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JP2024073580A - Ｂｔｌａ抗体 - Google Patents

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Abstract

【課題】ＢＴＬＡ抗体の提供。【解決手段】本発明は、概して、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する抗体及びそれらの使用に関する。より具体的には、本発明は、ヒトＢＴＬＡに結合し、その活性を調節するアゴニスト抗体、並びに炎症性、自己免疫性、及び増殖性の疾患及び障害の治療におけるそれらの使用に関する。好適には、抗体はまた、ＦｃγＲ２Ｂを介したシグナル伝達を増強するＦｃ改変を有する。ある特定の実施形態では、かかる分子は、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ａ又はＦｃγＲ１Ａなどの１つ以上の活性化Ｆｃガンマ受容体への減少した結合を有する。【選択図】なし

Description

本発明は、概して、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（B and T lymphocyte attenuator、ＢＴＬＡ）に結合する、抗原結合断片を含む抗体、並びにその使用に関する
。より具体的には、本発明は、ヒトＢＴＬＡに結合し、その活性を調節し、ＦｃγＲ２Ｂへの結合及びそれを介したシグナル伝達が増強されたアゴニスト抗体、並びに炎症性、自己免疫性、及び増殖性の疾患及び障害の治療におけるそれらの使用に関する。
免疫系は、病原体又は危険な変異細胞の破壊と、健康な自己組織及び無害な共生生物の寛容との間でバランスをとらなければならない。このバランスを容易にするために、免疫細胞の活性は、細胞をそれらの環境に合わせる複数の刺激性受容体及び抑制性受容体からのシグナルの統合に影響を受ける。これらの表面発現受容体は、免疫応答の治療的調節のための魅力的な標的を提示する。多くのヒト疾患は、自己免疫疾患、移植片拒絶、及び移植片対宿主病を含む免疫系の異常な又は望ましくない活性化に起因する。抑制性受容体を介してシグナル伝達を誘導することができるアゴニスト剤は、これらの望ましくない免疫応答を弱めることができる。
Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ；ＣＤ２７２とも称される）は、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ－４、ＩＣＯＳ、及びＰＤ－１も含む受容体のＣＤ２８ファミリーの抑制性メンバーである（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：６７０－６７９，２００３）。これは、免疫系全体にわたって、骨髄系細胞及びリンパ系細胞の両方で広く発現している（Ｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７２：５９３１－９，２００４）。そのリガンドであるヘルペスウイルス侵入メディエータ（ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ｅｎｔｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒ、ＨＶＥＭ）による結合に続いて、ＢＴＬＡは、ホスファターゼＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２をその細胞質ドメインに動員し（Ｓｅｄｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：９０－８，２００５）、これは次に、活性化受容体のシグナル伝達カスケードを抑制する。インタクトなＢＴＬＡ遺伝子を欠くマウスは、インビトロでの過剰増殖性Ｂ細胞及びＴ細胞応答、免疫化後のＤＮＰ－ＫＬＨに対するより高い力価、並びにＥＡＥに対する増加した感受性を示す（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，４：６７０－６７９，２００３）。老齢まで観察した場合、ＢＴＬＡノックアウトマウスは、自己抗体、自己免疫性肝炎様疾患、及び多臓器での炎症性細胞浸潤を自発的に発症する（Ｏｙａ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ５８：２４９８－２５１０，２００８）。この証拠は、ＢＴＬＡ抑制性受容体が免疫ホメオスタシスの維持及び自己免疫の抑制において重要な役割を果たすことを示す。更に、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡシグナル伝達は、粘膜炎症及び感染免疫の調節に関与している（Ｓｈｕｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ．８９：５１７－５２３，２０１１）。
自己免疫障害に関連して自己反応性リンパ球を抑制するためにＢＴＬＡ機能を調節することができる治療剤が非常に望ましい。
マウスＢＴＬＡに結合するモノクローナル抗体は、受容体を介したシグナル伝達を誘導して、免疫細胞応答を抑制するアゴニストとして作用することができることが以前に示されている。アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体（ｍＡｂ）の存在下で、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８活性化Ｔ細胞は、ＩＬ－２産生及び増殖の低下を示す（Ｋｒｅｉｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７５，６４２０－６４７２，２００５）。
更に、抗マウスＢＴＬＡアゴニスト抗体は、移植片対宿主病のマウスモデルにおいて疾患を改善することが示されている（Ｓａｋｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．１１７：２５０６－２５１４；Ａｌｂｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０７：２５５１－９，２０１０）。ヒトＢＴＬＡ受容体を標的とするアゴニスト抗体は、エクスビボでＴ細胞応答を抑制することが示されているが（Ｏｔｓｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ３４４：１１２１－７，２００６、及び国際公開第２０１１／０１４４３８号を参照されたい）、まだ臨床に移されていない。
国際公開第２０１８／２１３１１３号（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ＆Ｃｏ．）は、ＢＴＬＡに対するある特定の抗体を開示している。
２０２０年６月２５日に公開された国際公開第２０２０／１２８４４６号（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ及びＭｉｒｏＢｉｏ
Ｌｉｍｉｔｅｄ）は、ＢＴＬＡに対するある特定の抗体を開示している。
ヒトでは、１つの抑制性Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ２Ｂ）が存在する一方で、他のＦｃガンマ受容体は全て、免疫活性化シグナル（ＦｃγＲ１Ａ、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ３Ａ、及びＦｃγＲ３Ｂ）を送達する。ＦｃγＲ２Ｂの重要な制御的役割は、自己免疫疾患に対する感受性が増加したＦｃγＲ２Ｂノックアウトマウスの研究を通して実証されている（Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９１（５）：８９９－９０６，２０００）。更に、ヒトにおけるＦｃγＲ２Ｂ遺伝子の多型は、自己免疫疾患、特に全身性エリテマトーデスのリスクに関連する（Ｆｌｏｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １１（１０），２００５）。したがって、ＦｃγＲ２Ｂは、免疫応答の制御において重要な役割を果たすと考えられており、自己免疫疾患及び炎症性疾患を制御するための有望な標的分子である。
ＦｃγＲ２Ｂ結合活性が改善されたＦｃを有する抗体が報告されている（Ｃｈｕ ｅｔ
ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５（１５）：３９２６－３３，２００８）。この文献では、抗体Ｆｃ領域にＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｇ２３６Ｄ／Ｓ２６７Ｅ、及びＳ２３９Ｄ／Ｓ２６７Ｅなどの改変を加えることによって、ＦｃγＲ２Ｂ結合活性を改善している。その中でも、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異が導入された抗体は、ＦｃγＲ２Ｂに最も強く結合し、ＦｃγＲ１Ａ及びＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対して天然に存在するＩｇＧ１と同じレベルの結合を維持している。しかしながら、別の報告は、この改変が、ＦｃγＲ２Ｂ結合と同じレベルまで、ＦｃγＲ２Ａ １３１Ｒへの結合を数百倍増強することを示し、これは、ＦｃγＲ２Ｂ結合選択性が、ＦｃγＲ２Ａ
１３１Ｒと比較して改善されないことを意味する（米国特許公開第２００９／０１３６４８５号）。
炎症性ＦｃγＲシグナル伝達を誘発することなく免疫応答を抑制するのに有効であるＢＴＬＡアゴニスト抗体のために、本発明者らは、ＦｃγＲ２Ｂへの選択的なＦｃ結合のために、抗体を適合させることを提案する。ＦｃγＲ２Ｂへのより選択的な結合を有する分子は、ＢＴＬＡ発現細胞上のＢＴＬＡを通して、及びＦｃγＲ２Ｂ発現細胞上のＦｃγＲ２Ｂを通して、双方向の抑制性シグナル伝達を促進し、これが、抗体の免疫抑制効果を強化する。これは、免疫過剰活性化の疾患の治療を意図した治療用抗体において望ましい。
本発明は、ヒト対象における高い結合親和性、高いアゴニスト効力、高いアゴニスト有効性、良好な薬物動態、及び低い抗原性を含む、１つ以上の望ましい特性を有する、ＢＴＬＡアゴニスト抗体（その抗体断片を含む）に関する。ある特定の実施形態では、かかる分子はまた、ＦｃγＲ２Ｂへの増加した結合を有し、したがって、ＦｃγＲ２Ｂのシグナル伝達を駆動し、更に適切な治療用途に十分なインビボ半減期を有する。したがって、本発明の抗体は、ＢＴＬＡ発現細胞上のＢＴＬＡを介して、及びＦｃγＲ２Ｂ発現細胞上のＦｃγＲ２Ｂを介して、双方向性の抑制性シグナル伝達を促進する。ある特定の実施形態では、かかる分子は、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ａ又はＦｃγＲ１Ａなどの１つ以上の活性化Ｆｃガンマ受容体への減少した結合を有する。ある特定の実施形態では、かかる分子は、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ２Ａへの増加した結合比率を有する。ある特定の実施形態では、かかる分子は、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ１Ａへの増加した結合比率を有する。本発明はまた、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患などの疾患の治療における本発明の抗体の使用にも関する。
本発明の第１の態様によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加をもたらす置換を含むＦｃ領域を含む。
一部の実施形態では、［ＦｃγＲ２Ｂに対する親ポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値が１より大きい（例えば、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、２、２．５、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００）ように、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合が増加している。
一部の実施形態では、抗体は、ＦｃγＲ２ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性を有する。
一部の実施形態では、抗体は、親ポリペプチドと比較して、増強されたＦｃγＲ２Ｂ結合活性を有し、ＦｃγＲ２Ａ（Ｒ型）及び／又はＦｃγＲ２Ａ（Ｈ型）に対する維持又は低減された結合活性を有する。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ２Ａ（Ｒ型）に対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値は、２以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）である。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ２Ａ（Ｈ型）に対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値は、２以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、又は１５０以上）である。
一部の実施形態では、抗体は、親ポリペプチドと比較して、増強されたＦｃγＲ２Ｂ結合活性を有し、ＦｃγＲ１Ａに対する維持又は低減された結合活性を有する。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ１Ａに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値は、０．０５以上（例えば、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、又はそれ以上）である。
一部の実施形態では、親ポリペプチドと比較して、減少したＦｃγ１結合活性を有する。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ１Ａに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ１Ａに対する親ポリペプチドのＫＤ値］の値は、少なくとも１０、２０、５０、１００、２００である。
一部の実施形態では、抗体は、以下から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する：
（ｉ）Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）、
（ｉｉ）Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）、
（ｉｉｉ）Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）、
（ｉｖ）Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）、又は
（ｖ）Ｈ６８（配列番号２２５による位置）。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、又は２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
好適には、抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４である：ｈＩｇＧ１ Ｇ２３６Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ、ｈＩｇＧ１
Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ１ Ａ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ４ Ｓ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ４ Ｆ２３４Ａ、及びｈＩｇＧ４ Ｌ２３５Ａ。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２３６位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２３５位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２３４位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２６７位（ＥＵインデックス）にグルタミン酸を含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２６５位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２９７位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、３２２位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシン、及び３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
特定の実施形態では、抗体は、表１又は表２に特定され、本明細書に記載されるように、６．２、２．８．６、３Ｅ８、１１．５．１、１２Ｆ１１、１４Ｄ４、１５Ｂ６、１５Ｃ６、１６Ｅ１、１６Ｆ１０、１６Ｈ２、１Ｈ６、２１Ｃ７、２４Ｈ７、２６Ｂ１、２６Ｆ３、２７Ｇ９、３Ａ９、４Ｂ１、４Ｄ３、４Ｄ５、４Ｅ８、４Ｈ４、６Ｇ８、７Ａ１、８Ｂ４、８Ｃ４、及び８３１からなる群から選択される抗体に存在する少なくとも１つの相補性決定領域（complementarity-determining region、ＣＤＲ）を有する重鎖及び／
又は軽鎖を有する。好適には、当該抗体はまた、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、及び２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む。
更なる実施形態では、ヒトＢＴＬＡに結合する抗体は、６．２、２．８．６、３Ｅ８、又はヒトＢＴＬＡへの結合について６．２、２．８．６、若しくは３Ｅ８のうちのいずれか１つと競合する抗体からなる群から選択され、抗体が、ＢＴＬＡに特異的に結合し、受容体を介したシグナル伝達を誘導する。当該抗体はまた、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、及び２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、当該抗体が、配列番号１、１７、３、４、１２、及び６にそれぞれ開示されるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ配列を含む重鎖及び軽鎖と、置換を欠く親分子と比較してＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加をもたらす置換を含むＦｃ領域と、を含む。好適には、当該抗体は、それぞれ、配列番号１８及び１４に開示されているＶＨ及びＶＬ配列を含む。好適には、当該抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１９に開示されているアミノ酸配列を含み、かつ／又は軽鎖が、配列番号１６に開示されているアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、当該抗体は、２３６位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。好適には、抗体は、アゴニスト抗体である。
特定の実施形態では、当該抗体は、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。好適には、抗体は、アゴニスト抗体である。
特定の実施形態では、当該抗体は、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。好適には、抗体は、アゴニスト抗体である。
特定の実施形態では、当該抗体は、２３５位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、２３４位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、２６５位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、２６７位（ＥＵインデックス）にグルタミン酸を含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシンを含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、２９７位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、３２２位（ＥＵインデックス）にアラニンを含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、当該抗体は、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシン、及び３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを含むＦｃ領域を含む。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、抗体が、例えば、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３６Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ１ Ａ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ４ Ｓ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ４ Ｆ２３４Ａ、及びｈＩｇＧ４ Ｌ２３５Ａのうちの１つ以上のＦｃ領域置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの増加した結合を有する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの増加した結合を有し、ＦｃγＲ２Ａ又はＦｃγＲ１Ａなどの１つ以上の活性化Ｆｃγ受容体への減少した結合を有する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ２Ａへの結合増加した比率を有する。好適には、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ２Ａへの増加した比率は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較して、少なくとも１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．８、２、２．２、２．５、３、３．５、４、５、６、７、８、９、又は１０倍である。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、野生型配列に対してＦｃ領域置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ１Ａへの結合の増加した比率を有する。好適には、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ１Ａへの増加した比率は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較して、少なくとも１．１、１．２、１．５、２、５、１０、５０、１００、１５０、２００、２５０倍である。
Ｆｃ領域置換を欠く親分子と比較してとは、野生型Ｆｃに対するＦｃ置換を表す、特許請求の範囲に列挙されたアミノ酸以外の同じアミノ酸配列を有する抗体分子と比較することを意味する。例えば、以下の置換のうちのいずれかを含む：ｈＩｇＧ１ Ｇ２３６Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ１ Ａ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ４ Ｓ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ４ Ｆ２３４Ａ、及びｈＩｇＧ４ Ｌ２３５Ａ。したがって、ＦｃγＲ２Ｂへの列挙されたＦｃ置換を有する又は有しない抗体分子の結合を測定することができ、任意選択的に、ＦｃγＲ２Ａ又はＦｃγＲ１Ａなどの活性化Ｆｃγ受容体への列挙されたＦｃ置換を有する又は有しない抗体分子の結合を測定することができる。したがって、例えば、ＦｃγＲ２Ｂに対する結合が置換を有しない親分子と比較して１．５倍増加した場合、親と比較して１５０％増加した結合効率を示す。ＦｃγＲ２Ａに対する結合が、置換を有しない親分子と比較して１．５倍減少した場合、親と比較して６７％の結合効率を示す。この例示的な抗体分子の場合、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ２Ａ結合比率の変化は、１５０／６７＝２．２４倍になる。１を超える任意の値は、この化合物が、親化合物と比較して、ＦｃγＲ２ＡよりもＦｃγＲ２Ｂへの結合について増強された選択性を有することを示す。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、野生型配列に対してＦｃ領域置換を欠く親分子と比較して、［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の増加した比率を有する。好適には、バリアント分子の［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比率は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子の［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比率の少なくとも１．１、１．２、１．５、２、５、１０、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、１０００、１５００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、又は１００００倍である。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、野生型配列に対してＦｃ領域置換を欠く親分子と比較して、［ＦｃγＲ２Ａ １３１Ｒの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の増加した比率を有する。好適には、バリアント分子の［ＦｃγＲ２Ａ １３１Ｒの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比率は、Ｆｃ領域置換を欠く親分子の［ＦｃγＲ１Ａの結合についてのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂの結合についてのＫＤ値］の比率の少なくとも１．１、１．２、１．５、２、５、１０、５０、又は１００倍である。
本発明の第２の態様によれば、単離された核酸が提供され、本発明の第１の態様の単離された抗体の重鎖ポリペプチド及び／又は軽鎖ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。
本発明の第３の態様によれば、ベクターが提供され、本発明の第２の態様の核酸を含む。
本発明の第４の態様によれば、宿主細胞が提供され、本発明の第２の態様による核酸配列又は本発明の第３の態様によるベクターを含む。
本発明の第５の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体を産生する方法が提供され、当該抗体の産生のための条件下で本発明の第４の態様の宿主細胞を培養するステップと、任意選択的に、当該抗体を単離及び／又は精製するステップと、を含む。
本発明の第６の態様によれば、薬学的組成物が提供され、薬学的に許容される担体と、治療有効量の本発明の第１の態様の抗体又は本発明の第５の態様によって産生される抗体と、を含む。
本発明の第７の態様によれば、薬学的組成物を調製する方法が提供され、本発明の第１の態様による抗体又は本発明の第５の態様によって産生される抗体を、少なくとも１つの追加成分を含む組成物に製剤化することを含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの追加成分は、薬学的に許容される賦形剤である。
本発明の第８の態様によれば、キットが提供され、本発明の第１の態様による抗体又は本発明の第６の態様による薬学的組成物を含む。好適には、かかるキットは、使用説明書を含む添付文書を含む。
本発明の第９の態様によれば、患者におけるＢＴＬＡ関連疾患を治療する方法が提供され、患者に、治療有効量の本発明の第１の態様の抗体又は本発明の第６の態様の薬学的組成物を投与することを含む。
好適には、ＢＴＬＡ関連疾患は、自己免疫疾患又は炎症性疾患である。
発明を実施するための形態
本発明者らは、Ｔ細胞応答の抑制において現在の抗体よりも効果的であり、したがって、免疫媒介性障害の治療において特に有用であると予測される、ＢＴＬＡに対する特に強力なアゴニスト抗体を同定した。かかる抗体は、分子のＦｃ部分の位置に少なくとも１つの置換を含み、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合を選択的に増強する。好適には、抗体は、以下の位置（ＥＵインデックス位置）：２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２６５、２６７、２７１、２９７、３３０、及び３２２のうちの１つ以上に置換を含む。好適には、抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４である：ｈＩｇＧ１ Ｇ２３６Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ１ Ａ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ４ Ｓ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ４ Ｆ２３４Ａ、及びｈＩｇＧ４ Ｌ２３５Ａ（全てＥＵインデックス番号付けを使用）。
以下の位置：２３６、２３７、２３８、及び２６７（ＥＵインデックス）のうちの１つ以上での改変が、特に好適である。
Ｆｃ改変の組み合わせも好適である。特定の実施形態では、Ｖ９と呼ばれる改変のセットが用いられ、抗体重鎖が、２３７位にアスパラギン酸、２３８位にアスパラギン酸、２７１位にグリシン、及び３３０位にアルギニンを含むＦｃ領域を含む（ＥＵインデックスによる番号付け）。
Ｐ２３８Ｄ（ＥＵインデックス）置換を分子のＦｃ部分（すなわち、抗体又はその抗原結合断片）に導入することによって、分子は、ＦｃγＲ２Ｂへの結合及びＦｃγＲ２Ｂのシグナル伝達を、十分なインビボ半減期を保持することを確実にするレベル以外で増強した。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、その内容が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子（a molecule）」への言及は、任意選択的に、２つ以
上のこのような分子の組み合わせなどを含む。
態様が「含む（comprising）」という文言で本明細書に記載されている場合は常に、「からなる（consisting of）」及び／又は「から本質的になる（consisting essentially of）」という用語で記載されている他の類似の態様もまた提示されていることが理解
される。
本明細書に記載される様々な実施形態の特性のうちの１つ、いくつか、又は全ては、内容が明確に別様に指示しない限り、任意の態様に適用され得ることを理解されたい。更に、様々な実施形態を組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができる。本発明のこれらの態様及び他の態様は、当業者に明らかになるであろう。本発明のこれらの実施形態及び他の実施形態は、以下の詳細な説明によって更に説明される。
他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が関連する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。例えば、ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、及びｔｈｅ Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般的な辞書を、当業者に提供する。
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者に容易に知られるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」の値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータそれ自体に関する実施形態を含む（及び説明する）。
アミノ酸は、本明細書において、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ生化学命名委員会によって推奨されるそれらの一般的に知られている３文字記号又は１文字記号のいずれかによって言及され得る。ヌクレオチドは、同様に、それらの一般的に受け入れられている１文字コードによって言及され得る。
各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能を主に担う定常領域を定義する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原への結合を担う可変領域を規定する。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（ＮＩＨ Ｐｕｂ．Ｎｏ．９１／３２４２，ｐ．６７９－６８７；１９９１）は、重鎖及び軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。配列の保存の程度に基づいて、彼らは、個々の一次配列をＣＤＲ及びフレームワークに分類し、それらのリストを作成した（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｎｏ．９１－３２４２，１９９１を参照されたい）。
抗体の特定されたＣＤＲは、別段の指示がない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）に記載されているＫａｂａｔの定義に従う。可変ドメインのアミノ酸の番号付けは、配列表に提供される配列に基づく序数である。
ＣＬ、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３などの定常ドメインのアミノ酸の番号付けは、別段の指示がない限り、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（ＮＩＨ Ｐｕｂ．Ｎｏ．９１／３２４２，ｐ．６７９－６８７；１９９１）に開示されているＥＵインデックス番号付け（本明細書では「ＥＵインデックス」と称される）に従う。例えば、ＥＵインデックスは、本発明の抗体／その抗原結合断片のＦｃ領域における置換を位置付けるために使用される（例えば、２３６位のグリシン（Ｇ）からアスパラギン酸（Ｄ）への置換（Ｇ２３６Ｄとして特定される）、又は２３８位のプロリン（Ｐ）からアスパラギン酸（Ｄ）への置換（Ｐ２３８Ｄとして特定される））。抗体の分野の当業者は、この番号付けの慣習が、免疫グロブリン配列の特定の領域における非連続的な番号付けからなり、免疫グロブリンファミリーにおける保存された位置に対する正規化された参照を可能にすることを理解するであろう。したがって、ＥＵインデックスによって定義される任意の所与の免疫グロブリンの位置は、その連続的な配列に必ずしも対応しない。
「Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ」及び「ＢＴＬＡ」という用語は、互換的に使用され、文脈上別段の指示がない限り、タンパク質又は遺伝子（又はＢＴＬＡの全部若しくは一部をコードする他の核酸）のいずれかに関して使用される。ヒトＢＴＬＡ配列は、全てのヒトアイソタイプ及びバリアント形態を包含する。完全長ヒトＢＴＬＡの代表的な例は、Ｇｅｎｂａｎｋにおいて受託番号：ＡＪ７１７６６４．１として開示されている。ヒトＢＴＬＡの別の代表的なポリペプチド配列は、配列番号２２５に開示されており、これは、ＡＪ７１７６６４．１の配列と、２つの天然バリアント一塩基多型のみで異なる。アレル多様性にもかかわらず、ヒトＢＴＬＡポリペプチド配列は、典型的には、配列番号２２５のヒトＢＴＬＡに対して、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有する。
全長カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＢＴＬＡの代表例は、受託番号：ＸＰ＿００５５４８２２４の下、Ｇｅｎｂａｎｋに開示されている。カニクイザルＢＴＬＡの参照ポリペプチド配列は、配列番号２２６に開示されている。カニクイザルＢＴＬＡのポリペプチド配列は、典型的には、配列番号２２６に開示されているカニクイザルＢＴＬＡと、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％）の配列同一性を有する。
配列同一性という用語は、当該技術分野において周知である。本発明の目的のために、標的配列が規定された限界（例えば、９０％同一性）を満たすかどうかを決定する場合、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ）アルゴリズム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２１５：４０３－４１０，１９９０を参照）又はＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ．Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４７：１９５－１９７，１９８１を参照）を使用してそのように同定される場合、規定された限界を満たすと考えられる。
抗体（抗体の抗原結合断片を含む）
抗体は、免疫グロブリン分子であり、免疫グロブリン分子の可変ドメインに位置する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、又はこれらの組み合わせなどの標的に特異的に結合することができる。特に、本明細書で使用される場合、「抗体」とう用語は、インタクトなポリクローナル抗体、インタクトなモノクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、少なくとも２つのインタクトな抗体から生成される二重特異性抗体）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、任意の他の改変された免疫グロブリン分子、及び抗体が所望の生物学的活性を示す限り抗原認識部位を含むそれらの任意の断片、を包含する。抗体は、任意の種由来であり得る。好適には、抗体は、ヒト抗体である。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子を指し、抗原に特異的に結合し、機能的であってもなくてもよいＦｃＲ結合部位を含む。この用語は、全抗体（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ４など）及びその抗原結合断片を包含する。
本明細書で使用される場合、ＢＴＬＡアゴニスト抗体は、ＢＴＬＡに結合し、Ｔ細胞及び／又はＢ細胞に対するその共抑制性シグナルを増強する抗体（インタクトな抗体の抗原結合断片を含む）を指す。
抗原結合部位は、標的抗原の全部又は一部に結合する分子の一部を指す。抗体分子において、それは抗体の抗原結合部位と呼ばれてもよく、標的抗原の全部又は一部に特異的に結合する抗体の一部を含む。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定の部分にのみ結合することができ、その部分は、エピトープと呼ばれる。抗体の抗原結合部位は、１つ以上の抗体可変ドメインによって提供され得る。好ましくは、抗体の抗原結合部位は、抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）及び抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
本発明はまた、抗原結合部位を含む抗体断片を包含する。したがって、「その抗原結合断片」という用語は、抗体を指す場合、抗原認識部位（したがって、抗原に結合する能力）を有する、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、Ｆｖ断片及び単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）変異体などの抗体断片を指す。抗原結合免疫グロブリン（抗体）断片は、当該技術分野において周知である。このような断片は、機能的なＦｃ受容体結合部位を有する必要はない。特定の実施形態では、その抗原結合性断片は、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、及び２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上から選択される置換を有するＦｃ部分を含む。特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｇ２３６Ｄ（ＥＵインデックス）置換を有するＦｃ部分を含む。特定の実施形態では、その抗原結合断片は、Ｐ２３８Ｄ（ＥＵインデックス）置換を有するＦｃ部分を含む。特定の実施形態では、その抗原結合断片は、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシン、及び３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを有するＦｃ部分を含む。
本明細書で使用される場合、「本発明の抗体断片分子」、「抗体断片」、及び「その抗原結合断片」という用語は、本明細書で互換的に使用される。まとめて、抗体又はその抗原結合断片は、抗原結合分子と称され得る。
本明細書で使用される「ＢＴＬＡ結合分子」という用語は、ＢＴＬＡに結合することができる抗体及びその結合断片の両方を指す。
免疫グロブリンの５つの主要なクラス（すなわち、アイソタイプ）：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（サブタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分類され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常領域は、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知である。文脈上の制約による別段の指示がない限り、本発明の抗体は、抗体のこれらのクラス又はサブクラスのうちの１つに由来し得る。異なるクラスの抗体に対応する重鎖定常ドメインは、典型的には、それぞれ対応する小文字のギリシャ文字α、δ、ε、γ、及びμによって示される。任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの明確に異なる型のうちの１つに割り当てることができる。
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（light、Ｌ）鎖及び２つの同一の重（heavy、Ｈ）鎖から構成された約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体のＹ字型の糖タンパク質である。各軽鎖は、１つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に連結されているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖はまた、規則的な間隔の鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、その後にいくつかの定常ドメインが続く。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと整列する。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間の界面を形成すると考えられている。各重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）及び定常領域を含み、定常領域は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＤ抗体の場合、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３と呼ばれる３つのドメインを含む（ＩｇＭ及びＩｇＥは、第４のドメインＣＨ４を有する）。ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＤクラスでは、ＣＨ１及びＣＨ２ドメインは、可変的な長さのプロリン及びシステインリッチセグメント（様々なＩｇＧサブクラスにおいて約１０～約６０アミノ酸）である可動性ヒンジ領域によって分離されている。軽鎖及び重鎖の両方における可変ドメインは、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって定常ドメインに連結され、重鎖はまた、約１０個の更なるアミノ酸の「Ｄ」領域を有する。各クラスの抗体は、対になるシステイン残基によって形成される鎖間及び鎖内ジスルフィド結合を更に含む。重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）は、各々、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、ＣＤＲと呼ばれる超可変領域に更に細分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲと、４つのＦＲと、を含み、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）など、宿主の組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
本発明の抗体は、マウス、ラット、ヒト、又は任意の他の起源（キメラ抗体又はヒト化抗体を含む）を含む任意の動物種に由来し得る。一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル、例えば、モノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体若しくはヒト化抗体、又はその抗原結合断片である。非ヒト抗体又はその抗原結合断片は、ヒトにおけるその免疫原性を低減するために、組換え法によってヒト化され得る。
本明細書で使用される「モノクローナル抗体」（「ｍＡｂ」）という用語は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指し、例えば、集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得ると考えられる変異（例えば、天然に存在する変異）を除いて同一である。したがって、修飾語「モノクローナル」は、別個の抗体又は抗原結合断片の混合物ではない、抗体又はその断片の特徴を示す。ｍＡｂは、典型的には、高度に特異的であり、単一の抗原部位／エピトープを対象とするが、モノクローナル抗体はまた、実質的に均質な二重特異性抗体分子の集団を指すこともできる。
ｍＡｂは、ハイブリドーマ、組換え、トランスジェニック、又は当業者に既知の他の技術によって産生され得る。例えば、本発明によるモノクローナル抗体又はその抗原結合断片は、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５，１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及び同第６，３３１，４１５号に記載されている組換えＤＮＡ法によって作製され得る。「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ １９９１；３５２：６２４－６２８及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９１；２２２：５８１－５９７に記載の技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離することもできる。
モノクローナルという用語はまた、本発明の抗体の抗原結合断片に帰することができる。それは単に、分子が、単一クローン形態で産生されるか又は存在することを意味する。
「ヒト」抗体（ＨｕｍＡｂ）は、フレームワーク領域及びＣＤＲ領域の両方がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を指す。更に、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域も、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的変異誘発によって、又はインビボでの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかし、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図しない。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されているが、その内因性遺伝子座が無効にされているトランスジェニック動物（例えば、免疫された異種マウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号を参照）に免疫原／抗原を投与することによって調製され得る。例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）を参照されたい（ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体に関する）。かかる動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、又は染色体外に存在するか、若しくは動物の染色体にランダムに組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部又は一部を含有する。かかるトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、概して不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載している米国特許第．５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７，０４１，８７０号、並びにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号）も参照されたい。かかる動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって更に改変され得る。
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス－ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術によって生成されるヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）にも記載されている。追加の方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されているものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７：１８５－９１（２００５）に記載されている。
「ヒト」抗体及び「完全ヒト」抗体という用語は、同義的に使用される。ヒト抗体のこの定義は、特に、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体のＣＤＲの外側のアミノ酸の一部、ほとんど、又は全てが、ヒト免疫グロブリンに由来する対応するアミノ酸で置き換えられている抗体を指す。一部の実施形態では、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、又はウサギ）のＣＤＲ由来の残基（ドナー抗体）によって置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、インポートされたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られないが、抗体性能を更に改良及び最適化するために含まれる残基を含むことができる。Ａｂのヒト化形態の一実施形態では、ＣＤＲの外側の一部、ほとんど、又は全てのアミノ酸がヒト免疫グロブリン由来のアミノ酸で置き換えられているが、１つ以上のＣＤＲ領域内の一部、ほとんど、又は全てのアミノ酸は変化していない。アミノ酸の小さな付加、欠失、挿入、置換、又は改変は、それらが特定の抗原に結合する抗体の能力を無効にしない限り、許容される。「ヒト化」抗体は、元の抗体の抗原特異性と同様の抗原特異性を保持する。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可変ドメイン中、全て又は実質的に全ての超可変ループは、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は、任意選択的に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部分を含む。更なる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６（１９９２）を参照されたい。例えば、Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ ＆ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５（１９９８）、Ｈａｒｒｉｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５－１０３８（１９９５）、Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３（１９９４）、並びに米国特許第６，９８２，３２１号及び同第７，０８７，４０９号も参照されたい。好適には、Ｆｃは、ＦｃγＲ２Ｂへの結合に対する特異性を増強するために、Ｐ２３８Ｄ置換変異（「ＥＵインデックス」番号付けを使用）を含むであろう。
本明細書で使用される場合、Ｆｃ、Ｆｃ部分、又はＦｃ領域とは、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを除く、抗体又は抗体様分子の定常領域を指す。したがって、Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、並びにＩｇＥ、ＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、及びこれらのドメインのＮ末端側の可動性ヒンジを指す。ＩｇＧの場合、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２及びＣガンマ３（Ｃγ２及びＣγ３）、並びにＣガンマ１（Ｃγ１）とＣγ２との間のヒンジを含む。ＩｇＡ及びＩｇＭの場合、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。
本明細書で使用される場合、「操作された抗体」とは、ヒト化抗体であり得る抗体を指し、特定の残基が、有害な効果又は特性を減少させるように他の残基に置換されている。このような置換は、ＣＤドメイン内であり得る。例えば、本明細書に記載されるように（実施例２１を参照）、ヒト化抗体３Ｅ８のＣＤＲＨ２を、Ｎ５７Ｑ置換により改変して、脱アミド化の可能性を除去し、かつ／又はＫ６３Ｓ置換により改変して、予測される免疫原性を低減した。この場合の番号付けは、提供される配列識別子を参照した序数である。
「キメラ抗体」とは、可変領域がある種に由来し、定常領域が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域がマウス抗体に由来し、定常領域がヒト抗体に由来するか、又はその逆である抗体を指す。この用語はまた、ある種（例えば、第１のマウス）からのある個体由来のＶ領域と、同じ種（例えば、第２のマウス）からの別の個体由来の定常領域と、を含む抗体を包含する。「抗原（Ａｇ）」という用語は、Ａｇを認識する抗体（Ａｂ）を産生するために、又は発現ライブラリ（例えば、とりわけ、ファージ、酵母、又はリボソームディスプレイライブラリ）をスクリーニングするために、免疫応答性脊椎動物の免疫化に使用される分子実体を指す。本明細書では、Ａｇは、より広義に呼ばれ、一般に、Ａｂによって特異的に認識される標的分子を含むことが意図され、したがって、Ａｂを産生するための免疫化プロセスにおいて、又はＡｂを選択するためのライブラリスクリーニングにおいて、使用される分子の部分又は模倣物を含む。
「二重特異性」又は「二機能性」抗体は、２つの異なる重鎖／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。従来、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの重鎖が異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の共発現に基づく（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３））。二重特異性抗体を作製するための方法は、当業者の知識の範囲内である。例えば、二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’断片の連結を含む、様々な方法によって産生することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ，ｅｔ ａｌ，（１９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ，ｅｔ ａｌ，（１９９２）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７－１５５３を参照されたい。加えて、二重特異性抗体は、「ダイアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，ｅｔ ａｌ，（１９９３）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８）として、又は「ヤヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ，ｅｔ ａｌ，（１９９１）ＥＭＢＯ
Ｊ．１０：３６５５－３６５９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ，ｅｔ ａｌ，（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ．７：５１－５２）として形成され得る。完全長二重特異性抗体は、例えば、２つの単一特異性二価抗体間のＦａｂアーム交換（又は半分子交換）を使用して、各半分子の重鎖ＣＨ３界面に置換を導入して、別個の特異性を有する２つの抗体半分子のヘテロ二量体形成に有利に働くようにすることによって、インビトロの無細胞環境で又は共発現を使用して生成することができる。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合異性化反応及びＣＨ３ドメインの解離－会合の結果である。親単一特異性抗体のヒンジ領域の重鎖ジスルフィド結合が還元される。親単一特異性抗体のうちの１つの得られた遊離システインは、第２の親単一特異性抗体分子のシステイン残基と重鎖間ジスルフィド結合を形成し、同時に、親抗体のＣＨ３ドメインが解離－会合によって遊離及び再形成する。ＦａｂアームのＣＨ３ドメインは、ホモ二量体化よりもヘテロ二量体化に有利に働くように操作され得る。得られた産物は、各々が別個のエピトープに結合する２つのＦａｂアーム又は半分子を有する二重特異性抗体である。「ノブ・イン・ホール（knob-in-hole）」戦略（例えば、ＰＣＴ国際公開第２００６／０２８９３６号を参照）を使用して、完全長二重特異性抗体を生成することができる。簡潔には、ヒトＩｇＧのＣＨ３ドメインの界面を形成する選択されたアミノ酸を、ＣＨ３ドメイン相互作用に影響を及ぼす位置で変異させて、ヘテロ二量体の形成を促進することができる。小さな側鎖を有するアミノ酸（ホール）を、第１の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖に導入し、大きな側鎖を有するアミノ酸（ノブ）を、第２の抗原に特異的に結合する抗体の重鎖に導入する。２つの抗体の共発現後、「ホール」を有する重鎖と「ノブ」を有する重鎖との優先的な相互作用の結果として、ヘテロ二量体が形成される。ノブ及びホールを形成する例示的なＣＨ３置換対は、（第１の重鎖の第１のＣＨ３ドメインにおける改変位置／第２の重鎖の第２のＣＨ３ドメインにおける改変位置として表される）：Ｔ３６６Ｙ／Ｆ４０５Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｆ４０５Ｗ、Ｆ４０５Ｗ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３９４Ｗ／Ｙ４０７Ｔ、Ｔ３９４Ｓ／Ｙ４０７Ａ、Ｔ３６６Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、Ｆ４０５Ｗ／Ｔ３９４Ｓ、及びＴ３６６Ｗ／Ｔ３６６Ｓ＿Ｌ３６８Ａ＿Ｙ４０７Ｖである。
二重特異性抗体は、２つの単一特異性ホモ二量体抗体のＣＨ３領域に非対称変異を導入し、還元条件で２つの親単一特異性ホモ二量体抗体から二重特異性ヘテロ二量体抗体を形成して、国際特許公開第２０１１／１３１７４６号に記載の方法に従ってジスルフィド結合異性化を可能にすることによって、無細胞環境で、インビトロで生成することもできる。二重特異性抗体を生成するために別の戦略を使用することができ、１つのＣＨ３表面で正に帯電した残基を置換し、第２のＣＨ３表面で負に帯電した残基を置換することによる静電相互作用を使用して、重鎖ヘテロ二量体化を促進することを含む（米国特許公開第ＵＳ２０１０／００１５１３３号、米国特許公開第ＵＳ２００９／０１８２１２７号、米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２８６３７号、又は米国特許公開第ＵＳ２０１１／０１２３５３２号に記載の通り）
好適には、二重特異性分子の２つの抗体半分子のうちの１つは、本発明の抗ＢＴＬＡ抗体である。好適には、二重特異性抗体は、本明細書に開示されるＢＴＬＡ抗原結合領域を含む１つの結合アームと、別の抗原に対する（例えば、異なるＢＴＬＡ抗原エピトープ又は完全に異なるタンパク質に対する）結合領域を含む第２の結合アームと、を含み、分子が、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、及び２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む。
一般に、「エピトープ」という用語は、抗体が特異的に結合する抗原のエリア又は領域（すなわち、抗体と物理的に接触するエリア又は領域）を指す。したがって、「エピトープ」という用語は、抗体の抗原結合領域のうちの１つ以上において抗体によって認識及び結合され得る分子の部分を指す。典型的には、エピトープは、抗体又はその抗原結合部分（Ａｂ）とその対応する抗原との間の分子相互作用に関連して定義される。エピトープは、多くの場合、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の表面グループからなり、特定の三次元構造特性並びに特定の電荷特性を有する。一部の実施形態では、エピトープは、タンパク質エピトープであり得る。タンパク質エピトープは、直鎖状又は立体構造であり得る。直鎖状エピトープでは、タンパク質と相互作用分子（例えば、抗体）との相互作用点の全てが、タンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直鎖状に生じるエピトープを指す。「非直鎖状エピトープ」又は「立体構造エピトープ」は、エピトープに特異的な抗体が結合する抗原性タンパク質内の非連続ポリペプチド、アミノ酸及び／又は糖を含む。本明細書で使用される場合、「抗原性エピトープ」という用語は、当該技術分野で周知の任意の方法（例えば、従来のイムノアッセイ）によって決定される場合、抗体が特異的に結合することができる抗原の部分として定義される。
エピトープに「特異的に結合する」という用語は、当該技術分野で十分に理解されており、かかる特異的結合を決定する方法もまた、当該技術分野で周知である。分子が、代替的な細胞、タンパク質、又は物質よりも、特定の細胞、タンパク質、又は物質と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間、かつ／又はより大きな親和性で、反応又は会合する場合、その分子は「特異的結合」を示すと言われる。
目的の分子に特異的に結合する抗体又はペプチドを選択するために、様々なアッセイ形式を使用することができる。例えば、抗原若しくは受容体と特異的に反応する抗体、又は同族リガンド若しくは結合パートナーと特異的に結合するそのリガンド結合部分を同定するために使用され得る多くのアッセイの中には、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイ、免疫沈降、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ＫｉｎＥｘＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）、Ｏｃｔｅｔ（商標）（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）、及びウェスタンブロット分析がある。典型的には、特異的又は選択的反応は、バックグラウンドシグナル又はノイズの少なくとも２倍、より典型的には、バックグラウンドの１０倍超、更により典型的には、バックグラウンドの５０倍超、より典型的には、バックグラウンドの１００倍超、更により典型的には、バックグラウンドの５００倍超、更により典型的には、バックグラウンドの１０００倍超、更により典型的には、バックグラウンドの１０，０００倍超であろう。また、抗体は、平衡解離定数（ＫＤ又はＫＤ、本明細書において互換的に使用される）が７ｎＭ未満である場合、抗原に「特異的に結合する」と言われる。
一部の実施形態では、本開示は、キメラ抗原受容体を提供し、本明細書に開示されるＢＴＬＡ結合抗体の抗原結合断片、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用される「キメラ抗原受容体」（Chimeric Antigen Receptor、ＣＡ
Ｒ）、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」又は「キメラ免疫受容体」という用語は、任意の特異性を免疫エフェクター細胞に移植する、操作された受容体を指す。ＣＡＲは、典型的には、抗原結合ドメインを含む細胞外ドメイン（外部ドメイン）、膜貫通ドメイン、及び細胞内ドメイン（内部ドメイン）、を有する。「シグナル伝達ドメイン」という用語は、タンパク質の機能部分を指し、これは、二次メッセンジャーを生成することによって、又はかかるメッセンジャーに応答することでエフェクターとして機能することによって、定義されたシグナル伝達経路を介して細胞活性を調節するために細胞内で情報を伝達することによって作用する。
Ｆｃガンマ改変
ヒトでは、ＦｃγＲ１Ａ（ＣＤ６４Ａ）、ＦｃγＲ２Ａ（ＣＤ３２Ａ）、ＦｃγＲ２Ｂ（ＣＤ３２Ｂ）、ＦｃγＲ３Ａ（ＣＤ１６Ａ）、及びＦｃγＲ３Ｂ（ＣＤ１６Ｂ）アイソフォームがＦｃγＲタンパクファミリーとして報告されており、これらの受容体の異なるアロタイプも報告されている（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ８２（１－２）：５７－６５，２００２）。ＦｃγＲ１Ａ、ＦｃγＲ２Ａ、及びＦｃγＲ３Ａは、免疫学的に活性な機能を有するため、活性化ＦｃγＲと呼ばれ、ＦｃγＲ２Ｂは、免疫抑制機能を有するため、抑制性ＦｃγＲと呼ばれる（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｃｌａｔｗｏｒｔｈｙ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１０（５），３２８－３４３，２０１０）。文献及び本明細書において、ＦｃγＲ１Ａは、ＦｃγＲ１とも称され得る。
活性化ＦｃγＲが抗体のＦｃ領域への結合によって誘発される場合、それは、細胞内ドメイン又はＦｃＲ共通γ鎖（相互作用パートナー）に含まれる免疫受容活性化チロシンモチーフ（immunoreceptor tyrosine-based activating motif、ＩＴＡＭ）のリン酸化
をもたらし、シグナルカスケードの活性化を開始することによって炎症性免疫応答を誘発する（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ ａｎｄ Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８（１）：３４－４７，２００８）。抑制性受容体ＦｃγＲ２Ｂが抗体のＦｃ領域への結合によって誘発される場合、それは、細胞質テールにおける免疫受容活性化チロシンモチーフ（immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif、ＩＴＩＭ）のリン酸
化をもたらし、続いてＳＨ２含有イノシトールポリリン酸５－ホスファターゼ（ＳＨＩＰ１）が動員され、これが次に、他の活性化シグナルカスケードの伝達を抑制し、したがって、炎症性免疫応答を抑制する（Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｌａｎｉｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９０（５４８９）：８４－８９，２０００）。
ＦｃγＲ２Ｂは、Ｂ細胞上で発現される唯一のＦｃγＲである（Ａｍｉｇｏｒｅｎａ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９（８）：１３７９－８５，１９８９）。抗体のＦｃ領域とＦｃγＲ２Ｂとの相互作用は、Ｂ細胞受容体を介したシグナル伝達を抑制し、Ｂ細胞増殖及び抗体産生を抑制することが報告されている（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ ａｎｄ Ｒａｖｅｔｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９６：１７９－２０４，２００７）。活性化ＦｃγＲ及び抑制性ＦｃγＲの両方を発現する細胞型（例えば、マクロファージ、ＤＣ、好中球、マスト細胞、及び好塩基球）では、ＦｃγＲ結合のシグナル伝達の閾値及び結果は、活性化ＦｃγＲ及び抑制性ＦｃγＲの活性化のバランスによって決定される（Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ
ａｎｄ Ｒａｖｅｔｃｈ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３１０（５７５３）：１５１０－１２，２００５）。
ＦｃγＲ２Ｂの重要な制御的役割は、自己免疫疾患に対する感受性が増加したＦｃγＲ２Ｂノックアウトマウスの研究を通して実証されている（Ｎａｋａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９１（５）：８９９－９０６，２０００）。更に、ヒトにおけるＦｃγＲ２Ｂ遺伝子の多型は、自己免疫疾患、特に全身性エリテマトーデスのリスクに関連する（Ｆｌｏｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １１（１０），２００５）。したがって、ＦｃγＲ２Ｂは、免疫応答の制御において重要な役割を果たすと考えられており、自己免疫疾患及び炎症性疾患を制御するための有望な標的分子である。
ＩｇＧ１及びＩｇＧ４は、市販の抗体医薬品に最も一般的に使用されている抗体アイソタイプであり、ＦｃγＲ２Ｂだけでなく、活性化ＦｃγＲにも強く結合することが知られている（Ｂｒｕｈｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １１３（１６）：３７１６－２５，２００９）。活性化ＦｃγＲと比較して、ＦｃγＲ２Ｂ結合が増強されたＦｃ領域又はＦｃγＲ２Ｂ結合選択性が改善されたＦｃ領域を利用することによって、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４のものと比較してより大きな免疫抑制特性を有する抗体医薬を開発することが可能であり得る。
ＦｃγＲ２Ｂ結合活性が改善されたＦｃを有する抗体が報告されている（Ｃｈｕ ｅｔ
ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４５（１５）：３９２６－３３，２００８）。この文献では、抗体Ｆｃ領域にＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｇ２３６Ｄ／Ｓ２６７Ｅ、及びＳ２３９Ｄ／Ｓ２６７Ｅなどの改変を加えることによって、ＦｃγＲ２Ｂ結合活性を改善している。その中でも、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異が導入された抗体は、ＦｃγＲ２Ｂに最も強く結合し、ＦｃγＲ１Ａ及びＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に対して天然に存在するＩｇＧ１と同じレベルの結合を維持している。しかしながら、別の報告は、この改変が、ＦｃγＲ２Ｂ結合と同じレベルまで、ＦｃγＲ２Ａ １３１Ｒへの結合を数百倍増強することを示し、これは、ＦｃγＲ２Ｂ結合選択性が、ＦｃγＲ２Ａ
１３１Ｒと比較して改善されないことを意味する（米国特許公開第２００９／０１３６４８５号）。その炎症誘発効果に加えて、ＦｃγＲ２Ａへの抗体の結合は、治療用抗体であるベバシズマブ（Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ ７（１）：１７１－８１，２００９、Ｓｃａｐｐａｔｉｃｃｉ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ９９（１６）：１２３２－３９，２００７）及びＣＤ４０リガンドを標的とする抗体（Ｂｏｕｍｐａｓ ｅｔ ａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ ４８（３）：７１９－２７，２００３、Ｒｏｂｌｅｓ－Ｃａｒｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．：１９５０）１８５（３）：１５７７－８３，２０１０）で見られるように、血栓塞栓性事象をもたらす血小板の活性化につながり得る。更に、ＦｃγＲ２Ａ結合が増強された抗体は、マクロファージ媒介性の抗体依存性細胞貪食（ａｎｔｉｂｏｄｙ
ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ、ＡＤＣＰ）を増強することが報告されている（Ｒｉｃｈａｒｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ７（８）：２５１７－２７，２００８）。抗体の抗原がマクロファージによって貪食されると、抗体自体も同時に貪食される。その場合、それらの抗体に由来するペプチド断片も抗原として提示され、抗原性が高くなり、それによって、抗体に対する抗体（抗薬物抗体）が産生されるリスクが高くなる可能性がある。より具体的には、ＦｃγＲ２Ａ結合の増強は、抗体に対する抗体の産生のリスクを増大させ、これが、それらの医薬品としての価値を著しく低下させることになる。したがって、ＦｃγＲ２Ｂへの選択的結合及びＦｃγＲ２Ａへの低減された結合を有する抗体は、より有効な免疫抑制剤であり得、血栓塞栓性事象を誘導するリスクがより低く、免疫原性がより低い、より許容される治療剤でもあり得る。
したがって、ＢＴＬＡアゴニスト抗体が炎症性ＦｃＲシグナル伝達を誘発することなく免疫応答を抑制するのに有効であるように、本発明者らは、ＦｃγＲ２Ｂへの選択的なＦｃ結合のために抗体を適合させることを提案する。
ＦｃγＲ２Ｂへのより選択的な結合を有する分子は、ＢＴＬＡ発現細胞上のＢＴＬＡを通して、及びＦｃγＲ２Ｂ発現細胞上のＦｃγＲ２Ｂを通して、双方向の抑制性シグナル伝達を促進し、これが、抗体の免疫抑制効果を強化するであろう。これは、免疫過剰活性化の疾患の治療を意図した治療用抗体において望ましい。
しかしながら、ＦｃγＲ２Ｂに対する非常に高い親和性は、肝臓類洞上皮細胞における受容体の代謝回転に起因して、抗体の半減期に悪影響を及ぼし得る（Ｇａｎｅｓａｎ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８９（１０）：４９８１－８８，２０１２）。これは、７．７４ｎＭのＫＤでＦｃγＲ２Ｂに結合するＦｃγＲ２Ｂ増強ＩｇＧ１抗体ＸｍＡｂ７１９５によって実証されており（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２９（４）：１１０２－１５，２０１２、ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋｉｎｇｈｕｂ．ｅｌｓｅｖｉｅｒ．ｃｏｍ／ｒｅｔｒｉｅｖｅ／ｐｉｉ／Ｓ００９１６７４９１１０１８３４３（Ｍａｙ １３，２０２０）、またＸｅｎｃｏｒによれば、野生型ＩｇＧ１の平均半減期が約２１日であるのに対して（Ｍｏｒｅｌｌ，Ｔｅｒｒｙ，ａｎｄ Ｗａｌｄｍａｎｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ
４９（４）：６７３－８０，１９７０；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃｉ．ｏｒｇ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｖｉｅｗ／１０６２７９（Ｍａｙ １６，２０２０））、第１ａ相試験では平均インビボ半減期が３．９日であることが報告された（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＡＴＳ）２０１６ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ－Ａ６４７６：Ｐｏｓｔｅｒ Ｂｏａｒｄ Ｎｕｍｂｅｒ ４０７）。したがって、本発明の文脈において、ＦｃγＲ２Ｂに対する選択性及びアゴニズムを支持する十分な結合は、ＢＴＬＡアゴニスト抗体にとって望ましい可能性があるが、ＦｃγＲ２Ｂに対する過剰に高い親和性は、結果的に短縮された半減期がより頻繁な投薬を必要とする可能性が高いので、治療において望ましくない可能性がある。
１つ以上のＦｃγ受容体を介したシグナル伝達を改変するために、アミノ酸置換を含む様々な変異を抗体の重鎖定常領域に組み込むことができる。国際公開第２００６／０１９４４７号（Ｘｅｎｃｏｒ）は、Ｆｃ領域におけるアミノ酸置換を介して改変されたエフェクター機能を有する様々なＦｃバリアント分子（例えば、抗体）を開示している。
本発明者らは、本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体へのＰ２３８Ｄ置換変異の組み込みが、抗体のインビボ半減期を有意に減少させることなく、ＦｃγＲ２Ｂへの結合に対する選択性及びＦｃγＲ２Ｂを介したシグナル伝達を増強することを見出した。
Ｆｃ部分は、他の改変（アミノ酸置換など）を収容することができるが、特定の実施形態では、Ｐ２３８Ｄ改変は、野生型Ｉｇ Ｆｃ配列と比較して、本発明のＢＴＬＡ結合分子に導入される唯一の改変である。
一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１の２３８位（ＥＵインデックスを使用）に対応する位置にアスパラギン酸を含む。好適には、本発明の抗体は、配列番号２２７に開示されるｈＩｇＧ１定常領域、又はＰ２３８Ｄ置換が存在する限り最大５つのアミノ酸改変を有するｈＩｇＧ１定常領域を含む。
一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４の２３８位（ＥＵインデックスを使用）に対応する位置にアスパラギン酸を含む。好適には、本発明の抗体は、配列番号２３５に開示されるｈＩｇＧ４定常領域、又はＰ２３８Ｄ置換が存在する限り最大５つのアミノ酸改変を有するｈＩｇＧ４定常領域を含む。
本発明の抗体は、ＢＴＬＡ発現細胞上のＢＴＬＡ及びＦｃγＲ２Ｂ発現細胞上のＦｃγＲ２Ｂを介した双方向抑制性シグナル伝達を促進し、適切な治療用途に十分なインビボ半減期を有する。好適には、インビボ半減期は、ヒト体内で少なくとも５日（例えば、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４日、又はそれ以上）である。特定の実施形態では、ヒトにおけるインビボ半減期は、少なくとも１０日であり、これにより、好適な投薬レジメン（例えば、３週間毎）が可能になる。好適には、インビボ半減期は、約１０～３０日（例えば、約１２～２０日又は１４～２５日）である。
本発明の特定の実施形態では、本発明の抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む比較対照抗体の半減期の±３日以内のインビボ半減期を示す。比較対照抗体は、本明細書に記載されるように、ＦｃγＲ２Ｂへの結合を増加させるＦｃ改変を除いて同じ重鎖及び軽鎖を有する抗体である。
本発明の特定の実施形態では、本発明の抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む比較対照抗体の半減期の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％）を保持するインビボ半減期を示す。比較対照抗体は、本明細書に記載されるように、ＦｃγＲ２Ｂへの結合を増加させるＦｃ改変を除いて同じ重鎖及び軽鎖を有する抗体である。
ＦｃγＲ２Ｂへの結合を増加させるＦｃ改変がＰ２３８Ｄ置換である場合、特定の実施形態では、本発明の抗体は、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体の半減期の±３日以内のインビボ半減期を示す。
別の特定の実施形態では、ＦｃγＲ２Ｂへの結合を増加させるＦｃ改変がＰ２３８Ｄ置換である場合、本発明の抗体は、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む親抗体の半減期の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％）を保持するインビボ半減期を示す。
半減期が長いほど、良好な受容体占有率が達成される期間が長くなる。したがって、これは、投与間の間隔が長いほど、又はより長い投与間隔の代わりに、半減期がより長いと、より低い用量を投与することが可能になることを意味し、これは、より高いピーク用量で用量制限毒性が存在する場合に重要であり得る。
長い半減期を有する抗体を産生することはまた、商品コストの低減、患者に対する負担の低減、及び患者コンプライアンスの増加などの利益も有し得る。
好適には、本発明の分子は、１０ｍｇ／ｋｇの単回用量後、少なくとも１０日間（例えば、１４、２１、２８、３５、４２日間、又はそれ以上）にわたって、８０％超の受容体占有率が可能である。
好適には、本発明の分子は、３週間、理想的には、４週間又はそれ以上の投与間隔（例えば、６週間毎又は８週間毎）で投与することができる。
本発明の第１の態様によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加をもたらす置換を含むＦｃ領域を含む。好適には、抗体は、単離された抗体である。
一部の実施形態では、［ＦｃγＲ２Ｂに対する親ポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値が１より大きい（例えば、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、２、２．５、３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、又は１００）ように、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合が増加している。
一部の実施形態では、抗体は、ＦｃγＲ２ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性を有する。
一部の実施形態では、抗体は、親ポリペプチドと比較して、増強されたＦｃγＲ２Ｂ結合活性を有し、ＦｃγＲ２Ａ（Ｒ型）及び／又はＦｃγＲ２Ａ（Ｈ型）に対する維持又は低減された結合活性を有する。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ２Ａ（Ｒ型）に対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値は、２以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、又はそれ以上）である。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ２Ａ（Ｈ型）に対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値は、２以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、又は１５０以上）である。
一部の実施形態では、抗体は、親ポリペプチドと比較して、増強されたＦｃγＲ２Ｂ結合活性を有し、ＦｃγＲ１Ａに対する維持又は低減された結合活性を有する。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ１Ａに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］の値は、０．０５以上（例えば、少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、１、２、３、４、又はそれ以上）である。
一部の実施形態では、親ポリペプチドと比較して、減少したＦｃγ１結合活性を有する。一部の実施形態では、［ＦｃγＲ１Ａに対するバリアントポリペプチドのＫＤ値］／［ＦｃγＲ１Ａに対する親ポリペプチドのＫＤ値］の値は、少なくとも１０、２０、５０、１００、２００である。
一部の実施形態では、抗体は、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
一部の実施形態では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、及び２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む。好適には、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体は、アゴニスト抗体／抗原結合断片である。
好適には、抗体は、以下からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４である：ｈＩｇＧ１ Ｇ２３６Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ、ｈＩｇＧ１
Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ１ Ａ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ４ Ｓ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ４ Ｆ２３４Ａ、及びｈＩｇＧ４ Ｌ２３５Ａ。特定の実施形態では、ヒトＢＴＬＡに結合する抗体は、表１又は表２に開示され、本明細書に記載されるように、６．２、２．８．６、３Ｅ８、１１．５．１、１２Ｆ１１、１４Ｄ４、１５Ｂ６、１５Ｃ６、１６Ｅ１、１６Ｆ１０、１６Ｈ２、１Ｈ６、２１Ｃ７、２４Ｈ７、２６Ｂ１、２６Ｆ３、２７Ｇ９、３Ａ９、４Ｂ１、４Ｄ３、４Ｄ５、４Ｅ８、４Ｈ４、６Ｇ８、７Ａ１、８Ｂ４、８Ｃ４、及び８３１からなる群から選択される抗体由来の少なくとも１つのＣＤＲを有する重鎖及び／又は軽鎖を有する。一実施形態では、抗体は、ＢＴＬＡへの結合について、その天然リガンドＨＶＥＭと競合する。別の実施形態では、抗体は、ＨＶＥＭの結合を妨げない。
特定の実施形態では、ヒトＢＴＬＡに結合する単離された抗体は、６．２、２．８．６、３Ｅ８、又はヒトＢＴＬＡへの結合について６．２、２．８．６、若しくは３Ｅ８のうちのいずれか１つと競合する抗体からなる群から選択され、抗体が、ＢＴＬＡに特異的に結合し、受容体を介したシグナル伝達を誘導する。当該抗体はまた、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。
表１に開示され、本明細書に記載される６．２、２．８．６、３Ｅ８、１１．５．１、１２Ｆ１１、１４Ｄ４、１５Ｂ６、１５Ｃ６、１６Ｅ１、１６Ｆ１０、１６Ｈ２、１Ｈ６、２１Ｃ７、２４Ｈ７、２６Ｂ１、２６Ｆ３、２７Ｇ９、３Ａ９、４Ｂ１、４Ｄ３、４Ｄ５、４Ｅ８、４Ｈ４、６Ｇ８、７Ａ１、８Ｂ４、８Ｃ４、及び８３１からなる群から選択される抗体とは、表１又は表２に開示される抗体のうちのいずれか（マウス抗体、ヒト化抗体、又はヒト化抗体／操作された抗体にかかわらない）由来のＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３、又はＶＬ ＣＤＲ１、２、及び３、又はＶＨ ＣＤＲ１、２、及び３、並びにＶＬ
ＣＤＲ１、２、及び３などの１つ以上を含む任意の抗体又はその抗原結合断片を意味する。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、０～３つのアミノ酸改変（例えば、０、１、２、又は３つのアミノ酸改変）を有する、配列番号１、２、３、１１、又は１７のうちのいずれかに示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲを含む。ある特定の実施形態では、アミノ酸改変は、非改変アミノ酸配列と比較して、改変アミノ酸配列の抗体結合親和性又はＴ細胞抑制効果を排除しない、アミノ酸置換、付加、欠失、又は化学改変を含むが、これらに限定されない。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号２、１１、又は１７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号４、５、６、又は１２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲを含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号５又は１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号２、１１、又は１７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号５又は１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有し、当該重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号２０、２１、又は２２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲを含む。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号２３、２４、又は２５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲを含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第２０の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号３０、３１、４０、４８、又は３２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲを含む。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号３１、４０、又は４８に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号３３、３４、又は３５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲを含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号３１、４０、又は４８に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を有する。
これらの態様の各々において、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＦｃ領域を有する。一部の実施形態では、抗体は、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性を有する。一部の実施形態では、抗体は、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ１ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性を有する。
特定の実施形態では、抗体は、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、抗体は、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシン、及び３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを含むＦｃ領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、Ｆｃ領域と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域と、を含み、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、（１）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１７、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、（２）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０、２１、及び２２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、又は（３）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、Ｆｃ領域部分が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む。
典型的な抗体は、２つの重鎖と、２つの軽鎖と、を含み、対になった重鎖が、Ｆｃ領域を含み、したがって、本明細書で使用される場合、「Ｆｃ領域を含む重鎖」は、Ｈ鎖ポリペプチド上の領域を指し、別のＨ鎖Ｆｃ領域とともに機能的Ｆｃ領域を形成する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、以下に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲを含む：（１）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号４５、４６、若しくは４７、（２）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号５３、５４、若しくは５５、（３）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号６１、６２、若しくは６３、（４）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号６１、６９、若しくは７０、（５）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号７６、７７、若しくは７８、（６）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号４５、４６、若しくは８４、（７）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号８８、８９、若しくは９０、（８）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号９５、９６、若しくは９７、（９）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１０３、１０４、若しくは１０５、（１０）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号７６、１１１、若しくは１１２、（１１）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１１８、１１９、若しくは１２０、（１２）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１２６、１２７、若しくは１２８、（１３）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１３３、１３４、若しくは１３５、（１４）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１０３、１３４、若しくは１３９、（１５）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１４３、１４４、若しくは１４５、（１６）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１５１、１５２、若しくは１５３、（１７）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１５９、１６０、若しくは１６１、（１８）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１６７、１６８、若しくは１６９、（１９）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号４５、４６、若しくは１７７、（２０）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１８１、１８２、若しくは１８３、（２１）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号４５、１９１、若しくは１９２、（２２）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１９６、１９７、若しくは１９８、（２３）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号２０４、２０５、若しくは２０６、（２４）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号２１２、２１３、若しくは２１４、（２５）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１、２、若しくは３、（２６）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号２０、１６３、若しくは２２、（２７）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号３０、４８、若しくは３２、（２８）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１、１１、若しくは３、（２９）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号１、１７、若しくは３、（３０）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号２０、２１、若しくは２２、（３３）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号３０、３１、若しくは３２、又は（３４）０～３つのアミノ酸改変を有する、配列番号３０、４０、若しくは３２。当該抗体はまた、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、（１）それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７、（２）それぞれ、配列番号５３、５４、及び５５、（３）それぞれ、配列番号６１、６２、及び６３、（４）それぞれ、配列番号６１、６９、及び７０、（５）それぞれ、配列番号７６、７７、及び７８、（６）それぞれ、配列番号４５、４６、及び８４、（７）それぞれ、配列番号８８、８９、及び９０、（８）それぞれ、配列番号９５、９６、及び９７、（９）それぞれ、配列番号１０３、１０４、及び１０５、（１０）それぞれ、配列番号７６、１１１、及び１１２、（１１）それぞれ、配列番号１１８、１１９、及び１２０、（１２）それぞれ、配列番号１２６、１２７、及び１２８、（１３）それぞれ、配列番号１３３、１３４、及び１３５、（１４）それぞれ、配列番号１０３、１３４、及び１３９、（１５）それぞれ、配列番号１４３、１４４、及び１４５、（１６）それぞれ、配列番号１５１、１５２、及び１５３、（１７）それぞれ、配列番号１５９、１６０、及び１６１、（１８）それぞれ、配列番号１６７、１６８、及び１６９、（１９）それぞれ、配列番号４５、４６、及び１７７、（２０）それぞれ、配列番号１８１、１８２、及び１８３、（２１）それぞれ、配列番号４５、１９１、及び１９２、（２２）それぞれ、配列番号１９６、１９７、及び１９８、（２３）それぞれ、配列番号２０４、２０５、及び２０６、（２４）それぞれ、配列番号２１２、２１３、及び２１４、（２５）それぞれ、配列番号１、２、及び３、（２６）それぞれ、配列番号２０、１６３、及び２２、（２７）それぞれ、配列番号３０、４８、及び３２、（２８）それぞれ、配列番号１、１１、及び３、（２９）それぞれ、配列番号１、１７、及び３、（３０）それぞれ、配列番号２０、２１、及び２２、（３３）それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２、又は（３４）それぞれ、配列番号３０、４０、及び３２、に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変が、任意のＣＤＲ／配列番号に存在し得る。当該抗体はまた、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。
本発明の第１の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、（１）配列番号３３、３４、若しくは３５、（２）配列番号５６、５７、若しくは５８、（３）配列番号６４、６５、若しくは６６、（４）配列番号７１、７２、若しくは７３、（５）配列番号７９、８０、若しくは８１、（６）配列番号３３、３４、若しくは８５、（７）配列番号９１、６５、若しくは９２、（８）配列番号９８、９９、若しくは１００、（９）配列番号１０６、１０７、若しくは１０８、（１０）配列番号１１３、１１４、若しくは１１５、（１１）配列番号１２１、１２２、若しくは１２３、（１２）配列番号７９、１２９、若しくは１３０、（１３）配列番号１０６、１０７、若しくは１３６、（１４）配列番号１４６、１４７、若しくは１４８、（１５）配列番号１５４、１５５、若しくは１５６、（１６）配列番号４、１２、若しくは１６４、（１７）配列番号１７０、１７１、若しくは１７２、（１８）配列番号１５４、１５５、若しくは１７８、（１９）配列番号１８４、１８５、若しくは１８６、（２０）配列番号７９、８０、若しくは１８９、（２１）配列番号１５４、１５５、若しくは１９３、（２２）配列番号１９９、２００、若しくは２０１、（２３）配列番号２０７、２０８、若しくは２０９、（２４）配列番号２１５、３４、若しくは２１６、（２５）配列番号４、５、若しくは６、（２６）配列番号２３、１７６、若しくは２５、（２７）配列番号３３、３４、若しくは３５、（２８）配列番号４、１２、若しくは６、（２９）配列番号２３、２４、若しくは２５、又は（３０）配列番号３３、３４、若しくは３５、に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲを含み、０～３つのアミノ酸改変が、任意のＣＤＲ／配列番号に存在し得、当該抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域も含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、（１）それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５、（２）それぞれ、配列番号５６、５７、及び５８、（３）それぞれ、配列番号６４、６５、及び６６、（４）それぞれ、配列番号７１、７２、及び７３、（５）それぞれ、配列番号７９、８０、及び８１、（６）それぞれ、配列番号３３、３４、及び８５、（７）それぞれ、配列番号９１、６５、及び９２、（８）それぞれ、配列番号９８、９９、及び１００、（９）それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１０８、（１０）それぞれ、配列番号１１３、１１４、及び１１５、（１１）それぞれ、配列番号１２１、１２２、及び１２３、（１２）それぞれ、配列番号７９、１２９、及び１３０、（１３）それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１３６、（１４）それぞれ、配列番号１４６、１４７、及び１４８、（１５）それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１５６、（１６）それぞれ、配列番号４、１２、及び１６４、（１７）それぞれ、配列番号１７０、１７１、及び１７２、（１８）それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１７８、（１９）それぞれ、配列番号１８４、１８５、及び１８６、（２０）それぞれ、配列番号７９、８０、及び１８９、（２１）それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１９３、（２２）それぞれ、配列番号１９９、２００、及び２０１、（２３）それぞれ、配列番号２０７、２０８、及び２０９、（２４）それぞれ、配列番号２１５、３４、及び２１６、（２５）それぞれ、配列番号４、５、及び６、（２６）それぞれ、配列番号２３、１７６、及び２５、（２７）それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５、（２８）それぞれ、配列番号４、５、及び６、（２９）それぞれ、配列番号４、１２、及び６、（３０）それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５、又は（３１）それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５、に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変が、任意のＣＤＲ／配列番号に存在し得、当該抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域も含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、（１）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、（２）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号５３、５４、及び５５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号５６、５７、及び５８に示されるアミノ酸配列を有し、それぞれ、（３）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号６１、６２、及び６３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号６４、６５、及び６６に示されるアミノ酸配列を有し、（４）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号６１、６９、及び７０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７１、７２、及び７３に示されるアミノ酸配列を有し、（５）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号７６、７７、及び７８に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７９、８０、及び８１に示されるアミノ酸配列を有し、（６）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、４６、及び８４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び８５に示されるアミノ酸配列を有し、（７）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号８８、８９、及び９０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号９１、６５、及び９２に示されるアミノ酸配列を有し、（８）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号９５、９６、及び９７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号９８、９９、及び１００に示されるアミノ酸配列を有し、（９）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１０３、１０４、及び１０５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１０８に示されるアミノ酸配列を有し、（１０）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号７６、１１１、及び１１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１１３、１１４、及び１１５に示されるアミノ酸配列を有し、（１１）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１１８、１１９、及び１２０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１２１、１２２、及び１２３に示されるアミノ酸配列を有し、（１２）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１２６、１２７、及び１２８に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７９、１２９、及び１３０に示されるアミノ酸配列を有し、（１３）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１３３、１３４、及び１３５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１３６に示されるアミノ酸配列を有し、（１４）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１０３、１３４、及び１３９に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１３６に示されるアミノ酸配列を有し、（１５）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１４３、１４４、及び１４５に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１４６、１４７、及び１４８に示されるアミノ酸配列を有し、（１６）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１５１、１５２、及び１５３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１５６に示されるアミノ酸配列を有し、（１７）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１５９、１６０、及び１６１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び１６４に示されるアミノ酸配列を有し、（１８）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１６７、１６８、及び１６９に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１７０、１７１、及び１７２に示されるアミノ酸配列を有し、（１９）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１７０、１７１、及び１７２に示されるアミノ酸配列を有し、それぞれ、（２０）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、配列番号４５、４６、及び１７７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１７８に示されるアミノ酸配列を有し、（２１）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１８１、１８２、及び１８３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、配列番号１８４、１８５、及び１８６に示されるアミノ酸配列を有し、（２２）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号７６、７７、及び７８に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７９、８０、及び１８９に示されるアミノ酸配列を有し、（２３）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、１９１、及び１９２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１９３に示されるアミノ酸配列を有し、（２４）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１９６、１９７、及び１９８に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１９９、２００、及び２０１に示されるアミノ酸配列を有し、（２５）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０４、２０５、及び２０６に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２０７、２０８、及び２０９に示されるアミノ酸配列を有し、（２６）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２１２、２１３、及び２１４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２１５、３４、及び２１６に示されるアミノ酸配列を有し、（２７）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、２、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、５、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、（２８）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０、１６３、及び２２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２３、１７６、及び２５に示されるアミノ酸配列を有し、（２９）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、４８、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、（３０）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１１、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、（３１）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１１、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、５、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、（３２）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１７、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、（３３）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０、２１、及び２２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５に示されるアミノ酸配列を有し、（３４）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、（３５）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、４０、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変が、任意のＣＤＲ／配列番号に存在し得、当該抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域も含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、（１）配列番号４５、４６、若しくは４７に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号３３、３４、若しくは３５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２）配列番号５３、５４、若しくは５５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、並びに配列番号５６、５７、及び５８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（３）配列番号６１、６２、若しくは６３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号６４、６５、若しくは６６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（４）配列番号６１、６９、若しくは７０に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、並びに配列番号７１、７２、及び７３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（５）配列番号７６、７７、若しくは７８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ
ＣＤＲ、及び配列番号７９、８０、若しくは８１に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（６）配列番号４５、４６、若しくは８４に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号３３、３４、若しくは８５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（７）配列番号８８、８９、若しくは９０に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号９１、６５、若しくは９２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（８）配列番号９５、９６、若しくは９７に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号９８、９９、若しくは１００に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（９）配列番号１０３、１０４、若しくは１０５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１０６、１０７、若しくは１０８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１０）配列番号７６、１１１、若しくは１１２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１１３、１１４、若しくは１１５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１１）配列番号１１８、１１９、若しくは１２０に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１２１、１２２、若しくは１２３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１２）配列番号１２６、１２７、若しくは１２８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号７９、１２９、若しくは１３０に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１３）配列番号１３３、１３４、若しくは１３５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１０６、１０７、若しくは１３６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１４）配列番号１０３、１３４、若しくは１３９に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１０６、１０７、若しくは１３６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１５）配列番号１４３、１４４、若しくは１４５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１４６、１４７、若しくは１４８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１６）配列番号１５１、１５２、若しくは１５３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１５４、１５５、若しくは１５６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１７）配列番号１５９、１６０、若しくは１６１に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号４、１２、若しくは１６４に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１８）配列番号１６７、１６８、若しくは１６９に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１７０、１７１、若しくは１７２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（１９）配列番号４５、４６、若しくは４７に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１７０、１７１、若しくは１７２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２０）配列番号４５、４６、若しくは１７７に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１５４、１５５、若しくは１７８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２１）配列番号１８１、１８２、若しくは１８３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１８４、１８５、若しくは１８６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２２）配列番号７６、７７、若しくは７８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号７９、８０、若しくは１８９に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２３）配列番号４５、１９１、若しくは１９２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１５４、１５５、若しくは１９３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２４）配列番号１９６、１９７、若しくは１９８に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号１９９、２００、若しくは２０１に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２５）配列番号２０４、２０５、若しくは２０６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ
ＣＤＲ、及び配列番号２０７、２０８、若しくは２０９に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２６）配列番号２１２、２１３、若しくは２１４に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号２１５、３４、若しくは２１６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２７）配列番号１、２、若しくは３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号４、５、若しくは６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２８）配列番号２０、１６３、若しくは２２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号２３、１７６、若しくは２５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（２９）配列番号３０、４８、若しくは３２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号３３、３４、若しくは３５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（３０）配列番号１、１１、若しくは３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号４、１２、若しくは６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（３１）配列番号１、１１、若しくは３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号４、５、若しくは６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（３２）配列番号１、１７、若しくは３に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号４、１２、若しくは６に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（３３）配列番号２０、２１、若しくは２２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号２３、２４、若しくは２５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、（３４）配列番号３０、３１、若しくは３２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号３３、３４、若しくは３５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、又は（３５）配列番号３０、４０、若しくは３２に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＨ ＣＤＲ、及び配列番号３３、３４、若しくは３５に示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＶＬ ＣＤＲ、を含み、０～３つのアミノ酸改変が、任意のＣＤＲ／配列番号に存在し得、当該抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域も含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号７、１３、若しくは１８に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
他の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号７、１３、又は１８に示されるアミノ酸配列を含み、その中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸改変）有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号８若しくは１４に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
他の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号８又は１４に示されるアミノ酸配列を含み、その中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸改変）を有する。
これらの実施形態の各々において、抗体は、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＦｃ領域を有する。一部の実施形態では、抗体は、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性を有する。
特定の実施形態では、抗体は、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号７、１３、又は１８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号８又は１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１８又は１３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１３に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号９、１５、若しくは１９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号９、１５、若しくは１９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号１０、１６、若しくは２９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号１０、１６、若しくは２９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１５に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１０に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
他の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含み、その中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸改変）を有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
他の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含み、その中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸改変）を有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３６若しくは４１に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含む。
他の実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号３６又は４１に示されるアミノ酸配列を含み、その中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸改変）有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号３７若しくは４３に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む。
他の実施形態では、軽鎖可変領域は、配列番号３７又は４３に示されるアミノ酸配列を含み、その中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個のアミノ酸改変）を有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３６又は４１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号３７又は４３に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号４１に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３６に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号４３に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３８若しくは４２に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３８若しくは４２に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号３９若しくは４４に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖が、配列番号３９若しくは４４に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３８に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号３９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３８に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号３９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号４２に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号３９に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号４２に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号３９に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖が、配列番号３８に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号４４に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％配列同一性を有する配列を含む。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体が提供され、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号３８に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号４４に示されるアミノ酸配列又はその中に最大１０個の改変（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、若しくは１０個のアミノ酸改変）を有する配列を含む。
他の実施形態では、重鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号１８に開示される配列と少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。
他の実施形態では、重鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号２６に開示される配列と少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。
他の実施形態では、重鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号３６に開示される配列と少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。
他の実施形態では、軽鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号１４に開示される配列と少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。
他の実施形態では、軽鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号２７に開示される配列と少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。
他の実施形態では、軽鎖可変領域ポリペプチドは、配列番号４３に開示される配列と少なくとも９２％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。
本発明の第１の態様の別の変形形態によれば、単離された抗体が提供され、表１又は表２に示される任意の抗体クローンの少なくとも１つのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を有する一次ＶＨドメイン及び／又は一次ＶＬドメインを有する。ある特定の実施形態では、表１又は表２に記載される抗体クローンから選択される単離された抗体が本明細書に提供される。
本発明の第１の態様の各々において、置換を欠く親分子と比較してＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加、及び／又は置換を欠く親分子と比較してＦｃγＲ２ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性の増加をもたらす少なくとも１つのアミノ酸置換を含むＦｃ領域を有する。一部の実施形態では、抗体は、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ１ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性が増加している。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様（第１の態様の任意の変形形態を含む）による抗体の各々は、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、及び２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２３６位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２３５位（ＥＵインデックス）にアラニンを有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２３４位（ＥＵインデックス）にアラニンを有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２６５位（ＥＵインデックス）にアラニンを有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２６７位（ＥＵインデックス）にグルタミン酸を有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシンを有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２９７位（ＥＵインデックス）にアラニンを有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、３２２位（ＥＵインデックス）にアラニンを有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを有するＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体の各々は、２３７位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸、２７１位（ＥＵインデックス）にグリシン、及び３３０位（ＥＵインデックス）にアルギニンを含むＦｃを含む。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体は、以下からなる群から選択される置換を有するＦｃアイソタイプを含む：ｈＩｇＧ１ Ｇ２３６Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ１ Ａ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａ、ｈＩｇＧ１
Ｎ２９７Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ４ Ｓ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ４ Ｆ２３４Ａ、及びｈＩｇＧ４ Ｌ２３５Ａ。
特定の実施形態では、重鎖又は軽鎖は、定常領域も含む。分子が完全長ＩｇＧ型抗体分子である場合、重鎖は、３つの定常ドメインを含み得る。ある特定の実施形態では、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＢＴＬＡへの結合について、最大約１０×１０－９ＭのＫＤを示す。ある特定の実施形態では、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＢＴＬＡへの結合について、最大約４×１０－９ＭのＫＤを示す。ある特定の実施形態では、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＢＴＬＡへの結合について、最大約１×１０－９ＭのＫＤを示す。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）は、ヒトＢＴＬＡに、３７℃で、約１０ｎＭ（１×１０－８Ｍ）以下のＫＤ、好適には約１ｎＭ以下のＫｄで結合し、より好適な実施形態では、抗体は、３７℃で、最大約５００ｐＭ（５×１０－１０Ｍ）、２００ｐＭ、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、又は更には２ｐＭ以下のＫＤ値を有する。この文脈で使用される「約」という用語は、＋／－１０％を意味する。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）は、３７℃で、少なくとも１．０×１０５（１／Ｍｓ）の結合速度でヒトＢＴＬＡに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）は、３７℃で、少なくとも２．０×１０５（１／Ｍｓ）、３．０×１０５（１／Ｍｓ）、４．０×１０５（１／Ｍｓ）、５．０×１０５（１／Ｍｓ）、６．０×１０５（１／Ｍｓ）、又は７．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢＴＬＡに結合する。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）は、３７℃で、１．０×１０－３（１／ｓ）以下又はそれ未満のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）は、３７℃で、３．０×１０－４（１／ｓ）以下又はそれ未満のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。ある特定の実施形態では、本発明の単離された抗体（例えば、ヒト化抗体）は、３７℃で、２．０×１０－４（１／ｓ）若しくは１．０×１０－４（１／ｓ）以下又は未満のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（surface plasmon resonance、ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤで
ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、当該抗体が、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。例えば、実施例４に記載のものなどの方法を使用して、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用して、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３．０×１０－４（１／ｓ）未満のオフ速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３．０×１０－４（１／ｓ）～１．０×１０－３（１／ｓ）のオフ速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって、又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する（ここでの番号付け、例えば、Ｄ５２は、配列番号２２５における位置を指す）。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の抗体の特性を特徴付けるための方法は、当該技術分野で周知である。３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して結合特異性を決定するための好適な方法は、実施例２に記載されている。試験される抗体／その断片が、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制するかどうかを決定するための好適な方法は、実施例４に記載されている。これもまた、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用する。試験される抗体／その断片がインビトロでＴ細胞の増殖を抑制するかどうかを決定するための好適な方法は、実施例９に記載のものなどの混合リンパ球反応アッセイである。ＢＴＬＡへの抗体／その断片の結合部位を決定するための好適な方法は、実施例５に記載の方法などによって、変異受容体のＸ線結晶解析又はフローサイトメトリーを利用することができる。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書に提供され、当該抗体は、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、当該抗体は、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３．０×１０－４（１／ｓ）未満のオフ速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって、又は実施例５のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３．０×１０－４（１／ｓ）～１．０×１０－３（１／ｓ）のオフ速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体は、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、当該抗体は、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって各々測定される場合、１．０×１０－３（１／ｓ）未満のオフ速度及び少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体は、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、当該抗体は、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７から選択されるＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体は、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制し、当該抗体は、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１．０×１０６（１／Ｍｓ）未満のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１．０×１０－３（１／ｓ）未満のオフ速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１×１０－３（１／ｓ）未満のオンオフ速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体は、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制し、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体が、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合し、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制し、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体が、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５０ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合し、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１４００ｎＭ～３５００ｎＭのＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体が、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも２．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０．０×１０－１（１／ｓ）未満のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１．７×１０５（１／Ｍｓ）～２．５×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体が、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３．０×１０－１（１／ｓ）未満のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３．０×１０－１（１／ｓ）～５．０×１０－１（１／ｓ）のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも１５０ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１５０ｎＭ～１５００ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、２８６抗体の結合を遮断するエピトープに結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって、又は実施例５のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
本発明の第１の態様の特定の実施形態では、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、４０ｎＭ～１２００ｎＭのＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたアゴニスト抗体が本明細書で提供され、当該抗体が、実施例４に記載のものなどの方法を使用する表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、例えば、実施例９に記載のものなどの方法を使用する混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも１．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１．０×１０５（１／Ｍｓ）～１０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６．０×１０－１（１／ｓ）未満のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、当該抗体は、実施例２に記載のものなどの方法を使用する３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、６．０×１０－１（１／ｓ）～１０．０×１０－２（１／ｓ）のオフ速度でヒトＢＴＬＡに結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｘ線結晶解析によって又は実施例５に記載のものなどの方法を使用する変異受容体のフローサイトメトリーによって決定される場合、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８（配列番号２２５による位置）に結合する。一部の実施形態では、抗体は、Ｎ６５及びＡ６４（配列番号２２５による位置）から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
ある特定の実施形態では、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する本発明の単離された抗体は、ＢＴＬＡ活性及び／又は受容体を介したシグナル伝達を増加させる。
上述のように、抗体という用語は、本発明の第１の態様に関連して使用される場合、全抗体並びにその抗原結合断片を包含する。
特定のＦｃ受容体結合の実施形態
本発明のある特定の実施形態では、特に本発明の第１の態様による場合、重鎖は、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加、したがって、ＦｃγＲ２Ｂのシグナル伝達の増強を付与する置換を含むＦｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、かかる分子は、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ａ又はＦｃγＲ１Ａなどの１つ以上の活性化Ｆｃガンマ受容体への減少した結合を有する。ある特定の実施形態では、かかる分子は、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ２Ａへの増加した結合比率を有する。ある特定の実施形態では、かかる分子は、親ポリペプチドと比較して、ＦｃγＲ２Ｂ／ＦｃγＲ１Ａへの増加した結合比率を有する。
上述のように、本発明の特定の実施形態では、特に本発明の第１の態様による場合、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、及び２９７位のアラニン（Ａ）（全ての番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む。好適には、Ｆｃ領域、したがって、抗体自体が、Ｆｃγ受容体に結合することができる。
特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、上記の１つ以上のＦｃ置換を欠くＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より高い親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合する。特定の実施形態では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、約５μＭ～０．１μＭの解離定数（ＫＤ）でＦｃγＲ２Ｂに結合する。好適には、抗体は、Ｆｃ領域を介してＦｃγＲ２Ｂに結合する。
特定の実施形態では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、最大５μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ｂに結合する。
特定の実施形態では、抗体は、ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に、親分子と比較してより低い又は等しい親和性で結合する。親分子は、抗体分子にＦｃγＲ２Ｂへの結合を増加させ、したがって、ＦｃγＲ２Ｂのシグナル伝達を増強させるＦｃ置換を欠く同等の抗体である。
特定の実施形態では、抗体がＰ２３８Ｄ置換を含む場合、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より低い又は等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。
特定の実施形態では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも２０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。
特定の実施形態では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、約２５μＭ～３５μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する。
特定の実施形態では、抗体は、ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に、親分子と比較してより低い又は等しい親和性で結合する。
特定の実施形態では、抗体がＰ２３８Ｄ置換を含む場合、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より低い又は等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。
特定の実施形態では、抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する。
特定の実施形態では、抗体は、３以上（例えば、少なくとも５）の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒ）に対する抗体のＫＤ値／ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］を有する。好適には、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
特定の実施形態では、抗体は、１０以上（例えば、少なくとも１５）の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈ）に対する抗体のＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］を有する。好適には、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
特定の実施形態では、抗体は、３以上（例えば、少なくとも５）の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒ）に対する抗体のＫＤ値／ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］、及び／又は１０以上（例えば、少なくとも１５）の［ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈ）に対する抗体のＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対する抗体のＫＤ値］を有する。好適には、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。
好適には、本発明の抗体は、実施例２４に記載されているようなＴ細胞活性化アッセイ、実施例２５に記載されているような混合リンパ球反応、又は実施例２６に記載されているようなＢ細胞活性化アッセイから選択されるＢＴＬＡアゴニストアッセイによって測定される場合、比較対照抗体／親抗体と比較して、ヒト免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡのアゴニズムの増加を示す。
したがって、抗体がＰ２３８Ｄ置換を含む場合、抗体は、実施例２４に記載されているようなＴ細胞活性化アッセイ、実施例２５に記載されているような混合リンパ球反応、又は実施例２６に記載されているようなＢ細胞活性化アッセイから選択されるＢＴＬＡアゴニストアッセイによって測定される場合、２３８位にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、ヒト免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡのアゴニズムの増加を示す。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、多重特異性抗体（二重特異性抗体など）からなる群から選択される。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、及びダイアボディからなる群から選択される抗原結合断片抗体である。
特定の実施形態では、抗原結合断片を形成する重鎖及び軽鎖分子は、可撓性リンカーによって連結される。多くの一般的に使用される可撓性リンカーがあり、当業者がリンカーを選択することができる。
ｓｃＦｖ ＶＨとＶＬドメインとを連結するペプチドリンカーは、ＶＨ－ＶＬ対合及び抗原結合部位の忠実度を大幅に損なうことなく、１つの可変領域ドメインのカルボキシル末端を別の可変ドメインのアミノ末端に連結する。ペプチドリンカーは、１０～２５アミノ酸長で変動し得、典型的には、常にではないが、グリシン（Ｇ）及びセリン（Ｓ）などの親水性アミノ酸から構成される。リンカーは、天然のマルチドメインタンパク質で見出されるもの（例えば、Ａｒｇｏｓ Ｐ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２１１：９４３－９５８，１９９０及び．Ｈｅｒｉｎｇａ Ｇ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１５：８７１－８７９，２００２を参照）、又はそれから適合させたものであり得る。
一般的に使用される可撓性リンカーは、主にＧｌｙ及びＳｅｒ残基のストレッチからなる配列を有する（「ＧＳ」リンカー）。最も広く使用されている可撓性リンカーの例は、（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ）ｎ（配列番号２３２）の配列を有する。コピー数「ｎ」を調節することによって、このＧＳリンカーの長さは、機能ドメインの適切な分離を達成するために、又は必要なドメイン間相互作用を維持するために変更され得る。一般に、ｎ＝３ペプチドのＧＳリンカーは、ｓｃＦｖペプチドリンカーとして使用される（Ｌｅｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．２４：７６５－７７１，２００４、Ｈｏｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：６４４４－６４４８，１９９３）。この１５アミノ酸リンカー配列［（ＧＧＧＧＳ）３リンカーと称される］は、Ａｍｅｒｓｈａｍから市販されている組換えファージ抗体システム（ＲＰＡＳキット）で使用される。いくつかの他のリンカーもまた、ｓｃＦｖ分子を作製するために使用されている（例えば、ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号２３３）及びＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号２３４）；Ｂｉｒｄ
ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４３２－４２６，１９８８）。
エピトープ結合
本発明者らは、本明細書に開示される強力なアゴニスト及び抗体が結合するＢＴＬＡ上のエピトープをマッピングした。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、Ｅ９２、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、Ｓ４７、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、Ｌ１２３、Ｈ６８、Ｎ６５、Ａ６４から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、Ｅ９２から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、Ｅ９２から選択されるヒトＢＴＬＡのうちの少なくとも２つの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２から選択されるヒトＢＴＬＡのうちの少なくとも３つの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２から選択されるヒトＢＴＬＡのうちの少なくとも５つの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２から選択されるヒトＢＴＬＡの残基の全てに結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７から選択されるヒトＢＴＬＡのうちの少なくとも２つの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７から選択されるヒトＢＴＬＡの残基の全てに結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３から選択されるヒトＢＴＬＡのうちの少なくとも２つの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＢＴＬＡの残基Ｈ６８に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｎ６５及びＡ６４から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヒトＢＴＬＡのＮ６５及びＡ６４の両方の残基に結合する。
残基の番号付け、例えば、Ｋ４１は、アミノ酸（Ｋ４１；リジン）を指し、番号付けは、配列番号２２５に開示されるヒトＢＴＬＡポリペプチドにおける位置を指す。
特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４抗体である。特定の実施形態では、抗体は、マウス抗体又はヒト抗体である。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ヒト化抗体である。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、完全ヒト抗体である。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＢＴＬＡ受容体を介したシグナル伝達を誘導するアゴニストとして作用する。
本発明の抗体（抗原結合断片を含む）は、特に強力なアゴニストである。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、１ｎＭ以下のＥＣ５０を有する。
本発明のアゴニスト抗体（例えば、全長／全抗体又はその抗原結合断片）は、特に高い有効性を有する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、Ｔ細胞増殖を、少なくとも２０％、好適には少なくとも３０％、より好適には少なくとも４０％抑制する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、インビトロ混合リンパ球反応における上清のＥＬＩＳＡによって測定される場合、Ｔ細胞のＩＦＮ－γ産生を、少なくとも５０％、好適には少なくとも７５％、より好適には少なくとも９５％抑制する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、インビトロ混合リンパ球反応における上清のＥＬＩＳＡによって測定される場合、Ｔ細胞のＩＬ－２産生を、少なくとも５０％、好適には少なくとも７５％、より好適には少なくとも９５％抑制する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、例えば、インビトロ混合リンパ球反応における上清のＥＬＩＳＡによって測定される場合、Ｔ細胞のＩＬ－１７産生を、少なくとも５０％、好適には少なくとも７５％、より好適には少なくとも９５％抑制する。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、実施例１２に記載のものなどの方法を使用して、マウスＧＶＨＤモデルにおける死亡率を、少なくとも５０％、好適には少なくとも７５％、より好適には少なくとも９５％減少させる。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、実施例１１に記載のものなどの方法を使用して、マウスＴ細胞大腸炎モデルにおける重量減少を、少なくとも５０％、好適には少なくとも７５％、より好適には少なくとも９５％減少させる。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、実施例１１に記載のものなどの方法を使用して、マウスＴ細胞大腸炎モデルにおける結腸炎症を、少なくとも５０％、好適には少なくとも７５％、より好適には少なくとも９５％低減する。
ある特定の態様では、本発明はまた、本明細書に記載の抗体のうちのいずれかのＶＬドメイン又はＶＨドメインを含む単離されたポリペプチドに関する。
本明細書に記載されるように、特定の実施形態では、ＢＴＬＡに結合する抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖は、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む。
核酸分子
本発明の抗体は、核酸によってコードされるであろう。抗体（その抗原結合断片を含む）は、単一の核酸分子によってコードされてもよく、又は２つ以上の核酸分子によってコードされてもよい。例えば、抗原結合部位は、典型的には、重鎖可変ポリペプチド領域及び軽鎖可変ポリペプチド領域を合わせることによって形成されるので、２つの可変（重鎖及び軽鎖）ポリペプチド領域は、別々の核酸分子によってコードされ得る。あるいは、例えば、ＳｃＦｖの場合、それらは同じ核酸分子によってコードされ得る。
本発明の第２の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体をコードする１つ以上の核酸分子が提供される。
本発明の抗体をコードするポリペプチドの一次アミノ酸配列から、当業者は、ポリペプチドをコードする好適なヌクレオチド配列、及び必要に応じて、コドン最適化されたもの（例えば、Ｍａｕｒｏ ａｎｄ Ｃｈａｐｐｅｌｌ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ Ｍｅｄ．２０（１１）：６０４－６１３，２０１４）参照を参照されたい）を決定することができる。
本明細書で使用される場合、本発明の先の態様への言及（例えば、「本発明の第１（又は第２など）の態様に従って」）がある場合、それは、当該態様の任意の列挙された変形形態（例えば、第１（又は第２など）の態様の変形形態）も包含すると理解される。更に、本発明の特定の態様に適用される任意の実施形態は、その態様の任意の変形形態にも適用され、したがって、本発明の第１の態様に適用される実施形態は、本発明の第１の態様の変形形態にも適用される。
本発明の第２の態様の変形形態によれば、本発明の重鎖可変領域ポリペプチド又は軽鎖可変領域ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む単離された核酸が提供される。本発明の重鎖可変ポリペプチド又は軽鎖可変ポリペプチドは、抗原結合部位の一部を構成するアミノ酸を含む個々のポリペプチド鎖を指す。もちろん、当該ポリペプチドは、定常ドメイン、ヒンジ領域、及びＦｃ領域（１つ以上のＦｃ受容体結合部位を含むものなど）の他のドメインを含んでもよい。
本発明の第２の態様の別の変形形態によれば、単離された核酸が提供され、本発明の抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、当該ポリペプチドは、定常ドメイン、ヒンジ領域、及びＦｃ領域（１つ以上のＦｃ受容体結合部位を含むものなど）の他のドメインを含んでもよい。
核酸分子の１つは、抗体又はその断片のＶＬドメインを含むポリペプチド配列のみをコードしてもよい。核酸分子の１つは、抗体又はその断片のＶＨドメインを含むポリペプチド配列のみをコードしてもよい。しかしながら、核酸分子はまた、本発明の抗体（全長／全抗体又はその抗原結合断片など）を形成することができるポリペプチド配列を含むＶＨドメイン及びＶＬドメインの両方をコードしてもよい。
本発明の抗体、例えば、本発明の第１の態様による抗体をコードする核酸分子は、他の機能領域（エレメント）、例えば１つ以上のプロモーター、１つ以上の起点又は複製、１つ以上の選択マーカー、及び発現ベクターに典型的に見出される１つ以上の他のエレメントを含み得るベクター（例えば、プラスミドベクター、コスミドベクター、若しくはウイルスベクター、又は人工染色体）であってもよく、又はその一部であってもよい。抗体を含むタンパク質をコードする核酸のクローニング及び発現は十分に確立されており、十分に当業者の技術の範囲内である。
本発明の第３の態様によれば、ベクターが提供され、本発明の第２の態様の核酸を含む。特定の実施形態では、ベクターは、プラスミドベクター、コスミドベクター、ウイルスベクター、又は人工染色体である。
本発明の抗体を形成することができるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクター核酸を含む本発明の核酸は、精製／単離された形態であってもよい。
本発明の抗体をコードする単離／精製された核酸は、それらが天然に会合している物質（例えば、それらがそれらの天然の環境において、又はそれらが調製される環境（例えば、細胞培養）において見出される他のタンパク質又は核酸など）を含まないか又は実質的に含まず、かかる調製は、インビトロ又はインビボで組換えＤＮＡ技術によって実施される。
特定の実施形態では、本発明の核酸は、８０％超、例えば９０％超、９５％超、９７％超、及び９９％超純粋である。
したがって、本発明の第３の態様の別の変形形態によれば、本発明の重鎖可変ポリペプチド又は軽鎖可変ポリペプチドをコードする核酸又はヌクレオチド配列を含むベクターが提供される。特定の実施形態、ベクターは、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の両方をコードする核酸を含む。特定の実施形態では、当該ポリペプチドは、定常ドメイン、ヒンジ領域、及びＦｃ領域（１つ以上のＦｃ受容体結合部位を含むものなど）の他のドメインを含んでもよい。
本発明の核酸及び／又はベクターは、宿主細胞に導入され得る。導入は、任意の利用可能な技術を用いてもよい。真核細胞については、好適な技術は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、及び形質導入（レトロウイルス又は他のウイルス、例えば、ワクシニア若しくは昆虫細胞にはバキュロウイルスを使用する）を含み得る。宿主細胞（特に、真核細胞）への核酸の導入は、ウイルス又はプラスミドベースのシステムを使用することができる。プラスミドシステムは、エピソームとして維持されてもよく、又は宿主細胞若しくは人工染色体に組み込まれてもよい。組み込みは、単一又は複数の遺伝子座での１つ以上のコピーのランダム又は標的化組み込みのいずれかによる場合がある。細菌細胞の場合、好適な技術としては、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、及びトランスフェクション（バクテリオファージを使用する）が挙げられ得る。
一実施形態では、本発明の核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）に組み込まれる。組み込みは、標準的な技術に従って、ゲノムとの組換えを促進する配列を含めることによって促進され得る。
宿主細胞
本発明の更なる態様は、宿主細胞を提供し、本明細書に開示される核酸を含む。かかる宿主細胞は、インビトロであってもよく、培養であってもよい。
宿主細胞は、細菌又は酵母などの任意の種に由来し得るが、好適には、宿主細胞は、ヒト細胞又は齧歯類細胞などの哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞又はＣＨＯ－Ｋ１細胞）である。
したがって、本発明の第４の態様によれば、宿主細胞が提供され、本発明の第２の態様による核酸配列又は本発明の第３の態様によるベクターを含む。
宿主細胞は、例えば、コード核酸の発現のための条件下で宿主細胞を培養することによって、核酸からの本発明のタンパク質の発現を引き起こすか又は可能にするように処理することができる。発現された産物の精製は、当業者に既知の方法によって達成され得る。
したがって、本発明の核酸（本発明の抗体を形成し得るポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むベクター核酸を含む）は、単離された宿主細胞に存在し得る。宿主細胞は、典型的には、宿主細胞のクローン集団の一部である。本明細書で使用される場合、宿主細胞への言及は、当該細胞のクローン集団も包含する。クローン集団は、単一の親宿主細胞から増殖されたものである。宿主細胞は、任意の好適な生物由来であり得る。好適な宿主細胞としては、細菌細胞、真菌細胞、又は哺乳動物細胞が挙げられる。
宿主細胞は、ベクター核酸（例えば、プラスミドを用いて）の増幅を補助するために役立ち得るか、又は本発明のＢＴＬＡ抗体を形成する本発明のポリペプチドを発現するための生物学的工場として役立ち得る。ベクター核酸を増幅するための好適な宿主は、細菌細胞又は真菌細胞（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ細胞又はＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ細胞であり得る。本発明のタンパク質（すなわち、本発明のヒトＢＴＬＡ結合抗体を構成するポリペプチド）を発現させるのに好適な宿主は、哺乳動物細胞（例えば、ＨＥＫ２９３Ｔ又はＣＨＯ－Ｋ１細胞）であろう。特定の実施形態では、宿主細胞は、ＨＥＫ２９３Ｔ又はＣＨＯ－Ｋ１細胞などの哺乳動物細胞である。
様々な宿主－発現ベクター系を利用して、本明細書に記載のＢＴＬＡ結合分子を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８０７，７１５号を参照されたい）。哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（Chinese hamster ovary cell、
ＣＨＯ））は、例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要中間初期遺伝子プロモーターエレメントなどのベクターと組み合わせて、ＣＥＡタンパク質の有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ，４５：１０１（１９８６）、及びＣｏｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，８：２（１９９０））。異なる宿主細胞は、タンパク質及び遺伝子産物の翻訳後プロセシング及び改変のための特徴的かつ特異的な機構を有する。適切な細胞株又は宿主系を選択して、本開示のタンパク質の正確な改変及びプロセシングを確実にすることができる。この目的のために、一次転写物の適切なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化、及びリン酸化のための細胞機構を有する真核宿主細胞が使用され得る。このような哺乳動物宿主細胞としては、ＣＨＯ、ＨＥＫ、ＶＥＲＹ、ＢＨＫ、Ｈｅｌａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３、Ｗ１３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２Ｏ及びＴ４７Ｄ、ＮＳ０、ＣＲＬ７Ｏ３Ｏ、及びＨｓＳ７８Ｂｓｔ細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
抗体産生
本発明の第５の態様によれば、本発明の第１の態様による抗体を産生する方法が提供され、当該抗体の産生のための条件下で本発明の第４の態様の宿主細胞を培養するステップと、任意選択的に、当該抗体を単離及び／又は精製するステップと、を含む。
本発明の第５の態様の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに結合する抗体を産生する方法が提供され、当該抗体の産生のための条件下で、ヒトＢＴＬＡに結合する抗体を形成するポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を培養するステップを含み、任意選択的に、当該抗体を単離／精製するステップを更に含む。
単離／精製とは、本発明の抗体又はこれらの分子を構成するポリペプチドが、それらが天然に会合している物質（例えば、それらが、それらの天然の環境において、又はそれらが調製される環境（例えば、細胞培養）において見出される他のタンパク質又は核酸）を含まないか、又は実質的に含まないことを意味し、この場合、かかる調製は、インビトロ又はインビボの組換えＤＮＡ技術によって実施される。
本発明の第５の変形形態によれば、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体を調製するための方法が提供され、
ａ）発現された場合にヒトＢＴＬＡ結合分子を作製するために組み合わせることができる重鎖可変ドメイン及び／又は軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を含む１つ以上のポリペプチドをコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供するステップと、
ｂ）コードされたアミノ酸配列を発現する宿主細胞を培養するステップと、ｃ）抗体分子を単離するステップと、を含む。
１つ以上の核酸分子は、ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する本発明の抗体を形成することができる１つ以上のポリペプチドをコードする上記の核酸分子である。
特定の実施形態では、抗体は、ｉ）３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域であって、ＣＤＲＨ１が、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号１７に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域と、
ｉｉ）３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域であって、ＣＤＲＬ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域と、を含む。
特定の実施形態では、抗体は、ｉ）３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域であって、ＣＤＲＨ１が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域と、
ｉｉ）３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域であって、ＣＤＲＬ１が、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域と、を含む。
特定の実施形態では、抗体は、ｉ）３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域であって、ＣＤＲＨ１が、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域と、
ｉｉ）３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域であって、ＣＤＲＬ１が、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を有する、軽鎖可変領域と、を含む。
特定の実施形態では、抗体は、
ｉ）配列番号１８に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、
ｉｉ）配列番号１４に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域と、を含む。
特定の実施形態では、抗体は、
ｉ）配列番号２６に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、
ｉｉ）配列番号２７に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域と、を含む。
特定の実施形態では、抗体は、
ｉ）配列番号３６に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、
ｉｉ）配列番号４３に開示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域と、を含む。
本発明の抗体の産生及び当該分子の精製のための条件は、当該技術分野で周知である。これに対処する１つの方法は、本発明の抗体又はその断片を発現することができる細胞のクローン集団を調製し、これらを好適な増殖培地で、細胞集団の拡大／増殖及び目的のタンパク質の発現を可能にするのに役立つ期間及び温度で培養することである。目的のタンパク質（例えば、本発明の抗体）が宿主細胞内で発現される場合、細胞を溶解して（例えば、穏やかな界面活性剤又は超音波処理を使用して）、細胞の内容物（したがって、目的のタンパク質）を周囲の培地（細胞が再構成された培養培地又は別の培地であり得る）中に放出され得、次いで、この培地を精製プロセスに供する。目的のタンパク質（例えば、本発明の抗体）が増殖培地中に分泌される場合、その培地が精製プロセスに供される。抗体精製は、典型的には、目的のタンパク質を望ましくない宿主由来タンパク質及び他の細胞夾雑物（例えば、核酸、炭水化物など）から分離するためのクロマトグラフィー（例えば、親和性クロマトグラフィー、陰イオン及び／又は陽イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、又は他の分離技術を使用する）を典型的に含む十分に確立された方法を使用して、例えば、ハイブリドーマ細胞株の培地から、又は培養上清から抗体を単離することを含む。精製されたタンパク質はまた、ウイルス不活化ステップに供され得る。最後に、目的の精製されたタンパク質は、例えば、凍結乾燥され得るか、又は貯蔵、輸送、及び（その後の使用の準備ができた状態で）製剤化され得る。好ましくは、目的のタンパク質（例えば、本発明の全抗体又はその抗原結合断片）は、発現又は細胞溶解後に培養培地中に元々存在していた夾雑タンパク質を実質的に含まないであろう。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％純粋であろう。
本発明のタンパク質（例えば、本発明の全抗体又はその抗原結合断片）は、好適な組成物に製剤化され得る。
組成物
ＢＴＬＡ結合分子（本発明の抗体）は単独で投与されてもよいが、ある特定の実施形態では、投与は、ＢＴＬＡ結合分子が少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤とともに製剤化される薬学的組成物の投与である。賦形剤は、好適な薬学的担体溶質であり得る。かかる担体は、当該技術分野で周知であり、リン酸緩衝化生理食塩水溶液、水、リポソーム、様々な種類の湿潤剤、滅菌溶液などを含む。このような担体を含む組成物は、周知の従来の方法によって製剤化され得る。これらの薬学的組成物は、好適な用量で対象に投与することができる。投薬レジメンは、主治医及び臨床的要因によって決定される。
本発明の第６の態様によれば、薬学的組成物が提供され、薬学的に許容される賦形剤と、治療有効量の本発明の第１の態様の抗体又は本発明の第５の態様によって産生される抗体と、を含む。特定の実施形態では、組成物は、リン酸緩衝生理食塩水を含む。
「薬学的組成物」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象に対して許容できないほど毒性がある追加の成分を含まない調製物を指す。薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含むであろう。この文脈における賦形剤という用語は、充填剤、可溶化剤、担体、ビヒクル、添加剤などの任意の添加剤を指す。
薬学的組成物は、例えば、水、イオン交換体、タンパク質、緩衝物質、及び塩を含む、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含むことができる。保存剤及び他の添加剤も存在し得る。賦形剤は、溶媒又は分散媒であり得る。本明細書に開示される治療方法における使用に好適な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に記載されている。
「薬学的に許容される」賦形剤は、対象哺乳動物に合理的に投与されて、用いられる有効成分の有効用量を提供し得る賦形剤である。本発明の薬学的組成物は、組成物を任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤、又は安定剤と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、保存のために調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。許容される賦形剤は、用いられる投与量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、ホスフェート、シトレート、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメソニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール、及びｍ－クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；並びに／又は非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、若しくはポリエチレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ ｇｌｙｃｏｌ、ＰＥＧ））を含む。凍結乾燥ＨＥＲ２抗体製剤は、国際公開第９７／０４８０１号に記載されている。
インビボ投与に使用される薬学的組成物は無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過によって容易に達成され得る。
ＢＴＬＡ結合部分分子（例えば、抗体又はその抗原結合断片）の投与経路は、例えば、経口、非経口、吸入、又は局所であり得る。本明細書で使用される非経口という用語は、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、直腸、又は膣内投与を含む。
非経口投与のための薬学的組成物には、滅菌水溶液又は非水溶液、及び懸濁液が含まれる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、及び注射可能な有機エステル（例えば、オレイン酸エチル）である。水性担体には、水、水溶液、又は懸濁液が含まれ、生理食塩水及び緩衝媒体が含まれる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロース、及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル、又は固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、流体及び栄養補充剤、電解質補充剤（例えば、リンゲルデキストロースに基づくもの）が挙げられる。保存剤及び他の添加剤（例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスなど）もまた存在し得る。更に、組成物は、ヒト起源のある特定の実施形態では、例えば、血清アルブミン又は免疫グロブリンのようなタンパク質性担体を含み得る。静脈内注射又は罹患部位での注射の場合、活性成分は、発熱物質を含まず、好適なｐＨ、等張性、及び安定性を有する非経口的に許容される水溶液の形態となる。当業者は、例えば、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、乳酸リンゲル注射液などの等張ビヒクルを使用して、好適な溶液を十分に調製することができる。必要に応じて、保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤、及び／又は他の添加剤を含めることができる。上述のように、これらは全て本明細書において賦形剤と称される。
注射用組成物は、当該技術分野で既知の医療デバイスを用いて投与することができる。例えば、皮下針を用いる。米国特許第６６２０１３５号及び同第５３１２３３５号に開示されている無針注射デバイスも利用することができる。
経口投与用の薬学的組成物は、錠剤、カプセル、粉末、液体、又は半固体形態であってもよい。錠剤は、ゼラチン又はアジュバントなどの固体担体を含んでもよい。液体薬学的組成物は、一般に、水、石油、動物油若しくは植物油、鉱油又は合成油などの液体担体を含む。必要に応じて、生理食塩水、デキストロース若しくは他の糖類溶液、又はグリコール類（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、若しくはポリエチレングリコール）が含まれてもよい。
本発明の抗体は、分子の物理化学的特性及び送達経路に応じて、液体、半固体、又は固体形態で製剤化することができる。製剤は、賦形剤又は賦形剤の組み合わせ（例えば、糖、アミノ酸、及び界面活性剤）を含んでもよい。液体製剤は、広範囲の抗体濃度及びｐＨを含み得る。固体製剤は、例えば、凍結乾燥、噴霧乾燥、又は超臨界流体技術による乾燥によって製造することができる。
薬学的組成物は、単回用量、複数回用量として、又は注入において確立された期間にわたって投与することができる。投薬レジメンはまた、最適な所望の応答（例えば、治療応答又は予防応答）を提供するように調整され得る。特に、非経口製剤は、単回ボーラス用量、注入又は負荷ボーラス用量、それに続く１回以上の維持用量であり得る。これらの組成物は、特定の一定間隔又は可変間隔で、例えば１日１回又は「必要に応じて」投与することができる。
投与量
治療的に有効であろうＢＴＬＡ結合分子又はかかる分子を含む薬学的製剤の量は、用量範囲臨床試験などの標準的な臨床技術によって決定することができる。更に、最適な用量範囲を特定するのを助けるために、任意選択的に、インビトロアッセイを用いることできる。製剤に用いられる正確な用量はまた、投与経路、及び疾患又は障害の重症度に依存し、医師の判断及び各患者の状況に従って決定されるべきである。有効用量は、インビトロ又は動物モデルの試験系から導かれた用量応答曲線から外挿され得る。投与される組成物の投与量は、標準的な用量応答研究と併せて過度の実験を行うことなく、当業者によって決定され得る。これらの決定を行う際に考慮すべき関連状況としては、治療される状態（単数又は複数）、投与される組成物の選択、個々の患者の年齢、重量、並びに患者の症状の重症度が挙げられる。例えば、実際の患者の体重を使用して、投与される製剤の用量をミリリットル（ｍＬ）で計算することができる。「理想的な」重量への下方調整はなくてもよい。このような状況では、適切な用量は、以下の式によって計算され得る：
用量（ｍｌ）＝［患者の重量（ｋｇ）×用量レベル（ｍｇ／ｋｇ）／薬物濃度（ｍｇ／ｍＬ）］
ＢＴＬＡ関連疾患又は障害の治療のための治療有効用量の薬学的組成物は、本明細書で考察されるように、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、重量又は患者、患者の性別、患者の年齢、患者がヒトであるか動物であるか、投与される他の薬物、及び処置が予防的又は治療的であるかを含む、多くの異なる要因に依存して変化するであろう。治療有効量は、臨床試験から決定されている可能性が高く、主治医が治療ガイドラインを使用して決定することができる。通常、患者はヒトであるが、非ヒト哺乳動物も治療することができる。治療投与量は、安全性及び有効性を最適化するために、当業者に既知の慣用的な方法を使用して滴定され得る。
様々な実施形態では、ＢＴＬＡ結合分子は、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ、約４ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ、約６ｍｇ／ｋｇ、約７ｍｇ／ｋｇ、約８ｍｇ／ｋｇ、約９ｍｇ／ｋｇ、約１０ｍｇ／ｋｇ、約１１ｍｇ／ｋｇ、約１２ｍｇ／ｋｇ、約１３ｍｇ／ｋｇ、約１４ｍｇ／ｋｇ、約１５ｍｇ／ｋｇ、約１６ｍｇ／ｋｇ、約１７ｍｇ／ｋｇ、約１８ｍｇ／ｋｇ、約１９ｍｇ／ｋｇ、又は約２０ｍｇ／ｋｇの濃度で投与される。
本発明の薬学的組成物は、治療される状態に依存して、単独で又は他の治療と組み合わせて、同時に又は逐次的にのいずれかで投与され得る。このような組み合わせは、他の免疫抑制剤（例えば、以下から選択されるもの）との組み合わせである可能性がある：コルチコステロイド、シクロスポリン、アザチオプリン、スルファサラジン、メトトレキサート、ミコフェノレート、タクロリマス及びフィンゴリモド、又は他の生物製剤（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、ウステキヌマブ、トシリズマブ、及びリツキシマブ）。
本発明の第７の態様によれば、薬学的組成物を調製する方法が提供され、本発明の第１の態様による抗体又は本発明の第５の態様によって産生される抗体を、少なくとも１つの追加成分を含む組成物に製剤化することを含む。特定の実施形態では、少なくとも１つの追加成分は、薬学的に許容される賦形剤である。
キット
更に、製品（例えば、ＢＴＬＡ結合分子又はその薬学的組成物）は、キットの形態で包装及び販売することができる。このような製品は、製品についての説明書、及び疾患若しくは障害に罹患しているか又はそれに罹患しやすい対象の治療のための製品の適切な使用を示すラベル又は添付文書を有し得る。
したがって、本発明の第８の態様によれば、キットが提供され、本発明の第１の態様による抗体又は本発明の第６の態様による薬学的組成物を含む。好適には、かかるキットは、使用説明書を含む添付文書を含む。
療法／医療的用途
本発明の抗体又は当該抗体若しくはその抗原結合断片を含む薬学的組成物は、療法において、典型的には医薬品として使用することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、それを必要とする対象における任意の疾患又は状態を治療又は予防するために使用され得る。
ＢＴＬＡは、免疫応答の下方制御に関与し、宿主Ｔ細胞及び／又はＢ細胞を抑制することによって治療することができる多くの疾患又は状態が存在する（例えば、Ｃｒａｗｆｏｒｄ ＆ Ｗｈｅｒｒｙ．Ｅｄｉｔｏｒｉａｌ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＢＴＬＡ．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．８６：５－８，２００９を参照されたい）。抗ＢＴＬＡアゴニストによる治療から利益を得ることができる疾患又は状態は、本明細書において「ＢＴＬＡ関連疾患」と称される。ＢＴＬＡ関連疾患は、炎症性疾患又は自己免疫性疾患、及び過剰な免疫細胞増殖の障害を含む。
本発明のＢＴＬＡ結合分子で治療することができる具体的なＢＴＬＡ関連疾患としては、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息（アレルギー性喘息を含む）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫多腺性症候群（autoimmune polyendocrine syndrome）、ベ
ーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳性マラリア、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症、及び肝硬変）、若年性関節炎、川崎病、白血病、リンパ腫、リンパ増殖性障害、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、視神経脊髄炎、天疱瘡、多発性筋炎、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植片拒絶、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、及びフォークト・小柳・原田病が挙げられる。
特定の実施形態では、治療される病気は、クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、移植片対宿主病、移植片拒絶、多発性硬化症、血管炎、シェーグレン症候群、ベーチェット病、ブドウ膜炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、原発性硬化性胆管炎、重症筋無力症からなる群から選択される。
特定の実施形態では、過剰な免疫細胞増殖の障害は、リンパ腫、白血病、全身性肥満細胞症、骨髄腫、又はリンパ増殖性障害から選択される。
本発明の第９の態様によれば、療法に使用するための、本発明の第１の態様による抗体又は本発明の第６の態様による薬学的組成物が提供される。
特定の実施形態では、療法は、ＢＴＬＡ関連疾患の治療又は予防である。
特定の実施形態では、ＢＴＬＡ関連疾患は、対象におけるＢＴＬＡの発現及び／又は活性の低下によって引き起こされるものである。特に、Ｔ細胞又はＢ細胞の存在又は活性を特徴とする任意の疾患又は障害を、本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体で治療することができる。
一実施形態では、ＢＴＬＡ関連疾患は、炎症性疾患（例えば、関節リウマチ）、自己免疫疾患若しくは障害（例えば、移植片対宿主）、又は増殖性疾患若しくは障害（例えば、がん）である。
特定の実施形態では、治療は、炎症性疾患又は自己免疫疾患、及び過剰な免疫細胞増殖の障害の治療又は予防である。
本発明の第９の態様の変形形態によれば、治療を必要とする患者を治療する方法が提供され、患者に、本発明の第１の態様による抗体（若しくは、ＢＴＬＡ結合分子）又は本発明の第６の態様による薬学的組成物を投与することを含む。特定の実施形態では、治療を必要とする患者又は治療される患者は、ＢＴＬＡ関連疾患を有する（又は罹患している）。特定の実施形態では、治療を必要とする患者又は治療される患者は、炎症性疾患、自己免疫疾患、又は過剰な免疫細胞増殖の障害を有する（又は罹患している）。
特定の実施形態では、本発明の第１の態様による抗体又は本発明の第６の態様による薬学的組成物は、それを必要とする患者に、薬学的に許容される量で投与される。
本発明のこの第９の態様の変形形態では、治療を必要とする患者を治療する方法において使用するための、本発明の第１の態様による抗体（若しくはＢＴＬＡ結合分子）又は本発明の第６の態様による薬学的組成物が提供される。特定の実施形態では、方法は、ＢＴＬＡ関連疾患を治療又は予防するためのものである。特定の実施形態では、方法は、炎症性疾患又は自己免疫疾患、及び過剰な免疫細胞増殖の障害を治療又は予防するためのものである。
この態様の更なる変形形態では、治療を必要とする患者の治療のための医薬品の製造における、本発明の第１の態様による抗体又は本発明の第６の態様による薬学的組成物の使用が提供される。
一実施形態では、療法は、ＢＴＬＡ関連疾患を治療するためのものである。好適には、ＢＴＬＡ関連疾患は、炎症性疾患（例えば、喘息）、自己免疫性疾患又は障害（例えば、関節リウマチ）、又は免疫増殖性疾患又は障害（例えば、リンパ種）である。
特定の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、Ｔ細胞及び／又はＢ細胞を抑制するために使用される。
特定の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、治療又は予防を必要とする対象において、以下からなる群から選択される疾患又は状態を治療又は予防するために使用される：アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息（アレルギー性喘息を含む）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫多腺性症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳性マラリア、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、移植片対宿主病（graft versus host disease、ＧＶＨＤ）、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症、及び肝硬変）、若年性関節炎、川崎病、白血病、リンパ腫、リンパ増殖性障害、多発性硬化症（multiple sclerosis、ＭＳ）、重症筋無力症、骨髄腫、視神経脊髄炎、天疱瘡、多発性筋炎
、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植片拒絶、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、及びフォークト・小柳・原田病。
特定の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、治療又は予防を必要とする対象において、以下からなる群から選択される疾患又は状態を治療又は予防するために使用される：クローン病、潰瘍性大腸炎、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、乾癬、移植片対宿主病、移植片拒絶、多発性硬化症、血管炎、シェーグレン症候群、ベーチェット病、ブドウ膜炎、１型糖尿病、橋本甲状腺炎、原発性硬化性胆管炎、重症筋無力症。一実施形態では、免疫増殖性疾患は、がんである。好適には、がんは、白血病又はリンパ腫である。
別の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、移植片拒絶の予防又は治療に使用するためのものである。
別の実施形態では、本発明は、移植片対宿主病の予防又は治療に関する。
別の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、関節リウマチの治療に使用するためのものである。
他の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、１型糖尿病などの糖尿病の治療に使用するためのものである。
別の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、乾癬の治療に使用するためのものである。
別の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、多発性硬化症の治療に使用するためのものである。
別の実施形態では、本発明の抗体又は当該抗体を含む薬学的組成物は、大腸炎の治療に使用するためのものである。
「有効量」又は「治療有効量」という用語は、患者における症状を改善するか、又は所望の生物学的転帰（例えば、がんの場合、腫瘍細胞死の増加、腫瘍サイズの減少、無増悪生存期間又は全生存期間の増加など）を達成するのに十分である薬物の投与量又は量を指す。本明細書の他箇所に開示されているように、有効量は、典型的には、広範なヒト臨床試験を通して評価される。
本明細書の説明及び特許請求の範囲を通して、「含む（comprise）」及び「含有する（contain）」という用語、並びにそれらの変形は、「含むが、それに限定されない（including but not limited to）」を意味し、それらは、他の部分、添加物、成分、整数
、又はステップを排除することを意図しない（及び排除しない）。本明細書の説明及び特許請求の範囲を通して、単数形は、文脈上別段の要求がない限り、複数形を包含する。特に、不定冠詞が使用される場合、本明細書は、文脈上別段の要求がない限り、単数だけでなく複数も考慮するものとして理解されるべきである。
本発明の特定の態様、実施形態、又は実施例に関連して記載される特徴、整数、特性、化合物、化学的部分、又は化学基は、それらと矛盾しない限り、本明細書に記載される任意の他の態様、実施形態、又は実施例に適用可能であると理解されるべきである。本明細書（添付の特許請求の範囲、要約書、及び図面を含む）に開示された特徴の全て、及び／又はそのように開示された任意の方法若しくはプロセスのステップの全ては、かかる特徴及び／又はステップのうちの少なくともいくつかが相互に排他的である組み合わせを除いて、任意の組合せで組み合わせることができる。本発明は、任意の前述の実施形態の詳細に限定されない。本発明は、本明細書（任意の添付の特許請求の範囲、要約書、及び図面を含む）に開示された任意の新規な１つの特徴又は任意の新規な特徴の組合せ、あるいはそのように開示された任意の方法若しくはプロセスの任意の新規な１つのステップ又は任意の新規なステップの組み合わせに及ぶ。
読者の注意は、本出願に関連して本明細書と同時に又はそれより前に出願され、本明細書とともに公衆の閲覧に公開されている全ての論文及び文書に向けられており、全てのそのような論文及び文書の内容は、参照により本明細書に援用される。
ここで、以下の非限定的な実施例及び添付の図面を参照して、本発明を更に説明する。
可溶性及び細胞発現形態でのヒト及びカニクイザルＢＴＬＡへの抗体の結合。（ａ）固定化抗ＢＴＬＡ抗体に対して漸増濃度で注入された可溶性単量体ヒトＢＴＬＡ細胞外ドメインについての表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）結合曲線；グラフは、参照及びブランク減算後のＳＰＲシグナルを示す。（ｂ）ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して曲線フィッティングによって計算したヒト又はカニクイザルＢＴＬＡへの結合についての会合速度及び解離速度。（ｃ）アイソタイプ対照抗体と比較した、ヒトＢＴＬＡ又はカニクイザルＢＴＬＡを発現するＪｕｒｋａｔ細胞株への抗体２．８．６の結合（データポイントは、各抗体濃度での３連のウェルの平均＋／－ＳＤを表す）。（ｄ）ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して非線形曲線フィッティングによって計算した、トランスフェクトされた細胞株への抗体結合についてのＥＣ５０。 （ａ）抗ＢＴＬＡ抗体によるリガンド結合の遮断を、ＳＰＲによって評価した。ヒトＢＴＬＡ細胞外ドメインをセンサーチップ上に固定化した。ヒトＨＶＥＭを注入して、結合を確認した後、完全に解離させた。次いで、飽和濃度の抗ＢＴＬＡ抗体を注入し、その直後にＨＶＥＭの２回目の注入を行った。（ｂ）抗体注入後のＨＶＥＭの平衡結合を、抗体注入前のＨＶＥＭ結合の割合（％）として表した。クローン２．８．６ではなくクローン１１．５．１でのＢＴＬＡの飽和が、リガンドのその後の結合を遮断した。 抗ＢＴＬＡ抗体のエピトープマッピング。（ａ）ＧＦＰも発現するバイシストロンベクターでのＢＴＬＡ構築物でトランスフェクトしたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅコンジュゲート抗ＢＴＬＡ抗体で染色した。クローン１１．５．１は、野生型受容体でトランスフェクトされた細胞（左）に結合するが、Ｙ３９Ｒ変異を有するＢＴＬＡでトランスフェクトされた細胞（右）には結合しない。（ｂ）各ＢＴＬＡ変異体構築物への結合を、クローン２．８．６及び１１．５．１についての野生型ＢＴＬＡへの結合の割合（％）として表した。（ｃ）クローン１１．５．１の結合を選択的に排除する変異Ｙ３９Ｒ及びＫ４１Ｅを、ヒトＢＴＬＡの結晶構造上にマッピングした（黒色の残基）。リガンドＨＶＥＭの結合に重要な残基が、灰色で強調表示されている。 （ａ）クローン２．８．６のＦａｂ’断片と複合体化したヒトＢＴＬＡ細胞外ドメインの結晶構造。界面に埋もれているＢＴＬＡ上の残基が、黒色で強調表示されている。（ｂ）ＨＶＥＭ結合部位（灰色の残基）に対して抗体２．８．６のエピトープ（黒色の残基）を示す。 （ａ）ヒト化ＢＴＬＡマウスにおけるキメラＢＴＬＡ遺伝子の作製のための戦略。エキソン２の始まりからエキソン３の終わりまでのヒトゲノムＤＮＡのセクションをマウス遺伝子座に挿入して、エキソン２の始まりからエキソン４の終わりまでのマウス配列を置換した。マウスエキソン２の始まり及びマウスエキソン４の終わりにおけるエキソン－イントロン接合部の配列は、適切なスプライシングを確実にするためにインタクトのままにした。 インビボで抗ＢＴＬＡ抗体を評価するためのＴ細胞移入アッセイのプロトコル。ヒト化及び野生型ＯＶＡ特異的ＣＤ４ Ｔ細胞の混合物を、レシピエントマウスに注射した。翌日、マウスをＡｌｕｍ中のオボアルブミンで免疫化して、移入細胞を活性化し、２４時間後、抗ヒトＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照を投与した。最初の細胞移入の８日後、脾臓内の移入された集団におけるヒト化細胞と野生型細胞の比率をフローサイトメトリーによって評価した。（ｂ）クローン１１．５．１、及びより少ない程度でクローン２．８．６は、両方とも、野生型と比較してヒト化細胞の増殖を減少させた。グラフは、２回（１１．５．１）又は３回（２．８．６）の反復実験からプールされたデータを示す。各データポイントは、個々のレシピエントマウスを表す。 インビトロの混合リンパ球反応におけるＣＤ４ Ｔ細胞増殖に対する抗ＢＴＬＡクローン２．８．６の効果。ヒト化Ｃ５７ＢＬ／６マウス由来のＴ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｅＶｉｏｌｅｔで染色し、抗ＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照の存在下、マイトマイシンＣ処理Ｂａｌｂ／ｃ刺激細胞に添加した。９６時間後、ヒト化ＣＤ４細胞の増殖を評価し、抗体の不在下での増殖に対して正規化した。クローン２．８．６は、０．０２９ｎＭのＩＣ５０でヒト化細胞の増殖を抑制し、増殖の４２％抑制という最大の効果を有した。データポイントは、各抗体濃度での３連のウェルの平均＋／－ＳＤを表し、５回の独立した実験を表している。 （ａ）Ｔ細胞大腸炎モデルにおけるクローン２．８．６の効果。ＲＡＧノックアウトレシピエントマウスに、ヒト化ＢＴＬＡマウス由来のＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５－ＣＤ４＋Ｔ細胞を注射し、７日目、２１日目、及び３５日目に２００μｇの２．８．６又はアイソタイプ対照抗体で処置した。アイソタイプ対照処置マウスは、３週目以降から徐々に重量が減少したが、２．８．６処置マウスは免れた。（ｂ）細胞移入の８週間後、結腸を処理して固有層リンパ球を抽出し、結腸当たりに抽出された炎症細胞の総数を計算した。アイソタイプ対照処置マウスは、２．８．６処置マウスよりも有意に多くの浸潤免疫細胞を有した。（ｃ）結腸の重量対長さの比を、炎症及び肥厚のマーカーとして計算した。２．８．６処置は、重量対長さ比率の増加を防止し、アイソタイプ対照処置マウスで見られた。 （ａ）ＧＶＨＤの親－Ｆ１移入（parent-to-F1）モデルにおけるＢＴＬＡ抗体の効果。ヒト化ＢＴＬＡマウス由来のＣ５７ＢＬ／６脾細胞及び骨髄細胞を、ＣＢ６Ｆ１レシピエントマウスに注射し、次いで、これを抗ＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照で処置した。未処置マウスは、進行性の重量減少、皮膚炎、及び下痢を伴う臨床的ＧＶＨＤを発症し、予め指定された人道的エンドポイントに達したときに処分した。２．８．６及び１１．５．１抗体処置マウスは、同系細胞で再構成された対照マウスに匹敵する生存率を有し、比較的免れた。（ｂ）細胞移入の５週間後、マウスを処分し、結腸の重量対長さ比率を腸炎症のマーカーとして計算した。２．８．６及び１１．５．１処置は、結腸の肥厚を防止し、未処置マウスで見られた。 （ａ）インビボのＴ細胞移入アッセイにおけるＤ２６５Ａ変異クローン１１．５．１の効果。Ｆｃ受容体に結合しないこの変異抗体は、ヒト化ＢＴＬＡ細胞の増殖をもはや抑制せず、代わりに、受容体の遮断に起因して増殖の増強をもたらす。（ｂ）Ｄ２６５Ａ変異１１．５．１抗体は、混合リンパ球反応においてＴ細胞増殖をもはや抑制しなかった。 抗ＢＴＬＡ抗体は、補体を活性化（ｆｉｘ）しない。ヒト化ＢＴＬＡマウス由来の脾細胞を、２０μｇ／ｍｌのＢＴＬＡ抗体、アイソタイプ対照、又は陽性対照（枯渇化ＣＤ２０抗体）の存在下、１０％のウサギ補体とともに、３７℃で１時間インキュベートした。抗ＣＤ２０抗体は、Ｂ細胞の大部分を枯渇させ、ウサギ補体の活性を確認したが、ＢＴＬＡ抗体は、これらの集団の両方がＢＴＬＡに対して陽性染色されるにもかかわらず、Ｂ細胞又はＴ細胞のいずれも枯渇させなかった。 抗ＢＴＬＡ抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を引き起こさない。ヒト化ＢＴＬＡマウス由来の脾細胞を、２０μｇ／ｍｌのＢＴＬＡ抗体、アイソタイプ対照、又は陽性対照（枯渇化ＣＤ２０抗体）の存在下、３７℃で２４時間インキュベートした。抗ＣＤ２０抗体は、混合物中のエフェクター細胞によるＡＤＣＣを誘導することによって、Ｂ細胞の大部分を枯渇させたが、ＢＴＬＡ抗体は、これらの集団の両方がＢＴＬＡに対して陽性染色されるにもかかわらず、Ｂ細胞又はＴ細胞のいずれも枯渇させなかった。 抗ＢＴＬＡ抗体は、インビボでＢ細胞又はＴ細胞を枯渇させない。ヒト化ＢＴＬＡマウスに、２００μｇの２．８．６抗体を注射した。２４時間で、脾臓及び骨髄を採取し、細胞集団をフローサイトメトリーによって評価した。２．８．６は、脾臓のＢ細胞又はＴ細胞を枯渇させず、骨髄の異なるＢ細胞前駆体集団の頻度に影響を及ぼさなかった（１群当たりｎ＝３マウス）。 アイソタイプ対照抗体を注射したマウス由来の細胞におけるＢＴＬＡ発現と比較した、抗体２．８．６又は１１．５．１との６日間のインビボインキュベーション後のヒト化マウス由来のＢ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＢＴＬＡ発現レベル（１群当たりｎ＝５マウス）。 レポーターアッセイにおけるＢＴＬＡ抗体のアゴニスト効果は、Ｆｃ受容体結合及びアイソタイプに依存し、ＦｃγＲ２Ｂ結合がより大きいほど、アゴニストがより有効である。ＮＦκＢ応答性転写エレメントの制御下でＧＦＰを発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株を、ヒトＢＴＬＡでトランスフェクトし、表面に抗ＣＤ３ ＳｃＦｖ構築物を発現するＢＷ５１４７細胞株と共培養することによって刺激した。ＮＦκＢシグナル伝達を、２４時間の培養後のフローサイトメトリーによってＧＦＰ幾何平均を測定することによって検出した。異なるアイソタイプのＢＴＬＡアゴニスト抗体を培養物に添加することの抑制効果を、（ａ）ＢＷ５１４７細胞株もトランスフェクトしてｈＦｃγＲ２Ｂを発現させた条件下で評価するか、又は（ｂ）Ｆｃ受容体が存在しない条件下で評価した。データポイントは、各抗体濃度での３連のウェルの平均＋／－ＳＤであり、３回の独立した実験を表している。 Ｐ２３８Ｄアイソタイプ上で発現されるヒト化抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体２．８．６、６．２＿ｖａｒＣ、及び３Ｅ８は、ＢＴＬＡのリガンドＨＶＥＭのＦｃ融合タンパク質又は先行技術のＢＴＬＡアゴニスト２２Ｂ３と比較して、レポーターアッセイにおいてより大きな有効性及び効力を有する。ＮＦκＢ応答性転写エレメントの制御下でＧＦＰを発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株を、ヒトＢＴＬＡでトランスフェクトし、表面に抗ＣＤ３ ＳｃＦｖ構築物及びｈＦｃγＲ２Ｂを発現するＢＷ５１４７細胞株と共培養することによって刺激した。ＮＦκＢシグナル伝達を、２４時間の培養後のフローサイトメトリーによってＧＦＰ幾何平均を測定することによって検出した。共培養物に添加したＢＴＬＡアゴニスト抗体の抑制効果を評価した。データポイントは、各抗体濃度での３連のウェルの平均＋／－ＳＤであり、３回の独立した実験を表している。 ヒト化抗ＢＴＬＡ ２．８．６は、混合白血球反応においてＣＤ４ Ｔ細胞増殖を抑制する。血液バンクドナー由来の精製された初代ヒトＴ細胞を、細胞増殖追跡色素で染色し、ＢＴＬＡアゴニスト抗体又はｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ対照の存在下で、異なるドナー由来の同種単球由来樹状細胞と４：１の比率で５日間共培養した。細胞集団をフローサイトメトリーによって同定し、増殖を追跡色素の希釈によって評価した。ＢＴＬＡ抗体の存在下でのＣＤ４増殖を、等濃度のアイソタイプ対照の存在下での増殖に対して正規化した。データは、異なるドナー対を用いた６つの独立した実験から照合した。２．８．６は、Ｐ２３８ＤアイソタイプとしてＣＤ４ Ｔ細胞増殖を有意に抑制したが、他のアイソタイプ形式は抑制しなかった。先行技術の分子２２Ｂ３は、ＣＤ４増殖に対して有意な効果を有しなかった。 Ｐ２３８Ｄアイソタイプ上で発現されるヒト化抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体２．８．６、６．２＿ｖａｒＣ、及び３Ｅ８は、ＴＬＲ９アゴニストＯＤＮ２００６に応答した初代Ｂ細胞の活性化を抑制する。初代ヒトＢ細胞を、健常ドナーのＰＢＭＣから単離し、異なる用量のＰ２３８Ｄアイソタイプ対照抗体又は選択されたＢＴＬＡアゴニスト抗体の存在下又は不在下で、０．０１μＭのＯＤＮ２００６で刺激した。５日後、上清中のＩＬ－１０濃度を、ＥＬＩＳＡによって評価した。バーは、各抗体濃度での３連のウェルの平均＋／－ＳＤを表し、３つの独立した実験を表している。 Ｐ２３８Ｄアイソタイプ上で発現されるヒト化抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体２．８．６、６．２＿ｖａｒＣ、及び３Ｅ８は、異種移植片対宿主病モデルにおける重量減少を有意に低減する。照射ＮＳＧマウスを、０日目に、１０００万個のヒトＰＢＭＣでＩＶ再構成し、次いで、１日目に、１０ｍｇ／ｋｇのＢＴＬＡ抗体又はＰ２３８Ｄアイソタイプ対照でＩＰ処置した。マウスを定期的に秤量し、重量を開始時の体重に対してプロットした（１群当たりｎ＝９マウス、データポイントは平均＋／－ＳＤを表す）。
以下の実施例において、１１．５．１及び２．８．６などの抗体が高い親和性でヒトＢＴＬＡに結合することが示される。ヒト受容体を発現するトランスジェニックマウスを使用して、これらの抗体が、ＢＴＬＡへの結合後、Ｔ細胞応答をインビトロ及びインビボで抑制し、炎症性腸疾患及び移植片対宿主病のマウスモデルにおいて疾患を改善することができることが示される。これらのアゴニスト効果はＦｃ受容体結合に依存するが、抗体は、細胞傷害性を介してＢＴＬＡ発現細胞の枯渇を引き起こさず、受容体の下方調節を誘導しない。重鎖にＰ２３８Ｄ改変を導入すると、ＦｃγＲ２Ｂのアゴニストシグナル伝達が大幅に増強され、ＦｃγＲ２Ａに対してＦｃγＲ２Ｂのシグナル伝達の比率を増加させる。このような二重ＢＴＬＡ及びＦｃγＲ２Ｂアゴニスト抗体は、特に、自己免疫疾患及び炎症性疾患の状況において治療上の有用性があると予想される。
実施例１．抗ＢＴＬＡ抗体の生成及び配列決定
ヒト免疫細胞受容体であるＢＴＬＡを認識する抗体は、ヒトＢＴＬＡの細胞外領域（ＢＴＬＡＫ３１－Ｒ１５１）でマウスを免疫化することを介して、ＢｉｏＧｅｎｅｓ ＧｍｂＨによって生成された。免疫化マウス由来の脾細胞を、Ｓｐ２／０－Ａｇ１４骨髄腫細胞と融合させ、得られたハイブリドーマを、希釈クローニングと併せて上清のＥＬＩＳＡによって、ヒトＢＴＬＡとの反応性について選択した。迅速マウスアイソタイピングキット（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ）を使用して、ハイブリドーマ上清から抗体をアイソタイピングした。クローン２．８．６及び１１．５．１によって産生された抗体は、両方ともＩｇＧ１ｋであることがわかった。
免疫グロブリン可変ドメインを配列決定するために、ＴＲＩｚｏｌ試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を、製造元の説明書に従って使用して、ハイブリドーマからＲＮＡを抽出した。重鎖の第１の定常ドメイン又は軽鎖の定常ドメインに特異的なプライマー、及びＳｕｐｅｒ Ｓｃｒｉｐｔ ＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造元の説明書に従って使用して、ＲＮＡを逆転写して、ｃＤＮＡを生成した。
次いで、以前に記載されているように、免疫グロブリン遺伝子座の保存領域を標的とするプライマーを使用してＰＣＲを行い（Ｔｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．３５０：１８３－１９３，２００９）、ＰＣＲ産物を配列決定した。場合によっては、機能的軽鎖の同定は、融合骨髄腫細胞株由来の豊富な非機能的カッパ軽鎖ｃＤＮＡによって複雑になり、これを解決するため、以前に記載されている技術を使用し、非機能的鎖ＣＤＲ３に特異的なプライマーを過剰に添加して、異常な鎖産物の切断を強制した（Ｙｕａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２９４：３９５５３－６１，２００５）。
ＮＣＢＩ ＩｇＢｌａｓｔツールを使用して可変ドメイン配列を評価して、ＣＤＲの位置を決定した。
実施例２．可溶性ヒト及びカニクイザルＢＴＬＡへの結合
ヒト又はカニクイザルＢＴＬＡに対する本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体（２．８．６及び１１．５．１）の結合親和性及び動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴によって決定した。マウス抗体捕捉キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、ポリクローナル抗マウスＩｇＧでコーティングした。次いで、抗ＢＴＬＡ抗体を、バイオセンサー表面に捕捉し、陰性対照抗体（クローンＭｏｐｃ２１；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を参照チャネルで捕捉した。次いで、様々な濃度の単量体可溶性ヒトＢＴＬＡ細胞外ドメイン（ＢＴＬＡＫ３１－Ｒ１５１）（配列番号２２５から）又は可溶性カニクイザルＢＴＬＡ細胞外ドメイン（ＢＴＬＡＫ３１－Ｒ１５１）（配列番号２２６から）を、単一サイクル動態分析において、３７℃で、緩衝液（１０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４（ＨＢＳ－Ｐ）中の固定化抗体上に注入した（図１ａ）。参照及びブランク減算後、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、会合速度及び解離速度をフィッティングし、解離定数を計算した（図１ｂ）。クローン２．８．６は、０．６５ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、７．８９ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合した。クローン１１．５．１は、０．７５ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、０．９９ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合した。ヒトＢＴＬＡのみに対する別の実験では、クローン２．８．６は、０．３７ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、クローン１１．５．１は、０．５３ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合した。
実施例３．細胞上のＢＴＬＡへの結合
本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体（２．８．６及び１１．５．１）の、細胞表面に発現されたヒト又はカニクイザルＢＴＬＡに結合する能力を、フローサイトメトリーによって評価した。レンチウイルストランスフェクションシステムを使用して、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞株で完全長ヒト又はカニクイザルＢＴＬＡを発現させた。１ウェル当たり１×１０５細胞を、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＢＴＬＡ抗体結合対ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照（クローンＭＯＰＣ－２１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４００１６５）を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、２％ ＦＣＳ、０．０５％アジ化ナトリウム）中で１／３段階希釈（９０μｇ／ｍｌの濃度で開始）することによって、１２の濃度で評価した。非特異的な抗体結合は、Ｆｃブロック（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号１０１３１９）を添加することによって防止した。抗体を、氷上で３０分間、細胞とインキュベートし、次いで、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ｍＩｇＧ１二次抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４０６６１８）で染色した。二次抗体を、氷上で３０分間インキュベートした後、細胞を、洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁して、フローサイトメーターで分析した。二次抗体の幾何平均蛍光強度を、各濃度についてプロットし、受容体結合についてのＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、非線形曲線フィッティングによって計算した。クローン１１．５．１は、０．０１６ｎＭのＥＣ５０でヒトＢＴＬＡ発現細胞に結合し、０．００５７ｎＭのＥＣ５０でカニクイザルＢＴＬＡ発現細胞に結合した。クローン２．８．６は、０．０８５ｎＭのＥＣ５０でヒトＢＴＬＡ発現細胞に結合し、０．１６ｎＭのＥＣ５０でカニクイザルＢＴＬＡ発現細胞に結合した（図１ｃ～ｄ）。
実施例４．ＢＴＬＡへの結合についての天然リガンドＨＶＥＭとの競合
ＢＴＬＡへの天然リガンドの結合を遮断する、本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体（２．８．６及び１１．５．１）の能力を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴によって評価した。ヒトＢＴＬＡ細胞外ドメイン（ＢＴＬＡ３１Ｋ－１５１Ｒ）を、アミンカップリングを使用して、ＣＭ５センサーチップに共有結合させた。次いで、マウスＩｇＧ１ Ｆｃに融合されたヒトＨＶＥＭ細胞外ドメインを、３７℃で、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液中の固定化ｈＢＴＬＡ上に注入し、完全に解離させた。次いで、飽和量の抗ＢＴＬＡ抗体（２．８．６又は１１．５．１）を注射し、その直後に、最初の注射と同じ濃度でヒトＨＶＥＭ－ｍＦｃの第２の注射を行った（図２Ａ）。抗体によるＢＴＬＡの飽和後の平衡ＨＶＥＭ結合（共鳴単位で）を、抗体の注入前の結合の割合（％）として表した（図２Ｂ）。抗体で飽和させた後のＨＶＥＭ結合が抗体の注入前の結合の９０％超であった場合、抗体が非遮断性であるとみなした。
実施例５．ヒトＢＴＬＡ上の抗体１１．５．１の結合エピトープ
細胞表面に発現された受容体の単一残基変異体のパネルへの結合をフローサイトメトリーで評価することによって、ヒトＢＴＬＡ上の抗体１１．５．１の機能的エピトープを決定した。マウスＣＤ２８の膜貫通領域及び細胞内領域とともにＢＴＬＡのヒト細胞外領域をコードする構築物を、ＧＦＰもコードするバイシストロン哺乳動物発現ベクターであるｐＧＦＰ２－ｎ２（ＢｉｏＳｉｇｎａｌ Ｐａｃｋａｒｄ Ｌｔｄ）にクローニングした。「劇的な」変異誘発アプローチ（Ｄａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９５，５４９０－４（１９９８））を使用して、１つのアミノ酸が異なる変異体構築物を調製した。プラスミド（２μｇ／ウェル）を、Ｇｅｎｅｊｕｉｃｅトランスフェクション試薬（Ｎｏｖａｇｅｎ；６μｌ／ウェル）を使用して、６ウェルプレート中のＨＥＫ－２９３Ｔ細胞にトランスフェクションした。モック（ｍｏｃｋ）及びトランスフェクションなし対照を各実験に含めた。細胞を、４８時間で採取し、ＰＢＳ、０．０５％アジド、２％ ＦＣＳ（ＦＡＣＳ緩衝液）中、１０μｇ／ｍｌの蛍光色素コンジュゲート抗ＢＴＬＡ抗体で、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄマーカーとともに、４℃で１時間染色した。細胞を、洗浄し、ペレット化し、２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した後、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏフローサイトメーターで分析した。ＧＦＰ陽性（トランスフェクトされた）生存細胞をゲーティングして、抗ＢＴＬＡ抗体の結合について分析した（図３ａに、クローン１１．５．１についての結合分析の例が示されている）。各変異体について、トランスフェクトされた細胞への抗ＢＴＬＡ抗体の結合の幾何平均を、野生型受容体への結合の割合（％）として表した（図３ｂ）。抗ＢＴＬＡ抗体のパネルを評価し、全ての抗体の結合を排除した任意の変異は、かかる変異が抗体エピトープを示すのではなくタンパク質フォールディング又は発現の劇的な変化をもたらすという仮定の下で、分析から除外した。変異Ｙ３９Ｒ及びＫ４１Ｅは、抗体１１．５．１の結合を完全に無効にするが、２．８．６の結合は影響を受けないままである。これらの変異は、図３ｃにおいて、ヒトＢＴＬＡ結晶構造上にマッピングされており（Ｃｏｍｐａａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２８０：３９５５３－６１，２００５）（黒色の残基）、１１．５．１の結合エピトープを示している。ＨＶＥＭ結合に必要な残基（Ｇｌｎ３７、Ａｒｇ４２、Ｐｒｏ５９、Ｈｉｓ１２７；特許公開番号国際公開第２０１７／００４２１３号から）が、灰色で構造上にマッピングされており、１１．５．１がＨＶＥＭ結合部位に非常に近いエピトープに結合することを示している。
実施例６．ヒトＢＴＬＡと複合体化した２．８．６のＦａｂ’断片の結晶構造
ヒトＢＴＬＡ細胞外ドメインと複合体化した抗体Ｆａｂの結晶構造を解析することによって、ヒトＢＴＬＡ上の抗体２．８．６の構造エピトープを決定した。抗体２．８．６の重鎖及び軽鎖可変ドメインを、マウスＩｇＧ１重鎖の第１の定常ドメイン（６×ヒスチジンタグを有する）及びマウスＩｇカッパ鎖の定常ドメインをそれぞれコードする、ｐＯＰＩＮＶＨ及びｐＯＰＩＮＶＬ発現ベクター（Ａｄｄｇｅｎｅ）にクローニングした。これらのベクターをＨＥＫ２９３Ｔ細胞に一過性に同時トランスフェクトして、抗ＢＴＬＡ ２．８．６のＦａｂ’断片を産生し、これを、Ｎｉ－ＮＴＡ精製によって精製した。ヒトＢＴＬＡ Ｉｇ－Ｖセットドメイン（ＢＴＬＡＳ３３－Ｄ１３５）を、ｐＧＭＴ７ベクターにクローニングし、ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ Ｅ．ｃｏｌｉ細胞（Ｎｏｖａｇｅｎ）で発現させて、封入体を生成した。封入体を、超音波処理によって細胞ペレットから単離し、０．５％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有する洗浄溶液で繰り返し洗浄した。精製したＢＴＬＡ封入体を、６Ｍのグアニジン塩酸塩を含有する変性剤溶液中で可溶化した。可溶化されたタンパク質溶液を、リフォールディング緩衝液［０．１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、０．６Ｍ Ｌ－アルギニン、２ｍＭエチレンジアミン四酢酸、３．７３ｍＭシスタミン、及び６．７３ｍＭシステアミン］中で、１－２μＭの最終タンパク質濃度までゆっくり希釈し、次いで、４℃で４８時間撹拌した。次いで、リフォールディングしたＢＴＬＡの混合物を、ＶＩＶＡ ＦＬＯＷ５０システム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）で濃縮した。ＢＴＬＡを、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でのゲル濾過によって精製した。
精製されたＢＴＬＡ及びＦａｂ’を混合し、サイズ排除クロマトグラフィーによって複合体として精製した。データ収集に好適な結晶は、０．２Ｍの酢酸カルシウム、０．１Ｍのイミダゾール（ｐＨ８．０）、１０％（ｗ／ｖ）のＰＥＧ８０００中で、２９３°Ｋで、ハンギングドロップ蒸気拡散法によって得た。最終データセットを、Ｐｈｏｔｏｎ Ｆａｃｔｏｒｙで収集し、ＢＴＬＡの構造（ＰＤＢ ＩＤ；２ＡＷ２ Ａ鎖）及び抗ＰＤ１－Ｆａｂ（ＰＤＢ ＩＤ：５ＧＧＳ鎖Ｃ、Ｄ）を検索プローブとして使用して、構造を分子置換によって決定した。
抗体２．８．６との界面でのＢＴＬＡ上の残基は、Ａ５０、Ｇ５１、Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ８３、Ｄ８４、Ｒ８５、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｐ１０４、Ｖ１０５、Ｌ１０６、Ｐ１０７、Ｎ１０８、Ｄ１３５である。
実施例７．ヒト化ＢＴＬＡマウスの開発
マウスモデルにおいて抗ヒトＢＴＬＡ抗体を評価するためのプラットフォームを提供するために、ヒトの細胞外領域と、マウスの膜貫通領域及びシグナル伝達領域と、を有するＢＴＬＡのキメラ形態を発現するＣ５７Ｂｌ／６マウスのノックイン系統を開発した。エキソン２の始まりからエキソン３の終わりまでのヒトゲノムＤＮＡのセクションをマウス遺伝子座に挿入して、エキソン２の始まりからエキソン４の終わりまでのマウス配列を置換した。マウスのエキソン２の始まり及びマウスのエキソン４の終わりにおけるエキソン－イントロン接合部の配列は、適切なスプライシングを確実にするためにインタクトのままにした（図５）。
実施例８．インビボでの抗原特異的Ｔ細胞増殖の抑制
インビボで抗原特異的Ｔ細胞増殖を抑制する本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体（２．８．６及び１１．５．１）の能力を、感受性Ｔ細胞移入アッセイを使用して評価した（図６ａ）。このアッセイでは、ホモ接合ヒトＢＴＬＡ（ｈＢＴＬＡ）を発現するマウス由来の、及び野生型マウスＢＴＬＡ受容体を発現するＯＴ－ＩＩマウス由来の、オボアルブミン（ＯＶＡ）に特異的な精製ＯＴＩＩ（ＴＣＲトランスジェニック）ＣＤ４＋Ｔ細胞の混合物を含む５×１０５個のＴ細胞を、非トランスジェニックＣ５７ＢＬ／６レシピエントに移入した。移入された細胞を、ＣＤ４５．２（対ＣＤ４５．１）アロタイプマーカーを使用して、宿主細胞と区別した。野生型ドナー細胞はまた、ヒトユビキチンＣプロモーターの制御下で緑色蛍光タンパク質を発現し、フローサイトメトリーによって、それらをヒト化ドナー細胞と区別することを可能にした。Ｔ細胞移入の翌日、レシピエントマウスを、１００μｌのＩｍｊｅｃｔ Ａｌｕｍ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）と混合した１００μｌのＰＢＳ中に１００μｇのオボアルブミン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）で免疫化して、Ｔ細胞の増殖を誘導した。２日目に、マウスに、２００μｇの抗体を腹腔内投与した。Ｔ細胞の最初の移入の８日後、脾臓におけるヒト化ＢＴＬＡ発現Ｔ細胞と野生型ＯＶＡ特異的Ｔ細胞の比率を、フローサイトメトリーによって決定した。このようにして、抗ヒトＢＴＬＡ抗体に結合するヒト化細胞の増殖又は縮小を、結合しない野生型対照と比較して追跡することが可能であった。抗体２．８．６及び１１．５．１は、両方とも、野生型対照と比較してヒト化ＢＴＬＡ細胞の増殖の低減をもたらし、それらが抑制性ＢＴＬＡ受容体を介したシグナル伝達を誘導し、これがＴ細胞増殖の低減をもたらすことを示す（図６ｂ）。
実施例９．混合リンパ球反応におけるＴ細胞増殖の抑制
本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体（２．８．６及び１１．５．１）が、インビトロでヒト化マウス由来の初代Ｔ細胞の増殖を抑制する能力を、混合リンパ球反応（mixed lymphocyte reaction、ＭＬＲ）を使用して評価した。Ｂａｌｂ／ｃマウス由来の脾細胞を、
マイトマイシンＣで、３７℃で３０分間処理し、次いで、洗浄し、刺激細胞として使用した。磁気活性化細胞選別（Ｍｏｊｏｓｏｒｔ マウスＣＤ３ Ｔ細胞単離キット、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４８００２３）を使用する陰性選択によって、ヒト化ＢＴＬＡマウスの脾臓からＴ細胞を精製し、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で染色して、応答細胞として使用した。１ウェル当たり４×１０５個の刺激細胞及び２×１０５個の応答細胞を、様々な濃度の抗ＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照抗体（クローンＭＯＰＣ－２１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４００１６５）を含む９６ウェルＵ底プレート中で混合した。抗体の１／３段階希釈を１μｇ／ｍｌの濃度で開始して、合計１０の濃度について評価した。ポリクローナル抗ｍＨＶＥＭ抗体（Ｒ＆Ｄシステムズ番号ＡＦ２５１６）も、１０１μｇ／ｍｌで全てのウェルに添加して、ＢＴＬＡ経路を介するいずれのベースラインシグナル伝達を遮断し、アゴニスト抗体の効果を目立たせた。９６時間後、応答細胞における、増殖のマーカーとしてのＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔの希釈を、フローサイトメトリーによって評価した。抗ＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照の存在下での増殖を、抗体の不在下での増殖と比較した。ＣＤ４＋集団及びＣＤ８＋集団をゲートアウトし、別々に分析した。抗体２．８．６及び１１．５．１は両方とも、ヒトＢＴＬＡ発現Ｔ細胞の増殖を低減し、それらがヒトＢＴＬＡ受容体を介して抑制性シグナル伝達を誘導することを示した。クローン２．８．６は、０．０２９ｎＭのＩＣ５０でＣＤ４ Ｔ細胞を抑制し、増殖の４２％抑制という最大の効果を有した（図７）。クローン１１．５．１は、０．０１６ｎＭのＩＣ５０でＣＤ４ Ｔ細胞を抑制し、増殖の３３％抑制という最大の効果を有した。
実施例１０．ヒトＢＴＬＡ又はカニクイザルＢＴＬＡトランスフェクトＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株におけるＮＦκＢシグナル伝達の抑制
ＮＦκＢシグナル伝達を抑制する本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体（２．８．６及び１１．５．１）の能力を、ＢＴＬＡトランスフェクトレポーターＴ細胞株を使用して評価した。最小ＣＭＶプロモーター（ｍＣＭＶ）－ＧＦＰカセット（Ｓｏｕｒｃｅ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ番号ＴＲ８５０Ａ－１）の上流にＮＦ－κＢ応答性転写エレメントを含む発現カセットで安定的にトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株を、ＮＦκＢシグナル伝達のためのレポーター細胞株として使用した。レンチウイルストランスフェクションシステムを使用して、このレポーター細胞株で完全長ヒト又はカニクイザルＢＴＬＡを発現させた。これらの細胞を、Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２０１０ Ｏｃｔ ３１；３６２（１－２）：１３１－４１に記載されているように、その表面に抗ＣＤ３ ＳｃＦｖ構築物を発現するｂｗ５１４７細胞からなる刺激細胞株と混合した。アゴニストＢＴＬＡ抗体の提示のためのＦｃ受容体を提供するために、刺激細胞株もマウスＦｃγＲ２Ｂでトランスフェクトした。１ウェル当たり５×１０４個のレポーター細胞を、様々な濃度のＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照（クローンＭＯＰＣ－２１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４００１６５）の存在下、９６ウェルＵ底プレート中の５×１０４個の刺激細胞と混合した。細胞を、３７℃で２４時間インキュベートした後、ペレット化し、フローサイトメトリーのために、生存性色素（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ
ｄｙｅ）（Ｚｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４２３１０１）及びマウスＣＤ４５抗体（Ｐｅ－Ｃｙ７コンジュゲートクローン１０４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号１０９８３０）で染色して、刺激細胞（マウス）を応答細胞（ヒト）から分離した。ＧＦＰ発現の幾何平均を、各抗体濃度について評価し、抗体の不在下でのＧＦＰ発現に対して正規化した。クローン２．８．６は、ヒトＢＴＬＡトランスフェクト細胞を、０．０６ｎＭのＩＣ５０で抑制し、カニクイザルＢＴＬＡトランスフェクト細胞を、０．２２ｎＭのＩＣ５０で抑制した。クローン１１．５．１は、ヒトＢＴＬＡトランスフェクト細胞を、０．０３３ｎＭのＩＣ５０で抑制し、カニクイザルＢＴＬＡトランスフェクト細胞を、０．１４ｎＭのＩＣ５０で抑制した。
実施例１１．抗体２．８．６による大腸炎のＴ細胞駆動マウスモデルの処置
大腸炎のＴ細胞駆動モデルを改善するＢＴＬＡアゴニスト抗体２．８．６の能力を、ヒト化マウスを使用して評価した。このＴ細胞移入モデルは、炎症性腸疾患のマウスモデルとして、以前に記載されている（Ｏｓｔａｎｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔ Ｌｉｖｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２９６：Ｇ１３５－４６，２００９）。ヒト化ＢＴＬＡマウスの脾臓及びリンパ節から選別されたＣＤ４５ＲＢｈｉＣＤ２５－ＣＤ４＋Ｔ細胞を、Ｒａｇ１ ＫＯレシピエント（Ｒａｇ１ｔｍ１Ｍｏｍ；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）に、マウス１匹当たり５×１０５個の細胞の用量で腹腔内注射した。移入されたＴ細胞は、約３週間後に発症する炎症性大腸炎を引き起こし、下痢及び重量減少をもたらす。移入されたＴ細胞を受容しなかったＲａｇ１ ＫＯケージメイトは、非罹患対照として役立つ。Ｔ細胞移入後７、２１、及び３５日目に、レシピエントマウスに２００μｇの２．８．６又はアイソタイプ対照抗体を腹腔内注射した。全てのマウスを定期的に秤量し、８週目に結腸を秤量して測定し、組織学的に炎症性浸潤を評価し、並びに抽出された固有層（lamina propria）の白血球を細胞計数し、フ
ローサイトメトリーにかけた。抗体２．８．６は、重量減少を防止し（図８ａ）、結腸の炎症性浸潤を有意に低減した（図８ｂ）。罹患マウスにおける結腸炎症は、結腸重量：長さ比率の増加をもたらしたが、２．８．６処置マウスでは見られなかった（図８ｃ）。
実施例１２．移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のマウスモデルの処置
抗ＢＴＬＡアゴニスト抗体の効果を、ＧＶＨＤの非致死性親－Ｆ１移入（parent-into-F1）モデルで評価した。骨髄細胞（bone marrow cell、ＢＭＣ）及び脾細胞を、ヒト化ＢＴＬＡドナーマウス（Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンド；Ｈ２Ｂ）から採取した。２×１０７個のＢＭＣ及び１０７個の脾細胞を、９Ｇｙ全身照射で致死的に放射線照射（irradiated）ＣＢ６Ｆ１（Ｈ２Ｂ／ｄ）レシピエントに静脈内注射した。同系ＢＭＣ及び脾細胞で再構成された放射線照射ＣＢ６Ｆ１マウスは、非罹患対照として機能した。免疫細胞移入の日に、マウスに、２００μｇの抗ＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照を腹腔内注射した。マウスを定期的に秤量し、体重の相対的減少を計算することによって、及び臨床観察によってＧＶＨＤをモニタリングした。マウスは、免疫細胞移入の５週間後、又は人道的エンドポイント（最初の１４日間での開始時の重量に対する２０％超の重量減少、又は任意の他の時点での１５％超の重量減少を含む）に達したときに、マウスを処分した。死亡時に結腸を秤量し、結腸の重量：長さ比率を、結腸炎症のマーカー（これはＧＶＨＤの顕著な臨床的特徴である）として計算した。抗体２．８．６及び１１．５．１の両方は、重量減少を有意に低減し、生存率の増加をもたらし（図９ａ）、結腸炎症を予防した（図９ｂ）。
実施例１３．抗体１１．５．１のアゴニスト活性は、Ｆｃ受容体結合に依存する
抗体１１．５．１は、Ｄ２６５Ａ変異（Ｆｃ受容体結合を有意に低減することが以前に記載されている）を含むｍＩｇＧ１ｋとして組換え発現させた（Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍｅｄ．６：４４３－４４６，２０００）。この変異抗体を、実施例８に記載のＴ細胞移入アッセイにおいて評価した。親１１．５．１抗体は、その正味の効果がＢＴＬＡ受容体のアゴニズムであるため、ヒト化Ｔ細胞の増殖を抑制した。しかしながら、ＦｃＲヌルＤ２６５Ａ変異は、ヒト化Ｔ細胞の増殖の増強をもたらし、これは、ＦｃＲヌル変異が抗体のアゴニスト効果を取り除き、受容体遮断の効果のみを残すことを示唆した（図１０ａ）。
Ｄ２６５Ａ変異１１．５．１抗体を、実施例９に記載のインビトロＭＬＲアッセイにおいても評価した。ここでも、親１１．５．１抗体は、その正味の効果がＢＴＬＡ受容体のアゴニズムであるため、ヒト化Ｔ細胞の増殖を抑制した。ＦｃＲ－ヌルＤ２６５Ａ変異は、抗体のアゴニスト効果を取り除くため、この抗体は、このアッセイでは効果を示さなかった（図１０ｂ）。ＦｃＲヌル１１．５．１抗体は、ＨＶＥＭが（ポリクローナル抗ＨＶＥＭ抗体の添加によって）遮断されたので、このアッセイにおいてヒト化細胞の増殖を増強せず、そのため、ＢＴＬＡ遮断抗体によって遮断される経路を介したベースラインシグナル伝達はなかった。
実施例１４．インビトロで抗体２．８．６及び１１．５．１は、補体を活性化（ｆｉｘ）しない。
ヒト化マウス由来の脾細胞を、１０％の仔ウサギ補体（ＢｉｏＲａｄ）及び２０μｇ／ｍｌの抗ＢＴＬＡ抗体（又はアイソタイプ対照若しくは陽性対照の枯渇化抗ＣＤ２０抗体；ＢｉｏｌｅｇｅｎｄからのクローンＳＡ２７１Ｇ２）と、３７℃で１５分間インキュベートした。抗ＣＤ２０抗体は、Ｂ２２０＋Ｂ細胞の大部分を枯渇させたが、抗ＢＴＬＡ抗体は、Ｂ２２０＋又はＣＤ４＋細胞の両方がＢＴＬＡに対して陽性染色されるにもかかわらず、これらの細胞のいずれも枯渇させなかった（図１１）。
実施例１５．抗体２．８．６及び１１．５．１は、インビトロでＡＤＣＣを誘導しない
ヒト化マウス由来の全脾細胞（骨髄系エフェクター細胞を含む）を、２０μｇ／ｍｌの抗ＢＴＬＡ抗体（又はアイソタイプ対照若しくは枯渇化抗ＣＤ２０抗体ＳＡ２７１Ｇ２）と、３７℃で２４時間インキュベートした。抗ＣＤ２０抗体は、Ｂ２２０＋細胞の大部分を枯渇させたが、抗ＢＴＬＡ抗体は、Ｂ２２０＋又はＣＤ４＋細胞の両方がＢＴＬＡに対して陽性染色されるにもかかわらず、これらの細胞のいずれも枯渇させなかった（図１２）。
実施例１６．抗体２．８．６及び１１．５．１は、インビトロでＢＴＬＡ発現細胞を枯渇させない。
ヒト化ＢＴＬＡマウスに、２００μｇの抗ＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照を腹腔内注射した。２４時間で脾臓を採取し、異なる細胞集団の頻度をフローサイトメトリーによって特定した。抗ＢＴＬＡ抗体は、脾臓のＢ細胞若しくはＴ細胞の頻度若しくは絶対数、又は骨髄のＢ細胞前駆体の数に対する効果を有しなかった（図１３）。
実施例１７．抗体２．８．６及び１１．５．１は、インビボで免疫細胞でのＢＴＬＡの発現を安定化する
ヒト化マウスに、１０ｍｇ／ｋｇの抗体２．８．６又は１１．５．１を腹腔内注射した。注射の６日後、マウスを人道的に犠牲にし、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液へと処理して、フローサイトメトリーによって評価した。細胞を、抗体のカクテルで染色して免疫細胞サブセットを特定し、注入した抗体と非競合エピトープを有する蛍光コンジュゲート抗ＢＴＬＡ抗体で染色した。抗ＢＴＬＡ抗体とのインビボインキュベーション後のＢＴＬＡ染色の幾何平均を、アイソタイプ対照とのインキュベーション後のＢＴＬＡ染色（同じ染色抗体を使用する）の幾何平均に対して正規化した。ＢＴＬＡ発現は、アイソタイプ対照を注射したマウスと比較して、クローン２．８．６又は１１．５．１のいずれかを注射したマウス由来のＢ細胞及びＣＤ４ Ｔ細胞で有意に高かった（図１４）。これは、先行技術において、クローン２．８．６及び１１．５．１が、他のＢＴＬＡ抗体で観察されたように受容体下方調節を誘導するのではなく、インビボで細胞表面でのＢＴＬＡの発現を安定化することを示唆する（Ｍ．－Ｌ．ｄｅｌ Ｒｉｏ ｅｔ ａｌ．／Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ ２１５（２０１０）５７０－５７８）。免疫抑制の目的のために、受容体の発現を安定化させるアゴニスト抗体は、下方調節抗体と比較して、経路を介した長期の高レベルの抑制性シグナル伝達を可能にするという利点を示す。
実施例１８．動物モデルにおける耐容性及び副作用
抗体２．８．６又は１１．５．１を用いたいずれの動物試験においても、耐容性の問題又は副作用はなかった。
実施例１９．例示的なＢＴＬＡ抗体の特徴付け
本実施例では、２．８．６及び１１．５．１に加えて、本明細書で提供される例示的なｍＩｇＧ１ ＢＴＬＡ抗体の特徴付けを記載する。表１及び２に列挙された様々なクローンを、ＢＴＬＡに対するそれらの結合親和性及びリンパ球の抑制効率について評価した（表３）。
各抗体について、ヒトＢＴＬＡへの結合についての会合速度（「オン速度」）及び解離速度（「オフ速度」）、並びにヒト又はカニクイザルＢＴＬＡへの結合についてのＫＤを、実施例２に記載の方法に従って測定し、単一濃度でのＢＴＬＡ細胞外ドメインの注入について曲線をフィッティングした。Ｔ細胞に対する個々の抗体の抑制効率も、１０μｇ／ｍｌの単一濃度で評価した。実施例９に記載される方法に従って、各個々の抗体についてＭＬＲアッセイを実施した（表４に、２回の生物学的反復を示す）。抗ＣＤ３アッセイは、以下に記載の方法に従って実施した（表４、２回の生物学的反復）。実施例１０に記載される方法に従って、各抗体によるヒトＢＴＬＡトランスフェクトＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株におけるＮＦκＢシグナル伝達の抑制を決定した（表４）。例示的な各抗体についての様々なインビトロ刺激アッセイにおけるアイソタイプ対照と比較したＴ細胞の平均抑制を、全てのアッセイ結果の抑制率（％）の平均値として計算した（表３及び表４）。
抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８誘導性Ｔ細胞活性化を抑制するＢＴＬＡアゴニスト抗体の能力を、以下のように評価した。ヒト化ＢＴＬＡマウス由来の脾細胞を単一細胞懸濁液に処理し、ＡＣＫ緩衝液で処理して、赤血球を溶解させた。細胞を、ＣＦＳＥ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４２３８０１）で染色して、細胞増殖の追跡を可能にした。１ウェル当たり２×１０５個の細胞を、それぞれ５０ｎｇ／ｍｌの濃度の可溶性抗ＣＤ３抗体（クローン１４５．２Ｃ１１；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号１００３３９）及び抗ＣＤ２８抗体（クローン３７．５１；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号１０２１１５）、並びに１０μｇ／ｍｌの濃度の可溶性抗ＢＴＬＡ抗体又はアイソタイプ対照を含む９６ウェルＵ底プレートに播種した。７２時間後、細胞をフローサイトメトリーによって分析して、増殖（「抗ＣＤ３／ＣＤ２８（ＣＤ４ Ｔ細胞増殖）」）を評価し、表面発現活性化マーカーの染色によって、Ｔ細胞活性化（「抗ＣＤ３／ＣＤ２８（ＣＤ６９＋ＣＤ４ Ｔ細胞）」）を評価した。各ＢＴＬＡ抗体について、アイソタイプ対照抗体と比較した抑制の割合（％）を計算した。
更に、各ＢＴＬＡ抗体について、それらのリガンド遮断能力、例えば、ＢＴＬＡへの結合についてのＨＶＥＭとの競合を、実施例４に記載される方法に従って評価し、結果を、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ結合の９０％超の抑制については「あり」、ＨＶＥＭ－ＢＴＬＡ結合の１０％未満の抑制については「なし」として提示する。各ＢＴＬＡ抗体の機能的エピトープもまた、実施例５に記載される方法に従って決定した。表３の「エピトープ」欄は、各個々のＢＴＬＡ抗体が結合するエピトープ群を要約する。抗体２．８．６、６．２、８３１、１６Ｈ２、７Ａ１、１６Ｆ１０、６Ｇ８、３Ｅ８、４Ｅ８、１５Ｃ６、１２Ｆ１１、１０Ｂ１、１５Ｂ６、４Ｄ３、１６Ｅ１、４Ｄ５、及び３Ａ９は全て、リスト：Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）から選択される少なくとも１つの重要な残基を含む第１のエピトープ（表では「エピトープ１」と命名）に結合する。エピトープ１に結合する抗体は、ＢＴＬＡへの結合についてリガンドＨＶＥＭと競合しない。抗体１１．５．１、１４Ｄ４、１Ｈ６、８Ｃ４、２７Ｇ９、２６Ｆ３は全て、リスト：Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７から選択される少なくとも１つの重要な残基を含む異なる第２のエピトープ（「エピトープ２」）に結合する。エピトープ２に結合する抗体は、ＢＴＬＡへの結合についてリガンドＨＶＥＭと競合する。抗体２６Ｂ１は、リスト：Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３から選択される少なくとも１つの重要な残基を含む第３のエピトープ（「エピトープ３」）に結合する。エピトープ３に結合する抗体は、ＢＴＬＡへの結合についてリガンドＨＶＥＭと競合する。抗体２４Ｈ７、４Ｂ１、８Ｂ４、４Ｈ４は全て、重要な残基Ｈ６８を含む異なる第４のエピトープ（「エピトープ４」）に結合する。エピトープ４に結合する抗体は、ＢＴＬＡへの結合についてリガンドＨＶＥＭと競合しない。抗体２１Ｃ７は、リスト：Ｎ６５及びＡ６４から選択される少なくとも１つの重要な残基を含む異なる第５のエピトープ（「エピトープ５」）に結合する。エピトープ５に結合する抗体は、ＢＴＬＡへの結合についてリガンドＨＶＥＭと競合しない。
実施例２０．ＢＴＬＡ抗体６．２、２．８．２、及び３Ｅ８のヒト化及びＣＤＲ操作
抗体２．８．６は、相同ヒト生殖系列フレームワーク領域（配列番号２６、２７を参照）へのＣＤＲ移植によってヒト化した。ＩＧＨＶ２－５＊０８を重鎖に使用し、ＩＧＫＶ３－１１＊０１を軽鎖に使用した。ヒト化後、ＢＴＬＡへの結合を、ＳＰＲによって評価した。ヒト化２．８．６は、０．７３ｎＭのＫＤで単量体ＢＴＬＡに結合した。
６．２及び３Ｅ８の可変ドメインを、相同ヒト生殖系列フレームワーク領域（配列番号７、８、及び３６、３７）に生殖系列化することによってヒト化した。３Ｅ８の場合、選択されたアクセプターフレームワークは、重鎖についてはＶＨ１－１－０８及びＪＨ６であり、軽鎖についてはＶＫ３－Ｌ６及びＪＫ２であった。６．２の場合、選択されたアクセプターフレームワークは、重鎖についてはＶＨ３－３－２１及びＪＨ６であり、軽鎖についてはＶＫ２－Ａ１９及びＪＫ４であった。
抗体のＣＤＲ又は可変ドメインフレームワーク領域のある特定の残基を置換して、標的結合に著しく影響を与えることなく、望ましくない特徴を除去することが可能な場合がある。ヒト化抗体６．２のＣＤＲＨ２を、Ｎ５６Ｑ単独（配列番号１７）又はＮ５６Ｑ及びＤ５４Ｅ置換（配列番号１１）で改変して、脱アミド化能及び異性化能をそれぞれ除去した。ヒト化６．２のＣＤＲＬ２を、Ｄ６１Ｅ置換で改変して、ＬｏｎｚａのＥｐｉｂａｓｅ分析によって決定される予測免疫原性を低下させた（配列番号１２）。ＣＤＲの外側で、Ｓ７７Ｔ置換をヒト化６．２の重可変フレームワーク領域に導入して予測される免疫原性を低下させ、Ｑ５１Ｋ置換を軽鎖可変フレームワーク領域に導入して免疫原性を低下させた。これらの置換の異なる組み合わせを含むヒト化６．２の３つの操作されたバリアントを作製した（操作されたヒト化６．２「バリアントＡ」、「バリアントＢ」、及び「バリアントＣ」）。表２は、これらのバリアントの各々についての構成ＣＤＲ及び可変ドメインを記載する。Ｎ５６Ｑのみを有し、Ｄ５４Ｅ置換を有しない、ＣＤＲＨ２を含む抗体６．２の操作されたバリアント（例えば、操作されたヒト化６．２バリアントＣ）は、ＰＣＴ／ＧＢ２０１９／０５３５６９には開示されていない。
同様に、ヒト化抗体３Ｅ８のＣＤＲＨ２を、脱アミド化能を除去するためのＮ５７Ｑ置換及び予測される免疫原性を低減するためのＫ６３Ｓ置換で改変した（配列番号４０）。ＣＤＲの外側で、Ｇ４２Ｄ及びＡ６１Ｓ置換を３Ｅ８の軽鎖可変フレームワークに導入して、予測される免疫原性を低下させた。更に、Ｐ１５Ｌ及びＰ８１Ａ置換を軽鎖可変フレームワークに導入して、局所立体構造に影響を及ぼし得るプロリンを導入する代わりに、これらの位置をマウス配列に戻した。これらの置換の４つ全てを含む操作された３Ｅ８軽鎖可変ドメインの配列を、配列番号４３に示す。表２は、ヒト化３Ｅ８の操作されたバリアントについての構成ＣＤＲ及び可変ドメインを記載する。
実施例２１．可溶性ヒト及びカニクイザルＢＴＬＡへのヒト化抗ＢＴＬＡ抗体の結合
ヒト又はカニクイザルＢＴＬＡに対するヒト化ＢＴＬＡアゴニスト抗体の結合親和性及び動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用する表面プラズモン共鳴によって決定した。ヒト抗体捕捉キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号２９２３４６００）を使用して、シリーズＳ ＣＭ５センサーチップ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、ポリクローナル抗ヒトＩｇＧでコーティングした。次いで、抗ＢＴＬＡ抗体を、バイオセンサー表面に捕捉し、陰性対照抗体（ヒトＩｇＧ１ｋアイソタイプ対照；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌカタログ番号ＨＧ１Ｋ）を参照チャネルで捕捉した。次いで、様々な濃度の単量体可溶性ヒトＢＴＬＡ細胞外ドメイン（ＢＴＬＡＫ３１－Ｒ１５１、自家組換え産生）又は可溶性カニクイザルＢＴＬＡ細胞外ドメイン（ＢＴＬＡＫ３１－Ｒ１５１、自家組換え産生）を、単一サイクル動態分析において、３７℃で、緩衝液ＨＢＳ－ＥＰ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＢＲ１００６６９）、ｐＨ７．４（ＨＢＳ－Ｐ）中の固定化抗体上に注入した。ヒトＢＴＬＡの場合、４倍段階希釈で、６７３ｎＭ～１６４ｐＭの濃度を使用した。カニクイザルＢＴＬＡの場合、４倍段階希釈で、１３５１ｎＭ～３３０ｐＭの濃度を使用した。参照及びブランク減算後、ＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、会合速度及び解離速度をフィッティングし、解離定数を計算した（表５）。ヒト化２．８．６は、２．３３ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、１４７ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。ヒト化３Ｅ８バリアントＢ（３Ｅ８＿ｖａｒ＿Ｂ）は、１４１ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、１５２０ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。ヒト化６．２バリアントＡは、脱アミド化能及び異性化能をそれぞれ除去するようにＣＤＲＨ２にＤ５４Ｅ及びＮ５６Ｑ置換の両方を含み、１０．９ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、６９５ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。この結合は、親クローン６．２抗体（１．７ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、９．７１ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する）からの親和性の有意な低減を表す（表５）。６．２のヒト化バリアントは、ヒト化６．２バリアントＣ（又は６．２＿ｖａｒ＿Ｃ）と呼ばれ、ＣＤＲＨ２にＮ５６Ｑ置換のみを含むが、Ｄ５４Ｅ置換を含まず、１．２５ｎＭのＫＤでヒトＢＴＬＡに結合し、１５．４ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する。したがって、親クローンにより近い親和性を保持する。
実施例２２．細胞でのヒト化抗ＢＴＬＡ抗体のＢＴＬＡへの結合
本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体カニクイザルＢＴＬＡに結合する本発明のＢＴＬＡアゴニスト抗体の能力を、フローサイトメトリーによって評価した。レンチウイルストランスフェクションシステムを使用して、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞株で完全長ヒト又はカニクイザルＢＴＬＡを発現させた。１ウェル当たり１×１０５細胞を、９６ウェルＵ底プレートに播種した。ＢＴＬＡ抗体結合、対してｈＩｇＧ１ｋ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ対照（クローンＭＯＰＣ－２１、Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙによる組換え産生；重鎖配列番号２３０、軽鎖配列番号２３１）を、ＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、２％ＦＣＳ、０．０５％アジ化ナトリウム）中で１／３段階希釈（３０μｇ／ｍｌの濃度で開始）することによって、１２の濃度で評価した。非特異的な抗体結合は、Ｆｃブロック（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号１０１３１９）を添加することによって防止した。抗体を、氷上で６０分間、細胞とインキュベートし、次いで、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、ＡＦ６４７コンジュゲート抗ｈＩｇＧ二次抗体（クローンＨＰ６０１７；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄカタログ番号４０９３２０）で染色した。二次抗体を、氷上で３０分間インキュベートした後、細胞を、洗浄し、ＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁して、フローサイトメーターで分析した。二次抗体の幾何平均蛍光強度を、各濃度についてプロットし、受容体結合についてのＥＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、非線形曲線フィッティングによって計算した。ヒト化２．８．６は、０．０６６ｎＭのＥＣ５０でヒトＢＴＬＡ発現細胞に結合し（図１５ａ）、０．８５４ｎＭのＥＣ５０でカニクイザルＢＴＬＡ発現細胞に結合する（図１５ｂ）。ヒト化６．２＿ｖａｒ＿Ｃは、０．０６２ｎＭのＥＣ５０でヒトＢＴＬＡ発現細胞に結合し、０．１４８ｎＭのＥＣ５０でカニクイザルＢＴＬＡ発現細胞に結合する。ヒト化３Ｅ８＿ｖａｒ＿Ｂは、０．１７７ｎＭのＥＣ５０でヒトＢＴＬＡ発現細胞に結合し、１５．６ｎＭのＥＣ５０でカニクイザルＢＴＬＡ発現細胞に結合する。
実施例２３．ヒトＦｃ受容体に対するＦｃバリアント抗体の結合親和性
実施例１３では、驚くべきことに、ＢＴＬＡ抗体のアゴニスト機能は、抗体のＦｃ部分によるＦｃ受容体結合に依存し得ることが実証された。ヒトでは、１つの抑制性Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ２Ｂ）が存在する一方で、他のＦｃガンマ受容体は全て、免疫活性化シグナル（ＦｃγＲ１Ａ、ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ３Ａ、及びＦｃγＲ３Ｂ）を送達する。ＢＴＬＡアゴニスト抗体が、炎症性ＦｃＲシグナル伝達を誘発することなく免疫応答を抑制するのに有効であるために、本発明者らは、ＦｃγＲ２Ｂへの選択的なＦｃ結合が必要であり得ると提案する。ＦｃγＲ２Ｂへのより選択的な結合は、ＢＴＬＡ発現細胞上のＢＴＬＡを通して、及びＦｃγＲ２Ｂ発現細胞上のＦｃγＲ２Ｂを通して、双方向の抑制性シグナル伝達を促進し、これが、抗体の免疫抑制効果を強化するであろう。これは、免疫過剰活性化の疾患の治療を意図した治療用抗体において望ましい。逆に、ＦｃγＲ２Ｂに対する非常に高い親和性は、肝臓類洞上皮細胞における受容体の代謝回転に起因して、抗体の半減期に悪影響を及ぼし得る（Ｇａｎｅｓａｎ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８９（１０）：４９８１－８８，２０１２）。これは、７．７４ｎＭのＫＤでＦｃγＲ２Ｂに結合するＦｃγＲ２Ｂ増強ＩｇＧ１抗体ＸｍＡｂ７１９５によって実証されており（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２９（４）：１１０２－１５，２０１２、ｈｔｔｐｓ：／／ｌｉｎｋｉｎｇｈｕｂ．ｅｌｓｅｖｉｅｒ．ｃｏｍ／ｒｅｔｒｉｅｖｅ／ｐｉｉ／Ｓ００９１６７４９１１０１８３４３（Ｍａｙ １３，２０２０）、またＸｅｎｃｏｒによれば、野生型ＩｇＧ１の平均半減期が約２１日であるのに対して（Ｍｏｒｅｌｌ，Ｔｅｒｒｙ，ａｎｄ Ｗａｌｄｍａｎｎ．Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ４９（４）：６７３－８０，１９７０；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｃｉ．ｏｒｇ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｖｉｅｗ／１０６２７９（Ｍａｙ １６，２０２０））、第１ａ相試験では平均インビボ半減期が３．９日であることが報告された（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ（ＡＴＳ）２０１６ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ－Ａ６４７６：Ｐｏｓｔｅｒ Ｂｏａｒｄ Ｎｕｍｂｅｒ ４０７）。したがって、ＦｃγＲ２Ｂに対する選択性及びアゴニズムを支持する十分な結合は、ＢＴＬＡアゴニスト抗体にとって望ましい可能性があるが、ＦｃγＲ２Ｂに対する過剰に高い親和性は、結果的に短縮された半減期がより頻繁な投薬を必要とする可能性が高いので、治療において望ましくない可能性がある。
一連のＦｃ変異抗体バリアント（ヒト化２．８．６の可変ドメインを含む）を組換え産生し、それらの異なるヒトＦｃガンマ受容体への結合を、表面プラズモン共鳴（ｐＨ７．４の緩衝液ＨＢＳ－ＥＰ＋中、３７℃で）によって評価した。Ｆｃバリアントを、Ｆｃ－ＦｃＲ結合界面におけるそれらの位置に基づいて、ｈＩｇＧ１骨格若しくはｈＩｇＧ４骨格のいずれかに対して、ＦｃＲ結合に影響を及ぼすか又はそうする可能性が高いことが知られている置換を加えて（ｈＩｇＧ１ Ｇ２３６Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ１ Ｄ２６５Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｓ２６７Ｅ、ｈＩｇＧ１ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ１ Ａ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ１ Ｋ３２２Ａ、ｈＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２３８Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｇ２３７Ｄ、ｈＩｇＧ４ Ｐ２７１Ｇ、ｈＩｇＧ４ Ｓ３３０Ｒ、ｈＩｇＧ４ Ｆ２３４Ａ、ｈＩｇＧ４ Ｌ２３５Ａ）、組換え産生した。これらの変異を、単一の置換又は置換の組み合わせとして評価した。Ａｒｍｏｕｒら（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０（９）：５８５－９３，２００３）によって記載されているように、ｈＩｇＧ２から切り替えられた配列のセクションを含むバリアントも評価した（デルタｂ、デルタｃ、デルタａｂ、及びデルタａｃと呼ぶ）。ｍＩｇＧ１及びｍＩｇＧ１ Ｄ２６５ＡのヒトＦｃＲへの結合も評価した。
低親和性ＦｃγＲ（ＦｃγＲ２Ａ、ＦｃγＲ２Ｂ、ＦｃγＲ３Ａ、及びＦｃγＲ３Ｂ）について、分析物として組換え発現されたＦｃＲ（細胞外ドメインのみ）を用いて、その相互作用を表面プラズモン共鳴によって評価した。簡潔には、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅアミンカップリングキットを使用して、組換えヒトＢＴＬＡ細胞外ドメイン（ＢＴＬＡＫ３１－Ｒ１５１）を、ＣＭ５シリーズＳセンサーチップの全てのチャネルの両方のフローセルに共有結合的に固定化した。次いで、評価される２．８．６ Ｆｃバリアントを、各チャネルのフローセル２で捕捉した（約５００～１０００応答単位）。次いで、様々な濃度のＦｃＲを複数サイクル注入し、平衡結合を測定することによって、定常状態の親和性分析を行った。二重参照を使用した（参照Ｆｃ１におけるシグナルを差し引き、ブランクの濃度０の注入からのシグナルも差し引く）。ＫＤをラングミュア曲線から計算した（分析物の濃度に対して平衡結合をプロットして、半最大結合に必要な濃度を決定した）。
高親和性ＦｃＲ相互作用（ＦｃγＲ１Ａ、及びｐＨ６．０で評価したＦｃＲｎ）について、その結合を、分析物として抗体を用いて、動態分析で評価した。簡潔には、ビオチン化ＦｃＲ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ＦｃγＲ１Ａについてはカタログ番号１０２５６－Ｈ０８Ｓ－Ｂ、又はＦｃＲｎについてはカタログ番号ＣＴ００９－Ｈ０８Ｈ－Ｂ）を、提供されたプロトコルに従って、フローセル２でストレプトアビジンチップ（シリーズＳセンサーチップＳＡ－ＢＲ－１００５－３１）上で捕捉した。参照フローセル１は、全てのチャネルで空のままにした。次いで、精製された抗体を、単一濃度で注入し、オン／オフ速度をＢｉａＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアでの曲線フィッティングによって計算した。ｐＨ６．０でのＦｃＲｎ相互作用は、炎症性シグナル伝達を引き起こさないが、インビボでの維持された抗体半減期に必要であり、したがって、この相互作用は治療用抗体にとって望ましい。ＩｇＧ Ｆｃは、ＦｃＲｎに対する２つの結合部位を有するので、高密度で固定化されたＦｃＲｎを用いて実施されるこの評価は、真のＫＤではなく相互作用に対するアビディティ推定値を提供する。
それらが評価されたヒトＦｃ受容体の各々に結合するＦｃバリアントの各々についてのＫＤ値を表６に示す。Ｐ２３８Ｄ変異の存在は、ＦｃγＲ２Ｂに対する選択性を有意に増強した（ＦｃγＲ２Ｂに対する親和性をわずかに増加させる一方で、他のＦｃγＲに対する親和性を劇的に減少させることによって）。Ｖ９と命名されたＰ２３８Ｄを含む以前に記載されている変異の組み合わせ（Ｐ２３８Ｄ Ｇ２３７Ｄ Ｐ２７１Ｇ Ａ３３０Ｒ）（Ｍｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ
ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２６（１０）：５８９－９８，２０１３）は、ＦｃγＲ２Ｂに対する結合親和性を有意に増加させたが、ＦｃγＲ２Ａの１３１Ｒ多型バリアントに対する有意な結合も保持した。ＦｃγＲ２Ｂ選択性を増加させる同じ効果が、Ｐ２３８Ｄ単一置換又は組み合わせ置換がｈＩｇＧ４骨格に導入された場合に見られた。
実施例２４．ＮＦκＢレポーターアッセイにおけるヒト化ＢＴＬＡアゴニストによるＴ細胞活性化の抑制は、Ｆｃ受容体結合に依存する。
ＢＴＬＡは、Ｔ細胞上に発現される抑制性受容体であり、したがって、ＢＴＬＡに対するアゴニスト抗体は、受容体を介して抑制性シグナル伝達を誘導することによってＴ細胞活性化を抑制すると予想され得る。選択されたヒト化ＢＴＬＡアゴニスト抗体がＴ細胞活性化を抑制する能力を、ＢＴＬＡトランスフェクトレポーターＴ細胞株を使用して評価した。最小ＣＭＶプロモーター（ｍＣＭＶ）－ＧＦＰカセット（Ｓｏｕｒｃｅ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ番号ＴＲ８５０Ａ－１）の上流にＮＦ－κＢ応答性転写エレメントを含む発現カセットで安定的にトランスフェクトされたＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株を、ＮＦκＢシグナル伝達のためのレポーター細胞株として使用した。レンチウイルストランスフェクション系を使用して、このレポーター細胞株において完全長ヒトＢＴＬＡを発現させた。これらの細胞を、Ｌｅｉｔｎｅｒら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．３６２（１－２）：１３１－４１，２０１０）によって記載されているように、表面に抗ＣＤ３ ＳｃＦｖ構築物を発現するｂｗ５１４７細胞から構成される刺激細胞株と混合した。刺激細胞株にもヒトＦｃγＲ２Ｂをトランスフェクトして、アゴニストＢＴＬＡ抗体を提示するＦｃ受容体を提供した。１ウェル当たり５×１０４個のレポーター細胞を、９６ウェルＵ底プレート中で、様々な濃度のＢＴＬＡ抗体又はｈＩｇＧ１ｋアイソタイプ対照抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ｃａｔ＃ＨＧ１Ｋ）の存在下、５×１０４個の刺激細胞と混合した。細胞を、３７℃で２４時間インキュベートした後、ペレット化し、フローサイトメトリーのために、生存性色素（viability dye）（Ｚｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４２３１０１）及びマウスＣＤ４５抗体（Ｐｅ－Ｃｙ７コンジュゲートクローン１０４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号１０９８３０）で染色して、刺激細胞（マウス）を応答細胞（ヒト）から分離した。ＧＦＰ発現の幾何平均を、各抗体濃度について評価し、抗体の不在下でのＧＦＰ発現に対して正規化した。
ヒト化２．８．６を、ｈＩｇＧ４アイソタイプ、並びにｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ及びｈＩｇＧ１ Ｖ９（Ｐ２３８Ｄ Ｇ２３７Ｄ Ｐ２７１Ｇ Ａ３３０Ｒ）アイソタイプで試験した。２．８．６ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄは、２．８．６ ｈＩｇＧ４よりもＮＦκＢシグナルのより効果的な抑制をもたらし、２．８．６ ｈＩｇＧ１ Ｖ９は、更により効果的な抑制をもたらした（図１５ａ）。したがって、ＦｃγＲ２Ｂが存在する唯一のＦｃ受容体である条件において、ＦｃγＲ２Ｂに対する親和性の増加は、ＢＴＬＡアゴニスト抗体に優れたアゴニスト活性を付与する。同じ抗体を、刺激細胞がＦｃγＲ２Ｂを発現しないアッセイの改変バージョンで試験した場合、いずれの抗体の抑制効果も見られず、ＢＴＬＡの抗体アゴニズムが、抗体によるＦｃＲ結合に依存することが確認された（図１５ｂ）。２．８．６、６．２、及び３Ｅ８のマウスＩｇＧ１親抗体はまた、実施例２３で観察されたｍＩｇＧ１とｈＦｃγＲ２Ｂとの間の交差反応性と一致して、ヒトＦｃγＲ２Ｂが刺激細胞上で発現された場合、レポーターアッセイにおいてＴ細胞活性化を抑制することができた。
ヒト化２．８．６、６．２＿ｖａｒ＿Ｃ、及び３Ｅ８＿ｖａｒ＿Ｂを、全てｈＩｇＧ１
Ｐ２３８Ｄアイソタイプ上で産生し、上記のＴ細胞レポーターアッセイにおいて比較した。また、それらを、国際公開第２０１８／２１３１１３号に記載されている先行技術のＢＴＬＡアゴニスト２２Ｂ３（ｈＩｇＧ４ＰＡＡアイソタイプ上で発現）、及びｍＩｇＧ１ Ｆｃ領域に融合された天然ＢＴＬＡリガンドＨＶＥＭの融合タンパク質（ｈＨＶＥＭ－ｍＦｃ、独自に組換え産生；シグナルペプチド及びＣ末端Ｈｉｓタグを含むｈＨＶＥＭ－ｍＦｃ融合タンパク質は、配列番号２２９に開示されている配列を有する）と比較した。ヒト化Ｐ２３８Ｄバリアント抗体の３つ全てが、２２Ｂ３又はｈＨＶＥＭ－ｍＦｃと比較して、ＮＦκＢシグナルの有意に大きな抑制を実証した（図１６ａ）。３Ｅ８＿ｖａｒ＿Ｂは、６５ｐＭのＩＣ５０でＮＦκＢシグナルを最大５４％抑制した。６．２＿ｖａｒ＿Ｃは、２８ｐＭのＩＣ５０でＮＦκＢシグナルを最大４７％抑制した。２．８．６は、５９ｐＭのＩＣ５０で最大４２％抑制した。２２Ｂ３は、３．８ｎＭのＩＣ５０でＮＦκＢシグナルを最大１８％抑制した。ｈＨＶＥＭ－ｍＦｃは、９．６ｎＭのＩＣ５０でＮＦκＢシグナルを最大２７％抑制した。したがって、ＦｃγＲ２Ｂが存在する唯一のＦｃ受容体である条件では、ヒト化２．８．６ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、６．２＿ｖａｒ＿Ｃ
ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８、及び３Ｅ８ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄは全て、先行技術の抗体２２Ｂ３ ｈＩｇＧ４ＰＡＡよりも有意に効果的で強力なＢＴＬＡのアゴニストであり、Ｆｃ融合タンパク質としての内因性リガンドＨＶＥＭよりも強いシグナルを送達する。
実施例２５．ヒト化ＢＴＬＡアゴニストによる混合リンパ球反応における初代ヒトＴ細胞増殖の抑制
選択されたＢＴＬＡアゴニスト抗体がヒトＴ細胞増殖を抑制する能力を、混合リンパ球反応（ＭＬＲ）の文脈で評価した。簡潔には、ヒト初代Ｔ細胞を、ヒトＰａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃカタログ番号１３０－０９６－５３５）を使用して、健常ドナー末梢血単核細胞（peripheral blood mononuclear cell、ＰＢＭＣ）から単離し、細胞増殖追跡色素であるＴａｇ－ｉｔ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４２５１０１）で染色した。同種単球由来樹状細胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ
ｃｅｌｌ、ＤＣ）を、ＣＤ１４＋単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃカタログ番号１３０－０５０－２０１）を使用してＰＢＭＣから単離したＣＤ１４＋単球を培養することによって生成した。ＣＤ１４＋単球をヒト組換えＩＬ－４（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈカタログ番号２００－０４）及びＧＭ－ＣＳＦ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号５７２９０４）で７日間処理した。次いで、ヒト組換えＴＮＦ－α（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号７１７９０４）を更に添加することによって、ＤＣ成熟化を２日間誘導した。成熟樹状細胞は、活性化ＦｃγＲ及び抑制性ＦｃγＲの両方を発現する（Ｇｕｉｌｌｉａｍｓ
ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４（２）：９４－１０８，２０１４．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｎｒｉ３５８２（Ｍａｙ １８，２０２０））。
次いで、平底９６ウェルプレートで、１×１０５個の全Ｔ細胞を、同種成熟ＤＣと４：１（Ｔ：ＤＣ）の比率で共培養することによってＭＬＲを行った。Ｔ細胞及びＤＣを、抗体なしで、又は異なる用量のＢＴＬＡアゴニスト抗体（２．８．６ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、２．８．６ ｈＩｇＧ１ Ｖ９、２．８．６ ＩｇＧ４）、ｈＩｇＧ１ｋアイソタイプ対照抗体（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓカタログ番号ＨＧ１Ｋ）、若しくは先行技術のＢＴＬＡアゴニスト２２Ｂ３ ｈＩｇＧ４ＰＡＡの存在下で、５日間インキュベートした。５日後、Ｔ細胞増殖を、フローサイトメトリーによって評価した。Ｔ細胞を採取し、抗ＣＤ３抗体（ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５コンジュゲートクローンＯＫＴ３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号３１７３３６）、抗ＣＤ４抗体（ＢＢ５１５コンジュゲートクローンＲＰＡ－Ｔ４、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎカタログ番号５６４４１９）、抗ＣＤ８抗体（ＢＶ５１０コンジュゲートクローンＳＫ１、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎカタログ番号５６３９１９）を用いて、生存性色素（Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４２３１０５）とともに染色し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｅｓｔａ機器で取得した。抗体の存在下でのＣＤ４の増殖（ＣＴＶ低細胞の割合（％）として測定された）を、抗体の不在下での平均増殖に対して正規化した。図１７は、異なるＰＢＭＣドナーを用いた６つの別個のＭＬＲからの組み合わせたデータを示す。ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ上の抗体２．８．６は、１０μｇ／ｍｌで５１％の平均抑制効果で、ＣＤ４ Ｔ細胞増殖を有意に抑制した。ｈＩｇＧ１ Ｖ９アイソタイプ又はｈＩｇＧ４アイソタイプのいずれかに対する抗体２．８．６は、抑制効果を有しなかった。したがって、予想外に、複数のＦｃ受容体が存在する条件下で、ＦｃγＲ２Ｂに選択的に結合するｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプは、試験した他のアイソタイプよりも優れたアゴニスト活性をＢＴＬＡアゴニストに付与する。Ｐ２３８Ｄアイソタイプよりも約３０倍高い親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合するｈＩｇＧ１ Ｖ９アイソタイプのこの設定における有効性のなさは、ＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒ）（これに対しても有意な結合を保持する）を介した活性化シグナル伝達に起因する可能性がある。あるいは、ｈＩｇＧ１ Ｖ９アイソタイプの無効性は、同じ細胞表面上（例えば、両方の受容体を発現する樹状細胞上）の抗体、ＢＴＬＡ及びＦｃγＲ２Ｂの間のシス相互作用の安定な形成に起因する可能性があり、これは、シグナル伝達を誘導しない可能性があるが、異なる細胞上の抗体、ＢＴＬＡ及びＦｃγＲ２Ｂの間の生産的トランス相互作用の形成を遮断する。ＦｃγＲ２Ｂに対するＰ２３８Ｄアイソタイプのより低い親和性は、これらのシス相互作用が形成される場合、それらはより短命であり、トランス相互作用を完全に遮断しないことを意味し得る。
２２Ｂ３ ｈＩｇＧ４ＰＡＡはまた、混合リンパ球反応において抑制効果を有せず、実際に、ＣＤ４ Ｔ細胞の増殖を増加させる傾向があり、これは、リガンドＨＶＥＭとのその相互作用を妨げることによって抗体がＢＴＬＡを介して天然の抑制性シグナル伝達を遮断することで説明され得る。抗体６．２、３Ｅ８、及び２８６は、ＨＶＥＭ結合界面と重複せずにＢＴＬＡ上のエピトープに結合するため、これらの抗体は、ＢＴＬＡ－ＨＶＥＭ相互作用を遮断しない（実施例１９）。
実施例２６．ＢＴＬＡアゴニストによる初代ヒトＢ細胞の活性化の抑制
初代ヒトＢ細胞の活性化を抑制するＢＴＬＡアゴニスト抗体の能力を評価した。Ｂ細胞は、ＢＴＬＡ及びＦｃγＲ２Ｂの両方を高レベルで発現する。
ヒト初代Ｂ細胞を、ヒトＢ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃカタログ番号１３０－０５０－３０１）を使用して、健常ドナー末梢血単核細胞から単離し、細胞増殖追跡色素であるＴａｇ－ｉｔ Ｖｉｏｌｅｔ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ｃａｔ＃４２５１０１）で染色した。
次いで、９６ウェル平底プレートの１ウェル当たり１×１０５個のＢ細胞を、異なる用量のアイソタイプ対照抗体又は選択されたＢＴＬＡアゴニスト抗体の存在下又は不在下で、０．０１μＭのＴＬＲ９アゴニストＯＤＮ２００６（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎカタログ番号ｔｌｒｌ－２００６－１）で刺激した。ＢＴＬＡアゴニスト２．８．６、６．２＿ｖａｒ＿Ｃ、及び３Ｅ８＿ｖａｒ＿Ｂ（全てｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ）を試験し、先行技術のＢＴＬＡアゴニスト２２Ｂ３ ｈＩｇＧ４ＰＡＡと比較した。組換えＨＶＥＭ融合タンパク質（ｈＨＶＥＭ－ｍＦｃ、独自に産生）を陽性対照として使用した。３７℃で５日間インキュベートした後、Ｂ細胞を採取し、抗ＣＤ２０抗体（ＰＥ－ＣＦ５９４コンジュゲートクローン２Ｈ７、ＢＤ Ｈｏｒｉｚｏｎ番号５６２２９５）を用いて、生存性色素（Ｚｏｍｂｉｅ ＮＩＲ，Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ番号４２３１０５）とともに染色し、フローサイトメトリーによってそれらの増殖を評価した。更に、培養上清を回収して、ＩＬ－６（ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＤＹ２０６）及びＩＬ－１０（ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号ＤＹ２１７Ｂ）の産生を、ＥＬＩＳＡによって評価した。
基本的には上記の手順に従って、ＢＴＬＡアゴニスト抗体は、ｈＨＶＥＭ－ｍＦｃ陽性対照と同じくらい効率的にＢ細胞増殖を抑制することができた。加えて、３つ全ての抗体バリアントは、２２Ｂ３と比較して、Ｂ細胞増殖の有意に大きな抑制を実証した。更に、Ｐ２３８Ｄ ＢＴＬＡアゴニストは、活性化Ｂ細胞によるＩＬ－１０（図１８）及びＩＬ－６の産生を障害した。増殖データと一致して、ＩＬ－１０及びＩＬ－６の産生を抑制するＰ２３８Ｄ ＢＴＬＡ抗体の能力は、２２Ｂ３抗体と比較してより大きかった。
実施例２７．移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の異種モデルの治療
ヒトＰＢＭＣ誘導性移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の予防を、インビボで決定した。
簡潔には、約８～１０週齢の雌ＮＳＧマウス（ＪＡＸ Ｌａｂｓ、ストック番号０５５５７）（処置群当たりｎ＝１０マウス）を、２．４Ｇｙの全身照射で放射線照射した。ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ロイコパック（ｌｅｕｋｏｐａｋ）（Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓから注文したＨｅｍａＣａｒｅ製品）から単離し、１ｍｌのＰＢＳ当たり５０×１０６細胞で再懸濁した。放射線照射の１日後、マウスに、２００μｌの細胞懸濁液（１０×１０６個のＰＢＭＣ）を尾静脈（ＩＶ）注射によって注射する。翌日、マウスを腹腔内注射によって、１０ｍｇ／ｋｇの試験抗体で処置する。マウスを定期的に秤量し、重量が１５％減少した場合、又は２８日後に安楽死させる。試験終了時に、肺、肝臓、及び脾臓へのヒトＰＢＭＣの浸潤を、ｈＣＤ４５、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８、ｈＣＤ２０、ｈＣＤ２５、及びＦＯＸＰ３のマーカーを使用して、フローサイトメトリーによって定量する。
上記の手順に従って、ヒト化２．８．６ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、６．２＿ｖａｒ＿Ｃ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄ、及び３Ｅ８＿ｖａｒ＿Ｂ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄは全て、ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ対照と比較して重量減少を有意に低減し（図１９）、肺、肝臓、及び脾臓における浸潤性ヒト免疫細胞の有意な低減をもたらした。制御性Ｔ細胞の頻度が増加する傾向も、３つ全てのＢＴＬＡアゴニストで観察された。
実施例２８．カニクイザルにおけるＰ２３８Ｄ変異ｈＩｇＧ１抗体のインビボ半減期及びヒト半減期の予測
カニクイザルにおけるｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプに対する６．２＿ｖａｒ＿Ｃのインビボ半減期を評価した。２匹の雌マカクに、３ｍｇ／ｋｇの抗体を静脈内注射し、２匹の雌マカクに、１０ｍｇ／ｋｇの抗体を注射した。マカクを、抗体注入の前、並びに抗体注入の１時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間、１６８時間、２４０時間、３３６時間、４３２時間及び５０４時間後に採血した。これらの各時点における血清中の６．２＿ｖａｒ＿Ｃの濃度を、標的捕捉ＥＬＩＳＡによって評価した。９６ウェルマイクロプレート（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号４３９４５４）を、ＰＢＳ中１ｕｇ／ｍｌの１００μｌのヒトＢＴＬＡ細胞外ドメインで、４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを洗浄緩衝液（０．０５％のＴｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号２８３２０））で３回洗浄し、ウェルを、３００μｌのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３７５１５）で、室温で１時間ブロッキングし、続いて、洗浄緩衝液で再び３回洗浄した。次いで、ＥＬＩＳＡ緩衝液（ＰＢＳ、１％ウシ血清アルブミン、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）に希釈した１００μｌの血清試料を添加し、室温で１時間インキュベートした。ＥＬＩＳＡ緩衝液中の既知の濃度の６．２＿ｖａｒ＿Ｃの１１点標準曲線を二連で、及びブランクとして使用されるＥＬＩＳＡ緩衝液のみを含む二連のウェルで実施した。インキュベーション後、ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、ＥＬＩＳＡ緩衝液中で２０，０００倍希釈したＨＲＰコンジュゲート抗ヒト検出抗体（Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ９８６２４）を、添加し、室温で１時間インキュベートした。再び、ウェルを洗浄緩衝液で３回洗浄し、次いで、１ウェル当たり１００μＬのＵｌｔｒａ ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ基質溶液（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号３４０２８）を添加した。プレートが直接照明下にないことを確実にするためにホイルで覆って９０秒間インキュベートし、次いで、１ウェル当たり５０μＬの停止溶液（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ番号ＳＳ０４）を添加した。次いで、４５０ｎｍでの吸光度を、Ｔｈｅｒｍｏ ＭｕｌｔｉＳｋａｎ ＦＣで読み取った。濃度は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、標準曲線から補間した。
各時点での血清抗体濃度を使用して、各サルにおける薬物動態を、２コンパートメントモデルでフィッティングした（Ｄｉｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ ４９（１０）：６３３－６５９，２０１０）。マカクにおける平均終末相半減期は、５．４日（１３０時間）と計算された。次いで、モデルのパラメータ（分布容積Ｖ１及びＶ２、クリアランスＣ１、及びコンパートメント間交換係数Ｑ）を、アロメトリックスケーリングを使用して、ヒトに合わせてスケーリングした。アロメトリックスケーリングを用いて、種についてのｐａｒａｍｅｔｅｒ１（体重ＢＷ１）を、別の種についてのｐａｒａｍｅｔｅｒ２（体重ＢＷ２）から、以下の式を用いて推定され：
式中、βは、所与のパラメータに対するスケーリング係数である。このアプローチは、十分に実証されており、前臨床の種からのヒトにおける適切な予測を提供することが示されている（Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ，５０（２）：１３１－１４２，２０１１及びＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ＆ ｄｒｕｇ ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ，３１：２５３－２６３，２０１０）。
ヒトの場合、７０ｋｇの体重を想定した。カニクイザルの場合、３ｋｇの参照体重を使用した。大分子についての理論的スケーリング指数を使用した：Ｖ１及びＶ２についてβ＝１、Ｃｌについてβ＝０．７５（Ｋｌｅｉｂｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｌｇａｒｄｉａ ６（１１）：３１５－３３３．１９３２に記載の通り）、及びＱについてβ＝２／３。コンパートメント間交換係数Ｑのスケーリングの場合、化合物の交換速度が血管内皮の表面積に依存すると仮定した。この仮定は、以下のように記述されるコンパートメント間交換の実装に基づく：
Ｑ・（ｃｐ－ｃｔ）＝Ｐ・Ｓ・（ｃｐ－ｃｔ）
式中、ｃｐ－ｃｔは、血管境界を横切る濃度差であり、Ｐは、血管透過係数（単位はｍ／ｓ）であり、Ｓは、交換に関与する血管系の表面積（単位はｍ２）である。血管透過性Ｐが分子の特性であると仮定され、種には依存しない。種間の唯一の違いは、血管の表面積であり、体重により２／３の係数でスケーリングされる。これらの引数を用いて、Ｑについて仮定されたスケーリング値は、２／３である。
次いで、ヒトにおいて予測される終末相半減期を、２コンパートメントモデルを使用して、スケーリングされたパラメータから計算した。ヒトにおける平均予測半減期は、１２．５日（３００時間）と計算された。
本発明のある特定の実施形態
１．ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加をもたらす置換を含むＦｃ領域を含む、単離された抗体。
２．置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２ＡよりもＦｃγＲ２Ｂに結合する選択性を有する、実施形態１に記載の抗体。
３．抗体が、
（ｉ）親ポリペプチドと比較して、増強されたＦｃγＲ２Ｂ結合活性、並びにＦｃγＲ２Ａ（Ｒ型）及び／若しくはＦｃγＲ２Ａ（Ｈ型）に対する維持若しくは低減された結合活性、並びに／又は
（ｉｉ）２以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、若しくはそれ以上）の［ＦｃγＲ２Ａ（Ｒ型）に対するポリペプチドバリアントのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するポリペプチドバリアントのＫＤ値］の値、並びに／又は
（ｉｉｉ）２以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、若しくはそれ以上）の［ＦｃγＲ２Ａ（Ｈ型）に対するポリペプチドバリアントのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するポリペプチドバリアントのＫＤ値］の値、並びに／又は
（ｉｖ）親ポリペプチドと比較して、増強されたＦｃγＲ２Ｂ結合活性、及びＦｃγＲ１Ａに対する維持若しくは低減された結合活性、並びに／又は
（ｖ）２以上（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、若しくはそれ以上）の［ＦｃγＲ１Ａに対するポリペプチドバリアントのＫＤ値］／［ＦｃγＲ２Ｂに対するポリペプチドバリアントのＫＤ値］の値、を有する、実施形態１又は２に記載の抗体。
４．抗体が、
（ｉ）Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２（配列番号２２５による位置）、又は
（ｉｉ）Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７、又は
（ｉｉｉ）Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３、又は
（ｉｖ）Ｈ６８、又は
（ｖ）Ｎ６５及びＡ６４、から選択されるヒトＢＴＬＡの残基に結合し、
各位置が、配列番号２２５に開示されるアミノ酸配列に関連する、実施形態１～３のいずれか一項に記載の抗体。
５．ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する抗体であって、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、当該重鎖が、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、又は２９７位のアラニン（Ａ）（番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む、抗体。
６．次いで、当該重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む、実施形態５に記載の抗体。
７．アゴニスト抗体である、実施形態１～６のいずれか一項に記載の抗体。
８．当該抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より高い親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合する、実施形態６に記載の抗体。
９．当該抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、約５μＭ～０．１μＭの親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合する、実施形態１～８のいずれか一項に記載の抗体。
１０．当該抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、最大５μＭの親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合する、実施形態１から９のいずれか一項に記載の方法。
１１．当該抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より低い又は等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、実施形態６～１０のいずれか一項に記載の抗体。
１２．当該抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも２０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合する、実施形態１～１１のいずれか一項に記載の抗体。
１３．当該抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より低い又は等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、実施形態６～１２のいずれか一項に記載の抗体。
１４．当該抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合する、実施形態１～１３のいずれか一項に記載の抗体。
１５．当該抗体が、実施例２４に記載されているようなＴ細胞活性化アッセイ、実施例２５に記載されているような混合リンパ球反応、又は実施例２６に記載されているようなＢ細胞活性化アッセイから選択されるＢＴＬＡアゴニストアッセイによって測定される場合、ヒト免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡのアゴニズムの増加を示す、実施形態１～１４のいずれか一項に記載の抗体。
１６．ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、当該抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、Ｆｃ領域と、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域と、を含み、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、（１）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１７、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、（２）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０、２１、及び２２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、又は（３）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、Ｆｃ領域が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む、単離された抗体。
１７．ＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、（１）重鎖が、配列番号１８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域と、を含み、軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含むか、又は（２）重鎖が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域と、を含み、軽鎖が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含むか、又は（３）重鎖が、配列番号３６に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域と、を含み、軽鎖が、配列番号４３に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体。
１８．ＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、（１）重鎖が、配列番号１９に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、（２）重鎖が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、又は（３）重鎖が、配列番号３８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号４４に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、（１）、（２）、及び（３）の各々について、重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む、単離された抗体。
１９．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態１～１８のいずれか一項に記載の抗体。
２０．ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）からなる群から選択される、実施形態１～１９のいずれか一項に記載の抗体。
２１．モノクローナルである、実施形態１～２０のいずれか一項に記載の抗体。
２２．当該抗体が、細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡをアゴナイズし、任意選択的に、当該免疫細胞が、Ｔ細胞である、実施形態１～２１のいずれか一項に記載の抗体。
２３．免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡへの当該抗体の結合が、当該抗体によって結合されない同等の免疫細胞と比較して、当該細胞の増殖を減少させ、当該細胞が、任意選択的に、Ｔ細胞である、実施形態１～２２のいずれか一項に記載の抗体。
２４．当該細胞増殖の減少が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、又は５０％である、実施形態２３に記載の抗体。
２５．当該細胞増殖の減少が、約１０％～５０％、１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、１０％～１５％、２０％～５０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％である、実施形態２３に記載の抗体。
２６．当該抗体が、Ｆｃ受容体に結合するドメインを含む、実施形態１～２５のいずれか一項に記載の抗体。
２７．当該Ｆｃ受容体が、免疫細胞の表面に発現される、実施形態１～２６のいずれか一項に記載の抗体。
２８．当該免疫細胞が、抗原提示細胞である、実施形態２７に記載の抗体。
２９．当該抗原提示細胞が、樹状細胞、マクロファージ、単球、又は好中球である、実施形態２８に記載の抗体。
３０．当該抗体が、Ｔ細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡに結合する、実施形態１～２９のいずれか一項に記載の抗体。
３１．当該Ｆｃ受容体が、ＦｃγＲ２Ｂである、実施形態２６～３０のいずれか一項に記載の抗体。
３２．免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡへの当該抗体の結合が、当該抗体によって結合されない同等の免疫細胞と比較して、当該免疫細胞のＮＦκＢシグナル伝達を減少させ、任意選択的に、当該免疫細胞が、Ｔ細胞である、実施形態１～３１のいずれか一項に記載の抗体。
３３．当該免疫細胞のＮＦκＢシグナル伝達の当該減少が、実施例１０に記載のアッセイによって測定される、実施形態３２に記載の抗体。
３３．当該免疫細胞のＮＦκＢシグナル伝達の当該減少が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、又は４０％である、実施形態３２又は３３に記載の抗体。
３４．当該免疫細胞のＮＦκＢシグナル伝達の当該減少が、約１０％～４０％、１０％～３０％、１０％～２０％、２０％～４０％、又は２０％～３０％である、実施形態３２又は３３に記載の抗体。
３５．免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡへの当該抗体の結合が、当該ヒトＢＴＬＡの細胞質ドメインの脱リン酸化を減少させる、実施形態１～３４のいずれか一項に記載の抗体。
３６．当該脱リン酸化が、当該免疫細胞の表面に発現されたＣＤ４５によって媒介される、実施形態３５に記載の抗体。
３７．当該抗体が、各々、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合し、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、実施形態１～３６のいずれか一項に記載の抗体。
３８．当該抗体が、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に、３７℃で、少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度で結合する、実施形態３７に記載の抗体。
３９．当該抗体が、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に、３７℃で、３．０×１０－４（１／ｓ）未満のオフ速度で結合する、実施形態３７又は３８に記載の抗体。
４０．当該抗体が、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に、３．０×１０－４（１／ｓ）～１．０×１０－３（１／ｓ）のオフ速度で結合する、実施形態３７～３９のいずれか一項に記載の抗体。
４１．当該抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、当該抗体が、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、実施形態１～４０のいずれか一項に記載の抗体。
４２．当該抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に結合する、実施形態１～４１のいずれか一項に記載の抗体。
４３．当該抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合する、実施形態１～４２のいずれか一項に記載の抗体。
４４．当該抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、３．０×１０－４（１／Ｍｓ）～１．０×１０－３（１／Ｍｓ）のオフ速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、当該抗体が、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、実施形態１～４３のいずれか一項に記載の抗体。
４５．当該抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって各々測定される場合、１．０×１０－３（１／Ｍｓ）未満のオフ速度及び少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度でヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、当該抗体が、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、実施形態１～４４のいずれか一項に記載の抗体。
４６．当該抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、２ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、実施形態１～４５のいずれか一項に記載の抗体。
４７．当該抗体が、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合し、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制し、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、実施形態１～４６のいずれか一項に記載の抗体。
４８．当該抗体が、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５０ｎＭのＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合し、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、混合リンパ球反応アッセイによって決定されるように、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、実施形態１～４７のいずれか一項に記載の抗体。
４９．ヒト体内で少なくとも７日のインビボ半減期を有する、実施形態１～４８のいずれか一項に記載の抗体。
５０．実施形態１～４９のいずれか一項に記載の抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、核酸。
５１．実施形態５０に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
５２．実施形態５０又は５１に記載の核酸配列を含む、宿主細胞。
５３．ＢＴＬＡに結合する抗体（又はＢＴＬＡ結合分子）を産生する方法であって、当該抗体の産生のための条件下で、実施形態５２に記載の宿主細胞を培養するステップを含み、任意選択的に、当該抗体を単離及び／又は精製することを更に含む、方法。
５４．ＢＴＬＡに特異的に結合するヒト抗体（又はＢＴＬＡ結合分子）を調製するための方法であって、
（ｉ）発現された場合に実施形態１～４９のいずれか一項に記載の抗体を作製するために組み合わせることができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供するステップと、
（ｉｉ）コードされたアミノ酸配列を発現する宿主細胞を培養するステップと、
（ｉｉｉ）抗体を単離するステップと、を含む、方法。
５５．治療有効量の実施形態１～４９のいずれか一項に記載の抗体と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
５６．療法に使用するための、実施形態１～４９のいずれか一項に記載の抗体、又は実施形態５５に記載の薬学的組成物。
５７．炎症性疾患又は自己免疫疾患、及び過剰な免疫細胞増殖の障害の治療又は予防に使用するための、実施形態１～４９のいずれか一項に記載の抗体、又は実施形態５５に記載の薬学的組成物。
５８．炎症性疾患又は自己免疫性疾患が、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息（アレルギー性喘息を含む）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫多腺性症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳性マラリア、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症、及び肝硬変）、若年性関節炎、川崎病、白血病、リンパ腫、リンパ増殖性障害、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、視神経脊髄炎、天疱瘡、多発性筋炎、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植片拒絶、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、及びフォークト・小柳・原田病から選択される、実施形態５６に記載の使用のための抗体。
５９．過剰な免疫細胞増殖の障害が、リンパ腫、白血病、全身性肥満細胞症、骨髄腫、又はリンパ増殖性障害から選択される、実施形態５７に記載の使用のための抗体。
６０．Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１７、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有し、当該重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む、単離された抗体。
６１．ＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、配列番号１８に示されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含み、重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む、単離された抗体。
６２．軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列又はそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、実施形態６１に記載の単離された抗体。
６３．重鎖が、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列を含む、実施形態６０～６２のいずれか一項に記載の単離された抗体。
６４．ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号２１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号２２に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号２３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号２４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号２５に示されるアミノ酸配列を有し、当該重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む、単離された抗体。
６５．重鎖が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む、実施形態６４に記載の単離された抗体。
６６．ヒトＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１が、配列番号３０に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ２が、配列番号３１に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＨ３が、配列番号３２に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号３３に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号３４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号３５に示されるアミノ酸配列を有し、当該重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む、単離された抗体。
６７．重鎖が、配列番号３８に示されるアミノ酸配列を含み、軽鎖が、配列番号３９に示されるアミノ酸配列を含む、実施形態６６に記載の単離された抗体。
６８．ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４抗体である、実施形態６０～６７又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体。
６９．ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）からなる群から選択される、実施形態６０～６８又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体。
７０．ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、及びダイアボディからなる群から選択される抗原結合断片部分である、実施形態６０～６９又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体。
７１．モノクローナルである、実施形態６０～７０又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体。
７２．当該抗体が、免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡをアゴナイズし、任意選択的に、当該免疫細胞が、Ｔ細胞である、実施形態６０～７１又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体。
７３．免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡへの当該抗体の結合が、当該抗体によって結合されない同等の免疫細胞と比較して、当該細胞の増殖を減少させ、当該細胞が、任意選択的に、Ｔ細胞である、実施形態６０～７２又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体。
７４．実施形態６０～７３又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸。
７５．実施形態７４に記載の核酸配列を含む、宿主細胞。
７６．ＢＴＬＡに結合する抗体を産生する方法であって、当該抗体の産生のための条件下で、実施形態７５に記載の宿主細胞を培養するステップを含み、任意選択的に、当該抗体を単離及び／又は精製することを更に含む、方法。
７７．ＢＴＬＡに特異的に結合するヒト抗体を調製するための方法であって、
ｉ）発現された場合に実施形態６０～７３又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体を作製するために組み合わせることができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供するステップと、
ｉｉ）コードされたアミノ酸配列を発現する宿主細胞を培養するステップと、
ｉｉｉ）抗体を単離するステップと、を含む、方法。
７８．治療有効量の実施形態６０～７３又は８２～８４のいずれか一項に記載の抗体と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
７９．療法に使用するための、実施形態６０～７３若しくは８２～８４のいずれか一項に記載の抗体、又は実施形態７８に記載の薬学的組成物。
８０．炎症性疾患又は自己免疫疾患、及び過剰な免疫細胞増殖の障害の治療又は予防に使用するための、実施形態６０～７３若しくは８２～８４のいずれか一項に記載の抗体、又は実施形態７８に記載の薬学的組成物。
８１．炎症性疾患又は自己免疫性疾患が、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息（アレルギー性喘息を含む）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫多腺性症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳性マラリア、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症、及び肝硬変）、若年性関節炎、川崎病、白血病、リンパ腫、リンパ増殖性障害、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、視神経脊髄炎、天疱瘡、多発性筋炎、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植片拒絶、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、及びフォークト・小柳・原田病から選択される、請求項８０に記載の使用のための抗体。
８２．ＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、（１）重鎖が、配列番号１８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含み、軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体。
８３．ＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、（１）重鎖が、配列番号１９に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、単離された抗体。
８４．Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１７、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有し、かつ／又は
（ｂ）重鎖が、配列番号１８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含み、かつ／又は
（ｃ）軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含み、
任意選択的に、抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４抗体である、単離されたヒト抗体。
配列：
配列番号２２５ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＢＴＬＡポリペプチド。１～３０位はシグナル配列であり、３１～１５１位は細胞外領域であり、１５２～１７８位は膜貫通領域であり、１７９位～末端は細胞内領域である。
ＭＫＴＬＰＡＭＬＧＴＧＫＬＦＷＶＦＦＬＩＰＹＬＤＩＷＮＩＨＧＫＥＳＣＤＶＱＬＹＩＫＲＱＳＥＨＳＩＬＡＧＤＰＦＥＬＥＣ ＰＶＫＹＣＡＮＲＰＨＶＴＷＣＫＬＮＧＴＴＣＶＫＬＥＤＲＱＴＳＷＫＥＥＫＮＩＳＦＦＩＬＨＦＥＰＶＬＰＮＤＮＧＳＹＲＣ ＳＡＮＦＱＳＮＬＩＥＳＨＳＴＴＬＹＶＴＤＶＫＳＡＳＥＲＰＳＫＤＥＭＡＳＲＰＷＬＬＹＲＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬ ＦＣＣＬＲＲＨＱＧＫＱＮＥＬＳＤＴＡＧＲＥＩＮＬＶＤＡＨＬＫＳＥＱＴＥＡＳＴＲＱＮＳＱＶＬＬＳＥＴＧＩＹＤＮＤＰＤ ＬＣＦＲＭＱＥＧＳ ＥＶＹＳＮＰＣＬＥＥＮＫＰＧＩＶＹＡＳＬＮＨＳＶＩＧＰＮＳＲＬＡＲＮＶＫＥＡＰＴＥＹＡＳＩＣＶＲＳ
配列番号２２６ カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＢＴＬＡポリペプチド。
ＭＫＴＬＰＡＭＬＧＳＧＲＬＦＷＶＶＦＬＩＰＹＬＤＩＷＮＩＨＧＫＥＳＣＤＶＱＬＹＩＫＲＱＳＹＨＳＩＦＡＧＤＰＦＫＬＥＣＰＶ
ＫＹＣＡＨＲＰＱＶＴＷＣＫＬＮＧＴＴＣＶＫＬＥＧＲＨＴＳＷＫＱＥＫＮＬＳＦＦＩＬＨＦＥＰＶＬＰＳＤＮＧＳＹＲＣＳＡＮＦＬＳＡＩＩＥＳＨＳＴＴＬＹＶＴＤＶＫＳＡＳＥＲＰＳＫＤＥＭＡＳＲＰＷＬＬＹＳＬＬＰＬＧＧＬＰＬＬＩＴＴＣＦＣＬＦＣＦＬＲＲ
ＨＱＧＫＱＮＥＬＳＤＴＴＧＲＥＩＴＬＶＤＶＰＦＫＳＥＱＴＥＡＳＴＲＱＮＳＱＶＬＬＳＥＴＧＩＹＤＮＥＰＤＦＣＦＲＭＱＥＧＳ
ＥＶＹＳＮＰＣＬＥＥＮＫＰＧＩＩＹＡＳＬＮＨＳＩＩＧＬＮＳＲＱＡＲＮＶＫＥＡＰＴＥＹＡＳＩＣＶＲＳ
配列番号２２７ ｈＩｇＧ１定常領域（２３８Ｄを含む）。
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＤＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２２８ ｈκ定常領域。
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２２９ ｈＨＶＥＭ－ｍＦｃ融合タンパク質（シグナルペプチド及びＣ末端Ｈｉｓタグを含む）。
ＭＥＰＰＧＤＷＧＰＰＰＷＲＳＴＰＲＴＤＶＬＲＬＶＬＹＬＴＦＬＧＡＰＣＹＡＰＡＬＰＳＣＫＥＤＥＹＰＶＧＳＥＣＣＰＫＣＳＰＧＹＲＶＫＥＡＣＧＥＬＴＧＴＶＣＥＰＣＰＰＧＴＹＩＡＨＬＮＧＬＳＫＣＬＱＣＱＭＣＤＰＡＭＧＬＲＡＳＲＮＣＳＲＴＥＮＡＶＣＧＣＳＰＧＨＦＣＩＶＱＤＧＤＨＣＡＡＣＲＡＹＡＴＳＳＰＧＱＲＶＱＫＧＧＴＥＳＱＤＴＬＣＱＮＣＰＰＧＴＦＳＰＮＧＴＬＥＥＣＱＨＱＴＫＣＳＷＬＶＴＫＡＧＡＧＴＳＳＳＨＬＶＰＲＧＳＧＳＫＰＳＩＳＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫＨＨＨＨＨＨ
配列番号２３０ Ｍｏｐｃ２１ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ対照重鎖。
ＤＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＲＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＦＧＭＨＷＶＲＱＡＰＥＫＧＬＥＷＶＡＹＩＳＳＧＳＳＴＬＨＹＡＤＴＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＰＫＮＴＬＦＬＱＭＴＳＬＲＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲＷＧＮＹＰＹＹＡＭＤＹＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＤＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２３１ Ｍｏｐｃ２１ ｈＩｇＧ１ Ｐ２３８Ｄアイソタイプ対照軽鎖。
ＮＩＶＭＴＱＳＰＫＳＭＳＭＳＶＧＥＲＶＴＬＴＣＫＡＳＥＮＶＶＴＹＶＳＷＹＱＱＫＰＥＱＳＰＫＬＬＩＹＧＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＡＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＤＹＨＣＧＱＧＹＳＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２３２
ＧＧＧＧＳ
配列番号２３３
ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ
配列番号２３４
ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ
配列番号２３５－Ｐ２３８Ｄ置換及びまたＳ２２８Ｐ置換を含む参照ＩｇＧ４定常配列。
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＤＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧ ＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離された抗体であって、前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、置換を欠く親分子と比較して、ＦｃγＲ２Ｂへの結合の増加をもたらす前記置換を含むＦｃ領域を含む、単離された抗体。
（項目２）
前記重鎖が、以下のアミノ酸：２３４位のアラニン（Ａ）、２３５位のアラニン（Ａ）、２３６位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３７位のアスパラギン酸（Ｄ）、２３８位のアスパラギン酸（Ｄ）、２６５位のアラニン（Ａ）、２６７位のグルタミン酸（Ｅ）、２７１位のグリシン（Ｇ）、３３０位のアルギニン（Ｒ）、３３２位のアラニン（Ａ）、又は２９７位のアラニン（Ａ）（番号付けはＥＵインデックスによる）のうちの１つ以上を含むＦｃ領域を含む、項目１に記載の抗体。
（項目３）
前記重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む、項目１に記載の抗体。
（項目４）
（ｉ）前記Ｆｃ領域が、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より高い親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合するか、又は（ｉｉ）前記抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、約５μＭ～０．１μＭの親和性でＦｃγＲ２Ｂに結合するか、又は（ｉｉｉ）前記Ｆｃ領域が、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より低い若しくは等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合するか、又は（ｉｖ）前記抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも２０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｒアロタイプ）に結合するか、又は（ｖ）前記抗体が、２３８位（ＥＵインデックス）にプロリンを含むＦｃ領域を含む比較対照抗体と比較して、より低い若しくは等しい親和性でＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合するか、又は（ｖｉ）前記抗体が、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、少なくとも５０μＭのＫＤでＦｃγＲ２Ａ（１３１Ｈアロタイプ）に結合するか、又は（ｖｉｉ）前記抗体が、少なくとも１０日のインビボ半減期を示す、項目３に記載の抗体。
（項目５）
前記抗体が、
（ｉ）Ｄ５２、Ｐ５３、Ｅ５５、Ｅ５７、Ｅ８３、Ｑ８６、Ｅ１０３、Ｌ１０６、及びＥ９２、又は
（ｉｉ）Ｙ３９、Ｋ４１、Ｒ４２、Ｑ４３、Ｅ４５、及びＳ４７、又は
（ｉｉｉ）Ｄ３５、Ｔ７８、Ｋ８１、Ｓ１２１、及びＬ１２３、又は
（ｉｖ）Ｈ６８、又は
（ｖ）Ｎ６５及びＡ６４、からなる群から選択されるヒトＢＴＬＡのエピトープに結合し、
各位置が、配列番号２２５に開示されるアミノ酸配列に関連する、項目１～４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目６）
前記抗体が、Ｔ細胞活性化アッセイ又はＢ細胞活性化アッセイから選択されるＢＴＬＡアゴニストアッセイによって測定される場合に、ヒト免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡのアゴニズムの増加を示す、項目１～５のいずれか一項に記載の抗体。
（項目７）
前記重鎖が、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、前記軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、
（ｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１７、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０、２１、及び２２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｉｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号５３、５４、及び５５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号５６、５７、及び５８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｖｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号６１、６２、及び６３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号６４、６５、及び６６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｖｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号６１、６９、及び７０に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７１、７２、及び７３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｖｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号７６、７７、及び７８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７９、８０、及び８１に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｉｘ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、４６、及び８４に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び８５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号８８、８９、及び９０に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号９１、６５、及び９２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号９５、９６、及び９７に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号９８、９９、及び１００に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１０３、１０４、及び１０５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１０８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号７６、１１１、及び１１２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１１３、１１４、及び１１５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｉｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１１８、１１９、及び１２０に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１２１、１２２、及び１２３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１２６、１２７、及び１２８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７９、１２９、及び１３０に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｖｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１３３、１３４、及び１３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１３６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｖｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１０３、１３４、及び１３９に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１０６、１０７、及び１３６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｖｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１４３、１４４、及び１４５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１４６、１４７、及び１４８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｉｘ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１５１、１５２、及び１５３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１５６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１５９、１６０、及び１６１に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び１６４に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１６７、１６８、及び１６９に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１７０、１７１、及び１７２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、４６、及び４７に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１７０、１７１、及び１７２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、４６、及び１７７に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１７８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｉｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１８１、１８２、及び１８３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１８４、１８５、及び１８６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号７６、７７、及び７８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号７９、８０、及び１８９に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｖｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号４５、１９１、及び１９２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１５４、１５５、及び１９３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｖｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１９６、１９７、及び１９８に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号１９９、２００、及び２０１に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｖｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０４、２０５、及び２０６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２０７、２０８、及び２０９に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｉｘ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２１２、２１３、及び２１４に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２１５、３４、及び２１６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、２、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、５、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０、１６３、及び２２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２３、１７６、及び２５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、４８、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１１、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｉｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１１、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、５、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｖ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、１７、及び３に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号４、１２、及び６に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｖｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号２０、２１、及び２２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号２３、２４、及び２５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｖｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、３１、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有するか、又は
（ｘｘｘｖｉｉｉ）ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号３０、４０、及び３２に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３が、それぞれ、配列番号３３、３４、及び３５に示されるアミノ酸配列を有し、０～３つのアミノ酸改変を有し、
任意選択的に、前記Ｆｃ領域が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含む、項目１～６のいずれか一項に記載の抗体。
（項目８）
ＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、（１）前記重鎖が、配列番号１８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域と、を含み、前記軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含むか、又は（２）前記重鎖が、配列番号２６に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域と、を含み、前記軽鎖が、配列番号２７に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含むか、又は（３）前記重鎖が、配列番号３６に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域と、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域と、を含み、前記軽鎖が、配列番号４３に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含む、単離された抗体。
（項目９）
ＢＴＬＡに特異的に結合する単離された抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、（１）前記重鎖が、配列番号１９に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号１６に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むか、（２）前記重鎖が、配列番号２８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号２９に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むか、又は（３）前記重鎖が、配列番号３８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の配列同一性を有する配列を含み、軽鎖が、配列番号４４に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含み、前記重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸を含むＦｃ領域を含む、単離された抗体。
（項目１０）
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４抗体である、項目１～９のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１１）
ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）からなる群から選択される、項目１～１０のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１２）
モノクローナルである、項目１～１１のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１３）
前記抗体が、免疫細胞の前記に発現されたヒトＢＴＬＡをアゴナイズし、任意選択的に、前記免疫細胞が、Ｔ細胞である、項目１～１２のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１４）
免疫細胞の表面に発現されたヒトＢＴＬＡへの前記抗体の結合が、前記抗体によって結合されない同等の免疫細胞と比較して、前記細胞の増殖を減少させ、任意選択的に、前記細胞が、Ｔ細胞であり、任意選択的に、細胞増殖の前記減少が、少なくとも約１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、又は５０％である、項目１～１３のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１５）
（ｉ）前記抗体が、１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合し、かつ／又は（ｉｉ）前記抗体が、２０ｎＭ未満のＫＤでカニクイザルＢＴＬＡに結合し、かつ／又は（ｉｉｉ）前記抗体が、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）へのＢＴＬＡの結合を抑制せず、かつ／又は（ｉｖ）前記抗体が、混合リンパ球反応アッセイによって決定される場合、インビトロでＴ細胞の増殖を抑制する、項目１～１４のいずれか一項に記載の抗体。
（項目１６）
前記抗体が、３７℃での表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される場合、ヒトＢ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に、３７℃で少なくとも５．０×１０５（１／Ｍｓ）のオン速度で、かつ／又は３７℃で３．０×１０－４（１／ｓ）未満のオフ速度で、かつ／又は１０ｎＭ未満のＫＤで結合する、項目１５に記載の抗体。
（項目１７）
Ｂ及びＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体であって、重鎖及び軽鎖を含み、
（ａ）前記重鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含み、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３が、それぞれ、配列番号１、配列番号１７、及び配列番号３に示されるアミノ酸配列を有し、前記軽鎖が、３つのＣＤＲ：ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、及びＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域を含み、ＣＤＲＬ１が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ２が、配列番号１２に示されるアミノ酸配列を有し、ＣＤＲＬ３が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有し、かつ／又は
（ｂ）前記重鎖が、配列番号１８に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む重鎖可変領域を含み、かつ／又は
（ｃ）前記軽鎖が、配列番号１４に示されるアミノ酸配列若しくはそれと少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む軽鎖可変領域を含み、
前記重鎖が、２３８位（ＥＵインデックス）にアスパラギン酸作用を含むＦｃ領域を含み、
任意選択的に、前記抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、又はＩｇＧ４抗体である、単離されたヒト抗体。
（項目１８）
項目１～１７のいずれか一項に記載の抗体を形成することができるポリペプチドをコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む、核酸。
（項目１９）
項目１８に記載の核酸分子を含む、発現ベクター。
（項目２０）
項目１８又は１９に記載の核酸配列を含む、宿主細胞。
（項目２１）
ＢＴＬＡに結合する抗体を産生する方法であって、前記抗体の産生のための条件下で、項目２０に記載の宿主細胞を培養するステップを含み、任意選択的に、前記抗体を単離及び／又は精製することを更に含む、方法。
（項目２２）
ＢＴＬＡに特異的に結合する抗体を調製するための方法であって、
（ｉ）発現された場合に項目１～１７のいずれか一項に記載の抗体分子を作製するために組み合わせることができる重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列をコードする１つ以上の核酸分子を含む宿主細胞を提供するステップと、
（ｉｉ）前記コードされたアミノ酸配列を発現する前記宿主細胞を培養するステップと、
（ｉｉｉ）前記抗体を単離するステップと、を含む、方法。
（項目２３）
治療有効量の項目１～１７のいずれか一項に記載の抗体と、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
（項目２４）
療法に使用するための、項目１～１７のいずれか一項に記載の抗体、又は項目２３に記載の薬学的組成物。
（項目２５）
炎症性疾患又は自己免疫疾患、及び過剰な免疫細胞増殖の障害の治療又は予防に使用するための、項目１～１７のいずれか一項に記載の抗体、又は項目２３に記載の薬学的組成物。
（項目２６）
前記炎症性疾患又は自己免疫性疾患が、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息（アレルギー性喘息を含む）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫多腺性症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳性マラリア、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症、及び肝硬変）、若年性関節炎、川崎病、白血病、リンパ腫、リンパ増殖性障害、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、視神経脊髄炎、天疱瘡、多発性筋炎、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植片拒絶、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、及びフォークト・小柳・原田病から選択される、項目２５に記載の使用のための抗体。
（項目２７）
前記過剰な免疫細胞増殖の障害が、リンパ腫、白血病、全身性肥満細胞症、骨髄腫、又はリンパ増殖性障害から選択される、項目２５に記載の使用のための抗体。
（項目２８）
患者におけるＢＴＬＡ関連疾患を治療する方法であって、前記患者に、治療有効量の項目１～１７のいずれか一項に記載の抗体又は項目２３に記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。
（項目２９）
前記ＢＴＬＡ関連疾患が、炎症性疾患若しくは自己免疫疾患、又は免疫増殖性疾患若しくは障害である、項目２８に記載の方法。
（項目３０）
前記炎症性疾患又は自己免疫性疾患が、アジソン病、アレルギー、円形脱毛症、筋萎縮性側索硬化症、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、喘息（アレルギー性喘息を含む）、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性肝炎、自己免疫性膵炎、自己免疫多腺性症候群、ベーチェット病、水疱性類天疱瘡、脳性マラリア、慢性炎症性脱髄性多発神経炎、セリアック病、クローン病、クッシング症候群、皮膚筋炎、１型糖尿病、好酸球性多発血管炎性肉芽腫症、移植片対宿主病、グレーブス病、ギラン・バレー症候群、橋本甲状腺炎、化膿性汗腺炎、炎症性線維症（例えば、強皮症、肺線維症、及び肝硬変）、若年性関節炎、川崎病、白血病、リンパ腫、リンパ増殖性障害、多発性硬化症、重症筋無力症、骨髄腫、視神経脊髄炎、天疱瘡、多発性筋炎、原発性胆汁性胆管炎、原発性硬化性胆管炎、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、全身性エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、移植片拒絶、横断性脊髄炎、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、血管炎、白斑、及びフォークト・小柳・原田病から選択される、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
前記免疫増殖性疾患又は障害が、リンパ腫、白血病、全身性肥満細胞症、骨髄腫、又はリンパ増殖性障害から選択される、項目２９に記載の方法。

Claims (1)

  1. 明細書に記載の発明。
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