JP2024045250A - 抗体医薬製剤を作製する方法 - Google Patents

Abstract

【課題】高濃度でありながら低い粘度を有する抗体医薬製剤を作製する方法を提供する。【解決手段】本開示は、抗原結合タンパク質を含む組成物を、３０℃より高い温度において、カルシウムを含むダイアフィルトレーション緩衝液と交換することを含む、１０ｃＰ以下の粘度を有する抗体医薬製剤の作製のための材料及び方法を提供する。【選択図】なし

Description

本願は、２０１８年８月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／７１７，３５７号明細書に対する優先権の利益を主張するものであり、この開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。

電子的に提出された資料の参照による援用
本明細書と同時に提出されたコンピュータ可読のヌクレオチド／アミノ酸配列リストは、その全体が参照により援用され、且つ以下のように識別される：２０１９年８月８日に作成された「５３０２２Ａ＿ＳｅｑＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」という名称の１７，８５９バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル。

参照による援用
以下の出願は、参照によりその全体が本明細書に援用される：２０１２年８月２日出願の国際特許出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第２０１２／０４９３３１号明細書（２０１１年８月４日出願の米国仮特許出願第６１／５１５，１９１号明細書に対する優先権を主張）、２００６年４月２５日出願の米国特許出願公開第１１／４１０，５４０号明細書（２００６年４月１７日出願の米国仮特許出願第６０／７９２，６４５号明細書、２００６年３月１３日出願の米国仮特許出願第６０／７８２，２４４号明細書、２００６年２月２４日出願の米国仮特許出願第６０／７７６，８４７号明細書及び２００５年５月３日出願の米国仮特許出願第６０／６７７，５８３号明細書に対する優先権を主張）並びに２００６年４月２５日出願の米国特許出願公開第１１／４１１，００３号明細書（米国特許第７，５９２，４２９号明細書として登録）（２００６年４月１７日出願の米国仮特許出願第６０／７９２，６４５号明細書、２００６年３月１３日出願の米国仮特許出願第６０／７８２，２４４号明細書、２００６年２月２４日出願の米国仮特許出願第６０／７７６，８４７号明細書及び２００５年５月３日出願の米国仮特許出願第６０／６７７，５８３号明細書に対する優先権を主張）。以下の出願も参照により本明細書に援用される：２００８年９月１７日出願の米国特許出願公開第１２／２１２，３２７号明細書（２００７年９月１７日出願の米国仮特許出願第６０／９７３，０２４号明細書に対する優先権を主張）及び２０１０年６月２９日出願の米国特許出願公開第１２／８１１，１７１号明細書（２００８年１２月１５日出願の国際特許出願ＰＣＴ／米国特許出願公開第０８／８６８６４号明細書の米国特許法第３７１条に基づく米国国内段階移行出願であり、２００７年１２月１４日出願の米国仮特許出願第６１／０１３，９１７号明細書に対する優先権を主張）。

高濃度の液体抗体製剤は、より少ない体積の担体で治療薬の用量を送達するのに有用である。しかしながら、高濃度のタンパク質製剤は、抗体の高分子性に由来する多数の分子間相互作用の結果として、微粒子の形成に起因する不安定性及び粘度の上昇を含むいくつかの問題を提起する。高度に粘稠な製剤は、製造すること、シリンジに注入すること及び注射することも困難である。粘稠な製剤を操作する際に力を使用することは、過度の起泡を引き起こし、活性の生物製剤の変性及び不活性化を引き起こす可能性がある。

一態様において、本明細書では、１０ｃＰ以下の粘度を有する抗体医薬製剤を作製する方法であって、抗体を含む組成物を、３０℃より高い温度において、カルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換することを含む方法が記載される。いくつかの実施形態では、抗体は、ロモソズマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、カナキヌマブ、セツキシマブ、セルトリズマブペゴル、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゲムツズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブチウキセタン、インフリキシマブ、イピリムマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナタリズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ又はウステキヌマブ、ベドリズマブである。

いくつかの実施形態では、交換工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーションを介して行われる。いくつかの実施形態では、組成物は、少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０９ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１２ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１３ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１４ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１６ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１７ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１８ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１９ｍｇ／ｍＬ又は少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬの濃度で抗体を含み、いくつかの実施形態では、組成物は、７０ｍｇ／ｍＬ～２１０ｍｇ／ｍＬの範囲の濃度で抗体を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、２１０ｍｇ／ｍＬ未満の濃度で抗体を含む。いくつかの実施形態では、交換工程は、３０℃～４０℃（例えば、３７℃）又は３５℃より高い温度で行われる。

いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、酢酸カルシウムである。

いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、少なくとも２０ｍＭ（例えば、約２３ｍＭ）の酢酸カルシウムを含む。

いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、任意選択により約１％～約１５％の濃度でポリオール（例えば、スクロース）をさらに含む。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、約７％の濃度でスクロースを含む。

いくつかの実施形態では、交換工程後の抗体医薬製剤は、約５０ｍＭの酢酸塩及び約１２ｍＭのカルシウムを含む。

本開示の方法は、任意選択により、抗体医薬製剤を濾過し、且つ／又は薬物製品形態に等分する工程をさらに含む。

用語「含む」、「有する」、「包含する」及び「含有する」は、特に指定がない限り、オープンエンドの用語として解釈されるべきである（すなわち「包含するが、限定されない」を意味し、１つ以上の特徴又は構成要素の存在を許容する）。本明細書中の様々な実施形態は、様々な状況下で「含む」という語を使用して提示される一方、関連する実施形態は、「～からなる」又は「本質的に～からなる」という語を使用しても記載され得ると理解されるべきである。用語「１つの（ａ）」又は「１つの（ａｎ）」は、１つ以上を指し、例えば、「免疫グロブリン分子」は、別段の指定がない限り、１つ以上の免疫グロブリン分子を表すと理解されることに留意されたい。そのため、用語「１つの（ａ）」（又は「１つの（ａｎ）」）、「１つ以上」及び「少なくとも１つ」は、本明細書で区別なく使用され得る。さらに、「及び／又は」は、本明細書で使用される場合、２つの特定の特徴又は構成要素のそれぞれの特定の開示として（他の特徴又は構成要素の有無にかかわらず）解釈されるべきである。したがって、本明細書において「Ａ及び／又はＢ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、「Ａ及びＢ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ」（単独）及び「Ｂ」（単独）を包含するものとする。同様に、「Ａ、Ｂ及び／又はＣ」などの句で使用される「及び／又は」という用語は、以下の態様のそれぞれを包含するものとする：Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、Ｂ又はＣ；Ａ又はＣ；Ａ又はＢ；Ｂ又はＣ；Ａ及びＣ；Ａ及びＢ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；並びにＣ（単独）。

値の範囲を記載するとき、記載されている特徴は、その範囲内に見出される個々の値であり得ることも理解されるべきである。例えば、「約ｐＨ４～約ｐＨ６のｐＨ」は、限定されないが、ｐＨ４、４．２、４．６、５．１、５．５など、及びかかる値間にある任意の値であり得る。さらに、「約ｐＨ４～約ｐＨ６のｐＨ」は、目的の製剤のｐＨが保管中にｐＨ４～ｐＨ６の範囲において２ｐＨ単位で変動するという意味で解釈されるべきではなく、むしろ溶液のｐＨについてその範囲内で値が選択され得、ｐＨがそのｐＨ付近で緩衝されたままであることを意味する。

本明細書に記載される範囲のいずれかにおいて、範囲の端点は、その範囲に含まれる。しかしながら、この説明は、小さい方の端点及び／又は大きい方の端点が除外された同じ範囲も意図する。本発明の追加の特徴及び変形形態は、図面及び詳細な説明を含む本願の全体から当業者に明らかであろうが、そのような特徴は、全て本発明の態様として意図される。同様に、本明細書に記載される本発明の特徴を組み換えて、特徴の組合せが本発明の態様又は実施形態として上記に具体的に記載されているかどうかにかかわらず、本発明の態様としても意図される追加の実施形態にすることができる。また、本発明にとって不可欠なものとして本明細書に記載されるそのような限定のみがそのように見なされるべきであり；本明細書に不可欠なものとして記載されていない限定を欠く本発明の変形形態は、本発明の態様として意図される。

他に定義されていない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般に理解される意味と同じ意味を有する。例えば、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｕｏ，Ｐｅｉ－Ｓｈｏｗ，２ｎｄ ｅｄ．，２００２，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；Ｔｈｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，１９９９，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；及びＯｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ Ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖｉｓｅｄ，２０００，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓは、本開示で使用される用語の多くの一般辞書を当業者に提供する。

単位、接頭辞及び記号は、国際単位系（ＳＩ）で認められた形式で示される。数値範囲は、範囲を規定する数値を含む。別段の指示がない限り、アミノ酸配列は、左から右にアミノからカルボキシへの向きで記述されている。本明細書で示される見出しは、本開示の様々な１つ又は複数の態様を限定するものではなく、それは、本明細書全体を参照することによって有することができる。

本明細書に記載の全ての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。

抗体組成物の粘度に対する様々な濃度での酢酸カルシウムの影響を示すグラフである。粘度（ｃＰ．Ｙ軸）は、抗体の濃度（ｍｇ／ｍＬ、Ｘ軸）に対してプロットされる。 酢酸カルシウムの非存在下での限外濾過パラメーターを提供する。 酢酸カルシウムの存在下での限外濾過パラメーターを提供する。 抗体組成物の粘度に対する温度の影響を示すグラフである。供給圧（ｐｓｉ、Ｙ軸）は、残余分濃度（ｍｇ／ｍＬ、Ｘ軸）に対してプロットされる。

本開示は、抗体を含む組成物を、３０℃より高い温度において、カルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換することが、１０ｃＰ以下の粘度を有する抗体医薬製剤をもたらすという発見に基づく。

高濃度で抗体を製剤化する能力は、改善された患者投与レジメン、より少ない注射体積、より広範なデバイスの選択肢及びサプライチェーンの問題点の改善をもたらす。高濃度で非常に粘稠な多くの抗体は、加工及び薬物送達の選択肢を制限する可能性がある。特に、高い粘度を有する抗体組成物は、長い加工時間、高い圧力、加工に要求される広い膜面積及び潜在的に低い製品回収率に起因して、最終的な原体の限外濾過／ダイアフィルトレーションプロセス工程について問題になり得る。本明細書に記載されるとおり、温度の上昇及びカルシウム塩（例えば、酢酸カルシウム）の組合せは、カルシウム塩の溶解度が温度上昇とともに低下することを考えれば、組成物の粘度の低下に驚くほど有効である。

本明細書で使用する場合、用語「限外濾過」又は「ＵＦ」は、溶液又は懸濁液が、溶液又は懸濁液中の他の材料から製品（例えば、タンパク質）を分離するための膜（例えば、半透膜）にかけられる任意の手法を指す。限外濾過膜は、例えば、膜の孔より大きい分子を保持するが、塩、溶媒及び水などのより小さい分子は、膜を自由に通過する。膜によって保持された溶液は、「濃縮物」又は「残余分」と称されるが、膜を通過する溶液は、「濾液」又は「透過液」と称される。限外濾過は、溶液又は懸濁液中の高分子の濃度を増大させるために使用され得る。ある態様では、限外濾過は、溶液中のタンパク質の濃度を増大させるために使用される。

限外濾過膜などの本開示の濾過膜は、０．００１～０．１ミクロンの孔径を有し得る。いくつかの実施形態では、濾過膜は、０．００１、０．００２、０．００３、０．００４、０．００５、０．００６、０．００７、０．００８、０．００９、０．０１０、０．０１５、０．０２０、０．０２５、０．０３０、０．０３５、０．０４０、０．０４５、０．０５０、０．０５５、０．０６０、０．０６５、０．０７０、０．０７５、０．０８０、０．０８５、０．０９０、０．０９５又は０．１００ミクロンの孔径を有する。いくつかの実施形態では、本開示の濾過膜は、１５キロダルトン（ｋＤａ）～５０ｋＤａ以上の分子カットオフ値を有する。例えば、いくつかの実施形態では、濾過膜は、１５ｋＤａ、２０ｋＤａ、２５ｋＤａ、３０ｋＤａ、３５ｋＤａ、４０ｋＤａ、４５ｋＤａ若しくは５０ｋＤａ又は任意の中間の値の分子カットオフ値を有する。いくつかの実施形態では、膜の分子量カットオフは、３０ｋＤａである。

本明細書で使用する場合、用語「ダイアフィルトレーション」又は「ＤＦ」は、例えば、限外濾過膜を使用して、タンパク質、ペプチド、核酸又は他の生体分子を含有する溶液又は混合物から塩又は溶媒の濃度を除去、置換又は低下させることを指すために使用される。ダイアフィルトレーションは、タンパク質を含む保持された成分の濃度の増大をもたらす場合も又はもたらさない場合もある。例えば、継続的なダイアフィルトレーションにおいて、溶媒は、濾液が生じるのと同じ速度で残余分に継続的に加えられる。この場合、残余分体積及び保持された成分の濃度は、このプロセス中に変化しない。一方で、非継続的又は逐次的な希釈ダイアフィルトレーションにおいて、限外濾過工程後、残余分側への溶媒の添加が続き；残余分側に加えられる溶媒の体積が、生成される濾液の体積以上ではない場合、保持された成分は、高い濃度を有することになる。ダイアフィルトレーションは、高分子の溶液又は懸濁液のｐＨ、イオン強度、塩組成、緩衝液組成又は他の特性を変化させるために使用され得る。

本明細書で使用する場合、用語「限外濾過／ダイアフィルトレーション／」又は「ＵＦ／ＤＦ」は、逐次的であれ同時であれ、限外濾過及び／又はダイアフィルトレーションを達成する任意のプロセス、手法又は手法の組合せを指す。

いくつかの実施形態では、抗体を含む組成物の粘度は、緩衝液交換工程前に測定され、得られた製剤の粘度は、出発組成物を、３０℃より高い温度において、カルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換した後に測定される。粘度の測定方法は、当技術分野でよく知られており、例えば細管粘度計又はコーンプレートレオメーターの使用が挙げられる。出発組成物と、得られた製剤とを比較するために同じ方法が使用されるならば、任意の方法を使用し得る。

「粘度」という用語は、本明細書で使用される場合、「絶対粘度」を指す。絶対粘度は、動的又は単純粘度とも呼ばれる場合があり、動粘性率及び流体密度の所産である：絶対粘度＝動粘性率×密度。動粘性率の次元は、Ｌ^２／Ｔであり、ここで、Ｌは、長さであり、Ｔは、時間である。一般に、動粘性率は、センチストークス（ｃＳｔ）で表される。動粘度のＳＩ単位は、ｍｍ^２／ｓであり、これは、１ｃＳｔである。絶対粘度は、センチポアズ（ｃＰ）の単位で表される。絶対粘度のＳＩ単位は、ミリパスカル秒（ｍＰａ－ｓ）であり、ここで、１ｃＰ＝１ｍＰａ－ｓである。

粘度測定は、貯蔵又は投与温度、例えば２～８℃又は２５℃（室温）で行われ得る。いくつかの実施形態では、貯蔵及び／又は投与温度における得られた医薬組成物の絶対粘度は、１５ｃＰ以下、１４ｃＰ以下、１３ｃＰ以下、１２ｃＰ以下、１１ｃＰ以下、１０ｃＰ以下、９ｃＰ以下、８ｃＰ以下、７ｃＰ以下、６ｃＰ以下、５ｃＰ以下又は４ｃＰ以下である。

「ダイアフィルトレーション緩衝液」は、それ自体、抗体を含有しないが、抗体を含む製剤を作製するために使用される緩衝液である。ダイアフィルトレーション緩衝液は、カルシウム塩を含む。例示的なカルシウム塩としては、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルタミン酸カルシウム、コハク酸カルシウム及び塩化カルシウムが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、５ｍＭ～１５０ｍＭの範囲の濃度でダイアフィルトレーション緩衝液中に存在する。いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、１０ｍＭ～３０ｍＭの範囲の濃度でダイアフィルトレーション緩衝液中に存在する。いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも１１ｍＭ、少なくとも１２ｍＭ、少なくとも１３ｍＭ、少なくとも１４ｍＭ、少なくとも１５ｍＭ、少なくとも１６ｍＭ、少なくとも１７ｍＭ、少なくとも１８ｍＭ、少なくとも１９ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも２１ｍＭ、少なくとも２２ｍＭ、少なくとも２３ｍＭ、少なくとも２４ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも２６ｍＭ、少なくとも２７ｍＭ、少なくとも２８ｍＭ、少なくとも２９ｍＭ又は少なくとも３０ｍＭの濃度でダイアフィルトレーション緩衝液中に存在する。特定の実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液中のカルシウム塩の濃度は、約２０ｍＭ以下、約２１ｍＭ以下、約２２ｍＭ以下、約２３ｍＭ以下、約２４ｍＭ以下、約２５ｍＭ以下、約２６ｍＭ以下、約２７ｍＭ以下、約２８ｍＭ以下、約２９ｍＭ以下又は約３０ｍＭ以下である。前述の端点の組合せを特徴とする任意の範囲が企図され、約０．５ｍＭ～約３０ｍＭ、約２０ｍＭ～約３０ｍＭ又は約２０ｍＭ～約２５ｍＭを含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、本明細書で開示される緩衝液交換工程から得られる抗体組成物の粘度を、３０℃より高い温度における、カルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液による緩衝液交換前の抗体組成物と比較して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％以上低下させるか、又は１０ｃＰ以下、９ｃＰ以下、８ｃＰ以下、７ｃＰ以下、６ｃＰ以下又は５ｃＰ以下の粘度に達する濃度でダイアフィルトレーション緩衝液中に存在する。

本明細書に記載される範囲の全てにおいて、本明細書に記載されるカチオン、アニオン又は塩の濃度は、ダイアフィルトレーション緩衝液に関連する。本明細書に記載される範囲のいずれかにおいて、範囲の端点は、その範囲に含まれる。しかしながら、この説明は、小さい方の端点及び／又は大きい方の端点が除外された同じ範囲も意図する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるダイアフィルトレーション緩衝液は、カルシウム塩に加えて、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ又は少なくとも約１５ｍＭの濃度で緩衝液（例えば、酢酸緩衝液）をさらに含む。いくつかの実施形態では、濃度は、約１０ｍＭ以下、約１５ｍＭ以下、約２０ｍＭ以下、約２５ｍＭ以下、約３０ｍＭ以下、約３５ｍＭ以下、約４０ｍＭ以下、約４５ｍＭ以下又は約５０ｍＭ以下である。前述の端点の組合せを特徴とする任意の範囲が企図され、約５ｍＭ～約１５ｍＭ、又は約５ｍＭ～約１０ｍＭ、又は約２０ｍＭ～約３０ｍＭ、又は約２０ｍＭ～約２５ｍＭを含むが、これらに限定されない。緩衝液は、ｐＨを約５～６又は５～５．５又は４．５～５．５に維持する濃度に添加することが好ましい。製剤中のカルシウム塩が酢酸カルシウムである場合、いくつかの実施形態では、酢酸塩の総濃度は、約１０ｍＭ～約６０ｍＭ又は約２０ｍＭ～約４０ｍＭである。

いくつかの態様では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、総濃度が少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ又は少なくとも約５０ｍＭである酢酸塩を含む。いくつかの実施形態では、酢酸塩の濃度は、約３０ｍＭ以下、約３５ｍＭ以下、約４０ｍＭ以下、約４５ｍＭ以下、約５０ｍＭ以下、約５５ｍＭ以下、約６０ｍＭ以下、約６５ｍＭ以下、約７０ｍＭ以下、約７５ｍＭ以下、約８０ｍＭ以下、約８５ｍＭ又は約９０ｍＭ以下である。前述の端点の組合せを特徴とする任意の範囲が企図され、約１０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約５０ｍＭ、約２０ｍＭ～約４０ｍＭ、約３０ｍＭ～約５０ｍＭ又は約３０ｍＭ～約７５ｍＭを含むが、これらに限定されない。非限定的な例として、１０ｍＭ酢酸カルシウムを含有する溶液は、カルシウムカチオンの二価の性質のために、２０ｍＭの酢酸アニオン及び１０ｍＭのカルシウムカチオンを有することになるが、１０ｍＭ酢酸ナトリウムを含有する溶液は、１０ｍＭのナトリウムカチオン及び１０ｍＭの酢酸アニオンを有することになる。

いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約６ｍＭ、少なくとも約７ｍＭ、少なくとも約８ｍＭ、少なくとも約９ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ又は少なくとも約１５ｍＭの濃度でグルタミン酸緩衝液又はコハク酸緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、濃度は、約１０ｍＭ以下、約１５ｍＭ以下、約２０ｍＭ以下、約２５ｍＭ以下、約３０ｍＭ以下、約３５ｍＭ以下、約４０ｍＭ以下、約４５ｍＭ以下又は約５０ｍＭ以下である。前述の端点の組合せを特徴とする任意の範囲が企図され、約５ｍＭ～約１５ｍＭ、又は約５ｍＭ～約１０ｍＭ、又は約２０ｍＭ～約３０ｍＭ、又は約２０ｍＭ～約２５ｍＭを含むが、これらに限定されない。緩衝液は、ｐＨを約５～６又は５～５．５又は４．５～５．５に維持する濃度に添加することが好ましい。

いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液中の総イオン（カチオン及びアニオン）濃度は、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約１５ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約３５ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約４５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約５５ｍＭ、少なくとも約６０ｍＭ、少なくとも約６５ｍＭ、少なくとも約７０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ又は少なくとも約８５ｍＭである。いくつかの実施形態では、総イオン濃度は、約３０ｍＭ以下、約３５ｍＭ以下、約４０ｍＭ以下、約４５ｍＭ以下、約５０ｍＭ以下、約５５ｍＭ以下、約６０ｍＭ以下、約６５ｍＭ以下、約７０ｍＭ以下、約７５ｍＭ以下、約８０ｍＭ以下、約８５ｍＭ以下、約９０ｍＭ以下、約９５ｍＭ以下、約１００ｍＭ以下、約１１０ｍＭ以下、約１２０ｍＭ以下、約１３０ｍＭ以下、約１４０ｍＭ以下、約１５０ｍＭ以下、約１６０ｍＭ以下、約１７０ｍＭ以下、約１８０ｍＭ以下、約１９０ｍＭ又は約２００ｍＭ以下である。前述の端点の組合せを特徴とする任意の範囲が企図され、約３０ｍＭ～約６０ｍＭ、又は約３０ｍＭ～約７０ｍＭ、又は約３０ｍＭ～約８０ｍＭ、又は約４０ｍＭ～約１５０ｍＭ、又は約５０ｍＭ～約１５０ｍＭを含むが、これらに限定されない。非限定的な例として、１０ｍＭの酢酸カルシウム溶液は、３０ｍＭの総イオン濃度（１０ｍＭのカチオン及び２０ｍＭのアニオン）を有する。

様々な実施形態では、抗体組成物は、３０℃より高い温度において、ダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換される。いくつかの実施形態では、緩衝液交換は、３０℃～４０℃の温度で行われる。いくつかの実施形態では、緩衝液交換は、３５℃より高い温度で行われる。いくつかの実施形態では、緩衝液交換は、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃又は４０℃で行われる。いくつかの実施形態では、緩衝液交換は、３７℃で行われる。

本明細書に記載されるダイアフィルトレーション緩衝液は、任意選択により、少なくとも１つのポリオールを含む。ポリオールは、糖（例えば、マンニトール、スクロース又はソルビトール）及び他の多価アルコール（例えば、グリセロール及びプロピレングリコール）を含む賦形剤の一部類を包含する。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマーは、このカテゴリに含まれる。ポリオールは、液状及び凍結乾燥非経口タンパク質製剤の両方において、安定化賦形剤及び／又は等張化剤として一般的に使用される。ポリオールは、タンパク質を物理的分解経路及び化学的分解経路の両方から保護することができる。

例示的なポリオールとしては、スクロース、トレハロース、マンノース、マルトース、ラクトース、グルコース、ラフィノース、セロビオース、ゲンチオビオース、イソマルトース、アラビノース、グルコサミン、フルクトース、マンニトール、ソルビトール、グリシン、アルギニンＨＣＬ、ポリヒドロキシ化合物（例えば、デキストラン、デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、シクロデキストリン、カプチゾール、Ｎ－メチルピロリデン、セルロース及びヒアルロン酸などの多糖類を含む）並びに塩化ナトリウムが挙げられるが、これらに限定されない（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ ７４：２２５，（１９９１））。

追加のポリオールとしては、プロピレングリコール、グリセリン（グリセロール）、トレオース、トレイトール、エリトロース、エリトリトール、リボース、アラビノース、アラビトール、リキソース、マルチトール、ソルビトール、ソルボース、グルコース、マンノース、マンニトール、レブロース、デキストロース、マルトース、トレハロース、フルクトース、キシリトール、イノシトール、ガラクトース、キシロース、フルクトース、スクロース、１，２，６－ヘキサントリオールなどが挙げられるが、これらに限定されない。高次糖としては、デキストラン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールが挙げられる。フルクトース、マルトース又はガラクトースなどの還元糖は、非還元糖より容易に酸化する。糖アルコールのさらなる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトール又はイソ－マルツロースである。還元糖の例としては、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース、イソ－マルツロース及びラクツロースが挙げられる。非還元糖の例としては、糖アルコール及び他の直鎖ポリアルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが挙げられる。モノグリコシドとしては、ラクトース、マルトース、ラクツロース及びマルツロースなどの二糖類の還元によって得られる化合物が挙げられる。

いくつかの実施形態では、その少なくとも１種のポリオールは、単糖、二糖、環状多糖、糖アルコール、線状分岐デキストラン及び線状非分岐デキストラン又はその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、その少なくとも１種のポリオールは、スクロース、トレハロース、マンニトール及びソルビトール又はその組合せからなる群から選択される二糖である。

いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、約０％～約４０％（ｗ／ｖ）、又は約０％～約２０％（ｗ／ｖ）、又は約１％～約１５％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、少なくとも０．５、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも３０又は少なくとも４０％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４％～約１５％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、約１％～約１５％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。さらなる実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、約９％、約９．５％、約１０％、約１０．５％、約１１％、約１１．５％又は約１２％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、約９％～約１２％（ｗ／ｖ）の濃度で少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）を含む。いくつかの実施形態では、その少なくとも１種のポリオール（例えば、糖類）は、約９％（ｗ／ｖ）の濃度でダイアフィルトレーション緩衝液中に存在する。いくつかの実施形態では、その少なくとも１種のポリオールは、スクロース、トレハロース、マンニトール及びソルビトール又はその組合せからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、そのポリオールは、スクロースであり、且つ約５％～約９％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度でダイアフィルトレーション緩衝液中に存在する。

いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、２０ｍＭの酢酸カルシウム、７％スクロースを含む。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは、４～６の範囲である。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは、４、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９又は６である。いくつかの実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液のｐＨは、５．１である。

限外濾過／ダイアフィルトレーション
限外濾過膜／ダイアフィルトレーション（一般に本明細書でＵＦ／ＤＦとも称される）は、溶液及び懸濁液の成分をそれらの分子サイズに基づいて分離するために透過性（多孔性）濾過膜を選択的に利用する。膜は、膜の孔より大きい分子を保持するが、透過性である塩、溶媒及び水などのより小さい分子は、膜を自由に通過する。膜により保持される溶液は、濃縮物又は残余分として知られる。膜を通過する溶液は、濾液又は透過液として知られる。濃縮のための膜を選択するための１つのパラメーターは、濃縮されることになる試料についてのその保持特性である。一般的な尺度として、膜の分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）は、保持されることになる分子の１／３～１／６の分子量であるべきである。これは、完全な保持を保証するためである。ＭＷＣＯが試料のものに近いほど、濃縮中の小さい生成物の損失のリスクが大きくなる。本開示の方法とともに使用され得る膜の例としては、Ｏｍｅｇａ（商標）ＰＥＳ膜（３０ｋＤａ ＭＷＣＯ、すなわち３０ｋＤａより大きい分子は、膜により保持され、３０ｋＤａ未満の分子は、膜の濾液側に通過が可能になる）（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐ．、Ｐｏｒｔ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｎ．Ｙ．）；Ｐｅｌｉｃｏｎ（商標）３０ｋＤ再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｓｉｇｍａ）；Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）．－ＧＶシリンジ駆動フィルターユニット、ＰＶＤＦ ０．２２．μｍ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、Ｍａｓｓ．）；Ｍｉｌｌｅｘ（登録商標）．－ＧＰシリンジ駆動フィルターユニット、ＰＥＳ ０．２２．ｍｕ．ｍ；Ｓｔｅｒｉｖｅｘ（登録商標）０．２２μｍフィルターユニット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、Ｍａｓｓ．）；及びビバスピン濃縮機（ＭＷＣＯ １０ｋＤａ、ＰＥＳ；ＭＷＣＯ ３ｋＤａ、ＰＥＳ）（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｃｏｒｐ．、Ｅｄｇｅｗｏｏｄ、Ｎ．Ｙ．）が挙げられる。

非継続モードのＵＦ／ＤＦ及び継続モードのＵＦ／ＤＦを含む２つの形態のＵＦ／ＤＦがある。本開示の方法は、いずれかのモードに従って実施され得る。

継続的ＵＦ／ＤＦ（定容ＵＦ／ＤＦとも称される）は、濾液が生じているのと同じ速度で残余分に水又は新しい緩衝液を加えることにより、残余分（試料）中の当初の緩衝液塩（又は他の低分子量種）を洗い出すことを含む。結果として、残余分の体積及び生成物濃度は、ＵＦ／ＤＦプロセス中に変化しない。除去される塩の量は、残余分体積に対する生成される濾液の体積に関連する。生成された濾液の体積は、通常、「ダイアフィルトレーション体積」に換算して参照される。単一のダイアフィルトレーション体積（ＤＶ）は、ダイアフィルトレーションが開始されるときの残余分の体積である。継続的なダイアフィルトレーションのために、液体は、濾液が生成されるのと同じ速度で加えられる。回収された濾液の体積が出発残余分体積と等しいとき、１ＤＶが処理されている。

非継続的ＵＦ／ＤＦは、２つの異なる方法、非継続的な逐次的ＵＦ／ＤＦ及び体積減少の非継続的ＵＦ／ＤＦを含む。逐次的希釈による非継続的ＵＦ／ＤＦは、最初に試料を水で希釈して既定の体積にすることを含む。次に、希釈された試料は、ＵＦによってその当初の体積まで濃縮される。体積減少による非継続的ＵＦ／ＤＦは、最初に試料を既定の体積まで濃縮し、続いて試料を水又は置換緩衝液でその当初の体積まで希釈することを含む。継続的ＵＦ／ＤＦと同様に、プロセスは、不必要な溶質のレベル、例えばイオン性賦形剤が除去されるまで繰り返される。

ＵＦ／ＤＦは、ＵＦ／ＤＦ媒体として水、例えばＷＦＩを使用して、当技術分野において知られる従来の手法に従って実施され得る（例えば、Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ、Ｂｅａｔｏｎ＆Ｋｌｉｎｋｏｗｓｋｉ、Ｊ．Ｓｅｐａｒ．Ｐｒｏｃ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．、４（２）１－１０（１９８３））。ＵＦ／ＤＦを実施するための市販の機器の例としては、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｌａｂｓｃａｌｅ（商標）ＴＦＦシステム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、ＬＶ Ｃｅｎｔｒａｍａｔｅ（商標）、Ｌａｂ Ｔａｎｇｅｎｔｉａｌ Ｆｌｏｗシステム（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＵｎｉＦｌｕｘシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、ＦｌｅｘＡｃｔ（登録商標）ＵＤ（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ Ｓｔｅｄｉｍ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｍｏｂｉｕｓ（登録商標）ＦｌｅｘＲｅａｄｙ ＴＦＦ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、Ａｋｔａ（商標）Ｒｅａｄｙｆｌｕｘ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、Ａｌｌｅｇｒｏ（商標）頓用ＴＦＦ（Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）及びＣｏｇｅｎｔ ＴＦＦシステムなどのステンレス鋼スキッドが挙げられる。

ダイアフィルトレーション緩衝液による緩衝液交換工程は、溶液中のタンパク質に依存して任意の回数で実施され得、１回のダイアフィルトレーション工程は、１回の総体積の交換に等しい。一実施形態では、ダイアフィルトレーションプロセスは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５回又は所望の結果を達成するのに必要であると見なされる回数まで実施される。ダイアフィルトレーションの１回のラウンド又は工程は、抗体組成物の出発体積に等しい体積のダイアフィルトレーション緩衝液が残余分側に加えられたときに達成される。

様々な実施形態において、交換工程後に得られるダイアフィルトレーションされた製剤は、約５０ｍＭの酢酸塩及び約１２ｍＭのカルシウムを含む。

本開示の方法は、得られるダイアフィルトレーションされた製剤の粘度を増大させることなく、高レベルで抗原結合タンパク質を濃縮する手段も提供する。本開示の方法を使用して得られる水性製剤中の抗原結合タンパク質の濃度は、所望の濃度に従って任意の量であり得る。例えば、本明細書に記載される方法に従って作製された組成物中の抗原結合タンパク質の濃度は、少なくとも約７０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約７９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約８９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約９９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１０９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１１９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１２９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１３９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１４９ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５１ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５２ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５３ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５４ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５５ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５６ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５７ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５８ｍｇ／ｍｌ、少なくとも約１５９ｍｇ／ｍｌ又は少なくとも約１６０ｍｇ／ｍｌであり、且つ例えば約３００ｍｇ／ｍｌ、約２９０ｍｇ／ｍｌ、約２８０ｍｇ／ｍｌ、約２７０ｍｇ／ｍｌ、約２６０ｍｇ／ｍｌ、約２５０ｍｇ／ｍｌ、約２４０ｍｇ／ｍｌ、約２３０ｍｇ／ｍｌ、約２２０ｍｇ／ｍｌ、約２１０ｍｇ／ｍｌ、約２００ｍｇ／ｍｌ、約１９０ｍｇ／ｍｌ、約１８０ｍｇ／ｍｌ又は約１７０ｍｇ／ｍｌまでの範囲であり得る。前述の端点の組合せを特徴とする任意の範囲が企図され、約７０ｍｇ／ｍｌ～約２５０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍＬ～約２１０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍｌ～約１６０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ～約２５０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｌ～約２００ｍｇ／ｍｌ又は約１００ｍｇ／ｍｌ～約１８０ｍｇ／ｍｌを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する場合、「抗原結合タンパク質」は、特定の抗原と特異的に結合するタンパク質を意味する。抗原結合タンパク質の例としては、抗体、ペプチボディ、抗体断片、抗体コンストラクト、融合タンパク質及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む抗原受容体が挙げられるが、これらに限定されない。この用語は、少なくとも２本の全長重鎖及び２本の全長軽鎖を含むインタクトな抗体並びにその誘導体、バリアント、断片及び変異物を包含する。抗原結合タンパク質には、以下にさらに記載されるナノボディ及びｓｃＦｖなどのドメイン抗体も含まれる。

いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、抗体である。本明細書で使用する場合、「抗体」という用語は、重鎖及び軽鎖を含み、且つ可変領域及び定常領域を含む、従来の免疫グロブリン型を有するタンパク質を指す。抗体は、可変領域及び定常領域を有する。ＩｇＧ型では、可変領域は、一般に、約１００～１１０又はそれを超えるアミノ酸であり、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、主に抗原認識に関与し、異なる抗原に結合する他の抗体と実質的に異なる。定常領域は、抗体が免疫系の細胞及び分子を動員することを可能にする。可変領域は、各軽鎖及び重鎖のＮ末端領域からできているが、定常領域は、重鎖及び軽鎖のそれぞれのＣ末端部分からできている。（Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｇｅｎｅｓ”，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，４ｔｈ ｅｄ．Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｌｔｄ．／Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，（１９９９））。

抗体のＣＤＲの一般的な構造及び性質は、当技術分野において記述されている。簡潔に述べると、抗体骨格において、ＣＤＲは、重及び軽鎖可変領域におけるフレームワーク内に埋め込まれ、それらは、抗原結合及び認識に大きく関与する領域を構成する。可変領域は、少なくとも３つの重鎖又は軽鎖のＣＤＲを含み（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｎ．Ｉ．Ｈ．，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３）、それらは、フレームワーク領域（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１によってフレームワーク領域１～４、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４と呼ばれている；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７、前掲も参照されたい）中にある。

ヒト軽鎖は、カッパ及びラムダ軽鎖として分類される。重鎖は、ミュー、デルタ、ガンマ、アルファ又はイプシロンに分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥと定義する。ＩｇＧは、以下に限定されないが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含むいくつかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、以下に限定されないが、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２を含むサブクラスを有する。本発明の実施形態は、抗体の全てのこのようなクラス又はアイソタイプを含む。軽鎖定常領域は、例えば、カッパ又はラムダ型軽鎖定常領域、例えばヒトカッパ又はラムダ型軽鎖定常領域であり得る。重鎖定常領域は、例えば、アルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型又はミュー型重鎖定常領域、例えばヒトアルファ型、デルタ型、イプシロン型、ガンマ型又はミュー型重鎖定常領域であり得る。したがって、例示的な実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のいずれか１つを含むアイソタイプＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ又はＩｇＭの抗体である。ＩｇＧ１抗体は、ジスルフィド結合の還元を特に受けやすく、結果として本開示の１つの好ましい実施形態となる。

抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であり得る。いくつかの実施形態では、抗体は、哺乳動物、例えばマウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター及びヒトなどによって産生される天然に存在する抗体と実質的に類似した配列を含む。この点で、抗体は、哺乳動物の抗体、例えばマウス抗体、ウサギ抗体、ヤギ抗体、ウマ抗体、ニワトリ抗体、ハムスター抗体及びヒト抗体などと考えられ得る。特定の態様では、モノクローナル抗体は、ヒト抗体である。特定の態様では、モノクローナル抗体は、キメラ抗体又はヒト化抗体である。「キメラ抗体」という用語は、本明細書では、ある１つの種由来の定常ドメイン及び第２の種由来の可変ドメインを含有するか、又はより一般には少なくとも２種由来のアミノ酸配列の一続きを含有する抗体を指すために使用される。「ヒト化」という用語は、抗体に関して使用される場合、元の起源の抗体よりも真のヒト抗体と類似している構造及び免疫学的機能を有するように操作されている非ヒト起源由来の少なくともＣＤＲ領域を有する抗体を指す。例えば、ヒト化は、非ヒト抗体、例えばマウス抗体など由来のＣＤＲをヒト抗体に移植することを含み得る。ヒト化は、非ヒト配列をよりヒト配列に見えるようにするためのアミノ酸置換の選択も含み得る。

本開示の方法は、抗原結合タンパク質、例えば完全な抗原結合能を保持するｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＶＨＨ／ＶＨなどの抗体断片を含む製剤を得るのにも好適である。ｓｃＦｖ及びＦａｂの両方は、原核宿主において容易に作製され得る広く使用される断片である。他の抗体タンパク質生成物としては、オリゴマー化ドメインに連結されるｓｃＦｖからなる異なる形式を含むダイアボディ、トリアボディ及びテトラボディ又はミニボディ（ミニＡｂｓ）のようなジスルフィド結合で安定化されるｓｃＦｖ（ｄｓ－ｓｃＦｖ）、一本鎖Ｆａｂ（ｓｃＦａｂ）並びに二量体及び多量体抗体形式が挙げられる。最小の断片は、ラクダ科重鎖Ａｂ及び単一ドメインＡｂ（ｓｄＡｂ）のＶＨＨ／ＶＨである。新規な抗体形式を作製するために最も頻繁に使用される構築ブロックは、約１５アミノ酸残基のペプチドリンカーによって連結された重鎖及び軽鎖（ＶＨ及びＶＬドメイン）由来のＶドメインを含む一本鎖可変（Ｖ）－ドメイン抗体断片（ｓｃＦｖ）である。ペプチボディ又はペプチド－Ｆｃ融合体は、さらに別の抗体タンパク質生成物である。ペプチボディの構造は、Ｆｃドメイン上に移植された生物学的に活性のあるペプチドからなる。ペプチボディは、当技術分野において詳細に記述されている。例えば、Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ ４（５）：５８６－５９１（２０１２）を参照されたい。

いくつかの実施形態では、抗原結合タンパク質は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ ＶＨＨ／ＶＨ、Ｆｖ断片、ｄｓ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦａｂ、二量体抗体、多量体抗体（例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）、ミニＡｂ、ラクダ科動物の重鎖抗体のペプチボディＶＨＨ／ＶＨ、ｓｄＡｂ、二重特異性又は三重特異性抗体、ＢｓＩｇＧ、付加ＩｇＧ、ＢｓＡｂ断片、二重特異性融合タンパク質又はＢｓＡｂコンジュゲートである。

抗原結合タンパク質は、単量体形態又はポリマー、オリゴマー若しくは多量体形態で存在し得る。抗体が２つ以上の個別の抗原結合領域断片を含む特定の実施形態において、抗体は、抗体により認識され、結合される個別のエピトープの数に依存して二重特異性、三重特異性若しくは多重特異性又は二価、三価若しくは多価と見なされる。

有利には、本方法は、抗体の抗原特異性に限定されない。したがって、抗体（又は抗体断片若しくは抗体タンパク質生成物）は、実質的にあらゆる抗原に対するいずれかの結合特異性を有する。例示的な態様では、抗体は、ホルモン、増殖因子、サイトカイン、細胞表面受容体又はその任意のリガンドに結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ロモソズマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、カナキヌマブ、セツキシマブ、セルトリズマブペゴル、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゲムツズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブチウキセタン、インフリキシマブ、イピリムマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナタリズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ、ウステキヌマブ、ベドリズマブ又は前述のいずれかのバイオシミラーである。

いくつかの実施形態において、抗体は、ムロモナブ－ＣＤ３（商品名Ｏｒｔｈｏｃｌｏｎｅ Ｏｋｔ３（登録商標）で市販される製品）、アブシキシマブ（商品名Ｒｅｏｐｒｏ（登録商標）で市販される製品）、リツキシマブ（商品名ＭａｂＴｈｅｒａ（登録商標）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）で市販される製品）（米国特許第５，８４３，４３９号明細書）、バシリキシマブ（商品名Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（登録商標）で市販される製品）、ダクリズマブ（商品名Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標）で市販される製品）、パリビズマブ（商品名Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）で市販される製品）、インフリキシマブ（商品名Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）で市販される製品）、トラスツズマブ（商品名Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）で市販される製品）、アレムツズマブ（商品名ＭａｂＣａｍｐａｔｈ（登録商標）、Ｃａｍｐａｔｈ－１Ｈ（登録商標）で市販される製品）、アダリムマブ（商品名Ｈｕｍｉｒａ（登録商標）で市販される製品）、トシツモマブ－Ｉ１３１（商品名Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）で市販される製品）、エファリズマブ（商品名Ｒａｐｔｉｖａ（登録商標）で市販される製品）、セツキシマブ（商品名Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標）で市販される製品）、イブリツモマブチウキセタン（商品名Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）で市販される製品）、オマリズマブ（商品名Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）で市販される製品）、ベバシズマブ（商品名Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標）で市販される製品）、ナタリズマブ（商品名Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）で市販される製品）、ラニビズマブ（商品名Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（登録商標）で市販される製品）、パニツムマブ（商品名Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（登録商標）で市販される製品）、エクリズマブ（商品名Ｓｏｌｉｒｉｓ（登録商標）で市販される製品）、セルトリズマブペゴル（商品名Ｃｉｍｚｉａ（登録商標）で市販される製品）、ゴリムマブ（商品名Ｓｉｍｐｏｎｉ（登録商標）で市販される製品）、カナキヌマブ（商品名Ｉｌａｒｉｓ（登録商標）で市販される製品）、カツマキソマブ（商品名Ｒｅｍｏｖａｂ（登録商標）で市販される製品）、ウステキヌマブ（商品名Ｓｔｅｌａｒａ（登録商標）で市販される製品）、トシリズマブ（商品名ＲｏＡｃｔｅｍｒａ（登録商標）、Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標）で市販される製品）、オファツムマブ（商品名Ａｒｚｅｒｒａ（登録商標）で市販される製品）、デノスマブ（商品名Ｐｒｏｌｉａ（登録商標）で市販される製品）、ベリムマブ（商品名Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標）で市販される製品）、ラキシバクマブ、イピリムマブ（商品名Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）で市販される製品）及びペルツズマブ（商品名Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）で市販される製品）からなる群から選択される。

いくつかの実施形態では、抗体は、抗スクレロスチン抗体である。「抗スクレロスチン抗体」又は「スクレロスチンに結合する抗体」は、配列番号１のスクレロスチン又はその部分に結合する抗体である。組換えヒトスクレロスチン／ＳＯＳＴは、例えば、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ．，ＵＳＡ；２００６ カタログ番号１４０６－ＳＴ－０２５）から市販されている。米国特許第６，３９５，５１１号明細書及び同第６，８０３，４５３号明細書並びに米国特許出願公開第２００４／０００９５３５号明細書及び同第２００５／０１０６６８３号明細書（参照により本明細書に援用される）は、一般に抗スクレロスチン抗体について言及している。本開示との関連で使用するのに適したスクレロスチン抗体の例は、米国特許出願公開第２００７／０１１０７４７号明細書及び同第２００７／００７２７９７号明細書にも記載されており、これらは、参照により本明細書に援用される。スクレロスチン抗体を生成するための材料及び方法に関するさらなる情報は、米国特許出願公開第２００４／０１５８０４５号明細書（参照により本明細書に援用される）に見出すことができる。

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」とは、抗体が抗原に他のタンパク質よりも優先的に結合することを意味する。いくつかの実施形態では、「特異的に結合する」は、抗体が他のタンパク質よりも抗原に対して高い親和性を有することを意味する。

いくつかの又は任意の実施形態において、抗体は、１×１０^－７Ｍ以下、１×１０^－８Ｍ以下、１×１０^－９Ｍ以下、１×１０^－１０Ｍ以下、１×１０^－１１Ｍ以下又は１×１０^－１２Ｍ以下の親和性（Ｋｄ）で、配列番号１のスクレロスチン又はその天然に存在するバリアントに結合する。親和性は、種々の技術を使用して決定され、その一例は、親和性ＥＬＩＳＡアッセイである。様々な実施形態において、親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイによって決定される。様々な実施形態において、親和性は、速度論的方法によって決定される。様々な実施形態において、親和性は、平衡／溶液法によって決定される。米国特許出願公開第２００７／０１１０７４７号明細書（この開示は、参照により本明細書に援用される）には、スクレロスチンに対する抗体の親和性（Ｋｄ）を決定するのに好適な親和性アッセイのさらなる記載が含まれている。

様々な態様では、抗体は、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３から選択されるＣＤＲに対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％の同一性）を有する少なくとも１つのＣＤＲ配列を含む。ここで、ＣＤＲ－Ｈ１は、配列番号２に示す配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ２は、配列番号３に示す配列を有し、ＣＤＲ－Ｈ３は、配列番号４に示す配列を有し、ＣＤＲ－Ｌ１は、配列番号５に示す配列を有し、ＣＤＲ－Ｌ２は、配列番号６に示す配列を有し、ＣＤＲ－Ｌ３は、配列番号７に示す配列を有する。抗スクレロスチン抗体は、様々な態様において、２つのＣＤＲ又は６つのＣＤＲを含む。

好ましい実施形態では、抗スクレロスチン抗体は、以下の６つのＣＤＲのセットを含む：配列番号２のＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３のＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４のＣＤＲ－Ｈ３、配列番号５のＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６のＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号７のＣＤＲ－Ｌ３。

いくつかの又は任意の実施形態において、抗体は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号９に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。様々な態様において、配列番号８又は９と比較した配列の相違は、対応する配列におけるＣＤＲ領域の外側にある。いくつかの又は任意の実施形態では、抗体は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域及び配列番号９に記載されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。

いくつかの又は任意の実施形態において、抗スクレロスチン抗体は、配列番号１１に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖の全て又は一部及び配列番号１０に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖の全て又は一部を含む。

いくつかの又は任意の実施形態において、抗スクレロスチン抗体は、配列番号１３に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む重鎖の全て又は一部及び配列番号１２に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％の同一性（例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％又は１００％の同一性）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖の全て又は一部を含む。

他の抗スクレロスチン抗体の例としては、国際特許出願国際公開第２００８／０９２８９４号パンフレット、国際公開第２００８／１１５７３２号パンフレット、国際公開第２００９／０５６６３４号パンフレット、国際公開第２００９／０４７３５６号パンフレット、国際公開第２０１０／１００２００号パンフレット、国際公開第２０１０／１００１７９号パンフレット、国際公開第２０１０／１１５９３２号パンフレット及び国際公開第２０１０／１３０８３０号パンフレット（これらの各文献は、参照によりその全体が本明細書に援用される）に開示される抗スクレロスチン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。

抗体などのタンパク質に種々の翻訳後修飾を受け得るものがあることは、当業者によって理解されるであろう。これらの修飾の型及び程度は、多くの場合、タンパク質を発現するために使用される宿主細胞株及び培養条件に依存する。このような修飾としては、グリコシル化、メチオニン酸化、ジケトピペリジン形成、アスパラギン酸異性化及びアスパラギン脱アミド化におけるバリエーションを挙げることができる。よく起こる修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用によるカルボキシ末端の塩基性残基（例えば、リジン又はアルギニン）の喪失である（Ｈａｒｒｉｓ，ＲＪ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ７０５：１２９－１３４，１９９５に記載されるように）。

他の修飾としては、プロリン及びリシンのヒドロキシル化、セリル又はスレオニル残基のヒドロキシル基のリン酸化、リシン、アルギニン及びヒスチジン側鎖のα－アミノ基のメチル化（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ｐｐ．７９－８６［１９８３］（全体が本明細書に援用される））、Ｎ末端アミンのアセチル化並びに任意のＣ末端カルボキシル基のアミド化が挙げられる。

本明細書に記載の１種以上の抗体を含む医薬組成物は、容器（例えば、バイアル又はシリンジ）内において、このような医薬組成物の使用に関する説明書を提供する包装材料とともに配置され得る。一般に、このような説明書には、抗体濃度を記載する具体的な表現及び特定の実施形態において医薬組成物を再構成するために必要であり得る賦形剤成分又は希釈剤（例えば、水、生理食塩水又はＰＢＳ）の相対量を含む。

本実施例は、１２０ｇ／Ｌの濃度で抗体を含む最終的な医薬組成物を生成するために抗体を２０ｍＭ酢酸カルシウム、７％スクロースのｐＨ５．１ダイアフィルトレーション緩衝液に濃縮し、緩衝液交換する、高温での緩衝液交換（例えば、限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を介する）工程を使用する代表的な抗体精製プロセスを記載する。この方法に関する驚くべき結果は、比較的高い温度（例えば、３７℃）及びカルシウム塩（例えば、酢酸カルシウム）の両方を使用して過剰濃縮から高濃度のタンパク質を回収する能力である。酢酸カルシウムは、温度の上昇とともに溶解度を低減する特性を有する（例えば、Ａｐｅｌｂｌａｔ，Ａ．及びＭａｎｚｕｒｏｌａ，Ｅ．；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｔｈｅｒｍｏｄｙｎａｍｉｃｓ，１９９９，３１，１３４７－１３５７を参照されたい）。

溶解度と温度との間のこの反対の相関は、製剤を含有する酢酸カルシウムとの緩衝液交換（例えば、ＵＦ／ＤＦ）中の高温の使用が異常な沈殿又は他の潜在的に負の副次的作用を引き起こし得ることを示唆する。換言すると、製剤を含有する酢酸カルシウムに関して温度を上昇させることは、緩衝化塩の溶解度を低減するように見える。酢酸カルシウム（Ｃａ（Ａｃ）_２）の標的濃度は、ダイアフィルトレーション緩衝液中において約２０ｍＭ Ｃａ（Ａｃ）^２と相対的に低い一方、限外濾過膜表面での塩の局所的な濃度は、ＵＦプロセス中、特に過剰濃縮工程中にはるかに高くなり得る。高温及び非常に高いタンパク質濃度を伴うこれらの高い局所的Ｃａ（Ａｃ）_２濃度は、限外濾過プロセスが高い生成物収率をもたらすことができ、驚くべきことである。

図１は、過剰濃縮の材料の粘度に対する酢酸カルシウムの影響を示す。１０ｍＭ～２３ｍＭのカルシウムの添加は、粘度を有意に低下させた。これは、図２及び３におけるＵＦ／ＤＦパラメーターにおいても示され、Ｃｗａｌｌ（膜表面での最大タンパク質濃度）は、カルシウムの添加とともに１８６ｍｇ／ｍＬから２２０ｍｇ／ｍＬまで増大した。

粘度に対する温度の影響は、図４に示される。温度を上昇させることにより、所与のＵＦ／ＤＦ条件のための粘度及び得られる供給圧が低下した。

興味深いことに、ＵＦプールのカルシウム濃度は、過剰濃縮後のダイアフィルトレーション（ＤＦ）緩衝液と一致しない。ダイアフィルトレーションは、５５ｇ／Ｌの濃度でなされ、緩衝液を１０濾過容量（ＤＶ）にわたって２０ｍＭ酢酸カルシウム、７％スクロース、ｐＨ５．１に変換する。過剰濃縮は、３．３倍タンパク質濃度を増大させる（１８０ｇ／Ｌまで）。カルシウムが同じ程度まで濃縮されるならば、２０ｍＭのカルシウムＤＦ緩衝液濃度は、少なくとも６５ｍＭまで増大するであろう。驚くべきことに、実験的観察は、逆であり、カルシウム濃度は、過剰濃縮時にＤＦ緩衝液濃度未満に低下する。下の表１に示されるとおり、標的となる２０ｍＭ Ｃａ濃度は、８．２ｍＭのみの過剰濃縮カルシウムレベルをもたらす。

排除体積効果は、残余分緩衝液組成物を変化させることができるが、濾過中の温度上昇及び／又は高い局所的タンパク質濃度に起因する溶解度の変化のために、カルシウムイオンがタンパク質に優先的に配位しているか又は分割している可能性もある。

本実施例は、（例えば、約１２０ｇ／Ｌの）最終的な抗体医薬組成物を生成するために、濃縮し且つカルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換する高温での緩衝液交換（例えば、限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を介する）工程を使用する代表的な抗体精製プロセスを記載する。より高い温度（例えば、３７℃）及びより高い濃度のカルシウム塩（例えば、酢酸カルシウム）の両方を使用して過剰濃縮から高い濃度のタンパク質を回収する能力は、高温での酢酸カルシウムの溶解度効果に鑑みて驚くべきことである。

[配列表]
SEQUENCE LISTING

<110> Amgen Inc.

<120> METHOD OF PREPARING AN ANTIBODY PHARMACEUTICAL FORMULATION

<130> PA24-026

<150> US 62/717,357
<151> 2018-08-10

<160> 13

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 190
<212> PRT
<213> Homo sapiens


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> Human Sclerostin

<400> 1

Gln Gly Trp Gln Ala Phe Lys Asn Asp Ala Thr Glu Ile Ile Pro Glu
1 5 10 15


Leu Gly Glu Tyr Pro Glu Pro Pro Pro Glu Leu Glu Asn Asn Lys Thr
20 25 30


Met Asn Arg Ala Glu Asn Gly Gly Arg Pro Pro His His Pro Phe Glu
35 40 45


Thr Lys Asp Val Ser Glu Tyr Ser Cys Arg Glu Leu His Phe Thr Arg
50 55 60


Tyr Val Thr Asp Gly Pro Cys Arg Ser Ala Lys Pro Val Thr Glu Leu
65 70 75 80


Val Cys Ser Gly Gln Cys Gly Pro Ala Arg Leu Leu Pro Asn Ala Ile
85 90 95


Gly Arg Gly Lys Trp Trp Arg Pro Ser Gly Pro Asp Phe Arg Cys Ile
100 105 110


Pro Asp Arg Tyr Arg Ala Gln Arg Val Gln Leu Leu Cys Pro Gly Gly
115 120 125


Glu Ala Pro Arg Ala Arg Lys Val Arg Leu Val Ala Ser Cys Lys Cys
130 135 140


Lys Arg Leu Thr Arg Phe His Asn Gln Ser Glu Leu Lys Asp Phe Gly
145 150 155 160


Thr Glu Ala Ala Arg Pro Gln Lys Gly Arg Lys Pro Arg Pro Arg Ala
165 170 175


Arg Ser Ala Lys Ala Asn Gln Ala Glu Leu Glu Asn Ala Tyr
180 185 190


<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo HCDR1

<400> 2

Asp Tyr Asn Met His
1 5


<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo HCDR2

<400> 3

Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15


Gly



<210> 4
<211> 14
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo HCDR3

<400> 4

Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10


<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romoLCDR1

<400> 5

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10


<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo LCDR2

<400> 6

Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser
1 5


<210> 7
<211> 9
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo LCD3

<400> 7

Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr
1 5


<210> 8
<211> 123
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo light chain variable region

<400> 8

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60


Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val
100 105 110


Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120


<210> 9
<211> 107
<212> PRT
<213> Mus musculus


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo heavy chain variable region

<400> 9

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30


Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105


<210> 10
<211> 236
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Humanized antibody sequence


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo light chain

<400> 10

Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15


Leu Arg Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30


Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45


Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60


Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val
65 70 75 80


Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
85 90 95


Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
100 105 110


Gly Asp Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125


Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
130 135 140


Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
145 150 155 160


Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
165 170 175


Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
180 185 190


Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
195 200 205


Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
210 215 220


Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235


<210> 11
<211> 468
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Humanized Antibody sequence


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo heavy chain wild type

<400> 11

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly
1 5 10 15


Ala His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
20 25 30


Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
35 40 45


Thr Asp Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60


Glu Trp Met Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn
65 70 75 80


Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser
85 90 95


Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
100 105 110


Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr
115 120 125


Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
130 135 140


Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr
145 150 155 160


Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
165 170 175


Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
180 185 190


His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
195 200 205


Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr
210 215 220


Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val
225 230 235 240


Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
245 250 255


Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
260 265 270


Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285


His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
290 295 300


Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
305 310 315 320


Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335


Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro
340 345 350


Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365


Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
370 375 380


Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400


Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415


Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430


Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
435 440 445


Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
450 455 460


Ser Pro Gly Lys
465


<210> 12
<211> 214
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Polypeptide


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo light chain wild type without signal sequence

<400> 12

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15


Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30


Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45


Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60


Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80


Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asp Thr Leu Pro Tyr
85 90 95


Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110


Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125


Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140


Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160


Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175


Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190


Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205


Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210


<210> 13
<211> 449
<212> PRT
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> Synthetic Polypeptide


<220>
<221> MISC_FEATURE
<223> romo heavy chain wild type without signal sequence

<400> 13

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15


Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30


Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45


Gly Glu Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ala Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60


Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80


Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95


Ala Arg Leu Gly Tyr Asp Asp Ile Tyr Asp Asp Trp Tyr Phe Asp Val
100 105 110


Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125


Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
130 135 140


Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160


Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175


Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190


Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val
195 200 205


Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys
210 215 220


Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
225 230 235 240


Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255


Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270


Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285


Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
290 295 300


Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320


Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335


Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350


Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365


Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380


Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
385 390 395 400


Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415


Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430


Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445


Lys

本実施例は、（例えば、約１２０ｇ／Ｌの）最終的な抗体医薬組成物を生成するために、濃縮し且つカルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換する高温での緩衝液交換（例えば、限外濾過及びダイアフィルトレーション（ＵＦ／ＤＦ）を介する）工程を使用する代表的な抗体精製プロセスを記載する。より高い温度（例えば、３７℃）及びより高い濃度のカルシウム塩（例えば、酢酸カルシウム）の両方を使用して過剰濃縮から高い濃度のタンパク質を回収する能力は、高温での酢酸カルシウムの溶解度効果に鑑みて驚くべきことである。
本発明は、以下の実施形態を含む。
［１］
１０ｃＰ以下の粘度を有する抗体医薬製剤を作製する方法であって、抗体を含む組成物を、３０℃より高い温度において、カルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換することを含む方法。
［２］
前記交換工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーションを介して行われる、実施形態１に記載の方法。
［３］
前記組成物は、少なくとも９０ｍｇ／ｍＬの濃度で前記抗体を含む、実施形態１に記載の方法。
［４］
前記組成物は、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬの濃度で前記抗体を含む、実施形態１に記載の方法。
［５］
前記交換工程は、３０℃～４０℃の温度で行われる、実施形態１～４のいずれか一実施形態に記載の方法。
［６］
前記交換工程は、３５℃より高い温度で行われる、実施形態１～５のいずれか一実施形態に記載の方法。
［７］
前記交換工程は、３７℃で行われる、実施形態１～６のいずれか一実施形態に記載の方法。
［８］
前記カルシウム塩は、酢酸カルシウムである、実施形態１に記載の方法。
［９］
前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、少なくとも２０ｍＭの酢酸カルシウムを含む、実施形態１に記載の方法。
［１０］
前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、約２３ｍＭの酢酸カルシウムを含む、実施形態９に記載の方法。
［１１］
前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、ポリオールをさらに含む、実施形態１～１０のいずれか一実施形態に記載の方法。
［１２］
前記ポリオールは、スクロースである、実施形態１１に記載の方法。
［１３］
前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、約１％～約１５％の濃度で存在するスクロースを含む、実施形態１２に記載の方法。
［１４］
前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、約７％の濃度でスクロースを含む、実施形態１２に記載の方法。
［１５］
前記医薬製剤を濾過する工程をさらに含む、実施形態１～１４のいずれか一実施形態に記載の方法。
［１６］
前記医薬製剤を薬物製品形態に等分する工程をさらに含む、実施形態１～１４のいずれか一実施形態に記載の方法。
［１７］
前記抗体は、ロモソズマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、カナキヌマブ、セツキシマブ、セルトリズマブペゴル、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゲムツズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブチウキセタン、インフリキシマブ、イピリムマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナタリズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ又はウステキヌマブ、ベドリズマブである、実施形態１～１６のいずれか一実施形態に記載の方法。
［１８］
前記交換工程後の前記医薬製剤は、約５０ｍＭの酢酸塩及び約１２ｍＭのカルシウムを含む、実施形態１～１７のいずれか一実施形態に記載の方法。

Claims (18)

1. １０ｃＰ以下の粘度を有する抗体医薬製剤を作製する方法であって、抗体を含む組成物を、３０℃より高い温度において、カルシウム塩を含むダイアフィルトレーション緩衝液と緩衝液交換することを含む方法。
2. 前記交換工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーションを介して行われる、請求項１に記載の方法。
3. 前記組成物は、少なくとも９０ｍｇ／ｍＬの濃度で前記抗体を含む、請求項１に記載の方法。
4. 前記組成物は、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬの濃度で前記抗体を含む、請求項１に記載の方法。
5. 前記交換工程は、３０℃～４０℃の温度で行われる、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記交換工程は、３５℃より高い温度で行われる、請求項１～５のいずれか一項に記載の方法。
7. 前記交換工程は、３７℃で行われる、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記カルシウム塩は、酢酸カルシウムである、請求項１に記載の方法。
9. 前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、少なくとも２０ｍＭの酢酸カルシウムを含む、請求項１に記載の方法。
10. 前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、約２３ｍＭの酢酸カルシウムを含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、ポリオールをさらに含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記ポリオールは、スクロースである、請求項１１に記載の方法。
13. 前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、約１％～約１５％の濃度で存在するスクロースを含む、請求項１２に記載の方法。
14. 前記ダイアフィルトレーション緩衝液は、約７％の濃度でスクロースを含む、請求項１２に記載の方法。
15. 前記医薬製剤を濾過する工程をさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記医薬製剤を薬物製品形態に等分する工程をさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記抗体は、ロモソズマブ、アブシキシマブ、アダリムマブ、アレムツズマブ、バシリキシマブ、ベリムマブ、ベバシズマブ、ブレンツキシマブベドチン、カナキヌマブ、セツキシマブ、セルトリズマブペゴル、ダクリズマブ、デノスマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、ゲムツズマブ、ゴリムマブ、イブリツモマブチウキセタン、インフリキシマブ、イピリムマブ、ムロモナブ－ＣＤ３、ナタリズマブ、ニボルマブ、オファツムマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パニツムマブ、ラニビズマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、トシツモマブ、トラスツズマブ又はウステキヌマブ、ベドリズマブである、請求項１～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記交換工程後の前記医薬製剤は、約５０ｍＭの酢酸塩及び約１２ｍＭのカルシウムを含む、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。

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