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JP2023552773A - 炎症関連可溶性因子の阻害剤と組み合わせたキメラ抗原受容体（ｃａｒ）ｔ細胞療法の使用 - Google Patents

炎症関連可溶性因子の阻害剤と組み合わせたキメラ抗原受容体（ｃａｒ）ｔ細胞療法の使用 Download PDF

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JP2023552773A JP2023534128A JP2023534128A JP2023552773A JP 2023552773 A JP2023552773 A JP 2023552773A JP 2023534128 A JP2023534128 A JP 2023534128A JP 2023534128 A JP2023534128 A JP 2023534128A JP 2023552773 A JP2023552773 A JP 2023552773A
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Abstract

Figure 2023552773000001
がん（例えば、Ｂ細胞関連のがん、例えば、多発性骨髄腫）を治療するためのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の使用が本明細書で提供される。
【選択図】なし

Description

関連出願への相互参照
本出願は、２０２０年１２月４日に出願した米国出願番号第６３／１２１，７１６号の利益を主張する。この開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
電子的に提出した配列表への参照
本出願は、３３，９４１バイトのサイズを有する、２０２１年１１月２３日に作成された、14247-617-228_SEQ_LISTING.txtと題するＡＳＣＩＩテキストファイルとして本出願と共に提出した配列表を参照により組み込む。
１．分野
本明細書に提示される開示は、がん（例えば、Ｂ細胞関連のがん、例えば、多発性骨髄腫）を治療するための方法に関する。より具体的には、本開示は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を使用してがん（例えば、Ｂ細胞関連のがん、例えば、多発性骨髄腫）を治療するための改善された方法であって、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程、次いで、前記決定に基づき、抗体またはその抗原結合性断片（例えば、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合性断片）を含むＣＡＲを投与する工程を含む、方法、ならびにこれらのＣＡＲを発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）に関する。
２．背景
２．１．背景
がんの治療にアプローチするために、例えば従来の化学療法的アプローチ、ならびに免疫療法、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法を含む多くの選択肢が現在利用可能である。ある特定の事例では、患者の血清中のある特定の因子（例えば、タンパク質またはバイオマーカー）のレベルは、ＣＡＲ－Ｔ療法を投与すべきかどうかの決定に関連し得る。そのため、ＣＡＲ－Ｔ療法を投与すべきかどうかの決定に関連し得る患者の血清中のある特定の因子（例えば、タンパク質またはバイオマーカー）に対する必要性が存在する。
３．簡単な概要
本開示は、概しては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を使用してがん（例えばＢ細胞関連のがん、例えば、多発性骨髄腫）を治療する改善された方法であって、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程、および、決定に基づき、抗体またはその抗原結合性断片（例えば、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合性断片）を含むＣＡＲを投与する工程を含む、方法、ならびにこれらのＣＡＲを発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）を提供する。
１つの態様では、ヒトにおけるがんがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性であるかどうかを予測する方法であって、（ｉ）ヒトからの血清中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程；次いで（ｉｉ）（ｉ）の１つまたはそれ以上の可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清中のものと類似している場合に、治療有効用量のＣＡＲ Ｔ細胞をヒトに投与する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、それを必要とするヒトは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、ａ．それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していることを決定する工程；ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、がんを治療する方法であって、がんに罹っていると診断されたヒト患者に治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与する工程を含み、前記投与の前のヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、がんに罹っていると診断された患者がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与されるべきかどうかを決定する方法であって、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、患者はＣＡＲ Ｔ細胞のための候補となる、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞ならびにＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子のアンタゴニストをヒトに投与する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者における炎症関連可溶性因子のレベルまでヒトにおける炎症関連可溶性因子のレベルを低減させるための治療有効量でヒトに投与される。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。
特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１週間、２週間、３週間、または４週間前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月前に投与される。
４．図面の簡単な説明
図１は、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイでの９カ月時の非応答の相関を示す。ＡＵＣ、曲線下面積；ＤＣＮ、デコリン；ＦＤＲ、偽発見率；ＩＬ－１０、インターロイキン－１０；ＩＬ－１２、インターロイキン－１２；ＩＯ、免疫腫瘍学；Ｍ、月；ＮＣＲ１、天然細胞傷害性トリガー受容体１（natural cytotoxicity triggering receptor 1）；ＮＲ、ノンレスポンダー；ＰＤ、進行性疾患；ＰＤＣＤ１、プログラム細胞死１；ＰＧＦ、胎盤増殖因子；Ｒ、レスポンダー；ＴＮＦＲＳＦ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー。ＡＵＣ＞０．５はＮＲにおいてより高いアッセイを指し示す；ＦＤＲ＜０．１を有するＯ－ｌｉｎｋ ＩＯパネルアナライトが示されている。ｂＡＵＣ＞０．５はＮＲにおいてより高いアッセイを指し示す；ＦＤＲ＜０．１を有するＯ－ｌｉｎｋ ＩＯパネルアナライトが示されている。ｃＭ９ ＰＤは、Ｍ９の前に進行したレスポンダーを指し示す。ｄＭ９ Ｒは、≧Ｍ９において依然として応答したレスポンダーを指し示す。ｅＦＤＲ補正はＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法によって決定した。 図２は、Ｔ細胞エフェクター機能を負にモジュレートし得る炎症関連可溶性因子は最適以下の応答と関連付けられたことを示す。図２の左上のグラフは、ノンレスポンダー（Ｍ３ ＮＲ）およびレスポンダー（Ｍ３ Ｒ）におけるｉｄｅ－ｃｅｌ注入後３カ月におけるＣＤ８３ ｌｏｇ倍数変化を示す。図２の右上のグラフは、ノンレスポンダー（Ｍ３ ＮＲ）およびレスポンダー（Ｍ３ Ｒ）におけるｉｄｅ－ｃｅｌ注入後３カ月におけるＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）ｌｏｇ倍数変化を示す。図２の左下のグラフは、ノンレスポンダー（Ｍ９ ＮＲ）およびレスポンダー（Ｍ９ Ｒ）におけるｉｄｅ－ｃｅｌ注入後９カ月におけるＰＧＦ ｌｏｇ倍数変化を示す。図２の右下のグラフは、ノンレスポンダー（Ｍ９ ＮＲ）およびレスポンダー（Ｍ９ Ｒ）におけるｉｄｅ－ｃｅｌ注入後９カ月におけるＣＤ７０ ｌｏｇ倍数変化を示す。
５．配列番号の簡単な説明
配列番号１～３は、本明細書で企図されるＢＣＭＡ ＣＡＲのための例示的な軽鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号４～６は、本明細書で企図されるＢＣＭＡ ＣＡＲのための例示的な重鎖ＣＤＲ配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号７は、本明細書で企図されるＢＣＭＡ ＣＡＲのための例示的な軽鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号８は、本明細書で企図されるＢＣＭＡ ＣＡＲのための例示的な重鎖配列のアミノ酸配列を記載する。
配列番号９は、シグナルペプチド（アミノ酸１～２２）を有する、本明細書で企図される例示的なＢＣＭＡ ＣＡＲのアミノ酸配列を記載する。ＢＣＭＡ０２の成熟形態のアミノ酸配列は配列番号３７に記載される。
配列番号１０は、本明細書で企図される例示的なＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド配列を記載する。
配列番号１１はヒトＢＣＭＡのアミノ酸配列を記載する。
配列番号１２～２２は様々なリンカーのアミノ酸配列を記載する。
配列番号２３～３５はプロテアーゼ切断部位および自己切断性ポリペプチド切断部位のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３６は、例示的なＢＣＭＡ ＣＡＲをコードするベクターのポリヌクレオチド配列を記載する。表１を参照。
配列番号３７は、本明細書で企図される例示的な成熟ＢＣＭＡ ＣＡＲ（すなわち、シグナル配列を有しない）のアミノ酸配列を記載する。
配列番号３８はＢＣＭＡ０２ ｓｃＦｖのアミノ酸配列を記載する。
表１：配列のリスト:
Figure 2023552773000002
Figure 2023552773000003
Figure 2023552773000004
Figure 2023552773000005
Figure 2023552773000006
Figure 2023552773000007
６．詳細な説明
６．１．キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を使用してがんを治療するための方法
本明細書に提示される開示は、概しては、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を使用してがん（例えばＢ細胞関連のがん、例えば、多発性骨髄腫）を治療する改善された方法であって、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程、および、決定に基づき、抗体またはその抗原結合性断片（例えば、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合性断片）を含むＣＡＲを投与する工程を含む、方法、ならびにこれらのＣＡＲを発現するように遺伝子改変された免疫エフェクター細胞（例えば、Ｔ細胞）に関する。
１つの態様では、ヒトにおけるがんがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性であるかどうかを予測する方法であって、（ｉ）ヒトからの血清中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程；および（ｉｉ）（ｉ）の１つまたはそれ以上の可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清中のものと類似している場合に、治療有効用量のＣＡＲ Ｔ細胞をヒトに投与する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、それを必要とするヒトは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、ａ．それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していることを決定する工程；ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒトからの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。
１つの態様では、がんを治療する方法であって、がんに罹っていると診断されたヒト患者に治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与する工程を含み、前記投与の前のヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。
１つの態様では、がんに罹っていると診断された患者がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与されるべきかどうかを決定する方法であって、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、患者はＣＡＲ Ｔ細胞のための候補となる、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＣＤ８３のレベルは、対照と比べて約３．２５のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７）のレベルは、対照と比べて約６．３のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＰＧＦのレベルは、対照と比べて約８．６のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、患者からの血清試料中のＣＤ７０のレベルは、対照と比べて約５．０のｌｏｇ倍数変化またはそれ未満である。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、それを必要とするヒトは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、ａ．それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していることを決定する工程；ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程は、工程ａにおける決定の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に実施される。
特定の実施形態では、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程は、工程ａにおける決定の約１週間、２週間、３週間、または４週間後に実施される。特定の実施形態では、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程は、工程ａにおける決定の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に実施される。
１つの態様では、がんを治療する方法であって、がんに罹っていると診断されたヒト患者に治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与する工程を含み、前記投与の前のヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、前記投与の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、前記投与の約１週間、２週間、３週間、または４週間前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、前記投与の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
１つの態様では、がんに罹っていると診断された患者がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与されるべきかどうかを決定する方法であって、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、患者はＣＡＲ Ｔ細胞のための候補となる、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
１つの態様では、ヒトにおけるがんがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性であるかどうかを予測する方法であって、（ｉ）血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程；および（ｉｉ）（ｉ）の１つまたはそれ以上の可溶性因子のレベルが健康なヒトにおけるものと類似している場合に、治療有効用量のＣＡＲ Ｔ細胞をヒトに投与する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。
特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞ならびにＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子のアンタゴニストをヒトに投与する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、健康なヒトにおける炎症関連可溶性因子のレベルまでヒトにおける炎症関連可溶性因子のレベルを低減させるための治療有効量でヒトに投与される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者における炎症関連可溶性因子のレベルまでヒトにおける炎症関連可溶性因子のレベルを低減させるための治療有効量でヒトに投与される。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。
特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１週間、２週間、３週間、または４週間前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月前に投与される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞ならびにＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子の阻害剤をヒトに投与する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、健康なヒトにおける炎症関連可溶性因子のレベルまでヒトにおける炎症関連可溶性因子のレベルを低減させるための治療有効量でヒトに投与される。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。
特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１週間、２週間、３週間、または４週間前に投与される。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月前に投与される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、ａ．それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第１のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルよりも高いことを決定する工程；ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量の炎症関連可溶性因子のアンタゴニストをヒトに引き続いて提供する工程；ｃ．工程ｂの後に、それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルを決定する工程を含み；１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、それを必要とするヒトは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、ａ．それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルよりも高いことを決定する工程；ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量の炎症関連可溶性因子のアンタゴニストをヒトに引き続いて提供する工程；ｃ．工程ｂの後に、それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していることを決定する工程；ｄ．工程ｃにおける決定に基づき、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程は、工程ｃにおける決定の約１週間、２週間、３週間、または４週間後に実施される。特定の実施形態では、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程は、工程ｃにおける決定の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に実施される。
１つの態様では、がんを治療する方法であって、がんに罹っていると診断されたヒト患者に治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与する工程を含み、患者が、治療有効用量の炎症関連可溶性因子のアンタゴニストを以前に投与されており、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の前の患者からの血清試料が、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１週間、２週間、３週間、または４週間前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。
１つの態様では、がんに罹っていると診断された患者がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与されるべきかどうかを決定する方法であって、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、患者が、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のアンタゴニストを以前に投与されており、および患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、患者はＣＡＲ Ｔ細胞のための候補となる、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、ａ．それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第１のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルよりも高いことを決定する工程；ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量の炎症関連可溶性因子の阻害剤をヒトに引き続いて提供する工程；ｃ．工程ｂの後に、それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルを決定する工程を含み；１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、それを必要とするヒトは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。特定の実施形態では、それを必要とするヒトは、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される。
１つの態様では、それを必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、ａ．それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルよりも高いことを決定する工程；ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量の炎症関連可溶性因子の阻害剤をヒトに引き続いて提供する工程；ｃ．工程ｂの後に、それを必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の第２のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していることを決定する工程；ｄ．工程ｃにおける決定に基づき、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程を含む、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程は、工程ｃにおける決定の約１週間、２週間、３週間、または４週間後に実施される。特定の実施形態では、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、それを必要とするヒトに引き続いて提供する工程は、工程ｃにおける決定の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に実施される。
１つの態様では、がんを治療する方法であって、がんに罹っていると診断されたヒト患者に治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与する工程を含み、患者が、治療有効用量の炎症関連可溶性因子の阻害剤を以前に投与されており、および治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の前の患者からの血清試料が、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１週間、２週間、３週間、または４週間前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。特定の実施形態では、ヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月前に、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される。
１つの態様では、がんに罹っていると診断された患者がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与されるべきかどうかを決定する方法であって、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、患者が、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子の阻害剤を以前に投与されており、および患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、健康なヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、患者はＣＡＲ Ｔ細胞のための候補となる、方法が本明細書で提供される。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１の１つまたはそれ以上である。特定の実施形態では、１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３の１つまたはそれ以上である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の範囲の用量で投与される。
本明細書に提示される方法では、決定は、関連技術分野の当業者に周知の標準的な技術を使用して行われてもよい。追加的に、決定する工程は、炎症関連可溶性因子（例えば、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１）のレベルを決定するための標準的な技術、例えば血清検査または血漿検査または血液検査を利用することによって行われてもよい。例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞、例えばｉｄｅ－ｃｅｌ）に対して応答性の患者または健康なヒトからの血液試料（例えば、末梢血試料）中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルは、関連技術分野の当業者に周知の標準的な技術、例えば血清検査、血液検査、または血漿検査、例えば実施例において使用されたアッセイを使用して決定されてもよい。健康なヒトは、例えば、疾患を有すると診断されていないヒト（例えば、がんを有しないヒト）であってもよい。
特定の実施形態では、腫瘍またはがんは、リンパ腫、肺がん、乳がん、前立腺がん、副腎皮質癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、黒色腫、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、癒着性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢原始神経外胚葉腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽腫、非横紋筋肉腫軟組織肉腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、ウィルムズ腫瘍、神経膠芽腫、粘液腫、線維腫、脂肪腫性慢性リンパ球性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、脈管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｔリンパ球前リンパ球性白血病、Ｔリンパ球大顆粒状リンパ球性白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔリンパ球白血病／リンパ腫、節外ＮＫ／Ｔリンパ球白血病、鼻型・腸疾患型Ｔリンパ球リンパ腫、肝脾Ｔリンパ球リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉腫、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹腫、血管免疫芽球性Ｔリンパ球リンパ腫、末梢Ｔリンパ球リンパ腫（不特定）、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、または多発性骨髄腫である。
特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫、慢性リンパ球性白血病、または非ホジキンリンパ腫である。特定の実施形態では、がんは非ホジキンリンパ腫であり、非ホジキンリンパ腫はバーキットリンパ腫、慢性リンパ球性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆細胞Ｂリンパ芽球性リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫である。特定の実施形態では、がんは、多発性骨髄腫である。特定の実施形態では、多発性骨髄腫は高リスクの多発性骨髄腫または再発および難治性の多発性骨髄腫である。特定の実施形態では、多発性骨髄腫は高リスクの多発性骨髄腫であり、高リスクの多発性骨髄腫はＲ－ＩＳＳステージＩＩＩの疾患および／または早期再発によって特徴付けられる疾患である。特定の実施形態では、多発性骨髄腫はＲ－ＩＳＳステージＩＩＩの疾患ではない。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、がんは、脳がん、膠芽細胞腫、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頚部がん、黒色腫、肺がん、子宮がん、卵巣がん、結腸直腸がん、肛門がん、肝がん、肝細胞癌、胃がん、精巣がん、内膜がん、子宮頸がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、食道がん、腸がん、甲状腺がん、副腎がん、膀胱がん、腎がん、乳がん、多発性骨髄腫、肉腫、肛門がんまたは扁平上皮細胞がんである。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子は、胎盤増殖因子（ＰＧＦ）、ＣＤ７０、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー４（ＴＮＦＲＳＦ４）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー９（ＴＮＦＲＳＦ９またはｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、デコリン（ＤＣＮ）、分化クラスター８３（ＣＤ８３）、インターロイキン１０（ＩＬ－１０）、プログラム細胞死１（ＰＤＣＤ１）、インターロイキン１２（ＩＬ－１２）、および天然細胞傷害性トリガー受容体１（ＮＣＲ１）の１つまたはそれ以上である。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７もしくはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、またはＮＣＲ１の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＰＧＦの阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＣＤ７０の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＴＮＦＲＳＦ４の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＤＣＮの阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＣＤ８３の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＩＬ１０の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＰＤＣＤ１の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＩＬ１２の阻害剤またはアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは、ＮＣＲ１の阻害剤またはアンタゴニストである。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７もしくはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、またはＮＣＲ１の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＰＧＦの阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＣＤ７０の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ４の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＤＣＮの阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＣＤ８３の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＩＬ１０の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＰＤＣＤ１の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＩＬ１２の阻害剤である。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤は、ＮＣＲ１の阻害剤である。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７もしくはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、またはＮＣＲ１のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＧＦのアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＣＤ７０のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＴＮＦＲＳＦ４のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＤＣＮのアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＣＤ８３のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＩＬ１０のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＤＣＤ１のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＩＬ１２のアンタゴニストである。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＮＣＲ１のアンタゴニストである。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子の阻害剤またはアンタゴニストは抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７もしくはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、またはＮＣＲ１に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＧＦに対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＣＤ７０に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＴＮＦＲＳＦ４に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＤＣＮに対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＣＤ８３に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＩＬ１０に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＰＤＣＤ１に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＩＬ１２に対する抗体である。特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＮＣＲ１に対する抗体である。
上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＩＬ－１２のアンタゴニストはＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）である。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、１００ｋｇ以下の体重の成人ヒトに最初におよび４週後に皮下に投与される約４５ｍｇの用量で、続いて１２週毎に皮下に投与される４５ｍｇの用量で投与される。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、１００ｋｇより高い体重の成人ヒトに最初におよび４週後に皮下に投与される約９０ｍｇの用量で、続いて１２週毎に皮下に投与される９０ｍｇの用量で投与される。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、６０ｋｇ未満の体重の小児ヒト患者に約０．７５ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、６０ｋｇ～１００ｋｇの体重の小児ヒト患者に約４５ｍｇの用量で投与される。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、１００ｋｇより高い体重の小児ヒト患者に約９０ｍｇの用量で投与される。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、５５ｋｇまでの体重の成人ヒトに約２６０ｍｇの用量で投与される。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、５５ｋｇ～８５ｋｇの体重の成人ヒトに約３９０ｍｇの用量で投与される。特定の実施形態では、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標）（ウステキヌマブ）は、８５ｋｇより高い体重の成人ヒトに約５２０ｍｇの用量で投与される。
因子（例えば、タンパク質）の阻害剤またはアンタゴニストはタンパク質トラップであってもよい。タンパク質トラップは、例えば、受容体の最初の３つのＩｇドメイン（すなわち、リガンド結合エレメント）をヒトＩｇＧ１の定常領域（Ｆｃ）に融合させることにより作製され得る。Holash et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Aug 20; 99(17):11393-11398を参照。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストはタンパク質トラップである。特定の実施形態では、タンパク質トラップは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子に結合する。特定の実施形態では、タンパク質トラップは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７もしくはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、またはＮＣＲ１に結合する。特定の実施形態では、タンパク質トラップは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される炎症関連可溶性因子に結合する。特定の実施形態では、タンパク質トラップは、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、またはＣＤ８３に結合する。
ＣＡＲ Ｔ療法と組み合わせられてもよい、例えば、本明細書に記載される１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルまたは活性を低減させるためにＣＡＲ Ｔ療法の前に投与されてもよい、可溶性因子の例示的なアンタゴニストは、以下：ＩＬ－１２に対するウステキヌマブならびにＣＤ１３７に対するウレルマブおよびウトミルマブを含む。
特定の実施形態では、対象は、ＣＡＲ Ｔ細胞の対象への投与の前に、ＣＡＲ Ｔ細胞の製造のためにＰＢＭＣを収集する白血球アフェレーシス手順を受ける。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は静脈内注入によって投与される。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、対象はヒト（例えば、ヒト患者）である。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ０２、ＡＢＥＣＭＡ（著作権）、ＪＣＡＲＨ１２５、ＪＮＪ－６８２８４５２８（ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ；１０，９３４，３６３の配列番号２６５もしくはＷＯ２０１８／０２８６４７の配列番号３００を含み、シグナルペプチドを有するかもしくは有しないタンパク質）（Ｊａｎｓｓｅｎ／Ｌｅｇｅｎｄ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－１０１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、ＰＢＣＡＲ２６９Ａ（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－Ａｌｌｏ１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ａｌｌｏ－７１５（Ｐｆｉｚｅｒ／Ａｌｌｏｇｅｎｅ）、ＣＴ０５３（Ｃａｒｓｇｅｎ）、Ｄｅｓｃａｒｔｅｓ－０８（Ｃａｒｔｅｓｉａｎ）、ＰＨＥ８８５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＴＸ１２０（ＣＲＩＳＰＲ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ療法、例えば、Ｙｅｓｃａｒｔａ、Ｋｙｍｒｉａｈ、Ｔｅｃａｒｔｕｓ、リソカブタジェンマラリューセル（ｌｉｓｏ－ｃｅｌ）、または他の任意の細胞表面マーカーを標的とするＣＡＲ Ｔ療法である。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞療法は、ＢＣＭＡ０２、ＡＢＥＣＭＡ（著作権）、ＪＣＡＲＨ１２５、ＪＮＪ－６８２８４５２８（ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ；１０，９３４，３６３の配列番号２６５もしくはＷＯ２０１８／０２８６４７の配列番号３００を含み、シグナルペプチドを有するかもしくは有しないタンパク質）（Ｊａｎｓｓｅｎ／Ｌｅｇｅｎｄ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－１０１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、ＰＢＣＡＲ２６９Ａ（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－Ａｌｌｏ１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ａｌｌｏ－７１５（Ｐｆｉｚｅｒ／Ａｌｌｏｇｅｎｅ）、ＣＴ０５３（Ｃａｒｓｇｅｎ）、Ｄｅｓｃａｒｔｅｓ－０８（Ｃａｒｔｅｓｉａｎ）、ＰＨＥ８８５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＴＸ１２０（ＣＲＩＳＰＲ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ療法、例えば、Ｙｅｓｃａｒｔａ、Ｋｙｍｒｉａｈ、Ｔｅｃａｒｔｕｓ、リソカブタジェンマラリューセル（ｌｉｓｏ－ｃｅｌ）、または他の任意の細胞表面マーカーを標的とするＣＡＲ Ｔ療法である。
特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞（ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）である。ＢＣＭＡは腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーのメンバーである（例えばThompson et al., J. Exp. Medicine, 192(1): 129-135, 2000およびMackay et al., Annu. Rev. Immunol, 21: 231-264, 2003を参照）。ＢＣＭＡは、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）および増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）に結合する（例えばMackay et al., 2003およびKalled et al., Immunological Reviews, 204: 43-54, 2005を参照）。良性細胞の中で、ＢＣＭＡは主として形質細胞および成熟Ｂ細胞のサブセットで発現されることが報告されている（例えばLaabi et al., EMBO J., 77(1 ): 3897-3904, 1992；Laabi et al., Nucleic Acids Res., 22(7): 1147-1154,, 1994；Kalled et al., 2005；O'Connor et al., J. Exp. Medicine, 199(1): 91-97, 2004；およびNg et al., J. Immunol., 73(2): 807-817, 2004を参照）。ＢＣＭＡが欠乏したマウスは健康で、正常な数のＢ細胞を有しているが、長寿命の形質細胞の生存は障害されている（例えばO'Connor et al., 2004；Xu et al., Mol. Cell. Biol., 21(12): 4067-4074, 2001；およびSchiemann et al., Science, 293(5537): 2 111-21 14, 2001を参照）。ＢＣＭＡ ＲＮＡは多発性骨髄腫の細胞およびその他のリンパ腫において普遍的に検出されており、ＢＣＭＡタンパク質は多発性骨髄腫患者由来の形質細胞の表面において何人かの研究者によって検出されている（例えばNovak et al., Blood, 103(2): 689-694, 2004；Neri et al., Clinical Cancer Research, 73(19): 5903-5909, 2007；Bellucci et al., Blood, 105(10): 3945-3950, 2005；およびMoreaux et al., Blood, 703(8): 3148-3157, 2004を参照）。
特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを含み、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とする抗体または抗体断片を含む。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを含み、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲは一本鎖Ｆｖ抗体または抗体断片（ｓｃＦｖ）を含む。特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞はＢＣＭＡを指向するＣＡＲを含み、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲはＢＣＭＡ０２ ｓｃＦｖ、例えば配列番号３８を含む。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを含む。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とする抗体または抗体断片を含む。上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞はＢＣＭＡを指向するＣＡＲを含み、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲは一本鎖Ｆｖ抗体または抗体断片（ｓｃＦｖ）を含む。上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞はＢＣＭＡを指向するＣＡＲを含み、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲは配列番号３７を含む。上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞はＢＣＭＡを指向するＣＡＲを含み、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲはＢＣＭＡ０２ ｓｃＦｖ、例えば配列番号３８を含む。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲは配列番号１０によってコードされる。ある特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞は、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ、例えば配列番号９、配列番号３７、または配列番号３８のアミノ酸２２～４９３または１～４９３を含むＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔをコードする核酸、例えばベクターを含むか、または配列番号１０を含む核酸、例えばベクターを含む。上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞はイデカブタジェンビクリューセル細胞である。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記ＣＡＲ Ｔ細胞療法（例えば、ＢＣＭＡを指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞（ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）、例えば、イデカブタゲンビクルユーセル（ｉｄｅ－ｃｅｌ）細胞）は、１０％、５％、３％、２％または１％のＣＡＲ Ｔ細胞の老化集団、例えば、ＣＤ４ ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＡＲ＋／ＣＤ５７＋）を含む細胞の集団を含む。上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記組織試料は、血液、血漿または血清である。上記の態様または実施形態のいずれかの別の特定の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する細胞によって引き起こされる前記疾患は、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病または非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病／小リンパ性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂ－リンパ芽球性リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫）である。特定の実施形態では、疾患は、多発性骨髄腫、例えば、高リスクの多発性骨髄腫または再発および難治性の多発性骨髄腫である。他の特定の実施形態では、高リスクの多発性骨髄腫は、Ｒ－ＩＳＳステージＩＩＩ疾患および／または早期再発によって特徴付けられる疾患（例えば、最後の治療レジメン、例えば、プロテアソーム阻害剤、免疫調節剤および／またはデキサメタゾンを用いる最後の治療レジメンの日付から１２カ月以内の進行性の疾患）である。特定の実施形態では、多発性骨髄腫は、Ｒ－ＩＳＳステージＩＩＩ疾患ではない。特定の実施形態では、ＢＣＭＡを発現する細胞によって引き起こされる前記疾患は、非ホジキンリンパ腫であり、非ホジキンリンパ腫は、バーキットリンパ腫、慢性リンパ性白血病／小リンパ性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆体Ｂ－リンパ芽球性リンパ腫およびマントル細胞リンパ腫からなる群から選択される。
一実施形態では、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現するＴ細胞（ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）の投与の前に、腫瘍を有する対象は、腫瘍によるＢＣＭＡの発現について評価されている。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞は、Ｔ細胞、例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞または細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、Ｔキラー細胞またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。別の特定の実施形態では、免疫細胞は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞の投与量で投与される。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞、例えばＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）は、１５０×１０６細胞～４５０×１０６細胞、３００×１０６細胞～６００×１０６細胞、３５０×１０６細胞～６００×１０６細胞、３５０×１０６細胞～５５０×１０６細胞、４００×１０６細胞～６００×１０６細胞、１５０×１０６細胞～３００×１０６細胞または４００×１０６細胞～５００×１０６細胞の範囲の用量で投与される。一部の実施形態では、免疫細胞は、約１５０×１０６細胞、約２００×１０６細胞、約２５０×１０６細胞、約３００×１０６細胞、約３５０×１０６細胞、約４００×１０６細胞、約４５０×１０６細胞、約５００×１０６細胞または約５５０×１０６細胞の用量で投与される。一実施形態では、免疫細胞は、約４５０×１０６細胞の用量で投与される。一部の実施形態では、対象は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）の１回の注入を投与される。一部の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞の投与は反復される（例えば、免疫細胞の第２の用量が、対象に投与される）。一部の実施形態では、対象は、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞の１回の注入を投与される。一部の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞の投与は反復される（例えば、免疫細胞の第２の用量が、対象に投与される）。
本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）は、約１５０×１０６細胞～約３００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約５５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約１５０×１０６細胞～約２５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約６００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約６００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約４００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約３５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約３００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約４００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約３５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞（例えば、自己Ｔ細胞）である。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、治療されている対象は、対象へのその投与の前にＣＡＲを発現する免疫細胞を製造するために自己免疫細胞を収集するために、白血球アフェレーシス手順を受ける。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、静脈内注入によって投与される。
本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）は、約１５０×１０６細胞～約３００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約５５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約１５０×１０６細胞～約２５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約６００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約６００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約４００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約３５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約３００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約４００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約３５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞（例えば、自己Ｔ細胞）である。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、治療されている対象は、対象へのその投与の前にＣＡＲを発現する免疫細胞を製造するために自己免疫細胞を収集するために、白血球アフェレーシス手順を受ける。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、静脈内注入によって投与される。
本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞（ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）は、約１５０×１０６細胞～約３００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約５５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約１５０×１０６細胞～約２５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３００×１０６細胞～約６００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約３５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約６００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４００×１０６細胞～約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約４００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約３５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２００×１０６細胞～約３００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４５０×１０６細胞～約５００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約４００×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約２５０×１０６細胞～約３５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞は、約４５０×１０６細胞の投与量で投与される。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞はＴ細胞（例えば、自己Ｔ細胞）である。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、治療されている対象は、対象へのその投与の前にＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞を製造するために自己免疫細胞を収集するために、白血球除去アフェレーシス手順を受ける。本明細書に記載される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）は、静脈内注入によって投与される。
本明細書に開示される態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞）の投与の前に、治療されている対象は、リンパ球枯渇（ＬＤ）化学療法を投与される。特定の実施形態では、ＬＤ化学療法は、フルダラビンおよび／またはシクロホスファミドを含む。特定の実施形態では、ＬＤ化学療法は、１、２、３、４、５、６または７日の期間（例えば、３日）の間、フルダラビン（例えば、静脈内投与には約３０ｍｇ／ｍ２）およびシクロホスファミド（例えば、静脈内投与には約３００ｍｇ／ｍ２）を含む。他の特定の実施形態では、ＬＤ化学療法は、節５．９に記載される化学療法剤のいずれも含む。特定の実施形態では、対象は、ＬＤ化学療法の投与の１、２、３、４、５、６または７日後に（例えば、ＬＤ化学療法の投与の２または３日後に）、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞を投与される。特定の実施形態では、対象は、ＬＤ化学療法の開始の前に、少なくとも１週間もしくはそれよりも長く、少なくとも２週間もしくはそれよりも長く（少なくとも１４日もしくはそれよりも長く）、少なくとも３週間もしくはそれよりも長く、少なくとも４週間もしくはそれよりも長く、少なくとも５週間もしくはそれよりも長く、または少なくとも６週間もしくはそれよりも長く、いずれの療法も受けなかった。本明細書に開示される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞の投与の前に、治療されている対象は、単一の以前の治療レジメンのみを受けていた。
本明細書に開示される態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲを発現する免疫細胞（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）の投与の前に、治療されている対象は、リンパ球枯渇（ＬＤ）化学療法を投与される。特定の実施形態では、ＬＤ化学療法は、フルダラビンおよび／またはシクロホスファミドを含む。特定の実施形態では、ＬＤ化学療法は、１、２、３、４、５、６または７日の期間（例えば、３日）の間、フルダラビン（例えば、静脈内投与には約３０ｍｇ／ｍ２）およびシクロホスファミド（例えば、静脈内投与には約３００ｍｇ／ｍ２）を含む。他の特定の実施形態では、ＬＤ化学療法は、節５．９に記載される化学療法剤のいずれも含む。特定の実施形態では、対象は、ＬＤ化学療法の投与の１、２、３、４、５、６または７日後に（例えば、ＬＤ化学療法の投与の２または３日後に）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞を投与される。特定の実施形態では、対象は、ＬＤ化学療法の開始の前に、少なくとも１週間もしくはそれよりも長く、少なくとも２週間もしくはそれよりも長く（少なくとも１４日もしくはそれよりも長く）、少なくとも３週間もしくはそれよりも長く、少なくとも４週間もしくはそれよりも長く、少なくとも５週間もしくはそれよりも長く、または少なくとも６週間もしくはそれよりも長く、いずれの療法も受けなかった。本明細書に開示される実施形態のいずれかの特定の実施形態では、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）を指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞の投与の前に、治療されている対象は、単一の以前の治療レジメンのみを受けていた。
上記の実施形態のいずれかのために、対象は、前記免疫細胞、例えば、Ｔ細胞を収集し、単離するためにアフェレーシスを受ける。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記対象は、前記アフェレーシスの時点で以下を示す：Ｍ－タンパク質（血清タンパク質電気泳動［ｓＰＥＰ］または尿タンパク質電気泳動［ｕＰＥＰ］）：ｓＰＥＰ≧０．５ｇ／ｄＬまたはｕＰＥＰ≧２００ｍｇ／２４時間；血清または尿において測定可能な疾患を伴わない、血清免疫グロブリン遊離軽鎖≧１０ｍｇ／ｄＬおよび異常な血清免疫グロブリンカッパラムダ遊離軽鎖比を伴う軽鎖多発性骨髄腫；ならびに／または米国東海岸がん臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）活動状態≦１。より特定の実施形態では、前記対象は、アフェレーシスの時点でさらに：プロテアソーム阻害剤、免疫調節剤（レナリドミドまたはポマリドミド）および抗ＣＤ３８抗体を用いる以前の治療を含む、少なくとも３つの前記の以前の治療のラインを受けていた；治療のラインに対して進行性疾患が最良応答であるまで、以前の治療の前記の少なくとも３つのライン各々について少なくとも２の治療の連続周期を受けていた；以前の治療の最も最近のラインで、またはその６０日以内で進行性疾患の証拠を有している；および／または前記の治療の以前のラインのうち少なくとも１つに対して応答（最小応答またはより良好なもの）に達していた。上記の実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記対象は、前記投与の時点で以下を示す：Ｍ－タンパク質（血清タンパク質電気泳動［ｓＰＥＰ］または尿タンパク質電気泳動［ｕＰＥＰ］）：ｓＰＥＰ≧０．５ｇ／ｄＬまたはｕＰＥＰ≧２００ｍｇ／２４時間；血清または尿において測定可能な疾患を伴わない、血清免疫グロブリン遊離軽鎖≧１０ｍｇ／ｄＬおよび異常な血清免疫グロブリンカッパラムダ遊離軽鎖比を伴う軽鎖多発性骨髄腫；ならびに／または米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）活動状態≦１。別のより特定の実施形態では、前記対象はさらに：１つの以前の抗骨髄腫治療レジメンのみを受けていた；以下の高リスク因子を有している：Ｒ－ＩＳＳステージＩＩＩおよび（ｉ）対象が誘導および幹細胞移植を受けている場合の、第１の移植の日付から１２カ月未満の進行性疾患（ＰＤ）；または（ｉｉ）対象が誘導のみを受けている場合の、最小でもプロテアソーム阻害剤、免疫調節剤およびデキサメタゾンを含有していなくてはならない最後の治療レジメンの日付から１２カ月未満のＰＤとして定義される早期再発。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記ＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とする抗体または抗体断片を含む。より特定の実施形態では、前記ＣＡＲは、一本鎖Ｆｖ抗体断片（ｓｃＦｖ）を含む。より特定の実施形態では、前記ＣＡＲは、ＢＣＭＡ０２ ｓｃＦｖ、例えば、配列番号３８を含む。上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記免疫細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞である。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＢＣＭＡ、例えば、ＢＣＭＡを標的とするマウス一本鎖Ｆｖ抗体断片を含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ＣＤ８αポリペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むヒトＢＣＭＡポリペプチドヒンジドメインに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＢＣＭＡ、例えば、ｓｃＦＶが配列番号９の抗ＢＣＭＡ０２ ＣＡＲのものであるＢＣＭＡを標的とするマウスｓｃＦｖを含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号９または配列番号３７である、またはそれを含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号９である、またはそれを含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、配列番号３７である、またはそれを含む。本明細書における任意の実施形態のより特定の実施形態では、前記免疫細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル（ｉｄｅ－ｃｅｌ）細胞である。一実施形態では、免疫細胞は、ＢＣＭＡ、例えば、ＢＣＭＡを標的とするマウス一本鎖Ｆｖ抗体断片を含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ＣＤ８αポリペプチド、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むＢＣＭＡ、ヒンジドメインに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖを含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、配列番号９または配列番号３７である、またはそれを含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、配列番号９である、またはそれを含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、配列番号３７である、またはそれを含むキメラ抗原受容体を含む。
他の実施形態では、本明細書で企図される遺伝子改変された免疫エフェクター細胞は、Ｂ細胞関連状態、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する患者に投与される。
ＣＡＲ Ｔ細胞療法、例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞療法の施行後の可溶性（すなわち、非膜結合型）ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）の量を使用して、対象をＣＡＲ Ｔ細胞療法に対して適切に応答すると予測できるか否か、または対象が異なる抗がん療法を施行されるべきであるか否かを決定できる。ＣＡＲ Ｔ細胞療法の施行後の組織試料（例えば、血清、血漿、リンパまたは血液）におけるｓＢＣＭＡレベルのより大きな低下は、より臨床上有益なアウトカム（例えば、極めて良好な部分奏効、完全奏効またはストリンジェントな完全奏効）と相関している。一態様では、例えば、対象から得た組織試料において可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）の第１のレベルを決定する工程；ＢＣＭＡを指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞（ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）を含む第１のＢＣＭＡベースの治療モダリティーを対象に施行する工程、次いで、対象から得た組織試料において可溶性ＢＣＭＡ（ｓＢＣＭＡ）の第２のレベルを決定する工程を含む、それを必要とする対象におけるＢ細胞成熟剤（ＢＣＭＡ）を発現する細胞によって惹起される疾患を治療する方法であって、ｓＢＣＭＡの前記第２のレベルが、ｓＢＣＭＡの前記第１のレベルの約３０％より大きい場合に、対象が引き続いて前記疾患を治療するための第２のＢＣＭＡベースの治療モダリティーを提供され、第１のＢＣＭＡベースの治療モダリティーおよび第２のＢＣＭＡベースの治療モダリティーが、異なったＢＣＭＡベースの治療モダリティーである、方法が本明細書で提供される。特定の実施形態では、免疫細胞は、イデカブタゲンビクルユーセル細胞である。ある特定の実施形態では、第２のＢＣＭＡベースの治療モダリティーは、イデカブタゲンビクルユーセル細胞ではない。ある特定の実施形態では、第２のＢＣＭＡベースの治療モダリティーは、イデカブタゲンビクルユーセル細胞を含まない。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記ＣＡＲ Ｔ細胞療法（例えば、ＢＣＭＡを指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する免疫細胞（ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）、例えば、イデカブタゲンビクルユーセル（ｉｄｅ－ｃｅｌ）細胞）は、約１０％、５％、３％、２％または１％の活性化ＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、活性化ＣＤ８ ＣＡＲ Ｔ細胞（ＣＤ３＋／ＣＤ８＋／ＣＡＲ＋／ＣＤ２５＋）を含む細胞の集団を含む。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記ＣＡＲは、目的の抗原を標的とする抗体または抗体断片を含む。目的の抗原は任意の目的の抗原であり得、例えば、腫瘍細胞上の抗原であり得る。腫瘍細胞は、例えば、固形腫瘍中の細胞、または血液がんの細胞であってもよい。抗原は、任意の腫瘍またはがん種の細胞、例えば、リンパ腫、肺がん、乳がん、前立腺がん、副腎皮質癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、黒色腫、例えば、悪性黒色腫、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、癒着性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢原始神経外胚葉腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽腫、非横紋筋肉腫軟組織肉腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、ウィルムズ腫瘍、神経膠芽腫、粘液腫、線維腫、または脂肪腫などの細胞上に発現される任意の抗原であり得る。より特定の実施形態では、前記リンパ腫は、慢性リンパ球性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、脈管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｔリンパ球前リンパ球性白血病、Ｔリンパ球大顆粒状リンパ球性白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔリンパ球白血病／リンパ腫、節外ＮＫ／Ｔリンパ球白血病、鼻型・腸疾患型Ｔリンパ球リンパ腫、肝脾Ｔリンパ球リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉症、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔリンパ球リンパ腫、末梢Ｔリンパ球リンパ腫（不特定）、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、または多発性骨髄腫であり得る。
ある特定の実施形態では、抗原は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である。様々な特定の実施形態では、限定なしに、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、Ｈｅｒ２、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん抗原－１２５（ＣＡ－１２５）、ＣＡ１９－９、カルレチニン、ＭＵＣ－１、上皮膜タンパク質（ＥＭＡ）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、グロス嚢胞性疾患流体タンパク質（ＧＣＤＦＰ－１５）、ＨＭＢ－４５抗原、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、タンパク質メラン－Ａ（ＭＡＲＴ－１）、ｍｙｏ－Ｄ１、筋肉特異的アクチン（ＭＳＡ）、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィシス（synaptophysis）、サイログロブリン、甲状腺転写因子－１、二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソエンザイムＭ２型（腫瘍Ｍ２－ＰＫ）、異常ｒａｓタンパク質、または異常ｐ５３タンパク質である。
ある特定の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、がん／精巣（ＣＴ）抗原、例えば、ＢＡＧＥ、ＣＡＧＥ、ＣＴＡＧＥ、ＦＡＴＥ、ＧＡＧＥ、ＨＣＡ６６１、ＨＯＭ－ＴＥＳ－８５、ＭＡＧＥＡ、ＭＡＧＥＢ、ＭＡＧＥＣ、ＮＡ８８、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＳＡＲ－３５、ＯＹ－ＴＥＳ－１、ＳＰＡＮＸＢ１、ＳＰＡ１７、ＳＳＸ、ＳＹＣＰ１、またはＴＰＴＥである。
ある特定の他の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、炭水化物またはガングリオシド、例えば、ｆｕｃ－ＧＭ１、ＧＭ２（がん胎児性抗原－免疫原性－１；ＯＦＡ－Ｉ－１）；ＧＤ２（ＯＦＡ－Ｉ－２）、ＧＭ３、およびＧＤ３などである。
ある特定の他の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、アルファ－アクチニン－４、Ｂａｇｅ－１、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ融合タンパク質、ベータ－カテニン、ＣＡ １２５、ＣＡ１５－３（ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、Ｃａｓｐ－８、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ＣＥＡ、ｃｏａ－１、ｄｅｋ－ｃａｎ融合タンパク質、ＥＢＮＡ、ＥＦ２、エプスタインバーウイルス抗原、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１融合タンパク質、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ａ１１、ｈｓｐ７０－２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ－１、２、および３、ｎｅｏ－ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ－９、ｐｍｌ－ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ－ｒａｓ、Ｎ－ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、Ｇａｇｅ ３、４、５、６、７、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ－Ｋ－ｍｅｌ、Ｌａｇｅ－１、ＮＡ－８８、ＮＹ－Ｅｓｏ－１／Ｌａｇｅ－２、ＳＰ１７、ＳＳＸ－２、ＴＲＰ２－Ｉｎｔ２、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＲＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５（５８）、ＲＡＧＥ、ＳＣＰ－１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ－４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、Ｈ－Ｒａｓ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２－４、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、１３－カテニン、Ｍｕｍ－１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＧＤ２（ガングリオシドＧ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子バリアントＩＩＩ）、精子タンパク質１７（Ｓｐ１７）、メソテリン、ＰＡＰ（前立腺酸ホスファターゼ）、プロステイン、ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体ガンマ代替リーディングフレームタンパク質）、Ｔｒｐ－ｐ８、ＳＴＥＡＰ１（６回膜貫通型前立腺上皮抗原１）、異常ｒａｓタンパク質、または異常ｐ５３タンパク質である。別の特定の実施形態では、前記腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、インテグリンαｖβ３（ＣＤ６１）、ガレクチン（galactin）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２ Ｋｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルスがん遺伝子）、またはＲａｌ－Ｂである。
特定の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、ＣＤ２０、ＣＤ１２３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３８、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＲＯＲ１、ＦＡＰ、ＭＵＣ１、ＰＳＣＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＰＨＡ２、またはＧＤ２である。さらなる特定の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、ＣＤ１２３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３８、またはＣＳ－１である。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはＣＳ－１に結合する。さらなる特定の実施形態では、細胞外ドメインは、一本鎖バージョンのエロツズマブおよび／またはエロツズマブの抗原結合性断片を含む。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはＣＤ２０に結合する。より特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはｓｃＦｖであるか、またはその抗原結合性断片はＣＤ２０に結合する。
他の腫瘍関連および腫瘍特異的抗原は当業者に公知である。
ＴＳＡおよびＴＡＡに結合する抗体、およびｓｃＦｖは、当技術分野で公知であり、それらをコードするヌクレオチド配列についても同様である。
ある特定の実施形態では、抗原は、ＴＳＡまたはＴＡＡであるとは考えられないが、それにもかかわらず腫瘍細胞、または腫瘍によって惹起される損傷と関連する抗原である。特定の実施形態では、抗原は腫瘍微環境関連抗原（ＴＭＡＡ）である。ある特定の実施形態では、例えば、ＴＭＡＡは、例えば、増殖因子、サイトカインまたはインターロイキン、例えば、血管新生または脈管形成と関連する増殖因子、サイトカイン、またはインターロイキンである。そのような増殖因子、サイトカイン、またはインターロイキンは、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、またはインターロイキン－８（ＩＬ－８）を含むことができる。腫瘍はまた、腫瘍に対して局所的な低酸素性環境を作り出すことができる。そのため、他の特定の実施形態では、ＴＭＡＡは、低酸素関連因子、例えば、ＨＩＦ－１α、ＨＩＦ－１β、ＨＩＦ－２α、ＨＩＦ－２β、ＨＩＦ－３α、またはＨＩＦ－３βである。腫瘍はまた、正常組織に対して局在化した損傷を惹起して、損傷関連分子パターン分子（ＤＡＭＰ；アラーミンとしても公知）として公知の分子の放出を惹起することができる。したがって、ある特定の他の特定の実施形態では、ＴＭＡＡは、ＤＡＭＰ、例えば、熱ショックタンパク質、クロマチン関連タンパク質高移動度グループボックス１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８（ＭＲＰ８、カルグラニュリンＡ）、Ｓ１００Ａ９（ＭＲＰ１４、カルグラニュリンＢ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）であるか、またはデオキシリボ核酸、アデノシン三リン酸、尿酸、もしくはヘパリン硫酸であり得る。特定の実施形態では、ＴＭＡＡは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ、またはｂＦＧＦである。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記ＣＡＲは、目的の抗原を標的とする抗体または抗体断片を含む。より特定の実施形態では、前記ＣＡＲは一本鎖Ｆｖ抗体断片（ｓｃＦｖ）を含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、目的の抗原、例えば、腫瘍細胞上の抗原に結合するｓｃＦｖ、ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。腫瘍細胞は、例えば、固形腫瘍中の細胞、または血液がんの細胞であってもよい。抗原は、任意の腫瘍またはがん種の細胞上に発現される任意の抗原であり得る。一実施形態では、免疫細胞は、目的の抗原を標的とする一本鎖Ｆｖ抗体断片を含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、目的の抗原に結合するｓｃＦｖ、ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体を含む。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記ＣＡＲは、ＢＣＭＡを標的とする抗体または抗体断片を含む。より特定の実施形態では、前記ＣＡＲは一本鎖Ｆｖ抗体断片（ｓｃＦｖ）を含む。より特定の実施形態では、前記ＣＡＲは、ＢＣＭＡ０２ ｓｃＦｖ、例えば、配列番号３８を含む。上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、前記免疫細胞はイデカブタゲンビクルユーセル細胞である。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＢＣＭＡ、例えば、ＢＣＭＡを標的とするマウス一本鎖Ｆｖ抗体断片を含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は、ＢＣＭＡ、例えば、ｓｃＦＶが配列番号９または配列番号３７の抗ＢＣＭＡ０２ ＣＡＲのものであるＢＣＭＡを標的とするマウスｓｃＦｖを含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は配列番号９であるか、または配列番号９を含む。一実施形態では、キメラ抗原受容体は配列番号３７であるか、または配列番号３７を含む。本明細書における任意の実施形態のより特定の実施形態では、前記免疫細胞はイデカブタゲンビクルユーセル（ｉｄｅ－ｃｅｌ）細胞である。一実施形態では、免疫細胞は、ＢＣＭＡ、例えば、ＢＣＭＡを標的とするマウス一本鎖Ｆｖ抗体断片を含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ＢＣＭＡに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン、ＣＤ８α膜貫通ドメイン、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、配列番号９であるか、または配列番号９を含むキメラ抗原受容体を含む。一実施形態では、免疫細胞は、配列番号３７であるか、または配列番号３７を含むキメラ抗原受容体を含む。
他の実施形態では、本明細書で企図される遺伝子改変された免疫エフェクター細胞は、Ｂ細胞関連状態、例えば、Ｂ細胞またはＢ細胞悪性腫瘍と関連する自己免疫疾患を有する患者に投与される。
本明細書に提示される主題の実施は、そうでないことが特に指し示されなければ、当技術分野の技術的範囲内である化学、生化学、有機化学、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技術、遺伝学、免疫学、および細胞生物学の従来の方法を用い、該方法の多くは実例の目的のために以下に記載される。そのような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Edition, 2001)；Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989)；Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982)；Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, updated July 2008)；Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience；Glover, DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I & II (IRL Press, Oxford, 1985)；Anand, Techniques for the Analysis of Complex Genomes, (Academic Press, New York, 1992)；Transcription and Translation (B. Hames & S. Higgins, Eds., 1984)；Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984)；Harlow and Lane, Antibodies, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1998) Current Protocols in Immunology Q. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach and W. Strober, eds., 1991)；Annual Review of Immunology；およびAdvances in Immunologyなどの学術誌におけるモノグラフを参照。
６．２．定義
他に定義されなければ、本明細書において使用されるすべての科学技術用語は、本開示が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または同等の任意の方法および材料が本開示の実施または試験において使用され得るが、組成物、方法および材料の好ましい実施形態が本明細書に記載される。本開示の目的のために、以下の用語が以下において定義される。
冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、冠詞の文法的対象の１つまたは１つより多く（すなわち、少なくとも１つ、または１つもしくは複数）を指すために本明細書において使用される。例として、「要素」（an element）は、１つの要素または１つもしくは複数の要素を意味する。
選択肢（例えば、「または」）の使用は、選択肢のうちの１つ、両方、またはこれらの任意の組合せのいずれかを意味することが理解されるべきである。
「および／または」という用語は、選択肢のうちの１つ、または両方のいずれかを意味することが理解されるべきである。
本明細書で使用される場合、「約」または「おおよそ」という用語は、参照となる数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量または長さに対して１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％または１％程度だけ変動する数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量または長さを指す。一実施形態では、「約」または「おおよそ」という用語は、参照となる数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量または長さについて±１５％、±１０％、±９％、±８％、±７％、±６％、±５％、±４％、±３％、±２％、または±１％の数量、レベル、値、数、頻度、パーセンテージ、寸法、サイズ、量、重量または長さの範囲を指す。
本明細書の全体を通じて、文脈が他に要求しなければ、「含む」（comprise）、「含む」（comprises）および「含む」（comprising）という語は、記載される工程もしくは要素または工程もしくは要素の群を含むが、任意の他の工程もしくは要素または工程もしくは要素の群を除外しないことを含意することが理解される。「からなる」によって、「からなる」という語句に後続するどんなものでも含み、それに限定されることが意味される。そのため、「からなる」という語句は、列記される要素が要求されるかまたは義務的であること、および他の要素は存在してはならないことを指し示す。「から本質的になる」によって、該語句の後に列記される任意の要素を含み、および列記される要素について本開示において指定される活性または作用に干渉も寄与もしない他の要素に限定されることが意味される。そのため、「から本質的になる」という語句は、列記される要素が要求されるかまたは義務的であるが、列記される要素の活性または作用に実質的に影響する他の要素は存在しないことを指し示す。
「１つの実施形態」、「一実施形態」、「特定の実施形態」、「関連する実施形態」、「ある特定の実施形態」、「追加の実施形態」、もしくは「さらなる実施形態」またはこれらの組合せに対する本明細書の全体を通じた言及は、該実施形態との繋がりで記載される特定の特色、構造または特徴が、本明細書に提示される開示の少なくとも１つの実施形態に含まれることを意味する。そのため、本明細書の全体を通じた様々な箇所における以上の語句の登場は、必ずしもすべてが同じ実施形態を指すわけではない。さらには、特定の特色、構造、または特徴は、１つまたはそれ以上の実施形態では任意の好適な方式で組み合わせられてもよい。１つの実施形態における特色の積極的な記載は、特定の実施形態では該特色を除外するための基礎として役立つこともまた理解される。
６．３．投与の様式
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞ならびに炎症関連可溶性因子のアンタゴニスト（例えば、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１のアンタゴニスト）は、対象の血清中の炎症関連可溶性因子のレベルを、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清における炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定されるレベルにするために適切なように、同時に（すなわち、同時投与）および／または逐次的に（すなわち、逐次投与）対象に投与されてもよい。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞ならびに炎症関連可溶性因子のアンタゴニスト（例えば、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１のアンタゴニスト）は同時に投与される。用語「同時投与」は、本明細書で使用される場合、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが、約１５分以下、例えば約１０、５、または１分のいずれか以下の時間分離で投与されることを意味する。ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが同時に投与される場合、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、同じ組成物（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの両方を含む組成物）中または別々の組成物（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは別の組成物中に含有される）中に含有されてもよい。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞ならびに炎症関連可溶性因子のアンタゴニスト（例えば、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１のアンタゴニスト）は逐次的に投与される。用語「逐次投与」は、本明細書で使用される場合、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが、約１５分より大きい、例えば約２０、３０、４０、５０、６０分またはより多くの分のいずれかより大きい時間分離で投与されることを意味する。ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストのいずれかが最初に投与され得る。ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、同じまたは異なるパッケージ中に含有されてもよい、別々の組成物中に含有される。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与は同時発生的であり、すなわち、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与期間は互いとオーバーラップする。
一部の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与の前に少なくとも１サイクル（例えば、少なくとも２、３、または４サイクルのいずれか）にわたり投与される。特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与期間は、このアンタゴニストの投与に引き続いて、および炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清における炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日後に開始される。特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与期間は、このアンタゴニストの投与に引き続いて、および炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清における炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１週間、２週間、３週間、または４週間後に開始される。特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与期間は、このアンタゴニストの投与に引き続いて、および炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清における炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定された約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月後に開始される。
一部の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与はおおよそ同じ時間（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日のいずれか１つ以内）に開始される。一部の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与は、おおよそ同じ時間（例えば、１、２、３、４、５、６、または７日のいずれか１つ以内）に終了される。一部の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与は、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与の終了後に（例えば、約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、または１２カ月のいずれか１つにわたり）継続される。一部の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与は、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与の開始後（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月のいずれか１つの後）に開始される。一部の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与は、おおよそ同じ時間に開始および終了される。一部の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与は、おおよそ同じ時間に中止され、ならびにＣＡＲ Ｔ細胞の投与は、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与の開始後（例えば約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２カ月のいずれか１つの後）に開始される。
上記の態様または実施形態のいずれかの特定の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与は非同時発生的である。例えば、一部の実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストの投与は、ＣＡＲ Ｔ細胞が投与される前に終了される。一部の実施形態では、ＣＡＲ Ｔ細胞の投与は、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが投与される前に終了される。これらの２つの非同時発生的な投与の間の期間は、約２～８週間、例えば約４週間の範囲に及び得る。
本明細書に記載されるＣＡＲ Ｔ細胞および炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、肺内、経口、吸入、嚢内、筋肉内、気管内、皮下、眼内、髄腔内、経粘膜、および経皮を含む、様々な経路を介して個体（例えばヒト、例えば、ヒト患者）に投与され得る。一部の実施形態では、組成物の持続連続放出製剤が使用されてもよい。１つの実施形態では、炎症関連可溶性因子のアンタゴニストは、経口的、筋肉内、経皮的、静脈内、吸入器または他の空気媒介デリバリーシステムを通じたものなどを含むが、これらに限定されない任意の許容される経路により投与され得る。
６．４．キメラ抗原受容体
様々な実施形態では、免疫エフェクター細胞の細胞傷害性をＢ細胞に再指向させる遺伝子操作された受容体が提供される。これらの遺伝子操作された受容体は本明細書においてキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）として参照される。ＣＡＲは、特異的な抗ＢＣＭＡ細胞免疫活性を呈するキメラタンパク質を生成するために、所望される抗原（例えば、ＢＣＭＡ）に対する抗体ベースの特異性をＴ細胞受容体活性化細胞内ドメインと組み合わせた分子である。本明細書で使用される場合、「キメラ」という用語は、異なる起源からの異なるタンパク質またはＤＮＡの部分から構成されていることを記載する。
本明細書に記載される実施形態が応用されるＣＡＲ Ｔ細胞療法は、任意のＣＡＲ Ｔ療法、例えばＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞療法、例えばＢＣＭＡ０２、ＡＢＥＣＭＡ（著作権）、ＪＣＡＲＨ１２５、ＪＮＪ－６８２８４５２８（ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ；１０，９３４，３６３の配列番号２６５またはＷＯ２０１８／０２８６４７の配列番号３００を含み、シグナルペプチドを有するかまたは有しないタンパク質）（Ｊａｎｓｓｅｎ／Ｌｅｇｅｎｄ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－１０１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、ＰＢＣＡＲ２６９Ａ（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－Ａｌｌｏ１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ａｌｌｏ－７１５（Ｐｆｉｚｅｒ／Ａｌｌｏｇｅｎｅ）、ＣＴ０５３（Ｃａｒｓｇｅｎ）、Ｄｅｓｃａｒｔｅｓ－０８（Ｃａｒｔｅｓｉａｎ）、ＰＨＥ８８５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＴＸ１２０（ＣＲＩＳＰＲ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；ＣＤ１９ ＣＡＲ Ｔ療法、例えば、Ｙｅｓｃａｒｔａ、Ｋｙｍｒｉａｈ、Ｔｅｃａｒｔｕｓ、リソカブタジェンマラリューセル（ｌｉｓｏ－ｃｅｌ）、および任意の他の細胞表面マーカーを標的とするＣＡＲ Ｔ療法を含む。
ポリペプチドの細胞外ドメイン（結合性ドメインまたは抗原特異的結合性ドメインとしても参照される）は目的の抗原に結合する。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、前記抗原に結合する受容体、または受容体の部分を含む。細胞外ドメインは、例えば、前記抗原に結合する受容体、または受容体の部分であってもよい。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、抗体もしくはその抗原結合性部分を含むか、または抗体もしくはその抗原結合性部分である。特定の実施形態では、細胞外ドメインは一本鎖Ｆｖドメインを含むか、または一本鎖Ｆｖドメインである。一本鎖Ｆｖドメインは、例えば、可動性リンカーによってＶＨに連結されたＶＬであって、前記ＶＬおよびＶＨが前記抗原に結合する抗体からのものであるものを含むことができる。
ポリペプチドの細胞外ドメインが結合する抗原は、任意の目的の抗原であり得、例えば、腫瘍細胞上の抗原であり得る。腫瘍細胞は、例えば、固形腫瘍中の細胞、または血液がんの細胞であってもよい。抗原は、任意の腫瘍またはがん種の細胞、例えば、リンパ腫、肺がん、乳がん、前立腺がん、副腎皮質癌、甲状腺癌、鼻咽頭癌、黒色腫、例えば、悪性黒色腫、皮膚癌、結腸直腸癌、類腱腫、癒着性小円形細胞腫瘍、内分泌腫瘍、ユーイング肉腫、末梢原始神経外胚葉腫瘍、固形胚細胞腫瘍、肝芽腫、神経芽腫、非横紋筋肉腫軟組織肉腫、骨肉腫、網膜芽腫、横紋筋肉腫、ウィルムズ腫瘍、神経膠芽腫、粘液腫、線維腫、または脂肪腫などの細胞上に発現される任意の抗原であり得る。より特定の実施形態では、前記リンパ腫は、慢性リンパ球性白血病（小リンパ球性リンパ腫）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、リンパ形質細胞性リンパ腫、ワルデンストロームマクログロブリン血症、脾性辺縁帯リンパ腫、形質細胞骨髄腫、形質細胞腫、節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴリンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大Ｂ細胞リンパ腫、脈管内大Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出液リンパ腫、バーキットリンパ腫、Ｔリンパ球前リンパ球性白血病、Ｔリンパ球大顆粒状リンパ球性白血病、侵攻性ＮＫ細胞白血病、成人Ｔリンパ球白血病／リンパ腫、節外ＮＫ／Ｔリンパ球白血病、鼻型・腸疾患型Ｔリンパ球リンパ腫、肝脾Ｔリンパ球リンパ腫、芽細胞性ＮＫ細胞リンパ腫、菌状息肉症、セザリー症候群、原発性皮膚未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症、血管免疫芽球性Ｔリンパ球リンパ腫、末梢Ｔリンパ球リンパ腫（不特定）、未分化大細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、または多発性骨髄腫であり得る。
ある特定の実施形態では、抗原は腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である。様々な特定の実施形態では、限定なしに、腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、Ｈｅｒ２、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、アルファ－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、がん抗原－１２５（ＣＡ－１２５）、ＣＡ１９－９、カルレチニン、ＭＵＣ－１、上皮膜タンパク質（ＥＭＡ）、上皮腫瘍抗原（ＥＴＡ）、チロシナーゼ、黒色腫関連抗原（ＭＡＧＥ）、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ９９、ＣＤ１１７、クロモグラニン、サイトケラチン、デスミン、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）、グロス嚢胞性疾患流体タンパク質（ＧＣＤＦＰ－１５）、ＨＭＢ－４５抗原、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷ－ＭＡＡ）、タンパク質メラン－Ａ（ＭＡＲＴ－１）、ｍｙｏ－Ｄ１、筋肉特異的アクチン（ＭＳＡ）、ニューロフィラメント、ニューロン特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）、胎盤アルカリホスファターゼ、シナプトフィシス、サイログロブリン、甲状腺転写因子－１、二量体形態のピルビン酸キナーゼアイソエンザイムＭ２型（腫瘍Ｍ２－ＰＫ）、異常ｒａｓタンパク質、または異常ｐ５３タンパク質である。
ある特定の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、がん／精巣（ＣＴ）抗原、例えば、ＢＡＧＥ、ＣＡＧＥ、ＣＴＡＧＥ、ＦＡＴＥ、ＧＡＧＥ、ＨＣＡ６６１、ＨＯＭ－ＴＥＳ－８５、ＭＡＧＥＡ、ＭＡＧＥＢ、ＭＡＧＥＣ、ＮＡ８８、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＮＹ－ＳＡＲ－３５、ＯＹ－ＴＥＳ－１、ＳＰＡＮＸＢ１、ＳＰＡ１７、ＳＳＸ、ＳＹＣＰ１、またはＴＰＴＥである。
ある特定の他の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、炭水化物またはガングリオシド、例えば、ｆｕｃ－ＧＭ１、ＧＭ２（がん胎児性抗原－免疫原性－１；ＯＦＡ－Ｉ－１）；ＧＤ２（ＯＦＡ－Ｉ－２）、ＧＭ３、およびＧＤ３などである。
ある特定の他の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、アルファ－アクチニン－４、Ｂａｇｅ－１、ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｂｃｒ－Ａｂｌ融合タンパク質、ベータ－カテニン、ＣＡ １２５、ＣＡ １５－３（ＣＡ ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ １９５、ＣＡ ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、Ｃａｓｐ－８、ｃｄｃ２７、ｃｄｋ４、ｃｄｋｎ２ａ、ＣＥＡ、ｃｏａ－１、ｄｅｋ－ｃａｎ融合タンパク質、ＥＢＮＡ、ＥＦ２、エプスタインバーウイルス抗原、ＥＴＶ６－ＡＭＬ１融合タンパク質、ＨＬＡ－Ａ２、ＨＬＡ－Ａ１１、ｈｓｐ７０－２、ＫＩＡＡＯ２０５、Ｍａｒｔ２、Ｍｕｍ－１、２、および３、ｎｅｏ－ＰＡＰ、ミオシンクラスＩ、ＯＳ－９、ｐｍｌ－ＲＡＲα融合タンパク質、ＰＴＰＲＫ、Ｋ－ｒａｓ、Ｎ－ｒａｓ、トリオースリン酸イソメラーゼ、Ｇａｇｅ ３、４、５、６、７、ＧｎＴＶ、Ｈｅｒｖ－Ｋ－ｍｅｌ、Ｌａｇｅ－１、ＮＡ－８８、ＮＹ－Ｅｓｏ－１／Ｌａｇｅ－２、ＳＰ１７、ＳＳＸ－２、ＴＲＰ２－Ｉｎｔ２、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ １７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＲＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐ１５（５８）、ＲＡＧＥ、ＳＣＰ－１、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ－４０、ＰＲＡＭＥ、ｐ５３、Ｈ－Ｒａｓ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３Ｈ１、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２－４、ＣＡ １９－９、ＣＡ ７２－４、ＣＡＭ １７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、１３－カテニン、Ｍｕｍ－１、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＭＡ、ＣＴ７、テロメラーゼ、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、１３ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ＼７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＧＤ２（ガングリオシドＧ２）、ＥＧＦＲｖＩＩＩ（上皮増殖因子バリアントＩＩＩ）、精子タンパク質１７（Ｓｐ１７）、メソテリン、ＰＡＰ（前立腺酸ホスファターゼ）、プロステイン、ＴＡＲＰ（Ｔ細胞受容体ガンマ代替リーディングフレームタンパク質）、Ｔｒｐ－ｐ８、ＳＴＥＡＰ１（６回膜貫通型前立腺上皮抗原１）、異常ｒａｓタンパク質、または異常ｐ５３タンパク質である。別の特定の実施形態では、前記腫瘍関連抗原または腫瘍特異的抗原は、インテグリンαｖβ３（ＣＤ６１）、ガレクチン（galactin）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２ Ｋｉｒｓｔｅｎラット肉腫ウイルスがん遺伝子）、またはＲａｌ－Ｂである。
特定の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、ＣＤ２０、ＣＤ１２３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３８、ＣＳ－１、ＣＤ１３８、ＲＯＲ１、ＦＡＰ、ＭＵＣ１、ＰＳＣＡ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＰＨＡ２、またはＧＤ２である。さらなる特定の実施形態では、ＴＡＡまたはＴＳＡは、ＣＤ１２３、ＣＬＬ－１、ＣＤ３８、またはＣＳ－１である。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはＣＳ－１に結合する。さらなる特定の実施形態では、細胞外ドメインは、一本鎖バージョンのエロツズマブおよび／またはエロツズマブの抗原結合性断片を含む。特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはＣＤ２０に結合する。より特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外ドメインはｓｃＦｖであるか、またはその抗原結合性断片はＣＤ２０に結合する。
他の腫瘍関連および腫瘍特異的抗原は当業者に公知である。
ＴＳＡおよびＴＡＡに結合する抗体、およびｓｃＦｖは、当技術分野で公知であり、それらをコードするヌクレオチド配列についても同様である。
ある特定の実施形態では、抗原は、ＴＳＡまたはＴＡＡであるとは考えられないが、それにもかかわらず腫瘍細胞、または腫瘍によって惹起される損傷と関連する抗原である。特定の実施形態では、抗原は腫瘍微環境関連抗原（ＴＭＡＡ）である。ある特定の実施形態では、例えば、ＴＭＡＡは、例えば、増殖因子、サイトカインまたはインターロイキン、例えば、血管新生または脈管形成と関連する増殖因子、サイトカイン、またはインターロイキンである。そのような増殖因子、サイトカイン、またはインターロイキンは、例えば、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、またはインターロイキン－８（ＩＬ－８）を含むことができる。腫瘍はまた、腫瘍に対して局所的な低酸素性環境を作り出すことができる。そのため、他の特定の実施形態では、ＴＭＡＡは、低酸素関連因子、例えば、ＨＩＦ－１α、ＨＩＦ－１β、ＨＩＦ－２α、ＨＩＦ－２β、ＨＩＦ－３α、またはＨＩＦ－３βである。腫瘍はまた、正常組織に対して局在化した損傷を惹起して、損傷関連分子パターン分子（ＤＡＭＰ；アラーミンとしても公知）として公知の分子の放出を惹起することができる。したがって、ある特定の他の特定の実施形態では、ＴＭＡＡは、ＤＡＭＰ、例えば、熱ショックタンパク質、クロマチン関連タンパク質高移動度グループボックス１（ＨＭＧＢ１）、Ｓ１００Ａ８（ＭＲＰ８、カルグラニュリンＡ）、Ｓ１００Ａ９（ＭＲＰ１４、カルグラニュリンＢ）、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）であるか、またはデオキシリボ核酸、アデノシン三リン酸、尿酸、もしくはヘパリン硫酸であり得る。特定の実施形態では、ＴＭＡＡは、ＶＥＧＦ－Ａ、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ、またはｂＦＧＦである。
ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、前記膜貫通ドメインにリンカー、スペーサーまたはヒンジポリペプチド配列、例えば、ＣＤ２８からの配列によって接合される。
ある特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、ＢＣＭＡに結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。標的細胞の表面上のＢＣＭＡとのＣＡＲの抗ＢＣＭＡ抗原結合性ドメインのエンゲージメントは、ＣＡＲのクラスター化をもたらし、ＣＡＲ含有細胞に活性化刺激をデリバリーする。ＣＡＲの主な特徴は、モノクローナル抗体、可溶性リガンドまたは細胞特異的補助受容体の細胞特異的標的化能力を活用して、免疫エフェクター細胞特異性を再指向させ、それによって、増殖、サイトカイン産生、ファゴサイトーシスまたは主要組織適合性（ＭＨＣ）非依存性の方式において標的抗原発現細胞の細胞死を媒介できる分子の産生のトリガーとなるそれらの能力である。
様々な実施形態では、ＣＡＲは、マウス抗ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）特異的結合性ドメインを含む細胞外結合性ドメイン；膜貫通ドメイン；１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；および一次シグナル伝達ドメインを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、マウス抗ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）抗体またはその抗原結合性断片を含む細胞外結合性ドメイン；１つまたはそれ以上のヒンジドメインまたはスペーサードメイン；を含む膜貫通ドメイン；１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；および一次シグナル伝達ドメインを含む。
６．４．１．結合ドメイン
特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、Ｂ細胞上に発現されるヒトＢＣＭＡポリペプチドに特異的に結合するマウス抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を含む細胞外結合ドメインを含む。本明細書で使用される場合、用語「結合ドメイン」、「細胞外ドメイン」、「細胞外結合ドメイン」、「抗原特異的結合ドメイン」および「細胞外抗原特異的結合ドメイン」は、同義的に使用され、目的の標的抗原、例えば、ＢＣＭＡに特異的に結合する能力を有するＣＡＲを提供する。結合ドメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来し得る。
用語「特異的結合親和性」または「特異的に結合する」または「特異的に結合された」または「特異的結合」または「特異的に標的とする」とは、本明細書で使用される場合、バックグラウンド結合より大きな結合親和性での、抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片（またはそれを含むＣＡＲ）のＢＣＭＡへの結合を説明する。結合ドメイン（または結合ドメインを含むＣＡＲもしくは結合ドメインを含む融合タンパク質）は、例えば、約１０５Ｍ－１以上の親和性またはＫａ（すなわち、１／Ｍの単位を有する特定の結合相互作用の平衡会合定数）でＢＣＭＡに結合する、またはそれと会合する場合に、ＢＣＭＡに「特異的に結合する」。ある特定の実施形態では、結合ドメイン（またはその融合タンパク質）は、約１０６Ｍ－１、１０７Ｍ－１、１０８Ｍ－１、１０９Ｍ－１、１０１０Ｍ－１、１０１１Ｍ－１、１０１２Ｍ－１、または１０１３Ｍ－１以上のＫａで標的に結合する。「高親和性」結合ドメイン（またはその一本鎖融合タンパク質）とは、少なくとも１０７Ｍ－１、少なくとも１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、少なくとも１０１３Ｍ－１、またはそれより大きいＫａを有するそれらの結合ドメインを指す。
あるいは、親和性は、Ｍの単位（例えば、１０－５Ｍ～１０－１３Ｍまたはそれより小さい）を有する特定の結合相互作用の平衡解離定数（Ｋｄ）として定義され得る。本開示に従う結合ドメインポリペプチドおよびＣＡＲタンパク質の親和性は、従来技術を使用して、例えば、競合的ＥＬＩＳＡ法（酵素結合免疫吸着検定法）によって、または結合性会合によって、または標識されたリガンドを使用するディスプレイスメントアッセイによって、または表面プラズモン共鳴デバイス、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ， Ｉｎｃ．，ニュージャージー州、ピスカタウェイから入手可能であるＢｉａｃｏｒｅ Ｔ１００、もしくは光学的バイオセンサー技術、例えば、それぞれＣｏｒｎｉｎｇおよびＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒから入手可能であるＥＰＩＣシステムもしくはＥｎＳｐｉｒｅを使用して容易に決定できる（例えば、Scatchard et al. (1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660；および米国特許第５，２８３，１７３号；同５，４６８，６１４号、または等価物も参照）。
一実施形態では、特異的結合の親和性は、バックグラウンド結合よりも約２倍大きい、バックグラウンド結合よりも約５倍大きい、バックグラウンド結合よりも約１０倍大きい、バックグラウンド結合よりも約２０倍大きい、バックグラウンド結合よりも約５０倍大きい、バックグラウンド結合よりも約１００倍大きい、またはバックグラウンド結合よりも約１０００倍大きい、またはそれよりも大きい。
特定の実施形態では、ＣＡＲの細胞外結合ドメインは、抗体またはその抗原結合断片を含む。「抗体」とは、抗原のエピトープ、例えば、抗原決定基を含有するペプチド、脂質、多糖または核酸、例えば、免疫細胞によって認識されるものを特異的に認識し、結合する、少なくとも軽鎖または重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドである結合剤を指す。
「抗原（Ａｇ）」とは、動物において抗体の生成またはＴ細胞応答を刺激できる化合物、組成物、または物質を指し、動物中に注射または吸収される組成物（例えば、がん特異的タンパク質を含むもの）を含む。抗原は、異種抗原、例えば、開示される抗原によって誘導されるものを含む、特定の体液性または細胞性免疫の生成物と反応する。特定の実施形態では、標的抗原は、ＢＣＭＡポリペプチドのエピトープである。
「エピトープ」または「抗原決定基」とは、結合剤が結合する抗原の領域を指す。エピトープは、連続アミノ酸またはタンパク質の三次フォールディングによって並置される非連続アミノ酸の両方から形成され得る。連続アミノ酸から形成されたエピトープは、変性溶媒に対する曝露の際に通常保持されるが、三次フォールディングによって形成されたエピトープは、変性溶媒を用いる処理の際に通常失われる。エピトープは、独特の空間コンホメーションに少なくとも３個、より普通には、少なくとも５個、約９個、または約８～１０個のアミノ酸を通常含む。
抗体は、その抗原結合断片、例えば、ラクダＩｇ、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、ビス－ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）および抗原結合を担う全長抗体の部分を含む。この用語はまた、遺伝子操作された形態、例えば、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二重特異性抗体）およびその抗原結合断片も含む。Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL)；Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W. H. Freeman & Co., New York, 1997も参照。
当業者には理解されるように、また本明細書において別の場所に記載されるように、完全抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖を含む。各重鎖は、可変領域ならびに第１の、第２の、および第３の定常領域からなり、一方で、各軽鎖は、可変領域および定常領域からなる。哺乳動物重鎖は、α、δ、ε、γ、およびμとして分類される。哺乳動物軽鎖は、λまたはκとして分類される。α、δ、ε、γ、およびμ重鎖を含む免疫グロブリンは、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ａ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭとして分類される。完全抗体は、「Ｙ」形状を形成する。Ｙのステムは、一緒に結合された２つの重鎖の第２および第３の定常領域からなり（ＩｇＥおよびＩｇＭについては、第４の定常領域）、ジスルフィド結合（鎖間）はヒンジにおいて形成される。重鎖γ、αおよびδは、３つのタンデム（一列の）Ｉｇドメインから構成される定常領域および加えられる可動性のためのヒンジ領域を有し；重鎖μおよびεは、４つの免疫グロブリンドメインから構成される定常領域を有する。第２および第３の定常領域は、それぞれ「ＣＨ２ドメイン」および「ＣＨ３ドメイン」と呼ばれる。Ｙの各アームは、単一の軽鎖の可変および定常領域に結合された単一の重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は、抗原結合を担う。
軽鎖および重鎖可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」とも呼ばれる３つの超可変領域によって中断された「フレームワーク」領域を含有する。ＣＤＲは、従来法によって、例えば、Kabat et al (Wu, TT and Kabat, E. A., J Exp Med. 132(2):211-50, (1970)； Borden, P. and Kabat E. A., PNAS, 84: 2440-2443 (1987)に従う配列によって；（参照により本明細書に組み込まれる、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991も参照）、またはChothia et al (Chothia, C. and Lesk, A.M., J Mol. Biol., 196(4): 901-917 (1987)、 Chothia, C. et al, Nature, 342: 877 - 883 (1989)）に従う構造によって定義または同定できる。
異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種、例えば、ヒト内で比較的保存されている。成分である軽鎖および重鎖の組み合わされたフレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、三次元空間においてＣＤＲを位置付け、整列させるように働く。ＣＤＲは、主に抗原のエピトープへの結合を担う。各鎖のＣＤＲは、通常、Ｎ末端から出発して連続して番号付けられ、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と呼ばれ、また、通常、特定のＣＤＲが位置付けられている鎖によって同定される。したがって、抗体の重鎖の可変ドメイン中に位置するＣＤＲは、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、およびＣＤＲＨ３と呼ばれるが、抗体の軽鎖の可変ドメイン中に位置するＣＤＲは、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、およびＣＤＲＬ３と呼ばれる。異なる特異性（すなわち、異なる抗原に対する異なる組み合わされた部位）を有する抗体は、異なるＣＤＲを有する。抗体ごとに異なるのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の制限された数のアミノ酸位置が、抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は、特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。本明細書で企図されるヒト化ＢＣＭＡ ＣＡＲを構築するのに適している軽鎖ＣＤＲの実例として、それだけには限らないが、配列番号１～３に示されるＣＤＲ配列が挙げられる。本明細書で企図されるヒト化ＢＣＭＡ ＣＡＲを構築するのに適している重鎖ＣＤＲの実例として、それだけには限らないが、配列番号４～６に示されるＣＤＲ配列が挙げられる。
「ＶＨ」または「ＶＨ」への言及は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、または本明細書に開示されるような他の抗体断片のものを含む、免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。「ＶＬ」または「ＶＬ」への言及は、抗体、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆａｂ、または本明細書に開示されるような他の抗体断片のものを含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
「モノクローナル抗体」は、Ｂリンパ球の単一クローンによって、または単一抗体の軽鎖および重鎖遺伝子がトランスフェクトされている細胞によって生成された抗体である。モノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって、例えば、骨髄腫細胞の免疫脾臓細胞との融合からハイブリッド抗体形成細胞を作製することによって生成される。モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体を含む。
「キメラ抗体」は、ある種、例えば、ヒトに由来するフレームワーク残基と、別の種、例えば、マウスに由来するＣＤＲ（一般に、抗原結合を与える）とを有する。特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、キメラ抗体またはその抗原結合断片である抗原特異的結合ドメインを含む。
「ヒト化」抗体は、ヒトフレームワーク領域と、非ヒト（例えば、マウス、ラットまたは合成）免疫グロブリン由来の１つまたはそれ以上のＣＤＲとを含む免疫グロブリンである。ＣＤＲを提供する非ヒト免疫グロブリンは、「ドナー」と呼ばれ、フレームワークを提供するヒト免疫グロブリンは、「アクセプター」と呼ばれる。
特定の実施形態では、マウス抗ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）抗体またはその抗原結合断片は、それだけには限らないが、ラクダＩｇ（ラクダ類抗体（ＶＨＨ））、Ｉｇ ＮＡＲ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、Ｆ（ａｂ）’３断片、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ抗体（「ｓｃＦｖ」）、ビスｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）および単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、ナノボディ）を含む。
「ラクダＩｇ」または「ラクダ類ＶＨＨ」とは、本明細書で使用される場合、重鎖抗体の最も小さい公知の抗原結合単位を指す（Koch-Nolte, et al, FASEB J., 21: 3490-3498 (2007)）。「重鎖抗体」または「ラクダ類抗体」とは、２つのＶＨドメインを含有し、軽鎖を含有しない抗体を指す（Riechmann L. et al, J. Immunol. Methods 231:25 38 (1999)；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。
「免疫グロブリン新規抗原受容体」の「ＩｇＮＡＲ」とは、１つの可変新規抗原受容体（ＶＮＡＲ）ドメインおよび５つの定常新規抗原受容体（ＣＮＡＲ）ドメインのホモ二量体からなるサメ免疫レパートリー由来の抗体のクラスを指す。ＩｇＮＡＲは、最も小さい公知の免疫グロブリンベースのタンパク質足場を表し、高度に安定であり、効率的な結合特徴を有する。固有の安定性は、（ｉ）マウス抗体において見い出される従来の抗体ＶＨおよびＶＬドメインと比較して相当な数の荷電親水性表面露出残基を表す、基礎となるＩｇ足場；ならびに（ｉｉ）ループ間ジスルフィド橋およびループ内水素結合のパターンを含む相補性決定領域（ＣＤＲ）ループにおける安定化構造特徴の両方に起因し得る。
抗体のパパイン消化は、各々、単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合性断片と、その名称が容易に結晶化するその能力を反映する、残りの「Ｆｃ」断片をもたらす。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋可能であるＦ（ａｂ’）２断片が生じる。
「Ｆｖ」は、完全抗原結合部位を含有する最小抗体断片である。一実施形態では、二本鎖Ｆｖ種は、密接な、非共有結合性会合した１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、１つの重鎖可変ドメインおよび１つの軽鎖可変ドメインは、軽鎖および重鎖が、二本鎖Ｆｖ種におけるものと類似した「二量体」構造で会合できるように可動性ペプチドリンカーによって共有結合性に連結され得る。各可変ドメインの３つの超可変領域（ＨＶＲ）が相互作用して、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面で抗原結合部位を定義するのは、この立体配置においてである。まとめると、６つのＨＶＲが、抗体に抗原結合特異性を与える。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのみのＨＶＲを含むＦｖの半分）でさえも、全結合部位よりも低い親和性であるが、抗原を認識し、結合する能力を有する。
Ｆａｂ断片は、重鎖および軽鎖可変ドメインを含有し、また、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つまたはそれ以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での２、３の残基の追加によってＦａｂ断片とは異なっている。Ｆａｂ’－ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における名称である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は元々、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片の他の化学カップリングも公知である。
用語「ダイアボディ」とは、断片が、同一ポリペプチド鎖中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ－ＶＬ）を含む、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を指す。短すぎて同一鎖上の２つのドメイン間の対形成を可能にできないリンカーを使用することによって、ドメインは、別の鎖の相補的ドメインとの対形成を強いられ、２つの抗原結合部位を作出する。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003);およびHollinger et al., PNAS USA 90: 6444-6448 (1993)により十分に記載されている。トリアボディおよびテトラボディもHudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」または「ナノボディ」とは、抗体重鎖の可変領域（ＶＨドメイン）または抗体軽鎖の可変領域（ＶＬドメイン）からなる抗体断片を指す（Holt, L., et al, 2003, Trends in Biotechnology, 21(11): 484-490)。
「単鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含み、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖中に、いずれかの配向（例えば、ＶＬ－ＶＨまたはＶＨ－ＶＬ）で存在する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ＶＨおよびＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これによって、ｓｃＦｖが抗原結合のための所望の構造を形成することが可能となる。ｓｃＦｖの概要については、例えば、Pluckthun, The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York, 1994), pp. 269-315を参照。
ある特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、マウスｓｃＦｖである抗原特異的結合ドメインを含む。一本鎖抗体は、所望の標的に特異的なハイブリドーマのＶ領域遺伝子からクローニングされ得る。このようなハイブリッドベクターの生成は、日常的になっている。可変領域重鎖（ＶＨ）および可変領域軽鎖（ＶＬ）をクローニングするために使用できる技術は、例えば、Orlandi et al., PNAS,1989; 86: 3833-3837に記載されている。
特定の実施形態では、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウスｓｃＦｖである抗原特異的結合ドメイン。本明細書で企図されるＢＣＭＡ ＣＡＲを構築するのに適している重鎖可変鎖の実例として、それだけには限らないが、配列番号８に示されるアミノ酸配列が挙げられる。本明細書で企図されるＢＣＭＡ ＣＡＲを構築するのに適している軽鎖可変鎖の実例として、それだけには限らないが、配列番号７に示されるアミノ酸配列が挙げられる。
本明細書で提供されるＢＣＭＡ特異的結合ドメインはまた、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つのＣＤＲを含む。このようなＣＤＲは、軽鎖のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３および重鎖のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３から選択される非ヒトＣＤＲまたは変更された非ヒトＣＤＲであり得る。ある特定の実施形態では、ＢＣＭＡ特異的結合ドメインは、（ａ）軽鎖ＣＤＲＬ１、軽鎖ＣＤＲＬ２、および軽鎖ＣＤＲＬ３を含む軽鎖可変領域、ならびに（ｂ）重鎖ＣＤＲＨ１、重鎖ＣＤＲＨ２、および重鎖ＣＤＲＨ３を含む重鎖可変領域を含む。
６．４．２．リンカー
ある特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、例えば、分子の適切なスペーシングおよびコンホメーションのために付加される、種々のドメインの間のリンカー残基を含み得る。特定の実施形態では、リンカーは、可変領域連結配列である。「可変領域連結配列」は、得られるポリペプチドが、同一の軽鎖および重鎖可変領域を含む抗体と同一の標的分子に対する特異的結合親和性を保持するように、ＶＨとＶＬドメインを接続し、２つのサブ結合ドメインの相互作用に適合したスペーサー機能を提供するアミノ酸配列である。本明細書で企図されるＣＡＲは、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つのリンカーを含み得る。特定の実施形態では、リンカーの長さは、約１～約２５個のアミノ酸、約５～約２０個のアミノ酸、または約１０～約２０個のアミノ酸、または任意の介在する長さのアミノ酸である。一部の実施形態では、リンカーは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５個またはそれより多いアミノ酸長である。
リンカーの実例として、グリシンポリマー（Ｇ）ｎ；グリシン－セリンポリマー（Ｇ１～５Ｓ１～５）ｎ（式中、ｎは、少なくとも１、２、３、４または５の整数である）；グリシン－アラニンポリマー；アラニン－セリンポリマー；および当技術分野で公知の他の可動性リンカーが挙げられる。グリシンおよびグリシン－セリンポリマーは、相対的に不定形であり、したがって、本明細書に記載されるＣＡＲなどの融合タンパク質のドメイン間の中立的テザーとして働くことができる可能性がある。グリシンは、アラニンさえよりも相当に多くのファイ－プサイ空間にアクセスし、より長い側鎖を有する残基よりもはるかに制限されない（Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)を参照）。当業者ならば、ＣＡＲの設計は、特定の実施形態では、すべてまたは部分的に可動性のリンカーを含む場合があり、その結果、リンカーは、可動性リンカーならびに所望のＣＡＲ構造にあまり可動性ではない構造を与える１つまたはそれ以上の部分を含む場合があることを認識するであろう。
他の例示的リンカーとして、それだけには限らないが、以下のアミノ酸配列が挙げられる：ＧＧＧ；ＤＧＧＧＳ（配列番号１２）；ＴＧＥＫＰ（配列番号１３）（例えば、Liu et al., PNAS 5525-5530 (1997)を参照）；ＧＧＲＲ（配列番号１４）（Pomerantz et al. 1995、前掲）；（ＧＧＧＧＳ）ｎ（式中、ｎ＝１、２、３、４または５、ＧＧＧＧＳは、配列番号１５として同定される（Kim et al., PNAS 93, 1156-1160 (1996.)；ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＶＤ（配列番号１６）（Chaudhary et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:1066-1070)；ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１７）（Bird et al., 1988, Science 242:423-426), ＧＧＲＲＧＧＧＳ（配列番号１８）；ＬＲＱＲＤＧＥＲＰ（配列番号１９）；ＬＲＱＫＤＧＧＧＳＥＲＰ（配列番号２０）；ＬＲＱＫｄ（ＧＧＧＳ）２ＥＲＰ（配列番号２１）。あるいは、可動性リンカーは、ＤＮＡ結合部位およびペプチド自体の両方をモデリング可能なコンピュータプログラムを使用して（Desjarlais & Berg, PNAS 90:2256-2260 (1993), PNAS 91:11099-11103 (1994)、またはファージディスプレイ法によって合理的に設計できる。一実施形態では、リンカーは、以下のアミノ酸配列を含む：ＧＳＴＳＧＳＧＫＰＧＳＧＥＧＳＴＫＧ（配列番号２２）（Cooper et al., Blood, 101(4): 1637-1644 (2003))。
６．４．３．スペーサードメイン
特定の実施形態では、ＣＡＲの結合ドメインに、１つまたはそれ以上の「スペーサードメイン」が続き、これは、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にする領域を指す。（Patel et al., Gene Therapy, 1999; 6: 412-419）。スペーサードメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来し得る。ある特定の実施形態では、スペーサードメインは、それだけには限らないが、１つまたはそれ以上の重鎖定常領域、例えば、ＣＨ２およびＣＨ３を含む免疫グロブリンの部分である。スペーサードメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変更された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。
一実施形態では、スペーサードメインは、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。
６．４．４．ヒンジドメイン
ＣＡＲの結合ドメインに、一般に、１つまたはそれ以上の「ヒンジドメイン」が続き、これは、適切な細胞／細胞接触、抗原結合および活性化を可能にするために、抗原結合ドメインをエフェクター細胞表面から離して位置付けることにおいて役割を果たす。ＣＡＲは、一般に、結合ドメインと膜貫通ドメイン（ＴＭ）の間に１つまたはそれ以上のヒンジドメインを含む。ヒンジドメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来し得る。ヒンジドメインは、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域または変更された免疫グロブリンヒンジ領域のアミノ酸配列を含み得る。
「変更されたヒンジ領域」とは、（ａ）最大３０％のアミノ酸変化（例えば、最大２５％、２０％、１５％、１０％、または５％のアミノ酸置換または欠失）を有する天然に存在するヒンジ領域、（ｂ）最大３０％のアミノ酸変化（例えば、最大２５％、２０％、１５％、１０％、または５％のアミノ酸置換または欠失）を有する、少なくとも１０個のアミノ酸（例えば、少なくとも１２、１３、１４または１５個のアミノ酸）長である天然に存在するヒンジ領域の一部分、または（ｃ）コアヒンジ領域を含む天然に存在するヒンジ領域の一部分（４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個、または少なくとも４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、もしくは１５個のアミノ酸長であり得る）を指す。ある特定の実施形態では、天然に存在する免疫グロブリンヒンジ領域中の１つまたはそれ以上のシステイン残基は、１つまたはそれ以上の他のアミノ酸残基（例えば、１つまたはそれ以上のセリン残基）によって置換されてもよい。変更された免疫グロブリンヒンジ領域は、あるいは、またはさらに、別のアミノ酸残基（例えば、セリン残基）によって置換された野生型免疫グロブリンヒンジ領域のプロリン残基を有し得る。
本明細書で記載されるＣＡＲにおいて使用するのに適した他の例示的ヒンジドメインとして、１型膜タンパク質、例えば、ＣＤ８α、ＣＤ４、ＣＤ２８およびＣＤ７の細胞外領域に由来するヒンジ領域があり、これは、これらの分子からの野生型ヒンジ領域である場合も、変更される場合もある。別の実施形態では、ヒンジドメインは、ＣＤ８αヒンジ領域を含む。
６．４．５．膜貫通ドメイン
膜貫通（ＴＭ）ドメインは、細胞外結合部分と細胞内シグナル伝達ドメインを融合するＣＡＲの部分であり、ＣＡＲを免疫エフェクター細胞の細胞膜に繋留する。ＴＭドメインは、天然、合成、半合成、または組換え供給源のいずれかに由来し得る。ＴＭドメインは、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ－１のアルファ、ベータまたはゼータ鎖に由来し得る（すなわち、少なくとも、その膜貫通領域を含み得る）。特定の実施形態では、ＴＭドメインは、合成であり、疎水性残基、例えば、ロイシンおよびバリンを優勢に含む。
一実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、ＣＤ８αに由来するＴＭドメインを含む。別の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、ＣＤ８αに由来するＴＭドメインおよびＣＡＲのＴＭドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを連結する、好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個の間のアミノ酸長の、短いオリゴまたはポリペプチドリンカーを含む。グリシン－セリンベースのリンカーは、特に適したリンカーを提供する。
６．４．６．細胞内シグナル伝達ドメイン
特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、ヒトＢＣＭＡポリペプチドへ結合する有効なＢＣＭＡ ＣＡＲのメッセージを免疫エフェクター細胞の内部へ伝達して、細胞外ＣＡＲドメインへの抗原結合を用いて誘発される、ＣＡＲが結合している標的細胞への細胞傷害性因子の放出、または他の細胞性応答を含む、エフェクター細胞機能、例えば、活性化、サイトカイン生成、増殖および細胞傷害活性を誘発することに関与するＣＡＲの一部を指す。
用語「エフェクター機能」とは、免疫エフェクター細胞の特殊化された機能を指す。Ｔ細胞のエフェクター機能は、例えば、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性またはヘルパー活性であり得る。したがって、用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞が特殊化された機能を発揮するように指示するタンパク質の部分を指す。普通、全細胞内シグナル伝達ドメインを使用できるが、多くの場合、必ずしも全ドメインを使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの末端切断型部分が使用される範囲において、このような末端切断型部分は、エフェクター機能シグナルを伝達する限り全ドメインの代わりに使用され得る。用語細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の末端切断型部分を含むものとする。
ＴＣＲ単独によって生じたシグナルは、Ｔ細胞の完全活性化には不十分であることおよび続発的または共刺激シグナルも必要であることは公知である。したがって、Ｔ細胞活性化は、２つの別個のクラスの細胞内シグナル伝達ドメイン：ＴＣＲ（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）によって抗原依存性一次活性化を開始する一次シグナル伝達ドメインおよび抗原非依存的に作用して、続発的または共刺激シグナルを提供する共刺激シグナル伝達ドメインによって媒介されるといわれることがある。ある特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、１つまたはそれ以上の「共刺激シグナル伝達ドメイン」および「一次シグナル伝達ドメイン」を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
一次シグナル伝達ドメインは、刺激的方法、または阻害的方法のいずれかでＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激的方法で作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有し得る。
本明細書で提示される主題において特に使用される一次シグナル伝達ドメインを含有するＩＴＡＭの実例として、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄに由来するものが挙げられる。特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインおよび１つまたはそれ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。細胞内一次シグナル伝達および共刺激シグナル伝達ドメインは、任意の順序でタンデムで膜貫通ドメインのカルボキシル末端に連結され得る。
本明細書で企図されるＣＡＲは、ＣＡＲ受容体を発現するＴ細胞の有効性および拡大増殖を増強する、１つまたはそれ以上の共刺激シグナル伝達ドメインを含む。本明細書で使用される場合、用語「共刺激シグナル伝達ドメイン」または「共刺激ドメイン」とは、共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを指す。共刺激分子は、抗原への結合の際に効率的な活性化およびＴリンパ球の機能にとって必要な第２のシグナルを提供する、抗原受容体またはＦｃ受容体以外の細胞表面分子である。このような共刺激分子の実例として、ＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０が挙げられる。一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、およびＣＤ１３４からなる群から選択される１つまたはそれ以上の共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８およびＣＤ１３７共刺激シグナル伝達ドメインならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
さらに別の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８およびＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメインならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ１３７およびＣＤ１３４共刺激シグナル伝達ドメインならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、Ｂ細胞上に発現されたＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢ細胞上に発現されたヒトＢＣＭＡに特異的に結合するヒト抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を含む。
特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、Ｂ細胞上に発現されたＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢ細胞上に発現されたヒトＢＣＭＡに特異的に結合するマウス抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合断片を含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；Ｔ細胞受容体、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ１のアルファ、ベータまたはゼータ鎖からなる群から選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；Ｔ細胞受容体、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ１のアルファ、ベータまたはゼータ鎖からなる群から選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択されるポリペプチドからの１つまたはそれ以上の一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ、ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、およびＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ １３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ１のアルファ、ベータまたはゼータ鎖からなる群から選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、およびＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ１のアルファ、ベータまたはゼータ鎖からなる群から選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択されるポリペプチドからの１つまたはそれ以上の一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、およびＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ１のアルファ、ベータまたはゼータ鎖からなる群から選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ＣＡＲのＴＭドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを連結する、好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個の間のアミノ酸長の、短いオリゴまたはポリペプチドリンカー；ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからの一次シグナル伝達ドメインを含む。
一実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、ＩｇＧ４ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３、およびＣＤ８αヒンジからなる群から選択されるヒンジドメイン；Ｔ細胞受容体、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８α、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４５、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５２、ＣＤ１５４、およびＰＤ１のアルファ、ベータまたはゼータ鎖からなる群から選択されるポリペプチドに由来する膜貫通ドメイン；ＣＡＲのＴＭドメインと細胞内シグナル伝達ドメインを連結する、好ましくは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、もしくは１０個の間のアミノ酸長の、短いオリゴまたはポリペプチドリンカー；ならびにＣＡＲＤ１１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ）、ＣＤ８３、ＣＤ１３４（ＯＸ４０）、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭＦ１）、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ４）、ＣＤ２２３（ＬＡＧ３）、ＣＤ２７０（ＨＶＥＭ）、ＣＤ２７３（ＰＤ－Ｌ２）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＣＤ２７８（ＩＣＯＳ）、ＤＡＰ１０、ＬＡＴ、ＮＫＤ２Ｃ ＳＬＰ７６、ＴＲＩＭ、およびＺＡＰ７０からなる群から選択される共刺激分子からの１つまたはそれ以上の細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ３ζ、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、およびＣＤ６６ｄからなる群から選択されるポリペプチドからの１つまたはそれ以上の一次シグナル伝達ドメインを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；ＩｇＧ１ヒンジ／ＣＨ２／ＣＨ３ポリペプチドおよびＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；約３～約１０個のアミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；ならびにＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；約３～約１０個のアミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３４細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；約３～約１０個のアミノ酸のポリペプチドリンカーを含むＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ２８細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
特定の実施形態では、ＣＡＲは、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ；ＣＤ８αポリペプチドを含むヒンジドメイン；ＣＤ８α膜貫通ドメイン；ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン；およびＣＤ３ζ一次シグナル伝達ドメインを含む。
さらに、本明細書で企図されるＣＡＲの設計によって、非改変Ｔ細胞または他のＣＡＲを発現するように改変されたＴ細胞と比較して、ＣＡＲを発現するＴ細胞における改善された拡大増殖、長期持続、および許容できる細胞傷害性特性が可能となる。
６．５．ポリペプチド
本開示は、幾分かは、ＣＡＲポリペプチドおよびその断片、細胞およびそれを含む組成物、ならびにポリペプチドを発現するベクターを企図する。特定の実施形態では、配列番号９に示されるような１つまたはそれ以上のＣＡＲを含むポリペプチドが提供される。
「ポリペプチド」、「ポリペプチド断片」、「ペプチド」および「タンパク質」は、反して指定されない限り、従来の意味に従って、すなわち、アミノ酸の配列として同義的に使用される。ポリペプチドは、特定の長さに制限されない、例えば、それらは、全長タンパク質配列または全長タンパク質の断片を含む場合があり、ポリペプチドの翻訳後改変、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、ならびに天然に存在する、および天然に存在しない、両方の当技術分野で公知の他の改変を含む場合がある。種々の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドは、タンパク質のＮ末端にシグナル（またはリーダー）配列を含み、これは、タンパク質の移動を同時翻訳的に、または翻訳後に指示する。本明細書で開示されるＣＡＲにおいて有用な適したシグナル配列の実例として、それだけには限らないが、ＩｇＧ１重鎖シグナル配列およびＣＤ８αシグナル配列が挙げられる。本明細書で提供されるのは、成熟タンパク質であるタンパク質であり、すなわち、それらはシグナルペプチドを含有しない。例えば、ＣＡＲは成熟ＣＡＲであってもよい。ポリペプチドは、様々な周知の組換えおよび／または合成技術のいずれかを使用して調製できる。本明細書で企図されるポリペプチドは、本明細書で開示されるようなＣＡＲの１個または複数のアミノ酸からの欠失、それへの付加および／またはその置換を有する本開示のＣＡＲまたは配列を具体的に包含する。
「単離ペプチド」または「単離ポリペプチド」などは、本明細書で使用される場合、細胞環境からの、および細胞の他の構成成分との関連からのペプチドまたはポリペプチド分子のインビトロ単離および／または精製を指す、すなわち、インビボ物質と著しい関連はない。同様に、「単離細胞」とは、インビボ組織または臓器から得られており、細胞外基質を実質的に含まない細胞を指す。
ポリペプチドは、「ポリペプチドバリアント」を含む。ポリペプチドバリアントは、１つまたはそれ以上の置換、欠失、付加および／または挿入で天然に存在するポリペプチドとは異なり得る。このようなバリアントは、天然に存在する場合も、例えば、上記のポリペプチド配列のうち１つまたはそれ以上を改変することによって合成によって生成される場合もある。例えば、特定の実施形態では、ＣＡＲポリペプチドの結合ドメイン、ヒンジ、ＴＭドメイン、共刺激シグナル伝達ドメインまたは一次シグナル伝達ドメインへ１つまたはそれ以上の置換、欠失、付加および／または挿入を導入することによってＣＡＲの結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。ある特定の実施形態では、このようなポリペプチドは、それに対して少なくとも約６５％、７０％、７５％、８５％、９０％、９５％、９８％、または９９％のアミノ酸同一性を有するポリペプチドを含む。
ポリペプチドは、「ポリペプチド断片」を含む。ポリペプチド断片とは、天然に存在する、または組換えによって生成されたポリペプチドのアミノ末端欠失、カルボキシル末端欠失および／または内部欠失もしくは置換を有する単量体または多量体であり得るポリペプチドを指す。ある特定の実施形態では、ポリペプチド断片は、少なくとも５個～約５００個のアミノ酸長のアミノ酸鎖を含み得る。ある特定の実施形態では、断片は、少なくとも５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、４０個、４１個、４２個、４３個、４４個、４５個、４６個、４７個、４８個、４９個、５０個、５５個、６０個、６５個、７０個、７５個、８０個、８５個、９０個、９５個、１００個、１１０個、１５０個、２００個、２５０個、３００個、３５０個、４００個、または４５０個のアミノ酸長であるということが認められよう。特に有用なポリペプチド断片は、抗体の抗原結合ドメインまたは断片を含む機能的ドメインを含む。マウス抗ＢＣＭＡ（例えば、ヒトＢＣＭＡ）抗体の場合には、有用な断片として、それだけには限らないが、重鎖または軽鎖のＣＤＲ領域、ＣＤＲ３領域；重鎖または軽鎖の可変領域；２つのＣＤＲを含む抗体鎖または可変領域の一部分などが挙げられる。
ポリペプチドはまた、リンカーに、またはポリペプチドの合成、精製もしくは同定を容易にするために他の配列に（例えば、ポリＨｉｓ）、またはポリペプチドの固体支持体への結合を増強するために、インフレームで融合またはコンジュゲートされ得る。
上記のように、本開示のポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、末端切断、および挿入を含む種々の方法で変更され得る。このような操作の方法は、一般に当技術分野で公知である。例えば、参照ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、ＤＮＡにおける突然変異によって調製できる。変異原性およびヌクレオチド配列変更の方法は、当技術分野で周知である。例えば、Kunkel (1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82: 488-492)、Kunkel et al., (1987, Methods in Enzymol, 154: 367-382)、米国特許第4,873,192号、Watson, J. D. et al., (Molecular Biology of the Gene, Fourth Edition, Benjamin/Cummings, Menlo Park, Calif., 1987)およびそれらに引用された参考文献を参照。目的のタンパク質の生物活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換についてのガイダンスは、Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.)のモデルにおいて見い出すことができる。
ある特定の実施形態では、バリアントは、保存的置換を含有する。「保存的置換」は、アミノ酸が、ペプチド化学の当業者が、ポリペプチドの二次構造およびヒドロパシー性質が実質的に変化されないと予測するような同様の特性を有する別のアミノ酸と置換されているものである。改変は、本開示のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの構造において行うことができ、望ましい特徴を有するバリアントまたは誘導体ポリペプチドをコードする機能的分子が依然として得られる。等価物、さらには、改善されたバリアントポリペプチドを作出するためにポリペプチドのアミノ酸配列を変更することが望ましい場合には、当業者は、例えば、表２に従うＤＮＡ配列をコードするコドンのうち１つまたはそれ以上を変えることができる。
表２－アミノ酸コドン
Figure 2023552773000008
生物活性を消失させることなく、どのアミノ酸残基を置換、挿入、または欠失できるかを決定することにおけるガイダンスは、当技術分野で周知のコンピュータプログラム、例えば、ＤＮＡＳＴＡＲ（商標）ソフトウェアを使用して見い出すことができる。好ましくは、本明細書で開示されるタンパク質バリアントにおけるアミノ酸変化は、保存的アミノ酸変化、すなわち、同様に荷電した、または非荷電のアミノ酸の置換である。保存的アミノ酸変化は、その側鎖において関連するアミノ酸のファミリーのものの置換を含む。天然に存在するアミノ酸は、一般に、４つのファミリーに分けられる：酸性（アスパラギン酸、グルタミン酸）、塩基性（リシン、アルギニン、ヒスチジン）、非極性（アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、および非荷電極性（グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシン）アミノ酸。フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンは、芳香族アミノ酸として一緒に分類されることがある。ペプチドまたはタンパク質では、アミノ酸の適した保存的置換は、当業者に公知であり、一般に、得られる分子の生物活性を変更することなく行うことができる。この技術分野の当業者ならば、一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換は、生物活性を実質的に変更しないということは認識している（例えば、Watson et al. Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p.224を参照）。例となる保存的置換は、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願第６１／２４１，６４７号に記載されている。
このような変化を行うことにおいて、アミノ酸のヒドロパシー指数が考慮され得る。タンパク質への相互作用的生物学的機能の付与におけるヒドロパシーアミノ酸指数の重要性は、当技術分野で一般に理解されている（参照により本明細書に組み込まれる、Kyte and Doolittle,1982）。各アミノ酸は、その疎水性および荷電特徴に基づいてヒドロパシー指数のが割り当てられている（Kyte and Doolittle, 1982）。これらの値は、以下である：イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／システイン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；トレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リシン（－３．９）；およびアルギニン（－４．５）。
ある特定のアミノ酸は、同様のヒドロパシー指数またはスコアを有する他のアミノ酸によって置換されてもよく、同様の生物活性を有するタンパク質を依然としてもたらす、すなわち、生物学的機能的に同等のタンパク質が依然として得られることは、当技術分野で公知である。このような変化を行うことにおいて、ヒドロパシー指数が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものは特に好ましく、±０．５以内のものはさらにより特に好ましい。また、同様のアミノ酸の置換は、親水性に基づいて効果的に行うことができることも当技術分野では理解される。
米国特許第４，５５４，１０１号に詳述されるように、以下の親水性値がアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）；トリプトファン（－３．４）。アミノ酸は、同様の親水性値を有する別のものと置換されてもよく、生物学的に同等な、特に、免疫学的に同等なタンパク質が依然として得られることは理解される。このような変化では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が好ましく、±１以内のものは特に好ましく、±０．５以内のものはさらにより特に好ましい。
上記で概説されるように、アミノ酸置換は、アミノ酸側鎖置換基、例えば、その疎水性、親水性、電荷、サイズなどの相対的な類似性に基づく場合がある。
ポリペプチドバリアントは、グリコシル化された形態、他の分子との凝集コンジュゲート、および無関係の化学部分（例えば、ペグ化分子）との共有結合コンジュゲートをさらに含む。当技術分野で公知であるように、共有結合バリアントは、アミノ酸鎖において、またはＮもしくはＣ末端残基で見い出される基に官能基を連結することによって調製できる。バリアントはまた、対立遺伝子バリアント、種バリアントおよびムテインも含む。タンパク質の機能活性に影響を及ぼさない領域の末端切断または欠失もまたバリアントである。
２つまたはそれより多いポリペプチドの発現が望まれる一実施形態では、本明細書において別の場所で論じられるように、それらをコードするポリヌクレオチド配列をＩＲＥＳ配列によって分けることができる。別の実施形態では、２つまたはそれより多いポリペプチドは、１つまたはそれ以上の自己切断性ポリペプチド配列を含む融合タンパク質として発現され得る。
本明細書で開示されるポリペプチドは、融合ポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、融合ポリペプチドおよび融合ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば、ＣＡＲが提供される。融合ポリペプチドおよび融合タンパク質とは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９または１０またはそれより多いポリペプチドセグメントを有するポリペプチドを指す。融合ポリペプチドは、通常、Ｃ末端対Ｎ末端で連結されるが、Ｃ末端対Ｃ末端、Ｎ末端対Ｎ末端、またはＮ末端対Ｃ末端で連結される場合がある。融合タンパク質のポリペプチドは、任意の順序、または特定の順序であり得る。融合ポリペプチドまたは融合タンパク質はまた、融合ポリペプチドの所望の転写活性が保存されている限り、保存的に改変されたバリアント、多型バリアント、対立遺伝子、突然変異体、部分配列、および種間相同体も含み得る。融合ポリペプチドは、化学合成法によって、または２つの部分間の化学的連結によって生成される場合も、または一般に、他の標準技術を使用して調製される場合もある。本明細書において別の場所で論じられるように、融合ポリペプチドを含むライゲートされたＤＮＡ配列は、適した転写または翻訳制御エレメントに作動可能に連結される。
一実施形態では、融合パートナーは、天然組換えタンパク質よりも高い収率でのタンパク質の発現において補助する配列（発現エンハンサー）を含む。他の融合パートナーは、タンパク質の溶解度を増大するように、またはタンパク質が所望の細胞内コンパートメントへ標的化されることを可能にするように、または細胞膜を通る融合タンパク質の輸送を促進するように選択され得る。
融合ポリペプチドは、本明細書で記載されるポリペプチドドメイン各々の間にポリペプチド切断シグナルをさらに含み得る。さらに、ポリペプチド部位を、任意のリンカーペプチド配列中に置くことができる。例となるポリペプチド切断シグナルとして、ポリペプチド切断認識部位、例えば、プロテアーゼ切断部位、ヌクレアーゼ切断部位（例えば、希少制限酵素認識部位、自己切断性リボザイム認識部位）、および自己切断性ウイルス性オリゴペプチド(deFelipe and Ryan, 2004. Traffic, 5(8); 616-26を参照)。
適したプロテアーゼ切断部位および自己切断性ペプチドは、当業者に公知である(例えば、Ryan et al., 1997. J. Gener. Virol. 78, 699-722；Scymczak et al. (2004) Nature Biotech. 5, 589-594を参照)。例となるプロテアーゼ切断部位として、それだけには限らないが、ポティウイルスＮＩａプロテアーゼ（例えば、タバコエッチウイルスプロテアーゼ）、ポティウイルスＨＣプロテアーゼ、ポティウイルスＰ１（Ｐ３５）プロテアーゼ、ビオウイルス（ｂｙｏｖｉｒｕｓ）ＮＩａプロテアーゼ、ビオウイルスＲＮＡ－２によってコードされたプロテアーゼ、アフトウイルスＬプロテアーゼ、エンテロウイルス２Ａプロテアーゼ、ライノウイルス２Ａプロテアーゼ、ピコルナ３Ｃプロテアーゼ、コモウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ネポウイルス２４Ｋプロテアーゼ、ＲＴＳＶ（イネタングロ球状（ｒｉｃｅ ｔｕｎｇｒｏ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ）ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ＰＹＶＦ（パースニップ黄斑ウイルス）３Ｃ様プロテアーゼ、ヘパリン、トロンビン、第Ｘ因子およびエンテロキナーゼの切断部位が挙げられる。その高切断ストリンジェンシーのために、ＴＥＶ（タバコエッチウイルス）プロテアーゼ切断部位が好ましい。一実施形態では、例えば、ＥＸＸＹＸＱ（Ｇ／Ｓ）（配列番号２３）、例えば、ＥＮＬＹＦＱＧ（配列番号２４）およびＥＮＬＹＦＱＳ（配列番号２５）（式中、Ｘは、任意のアミノ酸を表す）（ＴＥＶによる切断は、ＱとＧまたはＱとＳの間で生じる）。
特定の実施形態では、自己切断性ペプチドは、ポティウイルスおよびカルジオウイルス２Ａペプチド、ＦＭＤＶ（口蹄疫ウイルス）、ウマ鼻炎Ａウイルス、ゾセア・アシグナ（Ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａ）ウイルスおよびブタテッショウウイルスから得られたポリペプチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、自己切断性ポリペプチド部位は、２Ａまたは２Ａ様部位、配列またはドメインを含む（Donnelly et al., 2001. J. Gen. Virol. 82:1027-1041）。
表３：例示的2A部位は、以下の配列を含む:
Figure 2023552773000009
ある特定の実施形態では、本明細書で企図されるポリペプチドは、ＣＡＲポリペプチドを含む。
６．６．ポリヌクレオチド
ある特定の実施形態では、１つまたはそれ以上のＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、例えば、配列番号１０が提供される。本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」または「核酸」という用語は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＲＮＡ、ゲノムＲＮＡ（ｇＲＮＡ）、正鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（＋））、負鎖ＲＮＡ（ＲＮＡ（－））、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）または組換えＤＮＡを指す。ポリヌクレオチドは一本鎖および二本鎖ポリヌクレオチドを含む。好ましくは、本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、本明細書に記載される参照配列（例えば、配列表を参照）のいずれかに対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するポリヌクレオチドまたはバリアントを含み、典型的にはバリアントは参照配列の少なくとも１つの生物活性を維持する。様々な実例的な実施形態では、本開示は、発現ベクター、ウイルスベクター、および移入プラスミドを含むポリヌクレオチド、ならびにそれを含む組成物、および細胞を部分的に企図する。
特定の実施形態では、ポリペプチドの少なくとも約５、１０、２５、５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、５００、１０００、１２５０、１５００、１７５０、または２０００個またはより多くの連続するアミノ酸残基の他に、すべての中間的長さの連続するアミノ酸残基をコードするポリヌクレオチドが本開示によって提供される。「中間的長さ」は、この文脈において、記載される値の間の任意の長さ、例えば６、７、８、９など、１０１、１０２、１０３など；１５１、１５２、１５３など；２０１、２０２、２０３などを意味することが容易に理解される。
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチドバリアント」および「バリアント」などの用語は、参照ポリヌクレオチド配列または以下において定義されるストリンジェントな条件下で参照配列とハイブリダイズするポリヌクレオチドと実質的な配列同一性を示すポリヌクレオチドを指す。これらの用語は、１つまたはそれ以上のヌクレオチドが、参照ポリヌクレオチドと比較して付加もしくは欠失されているか、または異なるヌクレオチドで置き換えられているポリヌクレオチドを含む。これに関して、突然変異、付加、欠失および置換を含むある特定の変更を参照ポリヌクレオチドに対して行って、それによって、変更されたポリヌクレオチドは参照ポリヌクレオチドの生物機能または活性を保持するようにできることが当技術分野でよく理解されている。
「配列同一性」または、例えば、「～に対して５０％同一の配列」を含むという記載は、本明細書で使用される場合、配列がヌクレオチド毎を基準としてまたはアミノ酸毎を基準として比較のウィンドウにかけて同一である程度を指す。そのため、「配列同一性のパーセンテージ」は、比較のウィンドウにかけて２つの最適にアライメントされた配列を比較し、同一の核酸塩基（例えば、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｉ）または同一のアミノ酸残基（例えば、Ａｌａ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ｈｉｓ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、ＣｙｓおよびＭｅｔ）が両方の配列中に存在する位置の数を決定して、マッチした位置の数を得、マッチした位置の数を比較のウィンドウ中の位置の総数（すなわち、ウインドウサイズ）で割り、結果に１００を掛けて配列同一性のパーセンテージを得ることによって算出されてもよい。本明細書に記載される参照配列のいずれかに対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有するヌクレオチドおよびポリペプチドが含まれ、典型的にはポリペプチドバリアントは参照ポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を維持する。
２つまたはより多くのポリヌクレオチドまたはポリペプチドの間の配列関係性を記載するために使用される用語は、「参照配列」、「比較ウインドウ」、「配列同一性」、「配列同一性のパーセンテージ」、および「実質的な同一性」を含む。「参照配列」は、少なくとも１２個であるが、頻繁には１５～１８個および多くの場合に少なくとも２５個の、ヌクレオチドおよびアミノ酸残基を含む、単量体単位の長さである。２つのポリヌクレオチドはそれぞれ、（１）２つのポリヌクレオチドの間で類似した配列（すなわち、完全なポリヌクレオチド配列の部分のみ）、および（２）２つのポリヌクレオチドの間で異なる配列を含み得るので、２つ（またはより多く）のポリヌクレオチドの間の配列比較は、典型的には、２つのポリヌクレオチドの配列を「比較ウインドウ」にかけて比較して、配列類似性の局所領域を同定および比較することによって実施される。「比較ウインドウ」は、少なくとも６個、通常は約５０～約１００個、より通常は約１００～約１５０個の連続する位置の概念上のセグメントであって、該セグメントにおいて、配列が同じ数の連続する位置の参照配列と、２つの配列が最適にアライメントされた後に比較されるものを指す。比較ウインドウは、２つの配列の最適なアライメントのために参照配列（付加も欠失も含まない）と比較して約２０％またはそれ未満の付加または欠失（すなわち、ギャップ）を含んでもよい。比較ウインドウをアライメントするための配列の最適なアライメントは、アルゴリズムのコンピュータによるインプリメンテーション（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ７．０、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒｉｖｅ Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＵＳＡ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によってまたは検査および選択された様々な方法のいずれかによって生成される最良のアライメント（すなわち、比較ウインドウにかけて最も高いパーセンテージの相同性をもたらすもの）によって実行されてもよい。例えばAltschul et al., 1997, Nucl. Acids Res. 25:3389によって開示されているＢＬＡＳＴファミリーのプログラムもまた参照され得る。配列解析の詳細な議論はAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15のUnit 19.3において見出され得る。
本明細書で使用される場合、「単離されたポリヌクレオチド」は、天然に存在する状態においてそれに隣接する配列から精製されているポリヌクレオチド、例えば、ＤＮＡ断片に通常は隣接する配列から除去されている該断片を指す。「単離されたポリヌクレオチド」はまた、天然において存在せず、人間の手によって作られている相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）、組換えＤＮＡ、または他のポリヌクレオチドを指す。
ポリヌクレオチドの方向性を記載する用語は、５’（通常は遊離リン酸基を有するポリヌクレオチドの末端）および３’（通常は遊離ヒドロキシル（ＯＨ）基を有するポリヌクレオチドの末端）を含む。ポリヌクレオチド配列は、５’から３’への方向性または３’から５’への方向性においてアノテーションされ得る。ＤＮＡおよびｍＲＮＡについて、５’から３’への鎖は、「センス」、「プラス」（正）、または「コード」鎖と呼称され、その理由は、その配列はプレメッセンジャー（ｐｒｅｍＲＮＡ）の配列と同一［ＤＮＡ中のチミン（Ｔ）の代わりに、ＲＮＡ中ではウラシル（Ｕ）であることを除く］であるからである。ＤＮＡおよびｍＲＮＡについて、ＲＮＡポリメラーゼによって転写される鎖である相補的な３’から５’への鎖は、「鋳型」、「アンチセンス」、「マイナス」（負）、または「非コード」鎖と呼称される。本明細書で使用される場合、「逆の方向性」という用語は、３’から５’への方向性において書かれた５’から３’への配列または５’から３’への方向性において書かれた３’から５’への配列を指す。
「相補的」および「相補性」という用語は、塩基対合則によって関係付けられるポリヌクレオチド（すなわち、ヌクレオチドの配列）を指す。 例えば、ＤＮＡ配列５’ Ａ Ｇ Ｔ Ｃ Ａ Ｔ Ｇ ３’の相補鎖は３’ Ｔ Ｃ Ａ Ｇ Ｔ Ａ Ｃ ５’である。後者の配列は、左に５’末端および右に３’末端を有する逆相補鎖、５’ Ｃ Ａ Ｔ Ｇ Ａ Ｃ Ｔ ３’として多くの場合に書かれる。その逆相補鎖に等しい配列はパリンドローム配列であるといわれる。相補性は「部分的」であり得、その場合、核酸の塩基の一部のみが塩基対合則に従ってマッチしている。または、核酸の間に「完全な」または「全的な」相補性があることができる。
さらに、遺伝コードの縮重の結果として、本明細書に記載されているポリペプチド、またはその断片もしくはバリアントをコードする多くのヌクレオチド配列があることが当業者によって理解される。これらのポリヌクレオチドの一部は、任意のネイティブな遺伝子のヌクレオチド配列に対して最小の相同性を有する。それにもかかわらず、コドン用法における差異に起因して変動するポリヌクレオチドが本開示によって特に企図され、これは例えばヒトおよび／または霊長動物コドン選択のために最適化されたポリヌクレオチドである。さらに、本明細書で提供されるポリヌクレオチド配列を含む遺伝子のアレルもまた使用され得る。アレルは、１つまたはそれ以上の突然変異、例えばヌクレオチドの欠失、付加および／または置換の結果として変更された内因性遺伝子である。
「核酸カセット」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡ、および引き続いてタンパク質を発現することができるベクター内の遺伝子配列を指す。核酸カセットは、目的の遺伝子、例えば、ＣＡＲを含有する。核酸カセットは、カセット中の核酸がＲＮＡに転写され、および必要な場合、タンパク質またはポリペプチドに翻訳され、形質転換された細胞中での活性のために要求される適切な翻訳後修飾を受け、適切な細胞内区画への標的化または細胞外区画への分泌によって生物活性のために適切な区画に移動することができるように、ベクター内で位置的におよび配列的に方向付けられる。好ましくは、カセットは、ベクターへの準備済みの挿入のために適合されたその３’および５’末端を有し、例えば、それぞれの末端において制限エンドヌクレアーゼ部位を有する。一実施形態では、核酸カセットは、腫瘍またはがんを治療するために使用されるキメラ抗原受容体の配列を含有する。一実施形態では、核酸カセットは、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するために使用されるキメラ抗原受容体の配列を含有する。カセットは、除去され、プラスミドまたはウイルスベクターに単一の単位として挿入され得る。
特定の実施形態では、ポリヌクレオチドは、少なくとも１つの目的のポリヌクレオチドを含む。本明細書で使用される場合、「目的のポリヌクレオチド」という用語は、発現が所望される発現ベクターに挿入されたポリペプチド（すなわち、目的のポリペプチド）をコードするポリヌクレオチドを指す。ベクターは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の目的のポリヌクレオチドを含んでもよい。ある特定の実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、疾患または障害の治療または予防において治療効果を提供するポリペプチドをコードする。目的のポリヌクレオチド、およびそれにコードされるポリペプチドは、野生型ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの他に、その機能的なバリアントおよび断片をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。特定の実施形態では、機能的なバリアントは、対応する野生型参照ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列に対して少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する。ある特定の実施形態では、機能的なバリアントまたは断片は、対応する野生型ポリペプチドの生物活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％を有する。
一実施形態では、目的のポリヌクレオチドは、ポリペプチドをコードしないが、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ、リボザイム、または他の阻害性ＲＮＡを転写するための鋳型として役立つ。様々な他の実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＣＡＲならびにｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、およびリボザイムを含むが、これらに限定されない阻害性核酸配列を含むがこれに限定されない１つまたはそれ以上の追加の目的のポリヌクレオチドをコードする目的のポリヌクレオチドを含む。
本明細書で使用される場合、「ｓｉＲＮＡ」または「短鎖干渉ＲＮＡ」という用語は、動物において配列特異的な転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害、転写阻害、またはエピジェネティックなＲＮＡｉのプロセスを媒介する短いポリヌクレオチド配列を指す（Zamore et al., 2000, Cell, 101, 25-33；Fire et al., 1998, Nature, 391, 806；Hamilton et al., 1999, Science, 286, 950-951；Lin et al., 1999, Nature, 402, 128-129；Sharp, 1999, Genes & Dev., 13, 139-141;およびStrauss, 1999, Science, 286, 886）。ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡは、同じ数のヌクレオシドを有する第１の鎖および第２の鎖を含み；しかしながら、第１および第２の鎖は、第１および第２の鎖上の２つの末端ヌクレオシドが相補鎖上の残基と対合しないようにオフセットされている。ある特定の事例において、対合しない２つのヌクレオシドはチミジン残基である。ｓｉＲＮＡは、標的遺伝子に対して十分な相同性の領域を含むべきであり、ヌクレオチドの観点において十分な長さであるべきであり、その結果、ｓｉＲＮＡ、またはその断片は、標的遺伝子の下方調節を媒介することができる。そのため、ｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡに少なくとも部分的に相補的な領域を含む。ｓｉＲＮＡと標的との間に完璧な相補性があることは必要でないが、対応関係は、ｓｉＲＮＡ、またはその切断生成物が、配列特異的なサイレンシング、例えば標的ＲＮＡのＲＮＡｉ切断によるものを指向させることを可能にするために十分でなければならない。相補性、または標的鎖との相同性の程度は、アンチセンス鎖において最も不可欠である。完璧な相補性が、特にアンチセンス鎖において、多くの場合に所望されるが、一部の実施形態は、標的ＲＮＡに対して１つまたはそれ以上の、好ましくは１０、８、６、５、４、３、２個の、またはより少ないミスマッチを含む。ミスマッチは末端領域において最も許容され、存在する場合、好ましくは１つまたはそれ以上の末端領域中、例えば、５’および／または３’末端の６、５、４、または３ヌクレオチド以内にある。センス鎖は、分子の全体的な二本鎖の特徴を維持するためにアンチセンス鎖と十分に相補的であることのみ必要とされる。
追加的に、ｓｉＲＮＡは、修飾されているか、またはヌクレオシドアナログを含むものであってもよい。ｓｉＲＮＡの一本鎖領域は、修飾されているか、またはヌクレオシドアナログを含むものであってもよく、例えば、ヘアピン構造の対合していない１つまたはそれ以上の領域、例えば、２つの相補的な領域を連結する領域は、修飾またはヌクレオシドアナログを有することができる。例えば、エキソヌクレアーゼに対して、ｓｉＲＮＡの１つもしくは複数の３’もしくは５’末端を安定化させるため、またはアンチセンスｓｉＲＮＡ剤がＲＩＳＣに入ることを助長するための修飾もまた有用である。修飾は、Ｃ３（またはＣ６、Ｃ７、Ｃ１２）アミノリンカー、チオールリンカー、カルボキシルリンカー、非ヌクレオチドスペーサー（Ｃ３、Ｃ６、Ｃ９、Ｃ１２、脱塩基、トリエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール）、ホスホロアミダイトとなり、およびＲＮＡ合成の間の複数のカップリングを可能とする別のＤＭＴ保護ヒドロキシル基を有する、特別なビオチンまたはフルオレセイン試薬を含むことができる。ｓｉＲＮＡのそれぞれの鎖は、３０、２５、２４、２３、２２、２１、もしくは２０個に等しいか、またはそれ未満のヌクレオチドの長さであり得る。鎖は好ましくは少なくとも１９ヌクレオチドの長さである。例えば、それぞれの鎖は２１～２５ヌクレオチドの長さであり得る。好ましいｓｉＲＮＡは、１７、１８、１９、２９、２１、２２、２３、２４、または２５個のヌクレオチドペアの二重鎖領域、および２～３ヌクレオチドの１つまたはそれ以上のオーバーハング、好ましくは２～３ヌクレオチドの１つまたは２つの３’オーバーハングを有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲＮＡ」または「ｍｉｃｒｏＲＮＡ」という用語は、典型的にはｐｒｅ－ｍｉＲＮＡとして公知の約７０ヌクレオチドの折り返されたＲＮＡ前駆体構造物から切除された、２０～２２ヌクレオチドの小さい非コードＲＮＡを指す。ｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡと標的との間の相補性の程度に依存して２つの仕方のうちの１つにおいてそれらの標的を負に調節する。第１に、タンパク質コードｍＲＮＡ配列に完璧なまたはほぼ完璧な相補性で結合するｍｉＲＮＡはＲＮＡ媒介性干渉（ＲＮＡｉ）経路を誘導する。それらのｍＲＮＡ標的の３’非翻訳領域（ＵＴＲ）内の不完全な相補的部位への結合によって調節効果を発揮するｍｉＲＮＡは、ＲＮＡｉ経路のために使用されるものと類似した、または場合によりそれと同一のＲＩＳＣ複合体を通じて、どうやら翻訳のレベルにおいて、転写後に標的遺伝子発現を抑止する。翻訳制御と合致して、この機序を使用するｍｉＲＮＡはそれらの標的遺伝子のタンパク質レベルを低減させるが、これらの遺伝子のｍＲＮＡレベルは最小限しか影響されない。ｍｉＲＮＡは、天然に存在するｍｉＲＮＡの他に、任意のｍＲＮＡ配列を特異的に標的とすることができる人工的に設計されたｍｉＲＮＡの両方を包含する。例えば、一実施形態では、当業者は、ヒトｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ－３０またはｍｉＲ－２１）一次転写物として発現される短鎖ヘアピンＲＮＡ構築物を設計することができる。この設計は、ヘアピン構築物にＤｒｏｓｈａプロセシング部位を付加し、ノックダウン効率を大きく増加させることが示されている（Pusch et al., 2004）。ヘアピンステムは、２２－ｎｔのｄｓＲＮＡ（例えば、アンチセンスは、所望される標的に対して完璧な相補性を有する）およびヒトｍｉＲからの１５～１９－ｎｔのループからなる。ヘアピンのいずれかまたは両方の側におけるｍｉＲループおよびｍｉＲ３０隣接配列の付加は、ｍｉｃｒｏＲＮＡを有しない従来のｓｈＲＮＡ設計と比較した場合に、発現されるヘアピンのＤｒｏｓｈａおよびＤｉｃｅｒプロセシングにおける１０倍より大きい増加をもたらす。増加したＤｒｏｓｈａおよびＤｉｃｅｒプロセシングは、より高いｓｉＲＮＡ／ｍｉＲＮＡ製造および発現されるヘアピンについてのより高い効力に翻訳される。
本明細書で使用される場合、「ｓｈＲＮＡ」または「短鎖ヘアピンＲＮＡ」という用語は、単一の自己相補的なＲＮＡ鎖によって形成される二本鎖構造を指す。標的遺伝子の、コード配列または非コード配列のいずれかの、部分と同一のヌクレオチド配列を含有するｓｈＲＮＡ構築物は、阻害のために好ましい。標的配列と比べて挿入、欠失、および単一の点突然変異を有するＲＮＡ配列もまた、阻害のために有効であることが見出されている。阻害性ＲＮＡと標的遺伝子の部分との間の９０％より高い配列同一性、またはさらには１００％の配列同一性が好ましい。ある特定の好ましい実施形態では、ｓｈＲＮＡの二重鎖形成部分の長さは、少なくとも２０、２１または２２ヌクレオチドの長さであり、例えば、Ｄｉｃｅｒ依存性切断によって生成されるＲＮＡ生成物のサイズに対応する。ある特定の実施形態では、ｓｈＲＮＡ構築物は、少なくとも２５、５０、１００、２００、３００または４００塩基の長さである。ある特定の実施形態では、ｓｈＲＮＡ構築物は４００～８００塩基の長さである。ｓｈＲＮＡ構築物は、ループ配列およびループサイズにおける変形形態について高度に許容性である。
本明細書で使用される場合、「リボザイム」という用語は、標的ｍＲＮＡの部位特異的な切断の能力を有する触媒的に活性のＲＮＡ分子を指す。いくつかのサブタイプが記載されており、例えば、ハンマーヘッドおよびヘアピンリボザイムがある。リボザイムの触媒活性および安定性は、非触媒的な塩基におけるリボヌクレオチドをデオキシリボヌクレオチドで置換することによって向上され得る。部位特異的な認識配列においてｍＲＮＡを切断するリボザイムを使用して特定のｍＲＮＡを破壊することができるが、ハンマーヘッドリボザイムの使用が好ましい。ハンマーヘッドリボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的な塩基対を形成する隣接領域によって指定される位置においてｍＲＮＡを切断する。唯一の要求は、標的ｍＲＮＡが２塩基の以下の配列：５’－ＵＧ－３’を有することである。ハンマーヘッドリボザイムの構築および製造は当技術分野で周知である。
ある特定の実施形態では、可溶性因子のアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはリボザイムである。
ある特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、またはリボザイムを含む目的のポリヌクレオチドのデリバリーの方法は、本明細書の他の箇所において記載されるように、１つまたはそれ以上の調節配列、例えば、強い構成的なｐｏｌ ＩＩＩ、例えば、ヒトＵ６ ｓｎＲＮＡプロモーター、マウスＵ６ ｓｎＲＮＡプロモーター、ヒトおよびマウスＨ１ ＲＮＡプロモーターならびにヒトｔＲＮＡ－ｖａｌプロモーター、または強い構成的なｐｏｌ ＩＩプロモーターなどを含む。
本明細書に開示されるポリヌクレオチドは、コード配列自体の長さにかかわらず、本明細書の他の箇所に開示されるように、または当技術分野で公知のように、他のＤＮＡ配列、例えばプロモーターおよび／またはエンハンサー、非翻訳領域（ＵＴＲ）、シグナル配列、Ｋｏｚａｋ配列、ポリアデニル化シグナル、追加の制限酵素部位、マルチプルクローニングサイト、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、リコンビナーゼ認識部位（例えば、ＬｏｘＰ、ＦＲＴ、およびＡｔｔ部位）、終止コドン、転写終結シグナル、ならびに自己切断性ポリペプチド、エピトープタグをコードするポリヌクレオチドと組み合わせられてもよく、その結果、それらの全体的長さはかなり変動してもよい。したがって、ほぼ任意の長さのポリヌクレオチド断片が用いられてもよいことが企図され、全長は、好ましくは、意図される組換えＤＮＡプロトコールにおける調製および使用の容易さによって限定される。
ポリヌクレオチドは、当技術分野で公知のおよび利用可能な様々なよく確立された技術のいずれかを使用して調製、操作および／または発現され得る。所望されるポリペプチドを発現させるために、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は適切なベクターに挿入され得る。ベクターの例は、プラスミド、自律複製配列、および転位可能なエレメントである。追加の例示的なベクターは、限定なしに、プラスミド、ファージミド、コスミド、人工染色体、例えば酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）、バクテリオファージ、例えばラムダファージまたはＭ１３ファージ、および動物ウイルスを含む。ベクターとして有用な動物ウイルスのカテゴリーの例は、限定なしに、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、およびパポバウイルス（例えば、ＳＶ４０）を含む。発現ベクターの例は、哺乳動物細胞中での発現用のｐＣｌｎｅｏベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）；哺乳動物細胞におけるレンチウイルス媒介性遺伝子移入および発現用のｐＬｅｎｔｉ４／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ（商標）、およびｐＬｅｎｔｉ６．２／Ｖ５－ＧＷ／ｌａｃＺ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）である。特定の実施形態では、本明細書に開示されるキメラタンパク質のコード配列は、哺乳動物細胞中でのキメラタンパク質の発現のためにそのような発現ベクターにライゲートされ得る。
一実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲをコードするベクターは、配列番号３６に記載されるポリヌクレオチド配列を含む。
特定の実施形態では、ベクターは、エピソームベクターまたは染色体外に維持されるベクターである。本明細書で使用される場合、「エピソーム」という用語は、宿主の染色体ＤＮＡへの組込みなしに、および分裂する宿主細胞からの段階的な喪失なしに複製が可能なベクターを指し、前記ベクターは染色体外でまたはエピソーム的に複製されることもまた意味する。ベクターは、リンパ球向性ヘルペスウイルスもしくはガンマヘルペスウイルス、アデノウイルス、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、または酵母からのＤＮＡ複製起点または「ｏｒｉ」、特にＥＢＶのｏｒｉＰに対応するリンパ球向性ヘルペスウイルスまたはガンマヘルペスウイルスの複製起点をコードする配列を宿すように操作される。特定の態様では、リンパ球向性ヘルペスウイルスは、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、カポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）、ヘルペスウイルスサイミリ（ＨＳ）、またはマレック病ウイルス（ＭＤＶ）であってもよい。エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）およびカポジ肉腫ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）はまたガンマヘルペスウイルスの例である。典型的には、宿主細胞は、複製を活性化させるウイルス複製トランスアクチベータータンパク質を含む。
発現ベクター中に存在する「制御エレメント」または「調節配列」は、転写および翻訳を実行する宿主細胞タンパク質と相互作用するベクターの非翻訳領域（複製起点、選択カセット、プロモーター、エンハンサー、翻訳開始シグナル（Ｓｈｉｎｅ Ｄａｌｇａｒｎｏ配列またはＫｏｚａｋ配列）、イントロン、ポリアデニル化配列、５’および３’非翻訳領域）である。そのようなエレメントは強度および特異性において様々であり得る。利用されるベクターシステムおよび宿主に依存して、遍在性プロモーターおよび誘導性プロモーターを含む、任意の数の好適な転写および翻訳エレメントが使用されてもよい。
特定の実施形態では、本明細書における利用のためのベクターは、発現ベクターおよびウイルスベクターを含むが、これらに限定されず、外因性、内因性、または異種制御配列、例えばプロモーターおよび／またはエンハンサーを含む。「内因性」制御配列は、ゲノム中の所与の遺伝子と天然に連結した制御配列である。「外因性」制御配列は、遺伝子操作（すなわち、分子生物学技術）の手段によって遺伝子に隣接して置かれており、その結果、その遺伝子の転写が、連結されたエンハンサー／プロモーターによって指向されるような制御配列である。「異種」制御配列は、遺伝学的に操作されている細胞とは異なる種からの外因性配列である。
「プロモーター」という用語は、本明細書で使用される場合、ＲＮＡポリメラーゼが結合するポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）の認識部位を指す。ＲＮＡポリメラーゼは、プロモーターに作動可能に連結したポリヌクレオチドをイニシエートおよび転写する。特定の実施形態では、哺乳動物細胞中で作動可能なプロモーターは、転写が開始される部位から約２５～３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域および／または転写の開始から７０～８０塩基上流に見出される別の配列、ＣＮＣＡＡＴ領域（ここでＮは任意のヌクレオチドであってもよい）を含む。
「エンハンサー」という用語は、増強された転写を提供する能力を有する配列を含有するＤＮＡのセグメントを指し、一部の事例において、別の制御配列と比べたそれらの方向性から独立して機能することができる。エンハンサーは、プロモーターおよび／または他のエンハンサーエレメントと協同的にまたは付加的に機能することができる。「プロモーター／エンハンサー」という用語は、プロモーターおよびエンハンサーの両方の機能を提供する能力を有する配列を含有するＤＮＡのセグメントを指す。
「作動可能に連結した」という用語は、記載される複数の構成要素が、それらがそれらの意図される方式において機能することを許容する関係性にある並置状態を指す。一実施形態では、該用語は、核酸発現制御配列（例えばプロモーター、および／またはエンハンサー）と第２のポリヌクレオチド配列、例えば、目的のポリヌクレオチドとの間の機能的な連結であって、発現制御配列が第２の配列に対応する核酸の転写を指向させるものを指す。
本明細書で使用される場合、「構成的な発現制御配列」という用語は、作動可能に連結した配列の転写を絶えずまたは連続的に可能とするプロモーター、エンハンサー、またはプロモーター／エンハンサーを指す。構成的な発現制御配列は、多様な細胞および組織種において発現を可能とする「遍在的な」プロモーター、エンハンサー、もしくはプロモーター／エンハンサーまたは制限された種類の細胞および組織種それぞれにおいて発現を可能とする「細胞特異的な」、「細胞種特異的な」、「細胞系列特異的な」、もしくは「組織特異的な」プロモーター、エンハンサー、もしくはプロモーター／エンハンサーであってもよい。
本明細書に提示される特定の実施形態における使用のために好適な実例的な遍在的な発現制御配列は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）最初期プロモーター、ウイルスシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、早期または後期）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）ＬＴＲプロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ＬＴＲ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーター、ワクシニアウイルスからのＨ５、Ｐ７．５、およびＰ１１プロモーター、伸長因子１－アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、初期増殖応答１（early growth response 1；ＥＧＲ１）、フェリチンＨ（ＦｅｒＨ）、フェリチンＬ（ＦｅｒＬ）、グリセルアルデヒド３－リン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）、真核翻訳開始因子４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１）、熱ショック７０ｋＤａタンパク質５（ＨＳＰＡ５）、熱ショックタンパク質９０ｋＤａベータ、メンバー１（ＨＳＰ９０Ｂ１）、熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）、β－キネシン（β－ＫＩＮ）、ヒトＲＯＳＡ ２６座位（Irions et al., Nature Biotechnology 25, 1477 - 1482 (2007)）、ユビキチンＣプロモーター（ＵＢＣ）、ホスホグリセリン酸キナーゼ－１（ＰＧＫ）プロモーター、サイトメガロウイルスエンハンサー／ニワトリβ－アクチン（ＣＡＧ）プロモーター、β－アクチンプロモーターおよび骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサー、負制御領域欠失、ｄｌ５８７ｒｅｖプライマー結合性部位置換（ＭＮＤ）プロモーター（Challita et al., J Virol. 69(2):748-55 (1995)）を含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本開示のベクターはＭＮＤプロモーターを含む。
一実施形態では、本開示のベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第１のイントロンを含むＥＦ１ａプロモーターを含む。
一実施形態では、本開示のベクターは、ヒトＥＦ１ａ遺伝子の第１のイントロンを欠いたＥＦ１ａプロモーターを含む。
特定の実施形態では、Ｔ細胞特異的プロモーターからＣＡＲを含むポリヌクレオチドを発現させることが望ましいことがある。
本明細書で使用される場合、「条件的な発現」は、誘導性発現；抑制性発現；特定の生理学的、生物学的、または疾患状態を有する細胞または組織中での発現などを含むが、これらに限定されない任意の種類の条件的な発現を指すことができる。この定義は、細胞種または組織特異的な発現を除外することは意図されない。ある特定の実施形態は、目的のポリヌクレオチドの条件的な発現を提供し、例えば、発現は、ポリヌクレオチドが発現されることを惹起するか、または目的のポリヌクレオチドによってコードされるポリヌクレオチドの発現における増加もしくは減少を惹起する処理または条件に細胞、組織、生物などを供することによって制御される。
誘導性プロモーター／システムの実例は、ステロイド誘導性プロモーター、例えばグルココルチコイドまたはエストロゲン受容体をコードする遺伝子用のプロモーター（対応するホルモンでの処理によって誘導可能）、メタロチオネイン（metallothionine）プロモーター（様々な重金属での処理によって誘導可能）、ＭＸ－１プロモーター（インターフェロンによって誘導可能）、「ＧｅｎｅＳｗｉｔｃｈ」ミフェプリストン調節可能システム（Sirin et al., 2003, Gene, 323:67）、ｃｕｍａｔｅ誘導性遺伝子スイッチ（国際公開第２００２／０８８３４６号パンフレット）、テトラサイクリン依存性調節システムなどを含むが、これらに限定されない。
条件的な発現はまた、部位特異的ＤＮＡリコンビナーゼを使用することによって達成され得る。ある特定の実施形態によれば、ベクターは、部位特異的リコンビナーゼによって媒介される組換えのための少なくとも１つ（典型的には２つ）の部位を含む。本明細書で使用される場合、「リコンビナーゼ」または「部位特異的リコンビナーゼ」という用語は、１つまたはそれ以上の組換え部位（例えば、２、３、４、５、７、１０、１２、１５、２０、３０、５０個など）を伴う組換え反応に関与する切除または組込みタンパク質、酵素、補因子または関連タンパク質を含み、これは、野生型タンパク質（Landy, Current Opinion in Biotechnology 3:699-707 (1993)を参照）、またはその突然変異体、誘導体（例えば、組換えタンパク質配列もしくはその断片を含有する融合タンパク質）、断片、およびバリアントであってもよい。本明細書における使用のために好適なリコンビナーゼの実例は、Ｃｒｅ、Ｉｎｔ、ＩＨＦ、Ｘｉｓ、Ｆｌｐ、Ｆｉｓ、Ｈｉｎ、Ｇｉｎ、ΦＣ３１、Ｃｉｎ、Ｔｎ３リゾルバーゼ、ＴｎｄＸ、ＸｅｒＣ、ＸｅｒＤ、ＴｎｐＸ、Ｈｊｃ、Ｇｉｎ、ＳｐＣＣＥ１、およびＰａｒＡを含むが、これらに限定されない。
ベクターは、多様な部位特異的リコンビナーゼのいずれかのための１つまたはそれ以上の組換え部位を含んでもよい。部位特異的リコンビナーゼのための標的部位は、ベクター、例えば、レトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターの組込みのために要求される任意の部位に対して追加的であることが理解されるべきである。本明細書で使用される場合、「組換え配列」、「組換え部位」、または「部位特異的組換え部位」という用語は、リコンビナーゼが認識して結合する特定の核酸配列を指す。
例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼのための１つの組換え部位はｌｏｘＰであり、これは、８塩基対コア配列に隣接する２つの１３塩基対逆位反復（リコンビナーゼ結合性部位として役立つ）を含む３４塩基対の配列である（Sauer, B., Current Opinion in Biotechnology 5:521-527 (1994)のFIG. 1を参照）。他の例示的なｌｏｘＰ部位は、ｌｏｘ５１１（Hoess et al., 1996；Bethke and Sauer, 1997）、ｌｏｘ５１７１（Lee and Saito, 1998）、ｌｏｘ２２７２（Lee and Saito, 1998）、ｍ２（Langer et al., 2002）、ｌｏｘ７１（Albert et al., 1995）、およびｌｏｘ６６（Albert et al., 1995）を含むが、これらに限定されない。
ＦＬＰリコンビナーゼのための好適な認識部位は、ＦＲＴ（McLeod, et al., 1996）、Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３（Schlake and Bode, 1994）、Ｆ４、Ｆ５（Schlake and Bode, 1994）、ＦＲＴ（ＬＥ）（Senecoff et al., 1988）、ＦＲＴ（ＲＥ）（Senecoff et al., 1988）を含むが、これらに限定されない。
認識配列の他の例は、ａｔｔＢ、ａｔｔＰ、ａｔｔＬ、およびａｔｔＲ配列であり、これらは、リコンビナーゼ酵素λインテグラーゼ、例えば、ｐｈｉ－ｃ３１によって認識される。φＣ３１ ＳＳＲは、ヘテロタイプな部位ａｔｔＢ（３４ｂｐの長さ）とａｔｔＰ（３９ｂｐの長さ）との間でのみ組換えを媒介する（Groth et al., 2000）。それぞれ細菌およびファージゲノム上のファージインテグラーゼ用の取付け部位のために命名されたａｔｔＢおよびａｔｔＰの両方は、φＣ３１ホモ二量体によって結合されるらしい不完全な逆位反復を含有する（Groth et al., 2000）。生成部位、ａｔｔＬおよびａｔｔＲは、さらなるφＣ３１媒介性組換えに対して有効に不活性であり（Belteki et al., 2003）、反応を不可逆的とする。挿入を触媒するために、ａｔｔＢ保有ＤＮＡはゲノムａｔｔＰ部位に、ａｔｔＰ部位がゲノムａｔｔＢ部位に挿入されるよりも容易に挿入されることが見出されている（Thyagarajan et al., 2001；Belteki et al., 2003）。そのため、典型的な戦略は、定義される座位に相同組換えによってａｔｔＰ保有「ドッキング部位」を配置し、該部位を次に、挿入のためにａｔｔＢ保有の入ってくる配列とパートナー形成させる。
本明細書で使用される場合、「内部リボソーム進入部位」または「ＩＲＥＳ」は、シストロン（タンパク質コード領域）の開始コドン、例えばＡＴＧへの直接的な内部リボソーム進入を促進し、それによって遺伝子のｃａｐ非依存性翻訳に繋がるエレメントを指す。例えば、Jackson et al., 1990. Trends Biochem Sci 15(12):477-83)およびJackson and Kaminski. 1995. RNA 1(10):985-1000を参照。特定の実施形態では、本明細書で企図されるベクターは、１つまたはそれ以上のポリペプチドをコードする１つまたはそれ以上の目的のポリヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、複数のポリペプチドのそれぞれの効率的な翻訳を達成するために、ポリヌクレオチド配列は、１つまたはそれ以上のＩＲＥＳ配列または自己切断性ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列によって分離され得る。
本明細書で使用される場合、「Ｋｏｚａｋ配列」という用語は、リボソームの小サブユニットへのｍＲＮＡの初期結合を大きく促し、翻訳を増加させる短いヌクレオチド配列を指す。コンセンサスＫｏｚａｋ配列は（ＧＣＣ）ＲＣＣＡＴＧＧであり、ここでＲはプリン（ＡまたはＧ）である（Kozak, 1986. Cell. 44(2):283-92、およびKozak, 1987. Nucleic Acids Res. 15(20):8125-48）。特定の実施形態では、本明細書で企図されるベクターは、コンセンサスＫｏｚａｋ配列を有し、所望されるポリペプチド、例えば、ＣＡＲをコードする、ポリヌクレオチドを含む。
一部の実施形態では、ポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを宿す細胞は、直接的な毒性および／または制御されない増殖のリスクを低減させるための誘導性自殺遺伝子を含む、自殺遺伝子を利用する。特定の態様では、自殺遺伝子は、ポリヌクレオチドまたは細胞を宿す宿主に対して免疫原性ではない。使用され得る自殺遺伝子のある特定の例は、カスパーゼ－９もしくはカスパーゼ－８またはシトシンデアミナーゼである。カスパーゼ－９は、特定の二量体化化学誘導因子（chemical inducer of dimerization；ＣＩＤ）を使用して活性化され得る。
ある特定の実施形態では、ベクターは、本開示の免疫エフェクター細胞、例えば、Ｔ細胞が、インビボで陰性選択に対して感受性となることを惹起する遺伝子セグメントを含む。「陰性選択」によって、注入された細胞が、個体のインビボ条件における変化の結果として排除され得ることが意味される。陰性選択可能な表現型は、投与された剤、例えば、化合物に対する感受性を付与する遺伝子の挿入の結果としてもたらされてもよい。陰性選択可能な遺伝子は当技術分野で公知であり、特に以下：ガンシクロビル感受性を付与する単純ヘルペスウイルスＩ型チミジンキナーゼ（ＨＳＶ－Ｉ ＴＫ）遺伝子（Wigler et al., Cell 11:223, 1977）；細胞ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＰＲＴ）遺伝子、細胞アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＡＰＲＴ）遺伝子、および細菌シトシンデアミナーゼ（Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)）を含む。
一部の実施形態では、遺伝子改変された免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、インビトロで陰性選択可能な表現型の細胞の選択を可能にする陽性マーカーをさらに含むポリヌクレオチドを含む。陽性選択可能なマーカーは、宿主細胞に導入されると、優性表現型を発現してその遺伝子を有する細胞の陽性選択を可能にする遺伝子であってもよい。この種類の遺伝子は当技術分野で公知であり、特に、ハイグロマイシンＢに対する耐性を付与するハイグロマイシン－Ｂホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｈｐｈ）、抗生物質Ｇ４１８に対する耐性をコードするＴｎ５からのアミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ｎｅｏまたはａｐｈ）、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子、アデノシンデアミナーゼ遺伝子（ＡＤＡ）、および多剤耐性（ＭＤＲ）遺伝子を含む。
好ましくは、陽性選択可能なマーカーおよび陰性選択可能なエレメントは、陰性選択可能なエレメントの喪失が必然的に陽性選択可能なマーカーの喪失も伴うように連結される。よりいっそう好ましくは、陽性および陰性選択可能なマーカーは、一方の喪失が義務的に他方の喪失に繋がるように融合される。上記される所望される陽性選択および陰性選択の両方の特徴を付与するポリペプチドを発現生成物としてもたらす融合されたポリヌクレオチドの例はハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼチミジンキナーゼ融合遺伝子（ＨｙＴＫ）である。この遺伝子の発現は、インビトロでの陽性選択のためのハイグロマイシンＢ耐性、およびインビボでの陰性選択のためのガンシクロビル感受性を付与するポリペプチドをもたらす。Lupton S. D., et al, Mol. and Cell. Biology 1 1:3374- 3378, 1991を参照。追加的に、ある特定の実施形態では、キメラ受容体をコードするポリヌクレオチドは、融合された遺伝子、特にはインビトロでの陽性選択のためのハイグロマイシンＢ耐性、およびインビボでの陰性選択のためのガンシクロビル感受性を付与する融合された遺伝子を含有するレトロウイルスベクター、例えばLupton, S. D. et al. (1991)、上掲に記載されるＨｙＴＫレトロウイルスベクター中にある。優性の陽性選択可能なマーカーを陰性選択可能なマーカーと融合させることに由来する二機能性の選択可能な融合遺伝子の使用を記載する、Ｓ．Ｄ．ＬｕｐｔｏｎによるＰＣＴ ＵＳ９１／０８４４２およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５６０１の公開公報もまた参照。
陽性選択可能なマーカーは、例えば、ｈｐｈ、ｎｃｏ、およびｇｐｔからなる群から選択される遺伝子に由来することができ、ならびに陰性選択可能なマーカーは、例えば、シトシンデアミナーゼ、ＨＳＶ－Ｉ ＴＫ、ＶＺＶ ＴＫ、ＨＰＲＴ、ＡＰＲＴおよびｇｐｔからなる群から選択される遺伝子に由来することができる。特定の実施形態では、マーカーは、二機能性の選択可能な融合遺伝子であり、ここで陽性選択可能なマーカーはｈｐｈまたはｎｅｏに由来し、陰性選択可能なマーカーはシトシンデアミナーゼもしくはＴＫ遺伝子または選択可能なマーカーに由来する。
ウイルスベクター
特定の実施形態では、細胞（例えば、免疫エフェクター細胞）は、ＣＡＲをコードするレトロウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターを用いて形質導入される。例えば、免疫エフェクター細胞は、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、Ｏｘ４０、またはこれらの任意の組合せの細胞内シグナル伝達ドメインと共に、ＢＣＭＡポリペプチド、例えば、ヒトＢＣＭＡポリペプチドに結合するマウス抗ＢＣＭＡ抗体またはその抗原結合性断片を含むＣＡＲをコードするベクターを用いて形質導入される。代替的に、免疫エフェクター細胞は、ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、Ｏｘ４０、またはこれらの任意の組合せの細胞内シグナル伝達ドメインと共に、細胞外抗原、例えば、腫瘍抗原に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含むＣＡＲをコードするベクターを用いて形質導入される。そのため、これらの形質導入された細胞は、ＣＡＲ媒介性細胞傷害性応答を誘発することができる。
レトロウイルスは、遺伝子デリバリーのための一般的なツールである（Miller, 2000, Nature. 357: 455-460）。特定の実施形態では、レトロウイルスは、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードするポリヌクレオチドを細胞にデリバリーするために使用される。本明細書で使用される場合、「レトロウイルス」という用語は、そのゲノムＲＮＡを直鎖状二本鎖ＤＮＡコピーに逆転写し、引き続いてそのゲノムＤＮＡを宿主ゲノムに共有結合的に組み込むＲＮＡウイルスを指す。ウイルスが宿主ゲノムに一旦組み込まれると、それは「プロウイルス」として参照される。プロウイルスは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩのための鋳型として役立ち、新たなウイルス粒子を製造するために必要とされる構造タンパク質および酵素をコードするＲＮＡ分子の発現を指向させる。
特定の実施形態における使用のために好適な実例的なレトロウイルスは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭｕＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、スプーマウイルス、フレンドマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）およびレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「レンチウイルス」という用語は、複合レトロウイルスの群（または属）を指す。実例的なレンチウイルスは、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス；ＨＩＶ １型、およびＨＩＶ ２型を含む）；ビスナ－マエディウイルス（ＶＭＶ）ウイルス；ヤギ関節炎－脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）；ウマ感染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）；ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）；ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）；ならびに類人猿免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含むが、これらに限定されない。一実施形態では、ＨＩＶベースのベクター骨格（すなわち、ＨＩＶシス作用性配列エレメント）が利用される。特定の実施形態では、レンチウイルスが、ＣＡＲを含むポリヌクレオチドを細胞にデリバリーするために使用される。
レトロウイルスベクター、より詳細にはレンチウイルスベクターが、本明細書に開示される特定の実施形態の実施において使用されてもよい。よって、「レトロウイルス」または「レトロウイルスベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それぞれ「レンチウイルス」および「レンチウイルスベクター」を含むことが意味される。
「ベクター」という用語は、別の核酸分子を移入または輸送する能力を有する核酸分子を指すために本明細書において使用される。移入される核酸は、ベクター核酸分子に一般に連結される、例えば、挿入される。ベクターは、細胞中での自律複製を指向させる配列を含んでもよいか、または宿主細胞ＤＮＡへの組込みを可能とするために十分な配列を含んでもよい。有用なベクターは、例えば、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミドまたはＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、細菌人工染色体、およびウイルスベクターを含む。有用なウイルスベクターは、例えば、複製欠陥性レトロウイルスおよびレンチウイルスを含む。
当業者に明らかなように、「ウイルスベクター」という用語は、典型的には核酸分子の移入もしくは細胞のゲノムへの組込みを促すウイルス由来核酸エレメントを含む核酸分子（例えば、移入プラスミド）または核酸移入を媒介するウイルス粒子のいずれかを指すために広く使用される。ウイルス粒子は、典型的には、様々なウイルス成分および場合により核酸に加えて宿主細胞成分も含む。
ウイルスベクターという用語は、核酸を細胞中にまたは移入される核酸自体に移入する能力を有するウイルスまたはウイルス粒子のいずれかを指すことができる。ウイルスベクターおよび移入プラスミドは、主にウイルスに由来する構造的なおよび／または機能的な遺伝子エレメントを含有する。「レトロウイルスベクター」という用語は、主にレトロウイルスに由来する、構造的なおよび機能的な遺伝子エレメント、またはその部分を含有するウイルスベクターまたはプラスミドを指す。「レンチウイルスベクター」という用語は、主にレンチウイルスに由来するＬＴＲを含む、構造的なおよび機能的な遺伝子エレメント、またはその部分を含有するウイルスベクターまたはプラスミドを指す。「ハイブリッドベクター」という用語は、レトロウイルスの、例えば、レンチウイルスの、配列および非レンチウイルスのウイルス配列の両方を含有するベクター、ＬＴＲまたは他の核酸を指す。一実施形態では、ハイブリッドベクターは、逆転写、複製、組込みおよび／またはパッケージングのためのレトロウイルスの、例えば、レンチウイルスの、配列を含むベクターまたは移入プラスミドを指す。
特定の実施形態では、「レンチウイルスベクター」および「レンチウイルス発現ベクター」という用語は、レンチウイルス移入プラスミドおよび／または感染性レンチウイルス粒子を指すために使用され得る。エレメント、例えばクローニングサイト、プロモーター、調節エレメント、異種核酸などへの参照が本明細書においてなされる場合、これらのエレメントの配列は、本開示のレンチウイルス粒子中にＲＮＡ形態で存在し、本開示のＤＮＡプラスミド中にＤＮＡ形態で存在することが理解されるべきである。
プロウイルスのそれぞれの末端において、「長鎖末端反復」または「ＬＴＲ」と呼ばれる構造物が存在する。「長鎖末端反復（ＬＴＲ）」という用語は、それらの天然配列の文脈において、直接的な反復であり、ならびにＵ３、ＲおよびＵ５領域を含有する、レトロウイルスＤＮＡの末端に位置する塩基対のドメインを指す。ＬＴＲは、レトロウイルス遺伝子の発現にとって基礎的な機能（例えば、促進、開始および遺伝子転写物のポリアデニル化）ならびにウイルス複製にとって基礎的な機能を一般に提供する。ＬＴＲは、転写制御エレメント、ポリアデニル化シグナルならびにウイルスゲノムの複製および組込みのために必要とされる配列を含む多数の調節シグナルを含有する。ウイルスＬＴＲは、Ｕ３、ＲおよびＵ５と呼ばれる３つの領域に分割される。Ｕ３領域はエンハンサーおよびプロモーターエレメントを含有する。Ｕ５領域は、プライマー結合性部位とＲ領域との間の配列であり、ポリアデニル化配列を含有する。Ｒ（反復；repeat）領域はＵ３およびＵ５領域に隣接している。ＬＴＲは、Ｕ３、ＲおよびＵ５領域から構成され、ウイルスゲノムの５’末端および３’末端の両方に存在する。５’ ＬＴＲに隣接して、ゲノムの逆転写のために必要な配列（ｔＲＮＡプライマー結合性部位）および粒子中へのウイルスＲＮＡの効率的なパッケージングのために必要な配列（プサイ部位）がある。
本明細書で使用される場合、「パッケージングシグナル」または「パッケージング配列」という用語は、ウイルスカプシドまたは粒子へのウイルスＲＮＡの挿入のために要求されるレトロウイルスゲノム内に位置する配列を指す。例えば、Clever et al., 1995. J. of Virology, Vol. 69, No. 4; pp. 2101-2109を参照。いくつかのレトロウイルスベクターは、ウイルスゲノムのカプシド被包のために必要とされる最小のパッケージングシグナル（プサイ［Ψ］配列としても参照される）を使用する。そのため、本明細書で使用される場合、「パッケージング配列」、「パッケージングシグナル」、「プサイ」という用語および記号「Ψ」は、ウイルス粒子形成の間にレトロウイルスＲＮＡ鎖のカプシド被包のために要求される非コード配列への参照において使用される。
様々な実施形態では、ベクターは、改変された５’ ＬＴＲおよび／または３’ ＬＴＲを含む。ＬＴＲのいずれかまたは両方は、１つまたはそれ以上の欠失、挿入、または置換を含むが、これらに限定されない１つまたはそれ以上の改変を含んでもよい。３’ ＬＴＲの改変は、多くの場合に、ウイルスを複製欠陥性とすることによってレンチウイルスまたはレトロウイルスシステムの安全性を向上させるためになされる。本明細書で使用される場合、「複製欠陥性」という用語は、完全な、有効な複製の能力を有さず、その結果、感染性ビリオンが産生されないようなウイルス（例えば、複製欠陥性のレンチウイルスの子孫）を指す。「複製コンピテント」という用語は、複製する能力を有し、その結果、ウイルスのウイルス複製が感染性ビリオンを産生する能力を有するような野生型ウイルスまたは突然変異体ウイルス（例えば、複製コンピテントのレンチウイルスの子孫）を指す。
「自己不活性化」（self-inactivating；ＳＩＮ）ベクターは、Ｕ３領域として公知の、右（３’）ＬＴＲエンハンサー－プロモーター領域が、ウイルス複製の第１のラウンドを越えてウイルス転写を防止するように（例えば、欠失または置換によって）改変されている複製欠陥性ベクター、例えば、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを指す。これは、右（３’）ＬＴＲ Ｕ３領域はウイルス複製の間に左（５’）ＬＴＲ Ｕ３領域のための鋳型として使用され、そのため、ウイルス転写物はＵ３エンハンサー－プロモーターなしでは作られ得ないからである。さらなる実施形態では、３’ ＬＴＲは、Ｕ５領域が、例えば、理想的なポリ（Ａ）配列で置き換えられるように改変される。ＬＴＲに対する改変、例えば３’ ＬＴＲ、５’ ＬＴＲ、または３’ ＬＴＲおよび５’ ＬＴＲの両方への改変もまた本明細書に含まれることが留意されるべきである。
追加の安全性増強は、５’ ＬＴＲのＵ３領域を異種プロモーターで置き換えて、ウイルス粒子の製造の間のウイルスゲノムの転写を駆動することによって提供される。使用され得る異種プロモーターの例は、例えば、ウイルスシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）（例えば、早期または後期）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（例えば、最初期）、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭＬＶ）、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）、および単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）（チミジンキナーゼ）プロモーターを含む。典型的なプロモーターは、Ｔａｔ非依存性の方式において高いレベルの転写を駆動することができる。この置換は、組換えが複製コンピテントウイルスを生成する可能性を低減させ、その理由は、ウイルス製造システム中に完全なＵ３配列がないからである。ある特定の実施形態では、異種プロモーターは、ウイルスゲノムが転写される方式の制御において追加の利点を有する。例えば、異種プロモーターは誘導性であり得、その結果、ウイルスゲノムの全体または部分の転写は、誘導因子が存在する場合にのみ起こる。誘導因子は、１つまたはそれ以上の化学的化合物または生理学的条件、例えば宿主細胞が培養される温度もしくはｐＨを含むが、これらに限定されない。
一部の実施形態では、ウイルスベクターはＴＡＲエレメントを含む。「ＴＡＲ」という用語は、レンチウイルス（例えば、ＨＩＶ）ＬＴＲのＲ領域中に位置する「トランス活性化応答」遺伝子エレメントを指す。このエレメントは、レンチウイルストランスアクチベーター（ｔａｔ）遺伝子エレメントと相互作用してウイルス複製を増強する。しかしながら、このエレメントは、５’ ＬＴＲのＵ３領域が異種プロモーターによって置き換えられている実施形態では要求されない。
「Ｒ領域」は、キャッピング基の開始（すなわち、転写の開始）において始まり、ポリＡトラクトの開始の直前で終わるレトロウイルスＬＴＲ内の領域を指す。Ｒ領域はまた、Ｕ３およびＵ５領域に隣接しているとして定義される。Ｒ領域は、逆転写の間にゲノムの１つの末端から他の末端への新生ＤＮＡの移動を許容することにおいて役割を果たす。
本明細書で使用される場合、「ＦＬＡＰエレメント」という用語は、その配列がレトロウイルス、例えば、ＨＩＶ－１またはＨＩＶ－２の中央ポリプリントラクトおよび中央終結配列（ｃＰＰＴおよびＣＴＳ）を含む核酸を指す。好適なＦＬＡＰエレメントは、米国特許第６，６８２，９０７号明細書およびZennou, et al., 2000, Cell, 101:173において記載されている。ＨＩＶ－１逆転写の間に、中央ポリプリントラクト（ｃＰＰＴ）におけるプラス鎖ＤＮＡの中央開始および中央終結配列（ＣＴＳ）における中央終結は、３鎖ＤＮＡ構造：ＨＩＶ－１中央ＤＮＡフラップの形成に繋がる。いかなる理論によっても縛られることを望まないが、ＤＮＡフラップは、レンチウイルスゲノム核内輸送のシス活性決定因子として作用し得る、および／またはウイルスの力価を増加させ得る。特定の実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクター骨格は、ベクター中の目的の異種遺伝子の上流または下流に１つまたはそれ以上のＦＬＡＰエレメントを含む。例えば、特定の実施形態では、移入プラスミドはＦＬＡＰエレメントを含む。一実施形態では、ベクターは、ＨＩＶ－１から単離されたＦＬＡＰエレメントを含む。
一実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルス移入ベクターは１つまたはそれ以上のエクスポートエレメントを含む。「エクスポートエレメント」という用語は、細胞の核から細胞質へのＲＮＡ転写物の輸送を調節するシス作用性転写後調節エレメントを指す。ＲＮＡエクスポートエレメントの例は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｒｅｖ応答エレメント（ＲＲＥ）（例えば、Cullen et al., 1991. J. Virol. 65: 1053;およびCullen et al., 1991. Cell 58: 423を参照）、ならびにＢ型肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＨＰＲＥ）を含むが、これらに限定されない。一般に、ＲＮＡエクスポートエレメントは、遺伝子の３’ＵＴＲ内に置かれ、１つまたはそれ以上のコピーとして挿入され得る。
特定の実施形態では、ウイルスベクター中の異種配列の発現は、転写後調節エレメント、効率的なポリアデニル化部位、および適宜、転写終結シグナルをベクターに組み込むことによって増加される。様々な転写後調節エレメントは、タンパク質における異種核酸の発現を増加させることができ、例えば、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ；Zufferey et al., 1999, J. Virol., 73:2886）；Ｂ型肝炎ウイルス中に存在する転写後調節エレメント（ＨＰＲＥ）（Huang et al., Mol. Cell. Biol., 5:3864）；など（Liu et al., 1995, Genes Dev., 9:1766）がある。特定の実施形態では、ベクターは、転写後調節エレメント、例えばＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むことができる。
特定の実施形態では、ベクターは、転写後調節エレメント（ＰＴＥ）、例えばＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを欠いているか、または含まず、その理由は、一部の事例において、これらのエレメントは、細胞形質転換のリスクを増加させ、および／または実質的にもしくは有意にｍＲＮＡ転写物の量を増加させることも、ｍＲＮＡ安定性を増加させることもないからである。したがって、一部の実施形態では、ベクターは、ＰＴＥを欠いているか、または含まない。他の実施形態では、ベクターは、追加の安全性対策としてＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを欠いているか、または含まない。
異種核酸転写物の効率的な終結およびポリアデニル化を指向させるエレメントは異種遺伝子発現を増加させる。転写終結シグナルはポリアデニル化シグナルの下流に一般に見出される。特定の実施形態では、ベクターは、発現されるべきポリペプチドをコードするポリヌクレオチドの３’にポリアデニル化配列を含む。「ポリＡ部位」または「ポリＡ配列」という用語は、本明細書で使用される場合、終結およびＲＮＡポリメラーゼＩＩによる新生ＲＮＡ転写物のポリアデニル化の両方を指向させるＤＮＡ配列を表す。ポリアデニル化配列は、コード配列の３’末端へのポリＡテイルの付加によってｍＲＮＡ安定性を促進することができ、そのため、翻訳効率の増加に寄与することができる。ポリＡテイルを欠いた転写物は不安定であり、急速に分解されるので、組換え転写物の効率的なポリアデニル化は望ましい。本明細書におけるベクターにおいて使用され得るポリＡシグナルの実例は、理想的なポリＡ配列（例えば、ＡＡＴＡＡＡ、ＡＴＴＡＡＡ、ＡＧＴＡＡＡ）、ウシ成長ホルモンポリＡ配列（ＢＧＨｐＡ）、ウサギβ－グロビンポリＡ配列（ｒβｇｐＡ）、または当技術分野で公知の別の好適な異種もしくは内因性ポリＡ配列を含む。
ある特定の実施形態では、レトロウイルスまたはレンチウイルスベクターは、１つまたはそれ以上のインシュレーターエレメントをさらに含む。インシュレーターエレメントは、ゲノムＤＮＡ中に存在するシス作用性エレメントによって媒介されて、移入された配列の調節されない発現に繋がり得る組込み部位効果（すなわち、位置効果；例えば、Burgess-Beusse et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 99:16433;およびZhan et al., 2001, Hum. Genet., 109:471を参照）からの、レンチウイルス発現配列、例えば、治療用ポリペプチドの保護に寄与し得る。一部の実施形態では、移入ベクターは、３’ ＬＴＲに１つまたはそれ以上のインシュレーターエレメントを含み、宿主ゲノムへのプロウイルスの組込みで、プロウイルスは、３’ ＬＴＲの複製を理由として、５’ ＬＴＲまたは３’ ＬＴＲの両方において１つまたはそれ以上のインシュレーターを含む。本明細書における使用のための好適なインシュレーターは、ニワトリβ－グロビンインシュレーターを含むが、これに限定されない（Chung et al., 1993. Cell 74:505；Chung et al., 1997. PNAS 94:575；およびBell et al., 1999. Cell 98:387を参照；これらは参照によって本明細書に組み込まれる）。インシュレーターエレメントの例は、β－グロビン座位からのインシュレーター、例えばニワトリＨＳ４を含むが、これに限定されない。
ある特定の実施形態によれば、ウイルスベクター骨格配列のほとんどまたはすべては、レンチウイルス、例えば、ＨＩＶ－１に由来する。しかしながら、レトロウイルスおよび／またはレンチウイルス配列の多くの異なる供給源が使用可能、または組合せ可能であり、ある特定のレンチウイルス配列における多数の置換および変更が、本明細書に記載される機能を行う移入ベクターの能力を損なうことなく適応され得ることが理解されるべきである。さらに、様々なレンチウイルスベクターが当技術分野で公知である。Naldini et al., (1996a、1996b、および1998)；Zufferey et al., (1997)；Dull et al., 1998、米国特許第６，０１３，５１６号明細書；ならびに同第５，９９４，１３６号明細書を参照。これらの多くは、本開示のウイルスベクターまたは移入プラスミドを製造するために適合されてもよい。
様々な実施形態では、本明細書に記載されるベクターは、ＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結したプロモーターを含むことができる。ベクターは、１つまたはそれ以上のＬＴＲを有してもよく、いずれかのＬＴＲは、１つまたはそれ以上の改変、例えば１つまたはそれ以上のヌクレオチドの置換、付加、または欠失を含んでもよい。ベクターは、１つまたはそれ以上の、形質導入効率を増加させるためのアクセサリーエレメント（例えば、ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）、ウイルスパッケージング（例えば、プサイ（Ψ）パッケージングシグナル、ＲＲＥ）、および／または治療遺伝子発現を増加させる他のエレメント（例えば、ポリ（Ａ）配列）をさらに含んでもよく、適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含んでもよい。
特定の実施形態では、移入ベクターは、左（５’）レトロウイルスＬＴＲ；中央ポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）；レトロウイルスエクスポートエレメント；本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した、Ｔ細胞において活性のプロモーター；および右（３’）レトロウイルスＬＴＲ；および適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含む。
特定の実施形態では、移入ベクターは、左（５’）レトロウイルスＬＴＲ；レトロウイルスエクスポートエレメント；本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した、Ｔ細胞において活性のプロモーター；右（３’）レトロウイルスＬＴＲ；およびポリ（Ａ）配列；および適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含む。別の特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、左（５’）ＬＴＲ；ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ；ＲＲＥ；本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した、Ｔ細胞において活性のプロモーター；右（３’）ＬＴＲ；およびポリアデニル化配列；および適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むレンチウイルスベクターである。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、左（５’）ＨＩＶ－１ ＬＴＲ；プサイ（Ψ）パッケージングシグナル；ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ；ＲＲＥ；本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した、Ｔ細胞において活性のプロモーター；右（３’）自己不活性化（ＳＩＮ） ＨＩＶ－１ ＬＴＲ；およびウサギβ－グロビンポリアデニル化配列；および適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むレンチウイルスベクターである。
別の実施形態では、本明細書で提供されるのは、少なくとも１つのＬＴＲ；中央ポリプリントラクト／ＤＮＡフラップ（ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ）；レトロウイルスエクスポートエレメント；および本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した、Ｔ細胞において活性のプロモーター；および適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むベクターである。
特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、少なくとも１つのＬＴＲ；ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ；ＲＲＥ；本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した、Ｔ細胞において活性のプロモーター；およびポリアデニル化配列；および適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥを含むベクターである。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、少なくとも１つのＳＩＮ ＨＩＶ－１ ＬＴＲ；プサイ（Ψ）パッケージングシグナル；ｃＰＰＴ／ＦＬＡＰ；ＲＲＥ；本明細書で企図されるＣＡＲポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結した、Ｔ細胞において活性のプロモーター；およびウサギβ－グロビンポリアデニル化配列；および適宜ＷＰＲＥまたはＨＰＲＥである。
様々な実施形態では、ベクターは組込み型ウイルスベクターである。
様々な他の実施形態では、ベクターはエピソームまたは非組込み型ウイルスベクターである。
様々な実施形態では、本明細書で企図されるベクターは、非組込み型または組込み型欠陥性レトロウイルスを含む。一実施形態では、「組込み型欠陥性」レトロウイルスまたはレンチウイルスは、宿主細胞のゲノムにウイルスゲノムを組み込む能力を欠いたインテグラーゼを有するレトロウイルスまたはレンチウイルスを指す。様々な実施形態では、インテグラーゼタンパク質は、そのインテグラーゼ活性を特異的に減少させるために突然変異される。組込み型インコンピテントレンチウイルスベクターは、インテグラーゼタンパク質をコードするｐｏｌ遺伝子を改変して、組込み型欠損性インテグラーゼをコードする突然変異型ｐｏｌ遺伝子を得ることによって得られる。そのような組込み型インコンピテントウイルスベクターは、特許出願国際公開第２００６／０１０８３４号パンフレット（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。
インテグラーゼ活性を低減させるために好適なＨＩＶ－１ ｐｏｌ遺伝子における実例的な突然変異は、Ｈ１２Ｎ、Ｈ１２Ｃ、Ｈ１６Ｃ、Ｈ１６Ｖ、Ｓ８１Ｒ、Ｄ４１Ａ、Ｋ４２Ａ、Ｈ５１Ａ、Ｑ５３Ｃ、Ｄ５５Ｖ、Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ、Ｅ６９Ａ、Ｋ７１Ａ、Ｅ８５Ａ、Ｅ８７Ａ、Ｄ１１６Ｎ、Ｄ１１６１、Ｄ１１６Ａ、Ｎ１２０Ｇ、Ｎ１２０１、Ｎ１２０Ｅ、Ｅ１５２Ｇ、Ｅ１５２Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｋ１５６Ｅ、Ｋ１５６Ａ、Ｅ１５７Ａ、Ｋ１５９Ｅ、Ｋ１５９Ａ、Ｋ１６０Ａ、Ｒ１６６Ａ、Ｄ１６７Ａ、Ｅ１７０Ａ、Ｈ１７１Ａ、Ｋ１７３Ａ、Ｋ１８６Ｑ、Ｋ１８６Ｔ、Ｋ１８８Ｔ、Ｅ１９８Ａ、Ｒ１９９ｃ、Ｒ１９９Ｔ、Ｒ１９９Ａ、Ｄ２０２Ａ、Ｋ２１１Ａ、Ｑ２１４Ｌ、Ｑ２１６Ｌ、Ｑ２２１Ｌ、Ｗ２３５Ｆ、Ｗ２３５Ｅ、Ｋ２３６Ｓ、Ｋ２３６Ａ、Ｋ２４６Ａ、Ｇ２４７Ｗ、Ｄ２５３Ａ、Ｒ２６２Ａ、Ｒ２６３ＡおよびＫ２６４Ｈを含むが、これらに限定されない。
インテグラーゼ活性を低減させるために好適なＨＩＶ－１ ｐｏｌ遺伝子における実例的な突然変異は、Ｄ６４Ｅ、Ｄ６４Ｖ、Ｅ９２Ｋ、Ｄ１１６Ｎ、Ｄ１１６１、Ｄ１１６Ａ、Ｎ１２０Ｇ、Ｎ１２０１、Ｎ１２０Ｅ、Ｅ１５２Ｇ、Ｅ１５２Ａ、Ｄ３５Ｅ、Ｋ１５６Ｅ、Ｋ１５６Ａ、Ｅ１５７Ａ、Ｋ１５９Ｅ、Ｋ１５９Ａ、Ｗ２３５Ｆ、およびＷ２３５Ｅを含むが、これらに限定されない。
特定の実施形態では、インテグラーゼは、アミノ酸、Ｄ６４、Ｄ１１６またはＥ１５２のうちの１つまたはそれ以上において突然変異を含む。一実施形態では、インテグラーゼは、アミノ酸、Ｄ６４、Ｄ１１６およびＥ１５２において突然変異を含む。特定の実施形態では、欠陥性ＨＩＶ－１インテグラーゼはＤ６４Ｖ突然変異を含む。
「宿主細胞」は、本明細書に開示される組換えベクターまたはポリヌクレオチドを用いてインビボ、エクスビボ、またはインビトロで電気穿孔、トランスフェクト、感染、または形質導入された細胞を含む。宿主細胞は、パッケージング細胞、プロデューサー細胞、およびウイルスベクターを感染させた細胞を含んでもよい。特定の実施形態では、本明細書に開示されるウイルスベクターを感染させた宿主細胞は、治療を必要とする対象に投与される。ある特定の実施形態では、「標的細胞」という用語は宿主細胞と交換可能に使用され、所望される細胞種のトランスフェクト、感染、または形質導入された細胞を指す。特定の実施形態では、標的細胞はＴ細胞である。
大スケールのウイルス粒子製造が、合理的なウイルス力価を達成するために多くの場合に必要である。ウイルス粒子は、ウイルス構造および／もしくはアクセサリー遺伝子、例えば、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｖｉｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｐｘ、もしくはｎｅｆ遺伝子または他のレトロウイルス遺伝子を含むパッケージング細胞系に移入ベクターをトランスフェクトすることによって製造される。
本明細書で使用される場合、「パッケージングベクター」という用語は、パッケージングシグナルを欠いており、ならびに１、２、３、４つまたはより多くのウイルス構造および／またはアクセサリー遺伝子をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターまたはウイルスベクターを指す。典型的には、パッケージングベクターは、パッケージング細胞中に含まれ、トランスフェクション、形質導入または感染を介して細胞に導入される。トランスフェクション、形質導入または感染の方法は当業者に周知である。本明細書に開示されるレトロウイルス／レンチウイルス移入ベクターは、プロデューサー細胞または細胞系を生成するために、トランスフェクション、形質導入または感染を介してパッケージング細胞系に導入され得る。本明細書に開示されるパッケージングベクターは、例えば、リン酸カルシウムトランスフェクション、リポフェクションまたは電気穿孔を含む、標準的な方法によってヒト細胞または細胞系に導入され得る。一部の実施形態では、パッケージングベクターは、優性選択可能なマーカー、例えばネオマイシン、ハイグロマイシン、ピューロマイシン、ブラストサイジン、ゼオシン、チミジンキナーゼ、ＤＨＦＲ、ＧｌｎシンテターゼまたはＡＤＡと共に細胞に導入され、続いて適切な薬物の存在下での選択およびクローンの単離が行われる。選択可能なマーカー遺伝子は、例えば、ＩＲＥＳまたは自己切断性ウイルスペプチドによって、パッケージングベクターによってコードされる遺伝子に物理的に連結され得る。
ウイルスエンベロープタンパク質（ｅｎｖ）は、細胞系から生成される組換えレトロウイルスによって最終的に感染および形質転換され得る宿主細胞の範囲を決定する。レンチウイルス、例えばＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＳＩＶ、ＦＩＶおよびＥＩＶの場合、ｅｎｖタンパク質はｇｐ４１およびｇｐ１２０を含む。好ましくは、本明細書に開示されるパッケージング細胞によって発現されるウイルスｅｎｖタンパク質は、以前に記載されているように、ウイルスｇａｇおよびｐｏｌ遺伝子とは別々のベクター上にコードされる。
本明細書において用いられ得るレトロウイルス由来ｅｎｖ遺伝子の実例は、ＭＬＶエンベロープ、１０Ａ１エンベロープ、ＢＡＥＶ、ＦｅＬＶ－Ｂ、ＲＤ１１４、ＳＳＡＶ、エボラ、センダイ、ＦＰＶ（家禽ペストウイルス）、およびインフルエンザウイルスエンベロープを含むが、これらに限定されない。同様に、ＲＮＡウイルス（例えば、ピコルナウイルス科、カリシウイルス科、アストロウイルス科、トガウイルス科、フラビウイルス科、コロナウイルス科、パラミクソウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、オルトミクソウイルス科、ブニヤウイルス科、アレナウイルス科、レオウイルス科、ビルナウイルス科、レトロウイルス科のＲＮＡウイルスファミリー）の他に、ＤＮＡウイルス（ヘパドナウイルス科、サーコウイルス科、パルボウイルス科、パポバウイルス科、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、ポックスウイルス科、およびイリドウイルス科のファミリー）からのエンベロープをコードする遺伝子が利用されてもよい。代表的な例は、ＦｅＬＶ、ＶＥＥ、ＨＦＶＷ、ＷＤＳＶ、ＳＦＶ、狂犬病、ＡＬＶ、ＢＩＶ、ＢＬＶ、ＥＢＶ、ＣＡＥＶ、ＳＮＶ、ＣｈＴＬＶ、ＳＴＬＶ、ＭＰＭＶ、ＳＭＲＶ、ＲＡＶ、ＦｕＳＶ、ＭＨ２、ＡＥＶ、ＡＭＶ、ＣＴ１０、およびＥＩＡＶを含む。
他の実施形態では、本開示との繋がりでウイルスをシュードタイプ化するためのエンベロープタンパク質は、以下のウイルス：インフルエンザＡ、例えばＨ１Ｎ１、Ｈ１Ｎ２、Ｈ３Ｎ２およびＨ５Ｎ１（鳥インフルエンザ）、インフルエンザＢ、インフルエンザＣウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｄ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、ロタウイルス、ノーウォークウイルス群の任意のウイルス、腸管アデノウイルス、パルボウイルス、デング熱ウイルス、サルポックス、モノネガウイルス目、リッサウイルス、例えば狂犬病ウイルス、ラゴスコウモリウイルス、モコラウイルス、ドゥベンヘイジウイルス、ヨーロッパコウモリウイルス１＆２およびオーストラリアコウモリウイルス、エフェメロウイルス、ベシクロウイルス、水胞性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、ヘルペスウイルス、例えば単純ヘルペスウイルス１および２型、水痘帯状疱疹、サイトメガロウイルス、エプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、ヒトヘルペスウイルス（ＨＨＶ）、ヒトヘルペスウイルス６および８型、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、パピローマウイルス、マウスガンマヘルペスウイルス、アレナウイルス、例えばアルゼンチン出血熱ウイルス、ボリビア出血熱ウイルス、サビア関連出血熱ウイルス、ベネズエラ出血熱ウイルス、ラッサ熱ウイルス、マチュポウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、ブニヤウイルス科、例えばクリミア・コンゴ出血熱ウイルス、ハンタウイルス、腎臓症候群を伴う出血熱を惹起するウイルス、リフトバレー熱ウイルス、エボラ出血熱およびマールブルク出血熱を含むフィロウイルス科（フィロウイルス）、キャサヌル森林病ウイルス、オムスク出血熱ウイルス、ダニ媒介性脳炎惹起ウイルスを含むフラビウイルス科ならびにパラミクソウイルス科、例えばヘンドラウイルスおよびニパウイルス、大痘瘡および小痘瘡（天然痘）、アルファウイルス、例えばベネズエラウマ脳炎ウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、ＳＡＲＳ関連コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）、ウエストナイルウイルス、ならびに任意の脳炎惹起ウイルスからの任意のものを含むが、これらに限定されない。
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＶＳＶ－Ｇ糖タンパク質でシュードタイプ化された組換えレトロウイルス、例えば、レンチウイルスを産生するパッケージング細胞である。
「シュードタイプ」または「シュードタイプ化する」という用語は、本明細書で使用される場合、そのウイルスエンベロープタンパク質が、好ましい特徴を有する別のウイルスのウイルスエンベロープタンパク質で置換されているウイルスを指す。例えば、ＨＩＶは、水胞性口内炎ウイルスＧ－タンパク質（ＶＳＶ－Ｇ）エンベロープタンパク質でシュードタイプ化することが可能であり、これは、ＨＩＶがより広い範囲の細胞に感染することを可能とし、その理由は、ＨＩＶエンベロープタンパク質（ｅｎｖ遺伝子によってコードされる）は、通常、ウイルスをＣＤ４＋提示細胞に標的化させるからである。一実施形態では、レンチウイルスエンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇでシュードタイプ化される。一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＶＳＶ－Ｇエンベロープ糖タンパク質でシュードタイプ化された組換えレトロウイルス、例えば、レンチウイルスを産生するパッケージング細胞である。
本明細書で使用される場合、「パッケージング細胞系」という用語は、パッケージングシグナルを含有しないが、ウイルス粒子の正確なパッケージングのために必要なウイルス構造タンパク質および複製酵素（例えば、ｇａｇ、ｐｏｌおよびｅｎｖ）を安定的にまたは一過的に発現する細胞系に関して使用される。任意の好適な細胞系が、本開示との繋がりでパッケージング細胞を調製するために用いられ得る。一般に、細胞は哺乳動物細胞である。特定の実施形態では、パッケージング細胞系を製造するために使用される細胞はヒト細胞である。使用され得る好適な細胞系は、例えば、ＣＨＯ細胞、ＢＨＫ細胞、ＭＤＣＫ細胞、Ｃ３Ｈ １０Ｔ１／２細胞、ＦＬＹ細胞、プサイ－２細胞、ＢＯＳＣ ２３細胞、ＰＡ３１７細胞、ＷＥＨＩ細胞、ＣＯＳ細胞、ＢＳＣ １細胞、ＢＳＣ ４０細胞、ＢＭＴ １０細胞、ＶＥＲＯ細胞、Ｗ１３８細胞、ＭＲＣ５細胞、Ａ５４９細胞、ＨＴ１０８０細胞、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、Ｂ－５０細胞、３Ｔ３細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｓａｏｓ－２細胞、Ｈｕｈ７細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｗ１６３細胞、２１１ 細胞、および２１１Ａ細胞を含む。特定の実施形態では、パッケージング細胞は、２９３細胞、２９３Ｔ細胞、またはＡ５４９細胞である。別の特定の実施形態では、細胞はＡ５４９細胞である。
本明細書で使用される場合、「プロデューサー細胞系」という用語は、パッケージング細胞系およびパッケージングシグナルを含む移入ベクター構築物を含む、組換えレトロウイルス粒子を産生する能力を有する細胞系を指す。感染性ウイルス粒子およびウイルスストック溶液の製造は、従来技術を使用して実行されてもよい。ウイルスストック溶液を調製する方法は当技術分野で公知であり、例えば、Soneoka et al. (1995) Nucl. Acids Res. 23:628-633、およびN. R. Landau et al. (1992) J. Virol. 66:5110-5113に示されている。感染性ウイルス粒子は、従来技術を使用してパッケージング細胞から収集されてもよい。例えば、感染性粒子は、当技術分野で公知のように、細胞溶解、または細胞培養物の上清の収集によって収集され得る。適宜、収集されたウイルス粒子は、所望される場合に精製されてもよい。好適な精製技術は当業者に周知である。
トランスフェクションではなくウイルス感染の手段によるレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターを使用する遺伝子または他のポリヌクレオチド配列のデリバリーは、「形質導入」として参照される。一実施形態では、レトロウイルスベクターは、感染およびプロウイルス組込みを通じて細胞に形質導入される。ある特定の実施形態では、標的細胞、例えば、Ｔ細胞は、ウイルスまたはレトロウイルスベクターを使用する感染によって細胞にデリバリーされた遺伝子または他のポリヌクレオチド配列を含む場合に、「形質導入されている」。特定の実施形態では、形質導入された細胞は、その細胞ゲノム中にレトロウイルスまたはレンチウイルスベクターによってデリバリーされた１つまたはそれ以上の遺伝子または他のポリヌクレオチド配列を含む。
特定の実施形態では、１つまたはそれ以上のポリペプチドを発現する本明細書に開示されているウイルスベクターを用いて形質導入された宿主細胞は、Ｂ細胞悪性腫瘍を治療および／または予防するために対象に投与される。本明細書におけるある特定の実施形態に従って利用され得る、遺伝子療法におけるウイルスベクターの使用に関する他の方法は、例えば、Kay, M. A. (1997) Chest 111(6 Supp.):138S-142S；Ferry, N. and Heard, J. M. (1998) Hum. Gene Ther. 9:1975-81；Shiratory, Y. et al. (1999) Liver 19:265-74；Oka, K. et al. (2000) Curr. Opin. Lipidol. 11:179-86；Thule, P. M. and Liu, J. M. (2000) Gene Ther. 7:1744-52；Yang, N. S. (1992) Crit. Rev. Biotechnol. 12:335-56；Alt, M. (1995) J. Hepatol. 23:746-58；Brody, S. L. and Crystal, R. G. (1994) Ann. N.Y. Acad. Sci. 716:90-101；Strayer, D. S. (1999) Expert Opin. Investig. Drugs 8:2159-2172；Smith-Arica, J. R. and Bartlett, J. S. (2001) Curr. Cardiol. Rep. 3:43-49;およびLee, H. C. et al. (2000) Nature 408:483-8において見出され得る。
６．７．遺伝子改変された細胞
特定の実施形態では、本明細書に開示されるのは、腫瘍またはがんの治療における使用のための、本明細書で企図されるＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞である。特定の実施形態では、本明細書に開示されるのは、Ｂ細胞関連状態の治療における使用のための本明細書で企図されるＣＡＲを発現するように遺伝子改変された細胞である。本明細書で使用される場合、「遺伝子操作された」または「遺伝子改変された」という用語は、細胞中の全遺伝材料への、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態の追加の遺伝材料の追加を指す。「遺伝子改変された細胞」、「改変された細胞」、および、「再指向された細胞」という用語は交換可能に使用される。本明細書で使用される場合、「遺伝子療法」という用語は、遺伝子の発現を回復させ、矯正し、もしくは改変するか、または治療用ポリペプチド、例えば、ＣＡＲを発現させる目的のための、細胞中の全遺伝材料への、ＤＮＡまたはＲＮＡの形態の追加の遺伝材料の導入を指す。
特定の実施形態では、本明細書で企図されるＣＡＲは、免疫エフェクター細胞の特異性を目的の標的抗原、例えば、ＢＣＭＡポリペプチドに再指向させるように該細胞に導入され、該細胞中で発現される。「免疫エフェクター細胞」は、１つまたはそれ以上のエフェクター機能（例えば、細胞傷害性細胞殺滅活性、サイトカインの分泌、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣの誘導）を有する免疫系の任意の細胞である。
本開示の免疫エフェクター細胞は、自己由来／自家（「自己」）または非自己由来（「非自己」、例えば、同種異系、同系もしくは異種）であり得る。
「自家」は、本明細書で使用される場合、同じ対象からの細胞を指す。
「同種」は、本明細書で使用される場合、比較される細胞と遺伝学的に異なる同じ種の細胞を指す。
「同系」は、本明細書で使用される場合、比較される細胞と遺伝学的に同一の異なる対象の細胞を指す。
「異種」は、本明細書で使用される場合、比較される細胞とは異なる種の細胞を指す。ある特定の実施形態では、本開示の細胞は同種である。
本明細書で企図されるＣＡＲと共に使用される実例的な免疫エフェクター細胞はＴリンパ球を含む。「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」という用語は当技術分野で認識されており、胸腺細胞、未熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、静止Ｔリンパ球、または活性化Ｔリンパ球を含むことが意図される。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞、例えばヘルパーＴ１（Ｔｈ１）またはヘルパーＴ２（Ｔｈ２）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ；ＣＤ４＋ Ｔ細胞）ＣＤ４＋ Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ；ＣＤ８＋ Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４－ＣＤ８－ Ｔ細胞、またはＴ細胞の任意の他のサブセットであり得る。特定の実施形態における使用のために好適な他の実例的なＴ細胞の集団はナイーブＴ細胞およびメモリーＴ細胞を含む。
当業者に理解されるように、他の細胞もまた、本明細書に記載されているＣＡＲと共に免疫エフェクター細胞として使用されてもよい。特に、免疫エフェクター細胞はまた、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、およびマクロファージを含む。免疫エフェクター細胞はまた、エフェクター細胞の前駆細胞を含み、そのような前駆細胞は、インビボまたはインビトロで免疫エフェクター細胞に分化するように誘導され得る。そのため、特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、免疫エフェクター細胞の前駆細胞、例えば臍帯血、骨髄または動員された末梢血に由来する細胞のＣＤ３４＋集団内に含有される造血幹細胞（ＨＳＣ）であって、対象における投与で成熟免疫エフェクター細胞に分化するか、または成熟免疫エフェクター細胞に分化するようにインビトロで誘導され得るものを含む。
本明細書で使用される場合、ＢＣＭＡ特異的ＣＡＲを含有するように遺伝子操作された免疫エフェクター細胞は、「ＢＣＭＡ特異的な再指向された免疫エフェクター細胞」として参照され得る。
「ＣＤ３４＋細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、その細胞表面上にＣＤ３４タンパク質を発現する細胞を指す。「ＣＤ３４」は、本明細書で使用される場合、多くの場合に細胞－細胞接着因子として作用し、リンパ節へのＴ細胞エントランスに関与する細胞表面糖タンパク質（例えば、シアロムチンタンパク質）を指す。ＣＤ３４＋細胞集団は造血幹細胞（ＨＳＣ）を含有し、ＨＳＣは、患者への投与で分化し、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球および単球／マクロファージ系列の細胞を含む、すべての造血系列に寄与する。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、本明細書で企図されるＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を作製するための方法である。一実施形態では、方法は、個体から単離された免疫エフェクター細胞へのトランスフェクトまたは形質導入を行い、その結果、免疫エフェクター細胞が、本明細書に記載されている１つまたはそれ以上のＣＡＲを発現するようにする工程を含む。ある特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞は、個体から単離され、インビトロでのさらなる操作なしに遺伝子改変される。そのような細胞は次に、個体に直接的に再投与され得る。さらなる実施形態では、免疫エフェクター細胞は、ＣＡＲを発現するように遺伝子改変される前に最初にインビトロで活性化され、増殖するように刺激される。これに関して、免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される（すなわち、本明細書で企図されるＣＡＲを発現させるために形質導入またはトランスフェクトされる）前および／または後に培養されてもよい。
特定の実施形態では、本明細書に記載される免疫エフェクター細胞のインビトロ操作または遺伝子改変の前に、細胞の供給源が対象から得られる。特定の実施形態では、ＣＡＲ改変免疫エフェクター細胞はＴ細胞を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位からの組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含むが、これらに限定されない多数の供給源から得られ得る。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、いくつもの当業者に公知の技術、例えば沈降、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離を使用して対象から収集された血液の単位から得られ得る。一実施形態では、個体の循環する血液からの細胞はアフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒細胞、Ｂ細胞、他の有核白血球を含む、リンパ球、赤血球細胞、および血小板を含有する。一実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿画分を除去するためおよび引き続いての処理のために適切なバッファーまたは培地中に細胞を置くために洗浄されてもよい。細胞は、ＰＢＳを用いて、またはカルシウム、マグネシウム、および他のすべてではないにしてもほとんどの二価陽イオンを欠いた別の好適な溶液を用いて洗浄され得る。当業者に理解されるように、洗浄工程は、当業者に公知の方法によって、例えば半自動化フロースルー遠心分離機を使用することによって達成されてもよい。例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１ ｃｅｌｌ ｐｒｏｃｅｓｓｏｒ、またはＢａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅなど。洗浄後に、細胞は、様々な生体適合性のバッファー中にまたはバッファーを含むもしくは含まない他の食塩水溶液中に再懸濁されてもよい。ある特定の実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない成分は、細胞を直接的に再懸濁された培養培地中で除去されてもよい。
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球細胞を溶解させ、および例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を通じた遠心分離によって、単球を枯渇させることによって、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離される。以下のマーカー：ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ４５ＲＯのうちの１つまたはそれ以上を発現する、Ｔ細胞の特定の亜集団は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離され得る。一実施形態では、ＣＤ３、ＣＤ２８、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ４５ＲＯを発現するＴ細胞の特定の亜集団は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離される。例えば、陰性選択によるＴ細胞集団の濃縮は、陰性選択される細胞に独特の表面マーカーを指向する抗体の組合せを用いて達成され得る。本明細書における使用のための１つの方法は、陰性選択される細胞上に存在する細胞表面マーカーを指向するモノクローナル抗体のカクテルを使用する陰性磁気免疫接着またはフローサイトメトリーを介する細胞選別および／または選択である。例えば、陰性選択によってＣＤ４＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。フローサイトメトリーおよび細胞選別もまた、本開示による使用のための目的の細胞集団を単離するために使用されてもよい。
ＰＢＭＣは、本明細書で企図される方法を使用してＣＡＲを発現するように直接的に遺伝子改変されてもよい。ある特定の実施形態では、ＰＢＭＣの単離後に、Ｔリンパ球はさらに単離され、ある特定の実施形態では、細胞傷害性Ｔリンパ球およびヘルパーＴリンパ球の両方は、遺伝子改変および／または拡大増殖の前または後のいずれかにおいてナイーブ、メモリー、およびエフェクターＴ細胞亜集団に選別され得る。
ＣＤ８＋細胞は、標準的な方法を使用することによって得られ得る。一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、ナイーブ、セントラルメモリー、およびエフェクター細胞に、それらの種類のＣＤ８＋細胞のそれぞれと関連する細胞表面抗原を同定することによってさらに選別される。
ある特定の実施形態では、ナイーブＣＤ８＋ Ｔリンパ球は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、ＣＤ １２７、およびＣＤ４５ＲＡを含むナイーブＴ細胞の表現型マーカーの発現によって特徴付けられる。
特定の実施形態では、メモリーＴ細胞は、ＣＤ８＋末梢血リンパ球のＣＤ６２Ｌ＋サブセットおよびＣＤ６２Ｌ－サブセットの両方に存在する。ＰＢＭＣは、抗ＣＤ８および抗ＣＤ６２Ｌ抗体を用いた染色後にＣＤ６２Ｌ－ＣＤ８＋およびＣＤ６２Ｌ＋ＣＤ８＋画分に選別される。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現は、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ３、およびＣＤ１２７を含み、ならびにグランザイムＢについて陰性である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋ Ｔ細胞である。
一部の実施形態では、エフェクターＴ細胞は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、およびＣＤ１２７について陰性であり、ならびにグランザイムＢおよびパーフォリンについて陽性である。
ある特定の実施形態では、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は亜集団にさらに選別される。例えば、ＣＤ４＋ Ｔヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによってナイーブ、セントラルメモリー、およびエフェクター細胞に選別され得る。ＣＤ４＋リンパ球は、標準的な方法によって得られ得る。一部の実施形態では、ナイーブＣＤ４＋ Ｔリンパ球は、ＣＤ４５ＲＯ－、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ６２Ｌ＋ ＣＤ４＋ Ｔ細胞である。一部の実施形態では、セントラルメモリーＣＤ４＋細胞はＣＤ６２Ｌ陽性およびＣＤ４５ＲＯ陽性である。一部の実施形態では、エフェクターＣＤ４＋細胞はＣＤ６２ＬおよびＣＤ４５ＲＯ陰性である。
免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、公知の方法を使用して単離後に遺伝子改変され得るか、または免疫エフェクター細胞は、遺伝子改変される前にインビトロで活性化および拡大増殖（もしくは前駆細胞の場合に分化）され得る。特定の実施形態では、免疫エフェクター細胞、例えばＴ細胞は、本明細書で企図されるキメラ抗原受容体で遺伝子改変され（例えば、ＣＡＲをコードする核酸を含むウイルスベクターを用いて形質導入され）、次にインビトロで活性化および拡大増殖される。様々な実施形態では、Ｔ細胞は、例えば、米国特許第６，３５２，６９４号明細書；同第６，５３４，０５５号明細書；同第６，９０５，６８０号明細書；同第６，６９２，９６４号明細書；同第５，８５８，３５８号明細書；同第６，８８７，４６６号明細書；同第６，９０５，６８１号明細書；同第７，１４４，５７５号明細書；同第７，０６７，３１８号明細書；同第７，１７２，８６９号明細書；同第７，２３２，５６６号明細書；同第７，１７５，８４３号明細書；同第５，８８３，２２３号明細書；同第６，９０５，８７４号明細書；同第６，７９７，５１４号明細書；同第６，８６７，０４１号明細書；および米国特許出願公開第２００６０１２１００５号明細書に記載されている方法を使用して、ＣＡＲを発現させるための遺伝子改変の前または後に活性化および拡大増殖され得る。
一般に、Ｔ細胞は、ＣＤ３ ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する剤およびＴ細胞の表面上の共刺激分子を刺激するリガンドを取り付けられた表面との接触によって拡大増殖される。Ｔ細胞集団は、表面上に固定化された抗ＣＤ３抗体、もしくはその抗原結合性断片、もしくは抗ＣＤ２抗体との接触によって、またはカルシウムイオノフォアと組み合わせてプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチン）との接触によって刺激されてもよい。Ｔ細胞の表面上のアクセサリー分子の共刺激もまた企図される。
特定の実施形態では、ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞は、適切なサイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、および／またはＩＬ－１５を含む培養培地中で、ビーズまたは他の表面に一般に取り付けられた、刺激剤および共刺激剤、例えば抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体と接触される。ＣＤ４＋ Ｔ細胞またはＣＤ８＋ Ｔ細胞のいずれかの増殖を刺激するために、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体。抗ＣＤ２８抗体の例は、９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８（Ｄｉａｃｉｏｎｅ、Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）を含み、これらは使用可能であり、当技術分野で一般的に公知の他の方法も使用され得る（Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998；Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9): 13191328, 1999；Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1 -2):53-63, 1999）。同じビーズに取り付けられた抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体は「代理」抗原提示細胞（ＡＰＣ）として役立つ。他の実施形態では、Ｔ細胞は、米国特許第６０４０１７７号明細書；米国特許第５８２７６４２号明細書；および国際公開第２０１２１２９５１４号パンフレットに記載されている方法などの方法を使用してフィーダー細胞ならびに適切な抗体およびサイトカインを用いて活性化され、増殖のために刺激されてもよい。
他の実施形態では、様々な共刺激分子およびサイトカインの安定的な発現および分泌を指向させるためにＫ５６２、Ｕ９３７、７２１．２２１、Ｔ２、およびＣ１Ｒ細胞を操作することによって人工的なＡＰＣ（ａＡＰＣ）が作製される。特定の実施形態では、Ｋ３２またはＵ３２ ａＡＰＣは、ＡＡＰＣ細胞表面上の１つまたはそれ以上の抗体ベース刺激分子の提示を指向させるために使用される。ａＡＰＣ上の遺伝子の様々な組合せの発現は、ヒトＴ細胞活性化要件の精密な決定を可能にし、その結果、ａＡＰＣは、特定の増殖要件および確固とした機能を有するＴ細胞サブセットの最適な繁殖のために適応され得る。ａＡＰＣは、天然のＡＰＣの使用とは対照的に、外因性サイトカインの追加を要求することなく機能的なヒトＣＤ８ Ｔ細胞のエクスビボ増殖および長期拡大増殖をサポートする。Ｔ細胞の集団は、ＣＤ１３７Ｌ（４－１ＢＢＬ）、ＣＤ１３４Ｌ（ＯＸ４０Ｌ）、および／またはＣＤ８０またはＣＤ８６を含むが、これらに限定されない様々な共刺激分子を発現するａＡＰＣによって拡大増殖され得る。最後に、ａＡＰＣは、遺伝子改変されたＴ細胞を拡大増殖するためおよびＣＤ８ Ｔ細胞上のＣＤ２８発現を維持するための効率的なプラットフォームを提供する。国際公開第０３／０５７１７１号パンフレットおよび米国特許出願公開第２００３／０１４７８６９号明細書において提供されるａＡＰＣは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
一実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、本開示による核酸構築物を用いて形質導入される。ある特定の実施形態では、形質導入されたＣＤ３４＋細胞は、対象、一般に細胞が元々単離された対象への投与後にインビボで成熟免疫エフェクター細胞に分化する。別の実施形態では、ＣＤ３４＋細胞は、以前に記載された方法（Asheuer et al., 2004, PNAS 101(10):3557-3562；Imren, et al., 2004）に従って、以下のサイトカイン：Ｆｌｔ－３リガンド（ＦＬＴ３）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、巨核球増殖および分化因子（ＴＰＯ）、ＩＬ－３ならびにＩＬ－６のうちの１つまたはそれ以上を用いて、曝露の前に、または本明細書に記載されているＣＡＲで遺伝子改変された後にインビトロで刺激されてもよい。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるのは、腫瘍またはがんの治療のための改変された免疫エフェクター細胞の集団であって、改変された免疫エフェクター細胞が、本明細書に開示されているＣＡＲを含む、集団である。例えば、改変された免疫エフェクター細胞の集団は、本明細書に記載されるＢ細胞悪性腫瘍を有すると診断された患者（自家ドナー）から得られた末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から調製される。ＰＢＭＣは、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋およびＣＤ８＋であり得るＴリンパ球の不均質集団を形成する。
ＰＢＭＣはまた、他の細胞傷害性リンパ球、例えばＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞を含むことができる。本明細書で企図されるＣＡＲのコード配列を有する発現ベクターは、ヒトドナーＴ細胞、ＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞の集団に導入され得る。発現ベクターを有する成功裏に形質導入されたＴ細胞は、ＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離するためにフローサイトメトリーを使用して選別可能であり、次に、抗ＣＤ３抗体およびもしくは抗ＣＤ２８抗体およびＩＬ－２または本明細書の他の箇所において記載されている当技術分野で公知の任意の他の方法を使用する細胞活性化に加えて、これらのＣＡＲタンパク質発現Ｔ細胞の数を増加させるためにさらに繁殖され得る。貯蔵および／またはヒト対象における使用のための調製のために標準手順がＣＡＲタンパク質を発現するＴ細胞の凍結保存のために使用される。一実施形態では、Ｔ細胞のインビトロ形質導入、培養および／または拡大増殖は、非ヒト動物由来生成物、例えばウシ胎仔血清およびウシ胎仔血清（fetal calf serum and fetal bovine serum）の非存在下で実施される。ＰＢＭＣの不均質集団は遺伝子改変されるので、得られる形質導入された細胞は、本明細書で企図されているＣＡＲ（例えば、ＢＣＭＡ標的ＣＡＲ）を含む改変された細胞の不均質集団である。
さらなる実施形態では、例えば、１、２、３、４、５つまたはより多くの、異なる発現ベクターの混合物が、免疫エフェクター細胞のドナー集団の遺伝子改変において使用可能であり、それぞれのベクターは、本明細書で企図されている異なるキメラ抗原受容体タンパク質をコードする。得られる改変された免疫エフェクター細胞は、改変された細胞の混合された集団を形成し、ある比率の改変された細胞は１つより多くの異なるＣＡＲタンパク質を発現する。
一実施形態では、本明細書で提供されるのは、ＢＣＭＡタンパク質を標的とする遺伝子改変されたマウス、ヒトまたはヒト化ＣＡＲタンパク質発現免疫エフェクター細胞を貯蔵する方法であって、免疫エフェクター細胞が解凍時に生存したままであるように該細胞を凍結保存する工程を含む、方法である。ＣＡＲタンパク質を発現する免疫エフェクター細胞の画分は、腫瘍またはがんまたはＢ細胞関連状態に罹患した患者の将来的な治療のためのそのような細胞の永久的な供給源を提供するために当技術分野で公知の方法によって凍結保存され得る。必要な場合、凍結保存された形質転換された免疫エフェクター細胞は、解凍され、生育され、およびより多くのそのような細胞のために拡大増殖され得る。
本明細書で使用される場合、「凍結保存する」は、零下の温度、例えば（典型的には）７７Ｋまたは－１９６℃（液体窒素の沸点）に冷却することによる細胞の保存を指す。凍結保護剤は、保存されている細胞が、低い温度での凍結または室温への温めに起因して損傷することから防止するために零下の温度において多くの場合に使用される。凍結保存剤および最適な冷却速度は細胞傷害からの保護が可能である。使用され得る凍結保護剤は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Lovelock and Bishop, Nature, 1959; 183: 1394-1395；Ashwood-Smith, Nature, 1961; 190: 1204-1205）、グリセロール、ポリビニルピロリドン（Rinfret, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1960; 85: 576）、およびポリエチレングリコール（Sloviter and Ravdin, Nature, 1962; 196: 48）を含むがこれらに限定されない。好ましい冷却速度は１℃～３℃／分である。少なくとも２時間後に、Ｔ細胞は－８０℃の温度に達しており、長期極低温貯蔵容器中などでの永久的な貯蔵のために液体窒素（－１９６℃）に直接的に入れられ得る。
６．８．Ｔ細胞製造プロセス
本明細書で企図される方法によって製造されたＴ細胞は、改善された養子免疫療法組成物を提供する。任意の特定の理論に捉われようとは思わないが、本明細書で企図される方法によって製造されたＴ細胞組成物は、生存の増大、分化の相対的非存在下での拡大増殖およびインビボでの持続性を含む優れた特性を有していると考えられる。一実施形態では、Ｔ細胞を製造する方法は、細胞を、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路をモジュレートする１つまたはそれ以上の薬剤と接触させる工程を含む。一実施形態では、Ｔ細胞を製造する方法は、細胞を、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ細胞シグナル伝達経路をモジュレートする１つまたはそれ以上の薬剤と接触させる工程を含む。種々の実施形態では、Ｔ細胞は、任意の供給源から取得し、製造プロセスの活性化および／または拡大増殖相の際に薬剤と接触させることができる。得られたＴ細胞組成物は、増殖し、以下のバイオマーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８のうち１つまたはそれ以上を発現する能力を有する発生的に強力なＴ細胞において濃縮されている。一実施形態では、１つまたはそれ以上のＰＩ３Ｋ阻害剤を用いて治療されているＴ細胞を含む細胞の集団は、以下のバイオマーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８のうち１つもしくは複数、またはすべてを同時発現するＣＤ８＋Ｔ細胞の集団について濃縮されている。
一実施形態では、維持されたレベルの増殖および減少した分化を含む改変されたＴ細胞が製造される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、１つもしくは複数の刺激性シグナルおよびＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤である薬剤の存在下でＴ細胞を刺激して、活性化にし、増殖させることによって製造される。
次いで、Ｔ細胞をＣＡＲ（例えば、ＢＣＭＡ標的化ＣＡＲ）を発現するように改変できる。一実施形態では、Ｔ細胞は、Ｔ細胞を、本明細書で企図されるＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）を含むウイルスベクターで形質導入することによって改変される。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤の存在下での刺激および活性化の前に改変される。別の実施形態では、Ｔ細胞は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤の存在下での刺激および活性化後に改変される。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路の阻害剤の存在下での刺激および活性化の１２時間、２４時間、３６時間または４８時間以内に改変される。
Ｔ細胞が活性化された後、増殖させるために細胞が培養される。Ｔ細胞は、少なくとも１、２、３、４、５、６または７日間、少なくとも２週間、少なくとも１、２、３、４、５、または６カ月間またはそれより長く培養され、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０またはそれより多いラウンドの拡大増殖を有する場合がある。
種々の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、ＰＩ３Ｋ経路の１つまたはそれ以上の阻害剤の存在下で製造される。阻害剤は、経路における１つもしくは複数の活性またはシグナル活性を標的とし得る。任意の特定の理論に捉われようとは思わないが、製造プロセスの刺激、活性化、および／または拡大増殖相の間に、Ｔ細胞をＰＩ３Ｋ経路の１つもしくは複数の阻害剤を用いて治療することまたはそれと接触させる工程は、若いＴ細胞を優先的に増大させ、それによって、優れた治療用Ｔ細胞組成物を生成すると企図される。
特定の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体を発現するＴ細胞の増殖を増大するための方法が提供される。このような方法は、例えば、対象からＴ細胞の供給源を回収する工程、ＰＩ３Ｋ経路の１つまたはそれ以上の阻害剤の存在下でＴ細胞を刺激し、活性化する工程、ＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ、より詳しくは、抗ＢＣＭＡ０２ ＣＡＲ）を発現するようにＴ細胞を改変する工程、およびＴ細胞を培養で拡大増殖させる工程を含み得る。
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞の集団を生成するための方法は、以下のバイオマーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、およびＣＤ３８のうち１つまたはそれ以上の発現について濃縮した。一実施形態では、若いＴ細胞は、以下のバイオマーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、およびＣＤ３８のうち１つもしくは複数、またはすべてを含む。一実施形態では、ＣＤ５７、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３およびＬＡＧ３の発現を欠く若いＴ細胞が提供される。本明細書において別の場所で論じられるように、若いＴ細胞バイオマーカーの発現レベルは、より分化したＴ細胞または免疫エフェクター細胞集団におけるこのようなマーカーの発現レベルに対して相対的である。
一実施形態では、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、本明細書で企図されるＴ細胞製造法においてＴ細胞の供給源として使用される。ＰＢＭＣは、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、またはＣＤ４＋およびＣＤ８＋であり得るＴリンパ球の不均一な集団を形成し、他の単核細胞、例えば、単球、Ｂ細胞、ＮＫ細胞およびＮＫＴ細胞を含む場合がある。本明細書で企図される操作されたＴＣＲまたはＣＡＲをコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターは、ヒトドナーＴ細胞、ＮＫ細胞またはＮＫＴ細胞の集団中に導入することができる。発現ベクターを保持する成功裏に形質導入されたＴ細胞は、抗ＣＤ３抗体およびまたは抗ＣＤ２８抗体ならびにＩＬ－２、ＩＬ－７および／またはＩＬ－１５を使用する、または本明細書において別の場所に記載されるような当技術分野で公知の任意の他の方法を使用する細胞活性化に加えて、フローサイトメトリーを使用して選別し、ＣＤ３陽性Ｔ細胞を単離し、次いで、さらに増殖させて改変されたＴ細胞数を増大できる。
本明細書で企図される製造方法は、ヒト対象における使用のための保存および／または調製のための改変されたＴ細胞の凍結保存をさらに含み得る。Ｔ細胞は、細胞が解凍の際に生存可能なままであるように低温保存される。必要とされる時点で、低温保存された形質転換された免疫エフェクター細胞が、解凍され、増殖され、より多くのこのような細胞のために拡大増殖され得る。本明細書で使用される場合、「凍結保存すること」とは、ゼロ度未満の温度、例えば、（通常）７７Ｋまたは－１９６℃（液体窒素の沸点）へ冷却することによる細胞の保存を指す。凍結保護剤は、保存されている細胞を低温での凍結または室温への加温による損傷から防ぐためにゼロ度未満の温度で使用されることが多い。凍結保存剤および最適冷却速度は、細胞傷害に対して保護し得る。使用できる凍結保護剤として、それだけには限らないが、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Lovelock and Bishop, Nature, 1959; 183: 1394-1395；Ashwood-Smith, Nature, 1961; 190: 1204-1205）、グリセロール、ポリビニルピロリドン（Rinfret, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1960; 85: 576）、およびポリエチレングリコール（Sloviter and Ravdin, Nature, 1962; 196: 48）が挙げられる。好ましい冷却速度は、１℃～３℃／分である。少なくとも２時間後、Ｔ細胞は、－８０℃に到達し、例えば、長期低温貯蔵保存容器中で永久保存のために液体窒素中（－１９６℃）に直接入れることができる。
６．９．Ｔ細胞
本開示は、改善されたＣＡＲ Ｔ細胞組成物の製造を企図する。ＣＡＲ Ｔ細胞製造のために使用されるＴ細胞は、自己由来／自家（「自己」）または非自己由来（「非自己」、例えば、同種異系、同系または異種）であり得る。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は哺乳動物対象から得られる。より特定の実施形態では、Ｔ細胞は、霊長類対象から得られる。好ましい実施形態では、Ｔ細胞は、ヒト対象から得られる。
Ｔ細胞は、それだけには限らないが、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染の部位からの組織、腹水、胸腔滲出液、脾臓組織および腫瘍を含むいくつかの供給源から得ることができる。ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、沈降、例えば、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの当業者に公知の任意の数の技術を使用して対象から収集された血液の単位から得ることができる。一実施形態では、個体の循環血液からの細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス生成物は、通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞を含むリンパ球、他の有核白血球細胞、赤血球および血小板を含有する。一実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、細胞をその後の処理のための適切なバッファーまたは培地中に入れてもよい。細胞を、ＰＢＳで、またはカルシウム、マグネシウム、およびほとんどの、すべてではないが他の二価カチオンを欠く別の適した溶液で洗浄することができる。当業者には理解されるであろうが、洗浄工程は、当業者に公知の方法によって、例えば、半自動化フロースルー遠心分離機を使用することによって達成できる。例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞プロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅなど。洗浄後、細胞を様々な生体適合性バッファーまたはバッファーを含むか含まない他の生理食塩水溶液で再懸濁してもよい。ある特定の実施形態では、アフェレーシス試料の望ましくない構成成分は、細胞が直接再懸濁される培養培地で除去され得る。
特定の実施形態では、本明細書で企図される製造方法においてＴ細胞を含む細胞の集団、例えば、ＰＢＭＣが使用される。他の実施形態では、本明細書で企図される製造方法においてＴ細胞の単離または精製された集団が使用される。細胞は、赤血球を溶解し、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配を介した遠心分離によって単球を枯渇させることによって末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）から単離することができる。一部の実施形態では、ＰＢＭＣの単離後、細胞傷害性およびヘルパーＴリンパ球の両方を、活性化、拡大増殖および／または遺伝子改変の前または後のいずれかでナイーブ、メモリーおよびエフェクターＴ細胞亜集団に選別できる。
以下のマーカー：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２、ＣＤ１２７、およびＨＬＡ－ＤＲのうち１つまたはそれ以上を発現するＴ細胞の特定の亜集団は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離され得る。一実施形態では、（ｉ）ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７；または（ｉｉ）ＣＤ３８もしくはＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、およびＣＤ３８からなる群から選択されるマーカーのうち１つまたはそれ以上を発現するＴ細胞の特定の亜集団は、陽性または陰性選択技術によってさらに単離される。種々の実施形態では、製造されたＴ細胞組成物は、以下のマーカー：ＣＤ５７、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３のうち１つまたはそれ以上を発現しない、または実質的に発現しない。
一実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、およびＣＤ３８からなる群から選択されるマーカーのうち１つまたはそれ以上の発現は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を用いずに活性化および拡大増殖されたＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍またはそれより多く増大される。
一実施形態では、ＣＤ５７、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３からなる群から選択されるマーカーのうち１つまたはそれ以上の発現は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を用いて活性化および拡大増殖されたＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍またはそれより多く減少される。
一実施形態では、本明細書で企図される製造方法は、ナイーブまたは発生的に強力なＴ細胞の１つまたはそれ以上のマーカーを含むＣＡＲＴ細胞数を増大する。任意の特定の理論に捉われようとは思わないが、本発明者らは、Ｔ細胞を含む細胞の集団を、１つまたはそれ以上のＰＩ３Ｋ阻害剤を用いて治療することは、発生的に強力なＴ細胞の拡大増殖の増大をもたらし、既存のＣＡＲ Ｔ細胞療法と比較してより頑強な、有効な養子ＣＡＲ Ｔ細胞免疫療法を提供すると考える。
本明細書で企図される方法を使用して製造されたＴ細胞において増大されたナイーブまたは発生的に強力なＴ細胞のマーカーの実例として、それだけには限らないが、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、およびＣＤ３８が挙げられる。特定の実施形態では、ナイーブＴ細胞は、以下のマーカー：ＣＤ５７、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＰＤ－１、ＢＴＬＡ、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３、およびＬＡＧ３のうち１つまたはそれ以上を発現しない、または実質的に発現しない。
Ｔ細胞に関して、本明細書で企図される種々の拡大増殖方法論に起因するＴ細胞集団は利用される条件次第で様々な特定の表現型特性を有し得る。種々の実施形態では、拡大増殖されたＴ細胞集団は、以下の表現型マーカー：ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７、ＣＤ３８およびＨＬＡ－ＤＲのうち１つまたはそれ以上を含む。
一実施形態では、このような表現型マーカーは、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８のうち１つもしくは複数、またはすべての発現の増強を含む。特定の実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８を含むナイーブＴ細胞の表現型マーカーの発現を特徴とするＣＤ８＋ Ｔリンパ球が拡大増殖される。
特定の実施形態では、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８を含むセントラルメモリーＴ細胞の表現型マーカーの発現を特徴とし、グランザイムＢについて陰性であるＴ細胞が拡大増殖される。一部の実施形態では、セントラルメモリーＴ細胞は、ＣＤ４５ＲＯ＋、ＣＤ６２Ｌ＋、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
ある特定の実施形態では、ＣＤ６２Ｌを含むナイーブＣＤ４＋細胞の表現型マーカーの発現を特徴とし、ＣＤ４５ＲＡおよび／またはＣＤ４５ＲＯの発現について陰性であるＣＤ４＋ Ｔリンパ球が拡大増殖される。一部の実施形態では、ＣＤ６２Ｌを含むセントラルメモリーＣＤ４＋細胞の表現型マーカーの発現を特徴とし、ＣＤ４５ＲＯ陽性であるＣＤ４＋細胞。一部の実施形態では、エフェクターＣＤ４＋細胞は、ＣＤ６２Ｌ陽性およびＣＤ４５ＲＯ陰性である。
ある特定の実施形態では、Ｔ細胞は、個体から単離され、インビトロで増殖するように活性化され、刺激され、その後、ＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）を発現するように遺伝子改変される。この関連で、Ｔ細胞は、遺伝子改変される（すなわち、本明細書で企図されるＣＡＲ、例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲを発現するように形質導入またはトランスフェクトされる）前および／または後に培養され得る。
６．９．１．活性化および拡大増殖
Ｔ細胞組成物の十分な治療用量に達成するために、Ｔ細胞は、１または複数ラウンドの刺激、活性化および／または拡大増殖に付されることが多い。Ｔ細胞は、一般に、例えば、各々、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，３５２，６９４号；同６，５３４，０５５号；同６，９０５，６８０号；同６，６９２，９６４号；同５，８５８，３５８号；同６，８８７，４６６号；同６，９０５，６８１号；同７，１４４，５７５号；同７，０６７，３１８号；同７，１７２，８６９号；同７，２３２，５６６号；同７，１７５，８４３号；同５，８８３，２２３号；同６，９０５，８７４号；同６，７９７，５１４号；および同６，８６７，０４１号に記載されるような方法を使用して活性化され、拡大増殖され得る。ＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）を発現するように改変されたＴ細胞は、Ｔ細胞が改変される前および／または後に活性化され、拡大増殖され得る。さらに、Ｔ細胞は、活性化および／または拡大増殖の前、その間および／またはその後に、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路をモジュレートする１つまたはそれ以上の薬剤と接触させることができる。一実施形態では、本明細書で企図される方法によって製造されたＴ細胞は、１、２、３、４または５またはそれより多いラウンドの活性化および拡大増殖を起こし、その各々は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路をモジュレートする１つまたはそれ以上の薬剤を含み得る。
一実施形態では、共刺激リガンドは、Ｔ細胞上の同族共刺激分子に特異的に結合する抗原提示細胞（例えば、ａＡＰＣ、樹状細胞、Ｂ細胞など）上に提示され、それによって、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体の結合によって提供される一次シグナルに加えて、所望のＴ細胞応答を媒介するシグナルを提供する。適した共刺激リガンドとして、それだけには限らないが、ＣＤ７、Ｂ７－１（ＣＤ８０）、Ｂ７－２（ＣＤ８６）、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、４－１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌ、誘導性共刺激リガンド（ＩＣＯＳ－Ｌ）、細胞間接着分子（ＩＣＡＭ）、ＣＤ３０Ｌ、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＣＤ８３、ＨＬＡ－Ｇ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＨＶＥＭ、リンホトキシンベータ受容体、ＩＬＴ３、ＩＬＴ４、Ｔｏｌｌリガンド受容体に結合するアゴニストまたは抗体およびＢ７－Ｈ３と特異的に結合するリガンドが挙げられる。
特定の実施形態では、共刺激リガンドは、それだけには限らないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－ＩＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、１ＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含む、Ｔ細胞上に存在する共刺激分子に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む。
適した共刺激リガンドは、標的抗原をさらに含み、これは、可溶性形態で提供される場合も、改変されたＴ細胞上に発現された操作されたＴＣＲまたはＣＡＲに結合するＡＰＣまたはａＡＰＣ上に発現される場合もある。
種々の実施形態では、本明細書で企図されるＴ細胞を製造するための方法は、Ｔ細胞を含む細胞の集団を活性化する工程およびＴ細胞の集団を拡大増殖する工程を含む。Ｔ細胞活性化は、Ｔ細胞ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介した、またはＣＤ２表面タンパク質の刺激による一次刺激シグナルを提供することによって、およびアクセサリー分子、例えば、ＣＤ２８を介した二次共刺激シグナルを提供することによって達成され得る。
ＴＣＲ／ＣＤ３複合体は、Ｔ細胞を適したＣＤ３結合剤、例えば、ＣＤ３リガンドまたは抗ＣＤ３モノクローナル抗体と接触させることによって刺激され得る。ＣＤ３抗体の実例として、それだけには限らないが、ＯＫＴ３、Ｇ１９－４、ＢＣ３および６４．１が挙げられる。
別の実施形態では、ＣＤ２結合剤を使用して、Ｔ細胞に一次刺激シグナルを提供できる。ＣＤ２結合剤の実例として、それだけには限らないが、ＣＤ２リガンドおよび抗ＣＤ２抗体、例えば、Ｔ１１．１またはＴ１１．２抗体と組み合わせたＴ１１．３抗体（Meuer, S. C. et al. (1984) Cell 36:897-906)および９－１抗体と組み合わせた９．６抗体（ＴＩ １．１と同一のエピトープを認識する）（Ｙａｎｇ, S. Y. et al. (1986) J. Immunol. 137:1097-1100）が挙げられる。上記の抗体のいずれかと同一のエピトープに結合する他の抗体も使用できる。さらなる抗体または抗体の組合せは、本明細書において別の場所で開示されるような標準技術によって調製および同定できる。
Ｔ細胞応答の誘導は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介して、またはＣＤ２によって提供された一次刺激シグナルに加えて、二次、共刺激シグナルを必要とする。特定の実施形態では、ＣＤ２８結合剤を使用して共刺激シグナルを提供できる。ＣＤ２８結合剤の実例として、それだけには限らないが、天然ＣＤ２８リガンド、例えば、ＣＤ２８の天然リガンド（例えば、タンパク質のＢ７ファミリーのメンバー、例えば、Ｂ７－１（ＣＤ８０）およびＢ７－２（ＣＤ８６）；および抗ＣＤ２８モノクローナル抗体またはＣＤ２８分子と架橋可能なその断片、例えば、モノクローナル抗体９．３、Ｂ－Ｔ３、ＸＲ－ＣＤ２８、ＫＯＬＴ－２、１５Ｅ８、２４８．２３．２およびＥＸ５．３Ｄ１０が挙げられる。
一実施形態では、一次刺激シグナルを提供する分子、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体もしくはＣＤ２を介して刺激を提供する分子および共刺激分子は、同一表面にカップリングされる。
ある特定の実施形態では、刺激性および補助刺激性シグナルを提供する結合剤は、細胞の表面に位置付けられる。これは、細胞表面でのその発現に適した形態で結合剤をコードする核酸を用いて細胞をトランスフェクトまたは形質導入することによって、あるいは、結合剤を細胞表面にカップリングすることによって達成できる。
別の実施形態では、一次刺激シグナルを提供する分子、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体またはＣＤ２を介して刺激を提供する分子および共刺激分子は、抗原提示細胞上にディスプレイされる。
一実施形態では、一次刺激シグナルを提供する分子、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体またはＣＤ２を介して刺激を提供する分子および共刺激分子は、別個の表面上に提供される。
ある特定の実施形態では、刺激性および補助刺激性シグナルを提供する結合剤の一方は、可溶性であり（溶液中で提供される）、他の薬剤（複数可）は、１つまたはそれ以上の表面上に提供される。
特定の実施形態では、刺激性および補助刺激性シグナルを提供する結合剤は、両方とも可溶性形態で提供される（溶液中で提供される）。
種々の実施形態では、本明細書で企図されるＴ細胞を製造するための方法は、Ｔ細胞を抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体を用いて活性化する工程を含む。
本明細書で企図される方法によって製造されたＴ細胞組成物は、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路を阻害する１つまたはそれ以上の薬剤の存在下で活性化および／または拡大増殖されたＴ細胞を含む。ＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）を発現するように改変されたＴ細胞は、Ｔ細胞が改変される前および／または後に活性化および拡大増殖され得る。特定の実施形態では、Ｔ細胞の集団は、ＣＡＲ（例えば、抗ＢＣＭＡ ＣＡＲ）を発現するように活性化され、改変され、次いで、拡大増殖のために培養される。
一実施形態では、本明細書で企図される方法によって製造されたＴ細胞は、高い増殖能および自己複製する能力を示すマーカーを発現するが、Ｔ細胞分化のマーカーを発現しない、または検出不可能なマーカーを実質的に発現する、増大した数のＴ細胞を含む。これらのＴ細胞は、頑強な様式で反復して活性化および拡大増殖される場合があり、それによって、改善された治療用Ｔ細胞組成物を提供する。
一実施形態では、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路を阻害する１つまたはそれ以上の薬剤の存在下で活性化および拡大増殖されたＴ細胞の集団は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を用いずに活性化および拡大増殖されたＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２５０倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、またはそれより多く拡大増殖される。
一実施形態では、ＰＩ３Ｋ細胞シグナル伝達経路を阻害する１つまたはそれ以上の薬剤の存在下で活性化および拡大増殖されたマーカー若いＴ細胞の発現を特徴とするＴ細胞の集団は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を用いずに活性化および拡大増殖されたＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも２５０倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、またはそれより多く拡大増殖される。
一実施形態では、本明細書で企図される方法によって活性化されたＴ細胞を拡大増殖することは、Ｔ細胞を含む細胞の集団を数時間（約３時間）～約７日間～約２８日間またはその間の任意の時間単位の整数値の間培養することをさらに含む。別の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、１４日間培養され得る。特定の実施形態では、Ｔ細胞は、約２１日間培養される。別の実施形態では、Ｔ細胞組成物は、約２～３日間培養される。数サイクルの刺激／活性化／拡大増殖が望ましい場合もあり、その結果、Ｔ細胞の培養時間は、６０日またはそれより長い場合がある。
特定の実施形態では、Ｔ細胞培養にとって適切な条件は、適切な培地（例えば、最小必須培地またはＲＰＭＩ培地１６４０またはＸ－ｖｉｖｏ １５、（Ｌｏｎｚａ））およびそれだけには限らないが、血清（例えば、胎児ウシまたはヒト血清）、インターロイキン－２（ＩＬ－２）、インスリン、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＴＧＦβおよびＴＮＦ－αまたは当業者に公知の細胞の増殖に適した任意の他の添加物を含む、増殖および生存能にとって必要な１つまたはそれ以上の因子を含む。
細胞培養培地のさらなる実例として、それだけには限らないが、血清不含であるか、または適切な量の血清（または血漿）もしくは定義されたホルモンのセットおよび／もしくはＴ細胞の増殖および拡大増殖にとって十分なサイトカイン（複数可）の量を補給した、アミノ酸、ピルビン酸ナトリウムおよびビタミンが添加された、ＲＰＭＩ １６４０、Ｃｌｉｃｋｓ、ＡＩＭ－Ｖ、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、ａ－ＭＥＭ、Ｆ－１２、Ｘ－Ｖｉｖｏ １５およびＸ－Ｖｉｖｏ ２０、Ｏｐｔｉｍｉｚｅｒが挙げられる。
Ｔ細胞拡大増殖のための他の添加剤の実例として、それだけには限らないが、界面活性剤、ピアスマネート（ｐｉａｓｍａｎａｔｅ）、ｐＨ緩衝液、例えば、ＨＥＰＥＳおよび還元剤、例えば、Ｎ－アセチル－システインおよび２－メルカプトエタノールが挙げられる。
抗生物質、例えば、ペニシリンおよびストレプトマイシンは、実験的培養物においてのみ含まれ、対象中に注入される予定である細胞の培養物には含まれない。標的細胞は、増殖を支持するのに必要な条件、例えば、適切な温度（例えば、３７℃）および雰囲気（例えば、大気および５％ Ｃ０２）下で維持される。
特定の実施形態では、ＰＢＭＣまたは単離されたＴ細胞は、適切なサイトカイン、例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－７および／またはＩＬ－１５を有する培養培地中で、一般に、ビーズまたは他の表面に付着された刺激剤および共刺激剤、例えば、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体と接触される。
他の実施形態では、人工ＡＰＣ（ａＡＰＣ）は、様々な共刺激分子およびサイトカインの安定な発現および分泌を指示するようにＫ５６２、Ｕ９３７、７２１．２２１、Ｔ２およびＣ１Ｒ細胞を操作することによって作製され得る。特定の実施形態では、Ｋ３２またはＵ３２ ａＡＰＣが、ＡＡＰＣ細胞表面上での１つまたはそれ以上の抗体ベースの刺激分子のディスプレイを指示するために使用される。Ｔ細胞の集団は、それだけには限らないが、ＣＤ１３７Ｌ（４－１ＢＢＬ）、ＣＤ１３４Ｌ（ＯＸ４０Ｌ）および／またはＣＤ８０またはＣＤ８６を含む様々な共刺激分子を発現するａＡＰＣによって拡大増殖され得る。最後に、ａＡＰＣは、遺伝子改変されたＴ細胞を拡大増殖し、ＣＤ８Ｔ細胞上でのＣＤ２８発現を維持する効率的なプラットフォームを提供する。ＷＯ０３／０５７１７１およびＵＳ２００３／０１４７８６９において提供されるａＡＰＣは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
６．９．２．薬剤
種々の実施形態では、Ｔ細胞を細胞においてＰＩ３Ｋ経路をモジュレートする薬剤と接触させる工程を含む、未分化の、または発生的に強力なＴ細胞を拡大増殖するＴ細胞を製造するための方法が提供される。種々の実施形態では、Ｔ細胞を細胞においてＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路をモジュレートする薬剤と接触させる工程を含む、未分化の、または発生的に強力なＴ細胞を拡大増殖するＴ細胞を製造するための方法が提供される。細胞は、活性化および拡大増殖の前に、その間におよび／またはその後に接触され得る。Ｔ細胞組成物は、分化の実質的な増大を伴わずに複数ラウンドの拡大増殖を受けることができるように十分なＴ細胞能力を保持する。
本明細書で使用される場合、用語「モジュレートする」、「モジュレーター」または「モジュレート剤」または同等の用語は、細胞シグナル伝達経路の変化を誘発する薬剤の能力を指す。モジュレーターは、経路構成成分の量、活性を増大もしくは減少し得る、または細胞シグナル伝達経路の所望の効果もしくはアウトプットを増大もしくは減少し得る。一実施形態では、モジュレーターは阻害剤である。別の実施形態では、モジュレーターはアクチベーターである。
「薬剤」とは、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路のモジュレーションにおいて使用される化合物、小分子、例えば、小有機分子、核酸、ポリペプチドまたはその断片、アイソフォーム、バリアント、アナログまたは誘導体を指す。
「小分子」とは、約５ｋＤ未満、約４ｋＤ未満、約３ｋＤ未満、約２ｋＤ未満、約１ｋＤ未満または約．５ｋＤ未満の分子量を有する組成物を指す。小分子は、核酸、ペプチド、ポリペプチド、ペプチド模倣薬、ぺプトイド、炭水化物、脂質、その構成成分または他の有機もしくは無機分子を含み得る。化学的および／または生物学的混合物、例えば、真菌、細菌または藻類抽出物のライブラリーが当技術分野で公知であり、本開示のアッセイのいずれかを用いてスクリーニングされ得る。分子ライブラリーの合成のための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Carell et al., 1994a；Carell et al., 1994b；Cho et al., 1993；DeWitt et al., 1993；Gallop et al., 1994；Zuckermann et al., 1994を参照）。
「アナログ」とは、本開示の所望の活性を有する化合物、ヌクレオチド、タンパク質またはポリペプチドまたは化合物と同様または同一の活性または機能（複数可）を有するが、好ましい実施形態の配列または構造と同様または同一である配列または構造を必ずしも含む必要はない小有機化合物、ヌクレオチド、タンパク質またはポリペプチドを指す。
「誘導体」とは、アミノ酸残基置換、欠失もしくは付加の導入によって変更されている親タンパク質またはポリペプチドのアミノ酸配列を含む化合物、タンパク質またはポリペプチド、またはヌクレオチド置換もしくは欠失、付加もしくは突然変異のいずれか導入によって改変されている核酸もしくはヌクレオチドを指す。誘導体核酸、ヌクレオチド、タンパク質またはポリペプチドは、親ポリペプチドと同様または同一の機能を有する。
種々の実施形態では、ＰＩ３Ｋ経路をモジュレートする薬剤は、経路の構成成分を活性化する。「アクチベーター」または「アゴニスト」とは、制限するものではないが、ＰＩ３Ｋの１つまたはそれ以上の活性を阻害する分子を含む、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路における分子の１つまたはそれ以上の活性を促進する、増大する、または誘導する薬剤を指す。
種々の実施形態では、ＰＩ３Ｋ経路をモジュレートする薬剤は、経路の構成成分を阻害する。「阻害剤」または「アンタゴニスト」とは、制限するものではないが、ＰＩ３Ｋを含む、ＰＩ３Ｋ経路における分子の１つまたはそれ以上の活性を阻害する、減少させる、または低減する薬剤を指す。一実施形態では、阻害剤は、二重分子阻害剤である。特定の実施形態では、阻害剤は、同一または実質的に同様の活性を有する分子のクラスを阻害し得る（汎阻害剤）、または分子の活性を特異的に阻害し得る（選択的または特異的阻害剤）。阻害はまた、不可逆性または可逆性であり得る。
一実施形態では、阻害剤は、少なくとも１ｎＭ、少なくとも２ｎＭ、少なくとも５ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、少なくとも５０ｎＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも２００ｎＭ、少なくとも５００ｎＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１０μＭ、少なくとも５０μＭまたは少なくとも１００μＭのＩＣ５０を有する。ＩＣ５０決定は、当技術分野で公知の任意の従来技術を使用して達成できる。例えば、ＩＣ５０は、ある範囲の濃度の研究下の阻害剤の存在下で、所与の酵素の活性を測定することによって決定できる。酵素活性の実験的に得られた値を、次いで、使用された阻害剤濃度に対してプロットする。５０％の酵素活性（任意の阻害剤の不在下での活性と比較して）を示す阻害剤の濃度を、「ＩＣ５０」値ととる。類似して、活性の適切な決定によって他の阻害濃度を定義できる。
種々の実施形態では、Ｔ細胞は、少なくとも１ｎＭ、少なくとも２ｎＭ、少なくとも５ｎＭ、少なくとも１０ｎＭ、少なくとも５０ｎＭ、少なくとも１００ｎＭ、少なくとも２００ｎＭ、少なくとも５００ｎＭ、少なくとも１μＭ、少なくとも１０μＭ、少なくとも５０μＭ、少なくとも１００μＭまたは少なくとも１Ｍの濃度のＰＩ３Ｋ経路の１つまたはそれ以上のモジュレーターと接触される、またはそれを用いて治療される、またはそれと共に培養される。
特定の実施形態では、Ｔ細胞は、少なくとも１２時間、１８時間、少なくとも１、２、３、４、５、６、または７日間、少なくとも２週間、少なくとも１、２、３、４、５、または６カ月またはそれより長く、ＰＩ３Ｋ経路の１つまたはそれ以上のモジュレーターと接触され、またはそれを用いて治療され、またはそれと共に培養され、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０またはそれより多いラウンドの拡大増殖を有する場合がある。
６．９．３．ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路
ラパマイシン経路のホスファチジル－イノシトール－３キナーゼ／Ａｋｔ／哺乳動物標的は、増殖因子シグナル伝達を、細胞増殖、分化、代謝および生存と統合するための導管として働く。ＰＩ３Ｋは、高度に保存された細胞内脂質キナーゼのファミリーである。クラスＩＡ ＰＩ３Ｋは、増殖因子受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）によって、直接的に、またはアダプター分子のインスリン受容体基質ファミリーとの相互作用を介して活性化される。この活性は、セリン／トレオニンキナーゼＡｋｔのレギュレーターであるホスファチジル－イノシトール－３，４，５－トリホスフェート（ＰＩＰ３）の生成をもたらす。ｍＴＯＲは、各々、別個の活性を与える結合パートナーを特徴とする、２つの別個の複合体による標準的なＰＩ３Ｋ経路を介して作用する。ｍＴＯＲＣ１（ＰＲＡＳ４０、ｒａｐｔｏｒおよびｍＬＳＴ８／ＧｂＬとの複合体中のｍＴＯＲ）は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔシグナル伝達の下流エフェクターとして作用し、増殖因子シグナルを、タンパク質翻訳、細胞増殖、増殖および生存と関連付ける。ｍＴＯＲＣ２（ｒｉｃｔｏｒ、ｍＳＩＮ１、ｐｒｏｔｏｒおよびｍＬＳＴ８との複合体中のｍＴＯＲ）は、Ａｋｔの上流アクチベーターとして作用する。
ＰＩ３Ｋの増殖因子受容体によって媒介された活性化の際、Ａｋｔは、ＰＩＰ３とのそのプレクストリン相同性ドメインの相互作用を介して膜に補充され、したがって、その活性化ループを露出させ、構成的に活性なホスホイノシチド依存性タンパク質キナーゼ１（ＰＤＫ１）によるトレオニン３０８（Ｔｈｒ３０８）でのリン酸化を可能にする。最大活性化のために、Ａｋｔはまた、そのＣ末端疎水性モチーフのセリン４７３（Ｓｅｒ４７３）でｍＴＯＲＣ２によってリン酸化される。ＤＮＡ－ＰＫおよびＨＳＰはまた、Ａｋｔ活性の調節において重要であると示されている。Ａｋｔは、ＴＳＣ２の阻害性リン酸化を介してｍＴＯＲＣ１を活性化し、これは、ＴＳＣ１と共に、ｍＴＯＲＣ１の正のレギュレーターであるＲｈｅｂ ＧＴＰアーゼを阻害することによって、ｍＴＯＲＣ１を負に調節する。ｍＴＯＲＣ１は、２つの十分に定義された基質、ｐ７０Ｓ６Ｋ（本明細書において以下、Ｓ６Ｋ１と呼ばれる）および４Ｅ－ＢＰ１を有し、それらの両方ともタンパク質合成を決定的に調節する。したがって、ｍＴＯＲＣ１は、ＰＩ３Ｋの重要な下流エフェクターであり、増殖因子シグナル伝達をタンパク質翻訳および細胞増殖と関連付ける。
６．９．４．ＰＩ３Ｋ阻害剤
本明細書で使用される場合、用語「ＰＩ３Ｋ阻害剤」とは、ＰＩ３Ｋに結合し、その少なくとも１つの活性を阻害する核酸、ペプチド、化合物または小有機分子を指す。ＰＩ３Ｋタンパク質は、３つのクラス、クラス１ ＰＩ３Ｋ、クラス２ ＰＩ３Ｋおよびクラス３ ＰＩ３Ｋに分けることができる。クラス１ ＰＩ３Ｋは、４つのｐ１１０触媒サブユニット（ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δおよびｐ１１０γ）のうち１つおよび調節サブユニットの２つのファミリーのうち１つからなるヘテロ二量体として存在する。特定の実施形態では、本開示のＰＩ３Ｋ阻害剤は、クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤を標的とする。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤の１つまたはそれ以上のアイソフォームに対する選択性（すなわち、ｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δおよびｐ１１０γまたはｐ１１０α、ｐ１１０β、ｐ１１０δおよびｐ１１０γのうち１つもしくは複数に対する選択性）を示すであろう。別の態様では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、アイソフォーム選択性を示さず、「汎ＰＩ３Ｋ阻害剤」と考えられる。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＰＩ３Ｋ触媒ドメインへの結合についてＡＴＰと競合する。
ある特定の実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、例えば、ＰＩ３ＫならびにＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲ経路中のさらなるタンパク質を標的とし得る。特定の実施形態では、ｍＴＯＲおよびＰＩ３Ｋの両方を標的とするＰＩ３Ｋ阻害剤は、ｍＴＯＲ阻害剤またはＰＩ３Ｋ阻害剤のいずれかと呼ばれる場合がある。ＰＩ３Ｋのみを標的とするＰＩ３Ｋ阻害剤は、選択的ＰＩ３Ｋ阻害剤と呼ばれる場合がある。一実施形態では、選択的ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ｍＴＯＲおよび／または経路中の他のタンパク質に関する阻害剤のＩＣ５０よりも、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍またはそれよりも多く低いＰＩ３Ｋに関する５０％阻害濃度を示す薬剤を指すと理解することができる。
特定の実施形態では、例となるＰＩ３Ｋ阻害剤は、約２００ｎＭ以下、好ましくは、約１００ｎｍ以下、さらにより好ましくは、約６０ｎＭ以下、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約５ｎＭ、約１ｎＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、１μＭまたはそれより小さいＩＣ５０（活性の５０％を阻害する濃度）でＰＩ３Ｋを阻害する。一実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、約２ｎＭ～約１００ｎｍ、より好ましくは、約２ｎＭ～約５０ｎＭ、さらにより好ましくは、約２ｎＭ～約１５ｎＭのＩＣ５０でＰＩ３Ｋを阻害する。
本明細書で企図されるＴ細胞製造方法において使用するのに適したＰＩ３Ｋ阻害剤の実例として、それだけには限らないが、ＢＫＭ１２０（クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ１４７（クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、（汎ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）およびＰＸ－８６６（クラス１ ＰＩ３Ｋ阻害剤；ｐ１１０α、ｐ１１０βおよびｐ１１０γアイソフォーム、Ｏｎｃｏｔｈｙｒｅｏｎ）が挙げられる。
選択的ＰＩ３Ｋ阻害剤の他の実例として、それだけには限らないが、ＢＹＬ７１９、ＧＳＫ２６３６７７１、ＴＧＸ－２２１、ＡＳ２５２４２、ＣＡＬ－１０１、ＺＳＴＫ４７４およびＩＰＩ－１４５が挙げられる。
汎ＰＩ３Ｋ阻害剤のさらなる実例として、それだけには限らないが、ＢＥＺ２３５、ＬＹ２９４００２、ＧＳＫ１０５９６１５、ＴＧ１００７１３およびＧＤＣ－０９４１が挙げられる。
６．９．５．ＡＫＴ阻害剤
本明細書で使用される場合、用語「ＡＫＴ阻害剤」とは、ＡＫＴの少なくとも１つの活性を阻害する核酸、ペプチド、化合物または小有機分子を指す。ＡＫＴ阻害剤は、脂質ベースの阻害剤（例えば、ＡＫＴが細胞膜に局在化することを妨げるＡＫＴのプレクストリン相同性ドメインを標的とする阻害剤）、ＡＴＰ競合阻害剤およびアロステリック阻害剤を含むいくつかのクラスにグループ化できる。一実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、ＡＫＴ触媒部位への結合によって作用する。特定の実施形態では、Ａｋｔ阻害剤は、下流ＡＫＴ標的、例えば、ｍＴＯＲのリン酸化を阻害することによって作用する。別の実施形態では、ＡＫＴ活性は、例えば、ＡＫＴのＤＮＡ－ＰＫ活性化、ＡＫＴのＰＤＫ－１活性化および／またはＡｋｔのｍＴＯＲＣ２活性化を阻害することによってＡｋｔを活性化するためのインプットシグナルを阻害することによって阻害される。
ＡＫＴ阻害剤は、３種のＡＫＴアイソフォームすべて、ＡＫＴ１、ＡＫＴ２、ＡＫＴ３を標的とすることができ、またはアイソフォーム選択的であり、ＡＫＴアイソフォームのうち１つまたは２つのみを標的とする場合もある。一実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、ＡＫＴならびにＰＩ３Ｋ－ＡＫＴ－ｍＴＯＲ経路中のさらなるタンパク質を標的とすることができる。ＡＫＴのみを標的とするＡＫＴ阻害剤は、選択的ＡＫＴ阻害剤と呼ばれる場合がある。一実施形態では、選択的ＡＫＴ阻害剤は、経路中の他のタンパク質に関する阻害剤のＩＣ５０よりも、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍またはそれより多く低いＡＫＴに関する５０％阻害濃度を示す薬剤を指すと理解することができる。
特定の実施形態では、例となるＡＫＴ阻害剤は、約２００ｎＭ以下、好ましくは、約１００ｎｍ以下、さらにより好ましくは、約６０ｎＭ以下、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約５ｎＭ、約１ｎＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、１μＭまたはそれより小さいＩＣ５０（活性の５０％を阻害する濃度）でＡＫＴを阻害する。一実施形態では、ＡＫＴは、約２ｎＭ～約１００ｎｍ、より好ましくは、約２ｎＭ～約５０ｎＭ、さらにより好ましくは、約２ｎＭ～約１５ｎＭのＩＣ５０でＡＫＴを阻害する。
アウリスタチンベースの抗体－薬物コンジュゲートと組み合わせて使用するためのＡＫＴ阻害剤の実例として、例えば、ペリフォシン（Ｋｅｒｙｘ）、ＭＫ２２０６（Ｍｅｒｃｋ）、ＶＱＤ－００２（ＶｉｏＱｕｅｓｔ）、ＸＬ４１８（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＧＳＫ６９０６９３、ＧＤＣ－００６８およびＰＸ３１６（ＰＲＯＬＸ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる。
選択的Ａｋｔ１阻害剤の非限定な実例として、Ａ－６７４５６３がある。
選択的Ａｋｔ２阻害剤の非限定な実例として、ＣＣＴ１２８９３０がある。
特定の実施形態では、Ａｋｔ阻害剤 ＡｋｔのＤＮＡ－ＰＫ活性化、ＡｋｔのＰＤＫ－１活性化、ＡｋｔのｍＴＯＲＣ２活性化またはＡｋｔのＨＳＰ活性化。
ＤＮＡ－ＰＫ阻害剤の実例として、それだけには限らないが、ＮＵ７４４１、ＰＩ－１０３、ＮＵ７０２６、ＰＩＫ－７５およびＰＰ－１２１が挙げられる。
６．９．６．ｍＴＯＲ阻害剤
用語「ｍＴＯＲ阻害剤」または「ｍＴＯＲを阻害する薬剤」とは、その基質（例えば、ｐ７０Ｓ６キナーゼ１、４Ｅ－ＢＰ１、ＡＫＴ／ＰＫＢおよびｅＥＦ２）の少なくとも１つに対するｍＴＯＲタンパク質の少なくとも１つの活性、例えば、セリン／トレオニンタンパク質キナーゼ活性などを阻害する核酸、ペプチド、化合物または小有機分子を指す。ｍＴＯＲ阻害剤は、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２またはｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方に直接的に結合し、阻害できる。
ｍＴＯＲＣ１および／またはｍＴＯＲＣ２活性の阻害は、ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ／ｍＴＯＲ経路のシグナル伝達の低減によって決定できる。多種多様なリードアウトを利用して、このようなシグナル伝達経路のアウトプットの低減を確立できる。いくつかの限定されない例となるリードアウトとして、（１）それだけには限らないが、５４７３およびＴ３０８を含む残基でのＡｋｔのリン酸化の減少；（２）例えば、それだけには限らないが、Ｆｏｘ０１／Ｏ３ａ Ｔ２４／３２、ＧＳＫ３ａ／β；Ｓ２１／９およびＴＳＣ２ Ｔ１４６２を含むＡｋｔ基質のリン酸化の低減によって証明されるような、Ａｋｔの活性化の減少；（３）それだけには限らないが、リボソームＳ６ Ｓ２４０／２４４、７０Ｓ６Ｋ Ｔ３８９および４ＥＢＰ１ Ｔ３７／４６を含む、ｍＴＯＲのシグナル伝達分子下流のリン酸化の減少；ならびに（４）がん性細胞の増殖の阻害が挙げられる。
一実施形態では、ｍＴＯＲ阻害剤は、活性部位阻害剤である。これらは、ｍＴＯＲのＡＴＰ結合部位（ＡＴＰ結合ポケットとも呼ばれる）に結合し、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２両方の触媒活性を阻害するｍＴＯＲ阻害剤である。本明細書で企図されるＴ細胞製造方法において使用するのに適した活性部位阻害剤の１つのクラスは、ＰＩ３ＫおよびｍＴＯＲの両方を標的とし、直接的に阻害する二重特異性阻害剤である。二重特異性阻害剤は、ｍＴＯＲおよびＰＩ３ＫのＡＴＰ結合部位両方に結合する。このような阻害剤の実例として、それだけには限らないが、イミダゾキナゾリン、ワートマニン、ＬＹ２９４００２、ＰＩ－１０３（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、ＳＦ１１２６（Ｓｅｍａｆｏｒｅ）、ＢＧＴ２２６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ７６５（Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）およびＮＶＰ－ＢＥＺ２３５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が挙げられる。
本明細書で企図される方法において使用するのに適した別のクラスのｍＴＯＲ活性部位阻害剤は、１つまたはそれ以上のＩ型ホスファチジルイノシトール３キナーゼ、例えば、ＰＩ３キナーゼα、β、γまたはδに対して、ｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２活性を選択的に阻害する。これらの活性部位阻害剤は、ｍＴＯＲの活性部位に結合するが、ＰＩ３Ｋには結合しない。このような阻害剤の実例として、それだけには限らないが、ピラゾロピリミジン、Ｔｏｒｉｎ１（Ｇｕｅｒｔｉｎ ａｎｄ Ｓａｂａｔｉｎｉ）、ＰＰ２４２（２－（４－アミノ－１－イソプロピル－１Ｈ－ピラゾロ［３，４－ｄ］ピリミジン－３－イル）－１Ｈ－インドール－５－オル）、ＰＰ３０、Ｋｕ－００６３７９４、ＷＡＹ－６００（Ｗｙｅｔｈ）、ＷＡＹ－６８７（Ｗｙｅｔｈ）、ＷＡＹ－３５４（Ｗｙｅｔｈ）およびＡＺＤ８０５５（Liu et al., Nature Review, 8, 627-644, 2009）が挙げられる。
一実施形態では、選択的ｍＴＯＲ阻害剤とは、Ｉ型ＰＩ３キナーゼのうち１、２、３またはそれより多くのＩ型ＰＩ３キナーゼまたはすべてに関する阻害剤のＩＣ５０よりも、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも１０００倍またはそれよりも多く低いｍＴＯＲＣ１および／またはｍＴＯＲＣ２に関する５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を示す薬剤を指す。
本開示において使用するための別のクラスのｍＴＯＲ阻害剤は、「ラパログ（ｒａｐａｌｏｇｓ）」と本明細書において呼ばれる。本明細書で使用される場合、用語「ラパログ」は、ｍＴＯＲ ＦＲＢドメイン（ＦＫＢＰラパマイシン結合ドメイン）に特異的に結合し、ラパマイシと構造的に関連し、ｍＴＯＲ阻害特性を保持する化合物を指す。用語ラパログは、ラパマイシンを含まない。ラパログには、ラパマイシンのエステル、エーテル、オキシム、ヒドラゾンおよびヒドロキシルアミンならびに例えば、還元または酸化によってラパマイシンコア構造上の官能基が改変されている化合物が含まれる。このような化合物の薬学的に許容される塩も、ラパマイシン誘導体であると考えられる。本明細書で企図される方法において使用するのに適したラパログの実例として、制限するものではないが、テムシロリムス（ＣＣ１７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、デフォロリムス（ＡＰ２３５７３）、ＡＺＤ８０５５（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）およびＯＳＩ～０２７（ＯＳＩ）が挙げられる。
一実施形態では、薬剤は、ｍＴＯＲ阻害剤ラパマイシン（シロリムス）である。
特定の実施形態では、本明細書において使用するための例となるｍＴＯＲ阻害剤は、約２００ｎＭ以下、好ましくは、約１００ｎｍ以下、さらにより好ましくは、約６０ｎＭ以下、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約５ｎＭ、約１ｎＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、１μＭまたはそれより小さいＩＣ５０（活性の５０％を阻害する濃度）で、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２またはｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方のいずれかを阻害する。一態様では、本明細書において使用するためのｍＴＯＲ阻害剤は、約２ｎＭ～約１００ｎｍ、より好ましくは、約２ｎＭ～約５０ｎＭ、さらにより好ましくは、約２ｎＭ～約１５ｎＭのＩＣ５０で、ｍＴＯＲＣ１、ｍＴＯＲＣ２またはｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方のいずれかを阻害する。
一実施形態では、例となるｍＴＯＲ阻害剤は、約２００ｎＭ以下、好ましくは、約１００ｎｍ以下、さらにより好ましくは、約６０ｎＭ以下、約２５ｎＭ、約１０ｎＭ、約５ｎＭ、約１ｎＭ、１００μＭ、５０μＭ、２５μＭ、１０μＭ、１μＭまたはそれより小さいＩＣ５０（活性の５０％を阻害する濃度）で、ＰＩ３ＫおよびｍＴＯＲＣ１もしくはｍＴＯＲＣ２またはｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方およびＰＩ３Ｋのいずれかを阻害する。一態様では、本明細書において使用するためのｍＴＯＲ阻害剤は、約２ｎＭ～約１００ｎｍ、より好ましくは、約２ｎＭ～約５０ｎＭ、さらにより好ましくは、約２ｎＭ～約１５ｎＭのＩＣ５０で、ＰＩ３ＫおよびｍＴＯＲＣ１もしくはｍＴＯＲＣ２またはｍＴＯＲＣ１およびｍＴＯＲＣ２の両方およびＰＩ３Ｋを阻害する。
本明細書で企図される特定の実施形態における使用に適したｍＴＯＲ阻害剤のさらなる実例として、それだけには限らないが、ＡＺＤ８０５５、ＩＮＫ１２８、ラパマイシン、ＰＦ－０４６９１５０２およびエベロリムスが挙げられる。
ｍＴＯＲは、ウエスタンブロッティングにおいてリン光体特異的抗体によって測定されるような、生理学的基質タンパク質、ｐ７０ Ｓ６リボソームタンパク質キナーゼＩ（ｐ７０Ｓ６Ｋ１）およびｅＩＦ４Ｅ結合タンパク質１（４ＥＢＰ１）に向けた、頑強な、特定の触媒活性を実証すると示されている。
一実施形態では、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路の阻害剤は、ＢＩ－Ｄ１８７０、Ｈ８９、ＰＦ－４７０８６７１、ＦＭＫおよびＡＴ７８６７からなる群から選択されるｓ６キナーゼ阻害剤である。
６．１０．組成物および製剤
本明細書で企図される組成物は、本明細書で企図されるような、同一の遺伝子改変された免疫エフェクター細胞などを含む、１つまたはそれ以上のポリペプチド、ポリヌクレオチド、ベクターを含み得る。組成物には、それだけには限らないが、医薬組成物が含まれる。「医薬組成物」とは、単独で、または１つもしくは複数の他の治療モダリティーと組み合わせて細胞または動物へ投与するための、薬学的に許容されるまたは生理学的に許容される溶液中で製剤化された組成物を指す。必要に応じて、本開示の組成物は、同様に他の薬剤、例えば、サイトカイン、増殖因子、ホルモン、小分子、化学療法薬、プロドラッグ、薬物、抗体または他の種々の薬学的に活性な薬剤などと組み合わせて投与され得るということは理解されるであろう。さらなる薬剤が意図される療法をデリバリーする組成物の能力に悪影響を及ぼさない限り、組成物中に同様に含まれ得る他の構成成分には実質的に制限はない。
語句「薬学的に許容される」は、合理的な利益／リスク比に見合った、過剰の毒性、刺激作用、アレルギー反応または他の問題または合併症を伴わない、ヒトおよび動物の組織との接触において使用するのに適した、正当な医学的判断の範囲内にある化合物、材料、組成物および／または投与形を指すように本明細書において使用される。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤」は、制限するものではないが、ヒトまたは飼育動物において使用するために許容されていると米国食品医薬品局によって承認されている、任意のアジュバント、担体、賦形剤、流動促進剤、甘味剤、希釈剤、防腐剤、色素／着色剤、香味料エンハンサー、界面活性剤、湿潤剤、分散剤、沈殿防止剤、安定剤、等張剤、溶媒、界面活性剤または乳化剤を含む。例となる薬学的に許容される担体として、それだけには限らないが、糖、例えば、ラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えば、トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびセルロースアセテート；トラガント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバター、ワックス、動物および植物性脂肪、パラフィン、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、酸化亜鉛；油状物、例えば、ピーナッツ油、綿実油、ベニバナ油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油およびダイズ油；グリコール、例えば、プロピレングリコール；ポリオール、例えば、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコール；エステル、例えば、オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば、水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；発熱物質不含水；等張性生理食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；リン酸バッファー溶液；および医薬品製剤中に使用される任意の他の適合する物質が挙げられる。
特定の実施形態では、本明細書で提示される組成物は、ある量の本明細書で企図されるＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む。本明細書で使用される場合、用語「量」とは、臨床結果を含む、有益なまたは所望の予防的または治療的結果を達成するための、遺伝子改変された治療用細胞、例えば、Ｔ細胞の「有効な量」または「有効量」を指す。
「予防的有効量」とは、所望の予防的結果を達成するために有効な、遺伝子改変された治療用細胞の量を指す。通常、必ずしもではないが、予防的用量は、疾患の前に、または疾患のより早期段階で対象において使用されるので、予防的有効量は治療有効量未満である。
遺伝子改変された治療用細胞の「治療有効量」とは、個体の疾患段階、年齢、性別および体重などの因子ならびに個体において所望の応答を誘発する幹細胞および前駆細胞の能力に従って変わり得る。治療有効量はまた、治療上有益な効果が、ウイルスまたは形質導入された治療用細胞の任意の毒性または有害な効果を上回るものである。用語「治療有効量」は、対象（例えば、患者）を「治療する」ために有効である量を含む。治療量が示される場合には、患者（対象）の年齢、体重、腫瘍サイズ、感染または転移の程度および状態における個々の相違を考慮して医師によって投与されるべき本開示の組成物の正確な量を決定できる。一般に、本明細書に記載されるＴ細胞を含む医薬組成物は、それらの範囲内のすべての整数値を含む、１０２～１０１０細胞／ｋｇ体重、好ましくは、１０５～１０６細胞／ｋｇ体重の投与量で投与できると述べることができる。細胞の数は、組成物に含まれる細胞の種類と同様に、組成物が意図される最終使用に応じて変わる。本明細書で提供される使用のためには、細胞は、一般に、１リットル以下の容量である、５００ｍＬ以下、さらには２５０ｍＬまたは１００ｍＬまたはそれより少ないものであり得る。したがって、所望の細胞の密度は、通常、１０６細胞／ｍｌより大きく、一般に、１０７細胞／ｍｌより大きく、一般に、１０８細胞／ｍｌまたはそれより大きい。免疫細胞の臨床上適切な数を、累積して１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１または１０１２細胞に等しい、またはそれを超える複数回の注入に配分することができる。一部の態様では、特に、すべての注入された細胞が特定の標的抗原（例えば、κまたはλ軽鎖）にリダイレクトされるので、１０６／キログラム（患者当たり１０６～１０１１個）の範囲のより少ない数の細胞が投与され得る。ＣＡＲを発現する細胞組成物は、これらの範囲内の投与量で複数回投与され得る。細胞は、療法を受けている患者にとって同種異系の、同系、異種の、または自己である場合がある。必要に応じて、治療はまた、免疫応答の誘導を増強するために本明細書に記載されるように、マイトジェン（例えば、ＰＨＡ）またはリンホカイン、サイトカインおよび／またはケモカイン（例えば、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＴＮＦ－アルファ、ＩＬ－１８およびＴＮＦ－ベータ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、Ｆｌｔ３～Ｌ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ１αなど）の投与も含み得る。
一般に、本明細書に記載されるような活性化され、拡大増殖された細胞を含む組成物を、免疫低下している個体において生じる疾患の治療および予防において利用できる。特に、本明細書で企図されるＣＡＲ改変Ｔ細胞を含む組成物は、腫瘍もしくはがんの治療において、またはＢ細胞悪性腫瘍の治療において使用される。本開示のＣＡＲ改変Ｔ細胞は、単独で、または担体、希釈剤、賦形剤と、および／または他の構成成分、例えば、ＩＬ－２もしくは他のサイトカインもしくは細胞集団と組み合わせて医薬組成物としてのいずれかで投与され得る。特定の実施形態では、本明細書で企図される医薬組成物は、１つまたはそれ以上の薬学的にまたは生理学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて、ある量の遺伝子改変されたＴ細胞を含む。
ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞集団、例えば、Ｔ細胞を含む本開示の医薬組成物は、中性緩衝生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水などといったバッファー；炭水化物、例えば、グルコース、マンノース、スクロースまたはデキストラン、マンニトール；タンパク質；ポリペプチドまたはアミノ酸、例えば、グリシン；抗酸化物質；キレート化剤、例えば、ＥＤＴＡまたはグルタチオン；アジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）；および保存料を含み得る。ある特定の態様では、本開示の組成物は、非経口投与、例えば、血管内（静脈内または動脈内）、腹腔内または筋肉内投与のために製剤化される。
液体医薬組成物は、それらが溶液、懸濁液または他の同様の形態であろうと、以下：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、生理食塩溶液、好ましくは、生理食塩水、リンゲル溶液、等張性塩化ナトリウム、固定油、例えば、溶媒または懸濁媒体として働く合成モノまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化物質、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；酢酸、クエン酸またはリン酸などのバッファーおよび張力の調整のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロースのうち１つまたはそれ以上を含み得る。非経口調製物は、ガラスまたはプラスチック製のアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは複数回用量バイアル中に封入され得る。注射用医薬組成物は、好ましくは、無菌である。
１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していることが一旦決定されたら、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）の投与は、第２の剤を投与する工程（例えば、ＣＡＲ Ｔ細胞（例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞）および第２の剤を併用療法として投与する工程）を伴ってもよい。
特定の実施形態では、本明細書で企図される組成物は、有効量のＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を、単独で、または１つもしくは複数の治療剤と組み合わせて含む。したがって、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞組成物は、単独で、または他の公知のがん治療、例えば、放射線療法、化学療法、移植、免疫療法、ホルモン療法、光線力学的療法などと組み合わせて投与され得る。組成物はまた、抗生物質と組み合わせて投与され得る。このような治療剤は、本明細書で記載されるような特定の疾患状態、例えば、特定のがんの標準治療として当技術分野で受け入れられる場合がある。企図される例となる治療剤として、サイトカイン、増殖因子、ステロイド、ＮＳＡＩＤ、ＤＭＡＲＤ、抗炎症剤、化学療法薬、放射線治療法、治療用抗体または他の活性および補助的薬剤が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本明細書で開示されるＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、任意の数の化学療法薬、例えば、抗がん剤と共に対象に投与され得る。ある特定の実施形態では、本明細書において別の場所に記載されるＣＡＲ Ｔ細胞療法が対象にとって治療上有益ではないことを示すある特定の条件が生じる場合には、化学療法薬、例えば、抗がん剤が、ＣＡＲ Ｔ細胞療法、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞療法の施行後に対象に投与される。化学療法剤の実例として、アルキル化剤、例えば、チオテパおよびシクロホスファミド（シトキサン（商標））；アルキルスルホネート、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）；エチレンイミンおよびアルトレタミンを含むメチルアメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスファオルアミド（ｔｒｉｅｈｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈａｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチロロメラミンレジューム（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ ｒｅｓｕｍｅ）；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン（例えば、メルファラン塩酸）、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えば、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カリケアマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤、例えば、メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリンアナログ、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、５－ＦＵ；アンドロゲン、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗アドレナル、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤（ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、例えば、フロリニックアシッド（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォルミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ）；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（タキソール（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、ニュージャージー州、プリンストン）およびドキセタキセル（ｄｏｘｅｔａｘｅｌ）（タキソテール（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｈｒｅｒ、フランス、アントニー）；クロラムブシル；ゲムシタビン；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金アナログ、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ～１６）；イホスファミド；マイトマイシンＣ；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン；ナベルビン；ノバントロン；テニポシド；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤 ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチロミチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸誘導体、例えば、タルグレチン（商標）（ベキサロテン）、Ｐａｎｒｅｔｉｎ（商標）（アリトレチノイン）；ＯＮＴＡＫ（商標）（デニロイキンジフチトクス）；エスペラミシン；カペシタビン；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が挙げられる。また、この定義では、がんに対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤、例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害性４（５）－イミダゾール、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびトレミフェン（フェアストン）を含む、例えば、抗エストロゲン；および抗アンドロゲン、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、リュープロリドおよびゴセレリン；および上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸または誘導体が含まれる。
様々な他の治療剤は、本明細書に記載される組成物と共に使用され得る。一実施形態では、ＣＡＲを発現する免疫エフェクター細胞を含む組成物は、抗炎症剤と共に投与される。抗炎症剤または抗炎症薬として、それだけには限らないが、ステロイドおよびグルココルチコイド（ベタメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンを含む）、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、メトトレキサート、スルファサラジン、レフルノミド、抗ＴＮＦ医薬、シクロホスファミドおよびミコフェノレートを含む非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）が挙げられる。
他の例となるＮＳＡＩＤは、イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロキセンナトリウム、Ｃｏｘ－２阻害剤、例えば、ＶＩＯＸＸ（登録商標）（ロフェコキシブ）およびＣＥＬＥＢＲＥＸ（登録商標）（セレコキシブ）およびシアリレートからなる群から選択される。例となる鎮痛薬は、アセトアミノフェン、オキシコドン、トラマドールおよび塩酸プロポキシフェンからなる群から選択される。例となるグルココルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン，ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロンおよびプレドニゾンからなる群から選択される。例となる生物反応修飾物質として、細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ４、ＣＤ５など）に対して向けられる分子、サイトカイン阻害剤、例えば、ＴＮＦアンタゴニスト（例えば、エタネルセプト（エンブレル（登録商標））、アダリムマブ（ヒュミラ（登録商標））およびインフリキシマブ（レミケード（登録商標））、ケモカイン阻害剤および接着分子阻害剤が挙げられる。生物反応修飾物質は、モノクローナル抗体ならびに分子の組換え形態を含む。例となるＤＭＡＲＤとして、アザチオプリン、シクロホスファミド、シクロスポリン、メトトレキサート、ペニシラミン、レフルノミド、スルファサラジン、ヒドロキシクロロキン、金（経口（オーラノフィン）および筋肉内）およびミノサイクリンが挙げられる。
本明細書で企図されるＣＡＲ改変Ｔ細胞との組合せに適した治療用抗体の実例として、それだけには限らないが、バビツキシマブ、ベバシズマブ（アバスチン）、ビバツズマブ、ブリナツモマブ、コナツムマブ、ダラツムマブ、デュリゴツマブ（ｄｕｌｉｇｏｔｕｍａｂ）、ダセツズマブ、ダロツズマブ、エロツズマブ（ＨｕＬｕｃ６３）、ゲムツズマブ、イブリツモマブ、インダツキシマブ（ｉｎｄａｔｕｘｉｍａｂ）、イノツズマブ、ロルボツズマブ、ルカツムマブ、ミラツズマブ、モキセツモマブ、オカラツズマブ（ｏｃａｒａｔｕｚｕｍａｂ）、オファツムマブ、リツキシマブ、シルツキシマブ、テプロツムマブおよびウブリツキシマブが挙げられる。
ＰＤ－１または、ＰＤ－Ｌ１および／またはＣＴＬＡ－４に対する抗体は、本明細書で開示されるＣＡＲＴ細胞、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、ＢＣＭＡ－２一本鎖Ｆｖ断片を含むキメラ抗原受容体を発現するＣＡＲ Ｔ細胞、例えば、イデカブタゲンビクルユーセル細胞と組み合わせて使用され得る。特定の実施形態では、ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ、ペムブロリズマブおよびピディリズマブからなる群から選択される。特定の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブおよびＢＭＳ－９８６５５９からなる群から選択される。特定の実施形態では、ＣＴＬＡ－４抗体は、イピリムマブおよびトレメリムマブからなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、本明細書で記載される組成物は、サイトカインと共に投与される。「サイトカイン」とは、本明細書で使用される場合、別の細胞に対して細胞間メディエーターとして作用する１つの細胞集団によって放出されるタンパク質の総称を意味する。このようなサイトカインの例として、リンホカイン、モノカインおよび伝統的なポリペプチドホルモンがある。サイトカインの中に、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ－メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；レラキシン；プロレラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓増殖因子；線維芽細胞増殖因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子アルファおよびベータ；ミュラー管抑制因子；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮増殖因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経増殖因子、例えば、ＮＧＦ－ベータ；血小板－増殖因子；形質転換性増殖因子（ＴＧＦ）例えば、ＴＧＦ－アルファおよびＴＧＦ－ベータ；インスリン様増殖因子－Ｉおよび－ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、インターフェロン－アルファ、ベータ、および－ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、マクロファージ－ＣＳＦ（Ｍ－ＣＳＦ）；顆粒細胞－マクロファージ－ＣＳＦ（ＧＭ－ＣＳＦ）；ならびに顆粒細胞－ＣＳＦ（Ｇ－ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１アルファ、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－９、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１２；ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ－アルファまたはＴＮＦ－ベータ；ならびにＬＩＦおよびｋｉｔリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子が含まれる。本明細書で使用される場合、用語サイトカインは、天然供給源由来の、または組換え細胞培養由来のタンパク質、および天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で記載される組成物は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を治療するための療法と共に投与される。ＣＲＳは、ある特定の生物学的治療薬、例えば、キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞またはＮＫ細胞（ＣＡＲ Ｔ細胞またはＣＡＲ ＮＫ細胞）、例えば、ＢＣＭＡ ＣＡＲ Ｔ細胞の投与後に生じる可能性がある全身炎症性免疫応答である。ＣＲＳは、以下のとおりに、同様の臨床表現型およびバイオマーカーシグネチャーを有する状態であるサイトカインストームと区別され得る。ＣＲＳでは、Ｔ細胞は、腫瘍抗原の認識の際に活性化になるが、サイトカインストームでは、免疫系は、腫瘍標的化とは独立して活性化される；ＣＲＳでは、ＩＬ－６が重要なメディエーターであり、したがって、症状は、抗ＩＬ－６または抗ＩＬ－６ 受容体（ＩＬ－６Ｒ）阻害剤を使用して軽減され得るが、サイトカインストームでは、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）およびインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）が重要なメディエーターであり、症状は、抗炎症療法、例えば、副腎皮質ステロイドを使用して軽減され得る。ＣＲＳを管理するためにトシリズマブなどの抗ＩＬ－６受容体（ＩＬ－６Ｒ）抗体を使用してもよく、支持療法を用いてもよい。ＣＲＳを管理するためにシルツキシマブなどの抗ＩＬ－６抗体を付加的または代替的に使用してもよく、支持療法を用いてもよい。ＣＡＲ Ｔ細胞またはＣＡＲ ＮＫ細胞を注入された患者が、グレード１、グレード２、グレード３またはグレード４のＣＲＳのいずれかを示すが、通常、より重度のグレード（例えば、グレード３またはグレード４）について保留されている場合に、ＩＬ－６遮断（例えば、抗ＩＬ－６Ｒ抗体または抗ＩＬ－６抗体を使用して）を使用できる。ＣＲＳと併発する、またはＣＲＳによって惹起される神経細胞毒性を管理するために、またはＩＬ－６遮断を用いて治療された患者に、副腎皮質ステロイドを投与できるが、一般に、ＣＲＳの第一選択治療としては使用されない。ＣＲＳの管理のための他の様式は、例えば、Shimabukuro-Vornhagen et al., “Cytokine Release Syndrome,” J. Immunother. Cancer 6:56 (2018)に記載されている。
表４：CRSは、Pennグレード分類尺度を使用してグレード分類できる:
Figure 2023552773000010
表５：CRSはまた、CTCAE(国立がん研究所の有害事象に関する共通用語基準(National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events))v4.0によってグレード分類できる：
Figure 2023552773000011
表６：CRSはまた、Lee et al. (「Current concepts in the diagnosis and management of cytokine release syndrome」, Blood, 2014, 124:188-195)のシステムによってグレード分類できる：
Figure 2023552773000012
特定の実施形態では、組成物は、本明細書で開示されるようなＰＩ３Ｋ阻害剤の存在下で培養され、以下のマーカー：ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ４５ＲＡ、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ６２、ＣＤ１２７およびＨＬＡ－ＤＲのうち１つまたはそれ以上を発現し、陽性または陰性選択技術によってさらに単離され得る、本明細書で企図されるＣＡＲ Ｔ細胞を含む。一実施形態では、組成物は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ７、ＣＤ２８、ＣＤ２７、ＣＤ１２２、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８またはＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８からなる群から選択されるマーカーのうち１つまたはそれ以上を発現し、陽性または陰性選択技術によってさらに単離される、Ｔ細胞の特定の亜集団を含む。種々の実施形態では、組成物は、以下のマーカー：ＣＤ５７、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３およびＬＡＧ３のうち１つまたはそれ以上を発現しない、または実質的に発現しない。
一実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ１２７、ＣＤ１９７およびＣＤ３８からなる群から選択されるマーカーのうち１つまたはそれ以上の発現は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を用いずに活性化および拡大増殖されたＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍またはそれより多く増大される。
一実施形態では、ＣＤ５７、ＣＤ２４４、ＣＤ１６０、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３およびＬＡＧ３からなる群から選択されるマーカーのうち１つまたはそれ以上の発現は、ＰＩ３Ｋ阻害剤を用いて活性化および拡大増殖されたＴ細胞の集団と比較して、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍またはそれより多く減少される。
６．１１．治療方法
本明細書で企図される遺伝子改変された免疫エフェクター細胞は、腫瘍もしくはがんの治療における、またはそれだけには限らないが、免疫調節状態および血液悪性腫瘍を含むＢ細胞関連状態の治療における使用のための養子免疫療法の改善された方法を提供する。
本明細書で引用した全ての出版物、特許出願、および発行された特許は、それぞれの個別の出版物、特許出願、または発行された特許が具体的かつ個別に参照により組み込まれると指示されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
上記の発明は、理解を明確にする目的のために説明および例としていくらか詳細に記載しているが、本発明の教示に照らして、添付した特許請求の精神または範囲から逸脱することなく、ある種の変更および改変をこれに加えることができることは、当業者には容易に明らかになる。以下の実施例は説明のためのみに提供され、限定のためではない。当業者であれば、本質的に同様の結果を得るために変更または改変することができる種々の重要でないパラメーターを容易に認識することになる。
７．実施例
７．１．実施例１：例示的なＢＣＭＡ ＣＡＲの構築
抗ＢＭＣＡ ｓｃＦｖに作動可能に連結したＭＮＤプロモーター、ＣＤ８αからのヒンジおよび膜貫通ドメインならびにＣＤ１３７共刺激ドメインの後にＣＤ３ζ鎖の細胞内シグナル伝達ドメインを含有するようにＣＡＲ含有抗ＢＣＭＡ ｓｃＦｖ抗体を設計した。国際公開第２０１６／０９４３０４号パンフレットを参照。該文献は、その全体が参照により本明細書に組み込まれ、特にＢＣＭＡ ＣＡＲおよびそれらの特徴付けの開示が組み込まれる。国際公開第２０１６／０９４３０４号パンフレットの図１に示されるＢＣＭＡ ＣＡＲは、免疫エフェクター細胞上の表面発現のためのＣＤ８αシグナルペプチド（ＳＰ）配列を含む。例示的なＢＣＭＡ ＣＡＲのポリヌクレオチド配列は配列番号１０（抗ＢＣＭＡ０２ ＣＡＲのポリヌクレオチド配列）に記載されており；ＢＣＭＡ ＣＡＲの例示的なポリペプチド配列は配列番号９（抗ＢＣＭＡ０２ ＣＡＲのポリペプチド配列）に記載されており；例示的なＣＡＲ構築物のベクターマップは国際公開第２０１６／０９４３０４号パンフレットの図１に示されている。表９は、国際公開第２０１６／０９４３０４号パンフレットの図１に示されているＢＣＭＡ ＣＡＲ構築物を含むＢＣＭＡ ＣＡＲレンチウイルスベクターの様々なヌクレオチドセグメントについての素性、ＧｅｎＢａｎｋ参照番号（適用可能な場合）、ソース名（Source Name）および参考資料（Citation）を示す。
表９．
Figure 2023552773000013
Figure 2023552773000014
７．２ 実施例２：Ｔ細胞エフェクター機能を負にモジュレートし得る炎症関連可溶性因子は、ＩＤＥ－ＣＥＬ治療に対する最適以下の応答と関連付けられた
この実施例は、ｉｄｅ－ｃｅｌ治療の前に多発性骨髄腫患者におけるある特定の可溶性因子の高いレベルと治療に対する最適以下の応答との間の相関の発見を記載する。
方法：ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１を含む、いくつかの可溶性因子の治療前レベルを、ＫａｒＭＭＡ試験（ＮＣＴ０３３６１７４８）においてｉｄｅ－ｃｅｌで治療され、ｉｄｅ－ｃｅｌ注入後３または９カ月において応答性または非応答性であった多発性骨髄腫患者からレトロスペクティブに得た。因子のレベルはスクリーニング期間の間に測定され、スクリーニング手順は白血球アフェレーシスの前２８日以内に完了された。
可溶性因子のレベルを測定された血清試料は以下のように得た。ｉｄｅ－ｃｅｌ注入の３または９カ月後に応答性または非応答性であった約１２８人の患者の末梢血から血清を単離し、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイ（https://www.olink.com/products/immuno-oncology/）を使用して血清中の可溶性因子のレベルを測定した。Ｏ－ｌｉｎｋ技術は、ＰＣＲを使用して、標的アナライトに結合した抗体を検出し、結果をｌｏｇ２倍数変化単位で表す。２群間の値は、パッケージＲ内のウィルコクソン検定を使用して比較した。
図１は、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイでの９カ月時の非応答の相関を示す。第２列および第３列は、患者の２つの群の各々においてどれほど多くの試料があったのかを明記する。「Ｗｉｌｃｏｘ ＡＵＣ」の列は、０～１の範囲に及ぶ一種のウィルコクソン統計量を与える。それは以下のように解釈され得る：２群間のすべての可能な一対比較（そのため、表の例において４３×４０＝１７２０の比較ペア）を取った場合に、Ｗｉｌｃｏｘ ＡＵＣは、第１群からの試料が第２群からの試料よりも高い値を有した比較のパーセンテージである。そのため、１のＡＵＣは、Ｍ９ ＰＤのあらゆるものが、Ｍ９レスポンダーのあらゆるものよりも高い値を有したことを意味する。最後の２列は、この統計量と関連付けられるｐ値（Ｒにより提供される）および複数のアナライトが試験されたという事実について補正（すべてのアナライトにかけてＢｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ補正）されたｐ値である。
可溶性因子のレベルを次に、ｉｄｅ－ｃｅｌ療法後３カ月または９カ月のいずれかにおけるレスポンダーまたはノンレスポンダーの関数として、いくつかの図表中にプロットし、これを図２に記載している。これらの結果は、免疫調節因子の治療前レベルは、最適以下の応答を有する患者の血清において上昇していたことを示す。Ｔ細胞エフェクター機能を負にモジュレートし得る炎症関連可溶性因子は、ｉｄｅ－ｃｅｌに対する最適以下の応答と関連付けられる。
一般に、以下の請求項において、使用される用語は、本明細書および請求項に開示される特定の実施形態に請求項を限定すると解釈されるべきではなく、そのような請求項が権利を与えられる均等物の全範囲と共にすべての可能な実施形態を含むと解釈されるべきである。よって、請求項は本開示によって限定されない。本明細書において参照されるすべての参考文献は、特許文献または非特許文献のいずれであれ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (23)

  1. ヒトにおけるがんがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性であるかどうかを予測する方法であって、
    （ｉ）ヒトからの血清中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程；次いで
    （ｉｉ）（ｉ）の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清中のものと類似している場合に、治療有効用量の前記ＣＡＲ Ｔ細胞を前記ヒトに投与する工程を含む、方法。
  2. 治療を必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、前記治療を必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、前記１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、前記治療を必要とするヒトが、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を引き続いて提供される、方法。
  3. 治療を必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、
    ａ．前記治療を必要とするヒトからの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していることを決定する工程；次いで
    ｂ．工程ａにおける決定に基づき、治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を、前記治療を必要とするヒトに引き続いて提供する工程
    を含む、方法。
  4. がんを治療する方法であって、がんに罹っていると診断されたヒト患者に治療有効用量のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与する工程を含み、前記投与の前のヒト患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似していると決定される、方法。
  5. がんに罹っていると診断された患者がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を投与されるべきかどうかを決定する方法であって、患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルを決定する工程を含み、前記患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者からの血清試料中の１つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルと類似している場合に、前記患者が前記ＣＡＲ Ｔ細胞のための候補となる、方法。
  6. １つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子が、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９（ｓＣＤ１３７またはｓ４－１ＢＢ）、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
  7. １つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子が、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
  8. がんが、多発性骨髄腫である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
  9. ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
  10. ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞が、ＢＣＭＡ０２、ＡＢＥＣＭＡ（著作権）、ＪＣＡＲＨ１２５、ＪＮＪ－６８２８４５２８（ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ；１０，９３４，３６３の配列番号２６５またはＷＯ２０１８／０２８６４７の配列番号３００を含み、シグナルペプチドを有するかまたは有しないタンパク質）（Ｊａｎｓｓｅｎ／Ｌｅｇｅｎｄ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－１０１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、ＰＢＣＡＲ２６９Ａ（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－Ａｌｌｏ１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ａｌｌｏ－７１５（Ｐｆｉｚｅｒ／Ａｌｌｏｇｅｎｅ）、ＣＴ０５３（Ｃａｒｓｇｅｎ）、Ｄｅｓｃａｒｔｅｓ－０８（Ｃａｒｔｅｓｉａｎ）、ＰＨＥ８８５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、およびＣＴＸ１２０（ＣＲＩＳＰＲ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を含む群から選択される、請求項９に記載の方法。
  11. ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞が、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である、請求項１０に記載の方法。
  12. １つまたはそれ以上の炎症関連可溶性因子のレベルが、Ｏ－ｌｉｎｋ ＩＯアナライトアッセイによって決定される、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 治療を必要とするヒトにおけるがんを治療する方法であって、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞、ならびにＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ４、ＴＮＦＲＳＦ９、ＤＣＮ、ＣＤ８３、ＩＬ１０、ＰＤＣＤ１、ＩＬ１２、およびＮＣＲ１からなる群から選択される炎症関連可溶性因子のアンタゴニストを前記ヒトに投与する工程を含む、方法。
  14. 炎症関連可溶性因子が、ＰＧＦ、ＣＤ７０、ＴＮＦＲＳＦ９、およびＣＤ８３からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
  15. 炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞に対して応答性を示す患者における炎症関連可溶性因子のレベルまでヒトにおける炎症関連可溶性因子のレベルを低減させるための治療有効量で前記ヒトに投与される、請求項１３または１４に記載の方法。
  16. がんが、多発性骨髄腫である、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. ＣＡＲ Ｔ細胞が、ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞である、請求項１３から１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞が、ＢＣＭＡ０２、ＡＢＥＣＭＡ（著作権）、ＪＣＡＲＨ１２５、ＪＮＪ－６８２８４５２８（ＬＣＡＲ－Ｂ３８Ｍ；１０，９３４，３６３の配列番号２６５またはＷＯ２０１８／０２８６４７の配列番号３００を含み、シグナルペプチドを有するかまたは有しないタンパク質）（Ｊａｎｓｓｅｎ／Ｌｅｇｅｎｄ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－１０１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、ＰＢＣＡＲ２６９Ａ（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ｐ－ＢＣＭＡ－Ａｌｌｏ１（Ｐｏｓｅｉｄａ）、Ａｌｌｏ－７１５（Ｐｆｉｚｅｒ／Ａｌｌｏｇｅｎｅ）、ＣＴ０５３（Ｃａｒｓｇｅｎ）、Ｄｅｓｃａｒｔｅｓ－０８（Ｃａｒｔｅｓｉａｎ）、ＰＨＥ８８５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、およびＣＴＸ１２０（ＣＲＩＳＰＲ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）を含む群から選択される、請求項１７に記載の方法。
  19. ＢＣＭＡを指向するＣＡＲ Ｔ細胞が、イデカブタゲンビクルユーセル細胞（ｉｄｅ－ｃｅｌ）である、請求項１８に記載の方法。
  20. 炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の前に投与される、請求項１３から１９のいずれか一項に記載の方法。
  21. 炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の１日、２日、３日、４日、５日、６日、または７日前に投与される、請求項１３から２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１週間、２週間、３週間、または４週間前に投与される、請求項１３から２０のいずれか一項に記載の方法。
  23. 炎症関連可溶性因子のアンタゴニストが、ヒトキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞の前記投与の約１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、または６カ月前に投与される、請求項１３から２０のいずれか一項に記載の方法。
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