ自己切断ペプチドドメインの例示的な非限定的ヌクレオチド配列を表６２に提供する。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１３のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６１３は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１４のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６１４は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１５のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６１５は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターとともに使用される２Ａ自己切断ペプチドドメインは、配列番号６１６のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６１６は、タンパク質発現を改善するために最適化される。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、ＩＲＥＳドメインを含む。好適なＩＲＥＳドメインは、当該技術分野で知られている。ある実施形態では、本発明のＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも９８％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも９６％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも９０％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一であるヌクレオチド配列を含む。ある実施形態では、本明細書に記載のＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの修飾のためにＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体をコードするベクターは、配列番号６１７のヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６１７は、タンパク質発現を改善するために最適化される。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６１７は、タンパク質発現を改善するために最適化される。他の好適なＩＲＥＳドメインは、Ｂｏｃｈｋｏｖ ａｎｄ Ｐａｌｍｅｎｂｅｒｇ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２００６，４１（３），２８３に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

Ｅ．ＣＣＲ構築物
前述の細胞外ドメイン及び細胞内ドメインは、本発明のＴＩＬとの使用に好適なＣＣＲを提供するために組み合わされてもよく、任意選択で、膜貫通ドメインによって組み合わされてもよい。本発明のいくつかの例示的なＣＣＲ構築物は、以前に論じられており、他の例示的なＣＣＲ構築物は、図３７に示されるか、または本明細書に記載されており、それらの各々が本発明の実施形態である。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＰＤ－１ドメイン、ＦＡＳ結合ドメイン、ＴＧＦβ結合ドメイン、ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、及びＬＬＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメインからなる群から選択される細胞外ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＦＡＳ、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、及びＭＵＣ１６からなる群から選択される分子に結合する細胞外ドメインを含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、（ｉ）ＰＤ－１ドメイン、ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、及びＬＬＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメインからなる群から選択される細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、及びＩＬ－２１Ｒからなる群から選択される細胞内ドメインと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、（ｉ）ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、及びＭＵＣ１６からなる群から選択される分子に結合する細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、及びＩＬ－２１Ｒからなる群から選択される細胞内ドメインと、を含む。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、（ｉ）ＰＤ－１ドメイン、ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、及びＬＬＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメインからなる群から選択される細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される細胞内ドメインと、を含むタンパク質であるいくつかの実施形態では、細胞外ドメイン及び細胞内ドメインは、作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン及び細胞内ドメインは、リンカードメインによって連結されている。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、（ｉ）ＰＤ－１ドメイン、ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、及びＬＬＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメインからなる群から選択される細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－１８ドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１８ＲＡＰドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される細胞内ドメインと、を含むタンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン及び膜貫通ドメインは、作動可能に連結され、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインは、リンカードメインによって互いに連結されている。

いくつかの実施形態では、本発明のＣＣＲは、（ｉ）ＰＤ－１ドメイン、ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、及びＬＬＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメインからなる群から選択される細胞外ドメインと、（ｉｉ）ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される膜貫通ドメインと、（ｉｉｉ）ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択されるヒンジタンパク質ドメインと、（ｉｖ）ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１８ＲＡＰドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される細胞内ドメインと、を含むタンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン及びヒンジドメインは、作動可能に連結され、ヒンジドメイン及び膜貫通ドメインは、作動可能に連結され、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは、作動可能に連結される。いくつかの実施形態では、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメインは、リンカードメインによって互いに連結されている。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－１ドメイン及びＰＤ－１膜貫通ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。ある実施形態では、本発明は、配列番号２４５に作動可能に連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含む。ある実施形態では、本発明は、配列番号２４５にリンカードメインを介して連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含む。ある実施形態では、本発明は、配列番号２４５に作動可能に連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含み、これはさらに細胞内ドメインに作動可能に連結される。ある実施形態では、本発明は、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される細胞内ドメインにさらに作動可能に連結される、配列番号２４５に作動可能に連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－１ドメイン及びＣＤ２８膜貫通ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。ある実施形態では、本発明は、配列番号２４６に作動可能に連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含む。ある実施形態では、本発明は、配列番号２４６にリンカードメインを介して連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含む。ある実施形態では、本発明は、配列番号２４６に作動可能に連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含み、これはさらに細胞内ドメインに作動可能に連結される。ある実施形態では、本発明は、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される細胞内ドメインにさらに作動可能に連結される、配列番号２４６に作動可能に連結された配列番号２４４を含むタンパク質配列を発現するＴＩＬ、ＭＩＬまたはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＰＤ－Ｌ１結合（抗ＰＤ－Ｌ１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＥＡ結合（抗ＣＥＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＣＤ７３結合（抗ＣＤ７３）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＴＲＯＰ－２結合（抗ＴＲＯＰ－２）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥＰＣＡＭ結合（抗ＥＰＣＡＭ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

びくつかの実施形態では、本発明は、組織因子結合（抗ＴＦ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＦＡ－１結合（抗ＬＦＡ－１）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＦＡＰ結合（抗ＦＡＰ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＶＩＳＴＡ結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７２のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＯＸ４０）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７３のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３４（ＩＣＯＳ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７４のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＶＩＳＴＡ）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７５のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７６のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメイン（例えば、配列番号５７８のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＬＲＲＣ１５結合（抗ＬＲＲＣ１５）ドメイン、ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメイン（例えば、配列番号５８０のドメイン）を含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ２８細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、任意選択のＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８細胞内ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＳ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＧＦβＲＩＩ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ１結合ドメイン、ＩｇＧ４ヒンジドメイン、ＩｇＧ４膜貫通ドメイン、及びＩＬ－２Ｒβ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＳ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＧＦβＲＩＩ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ１結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＩＬ－１８Ｒ１細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＳ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＧＦβＲＩＩ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－１結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及びＣＤ２７細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＥＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＣＤ７３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＥＰＣＡＭ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗組織因子ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＦＡ－１ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＰ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＶＩＳＴＡ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＬＲＲＣ１５ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗Ｂ７－Ｈ３ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＦＡＳ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＴＧＦβＲＩＩ ｓｃＦｖ結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、抗ＰＤ－１結合ドメイン、ＣＤ８αヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、及び４－１ＢＢ細胞内ドメインを含むタンパク質配列を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３４）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３４）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３４）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３４）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３４）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ１３４）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＩｇＧ４ヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７８）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の３８Ａ１抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８αヒンジ及び膜貫通）－（ＣＤ２７）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ヒンジ及び膜貫通）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（ＣＤ８シグナルペプチド）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ヒンジ及び膜貫通）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８ヒンジ及び膜貫通）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（ＣＤ８シグナルペプチド）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８ヒンジ及び膜貫通）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－ＶＨ）－（ヒンジ及び膜貫通）－（ＬＴＢＲ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（ＣＤ８シグナルペプチド）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－ＶＨ）－（ヒンジ及び膜貫通）－（ＬＴＢＲ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８ヒンジ及び膜貫通）－（ＬＴＢＲ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（ＣＤ８シグナルペプチド）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ＣＤ８ヒンジ及び膜貫通）－（ＬＴＢＲ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－ＶＨ）－（ヒンジ及び膜貫通）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）－（ＬＴＢＲ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、任意選択で本明細書に記載の１９Ｈ９抗ＰＤ－Ｌ１ Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、（ＣＤ８シグナルペプチド）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ）－（リンカー）－（抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ）－（ヒンジ及び膜貫通）－（ＬＴＢＲ細胞内ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＰＤ－１細胞外ドメイン）－（ＣＤ２８細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（ＣＤ２８膜貫通ドメイン）－（ＣＤ２８細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＰＤ－１細胞外ドメイン）－（ＣＤ２８細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（ＣＤ２８膜貫通ドメイン）－（ＣＤ２８細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＰＤ－１細胞外ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（４－１ＢＢ膜貫通ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）－（ＣＤ２８細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（ＣＤ２８膜貫通ドメイン）－（ＣＤ２８細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（４－１ＢＢ膜貫通ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＦＡＳ細胞外ドメイン）－（ＦＡＳ膜貫通ドメイン）－（ＦＡＳ細胞内ドメインの７アミノ酸）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結されている。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＩｇＥシグナルペプチド）－（ＰＤ－１細胞外ドメイン）－（ＣＤ２８細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（ＣＤ２８膜貫通ドメイン）－（ＣＤ２８細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＩｇＥシグナルペプチド）－（ＰＤ－１細胞外ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（４－１ＢＢ膜貫通ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＩｇＥシグナルペプチド）－（ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）－（ＣＤ２８細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（ＣＤ２８膜貫通ドメイン）－（ＣＤ２８細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＩｇＥシグナルペプチド）－（ＴＧＦβＲＩＩ細胞外ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞外ドメインの１２アミノ酸）－（４－１ＢＢ膜貫通ドメイン）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本発明は、（ＩｇＥシグナルペプチド）－（ＦＡＳ細胞外ドメイン）－（ＦＡＳ膜貫通ドメイン）－（ＦＡＳ細胞内ドメインの７アミノ酸）－（４－１ＢＢ細胞内ドメイン）を含むタンパク質を含むＣＣＲを発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含み、括弧で示される各ドメインは、作動可能に連結されている。

いくつかの実施形態では、本発明は、ビエピトープＣＣＲ構築物を発現するＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬを含む。

本発明の例示的なＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列を表６３に提供する。ある実施形態では、表６３のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。ある実施形態では、表６３のヌクレオチド配列は、本明細書の他の箇所に記載されるように、追加のリンカードメインを含むようにさらに修飾される。ある実施形態では、表６３のヌクレオチド配列は、レンチウイルス発現系で使用される。ある実施形態では、表６３のヌクレオチド配列は、追加のプラスミドを使用してレンチウイルス発現系で使用される。

表６３に提供されるベクターの例示的なベクター設計は、図３８～４０に提供される。ある実施形態では、図３８に示されるベクターによってコードされるＣＣＲを使用して、本明細書に記載される本発明のＴＩＬ製品を遺伝子修飾する。ある実施形態では、図３９に示されるベクターによってコードされるＣＣＲを使用して、本明細書に記載される本発明のＴＩＬ製品を遺伝子修飾する。ある実施形態では、図４０に示されるベクターによってコードされるＣＣＲを使用して、本明細書に記載される本発明のＴＩＬ製品を遺伝子修飾する。

ある実施形態では、ＣＣＲは、抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｌ－リンカー－抗ＴＲＯＰ－２－Ｖ_Ｈ－ＩｇＧ４（ヒンジ及び膜貫通）－ＩＬ２Ｒβ構築物を含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１８と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。

ある実施形態では、ＣＣＲは、抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｌ－リンカー－抗ＦＡＰ－Ｖ_Ｈ－ＣＤ８α（ヒンジ及び膜貫通）－ＩＬ－１８Ｒ１構築物を含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６１９と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。

ある実施形態では、ＣＣＲは、本明細書に記載の３８Ａ１抗体に基づいて、抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｌ－リンカー－抗ＰＤ－Ｌ１－Ｖ_Ｈ－ＣＤ８α（ヒンジ及び膜貫通）－ＣＤ２７構築物を含む。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ＣＣＲは、配列番号６２０と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。

ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメインの両方を使用して、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）を含む２つのＣＣＲを含み、ＳＰは、シグナルペプチドを指す。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２１と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態は、必要に応じて、分析用に、ｅＧＦＰなどの蛍光タンパク質を含み得るか、または省略し得る。

ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、本明細書に記載の３８Ａ１及び１９Ｈ９ ＰＤ－Ｌ１ドメインの両方を使用して、ＳＰ－（３８Ａ１ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（１９Ｈ９ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）を含む２つのＣＣＲを含み、ＳＰは、シグナルペプチドを指す。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態は、必要に応じて、分析用に、ｅＧＦＰなどの蛍光タンパク質を含み得るか、または省略し得る。

ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒβ膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－２Ｒγ膜貫通及び細胞内）を含む２つのＣＣＲを含み、ＳＰは、シグナルペプチドを指す。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２２を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２３と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態は、必要に応じて、分析用に、ｅＧＦＰなどの蛍光タンパク質を含み得るか、または省略し得る。

ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８Ｒ１膜貫通及び細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（抗ＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ８ヒンジ）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ膜貫通及び細胞内）を含む２つのＣＣＲを含み、ＳＰは、シグナルペプチドを指す。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２４と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態は、必要に応じて、分析用に、ｅＧＦＰなどの蛍光タンパク質を含み得るか、または省略し得る。

ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒβ細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ及び膜貫通）－（ＩＬ－２Ｒγ細胞内）を含む２つのＣＣＲを含み、ＳＰは、シグナルペプチドを指す。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２５と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態は、必要に応じて、分析用に、ｅＧＦＰなどの蛍光タンパク質を含み得るか、または省略し得る。

ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、ＳＰ－（ｃＡＲ４７Ａ６．４ ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ膜貫通）－（ＩＬ－１８Ｒ１細胞内）－Ｔ２Ａ－ＳＰ－（ＫＭ４０９７ｓｃＦｖ）－（ＣＤ２８ヒンジ膜貫通）－（ＩＬ－１８ＲＡＰ細胞内）を含む２つのＣＣＲを含み、ＳＰは、シグナルペプチドを指す。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ビエピトープＣＣＲは、配列番号６２６と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。前述の実施形態は、必要に応じて、分析用に、ｅＧＦＰなどの蛍光タンパク質を含み得るか、または省略し得る。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、もしくは配列番号６６３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、もしくは配列番号６６３に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、もしくは配列番号６６３に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号５６２に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、もしくは配列番号６６３に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、もしくは配列番号６６３に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号５６２に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、もしくは配列番号６６３に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６５８、配列番号６５９、配列番号６６０、配列番号６６１、配列番号６６２、もしくは配列番号６６３に示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

ある実施形態では、２つ以上のＣＣＲが、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。ある実施形態では、少なくとも１つのケモカイン受容体及び少なくとも１つのＣＣＲが、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。ある実施形態では、少なくとも２つのケモカイン受容体及び少なくとも１つのＣＣＲが、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。ある実施形態では、少なくとも１つのケモカイン受容体及び少なくとも２つのＣＣＲが、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。前述の実施形態のうちのいずれにおいても、ＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体は、バイシストロニックベクターによってコードされる。好適なポリシストロニックベクターは、本明細書及びＬｉｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１７，７（１），２１９３、Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０１１，６（４），ｅ１８５５６に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＩＲＥＳ技法はまた、ポリシストロニックベクター設計を達成するために、本明細書の実施形態で用いられてもよい。

ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、同じ標的の異なるエピトープに結合する２つのＣＣＲを含むビエピトープＣＣＲである。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、各ＣＣＲは、標的の異なるエピトープに結合する。ある実施形態では、２つのＣＣＲが、ビシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ（ＣＤ３２６）、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、及びＭＵＣ１６からなる群から選択される標的の第１のエピトープに結合する第１のｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、標的の異なるエピトープに結合する第２のｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＰＤ－Ｌ１の第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＰＤ－Ｌ１の第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＰＤ－１の第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＰＤ－１の第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＣＥＡの第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＣＥＡの第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＣＤ７３の第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＣＤ７３の第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＴＲＯＰ－２の第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＴＲＯＰ－２の第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、組織因子の第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、組織因子の第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＬＦＡ－１の第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＬＦＡ－１の第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＦＡＰの第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＦＡＰの第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＶＩＳＴＡの第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＶＩＳＴＡの第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。ある実施形態では、２つのＣＣＲは、バイシストロニックベクターによってコードされ、第１のＣＣＲは、ＬＲＲＣ１５の第１のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含み、第２のＣＣＲは、ＬＲＲＣ１５の第２のエピトープに結合するｓｃＦｖドメインを含む。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
（ａ）細胞外ドメインと、
（ｂ）ヒンジドメインと、
（ｃ）膜貫通ドメインと、
（ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択される。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
（ａ）細胞外ドメインと、
（ｂ）ヒンジドメインと、
（ｃ）膜貫通ドメインと、
（ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、がんは、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、方法は、
（ａ）患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
（ｂ）第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
（ｃ）第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、第１の拡張が、約３～１４日間行われて、第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、系を開くことなく起こる、第２のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｄ）ＣＣＲを発現するように第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
（ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、第２の拡張が、約３～１４日間行われて、第３のＴＩＬ集団を取得し、第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、第３のＴＩＬ集団を産生することと、
（ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
（ｇ）ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、系を開くことなく起こる、移すことと、
（ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの採取されたＴＩＬ集団を含む注入バッグを凍結保存することと、
（ｉ）治療上有効な投与量の第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の注入バッグから患者に投与することと、を含む。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的タンパク質の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＩＬ－１３Ｒα２、ＦＡＳ、ＴＧＦβＲＩＩ、及びＭＵＣ１６からなる群から選択される標的タンパク質のエピトープに結合する。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的タンパク質の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、細胞外ドメインは、ＰＤ－１ドメイン、ＦＡＳドメイン、及びＴＧＦβＲＩＩドメインからなる群から選択される。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的タンパク質の異なるエピトープに結合して、ビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供し、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＩＬ－１３Ｒα２、ＦＡＳ、ＴＧＦβＲＩＩ、及びＭＵＣ１６からなる群から選択される標的タンパク質のエピトープに結合し、細胞内ドメインは、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＳＴＡＴ３、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２１Ｒ、ＬＴＢＲ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、ＰＤ－Ｌ１の２つの異なるエピトープに結合する。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、ＴＲＯＰ－２の２つの異なるエピトープに結合する。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
（ａ）細胞外ドメインと、
（ｂ）ヒンジドメインと、
（ｃ）膜貫通ドメインと、
（ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、各ＣＣＲ上のＰＤ－Ｌ１の２つの異なるエピトープに結合し、細胞内ドメインは、各ＣＣＲ上のＩＬ－１８Ｒ１及びＩＬ－１８ＲＡＰである。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、各ＣＣＲ上のＴＲＯＰ－２の２つの異なるエピトープに結合し、細胞内ドメインは、各ＣＣＲ上のＩＬ－１８Ｒ１及びＩＬ－１８ＲＡＰである。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、各ＣＣＲ上のＰＤ－Ｌ１の２つの異なるエピトープに結合し、細胞内ドメインは、各ＣＣＲ上のＩＬ－２Ｒβ及びＩＬ－２γである。

ある実施形態では、本発明は、がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによってがんを治療する方法を含み、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、２つのキメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、各ＣＣＲは、
ａ）細胞外ドメインと、
ｂ）ヒンジドメインと、
ｃ）膜貫通ドメインと、
ｄ）少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含み、
各細胞外ドメインは、標的抗原の異なるエピトープに結合してビエピトープ複合体を形成し、各細胞内ドメインは、シグナル伝達のための２つのサブユニットを提供するように選択され、各細胞外ドメインは、ｓｃＦｖ結合ドメインを含み、ｓｃＦｖ結合ドメインは、各ＣＣＲ上のＴＲＯＰ－２の２つの異なるエピトープに結合し、細胞内ドメインは、各ＣＣＲ上のＩＬ－２Ｒβ及びＩＬ－２γである。

ＩＸ．ケモカイン受容体
いくつかの実施形態では、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３を含む前述の製造プロセス、ならびにＴＩＬ、ＭＩＬ、及びＰＢＬを作製する他のプロセスは、化学誘引性サイトカイン受容体としても知られる１つ以上のケモカイン受容体を発現するためのＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬのウイルスまたは非ウイルス形質導入を含むステップを含むように修飾されてもよい。ケモカイン受容体は、一般に、Ｍｕｒｄｏｃｈ ａｎｄ Ｆｉｎｎ，Ｂｌｏｏｄ ２０００，９５，３０３２－３０４３（その開示は参照により本明細書に組み込まれる）に記載されるように、ロドプシン様７膜貫通（７ＴＭ）構造を有し、ケモカインと相互作用し、Ｇタンパク質とのカップリングによって細胞内シグナルを形質導入し、化学走化を媒介する。ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体を発現するように修飾される。ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体及びＣＣＲを発現するように修飾される。ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体及びＣＣＲを発現するように修飾され、かかる修飾は、別々に生じる。ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ケモカイン受容体及びＣＣＲを発現するように修飾され、かかる修飾は、同時に生じる。ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＣＣＲを発現するように修飾されることなく、ケモカイン受容体を発現するように修飾される。に記載のケモカイン受容体は、本明細書に記載のＣＣＲと併せて、または本明細書に記載のＣＣＲとは別個に、遺伝子修飾されたＴＩＬ、ＭＩＬ、及びＰＢＬに使用することができる。

Ａ．ケモカイン受容体ドメイン
ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、またはＣＸＣＲ５などのＣ－Ｘ－Ｃ（またはＣＸＣ）モチーフケモカイン受容体を発現するように一過性または安定的に修飾される。ある実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬは、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体を発現するように一過性または安定的に修飾される。好適なＣ－Ｃモチーフケモカイン受容体は、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、及びＣＣＲ８である。ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、及びＣＣＲ８などのＣ－Ｃモチーフケモカイン受容体と組み合わせて使用される「ＣＣＲ」という名称は、共刺激性キメラ受容体について本明細書で使用される略語ＣＣＲと混同されるべきではない。例えば、「ＣＣＲ２」という用語は、本明細書では、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体２を指し、「ＣＣＲ４」という用語は、本明細書では、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体４を指し、「ＣＣＲ６」という用語は、本明細書では、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体６を指し、「ＣＣＲ７」という用語は、本明細書では、Ｃ－Ｃ（またはＣＣ）モチーフケモカイン受容体７を指し、「ＣＣＲ８」という用語は、本明細書では、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体８を指す。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの集団は、腫瘍組織輸送を改善するためにリガンド勾配に遭遇したときに、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの集団に走化性応答及びＣａ^２＋フラックスを誘導するために、完全長ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの集団は、Ｃ－Ｘ－３－Ｃ（またはＣＸ３Ｃ）モチーフケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾される。いくつかの実施形態では、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬの集団は、Ｘ－Ｃ（またはＸＣ）モチーフケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾される。Ｔ細胞ホーミングにおけるケモカイン受容体の役割は、Ｓａｃｋｓｔｅｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．２０１７，９７，６６９－９７に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｃ－Ｘ－３－Ｃモチーフケモカイン受容体である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、表６４に示されるケモカイン受容体から選択される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６２７のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６２７で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６２７で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６２７で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６２７で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６２７で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６２７で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６２７で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６２７で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６２７のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６２８のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６２８で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６２８で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６２８で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６２８で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６２８で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６２８で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６２８で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６２８で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６２８のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６２９のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６２９で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６２９で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６２９で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６２９で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６２９で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６２９で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６２９で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６２９で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６２９のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３０のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３０で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３０で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３０で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３０で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３０で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３０で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３０で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３０で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３０のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３１のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３１で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３１で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３１で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３１で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３１で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３１で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３１で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３１で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３１のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３２のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３２で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３２で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３２で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３２で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３２で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３２で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３２で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３２で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３２のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３３で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３３で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３３で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３３で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３３で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３３で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３３で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３３で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３４のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３４で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３４で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３４で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３４で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３４で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３４で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３４で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３４で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３４のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３５のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３５で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３５で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３５で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３５で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３５で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３５で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３５で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３５で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３５のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３６のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３６で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３６で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３６で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３６で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３６で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３６で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３６で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３６で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３６のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３７のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３７で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３７で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３７で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３７で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３７で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３７で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３７で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３７で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３７のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３８のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３８で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３８で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３８で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３８で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３８で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３８で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３８で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３８で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３８のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３９のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６３９で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６３９で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６３９で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６３９で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６３９で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６３９で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６３９で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６３９で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６３９のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４０のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６４０で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６４０で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６４０で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６４０で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６４０で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６４０で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６４０で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６４０で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４０のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４１のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６４１で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６４１で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６４１で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６４１で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６４１で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６４１で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６４１で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６４１で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４１のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４２のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６４２で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６４２で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６４２で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６４２で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６４２で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６４２で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６４２で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６４２で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４２のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６４３で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６４３で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６４３で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６４３で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６４３で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６４３で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６４３で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６４３で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４３のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４４のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６４４で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６４４で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６４４で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６４４で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６４４で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６４４で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６４４で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６４４で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４４のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４５のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアントもしくは誘導体、あるいは配列番号６４５で示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６４５で示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６４５で示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６４５で示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６４５で示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６４５で示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６４５で示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６４５で示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含むドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４５のアミノ酸配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体をコードするヌクレオチドドメインを含む。

いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体をコードするヌクレオチドによってコードされるタンパク質である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｃ－Ｃモチーフケモカイン受容体をコードするヌクレオチドによってコードされるタンパク質である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｃ－Ｘ－３－Ｃモチーフケモカイン受容体をコードするヌクレオチドによってコードされるタンパク質である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体をコードするヌクレオチドによってコードされるタンパク質である。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、表６５に示されるヌクレオチドによってコードされるタンパク質である。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４６と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６４６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４７と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６４７は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４８と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６４８は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６４９と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６４９は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５０と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５０は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５１と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５１は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５２と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５２は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５３と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５３は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５４と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５４は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５５と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５５は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５６と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５７と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５７は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５８と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５８は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６５９と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６５９は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６０と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６０は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６１と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６１は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６２と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６２は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６３と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６３は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６４と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６４は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６５と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６５は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６６と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６６は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６７と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６７は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８のヌクレオチド配列、またはその保存的アミノ酸置換、またはその断片、バリアント、もしくは誘導体によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも９９％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも９８％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも９７％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも９６％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも９５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも８５％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。ある実施形態では、本発明のケモカイン受容体は、配列番号６６８と少なくとも８０％同一のヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸ドメインを含む。前述の実施形態を含むある実施形態では、配列番号６６８は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。

Ｂ．ケモカイン受容体の遺伝子発現方法
レンチウイルス、レトロウイルス、及びトランスポゾンベースのシステムを含むが、これらに限定されない、本明細書の他の箇所または当該技術分野において記載される遺伝子発現方法を使用して、プロモーター、自己切断ペプチド、リンカー、調節エレメントまたはドメイン、及び他のベクターコンポーネントまたはドメインを含む、上記セクションＶＩＩＩ．Ｄに記載される例示的なシステムなどの、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬにおけるケモカイン受容体の安定した発現を提供することができる。

本発明の例示的なＣＣＲをコードするベクターのヌクレオチド配列を表６６に提供する。ある実施形態では、表６６のヌクレオチド配列は、タンパク質発現を改善するためにコドン最適化される。ある実施形態では、表６６のヌクレオチド配列は、本明細書の他の箇所に記載されるように、代替プロモーターまたは調節ドメインを含むようにさらに修飾される。ある実施形態では、表６６のヌクレオチド配列は、レトロウイルス発現系で使用される。ある実施形態では、表６６のヌクレオチド配列は、追加のプラスミドを使用してレトロウイルス発現系で使用される。追加の詳細は、Ｈａｗｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．１９９４，１，１３６－３８に記載されており、その開示は参照により本明細書に組み込まれる。

表６６に提供されるベクターの例示的なベクター設計は、図４１及び４２に提供される。ある実施形態では、図４１に示されるベクターによってコードされるケモカイン受容体を使用して、本明細書に記載される本発明のＴＩＬ製品を遺伝子修飾する。ある実施形態では、図４１に示されるベクターによってコードされるケモカイン受容体を使用して、本明細書に記載される本発明のＴＩＬ製品を遺伝子修飾する。ある実施形態では、図４２に示されるベクターによってコードされるケモカイン受容体を使用して、本明細書に記載される本発明のＴＩＬ製品を遺伝子修飾する。

ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６６９と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。

ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９９％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９８％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９７％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９６％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９４％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９３％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９２％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９１％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも９０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも８５％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。ある実施形態では、ケモカイン受容体は、配列番号６７０と少なくとも８０％同一である領域を含むヌクレオチド配列によってコードされる。

ある実施形態では、２つ以上のケモカイン受容体が、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。ある実施形態では、少なくとも１つのケモカイン受容体及び少なくとも１つのＣＣＲが、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。ある実施形態では、少なくとも２つのケモカイン受容体及び少なくとも１つのＣＣＲが、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。ある実施形態では、少なくとも１つのケモカイン受容体及び少なくとも２つのＣＣＲが、ポリシストロニックベクター内の複数の導入遺伝子によってコードされる。前述の実施形態のうちのいずれにおいても、ＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体は、バイシストロニックベクターによってコードされる。好適なポリシストロニックベクターは、本明細書及びＬｉｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１７，７（１），２１９３に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に組み込まれる。ＩＲＥＳ技法はまた、ポリシストロニックベクター設計を達成するために、本明細書の実施形態で用いられてもよい。

本明細書に包含される実施形態は、これから以下の実施例を参照して説明される。これらの実施例は、例示のみを目的として提供されており、本明細書に包含される本開示は、決してこれらの実施例に限定されると解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書で提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含すると解釈されるべきである。

実施例１：ＲＥＰ前プロセス及びＲＥＰプロセス用の培地の調製
この実施例は、様々な固形腫瘍に由来する腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）の培養を含むプロトコルで使用するための組織培養培地の調製のための手順を説明する。この培地を、本出願及び他の実施例に記載のＴＩＬのうちのいずれかの調製に使用することができる。

ＣＭ１の調製。以下の試薬を冷蔵から取り出し、それらを３７℃の水浴中で温める（ＲＰＭＩ１６４０、ヒトＡＢ血清、２００ｍＭ Ｌ－グルタミン）。濾過される体積に適した０．２μｍフィルターユニットの上部に成分の各々を追加することによって、以下の表６７に従ってＣＭ１培地を調製する。４℃で保存する。

使用日に、３７℃の水浴中で必要量のＣＭ１を事前に温め、６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を追加する。

表６８に従って必要に応じて追加の補充を行ってもよい。

ＣＭ２の調製。調製したＣＭ１を冷蔵庫から取り出すか、または上記のセクション７．３に従って新鮮なＣＭ１を調製する。ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）を冷蔵庫から取り出し、調製したＣＭ１を滅菌培地ボトル内で同等体積のＡＩＭ－Ｖ（登録商標）と混合することによって、必要な量のＣＭ２を調製する。使用日に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２をＣＭ２培地に追加する。使用日に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む十分な量のＣＭ２を作製する。ＣＭ２培地ボトルにラベルを付け、組織培養に必要になるまで４℃で保存する。

ＣＭ３の調製。使用が必要になった日にＣＭ３を調製する。ＣＭ３は、ＡＩＭ－Ｖ（登録商標）培地と同じであり、使用日に３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した。ＩＬ－２ストック溶液をＡＩＭ－Ｖのボトルまたはバッグに直接追加することによって、実験のニーズに十分な量のＣＭ３を調製する。穏やかに振盪することによって十分に混合する。ボトルに、ＡＩＭ－Ｖに追加した直後に「３０００ＩＵ／ｍＬ ＩＬ－２」とラベル付けする。過剰なＣＭ３が存在する場合は、ラベル付けされたボトル内で４℃で保管し、有効期限は調製後７日である。４℃で７日間保管した後、ＩＬ－２を補充した培地を廃棄する。

ＣＭ４の調製。ＣＭ４は、ＣＭ３と同じであり、２ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）（最終濃度）を追加で補充する。１ＬのＣＭ３毎に、１０ｍＬの２００ｍＭ ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）を添加する。ＩＬ－２ストック溶液及びＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）ストック溶液をＡＩＭ－Ｖのボトルまたはバッグに直接追加することによって、実験のニーズに十分な量のＣＭ４を調製する。穏やかに振盪することによって十分に混合する。ボトルに、ＡＩＭ－Ｖに追加した直後に「３０００ＩＬ／ｍＬ ＩＬ－２及びＧｌｕｔａＭＡＸ」とラベル付けした。過剰なＣＭ４が存在する場合、培地名及びその有効期限（調製後７日）でラベル付けしたボトル内で４℃で保管する。４℃で７日間超保管した後、ＩＬ－２を補充した培地を廃棄する。

実施例２：ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１サイトカインカクテルの使用
この実施例は、本明細書の実施例のうちのいずれかのＴＩＬプロセスと組み合わせた、追加のＴ細胞成長因子として機能するＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１サイトカインの使用を説明する。

本明細書に記載のプロセスを使用して、ＴＩＬは、培養の開始時に、実験の一方のアームにおいてＩＬ－２の存在下で腫瘍から、及びもう一方のアームではＩＬ－２の代わりにＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１の組み合わせから成長させることができる。ＲＥＰ前の完了時に、培養物を、拡張、表現型、機能（ＣＤ１０７ａ＋及びＩＦＮ－γ）、及びにＴＣＲ Ｖβレパートリーについて評価した。ＩＬ－１５及びＩＬ－２１は、本明細書の他の場所及びＳａｎｔｅｇｏｅｔｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，２０１３，１１，３７に記載されている。

結果は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１処理条件でのＣＤ４^＋及びＣＤ８^＋細胞の両方で、ＩＬ－２のみの条件と比較して増強したＴＩＬ拡張（＞２０％）が観察できることを示し得る。ＩＬ－２単独培養物と比較して、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１で処理した培養物から取得されたＴＩＬには、歪んだＴＣＲ Ｖβレパートリーを伴う主にＣＤ８^＋集団への歪みがあった。ＩＦＮ－γ及びＣＤ１０７ａは、ＩＬ－２単独で処理したＴＩＬと比較して、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、及びＩＬ－２１で処理したＴＩＬで上昇した。

実施例３：ガンマ線照射末梢単核細胞の個々のロットを適格性確認する
この実施例は、本明細書に記載の例示的な方法において同種異系フィーダー細胞として使用するためのガンマ線照射末梢単核細胞（ＰＢＭＣ、単核細胞またはＭＮＣとしても知られる）の個々のロットを適格性確認するための簡略化された手順を説明する。

照射された各ＭＮＣフィーダーロットは、個々のドナーから調製した。各ロットまたはドナーは、精製された抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）抗体及びインターロイキン－２（ＩＬ－２）の存在下でＲＥＰ内のＴＩＬを拡張する能力について個々にスクリーニングした。さらに、フィーダー細胞の各ロットを、ＴＩＬを添加せずに試験し、受けたガンマ線の線量がそれらを複製不全にするのに十分であることを確認した。

ＴＩＬのＲＥＰには、ガンマ線を照射し、成長を停止させたＭＮＣフィーダー細胞が必要である。フィーダーＭＮＣの膜受容体は、抗ＣＤ３（クローンＯＫＴ３）抗体に結合し、ＲＥＰフラスコ内のＴＩＬに架橋し、ＴＩＬを刺激して拡張させる。フィーダーロットは、個々のドナーから採取した全血の白血球アフェレーシスから調製した。白血球アフェレーシス産物を、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ上で遠心分離し、洗浄し、照射し、ＧＭＰ条件下で凍結保存した。

ＴＩＬ療法を受けた患者には、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を引き起こす可能性があるため、生存可能なフィーダー細胞を注入しないことが重要である。したがって、フィーダー細胞は、細胞にガンマ線を照射することによって成長を停止させ、再培養時に二本鎖ＤＮＡ切断が起こり、ＭＮＣ細胞の細胞生存性が喪失する。

フィーダーロットを、２つの基準：１）共培養でＴＩＬを１００倍超拡張する能力、及び２）複製不全で評価した。

フィーダーロットを、直立したＴ２５組織培養フラスコ内で培養された２つの主要なＲＥＰ前ＴＩＬ株を利用して、ｍｉｎｉ－ＲＥＰ形式で試験した。各ＴＩＬ株は、ＲＥＰでの活性化に応答して増殖する能力が独特であるため、フィーダーロットを、２つの異なるＴＩＬ株に対して試験した。対照として、上記の基準を満たすことが歴史的に示されている多くの照射されたＭＮＣフィーダー細胞を、試験ロットと並行して実行した。

１回の実験で試験されたすべてのロットが同等の試験を受けることを保証するために、すべての条件及びすべてのフィーダーロットを試験するために、同じＲＥＰ前ＴＩＬ株の十分なストックが利用可能であった。

試験したフィーダー細胞の各ロットに、合計６つのＴ２５フラスコがあった：ＲＥＰ前ＴＩＬ株＃１（２フラスコ）、ＲＥＰ前ＴＩＬ株＃２（２フラスコ）、及びフィーダー対照（２フラスコ）。ＴＩＬ株番号１及び番号２を含むフラスコは、フィーダーロットがＴＩＬを拡張する能力を評価した。フィーダー対照フラスコは、フィーダーロットの複製不全を評価した。

Ａ．実験プロトコル
－２／３日目、ＴＩＬ株の解凍ＣＭ２培地を調製し、３７℃の水浴中で温める。３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した４０ｍＬのＣＭ２を調製する。使用まで保温する。ＩＬ－２を含まない２０ｍＬの予熱したＣＭ２を、使用したＴＩＬ株の名前がラベル付けされた２本の５０ｍＬコニカルチューブの各々に入れる。ＬＮ２ストレージから２つの指定されたＲＥＰ前ＴＩＬ株を取り出し、バイアルを組織培養室に移した。少量の氷が残るまで、３７℃の水浴内の密封されたジッパーストレージバッグ内にバイアルを入れて解凍した。

無菌トランスファーピペットを使用して、各バイアルの内容物を、調製した、ラベル付けされた５０ｍＬのコニカルチューブ中の２０ｍＬのＣＭ２に直ちに移した。細胞を洗浄し、４００×ＣＦで５分間遠心分離するために、ＩＬ－２なしのＣＭ２を使用して４０ｍＬにＱＳ。上清を吸引し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２で補充された５ｍＬの温かいＣＭ２に再懸濁した。

自動セルカウンターを使用して細胞をカウントするために、少量のアリコート（２０μＬ）を重複して取り出した。計数を記録した。カウントしながら、ＴＩＬ細胞を含む５０ｍＬのコニカルチューブを、加湿した３７℃、５％ ＣＯ_２インキュベーターに入れ、ガス交換を可能にするためにキャップを緩めた。細胞濃度を決定し、ＴＩＬを、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充したＣＭ２中で１×１０^６細胞／ｍＬに希釈した。

ｍｉｎｉ－ＲＥＰの０日目まで、加湿した３７℃のインキュベーターで必要な数のウェルにおいて、２４ウェル組織培養プレートの１ウェル当たり２ｍＬで培養した。混乱及び潜在的な相互汚染を避けるために、別々の２４ウェル組織培養プレートで異なるＴＩＬ株を培養した。

０日目、Ｍｉｎｉ－ＲＥＰを開始する試験されるフィーダーロットの数に十分なＣＭ２培地を調製した。（例えば、一度に４つのフィーダーロットを試験するために、８００ｍＬのＣＭ２培地を調製した）。上記で調製したＣＭ２の一部を分注し、それを細胞の培養のために３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２で補充した。（例えば、一度に４つのフィーダーロットを試験するために、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む５００ｍＬのＣＭ２培地を調製する）。

相互汚染を防ぐために各ＴＩＬ株を別々に操作し、ＴＩＬ培養物を入れた２４ウェルプレートをインキュベーターから取り出し、ＢＳＣに移した。

無菌トランスファーピペットまたは１００～１０００μＬピペッター及びチップを使用して、約１ｍＬの培地を、使用されるＴＩＬの各ウェルから取り出し、２４ウェル組織培養プレートの未使用のウェルに入れる。

新鮮な無菌トランスファーピペットまたは１００～１０００μＬピペッター及びチップを使用して、残りの培地をウェル内のＴＩＬと混合して細胞を再懸濁し、次いで細胞懸濁液を、ＴＩＬロット名のラベルが付いた５０ｍＬコニカルチューブに移し、容量を記録した。

予備の培地でウェルを洗浄し、その容量を同じ５０ｍＬコニカルチューブに移した。細胞を４００×ＣＦで回転させて、細胞ペレットを収集する。培地上清を吸引除去し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含有する２～５ｍＬのＣＭ２培地に細胞ペレットを再懸濁し（採取したウェルの数及びペレットのサイズに基づいて使用される容量）、容量は、１．３×１０^６細胞／ｍＬを超える濃度を保証するのに十分である必要がある。

血清学的ピペットを使用して、細胞懸濁液を十分に混合し、容量を記録した。自動セルカウンターを使用して細胞をカウントするために、２００μＬを取り出した。カウントしながら、ＴＩＬ細胞を含む５０ｍＬのコニカルチューブを、加湿した５％ＣＯ_２、３７℃インキュベーターに入れ、ガス交換を可能にするためにキャップを緩めた。計数を記録した。

ＴＩＬ細胞を含有する５０ｍＬのコニカルチューブをインキュベーターから取り出し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２で補充された温かいＣＭ２中、１．３×１０^６細胞／ｍＬの濃度でそれらの細胞を再懸濁した。キャップを緩めた状態で、５０ｍＬのコニカルチューブをインキュベーターに戻した。

第２のＴＩＬ株について、上記のステップを繰り返した。

ＴＩＬを実験用のＴ２５フラスコに入れる直前に、ＴＩＬを、以下の通り１：１０に希釈して１．３×１０^５細胞／ｍＬの最終濃度にした。

ＭＡＣＳ ＧＭＰ ＣＤ３ピュア（ＯＫＴ３）作用溶液を調製するＯＫＴ３のストック溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を４℃の冷蔵庫から取り出し、ＢＳＣに入れた。ｍｉｎｉ－ＲＥＰの培地では、最終濃度３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３を使用した。

実験の各Ｔ２５フラスコ内の２０ｍＬに対して６００ｎｇのＯＫＴ３が必要であり、これは、２０ｍＬ毎に６０μＬの１０μｇ／ｍＬ溶液、または各フィーダーロットについて試験した６つのフラスコすべてで３６０μＬに相当する。

試験した各フィーダーロットについて、４００μＬの１：１００希釈の１ｍｇ／ｍＬ ＯＫＴ３を、１０μｇ／ｍＬの作業濃度で作製した（例えば、４つのフィーダーロットを一度に試験する場合、１６００μＬの１：１００希釈の１ｍｇ／ｍＬ ＯＫＴ３：１６μＬの１ｍｇ／ｍＬ ＯＫＴ３＋３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１．５８４ｍＬのＣＭ２培地を作製する）。

Ｔ２５フラスコを調製するフィーダー細胞を調製する前に、各フラスコにラベルを付け、フラスコにＣＭ２培地を充填した。フラスコを３７℃の加湿した５％ ＣＯ_２インキュベーターに入れ、残りの成分を添加するのを待つ間、培地を保温した。一旦フィーダー細胞が調製されると、各フラスコ内のＣＭ２に成分が添加される。

さらなる情報を表６９に提供する。

フィーダー細胞を調製する。このプロトコルについて試験されたロット当たり７８×１０^６フィーダー細胞の最小値が必要であった。ＳＤＢＢによって凍結された各１ｍＬバイアルは、凍結時に１００×１０^６個の生細胞を有していた。液体Ｎ_２ストレージからの解凍時の５０％の回収率を仮定すると、ロット当たり少なくとも２つの１ｍＬバイアルのフィーダー細胞を解凍して、各ＲＥＰに推定１００×１０^６個の生細胞を与えることが推奨された。あるいは、１．８ｍＬバイアルで供給された場合、１つのバイアルだけで十分なフィーダー細胞が提供された。

フィーダー細胞を解凍する前に、試験される各フィーダーロットにＩＬ－２を含まないおよそ５０ｍＬのＣＭ２を予熱した。指定されたフィーダーロットバイアルをＬＮ２ストレージから取り出し、ジッパーストレージバッグに入れ、氷上に置いた。３７℃の水浴に浸すことによって、閉じたジッパーストレージバッグ内のバイアルを解凍した。バイアルをジッパーバッグから取り出し、７０％ ＥｔＯＨでスプレーまたはワイプし、ＢＳＣに移した。

トランスファーピペットを使用して、フィーダーバイアルの内容物を、５０ｍＬのコニカルチューブ中の３０ｍＬの温かいＣＭ２に直ちに移した。バイアルを少量のＣＭ２で洗浄して、バイアル内のいかなる残留細胞も除去し、４００×ＣＦで５分間遠心分離した。上清を吸引し、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を加えた４ｍＬの温かいＣＭ２に再懸濁した。自動セルカウンターを使用して細胞をカウントするために、２００μＬを取り出した。計数を記録した。

３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を加えた温かいＣＭ２中、１．３×１０^７細胞／ｍＬで細胞を再懸濁した。ＴＩＬ細胞を１．３×１０^６細胞／ｍＬから１．３×１０^５細胞／ｍＬに希釈した。

共培養物を準備する。ＴＩＬ細胞を１．３×１０^６細胞／ｍＬから１．３×１０^５細胞／ｍＬに希釈した。４．５ｍＬのＣＭ２培地を１５ｍＬのコニカルチューブに添加した。インキュベーターからＴＩＬ細胞を取り出し、１０ｍＬの血清ピペットを使用して十分に再懸濁した。１．３×１０^６細胞／ｍＬのＴＩＬ懸濁液から０．５ｍＬの細胞を取り出し、１５ｍＬのコニカルチューブ中の４．５ｍＬの培地に添加した。ＴＩＬストックバイアルをインキュベーターに戻した。よく混ぜた。第２のＴＩＬ株に対して繰り返した。

単一フィーダーロット用に予熱した培地を入れたフラスコを、インキュベーターからＢＳＣに移した。１ｍＬのピペットチップで数回上下にピペッティングすることによってフィーダー細胞を混合し、そのフィーダーロットの各フラスコに１ｍＬ（１．３×１０^７細胞）を移した。６０μＬのＯＫＴ３作用ストック（１０μｇ／ｍＬ）を各フラスコに追加した。２つの対照フラスコをインキュベーターに戻した。

各ＴＩＬロットの１ｍＬ（１．３×１０^５）を、対応するラベルの付いたＴ２５フラスコに移した。フラスコをインキュベーターに戻し、直立させてインキュベートした。５日目まで乱さなかった。試験したすべてのフィーダーロットについて、この手順を繰り返した。

５日目、培地変更３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含むＣＭ２を調製した。各フラスコに１０ｍＬが必要である。１０ｍＬピペットを使用して、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１０ｍＬの温かいＣＭ２を各フラスコに移した。フラスコをインキュベーターに戻し、７日目まで直立させてインキュベートした。試験したすべてのフィーダーロットについて繰り返した。

７日目、採取インキュベーターからフラスコを取り出し、ＢＳＣに移し、フラスコの底部の細胞層を乱さないように注意する。フラスコの底部で成長する細胞を乱すことなく、各試験フラスコから１０ｍＬの培地を取り出し、対照フラスコの各々から１５ｍＬの培地を取り出した。

１０ｍＬの血清ピペットを使用して、残りの培地に細胞を再懸濁し、よく混合して細胞の塊をすべて破壊した。ピペッティングすることによって細胞懸濁液を完全に混合した後、細胞計数のために２００μＬを取り出した。自動セルカウンター装置とともに適切な標準操作手順を使用して、ＴＩＬを計数した。７日目に計数を記録した。試験したすべてのフィーダーロットについて、この手順を繰り返した。

フィーダー対照フラスコは、複製不全について評価し、ＴＩＬを含有するフラスコは、０日目からの倍率拡張について評価した。

７日目、フィーダー対照フラスコの１４日目までの継続フィーダー対照フラスコの７日目の計数を完了した後、３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含む１５ｍＬの新鮮なＣＭ２培地を対照フラスコの各々に追加した。対照フラスコをインキュベーターに戻し、１４日目まで直立位置でインキュベートした。

１４日目、フィーダー対照フラスコの長期非増殖インキュベーターからフラスコを取り出し、ＢＳＣに移し、フラスコの底部の細胞層を乱さないように注意した。フラスコの底部で成長する細胞を乱すことなく、各対照フラスコからおよそ１７ｍＬの培地を取り出した。５ｍＬの血清ピペットを使用して、残りの培地に細胞を再懸濁し、よく混合して細胞の塊をすべて破壊した。各フラスコについて、容量を記録した。

ピペッティングすることによって細胞懸濁液を完全に混合した後、細胞計数のために２００μＬを取り出した。ＴＩＬは、自動セルカウンター装置と併せて適切な標準操作手順を使用して計数し、計数を記録した。試験したすべてのフィーダーロットについて、この手順を繰り返した。

Ｂ．結果及び承認基準プロトコル
結果ガンマ線照射の線量は、フィーダー細胞を複製不全にするのに十分であった。すべてのロットは、評価基準を満たすことが予想され、また０日目と比較して、ＲＥＰ培養の７日目に残っているフィーダー細胞の総有効数の低減を示した。すべてのフィーダーロットは、ＲＥＰ培養の７日目までのＴＩＬ成長の１００倍拡張の評価基準を満たすことが予想された。フィーダー対照フラスコの１４日目の計数は、７日目に見られた非増殖傾向を継続すると予想された。

承認基準フィーダー細胞の各ロットについて試験された各複製ＴＩＬ株について、以下の承認基準が満たされた。承認は、以下の表７０に従って２倍であった。

３０ｎｇ／ｍＬのＯＫＴ３抗体及び３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下で培養した場合に、ＭＮＣフィーダー細胞の複製を不全にするのに十分な放射線量を評価した。複製不全は、ＲＥＰの７日目及び１４日目の自動細胞計数によって決定された総生細胞数（ＴＶＣ）によって評価した。

承認基準は、「成長なし」であり、これは、ＲＥＰの０日目に培養された最初の生細胞数から７日目及び１４日目に総生細胞数が増加していないことを意味する。

フィーダー細胞がＴＩＬ拡張をサポートする能力を評価した。ＴＩＬ成長は、ＲＥＰの０日目の培養開始からＲＥＰの７日目までの生細胞の倍率拡張の観点から測定された。自動細胞計数によって評価されるように、７日目に、ＴＩＬ培養物は最低１００倍の拡張を達成した（すなわち、ＲＥＰの０日目に培養された生ＴＩＬ細胞の総数の１００倍超）。

承認基準を満たさないＭＮＣフィーダーロットの偶発性試験ＭＮＣフィーダーロットが上で概説された承認基準のうちのいずれかを満たさなかった場合は、以下のステップを実行してロットを再試験し、単純な実験者エラーを原因として除外する。

ロットの衛星試験バイアルが２つ以上残っている場合は、ロットを再試験した。ロットの衛星試験バイアルが１つ残っているか、まったく残っていない場合、上記の承認基準に従ってロットは失敗であった。

適格となるには、問題のロット及び対照ロットが、上記の承認基準を達成する必要があった。これらの基準を満たすと、ロットは使用のために放出される。

実施例４：ＩＬ－２ストック溶液の調製
この実施例は、精製されて凍結乾燥された組換えヒトインターロイキン－２を、ｒｈＩＬ－２の使用を含むものを含む、本出願及び実施例に記載されるものすべてを含む、さらなる組織培養プロトコルでの使用に好適なストック試料に溶解するプロセスを説明する。

手順。０．２％酢酸溶液（ＨＡｃ）を調製する。２９ｍＬの滅菌水を、５０ｍＬのコニカルチューブに移す。１ｍＬの１Ｎ酢酸を、５０ｍＬのコニカルチューブに追加する。チューブを２～３回反転させることによって十分に混合する。Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐフィルターを使用した濾過によってＨＡｃ溶液を滅菌する。

ＰＢＳ中の１％ ＨＳＡを調製する。４ｍＬの２５％ ＨＳＡストック溶液を、１５０ｍＬの滅菌フィルターユニット内の９６ｍＬのＰＢＳに追加する。溶液を濾過し、４℃で保管する。調製したｒｈＩＬ－２の各バイアルについて、フォームに記入する。

ｒｈＩＬ－２ストック溶液を調製する（６×１０^６ＩＵ／ｍＬ最終濃度）。ｒｈＩＬ－２の各ロットは異なり、必要な情報は、以下のような製造業者の分析証明書（ＣＯＡ）に見出された：１）バイアル当たりのｒｈＩＬ－２の質量（ｍｇ）、２）ｒｈＩＬ－２の比活性（ＩＵ／ｍｇ）、及び３）推奨０．２％ ＨＡｃ再構成体積（ｍＬ）。

以下の等式を使用することによって、ｒｈＩＬ－２ロットに必要な１％ ＨＳＡの体積を計算することができる。

例えば、ＣｅｌｌＧｅｎｉｘのｒｈＩＬ－２ロット１０２００１２１ ＣＯＡによると、１ｍｇバイアルの比活性は、２５×１０^６ＩＵ／ｍｇである。ｒｈＩＬ－２を２ｍＬの０．２％ＨＡｃ中で再構成することが推奨される。

ＩＬ－２バイアルのゴム栓をアルコールワイプで拭いた。３ｍＬシリンジに取り付けた１６Ｇ針を使用して、推奨体積の０．２％ＨＡｃをバイアルに注入した。針を抜くときに栓が外れないように注意した。バイアルを３回反転させ、すべての粉末が溶解するまで回転させた。栓を慎重に取り外し、アルコールワイプ上に置いた。計算された容量の１％ ＨＳＡをバイアルに添加した。

ｒｈＩＬ－２溶液の保管。短期保管（７２時間未満）の場合、４℃でバイアルを保管した。長期保管（７２時間超）の場合、バイアルをより小さい体積に等分し、使用の準備が整うまで－２０℃でクライオバイアル内で保管した。凍結／解凍サイクルを回避した。調製日から６ヶ月後に有効期限が切れた。Ｒｈ－ＩＬ－２ラベルに、ベンダー及びカタログ番号、ロット番号、有効期限、オペレーターのイニシャル、濃度、ならびにアリコート体積を含めた。

実施例５：凍結保存プロセス
この実施例では、ＣｒｙｏＭｅｄ制御速度冷凍庫、モデル７４５４（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、本明細書に記載の手順で調製したＴＩＬの凍結保存プロセス方法について説明する。

使用した機器は以下の通りであった：アルミニウムカセットホルダーラック（ＣＳ７５０フリーザーバッグに対応）、７５０ｍＬバッグ用凍結保存カセット、低圧（２２ｐｓｉ）液体窒素タンク、冷蔵庫、熱電対センサー（バッグ用リボンタイプ）、及びＣｒｙｏＳｔｏｒｅ ＣＳ７５０冷凍バッグ（ＯｒｉＧｅｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。

凍結プロセスは、核形成から－２０℃まで０．５℃の速度、及び－８０℃の終了温度まで毎分１℃の冷却速度を提供する。プログラムパラメータは、以下の通りである：ステップ１－４℃で待つ、ステップ２：－４℃まで１．０℃／分（試料温度）、ステップ３：－４５℃まで２０．０℃／分（チャンバ温度）、ステップ４：－１０．０℃まで１０．０℃／分（チャンバ温度）、ステップ５：－２０℃まで０．５℃／分（チャンバ温度）、及びステップ６：－８０℃まで１．０℃／分（試料温度）。

実施例６：ＧＥＮ２及びＧＥＮ３の例示的なプロセス
この実施例は、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３のプロセスを示す。Ｇｅｎ２プロセス及びＧｅｎ３プロセスのＴＩＬは、一般に腫瘍の外科的切除によって個々の患者から得られ、その後、エクスビボで拡張された自己ＴＩＬで構成されている。Ｇｅｎ３プロセスのプライミングによる第１の拡張ステップは、インターロイキン－２（ＩＬ－２）及びモノクローナル抗体ＯＫＴ３の存在下での細胞培養であり、照射された末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の足場上のＴ細胞共受容体ＣＤ３を標的とする。

Ｇｅｎ２ ＴＩＬ製品の製造は、２つの相からなる：１）急速拡張前（ＲＥＰ前）及び２）急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）。ＲＥＰ前中に、切除腫瘍を、各寸法２～３ｍｍの≦５０個の断片に切断し、血清含有培養培地（１０％ＨｕＳＡＢを補充したＲＰＭＩ１６４０培地）及び６，０００ＩＵ／ｍＬのインターロイキン－２（ＩＬ－２）で１１日間培養した。１１日目にＴＩＬを採取し、大規模二次ＲＥＰ拡張に導入した。ＲＥＰは、５日間の３０００ＩＵ／ｍＬのｒｈＩＬ－２を補充した５Ｌ体積のＣＭ２中の１５０μｇのモノクローナル抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）を装填した５×１０^９個の照射された同種異系ＰＢＭＣフィーダー細胞の共培養におけるＲＥＰ前由来の２００×１０^６個以下の生細胞の活性化からなる。１６日目に、培養物を９０％減容し、細胞画分を１フラスコ当たり≧１×１０^９の生リンパ球で複数のＧ－Ｒｅｘ－５００フラスコに分割し、ＣＭ４で５ＬにＱＳする。ＴＩＬをさらに６日間インキュベートする。ＲＥＰを２２日目に採取し、洗浄し、製剤化し、凍結保存した後に、注入のために臨床現場に－１５０℃で発送する。

Ｇｅｎ３ ＴＩＬ製品の製造は、３つの相からなる：１）プライミングによる第１の拡張プロトコル、２）急速な第２の拡張プロトコル（急速拡張相またはＲＥＰとも称される）、及び３）継代培養分割。プライミングによる第１の拡張ＴＩＬ増殖を行うために、切除した腫瘍を各寸法２～３ｍｍ以下の≦１２０個の断片に切断した。プライミングによる第１の拡張の０日目に、ＯＫＴ－３を装填したおよそ２．５×１０^８個の照射された同種異系ＰＢＭＣフィーダー細胞のフィーダー層を、３つの１００ＭＣＳ容器の各々内のおよそ１００ｃｍ^２の表面積上に確立した。腫瘍断片を、各々が５００ｍＬの血清含有ＣＭ１培養培地及び６，０００ＩＵ／ｍＬのインターロイキン－２（ＩＬ－２）及び１５ｕｇのＯＫＴ－３を含む３つの１００ＭＣＳ容器に分布し、その中で７日間培養した。７日目に、ＯＫＴ－３を負荷したおよそ５×１０^８個の同種異系の照射されたＰＢＭＣフィーダー細胞の追加のフィーダー細胞層を、３つの１００ＭＣＳ容器の各々において腫瘍断片化培養相に組み込み、５００ｍＬのＣＭ２培養培地及び６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２及び３０μｇのＯＫＴ－３で培養することによってＲＥＰを開始した。ＲＥＰの開始を、１００ＭＣＳ容器へのＯＫＴ３を装填したフィーダー細胞の閉鎖系流体移送を使用して、同じ容器内のプライミングによる第１の拡張培養物全体を活性化することによって増強した。Ｇｅｎ３の場合、ＴＩＬのスケールアップまたは分割に、細胞培養物全体を閉鎖系流体移送によってより大きい容器にスケーリングし、移し（１００Ｍフラスコから５００Ｍフラスコに）、追加の４ＬのＣＭ４培地を添加するプロセスステップを含めた。１６日目にＲＥＰ細胞を採取し、洗浄し、製剤化し、凍結保存した後に、注入のために臨床現場に－１５０℃で発送する。

全体として、Ｇｅｎ３プロセスは、表７１に要約されるように、より短く、よりスケーラブルであり、かつ簡単に修正可能な拡張プラットフォームである。

０日目に、両方のプロセスについて、腫瘍を３回洗浄し、断片をランダム化し、２つのプールに分けた（プロセス毎に１つのプール）。Ｇｅｎ２プロセスの場合、断片を、６，０００ＩＵ／ｍＬのｒｈＩＬ－２を含有する１ＬのＣＭ１培地を含む１つのＧＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコに移した。Ｇｅｎ３プロセスでは、断片を、６，０００ＩＵ／ｍＬのｒｈＩＬ－２、１５ｕｇのＯＫＴ－３及び２．５×１０^８個のフィーダー細胞を含有する５００ｍＬのＣＭ１を含む１つのＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコに移した。Ｒｅｐ開始日のＴＩＬの播種は、各プロセスに従って異なる日に起こった。Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコを９０％減容したＧｅｎ２プロセスの場合、収集した細胞懸濁液を新たなＧ－ＲＥＸ５００ＭＣＳに移して、ＩＬ－２（３０００ＩＵ／ｍＬ）＋５×１０^９フィーダー細胞及びＯＫＴ－３（３０ｎｇ／ｍＬ）を含有するＣＭ２培地中で１１日目にＲＥＰを開始した。細胞を拡張し、プロトコルに従って１６日目にＩＬ－２（３０００ＩＵ／ｍＬ）を含有するＣＭ４培地を含む複数のＧ－ＲＥＸ５００ＭＣＳフラスコに分割した。その後、培養物を採取し、プロトコルに従って２２日目に凍結保存した。Ｇｅｎ３プロセスの場合、ＲＥＰの開始は７日目に起こり、同じＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳをＲＥＰの開始に使用した。簡潔には、ＩＬ－２（６０００ＩＵ／ｍＬ）及び５×１０^８個のフィーダー細胞を３０ｕｇのＯＫＴ－３とともに含有する５００ｍＬのＣＭ２培地を各フラスコに添加した。９～１１日目に、培養をスケールアップした。Ｇ－Ｒｅｘ１００Ｍの全体積（１Ｌ）をＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳに移し、ＩＬ－２（３０００ＩＵ／ｍＬ）を含有する４ＬのＣＭ４を添加した。フラスコを５日間インキュベートした。培養物を採取し、１６日目に凍結保存した。

比較には、２つの肺腫瘍（Ｌ４０５４及びＬ４０５５）と１つの黒色腫腫瘍（Ｍ１０８５Ｔ）の３つの異なる腫瘍を含めた。

Ｌ４０５４及びＬ４０５５の場合、ＣＭ１培地（培養培地１）、ＣＭ２培地（培養培地２）、及びＣＭ４培地（培養培地４）を事前に調製し、４℃で保持した。ＣＭ１培地及びＣＭ２培地を、培地を濾過した場合の細胞増殖と培地を濾過しなかった場合の細胞増殖を比較するために、濾過せずに調製した。

Ｌ４０５５腫瘍の場合、ＲＥＰの開始及びスケールアップ時に、培地を事前に３７℃で最大２４時間温めた。

結果達成された生細胞の総数について、Ｇｅｎ３の結果はＧｅｎ２の３０％以内であった。Ｇｅｎ３最終製品は、再刺激後により高いＩＮＦ－γ産生を示した。Ｇｅｎ３最終製品は、存在する固有の全ＣＤＲ３配列によって測定される、増加したクローンの多様性を示した。Ｇｅｎ３最終製品は、より長い平均テロメア長を示した。

Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスでのＲＥＰ前及びＲＥＰ拡張は、上記の手順に従った。各腫瘍について、２つのプールに同数の断片を含めた。腫瘍のサイズが小さいため、１フラスコ当たりの最大断片数は達成されなかった。総ＲＥＰ前細胞（ＴＶＣ）を採取し、Ｇｅｎ２プロセスの場合は１１日目に、Ｇｅｎ３プロセスの場合は７日目に計数した。２つのＲＥＰ前群を比較するために、細胞計数を培養物中に提供された断片の数で割り、１断片当たりの平均生細胞を計算した。以下の表７２に示されるように、Ｇｅｎ２プロセスは、Ｇｅｎ３プロセスと比較して、１断片当たりより多くの細胞を一貫して成長させた。ＲＥＰ前ＴＶＣを７で割り、その後、１１を掛けて計算した、１１日目にＧｅｎ３プロセスで予想されるＴＶＣ数の外挿計算。

Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスの場合、ＴＶＣをプロセス条件毎に計数し、生細胞パーセントをプロセス日毎に生成した。採取時に、２２日目（Ｇｅｎ２）及び１６日目（Ｇｅｎ３）の細胞を収集し、ＴＶＣ数を確立した。その後、ＴＶＣを０日目に提供された断片の数で割り、１断片当たりの平均生細胞を計算した。倍率拡張を、採取したＴＶＣをＲＥＰ開始ＴＶＣで割ることによって計算した。表７３に示されるように、Ｇｅｎ２プロセスとＧｅｎ３プロセスとを比較すると、倍率拡張はＬ４０５４の場合では同様であり、Ｌ４０５５の場合、倍率拡張はＧｅｎ２プロセスの方が高かった。具体的には、この場合、培地をＲＥＰ開始日の前に２４温めた。Ｍ１０８５Ｔの場合のＧｅｎ３でもより高い倍率拡張が観察された。ＲＥＰ ＴＶＣを１６で割り、その後、２２を掛けて計算した、２２日目にＧｅｎ３プロセスで予想されるＴＶＣ数の外挿計算。

採取時に、最終ＴＩＬ ＲＥＰ製品を生存率％の放出基準と比較し、結果を表７４に示す。Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスのすべての条件は、７０％の生存率基準を超えており、プロセス及び腫瘍間で同等であった。

１フラスコ当たりの断片の数が最大必要数未満であったため、表７５に示されるように、採取日の推定細胞数を腫瘍毎に計算した。推定は、臨床腫瘍が０日目に２つまたは３つのフラスコに播種するのに十分な大きさであるという予想に基づいた。

免疫表現型決定－ＴＩＬ最終製品の表現型マーカー比較。３つの腫瘍Ｌ４０５４、Ｌ４０５５、及びＭ１０８５Ｔは、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスの両方でＴＩＬ拡張を受けた。採取時に、ＲＥＰ ＴＩＬ最終製品をフローサイトメトリー分析にかけ、純度、分化、及びメモリーマーカーを試験した。すべての条件で、ＴＣＲ ａ／ｂ＋細胞パーセンテージは９０％超であった。

Ｇｅｎ３プロセスから採取したＴＩＬは、Ｇｅｎ２プロセスから採取したＴＩＬと比較して、より高いＣＤ８及びＣＤ２８発現を示した。Ｇｅｎ２プロセスは、より高いＣＤ４＋パーセンテージを示した。

Ｇｅｎ３プロセスから採取したＴＩＬは、Ｇｅｎ２プロセス由来のＴＩＬと比較して、セントラルメモリー区画でより高い発現を示した。

活性化及び疲弊マーカーを２つの腫瘍Ｌ４０５４及びＬ４０５５由来のＴＩＬで分析して、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３ ＴＩＬ拡張プロセス由来の最終ＴＩＬ製品を比較した。活性化及び疲弊マーカーは、Ｇｅｎ２プロセスとＧｅｎ３プロセスとの間で同等であった。

再刺激時のインターフェロンガンマ分泌採取日、Ｇｅｎ２の場合は２２日目、Ｇｅｎ３の場合は１６日目に、ＴＩＬは、Ｌ４０５４及びＬ４０５５の場合、コーティングした抗ＣＤ３プレートで一晩再刺激を受けた。Ｍ１０８５Ｔでの再刺激は、抗ＣＤ３、ＣＤ２８、及びＣＤ１３７ビーズを使用して行った。すべての条件で再刺激の２４時間後に上清を収集し、上清を凍結させた。ＥＬＩＳＡによるＩＦＮγ分析を、同じＥＬＩＳＡプレートを使用して両方のプロセス由来の上清で同時に評価した。分析した３つの腫瘍で、Ｇｅｎ３プロセス由来のＩＦＮγのより高い産生が観察された。

培養培地中のＩＬ－２レベルの測定Ｇｅｎ２プロセスとＧｅｎ３プロセスとの間のＩＬ－２消費量を比較するために、腫瘍Ｌ４０５４及びＬ４０５５で、ＲＥＰの開始時、スケールアップ時、及び採取日に細胞上清を収集した。細胞培養上清中のＩＬ－２の量を、Ｒ＆Ｄ製の定量化ＥＬＩＳＡキットによって測定した。一般的な傾向は、Ｇｅｎ２プロセスと比較して、Ｇｅｎ３プロセスではＩＬ－２濃度が高いままであることを示す。これは、プロセス全体を通して培地のキャリーオーバーと相まってＧｅｎ３のＲＥＰ開始時のＩＬ－２濃度がより高い（６０００ＩＵ／ｍＬ）ことに起因する可能性がある。

代謝基質及び代謝物分析Ｄ－グルコース及びＬ－グルタミンなどの代謝基質のレベルを、全培地消費量の代わりに測定した。乳酸及びアンモニアなどのそれらの相互代謝物を測定した。グルコースは、ＡＴＰの形態でエネルギーを産生するためにミトコンドリアによって利用される培地中の単糖である。グルコースが酸化されると、乳酸が産生される（乳酸塩は乳酸のエステルである）。乳酸塩は、細胞の指数関数的成長期中に強く産生される。高レベルの乳酸塩は、細胞培養プロセスに悪影響を及ぼす。

Ｌ４０５４及びＬ４０５５の使用済み培地を、Ｇｅｎ２プロセス及びＧｅｎ３プロセスの両方で、ＲＥＰ開始時、スケールアップ時、及び採取日に収集した。使用済み培地の収集は、Ｇｅｎ２の場合は１１日目、１６日目、及び２２日目、Ｇｅｎ３の場合は７日目、１１日目、及び１６日目であった。上清を、グルコース、乳酸、グルタミン、ＧｌｕｔａＭａｘ、及びアンモニアの濃度についてＣＥＤＥＸバイオアナライザーで分析した。

Ｌ－グルタミンは、細胞培養培地製剤に必要な不安定な必須アミノ酸である。グルタミンにはアミンが含まれており、このアミド構造基は、窒素を細胞に輸送して送達することができる。Ｌ－グルタミンが酸化すると、細胞によって有毒なアンモニア副産物が産生される。Ｌ－グルタミンの分解に対抗するために、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスの培地に、水溶液中でより安定しており、かつ自発的に分解しないＧｌｕｔａＭａｘを補充した。２つの腫瘍株では、Ｇｅｎ３アームは、プロセス中のＬ－グルタミン及びＧｌｕｔａＭａｘの減少、ならびにＲＥＰ全体でアンモニアの増加を示した。Ｇｅｎ２アームでは、Ｌ－グルタミン及びＧｌｕｔａＭａｘの濃度が一定であり、アンモニア産生のわずかな増加が観察された。Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３のプロセスは、アンモニアについて採取日に同等であり、Ｌ－グルタミン分解にわずかな違いが見られた。

テロメアは、Ｆｌｏｗ－ＦＩＳＨによって繰り返される。Ｆｌｏｗ－ＦＩＳＨ技術を使用して、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスでのＬ４０５４及びＬ４０５５のテロメア反復の平均長を測定した。相対テロメア長（ＲＴＬ）の決定を、ＤＡＫＯ製のフローサイトメトリー分析用Ｔｅｌｏｍｅｒｅ ＰＮＡキット／ＦＩＴＣを使用して計算した。Ｇｅｎ３は、Ｇｅｎ２と同等のテロメア長を示した。

ＣＤ３分析各プロセスで生成された細胞製品のクローン多様性を決定するために、Ｌ４０５４及びＬ４０５５の採取したＴＩＬ最終製品をサンプリングし、Ｔ細胞受容体のＣＤＲ３部分の配列決定によるクローン多様性分析についてアッセイした。

表７６は、採取したＴＩＬ細胞製品のＬ４０５４における共有される固有のＣＤＲ３配列パーセンテージに関するＧｅｎ２とＧｅｎ３との比較を示す。１９９個の配列がＧｅｎ３最終製品とＧｅｎ２最終製品との間で共有され、Ｇｅｎ３最終製品と共有されるＧｅｎ２由来の固有のＣＤＲ３配列の上位８０％の９７．０７％に相当する。

表７７は、採取したＴＩＬ細胞製品のＬ４０５５における共有される固有のＣＤＲ３配列パーセンテージに関するＧｅｎ２とＧｅｎ３との比較を示す。１８３３個の配列がＧｅｎ３最終製品とＧｅｎ２最終製品との間で共有され、Ｇｅｎ３最終製品と共有されるＧｅｎ２由来の固有のＣＤＲ３配列の上位８０％の９９．４５％に相当する。

ＣＭ１及びＣＭ２培地は、濾過せずに事前に調製し、腫瘍Ｌ４０５５の場合、Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスで使用するまで４℃で保持した。

Ｇｅｎ２及びＧｅｎ３プロセスのＲＥＰ開始日に、腫瘍Ｌ４０５５の場合、培地を３７℃で事前に２４時間温めた。

これらのプロセスで収集した上清中にＬＤＨは測定されなかった。

Ｍ１０８５Ｔ ＴＩＬ細胞計数を、Ｋ２ ｃｅｌｌｏｍｅｔｅｒ細胞カウンターを使用して実行した。

腫瘍Ｍ１０８５Ｔでは、代謝分析用の上清、活性化及び疲弊マーカー分析用のＴＩＬ製品、テロメア長、及びＣＤ３－ＴＣＲｖｂ分析などの試料は入手できなかった。

結論この実施例では、３つの独立したドナー腫瘍組織を、機能的品質属性に加えて、拡張された表現型特徴付け、ならびにＧｅｎ２プロセス及びＧｅｎ３プロセス間の培地消費に関して比較する。

Ｇｅｎ２とＧｅｎ３のＲＥＰ前及びＲＥＰ拡張比較を、生成された全生細胞及び全有核細胞集団の生存率に関して評価した。採取日のＴＶＣ細胞用量は、Ｇｅｎ２（２２日）とＧｅｎ３（１６日）との間で同等ではなかった。Ｇｅｎ３細胞用量は、採取時に収集した全生細胞の約４０％であり、Ｇｅｎ２よりも低かった。

ＲＥＰ前採取は、７日目ではなく１１日目に起こり、ＲＥＰ採取は、１６日目ではなく２２日目に起こると仮定して、Ｇｅｎ３プロセスの外挿細胞数を計算した。どちらの場合も、Ｇｅｎ３は、Ｇｅｎ２プロセスと比較してＴＶＣの数値が近いことを示し、これは初期の活性化により、ＴＩＬの成長に対する全体的な性能が向上する可能性があることを示す。

Ｇｅｎ３プロセスでの追加フラスコ（２つまたは３つ）の外挿値の場合、処理される腫瘍サイズがより大きいと仮定し、記載されるようにプロセス毎に必要な最大断片数に到達する。２２日目のＧｅｎ２プロセスと比較して、Ｇｅｎ３プロセスの１６日目の採取時にＴＶＣで同様の用量に到達可能であり得ることが観察された。この観察は重要であり、培養物の初期活性化により、より短い処理時間でより良好なＴＩＬ性能が可能になり得ることを示す。

Ｇｅｎ２とＧｅｎ３のＲＥＰ前及びＲＥＰ拡張比較を、生成された全生細胞及び全有核細胞集団の生存率に関して評価した。採取日のＴＶＣ細胞用量は、Ｇｅｎ２（２２日）とＧｅｎ３（１６日）との間で同等ではなかった。Ｇｅｎ３細胞用量は、採取時に収集した全生細胞の約４０％であり、Ｇｅｎ２よりも低かった。

表現型特徴付けに関して、Ｇｅｎ２プロセスと比較してＧｅｎ３プロセスでの３つの腫瘍でより高いＣＤ８＋及びＣＤ２８＋発現が観察された。このデータは、Ｇｅｎ３プロセスがＧｅｎ２と比較して改善されたＴＩＬ最終製品の属性を有することを示す。

Ｇｅｎ３プロセスは、Ｇｅｎ２プロセスと比較してわずかに高いセントラルメモリー区画を示した。

Ｇｅｎ２プロセス及びＧｅｎ３プロセスは、Ｇｅｎ３プロセスの持続期間がより短いにもかかわらず、同等の活性化及び疲弊マーカーを示した。

ＩＦＮガンマ（ＩＦＮγ）産生は、分析した３つの腫瘍において、Ｇｅｎ２と比較してＧｅｎ３最終製品において３倍高かった。このデータは、Ｇｅｎ３プロセスがＧｅｎ２プロセスと比較して高機能でより強力なＴＩＬ製品を生成したことを示し、Ｇｅｎ３でのＣＤ８及びＣＤ２８発現がより高いことに起因する可能性がある。表現型特徴付けは、Ｇｅｎ２プロセスと比較して３つの腫瘍でＣＤ８＋、ＣＤ２８＋発現へのＧｅｎ３の肯定的な傾向を示唆した。

Ｇｅｎ２とＧｅｎ３との間のＴＩＬ最終製品のテロメア長は同等であった。

グルコース及び乳酸塩レベルは、Ｇｅｎ２最終製品とＧｅｎ３最終製品との間で同等であり、プロセス日毎に減容除去が実行されなかったこと、及びＧｅｎ２と比較してプロセスにおける培地全体の体積が少ないことに起因して、Ｇｅｎ３プロセスの培地の栄養素レベルが影響されなかったことを示唆する。

全体として、Ｇｅｎ３プロセスは、Ｇｅｎ２プロセスと比較してほぼ２倍の処理時間の短縮を示し、これにより、Ｇｅｎ３プロセスによって拡張されたＴＩＬ製品の売上原価（ＣＯＧ）の有意な削減がもたらされるであろう。

ＩＬ－２消費は、Ｇｅｎ２プロセスでのＩＬ－２消費の一般的な傾向を示しており、Ｇｅｎ３プロセスでは、古い培地が除去されなかったため、ＩＬ－２が高かった。

Ｇｅｎ３プロセスは、ＣＤＲ３ ＴＣＲａｂ配列分析によって測定されたより高いクローン多様性を示した。

Ｇｅｎ３プロセスを使用して、ＲＥＰ前の０日目のフィーダー及びＯＫＴ－３の添加により、ＴＩＬの初期活性化及びＴＩＬ成長における全体的により良好な性能が可能になった。

表７８は、現在のＧｅｎ２プロセスと比較したＧｅｎ３プロセスの様々な実施形態及び成果を説明する。

実施例７：０日目のＧｅｎ３拡張プロセスの例示的な実施形態
腫瘍洗浄培地を調製した。培地を開始前に温めた。５ｍＬのゲンタマイシン（５０ｍｇ／ｍＬ）を５００ｍＬボトルのＨＢＳＳに添加した。５ｍＬの腫瘍洗浄培地を、ＯＫＴ３希釈に使用する１５ｍＬのコニカルに添加した。室温（ＲＴ）で保管する。

フィーダー細胞バッグを調製した。フィーダー細胞をフィーダー細胞バッグに無菌で移し、使用するまで３７℃で保管するか、または凍結させた。３７℃の場合、フィーダー細胞をカウントした。凍結した場合は、解凍した後、フィーダー細胞をカウントした。

フィーダー細胞濃度の最適範囲は、５×１０^４～５×１０^６細胞／ｍＬである。４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖを含む４つのコニカルチューブを準備した。各細胞計数について０．５ｍＬの細胞画分を追加した。

総生フィーダー細胞数が≧１×１０^９細胞であった場合、次のステップに進んでフィーダー細胞濃度を調整した。フィーダー細胞の体積を計算し、第１のフィーダー細胞バッグから取り出して、１×１０^９細胞を第２のフィーダー細胞バッグに添加した。

ｐ１０００マイクロピペットを使用して、９００μＬの腫瘍洗浄培地をＯＫＴ３アリコート（１００μＬ）に移した。シリンジ及び滅菌技法を使用して、０．６ｍＬのＯＫＴ３を吸引し、第２のフィーダー細胞バッグに添加した。培地体積を全体積２Ｌに調整した。第２のフィーダー細胞バッグをインキュベーターに移した。

ＯＫＴ３製剤の詳細：ＯＫＴ３は、１００μＬアリコート中のバイアル（１ｍｇ／ｍＬ）からの元のストック濃度でアリコートされ、凍結されてもよい。１ｍＬバイアル当たり約１０×アリコート。－８０℃で保管した。０日目：１５μｇ／フラスコ、すなわち５００ｍＬ中３０ｎｇ／ｍＬ～６０μＬ最大約１アリコート。

腫瘍試料を調製した。６ウェルプレート及び１００ｍｍペトリ皿（合計４枚）を入手した。６ウェルプレートに「過剰腫瘍片」とラベル付けした。４枚の１００ｍｍペトリ皿の各々に「洗浄＿０１」、「洗浄＿０２」、「洗浄＿０３」、「洗浄＿０４」、及び「保持」とラベル付けした。

５ｍＬの腫瘍洗浄培地を、過剰腫瘍片とラベル付けした６ウェルプレートのすべてのウェルに添加した。解剖中に腫瘍を水和状態に保持する際に、腫瘍洗浄培地をさらなる使用のために利用可能にした。

５０ｍＬの腫瘍洗浄培地を、洗浄＿０１、洗浄＿０２、洗浄＿０３、及び保持というラベルの付いた各１００ｍｍペトリ皿に添加した。マーカーを使用して、各ペトリ皿に解剖１～解剖４とラベル付けする。腫瘍を洗浄＿０１で≧３分間、周囲温度でインキュベートした。腫瘍を洗浄＿０２で≧３分間、周囲温度でインキュベートした。腫瘍を洗浄＿０３で≧３分間、周囲温度でインキュベートした。洗浄が完了した後、腫瘍を「保持」皿に移して、組織が水和したままであることを確認する。

腫瘍インキュベーションが進行中の間、１０ｍＬの腫瘍発送培地を腫瘍発送培地とラベル付けした管に移した。１０ｍＬの腫瘍発送培地をシリンジ内に引き込み、各嫌気性及び好気性滅菌ボトルに５ｍＬの腫瘍発送培地を接種した。

解剖プロセス全体を通して、ペトリ皿のふたの下に定規を置いた。腫瘍の長さ及び断片の数を測定し、記録した。腫瘍を４つの中間片に解剖するか、または同等の体積の４つの群に分類し、各中間片の腫瘍構造を保存した。腫瘍片を水和状態で保つ。

組織を水和状態で保つために、活発に解剖されていない中間腫瘍片を保持皿に移した。

解剖皿のふたの下の定規を参照として使用して、腫瘍を２７ｍｍ^３断片（３×３×３ｍｍ）に解剖した。６０個の断片に達するまで中間断片を解剖した。生成した最終断片の数に応じて、最終断片の総数を計数し、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコを調製した（一般に、１フラスコ当たり６０個の断片）。

断片チューブ１～断片チューブ４とラベル付けしたコニカルチューブ内に好ましい組織断片を保持した。起源とする断片チューブの数に応じて、フィーダー細胞懸濁液を播種するＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコの数を計算した。

フィーダー細胞バッグをインキュベーターから取り出し、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳを播種する。Ｄ０（０日目）とラベル付けする。

Ｇ－Ｒｅｘ－１００ＭＣＳ中の培養物への腫瘍断片の追加。滅菌条件下で、腫瘍断片培養（Ｄ０）１とラベル付けしたＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ及び断片チューブとラベル付けした５０ｍＬのコニカルチューブのキャップを緩めた。開いた断片チューブ１を回転させ、同時にＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳのキャップをわずかに持ち上げた。断片を含む培地を、回転している間にＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳに添加した。Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳに移送された断片の数を記録した。

断片がＧＲＥＸフラスコの底に配置された時点で、７ｍＬの培地を吸引し、７つの１ｍＬアリコートを作製した（拡張された特徴付け用に５ｍＬ、滅菌試料用に２ｍＬ）。拡張された特徴付け用の５つのアリコート（最終断片培養上清）を、必要になるまで－２０℃で保管した。

１本の嫌気性ＢａｃＴ／Ａｌｅｒｔボトル及び１本の好気性ＢａｃＴ／Ａｌｅｒｔボトルに各々１ｍＬの最終断片培養上清を接種した。サンプリングしたフラスコ毎に繰り返す。

実施例８：７～８日目のＧｅｎ３拡張プロセスの例示的な実施形態
フィーダー細胞バッグを調製した。凍結時に３７℃の水浴中で３～５分間フィーダーバッグを解凍した。凍結している場合、フィーダー細胞を計数した。

フィーダー細胞濃度の最適範囲は、５×１０^４～５×１０^６細胞／ｍＬである。４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖを含む４つのコニカルチューブを準備した。各細胞計数について０．５ｍＬの細胞画分を新しいクライオバイアル管に追加した。試料を十分に混合し、細胞計数を続けた。

総生フィーダー細胞数が≧２×１０^９細胞であった場合、次のステップに進んでフィーダー細胞濃度を調整した。フィーダー細胞の体積を計算し、第１のフィーダー細胞バッグから取り出して、２×１０^９細胞を第２のフィーダー細胞バッグに追加した。

ｐ１０００マイクロピペットを使用して、９００μＬのＨＢＳＳを１００μＬのＯＫＴ３アリコートに移す。上下に３回ピペッティングして混合する。２つのアリコートを調製した。

ＯＫＴ３製剤の詳細：ＯＫＴ３は、１００μＬアリコート中のバイアル（１ｍｇ／ｍＬ）からの元のストック濃度でアリコートされ、凍結されてもよい。１ｍＬバイアル当たり約１０×アリコート。－８０℃で保管した。７日目／８日目：３０μｇ／フラスコ、すなわち５００ｍＬ中６０ｎｇ／ｍＬ～１２０μｌ最大約２アリコート。

シリンジ及び滅菌技法を使用して、０．６ｍＬのＯＫＴ３を吸引し、フィーダー細胞バッグに添加して、すべて添加されたことを確認した。培地量を合計２Ｌに調整した。第２のＯＫＴ３アリコートで繰り返し、フィーダー細胞バッグに追加した。第２のフィーダー細胞バッグをインキュベーターに移した。

フィーダー細胞懸濁液を含むＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳフラスコの準備。０日目に生成されたＧ－Ｒｅｘフラスコの数に従って処理するためにＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコの数を記録した。Ｇ－Ｒｅｘフラスコをインキュベーターから取り出し、第２のフィーダー細胞バッグをインキュベーターから取り出した。

フィーダー細胞懸濁液を添加する前の上清の除去：１本の１０ｍＬシリンジをＧ－Ｒｅｘ１００フラスコに接続し、５ｍＬの培地を吸引した。５つの１ｍＬアリコート（拡張された特徴付け用に５ｍＬ）を作製し、治験依頼者からの要求があるまで、拡張された特徴付け用に５つのアリコート（最終断片培養上清）を－２０℃で保管した。各Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコにラベル付けし、繰り返した。

フラスコの数に応じて、特徴付け用の５～２０×１ｍＬ試料を調製する：
●５ｍＬ＝１フラスコ
●１０ｍＬ＝２フラスコ
●１５ｍＬ＝３フラスコ
●２０ｍＬ＝４フラスコ

フィーダー細胞をＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳに播種し続け、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコ毎に繰り返した。滅菌移送法を使用して、各Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳフラスコに重量で５００ｍＬの第２のフィーダー細胞バッグを重力移送し（１ｇ＝１ｍＬと想定）、量を記録した。７日目培養とラベル付けし、Ｇ－Ｒｅｘ１００フラスコ毎に繰り返した。Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコをインキュベーターに移した。

実施例９：１０～１１日目のＧｅｎ３拡張プロセスの例示的な実施形態
第１のＧ－ＲＥＸ１００ＭＣＳフラスコを取り出し、滅菌条件を使用して、１０ｍＬシリンジを使用して７ｍＬの前処理培養上清を除去した。７つの１ｍＬアリコートを作製した（拡張された特徴付け用に５ｍＬ、滅菌試料用に２ｍＬ）。

フラスコを注意深く混合し、新たな１０ｍＬシリンジを使用して１０ｍＬの上清を取り出し、Ｄ１０／１１マイコプラズマ上清とラベル付けした１５ｍＬのチューブに移す。

フラスコを注意深く混合し、新しい注射器を使用して、処理されるフラスコの数に応じて以下の量を除去した。
●１フラスコ＝４０ｍＬ
●２フラスコ＝２０ｍＬ／フラスコ
●３フラスコ＝１３．３ｍＬ／フラスコ
●４フラスコ＝１０ｍＬ／フラスコ

合計４０ｍＬをすべてのフラスコから取り出し、「１０／１１日目ＱＣ試料」とラベル付けした５０ｍＬのコニカルチューブにプールし、必要になるまでインキュベーター内で保管すべきである。細胞計数を行い、細胞を割り当てた。

必要になるまで≦－２０℃で拡張された特徴付けのために５つのアリコート（前処理培養上清）を保管した。１本の嫌気性ＢａｃＴ／Ａｌｅｒｔボトル及び１本の好気性ＢａｃＴ／Ａｌｅｒｔボトルに各々１ｍＬの前処理培養上清を接種した。

細胞懸濁液をＧ－ＲＥＸ５００ＭＣＳに移し、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳ毎に繰り返した。滅菌条件を使用して、各Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳの内容物をＧ－ＲＥＸ５００ＭＣＳに移し、一度に約１００ｍＬの液体移送を監視した。Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳの容量が５００ｍＬに低減したとき、移送を停止した。

移送ステップ中、１０ｍＬシリンジを使用し、Ｇ－ＲＥＸ１００ＭＣＳからシリンジに１０ｍＬの細胞懸濁液を吸引した。培養中のフラスコの数に従って指示に従った。１つのフラスコのみの場合：２つのシリンジを使用して合計２０ｍＬを取り出した。フラスコが２つの場合：１フラスコ当たり１０ｍＬを取り出した。フラスコが３つの場合：１フラスコ当たり７ｍＬを取り出した。フラスコが４つの場合：１フラスコ当たり５ｍＬを取り出した。細胞懸濁液を１本の一般的な５０ｍＬのコニカルチューブに移した。細胞計数ステップ及びＱＣ試料までインキュベーター内で保管する。ＱＣに必要な細胞の総数は、約２０ｅ６細胞であった：４×０．５ｍＬの細胞計数（細胞計数を最初に希釈しなかった）。

アッセイに必要な細胞の量は、以下の通りである。
●本明細書に記載されるものなどの効力アッセイ、またはＩＦＮ－γもしくはグランザイムＢアッセイの場合、最小１０×１０^６細胞
●マイコプラズマの場合、１×１０^６細胞
●ＣＤ３＋／ＣＤ４５＋のフローサイトメトリーの場合、５×１０^６細胞

Ｇ－ＲＥＸ５００ＭＣＳフラスコをインキュベーターに移した。

ＱＣ試料を調製した。この実施形態のアッセイには少なくとも１５×１０^８細胞が必要であった。アッセイは、細胞計数及び生存率、マイコプラズマ（１×１０^６細胞／平均生存濃度）、フロー（５×１０^６細胞／平均生存濃度）及びＩＦＮ－ｇアッセイ（５×１０^６細胞～１×１０^６細胞を含み、８～１０×１０^６細胞が、ＩＦＮ－γアッセイに必要である。

１０×１０^６細胞／ｍＬで凍結保存のための細胞画分の体積を計算し、調製するバイアルの数を計算した。

実施例１０：１６～１７日目のＧｅｎ３拡張プロセスの例示的な実施形態
洗浄緩衝液の調製（１％ ＨＳＡ Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ Ａ）。ＨＳＡ及びＰｌａｓｍａｌｙｔｅを５Ｌバッグに移して、ＬＯＶＯ洗浄緩衝液を作製した。滅菌条件を使用して、総体積１２５ｍＬの２５％ＨＳＡを５Ｌバッグに移した。室温で保管した。

１０ｍＬまたは４０ｍＬの洗浄緩衝液を取り出し、「ＩＬ－２ ６×１０^４ＩＵ／ｍＬ」チューブに移した（ＩＬ－２を事前に調製した場合は１０ｍＬ、ＩＬ－２を新たに調製した場合は４０ｍＬ）。

Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅ＋１％ ＨＳＡに添加する再構成ＩＬ－２の量を計算した：再構成ＩＬ－２の量＝（ＩＬ－２の最終濃度×最終体積）／ＩＬ－２の比活性（標準アッセイに基づく）。ＩＬ－２の最終濃度は、６×１０^４ＩＵ／ｍＬであった。最終体積は、４０ｍＬであった。

再構成ＩＬ－２に必要なＩＬ－２の計算された初期体積を取り出し、「ＩＬ－２ ６×１０^４ＩＵ／ｍＬ」チューブに移した。事前に調製したアリコートから１００μＬのＩＬ－２ ６×１０^６ＩＵ／ｍＬを、１０ｍＬのＬＯＶＯ洗浄緩衝液を含有する「ＩＬ－２ ６×１０^４ＩＵ／ｍＬ」とラベル付けしたチューブに追加した。

約４５００ｍＬの上清をＧ－ＲＥＸ５００ＭＣＳフラスコから取り出した。残りの上清を回転させ、細胞を細胞収集プールバッグに移した。すべてのＧ－ＲＥＸ５００ＭＣＳフラスコで繰り返した。

６０ｍＬの上清を除去し、マイコプラズマ検出を含む品質管理アッセイのために上清チューブに添加した。＋２～８℃で保管した。

細胞収集細胞を計数した。４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖを含む４つの１５ｍＬコニカルバイアルを準備する。これらは、事前に準備してもよい。最適な範囲は、５×１０^４～５×１０^６細胞／ｍＬである。（１：１０希釈が推奨された）。１：１０希釈の場合、事前に調製した４５００μＬのＡＩＭ Ｖに、５００μＬのＣＦを追加する。希釈倍率を記録した。

ＴＣ（総細胞）ＬＯＶＯ前（生＋死）を計算した＝
平均総細胞
濃度（ＴＣ濃度ＬＯＶＯ前）
（生＋死）
Ｘ
ソースバッグの体積

ＴＶＣ（総生細胞）ＬＯＶＯ前（生）を計算した＝
平均総生細胞
濃度（ＴＶＣ ＬＯＶＯ前）
（生）
Ｘ
ＬＯＶＯソースバッグの体積

総細胞（ＴＣ）数が５×１０^９超であった場合、５×１０^８細胞を取り出して、ＭＤＡ保持試料として凍結保存する。５×１０^８÷平均ＴＣ濃度（ステップ１４．４４）＝取り出す体積

総細胞（ＴＣ）数が≦５×１０^９であった場合、４×１０^６細胞を取り出して、ＭＤＡ保持試料として凍結保存する。４×１０^６÷平均ＴＣ濃度＝取り出す体積。

適切なサイズのシリンジを使用して、ＬＯＶＯソースバッグから必要な体積を取り出した。凍結保存ステップまでインキュベーター内で保持した。

総細胞数が決定された場合、取り出す細胞の数は、１５０×１０^９生細胞の保持を可能にすべきである。ＴＶＣ ＬＯＶＯ前５×１０^８もしくは４×１０^６を確認するか、または該当なしである。取り出す細胞の体積量を計算した。

バッグに残っている残りの総細胞を計算した。ＴＣ（総細胞）ＬＯＶＯ前を計算した。［平均総細胞濃度×残りの体積＝残りのＴＣ ＬＯＶＯ前］を計算した。

残存する細胞の総数に従って、表７９の対応するプロセスを選択する。

使用したプロセスに対応して添加するＩＬ－２の量を選択する。次のように計算された体積：保持量×２×３００ＩＵ／ｍＬ＝必要とされるＩＬ－２のＩＵ。必要なＩＬ－２のＩＵ／６×１０^４ＩＵ／ｍＬ＝ＬＯＶＯ後バッグに追加するＩＬ－２の体積。添加したすべての体積を記録した。さらなる分析のために試料をクライオバイアル内に得た。

細胞製品を十分に混合した。該当する場合、凍結保存を含むさらなる処理のためにすべてのバッグを密封した。

得られたクライオバイアル試料に対して、内毒素、ＩＦＮ－γ、無菌性、及び必要に応じて他のアッセイを行った。

実施例１１：例示的なＧＥＮ３プロセス（ＧＥＮ３．１とも称される）
この実施例は、「ＴＩＬ拡張のためのＧｅｎ２プロセスとＧｅｎ３プロセスとの間の比較可能性」に関するさらなる研究について説明する。Ｇｅｎ３プロセスを、以前に見られたような表現型及び機能プロファイルを維持しながら、最終総生細胞（ＴＶＣ）出力をＧｅｎ２におけるものと同等（またはそれ以上）であるように増やすことを目的として、プロセスの初期に活性化ステップを含むように修正した。

この実施例の範囲は、０日目の培養腫瘍断片に対する活性化ステップを導入によるＴＶＣ出力の評価、２つの独立した患者腫瘍にわたってＧｅｎ３標準及び対照群での機能的かつ拡張された表現型特徴付けに関して比較可能性を実証すること、ならびに処理パラメータが生理学的条件で維持されたことを確認するための培地消費及び代謝物産生の分析を含む。

この実施例のすべての実行は、市販のドナー腫瘍組織を出発材料として使用して、フルスケールプラットフォームで行った。

Ｇｅｎ３実施形態をさらなる実施形態として修正し、本明細書ではこの実施例においてＧｅｎ３．１と称する。

ある実施形態では、Ｇｅｎ３．１ ＴＩＬ製造プロセスは、以下の４つのオペレーター介入を有する。

１）腫瘍断片の単離及び活性化：プロセスの０日目に腫瘍を解剖し、最終断片を各々約３×３ｍｍ（合計で最大２４０個の断片）を生成し、１～４つのＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳフラスコ内で培養した。各フラスコは、最大６０個の断片、６，０００ＩＵのｒｈＩＬ－２、１５μｇのＯＫＴ３、及び２．５×１０^８個の照射された同種異系単核細胞を補充した５００ｍＬのＣＭ１またはＤＭ１培地を含んだ。培養物を３７℃で６～８日間インキュベートした。

２）ＴＩＬ培養再活性化：７～８日目に、いずれの場合も６，０００ＩＵのｒｈＩＬ－２、３０μｇのＯＫＴ３、及び５×１０^８個の照射された同種異系単核細胞を補充したＣＭ２またはＤＭ１培地をゆっくり添加することによって、培養物を補充した。フラスコの底にある既存の細胞を乱さないように注意した。培養物を３７℃で３～４日間インキュベートした。

３）培養のスケールアップ：１０～１１日目に生じる。培養のスケールアップ中に、Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳの全内容物を、いずれの場合も３，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した４ＬのＣＭ４またはＤＭ２を含むＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳフラスコに移した。採取するまでフラスコを３７℃で５～６日間インキュベートした。

４）採取／洗浄／製剤化：１６～１７日目に、フラスコを減容させ、プールする。細胞を濃縮し、１％ＨＳＡを含有するＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ ｐＨ７．４で洗浄した。洗浄した細胞懸濁液を、ＣｒｙｏＳｔｏｒ１０と１：１の比で配合し、３００ＩＵ／ｍＬの最終濃度までｒｈＩＬ－２を補充した。

ＤＰを制御された速度の凍結で凍結保存し、気相液体窒素中で保管した。＊完全標準ＴＩＬ培地１、２、または４（ＣＭ１、ＣＭ２、ＣＭ４）は、上記のように、合成培地（ＤＭ１またはＤＭ２）と称されるＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ細胞無血清拡張培地の代用となり得た。

プロセスの説明０日目に、腫瘍を３回洗浄し、その後、３×３×３の最終断片に断片化した。全腫瘍を断片化した時点で、最終断片を均等にランダム化し、３つのプールに分割した。１つのランダム化断片プールを各群に導入し、３つの実験マトリックス毎に同じ数の断片を添加した。

全ＴＩＬ拡張プロセスにわたって、腫瘍Ｌ４０６３拡張を標準培地で行い、腫瘍Ｌ４０６４拡張を合成培地（ＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ）で行った。培地の成分を本明細書に記載する。

ＣＭ１完全培地１：２ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ、１０％ヒトＡＢ血清、ゲンタマイシン（５０ｕｇ／ｍＬ）、２－メルカプトエタノール（５５ｕＭ）を補充したＲＰＭＩ＋グルタミン。６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した最終培地製剤

ＣＭ２完全培地２：５０％ ＣＭ１培地＋５０％ ＡＩＭ－Ｖ培地。６０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した最終培地製剤

ＣＭ４完全培地４：Ｇｌｕｔａｍａｘ（２ｍＭ）を補充したＡＩＭ－Ｖ。３０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した最終培地製剤

ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（２６ｍＬ／Ｌ）を補充したＣＴＳ ＯｐＴｍｉｚｅｒ ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ。

ＤＭ１：ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（２６ｍＬ／Ｌ）、及びＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ（３％）をＧｌｕｔａｍａｘ（２ｍＭ）とともに補充したＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ。６，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した最終製剤。

ＤＭ２：ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（２６ｍＬ／Ｌ）、及びＣＴＳ（商標）Ｉｍｍｕｎｅ Ｃｅｌｌ ＳＲ（３％）をＧｌｕｔａｍａｘ（２ｍＭ）とともに補充したＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ。３，０００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を補充した最終製剤。

使用したすべてのタイプの培地、すなわち、完全培地（ＣＭ）及び合成培地（ＤＭ）を事前に調製し、使用前日まで４℃で保持し、プロセス日前に事前に最長２４時間にわたってインキュベーター内で３７℃で温めた。

ＴＩＬ培養再活性化は、両方の腫瘍で７日目に起こった。スケールアップは、Ｌ４０６３では１０日目、Ｌ４０６４では１１日目に起こった。両方の培養物を採取し、１６日目に凍結保存した。

達成した結果Ｇｅｎ３．０プロセス及びＧｅｎ３．１プロセスの細胞計数及び生存率％を決定した。すべての条件下での拡張は、この実施例に説明される詳細に従った。

腫瘍毎に、断片を同数の３つのプールに分割した。腫瘍のサイズが小さいため、１フラスコ当たりの断片の最大数は達成されなかった。３つの異なるプロセスについて、総生細胞及び細胞生存率を条件毎に評価した。細胞計数を、７日目の再活性化のＴＶＣ、１０日目（Ｌ４０６４）または１１日目（Ｌ４０６３）のスケールアップのＴＶＣ、及び１６／１７日目の採取時のＴＶＣとして決定した。

７日目及び１０／１１日目の細胞計数をＦＩＯで測定した。倍率拡張を、１６／１７日目の採取時のＴＶＣを７日目の再活性化日のＴＶＣで割ることによって計算した。３つの群を比較するために、採取日のＴＶＣを、０日目の培養物中に添加した断片の数で割って、１断片当たりの生細胞の平均を計算した。

Ｌ４０６３及びＬ４０６４について、細胞計数及び生存率アッセイを行った。Ｇｅｎ３．１－試験プロセスは、両方の腫瘍でＧｅｎ３．０プロセスよりも多くの１断片当たりの細胞数をもたらした。

総生細胞数及び倍率拡張；プロセス中の生存率％。再活性化、スケールアップ、及び採取時に、すべての条件で生存率％を行った。１６／１７日目の採取日に、最終ＴＶＣを生存率％の放出基準と比較した。評価したすべての条件は、７０％の生存率基準を超え、プロセス及び腫瘍全体で同等であった。

免疫表現型決定－ＴＩＬ最終製品の表現型特徴付け。最終製品をフローサイトメトリー分析にかけ、純度、分化、及びメモリーマーカーを試験した。集団の割合は、すべての条件で、ＴＣＲα／β細胞、ＣＤ４＋細胞、及びＣＤ８＋細胞で一貫していた。

ＲＥＰ ＴＩＬの拡張表現型分析を行った。ＴＩＬ製品は、両方の腫瘍でＧｅｎ３．０と比較してＧｅｎ３．１条件でより高いＣＤ４＋細胞パーセンテージを示し、両方の条件でＧｅｎ３．１条件と比較してＧｅｎ３．０でより高いＣＤ８＋集団由来のＣＤ２８＋細胞パーセンテージを示した。

Ｇｅｎ３．０プロセス及びＧｅｎ３．１プロセスから採取したＴＩＬは、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞でのＣＤ２７及びＣＤ５６発現、ならびにＣＤ４＋ゲート細胞集団での同等のＣＤ２８発現と同等の表現型マーカーを示した。ＴＩＬ最終製品のメモリーマーカーの比較：

１６日目に採取したＴＩＬの凍結試料を分析のために染色した。ＴＩＬメモリーステータスは、Ｇｅｎ３．０プロセスとＧｅｎ３．１プロセスとの間で同等であった。ＴＩＬ最終製品の活性化及び疲弊マーカーの比較：

活性化及び疲弊マーカーは、ＣＤ４＋細胞及びＣＤ８＋細胞上でゲートされたＧｅｎ３．０プロセスとＧｅｎ３．１プロセスとの間で同等であった。

再刺激時のインターフェロンガンマ分泌採取したＴＩＬは、Ｌ４０６３及びＬ４０６４用のコーティングされた抗ＣＤ３プレートで一晩再刺激を受けた。Ｇｅｎ３．０プロセスと比較して、分析した２つの腫瘍で、より高いＧｅｎ３．１プロセスからのＩＦＮγ産生が観察された。

培養培地中のＩＬ－２レベルの測定すべての条件及びプロセス間のＩＬ－２消費レベルを比較するために、細胞上清を、７日目の再活性化の開始時、１０日目（Ｌ４０６４）／１１日目（Ｌ４０６３）のスケールアップ時、及び１６／１７日目の採取及び凍結時に収集した。その後、上清を解凍し、分析した。細胞培養上清中のＩＬ－２の量を、製造業者のプロトコルによって測定した。

全体的なＧｅｎ３プロセス及びＧｅｎ３．１プロセスは、同じ培地条件で評価した全プロセス中のＩＬ－２消費に関して同等であった。Ｌ４０６３及びＬ４０６４用に収集した使用済み培地のＩＬ－２濃度（ｐｇ／ｍＬ）分析。

代謝物分析使用済み培地の上清を、Ｌ４０６３及びＬ４０６４について、すべての条件で、７日目の再活性化の開始時、１０日目（Ｌ４０６４）または１１日目（Ｌ４０６３）のスケールアップ時、及び１６／１７日目の採取時に、Ｌ４０６３及びＬ４０６４から収集した。上清を、グルコース、塩乳酸、グルタミン、ＧｌｕｔａＭａｘ、及びアンモニアの濃度についてＣＥＤＥＸバイオアナライザーで分析した。

合成培地は、完全培地（２ｇ／Ｌ）と比較してより高いグルコース濃度４．５ｇ／Ｌを有する。全体として、グルコースの濃度及び消費量は、各培地タイプ内でＧｅｎ３．０プロセス及びＧｅｎ３．１プロセスにおいて同等であった。

すべての試験条件で、Ｌ４０６３及びＬ４０６４の両方の腫瘍に乳酸塩の増加が観察された。乳酸塩の増加は、Ｇｅｎ３．０条件とＧｅｎ３．１条件との間、及び再活性化拡張に使用した２つの培地（Ｌ４０６３の場合の完全培地とＬ４０６４の場合の合成培地）間で同等であった。

Ｌ４０６３の場合において、標準基礎培地は、２ｍＭのＬ－グルタミンを含有し、培養条件下でＬ－グルタミンのＬ－グルタミン酸塩及びアンモニアへの自然分解を補うために、２ｍＭのＧｌｕｔａＭａｘで補充された。

Ｌ４０６４腫瘍の場合、使用した合成（無血清）培地は、基礎培地にＬ－グルタミンを含有せず、最終濃度が２ｍＭになるまでＧｌｕｔａＭａｘのみで補充された。ＧｌｕｔａＭａｘは、Ｌ－アラニンとＬ－グルタミンのジペプチドであり、水溶液中でＬ－グルタミンよりも安定しており、グルタミン酸塩及びアンモニアに自発的に分解しない。代わりに、ジペプチドは、個々のアミノ酸に徐々に解離し、それにより、より低いが十分な濃度のＬ－グルタミンを維持して、強力な細胞成長を維持する。

Ｌ４０６３の場合、グルタミン濃度及びＧｌｕｔａＭａｘ濃度は、スケールアップ日にわずかに減少したが、採取日には再活性化日と比較して同様またはより近いレベルへの増加を示した。Ｌ４０６４の場合、グルタミン濃度及びＧｌｕｔａＭａｘ濃度は、全プロセス中、異なる条件間で同様の速度でわずかな分解を示した。

予想通り、アンモニア濃度は、Ｌ４０６４（２ｍＭのＧｌｕｔａＭａｘを含有する合成培地中で成長させた）よりも、Ｌ４０６３（２ｍＭのグルタミン＋２ｍＭのＧｌｕｔａＭａｘを含有する標準培地中で成長させた）について高かった。さらに、予想通り、培養の過程にわたってアンモニアの段階的増加または蓄積があった。３つの異なる試験条件間でアンモニア濃度に差はなかった。

Ｆｌｏｗ－ＦＩＳＨによるテロメア反復：Ｆｌｏｗ－ＦＩＳＨ技術を使用して、Ｇｅｎ３プロセス及びＧｅｎ３．１プロセス下でのＬ４０６３及びＬ４０６４のテロメア反復の平均長を測定した。相対テロメア長（ＲＴＬ）の決定を、ＤＡＫＯ製のフローサイトメトリー分析用Ｔｅｌｏｍｅｒｅ ＰＮＡキット／ＦＩＴＣを使用して計算した。テロメアアッセイを行った。Ｌ４０６３及びＬ４０６４の試料のテロメア長を、対照細胞株（１３０１白血病）と比較した。対照細胞株は、長くて安定したテロメアを有する四倍体細胞株であり、相対テロメア長の計算を可能にする。両方の腫瘍で評価したＧｅｎ３プロセス及びＧｅｎ３．１プロセスは、同等のテロメア長を示した。ＴＣＲ Ｖβレパートリー分析

各プロセスで生成された細胞製品のクローン多様性を決定するために、ＴＩＬ最終製品をＴ細胞受容体のＣＤＲ３部分の配列決定によるクローン多様性分析のためにアッセイした。

３つのパラメータを３つの条件間で比較した。
●固有のＣＤＲ３（ｕＣＤＲ３）の多様性指数
●ｕＣＤＲ３共有％
●ｕＣＤＲ３の上位８０％の場合：
○共有されるｕＣＤＲ３コピーの％を比較する
○固有のクロノタイプの頻度を比較する

対照及びＧｅｎ３．１試験、ＴＩＬで採取した細胞製品のＬ４０６３で共有される固有のＣＤＲ３配列パーセンテージ：９７５個の配列がＧｅｎ３試験最終製品とＧｅｎ３．１試験最終製品との間で共有され、Ｇｅｎ３．１試験最終製品と共有されるＧｅｎ３由来の固有のＣＤＲ３配列の上位８０％の８８％に相当する。

対照及びＧｅｎ３．１試験、ＴＩＬで採取した細胞製品のＬ４０６４で共有される固有のＣＤＲ３配列パーセンテージ：２１６３個の配列がＧｅｎ３試験最終製品とＧｅｎ３．１試験最終製品との間で共有され、Ｇｅｎ３．１試験最終製品と共有されるＧｅｎ３由来の固有のＣＤＲ３配列の上位８０％の８７％に相当する。

異なるプロセスについて、１６日目の採取時に収集した１×１０^６個の細胞から特定された固有のＣＤ３配列の数。Ｇｅｎ３．１試験条件は、試料内の固有のペプチドＣＤＲの数に基づいて、Ｇｅｎ３．０と比較してわずかに高いクローン多様性を示した。

シャノンエントロピー多様性指数は、比較のための信頼性の高い一般的なメトリックであり、これは両方の腫瘍に対するＧｅｎ３．１条件が、Ｇｅｎ３プロセスよりもわずかに高い多様性を示すためであり、Ｇｅｎ３．１試験条件のＴＣＲ ＶβレパートリーがＧｅｎ３．０プロセスよりもポリクローナルであることを示唆する。

加えて、Ｇｅｎ３．１試験条件のＴＣＲ Ｖβレパートリーは、腫瘍Ｌ４０６３及びＬ４０６４の両方でＧｅｎ３．０プロセスの対応するレパートリーと８７％を超える重複を示した。

再活性化日のＧｅｎ３．１試験Ｌ４０６４の使用済み培地のＩＬ－２濃度の値は、期待値を下回った（Ｇｅｎ３．１対照及びＧｅｎ３．０条件と同様であった）。

低い値はピペッティングエラーに起因した可能性があったが、最小限の試料しか採取できなかったため、アッセイを繰り返すことができなかった。

試料Ｌ４０６４の１０／１１日目のスケールアップから使用済み培地は収集されず、ＩＬ－２濃度の分析及び上清の代謝物分析には含めなかった。

結論０日目のフィーダー及びＯＫＴ－３を含むＧｅｎ３．１試験条件は、Ｇｅｎ３．０及びＧｅｎ３．１対照と比較して、１６日目の採取時の細胞用量のＴＶＣがより高いことを示した。Ｇｅｎ３．１試験条件のＴＶＣ最終製品は、Ｇｅｎ３．０よりも約２．５倍高かった。

腫瘍Ｌ４０６３及びＬ４０６４の両方について、０日目にＯＫＴ－３及びフィーダーを添加したＧｅｎ３．１試験条件は、採取時にフラスコの最大容量に達した。これらの条件下で、０日目に最大４つのフラスコを開始した場合、最終細胞用量は、８０～１００×１０^９ＴＩＬである可能性があった。

最終ＴＩＬ製品の純度、疲弊、活性化、及びメモリーマーカーを含む表現型特徴付けなどのすべての品質属性が、Ｇｅｎ３．１試験とＧｅｎ３．０プロセスとの間で維持され、同等であった。ＴＩＬ最終製品のテロメア長及び使用済み培地のＩＬ－２消費量は、Ｇｅｎ３．０プロセスとＧｅｎ３．１プロセスとの間で同等であった。

最終ＴＩＬ製品のＩＦＮ－γ産生は、分析した２つの腫瘍において、Ｇｅｎ３．０と比較して、０日目にフィーダー及びＯＫＴ－３を添加したＧｅｎ３．１で３倍高く、Ｇｅｎ３．１プロセスが強力なＴＩＬ製品を生成したことを示唆する。

試験条件にわたって、グルコースまたは乳酸塩レベルに差異は観察されなかった。培地条件にわたって、Ｇｅｎ３．０プロセスとＧｅｎ３．１プロセスとの間でグルタミン及びアンモニアに差異は観察されなかった。培地上の低レベルのグルタミンは、細胞増殖を制限しておらず、培地へのＧｌｕｔａＭａｘのみの添加が、細胞を増殖させるのに必要な栄養素を与えるのに十分であることを示唆する。

Ｌ４０６３及びＬ４０６４のスケールアップ日は、それぞれ１１日目及び１０日目であり、プロセスの採取日に到達した細胞数に関して大きな差異を示さず、代謝物の消費量は、全プロセスにわたって両方の場合で同等であった。この観察結果は、Ｇｅｎ３．０最適化プロセスが処理日に柔軟性を有し、それにより、製造スケジュールの柔軟性を促進することができることを示唆している。

０日目にフィーダー及びＯＫＴ－３を添加したＧｅｎ３．１プロセスは、Ｇｅｎ３．０と比較して、ＣＤＲ３ ＴＣＲａｂ配列分析によって測定されたより高いクローン多様性を示した。

図３２は、Ｇｅｎ３プロセス（Ｇｅｎ３最適化プロセス）の実施形態を説明する。標準培地及びＣＴＳ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒ無血清培地を、Ｇｅｎ３最適化プロセスＴＩＬ拡張に使用することができる。ＣＴＳ Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒの場合、培地のＧｌｕｔａＭａｘを最終濃度４ｍＭに増加させるために無血清培地が推奨される。

実現可能性を、すべての実験のすべての研究条件に対して確立した。すべての実験及び条件にわたって、かつドナー腫瘍組織間で、すべての実験を、ＩＬ－２、ヒト血清－ＡＢ、同種異系フィーダー細胞、ＯＫＴ－３などの同じロットの重要な原材料を利用して行った。

比較可能性を、凍結保存した２２日目のＴＩＬ製品の以前の仕様に従って、臨床製品の放出基準を満たす任意の研究群の能力によって決定した。

実施例１２：合成培地を用いた腫瘍拡張プロセス
Ｇｅｎ２プロセス及びＧｅｎ３プロセスを含む、上記で開示されるプロセスは、ＣＭ１培地及びＣＭ２培地を、合成培地（例えば、ＣＴＳ（商標）ＯｐＴｍｉｚｅｒ（商標）Ｔ－Ｃｅｌｌ Ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ＳＦＭ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、例えば、ＤＭ１及びＤＭ２を含む）で置き換えることによって行われ得る。

実施例１３：凍結保存ＴＩＬ細胞療法の例示的生産
この実施例は、現在の適正製造基準に従った、Ｇ－Ｒｅｘフラスコ内（または代替としてガス透過性バッグ内）のＴＩＬ細胞療法の例示的なｃＧＭＰ製造を説明する。

０日目のＣＭ１培地の調製ＢＳＣ内で、試薬をＲＰＭＩ１６４０培地ボトルに追加した。以下の試薬を追加した：不活化ヒトＡＢ血清（１００．０ｍＬ）、ＧｌｕｔａＭａｘ（１０．０ｍＬ）、硫酸ゲンタマイシン、５０ｍｇ／ｍＬ（１．０ｍＬ）、２－メルカプトエタノール（１．０ｍＬ）を加熱する。

ＢＳＣから不要な材料を取り出した。ＢＳＣから培地試薬を抜き取り、配合された洗浄培地の調製のために硫酸ゲンタマイシン及びＨＢＳＳをＢＳＣの中に残した。

ＩＬ－２アリコートを解凍した。すべての氷が融解するまで、１つの１．１ｍＬのＩＬ－２アリコート（６×１０６ＩＵ／ｍＬ）（ＢＲ７１４２４）を解凍した。ＩＬ－２ロット番号及び有効期限を記録した

ＩＬ－２ストック溶液を培地に移した。ＢＳＣ内で、１．０ｍＬのＩＬ－２ストック溶液を、調製されたＣＭ１の０日目培地ボトルに移した。ＣＭ１の０日目培地１ボトル及びＩＬ－２（６×１０６ＩＵ／ｍＬ）１．０ｍＬを追加した。

Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳをＢＳＣの中に通過させた。無菌的にＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳ（Ｗ３０１３１３０）をＢＳＣの中に通過させた。

すべての完全なＣＭ１の０日目培地を、Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳフラスコ（組織断片コニカルまたはＧＲｅｘ１００ＭＣＳ）にポンプで注入した。

０日目の腫瘍洗浄培地の調製ＢＳＣ内で、５．０ｍＬのゲンタマイシン（Ｗ３００９８３２またはＷ３０１２７３５）を１本の５００ｍＬのＨＢＳＳ培地（Ｗ３０１３１２８）ボトルに追加した。ボトル当たりの追加：ＨＢＳＳ（５００．０ｍＬ）、硫酸ゲンタマイシン、５０ｍｇ／ｍＬ（５．０ｍＬ）。１Ｌの０．２２ミクロンフィルターユニット（Ｗ１２１８８１０）を通して調製されたゲンタマイシンを含有するＨＢＳＳを濾過した。

０日目の腫瘍処理腫瘍検体を取得し、即時に処理のために２～８℃における部屋に移した。

腫瘍洗浄培地を等分した。腫瘍洗浄１は、８インチ鉗子（Ｗ３００９７７１）を使用して行う。腫瘍を検体ボトルから取り出し、調製した「洗浄１」皿に移す。この後、腫瘍洗浄２及び腫瘍洗浄３が続く。

腫瘍を測定し、評価した。腫瘍領域全体の３０％未満が壊死及び／または脂肪性組織であることが観察されたかどうかを評価した。該当する場合、クリーンアップ解剖を行う。腫瘍が大きく、外部の組織の３０％未満が壊死／脂肪性であることが観察された場合、メス及び／または鉗子の組み合わせを使用して、腫瘍の内側構造を温存しながら壊死／脂肪性組織を除去することによって、「クリーンアップ解剖」を行った。

腫瘍を切除した。メス及び／または鉗子の組み合わせを使用して、腫瘍検体を均等で適切なサイズの断片（最大６つの中間断片）に切断した。中間腫瘍断片を移した。腫瘍断片を、およそ３×３×３ｍｍのサイズの小片に切除した。乾燥を防止するために中間断片を保存した。

中間断片の解剖を繰り返した。収集された切片の数を決定した。望ましい組織が残っている場合、「好ましい中間断片」６ウェルプレートから追加の好ましい腫瘍片を選択し、最大５０片のために液滴を充填した。

コニカルチューブを準備した。腫瘍片を５０ｍＬのコニカルチューブに移した。Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳのためにＢＳＣを準備した。インキュベーターからＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳを取り出した。無菌的にＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳフラスコをＢＳＣの中に通過させた。腫瘍断片をＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳフラスコに追加した。切片を均等に分配した。

以下のパラメータにおいてＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳをインキュベートした：Ｇ－Ｒｅｘフラスコをインキュベートした：温度ＬＥＤディスプレイ：３７．０±２．０℃、ＣＯ_２パーセンテージ：５．０±１．５％ＣＯ_２．計算：培養の時間、下限＝培養の時間＋２５２時間、上限＝培養の時間＋２７６時間。

プロセスが完了した後、いずれの残りの温められた培地も廃棄し、ＩＬ－２のアリコートを解凍した。

１１日目－培地の調製インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ：温度ＬＥＤディスプレイ：３７．０±２．０℃、ＣＯ２パーセンテージ：５．０±１．５％ＣＯ２．

３本の１０００ｍＬのＲＰＭＩ１６４０培地（Ｗ３０１３１１２）ボトル及び３本の１０００ｍＬのＡＩＭ－Ｖ（Ｗ３００９５０１）ボトルを、インキュベーター内で≧３０分間温めた。インキュベーターからＲＰＭＩ１６４０培地を取り出した。ＲＰＭＩ１６４０培地を調製した。培地を濾過した。３つのＩＬ－２の１．１ｍＬのアリコート（６×１０６ＩＵ／ｍＬ）（ＢＲ７１４２４）を解凍した。インキュベーターからＡＩＭ－Ｖ培地を取り出した。ＩＬ－２をＡＩＭ－Ｖに追加した。１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒバッグ及びリピータポンプ移送セットを、ＢＳＣの中に無菌的に移した。

１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒ培地バッグを準備した。Ｂａｘａポンプを準備した。１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒ培地バッグを準備した。培地を１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒにポンプで注入した。Ｌａｂｔａｉｎｅｒバッグからポンプマティックを取り出した。

培地を混合した。バッグを穏やかにマッサージして混合した。試料計画に従って培地を試料採取した。２０．０ｍＬの培地を取り出し、５０ｍＬのコニカルチューブに入れた。細胞計数希釈管を準備した。ＢＳＣに、「細胞計数希釈液用」及びロット番号でラベル付けされた４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖ培地を、４本の１５ｍＬコニカルチューブに追加した。試薬をＢＳＣから２～８℃に移した。１Ｌ移送パックを準備した。（プロセス注記５．１１に従って）ＢＳＣ溶接の外側で、「完全なＣＭ２の１１日目培地」バッグに取り付けられた移送セットへの１Ｌ移送パックを準備した。フィーダー細胞移送パックを準備した。完全なＣＭ２の１１日目培地をインキュベートした。

１１日目－ＴＩＬ採取前処理表。インキュベーターパラメータ：温度ＬＥＤディスプレイ：３７．０±２．０℃、ＣＯ_２パーセンテージ：５．０±１．５％ＣＯ_２．インキュベーターからＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳを取り出した。３００ｍＬ移送パックを準備した。移送パックをＧ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳに溶接した。

ＴＩＬ採取及びＴＩＬ採取の開始のためにフラスコを準備する。ＴＩＬが採取された。ＧａｔｈｅＲｅｘを使用して、血液フィルターを介して細胞懸濁液を３００ｍＬの移送パックに移した。付着した細胞について膜を点検した。

フラスコ膜をすすいだ。Ｇ－Ｒｅｘ１００ＭＣＳ上のクランプを閉じた。すべてのクランプが閉じられていることを確実にした。ＴＩＬ及び「上清」移送パックを熱融着した。ＴＩＬ懸濁液の体積を計算した。試料採取のために上清移送パックを準備した。

Ｂａｃ－Ｔ試料を引き出した。ＢＳＣ内で、１Ｌ「上清」移送パックからおよそ２０．０ｍＬの上清を引き上げ、滅菌５０ｍＬコニカルチューブに分注する。

試料計画に従ってＢａｃＴを接種した。適切なサイズのシリンジを使用して調製されたＢａｃＴとラベル付けされた５０ｍＬコニカルから１．０ｍＬの試料を取り出し、嫌気性ボトルに接種した。

ＴＩＬをインキュベートした。必要とされるまで、ＴＩＬ移送パックをインキュベーターに入れた。細胞計数及び計算を行った。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。生存率÷２。生細胞濃度÷２。計数の上限及び下限を決定した。下限：生細胞濃度の平均×０．９。上限：生細胞濃度の平均×１．１。許容限界内の両方の計数を確認した。行われた４つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。

ＴＩＬ懸濁液の調整された体積：細胞計数試料を取り出した後のＴＩＬ懸濁液の調整された体積を計算する。総ＴＩＬ細胞体積（Ａ）。取り出された細胞計数試料の体積（４．０ｍＬ）（Ｂ）調整された総ＴＩＬ細胞体積Ｃ＝Ａ－Ｂ。

総生ＴＩＬ細胞を計算した。平均生細胞濃度＊：総体積、総生細胞：Ｃ＝Ａ×Ｂ．

フローサイトメトリーのための計算：総生ＴＩＬ細胞計数が、≧４．０×１０^７個であった場合、フローサイトメトリー試料のために１．０×１０^７個の細胞を取得するための体積を計算した。

フローサイトメトリーに必要とされる総生細胞：１．０×１０^７個の細胞。フローサイトメトリーに必要とされる細胞の体積：生細胞濃度を１．０×１０^７個の細胞Ａで割ったもの。

２．０×１０^８個の生細胞に等しいＴＩＬ懸濁液の体積を計算した。必要に応じて、取り出すＴＩＬ細胞の過剰体積を計算し、過剰なＴＩＬを取り出し、必要に応じてＴＩＬをインキュベーターに入れた。必要に応じて、取り出された全過剰ＴＩＬを計算した。

凍結のための標的細胞濃度が１．０×１０^８細胞／ｍＬである過剰なＴＩＬ細胞に追加するＣＳ－１０培地の量を計算した。必要に応じて、過剰なＴＩＬを遠心分離した。コニカルチューブを観察し、ＣＳ－１０を追加した。

バイアルを充填した。１．０ｍＬの細胞懸濁液を、適切なサイズの凍結バイアルに等分した。残留体積を適切なサイズのクライオバイアルに等分した。体積が≦０．５ｍＬである場合、体積が０．５ｍＬになるまでＣＳ１０をバイアルに追加する。

凍結保存のための１×１０^７個の細胞を取得するために必要とされる細胞の体積を計算した。凍結保存のために試料を取り出した。ＴＩＬをインキュベーターに入れた。

試料の凍結保存コニカルチューブを観察し、ＣＳ－１０をゆっくりと追加し、追加された０．５ｍＬのＣＳ１０の体積を記録した。

１１日目－フィーダー細胞フィーダー細胞を取得した。ＬＮ２冷凍庫から少なくとも２つの異なるロット番号を伴うフィーダー細胞の３つのバッグを取得した。解凍する準備が整うまで、細胞をドライアイス上で保管した。水浴またはｃｒｙｏｔｈｅｒｍを準備した。３７．０±２．０℃の水浴またはｃｙｔｏｔｈｅｒｍにおいて約３～５分間、または氷が消滅するまで、フィーダー細胞を解凍した。インキュベーターから培地を取り出した。解凍されたフィーダー細胞をプールした。フィーダー細胞を移送パックに追加した。シリンジから移送パックにフィーダー細胞を分注した。プールされたフィーダー細胞を混合し、移送パックをラベル付けした。

移送パック内のフィーダー細胞懸濁液の総体積を計算した。細胞計数試料を取り出した。各試料に対して別個の３ｍＬシリンジを使用して、不要注入ポートを使用して、フィーダー細胞懸濁液移送パックから４×１．０ｍＬの細胞計数試料を取り出した。各試料をラベル付けされたクライオバイアルに等分した。細胞計数を行い、増倍率を決定し、プロトコルを選択し、増倍率を入力した。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定し、限界内で確認した。

フィーダー細胞懸濁液の調整された体積。細胞計数試料を取り出した後のフィーダー細胞懸濁液の調整された体積を計算した。総生フィーダー細胞を計算した。必要に応じて追加のフィーダー細胞を取得した。必要に応じて追加のフィーダー細胞を解凍した。第４のフィーダー細胞バッグをジップトップバッグに入れ、３７．０±２．０℃の水浴またはｃｙｔｏｔｈｅｒｍ内で約３～５分間解凍し、追加のフィーダー細胞をプールした。体積を測定した。シリンジ内のフィーダー細胞の体積を測定し、以下に記録した（Ｂ）。フィーダー細胞の新しい総体積を計算した。フィーダー細胞を移送パックに追加した。

必要に応じて希釈液を調製し、４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖ培地を４本の１５ｍＬコニカルチューブに追加した。細胞計数を準備した。各試料に対して別個の３ｍＬシリンジを使用して、不要注入ポートを使用して、フィーダー細胞懸濁液移送パックから４×１．０ｍＬの細胞計数試料を取り出した。細胞計数及び計算を行った。行われた４つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。フィーダー細胞懸濁液の体積を調整し、細胞計数試料を取り出した後のフィーダー細胞懸濁液の調整された体積を計算した。４．０ｍＬを差し引いた総フィーダー細胞体積を取り出した。５×１０^９個の生フィーダー細胞を取得するために必要とされたフィーダー細胞懸濁液の体積を計算した。過剰なフィーダー細胞体積を計算した。取り出す過剰なフィーダー細胞の体積を計算した。過剰なフィーダー細胞を取り出した。

１．０ｍＬシリンジ及び１６Ｇ針を使用して、０．１５ｍＬのＯＫＴ３を引き上げ、ＯＫＴ３を追加した。フィーダー細胞懸濁液移送パックを熱融着した。

１１日目 Ｇ－Ｒｅｘ充填及び播種設定Ｇ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳ。「完全なＣＭ２の１１日目培地」をインキュベーターから取り出し、培地をＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳにポンプで注入した。４．５Ｌの培地をＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳにポンプで注入し、フラスコ上にマークされたラインまで充填した。必要に応じてフラスコを熱融着し、インキュベートした。フィーダー細胞の懸濁液移送パックを、Ｇ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳに溶接した。フィーダー細胞をＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳに追加した。熱融着した。ＴＩＬ懸濁液移送パックをフラスコに溶接した。ＴＩＬをＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳに追加した。熱融着した。Ｇ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳを３７．０±２．０℃でインキュベートした。ＣＯ２パーセンテージ：５．０±１．５％ＣＯ２．

インキュベーション時間帯を計算した。１６日目にインキュベーターからＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳを取り出すための適切な時間を決定するための計算を行った。下限：インキュベーションの時間＋１０８時間。上限：インキュベーションの時間１３２時間。

１１日目 過剰ＴＩＬ凍結保存該当：過剰ＴＩＬバイアルを凍結させた。凍結前にＣＲＦが設定されていることを検証した。凍結保存を行う。バイアルを速度制御された冷凍庫から適切な保管場所に移した。凍結の完了時に、バイアルをＣＲＦから適切な保管容器に移した。バイアルを適切な保管場所に移した。ＬＮ２における保管場所を記録した。

１６日目 培地の調製ＡＩＭ－Ｖ培地を事前に温めた。培地バッグ１、２、及び３について培地が温められた時間を計算した。すべてのバッグが１２～２４時間の持続時間にわたって温められていることを確実にした。上清用の１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒを設定した。ルアーコネクタを使用して、流体ポンプ移送セットのより大きな直径の端部を１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒバッグのメス型ポートのうちの１つに取り付けた。上清用の１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒを設定し、ラベル付けした。上清用の１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒを設定した。ＢＳＣから取り出す前に、すべてのクランプが閉じられていることを確実にした。注記：上清バッグは、培地調製と同時に行われ得るＴＩＬ採取中に使用された。

ＩＬ－２を解凍した。すべての氷が融解するまで、ＣＴＳ ＡＩＭ Ｖ培地の１バッグ当たりＩＬ－２（６×１０^６ＩＵ／ｍＬ）（ＢＲ７１４２４）の５×１．１ｍＬアリコートを解凍した。１００．０ｍＬのＧｌｕｔａＭａｘを等分した。ＩＬ－２をＧｌｕｔａＭａｘに追加した。配合用のＣＴＳ ＡＩＭ Ｖ培地バッグを準備した。配合用のＣＴＳ ＡＩＭ Ｖ培地バッグを準備した。ステージＢａｘａポンプ。培地を配合することを準備した。ＧｌｕｔａＭａｘ＋ＩＬ－２をバッグにポンプで注入した。パラメータを監視した：温度ＬＥＤディスプレイ：３７．０±２．０℃、ＣＯ_２パーセンテージ：５．０±１．５％ＣＯ_２．完全なＣＭ４の１６日目培地を温めた。希釈液を調製した。

１６日目 ＲＥＰ分割インキュベーターパラメータを監視した：温度ＬＥＤディスプレイ：３７．０±２．０℃、ＣＯ_２パーセンテージ：５．０±１．５％ＣＯ_２．インキュベーターからＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳを取り出した。１Ｌの移送パックを準備し、ＴＩＬ懸濁液としてラベル付けし、１Ｌの重量を量った。

Ｇ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳの減容約４．５Ｌの培養上清をＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳから１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒに移した。

ＴＩＬ採取用のフラスコを準備した。上清を取り出した後に、赤色ラインへのすべてのクランプを閉じた。

ＴＩＬ採取の開始。フラスコを激しく叩き、培地を旋回させて細胞を解放し、すべての細胞が引き離されていることを確実にする。

ＴＩＬ採取。ＴＩＬ懸濁液移送パックにつながるすべてのクランプを解放した。ＧａｔｈｅＲｅｘを使用して、細胞懸濁液をＴＩＬ懸濁液移送パックの中に移した。注記：すべての細胞及び培地が収集されるまで、傾斜した縁を必ず維持すること。付着した細胞について膜を点検した。フラスコ膜をすすいだ。Ｇ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳ上のクランプを閉じた。ＴＩＬを含む移送パックを熱融着した。上清を含む１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒを熱融着した。細胞懸濁液を伴う移送パックの重量を記録し、細胞懸濁液を計算した。試料を取り出すための移送パックを準備した。細胞上清から試験試料を取り出した。

無菌性及びＢａｃＴ試験サンプリング。調製したＢａｃＴラベル付けされた１５ｍＬのコニカルから１．０ｍＬの試料を取り出した。細胞計数試料を取り出した。ＢＳＣ内で、各試料に別個の３ｍＬシリンジを使用して、「ＴＩＬ懸濁液」移送パックから４×１．０ｍＬの細胞計数試料を取り出した。

マイコプラズマ試料を取り出した。３ｍＬシリンジを使用して、ＴＩＬ懸濁液移送パックから１．０ｍＬを取り出し、「マイコプラズマ希釈液」とラベル付けされた１５ｍＬコニカルチューブに入れた。

播種用の移送パックを準備した。ＴＩＬをインキュベーターに入れた。細胞懸濁液をＢＳＣから取り出し、必要とされるまでインキュベーターに入れた。細胞計数及び計算を行った。最初に、０．５ｍＬの細胞懸濁液を調製された４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖ培地に追加することによって、細胞計数試料を希釈し、１：１０希釈液を生じた。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。注記：希釈は、細胞の期待濃度に基づいて調整され得る。行われた４つすべての計数から平均生細胞濃度を決定した。ＴＩＬ懸濁液の調整された体積。細胞計数試料を取り出した後のＴＩＬ懸濁液の調整された体積を計算した。５．０ｍＬを差し引いた総ＴＩＬ細胞体積が試験のために取り出された。

総生ＴＩＬ細胞を計算した。播種するフラスコの総数を計算した。注記：播種するＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳフラスコの最大数は５であった。播種するフラスコの計算された数が５つを超えた場合、５つのみが利用可能な細胞懸濁液の体積全体を使用して播種された。

二次培養用のフラスコの数を計算した。準備されたバッグに加えて必要とされる培地バッグの数を計算した。計算されたように必要とされる２つのＧ－Ｒｅｘ－５００Ｍフラスコ毎に「ＣＭ４の１６日目培地」の１つの１０Ｌバッグを準備した。追加の培地が調製され、温められている間に、続けて第１のＧＲＥＸ－５００Ｍフラスコ（複数可）を播種した。計算された数の決定された追加の培地バッグを調製し、温めた。Ｇ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳを充填した。培地をポンプで注入するように準備し、４．５Ｌの培地をＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳにポンプで注入した。熱融着した。充填を繰り返した。フラスコをインキュベートした。新しいＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳフラスコに追加するＴＩＬ懸濁液の標的体積を計算した。計算されたフラスコの数が５つを超える場合、５つのみが細胞懸濁液の体積全体を使用して播種されるであろう。播種用のフラスコを準備した。インキュベーターからＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳを取り出した。ポンプで注入するためのＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳを準備した。大型フィルターラインを除くすべてのクランプを閉じた。インキュベーターからＴＩＬを取り出した。播種用の細胞懸濁液を調製した。（プロセス注記５．１１に従って）「ＴＩＬ懸濁液」移送パックをポンプ入口ラインに滅菌溶接した。ＴＩＬ懸濁液バッグを秤の上に置いた。

フラスコにＴＩＬ懸濁液を播種した。計算されたＴＩＬ懸濁液の体積をフラスコにポンプで注入した。熱融着した。残りのフラスコを充填した。

インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ：温度ＬＥＤディスプレイ：３７．０±２．０℃、ＣＯ_２パーセンテージ：５．０±１．５％ＣＯ_２．フラスコをインキュベートした。

２２日目にインキュベーターからＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳを取り出す時間範囲を決定した。

２２日目 洗浄緩衝液の調製１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒバッグを準備した。ＢＳＣ内で、ルアー接続を介して４インチ血漿移送セットを１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒバッグに取り付ける。１０ＬのＬａｂｔａｉｎｅｒバッグを準備した。ＢＳＣから外に移す前に、すべてのクランプを閉じた。注記：採取される２つのＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳフラスコ毎に、１つの１０Ｌ Ｌａｂｔａｉｎｅｒバッグを準備した。Ｐｌａｓｍａｌｙｔｅを３０００ｍＬバッグにポンプで注入し、ポンプを反転させてバッグの位置を操作することによって、３０００ｍＬのＯｒｉｇｅｎバッグから空気を除去した。ヒトアルブミン２５％を３０００ｍＬのバッグに追加した。１２０．０ｍＬの最終体積のヒトアルブミン２５％を取得する。

ＩＬ－２希釈液を調製した。１０ｍＬシリンジを使用して、ＬＯＶＯ洗浄緩衝液バッグ上の無針注入ポートを使用して、５．０ｍＬのＬＯＶＯ洗浄緩衝液を取り出した。ＬＯＶＯ洗浄緩衝液を５０ｍＬのコニカルチューブに分注した。

ＣＲＦブランクバッグ 等分されたＬＯＶＯ洗浄緩衝液。１００ｍＬのシリンジを使用して、無針注入ポートから７０．０ｍＬのＬＯＶＯ洗浄緩衝液を引き上げた。

すべての氷が融解するまで、１つの１．１ｍＬのＩＬ－２（６×１０６ＩＵ／ｍＬ））を解凍した。５０μＬのＩＬ－２ストック（６×１０^６ＩＵ／ｍＬ）を「ＩＬ－２希釈液」とラベル付けされた５０ｍＬのコニカルチューブに追加した。

凍結保存調製。５つのクライオカセットを２～８℃に置き、最終製品の凍結保存のためにそれらを前調整した。

細胞計数希釈液を調製した。ＢＳＣ内で、ロット番号及び「細胞計数希釈液用」でラベル付けされた４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖ培地を、４本の別個の１５ｍＬコニカルチューブに追加した。細胞計数を準備した。４つのクライオバイアルをバイアル番号（１～４）でラベル付けした。使用されるＢＳＣの下でバイアルを保存した。

２２日目 ＴＩＬ採取インキュベーターを監視した。インキュベーターパラメータ：温度ＬＥＤディスプレイ：３７±２．０℃、ＣＯ２パーセンテージ：５％±１．５％．インキュベーターからＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳフラスコを取り外した。ＴＩＬ収集バッグを準備し、ラベル付けした。余分な接続を密封した。減容：約４．５Ｌの上清をＧ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳから上清バッグに移した。

ＴＩＬ採取用のフラスコを準備した。ＴＩＬの収集を開始した。フラスコを激しく叩き、培地旋回させて細胞を解放した。すべての細胞が引き離されていることを確実にした。ＴＩＬの収集を開始した。ＴＩＬ懸濁液収集バッグにつながるすべてのクランプを解放した。ＴＩＬ採取を行う。ＧａｔｈｅＲｅｘを使用して、ＴＩＬ懸濁液を３０００ｍＬの収集バッグに移した。付着した細胞について膜を点検した。フラスコ膜をすすいだ。Ｇ－Ｒｅｘ５００ＭＣＳ上のクランプを閉じ、すべてのクランプが閉じていることを確実にした。細胞懸濁液をＬＯＶＯソースバッグの中に移した。すべてのクランプを閉じた。熱融着した。４×１．０ｍＬの細胞計数試料を取り出した。

細胞計数を行った。ＮＣ－２００及びプロセス注記５．１４を利用して、細胞計数及び計算を行った。最初に、０．５ｍＬの細胞懸濁液を調製された４．５ｍＬのＡＩＭ－Ｖ培地に追加することによって、細胞計数試料を希釈した。これは、１：１０希釈液を生じた。行われた細胞計数の平均生存率、生細胞濃度、及び総有核細胞濃度を決定した。計数の上限及び下限を決定した。行われた細胞計数の平均生存率、生細胞濃度、及び総有核細胞濃度を決定した。ＬＯＶＯソースバッグの重量を量った。総生ＴＩＬ細胞を計算した。総有核細胞を計算した。

マイコプラズマ希釈液を調製した。ルアー試料ポートを介して１つの上清バッグから１０．０ｍＬを取り出し、１５ｍＬコニカルに入れた。

「ＴＩＬ Ｇ－Ｒｅｘ採取」プロトコルを行い、最終製品の標的体積を決定した。使い捨てキットを装填した。濾液バッグを取り出した。濾液容量を入力した。濾液容器をベンチトップの上に置いた。ＰｌａｓｍａＬｙｔｅを取り付けた。ＰｌａｓｍａＬｙｔｅが取り付けられていることを検証し、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅが動いていることを観察した。ソース容器をチューブに取り付け、ソース容器が取り付けられていることを検証した。ＰｌａｓｍａＬｙｔｅが動いていることを確認した。

最終製剤及び充填標的体積／バッグの計算。ブランクバッグを配合するためのＣＳ－１０及びＬＯＶＯ洗浄緩衝液の体積を計算した。ＣＲＦブランクを調製した。

最終製品に追加するＩＬ－２の体積を計算した。所望される最終ＩＬ－２濃度（ＩＵ／ｍＬ）－３００ＩＵ／ｍＬ。ＩＬ－２作業ストック：６×１０^４ＩＵ／ｍＬ．接続装置を組み立てた。４Ｓ－４Ｍ６０をＣＣ２細胞接続に滅菌溶接した。ＣＳ７５０クライオバッグを準備したハーネスに滅菌溶接した。ＣＳ－１０バッグを４Ｓ－４Ｍ６０のスパイクに溶接した。ＩＬ－２とともにＴＩＬ調製した。適切なサイズのシリンジを使用して、「ＩＬ－２ ６×１０^４」アリコートから決定されたＩＬ－２の量を取り出した。配合されたＴＩＬバッグをラベル付けした。配合されたＴＩＬバッグを装置に追加した。ＣＳ１０を追加した。シリンジを交換した。約１０ｍＬの空気を１００ｍＬのシリンジに引き込み、装置上の６０ｍＬシリンジを交換した。ＣＳ１０を追加した。ＣＳ－７５０バッグを準備した。細胞を分注した。

最終製品バッグから空気を除去し、保持液を得た。最後の最終製品バッグが充填されると、すべてのクランプを閉じた。１０ｍＬの空気を新しい１００ｍＬシリンジに引き込み、装置のシリンジを交換する。保持液を５０ｍＬコニカルチューブに分注し、管を「保持液」及びロット番号としてラベル付けした。各バッグについて空気除去ステップを繰り返した。

目視検査を含み、凍結保存のための最終製品を調製した。凍結保存までクライオバッグを低温パック上で、または２～８℃で保持した。

細胞計数試料を取り出した。適切なサイズのピペットを使用して、２．０ｍＬの保持液を取り出し、細胞計数に使用されるように１５ｍＬコニカルチューブに入れる。細胞計数及び計算を行った。注記：１つだけの試料を適切な希釈に希釈し、希釈が十分であることを検証した。追加の試料を適切な希釈倍率に希釈し、計数を進めた。行われた細胞計数の生細胞濃度及び生存率の平均を決定した。計数の上限及び下限を決定した。注記：希釈は、細胞の期待濃度に基づいて調整され得る。ＩＦＮ－γを計算した。最終製品バッグを熱融着した。

表８２の例示的な試料計画に従って試料をラベル付けし、収集する。

無菌性及びＢａｃＴ試験。試験試料採取。ＢＳＣ内で、適切なサイズのシリンジを使用して収集された保持細胞懸濁液から１．０ｍＬの試料を取り出し、嫌気性ボトルに接種する。好気性ボトルについて上記を繰り返す。

最終製品の凍結保存制御速度冷凍庫（ＣＲＦ）を準備した。ＣＲＦが設定されており、ＣＲＦプローブが設定されていることを検証した。最終製品及び試料をＣＲＦに入れた。４℃±１．５℃に達し、ＣＲＦ実行を進めるために必要な時間を決定した。ＣＲＦが完了し、保管された。実行の完了後にＣＲＦを停止させた。カセット及びバイアルをＣＲＦから取り出した。保管のためにカセット及びバイアルを蒸気相ＬＮ_２に移した。保管場所を記録した。

最終医薬品の後処理及び分析には、以下の試験が含まれた：（２２日目）フローサイトメトリーによる２２日目ＲＥＰのＣＤ３＋細胞の決定、（２２日目）グラム染色法（ＧＭＰ）、（２２日目）Ｇｅｌ Ｃｌｏｔ ＬＡＬアッセイ（ＧＭＰ）による細菌内毒素試験、（１６日目）ＢａｃＴ滅菌アッセイ（ＧＭＰ）、（１６日目）ＴＤ－ＰＣＲによるマイコプラズマＤＮＡ検出（ＧＭＰ）、許容される外観属性、（２２日目）ＢａｃＴ滅菌アッセイ（ＧＭＰ）（２２日目）、（２２日目）ＩＦＮ－ガンマアッセイ。本明細書に記載の他の効力アッセイもまた、ＴＩＬ製品を分析するために用いられる。

実施例１４：固形腫瘍を有する患者における自己腫瘍浸潤リンパ球の第２相多施設研究
研究デザインの概要。この実施例では、本出願ならびにこの実施例に記載されるように調製されたＴＩＬを使用して、ＴＩＬをペムブロリズマブと組み合わせて、またはＴＩＬを単剤療法として使用してＡＣＴを評価する、前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第２相試験について説明する。

目的主目的は、治験責任医師が評価した固形腫瘍の奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ１．１）を使用して、客観的奏効率（ＯＲＲ）によって決定されるように、ＭＭ、ＨＮＳＣＣ、もしくはＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己ＴＩＬの有効性、またはＣＰＩによる治療中もしくは治療後に以前に進行した再発もしくは不応性（ｒ／ｒ）ＮＳＣＬＣ患者における単剤療法としてのＴＩＬの有効性を評価することである。

グレード≧３の治療に起因する有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率によって測定される、ＭＭ、ＨＮＳＣＣ、及びＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬの安全性プロファイル、またはｒ／ｒ ＮＳＣＬＣ患者における単剤療法としてのＴＩＬの安全性プロファイルを特徴付けること。

副次的目的は、完全奏効（ＣＲ）率、奏効期間（ＤＯＲ）、疾患制御率（ＤＣＲ）、治験責任医師によって評価されたＲＥＣＩＳＴ１．１を使用した無増悪生存期間（ＰＦＳ）、及び全生存期間（ＯＳ）を使用して、ＭＭ、ＨＮＳＣＣ、及びＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせた自己ＴＩＬの有効性、またはｒ／ｒ ＮＳＣＬＣ患者における単剤療法としてのＴＩＬの有効性をさらに評価することである。

本研究は、以下のコホートを含む。
●コホート１Ａ：免疫療法を除く≦３つの以前の全身療法を伴う、切除不能なステージＩＩＩＣもしくはステージＩＶ、またはＭＭの患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。
●コホート２Ａ：免疫療法を除く≦３つの以前の全身療法を伴う、進行性、再発性、または転移性のＨＮＳＣＣ（例えば、ステージＴ１Ｎ１－Ｎ２Ｂ、Ｔ２－４Ｎ０－Ｎ２ｂ）の患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。
●コホート３Ａ：免疫療法を除く≦３つの以前の全身療法を伴う、局所進行性または転移性（ステージＩＩＩ～ＩＶ）ＮＳＣＬＣ患者におけるペムブロリズマブと組み合わせたＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。
●コホート３Ｂ：≦３つの以前の全身療法の一部として、ＣＰＩ（例えば、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１）による全身療法を以前に受けたことがあるステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ患者における単剤としてのＴＩＬ療法。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が記録されていなければならない。

有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有するコホート３Ａ及び３Ｂ（ＮＳＣＬＣ）の患者は、少なくとも１つの標的療法を受けていなければならない。

すべての患者は、シクロホスファミド及びフルダラビンからなる骨髄非破壊的リンパ球枯渇（ＮＭＡ－ＬＤ）プレコンディショニングレジメンの前に、自己凍結保存ＴＩＬ療法（コホートの割り当てに応じて、ペムブロリズマブの有無にかかわらず）を受けた。ＴＩＬ注入後、最大６回のＩＶインターロイキン－２（ＩＬ－２）の最大用量が投与された。

以下の一般的な研究期間は、特に明記されていない限り、４つのコホートすべてで行われた。

スクリーニング及び腫瘍切除：研究登録から最大４週間（２８日）、ＴＩＬ製品の製造：腫瘍切除からおよそ≦２２日、及び以下で考察される治療期間。

治療期間（コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａ）：ＮＭＡ－ＬＤ（７日）、ＴＩＬ注入（１日）、続いてＩＬ－２投与（１～４日）を含む最大２年。患者は、ＴＩＬ産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、ＮＭＡ－ＬＤレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、ＩＬ－２の完了後以降であり、その後≦２年（２４ヶ月）または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までＱ３Ｗ±３日間継続する。治療終了（ＥＯＴ）来院は、ペムブロリズマブの最後の用量後３０日以内に起こった。該当する場合、この来院は評価終了（ＥＯＡ）来院と組み合わされ得る（例えば、ペムブロリズマブの中止は、疾患の進行時または新しい抗がん療法の開始時に起こった）。

治療期間（コホート３Ｂ）：ＮＭＡ－ＬＤ（７日）、ＴＩＬ、注入（１日）、続いてＩＬ－２投与（１～４日）を含む最大１２日。ＥＯＴ来院は、患者がＩＬ－２の最後の用量を受けたときに起こった。ＥＯＴ来院は、治療中止後３０日以内に行われ、評価期間中にこの間隔内に起こる予定の任意の来院と組み合わせることができる。

評価期間：０日目のＴＩＬ注入後に開始し、疾患の進行時に終了し、新しい抗がん療法の開始、研究評価への同意の部分的撤回、または５年（６０ヶ月）のいずれか早い方。患者が疾患の進行に達するか、または新しい抗がん療法を開始すると、評価終了（ＥＯＡ）来院が起こった。

本明細書に記載されるように調製されたＴＩＬを用いたＴＩＬ自己療法は、以下のステップから構成されていた。

１）ＴＩＬ細胞製品の供給源として機能する自己組織を提供するための腫瘍切除、

２）中央の適正製造基準（ＧＭＰ）施設で産生されたＴＩＬ製品、

３）７日間のＮＭＡ－ＬＤプレコンディショニングレジメン、

４）コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａ：患者は、ＴＩＬ産生のための腫瘍切除及びベースライン走査の完了後であるが、ＮＭＡ－ＬＤレジメンの開始前にペムブロリズマブの単回注入を受ける。ペムブロリズマブの次の用量は、ＩＬ－２の完了後以降であり、その後Ｑ３Ｗ±３日継続する。

５）自己ＴＩＬ製品の注入（０日目）、ならびに

６）最大６用量までのＩＶ ＩＬ－２投与。

コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａでは、ペムブロリズマブの次の用量は、ＩＬ－２の完了後以降であり、その後≦２年（２４ヶ月）または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方までＱ３Ｗ±３日間継続する。

コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａのフローチャートは、図７に見出すことができる。コホート３Ｂのフローチャートは、図８に見出すことができる。患者は、腫瘍の適応によって適切なコホートに割り当てられた。

ＴＩＬ療法＋ペムブロリズマブ（コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａ）。患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は１つ以上の腫瘍病変を切除し、ＴＩＬ産生のために中央製造施設に送られた。

次に、ＮＭＡ－ＬＤレジメンは模倣され、－７日目及び－６日目にメスナ（部位当たりの標準治療またはＵＳＰＩ／ＳｍＰＣ）を含む２日間のＩＶシクロホスファミド（６０ｍｇ／ｋｇ）、ならびにその後５日間のＩＶフルダラビン（２５ｍｇ／ｍ２：－５日目～－１日目）で構成された。

コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａの患者は、ＴＩＬ産生のために腫瘍切除の完了後にペムブロリズマブの単回注入を受け、ＮＭＡ－ＬＤレジメンの開始前にベースライン走査を受けた。６００，０００ＩＵ／ｋｇの用量でＩＶでのＩＬ－２投与は、０日目のＴＩＬ注入の完了の３時間後、ただし２４時間後までに開始された。追加のＩＬ－２投与は、最大６用量まで、およそ８～１２時間毎に行われる。ペムブロリズマブの第２の用量は、ＩＬ－２の完了後以降であった。患者は、第２のペムブロリズマブ投与前に、すべてのＩＬ－２関連毒性（グレード≦２）から回復している必要がある。ペムブロリズマブは、その後≦２年（２４ヶ月）または疾患の進行もしくは許容できない毒性のいずれか早い方まで、Ｑ３Ｗ±３日間継続する。

単剤としてのＴＩＬ療法（コホート３Ｂ）。患者はスクリーニングされ、腫瘍切除のための手術が予定された。その後、患者は１つ以上の腫瘍病変を切除し、ＴＩＬ産生のために中央製造施設に送られた。

次に、ＮＭＡ－ＬＤレジメンは、－７日目及び－６日目にメスナ（部位当たりの標準治療またはＵＳＰＩ／ＳｍＰＣ）を含む２日間のＩＶシクロホスファミド（６０ｍｇ／ｋｇ）、ならびにその後５日間のＩＶフルダラビン（２５ｍｇ／ｍ２：－５日目～－１日目）で構成された。

腫瘍由来の自己ＴＩＬ製品の注入は、フルダラビンの最後の用量から２４時間以内に起こった。６００，０００ＩＵ／ｋｇの用量でＩＶでのＩＬ－２投与は、ＴＩＬ注入の完了後３時間後、ただし２４時間後までに開始された可能性がある。

追加のＩＬ－２投与は、最大６用量まで、およそ８～１２時間毎に行われた。

腫瘍浸潤リンパ球の産生及び拡張。ＴＩＬ自己細胞製品は、患者の腫瘍／病変に由来する生存可能な細胞傷害性Ｔリンパ球で構成されており、中央のＧＭＰ施設でエクスビボで製造される。例えば、ＴＩＬ産生プロセスを示す例示的なフロー図を図９に示す。

ＴＩＬ製造プロセスは、個々の患者毎に直径≧１．５ｃｍの原発性または続発性転移性腫瘍病変（複数可）を外科的に切除した後に臨床現場で開始された。様々な解剖学的位置からの複数の腫瘍病変を切除して、腫瘍組織の全凝集体をまとめることができるが、輸送ボトルに存在する生体保存培地の量が限られているため、凝集体は、直径４．０ｃｍ、または重量１０ｇを超えてはならない。

腫瘍病変（複数可）が生体保存輸送ボトルに入れられると、それは中央のＧＭＰ製造施設への速達宅配便を使用して２℃～８℃で出荷される。到着時に、腫瘍標本（複数可）を断片に解剖し、その後、ヒト組換えＩＬ－２を用いたプレ急速拡張プロトコル（Ｐｒｅ－ＲＥＰ）において約１１日間培養した。

次いで、これらのＲＥＰ前細胞を、ＩＬ－２、ＯＫＴ３（［ムロモナブ－ＣＤ３］としても知られるヒトＣＤ３に対するマウスモノクローナル抗体）、及びフィーダー細胞としての照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の存在下で１１日間、急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）を使用してさらに拡張した。

次いで、拡張した細胞を採取し、洗浄し、配合し、凍結保存し、速達宅配便で臨床現場に出荷した。ＴＩＬ細胞製品の剤形は、ＴＩＬが由来する患者への注入の準備ができている凍結保存された自己の「生細胞懸濁液」であった。患者は、製品仕様当たり１×１０^９～１５０×１０^９生細胞の間に含まれる、製造及び放出された製品の全用量を受容することとした。臨床経験は、客観的な腫瘍応答がこの用量範囲全体で達成されたことを示し、これも安全であることが示されている（Ｒａｄｖａｎｙｉ， ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２，１８：６７５８－７０）。製品の全用量は、最大４つの注入バッグで提供された。

ＴＩＬ細胞製品を受容する患者の準備。この研究で使用されたＮＭＡ－ＬＤプレコンディショニングレジメン（すなわち、２日間のシクロホスファミド＋メスナ、続いて５日間のフルダラビン）は、国立がん研究所によって開発及び試験された方法に基づいていた。Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１，１７（１３），４５５０－７、Ｒａｄｖａｎｙｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２，１８（２４），６７５８－７０、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００８，２６（３２），５２３３－９、Ｐｉｌｏｎ－Ｔｈｏｍａｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１２，３５（８），６１５－２０、Ｄｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２００５，２３（１０），２３４６－５７、及びＤｕｄｌｅｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２，２９８（５５９４），８５０－４。７日間のプレコンディショニングレジメンに続いて、患者にＴＩＬ細胞製品を注入した。

ＴＩＬ注入後、８～１２時間毎にＩＶ ＩＬ－２（６００，０００ＩＵ／ｋｇ）を投与し、最初の用量は、ＴＩＬ注入の完了後３～２４時間の間に投与し、最大６回まで継続した。施設の基準に従って、ＩＬ－２の用量は、実際の体重に基づいて計算することができる。

各コホートの患者集団の選択は、以下のとおりである。
●コホート１Ａ：患者は、切除不能なＭＭの確定診断を受けた（ステージＩＩＩＣまたはステージＩＶ、米国癌合同委員会［ＡＪＣＣ］病期分類システムに従って組織学的に確認された）。眼内黒色腫患者は除外された。患者は、以前に免疫腫瘍学を標的とした薬剤を受けていてはならない。ＢＲＡＦ変異が陽性の場合、患者は、以前にＢＲＡＦ／ＭＥＫ標的療法を受けていた可能性があった。
●コホート２Ａ：患者は、進行性、再発性、及び／または転移性のＨＮＳＣＣを有しており、治療ナイーブであり得、病理学レポートを介した原発腫瘍の組織学的診断が必要である。患者は、以前に免疫療法レジメンを受けていてはならない。
●コホート３Ａ：患者は、ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）の確定診断を受けた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも１つの標的療法を受けていた。
●コホート３Ｂ：患者は、ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）の確定診断を受けており、以前にＣＰＩ（例えば、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１）による全身療法を受けていた。有効な標的療法が利用可能ながん遺伝子駆動腫瘍を有する患者は、少なくとも１つの標的療法を受けていた。

コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａの免疫療法を除き、すべての患者は、最大３つの全身抗がん療法を受けていた（以下の包含基準を参照）。以前に治療を受けた場合、患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が確認されていた。

包含基準患者は、研究に参加するために以下の包含基準をすべて満たしていなければならない。

１）すべての患者は、組織学的または病理学的にそれぞれの組織学的悪性腫瘍の確定診断を受けた。
○切除不能または転移性黒色腫（コホート１Ａ）
○頭頸部の進行性、再発性、または転移性扁平上皮癌（コホート２Ａ）
○ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、大細胞癌）（コホート３Ａ及び３Ｂ）。

２）コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａのみ：患者は、免疫療法ナイーブであった。以前に治療された場合、患者は、最近の治療中または治療後に進行していた。コホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａは、最大３つの全身性抗がん療法を以前に受けている可能性があり、具体的には以下の通りである。
○コホート１Ａ：切除不能または転移性黒色腫（ステージＩＩＩＣまたはステージＩＶ）を有する患者。ＢＲＡＦ変異陽性の場合、患者は、ＢＲＡＦ阻害剤を投与されている可能性がある。
○コホート２Ａ：切除不能または転移性ＨＮＳＣＣの患者。最初の化学放射線療法を受けていた患者は許可された。
○コホート３Ａ：ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌）を有し、免疫療法ナイーブであり、局所進行または転移の状況で≦３つの以前の全身療法後に進行した患者。アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から１２ヶ月以内に疾患が進行した場合、１つの治療を受けたとみなされた。標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー（例えば、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ）を有する患者は、少なくとも１つの標的療法の後に進行したに違いない。

３）コホート３Ｂのみ：ステージＩＩＩまたはステージＩＶのＮＳＣＬＣ（扁平上皮癌、非扁平上皮癌、腺癌、または大細胞癌）を有し、≦３つの以前の全身療法の一部として、ＣＰＩ（例えば、抗ＰＤ－１／抗ＰＤ－Ｌ１）による全身療法を以前に受けていた患者。
○患者は、最近の治療中または治療後にＸ線写真で進行が確認されていた。
○アジュバントもしくはネオアジュバントの設定で、または根治的化学放射線療法の一部として全身療法を受けた患者は適格であり、以前の全身療法の完了から１２ヶ月以内に疾患が進行していた場合、１つの治療を受けたとみなされた。
○標的療法に感受性のある変異を有する既知のがん遺伝子ドライバー（例えば、ＥＧＦＲ、ＡＬＫ、ＲＯＳ）を有する患者は、少なくとも１つの標的療法の後に進行したに違いない。

４）患者は、ＴＩＬ治験薬産生のために、切除後に最少直径１．５ｃｍの切除可能な病変（または凝集病変）を少なくとも１つ有していた。外科的切除が患者に追加のリスクをもたらさない限り、腫瘍組織を、複数の多様な転移性病変から得ることが奨励された。
○ＴＩＬ生成のために切除が検討されている病変が、以前に照射された領域内にある場合、その病変は、切除前にＸ線写真で進行を示している必要がある。
○患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。

５）患者は、ＴＩＬ製造のための腫瘍切除後、標準ＲＥＣＩＳＴ １．１ガイドラインによって定義されているように、残留する測定可能な疾患を有していた（例えば、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ２００９，４５，２２８－２４７を参照）。
○以前に照射された領域内の病変は、それらの病変で疾患の進行が示されていない限り、標的病変として選択されなかった。
○ＲＥＣＩＳＴ毎に依然として測定可能なＴＩＬ生成のために部分的に切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。

６）患者は、同意時に１８歳以上であった。

７）患者の米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ、ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスは０または１であり、推定平均余命は３ヶ月以上であった。

８）妊娠可能性のある患者または妊娠可能性のあるパートナーがいる患者は、治療中に承認された非常に効果的な避妊方法を実践し、すべてのプロトコル関連療法を受けてから１２ヶ月間継続しなければならなかった（注記：生殖可能性のある女性は、治療中及びＩＬ－２の最後の投与後１２ヶ月間、またはペムブロリズマブの最後の投与後４ヶ月間のいずれか遅い時期に有効な避妊法を使用することとした）。男性は、研究中または治療中止後１２ヶ月のいずれか遅い方で、精子を提供することができなかった。

９）患者は、以下の血液学的パラメータを有していた：
○絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１０００／ｍｍ３、
○ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬ、
○血小板数≧１００，０００／ｍｍ３。

１０）患者は、適正な臓器機能を有していた：
○血清アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）／血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＳＧＰＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）／ＳＧＯＴが、正常上限（ＵＬＮ）の≦３倍、肝転移がＵＬＮの≦５倍の患者。
○スクリーニング時にコッククロフト・ゴールト式を使用して推定されたクレアチニンクリアランス≧４０ｍＬ／分。
○総ビリルビン≦２ｍｇ／ｄＬ。
○ジルベール症候群の患者は、総ビリルビン≦３ｍｇ／ｄＬでなければならない。

１１）患者は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ１及びＨＩＶ２）に対して血清陰性であった。Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ｂ型肝炎コア抗体（抗ＨＢｃ）、または急性もしくは慢性感染を示すＣ型肝炎ウイルス（抗ＨＣＶ）の血清学が陽性の患者は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に基づくウイルス量及び特定のウイルス曝露の局所有病率に応じて登録した。

１２）患者は、最初の試験治療（すなわち、ＮＭＡ－ＬＤまたはペムブロリズマブの開始）の前に、以下に詳述されるように、最小期間の以前の抗がん療法（複数可）からのウォッシュアウト期間を有していた。
○標的療法：ウォッシュアウトが治療の開始の最低１４日前であれば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＭＥＫ、ＢＲＡＦ、ＡＬＫ、ＲＯＳ１または他の標的薬剤（例えば、エルロチニブ、アファチニブ、ダコミチニブ、オシメルチニブ、クリゾチニブ、セリチニブ、またはロラチニブ）による以前の標的療法が許可された。
○化学療法：ウォッシュアウトが治療開始の最低２１日前であれば、アジュバント、ネオアジュバント、または根治的化学療法／化学放射線療法が許可された。
○コホート３Ｂのみの免疫療法、抗ＰＤ－１、他のｍＡｂ、またはワクチンによる以前のチェックポイント標的療法は、ＮＭＡ－ＬＤの開始前≧２１日のウォッシュアウト期間で許可された。
○緩和的放射線療法：脱毛症、皮膚色素沈着の変化、または他の臨床的に重要でない事象、例えば小領域放射線皮膚炎または直腸もしくは尿意切迫感を除いて、すべての放射線関連毒性がグレード１またはベースラインに解決された場合、以前の外部ビーム放射線療法が許可された。
○ＲＥＣＩＳＴ１．１を介して応答のターゲットとして評価されている腫瘍病変（複数可）は、放射線ポータルの外側にあったが、ポータル内の場合は、進行が実証されていなければならない（上記の包含基準を参照）。
○手術／事前に計画された手順：創傷治癒が起こり、すべての合併症が解消され、腫瘍切除の前に少なくとも１４日が経過している場合（主要な手術手順の場合）、以前の外科的手順（複数可）が許可された。

１３）患者は、コホートの割り当て前に、脱毛症または白斑を除いて、以前のすべての抗がん治療関連有害事象（ＴＲＡＥ）からグレード１以下（有害事象の一般用語基準［ＣＴＣＡＥ］による）に回復していた。

１４）以前の抗がん療法から安定したグレード２以上の毒性を有する患者は、医療モニターと相談した後、ケースバイケースで検討された。

１５）ペムブロリズマブによる治療によって悪化すると合理的に予想されない不可逆的毒性を有するコホート１Ａ、２Ａ、及び３Ａの患者は、医療モニターとの協議後にのみ含まれた。コホート３Ｂの患者のみ、免疫チェックポイント阻害剤ＣＰＩ（複数可）による以前の治療の結果として、グレード≧２の下痢または大腸炎が記録されている患者は、少なくとも６ヶ月間無症候性であったか、または治療後腫瘍切除前の目視評価による結腸内視鏡検査で正常でなければならない。

１６）患者は、保護された健康情報の使用及び開示について、書面による承認を提供していなければならない。

除外基準。以下の基準のうちのいずれかを満たす患者は、研究から除外した。

１）ブドウ膜／眼起源の黒色腫を有する患者

２）過去２０年以内に骨髄非破壊的または骨髄破壊的化学療法レジメンを含む、臓器同種移植または以前の細胞移植療法を受けていた患者。（注記：この基準は、以前のＴＩＬ治療で以前のＮＭＡ－ＬＤレジメンがあったことを除いて、ＴＩＬによる再治療を受けている患者に適用可能であった。）

３）症候性及び／または未治療の脳転移を有する患者。
○脳転移が根治的に治療された患者は、治療開始前に患者が２週間以上にわたって臨床的に安定し、治療後の磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による新たな脳病変がなく、患者が継続的なコルチコステロイド治療を必要としない場合、医療モニターと相談した後に登録が検討される。

４）登録から２１日以内に全身ステロイド療法を受けている患者。

５）妊娠中または授乳中の患者。

６）治験責任医師の意見では、研究参加のリスクが高い、活動性の医学的疾患（複数可）、例えば全身性感染症（例えば、梅毒もしくは抗生物質を必要とする他の感染症）、凝固障害、または心臓血管系、呼吸器系、もしくは免疫系の他の活動性の主要な医学的疾患を有していた患者。

７）患者は、活動性または以前に記録された自己免疫または炎症性障害（肺炎、炎症性腸疾患（例えば、大腸炎もしくはクローン病）、憩室炎（憩室症を除く）、全身性紅斑性狼瘡、サルコイドーシス症候群、またはウェゲナー症候群（多発血管炎を伴う肉芽腫症、グレイブス病、関節リウマチ、下垂体炎、ブドウ膜炎等））を有しない場合がある。以下は、この基準の例外であった。
○白斑または脱毛症を有する患者。
○甲状腺機能低下症（例えば、橋本症候群に続く）が安定している患者
○ホルモン補充療法。
○全身療法を必要としない任意の慢性皮膚疾患。
○食事療法だけで制御されるセリアック病の患者。

８）治療開始前２８日以内に生ワクチン接種または弱毒化ワクチン接種を受けていた患者。

９）何らかの形態の原発性免疫不全症（重症複合免疫不全症［ＳＣＩＤ］及び後天性免疫不全症候群［ＡＩＤＳ］など）を有していた患者。

１０）治験薬のいずれかの成分に対する過敏症の病歴を有する患者。ＴＩＬは、以下のうちのいずれかを含むがこれらに限定されない、ＴＩＬ製品製剤のいずれかの成分に対する既知の過敏症を有する患者には投与されなかった。
○ＮＭＡ－ＬＤ（シクロホスファミド、メスナ、及びフルダラビン）
○Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）、アルデスロイキン、ＩＬ－２
○アミノグリコシド系抗生物質（すなわち、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン［ゲンタマイシン過敏症の皮膚検査陰性者を除く］）
○ジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］、ＨＳＡ、ＩＬ－２、及びデキストラン－４０を含むＴＩＬ製品製剤の任意の成分
○ペムブロリズマブ

１１）左心室駆出率（ＬＶＥＦ）が４５％未満の患者、またはニューヨーク心臓協会クラスＩＩ以上の患者。≧６０歳の患者、あるいは虚血性心疾患、胸痛、または臨床的に重大な心房性及び／または心室性不整脈の病歴のある患者において、不可逆的な壁運動異常を示す心臓ストレス試験。
○治験依頼者の医療モニターの承認を得て、駆出率及び心臓病クリアランスが十分であれば、心臓ストレス試験に異常がある患者を登録することができた。

１２）閉塞性または拘束性肺疾患があり、予測正常値の６０％以下のＦＥＶ１（１秒の強制呼気量）が記録されている患者。
○患者が上気道の解剖学的構造の異常（すなわち、気管切開）のために信頼できる肺活量測定を行うことができなかった場合は、６分間の歩行試験を使用して呼吸機能を評価した。年齢及び性別に対して予測される少なくとも８０％の距離を歩くことができなかった患者、または試験中の任意の時点で低酸素症の証拠を示した患者（ＳｐＯ２＜９０％）は除外される。

１３）過去３年以内に別の原発性悪性腫瘍があった患者（治療を必要としなかった、または１年以上前に治癒的に治療された患者を除き、治験責任医師の判断では、非黒色腫皮膚癌、ＤＣＩＳ、ＬＣＩＳ、前立腺癌グリーソンスコア≦６または膀胱癌を含むが、これらに限定されない重大な再発リスクをもたらさなかった）。

１４）治療開始から２１日以内に治験薬を用いた別の臨床試験への参加。

研究エンドポイント及び計画された分析。一次エンドポイント及び二次エンドポイントは、コホートによって別々に分析した。

主目的：ＯＲＲは、有効性分析セットの中でＲＥＣＩＳＴ１．１に従って治験責任医師が評価した最良の応答として確認されたＰＲまたはＣＲのいずれかを達成した患者の割合として定義された。

客観的反応を各疾患評価毎に評価し、ＯＲＲは、対応する両側９０％ ＣＩを用いて二項比率として表された。各コホートの一次分析は、評価期間の早期に進行／期限切れまたは中止されない限り、コホート毎に治療を受けたすべての患者が１２ヶ月間追跡される機会があるときに行った。

安全性一次エンドポイントは、各コホート内のグレード３以上のＴＥＡＥ発生率によって測定され、対応する両側９０％ ＣＩの二項比率として表された。

二次エンドポイント：二次有効性エンドポイントは、次のように定義された。
●治験責任医師によって評価された確認済みＣＲを達成した応答者に基づくＣＲ率。ＤＣＲは、確認されたＰＲ／ＣＲまたは持続的なＳＤ（少なくとも６週間）を達成した患者数の合計を、有効性分析セットの患者数で割り、１００％を掛けたものとして導き出された。ＣＲ率及びＤＣＲは、点推定及びその両側９０％ ＣＩを使用して要約した。
●ＤＯＲは、客観的な応答を達成した患者の間で定義された。再発性もしくは進行性疾患が客観的に記録された最初の日付、またはその後の抗がん療法の受容もしくは患者の死亡（最初に記録された方）まで、初回応答（ＰＲ／ＣＲ）基準が満たされていることから測定した。ＰＤを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点より前に死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られる。
●ＰＦＳは、リンパ球枯渇からＰＤまでの時間（月単位）、または何らかの原因による死亡のいずれか早い方の事象として定義された。ＰＤを経験していない、またはデータカットもしくは最終データベースロックの時点で死亡していない患者は、腫瘍状態の適切な評価が行われた最終日に事象時間が打ち切られた。
●ＯＳは、リンパ球枯渇の時点から何らかの原因による死亡までの時間（月単位）として定義された。データカットまたは最終的なデータベースロックの時点までに死亡していない患者は、既知の生存状態の最終日に事象時間が打ち切られた。
●ＤＯＲ、ＰＦＳ、及びＯＳは、右側打ち切りを受けた。カプラン・マイヤー法を使用して、事象までの時間の有効性エンドポイントを要約する。腫瘍評価のベースラインデータは、すべてのコホートのリンパ球枯渇前の最後の走査であった。
●上記の有効性パラメータは、ベースラインの疾患特徴：ＢＲＡＦステータス（コホート１Ａのみ）、ＨＰＶステータス（コホート２Ａのみ）、扁平上皮または非扁平上皮肺疾患（コホート３Ａ及び３Ｂのみ）、ならびに抗ＰＤ－Ｌ１ステータスによって定義されたサブセットに適用可能なコホートについて推定される。

実施例１５：局所進行性または転移性非小細胞肺癌患者における自己腫瘍浸潤リンパ球の第２相多施設研究
この実施例は、局所進行性、切除不能または転移性の非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）で、アクショナブルなドライバー変異がなく、チェックポイント阻害剤（ＣＰＩ）＋化学療法±ベバシズマブ（ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ）、ＶＥＧＦＡ阻害剤を含む）からなる承認された単一の全身療法中の疾患進行またはそれに続く疾患進行を有する患者の治療に関するものであり、治療のためのコホートを以下に要約する。
●コホート１：ＣＰＩ治療前に腫瘍がプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）を発現しなかった患者（腫瘍割合スコア［ＴＰＳ］＜１％）。
●コホート２：ＣＰＩ治療前に腫瘍がＰＤ－Ｌ１（ＴＰＳ≧１％）を発現した患者。コホート３：ＣＰＩ治療前に腫瘍がＰＤ－Ｌ１（ＴＰＳ＜１％）を発現しなかった患者で、以下のうちの少なくとも１つが原因でＴＩＬ生成のための外科的採取を安全に受けられない患者：
〇許容できない外科的リスク、または
〇固形腫瘍における奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）ｖ１．１評価には、外科的にアプローチ可能な病変が必要であった。
●コホート４：再治療コホート：この研究のコホート１、２または３でＴＩＬベースの免疫療法で以前に治療されたことのある患者。

治療は、患者指向の療法のための個々の患者の腫瘍由来の自己ＴＩＬベースの免疫療法を使用して行われる。

ＴＩＬベースの免疫療法治療レジメンは、ＴＩＬベースの免疫療法注入の前に合計５日間のシクロホスファミド及びフルダラビンを使用したＮＭＡ－ＬＤ調製レジメンのコースを含み、ＴＩＬベースの免疫療法注入後のＩＬ－２投与（最大６回の用量）の限られたコースを含んでいた。移送されたＴＩＬの移植、拡張、及び活性化をサポートするために、ＮＭＡ－ＬＤ調製レジメン及びＩＬ－２をレジメンに含めた。

いくつかの調製レジメンがＴＩＬ療法と併せて使用されていた。ＮＭＡ－ＬＤの調製レジメンには、シクロホスファミド／フルダラビン、全身照射（ＴＢＩ）、または両方の組み合わせが含まれた。本例示的な研究は、ｃｙ－ｆｌｕレジメンを利用した。現在の研究で使用されているＮＭＡ－ＬＤ調製レジメンは、国立がん研究所（ＮＣＩ）によって開発及び試験された方法に基づいており、患者の入院期間を短縮するために、２日間のシクロホスファミドと５日間のフルダラビンを併用した。各患者は、ＴＩＬベースの免疫療法の注入前にＮＭＡ－ＬＤ調製レジメンを受ける。

治療は、すぐに注入可能な自己ＴＩＬベースの免疫療法である。ＴＩＬベースの免疫療法は、個々の患者の腫瘍から取得され、サイトカインＩＬ－２及びマウスモノクローナル抗体（ｍＡｂ）からヒトＣＤ３（ＯＫＴ３）の存在下での細胞培養を介してエクスビボで拡張した自己ＴＩＬから構成された。

最終医薬品は、ＩＶ注入のために製剤化された凍結保存された生細胞懸濁液である。エクスビボで拡張された自己ＴＩＬは、ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標）ＣＳ１０凍結保存培地／ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ（最終ジメチルスルホキシド［ＤＭＳＯ］濃度：５％）中で、０．５％ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）及び３００ＩＵ／ｍＬ（１２ｎｇ／ｍＬ）のＩＬ－２とともに製剤化された。製剤化された製品を、気相液体窒素中で－１５０℃未満に制御された速度で凍結し、クライオシッパーで適切な臨床現場に発送し、患者に注入するために使用する前に解凍した。

製造プロセスは、生存可能な腫瘍材料を含有する腫瘍病変の外科的切除またはコア生検によって臨床現場で開始された。複数の別個の病変生検の集合体を患者から切除することもでき、患者の安全性が認められる場合は奨励された。腫瘍検体を輸送培地に置き、速達便で２～８℃で適正製造基準（ＧＭＰ）製造施設に発送した。ＧＭＰ製造施設に到着すると、腫瘍検体を断片に解剖し、次いで活性化し（初期拡張ステップ）、急速拡張プロトコル（ＲＥＰ）段階に必要な生細胞の最小数を生成した。腫瘍はまた、酵素的に解離することもでき、ＴＩＬは、ＲＥＰに進む前にバイオマーカーの発現のために選択することができる。ＲＥＰステージ（第２の拡張ステップ）は、ＩＬ－２、ＯＫＴ３、及び照射された同種異系末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の存在下で細胞をさらに拡張させる。次いで、ＲＥＰ拡張細胞を採取し、洗浄し、血液輸送／注入バッグ中に製剤化して、宅配便によって臨床現場に発送する。ＴＩＬベースの免疫療法の製造プロセスの図は、図３４及び３５に提供される。

ＴＩＬベースの免疫療法最終製品の各凍結保存バッグを、患者特有のラベルでラベル付けした。ＴＩＬベースの免疫療法は、患者に投与するために製造施設から臨床現場に発送された。

この実施例は、局所的に進行した切除不能または転移性ＮＳＣＬＣを有する患者におけるＴＩＬベースの免疫療法を評価する前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第２相研究に関連していた。

以下のコホートを研究した。
●コホート１：既知のアクショナブルなドライバー変異がなく、ＣＰＩ治療の前に腫瘍がＰＤ－Ｌ１（腫瘍割合スコア［ＴＰＳ］＜１％）を発現しなかったステージＩＶのＮＳＣＬＣ患者、ＣＰＩ＋化学療法±ベバシズマブの併用からなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた患者、ＴＩＬ産生のために直径が最小１．５ｃｍの少なくとも１つの切除可能な病変（または凝集した病変）を有し、切除後にＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるように少なくとも１つの残りの測定可能な病変を有していた患者における、単剤療法としてのＴＩＬベースの免疫療法。
●コホート２：既知のアクショナブルなドライバー変異がなく、ＣＰＩ治療の前に腫瘍がＰＤ－Ｌ１（ＴＰＳ≧１％）を発現したステージＩＶのＮＳＣＬＣ患者、ＣＰＩ＋化学療法±ベバシズマブの併用からなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた患者、及びＴＩＬ産生のために直径が最小１．５ｃｍの少なくとも１つの切除可能な病変（または凝集した病変）を有し、切除後にＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるように少なくとも１つの残りの測定可能な病変を有していた患者における、単剤療法としてのＴＩＬベースの免疫療法。
●コホート３：任意の既知のアクショナブルなドライバー変異がなく、腫瘍がＣＰＩ治療の前にＰＤ－Ｌ１（ＴＰＳ＜１％）を発現しなかったステージＩＶのＮＳＣＬＣ患者、ＣＰＩ＋化学療法±ベバシズマブの併用からなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた患者、及び以下：１）許容できない外科的リスク、または２）外科的にアプローチ可能な病変が、ＲＥＣＩＳＴ評価のために必要である、のうちの少なくとも１つが原因でＴＩＬ生成のための外科的採取を安全に受けることができなかった患者における、単剤療法としてのＴＩＬベースの免疫療法。
●コホート４：コホート１、２または３への参加の一環として以前にＴＩＬベースの免疫療法を受けた患者における、再治療としてのＴＩＬベースの免疫療法単剤療法。

コホート１、２、３、及び４について、すべての患者は、シクロホスファミド及びフルダラビンからなる骨髄非破壊的リンパ球枯渇（ＮＭＡ－ＬＤ）前処置レジメンが先行して、自己凍結保存ＴＩＬベースの免疫療法を受けた。ＴＩＬベースの免疫療法注入後、最大６用量のＩＶ ＩＬ－２（アルデスロイキンまたはそのバイオシミラーもしくはバリアントなど）を投与した。あるいは、デクレッシェンドＩＬ－２または低用量ＩＬ－２を、本明細書に記載されるように使用してもよい。

ＴＩＬベースの免疫療法による自己ＴＩＬ療法には、以下の一般的なステップが含まれていた。
●自己ＴＩＬ細胞製品のソースとして機能した自己組織を提供するための腫瘍採取、
●中央適正製造基準（ＧＭＰ）施設における自己ＴＩＬベースの免疫療法治験薬（ＩＰ）の製造、
●５日間の骨髄非破壊的リンパ球枯渇（ＮＭＡ－ＬＤ）前処置レジメン、
●ＴＩＬベースの免疫療法製品の注入（０日目）、及び
●≦６用量のＩＶ ＩＬ－２の投与。

主目的は、独立審査委員会（ＩＲＣ）（コホート１及び２）または治験責任医師コホート３及びコホート４によって評価された、固形腫瘍の奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ１．１）を使用して、客観的奏効率（ＯＲＲ）によって決定されたチェックポイント阻害剤（複数可）（ＣＰＩ［ｓ］）＋化学療法±ベバシズマブからなる単一の承認された全身療法中またはその後に疾患進行が認められた、アクショナブルなドライバー変異がない、局所的に進行した切除不能または転移性のＮＳＣＬＣ患者におけるＴＩＬベースの免疫療法の有効性を評価することである。

副次的目的は、ＲＥＣＩＳＴ１．１を使用してＯＲＲによって決定され、治験責任医師（コホート１及び２）によって評価されたＴＩＬベースの免疫療法の有効性を評価し、完全奏効率（ＣＲ）；奏効期間（ＤＯＲ）；疾患制御率（ＤＣＲ）；ＲＥＣＩＳＴ １．１を使用して、ＩＲＣ（コホート１及び２）ならびに治験責任医師（すべてのコホート）によって評価された無増悪生存期間（ＰＦＳ）；ならびに全生存期間（ＯＳ）を使用して、ＴＩＬベースの免疫療法の有効性をさらに評価し、グレード３以上の治療中間有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率によって測定された、ＮＳＣＬＣ患者におけるＴＩＬベースの免疫療法の安全性プロファイルを特徴付けた。コホート３のみについて、コア生検からＴＩＬベースの免疫療法を生成する効率を評価する。

探索的目的：（１）ＴＩＬベースの免疫療法の持続性を評価し、反応、転帰、及び毒性変数に影響を与える可能性のある免疫相関を特定した。（２）それぞれの適応症固有の健康関連生活の質（ＨＲＱｏＬ）パラメータを評価した。

一次エンドポイント：ＯＲＲは、ＩＲＣ（コホート１及び２）または治験責任医師（コホート３及び４）によってＲＥＣＩＳＴ１．１に従って評価された。

二次エンドポイント：（１）重症度、重篤度、研究治療との関係、ならびに重篤な有害事象（ＳＡＥ）、治療関連有害事象、及び早期治療中止または評価期間からの離脱または死亡につながる有害事象を含む、治療下で発現した有害事象（ＴＥＡＥ）の特徴。（２）ＲＥＣＩＳＴ１．１（コホート１及び２）に従ってＩＲＣによって評価された、ＣＲ（完全奏効）率、ＤＯＲ（奏効期間）、ＤＣＲ（疾患制御率）、及びＰＦＳ（無増悪生存期間）。（３）ＲＥＣＩＳＴ１．１（すべてのコホート）に従って治験責任医師によって評価された、ＯＲＲ（客観的奏効率）、ＣＲ率、ＤＯＲ、ＤＣＲ、及びＰＦＳ。（４）ＯＳ（全生存）。（５）コア生検から生成されたＴＩＬ製品の成功率（コホート３）。

探索的エンドポイント：ＴＩＬ製品を含むＴ細胞のインビボ持続性を、経時的に患者の血液中のＴＩＬ製品特異的Ｔ細胞受容体－ベータ相補性決定領域３（ＣＤＲ３）配列の存在を監視することによって評価した。製品及び末梢血試料中に存在するＣＤＲ３配列を、ディープシーケンシングを使用して同定した。

ＴＩＬベースの免疫療法の活性の予測的及び薬力学的臨床バイオマーカーの同定を目的とした探索的エンドポイントには、以下も含まれた。
●ＴＩＬベースの免疫療法の表現型及び機能的特徴、
●腫瘍組織の免疫プロファイル、
●ＴＩＬ製品、腫瘍組織、及び／またはＰＢＭＣの遺伝子発現プロファイル、
●腫瘍の変異ランドスケープ、
●循環免疫因子、ならびに
●ＰＢＭＣの免疫組成物。

欧州がん研究治療機関（ＥＯＲＴＣ）の生活の質質問票（ＱＬＱ）Ｃ３０及びＱＬＱ ＬＣ１３によって評価されたＨＲＱｏＬ（健康関連の生活の質）も含まれた。

研究デザインの詳細：前向き、非盲検、マルチコホート、非ランダム化、多施設第２相研究では、ＴＩＬベースの免疫療法による養子細胞療法（ＡＣＴ）が評価された。

すべての患者は、以下のステップからなるＴＩＬベースの免疫療法を受けた。
●腫瘍採取は自己ＴＩＬ細胞製品のソースとして機能する自己組織を提供した、
●適正製造基準（ＧＭＰ）に従って稼働する中央施設における自己ＴＩＬベースの免疫療法治験薬（ＩＰ）の製造、
●５日間の骨髄非破壊的リンパ球枯渇（ＮＭＡ－ＬＤ）前処置レジメン、
●ＴＩＬベースの免疫療法製品の注入（０日目）、及び
●≦６用量のＩＶ ＩＬ－２の投与。

別段の指定がない限り、以下の一般的な連続期間が４つのコホートすべてで発生する。
１．スクリーニング期間：インフォームドコンセントフォーム（ＩＣＦ）の署名から登録まで
２．前治療期間：登録から調製ＮＭＡ－ＬＤレジメンの開始まで。
３．治療期間：調製ＮＭＡ－ＬＤの開始から治療終了（ＥＯＴ）来院まで。これは、ＮＭＡ－ＬＤ（－５日目～－１日目）、ＴＩＬベースの免疫療法注入（０日目）、続いてＩＬ－２投与（０日目または１～３日目または４日目）を含む、８～９日間の治療で構成された。ＥＯＴは、０日目のおよそ３０日後に起こった。
４．治療後のフォローアップ期間。これは以下で構成されている。
ａ．治療後有効性フォローアップ期間（ＴＥＦＵ）：疾患の進行または新しい抗がん療法の開始のいずれか早い方によって促される、ＥＯＴ来院から研究完了（治療後５年［６０ヶ月］）または有効性評価終了（ＥＯＥＡ）来院まで。
ｂ．長期フォローアップ期間（ＬＴＦＵ）：上記のようなＥＯＥＡから研究完了まで（治療後５年［６０ヶ月］）。

研究参加者（登録患者）は、早期にＬＴＦＵに移行する（例えば、同意の部分的撤回、または何らかの理由でＴＩＬベースの免疫療法を受けないと判断された場合）。研究の早期中止は、治験依頼者による同意撤回、死亡、フォローアップ不能、または研究終了のいずれかによって促された。研究デザインのフローチャートを図３６に提示する。

患者は、０日目（すなわち、－５日目～－１日目）に予定されているＴＩＬベースの免疫療法注入の前に開始された５日間の前処置ＮＭＡ－ＬＤレジメンを受ける。ＮＭＡ ＬＤレジメンは、－５日目及び－４日目のメスナ（現場の標準治療またはＵＳＰＩ／ＳｍＰＣ毎）を伴う２日間の静脈内（ＩＶ）シクロホスファミド（６０ｍｇ／ｋｇ）、及び５日間のフルダラビンＩＶ（２５ｍｇ／ｍ２、－５日目～－１日目）で構成された。

６００，０００ＩＵ／ｋｇの用量でＩＶでのＩＬ－２ ＩＶ投与は、０日目のＴＩＬベースの免疫療法注入の完了の３時間後、ただし２４時間後までに開始された。追加のＩＬ－２用量は、およそ８～１２時間毎に、最大６回の合計用量で与えた。

メスナの調製：メスナは、シクロホスファミド投与に関連する出血性膀胱炎のリスクを低減するために投与された。メスナは、局所標準に従って連続的または断続的な注入として投与された。

シクロホスファミドの量が減少した場合、メスナの総用量は調整されなかった。施設標準に従ってメスナ注入または注入の量を希釈する。

シクロホスファミド及びメスナの注入：２５０ｍＬまたは５００ｍＬの総量中のシクロホスファミド（６０ｍｇ／ｋｇ）（例えば、水［Ｄ５Ｗ］または０．９％塩化ナトリウム［ＮａＣｌ］中の５％デキストロース）。メスナ（１５ｍｇ／ｋｇ）を、連続的に注入した場合、シクロホスファミドをおよそ２時間にわたって（－５日目及び－４日目に）注入し、次いで、各シクロホスファミド用量と同時に開始して２４時間にわたって、好適な希釈剤中で残りの２２時間、３ｍｇ／ｋｇ／時間の速度で注入した。投与された総用量は、シクロホスファミドの用量の少なくとも１．３倍であった。出血性膀胱炎の予防のために、高用量または継続用量のメスナを投与することができる。

フルダラビンの注入：フルダラビン（２５ｍｇ／ｍ２）は、－５日目～－１日目の５日間連続して１日１回、およそ３０分間にわたってＩＶ投与されるものとした。

参加期間：全体として、研究参加期間は、治療から完了まで最大５年となる。

選択された包含基準：
●ＮＳＣＬＣ（扁平上皮、非扁平上皮、腺癌、大細胞、または混合組織型）の組織学的または病理学的に確定された診断を受けており、受けたＣＰＩ治療（すなわち、最初の治療選択を通知した歴史的ＴＰＳ）の前に腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）によって決定されたＰＤ－Ｌ１発現状態が文書化されていなければならない（コホート１及び３の場合、ＴＰＳ＜１％、ならびにコホート２の場合、ＴＰＳ≧１％）。
●ＣＰＩ及び化学療法を同時に含む単一の全身療法を受けており、この単一の全身療法では放射線疾患の進行が記録されている。
●アジュバントまたはネオアジュバント設定における、または決定的な化学放射線療法の一部としての以前の全身療法は、疾患がそのような療法の完了の間または１２ヶ月以内に進行しなかった場合、治療選択として計数されなかった。このプロトコルのＴＩＬ治療前は、コホート４（再治療）患者の治療選択として計数されなかった。
●運動耐性が予想される年齢の正常範囲の８５％以上であり、虚血または臨床的に重大な不整脈の徴候または症状はなかった。
●米国東海岸がん臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ、ＥＣＯＧ）のパフォーマンスステータスは０または１であり、治験責任医師の意見において、推定平均余命は６ヶ月超であった。
●コホート１及び２：ＴＩＬ産生のために、直径が最小１．５ｃｍの切除可能な病変（または凝集病変）を少なくとも１つ有していなければならない。
●コホート３のみ：患者は、単一のＲＥＣＩＳＴ１．１測定可能な病変を有し、外科的採取のために利用可能な追加の病変がないか、またはＴＩＬ生成のために安全に外科的採取を受けることができないが、ＴＩＬ生成のために十分な放射線学的ガイド付きコア生検を介して安全に腫瘍採取を有することができる。
●コホート４：いずれかのパラダイムに従った。
●すべてのコホート：採取を検討した病変が以前に照射された領域内にあった場合、病変は、採取前にＸ線画像による進行を示し、照射は登録の少なくとも３ヶ月前に完了していなければならない。患者は、プロトコルが必要とする検査に適正な組織病理標本を有していなければならない。

ＴＩＬ製造のための腫瘍採取後、すべての患者は、以下の事項を考慮して、ＲＥＣＩＳＴ１．１によって定義されるように、少なくとも１つの残りの測定可能な病変を有していなければならない。
●以前に照射された領域内の病変は、それらの病変に進行が示され、照射が登録の少なくとも３ヶ月前に完了していない限り、標的病変として選択されなかった。
●コホート１及び２のみ：ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１毎に依然として測定可能なＴＩＬ生成のために外科的に部分切除された病変を、非標的病変として選択することができるが、応答評価の標的病変としては機能することができなかった。
●コホート３のみ：ＴＩＬ生成のコア生検に他の病変が利用できなかった場合、単一のＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１測定可能病変が、コア生検の採取部位及び応答モニタリングの病変の両方として機能していた可能性がある。
●コホート４：いずれかのパラダイムに従ってもよいが、応答には少なくとも１つのＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１測定可能な病変がある必要がある。

ＮＳＣＬＣ患者における単一療法としてのＴＩＬベースの免疫療法の以下の有効性パラメータを各コホートで調査した：ＯＲＲ、ＣＲ、ＤＯＲ、ＤＣＲ、ＰＦＳ、及びＯＳ。

統計解析は、有効性及び安全性パラメータの推定に基づいており、コホート別に行われる。正式な統計学的比較は、コホート間で適用されなかった。主要有効性エンドポイントは、ＩＲＣ（コホート１及び２）または治験責任医師（コホート３及び４）によってＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１に従って評価されたＯＲＲであった。ＯＲＲ、ＣＲ率、及びＤＣＲを、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｘａｃｔ法に基づく点推定及び両側９５％信頼限界を使用して要約した。ＤＯＲ、ＰＦＳ、及びＯＳなどの事象までの時間有効性エンドポイントを要約するために、Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法を使用した。ＤＯＲ分析は、客観的奏効を達成した患者に対して行った。安全性解析は記述的であり、研究の中止、バイタルサイン、及び臨床検査につながるＴＥＡＥ、ＳＡＥ、及びＡＥの要約に基づいていた。

コホート１、２及び３において、ＴＩＬベースの免疫療法を注入された計画患者の総数は、およそ９５人であった。コホート１及び２について、各コホートにおよそ４０人の患者を選択した。各コホートについて、ミニマックスを用いたサイモンの２段階デザイン（Ｓｉｍｏｎ，１９８９）を使用して、ＯＲＲ＞１０％の代替仮説に対する≦１０％ ＯＲＲの帰無仮説を検証した。第１段階では、２５人の患者が集められた。これらの２５人の患者で治療に応答する患者が２人以下であれば、コホートを終了することができた。それ以外の場合、ステージ１の解析と同時に、合計４０人の患者に対してステージ２への拡張が起こった。第２段階の終わりに、合計４０人の患者のうち少なくとも７人の患者が治療に反応した場合、帰無仮説は却下された。この２段階デザインは、０．１の片側アルファレベルでのＴＩＬベースの免疫療法のための２０％ ＯＲＲの仮定に基づいて、１０％ ＯＲＲの帰無仮説を却下するために７０％のパワーを提供した。コホート３について、およそ１５人の患者が計画され、これにより、Ｃｌｏｐｐｅｒ－Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｘａｃｔ法による半幅９０％信頼区間（ＣＩ）＜０．２３の推定ＯＲＲが得られた。コホート４について、この研究のコホート１、２または３においてＴＩＬベースの免疫療法で以前に治療されたことのある再治療コホートの患者。

実施例１６：キメラ共刺激受容体設計に好適な腫瘍マーカーの同定
この実施例は、ＣＣＲ及びＣＣＲを発現するように修飾されたＴＩＬとの使用に好適な腫瘍マーカーの同定について説明する。腫瘍試料のフローサイトメトリー分析を使用して、本明細書の他の箇所に記載される２つのマーカーであるＥＰＣＡＭ及びＴＲＯＰ－２の発現を測定した。ＥＰＣＡＭ、ＥＰＣＡＭ－ＰＥ（ＢＤ、カタログ＃５６６８４１）及びＡＰＣ（ＢＤ、カタログ番号５６６８４２）に対する抗体、クローン９Ｃ４、ならびにＴＲＯＰ－２、ＴＲＯＰ－２ ＰＥ（ＢＤ、カタログ番号５６４８３７）に対する抗体、クローン１６２－４６を使用するＢＤ Ｃａｎｔｏ ＩＩシステムを使用して、フローサイトメトリーを行った。図４３は、ＥＰＣＡＭ、ＴＲＯＰ－２、及び両方のマーカーの組み合わせの高い発現を示す、子宮頸癌腫瘍（識別番号１９１１２７１４２３）消化物のフローサイトメトリー分析を示す。図４４は、同様に、ＥＰＣＡＭ－ＰＥの代わりにＥＰＣＡＭ－ＡＰＣを使用した、子宮頸癌腫瘍消化物のフローサイトメトリー分析を示す。図４５は、頭頸部扁平上皮癌腫瘍（識別番号Ｈ３１０３）消化物上のＥＰＣＡＭ／ＴＲＯＰ－２発現のフローサイトメトリー分析を示す。図４６は、非小細胞肺癌腫瘍（識別番号Ｌ４１７２）消化物におけるＥＰＣＡＭ／ＴＲＯＰ－２発現を示す。より高いＥＰＣＡＭ及びＴＲＯＰ－２発現は、複数の腫瘍タイプ及び複製にわたって一貫して観察され、本明細書に記載のがんにおけるこれらの分子を標的とするＣＣＲの使用に好適であることを示した。

実施例１７：キメラ共刺激受容体で修飾されたＴＩＬ製品の調製
レンチウイルスベクターを調製して、細胞外ＰＤ－１結合ドメイン（配列番号２４４、配列番号２４５、または配列番号２４６に示されるものなど）を含むＣＣＲを生成してもよい。このＣＣＲの３つのバージョンは、図３６に示されるドメインを使用して、ＣＤ２８の完全なシグナル伝達ドメイン（ＹＭＮＭ＋ＰＲＲＰ＋ＰＹＡＰモチーフ）、部分シグナル伝達ドメイン（ＹＭＮＭ＋ＰＲＲＰモチーフ）、及びＹＭＮＭシグナル伝達ドメインのみ（配列番号５７２を参照）について調製してもよい。

レンチウイルスベクターは、それぞれ図３８、図３９、または図４０に対応する配列番号６１８、配列番号６１９、または配列番号６２０のヌクレオチド配列を含むように、本明細書にさらに記載される、及び／または当該技術分野で知られているクローニング方法を使用して構築されてもよい。

パッケージングのために、上述のレンチウイルスベクターを、ＶＳＶ－Ｇエンベローププラスミド、ならびにＧａｇ／Ｐｏｌ及びＲｅｖパッケージングプラスミドとともにＨＥＫ２９３Ｔパッケージング細胞に同時トランスフェクトしてもよい。およそ２日間のインキュベーション後、上清を収集し、遠心分離してゴミを取り除き、濾過する。レンチウイルス粒子は、ポリエチレングリコールを使用して濃縮され、スクロース勾配クッション超遠心分離によってさらに精製される。パイロットバッチ及び臨床バッチが試みられる前に、研究バッチにおけるトランスフェクション効率を評価するために、緑色蛍光タンパク質導入遺伝子が添加され得る。少なくとも１×１０^９ＴＵ／ｍＬのトランスフェクションユニット（ＴＵ）力価が望ましい。レンチウイルス産物を、エンドトキシンレベル及び他の放出パラメータについてアッセイし、その後、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬをトランスフェクトするために使用してもよい。例えば、Ｇｅｎ２プロセスは、本明細書の他の箇所に記載されるように（例えば、図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃに、１１日目のＲＥＰ開始前に）、ＲＥＰ前段階とＲＥＰ段階との間に、任意選択で、トランスフェクション前、トランスフェクション中、及び／またはトランスフェクション後の短い静置期間でＴＩＬをトランスフェクションするように修飾することができ、ＲＥＰ前段階の合計持続時間は、約３～約１４日であり、ＲＥＰ段階の合計持続時間は、約３～約１４日であり、１０^８細胞を超える治療的ＴＩＬ集団が得られ、腫瘍が得られた患者のがんの治療における使用に好適なＣＣＲを発現する。

前述のプロセスは、本明細書の他の箇所に記載されている、または当該技術分野で知られている、レトロウイルス及びトランスポザーゼ発現系を使用して行ってもよい。

実施例１８：ＴＩＬ上のケモカイン受容体発現
ＴＩＬ上のケモカイン受容体発現を評価するために、Ｇｅｎ２プロセスによって産生された９つの異なるＴＩＬラインを解凍し、２つの異なる日に特徴付けのために染色した。ＰＢＭＣを対照として使用した。使用されたＴＩＬロット及び結果を表８４に要約する。

フローサイトメトリー分析のために、Ｂｉｏ－Ｒａｄ ＺＥ５ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用した。ケモカイン受容体の表面染色のために、１×１０^６細胞を９６ウェルのＶ底プレートに播種した。次いで、細胞を洗浄し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）のヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ Ｆｃ受容体遮断溶液の存在下で、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＣＡ，ＵＳＡ）の生／死の固定可能な青色死細胞染色キットを用いて、室温で１０分間染色した。次いで抗体を細胞に添加し、試料を４℃で２５分間インキュベートした。次いで試料を２回洗浄し、濾過し、ＺＥ５分析装置で実行した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析を行った。すべてのゲーティングは、蛍光マイナス１（ＦＭＯ）対照に基づいていた。結果を図４７、４８、４９、及び５０に示す。ＣＸＣＬ９／１０／１１に結合するＣＸＣＲ３の中程度のレベルが観察される。それぞれＣＸＣＬ１２及びＣＸＣＬ１３に結合するＣＸＣＲ４及びＣＸＣＲ５は、Ｂ細胞及び三次リンパ腫構造に近接したＴＩＬの位置決めに使用され得る。ＣＸＣＲ１及びＣＸＣＲ２は、他のリガンドの中でＣＸＣＬ８に結合し、好中球の輸送を共選択するために使用され得る。ＣＣＲ２は、ＭＣＰ－１及び他のリガンドに結合し、単球の輸送を共選択するために使用され得る。ＣＣＲ４及びＣＣＲ８は、ＣＣＬ１７、ＣＣＬ２２（ＣＣＲ４）及びＣＣＬ１（ＣＣＲ８）に結合し、Ｔｒｅｇの腫瘍への輸送を共選択するために使用され得る。

実施例１９：ケモカイン受容体で修飾されたＴＩＬ製品の調製
ＶＳＶ－Ｇ偽型ＭＳＣＶレトロウイルスベクターを調製して、ＣＸＣＲ１またはＣＣＲ８ドメイン（それぞれ、配列番号６２７及び配列番号６３２に示されるものなど）を含むケモカイン受容体を生成してもよい。パッケージングのために、上述のベクターを、ＶＳＶ－Ｇエンベローププラスミド、ならびにＧａｇ／Ｐｏｌ及びＲｅｖパッケージングプラスミドとともにＨＥＫ２９３Ｔパッケージング細胞に同時トランスフェクトしてもよい。およそ２日間のインキュベーション後、上清を収集し、遠心分離してゴミを取り除き、濾過する。ウイルス粒子は、ポリエチレングリコールを使用して濃縮され、スクロース勾配クッション超遠心分離によってさらに精製される。パイロットバッチ及び臨床バッチが試みられる前に、研究バッチにおけるトランスフェクション効率を評価するために、緑色蛍光タンパク質導入遺伝子が添加され得る。少なくとも１×１０^７ＴＵ／ｍＬのＴＵ力価が望ましい。レトロウイルス産物を、エンドトキシンレベル及び他の放出パラメータについてアッセイし、その後、ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬをトランスフェクトするために使用してもよい。例えば、Ｇｅｎ２プロセスは、本明細書の他の箇所に記載されるように（例えば、図２Ａ、２Ｂ、及び２Ｃに、１１日目のＲＥＰ開始前に）、ＲＥＰ前段階とＲＥＰ段階との間に、任意選択で、トランスフェクション前、トランスフェクション中、及び／またはトランスフェクション後の短い静置期間でＴＩＬをトランスフェクションするように修飾することができ、ＲＥＰ前段階の合計持続時間は、約３～約１４日であり、ＲＥＰ段階の合計持続時間は、約３～約１４日であり、１０^８細胞を超える治療的ＴＩＬ集団が得られ、腫瘍が得られた患者のがんの治療における使用に好適な導入遺伝子（複数可）に基づいて１つ以上のケモカイン受容体を発現する。

例示的なＣＣＲ構築物は、上述の実験から産生されたＴＩＬとともに使用することができる。「ＣＣＲ１」～「ＣＣＲ６」と標識された構築物の配列（図５１）を合成し、ＭＣＳ Ｉへの挿入によってｐＱＣＸＩＸベクター（図５２）に挿入し、ｅＧＦＰを発現レポーターとしてＭＣＳ ＩＩに挿入した。市販のｐＱＣＸＩＸベクターは、ＣＭＶプロモーターによって駆動される遺伝子発現を有する自己不活性化レンチウイルスベクターである。レトロウイルスを作製するために、ｐＱＣＸＩＸベクターをＰＴ６７パッキング細胞にトランスフェクトした。ＨＥＫレポーター細胞の形質導入のために、２日目～３日目の培養上清からウイルス上清を収集した。ＨＥＫレポーター細胞を、各ＣＣＲ構築物を有するレトロウイルスウイルスで形質導入した。ＨＥＫレポーター細胞における「ＣＣＲ４」及び「ＣＣＲ５」と標識された構築物の発現を決定し、「ＣＣＲ４」（図５３、パネルＡ）及び「ＣＣＲ５」（図５３、パネルＢ）におけるＰＤ－１細胞外ドメインの表面発現を、非形質導入（ＧＦＰ－）及び形質導入（ＧＦＰ＋）ＨＥＫレポーター細胞でフローサイトメトリーによりアッセイし、結果を図５３に示す。

実施例２０：ビエピトープキメラ共刺激受容体
上記の方法を使用して、追加のＣＣＲを調製してもよい。図５４は、各々がＴ２Ａドメインによって分離されたバイシストロニック構築物中の２つのＣＣＲを含むように設計された、ビエピトープＣＣＲの構築物を示す。これらのＣＣＲについての標識ドメインを有するアミノ酸配列を図５５～６０及び表８５に示す。ＣＤ８αリーダーペプチドを、すべての構築物で使用した。ＰＤ－Ｌ１ ＣＣＲについて、１９Ｈ９及び３８Ａ１ ｓｃＦｖドメインを、ＰＤ－Ｌ１の２つのエピトープ（配列番号６５８及び配列番号６５９）を潜在的に標的とするように選択した。

抗ＴＲＯＰ－２ ＣＣＲ構築物について、２つのバージョンが設計された。ＴＲＯＰ－２は、潜在的に二量体を形成し得、理論によって拘束されないが、２つのｓｃＦｖの代わりに１つのｓｃＦｖ（ｈ６Ｇ１１、配列番号３１６）が、複合体を形成し、下流の活性化シグナルを伝達するために閉じられた異なる細胞内サブユニットを引っ張るのに十分であり得ると考えられる。したがって、この特徴は、配列番号６６０及び配列番号６６１の設計に含まれた。しかしながら、ＴＲＯＰ－２がダイマーを形成しない場合、競合アッセイで競合しないクローンｃＡＲ４７Ａ６．４及びＫＭ４０９７（配列番号６６２及び配列番号６６３）を使用して、２つのｓｃＦｖ戦略も同様に含まれた。本実施例に従って調製され、本発明のＣＣＲ構築物として有用なＣＣＲの好適な非限定的実施形態を表８５に示す。

本発明の実施形態でもある前述の実施例は、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６の配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６７１、配列番号６７２、配列番号６７３、配列番号６７４、配列番号６７５、もしくは配列番号６７６に示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列の発現を提供する。

ある実施形態では、これらの構築物は、配列番号６２１、配列番号６２２、配列番号６２３、配列番号６２４、配列番号６２５、及び配列番号６２６のベクターによってコードされる。ある実施形態では、本発明のＣＣＲは、前述のバイシストロニック構築物のうちの１つを介して発現される前述のビエピトープＣＣＲを含む組成物を含む。ｅＧＦＰドメインは、ヒト治療のためのＴＩＬの調製において使用するために除去され得る。

ＣＣＲ７～ＣＣＲ１２配列（図５４に示されるように）を合成し、目的の遺伝子のＣａｓ９－ＧＦＰカセットを置き換えることによってｐＬｅｎｔｉウイルスベクター（図６１）に挿入した。ｐＬｅｎｔｉウイルスベクターは、ＥＦ－１αコアプロモーターによって駆動される遺伝子発現を有する自己不活性化レンチウイルスベクターである。レンチウイルスを作製するために、ｐＬｅｎｔｉベクター及びヘルパーベクター（ＶＳＶ－Ｇ、Ｇａｇ／Ｐｏｌ）を２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクトした。ＨＥＫレポーター細胞の形質導入のために、ウイルス上清を２日目～３日目の培養上清から収集した。

ＨＥＫレポーター細胞におけるビエピトープＣＣＲ８及びＣＣＲ１２構築物の発現を示す例示的な結果を図６２に提示する。ＨＥＫレポーター細胞を、示されているＣＣＲ８及びＣＣＲ１２構築物を有するレンチウイルスで形質導入した。図６２において、パネル（Ａ）に示される、ＣＣＲ８で形質導入され、ビオチン抱合ＰＤ－Ｌ１タンパク質とインキュベートされたＨＥＫ－ＩＬ－１８レポーター細胞の結果、及びパネル（Ｂ）に示される、ＣＣＲ１２で形質導入され、ビオチン抱合ＴＲＯＰ－２タンパク質とインキュベートされたＨＥＫ－ＩＬ－１８レポーター細胞の結果は、各々がストレプトアビジン蛍光染色後に、所望のＣＣＲの発現を示す。

次いで、ビエピトープＣＣＲ構築物の実現可能性を決定するために、これらの抗体の競合結合を研究した。抗ＰＤ－Ｌ１抗体クローン３８Ａ１－ＩｇＧ４－ＨＡ及び１９Ｈ－ＩｇＧ４－Ｆｌａｇの特徴付けデータを表８６に示す。

最初に、ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞を、競合ｈＰＤ－Ｌ１結合抗体１９Ｈ９の存在下で、ＰＤ－Ｌ１を標的とする３８Ａ１－ＩｇＧ４－ＨＡ抗体の示された濃度（図６３）でインキュベートした。２時間のインキュベーション後、細胞を洗浄し、分析のために抗ＨＡ－ＡＰＣで染色した。図６３において、ｘ軸は、滴定された３８Ａ１－ＩｇＧ４－ＨＡ抗体の濃度を示し、ｙ軸は、全ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞のＰＤ－Ｌ１陽性染色細胞の％を示す。次いで、ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞は、競合ｈＰＤ－Ｌ１結合抗体１９Ｈ９の存在下で、ＰＤ－Ｌ１を標的とする１９Ｈ９－ＩｇＧ４－Ｆｌａｇ抗体の示された濃度（図６４）でインキュベートされた。２時間のインキュベーション後、細胞を洗浄し、抗Ｆｌａｇ－ＡＦ４８８で染色した。図６４において、ｘ軸は、滴定した１９Ｈ９－ＩｇＧ４－Ｆｌａｇ抗体の濃度を示し、ｙ軸は、全ｈＰＤ－Ｌ１ Ｒａｊｉ細胞のＰＤ－Ｌ１陽性染色細胞の％を示す。結果は、３８Ａ１及び１９Ｈ９がＰＤ－Ｌ１に非競合的に結合することを示す。図６５は、示される各抗体の染色を伴うＲａｊｉ細胞の共染色フローサイトメトリーデータを示し、ｈＰＤＬ－１－Ｒａｊｉ細胞を、１９Ｈ９－ＩｇＧ４－Ｆｌａｇ Ａｂ及び３８Ａ１－ＩｇＧ４－ＨＡ Ａｂとインキュベートし、続いて、フルオロフォア抱合二次抗体とインキュベートした。

追加の実験を行い、図６６に示されるアプローチを使用して２つのＰＤ－Ｌ１抗体の遮断有効性を評価した。Ｊｕｒｋａｔ－Ｌｕｃｉａ（商標）ＴＣＲ－ｈＰＤ－１細胞（２×１０^５細胞）及びＲａｊｉ－ＡＰＣ－ｈＰＤ－Ｌ１細胞（２×１０^５細胞）を、図６７のｘ軸に示される、示される濃度で１９Ｈ９抗体及び３８Ａ１抗ＰＤ－Ｌ１抗体の存在下で共培養した。１９Ｈ９及び３８Ａ１を単一で添加するか、または共培養システムに組み入れた。２４時間後、ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ（商標）アッセイキットでＬｕｃｉａ活性を定量化した。結果を、図６７に示す。

結論として、ビエピトープＣＣＲ構築物は、ＨＥＫ－青色レポーター細胞において正常に発現することができ、抗原特異的結合能力を示す。驚くべきことに、ＰＤ－Ｌ１クローン３８Ａ１及び１９Ｈ９に対するＰＤ－Ｌ１の競合結合は存在せず、それらが異なるＰＤ－Ｌ１エピトープに結合することを示す。これらのクローンは、この実施例に示されるように、ビエピトープＣＣＲ設計に好適である。かかる設計は、ＩＬ－１８Ｒ及びＩＬ－２Ｒ細胞内ドメインの２つのサブユニットを提供することができる。

実施例２１：ＴＩＬ製品中のＣＤ３９－ＣＤ６９－表現型を増加させるためのＡＫＴ阻害剤の使用
メモリー前駆体幹様（ＣＤ３９^－ＣＤ６９^－）表現型は、転移性黒色腫を有する患者のコホートにおいて完全な退縮及びＴＩＬ持続性と関連付けられた（Ｋｒｉｓｈｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２０２０，３７０，１３２８）。より分化が少なく、より幹様の属性を有するＴＩＬを拡張することを目的とする戦略は、向上した持続性、機能性、及びより良い効果的な腫瘍応答をもたらし得る。ＴＩＬにおけるＡＫＴの薬理学的阻害は、メモリーＴ細胞に特徴的な転写、代謝、及び機能的特性を誘導することが示されている。この実施例では、エクスビボＴＩＬ拡張中のＡＫＴ阻害を調査して、向上したサイトカイン出力及び機能性を有するより分化が少なく、より幹様の細胞の割合を増加させることができるかどうかを決定した。

異なる適応症からの患者の腫瘍を受け取り、断片化し、ＴＩＬ製造のための拡張プロトコルに供した。異なる用量（０．３μＭ及び１μＭ）のｐａｎ－ＡＫＴ阻害剤イパタセルチブを、エクスビボ拡張中に培養物に添加した。拡張可能性、ならびに表現型及び機能的特性を最終ＴＩＬ製品上で評価した。黒色腫、ＮＳＣＬＣ、頭頸部癌、卵巣癌、及び乳癌からの腫瘍を含む８つの腫瘍を、Ｇｅｎ２プロセスと組み合わせて使用した。

図６８は、ＡＫＴ阻害剤処置が、Ｔ細胞比に影響を与えることなく、ＴＩＬ拡張及び生存率を維持することを示す。対照及びＡＫＴ阻害剤で処置されたＴＩＬにおける拡張、生存率及びＴ細胞分布を示す。ＴＩＬを未処置のままにするか、またはｐａｎ－ＡＫＴ阻害剤イパタセルチブの濃度を増加させて処置した。処置は、ＲＥＰ前及びＲＥＰ（青色のバー）中、またはＲＥＰ段階のみ（紫色のバー）中のいずれかに加えた。２２日間の拡張プロセスの終了時のＴＩＬの倍率拡張及び生存率を示す。凍結保存細胞での拡張プロセス後のＣＤ８^＋、ＣＤ４^＋及びＣＤ４^＋（Ｆｏｘｐ３^＋）細胞の頻度も示される。

追加の結果を図６９～７５に示す。ＡＫＴ阻害は、図６９においてＣＤ８^＋ＴＥＭＲＡ細胞の頻度の増加、ならびに図７０においてＣＤ８^＋ＴＩＬ上のＩＬ－７Ｒ及びＣＸＣＲ３発現の増加を誘導することが示されている。図７１は、ＡＫＴ阻害が、ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋ＴＩＬの両方でより分化の少ないＣＤ８^＋ＣＤ６９^－ＣＤ３９^－Ｔ細胞の頻度を増加させることを実証する。図７２は、ＣＤ８^＋ＣＤ６９^－ＣＤ３９^－ＴＩＬが分化が少なく、疲弊していることを示す。ＡＫＴ阻害剤処置したＴＩＬはまた、図７３に示されるように、刺激後にＣＤ８^＋ＣＤ６９^－ＣＤ３９^－Ｔ細胞のより高い頻度及びより低いＴＯＸ発現を維持する。

凍結保存された対照及び１μＭのイパタセルチブでＲＥＰ前及びＲＥＰの両方で処置したＴＩＬを、１：５のビーズ対細胞比で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで一晩刺激した。結果を、図７４に示す。Ｇｅｎ２プロセスを使用して調製されたＡＫＴ阻害剤処置したＴＩＬは、刺激後により高いサイトカイン出力を維持することが観察された。

１μＭのイパタセルチブでＲＥＰ前及びＲＥＰの両方で処置した凍結保存された対照及びＴＩＬを、１０：１のエフェクター対標的細胞の比でＫＩＬＲ（登録商標）ＴＨＰ－１細胞と２４時間共培養して、同種異系設定における細胞傷害性を測定した。対照及びイパタセルチブ処置したＴＩＬを、１：１のビーズ対細胞の比で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで５日毎に刺激した。第３の刺激の３日後、細胞を洗浄し、ビーズを除去し、細胞を、ＫＩＬＲ ＴＨＰ－１細胞と１０：１のエフェクター対標的細胞の比で２４時間共培養した。図７５に示されるように、Ｇｅｎ２プロセスを使用して調製されたイパタセルチブ処置したＴＩＬは、反復刺激後に持続する同種異系設定において細胞傷害性の増加を示した。

１μＭ用量のＡＫＴ阻害剤での処置は、対照と比較してＴＩＬの同等の拡張及び生存率をもたらしたが、分化の少ないＣＤ３９^－ＣＤ６９^－細胞の集団を倍増させた。この効果は、再刺激後も存在し、これらの細胞は、ＣＤ３８、ならびに転写因子Ｔ－ｂｅｔ及びＴＯＸの発現の低減を示し、分化が少なく、疲弊した表現型を示唆している。重要なことに、ＡＫＴ阻害剤処置は、ＩＦＮγ^＋ＴＮＦα^＋ＣＤ８^＋Ｔ細胞の頻度の増加をもたらし、これは、細胞傷害性の増加につながった。エクスビボＴＩＬ拡張中のＡＫＴ阻害剤処置は、分化の少ないよりメモリー様の機能的なＴＩＬの割合を増加させた。

したがって、ＴＩＬ拡張中にＡＫＴシグナル伝達を一時的に阻害することは、ＣＣＲ及び／またはケモカイン受容体との組み合わせを含む、臨床環境におけるＴＩＬ製品の性能を改善し、ＴＩＬの持続性及び治療有効性を増強するためのアプローチを表す。ＡＫＴ阻害剤処置したＴＩＬは、より高い頻度のＣＤ６９^－ＣＤ３９^－細胞を維持し、ＴＯＸレベルを低減し、刺激後にサイトカイン出力を増加させた。同種異系設定において、ＡＫＴ阻害剤処置ＴＩＬでは細胞傷害能力の増加が観察され、ＴＩＬ刺激を繰り返した後でも持続した。ＡＫＴ阻害剤処置ＴＩＬは、本明細書の他の箇所に記載されるように、１つ以上のＣＣＲまたはケモカイン受容体を発現するようにさらに修飾されてもよい。

実施例２２：ＴＩＬ製品の表現型を改善するためのエピジェネティック修飾の使用
この実施例では、ＴＩＬ製品のエピジェネティック修飾剤としてのＤＮＡ低メチル化剤であるデシタビンの培養における使用が探索された。デシタビンは、ＡＫＴ阻害剤、ならびに本明細書に開示されるＣＣＲ及びケモカイン受容体、ならびに本明細書に記載される他の遺伝子修飾ＴＩＬと組み合わせることができる。異なる腫瘍タイプ（非小細胞肺癌、頭頸部癌、卵巣癌、及び乳癌）からの患者腫瘍（Ｎ＝８）をドナーから取得し、断片化し、ＴＩＬ生成のための２２日間の拡張プロトコルに供した。異なる用量（１０ｎＭ、３０ｎＭ、及び１００ｎＭ）のデシタビンを、エクスビボ拡張中、ＲＥＰ前及びＲＥＰ段階中、またはＲＥＰのみのいずれかの間に培養物に添加した。ＴＩＬの拡張可能性、ならびに表現型及び機能的特性を最終ＴＩＬ製品において評価した。

図７６に示される結果は、デシタビン処置がＴＩＬ生存率を維持したが、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞比を増加させながら拡張を減少させたことを示す。対照ＴＩＬ及びデシタビン処置したＴＩＬにおける拡張、生存率、及びＴ細胞の分布を図７６に示す。ＴＩＬは、未処置（ＣＴＲＬ、灰色のバー）のままにするか、またはデシタビンの濃度を増加させて処置した。処置は、ＲＥＰ段階のみの間（青色のバー）またはＲＥＰ前及びＲＥＰの両方の間（緑色のバー）のいずれかに加えた。図７６において、パネルＡは、２２日間の拡張プロセスの終了時のＴＩＬの倍率拡張及び生存率を示し、パネルＢは、凍結保存された細胞における拡張プロセス後のＣＤ８^＋、ＣＤ４^＋、及びＣＤ４＋（Ｆｏｘｐ３＋）細胞の頻度を示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。図７７において、ＲＥＰ段階中のデシタビン処置が、ＣＤ８^＋及びＣＤ４^＋Ｔ細胞の両方におけるＴ_ＣＭ－様細胞の頻度を増加させたことを示す結果が示されている。対照ＴＩＬ及びデシタビン処置したＴＩＬにおけるＴ細胞サブセットを示し、Ｔ_ＣＭ（ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＣＲ７^＋）、Ｔ_ＥＭ（ＣＤ４５ＲＡ^－ＣＣＲ７^－）、及びＴ_ＥＭＲＡ（ＣＤ４５^＋ＣＣＲ７^－）細胞の頻度を、拡張後のＣＤ８^＋ＴＩＬについてはパネルＡ、ＣＤ４^＋ＴＩＬについてはパネルＢに示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。図７８は、デシタビン処置したＴＩＬ上の表面マーカーの発現を示す。デシタビン処置は、ＣＤ８^＋ＴＩＬ上の阻害性受容体発現を減少させながら、共刺激性受容体の頻度を増加させることが観察される。図７８のパネルＡは、ＣＤ８^＋ＴＩＬ上のＣＤ２５、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、及びＩＬ－７Ｒの発現を示し、一方、パネルＢは、ＣＤ８^＋ＴＩＬ上の阻害受容体ＰＤ－１及びＴＩＧＩＴの発現を示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１）。ＣＤ４^＋ＴＩＬについて同様の結果が観察された。

デシタビン処置したＴＩＬにおける転写因子の発現を図７９に示し、これは、デシタビン処置がメモリー関連転写因子の発現を増加させたことを実証する。対照またはデシタビン処置した凍結保存ＴＩＬを解凍し、フローサイトメトリー分析のために染色した。ＣＤ８^＋ＴＩＬにおけるＥｏｍｅｓ、ＫＬＦ２、ＢＡＴＦ、及びＴ－ｂｅｔの発現を図７９に示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。インビトロ刺激後の対照及びデシタビン処置したＴＩＬにおけるサイトカイン発現を図８０に提示する。デシタビン処置は、刺激後にＴＮＦ－α及びＣＤ８^＋ＴＩＬを発現するグランザイムＢの頻度を増加させることがわかった。凍結保存された対照及びデシタビン処置したＴＩＬを、１：５のビーズ対細胞比で抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズで一晩刺激した。ＣＤ８^＋ＴＩＬ上のＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α、及びグランザイムＢの発現レベルを図８０に示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。

対照及びデシタビン処置したＴＩＬの細胞傷害性も評価した。図８１は、デシタビン処置したＴＩＬが、反復刺激後に持続した細胞傷害性の増加を示したことを示す。パネルＡでは、凍結保存された対照及び１００ｎＭのデシタビンによりＲＥＰで処置したＴＩＬを、１０：１のＥ：Ｔ細胞比でＫＩＬＲ（登録商標）ＴＨＰ－１細胞（Ｅｕｒｏｆｉｎｓ ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ，Ｆｒｅｍｏｎｔ，ＣＡ，ＵＳＡ）と２４時間共培養して、同種異系設定での細胞傷害性を測定した。パネルＢでは、対照ＴＩＬ及びデシタビンで処置したＴＩＬを、ＴｒａｎｓＡｃｔｔｍ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で５日毎に刺激した。第３の刺激の１日後、細胞を洗浄し、１０：１のエフェクター対標的細胞比でＫＩＬＲ ＴＨＰ－１細胞と２４時間共培養して、細胞傷害性を測定した。＊Ｐ＜０．０５。

図８２は、デシタビン処置したＴＩＬが、反復刺激後にＩＬ－７Ｒ発現が増加している一方で、阻害性受容体発現が低減し、ＴＯＸのレベルが低いことを示している。対照及びデシタビン処置したＴＩＬの表現型は、反復刺激後に示される。対照ＴＩＬ及びデシタビン処置したＴＩＬを、ＴｒａｎｓＡｃｔｔｍ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で５日毎に刺激した。第３の刺激の１日後、細胞を洗浄し、フローサイトメトリー分析のために染色した。図８２において、反復刺激後のＴＩＬにおけるＩＬ－７Ｒ、ＰＤ－１、及びＴＩＭ３の発現をパネルＡに示し、反復刺激後のＴＩＬにおける転写因子の発現レベルをパネルＢに示す（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。

結論として、ＴＩＬ拡張中のデシタビン処置は、バランスをエフェクター分化からよりメモリーに似た表現型へとシフトさせることができる。ＲＥＰ段階のみの間の１００ｎＭでのデシタビン処置は、阻害性受容体発現を低減させながら、共刺激受容体の発現を増加させた。デシタビン処置は、ＴＮＦα^＋及びＩＦＮγ^＋ＴＮＦα^＋ＣＤ８^＋ＴＩＬの頻度を増加させながら、殺傷活性の増加を付与し、これは反復刺激後でも持続した。デシタビン処置したＴＩＬは、反復刺激後のＰＤ１^＋ＴＩＭ３^＋ＣＤ８^＋ＴＩＬの低減したＴＯＸレベル及び低い頻度を示した。これは、ＴＩＬの治療可能性を向上させるために、ＴＩＬのエピジェネティックランドスケープを修飾するＴＩＬ拡張中にＤＮＡメチル化プログラムを阻害するという証拠を提供する。

実施例２３：ビエピトープＴＲＯＰ－２及びＰＤ－Ｌ１キメラ共刺激受容体
この実施例では、ＴＲＯＰ－２及びＰＤ－Ｌ１を標的とする追加のビエピトープＣＣＲを、再び、３８Ａ１及び１９Ｈ９に基づくＰＤ－Ｌ１ ｓｃＦｖ、ならびにｃＡＲ４７Ａ６．４及びＫＭ４０９７に基づくＴＲＯＰ－２ ｓｃＦｖを使用して、上述の手順を使用して調製及び試験する。これらのＣＣＲは、ＣＣＲ７．２、ＣＣＲ８．２、ＣＣＲ１１．２、及びＣＣＲ１２．２と指定されている。本実施例に従って調製され、本発明のＣＣＲ構築物として有用なＣＣＲの好適な非限定的実施形態を表８７に示す。

本実施例に従って調製され、本発明のＣＣＲ構築物として有用なＣＣＲをコードするヌクレオチドの好適な非限定的実施形態を表８８に示す。

ＣＣＲ７．２、ＣＣＲ８．２、ＣＣＲ１１．２、及びＣＣＲ１２．２と指定されるＣＣＲをコードするベクターを調製し、表８９に提示する。

配列番号６８５～配列番号６８８に対応する、ＣＣＲ７．２、ＣＣＲ８．２、ＣＣＲ１１．２、及びＣＣＲ１２．２と指定されるビエピトープＣＣＲをコードする例示的なベクターのベクターマップを図８３～８６に提示する。

ＣＣＲ構築物の生物学的機能を、Ｈｅｋ－ＩＬ－１８ ＳＥＡＰレポーター株で試験した。ＣＣＲ８及びＣＣＲ８．２形質導入ＨｅｋＩＬ－１８レポーター細胞（５×１０^４）を、抗Ｈｉｓ抗体（抗体：タンパク質比＝２：１；例えば、５μｇ／ｍＬのＰＤ－Ｌ１については、１０μｇ／ｍＬの抗Ｈｉｓ抗体を添加）の存在下で、示された濃度のＰＤ－Ｌ１（Ｈｉｓタグ付き）で刺激した。２４時間後、上清を採取し、定量青色溶液を添加した後、６５０ｎｍの分光光度計でＳＥＡＰレベルを測定した。結果を、図８７に示す。ＣＣＲ１２及びＣＣＲ１２．２形質導入ＨｅｋＩＬ－１８レポーター細胞（５×１０^４）を、抗Ｈｉｓ抗体（抗体：タンパク質比＝２：１）の存在下で、示された濃度のＴＲＯＰ－２（Ｈｉｓタグ付き）で刺激した。２４時間後、上清を採取し、定量青色溶液を添加した後、６５０ｎｍの分光光度計でＳＥＡＰレベルを測定した。結果を、図８８に示す。両方のセットの実験の結果を、図８９（ＰＤ－Ｌ１について）及び図９０（ＴＲＯＰ－２について）のＩＬ－１８標準とさらに比較し、０．５のＯＤ値は、約３．１７５ｐｇ／ｍＬのＩＬ－１８刺激に相当することが示され、調整された活性化を実証する。

最後に、がん細胞株ＣａＯ－Ｖ３及びＭＣＦ－７におけるＴＲＯＰ－２の発現を、アイソタイプ対照と比較して、ＰＥ蛍光定量キットを用いたフローによって評価及び定量化した。ＴＲＯＰ－２は、細胞当たりおよそ８００，０００個のＴＲＯＰ－２分子のレベルでＣａＯ－Ｖ３上に、細胞当たりおよそ１００，０００個のＴＲＯＰ－２分子のレベルでＭＣＦ－７上に発現した。

前述の実施例は、本発明の実施形態でもある。本発明のさらなる実施形態は、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０の配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６７７、配列番号６７８、配列番号６７９、及び配列番号６８０に示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

本発明のさらなる実施形態は、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４の配列、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６８１、配列番号６８２、配列番号６８３、及び配列番号６８４に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。

本発明のさらなる実施形態は、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８の配列、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６８５、配列番号６８６、配列番号６８７、及び配列番号６８８に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。

実施例２４：４－１ＢＢ細胞内ドメインを有するキメラ共刺激受容体
上記の方法を使用して、追加のＣＣＲを調製してもよい。図９１は、ＣＣＲ１３、ＣＣＲ１４、ＣＣＲ１５、及びＣＣＲ１６と指定されるＣＣＲの構築物を示す。レンチウイルスは、前述のように調製される。簡潔に述べると、ＣＣＲをｐＬｅｎｔｉ－ＩＲＥＳ－ＥＧＦＰプラスミドにクローニングした。ＣＣＲの合成ＤＮＡ配列の両側にＡｆｅＩ／ＥｃｏＲＩ酵素認識配列を添加した。次いで、完全なＤＮＡ配列をｐＬｅｎｔｉ－ＩＲＥＳ－ＥＧＦＰウイルスベクター（実施例２５のＣＣＲ１３－ＣＣＲ１６及びＣＣＲ１７－ＣＣＲ１９について）に挿入した。ｐＬｅｎｔｉウイルスベクターは、ＥＦ－１αコアプロモーターによって駆動される遺伝子発現を有する自己不活性化レンチウイルスベクターである。レンチウイルスを作製するために、ｐＬｅｎｔｉベクター及びヘルパーベクター（ＶＳＶ－Ｇ、Ｇａｇ／Ｐｏｌ）を２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクトした。ウイルス上清を２日目または３日目の培養上清から収集し、続いて超遠心分離して、ＴＩＬ形質導入のためにレンチウイルスを濃縮した。これらのＣＣＲのアミノ酸配列を表９０に示す。

本実施例に従って調製され、本発明のＣＣＲ構築物として有用なＣＣＲをコードするヌクレオチドの好適な非限定的実施形態を表９１に示す。

ＣＣＲ１３、ＣＣＲ１４、ＣＣＲ１５、及びＣＣＲ１６と指定されるＣＣＲをコードするベクターを上記のように調製した。これらのベクターの完全なヌクレオチド配列を表９２に提示する。

配列番号６９９～配列番号７０２に対応する、ＣＣＲ１３、ＣＣＲ１４、ＣＣＲ１５、及びＣＣＲ１６と指定されるＣＣＲをコードする例示的なベクターのベクターマップを図９２～９５に提示する。これらのベクターは、この実施例では、レンチウイルスバッチの調製に使用された。

レンチウイルスの調製後、各レンチウイルスバッチを使用してＴＩＬを形質導入し、続いて２日間休息し、続いて１１日間のＲＥＰ拡張プロセスを行った。各ＣＣＲ構築物の表面発現は、フローサイトメトリーによって検出された。結果を、図９６に示す。

ＣＣＲを発現するＲＥＰ ＴＩＬの拡張、生存率及び殺傷有効性も評価した。ＲＥＰ前ＴＩＬ（Ｎ＝３）をＴｒａｎｓ－ＡＣＴで２日間活性化し、続いてＦａｓ－４－１ＢＢ、ＰＤ－１－４－１ＢＢ、ＴＧＦ－ｂＲＩＩ－４－１ＢＢ、ＰＤ－１－２８（すなわち、ＣＣＲ１３、ＣＣＲ１４、ＣＣＲ１５、及びＣＣＲ１６）、ならびに対照ビヒクルベクターを含むＣＣＲ構築物を含有するレンチウイルス粒子による遺伝子導入を行った。遺伝子導入の２日後、３×１０^４個のＲＥＰ前ＴＩＬを、１１日間のＲＥＰ拡張で処理した。図９７（Ａ）は、ＣＣＲ発現ＲＥＰ後ＴＩＬの倍率拡張を示し、（Ｂ）は、生存率を示し、（Ｃ）は、ＫＩＬＲ（登録商標）細胞傷害性アッセイによって評価されたＣＣＲ発現ＲＥＰ後ＴＩＬの殺傷能力を示す。簡潔に述べると、ＫＩＬＲ（登録商標）ＴＨＰ－１標的細胞（１．２５×１０^４）を、３００ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２を含有する１００μＬのＣＭ２培養培地を有する９６ウェル白色プレート中のＣＣＲ形質導入ＴＩＬ細胞（１．２５×１０^５、Ｅ：Ｔ比＝１０：１）と共培養した。２４時間後、１００μＬのＫＩＬＲ試薬を各ウェルに添加し、続いて３０分間のインキュベーションを行った。発光シグナルを決定して、死細胞を定量化した。殺傷のパーセンテージを、細胞溶解緩衝液を加えた対照ウェルに基づいて正規化した。

前述の実施例は、本発明の実施形態でもある。本発明のさらなる実施形態は、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４の配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６８９、配列番号６９０、配列番号６９１、配列番号６９２、配列番号６９３、及び配列番号６９４に示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

本発明のさらなる実施形態は、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８の配列、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６９５、配列番号６９６、配列番号６９７、及び配列番号６９８に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。

本発明のさらなる実施形態は、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２の配列、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号６９９、配列番号７００、配列番号７０１、及び配列番号７０２に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。

実施例２５：ＬＴＢＲ細胞内ドメインを有するキメラ共刺激受容体
上記の方法を使用して、追加のＣＣＲを調製してもよい。図９８は、ＬＴＢＲ細胞内ドメインを使用する、ＣＣＲ１７、ＣＣＲ１８、及びＣＣＲ１９と指定されるＣＣＲの構築物を示す。これらのＣＣＲのアミノ酸配列を表９３に示す。

本実施例に従って調製され、本発明のＣＣＲ構築物として有用なＣＣＲをコードするヌクレオチドの好適な非限定的実施形態を表９４に示す。

ＣＣＲ１７、ＣＣＲ１８、及びＣＣＲ１９と指定されるＣＣＲをコードするベクターを上記のように調製した。これらのベクターの完全なヌクレオチド配列を表９５に提示する。

配列番号７０９～配列番号７１１に対応する、ＣＣＲ１７、ＣＣＲ１８、及びＣＣＲ１９と指定されるＣＣＲをコードする例示的なベクターのベクターマップを図９９～１０１に提示する。これらのベクターは、この実施例では、レンチウイルスバッチの調製に使用された。

前述の実施例は、本発明の実施形態でもある。本発明のさらなる実施形態は、配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５の配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号７０３、配列番号７０４、及び配列番号７０５に示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

本発明のさらなる実施形態は、配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８の配列、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号７０６、配列番号７０７、及び配列番号７０８に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。

本発明のさらなる実施形態は、配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１の配列、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号７０９、配列番号７１０、及び配列番号７１１に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。

実施例２６：抗ＰＤ－Ｌ１細胞外ドメインを有するキメラ共刺激受容体
上記の方法を使用して、追加のＣＣＲを調製してもよい。これらのＣＣＲは、ＣＣＲ２０、ＣＣＲ２１、ＣＣＲ２２、ＣＣＲ２３、ＣＣＲ２４、及びＣＣＲ２５と指定され、抗ＰＤ－Ｌ１ １９Ｈ９細胞外ドメインを使用する。これらのＣＣＲのアミノ酸配列を表９６に示す。

本実施例に従って調製され、本発明のＣＣＲ構築物として有用なＣＣＲをコードするヌクレオチドの好適な非限定的実施形態を表９７に示す。

実施例２５及び２６に記載されているものに類似するベクター及び手順を、ＣＣＲ２０～ＣＣＲ２５を発現するＴＩＬの調製に用いてもよい。

前述の実施例は、本発明の実施形態でもある。本発明のさらなる実施形態は、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７の配列、またはそれらの保存的アミノ酸置換、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号７１２、配列番号７１３、配列番号７１４、配列番号７１５、配列番号７１６、及び配列番号７１７に示される配列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含む。

本発明のさらなる実施形態は、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３の配列、またはそれらの断片、バリアント、もしくは誘導体、あるいは配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも９９％同一、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも９８％同一、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも９７％同一、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも９６％同一、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも９５％同一、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも９０％同一、配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも８５％同一、または配列番号７１８、配列番号７１９、配列番号７２０、配列番号７２１、配列番号７２２、及び配列番号７２３に示される配列と少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含む。
＊＊＊

上記の実施例は、当業者に対して、本発明の組成物、プロセス、アッセイ、システム及び方法の実施形態の作製方法及び使用方法の完全な開示及び説明を提供するために提示されており、本発明者らが自身の発明とみなすものの範囲を限定することを意図しない。当業者に明らかな、本発明を実施するための上記のモードの修正は、添付の特許請求の範囲内にあることを意図している。本明細書で言及するすべての特許、特許出願、及び刊行物は、本発明が属する分野の当業者のスキルレベルを示す。

すべての見出し及びセクションの指定は、明確化及び参照の目的のみのために使用されており、いかなる方法でも限定するものとしてみなされない。例えば、当業者は、本明細書に記載の本発明の趣旨及び範囲に従って異なる見出し及びセクションから様々な態様を適宜組み合わせることの有用性を理解する。

本明細書で引用されたすべての参考文献は、各個々の刊行物または特許もしくは特許出願がすべての目的のためにその全体が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同じ程度にすべての目的のためにそれらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。

当業者に明らかであるように、本出願の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本出願の多くの修正及び変形が加えられてもよい。本明細書に記載の特定の実施形態及び実施例はほんの一例として提供されており、本出願は、特許請求の範囲が権利を与えられる等価物の全範囲に加えて、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定されるべきである。

Claims (97)

1. がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによって前記がんを治療する方法であって、前記ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾され、前記ＣＣＲが、
   ｉ．細胞外ドメインと、
   ｉｉ．ヒンジドメインと、
   ｉｉｉ．膜貫通ドメインと、
   ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含む、前記方法。
2. 前記がんが、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、前記方法が、
   （ａ）前記患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、前記患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
   （ｂ）前記第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
   （ｃ）前記第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、前記第１の拡張が、約３～１４日間行われて、前記第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第２のＴＩＬ集団を産生することと、
   （ｄ）前記ＣＣＲを発現するように前記第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾することと、
   （ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で前記第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第２の拡張が、約３～１４日間行われて、前記第３のＴＩＬ集団を取得し、前記第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、前記第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、前記第３のＴＩＬ集団を産生することと、
   （ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
   （ｇ）ステップ（ｆ）からの前記採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記移すことと、
   （ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの前記採取されたＴＩＬ集団を含む前記注入バッグを凍結保存することと、
   （ｉ）治療上有効な投与量の前記第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の前記注入バッグから前記患者に投与することと、を含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記細胞外ドメインが、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 前記ｓｃＦｖ結合ドメインが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ２２８、ＬＲＲＣ１５、ＣＥＡ、ＦＲα、ＥＰＣＡＭ、ＰＤ－Ｌ１、ＰＳＭＡ、ｇｐ１００、ＭＵＣ１、ＭＣＳＰ、ＥＧＦＲ、ＧＤ２、ＴＲＯＰ－２、ＧＰＣ３、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＶＩＳＴＡ、ＵＬＢＰ、ＨＥＲ２、ＭＣＭ５、ＦＡＰ、５Ｔ４、ＬＦＡ－１、Ｂ７－Ｈ３、ＩＬ－１３Ｒα２、ＦＡＳ、ＴＧＦβ、ＴＧＦβＲＩＩ、及びＭＵＣ１６からなる群から選択されるタンパク質に結合する、請求項３に記載の方法。
5. 前記細胞外ドメインが、ＰＤ－１ドメイン、ＦＡＳドメイン、及びＴＧＦβＲＩＩドメインからなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
6. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ２８、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ２７、ＣＤ４０Ｌ、ＳＴＡＴ３、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、ＩＬ－１８Ｒ１、ＩＬ－１８ＲＡＰ、ＩＬ－７Ｒα、ＩＬ－１２Ｒ１、ＩＬ－１２Ｒ２、ＩＬ－１５Ｒα、ＩＬ－２１Ｒ、ＬＴＢＲ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
7. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３α、ＣＤ３β、ＣＤζ、ＣＤ３ε、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩＬ－２Ｒα、ＩＬ－２Ｒβ、ＩＬ－２Ｒγ、及びＣＤ４０Ｌの膜貫通領域からなる群から選択される、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
8. ステップ（ｄ）が、前記ＣＣＲを発現するように、レンチウイルスを使用してＴＩＬを遺伝子修飾することをさらに含む、請求項２～７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記がんが、ＴＩＬの投与によって治療される固形腫瘍がんである、請求項２～９のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記がんが、肉腫、膵臓癌、肝臓癌、神経膠芽細胞腫、胃腸癌、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択され、前記患者が、ヒトである、請求項１０に記載の方法。
12. 前記がんが、非小細胞肺癌であり、前記患者が、
    １．＜１％のＰＤ－Ｌ１の所定の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、
    ２．１％～４９％のＰＤ－Ｌ１の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、または
    ３．１つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも１つを有する、請求項１１に記載の方法。
13. 前記患者が、＜１％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳを有する、請求項１２に記載の方法。
14. 前記患者が、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療のために適応されていないがんを有する、請求項１０～１３のいずれか１項に記載の方法。
15. 前記患者が、１つ以上のドライバー変異の非存在を有する、請求項１０～１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記１つ以上のドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
17. 前記がんが、化学療法剤または化学療法レジメンによる治療に対して不応性または耐性である、請求項１０～１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 前記がんが、ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項１０～１７のいずれか１項に記載の方法。
19. 前記ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤が、ベバシズマブ、ラニビズマブ、イクルクマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
20. 前記がんが、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項１０～１９のいずれか１項に記載の方法。
21. 前記ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ドスタリマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、レチファンリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
22. 前記がんが、ＣＴＬＡ－４阻害剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項１０～２１のいずれか１項に記載の方法。
23. 前記ＣＴＬＡ－４阻害剤が、イピルムマブ、トレメリムマブ、ザリフレリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される、請求項２２に記載の方法。
24. 前記ＩＬ－２が、最初に、前記第１の細胞培養培地中及び前記第２の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ～６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項１０～２３のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記ＯＫＴ－３抗体が、最初に、前記第２の細胞培養培地中に約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項１０～２４のいずれか１項に記載の方法。
26. 前記第１または第２の細胞培養培地が、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、４－１ＢＢアゴニスト、ＯＸ－４０アゴニスト、ＡＫＴ阻害剤、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項１０～２５のいずれか１項に記載の方法。
27. 前記第２の細胞培養培地が、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項１０～２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記第３のＴＩＬ集団を前記患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項１０～２７のいずれか１項に記載の方法。
29. 前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップを含む、請求項２８に記載の方法。
30. 前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で、及びフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で３日間投与するステップを含む、請求項２８に記載の方法。
31. 前記患者への前記第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始するＩＬ－２レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項１０～３０のいずれか１項に記載の方法。
32. 前記患者への前記第３のＴＩＬ集団の投与と同日に開始するＩＬ－２レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項１０～３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記ＩＬ－２レジメンが、許容範囲まで８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを含む高用量ＩＬ－２レジメンである、請求項３１または３２に記載の方法。
34. 前記ＩＬ－２レジメンが、ベンペガルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項３１または３２に記載の方法。
35. 前記ＩＬ－２レジメンが、ＴＨＯＲ－７０７、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項３１または３２に記載の方法。
36. 前記ＩＬ－２レジメンが、ネムバロイキンアルファ、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項３１または３２に記載の方法。
37. 前記ＩＬ－２レジメンが、配列番号２９及び配列番号３８からなる群から選択される重鎖と、配列番号３７及び配列番号３９からなる群から選択される軽鎖と、を含む抗体、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項３１または３２に記載の方法。
38. 治療上有効なＴＩＬ集団が投与され、約２×１０^９～約１５×１０^１０ＴＩＬを含む、請求項１０～３７のいずれか１項に記載の方法。
39. 前記第１の拡張が、１１日以内の期間にわたって行われる、請求項１０～３８のいずれか１項に記載の方法。
40. 前記第２の拡張が、１１日以内の期間にわたって行われる、請求項１０～３９のいずれか１項に記載の方法。
41. キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む組成物であって、前記ＣＣＲが、
    ｉ．細胞外ドメインと、
    ｉｉ．ヒンジドメインと、
    ｉｉｉ．膜貫通ドメインと、
    ｉｖ．少なくとも１つの細胞内ドメインと、を含む、前記組成物。
42. 前記細胞外ドメインが、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む、請求項４１に記載の組成物。
43. 前記ｓｃＦｖ結合ドメインが、抗ＣＤ１９ドメイン、抗ＣＤ２０ドメイン、抗ＣＤ２２ドメイン、抗ＣＤ２４ドメイン、抗ＣＤ３３ドメイン、抗ＣＤ３８ドメイン、抗ＣＤ３９ドメイン、抗ＣＤ７３ドメイン、抗ＣＤ１２３ドメイン、抗ＣＤ１３８ドメイン、抗ＣＤ２２８ドメイン、抗ＬＲＲＣ１５ドメイン、抗ＣＥＡドメイン、抗ＦＲαドメイン、抗ＥＰＣＡＭドメイン、抗ＰＤ－Ｌ１ドメイン、抗ＰＳＭＡドメイン、抗ｇｐ１００ドメイン、抗ＭＵＣ１ドメイン、抗ＭＣＳＰドメイン、抗ＥＧＦＲドメイン、抗ＧＤ２ドメイン、抗ＴＲＯＰ－２ドメイン、抗ＧＰＣ３ドメイン、抗ＭＩＣＡドメイン、抗ＭＩＣＢドメイン、抗ＶＩＳＴＡドメイン、抗ＵＬＢＰドメイン、抗ＨＥＲ２ドメイン、抗ＭＣＭ５ドメイン、抗ＦＡＰドメイン、抗５Ｔ４ドメイン、抗ＬＦＡ－１ドメイン、抗Ｂ７－Ｈ３ドメイン、及び抗ＭＵＣ１６ドメインからなる群から選択される、請求項４２に記載の組成物。
44. 前記細胞外ドメインが、ＰＤ－１ドメイン、ＦＡＳドメイン、またはＴＧＦβＲＩＩドメインである、請求項４１に記載の組成物。
45. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＳＴＡＴ３ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１８ＲＡＰドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４１～４４のいずれか１項に記載の組成物。
46. 前記膜貫通ドメインが、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される、請求項４１～４５のいずれか１項に記載の組成物。
47. 前記ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される、請求項４１～４６のいずれか１項に記載の組成物。
48. キメラ共刺激受容体（ＣＣＲ）を含む組成物であって、前記ＣＣＲが、
    ｉ．細胞外タンパク質ドメインと、
    ｉｉ．ヒンジタンパク質ドメインと、
    ｉｉｉ．膜貫通タンパク質ドメインと、
    ｉｖ．少なくとも１つの細胞内タンパク質ドメインと、を含む、前記組成物。
49. 前記細胞外タンパク質ドメインが、ｓｃＦｖ結合ドメインを含む、請求項４８に記載の組成物。
50. 前記ｓｃＦｖ結合ドメインが、抗ＣＤ１９ドメイン、抗ＣＤ２０ドメイン、抗ＣＤ２２ドメイン、抗ＣＤ２４ドメイン、抗ＣＤ３３ドメイン、抗ＣＤ３８ドメイン、抗ＣＤ３９ドメイン、抗ＣＤ７３ドメイン、抗ＣＤ１２３ドメイン、抗ＣＤ１３８ドメイン、抗ＣＤ２２８ドメイン、抗ＬＲＲＣ１５ドメイン、抗ＣＥＡドメイン、抗ＦＲαドメイン、抗ＥＰＣＡＭドメイン、抗ＰＤ－Ｌ１ドメイン、抗ＰＳＭＡドメイン、抗ｇｐ１００ドメイン、抗ＭＵＣ１ドメイン、抗ＭＣＳＰドメイン、抗ＥＧＦＲドメイン、抗ＧＤ２ドメイン、抗ＴＲＯＰ－２ドメイン、抗ＧＰＣ３ドメイン、抗ＭＩＣＡドメイン、抗ＭＩＣＢドメイン、抗ＶＩＳＴＡドメイン、抗ＵＬＢＰドメイン、抗ＨＥＲ２ドメイン、抗ＭＣＭ５ドメイン、抗ＦＡＰドメイン、抗５Ｔ４ドメイン、抗ＬＦＡ－１ドメイン、抗Ｂ７－Ｈ３ドメイン、抗ＩＬ－１３Ｒα２ドメイン、抗ＦＡＳドメイン、抗ＴＧＦβＲＩＩドメイン、及び抗ＭＵＣ１６ドメインからなる群から選択される、請求項４９に記載の組成物。
51. 前記細胞外タンパク質ドメインが、ＰＤ－１ドメイン、ＦＡＳドメイン、またはＴＧＦβＲＩＩドメインである、請求項４８に記載の組成物。
52. 前記細胞内ドメインが、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）ドメイン、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、ＩＬ－２Ｒγドメイン、ＩＬ－１８Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１８ＲＡＰドメイン、ＩＬ－７Ｒαドメイン、ＩＬ－１２Ｒ１ドメイン、ＩＬ－１２Ｒ２ドメイン、ＩＬ－１５Ｒαドメイン、ＩＬ－２１Ｒドメイン、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項４８～５１のいずれか１項に記載の組成物。
53. 前記膜貫通タンパク質ドメインが、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される、請求項４８～５２のいずれか１項に記載の組成物。
54. 前記ヒンジタンパク質ドメインが、ＣＤ３αドメイン、ＣＤ３βドメイン、ＣＤζドメイン、ＣＤ３εドメイン、ＣＤ４ドメイン、ＣＤ５ドメイン、ＣＤ８αドメイン、ＣＤ９ドメイン、ＣＤ１６ドメイン、ＣＤ２２ドメイン、ＣＤ２７ドメイン、ＣＤ２８ドメイン、ＣＤ３３ドメイン、ＣＤ３７ドメイン、ＣＤ４５ドメイン、ＣＤ６４ドメイン、ＣＤ８０ドメイン、ＣＤ８６ドメイン、ＣＤ１３４ドメイン、ＣＤ１３７ドメイン、ＣＤ１５４ドメイン、ＩｇＧ１ドメイン、ＩｇＧ４ドメイン、ＩｇＤドメイン、ＩＬ－２Ｒαドメイン、ＩＬ－２Ｒβドメイン、及びＩＬ－２Ｒγドメインからなる群から選択される、請求項４８～５３のいずれか１項に記載の組成物。
55. 腫瘍浸潤リンパ球をさらに含む、請求項４８～５４のいずれか１項に記載の組成物。
56. 骨髄浸潤リンパ球をさらに含む、請求項４８～５４のいずれか１項に記載の組成物。
57. 末梢血リンパ球をさらに含む、請求項４８～５４のいずれか１項に記載の組成物。
58. がんの治療を必要とする患者に、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の集団を投与することによって前記がんを治療する方法であって、前記ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾される、前記方法。
59. 前記がんが、ＴＩＬ集団を投与することによって治療され、前記方法が、
    （ａ）前記患者から取得された腫瘍試料を複数の腫瘍断片または腫瘍消化物に処理することによって、前記患者から切除された腫瘍から第１のＴＩＬ集団を取得及び／または受容することと、
    （ｂ）前記第１のＴＩＬ集団を閉鎖系に付加することと、
    （ｃ）前記第１のＴＩＬ集団を、ＩＬ－２及び任意選択でＯＫＴ－３抗体、ならびに抗原提示細胞（ＡＰＣ）を含む第１の細胞培養培地中で培養することによって第１の拡張を行い、第２のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第１の拡張が、第１のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われ、前記第１の拡張が、約３～１４日間行われて、前記第２のＴＩＬ集団を取得し、ステップ（ｂ）からステップ（ｃ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記第２のＴＩＬ集団を産生することと、
    （ｄ）前記第２のＴＩＬ集団を遺伝子修飾して前記ケモカイン受容体を発現させることと、
    （ｅ）ＩＬ－２、ＯＫＴ－３抗体、及びＡＰＣを含む第２の細胞培養培地中で前記第２のＴＩＬ集団の第２の拡張を行い、第３のＴＩＬ集団を産生することであって、前記第２の拡張が、約３～１４日間行われて、前記第３のＴＩＬ集団を取得し、前記第３のＴＩＬ集団が、治療的ＴＩＬ集団であり、前記第２の拡張が、第２のガス透過性表面積を提供する密閉容器内で行われる、前記第３のＴＩＬ集団を産生することと、
    （ｆ）ステップ（ｅ）から取得された治療的ＴＩＬ集団を採取することと、
    （ｇ）ステップ（ｆ）からの前記採取されたＴＩＬ集団を注入バッグに移すことであって、ステップ（ｅ）から（ｆ）への移行が、前記系を開くことなく起こる、前記移すことと、
    （ｈ）凍結保存プロセスを使用して、ステップ（ｆ）からの前記採取されたＴＩＬ集団を含む前記注入バッグを凍結保存することと、
    （ｉ）治療上有効な投与量の前記第３のＴＩＬ集団を、ステップ（ｇ）の前記注入バッグから前記患者に投与することと、を含む、請求項５８に記載の方法。
60. 前記ケモカイン受容体が、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質である、請求項５９に記載の方法。
61. ステップ（ｄ）が、前記ケモカイン受容体を発現するように、レンチウイルスまたはレトロウイルスを使用してＴＩＬを遺伝子修飾することをさらに含む、請求項５８～６０のいずれか１項に記載の方法。
62. 前記ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、ＳＯＣＳ１、ＡＮＫＲＤ１１、ＢＣＯＲ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される、請求項５８～６１のいずれか１項に記載の方法。
63. 前記がんが、ＴＩＬの投与によって治療される固形腫瘍がんである、請求項５８～６２のいずれか１項に記載の方法。
64. 前記がんが、肉腫、膵臓癌、肝臓癌、神経膠芽細胞腫、胃腸癌、黒色腫、卵巣癌、子宮内膜癌、甲状腺癌、結腸直腸癌、子宮頸癌、肺癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、中皮腫、膀胱癌、乳癌、ヒトパピローマウイルスによって引き起こされるがん、頭頸部癌、腎癌、及び腎細胞癌からなる群から選択され、前記患者が、ヒトである、請求項６３に記載の方法。
65. 前記がんが、非小細胞肺癌であり、前記患者が、
    １．＜１％のＰＤ－Ｌ１の所定の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、
    ２．１％～４９％のＰＤ－Ｌ１の腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）、または
    ３．１つ以上のドライバー変異の所定の非存在のうちの少なくとも１つを有する、請求項６４に記載の方法。
66. 前記患者が、＜１％のＰＤ－Ｌ１のＴＰＳを有する、請求項６５に記載の方法。
67. 前記患者が、ＥＧＦＲ阻害剤、ＢＲＡＦ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤、ｃ－Ｒｏｓ阻害剤、ＲＥＴ阻害剤、ＥＲＢＢ２阻害剤、ＢＲＣＡ阻害剤、ＭＡＰ２Ｋ１阻害剤、ＰＩＫ３ＣＡ阻害剤、ＣＤＫＮ２Ａ阻害剤、ＰＴＥＮ阻害剤、ＵＭＤ阻害剤、ＮＲＡＳ阻害剤、ＫＲＡＳ阻害剤、ＮＦ１阻害剤、ＭＥＴ阻害剤、ＴＰ５３阻害剤、ＣＲＥＢＢＰ阻害剤、ＫＭＴ２Ｃ阻害剤、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１阻害剤、ＡＴＭ阻害剤、ＳＥＴＤ２阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＰＴＰＮ１１阻害剤、ＦＧＦＲ１阻害剤、ＥＰ３００阻害剤、ＭＹＣ阻害剤、ＥＺＨ２阻害剤、ＪＡＫ２阻害剤、ＦＢＸＷ７阻害剤、ＣＣＮＤ３阻害剤、及びＧＮＡ１１阻害剤による治療のために適応されていないがんを有する、請求項６３～６６のいずれか１項に記載の方法。
68. 前記患者が、１つ以上のドライバー変異の非存在を有する、請求項６３～６６のいずれか１項に記載の方法。
69. 前記１つ以上のドライバー変異が、ＥＧＦＲ変異、ＥＧＦＲ挿入、ＥＧＦＲエクソン２０、ＫＲＡＳ変異、ＢＲＡＦ変異、ＢＲＡＦ Ｖ６００変異、ＡＬＫ変異、ｃ－ＲＯＳ変異（ＲＯＳ１変異）、ＲＯＳ１融合、ＲＥＴ変異、ＲＥＴ融合、ＥＲＢＢ２変異、ＥＲＢＢ２増幅、ＢＲＣＡ変異、ＭＡＰ２Ｋ１変異、ＰＩＫ３ＣＡ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＰＴＥＮ変異、ＵＭＤ変異、ＮＲＡＳ変異、ＫＲＡＳ変異、ＮＦ１変異、ＭＥＴ変異、ＭＥＴスプライス及び／または変化したＭＥＴシグナル伝達、ＴＰ５３変異、ＣＲＥＢＢＰ変異、ＫＭＴ２Ｃ変異、ＫＭＴ２Ｄ変異、ＡＲＩＤ１Ａ変異、ＲＢ１変異、ＡＴＭ変異、ＳＥＴＤ２変異、ＦＬＴ３変異、ＰＴＰＮ１１変異、ＦＧＦＲ１変異、ＥＰ３００変異、ＭＹＣ変異、ＥＺＨ２変異、ＪＡＫ２変異、ＦＢＸＷ７変異、ＣＣＮＤ３変異、及びＧＮＡ１１変異からなる群から選択される、請求項６８に記載の方法。
70. 前記がんが、化学療法剤または化学療法レジメンによる治療に対して不応性または耐性である、請求項６３～６９のいずれか１項に記載の方法。
71. 前記がんが、ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項６３～７０のいずれか１項に記載の方法。
72. 前記ＶＥＧＦ－Ａ阻害剤が、ベバシズマブ、ラニビズマブ、イクルクマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
73. 前記がんが、ＰＤ－１阻害剤またはＰＤ－Ｌ１阻害剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項６３～７２のいずれか１項に記載の方法。
74. 前記ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、セミプリマブ、チスレリズマブ、シンチリマブ、トリパリマブ、ドスタリマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、アテゾリズマブ、レチファンリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される、請求項７３に記載の方法。
75. 前記がんが、ＣＴＬＡ－４阻害剤による治療に対して不応性または耐性である、請求項６３～７４のいずれか１項に記載の方法。
76. 前記ＣＴＬＡ－４阻害剤が、イピルムマブ、トレメリムマブ、ザリフレリマブ、ならびにそれらの断片、バリアント、及びバイオシミラーからなる群から選択される、請求項７５に記載の方法。
77. 前記ＩＬ－２が、最初に、前記第１の細胞培養培地中及び前記第２の細胞培養培地中に１０００ＩＵ／ｍＬ～６０００ＩＵ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項６３～７６のいずれか１項に記載の方法。
78. 前記ＯＫＴ－３抗体が、最初に、前記第２の細胞培養培地中に約３０ｎｇ／ｍＬの初期濃度で存在する、請求項６３～７７のいずれか１項に記載の方法。
79. 前記第１の細胞培養培地が、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項６３～７８のいずれか１項に記載の方法。
80. 前記第２の細胞培養培地が、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるサイトカインをさらに含む、請求項６３～７９のいずれか１項に記載の方法。
81. 前記第３のＴＩＬ集団を前記患者に投与する前に、骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項６３～８０のいずれか１項に記載の方法。
82. 前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で５日間投与するステップを含む、請求項８１に記載の方法。
83. 前記骨髄非破壊的リンパ球枯渇レジメンが、シクロホスファミドを６０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で、及びフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で２日間投与し、続いてフルダラビンを２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で３日間投与するステップを含む、請求項８２に記載の方法。
84. 前記患者への前記第３のＴＩＬ集団の投与の翌日に開始するＩＬ－２レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項６３～８３のいずれか１項に記載の方法。
85. 前記患者への前記第３のＴＩＬ集団の投与と同日に開始するＩＬ－２レジメンで前記患者を治療するステップをさらに含む、請求項６３～８３のいずれか１項に記載の方法。
86. 前記ＩＬ－２レジメンが、許容範囲まで８時間毎に１５分間のボーラス静脈内注入として投与される、６００，０００もしくは７２０，０００ＩＵ／ｋｇのアルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーを含む高用量ＩＬ－２レジメンである、請求項８４または８５に記載の方法。
87. 前記ＩＬ－２レジメンが、ベンペガルデスロイキン、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
88. 前記ＩＬ－２レジメンが、ＴＨＯＲ－７０７、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
89. 前記ＩＬ－２レジメンが、ネムバロイキンアルファ、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
90. 前記ＩＬ－２レジメンが、配列番号２９及び配列番号３８からなる群から選択される重鎖と、配列番号３７及び配列番号３９からなる群から選択される軽鎖と、を含む抗体、またはその断片、バリアント、もしくはバイオシミラーの投与を含む、請求項８４または８５に記載の方法。
91. 治療上有効なＴＩＬ集団が投与され、約２×１０^９～約１５×１０^１０ＴＩＬを含む、請求項６３～９０のいずれか１項に記載の方法。
92. 前記第１の拡張が、１１日以内の期間にわたって行われる、請求項６３～９１のいずれか１項に記載の方法。
93. 前記第２の拡張が、１１日以内の期間にわたって行われる、請求項６３～９２のいずれか１項に記載の方法。
94. ケモカイン受容体を発現するように遺伝子修飾された腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、骨髄浸潤リンパ球（ＭＩＬ）、または末梢血リンパ球（ＰＢＬ）を含む、組成物。
95. 前記ケモカイン受容体が、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、ＣＸＣＲ７（ＡＣＫＲ３）、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、ＣＣＲ１１、ＸＣＲ１、ＣＸ３ＣＲ１、及びそれらの組み合わせからなる群から選択されるタンパク質である、請求項９４に記載の組成物。
96. 前記ＴＩＬ、ＭＩＬ、またはＰＢＬが、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＣＩＳＨ、ＴＧＦβＲ２、ＰＫＡ、ＣＢＬ－Ｂ、ＢＡＦＦ（ＢＲ３）、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される遺伝子の発現を安定的または一過的に低減するようにさらに遺伝子修飾される、請求項９４または９５に記載の組成物。
97. ケモカイン受容体を含む組成物であって、腫瘍浸潤リンパ球、骨髄浸潤リンパ球、または末梢血リンパ球をさらに含む、前記組成物。

Images