JP2023547506A - Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するための抗ｃｄ１９剤及びｂ細胞標的化剤の組み合わせ療法 - Google Patents
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Abstract
本開示は、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の組み合わせ並びにＢ細胞悪性腫瘍を有する対象を抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の組み合わせで治療する方法を提供する。
Description
１．関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１０，５０１号明細書、２０２０年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１４，３７０号明細書、２０２０年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１４，３７１号明細書、２０２１年２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／１４７，４８８号明細書、２０２１年２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／１４７，５０１号明細書及び２０２０年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１０，４９０号明細書の優先権の利益を主張するものであり、これらの仮特許出願の各々の内容は、その参照により全体として本明細書に援用される。
本出願は、２０２０年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１０，５０１号明細書、２０２０年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１４，３７０号明細書、２０２０年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１４，３７１号明細書、２０２１年２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／１４７，４８８号明細書、２０２１年２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／１４７，５０１号明細書及び２０２０年１１月６日に出願された米国仮特許出願第６３／１１０，４９０号明細書の優先権の利益を主張するものであり、これらの仮特許出願の各々の内容は、その参照により全体として本明細書に援用される。
２．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は、全体が参照により本明細書に援用される。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年１１月４日に作成され、ＮＯＶ－０１３ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、７０４，０２９バイトのサイズである。
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、この配列表は、全体が参照により本明細書に援用される。前記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年１１月４日に作成され、ＮＯＶ－０１３ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、７０４，０２９バイトのサイズである。
本開示は、概して、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の組み合わせ並びにＢ細胞悪性腫瘍を治療するためのその使用に関する。
Ｂ細胞は、その分化及び増殖中に幅広い細胞表面分子を発現する。ＣＤ１９は、プレＢ細胞発生の初期段階から最終分化にかけて発現する汎Ｂ細胞膜糖タンパク質であり、Ｂリンパ球の発生及び機能を調節する。ＣＤ１９の発現は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の大部分並びに慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及びワルデンシュトレームマクログロブリン血症（ＷＭ）を含む白血病に同定されている。
Ｂ細胞悪性腫瘍の治療のため、いくつかの抗ＣＤ１９剤、例えばＡＬＬの治療について承認されているＣＤ１９－ＣＤ３二重特異性Ｔ細胞エンゲージャーであるブリナツモマブ（ＡｍｇｅｎによりＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）として市販されている）、ＡＬＬの治療について承認されているキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞組成物であるチサゲンレクロイセル（ＮｏｖａｒｔｉｓによりＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）として市販されている）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）に対して承認されているＣＡＲ Ｔ細胞組成物であるアキシカブタゲンシロロイセル（ＧｉｌｅａｄによりＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）として市販されている）及びマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）に対して承認されているＣＡＲ Ｔ細胞組成物であるブレクスカブタゲンオートロイセル（ＧｉｌｅａｄによりＴＥＣＡＲＴＵＳ（登録商標）として市販されている）が承認されている。しかし、ブリナツモマブ及びＣＤ１９特異的ＣＡＲ Ｔ療法で治療された一部の患者は、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）を発現する。Ｔｅａｃｈｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｂｌｏｏｄ，１２１（２６）：５１５４－５１５７；Ｐａｒｋ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ．２０１８ Ａｕｇ １５；６７（４）：５３３－５４０。ＣＲＳは、軽度のインフルエンザ様症状から、重度の生命を脅かす炎症性応答にまで及ぶ症状をもたらし得る全身性炎症応答である。Ｓｈｉｍａｂｕｋｕｒｏ－Ｖｏｒｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｃａｎｃｅｒ．６：５６。
癌療法における主要な改善にも関わらず、非ホジキンリンパ腫のＢ細胞サブタイプなどのＢ細胞悪性腫瘍及び慢性リンパ性白血病は、癌関連死の主要な寄与体である。したがって、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療及び抗ＣＤ１９剤に伴うＣＲＳの管理のための更なる治療薬及び方法が依然として求められている。
本開示は、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の組み合わせ並びにＢ細胞悪性腫瘍を治療するためにそのような組み合わせを使用する方法を提供する。理論によって拘束されるものではないが、抗ＣＤ１９剤に伴うＣＲＳは、正常Ｂ細胞をＢ細胞標的化剤で枯渇させることによって軽減され得ると考えられる。理論によって拘束されるものではないが、抗ＣＤ１９剤の治療効果は、Ｂ細胞標的化剤と組み合わせて投与されると増強され得るとも考えられる。
したがって、一態様では、本開示は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤を対象に投与することによって治療する方法を提供する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化剤は、抗ＣＤ１９剤の投与前に投与される。理論によって拘束されるものではないが、正常Ｂ細胞によるサイトカイン放出がＣＲＳにおける重要なドライバーであると考えられ、対象における正常Ｂ細胞を、対象への抗ＣＤ１９剤の投与前にＢ細胞標的化剤で枯渇させることにより、対象によって経験されるＣＲＳの重症度が低下し得ると考えられる。
別の態様では、本開示は、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の組み合わせを提供する。そのような組み合わせは、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＤＬＢＣＬ又はＭＣＬなどのＮＨＬ）を有する対象を治療する方法において用いることができる。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＨＬ、例えばＤＬＢＣＬ又はＭＣＬを有し、（ｉ）少なくとも１回の以前の（及び任意選択的に最大で５回の以前の）標準治療、例えばリツキシマブなどの抗ＣＤ２０療法に失敗しており、及び／又は（ｉｉ）１つ以上の他の承認された療法、例えば自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）に対して不耐性又は不適格であり、及び／又は（ｉｉｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法に対して非応答者である。ＮＨＬは、再発性及び／又は難治性であり得る。
更なる態様では、本開示は、例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍（例えば、ＤＬＢＣＬ又はＭＣＬなどのＮＨＬ）を有する対象の治療に使用するための、Ｂ細胞標的化剤との組み合わせ使用のための抗ＣＤ１９剤及び抗ＣＤ１９剤との組み合わせ使用のためのＢ細胞標的化剤を提供する。いくつかの実施形態では、対象は、ＮＨＬ、例えばＤＬＢＣＬ又はＭＣＬを有し、（ｉ）少なくとも１回の以前の（及び任意選択的に最大で５回の以前の）標準治療、例えばリツキシマブなどの抗ＣＤ２０療法に失敗しており、及び／又は（ｉｉ）１つ以上の他の承認された療法、例えば自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）に対して不耐性又は不適格であり、及び／又は（ｉｉｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法に対して非応答者である。ＮＨＬは、再発性及び／又は難治性であり得る。
本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される抗ＣＤ１９剤は、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するＣＤ１９結合分子、例えばヒトＣＤ１９に特異的に結合する抗体、その抗原結合フラグメント及び多重特異性分子であり得る。代わりに、抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子を発現する細胞の集団であり得る。
いくつかの態様では、ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９抗原結合ドメイン又は抗原結合モジュール（「ＡＢＭ」）を含む単一特異性ＣＤ１９結合分子（例えば、抗体及びその抗原結合フラグメント）である。単一特異性であり得る例示的なＣＤ１９結合分子は、以下の第７．２節及び特定の実施形態２～３９に記載されている。
他の態様では、ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９ ＡＢＭを含む多重特異性結合分子（「ＭＢＭ」）である。特定の実施形態では、ＭＢＭは、二重特異性結合分子（「ＢＢＭ」）である。ＢＢＭは、ヒトＣＤ１９に特異的に結合する第１のＡＢＭ（「ＡＢＭ１」又は「ＣＤ１９ ＡＢＭ」）及び第２の抗原、例えばＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体のヒトＣＤ３又は他の構成要素に特異的に結合する第２のＡＢＭ（「ＡＢＭ２」）（ときに本明細書で「ＴＣＲ ＡＢＭ」と称される）を含む。ＡＢＭ１、ＡＢＭ２、ＣＤ１９ ＡＢＭ及びＴＣＲ ＡＢＭという用語は、あくまで便宜的に使用され、ＢＢＭのいずれかの特定の立体配置を伝えることを意図されない。いくつかの実施形態では、ＴＣＲ ＡＢＭは、ＣＤ３に結合する（本明細書で「ＣＤ３ ＡＢＭ」などと称される）。したがって、ＡＢＭ２及びＴＣＲ ＡＢＭについての開示は、ＣＤ３ ＡＢＭにも適用可能である。そのような多重特異性分子を用いて、ＣＤ３＋エフェクターＴ細胞をＣＤ１９＋部位に誘導することができ、それによりＣＤ３＋エフェクターＴ細胞がＣＤ１９＋細胞及び腫瘍を攻撃し、溶解することを可能にする。
他の実施形態では、ＭＢＭは、ＣＤ１９、Ｔ細胞上のＴＣＲ複合体のＣＤ３又は他の構成要素及びＣＤ２又はヒト腫瘍関連抗原（「ＴＡＡ」）のいずれか、例えばＣＤ１９以外のＢ細胞抗原を会合させる三重特異性結合分子（「ＴＢＭ」）である。ＴＢＭは、（ｉ）ＣＤ１９（ＡＢＭ１）、（ｉｉ）ＴＣＲ複合体の構成要素（ＡＢＭ２）、及び（ｉｉｉ）ＣＤ２又はＴＡＡのいずれか（ＡＢＭ３）に結合することのできる少なくとも３つの抗原結合モジュール（「ＡＢＭ」）を含む。（１）ヒトＣＤ１９、（２）ＣＤ３又はＴＣＲ複合体の他の構成要素、及び（３）ＣＤ２に結合するＴＢＭは、本明細書では、便宜上、「１型ＴＢＭ」と呼ばれる。（１）ヒトＣＤ１９、（２）ＣＤ３又はＴＣＲ複合体の他の構成要素、及び（３）ＴＡＡに結合するＴＢＭは、本明細書では、便宜上、「２型ＴＢＭ」と呼ばれる。
理論によって拘束されるものではないが、本発明者らの考えでは、１型ＴＢＭにおけるＣＤ２及びＴＣＲ複合体の会合の組み合わせにより、Ｔ細胞の媒介による腫瘍細胞の溶解（例えば、ＴＣＲのクラスター形成による）を促進する一次シグナル伝達経路と、Ｔ細胞増殖を誘導して、潜在的にアネルギーを克服する第２の共刺激経路との両方を刺激することができる。理論によって拘束されるものではないが、２型ＴＢＭにおいてＣＤ１９及びＴＣＲ複合体の構成要素に加えてＴＡＡが会合することにより、ＣＤ１９及びＴＣＲ複合体構成要素のみを標的とする二重特異性会合体を用いるよりも更に多くの癌性Ｂ細胞が標的となることにより、Ｂ細胞悪性腫瘍のＲＴＣＣ療法の臨床転帰が改善するであろうことも考えられる。
したがって、いくつかの実施形態では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用されるＣＤ１９結合分子は、（１）ヒトＣＤ１９、（２）ＴＣＲ複合体のＣＤ３又は他の構成要素、及び（３）ＣＤ２に結合する１型ＴＢＭである。
他の実施形態では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用されるＣＤ１９結合分子は、（１）ヒトＣＤ１９、（２）ＴＣＲ複合体のＣＤ３又は他の構成要素、及び（３）ＴＡＡに結合する２型ＴＢＭである。
特に明示されない限り又は文脈上特に断りのない限り、本開示におけるＴＢＭは、１型及び２型ＴＢＭの両方に適用される。
例示的なＭＢＭの特徴は、以下の第７．２節及び特定の実施形態４０～６０５に記載されている。
更に、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用することができる例示的なＣＤ１９結合分子は、以下の第７．２節及び特定の実施形態６１４～６２６に記載されている。
いくつかの態様では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９に結合するＣＡＲ分子を発現する細胞の集団である。例示的なＣＡＲ及びＣＡＲ分子を発現する細胞の集団の特徴は、以下の第７．３節及び特定の実施形態６２７～７００に記載されている。
いくつかの態様では、Ｂ細胞標的化剤は、Ｂ細胞活性化因子受容体（ＢＡＦＦＲ）結合分子、ＣＤ２０結合分子、ＣＤ２２結合分子又はＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）結合分子である。Ｂ細胞標的化剤の例示的な特徴は、以下の第７．４節及び特定の実施形態７０１～７４１に記載されている。
本明細書に記載の方法及び組成物を用いる治療に適した例示的なＢ細胞悪性腫瘍及び患者集団は、以下の第７．６節及び特定の実施形態７６０～８０７に記載されている。
全体を通して記載される抗ＣＤ１９剤は、組み合わせ治療として対象に投与することができる。例えば、組み合わせは、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤を含み得る。抗ＣＤ１９剤は、いくつかの実施形態において、ＣＤ１９結合分子であり得る。
いくつかの実施形態では（例えば、組み合わせて使用されるとき）、ＣＤ１９結合分子は、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含み得る。他の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含み得る。ＣＤ１９結合分子は、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３も含み得る。特定の実施形態では、ＣＤ１９結合は、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含み得る。
ＣＤ１９結合分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨを含み得る。ＣＤ１９結合分子は、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬも含み得る。ＣＤ１９結合分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬの両方も含み得る。
ＣＤ１９結合分子は、多重特異性結合分子（ＭＢＭ）でもあり得る。例えば、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；及び（ｂ）異なる標的分子（例えば、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素（ＣＤ３など））に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）を含み得る。ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９以外の標的分子に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）であり得る。例えば、ＣＤ１９結合分子がＴＢＭである場合、いくつかの例において、ＡＢＭ２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合し得、ＡＢＭ３は、ヒトＣＤ２に特異的に結合し得る。
ＣＤ１９結合分子は、いくつかの実施形態において、三価であり得る。ＣＤ１９結合分子は、複数の方法の１つにおいて、例えば図２Ａ～２Ｐで表される立体配置のいずれか１つとして設計することができる。例えば、ＣＤ１９結合分子は、図２Ｉに表されるような立体配置を有し得る。ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ２と称される立体配置も有し得る。
ＣＤ１９結合分子は、ヒトＣＤ２に特異的に結合するＡＢＭ３を有し得る。いくつかの実施形態では、ＡＢＭ３は、非免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである。いくつかの実施形態では、ＡＢＭ３は、ＣＤ２リガンドの受容体結合ドメインを含み得る。いくつかの実施形態では、ＡＢＭ３は、ＣＤ５８部分である。使用されるＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含み得る。
ＣＤ１９結合分子は、固有のＦｃドメインも含み得る。例えば、ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインを形成する第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域を含み得る。第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成し得る。いくつかの実施形態では、第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含み得る。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、ノブ・イン・ホール（「ＫＩＨ」）修飾を含むＦｃヘテロ二量体である。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、改変されたエフェクター機能を有する。いくつかの実施形態では、Ｆｃドメインは、１つ以上のＦｃ受容体への改変された結合を有し得る。Ｆｃドメインのいくつかの突然変異は、サイレンシング突然変異であり得る。例えば、突然変異の１つ以上は、サイレントＩｇＧ１をもたらし得る。いくつかの実施形態では、突然変異は、Ｄ２６５Ａ突然変異を含み得る。他の実施形態では、突然変異は、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ突然変異を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、（ａ）修飾Ｔ３６６Ｗを含む第１のＣＨ３ドメイン；及び（ｂ）第１のＣＨ３ドメインとヘテロ二量体を形成する第２のＣＨ３ドメインを含み、且つ修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、２６５位のアスパラギン酸残基をアラニン残基で、２９７位のアスパラギン残基をアラニン残基で、且つ３２９位のプロリン残基をアラニン残基で置換すること（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）によって修飾されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。
いくつかの特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；（ｂ）ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；並びに（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である。このＣＤ１９結合分子は、三価であり得る。ＡＢＭ１は、Ｆａｂであり得る。ＣＤ１９結合分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含むＡＢＭ１も有し得る。
ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ３に結合するＴＣＲ複合体の構成要素を有し得る。ＣＤ１９結合分子のＡＢＭ２は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインであり得る。例えば、ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｈｉのＣＤＲ配列を含み得る。ＣＤ３ｈｉの重鎖配列は、表９Ａに記載のとおりであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖの形態である。例えば、ＡＢＭ２は、表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含み得る。ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ５８部分であるＡＢＭ３を含み得る。例として、ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列であり得る。組み合わせて使用され、且つ／又は全体を通して開示されるＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインも含み得る。Ｆｃドメインにおける第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成し得る。
特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；並びに（ｄ）Ｆｃドメインを含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である。
特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；並びに（ｄ）Ｆｃドメインを含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である。
別の特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ（ｉ）配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；並びに（ｄ）Ｆｃドメインを含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である。ＣＤ１９結合分子のＡＢＭ１は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含み得る。いくつかの実施形態では、ＡＢＭ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含み得る。
別の特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つｓｃＦｖを含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；（ｃ）Ｆｃ領域を含む第１の半抗体；並びにヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つＣＤ５８ ＩｇＶドメインを含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）及び（ｄ）Ｆｃ領域を含む第２の半抗体を含み、第１の半抗体におけるＦｃ領域及び第２の半抗体におけるＦｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体を形成する。ＣＤ１９結合分子は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖；及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む第１の半抗体；並びに配列番号６５のアミノ酸配列を含む第２の半抗体を含み得る。組み合わせて使用され、且つ／又は全体を通して開示されるＣＤ１９結合分子は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖；及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む第１の半抗体；並びに配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む第２の半抗体を含み得る。いくつかの実施形態では、組み合わせて使用され、且つ／又は全体を通して開示されるＣＤ１９結合分子は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖；及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む第１の半抗体；並びに配列番号８６のアミノ酸配列を含む第２の半抗体を含み得る。
一実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）第１の半抗体重鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６３のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第１の半抗体重鎖；（ｂ）第１の半抗体軽鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第１の半抗体軽鎖；（ｃ）第２の半抗体であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６５のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第２の半抗体を含む。
別の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチドを含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチドを含み得る。
全体を通して記載されるとおり、組み合わせは、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤を含み得る。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化剤は、Ｂ細胞枯渇剤である。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ受容体（ＢＡＦＦＲ）結合分子である。例えば、ＢＡＦＦＲ結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである。本実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含み得る。ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１８に記載されるイアナルマブのＶＨ及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み得る。具体例では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、イアナルマブである。
抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の分子であり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の医薬組成物中で製剤化され得る。
Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象の治療で使用するための、本明細書に記載の抗ＣＤ１９剤及び本明細書に記載のＢ細胞標的化剤を含む組み合わせも本明細書に提供される。全体を通して記載される組み合わせは、Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を治療するための方法において用いることができる。この方法は、全体を通して記載されるような抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤を投与することを含み得る。投与のタイミングに関して、Ｂ細胞標的化剤は、抗ＣＤ１９剤の対象への初回投与前に、対象に１回以上投与することができる。投与方法は、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤を同時に投与することも含み得る。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）であり得る。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）であり得る。例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性ＡＬＬであり得る。抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の組み合わせは、本明細書に記載の治療薬を更に含み得る。
７．１．定義
本明細書で使用されるとき、以下の用語は、以下の意味を有することが意図される。
本明細書で使用されるとき、以下の用語は、以下の意味を有することが意図される。
ＡＢＭ鎖：個々のＡＢＭは、１つの（例えば、ｓｃＦｖの場合）ポリペプチド鎖として存在し得るか、又は２つ以上のポリペプチド鎖（例えば、Ｆａｂの場合）の会合によって形成され得る。本明細書で使用されるとき、用語「ＡＢＭ鎖」は、単一のポリペプチド鎖上に存在するＡＢＭの全て又は一部分を指す。用語「ＡＢＭ鎖」の使用は、あくまでも便宜上で説明のために過ぎないことが意図され、特定の形態又は作製方法を含意するものではない。
ＡＤＣＣ：本明細書において使用される際の「ＡＤＣＣ」又は「抗体依存性細胞媒介細胞傷害性」とは、ＦｃγＲｓを発現する非特異的な細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応を意味する。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合に相関しており；ＦｃγＲＩＩＩａへの増加した結合は、ＡＤＣＣ活性の増加をもたらす。
ＡＤＣＰ：本明細書において使用される際の「ＡＤＣＰ」又は抗体依存性細胞媒介食作用とは、ＦｃγＲｓを発現する非特異的な食細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の食作用を引き起こす細胞媒介反応を意味する。
抗体：本明細書において使用される際の「抗体」という用語は、非共有結合的に、可逆的に及び特異的に抗原に結合することが可能な免疫グロブリンファミリーのポリペプチド（又はポリペプチドのセット）を指す。例えば、ＩｇＧ型の天然「抗体」は、ジスルフィド結合によって相互接続される少なくとも２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖を含む四量体である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略記される）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略記される）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（本明細書においてＣＬと略記される）から構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域がその間に散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変領域に更に細分され得る。各ＶＨ及びＶＬは、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配置された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典補体系の第１の構成要素（Ｃｌｑ）を含む、宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。「抗体」という用語は、限定はされないが、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、二重特異性又は多重特異性抗体及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、本開示の抗体に対する抗Ｉｄ抗体を含む）を含む。抗体は、任意のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）であり得る。
軽鎖及び重鎖は、両方とも構造的及び機能的相同性の領域に分けられる。「定常」及び「可変」という用語は、機能的に使用される。これに関して、軽（ＶＬ）及び重（ＶＨ）鎖部分の両方の可変ドメインが抗原認識及び特異性を決定することが理解されるであろう。逆に、軽鎖（ＣＬ）及び重鎖（ＣＨ１、ＣＨ２又はＣＨ３）の定常ドメインは、分泌、経胎盤移動性、Ｆｃ受容体結合、補体結合などの重要な生物学的特性を付与する。慣例により、定常領域ドメインの番号付けは、抗体の抗原結合部位又はアミノ末端からより遠位になるにつれて数が増加する。野生型抗体において、Ｎ末端では可変領域であり、Ｃ末端では定常領域であり；ＣＨ３及びＣＬドメインは、実際にそれぞれ重鎖及び軽鎖のカルボキシ末端を含む。
抗体フラグメント：本明細書において使用される際の抗体の「抗体フラグメント」という用語は、抗体の１つ以上の部分を指す。ある実施形態において、これらの部分は、抗体の接触ドメインの一部である。ある他の実施形態において、これらの部分は、本明細書において「抗原結合フラグメント」、「その抗原結合フラグメント」、「抗原結合部分」などと呼ばれることもある、非共有結合的に、可逆的に及び特異的に抗原に結合する能力を保持する抗原結合フラグメントである。結合フラグメントの例としては、限定はされないが、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価フラグメント；Ｆ（ａｂ）２フラグメント、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂフラグメントを含む２価フラグメント；ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント；ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；及び単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。したがって、「抗体フラグメント」という用語は、抗体のタンパク質分解フラグメント（例えば、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）２フラグメント）並びに抗体の１つ以上の部分（例えば、ｓｃＦｖ）を含む改変タンパク質を包含する。
抗体フラグメントは、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、細胞内抗体、二重特異性抗体、三重特異性抗体、四重特異性抗体、ｖ－ＮＡＲ及びビス－ｓｃＦｖ中にも組み込まれ得る（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，２００５，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６を参照されたい）。抗体フラグメントは、フィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づいて足場中にグラフトされ得る（フィブロネクチンポリペプチドモノボディを説明する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照されたい）。
抗体フラグメントは、相補的軽鎖ポリペプチド（例えば、ＶＬ－ＶＣ－ＶＬ－ＶＣ）と一緒になって抗原結合領域の対を形成する、タンデムＦｖセグメントの対（例えば、ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含む一本鎖分子中に組み込まれ得る（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８：１０５７－１０６２；及び米国特許第５，６４１，８７０号明細書）。
抗体番号付け方式：本明細書において、抗体ドメイン中の番号付けされたアミノ酸残基への言及は、特に規定されない限り、ＥＵ番号付け方式に基づいている（例えば、表１中）。この方式は、Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６３：７８－８５によって最初に考案され、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，ｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ，ＵＳＡに詳細に記載されている。
抗原結合モジュール：用語「抗原結合モジュール」又は「ＡＢＭ」は、本明細書で使用されるとき、抗原に非共有結合的に、可逆的に、且つ特異的に結合する能力を有するＭＢＭの一部分を指す。ＡＢＭは、免疫グロブリンベース又は非免疫グロブリンベースであり得る。本明細書で使用されるとき、用語「ＡＢＭ１」及び「ＣＤ１９ ＡＢＭ」（など）は、ＣＤ１９に特異的に結合するＡＢＭを指し、用語「ＡＢＭ２」及び「ＴＣＲ ＡＢＭ」（など）は、ＴＣＲ複合体の構成要素に特異的に結合するＡＢＭを指し、用語「ＡＢＭ３」は、ＣＤ２又はＴＡＡ（コンテクストに依存）に特異的に結合するＡＢＭを指し、用語「ＣＤ２ ＡＢＭ」（など）は、ＣＤ２に特異的に結合するＡＢＭを指し、及び用語「ＴＡＡ ＡＢＭ」（など）は、ＴＡＡに特異的に結合するＡＢＭを指す。用語のＡＢＭ１、ＡＢＭ２及びＡＢＭ３は、便宜上使用されるに過ぎず、ＭＢＭのいずれか特定の形態を伝えようと意図するものではない。一部の実施形態において、ＡＢＭ２はＣＤ３に結合する（本明細書では「ＣＤ３ ＡＢＭ」などと呼ばれる）。したがって、１つ又は複数のＡＢＭ２に関する開示は、ＣＤ３ ＡＢＭにも適用可能である。
抗原結合フラグメント：抗体の「抗原結合フラグメント」という用語は、非共有結合的に、可逆的に及び特異的に抗原に結合する能力を有する抗体の部分を指す。
抗原結合分子：「抗原結合分子」という用語は、１つ以上の抗原結合ドメインを含む分子、例えば抗体を指す。抗原結合分子は、１つ以上のポリペプチド鎖、例えば１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるポリペプチド鎖を含み得る。抗原結合分子中のポリペプチド鎖は、互いに直接又は間接的に会合され得る（例えば、第１のポリペプチド鎖が第２のポリペプチド鎖と会合され得、それが次に第３のポリペプチド鎖と会合されて、第１及び第２のポリペプチド鎖が互いに直接会合される抗原結合分子を形成し得るか、第２及び第３のポリペプチド鎖が互いに直接会合され、第１及び第３のポリペプチド鎖が第２のポリペプチド鎖を介して間接的に互いに会合される）。
会合した：抗原結合分子に関連して用語「会合した」は、２つ以上のポリペプチド鎖間及び／又は単一のポリペプチド鎖の２つ以上の部分間の機能的関係を指す。詳細には、用語「会合した」は、２つ以上のポリペプチド（又は単一のポリペプチドの部分）が互いに、例えば分子相互作用を通して非共有結合的に、且つ／又は１つ以上のジスルフィド架橋若しくは化学的架橋を通して共有結合的に会合し、それにより機能性の抗原結合分子、例えばその中の抗原結合ドメインがそのそれぞれの標的に結合することができるＢＢＭ又はＴＢＭを生成することを意味する。ＭＢＭに存在する可能性のある会合の例としては（限定はされないが）、Ｆｃドメイン（第７．２．２．１．５節に記載されるとおりのホモ二量体又はヘテロ二量体）のＦｃ領域間にある会合、Ｆａｂ又はＦｖのＶＨ領域とＶＬ領域との間にある会合及びＦａｂのＣＨ１とＣＬとの間にある会合が挙げられる。
ＢＡＦＦ：「ＢＡＦＦ」という用語は、Ｂ細胞活性化因子タンパク質を指す。ＢＡＦＦは、腫瘍壊死因子リガンドスーパーファミリーメンバー１３Ｂ及びＢリンパ球刺激因子（ＢＬｙＳ）としても知られる。ヒト及びマウスのアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公的データベース内で見出すことができる。例えば、ヒトＢＡＦＦのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受入番号Ｑ９Ｙ２７５として見出すことができ、ヒトＢＡＦＦをコードするヌクレオチド配列は、受入番号ＮＭ＿００６５７３．５で見出すことができる。ＢＡＦＦは、ＢＡＦＦＲに対するリガンドであり、Ｂ細胞の増殖及び分化における役割を果たす。
ＢＡＦＦＲ：「ＢＡＦＦＲ」という用語は、Ｂ細胞活性化因子受容体タンパク質を指す。ＢＡＦＦＲは、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ（ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ）としても知られる。ヒト及びマウスのアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公的データベース内で見出すことができる。例えば、ヒトＢＡＦＦＲのアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受入番号Ｑ９６ＲＪ３として見出すことができ、ヒトＢＡＦＦＲをコードするヌクレオチド配列は、受入番号ＮＭ＿０５２９４５．４で見出すことができる。それは主に、Ｂリンパ球上及びＴ細胞のサブセット上で発現される。
Ｂ細胞：本明細書で用いられるとき、「Ｂ細胞」という用語は、リンパ球サブタイプの白血球の１タイプである、Ｂ細胞系統の細胞を指す。Ｂ細胞の例として、形質芽細胞、形質細胞、リンパ形質細胞様細胞、メモリーＢ細胞、濾胞性Ｂ細胞、辺縁帯Ｂ細胞、Ｂ－１細胞、Ｂ－２細胞及び制御性Ｂ細胞が挙げられる。
Ｂ細胞標的化剤：本明細書で用いられるとき、「Ｂ細胞標的化剤」という用語は、Ｂ細胞の細胞表面分子に（例えば、抗体の抗原結合ドメインを介して）結合し、且つ／又はインビトロ及び／若しくはインビボでヒトＢ細胞を枯渇させる薬剤（例えば、治療薬）を指す。Ｂ細胞を枯渇させるＢ細胞標的化剤は、本明細書で「Ｂ細胞枯渇剤」と称される。Ｂ細胞枯渇剤、例えばＢ細胞枯渇抗体は、ヒトＢ細胞枯渇アッセイにおける測定として、Ｂ細胞をインビトロで枯渇させる、好ましくは、１０ｎＭ以下のＥＣ５０で、好ましくは、１ｎＭ以下のＥＣ５０で、より好ましくは、１００ｐＭ以下のＥＣ５０でＢ細胞を枯渇させる。例えば、マウスモデルにおいて、インビボでＢ細胞を枯渇させるＢ細胞枯渇剤は、好ましくは、Ｂ細胞の蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）による測定として、インビボでＢ細胞の百分率を、最大で７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％又はそれを超えて低下させる。インビトロ及びインビボでＢ細胞枯渇を測定するためのＢ細胞枯渇アッセイは、国際公開第２０１０／００７０８２号パンフレットに記載されており、その内容は、全体的に参照により本明細書に組み込まれる。
Ｂ細胞悪性腫瘍：本明細書において使用される際、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞の無制御の増殖を指す。Ｂ細胞悪性腫瘍の例としては、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、ホジキンリンパ腫、白血病及び骨髄腫が挙げられる。例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍は、限定はされないが、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、有毛細胞白血病、脾性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節外性辺縁帯リンパ腫（ＥＭＺＬ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＺＭＬ）及び原発性滲出液リンパ腫であり得る。
結合配列：表１、９、１０、１１、１４、１５、１８又は１９（その下位部分を含む）を参照して、「結合配列」という用語は、該当する表に記載されるＣＤＲ一式、ＶＨ－ＶＬ対又はｓｃＦｖを有するＡＢＭを意味する。
二重特異性結合分子：「二重特異性結合分子」又は「ＢＢＭ」という用語は、２つの抗原に特異的に結合し、２つ以上のＡＢＭを含む分子を指す。本開示のＢＢＭは、ＣＤ１９に対して特異的な少なくとも１つの抗原結合ドメイン及び異なる抗原に対して特異的な少なくとも１つの抗原結合ドメイン、例えばＴＣＲ複合体の構成要素を含む。代表的なＢＢＭが図１Ｂ～１ＡＨに示される。ＢＢＭは、１つ、２つ、３つ、４つ又は更にそれを超えるポリペプチド鎖を含み得る。
２価：抗原結合分子に関連して本明細書において使用される際の「２価」という用語は、２つの抗原結合ドメインを有する抗原結合分子を指す。ドメインは、同じであるか又は異なり得る。したがって、２価抗原結合分子は、単一特異性又は二重特異性であり得る。２価ＢＢＭは、ＣＤ１９に特異的に結合するＡＢＭ及び別の抗原に結合する別のＡＢＭ、例えばＴＣＲ複合体の構成要素を含むことができる。
癌：「癌」という用語は、異常細胞の制御されない（多くの場合に急速な）成長によって特徴付けられる疾患を指す。癌細胞は、局所的に又は血流及びリンパ系を介して身体の他の部位に広がり得る。癌の例としては、本明細書に記載されるＢ細胞悪性腫瘍が挙げられる。「癌性Ｂ細胞」という用語は、無制御の増殖を起こしているか又は起こしたＢ細胞を指す。
ＣＤ３：「ＣＤ３」又は「分化群３」という用語は、Ｔ細胞受容体の分化した３つの共受容体の群を指す。ＣＤ３は、細胞傷害性Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞）及びＴヘルパー細胞（例えば、ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞）の両方の活性化を促進し、４つの異なる鎖：１つのＣＤ３γ鎖（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００００７３及びＭＰ＿００００６４（ヒト））、１つのＣＤ３δ鎖（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００７３２、ＮＭ＿００１０４０６５１、ＮＰ＿００７３２及びＮＰ＿００１０３５７４１（ヒト））及び２つのＣＤ３ε鎖（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿０００７３３及びＮＰ＿００７２４（ヒト））から構成される。ＣＤ３の鎖は、単一の細胞外免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの非常に関連する細胞表面タンパク質である。ＣＤ３分子は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ－鎖と会合して、Ｔリンパ球における活性化シグナルを生成する際に機能するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体を形成する。明示的に示されない限り、本出願におけるＣＤ３への言及は、ＣＤ３共受容体、ＣＤ３共受容体複合体又はＣＤ３共受容体複合体の任意のポリペプチド鎖を指し得る。
ＣＤ１９：：用語「ＣＤ１９」又は「分化クラスター１９」は、白血病前駆細胞に検出可能な抗原決定基である分化クラスター１９タンパク質を指す。ヒト及びマウスアミノ酸及び核酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＰｒｏｔ及びＳｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔなどの公開データベース内で見つけることができる。例えば、ヒトＣＤ１９のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５３９１として見つけることができ、ヒトＣＤ１９をコードするヌクレオチド配列は、受託番号ＮＭ＿００１１７８０９８で見つけることができる。ＣＤ１９は、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）及び非ホジキンリンパ腫を含め、ほとんどのＢ細胞系統の癌で発現する。これは、Ｂ細胞前駆細胞の初期マーカーでもある。例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５を参照されたい。
抗ＣＤ１９剤：「抗ＣＤ１９剤」という用語は、ＣＤ１９を標的にする薬剤（例えば、治療薬）を指す。抗ＣＤ１９剤の例として、ブリナツモマブなどのＣＤ１９結合分子（単一特異性及び多重特異性抗原結合分子を含む）、本明細書に記載のＮＥＧ２１８ベースの単一特異性及び多重特異性結合分子、本明細書に記載のＮＥＧ２５８ベースの単一特異性及び多重特異性結合分子並びにチサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル及びブレクスカブタゲンオートロイセルなどのＣＡＲ Ｔ組成物が挙げられる。
キメラ抗体：「キメラ抗体」（又はその抗原結合フラグメント）という用語は、（ａ）定常領域又はその部分が、抗原結合部位（可変領域）が、異なる若しくは改変されたクラス、エフェクター機能及び／若しくは種の定常領域又はキメラ抗体に新しい特性を付与する全く異なる分子、例えば酵素、毒素、ホルモン、成長因子、薬物などに連結されるように改変、置換又は交換されたか；又は（ｂ）可変領域又はその部分が、異なる又は改変された抗原特異性を有する可変領域により改変、置換又は交換された抗体分子（又はその抗原結合フラグメント）である。例えば、マウス抗体は、その定常領域をヒト免疫グロブリンからの定常領域で置換することによって修飾され得る。ヒト定常領域による置換により、キメラ抗体は、元のマウス抗体と比較して、ヒトにおいて低下した抗原性を有しながら、抗原を認識する際にその特異性を保持することができる。
キメラ抗原受容体：「キメラ抗原受容体」又は代わりに「ＣＡＲ」という用語は、最も単純な実施形態において典型的には２つであるポリペプチドのセットを指し、免疫エフェクター細胞内にある場合、標的細胞、典型的には癌細胞に対する特異性を有し、且つ細胞内シグナル生成を伴う細胞を提供する。一部の実施形態において、ＣＡＲは、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び以下に定義される刺激分子及び／又は共刺激分子に由来する機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞質シグナル伝達ドメイン（本明細書では「細胞内シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）を含む。ポリペプチドのセットは、互いに連続していても又は連続していなくてもよい。ポリペプチドが互いに連続していない場合、ポリペプチドのセットは、二量体化分子が存在すると、ポリペプチドを互いに結合させることができる、例えば抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達ドメインに結合させることができる二量体化スイッチを含む。ＣＡＲ分子は、典型的には、ＣＡＲ分子を発現するように操作された免疫エフェクター細胞（例えば、好ましくは対象の自己細胞であるＴ細胞）の投与によって対象に投与される。
組み合わせて：「組み合わせて」投与されるとは、本明細書で使用されるとき、対象が障害に罹患している最中に対象に２つ（以上）の異なる治療が送達されることを意味し、例えば、それらの２つ以上の治療は、対象が障害と診断された後、且つ障害が治癒若しくは消失する前又は他の理由で治療が中止される前に送達される。「組み合わせ」及び「組み合わせて」という用語は、２つ以上の治療を正確且つ同時に投与することに限定されず、むしろ、薬剤が追加の療法と一緒に作用して、別の方法で投与された場合よりも大きい利益を提供できるような順序及び時間間隔で薬剤（例えば、抗ＣＤ１９剤又はＢ細胞標的化剤）を含む医薬組成物を対象に投与することを意味する。
相補性決定領域：本明細書において使用される際の「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」という用語は、抗原特異性及び結合親和性を付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の配列を指す。例えば、一般に、各重鎖可変領域中の３つのＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３）並びに各軽鎖可変領域中の３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３）がある。所与のＣＤＲの正確なアミノ酸配列境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」番号付けスキーム），Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」番号付けスキーム）及びＩｍＭｕｎｏＧｅｎＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）番号付け（Ｌｅｆｒａｎｃ，１９９９，ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｓｔ ７：１３２－１３６；Ｌｅｆｒａｎｃ，ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７：５５－７７（「ＩＭＧＴ」番号付けスキーム）によって記載されるものを含む、いくつかの周知のスキームのいずれかを用いて決定され得る。例えば、古典的な形式について、Ｋａｂａｔにより、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、３１～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５０～６５（ＣＤＲ－Ｈ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）と番号付けされ；軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）中のＣＤＲアミノ酸残基は、２４－３４（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５６（ＣＤＲ－Ｌ２）及び８９～９７（ＣＤＲ－Ｌ３）と番号付けされる。Ｃｈｏｔｈｉａにより、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸は、２６～３２（ＣＤＲ－Ｈ１）、５２～５６（ＣＤＲ－Ｈ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）と番号付けされ；ＶＬ中のアミノ酸残基は、２６～３２（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５２（ＣＤＲ－Ｌ２）及び９１～９６（ＣＤＲ－Ｌ３）と番号付けされる。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの両方のＣＤＲの定義を組み合わせることにより、ＣＤＲは、ヒトＶＨ中のアミノ酸残基２６～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５０～６５（ＣＤＲ－Ｈ２）及び９５～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）並びにヒトＶＬ中のアミノ酸残基２４～３４（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５６（ＣＤＲ－Ｌ２）及び８９～９７（ＣＤＲ－Ｌ３）からなる。ＩＭＧＴにより、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基は、約２６～３５（ＣＤＲ－Ｈ１）、５１～５７（ＣＤＲ－Ｈ２）及び９３～１０２（ＣＤＲ－Ｈ３）と番号付けされ、ＶＬ中のＣＤＲアミノ酸残基は、約２７～３２（ＣＤＲ－Ｌ１）、５０～５２（ＣＤＲ－Ｌ２）及び８９～９７（ＣＤＲ－Ｌ３）（「Ｋａｂａｔ」による番号付け）と番号付けされる。ＩＭＧＴにより、抗体のＣＤＲ領域は、プログラムＩＭＧＴ／ドメインＧａｐ Ａｌｉｇｎを用いて決定され得る。
保存的配列修飾：「保存的配列修飾」という用語は、ＣＤ１９結合分子又はその構成要素（（例えば、ＣＤ１９結合ドメイン又はＦｃ領域）の結合特性に実質的に影響を与えないか又は変化させないアミノ酸修飾を指す。このような保存的修飾は、アミノ酸置換、付加及び欠失を含む。修飾は、部位特異的突然変異誘発及びＰＣＲ媒介突然変異誘発などの標準的な技術によって結合分子に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置換されるものである。同様の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において規定されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β－分岐側鎖を有するアミノ酸（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、結合分子内の１つ以上のアミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基で置換され得、改変された結合分子は、例えば、標的分子への結合及び／又は有効なヘテロ二量体化及び／又はエフェクター機能について試験され得る。
二重特異性抗体：本明細書において使用される際の「二重特異性抗体」という用語は、典型的には、ｓｃＦｖ鎖の対合によって形成される、２つの抗原結合部位を有する小型の抗体フラグメントを指す。各ｓｃＦｖは、同じポリペプチド鎖中に軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ－ＶＬ、ここで、ＶＨは、ＶＬに対してＮ末端又はＣ末端のいずれかである）。ＶＨ及びＶＬが同じポリペプチド鎖上のＶＨ及びＶＬが対合して抗原結合ドメインを形成することを可能にするリンカーによって隔てられる典型的なｓｃＦｖと異なり、二重特異性抗体は、典型的には、同じ鎖上のＶＨ及びＶＬドメイン間の対合を可能にするには短過ぎるリンカーを含み、それにより、ＶＨ及びＶＬドメインが別の鎖の相補的ドメインと対合され、２つの抗原結合部位が形成される。二重特異性抗体は、例えば、欧州特許第４０４，０９７号明細書；国際公開第９３／１１１６１号パンフレット；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８に更に十分に記載されている。
ｄｓＦｖ：「ｄｓＦｖ」という用語は、ジスルフィド安定化Ｆｖフラグメントを指す。ｄｓＦｖにおいて、ＶＨ及びＶＬがドメイン間ジスルフィド結合によって連結される。このような分子を生成するために、ＶＨ及びＶＬのフレームワーク領域中の１つのアミノ酸がそれぞれシステインに突然変異され、それが次に安定した鎖間ジスルフィド結合を形成する。典型的には、ＶＨ中の４４位及びＶＬ中の１００位がシステインに突然変異される。Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ，２０１０，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １８１－１８９，ＤＯＩ：１０．１００７／９７８－３－６４２－０１１４７－４＿１４を参照されたい。ｄｓＦｖという用語は、ｄｓＦｖとして公知のもの（ＶＨ及びＶＬが、リンカーペプチドではなく鎖間ジスルフィド結合によって連結された分子）又はｓｃｄｓＦｖ（ＶＨ及びＶＬが、リンカー並びに鎖間ジスルフィド結合によって連結された分子）の両方を包含する。
エフェクター機能：「エフェクター機能」という用語は、通常、エフェクター分子の結合によって媒介される、抗原結合ドメイン以外の抗体のドメインを介した結合によって媒介される抗体分子の活性を指す。エフェクター機能は、例えば、抗体への補体のＣ１構成要素の結合によって媒介される補体媒介性エフェクター機能を含む。補体の活性化は、細胞病原体のオプソニン化及び溶解において重要である。補体の活性化は、炎症反応も刺激し、自己免疫過敏性にも関与し得る。エフェクター機能は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）媒介性エフェクター機能も含み、これは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への抗体の定常ドメインの結合時に引き起こされ得る。細胞表面におけるＦｃ受容体への抗体の結合は、抗体で被覆された粒子の貪食及び破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体で被覆された標的細胞の溶解（抗体依存性細胞媒介細胞傷害又はＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症性メディエータの放出、胎盤通過及び免疫グロブリン産生の制御を含む、多くの重要及び多様な生物学的応答を引き起こす。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ受容体又は補体成分などのエフェクター分子に対する抗体の親和性を改変、例えば増強又は低減することによって改変され得る。結合親和性は、一般に、エフェクター分子結合部位を修飾することによって変化され、この場合、対象とする部位を位置特定し、この部位の少なくとも一部を好適な方法で修飾することが適切である。エフェクター分子のための抗体における結合部位の改変が全体的な結合親和性を実質的に改変する必要はないが、エフェクター機構を非生産的結合におけるように無効にするように、相互作用の幾何学的性質を改変し得ることも考えられる。エフェクター機能は、エフェクター分子結合に直接関与しないが、エフェクター機能の性能に他の方法で関与する部位を修飾することによって改変され得ることも更に考えられる。
エピトープ：エピトープ又は抗原決定基は、抗体又は本明細書に記載されるとおりの他の抗原結合部分によって認識される抗原の一部分である。エピトープは、線状又は立体構造型であり得る。
Ｆａｂ：本明細書において使用される際の「Ｆａｂ」又は「Ｆａｂ領域」とは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ及びＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチド領域を意味する。これらの用語は、単独でのこの領域又は本開示の抗原結合分子に関連したこの領域を指し得る。
Ｆａｂドメインは、ＶＬドメインに結合されたＣＬドメインとの、ＶＨドメインに結合されたＣＨ１ドメインの会合によって形成される。ＶＨドメインは、ＶＬドメインと対合されてＦｖ領域を構成し、ＣＨ１ドメインは、ＣＬドメインと対合されて結合モジュールを更に安定させる。２つの定常ドメイン間のジスルフィド結合は、Ｆａｂドメインを更に安定させ得る。
Ｆａｂ領域は、（例えば、パパインなどの酵素を用いた）免疫グロブリン分子のタンパク質分解的切断又は組み換え発現によって生成され得る。天然免疫グロブリン分子において、Ｆａｂは、２つの異なるポリペプチド鎖の会合（例えば、一方の鎖上のＶＨ－ＣＨ１が他方の鎖上のＶＬ－ＣＬと会合する）によって形成される。Ｆａｂ領域は、典型的には２つのポリペプチド鎖上において、典型的には組み換え技術によって発現されるが、一本鎖Ｆａｂも本明細書において考えられる。
Ｆｃドメイン：用語「Ｆｃドメイン」は、一対の会合したＦｃ領域を指す。これらの２つのＦｃ領域が二量体化してＦｃドメインを作り出す。Ｆｃドメイン内にある２つのＦｃ領域は、同じである（このようなＦｃドメインは、本明細書では「Ｆｃホモ二量体」と呼ばれる）か又は互いに異なり得る（このようなＦｃドメインは、本明細書では「Ｆｃヘテロ二量体」と呼ばれる）。
Ｆｃ領域：本明細書において使用される際の「Ｆｃ領域」又は「Ｆｃ鎖」という用語は、ＩｇＧ分子のＣＨ２－ＣＨ３ドメインを含み、ある場合には、ヒンジを含むポリペプチドを意味する。ヒトＩｇＧ１のためのＥＵ番号付けにおいて、ＣＨ２－ＣＨ３ドメインは、アミノ酸２３１～４４７を含み、ヒンジは２１６～２３０である。したがって、「Ｆｃ領域」の定義は、アミノ酸２３１～４４７（ＣＨ２－ＣＨ３）若しくは２１６～４４７（ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）の両方又はそのフラグメントを含む。これに関連する「Ｆｃフラグメント」は、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか又は両方からのより少ないアミノ酸を含有し得るが、一般にサイズに基づく標準的な方法（例えば、非変性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー）を用いて検出され得るように、別のＦｃ領域と共に二量体を形成する能力を依然として保持する。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域は、本開示において特に使用され、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４からのＦｃ領域であり得る。
Ｆｖ：用語「Ｆｖ」は、完全な標的認識及び結合部位を含む免疫グロブリンから誘導可能な最小限の抗体フラグメントを指す。この領域は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインとが緊密に非共有結合的に会合している二量体（ＶＨ－ＶＬ二量体）からなる。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ－ＶＬ二量体の表面に標的結合部位を画定するのは、この形態である。多くの場合、これらの６つのＣＤＲが、抗体に標的結合特異性を付与する。しかしながら、一部の例では、単一の可変ドメイン（又は標的に特異的な３つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）であっても、標的を認識して結合する能力を有し得る。本明細書におけるＶＨ－ＶＬ二量体という表現は、いずれか特定の形態を伝えようと意図するものではない。例として、限定なしに、ＶＨ及びＶＬは、本明細書に記載される任意の形態をとるよう一体となって半抗体を形成し得るか、又は各々が別個の半抗体に存在して、それらの別個の半抗体が会合したときに一体となって抗原結合ドメインを形成し、例えば本開示のＴＢＭを形成し得る。単一のポリペプチド鎖上に存在するとき（例えば、ｓｃＦｖ）、ＶＨ及びＶＬのＮ末端側又はＣ末端側である。
半抗体：「半抗体」という用語は、少なくとも１つのＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を含み、例えばジスルフィド架橋又は分子相互作用（例えば、Ｆｃヘテロ二量体間のノブ・イン・ホール相互作用）により、ＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を含む別の分子と会合し得る分子を指す。半抗体は、１つのポリペプチド鎖又は２つ以上のポリペプチド鎖（例えば、Ｆａｂの２つのポリペプチド鎖）から構成され得る。一実施形態において、半抗体は、Ｆｃ領域を含む。
半抗体の例は、抗体（例えば、ＩｇＧ抗体）の重鎖及び軽鎖を含む分子である。半抗体の別の例は、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む第１のポリペプチドと、ＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む第２のポリペプチドとを含む分子であり、ＶＬ及びＶＨドメインは、ＡＢＭを形成する。半抗体の更に別の例は、ｓｃＦｖドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含むポリペプチドである。
半抗体は、２つ以上のＡＢＭを含み得、例えば、半抗体は、（Ｎ末端からＣ末端への順に）ｓｃＦｖドメイン、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン及び別のｓｃＦｖドメインを含む。
半抗体は、別の半抗体中の別のＡＢＭ鎖と会合されたときに完全なＡＢＭを形成するＡＢＭ鎖も含み得る。
したがって、ＭＢＭは、１つ、より典型的には２つ又は更に３つ以上の半抗体を含み得、半抗体は、１つ以上のＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を含み得る。
一部のＭＢＭにおいて、第１の半抗体は、第２の半抗体と会合し、例えばそれと共にヘテロ二量体化する。他のＭＢＭにおいて、第１の半抗体は、例えば、ジスルフィド架橋又は化学的架橋によって第２の半抗体に共有結合される。更に他のＭＢＭにおいて、第１の半抗体は、共有結合及び非共有相互作用の両方、例えばジスルフィド架橋及びノブ・イン・ホール相互作用によって第２の半抗体と会合する。
「半抗体」という用語は、説明の目的のために意図されるに過ぎず、特定の形態又は製造の方法を暗示していない。「第１の」半抗体、「第２の」半抗体、「左側」半抗体、「右側」半抗体などの半抗体の説明は、便宜上及び説明の目的のために過ぎない。
６価：用語「６価」は、抗原結合分子（例えば、ＴＢＭ）に関連して本明細書で使用されるとき、６つの抗原結合ドメインを有する抗原結合分子を指す。本開示の６価ＴＢＭは、概して、各々が同じ抗原に結合する３対の抗原結合ドメインを有するが、異なる形態（例えば、ＣＤ１９に結合する３つの抗原結合ドメイン、ＴＣＲ複合体の構成要素に結合する２つの抗原結合ドメイン及びＣＤ２又はＴＡＡに結合する１つの抗原結合ドメイン又はＣＤ１９に結合する３つの抗原結合ドメイン、ＣＤ２又はＴＡＡに結合する２つの抗原結合ドメイン及びＴＣＲ複合体の構成要素に結合する１つの抗原結合ドメイン）が本開示の範囲内にある。６価ＴＢＭの例は、図１Ｕ～図１Ｖに概略的に示される。
ホール：ノブ・イントゥ・ホールに関連して、「ホール」は、第１のＦｃ鎖の境界から陥凹しており、したがってＦｃヘテロ二量体を安定させ、それにより例えば、Ｆｃホモ二量体形成よりＦｃヘテロ二量体形成に有利に作用するように、第２のＦｃ鎖の隣接する境界における相補的な「ノブ」に位置決め可能である少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。
宿主細胞又は組み換え宿主細胞：「宿主細胞」又は「組み換え宿主細胞」という用語は、例えば、異種核酸の導入によって遺伝子組み換えされた細胞を指す。このような用語は、特定の対象の細胞だけでなく、このような細胞の子孫を指すことが意図されることが理解されるべきである。突然変異又は環境の影響のいずれかのため、ある修飾が後の世代において存在し得るため、このような子孫は、実際には親細胞と同一でないことがあり得るが、本明細書において使用される際の「宿主細胞」という用語の範囲内に依然として含まれる。宿主細胞は、例えば、染色体外異種発現ベクター上で一時的に又は例えば宿主細胞ゲノムへの異種核酸の統合によって安定的に異種核酸を保有し得る。抗原結合分子を発現する目的のために、宿主細胞は、サル腎臓細胞（ＣＯＳ、例えばＣＯＳ－１、ＣＯＳ－７）、ＨＥＫ２９３、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ、例えばＢＨＫ２１）、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＮＳＯ、ＰｅｒＣ６、ＢＳＣ－１、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、ＳＰ２／０、ＨｅＬａ、メイディン・ダービー・ウシ腎臓（ＭＤＢＫ）、骨髄腫及びリンパ腫細胞又はそれらの誘導体及び／若しくは改変変異体などの、哺乳動物由来又は哺乳動物様特性の細胞株であり得る。改変変異体としては、例えば、グリカンプロファイル修飾された及び／又は部位特異的統合部位誘導体が挙げられる。
ヒト抗体：本明細書において使用される際の「ヒト抗体」という用語は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方が、ヒト由来の配列に由来する可変領域を有する抗体を含む。更に、抗体が定常領域を含む場合、定常領域は、このようなヒト配列、例えばヒト生殖系列配列若しくは突然変異体のヒト生殖系列配列又は例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６，５７－８６に記載されているように、ヒトフレームワーク配列分析に由来する抗体含有コンセンサスフレームワーク配列にも由来する。免疫グロブリン可変ドメイン、例えばＣＤＲの構造及び位置は、周知の番号付けスキーム、例えばＫａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム又はＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの組み合わせを用いて定義され得る（例えば、Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２７３：９２７ ９４８；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２ Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３を参照されたい）。
ヒト抗体は、ヒト配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダム若しくは部位特異的突然変異又はインビボでの体細胞突然変異によって導入される突然変異又は安定性若しくは製造を促進するための保存的置換）を含み得る。しかしながら、本明細書において使用される際の「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳動物種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク配列上にグラフトされた抗体を含むことを意図されていない。
ヒト化：用語「ヒト化」形態の非ヒト（例えば、マウス）抗体とは、非ヒト免疫グロブリンに由来する配列を最小限のみ含むキメラ抗体である。大体において、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域の残基が、所望の特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域の残基に置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基が対応する非ヒト残基に置き換えられる。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体又はドナー抗体に見られない残基を含み得る。こうした修飾は、抗体の性能を更に洗練させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここでは超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、任意選択的に、典型的にはヒト免疫グロブリンの、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分も含むことになる。更なる詳細については、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９；及びＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３－５９６を参照されたい。以下のレビュー論文及びそこに引用されている文献も参照されたい：Ｖａｓｗａｎｉ ａｎｄ Ｈａｍｉｌｔｏｎ，１９９８，Ａｎｎ．Ａｌｌｅｒｇｙ，Ａｓｔｈｍａ＆Ｉｍｍｕｎｏｌ．１：１０５－１１５；Ｈａｒｒｉｓ，１９９５，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ２３：１０３５－１０３８；Ｈｕｒｌｅ ａｎｄ Ｇｒｏｓｓ，１９９４，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．５：４２８－４３３。
ノブ：ノブ・イントゥ・ホールに関連して、「ノブ」は、第１のＦｃ鎖の境界から突出し、したがってＦｃヘテロ二量体を安定させ、それにより例えばＦｃホモ二量体形成よりＦｃヘテロ二量体形成に有利に作用するように、第２のＦｃ鎖との境界における相補的な「ホール」に位置決め可能である少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。
ノブ及びホール（又はノブ・イントゥ・ホール）：Ｆｃヘテロ二量体化の１つの機構は、当技術分野において「ノブ及びホール」、又は「ノブ・イン・ホール」、又は「ノブ・イントゥ・ホール」と一般に呼ばれる。これらの用語は、例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（７）：６１７；Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６；及び米国特許第８，２１６，８０５号明細書に記載されるように、Ｆｃホモ二量体よりＦｃヘテロ二量体の形成に有利に作用するように立体的影響を生じるアミノ酸突然変異を指す。ノブ・イン・ホール突然変異は、例えば、第７．２．２．１．６節に記載されるように、ヘテロ二量体化を改善する他の手法と組み合わされ得る。
モノクローナル抗体：本明細書において使用される際の「モノクローナル抗体」という用語は、同じ遺伝源に由来する、抗体、抗体フラグメント、分子（ＭＢＭを含む）などを含むポリペプチドを指す。
１価：抗原結合分子に関連して本明細書において使用される際の「１価」という用語は、単一の抗原結合ドメインを有する抗原結合分子を指す。
多重特異性結合分子：用語「多重特異性結合分子」又は「ＭＢＭ」は、少なくとも２つの抗原に特異的に結合する分子であって、２つ以上の抗原結合ドメインを含む分子を指す。抗原結合ドメインは、各々が独立に、抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ナノボディ）、リガンド又は非抗体由来結合剤（例えば、フィブロネクチン、フィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒ）、ＤＡＲＰｉｎ）であり得る。
突然変異又は修飾：ポリペプチドの一次アミノ酸配列に関連して、「修飾」及び「突然変異」という用語は、参照ポリペプチドと比べた、ポリペプチド配列におけるアミノ酸置換、挿入及び／又は欠失を指す。更に、「修飾」という用語は、例えば、化学的コンジュゲーション（例えば、薬物又はポリエチレングリコール部分の）又は翻訳後修飾（例えば、グリコシル化）による、アミノ酸残基への改変を更に包含する。
核酸：「核酸」という用語は、「ポリヌクレオチド」という用語と同義的に本明細書において使用され、一本鎖又は二本鎖形態のいずれかのデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及びそれらのポリマーを指す。この用語は、合成、天然及び非天然であり、参照核酸と同様の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと同様に代謝される、公知のヌクレオチド類似体又は修飾された骨格残基又は連結を含む核酸を包含する。このような類似体の例としては、限定はされないが、ホスホロチオエート、ホスホロアミダート、メチルホスホネート、キラル－メチルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド及びペプチド－核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。
特に示されない限り、特定の核酸配列は、明示的に示された配列だけでなく、その核酸配列の保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換）及び相補配列も暗に包含する。具体的には、以下に詳述されるように、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの第３位が、混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８）。
作動可能に連結された：「作動可能に連結された」という用語は、２つ以上のペプチド又はポリペプチドドメイン又は核酸（例えば、ＤＮＡ）セグメント間の機能的関係を指す。融合タンパク質又は他のポリペプチドに関連して、「作動可能に連結された」という用語は、２つ以上のアミノ酸セグメントが機能的ポリペプチドを生成するように連結されることを意味する。例えば、抗原結合分子に関連して、別個のＡＢＭ（又はＡＢＭの鎖）がペプチドリンカー配列を介して作動可能に連結され得る。抗原結合分子のポリペプチド鎖などの、融合タンパク質をコードする核酸に関連して、「作動可能に連結された」は、２つの核酸が、２つの核酸によってコードされたアミノ酸配列がインフレームのままであるように結合されることを意味する。転写調節に関連して、この用語は、転写配列に対する転写調節配列の機能的関係を指す。例えば、プロモーター又はエンハンサー配列は、それが適切な宿主細胞又は他の発現系におけるコード配列の転写を刺激又は調節する場合、コード配列に作動可能に連結される。
５価：用語「５価」は、抗原結合分子（例えば、ＴＢＭ）に関連して本明細書で使用されるとき、５つの抗原結合ドメインを有する抗原結合分子を指す。本開示の５価ＴＢＭは、概して、（ａ）各々が同じ抗原に結合する２対の抗原結合ドメイン及び第３の抗原に結合する単一の抗原結合ドメイン、又は（ｂ）同じ抗原に結合する３つの抗原結合ドメイン及び各々が別個の抗原に結合する２つの抗原結合ドメインのいずれかを有する。５価ＴＢＭの例を図１Ｔに概略的に示す。
ポリペプチド及びタンパク質：「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すように本明細書において同義的に使用される。この用語は、１つ以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工的な化学的模倣体であるアミノ酸ポリマー並びに天然アミノ酸ポリマー及び非天然アミノ酸ポリマーを包含する。更に、この用語は、例えば、１つ以上の側鎖若しくは末端の合成誘導体化、グリコシル化、ＰＥＧ化、循環置換（ｃｉｒｃｕｌａｒ ｐｅｒｍｕｔａｔｉｏｎ）、環化、他の分子へのリンカー、タンパク質若しくはタンパク質ドメインへの融合及びペプチドタグ若しくは標識の付加によって誘導体化されるアミノ酸ポリマーを包含する。
認識する：本明細書において使用される際の「認識する」という用語は、そのエピトープを見つけ、それと相互作用する（例えば、結合する）ＡＢＭを指す。
配列同一性：２つの類似の配列（例えば、抗体可変ドメイン）間の配列同一性は、Ｓｍｉｔｈ、Ｔ．Ｆ．＆Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．（１９８１）“Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｏｆ Ｂｉｏｓｅｑｕｅｎｃｅｓ”，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２［局地的相同性アルゴリズム］；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ，Ｓ．Ｂ．＆Ｗｕｎｓｃｈ，ＣＤ．（１９７０）“Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｔｈｏｄ Ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ Ｔｏ ｔｈｅ Ｓｅａｒｃｈ Ｆｏｒ Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｉｅｓ Ｉｎ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｏｆ Ｔｗｏ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３［相同性アライメントアルゴリズム］、Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｗ．Ｒ．＆Ｌｉｐｍａｎ，Ｄ．Ｊ．（１９８８）“Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ Ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：２４４４［類似性の探索方法］；又はＡｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ，１９９０，“Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ“，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，“ＢＬＡＳＴ” ａｌｇｏｒｉｔｈｍ（ｂｌａｓｔ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉを参照されたい）のものなどのアルゴリズムによって測定され得る。上記のアルゴリズムのいずれかを使用する場合、デフォルトパラメータ（ウィンドウ長さ、ギャップペナルティなどの）が使用される。一実施形態において、配列同一性は、デフォルトパラメータを使用するＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して行われる。
任意選択的に、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（又はペプチド若しくはポリペプチドの場合、少なくとも約１０アミノ酸）の長さの領域又はある場合には１００～５００若しくは１０００又はそれを超えるヌクレオチド（又は２０、５０、２００若しくはそれを超えるアミノ酸）の長さの領域にわたって決定される。ある実施形態において、同一性は、規定されたドメイン、例えば抗体のＶＨ又はＶＬにわたって決定される。特に規定されない限り、２つの配列間の配列同一性は、２つの配列の短い方の全長にわたって決定される。
一本鎖Ｆａｂ又はｓｃＦａｂ：「一本鎖Ｆａｂ」及び「ｓｃＦａｂ」という用語は、ＶＨ及びＶＬが互いに会合され、ＣＨ１及びＣＬが互いに会合されるように、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及びリンカーを含むポリペプチドを意味する。ある実施形態において、抗体ドメイン及びリンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向への以下の順序の１つ：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１又はｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬを有する。リンカーは、少なくとも３０個のアミノ酸、例えば３２～５０個のアミノ酸のポリペプチドであり得る。一本鎖Ｆａｂは、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合によって安定化される。
単鎖Ｆｖ又はｓｃＦｖ：用語「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」は、本明細書で使用されるとき、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む抗体フラグメントを指し、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖に存在する。Ｆｖポリペプチドは更に、ＶＨとＶＬドメインとの間に、ｓｃＦｖが抗原結合に望ましい構造を形成することを可能にするポリペプチドリンカーを含むことができる。ｓｃＦｖのレビューについては、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，１９９４，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５を参照されたい。
特異的に（又は選択的に）結合する：抗原又はエピトープに「特異的に（又は選択的に）結合する」という用語は、タンパク質及び他の生物学的物質の異種集団中における同種抗原又はエピトープの存在を決定付ける結合反応を指す。この結合反応は、必須ではないが、抗体又は抗体フラグメントによって媒介され得るが、しかし、例えばリガンド、ＤＡＲＰｉｎなど、第７．２．１節に記載される任意の種類のＡＢＭによって媒介され得る。ＡＢＭは、典型的には、５×１０－２Ｍ未満、１０－２Ｍ未満、５×１０－３Ｍ未満、１０－３Ｍ未満、５×１０－４Ｍ未満、１０－４Ｍ未満、５×１０－５Ｍ未満、１０－５Ｍ未満、５×１０－６Ｍ未満、１０－６Ｍ未満、５×１０－７Ｍ未満、１０－７Ｍ未満、５×１０－８Ｍ未満、１０－８Ｍ未満、５×１０－９Ｍ未満又は１０－９Ｍ未満の解離速度定数（ＫＤ）（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）も有し、非特異的抗原（例えば、ＨＳＡ）に結合するためのその親和性より少なくとも２倍高い親和性で標的抗原に結合する。結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＳＰＲ又はＢＬＩアッセイを用いて測定され得る。「特異的に結合する」という用語は、異種間交差性を排除しない。例えば、１つの種からの抗原に「特異的に結合する」抗原結合モジュール（例えば、抗体の抗原結合フラグメント）は、１つ以上の他の種における該当する抗原にも「特異的に結合」し得る。したがって、このような異種間交差性自体は、「特異的な」結合剤として抗原結合モジュールの分類を変化させない。特定の実施形態において、ヒト抗原に特異的に結合する抗原結合モジュールは、１つ以上の非ヒト哺乳動物種、例えば霊長類種（カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）、アカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）及びブタオザル（Ｍａｃａｃａ ｎｅｍｅｓｔｒｉｎａ）の１つ以上を含むが、これらに限定されない）又はげっ歯類種、例えばハツカネズミ（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ）との異種間交差性を有する。他の実施形態において、抗原結合モジュールは、異種間交差性を有さない。
対象：「対象」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を含む。非ヒト動物は、全ての脊椎動物、例えば非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類及びは虫類などの哺乳動物及び非哺乳動物を含む。特記されない限り、「患者」又は「対象」という用語は、本明細書において同義的に使用される。
ＶＨドメインのタンデム：本明細書において使用される際の「ＶＨドメイン（又はＶＨ）のタンデム」という用語は、抗体の倍数の同一のＶＨドメインからなる一連のＶＨドメインを指す。ＶＨドメインのそれぞれは、タンデムの末端の最後の１つを除いて、リンカーあり又はなしで別のＶＨドメインのＮ末端に連結されたそのＣ末端を有する。タンデムは、少なくとも２つのＶＨドメインを有し、抗原結合モジュールの特定の実施形態において３、４、５、６、７、８、９又は１０個のＶＨドメインを有する。ＶＨのタンデムは、それらが単一のポリペプチド鎖として作製されることを可能にするリンカーあり又はなしの組み換え方法（例えば、第７．２．２．３節に記載されるように）を用いて、所望の順序で各ＶＨドメインのコード核酸を結合することによって生成され得る。タンデムの最初のＶＨドメインのＮ末端は、タンデムのＮ末端として定義される一方、タンデムの最後のＶＨドメインのＣ末端は、タンデムのＣ末端として定義される。
ＶＬドメインのタンデム：本明細書において使用される際の「ＶＬドメイン（又はＶＬ）のタンデム」という用語は、抗体の倍数の同一のＶＬドメインからなる一連のＶＬドメインを指す。ＶＬドメインのそれぞれは、タンデムの末端の最後の１つを除いて、リンカーあり又はなしで別のＶＬのＮ末端に連結されたそのＣ末端を有する。タンデムは、少なくとも２つのＶＬドメインを有し、抗原結合モジュールの特定の実施形態において３、４、５、６、７、８、９又は１０個のＶＬドメインを有する。ＶＬのタンデムは、それらが単一のポリペプチド鎖として作製されることを可能にするリンカーあり又はなしの組み換え方法（例えば、第７．２．２．３節に記載されるように）を用いて、所望の順序で各ＶＬドメインのコード核酸を結合することによって生成され得る。タンデムの最初のＶＬドメインのＮ末端は、タンデムのＮ末端として定義される一方、タンデムの最後のＶＬドメインのＣ末端は、タンデムのＣ末端として定義される。
標的抗原：本明細書において使用される際の「標的抗原」とは、抗原結合ドメインによって非共有結合的に、可逆的に及び特異的に結合される分子を意味する。
４価：用語「４価」は、抗原結合分子（例えば、ＢＢＭ又はＴＢＭ）に関連して本明細書で使用されるとき、４つの抗原結合ドメインを有する抗原結合分子を指す。本開示の４価ＴＢＭは、概して、同じ抗原（例えば、ＣＤ１９）に結合する２つの抗原結合ドメイン及び各々が別個の抗原（例えば、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡのいずれか）に結合する２つの抗原結合ドメインを有する。４価ＢＢＭの例が図１ＡＡ～図１ＡＨに概略的に示され、４価ＴＢＭの例が図２Ｑ～図２Ｓに概略的に示される。
治療有効量：「治療有効量」は、所望の治療結果を達成するのに必要な投与量及び期間での有効な量を指す。
治療する、治療、治療すること：本明細書で用いられるとき、「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、疾患若しくは障害（例えば、Ｂ細胞悪性腫瘍）の進行、重症度及び／若しくは持続期間の減少若しくは寛解又は１つ以上の抗ＣＤ１９剤の投与に起因する障害（例えば、ＣＲＳ）の１つ以上の症状（例えば、１つ以上の識別可能な症状）の進行、重症度及び／若しくは持続期間の寛解を指す。ある実施形態において、「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、必ずしも患者によって識別されない、腫瘍の成長などの疾患の少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善を指す。他の実施形態において、「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、例えば、識別可能な症状の安定化によって物理的に、例えば物理的パラメータの安定化によって生理学的に又はその両方のいずれかの疾患の進行の阻害を指す。一部の実施形態において、「治療する」、「治療」及び「治療すること」という用語は、腫瘍サイズ又は癌性細胞数の減少又は安定化を指し得る。
三重特異性結合分子：用語「三重特異性結合分子」又は「ＴＢＭ」は、３つの抗原に特異的に結合する分子であって、３つ以上の抗原結合ドメインを含む分子を指す。本開示のＴＢＭは、ＣＤ１９に特異的な少なくとも１つの抗原結合ドメインと、ＴＣＲ複合体の構成要素に特異的な少なくとも１つの抗原結合ドメインと、ＣＤ２又はＴＡＡに特異的な少なくとも１つの抗原結合ドメインとを含む。抗原結合ドメインは、各々が独立に、抗体フラグメント（例えば、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ナノボディ）、リガンド又は非抗体由来結合剤（例えば、フィブロネクチン、フィノマー（Ｆｙｎｏｍｅｒ）、ＤＡＲＰｉｎ）であり得る。代表的なＴＢＭを図１に例示する。ＴＢＭは、１、２、３、４つ又は更に多くのポリペプチド鎖を含み得る。例えば、図１Ｍに例示されるＴＢＭは、ＡＢＭリンカーによって連結された３つのｓｃＦｖを含む単一のポリペプチド鎖、１つの単一のポリペプチド鎖を含む。図１Ｋに例示されるＴＢＭは、とりわけ、Ｆｃドメインによって連結された３つのｓｃＦｖを含む２つのポリペプチド鎖を含む。図１Ｊに例示されるＴＢＭは、とりわけ、Ｆｃドメインによって連結された、ｓｃＦｖ、リガンド及びＦａｂを形成する３つのポリペプチド鎖を含む。図１Ｃに例示されるＴＢＭは、とりわけ、Ｆｃドメインによって連結された、３つのＦａｂを形成する４つのポリペプチド鎖を含む。図１Ｕに例示されるＴＢＭは、とりわけ、Ｆｃドメインによって連結された、４つのＦａｂ及び２つのｓｃＦｖを形成する６つのポリペプチド鎖を含む。
３価：用語「３価」は、抗原結合分子（例えば、ＭＢＭ）に関連して本明細書で使用されるとき、３つの抗原結合ドメインを有する抗原結合分子を指す。本開示のＭＢＭは、典型的には、二重特異性又は三重特異性である。二重特異性ＢＢＭは、ＣＤ１９及びＴＣＲ複合体の構成要素に特異的に結合する。三重特異性ＴＢＭは、ＣＤ１９、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡに特異的に結合する。したがって、３価ＢＢＭは３つの抗原結合ドメインを有し、その２つがＣＤ１９に結合し、その１つがＴＣＲの構成要素に結合するか又はその逆である。ＴＢＭは、各々が異なる抗原に結合する３つの抗原結合ドメインを有する。３価ＢＢＭの例は図１Ｇ～図１Ｚに概略的に示され、３価ＴＢＭの例は図２Ｂ～図２Ｖに概略的に示される。
腫瘍：「腫瘍」という用語は、本明細書において「癌」という用語と同義的に使用され、例えば、両方の用語は、液体、例えばびまん性又は循環腫瘍を包含する。
腫瘍関連抗原：用語「腫瘍関連抗原」又は「ＴＡＡ」は、癌細胞の表面に発現する分子（典型的にはタンパク質、炭水化物、脂質又はこれらの何らかの組み合わせ）の全体又はフラグメント（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）としてのいずれかであって、薬理学的作用剤を癌細胞へと優先的にターゲティングするのに有用な分子を指す。一部の実施形態において、ＴＡＡは、正常細胞及び癌細胞の両方に発現するマーカー、例えば系統マーカー、例えばＢ細胞上のＣＤ１９である。一部の実施形態において、ＴＡＡは、正常細胞と比較して癌細胞に過剰発現する、例えば正常細胞と比較して１倍の過剰発現、２倍の過剰発現、３倍の過剰発現又はそれを超えて過剰発現する細胞表面分子である。一部の実施形態において、ＴＡＡは、癌細胞で不適切に合成される細胞表面分子、例えば正常細胞に発現する分子と比較して欠失、付加又は突然変異を含む分子である。一部の実施形態において、ＴＡＡは、癌細胞の細胞表面にのみ、全体又はフラグメント（例えば、ＭＨＣ／ペプチド）としてのいずれかで発現することになり、正常細胞の表面において合成されないか又は発現しない。したがって、用語「ＴＡＡ」は、ときに腫瘍特異抗原（「ＴＳＡ」）と呼ばれることもある、癌細胞に特異的な抗原を包含する。ＣＤ１９は腫瘍関連抗原の特徴を有するが、用語「腫瘍関連抗原」及び「ＴＡＡ」は、本開示全体を通して、ＣＤ１９以外の分子を指して使用される。
可変領域：本明細書において使用される際の「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、それぞれκ、λ及び重鎖免疫グロブリン遺伝子座を構成するＶκ、Ｖλ及び／又はＶＨ遺伝子のいずれかによって実質的にコードされる１つ以上のＩｇドメインを含み、抗原特異性を付与するＣＤＲを含有する、免疫グロブリンの領域を意味する。「可変重鎖ドメイン」は、「可変軽鎖ドメイン」と対合して、抗原結合ドメイン（「ＡＢＤ」）又は抗原結合モジュール（「ＡＢＭ」）を形成し得る。更に、各可変ドメインは、以下の順序：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端まで配置された、３つの超可変領域（「相補性決定領域」、「ＣＤＲ」）（可変重鎖ドメインについてＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び可変軽鎖ドメインについてＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）及び４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。
ベクター：「ベクター」という用語は、それに連結された別のポリヌクレオチドを輸送することが可能なポリヌクレオチド分子を指すことが意図される。１つのタイプのベクターは、「プラスミド」であり、これは、更なるＤＮＡセグメントがその中にライゲートされ得る環状二本鎖ＤＮＡループを指す。別のタイプのベクターは、ウイルスベクターであり、更なるＤＮＡセグメントがウイルスゲノム中にライゲートされ得る。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自己複製が可能である（例えば、細菌複製起点及びエピソーム哺乳動物ベクターを有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞中への導入時、宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それにより宿主ゲノムに沿って複製される。更に、特定のベクターは、それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を誘導することが可能である。このようなベクターは、本明細書において「組み換え発現ベクター」（又は単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組み換えＤＮＡ技術において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。プラスミドがベクターの最も一般的に使用される形態であるため、本明細書において、「プラスミド」及び「ベクター」は、同義的に使用され得る。しかしながら、本開示は、同等の機能を果たすウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）などのこのような他の形態の発現ベクターを含むことが意図される。
ＶＨ：「ＶＨ」という用語は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ又はＦａｂの重鎖を含む、抗体の免疫グロブリン重鎖の可変領域を指す。
ＶＬ：「ＶＬ」という用語は、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ又はＦａｂの軽鎖を含む、免疫グロブリン軽鎖の可変領域を指す。
ＶＨ－ＶＬ又はＶＨ－ＶＬ対：ＶＨ－ＶＬ対を参照して、同じポリペプチド鎖上又は異なるポリペプチド鎖上に関わらず、「ＶＨ－ＶＬ」及び「ＶＨ－ＶＬ対」という用語は、便宜上、使用され、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、任意の特定の配向を示すことを意図されていない。したがって、「ＶＨ－ＶＬ」又は「ＶＨ－ＶＬ対」を含むｓｃＦｖは、例えば、ＶＨ Ｎ末端からＶＬ又はＶＬ Ｎ末端からＶＨへの任意の配向でＶＨ及びＶＬドメインを有し得る。
７．２．単一特異性及び多重特異性ＣＤ１９結合分子
いくつかの態様では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される抗ＣＤ１９剤は、ヒトＣＤ１９に結合する単一特異性分子である。例えば、単一特異性結合分子は、抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２又は単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）であり得る。代わりに、ＣＤ１９結合分子は、多重特異性分子、例えば二重特異性又は三重特異性結合分子であり得る。
いくつかの態様では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される抗ＣＤ１９剤は、ヒトＣＤ１９に結合する単一特異性分子である。例えば、単一特異性結合分子は、抗体又はその抗原結合フラグメント（例えば、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２又は単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）であり得る。代わりに、ＣＤ１９結合分子は、多重特異性分子、例えば二重特異性又は三重特異性結合分子であり得る。
ある実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、キメラ又はヒト化モノクローナル抗体である。キメラ及び／又はヒト化抗体は、非ヒト対象において産生されるか又は非ヒト抗体遺伝子の発現から得られる抗体に対するヒト患者による免疫応答を最小限に抑えるように操作され得る。キメラ抗体は、非ヒト動物抗体可変領域及びヒト抗体定常領域を含む。このような抗体は、元のモノクローナル抗体のエピトープ結合特異性を保持するが、ヒトに投与される場合、免疫抗原性が低くなり得るため、患者に忍容される可能性がより高い。例えば、マウス抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）の軽鎖の可変領域の１つ又は全て（例えば、１つ、２つ又は３つ）及び／又は重鎖の可変領域の１つ又は全て（例えば、１つ、２つ又は３つ）は、限定はされないが、それぞれＩｇＧ１ヒト定常領域などのヒト定常領域に結合され得る。キメラモノクローナル抗体は、公知の組み換えＤＮＡ技術によって産生され得る。例えば、非ヒト抗体分子の定常領域をコードする遺伝子が、ヒト定常領域をコードする遺伝子で置換され得る（ＲｏｂｉｎｓｏｎらのＰＣＴ特許公報ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号明細書；Ａｋｉｒａらの欧州特許出願第１８４，１８７号明細書；又はＴａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．の欧州特許出願第１７１，４９６号明細書を参照されたい）。更に、キメラ抗体を生成するのに使用され得る他の好適な技術は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；同第４，９７８，７７５号明細書；同第４，９７５，３６９号明細書；及び同第４，８１６，３９７号明細書に記載されている。
キメラ又はヒト化抗体及びその抗原結合フラグメントが、マウスモノクローナル抗体の配列に基づいて調製され得る。重鎖及び軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡは、対象とするマウスハイブリドーマから得られ、標準的な分子生物学技術を用いて非マウス（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含むように操作され得る。例えば、キメラ抗体を生成するために、マウス可変領域は、公知の方法を用いてヒト定常領域に連結され得る（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらに付与された米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい）。ヒト化抗体を生成するために、マウスＣＤＲ領域は、公知の方法を用いてヒトフレームワークに挿入され得る。例えば、Ｗｉｎｔｅｒに付与された米国特許第５，２２５，５３９号明細書並びにＱｕｅｅｎらに付与された米国特許第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書及び同第６１８０３７０号明細書を参照されたい。
ヒト化抗体は、ＣＤＲグラフティング（例えば、欧州特許第２３９，４００号明細書；国際公開番号国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第５，２２５，５３９号明細書、同第５，５３０，１０１号明細書及び同第５，５８５，０８９号明細書を参照されたい）、ベニヤリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又はリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（例えば、欧州特許第５９２，１０６号明細書及び欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５－８１４；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，ＰＮＡＳ，９１：９６９－９７３を参照されたい）、チェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号明細書を参照されたい）並びに例えば米国特許出願公開第２００５／００４２６６４号明細書、米国特許出願公開第２００５／００４８６１７号明細書、米国特許第６，４０７，２１３号明細書、米国特許第５，７６６，８８６号明細書、国際公開番号国際公開第９３１７１０５号パンフレット、Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６９：１１１９－２５（２００２）、Ｃａｌｄａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，１３（５）：３５３－６０（２０００）、Ｍｏｒｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０（３）：２６７－７９（２０００）、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７２（１６）：１０６７８－８４（１９９７）、Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，９（１０）：８９５－９０４（１９９６）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５（２３ Ｓｕｐｐ）：５９７３ｓ－５９７７ｓ（１９９５）、Ｃｏｕｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５（８）：１７１７－２２（１９９５）、Ｓａｎｄｈｕ Ｊ Ｓ，Ｇｅｎｅ，１５０（２）：４０９－１０（１９９４）及びＰｅｄｅｒｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２３５（３）：９５９－７３（１９９４）に開示される技術を含むが、これらに限定されない様々な公知の技術を用いて産生され得る。多くの場合、フレームワーク領域中のフレームワーク残基は、抗原結合を改変する、例えば改善するために、ＣＤＲドナー抗体に由来する対応する残基で置換される。これらのフレームワーク置換、例えば保存的置換が、周知の方法により、例えば抗原結合に重要なフレームワーク残基を同定するためのＣＤＲとフレームワーク残基との相互作用のモデリング及び特定の位置における異常なフレームワークを同定するための配列比較によって同定される。（例えば、Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５，５８５，０８９号明細書；及びＲｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３を参照されたい）。
本明細書において提供されるように、ヒト化抗体又は抗体フラグメントは、非ヒト免疫グロブリン分子からの１つ以上のＣＤＲ及びフレームワーク領域を含み得、フレームワークを含むアミノ酸残基は、生殖系列に完全に又は大部分が由来する。抗体又は抗体フラグメントのヒト化のための複数の技術が周知であり、Ｗｉｎｔｅｒ及び協同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４－１５３６（１９８８））に従い、げっ歯類ＣＤＲ又はヒト抗体の対応する配列についてのＣＤＲ配列を置換すること、すなわちＣＤＲグラフティング（欧州特許第２３９，４００号明細書；ＰＣＴ公開番号国際公開第９１／０９９６７号パンフレット；及び米国特許第４，８１６，５６７号明細書；同第６，３３１，４１５号明細書；同第５，２２５，５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；同第６，５４８，６４０号明細書）によって実質的に行われ得る。このようなヒト化抗体及び抗体フラグメントにおいて、無傷のヒト可変ドメインより実質的に少ない部分が、非ヒト種からの対応する配列で置換されている。ヒト化抗体は、いくつかのＣＤＲ残基及び場合によりいくつかのフレームワーク（ＦＲ）残基がげっ歯類抗体の類似の部位からの残基で置換されたヒト抗体であることが多い。抗体及び抗体フラグメントのヒト化は、ベニヤリング又はリサーフェイシング（欧州特許第５９２，１０６号明細書；欧州特許第５１９，５９６号明細書；Ｐａｄｌａｎ，１９９１，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２８（４／５）：４８９－４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，７（６）：８０５－８１４（１９９４）；及びＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，９１：９６９－９７３（１９９４））又はチェーンシャッフリング（米国特許第５，５６５，３３２号明細書）によっても達成され得る。
ヒト化抗体を作製するのに使用される、軽鎖及び重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性を低下させることになる。いわゆる「最良適合（ｂｅｓｔ－ｆｉｔ）」法に従い、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列は、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対してスクリーニングされる。次に、げっ歯類の配列に最も近いヒト配列が、ヒト化抗体のためのヒトフレームワーク（ＦＲ）として容認される（Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。別の方法は、軽鎖又は重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。同じフレームワークが、いくつかの異なるヒト化抗体に使用され得る（例えば、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５（１９９７）；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい。ある実施形態において、フレームワーク領域、例えば重鎖可変領域の全ての４つのフレームワーク領域は、ＶＨ４＿４－５９生殖系列配列に由来する。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列におけるアミノ酸からの１、２、３、４又は５つの修飾、例えば置換、例えば保存的置換を含み得る。一実施形態において、フレームワーク領域、例えば軽鎖可変領域の全ての４つのフレームワーク領域は、ＶＫ３＿１．２５生殖系列配列に由来する。一実施形態において、フレームワーク領域は、例えば、対応するマウス配列におけるアミノ酸からの１、２、３、４又は５つの修飾、例えば置換、例えば保存的置換を含み得る。
特定の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、特定の生殖系列重鎖免疫グロブリン遺伝子からの重鎖可変領域及び／又は特定の生殖系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子からの軽鎖可変領域を含む。例えば、このような抗体は、特定の生殖系列配列「の産物」であるか又は「に由来する」重鎖又は軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含むか又はそれからなり得る。生殖系列免疫グロブリン配列「の産物」であるか又は「に由来する」ヒト抗体は、ヒト抗体のアミノ酸配列を、生殖系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、（本明細書に概説される方法を用いて）ヒト抗体の配列と配列が最も近い（すなわち最も高い同一性％）生殖系列免疫グロブリン配列を選択することなどによって同定され得る。特定の生殖系列免疫グロブリン配列「の産物」であるか又は「に由来する」ヒト抗体は、例えば、天然の体細胞突然変異又は部位特異的突然変異の意図的な導入のため、生殖系列配列と比較してアミノ酸差を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、典型的には、アミノ酸配列が、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であり、他の種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖系列配列）と比較した際に、ヒト配列に由来するものとして抗体を同定するアミノ酸残基を含む。ある場合には、ヒト化抗体は、アミノ酸配列が、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と少なくとも９５、９６、９７、９８若しくは９９％又は少なくとも９６％、９７％、９８％若しくは９９％同一であり得る。典型的には、特定の生殖系列配列に由来するヒト化抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列との１０～２０以下のアミノ酸差を示す（本明細書における任意の歪曲（ｓｋｅｗ）、ｐＩ及び除去（ａｂｌａｔｉｏｎ）変異の導入の前；すなわち、変異の数は、本開示の変異の導入の前、一般に少ない）。ある場合には、ヒト化抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と５以下又は４、３、２若しくは１以下のアミノ酸差を示し得る（やはり、本明細書における任意の歪曲、ｐＩ及び除去変異の導入の前；すなわち、変異の数は、本開示の変異の導入の前、一般に少ない）。
一実施形態において、親抗体は、親和性成熟されている。例えば、米国特許出願第１１／００４，５９０号明細書に記載されるように、構造に基づく方法が、ヒト化及び親和性成熟に用いられ得る。Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１５１－１６２；Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（１６）：１０６７８－１０６８４；Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１－２２６１８；Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：８９１０－８９１５；Ｋｒａｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １６（１０）：７５３－７５９に記載される方法を含むが、これらに限定されない選択に基づく方法が、抗体可変領域をヒト化し、且つ／又は親和性成熟させるのに用いられ得る。米国特許第０９／８１０，５１０号明細書；Ｔａｎ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－１１２５；Ｄｅ Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６－３０８４に記載される方法を含むが、これらに限定されない他のヒト化方法は、ＣＤＲの一部のみをグラフトすることを含み得る。
ある実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ＦａｂであるＡＢＭを含む。Ｆａｂドメインは、パパインなどの酵素を用いた免疫グロブリン分子のタンパク質分解的切断又は組み換え発現によって産生され得る。Ｆａｂドメインは、典型的には、ＶＬドメインに結合されたＣＬドメインと対合するＶＨドメインに結合されたＣＨ１ドメインを含む。野生型免疫グロブリンにおいて、ＶＨドメインは、ＶＬドメインと対合して、Ｆｖ領域を構成し、ＣＨ１ドメインは、ＣＬドメインと対合して、結合モジュールを更に安定させる。２つの定常ドメイン間のジスルフィド結合は、Ｆａｂドメインを更に安定させ得る。
ある実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ｓｃＦａｂであるＡＢＭを含む。一実施形態において、ｓｃＦａｂフラグメント中の抗体ドメイン及びリンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向への以下の順序の１つ：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、又はｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１を有する。ある場合には、ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１が使用される。
別の実施形態において、ｓｃＦａｂフラグメント中の抗体ドメイン及びリンカーは、Ｎ末端からＣ末端方向への以下の順序の１つ：ａ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１又はｂ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬを有する。
任意選択的に、ｓｃＦａｂフラグメントにおいて、ＣＬ－ドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合に加えて、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、以下の位置：ｉ）重鎖可変ドメイン４４位と軽鎖可変ドメイン１００位、ｉｉ）重鎖可変ドメイン１０５位と軽鎖可変ドメイン４３位、又はｉｉｉ）重鎖可変ドメイン１０１位と軽鎖可変ドメイン１００位（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付け）との間のジスルフィド結合の導入によってもジスルフィド安定化される。
ｓｃＦａｂフラグメントのこのような更なるジスルフィド安定化は、一本鎖Ｆａｂフラグメントの可変ドメインＶＨ及びＶＬ間のジスルフィド結合の導入によって達成される。一本鎖Ｆｖの安定化のための非天然ジスルフィド架橋を導入するための技術は、例えば、国際公開第９４／０２９３５０号パンフレット、Ｒａｊａｇｏｐａｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｉｎ．１０：１４５３－５９；Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ＆Ｂｉｏｌｏｇｙ，２５：３８７－３９３；及びＳｃｈｍｉｄｔ，ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １８：１７１１－１７２１に記載されている。一実施形態において、ｓｃＦａｂフラグメントの可変ドメイン間の任意選択のジスルフィド結合は、重鎖可変ドメイン４４位と軽鎖可変ドメイン１００位との間にある。一実施形態において、ｓｃＦａｂフラグメントの可変ドメイン間の任意選択のジスルフィド結合は、重鎖可変ドメイン１０５位と軽鎖可変ドメイン４３位との間にある（ＫａｂａｔのＥＵインデックスによる番号付け）。
ある実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ｓｃＦｖであるＡＢＭを含む。一本鎖Ｆｖ抗体フラグメントは、単一のポリペプチド鎖中の抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含み、一本鎖ポリペプチドとして発現されることが可能であり、それが由来する無傷の抗体の特異性を保持する。一般に、ｓｃＦｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが標的結合のための所望の構造を形成することを可能にするＶＨ及びＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーを更に含む。ｓｃＦＶのＶＨ及びＶＬ鎖を連結するのに好適なリンカーの例は、第７．２．２．３節において特定されるＡＢＭリンカー、例えばＬ１～Ｌ５８として示されるリンカーのいずれかである。
規定されない限り、本明細書において使用される際、ｓｃＦｖは、例えば、ポリペプチドのＮ末端及びＣ末端に関して、いずれかの順序でＶＬ及びＶＨ可変領域を有し得、ｓｃＦｖは、ＶＬ－リンカー－ＶＨを含み得るか又はＶＨ－リンカー－ＶＬを含み得る。
ｓｃＦｖコード核酸を生成するために、ＶＨ及びＶＬコードＤＮＡフラグメントは、リンカーをコードする、例えば第７．２．２．３節に記載されるリンカーのいずれか（アミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３（配列番号１１７４）など）をコードする別のフラグメントに作動可能に連結され、ＶＬ及びＶＨ領域が可撓性リンカーによって結合された状態で、ＶＨ及びＶＬ配列が、連続した一本鎖タンパク質として発現され得るようになっている（例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４を参照されたい）。
ＣＤ１９結合分子は、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄ）ＶＨＨドメイン（ナノボディとも呼ばれる）であるＡＢＭも含み得る。
ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９に対する十分な親和性を示す単一のＶＨ又はＶＬドメインから構成される単一ドメイン抗体を含み得る。一実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ科ＶＨＨドメインである（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：２５－３８；国際公開第９４／０４６７８号パンフレットを参照されたい）。
表１Ａ～１Ｃ（まとめて「表１」）は、ＣＤ１９結合分子中に含まれ得る例示的なＣＤ１９結合配列の配列を列記する。
表１Ａに記載される配列は、ＣＤ１９抗体ＮＥＧ２５８に基づく。
一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、表１Ａに記載されるＮＥＧ２５８のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含む。ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列は、Ｋａｂａｔ（それぞれ配列番号１７～１９及び４～６）、Ｃｈｏｔｈｉａ（それぞれ配列番号２０～２２及び７～９）、又はＩＭＧＴ（それぞれ配列番号２３～２５及び１０～１２）、又はＣｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔの組み合わせのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列（それぞれ配列番号１４～１６及び１～３）によって定義されるとおりであり得る。ＣＤ１９結合分子は、表１Ａに記載される抗ＣＤ１９抗体ＮＥＧ２５８の軽鎖可変配列（配列番号２６）及び／又は重鎖可変配列（配列番号１３）も含み得る。
表１Ｂに記載される配列は、ＣＤ１９抗体ＮＥＧ２１８をベースとする。
一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｂに記載されるＮＥＧ２１８のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含む。ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列は、Ｋａｂａｔ（それぞれ配列番号４３～４５及び３０～３２）、Ｃｈｏｔｈｉａ（それぞれ配列番号４６～４８及び３３～３５）、又はＩＭＧＴ（それぞれ配列番号４９～５１及び３６～３８）、又はＣｈｏｔｈｉａ及びＫａｂａｔの組み合わせのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３配列（それぞれ配列番号４０～４２及び２７～２９）によって定義されるとおりであり得る。ＣＤ１９結合分子は、表１Ｂに記載される抗ＣＤ１９抗体ＮＥＧ２１８の軽鎖可変配列（配列番号５２）及び／又は重鎖可変配列（配列番号３９）も含み得る。
表１Ａ及び表１Ｂに記載されるＣＤＲ配列を有する例示的なＣＤ１９結合分子は、表２０Ａ－１～表２０Ｄに提供される。
更に、ＣＤ１９結合分子中に組み込むことができる例示的なＣＤＲ及び可変ドメイン配列が表１Ｃに記載される。
特定の態様では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ａ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＡのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＡのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
他の態様では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｂ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＢのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
更なる態様では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｃ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＣのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
更なる態様では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｄ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＤのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む。
更なる態様では、ＣＤ１９結合分子は、ｓｃＦＶの形態である。例示的な抗ＣＤ１９ ｓｃＦｖは、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１～ＣＤ１９－ｓｃＦｖ１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。
他のＣＤ１９結合分子は、突然変異しているが、ＣＤＲ領域において、表１に記載されるＣＤＲ配列と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセントの同一性を有するアミノ酸を含む。ある実施形態において、このようなＣＤ１９結合分子は、１、２、３、４又は５つ以下のアミノ酸が、表１に記載されるＣＤＲ配列と比較した際に、ＣＤＲ領域において突然変異されている、突然変異アミノ酸配列を含む。
他のＣＤ１９結合分子は、表１に記載されるＶＨ及び／又はＶＬ配列と少なくとも８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９パーセントの同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む。ある実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、１、２、３、４又は５つ以下のアミノ酸が、実質的に同じ治療活性を保持しながら、表１に記載される配列に示されるＶＨ及び／又はＶＬドメインと比較した際に突然変異されている、ＶＨ及び／又はＶＬドメインを含む。
更なるＣＤ１９結合分子は、遺伝子－シャッフリング、モチーフ－シャッフリング、エクソン－シャッフリング及び／又はコドン－シャッフリング（まとめて「ＤＮＡシャッフリング」と呼ばれる）の技術によって生成され得る。ＤＮＡシャッフリングは、本開示の分子又はそのフラグメント（例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する分子又はそのフラグメント）の活性を改変するのに用いられ得る。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号明細書、同第５，８１１，２３８号明細書、同第５，８３０，７２１号明細書、同第５，８３４，２５２号明細書及び同第５，８３７，４５８号明細書；Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３；Ｈａｒａｙａｍａ，１９９８，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８２；Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５－７６；及びＬｏｒｅｎｚｏ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｏ，１９９８，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２４（２）：３０８－３１３を参照されたい。本明細書に記載されるＣＤ１９結合分子又はそのフラグメントは、組み換えの前に、エラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入又は他の方法によるランダム突然変異誘発にかけられることによって改変され得る。本明細書に記載されるＣＤ１９結合分子のフラグメントをコードするポリヌクレオチドが、１つ以上の異種分子の１つ以上の構成要素、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、フラグメントなどと組み換えられ得る。
更に、ＣＤ１９結合分子は、精製を容易にするために、ペプチドなどのマーカー配列に融合され得る。ある実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、中でも特に、ｐＱＥベクターにおいて提供されるタグ（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）などのヘキサヒスチジンペプチド（配列番号１２５３）であり、それらの多くは市販されている。Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：８２１－８２４に記載されるように、例えば、ヘキサヒスチジン（配列番号１２５３）は、融合タンパク質の好都合な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定はされないが、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質に由来するエピトープに相当する赤血球凝集素（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７：７６７）及び「フラッグ（ｆｌａｇ）」タグが挙げられる。
様々な他のＣＤ１９結合分子であって、それらの一部が単一特異性であり、且つそれらの一部が多重特異性であるＣＤ１９結合分子は、当技術分野で公知であり、本開示の方法及び組み合わせにおいても用いることができる。例えば、国際公開第２０１４／０３１６８７号パンフレット；国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレット；国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット；米国特許第７，７４１，４６５号明細書；Ｎａｄｄａｆｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｍｅｄ．４（３）：１４３－１５１；及びＨａｍｍｅｒ，２０１２，ＭＡｂｓ．４（５）：５７１－５７７を参照されたい（それらの内容は参照により本明細書に組み込まれる）。特定の実施形態では、ＣＤ１９結合分子は、ブリナツモマブ（Ａｍｇｅｎ）、コルツキシマブラブタンシン（Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ）、ＭＯＲ２０８（ＸｍＡｂ－５５７４とも呼ばれる；Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）、ＭＥＤＩ－５５１（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、デニンツズマブマホドチン（ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａとも呼ばれる；Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＤＩ－Ｂ４（Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ）、タプリツモマブパプトクス（国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ））、ＸｍＡｂ５８７１（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＭＤＸ－１３４２（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ）、ＭＤＸ－１３４２（ＢＭＳ）、ロンカスツキシマブテシリン（ＡＤＣ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）又はＧＢＲ４０１（Ｇｌｅｎｍａｒｋ）である。
７．２．１．多重特異性結合分子の抗原結合モジュール
いくつかの態様では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される分子の１つ以上は、多重特異性結合分子である。例えば、ＣＤ１９結合分子は、いくつかの実施形態において、多重特異性結合分子（ＭＢＭ）、例えば二重特異性結合分子（ＢＢＭ）又は三重特異性結合分子（ＴＢＭ）であり得る。典型的には、ＭＢＭの１つ以上のＡＢＭは、免疫グロブリンベースの抗原結合ドメイン、例えば抗体フラグメントの配列又は誘導体を含む。これらの抗体フラグメント及び誘導体は、典型的には、抗体のＣＤＲを含み、より大きいフラグメント及びその誘導体、例えばＦａｂ、ｓｃＦａｂ、Ｆｖ及びｓｃＦｖを含み得る。
いくつかの態様では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される分子の１つ以上は、多重特異性結合分子である。例えば、ＣＤ１９結合分子は、いくつかの実施形態において、多重特異性結合分子（ＭＢＭ）、例えば二重特異性結合分子（ＢＢＭ）又は三重特異性結合分子（ＴＢＭ）であり得る。典型的には、ＭＢＭの１つ以上のＡＢＭは、免疫グロブリンベースの抗原結合ドメイン、例えば抗体フラグメントの配列又は誘導体を含む。これらの抗体フラグメント及び誘導体は、典型的には、抗体のＣＤＲを含み、より大きいフラグメント及びその誘導体、例えばＦａｂ、ｓｃＦａｂ、Ｆｖ及びｓｃＦｖを含み得る。
免疫グロブリンベースのＡＢＭは、例えばそのＡＢＭを含むＭＢＭの特性を改善するため、ＶＨ及び／又はＶＬ内のフレームワーク残基に修飾を含み得る。例えば、ＭＢＭの免疫原性を低下させるためにフレームワーク修飾が行われ得る。このようなフレームワーク修飾を行う１つの手法は、ＡＢＭの１つ以上のフレームワーク残基を対応する生殖細胞系列配列に「復帰突然変異」させることである。このような残基は、そのＡＢＭが由来する生殖細胞系列配列とフレームワーク配列を比較することによって同定し得る。フレームワーク領域配列を所望の生殖細胞系列形態に「マッチ」させるため、例えば部位特異的突然変異誘発により、残基を対応する生殖細胞系列配列に「復帰突然変異」させることができる。このような「復帰突然変異」したＡＢＭを有するＭＢＭは、本開示に包含されるものと意図される。
別の種類のフレームワーク修飾には、フレームワーク領域内又は更に１つ以上のＣＤＲ領域内の１つ以上の残基を突然変異させてＴ細胞エピトープを除去し、それによりＭＢＭの潜在的な免疫原性を低下させることが関わる。この手法は「脱免疫化」とも称され、Ｃａｒｒ ｅｔ ａｌ．による米国特許出願公開第２００３０１５３０４３号明細書に更に詳細に記載されている。
ＡＢＭは、グリコシル化の改変を呈するようにも修飾され得、これは、例えば、ＭＢＭのその抗原の１つ以上に対する親和性を増加させるのに有用であり得る。このような炭水化物修飾は、例えば、ＡＢＭ配列内の１つ以上のグリコシル化部位を改変することにより達成し得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークグリコシル化部位の消失をもたらし、それによりその部位のグリコシル化をなくす１つ以上のアミノ酸置換を行うことができる。このような脱グリコシル化により、ＭＢＭの抗原に対する親和性が増加し得る。このような手法については、例えば、Ｃｏ ｅｔ ａｌ．による米国特許第５，７１４，３５０号明細書及び同第６，３５０，８６１号明細書に記載されている。
７．２．１．１．免疫グロブリンベースのＡＢＭ
７．２．１．１．１．Ｆａｂ
特定の態様において、ＡＢＭは、Ｆａｂドメインである。
７．２．１．１．１．Ｆａｂ
特定の態様において、ＡＢＭは、Ｆａｂドメインである。
本開示のＭＢＭの場合、同じＡＢＭに属するＦａｂドメインの正確な会合を可能にし、異なるＡＢＭに属するＦａｂドメインの異常な対合を最小化するためのＦａｂヘテロ二量体化手法を用いることが有利である。例えば、以下の表２に示されるＦａｂヘテロ二量体化手法を用いることができる。
したがって、特定の実施形態において、Ｆａｂの２つのポリペプチド間の適切な会合は、例えば、国際公開第２００９／０８０２５１号パンフレットに記載されるようにＦａｂのＶＬ及びＶＨドメインを互いに交換するか、又はＣＨ１及びＣＬドメインを互いに交換することにより促進される。
適切なＦａｂ対合は、１つ以上のアミノ酸修飾をＣＨ１ドメイン中に及び１つ以上のアミノ酸修飾をＦａｂのＣＬドメイン中に導入し、且つ／又は１つ以上のアミノ酸修飾をＶＨドメイン中に及び１つ以上のアミノ酸修飾をＶＬドメイン中に導入することによっても促進され得る。Ｆａｂ構成要素が他のＦａｂの構成要素とよりも互いと優先的に対合するように、修飾されるアミノ酸は、典型的には、ＶＨ：ＶＬ及びＣＨ１：ＣＬ境界の一部である。
一実施形態において、１つ又はアミノ酸修飾は、残基のＫａｂａｔ番号付けによって示されるように、可変（ＶＨ、ＶＬ）及び定常（ＣＨ１、ＣＬ）ドメインの保存されたフレームワーク残基に限定される。Ａｌｍａｇｒｏ，２００８，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ Ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３：１６１９－１６３３には、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴ番号付けスキームに基づいたフレームワーク残基の定義が提供される。
一実施形態において、ＶＨ及びＣＨ１及び／又はＶＬ及びＣＬドメイン中に導入される修飾は、互いに相補的である。重鎖及び軽鎖境界における相補性は、立体及び疎水性接触、静電／電荷相互作用又は様々な相互作用の組み合わせに基づいて達成され得る。タンパク質表面間の相補性は、ロック・アンド・キー嵌合、ノブ・イントゥ・ホール、突起及び空洞、ドナー及びアクセプターなどに関して文献に広く記載されており、これらは、全て２つの相互作用する表面間の構造的及び化学的マッチの性質を示唆している。
一実施形態において、１つ以上の導入される修飾は、Ｆａｂ構成要素の境界にわたる新たな水素結合を導入する。一実施形態において、１つ以上の導入される修飾は、Ｆａｂ構成要素の境界にわたる新たな塩架橋を導入する。例示的な置換は、国際公開第２０１４／１５０９７３号パンフレット及び国際公開第２０１４／０８２１７９号パンフレットに記載されている。
ある実施形態において、Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメイン中の１９２Ｅ置換並びにＣＬドメイン中の１１４Ａ及び１３７Ｋ置換を含み、これは、ＣＨ１及びＣＬドメイン間に塩架橋を導入する（Ｇｏｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９６：３１９９－２１１を参照されたい）。
ある実施形態において、Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメイン中の１４３Ｑ及び１８８Ｖ置換並びにＣＬドメイン中の１１３Ｔ及び１７６Ｖ置換を含み、これは、ＣＨ１及びＣＬドメイン間の疎水性及び極性接触領域を入れ替える役割を果たす（Ｇｏｌａｙ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９６：３１９９－２１１を参照されたい）。
ある実施形態において、Ｆａｂドメインは、Ｆａｂドメインの適切な集合を促進する直交Ｆａｂ境界を導入するためにＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、ＣＬドメインのいくつか又は全てにおける修飾を含み得る（Ｌｅｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１４ Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３２：１９１－１９８）。一実施形態において、３９Ｋ、６２Ｅ修飾がＶＨドメイン中に導入され、Ｈ１７２Ａ、Ｆ１７４Ｇ修飾がＣＨ１ドメイン中に導入され、１Ｒ、３８Ｄ、（３６Ｆ）修飾がＶＬドメイン中に導入され、Ｌ１３５Ｙ、Ｓ１７６Ｗ修飾がＣＬドメイン中に導入される。別の実施形態において、３９Ｙ修飾がＶＨドメイン中に導入され、３８Ｒ修飾がＶＬドメイン中に導入される。
Ｆａｂドメインは、天然ＣＨ１：ＣＬジスルフィド結合を改変ジスルフィド結合で置換するようにも修飾されて、それによりＦａｂ構成要素対合の効率を高め得る。例えば、改変ジスルフィド結合は、１２６ＣをＣＨ１ドメイン中に且つ１２１ＣをＣＬドメイン中に導入することによって導入され得る（Ｍａｚｏｒ ｅｔ ａｌ．，２０１５，ＭＡｂｓ ７：３７７－８９を参照されたい）。
Ｆａｂドメインは、ＣＨ１ドメイン及びＣＬドメインを、適切な集合を促進する別のドメインで置換することによっても修飾され得る。例えば、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，２０１５，ＭＡｂｓ ７：３６４－７６には、α Ｔ細胞受容体のＣＨ１ドメインを定常ドメインで置換すること及びＴ細胞受容体のＣＬドメインをβドメインで置換すること並びに３８Ｄ修飾をＶＬドメイン中に及び３９Ｋ修飾をＶＨドメイン中に導入することにより、ＶＬ及びＶＨドメイン間の更なる電荷間相互作用とこれらのドメイン置換とを組み合わせることが記載されている。
ＡＢＭは、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、抗体定常ドメイン１（ＣＨ１）、抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）、抗体軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及びリンカーからなるポリペプチドである単鎖Ｆａｂフラグメントを含み得る。一部の実施形態において、抗体ドメイン及びリンカーは、Ｎ末端からＣ末端の向きに、以下の順番の１つを有する：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、ｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１、ｃ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１又はｄ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬ。リンカーは、少なくとも３０アミノ酸、例えば３２～５０アミノ酸のポリペプチドであり得る。単鎖Ｆａｂドメインは、ＣＬドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合によって安定化する。
ある実施形態において、単鎖Ｆａｂフラグメントの抗体ドメイン及びリンカーは、Ｎ末端からＣ末端の向きに、以下の順番の１つを有する：ａ）ＶＨ－ＣＨ１－リンカー－ＶＬ－ＣＬ、又はｂ）ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１。ある場合には、ＶＬ－ＣＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＨ１が用いられる。
別の実施形態において、単鎖Ｆａｂフラグメントの抗体ドメイン及びリンカーは、Ｎ末端からＣ末端の向きに、以下の順番の１つを有する：ａ）ＶＨ－ＣＬ－リンカー－ＶＬ－ＣＨ１又はｂ）ＶＬ－ＣＨ１－リンカー－ＶＨ－ＣＬ。
任意選択的に単鎖Ｆａｂフラグメントにおいて、ＣＬ－ドメインとＣＨ１ドメインとの間の天然ジスルフィド結合に加えて、抗体重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び抗体軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）ＡＢＭは、以下の位置間へのジスルフィド結合の導入によってもジスルフィド安定化される：ｉ）重鎖可変ドメイン４４位から軽鎖可変ドメイン１００位、ｉｉ）重鎖可変ドメイン１０５位から軽鎖可変ドメイン４３位、又はｉｉｉ）重鎖可変ドメイン１０１位から軽鎖可変ドメイン１００位（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）。
一実施形態において、単鎖Ｆａｂフラグメントの可変ドメイン間の任意選択のジスルフィド結合は、重鎖可変ドメイン４４位と軽鎖可変ドメイン１００位との間にある。一実施形態において、単鎖Ｆａｂフラグメントの可変ドメイン間の任意選択のジスルフィド結合は、重鎖可変ドメイン１０５位と軽鎖可変ドメイン４３位との間にある（番号付けはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う）。
７．２．１．１．２．ｓｃＦｖ
特定の態様において、ＡＢＭは単鎖Ｆｖ又は「ｓｃＦｖ」である。ｓｃＦＶのＶＨ鎖とＶＬ鎖とを連結するリンカーの例は、第７．２．２．３節に特定されるＡＢＭリンカー、例えばＬ１～Ｌ５４として指定されるリンカーのいずれかである。
特定の態様において、ＡＢＭは単鎖Ｆｖ又は「ｓｃＦｖ」である。ｓｃＦＶのＶＨ鎖とＶＬ鎖とを連結するリンカーの例は、第７．２．２．３節に特定されるＡＢＭリンカー、例えばＬ１～Ｌ５４として指定されるリンカーのいずれかである。
ｓｃＦｖをコードする核酸を作成するため、ＶＨ及びＶＬをコードするＤＮＡフラグメントが、リンカーをコードする別のフラグメント、例えば第７．２．２．３節に記載されるＡＢＭリンカーのいずれか（アミノ酸配列（Ｇｌｙ４～Ｓｅｒ）３（配列番号１１７４）などをコードする別のフラグメントに作動可能に連結される。
７．２．１．１．３．他の免疫グロブリンベースのＡＢＭ
ＭＢＭは、Ｆａｂ又はｓｃＦｖ、例えばＦｖ、ｄｓＦｖ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄ）ＶＨＨドメイン（ナノボディとも呼ばれる）以外の免疫グロブリン形式を有するＡＢＭも含み得る。
ＭＢＭは、Ｆａｂ又はｓｃＦｖ、例えばＦｖ、ｄｓＦｖ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダ科（ｃａｍｅｌｉｄ）ＶＨＨドメイン（ナノボディとも呼ばれる）以外の免疫グロブリン形式を有するＡＢＭも含み得る。
ＡＢＭは、標的に対する十分な親和性を示す単一のＶＨ又はＶＬドメインから構成される単一ドメイン抗体であり得る。実施形態において、単一ドメイン抗体は、ラクダ科ＶＨＨドメインである（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：２５－３８；国際公開第９４／０４６７８号パンフレットを参照されたい）。
７．２．１．２．非免疫グロブリンベースのＡＢＭ
特定の実施形態において、ＭＢＭは、非抗体足場タンパク質（設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、アビマー（アビディティ多量体の省略形）、アンチカリン／リポカリン、センチリン、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィリン、アフィチン（ナノフィチンとしても知られている）、ノッチン、プロネクチン、バーサボディ、デュオカリン及びフィノマーを含むが、これらに限定されない）、リガンド、受容体、サイトカイン又はケモカインに由来する１つ以上のＡＢＭを含む。
特定の実施形態において、ＭＢＭは、非抗体足場タンパク質（設計されたアンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）、アビマー（アビディティ多量体の省略形）、アンチカリン／リポカリン、センチリン、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィリン、アフィチン（ナノフィチンとしても知られている）、ノッチン、プロネクチン、バーサボディ、デュオカリン及びフィノマーを含むが、これらに限定されない）、リガンド、受容体、サイトカイン又はケモカインに由来する１つ以上のＡＢＭを含む。
ＭＢＭにおいて使用され得る非免疫グロブリン足場としては、Ｍｉｎｔｚ ａｎｄ Ｃｒｅａ，２０１３，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ １１（２）：４０－４８の表３及び４；Ｖａｚｑｕｅｚ－Ｌｏｍｂａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ２０（１０）：１２７１－８３の図１、表１及び図Ｉ；Ｓｋｒｌｅｃ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３３（７）：４０８－１８の表１及びＢｏｘ ２に列挙されるものが挙げられる。Ｍｉｎｔｚ ａｎｄ Ｃｒｅａ，２０１３，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ １１（２）：４０－４８の表３及び４；Ｖａｚｑｕｅｚ－Ｌｏｍｂａｒｄｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ ２０（１０）：１２７１－８３の図１、表１及び図Ｉ；Ｓｋｒｌｅｃ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３３（７）：４０８－１８の表１及びＢｏｘ ２の内容（まとめて「足場の開示」）。特定の実施形態において、足場の開示は、それらがアドネキシンに関して開示するものについて参照により援用される。別の実施形態において、足場の開示は、それらがアビマーに関して開示するものについて参照により援用される。別の実施形態において、足場の開示は、それらがアフィボディに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアンチカリンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがＤＡＲＰｉｎに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがクニッツドメインに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがノッチンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがプロネクチンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがナノフィチンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアフィリンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアドネクチンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがＡＢＭに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアドヒロンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアフィマーに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアルファボディに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアルマジロリピートタンパク質に関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアトリマー／テトラネクチンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがオーボディ／ＯＢ－フォールドに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがセンチリンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがレペボディに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアンチカリンに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがアトリマーに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらが二環式ペプチドに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがｃｙｓ－ノットに関して開示するものについて参照により援用される。更に別の実施形態において、足場の開示は、それらがＦｎ３足場（アドネクチン、センチリン、プロネクチン及びＴｎ３を含む）に関して開示するものについて参照により援用される。
一実施形態において、ＡＢＭは、設計されたアンキリンリピートタンパク質（「ＤＡＲＰｉｎ」）であり得る。ＤＡＲＰｉｎは、高度に特異的及び高親和性標的タンパク質結合を典型的に示す抗体ミメティックタンパク質である。それらは、典型的には、遺伝子組み換えされ、天然アンキリンタンパク質に由来し、これらのタンパク質の少なくとも３つ、通常、４つ又は５つの反復モチーフからなる。それらの分子量は、４つ又は５つの反復ＤＡＲＰｉｎでそれぞれ約１４又は１８ｋＤａ（キロダルトン）である。ＤＡＲＰｉｎの例は、例えば、米国特許第７，４１７，１３０号明細書に見られる。ＤＡＲＰｉｎ結合モジュール及び免疫グロブリンベースの結合モジュールを含む多重特異性結合分子は、例えば、米国特許出願公開第２０１５／００３０５９６ Ａ１号明細書に開示されている。
別の実施形態において、ＡＢＭは、アフィボディであり得る。アフィボディは、周知であり、ブドウ球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ）プロテインＡのＩｇＧ結合ドメインの１つに由来する、５８アミノ酸残基タンパク質ドメインをベースとする親和性タンパク質を指す。
別の実施形態において、ＡＢＭは、アンチカリンであり得る。アンチカリンは、周知であり、別の抗体ミメティック技術を指し、結合特異性は、リポカリンに由来する。アンチカリンは、デュオカリンと呼ばれる二重標的化タンパク質としてもフォーマットされ得る。
別の実施形態において、ＡＢＭは、バーサボディであり得る。バーサボディは、周知であり、別の抗体ミメティック技術を指す。それらは、典型的なタンパク質の疎水性コアを置き換える、高ジスルフィド密度足場を形成する、１５％を超えるシステインを有する３～５ｋＤａの低分子タンパク質である。
他の非免疫グロブリンＡＢＭとしては、「Ａ」ドメインオリゴマー（アビマーとしても知られている）（例えば、米国特許出願公開第２００５／０１６４３０１号明細書、同第２００５／００４８５１２号明細書及び同第２００４／０１７５７６号明細書を参照されたい）、Ｆｎ３ベースのタンパク質足場（例えば、米国特許出願公開第２００３／０１７０７５３号明細書を参照されたい）、ＶＡＳＰポリペプチド、トリ膵臓ポリペプチド（ａＰＰ）、テトラネクチン（ＣＴＬＤ３をベースとする）、アフィリン（γＢ－クリスタリン／ユビキチンをベースとする）、ノッチン、ＳＨ３ドメイン、ＰＤＺドメイン、テンダミスタット、ネオカルジノスタチン、プロテインＡドメイン、リポカリン、トランスフェリン又はクニッツドメインが挙げられる。一態様において、ＭＢＭの構築に有用なＡＢＭは、国際公開第２０１１／１３０３２４号パンフレットに例示されるフィブロネクチンベースの足場を含む。
更に、特定の態様において、ＡＢＭは、受容体のリガンド結合ドメイン又はリガンドの受容体結合ドメインを含む。
７．２．２．コネクタ
ＣＤ１９結合分子は、ある場合には、例えばリンカーなしで融合タンパク質として、互いに直接連結されたＡＢＭ又はＡＢＭ鎖の対（例えば、ＦａｂのＶＨ－ＣＨ１又はＶＬ－ＣＬ構成要素）を含み得ることが考えられる。例えば、ＣＤ１９結合分子は、個々のＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を連結するコネクタ部分を含み得る。コネクタ部分の使用は、例えば、ＣＤ１９結合分子内のＡＢＭの柔軟性を高め、それにより立体障害を低減することによって標的結合を改善し得る。ＡＢＭ又はＡＢＭ鎖は、例えば、Ｆｃドメイン（各Ｆｃドメインは、会合されたＦｃ領域の対を表す）及び／又はＡＢＭリンカーを介して互いに連結され得る。Ｆｃドメインの使用は、典型的には、最適な抗原結合のために、ＡＢＭ又はＡＢＭ鎖のコネクタとしてのヒンジ領域の使用を必要とする。したがって、「コネクタ」という用語は、限定はされないが、Ｆｃ領域、Ｆｃドメイン及びヒンジ領域を包含する。
ＣＤ１９結合分子は、ある場合には、例えばリンカーなしで融合タンパク質として、互いに直接連結されたＡＢＭ又はＡＢＭ鎖の対（例えば、ＦａｂのＶＨ－ＣＨ１又はＶＬ－ＣＬ構成要素）を含み得ることが考えられる。例えば、ＣＤ１９結合分子は、個々のＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を連結するコネクタ部分を含み得る。コネクタ部分の使用は、例えば、ＣＤ１９結合分子内のＡＢＭの柔軟性を高め、それにより立体障害を低減することによって標的結合を改善し得る。ＡＢＭ又はＡＢＭ鎖は、例えば、Ｆｃドメイン（各Ｆｃドメインは、会合されたＦｃ領域の対を表す）及び／又はＡＢＭリンカーを介して互いに連結され得る。Ｆｃドメインの使用は、典型的には、最適な抗原結合のために、ＡＢＭ又はＡＢＭ鎖のコネクタとしてのヒンジ領域の使用を必要とする。したがって、「コネクタ」という用語は、限定はされないが、Ｆｃ領域、Ｆｃドメイン及びヒンジ領域を包含する。
コネクタは、例えば、ＣＤ１９結合分子の生物学的半減期を増加又は減少させるように選択又は修飾され得る。例えば、生物学的半減期を減少させるために、フラグメントを含むＣＤ１９結合分子が、天然のＦｃ－ヒンジ領域ＳｐＡ結合と比べて低下したブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｙｌ）プロテインＡ（ＳｐＡ）結合を有するように、１つ以上のアミノ酸突然変異が、Ｆｃ－ヒンジフラグメントのＣＨ２－ＣＨ３ドメイン境界領域に導入され得る。この手法は、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号明細書に更に詳細に記載されている。代わりに、ＣＤ１９結合分子が、その生物学的半減期を増加させるように修飾され得る。例えば、Ｗａｒｄに付与された米国特許第６，２７７，３７５号明細書に記載されるように、以下の突然変異：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、Ｔ２５６Ｆの１つ以上が導入され得る。代わりに、生物学的半減期を増加させるために、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号明細書及び同第６，１２１，０２２号明細書に記載されるように、ＣＤ１９結合分子が、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから取られたサルベージ受容体結合エピトープを含むようにＣＨ１又はＣＬ領域内で改変され得る。
Ｆｃドメイン（２つのＦｃ領域の対合によって形成される）、ヒンジ領域及びＡＢＭリンカーの例がそれぞれ第７．２．２．１、７．２．２．２及び７．２．２．３節に記載されている。
７．２．２．１．Ｆｃドメイン
ＣＤ１９結合分子は、任意の好適な種に由来するＦｃドメインを含み得る。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインに由来する。
ＣＤ１９結合分子は、任意の好適な種に由来するＦｃドメインを含み得る。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ヒトＦｃドメインに由来する。
Ｆｃドメインは、ＩｇＡ（サブクラスＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ（サブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む）及びＩｇＭを含む、任意の好適なクラスの抗体に由来し得る。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４に由来する。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１に由来する。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４に由来する。
Ｆｃドメインは、各々が重鎖Ｆｃ領域と呼ばれる２つのポリペプチド鎖を含む。これらの２つの重鎖Ｆｃ領域が二量体化して、Ｆｃドメインを作り出す。Ｆｃドメイン内の２つのＦｃ領域は同じであるか又は互いに異なり得る。天然抗体において、Ｆｃ領域は、典型的には、同一であるが、本開示の多重特異性結合分子を生成する目的のために、Ｆｃ領域は、以下の第７．２．２．１．５節に記載されるように、ヘテロ二量体化を可能にするために有利には異なり得る。
典型的には、各重鎖Ｆｃ領域は、２つ又は３つの重鎖定常ドメインを含むか又はそれからなる。
天然抗体において、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域は、２つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）から構成され、ＩｇＥ及びＩｇＭの重鎖Ｆｃ領域は、３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４）から構成される。これらは、Ｆｃドメインを生成するように二量体化する。
本開示において、重鎖Ｆｃ領域は、１つ以上の異なるクラスの抗体、例えば１つ、２つ又は３つの異なるクラスに由来する重鎖定常ドメインを含み得る。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１に由来するＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。ヒトＩｇＧ１に由来する重鎖Ｆｃ領域の例示的な配列は、配列番号１１０９に提供される。
一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、そのアミノ酸配列が、第７．２．２．１節及びその下位部分に記載される置換の１つ以上で修飾された配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＦｃ領域を含む。
一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、そのアミノ酸配列が、第７．２．２．１節及びその下位部分に記載される置換の１つ以上で修飾された配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＦｃ領域を含む。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧ２に由来するＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧ３に由来するＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧ４に由来するＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＭに由来するＣＨ４ドメインを含む。ＩｇＭ ＣＨ４ドメインは、典型的には、ＣＨ３ドメインのＣ末端に位置する。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、ＩｇＧに由来するＣＨ２及びＣＨ３ドメイン及びＩｇＭに由来するＣＨ４ドメインを含む。
本開示のＣＤ１９結合分子のための重鎖Ｆｃ領域を生成するのに使用するための重鎖定常ドメインは、上述される天然定常ドメインの変異型を含み得ることが理解されるであろう。このような変異型は、野生型定常ドメインと比較して１つ以上のアミノ酸変化を含み得る。一例において、本開示の重鎖Ｆｃ領域は、野生型定常ドメインと配列が異なる少なくとも１つの定常ドメインを含む。変異型定常ドメインは、野生型定常ドメインより長いか又は短いことがあることが理解されるであろう。例えば、変異型定常ドメインは、野生型定常ドメインと少なくとも６０％同一であるか又は類似している。別の例において、変異型定常ドメインは、少なくとも７０％同一であるか又は類似している。別の例において、変異型定常ドメインは、少なくとも７５％同一であるか又は類似している。別の例において、変異型定常ドメインは、少なくとも８０％同一であるか又は類似している。別の例において、変異型定常ドメインは、少なくとも８５％同一であるか又は類似している。別の例において、変異型定常ドメインは、少なくとも９０％同一であるか又は類似している。別の例において、変異型定常ドメインは、少なくとも９５％同一であるか又は類似している。別の例において、変異型定常ドメインは、少なくとも９９％同一であるか又は類似している。例示的なＦｃ変異型は、以下の第７．２．２．１．１～７．２．２．１．６節に記載されている。
ＩｇＭ及びＩｇＡは、共通のＨ２Ｌ２抗体単位の共有結合多量体としてヒトにおいて天然に存在する。ＩｇＭは、Ｊ鎖を組み込んだ場合に五量体として存在するか、又はＪ鎖を欠いている場合に六量体として存在する。ＩｇＡは、モノマー及び二量体形態として存在する。ＩｇＭ及びＩｇＡの重鎖は、尾部として知られている、Ｃ末端定常ドメインへの１８アミノ酸伸長を有する。尾部は、ポリマーにおいて重鎖間にジスルフィド結合を形成するシステイン残基を含み、重合において重要な役割を果たすものと考えられる。尾部は、グリコシル化部位も含有する。特定の実施形態において、本開示のＣＤ１９結合分子は、尾部を含まない。
ＣＤ１９結合分子に組み込まれるＦｃドメインは、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合及び／又は抗原依存性細胞傷害性などの、タンパク質の１つ以上の機能的特性を変化させる１つ以上の修飾を含み得る。更に、ＣＤ１９結合分子は、化学修飾され得るか（例えば、１つ以上の化学部分が、ＣＤ１９結合分子に結合され得る）又はそのグリコシル化を改変するように、同様に、ＣＤ１９結合分子の１つ以上の機能的特性を改変するように修飾され得る。
抗体分子のエフェクター機能は、例えば、抗体への補体のＣ１構成要素の結合によって媒介される補体媒介性エフェクター機能を含む。補体の活性化は、病原体のオプソニン化及び直接溶解において重要である。更に、それは、補体の活性化の部位に食細胞を動員及び活性化することによって炎症反応を刺激する。エフェクター機能は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）媒介性エフェクター機能を含み、これは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）への抗体の定常ドメインの結合時に引き起こされ得る。エフェクター細胞表面におけるＦｃ受容体の抗原抗体複合体に媒介される架橋は、抗体で被覆された粒子の貪食及び破壊、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体で被覆された標的細胞の溶解（抗体依存性細胞媒介細胞傷害性又はＡＤＣＣと呼ばれる）、炎症性メディエータの放出、胎盤通過及び免疫グロブリン産生の制御を含む、多くの重要及び多様な生物学的応答を引き起こす。
Ｆｃ領域は、エフェクター機能を改変するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置換することによって改変され得る。例えば、Ｆｃ領域が、エフェクターリガンドに対する改変された親和性を有するように、１つ以上のアミノ酸が、異なるアミノ酸残基で置換され得る。それに対する親和性が改変されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体又は補体のＣ１構成要素であり得る。この手法は、例えば、両方ともＷｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び同第５，６４８，２６０号明細書に記載されている。修飾Ｆｃ領域は、Ｃ１ｑ結合も改変し、且つ／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を低減するか又はなくし得る。この手法は、例えば、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号明細書に記載されている。修飾Ｆｃ領域は、補体を結合するＦｃ領域の能力も改変し得る。この手法は、例えば、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公報国際公開第９４／２９３５１号パンフレットに記載されている。アロタイプアミノ酸残基としては、限定はされないが、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，ＭＡｂｓ，１：３３２－３３８によって記載されるように、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３サブクラスの重鎖の定常領域並びにκアイソタイプの軽鎖の定常領域が挙げられる。
Ｆｃ領域は、例えば、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を媒介するＣＤ１９結合分子の能力を低減するか又はなくすために、エフェクター機能を「サイレンシング」するようにも修飾され得る。これは、例えば、Ｆｃ領域における突然変異を導入することによって達成され得る。このような突然変異は、当技術分野において記載されている：ＬＡＬＡ及びＮ２９７Ａ（Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０（６）：６８５－６９１）；及びＤ２６５Ａ（Ｂａｕｄｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８１：６６６４－６９；Ｓｔｒｏｈｌ、上記）。サイレントＦｃ ＩｇＧ１抗体の例は、ＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列におけるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ突然変異を含むいわゆるＬＡＬＡ突然変異体を含む。サイレントＩｇＧ１抗体の別の例は、Ｄ２６５Ａ突然変異を含む。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、ＩｇＧ１ Ｆｃアミノ酸配列におけるＤ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ突然変異を含むいわゆるＤＡＰＡ突然変異体を含む。別のサイレントＩｇＧ１抗体は、Ｎ２９７Ａ突然変異を含み、これは、脱グリコシル化／非グリコシル化抗体をもたらす。
Ｆｃ領域は、例えば、活性Ｆｃγ受容体に対するＣＤ１９結合分子の親和性を増大するように又は阻害性Ｆｃγ受容体に対するＣＤ１９結合分子の親和性を低下させるように、１つ以上のアミノ酸残基を修飾することにより、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を媒介する、Ｆｃ領域を含有するＣＤ１９結合分子の能力を向上させるように修飾され得る。ヒト活性化Ｆｃγ受容体は、ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂを含み、ヒト阻害性Ｆｃγ受容体は、ＦｃγＲＩＩｂを含む。この手法は、例えば、ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公報国際公開第００／４２０７２号パンフレットに記載されている。更に、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃＲｎのためのヒトＩｇＧ１における結合部位が、マッピングされており、向上した結合を有する変異型が、記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４，２００１を参照されたい）。ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能の向上などの、モノクローナル抗体のＦｃ媒介性エフェクター機能の最適化が、記載されている（Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１を参照されたい）。ＡＤＣＣ／ＡＤＣＰ機能を向上させ得る突然変異としては、Ｇ２３６Ａ、Ｓ２３９Ｄ、Ｆ２４３Ｌ、Ｐ２４７Ｉ、Ｄ２８０Ｈ、Ｋ２９０Ｓ、Ｒ２９２Ｐ、Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ｄ、Ｓ２９８Ｖ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３０５Ｉ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ａ３３９Ｄ、Ａ３３９Ｑ、Ａ３３９Ｔ及びＰ３９６Ｌ（全ての位置はＥＵ番号付けによる）から選択される１つ以上の突然変異が挙げられる。
Ｆｃ領域は、例えば、典型的にはＦｃαＲＩなどの親ＣＤ１９結合分子を認識しない活性化受容体に対するＣＤ１９結合分子の親和性を増大するように１つ以上のアミノ酸を修飾することにより、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰを媒介するＣＤ１９結合分子の能力を向上させるようにも修飾され得る。この手法は、例えば、Ｂｏｒｒｏｋ ｅｔ ａｌ．，２０１５，ｍＡｂｓ．７（４）：７４３－７５１に記載されている。
したがって、特定の態様において、ＣＤ１９結合分子は、限定はされないが、ＦｃＲｎ若しくは白血球受容体などのＦｃ－受容体への結合（例えば、上記又は第７．２．２．１．１節に記載されるように）、補体への結合（例えば、上記又は第７．２．２．１．２節に記載されるように）、修飾ジスルフィド結合構造（例えば、上記又は第７．２．２．１．３節に記載されるように）又は改変グリコシル化パターン（例えば、上記又は第７．２．２．１．４節に記載されるように）などの改変されたエフェクター機能を有するＦｃドメインを含み得る。Ｆｃドメインは、例えば、同一のＦｃ領域より非同一のＦｃ領域の優先的な対合であるヘテロ二量体化を可能にすることにより、非対称ＣＤ１９結合分子の製造可能性を向上させる修飾を含むようにも改変され得る。ヘテロ二量体化は、異なるＡＢＭが、配列が異なるＦｃ領域を含有するＦｃドメインによって互いに連結されたＣＤ１９結合分子の生成を可能にする。ヘテロ二量体化手法の例が第７．２．２．１．５節（及びそのサブセクション）に例示されている。
第７．２．２．１．１～７．２．２．１．５節に記載される修飾の任意のものを任意の好適な方法で組み合わせて所望の機能特性を実現し、且つ／又は他の修飾と組み合わせてＣＤ１９結合分子の特性を改変し得ることが理解されるであろう。一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位（ＥＵ番号付け）の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む。例えば、ＣＤ１９結合分子は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有する配列番号２５１のＩｇＧ１配列を含み得る。
一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、以下の置換の組み合わせ：置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ（「ＬＡＬＡＧＡ」）；置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｋ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」）；置換Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＤＡＰＡＳＫ」）；置換Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＧＡＤＡＰＡ」）；置換Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」）；置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「ＬＡＬＡＰＧ」）並びに置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＰＡ」）から選択されるアミノ酸置換を有する第１及び第２のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている。「ＬＡＬＡＧＡ」、「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」、「ＤＡＰＡＳＫ」、「ＧＡＤＡＰＡ」、「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」、「ＬＡＬＡＰＧ」及び「ＬＡＬＡＰＡ」という用語は、連続したアミノ酸配列ではなく、この段落に記載されている置換の様々な組み合わせを表す短縮用語を表すことを理解されたい。
別の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｋ、Ｐ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」）又は置換Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ｓ２６７Ｋ（「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」）の組み合わせから選択されるアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている。
更なる実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ＦＣＶ１～ＦＣＶ７から選択されるＦｃ領域を含む（以下の表Ａを参照されたい）。
なお更なる実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ＦＣＶ４又はＦＣＶ７であるＦｃ領域を含む。
いくつかの態様において、ＣＤ１９結合分子は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置を使用する表面プラズモン共鳴によって任意選択的に測定される、Ｆｃγ受容体又はＣ１ｑに対する結合親和性が、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して低下しているか又は検出不可能であり、Ｆｃγ受容体は、ＦｃγＲ１Ａ、ＦｃγＲＩＩＩａＶ１５８変異体及びＦｃγＲＩＩＩａＦ１５８変異体からなる群から選択され、野生型と比較して結合が、５０％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％減少するか又は検出不能である。
いくつかの態様において、ＣＤ１９結合分子は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含むポリペプチドと比較して、エフェクター機能が低下しているか又は検出不能である。
いくつかの態様において、ＣＤ１９結合分子は、検出可能な抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を引き起こすことなく、抗原に結合することができる。いくつかの態様において、減少又は低下するエフェクター機能は、個体における抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）である。いくつかの態様において、減少又は低下するエフェクター機能は、個体における抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）である。いくつかの態様において、減少又は低下するエフェクター機能は、個体における補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）である。いくつかの態様において、Ｆｃドメインの第１及び第２のＦｃ領域は、それぞれ以下の表Ａに列挙される核酸配列から選択される核酸配列又はこの核酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有する任意の配列を含む。
一実施形態において、Ｆｃ領域をコードする核酸は、ＦＣＶ－７の核酸配列（以下の表Ａを参照されたい）又はこの核酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有する配列を含む。一実施形態において、Ｆｃ領域をコードする核酸は、ＦＣＶ－４の核酸配列（以下の表Ａを参照されたい）又はこの核酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有する配列を含む。いくつかの態様において、Ｆｃドメインは、第１及び第２のＦｃ領域を含み、そのそれぞれは、以下の表Ａに列挙されるアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列又はこのアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有する任意の配列を含む。
一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦＣＶ－７のアミノ酸配列（以下の表Ａを参照されたい）又はこのアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有する配列を含む第１及び第２のＦｃ領域を含む。一実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦＣＶ－４のアミノ酸配列（以下の表Ａを参照されたい）又はこのアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有する配列を含む第１及び第２のＦｃ領域を含む。
加えて、ＦＣＶ１～ＦＣＶ７（以下の表Ａを参照されたい）から選択されるＦｃ領域を含むＣＤ１９結合分子をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが本明細書において提供される。
ＦＣＶ１～ＦＣＶ７から選択されるＦｃ領域を含むＣＤ１９結合分子をコードし、且つこれを発現することができるベクター又はポリヌクレオチドを含む宿主細胞も本明細書において提供される（以下の表Ａを参照されたい）。
７．２．２．１．１．改変されたＦｃＲ結合を有するＦｃドメイン
ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、対応する天然免疫グロブリンと比較して、１つ以上のＦｃ－受容体（ＦｃＲｓ）への改変された結合を示し得る。任意の特定のＦｃ－受容体への結合は、増加又は減少され得る。一実施形態において、Ｆｃドメインは、そのＦｃ－受容体結合プロファイルを改変する１つ以上の修飾を含む。
ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、対応する天然免疫グロブリンと比較して、１つ以上のＦｃ－受容体（ＦｃＲｓ）への改変された結合を示し得る。任意の特定のＦｃ－受容体への結合は、増加又は減少され得る。一実施形態において、Ｆｃドメインは、そのＦｃ－受容体結合プロファイルを改変する１つ以上の修飾を含む。
ヒト細胞は、ＦｃαＲ、ＦｃεＲ、ＦｃγＲ、ＦｃＲｎ及びグリカン受容体から選択されるいくつかの膜結合性ＦｃＲを発現し得る。一部の細胞は、可溶性（細胞外ドメイン）ＦｃＲを発現することも可能である（Ｆｒｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｊ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５４：５０４－５１２）。ＦｃγＲは、ＩｇＧ結合の親和性（高／低）及び生物学的影響（活性化／阻害）によって更に分けられ得る。ヒトＦｃγＲＩは、唯一の「高親和性」受容体であると広く考えられている一方、他の全ては、中程度～低親和性であると考えられる。ＦｃγＲＩＩｂは、その細胞内ＩＴＩＭモチーフにより「阻害」機能性を有する唯一の受容体である一方、他の全ては、ＩＴＡＭモチーフにより「活性化」するか、又は共通のＦｃγＲ－－γ鎖と対合すると考えられる。ＦｃγＲＩＩＩｂは、活性であるが、それがＧＰＩアンカーを介して細胞と会合する点でも独特である。全体的に、ヒトは、６つの「標準的な」ＦｃγＲｓ：ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩｃ、ＦｃγＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩＩｂを発現する。これらの配列に加えて、これらのファミリーにわたって広がる多数の配列又はアロタイプ変異体が存在する。これらのいくつかは、重要な機能的結果を有することが分かっており、したがってそれ自体の受容体サブタイプであると考えられることがある。例としては、ＦｃγＲＩＩａＨ１３４Ｒ、ＦｃγＲＩＩｂＩ１９０Ｔ、ＦｃγＲＩＩＩａＦ１５８Ｖ、ＦｃγＲＩＩＩｂＮＡ１、ＦｃγＲＩＩＩｂＮＡ２及びＦｃγＲＩＩＩＳＨが挙げられる。各受容体配列は、ＩｇＧ：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の４つのサブクラスに対する異なる親和性を有することが示された（Ｂｒｕｈｎｓ，１９９３，Ｂｌｏｏｄ １１３：３７１６－３７２５）。他の種は、ＦｃγＲのいくらか異なる数及び機能性を有し、マウス系がこれまで最もよく試験され、４つのＦｃγＲ、ＦｃγＲＩ ＦｃγＲＩＩｂ ＦｃγＲＩＩＩ ＦｃγＲＩＶを含む（Ｂｒｕｈｎｓ，２０１２，Ｂｌｏｏｄ １１９：５６４０－５６４９）。細胞上のヒトＦｃγＲＩは、通常、ＩｇＧ１／ＩｇＧ３／ＩｇＧ４に対するその親和性（約１０－８Ｍ）及び血清中のこれらのＩｇＧの濃度（約１０ｍｇ／ｍｌ）のため、正常な血清条件でモノマーＩｇＧによって「占有される」ものと考えられる。したがって、それらの表面上にＦｃγＲＩを保有する細胞は、結合された多重特異性ＩｇＧによって代理的にそれらの抗原環境の「スクリーニング」又は「サンプリング」が可能であると考えられる。ＩｇＧサブクラスに対するより低い親和性（約１０－５～１０－７Ｍの範囲内）を有する他の受容体は、通常、「占有されない」ものと考えられる。したがって、低親和性受容体は、抗体が関与する免疫複合体の検出及びそれによる活性化に対して本質的に感受性である。抗体免疫複合体中の増加したＦｃ密度は、低親和性ＦｃγＲへの結合アビディティの増加した機能的親和力をもたらす。これは、いくつかの方法を用いてインビトロで実証された（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６（９）：６５９１－６６０４；Ｌｕｘ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９０：４３１５－４３２３）。それは、ヒトにおけるＩＴＰを治療するための抗ＲｈＤの使用における主要な作用モードの１つであることも示唆された（Ｃｒｏｗ，２００８，Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２２：１０３－１１６）。
多くの細胞型が複数のタイプのＦｃγＲを発現し、したがって、ＦｃγＲを保有する細胞へのＩｇＧ又は抗体免疫複合体の結合は、生物学的状況に応じて複数の及び複雑な結果を有し得る。最も簡潔には、細胞は、活性、阻害又は混合シグナルのいずれかを受け取り得る。これは、食作用（例えば、マクロファージ及び好中球）、抗原プロセシング（例えば、樹枝状細胞）、減少したＩｇＧ産生（例えば、Ｂ細胞）又は脱顆粒（例えば、好中球、肥満細胞）などの事象をもたらし得る。ＦｃγＲＩＩｂからの阻害シグナルが活性シグナルのものより優位であり得ることを裏付けるデータがある（Ｐｒｏｕｌｘ，２０１０，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３５：４２２－４２９）。
ＦｃγＲ受容体の１つ以上への結合を改変するために行われ得るいくつかの有用なＦｃ置換がある。増加した結合並びに減少した結合をもたらす置換が、有用であり得る。例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの増加した結合が、一般に、増加したＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介細胞傷害性；ＦｃγＲを発現する非特異的な細胞傷害性細胞が、標的細胞上の結合抗体を認識し、その後、標的細胞の溶解を引き起こす細胞媒介反応）をもたらすことは公知である。同様に、ＦｃγＲＩＩｂ（阻害性受容体）への減少した結合は、ある状況において同様に有益であり得る。本開示において利用されるアミノ酸置換としては、米国特許出願公開第２００６／００２４２９８号明細書（特に図４１）、米国特許出願公開第２００６／０１２１０３２号明細書、米国特許出願公開第２００６／０２３５２０８号明細書、米国特許出願公開第２００７／０１４８１７０号明細書及び米国特許出願公開第２０１９／０１００５８７号明細書に列挙されるものが挙げられる。利用される特定の変異型としては、限定はされないが、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２４３Ａ、２４３Ｌ、２６４Ａ、２６４Ｖ、２９９Ｔ、２６５Ａ／２９７Ａ／３２９Ａ、２６５Ｎ／２９７Ｄ／３２９Ｇ及び２６５Ｅ／２９７Ｑ／３２９Ｓが挙げられる。
ＦｃＲｎは、成人及び小児の血清中のＩｇＧの長い半減期を維持するのに重要な役割を果たす。受容体は、酸性化された小胞（ｐＨ＜６．５）中のＩｇＧに結合して、ＩｇＧ分子を分解から保護し、次に血液中７．４のより高いｐＨでそれを放出する。
ＦｃＲｎは、白血球Ｆｃ受容体と異なり、代わりにＭＨＣクラスＩ分子との構造的類似性を有する。それは、３つの細胞外ドメインを含む膜結合性鎖に非共有結合されたβ２－ミクログロブリン鎖から構成されるヘテロ二量体である。炭水化物鎖を含む、これらのドメインの１つは、β２－ミクログロブリンと一緒に、ＦｃのＣＨ２及びＣＨ３ドメイン間の部位と相互作用する。相互作用は、ｐＨ＜６．５で正に荷電したＩｇＧ上のヒスチジン残基になされた塩架橋を含む。より高いｐＨにおいて、Ｈｉｓ残基は、それらの正電荷を喪失し、ＦｃＲｎ－ＩｇＧ相互作用が弱められ、ＩｇＧが解離する。
一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ヒトＦｃＲｎに結合するＦｃドメインを含む。
一実施形態において、Ｆｃドメインは、３１０位、ある場合には４３５位にもヒスチジン残基を含むＦｃ領域（例えば、１つ又は２つ）を有する。これらのヒスチジン残基は、ヒトＦｃＲｎ結合のために重要である。一実施形態において、３１０及び４３５位におけるヒスチジン残基は、天然残基であり、すなわち３１０及び４３５位が修飾されていない。代わりに、これらのヒスチジン残基の１つ又は両方が修飾の結果として存在し得る。
ＣＤ１９結合分子は、ＦｃＲｎへのＦｃ結合を改変する１つ以上のＦｃ領域を含み得る。改変された結合は、増加した結合又は減少した結合であり得る。
一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、少なくとも１つ（任意選択的に両方）のＦｃ領域が、それが対応する天然免疫グロブリンより高い親和性及びアビディティでＦｃＲｎに結合するように１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含む。
ＦｃＲｎ受容体への結合を増加させ、血清半減期を増加させるＦｃ置換は、米国特許出願公開第２００９／０１６３６９９号明細書に記載されており、４３４Ｓ、４３４Ａ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６Ｉ又はＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ及び２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌを含むが、これらに限定されない。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５０位におけるトレオニン残基をグルタミン残基（Ｔ２５０Ｑ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５２位におけるメチオニン残基をチロシン残基（Ｍ２５２Ｙ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５４位におけるセリン残基をトレオニン残基（Ｓ２５４Ｔ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５６位におけるトレオニン残基をグルタミン酸残基（Ｔ２５６Ｅ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０７位におけるトレオニン残基をアラニン残基（Ｔ３０７Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０７位におけるトレオニン残基をプロリン残基（Ｔ３０７Ｐ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０８位におけるバリン残基をシステイン残基（Ｖ３０８Ｃ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０８位におけるバリン残基をフェニルアラニン残基（Ｖ３０８Ｆ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０８位におけるバリン残基をプロリン残基（Ｖ３０８Ｐ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３１１位におけるグルタミン残基をアラニン残基（Ｑ３１１Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３１１位におけるグルタミン残基をアルギニン残基（Ｑ３１１Ｒ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、４２８位におけるメチオニン残基をロイシン残基（Ｍ４２８Ｌ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、４３３位におけるヒスチジン残基をリジン残基（Ｈ４３３Ｋ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、４３４位におけるアスパラギン残基をフェニルアラニン残基（Ｎ４３４Ｆ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、４３４位におけるアスパラギン残基をチロシン残基（Ｎ４３４Ｙ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５２位におけるメチオニン残基をチロシン残基で、２５４位におけるセリン残基をトレオニン残基で、且つ２５６位におけるトレオニン残基をグルタミン酸残基（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０８位におけるバリン残基をプロリン残基で、且つ４３４位におけるアスパラギン残基をチロシン残基（Ｖ３０８Ｐ／Ｎ４３４Ｙ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５２位におけるメチオニン残基をチロシン残基で、２５４位におけるセリン残基をトレオニン残基で、２５６位におけるトレオニン残基をグルタミン酸残基で、４３３位におけるヒスチジン残基をリジン残基で、且つ４３４位におけるアスパラギン残基をフェニルアラニン残基（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ／Ｈ４３３Ｋ／Ｎ４３４Ｆ）で置換することによって修飾される。
上に列挙される修飾のいずれかが組み合わされて、ＦｃＲｎ結合を改変し得ることが理解されるであろう。
一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域が、Ｆｃドメインが対応する天然免疫グロブリンより低い親和性及びアビディティでＦｃＲｎに結合するように１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含む。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３１０位及び／又は４３５位において、ヒスチジン以外の任意のアミノ酸残基を含む。
ＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域が、ＦｃγＲＩＩｂへのその結合を増加させる１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含み得る。ＦｃγＲＩＩｂは、ヒトにおける唯一の阻害性受容体及びＢ細胞に見られる唯一のＦｃ受容体である。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３８位におけるプロリン残基をアスパラギン酸残基（Ｐ２３８Ｄ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５８位におけるグルタミン酸残基をアラニン残基（Ｅ２５８Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２６７位におけるセリン残基をアラニン残基（Ｓ２６７Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２６７位におけるセリン残基をグルタミン酸残基（Ｓ２６７Ｅ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３２８位におけるロイシン残基をフェニルアラニン残基（Ｌ３２８Ｆ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２５８位におけるグルタミン酸残基をアラニン残基で、且つ２６７位におけるセリン残基をアラニン残基（Ｅ２５８Ａ／Ｓ２６７Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２６７位におけるセリン残基をグルタミン酸残基で、且つ３２８位におけるロイシン残基をフェニルアラニン残基（Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ）で置換することによって修飾される。
上に列挙される修飾のいずれかが組み合わされて、ＦｃγＲＩＩｂ結合を増加させ得ることが理解されるであろう。
一実施形態において、ＦｃγＲへの減少した結合を示すＦｃドメインを含むＣＤ１９結合分子が提供される。
一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域が、ＦｃγＲへのＦｃ結合を減少させる１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含む。
Ｆｃドメインは、ＩｇＧ１に由来し得る。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３４位におけるロイシン残基をアラニン残基（Ｌ２３４Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３５位におけるロイシン残基をアラニン残基（Ｌ２３５Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３６位におけるグリシン残基をアルギニン残基（Ｇ２３６Ｒ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２９７位におけるアスパラギン残基をアラニン残基（Ｎ２９７Ａ）又はグルタミン残基（Ｎ２９７Ｑ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２９８位におけるセリン残基をアラニン残基（Ｓ２９８Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３２８位におけるロイシン残基をアルギニン残基（Ｌ３２８Ｒ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３４位におけるロイシン残基をアラニン残基で、且つ２３５位におけるロイシン残基をアラニン残基（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）で置換することによって修飾される。
実施形態において、Ｆｃ領域は、２３４位におけるフェニルアラニン残基をアラニン残基で、且つ２３５位におけるロイシン残基をアラニン残基（Ｆ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３６位におけるグリシン残基をアルギニン残基で、且つ３２８位におけるロイシン残基をアルギニン残基（Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２６５位のアスパラギン酸残基をアラニン残基に、２９７位のアスパラギン残基をアラニン残基に、且つ３２９位のプロリン残基をアラニン残基に置換することによって修飾される（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２６５位のアスパラギン酸残基をアスパラギン残基に、２９７位のアスパラギン残基をアスパラギン酸残基に、且つ３２９位のプロリン残基をグリシン残基に置換することによって修飾される（Ｄ２６５Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｐ３２９Ｇ）。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２６５位のアスパラギン酸残基をグルタミン酸残基に、２９７位のアスパラギン残基をグルタミン残基に、且つ３２９位のプロリン残基をセリン残基に置換することによって修飾される（Ｄ２６５Ｅ／Ｎ２９７Ｑ／Ｐ３２９Ｓ）。
上に列挙される修飾のいずれかが組み合わされて、ＦｃγＲ結合を減少させ得ることが理解されるであろう。
一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域が、ＦｃγＲＩＩへのＦｃの結合に影響を与えずにＦｃγＲＩＩＩａへのＦｃ結合を減少させる１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含む。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３９位におけるセリン残基をアラニン残基（Ｓ２３９Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２６９位におけるグルタミン酸残基をアラニン残基（Ｅ２６９Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２９３位におけるグルタミン酸残基をアラニン残基（Ｅ２９３Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２９６位におけるチロシン残基をフェニルアラニン残基（Ｙ２９６Ｆ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０３位におけるバリン残基をアラニン残基（Ｖ３０３Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３２７位におけるアラニン残基をグリシン残基（Ａ３２７Ｇ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３３８位におけるリジン残基をアラニン残基（Ｋ３３８Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３７６位におけるアスパラギン酸残基をアラニン残基（Ｄ３７６Ａ）で置換することによって修飾される。
上に列挙される修飾のいずれかが組み合わされて、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を減少させ得ることが理解されるであろう。
減少したＦｃＲ結合を有するＦｃ領域変異は、「ＦｃγＲ除去変異」、「ＦｃγＲサイレンシング変異」又は「Ｆｃノックアウト（ＦｃＫＯ又はＫＯ）」変異と呼ばれ得る。ある治療用途では、更なる作用機序を避けるために、Ｆｃγ受容体（例えば、ＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ）の１つ以上又は全てへのＦｃドメインの通常の結合を減少させるか又は除去することが望ましい。すなわち、例えば多くの実施形態において、特にＣＤ３に１価的に結合するＭＢＭの使用において、ＦｃγＲＩＩＩａ結合を除去して、ＡＤＣＣ活性をなくすか又は実質的に低下させることが一般に望ましい。ある実施形態において、本明細書に記載されるＭＢＭのＦｃ領域の少なくとも１つは、１つ以上のＦｃγ受容体除去変異を含む。ある実施形態において、Ｆｃ領域は、両方とも１つ以上のＦｃγ受容体除去変異を含む。これらの除去変異は、表３に示され、それぞれが、独立して及び任意選択的に、含まれるか又は除外され得、ある態様は、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ、Ｄ２６５Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｐ３２９Ｇ及びＤ２６５Ｅ／Ｎ２９７Ｑ／Ｐ３２９Ｓ（「ｄｅｌ」は、欠失を示し、例えば、Ｇ２３６ｄｅｌは、２３６位におけるグリシンの欠失を指す）からなる群から選択される除去変異を用いる。本明細書において言及される除去変異が、ＦｃγＲ結合を除去するが、一般にＦｃＲｎ結合を除去しないことが留意されるべきである。
ある実施形態において、本開示のＭＢＭは、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域を含む。ある実施形態において、第１のＦｃ領域及び／又は第２のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３６ｄｅｌ及びＳ２６７Ｋを含み得る。
ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインは、Ｆｃγ受容体への最も高い結合を有し、したがってヘテロ二量体抗体の骨格中の定常ドメイン（又はＦｃドメイン）がＩｇＧ１である場合、除去変異が使用され得る。
代わりに又はＩｇＧ１バックグラウンドにおける除去変異に加えて、グリコシル化２９７位における突然変異、例えば２９７位のアスパラギン残基を、アラニン残基（Ｎ２９７Ａ）又はグルタミン残基（Ｎ２９７Ｑ）で置換することにより、例えばＦｃγＲＩＩＩａへの結合を有意に除去することができる。ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４は、Ｆｃγ受容体への自然に減少した結合を有し、したがって、それらの骨格が、除去変異を伴うか又は伴わずに使用され得る。
７．２．２．１．２．改変された補体結合を有するＦｃドメイン
ＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域が、補体へのＦｃ結合を改変する１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含み得る。改変された補体結合は、増加した結合又は減少した結合であり得る。
ＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域が、補体へのＦｃ結合を改変する１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含み得る。改変された補体結合は、増加した結合又は減少した結合であり得る。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、Ｃ１ｑへのその結合を減少させる１つ以上の修飾を含む。古典的補体経路の開始は、抗原結合ＩｇＧ及びＩｇＭのＣＨ２ドメインへの六量体Ｃ１ｑタンパク質の結合から開始する。
一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域が、Ｃ１ｑへのＦｃ結合を減少させる１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含む。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３４位におけるロイシン残基をアラニン残基（Ｌ２３４Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３５位におけるロイシン残基をアラニン残基（Ｌ２３５Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３５位におけるロイシン残基をグルタミン酸残基（Ｌ２３５Ｅ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、２３７位におけるグリシン残基をアラニン残基（Ｇ２３７Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３２２位におけるリジン残基をアラニン残基（Ｋ３２２Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３３１位におけるプロリン残基をアラニン残基（Ｐ３３１Ａ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３３１位におけるプロリン残基をセリン残基（Ｐ３３１Ｓ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ＩｇＧ４に由来するＦｃドメインを含む。ＩｇＧ４は、元々、ＩｇＧ１より低い補体活性化プロファイルを有するだけでなく、ＦｃγＲのより弱い結合も有する。したがって、一実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、ＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含み、ＦｃγＲ結合を増加させる１つ以上の修飾も含む。
上に列挙される修飾のいずれかが組み合わされて、Ｃ１ｑ結合を減少させ得ることが理解されるであろう。
７．２．２．１．３．改変されたジスルフィド構造を有するＦｃドメイン
ＣＤ１９結合分子は、システイン残基を生成及び／又は除去するための１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含み得る。システイン残基は、ポリペプチドモノマーの個々の対間にジスルフィド架橋を形成することにより、Ｆｃベースの多重特異性結合分子の自発的集合において重要な役割を果たす。したがって、システイン残基の数及び／又は位置を改変することにより、ＣＤ１９結合分子の構造を修飾して、向上した治療特性を有するタンパク質を産生することが可能である。
ＣＤ１９結合分子は、システイン残基を生成及び／又は除去するための１つ以上の修飾を含むＦｃドメインを含み得る。システイン残基は、ポリペプチドモノマーの個々の対間にジスルフィド架橋を形成することにより、Ｆｃベースの多重特異性結合分子の自発的集合において重要な役割を果たす。したがって、システイン残基の数及び／又は位置を改変することにより、ＣＤ１９結合分子の構造を修飾して、向上した治療特性を有するタンパク質を産生することが可能である。
本開示のＣＤ１９結合分子は、１つ又は両方のＦｃ領域、例えば両方のＦｃ領域が、３０９位にシステイン残基を含むＦｃドメインを含み得る。一実施形態において、３０９位におけるシステイン残基は、修飾によって生成され、例えばＩｇＧ１に由来するＦｃドメインの場合、３０９位におけるロイシン残基がシステイン残基（Ｌ３０９Ｃ）で置換され、ＩｇＧ２に由来するＦｃドメインの場合、３０９位におけるバリン残基がシステイン残基（Ｖ３０９Ｃ）で置換される。
一実施形態において、Ｆｃ領域は、３０８位におけるバリン残基をシステイン残基（Ｖ３０８Ｃ）で置換することによって修飾される。
一実施形態において、ヒンジ領域における２つのジスルフィド結合が、コアヒンジ配列ＣＰＰＣ（配列番号１１７９）をＳＰＰＳ（配列番号１１８０）に突然変異させることによって除去される。
７．２．２．１．４．改変されたグリコシル化を有するＦｃドメイン
特定の態様において、対応する免疫グロブリンより少ないグリコシル化部位を含む、向上した製造可能性を有するＣＤ１９結合分子が提供される。これらのタンパク質は、より単純な翻訳後グリコシル化パターンを有し、したがってより単純であり、製造するのにより安価である。
特定の態様において、対応する免疫グロブリンより少ないグリコシル化部位を含む、向上した製造可能性を有するＣＤ１９結合分子が提供される。これらのタンパク質は、より単純な翻訳後グリコシル化パターンを有し、したがってより単純であり、製造するのにより安価である。
一実施形態において、ＣＨ２ドメインにおけるグリコシル化部位は、２９７位におけるアスパラギン残基をアラニン残基（Ｎ２９７Ａ）又はグルタミン残基（Ｎ２９７Ｑ）で置換することによって除去される。向上した製造可能性に加えて、これらのグリコシル突然変異体は、本明細書において上述されるＦｃγＲ結合も減少させる。
ある実施形態において、減少した量のフコシル残基を有する低フコシル化された（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体又は増加した二分ＧｌｃＮａｃ構造を有する抗体などの、改変されたタイプのグリコシル化を有するＣＤ１９結合分子が作製され得る。このような改変されたグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を向上させることが実証されている。このような炭水化物修飾は、例えば、改変されたグリコシル化機構を有する宿主細胞内でＣＤ１９結合分子を発現することによって達成され得る。改変されたグリコシル化機構を有する細胞は、当技術分野において記載されており、ＣＤ１９結合分子を内部で発現して、それによって改変されたグリコシル化を有するＣＤ１９結合分子を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、Ｈａｎｇらによる欧州特許第１，１７６，１９５号明細書には、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株が記載されており、このような細胞株において発現される抗体は、低フコシル化（ｈｙｐｏｆｕｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）を示すようになっている。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公報国際公開第０３／０３５８３５号パンフレットには、フコースをＡｓｎ（２９７）連結炭水化物に結合する低下した能力を有し、該当する宿主細胞において発現される抗体の低フコシル化ももたらす、変異型ＣＨＯ細胞株、Ｌｅｃｌ３細胞が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照されたい）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴ公報国際公開第９９／５４３４２号パンフレットには、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、β（１，４）－ＮアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株が記載されており、操作された細胞株において発現される抗体は、抗体の増大したＡＤＣＣ活性をもたらす増加した二分ＧｌｃＮａｃ構造を示すようになっている（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０，１９９９も参照されたい）。
７．２．２．１．５．Ｆｃヘテロ二量体化
多くの多重特異性分子形式は、天然免疫グロブリンと異なり、非同一抗原結合ドメイン（又はその部分、例えばＦａｂのＶＨ又はＶＨ－ＣＨ１）に作動可能に連結される、２つのＦｃ領域間の二量体化を伴う。Ｆｃドメインを形成するための２つのＦｃ領域の不十分なヘテロ二量体化は、常に所望の多重特異性分子の収率を増加させることの障害になっており、精製にとって難しい問題である。当技術分野において利用可能な様々な手法は、例えば、欧州特許出願公開第１８７０４５９Ａ１号明細書；米国特許第５，５８２，９９６号明細書；米国特許第５，７３１，１６８号明細書；米国特許第５，９１０，５７３号明細書；米国特許第５，９３２，４４８号明細書；米国特許第６，８３３，４４１号明細書；米国特許第７，１８３，０７６号明細書；米国特許出願公開第２００６２０４４９３Ａ１号明細書；及びＰＣＴ公開番号国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号パンフレットに開示されるように、ＣＤ１９結合分子（及び特に本開示のＭＢＭ）中に存在し得るＦｃ領域の二量体化を促進するのに使用され得る。
多くの多重特異性分子形式は、天然免疫グロブリンと異なり、非同一抗原結合ドメイン（又はその部分、例えばＦａｂのＶＨ又はＶＨ－ＣＨ１）に作動可能に連結される、２つのＦｃ領域間の二量体化を伴う。Ｆｃドメインを形成するための２つのＦｃ領域の不十分なヘテロ二量体化は、常に所望の多重特異性分子の収率を増加させることの障害になっており、精製にとって難しい問題である。当技術分野において利用可能な様々な手法は、例えば、欧州特許出願公開第１８７０４５９Ａ１号明細書；米国特許第５，５８２，９９６号明細書；米国特許第５，７３１，１６８号明細書；米国特許第５，９１０，５７３号明細書；米国特許第５，９３２，４４８号明細書；米国特許第６，８３３，４４１号明細書；米国特許第７，１８３，０７６号明細書；米国特許出願公開第２００６２０４４９３Ａ１号明細書；及びＰＣＴ公開番号国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号パンフレットに開示されるように、ＣＤ１９結合分子（及び特に本開示のＭＢＭ）中に存在し得るＦｃ領域の二量体化を促進するのに使用され得る。
本開示は、Ｆｃヘテロ二量体、すなわち同一でないヘテロなＦｃ領域を含むＦｃドメインを含むＣＤ１９結合分子を提供する。ヘテロ二量体化手法を用いて、異なるＡＢＭ（又はその部分、例えばＦａｂのＶＨ又はＶＨ－ＣＨ１）に作動可能に連結されるＦｃ領域の二量体化を促進し、同じＡＢＭ又はその部分に作動可能に連結されるＦｃ領域の二量体化を低減する。典型的には、Ｆｃヘテロ二量体中の各Ｆｃ領域は、抗体のＣＨ３ドメインを含む。ＣＨ３ドメインは、前の節に記載されるように、任意のアイソタイプ、クラス又はサブクラス、ある場合にはＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）クラスの抗体の定常領域に由来する。
典型的には、ＭＢＭは、ＣＨ３ドメインに加えて、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、ヒンジ領域、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン、ＣＤＲ及び／又は本明細書に記載される抗原結合フラグメントなどの他の抗体フラグメントを含む。ある実施形態において、２つのヘテロポリペプチドは、二重特異性又は多重特異性分子を形成する２つの重鎖である。ＣＨ３ドメインにおける２つの異なる重鎖のヘテロ二量体化は、所望の抗体又は抗体様分子を生じさせる一方、同一の重鎖のホモ二量体化は、所望の抗体又は分子の収率を低下させる。例示的な実施形態において、２つ以上のヘテロポリペプチド鎖は、ＣＨ３ドメインを含み、且つ本開示の上述される多重特異性分子形式のいずれかの分子を形成する２つの鎖を含む。一実施形態において、ＣＨ３ドメインを含む２つのヘテロポリペプチド鎖は、非修飾鎖と比べて、ポリペプチドのヘテロ二量体会合に有利に作用する修飾を含む。修飾手法の様々な例が以下の表４及び第７．２．２．１．５．１節のサブセクション（ａ）～（ｇ）に示されている。
対になってＦｃヘテロ二量体を形成することができ、且つ本開示のＣＤ１９結合分子に含まれ得る、同一でないヘテロなＦｃ配列の例示的な対としては、（ｉ）配列番号２５２及び配列番号２５３、及び（ｉｉ）配列番号２５２及び配列番号２５４が挙げられる。
配列番号２５２～２５４の１つのアミノ酸配列を有するＦｃ領域は、第７．２．２．１節（その下位部分を含む）に記載される置換の１つ以上を含むように、例えば表３に記載される除去変異型に対応する１つ又は複数の置換を含むように修飾することができる。一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位（ＥＵ番号付け）の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異、例えば第７．２．２．１節（その下位部分を含む）に記載される１つ又は複数の突然変異を有する配列番号２５２～２５４の１つのアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含む。例えば、ＣＤ１９結合分子は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有する配列番号２５２のアミノ酸配列を有するＦｃ領域及び／又は２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有する配列番号２５３のアミノ酸配列を有するＦｃ領域及び／又は２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有する配列番号２５４のアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含み得る。
配列番号２５２～２５４の１つのアミノ酸配列を有するＦｃ領域は、第７．２．２．１節（その下位部分を含む）に記載される置換の１つ以上を含むように、例えば表３に記載される除去変異型に対応する１つ又は複数の置換を含むように修飾することができる。一部の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位（ＥＵ番号付け）の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異、例えば第７．２．２．１節（その下位部分を含む）に記載される１つ又は複数の突然変異を有する配列番号２５２～２５４の１つのアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含む。例えば、ＣＤ１９結合分子は、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有する配列番号２５２のアミノ酸配列を有するＦｃ領域及び／又は２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有する配列番号２５３のアミノ酸配列を有するＦｃ領域及び／又は２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２９７、２９９、３２２、３２７、３２８、３２９、３３０、３３１及び３３２位の１、２、３、４、５、６つ又は６つより多くに突然変異を有する配列番号２５４のアミノ酸配列を有するＦｃ領域を含み得る。
（ａ）立体変異
ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインの定常ドメインの１つ以上に対する、例えばＣＨ３ドメインに対する１つ以上、例えば複数の修飾を含み得る。一例において、本開示のＣＤ１９結合分子は、抗体の重鎖定常ドメイン、例えばＣＨ２又はＣＨ３ドメインをそれぞれ含む２つのポリペプチドを含む。一例において、ＣＤ１９結合分子の２つの重鎖定常ドメイン、例えばＣＨ２又はＣＨ３ドメインは、２つの鎖間のヘテロ二量体会合を可能にする１つ以上の修飾を含む。一態様において、１つ以上の修飾は、２つの重鎖のＣＨ２ドメイン上に配置される。一態様において、１つ以上の修飾は、ＣＤ１９結合分子の少なくとも２つのポリペプチドのＣＨ３ドメイン上に配置される。
ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインの定常ドメインの１つ以上に対する、例えばＣＨ３ドメインに対する１つ以上、例えば複数の修飾を含み得る。一例において、本開示のＣＤ１９結合分子は、抗体の重鎖定常ドメイン、例えばＣＨ２又はＣＨ３ドメインをそれぞれ含む２つのポリペプチドを含む。一例において、ＣＤ１９結合分子の２つの重鎖定常ドメイン、例えばＣＨ２又はＣＨ３ドメインは、２つの鎖間のヘテロ二量体会合を可能にする１つ以上の修飾を含む。一態様において、１つ以上の修飾は、２つの重鎖のＣＨ２ドメイン上に配置される。一態様において、１つ以上の修飾は、ＣＤ１９結合分子の少なくとも２つのポリペプチドのＣＨ３ドメイン上に配置される。
Ｆｃヘテロ二量体化のための１つの機構は、一般に、「ノブ及びホール」又は「ノブ・イントゥ・ホール」と呼ばれる。これらの用語は、例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９（７）：６１７；Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７０：２６；米国特許第８，２１６，８０５号明細書に記載されるように、Ｆｃホモ二量体よりＦｃヘテロ二量体の形成に有利に作用するように立体的影響を生じるアミノ酸突然変異を指す。ノブ・イン・ホール突然変異は、ヘテロ二量体化を改善する他の手法と組み合わされ得る。
一態様において、重鎖定常ドメインを含むＣＤ１９結合分子の第１のポリペプチドに対する１つ以上の修飾は、「ノブ」を生成することができ、ＣＤ１９結合分子の第２のポリペプチドに対する１つ以上の修飾は、「ホール」を生成し、重鎖定常ドメインを含むＣＤ１９結合分子のポリペプチドのヘテロ二量体化が「ノブ」を「ホール」と結び付けさせる（例えば、相互作用させる、例えば第１のポリペプチドのＣＨ２ドメインが第２のポリペプチドのＣＨ２ドメインと相互作用するか、又は第１のポリペプチドのＣＨ３ドメインが第２のポリペプチドのＣＨ３ドメインと相互作用する）ようになっている。ノブは、重鎖定常ドメインを含むＣＤ１９結合分子の第１のポリペプチドの境界から突出し、したがってヘテロ多量体を安定させ、それにより例えばホモ多量体形成よりヘテロ多量体形成に有利に作用するように、重鎖定常ドメインを含むＣＤ１９結合分子の第２のポリペプチドとの境界における相補的な「ホール」に位置決め可能である。ノブは、元の境界に存在し得るか、又は（例えば、境界をコードする核酸を改変することによって）合成的に導入され得る。ノブの形成のためのインポート残基は、一般に、天然アミノ酸残基であり、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）から選択され得る。ある場合には、トリプトファン及びチロシンが選択される。実施形態において、突起の形成のための元の残基は、小さい側鎖容量を有し、例えばアラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニン又はバリンである。
「ホール」は、重鎖定常ドメインを含むＣＤ１９結合分子の第２のポリペプチドの境界から陥凹しており、したがって重鎖定常ドメインを含むＣＤ１９結合分子の第１のポリペプチドの隣接する相互作用表面上の対応するノブに適合する少なくとも１つのアミノ酸側鎖を含む。ホールは、元の境界に存在し得るか、又は（例えば、境界をコードする核酸を改変することによって）合成的に導入され得る。ホールの形成のためのインポート残基は、通常、天然アミノ酸残基であり、一部の実施形態ではアラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）及びバリン（Ｖ）から選択される。一実施形態において、アミノ酸残基は、セリン、アラニン又はトレオニンである。別の実施形態において、ホールの形成のための元の残基は、大きい側鎖容量を有し、例えばチロシン、アルギニン、フェニルアラニン又はトリプトファンである。
実施形態において、第１のＣＨ３ドメインは、残基３６６、４０５又は４０７において修飾されて、「ノブ」又はホール」（上述されるような）のいずれかを生成し、第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体する第２のＣＨ３ドメインは、残基３６６が第１のＣＨ３ドメインにおいて修飾される場合、残基４０７、残基４０５が第１のＣＨ３ドメインにおいて修飾される場合、残基３９４又は残基４０７が第１のＣＨ３ドメインにおいて修飾されて、第１のＣＨ３ドメインの「ノブ」又は「ホール」に相補的な「ホール」又は「ノブ」を生成する場合、残基３６６において修飾される。
別の実施形態において、第１のＣＨ３ドメインは、残基３６６において修飾され、第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体化する第２のＣＨ３ドメインは、残基３６６、３６８及び／又は４０７において修飾されて、第１のＣＨ３ドメインの「ノブ」又は「ホール」に相補的な「ホール」又は「ノブ」を生成する。一実施形態において、第１のＣＨ３ドメインに対する修飾は、３６６位におけるチロシン（Ｙ）残基を導入する。一実施形態において、第１のＣＨ３に対する修飾は、Ｔ３６６Ｙである。一実施形態において、第１のＣＨ３ドメインに対する修飾は、３６６位におけるトリプトファン（Ｗ）残基を導入する。一実施形態において、第１のＣＨ３に対する修飾は、Ｔ３６６Ｗである。ある実施形態において、３６６位において修飾された第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体化する、第２のＣＨ３ドメインに対する修飾（例えば、３６６位において導入されたチロシン（Ｙ）又はトリプトファン（Ｗ）を有する、例えば修飾Ｔ３６６Ｙ又はＴ３６６Ｗを含む）は、３６６位における修飾、３６８位における修飾及び４０７位における修飾を含む。ある実施形態において、３６６位における修飾は、セリン（Ｓ）残基を導入し、３６８位における修飾は、アラニン（Ａ）を導入し、４０７位における修飾は、バリン（Ｖ）を導入する。ある実施形態において、修飾は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。一実施形態において、多重特異性分子の第１のＣＨ３ドメインは、修飾Ｔ３６６Ｙを含み、第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体化する第２のＣＨ３ドメインは、修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含むか又は逆も同様である。一実施形態において、多重特異性分子の第１のＣＨ３ドメインは、修飾Ｔ３６６Ｗを含み、第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体化する第２のＣＨ３ドメインは、修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含むか又は逆も同様である。
更なる立体又は「歪曲」（例えば、ノブ・イン・ホール）修飾は、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレットの図３、図４及び図１２）、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレット及びＰＣＴ公開番号国際公開第２０１６／０８６１８６号パンフレット、国際公開第２０１６／０８６１８９号パンフレット、国際公開第２０１６／０８６１９６号パンフレット及び国際公開第２０１６／１８２７５１号パンフレットに記載されている。ＫＩＨ変異体の例は、Ｓ３６４Ｋ及びＥ３５７Ｑ修飾を含む第２の定常鎖と対合された、Ｌ３６８Ｄ及びＫ３７０Ｓ修飾を含む第１の定常鎖を含む。
本開示のＣＤ１９結合分子のいずれかにおいて使用するのに好適な更なるノブ・イン・ホール修飾対は、例えば、国際公開第１９９６／０２７０１１号パンフレット及びＭｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１６：６７７－６８１に更に記載されている。
更なる実施形態において、ＣＨ３ドメインは、システイン残基の対を導入するように更に修飾され得る。理論によって拘束されるものではないが、ジスルフィド結合を形成することが可能なシステイン残基の対の導入は、対合したＣＨ３ドメインを含むヘテロ二量体化ＣＤ１９結合分子、例えばＭＢＭに安定性を与えるものと考えられる。ある実施形態において、第１のＣＨ３ドメインは、３５４位におけるシステインを含み、第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体化する第２のＣＨ３ドメインは、３４９位におけるシステインを含む。ある実施形態において、第１のＣＨ３ドメインは、３５４位におけるシステイン（例えば、修飾Ｓ３５４Ｃを含む）及び３６６位におけるチロシン（Ｙ）（例えば、修飾Ｔ３６６Ｙを含む）を含み、第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体化する第２のＣＨ３ドメインは、３４９位におけるシステイン（例えば、修飾Ｙ３４９Ｃを含む）、３６６位におけるセリン（例えば、修飾Ｔ３６６Ｓを含む）、３６８位におけるアラニン（例えば、修飾Ｌ３６８Ａを含む）及び４０７位におけるバリン（例えば、修飾Ｙ４０７Ｖを含む）を含む。ある実施形態において、第１のＣＨ３ドメインは、３５４位におけるシステイン（例えば、修飾Ｓ３５４Ｃを含む）及び３６６位におけるトリプトファン（Ｗ）（例えば、修飾Ｔ３６６Ｗを含む）を含み、第１のＣＨ３ドメインと共にヘテロ二量体化する第２のＣＨ３ドメインは、３４９位におけるシステイン（例えば、修飾Ｙ３４９Ｃを含む）、３６６位におけるセリン（例えば、修飾Ｔ３６６Ｓを含む）、３６８位におけるアラニン（例えば、修飾Ｌ３６８Ａを含む）及び４０７位におけるバリン（例えば、修飾Ｙ４０７Ｖを含む）を含む。
ヘテロ二量体の生成に利用される更なる機構は、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５（２５）：１９６３７に記載されるように「静電ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）」と呼ばれることがある。これは、本明細書において「電荷対」と呼ばれることがある。この実施形態において、静電学を用いて、ヘテロ二量体化に向けて形成を歪曲させる。当業者が理解するように、これは、ｐＩ、したがって精製に影響を与えることもあり、したがってある場合にはｐＩ変異と見なされ得る。しかしながら、これらがヘテロ二量体化を促すために生成され、精製手段として使用されなかったため、それらは、「立体変異」として分類される。これらとしては、限定はされないが、Ｄ２２１Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対合されたＤ２２１Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／Ｌ３６８Ｅ及びＣ２２０Ｒ／Ｅ２２４Ｒ／Ｐ２２８Ｒ／Ｋ４０９Ｒと対合されたＣ２２０Ｅ／Ｐ２２８Ｅ／３６８Ｅが挙げられる。
更なる変異が、本明細書に概説されるｐＩ変異又は米国特許出願公開第２０１２／０１４９８７６号明細書の図３７に示される他の立体変異などの他の変異と、任意の量で任意選択的に及び独立して組み合わされ得る。
ある実施形態において、本明細書に概説される立体変異は、任意選択的に及び独立して、いずれかのｐＩ変異（又はＦｃ変異、ＦｃＲｎ変異などの他の変異）を一方又は両方のＦｃ領域に組み込むことができ、独立して及び任意選択的に、本開示のＣＤ１９結合分子に含めるか又は除外することができる。
好適な歪曲変異のリストが、多くの実施形態において特に有用ないくつかの対を示す表５に見出される。多くの実施形態において特に有用なのは、Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ；Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋ；Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｌ；及びＫ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含むが、これらに限定されないセットの対である。命名法に関して、対「Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ」は、Ｆｃ領域の一方が、二重変異セットＳ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを有し、他方が、二重変異セットＬ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを有することを意味する。
ある実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域を含む。ある実施形態において、第１のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｌ３６８Ｄ及びＫ３７０Ｓを含み、第２のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｓ３６４Ｋ及びＥ３５７Ｑを含む。ある実施形態において、第１のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｓ３６４Ｋ及びＥ３５７Ｑを含み、第２のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｌ３６８Ｄ及びＫ３７０Ｓを含む。
（ｂ）代替的なノブ及びホール：ＩｇＧヘテロ二量体化
対合したＣＨ３ドメインを含むＣＤ１９結合分子のポリペプチド鎖のヘテロ二量体化は、ＩｇＧ１抗体クラスに由来するＣＨ３ドメイン中に１つ以上の修飾を導入することによって増加され得る。一実施形態において、修飾は、第２のＣＨ３ドメイン中のＦ４０５Ｌ修飾と対合された１つのＣＨ３ドメインに対するＫ４０９Ｒ修飾を含む。更なる修飾は、更に又は代わりに、３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、４０７及び４０９位にあり得る。ある場合には、このような修飾を含むポリペプチドのヘテロ二量体化は、還元条件下、例えば２５～３７℃、例えば２５℃又は３７℃で１～１０時間、例えば１．５～５時間、例えば５時間にわたって１０～１００ｍＭの２－ＭＥＡ（例えば、２５、５０又は１００ｍＭの２－ＭＥＡ）で行われる。
対合したＣＨ３ドメインを含むＣＤ１９結合分子のポリペプチド鎖のヘテロ二量体化は、ＩｇＧ１抗体クラスに由来するＣＨ３ドメイン中に１つ以上の修飾を導入することによって増加され得る。一実施形態において、修飾は、第２のＣＨ３ドメイン中のＦ４０５Ｌ修飾と対合された１つのＣＨ３ドメインに対するＫ４０９Ｒ修飾を含む。更なる修飾は、更に又は代わりに、３６６、３６８、３７０、３９９、４０５、４０７及び４０９位にあり得る。ある場合には、このような修飾を含むポリペプチドのヘテロ二量体化は、還元条件下、例えば２５～３７℃、例えば２５℃又は３７℃で１～１０時間、例えば１．５～５時間、例えば５時間にわたって１０～１００ｍＭの２－ＭＥＡ（例えば、２５、５０又は１００ｍＭの２－ＭＥＡ）で行われる。
本明細書に記載されるアミノ酸置換は、周知の技術を用いてＣＨ３ドメイン中に導入され得る（例えば、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，ｅｄ．，１９９１、Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ａｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，ＤＮＡ，２：１８３を参照されたい）。
ＩｇＧヘテロ二量体化手法は、例えば、国際公開第２００８／１１９３５３号パンフレット、国際公開第２０１１／１３１７４６号パンフレット及び国際公開第２０１３／０６０８６７号パンフレットに更に記載されている。
この節に記載される実施形態のいずれかにおいて、ＣＨ３ドメインは、第７．２．２．１．３節に記載されるように、システイン残基の対を導入するように更に修飾され得る。
（ｃ）ｐＩ（等電点）変異
一般に、当業者によって理解されるように、ｐＩ変異の２つの一般的なカテゴリーがある：タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）及びタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）。本明細書に記載されるように、これらの変異の全ての組み合わせが行われ得る：一方のＦｃ領域が、野生型又は野生型と顕著に異なるｐＩを示さない変異型であり得、他方が、より塩基性又はより酸性のいずれかであり得る。代わりに、各Ｆｃ領域が、１つがより塩基性に、１つがより酸性に変化され得る。
一般に、当業者によって理解されるように、ｐＩ変異の２つの一般的なカテゴリーがある：タンパク質のｐＩを増加させるもの（塩基性変化）及びタンパク質のｐＩを減少させるもの（酸性変化）。本明細書に記載されるように、これらの変異の全ての組み合わせが行われ得る：一方のＦｃ領域が、野生型又は野生型と顕著に異なるｐＩを示さない変異型であり得、他方が、より塩基性又はより酸性のいずれかであり得る。代わりに、各Ｆｃ領域が、１つがより塩基性に、１つがより酸性に変化され得る。
ｐＩ変異の例示的な組み合わせが、表６に示される。本明細書に概説され、表６に示されるように、これらの変化が、ＩｇＧ１と比べて示されるが、全てのアイソタイプが、このように改変され得、アイソタイプハイブリッドも同様である。重鎖定常ドメインがＩｇＧ２－４に由来する場合、Ｒ１３３Ｅ及びＲ１３３Ｑも使用され得る。
一実施形態において、例えば図１Ｂ～１Ｗ、図１Ｙ～１ＡＨ、図２Ｂ～２Ｌ及び図２Ｎ～２Ｖの形式において、ｐＩ変異の組み合わせは、２０８Ｄ／２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄ変異を含む１つのＦｃ領域（負のＦａｂ側）（ヒトＩｇＧ１と比べたとき、Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）及び正に荷電したｓｃＦｖリンカー、例えばＬ３６を含む第２のＦｃ領域（正のｓｃＦｖ側）を有する（第７．２．２．３に記載されるように）。しかしながら、当業者によって理解されるように、第１のＦｃ領域は、２０８位を含むＣＨ１ドメインを含む。したがって、ＣＨ１ドメインを含まないコンストラクトにおいて（例えば、ドメインの１つとしてＣＨ１ドメインを利用しないＭＢＭについて、例えば図２Ｋに示される形式において）、例示的な負のｐＩ変異Ｆｃセットは、２９５Ｅ／３８４Ｄ／４１８Ｅ／４２１Ｄ変異（ヒトＩｇＧ１と比べたとき、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）を含むことができる。
ある実施形態において、第１のＦｃ領域は、表６からの置換のセットを有し、第２のＦｃ領域は、荷電リンカーに連結される（例えば、第７．２．２．３節に記載されるものから選択される）。
ある実施形態において、本開示のＣＤ１９結合分子は、第１のＦｃ領域及び第２のＦｃ領域を含む。ある実施形態において、第１のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｎ２０８Ｄ、Ｑ２９５Ｅ、Ｎ３８４Ｄ、Ｑ４１８Ｅ及びＮ４２１Ｄを含む。ある実施形態において、第２のＦｃ領域は、以下の突然変異：Ｎ２０８Ｄ、Ｑ２９５Ｅ、Ｎ３８４Ｄ、Ｑ４１８Ｅ及びＮ４２１Ｄを含む。
（ｄ）アイソタイプ変異
更に、本開示の多くの実施形態は、１つのＩｇＧアイソタイプから別のものへの特定の位置におけるｐＩアミノ酸の「取り込み」に依存し、したがって、望ましくない免疫原性が変異体に導入される可能性を低減するか又はなくす。これらのいくつかが、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号明細書の図２１に示される。すなわち、ＩｇＧ１は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、ＩｇＧ１の重鎖定常領域は、ＩｇＧ２のものより高いｐＩを有する（８．１０対７．３１）。特定の位置でＩｇＧ２残基をＩｇＧ１骨格に導入することにより、得られるＦｃ領域のｐＩは低下（又は増加）され、更に、より長い血清半減期を示す。例えば、ＩｇＧ１は、１３７位にグリシン（ｐＩ ５．９７）を有し、ＩｇＧ２は、グルタミン酸（ｐＩ ３．２２）を有し；グルタミン酸を取り込むと、得られるタンパク質のｐＩに影響を与える。以下に記載されるように、変異型抗体のｐＩに顕著な影響を与えるために、いくつかのアミノ酸置換が、一般に必要とされる。しかしながら、後述されるように、ＩｇＧ２分子の変化でさえ、血清半減期の増加を可能にすることが留意されるべきである。
更に、本開示の多くの実施形態は、１つのＩｇＧアイソタイプから別のものへの特定の位置におけるｐＩアミノ酸の「取り込み」に依存し、したがって、望ましくない免疫原性が変異体に導入される可能性を低減するか又はなくす。これらのいくつかが、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号明細書の図２１に示される。すなわち、ＩｇＧ１は、高いエフェクター機能を含む様々な理由から治療用抗体の一般的なアイソタイプである。しかしながら、ＩｇＧ１の重鎖定常領域は、ＩｇＧ２のものより高いｐＩを有する（８．１０対７．３１）。特定の位置でＩｇＧ２残基をＩｇＧ１骨格に導入することにより、得られるＦｃ領域のｐＩは低下（又は増加）され、更に、より長い血清半減期を示す。例えば、ＩｇＧ１は、１３７位にグリシン（ｐＩ ５．９７）を有し、ＩｇＧ２は、グルタミン酸（ｐＩ ３．２２）を有し；グルタミン酸を取り込むと、得られるタンパク質のｐＩに影響を与える。以下に記載されるように、変異型抗体のｐＩに顕著な影響を与えるために、いくつかのアミノ酸置換が、一般に必要とされる。しかしながら、後述されるように、ＩｇＧ２分子の変化でさえ、血清半減期の増加を可能にすることが留意されるべきである。
他の実施形態において、得られるタンパク質の全体的な荷電状態を低下させるため（例えば、より高いｐＩアミノ酸からより低いｐＩアミノ酸に変化させることによって）又は更に後述されるように、安定性のために構造の調整を可能にするために、非アイソタイプのアミノ酸変化が行われる。
更に、２つの半抗体を含むＣＤ１９結合分子の重鎖及び軽鎖定常ドメインの両方をｐＩ操作することにより、各半抗体の有意な変化がみられる。２つの半抗体ｐＩが少なくとも０．５だけ異なることは、イオン交換クロマトグラフィー若しくは等電点電気泳動又は等電点に感受性の他の方法による分離を可能にし得る。
（ｅ）ｐＩの計算
Ｆｃ領域及びＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を含む半抗体のｐＩは、変異型重鎖定常ドメインのｐＩ並びに変異型重鎖定常ドメイン及びＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を含む半抗体全体のｐＩに依存し得る。したがって、ある実施形態において、ｐＩの変化は、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号明細書の図１９のチャートを用いて、変異型重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書に記載されるように、どの半抗体を操作するかは、一般に、半抗体の固有のｐＩによって決定される。代わりに、各半抗体のｐＩが比較され得る。
Ｆｃ領域及びＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を含む半抗体のｐＩは、変異型重鎖定常ドメインのｐＩ並びに変異型重鎖定常ドメイン及びＡＢＭ又はＡＢＭ鎖を含む半抗体全体のｐＩに依存し得る。したがって、ある実施形態において、ｐＩの変化は、米国特許出願公開第２０１４／０３７００１３号明細書の図１９のチャートを用いて、変異型重鎖定常ドメインに基づいて計算される。本明細書に記載されるように、どの半抗体を操作するかは、一般に、半抗体の固有のｐＩによって決定される。代わりに、各半抗体のｐＩが比較され得る。
（ｆ）インビボ結合に良好なＦｃＲｎも付与するｐＩ変異
ｐＩ変異がＦｃ領域のｐＩを減少させる場合、それは、インビボでの血清保持を改善するという追加の利点を有し得る。
ｐＩ変異がＦｃ領域のｐＩを減少させる場合、それは、インビボでの血清保持を改善するという追加の利点を有し得る。
エンドソームにおけるｐＨ６でのＦｃＲｎへの結合により、Ｆｃが隔離されるため、ｐＩ変異Ｆｃ領域は、インビボでの抗原結合分子により長い半減期を与えると考えられる（Ｇｈｅｔｉｅ ａｎｄ Ｗａｒｄ，１９９７，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ．１８（１２）：５９２－５９８）。次に、エンドソーム区画は、Ｆｃを細胞表面にリサイクルする。区画が細胞外空間に開くと、約７．４のより高いｐＨが、血液中へのＦｃの放出を誘導する。マウスにおいて、Ｄａｌｌ’ Ａｃｑｕａらは、ｐＨ６及びｐＨ７．４での増加したＦｃＲｎ結合を有するＦｃ突然変異体が、実際に低下した血清濃度及び野生型Ｆｃと同じ半減期を有することを示した（Ｄａｌｌ’ Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１－５１８０）。ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対するＦｃの親和性の増加は、血液中へのＦｃの放出を妨げると考えられる。したがって、インビボでのＦｃの半減期を増加させるＦｃ突然変異は、理想的には、より高いｐＨでのＦｃの放出をなお可能にしながら、より低いｐＨでのＦｃＲｎ結合を増加させる。アミノ酸ヒスチジンは、６．０～７．４のｐＨ範囲でその荷電状態を変化させる。したがって、Ｆｃ／ＦｃＲｎ複合体中の重要な位置にＨｉｓ残基を見出すことは驚くべきことではない。
より低い等電点を有する可変領域を有する抗体が、より長い血清半減期も有し得ることが示唆されている（Ｉｇａｗａ ｅｔ ａｌ．，２０１０，ＰＥＤＳ．２３（５）：３８５－３９２）。しかしながら、この機構の理解は、依然として不十分である。更に、可変領域は、抗体毎に異なる。低下されたｐＩ及び延長された半減期を有する定常領域変異体は、本明細書に記載されるように、ＣＤ１９結合分子の薬物速度論的特性を改善するよりモジュール型の手法を提供するであろう。
（ｇ）極性架橋
Ｆｃドメインを含むＣＤ１９結合分子、例えばＭＢＭのポリペプチド鎖のヘテロ二量体化は、「極性架橋」の原理に基づいて修飾を導入することによって増加され得、「極性架橋」の原理は、２つのポリペプチド鎖の結合境界における残基をヘテロ二量体形態において同様の（又は補完的な）物理的特性の残基と相互作用させる一方、ホモ二量体形態において異なる物理的特性の残基と相互作用させる。特に、これらの修飾は、ヘテロ二量体形成において、極性残基が極性残基と相互作用する一方、疎水性残基が疎水性残基と相互作用するように設計される。対照的に、ホモ二量体形成において、残基は、極性残基が疎水性残基と相互作用するように修飾される。ヘテロ二量体形態における好ましい相互作用及びホモ二量体形態における好ましくない相互作用は、連携して、Ｆｃ領域が、ホモ二量体を形成するよりもヘテロ二量体を形成する傾向が高くなるようにする。
Ｆｃドメインを含むＣＤ１９結合分子、例えばＭＢＭのポリペプチド鎖のヘテロ二量体化は、「極性架橋」の原理に基づいて修飾を導入することによって増加され得、「極性架橋」の原理は、２つのポリペプチド鎖の結合境界における残基をヘテロ二量体形態において同様の（又は補完的な）物理的特性の残基と相互作用させる一方、ホモ二量体形態において異なる物理的特性の残基と相互作用させる。特に、これらの修飾は、ヘテロ二量体形成において、極性残基が極性残基と相互作用する一方、疎水性残基が疎水性残基と相互作用するように設計される。対照的に、ホモ二量体形成において、残基は、極性残基が疎水性残基と相互作用するように修飾される。ヘテロ二量体形態における好ましい相互作用及びホモ二量体形態における好ましくない相互作用は、連携して、Ｆｃ領域が、ホモ二量体を形成するよりもヘテロ二量体を形成する傾向が高くなるようにする。
例示的な実施形態において、上記の修飾は、ＣＨ３ドメインの残基３６４、３６８、３９９、４０５、４０９及び４１１の１つ以上の位置において生成される。
ある実施形態において、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｑ、Ｎ３９９Ｋ、Ｆ４０５Ｓ、Ｋ４０９Ｆ及びＲ４１１Ｋからなる群から選択される１つ以上の修飾が２つのＣＨ３ドメインの１つに導入される。Ｙ４０７Ｆ、Ｋ４０９Ｑ及びＴ４１１Ｎからなる群から選択される１つ以上の修飾が第２のＣＨ３ドメイン中に導入され得る。
別の実施形態において、Ｓ３６４Ｌ、Ｔ３６６Ｖ、Ｌ３６８Ｑ、Ｄ３９９Ｋ、Ｆ４０５Ｓ、Ｋ４０９Ｆ及びＴ４１１Ｋからなる群から選択される１つ以上の修飾が１つのＣＨ３ドメイン中に導入される一方、Ｙ４０７Ｆ、Ｋ４０９Ｑ及びＴ４１１Ｄからなる群から選択される１つ以上の修飾が第２のＣＨ３ドメイン中に導入される。
例示的な一実施形態において、１つのＣＨ３ドメインの３６６位におけるトレオニンの元の残基がバリンで置換される一方、他方のＣＨ３ドメインの４０７位におけるチロシンの元の残基がフェニルアラニンで置換される。
別の例示的な実施形態において、１つのＣＨ３ドメインの３６４位におけるセリンの元の残基がロイシンで置換される一方、同じＣＨ３ドメインの３６８位におけるロイシンの元の残基がグルタミンで置換される。
更に別の例示的な実施形態において、１つのＣＨ３ドメインの４０５位におけるフェニルアラニンの元の残基がセリンで置換され、このＣＨ３ドメインの４０９位におけるリジンの元の残基がフェニルアラニンで置換される一方、他方のＣＨ３ドメインの４０９位におけるリジンの元の残基がグルタミンで置換される。
更に別の例示的な実施形態において、１つのＣＨ３ドメインの３９９位におけるアスパラギン酸の元の残基がリジンで置換され、同じＣＨ３ドメインの４１１位におけるトレオニンの元の残基がリジンで置換される一方、他方のＣＨ３ドメインの４１１位におけるトレオニンの元の残基がアスパラギン酸で置換される。
本明細書に記載されるアミノ酸置換は、周知の技術を用いてＣＨ３ドメイン中に導入され得る（例えば、ＭｃＰｈｅｒｓｏｎ，ｅｄ．，１９９１、Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ：ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ；Ａｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，ＤＮＡ，２：１８３を参照されたい）。極性架橋手法は、例えば、国際公開第２００６／１０６９０５号パンフレット、国際公開第２００９／０８９００４号パンフレット及びＧｕｎａｓｅｋａｒａｎ，ｅｔ ａｌ．，２０１０，ＪＢＣ ２８５：１９６３７－１９６４６に記載されている。
更なる極性架橋修飾は、例えば、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレットの図６）、ＰＣＴ公開番号国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレット及びＰＣＴ公開番号国際公開第２０１６／０８６１８６号パンフレット、国際公開第２０１６／０８６１８９号パンフレット、国際公開第２０１６／０８６１９６号パンフレット及び国際公開第２０１６／１８２７５１号パンフレットに記載されている。極性架橋変異体の例は、Ｎ２０８Ｄ、Ｑ２９５Ｅ、Ｎ３８４Ｄ、Ｑ４１８Ｅ及びＮ４２１Ｄ修飾を含む定常鎖を含む。
本明細書に記載される実施形態のいずれかにおいて、ＣＨ３ドメインは、第７．２．２．１．３節に記載されるように、システイン残基の対を導入するように更に修飾され得る。
ヘテロ二量体化を促進するための更なる手法は、例えば、国際公開第２０１６／１０５４５０号パンフレット、国際公開第２０１６／０８６１８６号パンフレット、国際公開第２０１６／０８６１８９号パンフレット、国際公開第２０１６／０８６１９６号パンフレット、国際公開第２０１６／１４１３７８号パンフレット、及び国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレット、及び国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレットに記載されている。これらの手法のいずれかは、本明細書に記載されるＣＤ１９結合分子に用いられ得る。
７．２．２．１．６．ヘテロ二量体化変異及び他のＦｃ変異の組み合わせ
当業者によって理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化変異（歪曲及び／又はｐＩ変異を含む）の全ては、ＦｃドメインのＦｃ領域が二量体化するそれらの能力を保持する限り、任意選択的に及び独立して、任意の方法で組み合わされ得る。更に、これらの変異は、全てヘテロ二量体化形式のいずれかに組み合わされ得る。
当業者によって理解されるように、列挙されたヘテロ二量体化変異（歪曲及び／又はｐＩ変異を含む）の全ては、ＦｃドメインのＦｃ領域が二量体化するそれらの能力を保持する限り、任意選択的に及び独立して、任意の方法で組み合わされ得る。更に、これらの変異は、全てヘテロ二量体化形式のいずれかに組み合わされ得る。
ｐＩ変異の場合、特に使用される実施形態が表６に示されるが、精製を容易にするためにＦｃヘテロ二量体中の２つのＦｃ領域間のｐＩの差異を変化させるという基本的な規則に従い、他の組み合わせが生成され得る。
更に、ヘテロ二量体化変異、歪曲及びｐＩのいずれも、本明細書に一般に概説されるように、独立して及び任意選択的に、Ｆｃ除去変異、Ｆｃ変異、ＦｃＲｎ変異と組み合わされる。
ある実施形態において、本開示において利用される歪曲及びｐＩ変異の特定の組み合わせは、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ：Ｔ３６６Ｗ（任意選択的に、架橋ジスルフィドを含む、Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ／Ｙ３４９Ｃ：Ｔ３６６Ｗ／Ｓ３５４Ｃ）であり、一方のＦｃ領域は、Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４８１Ｄを含み、他方は、正に荷電したｓｃＦｖリンカーを含む（形式がｓｃＦｖドメインを含む場合）。当業者によって理解されるように、「ノブ・イン・ホール」変異は、ｐＩを変化させず、したがって、Ｆｃヘテロ二量体中のＦｃ領域のいずれか一方に使用され得る。
ある実施形態において、本開示において利用される第１及び第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み、第１及び／又は第２のＦｃ領域は、除去変異体置換２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、第１及び／又は第２のＦｃ領域は、ｐＩ変異体置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ）を含む。
７．２．２．２．ヒンジ領域
ＣＤ１９結合分子は、例えば、抗原結合ドメインをＦｃ領域に連結するヒンジ領域も含み得る。ヒンジ領域は、天然又は修飾ヒンジ領域であり得る。ヒンジ領域は、典型的には、Ｆｃ領域のＮ末端において見られる。
ＣＤ１９結合分子は、例えば、抗原結合ドメインをＦｃ領域に連結するヒンジ領域も含み得る。ヒンジ領域は、天然又は修飾ヒンジ領域であり得る。ヒンジ領域は、典型的には、Ｆｃ領域のＮ末端において見られる。
天然ヒンジ領域は、天然抗体中のＦａｂ及びＦｃドメイン間に通常見られ得るヒンジ領域である。修飾ヒンジ領域は、天然ヒンジ領域と長さ及び／又は組成が異なる任意のヒンジである。このようなヒンジは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、サメ、ブタ、ハムスター、ラクダ、ラマ又はヤギヒンジ領域など、他の種に由来するヒンジ領域を含み得る。他の修飾ヒンジ領域は、重鎖Ｆｃ領域のものと異なるクラス又はサブクラスの抗体に由来する完全なヒンジ領域を含み得る。代わりに、修飾ヒンジ領域は、天然ヒンジの部分又は繰返し中の各単位が天然ヒンジ領域に由来する繰返し単位を含み得る。更なる代替例において、天然ヒンジ領域は、１つ以上のシステイン又は他の残基をセリン又はアラニンなどの中性残基に転化するか、又は好適に配置された残基をシステイン残基に転化することにより改変され得る。このような手段により、ヒンジ領域中のシステイン残基の数が増加又は減少され得る。この手法は、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号明細書に更に記載されている。ヒンジ領域中のシステイン残基の数を改変することにより、例えば軽鎖及び重鎖の集合を促進するか、又はＣＤ１９結合分子の安定性を増加若しくは低下させることができる。他の修飾ヒンジ領域は、全体的に合成であり得、長さ、システイン組成物及び柔軟性など、所望の特性を有するように設計され得る。
いくつかの修飾ヒンジ領域は、例えば、米国特許第５，６７７，４２５号明細書、国際公開第９９１５５４９号パンフレット、国際公開第２００５００３１７０号パンフレット、国際公開第２００５００３１６９号パンフレット、国際公開第２００５００３１７０号パンフレット、国際公開第９８２５９７１及び国際公開第２００５００３１７１号パンフレットに記載されている。
好適なヒンジ配列の例が表７に示される。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域は、そのＮ末端において無傷のヒンジ領域を有する。
一実施形態において、重鎖Ｆｃ領域及びヒンジ領域は、ＩｇＧ４に由来し、ヒンジ領域は、修飾配列ＣＰＰＣ（配列番号１１７９）を含む。ヒトＩｇＧ４のコアヒンジ領域は、配列ＣＰＰＣ（配列番号１１７９）を含有するＩｇＧ１と比較して配列ＣＰＳＣ（配列番号１１８９）を含有する。ＩｇＧ４配列中に存在するセリン残基は、この領域における増加した柔軟性をもたらし、したがって、分子の一部は、鎖間ジスルフィドを形成するためのＩｇＧ分子における他の重鎖への架橋ではなく、同じタンパク質鎖内のジスルフィド結合（鎖内ジスルフィド）を形成する。（Ａｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌ ｌｍｍｕｎｏｌ ３０（１）：１０５－１０８）。セリン残基をプロリンに変化させて、ＩｇＧ１と同じコア配列を得ることは、ＩｇＧ４ヒンジ領域における鎖間ジスルフィドの完全な形成を可能にし、したがって精製された産物の異質性を低減する。この改変されたアイソタイプは、ＩｇＧ４Ｐと呼ばれる。
７．２．２．３．ＡＢＭリンカー
特定の態様において、本開示は、ＣＤ１９結合分子を提供し、ＡＢＭの２つ以上の構成要素（例えば、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ）、２つ以上のＡＢＭ又はＡＢＭ及び非ＡＢＭドメイン（例えば、Ｆｃ領域などの二量体化ドメイン）がペプチドリンカーによって互いに連結される。このようなリンカーは、本明細書において「ＡＢＭリンカー」と呼ばれる。
特定の態様において、本開示は、ＣＤ１９結合分子を提供し、ＡＢＭの２つ以上の構成要素（例えば、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬ）、２つ以上のＡＢＭ又はＡＢＭ及び非ＡＢＭドメイン（例えば、Ｆｃ領域などの二量体化ドメイン）がペプチドリンカーによって互いに連結される。このようなリンカーは、本明細書において「ＡＢＭリンカー」と呼ばれる。
ペプチドリンカーは、２個のアミノ酸～６０個以上のアミノ酸の範囲であり得、特定の態様において、ペプチドリンカーは、３個のアミノ酸～５０個のアミノ酸、４～３０個のアミノ酸、５～２５個のアミノ酸、１０～２５個のアミノ酸又は１２～２０個のアミノ酸の範囲である。特定の実施形態において、ペプチドリンカーは、２個のアミノ酸、３個のアミノ酸、４個のアミノ酸、５個のアミノ酸、６個のアミノ酸、７個のアミノ酸、８個のアミノ酸、９個のアミノ酸、１０個のアミノ酸、１１個のアミノ酸、１２個のアミノ酸、１３個のアミノ酸、１４個のアミノ酸、１５個のアミノ酸、１６個のアミノ酸、１７個のアミノ酸、１８個のアミノ酸、１９個のアミノ酸、２０個のアミノ酸、２１個のアミノ酸、２２個のアミノ酸、２３個のアミノ酸、２４個のアミノ酸、２５個のアミノ酸、２６個のアミノ酸、２７個のアミノ酸、２８個のアミノ酸、２９個のアミノ酸、３０個のアミノ酸、３１個のアミノ酸、３２個のアミノ酸、３３個のアミノ酸、３４個のアミノ酸、３５個のアミノ酸、３６個のアミノ酸、３７個のアミノ酸、３８個のアミノ酸、３９個のアミノ酸、４０個のアミノ酸、４１個のアミノ酸、４２個のアミノ酸、４３個のアミノ酸、４４個のアミノ酸、４５個のアミノ酸、４６個のアミノ酸、４７個のアミノ酸、４８個のアミノ酸、４９個のアミノ酸又は５０個のアミノ酸長である。
荷電及び／又は可撓性リンカーが使用され得る。
ＣＤ１９結合分子に使用され得る可撓性ＡＢＭリンカーの例としては、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．６５（１０）：１３５７－１３６９及びＫｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ２７（１０）：３２５－３３０によって開示されるものが挙げられる。特に有用な可撓性リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎ（（Ｇ４Ｓ）ｎとも呼ばれる）（配列番号１１７１）である。ある実施形態において、ｎは、１～１０の任意の数、すなわち１、２、３、４、５、６、７、８、９及び１０又は上記の数のいずれか２つによって境界付けられる任意の範囲、例えば１～５、２～５、３～６、２～４、１～４など及びその他である。
本開示のＣＤ１９結合分子における使用に適したＡＢＭリンカーの他の例は、以下の表８に示される
様々な態様において、本開示は、１つ以上のＡＢＭリンカーを含むＣＤ１９結合分子を提供する。ＡＢＭリンカーのそれぞれは、任意選択的に上の表８から選択される２個のアミノ酸～６０個のアミノ酸長、例えば４～３０個のアミノ酸、５～２５個のアミノ酸、１０～２５個のアミノ酸又は１２～２０個のアミノ酸長の範囲であり得る。特定の実施形態において、ＣＤ１９結合分子は、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＡＢＭリンカーを含む。ＡＢＭリンカーは、ＣＤ１９結合分子の１つ、２つ、３つ、４つ又は更にそれを超えるポリペプチド鎖上にあり得る。
７．２．３．二重特異性結合分子形態
例示的なＢＢＭ形態が図１に示される。図１Ａは、図１Ｂ～１ＡＨに示されるＢＢＭ形態の構成要素を示す。ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃドメインは、それぞれ第７．２．１及び７．２．２節においてこれらの構成要素について記載される特性を有し得る。図１に示されるＢＢＭ形態の構成要素は、第７．２．１及び７．２．２節に記載される手段のいずれかによって（例えば、直接結合、ＡＢＭリンカー、ジスルフィド結合、ノブ・イン・ホール相互作用で修飾されたＦｃドメインなどによって）互いに会合され得る。図１に示される様々な構成要素の配向及び会合は、例示的なものであるに過ぎず；当業者によって理解されるように、他の配向及び会合が好適であり得る（例えば、第７．２．１及び７．２．２節に記載されるように）。
例示的なＢＢＭ形態が図１に示される。図１Ａは、図１Ｂ～１ＡＨに示されるＢＢＭ形態の構成要素を示す。ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃドメインは、それぞれ第７．２．１及び７．２．２節においてこれらの構成要素について記載される特性を有し得る。図１に示されるＢＢＭ形態の構成要素は、第７．２．１及び７．２．２節に記載される手段のいずれかによって（例えば、直接結合、ＡＢＭリンカー、ジスルフィド結合、ノブ・イン・ホール相互作用で修飾されたＦｃドメインなどによって）互いに会合され得る。図１に示される様々な構成要素の配向及び会合は、例示的なものであるに過ぎず；当業者によって理解されるように、他の配向及び会合が好適であり得る（例えば、第７．２．１及び７．２．２節に記載されるように）。
ＢＢＭは、図１に示される形態に限定されない。使用され得る他の形態が当業者に公知である。例えば、国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレット；国際公開第２０１７／１２４００２号パンフレット；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：３８；Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ＆Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２０１７，ｍＡｂｓ ９：２，１８２－２１２；米国特許出願公開第２０１６／０３５５６００号明細書；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１６，ＭＡｂｓ ８（６）：１０１０－２０；及び米国特許出願公開第２０１７／０１４５１１６号明細書を参照されたい。
７．２．３．１．例示的な２価ＢＢＭ
ＢＢＭは、２価であり得、すなわち、それらは、２つの抗原結合ドメインを有し、その１つは、ＣＤ１９（ＡＢＭ１）に結合し、１つは、第２の標的抗原（ＡＢＭ２）、例えばＴＣＲ複合体の構成要素に結合する。
ＢＢＭは、２価であり得、すなわち、それらは、２つの抗原結合ドメインを有し、その１つは、ＣＤ１９（ＡＢＭ１）に結合し、１つは、第２の標的抗原（ＡＢＭ２）、例えばＴＣＲ複合体の構成要素に結合する。
例示的な２価ＢＢＭ形態が図１Ｂ～１Ｆに示される。
図１Ｂ～１Ｄに示されるように、ＢＢＭは、２つの半抗体を含み得、一方が１つのＡＢＭを含み、他方が１つのＡＢＭを含み、２つの半抗体は、Ｆｃドメインを介して対合されている。
図１Ｂの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｃの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｄの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｅ～図１Ｆに示されるように、２価ＢＢＭは、Ｆｃドメインの一方のＦｃ領域に結合した２つのＡＢＭを含み得る。
図１Ｅの実施形態において、このＢＢＭは、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃドメインを含み、ここではｓｃＦｖがＦａｂとＦｃドメインとの間に位置する。
図１Ｆの実施形態において、（「ワンアームｓｃＦｖ－ｍＡｂ」形態）ＢＢＭは、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃドメインを含み、ここではＦａｂがｓｃＦｖとＦｃドメインとの間に位置する。
図１Ｂ～図１Ｆに示される形態において、Ｘ及びＹの各々は、ＡＢＭ１又はＡＢＭ２のいずれかを表し、ただし、ＢＢＭは、１つのＡＢＭ１と１つのＡＢＭ２とを含むものとする。したがって、本開示は、ＸがＡＢＭ１であり、ＹがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｂ１」と称される）図１Ｂ～図１Ｆのいずれか１つに示されるような２価ＢＢＭを提供する。本開示は、ＸがＡＢＭ２であり、ＹがＡＢＭ１である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｂ２」と称される）図１Ｂ～図１Ｆのいずれか１つに示されるような２価ＢＢＭも提供する。
７．２．３．２．例示的な３価ＢＢＭ
ＢＢＭは３価であることができ、すなわち、このＢＢＭは３つの抗原結合ドメインを有し、その１つ又は２つがＣＤ１９に結合し（ＡＢＭ１）、その１つ又は２つが第２の標的抗原に結合し（ＡＢＭ２）、例えばＴＣＲ複合体の構成要素に結合する。
ＢＢＭは３価であることができ、すなわち、このＢＢＭは３つの抗原結合ドメインを有し、その１つ又は２つがＣＤ１９に結合し（ＡＢＭ１）、その１つ又は２つが第２の標的抗原に結合し（ＡＢＭ２）、例えばＴＣＲ複合体の構成要素に結合する。
例示的な３価ＢＢＭ形態を図１Ｇ～図１Ｚに示す。
図１Ｇ～図１Ｎ、図１Ｑ～図１Ｗ、図１Ｙ～図１Ｚに示されるように、ＢＢＭは２つの半抗体を含み、一方は２つのＡＢＭを含み、他方は１つのＡＢＭを含み、これらの２つの半抗体は、Ｆｃドメインを介して対を成している。
図１Ｇの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦａｂ、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｈの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｉの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、２つのＦａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｊの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、２つのＦａｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｋの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、２つのｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｌの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｍの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｎの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ダイアボディ型結合ドメイン及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１Ｑの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１Ｒの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１Ｓの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及び第２のｓｃＦＶを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｔの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及びＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｕの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、２つのＦａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｖの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｗの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｙの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１Ｚの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
代わりに、図１Ｏ及び図１Ｐに示されるように、３価ＢＢＭは、１つの完全なＡＢＭ（図１Ｏ及び図１ＰのＦａｂ）と、別のＡＢＭの一部分（一方がＶＨ、他方がＶＬ）とを各々が含む２つの半抗体を含み得る。これらの２つの半抗体はＦｃドメインを介して対を成し、そこでＶＨとＶＬとが会合して完全な抗原結合Ｆｖドメインを形成する。
ＢＢＭは、図１Ｘに示されるように、単鎖であり得る。図１ＸのＢＢＭは、リンカーを介して連結された３つのｓｃＦｖドメインを含む。
図１Ｇ～図１Ｚに示される形態において、Ｘ、Ｙ及びＡの各々は、ＡＢＭ１又はＡＢＭ２のいずれかを表し、ただし、ＢＢＭは、少なくともＡＢＭ１と、少なくとも１つのＡＢＭ２とを含むものとする。したがって、３価ＭＢＭは、１つ又は２つのＡＢＭ１と、１つ又は２つのＡＢＭ２とを含むことになる。一部の実施形態において、３価ＢＢＭは、２つのＡＢＭ１と、１つのＡＢＭ２とを含む。他の実施形態において、本開示の３価ＢＢＭは、１つのＡＢＭ１と、２つのＡＢＭ２とを含む。
したがって、本開示では、ＸがＡＢＭ１であり、ＹがＡＢＭ１であり、及びＡがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ１」と称される）図１Ｇ～図１Ｚのいずれか１つに示されるような３価ＢＢＭを提供する。
本開示は、ＸがＡＢＭ１であり、ＹがＡＢＭ２であり、ＡがＡＢＭ１である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ２」と称される）図１Ｇ～図１Ｚのいずれか１つに示されるような３価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、ＸがＡＢＭ２であり、ＹがＡＢＭ１であり、ＡがＡＢＭ１である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ３」と称される）図１Ｇ～図１Ｚのいずれか１つに示されるような３価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、ＸがＡＢＭ１であり、ＹがＡＢＭ２であり、ＡがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ４」と称される）図１Ｇ～図１Ｚのいずれか１つに示されるような３価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、ＸがＡＢＭ２であり、ＹがＡＢＭ１であり、ＡがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ５」と称される）図１Ｇ～図１Ｚのいずれか１つに示されるような３価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、ＸがＡＢＭ２であり、ＹがＡＢＭ２であり、ＡがＡＢＭ１である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ６」と称される）図１Ｇ～図１Ｚのいずれか１つに示されるような３価ＢＢＭを更に提供する。
７．２．３．３．例示的な４価ＢＢＭ
ＢＢＭは４価であることができ、すなわち、このＢＢＭは４つの抗原結合ドメインを有し、その１つ、２つ又は３つはＣＤ１９に結合し（ＡＢＭ１）、その１つ、２つ又は３つは第２の標的抗原に結合し（ＡＢＭ２）、例えばＴＣＲ複合体の構成要素に結合する。
ＢＢＭは４価であることができ、すなわち、このＢＢＭは４つの抗原結合ドメインを有し、その１つ、２つ又は３つはＣＤ１９に結合し（ＡＢＭ１）、その１つ、２つ又は３つは第２の標的抗原に結合し（ＡＢＭ２）、例えばＴＣＲ複合体の構成要素に結合する。
例示的な４価ＢＢＭ形態を図１ＡＡ～図１ＡＨに示す。
図１ＡＡ～図１ＡＨに示されるように、４価ＢＢＭは、各々が２つの完全なＡＢＭを含む２つの半抗体を含むことができ、これらの２つの半抗体はＦｃドメインを介して対を成している。
図１ＡＡの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦａｂを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１ＡＢの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１ＡＣの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域を介して会合されてＦｃドメインを形成する。
図１ＡＤの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及び第２のＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及び第２のＦａｂを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１ＡＥの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ、第２のｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、第２のｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１ＡＦの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１ＡＧの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及びＦａｂを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１ＡＨの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及びＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及びＦａｂを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図１ＡＡ～図１ＡＨに示される形態において、Ｘ、Ｙ、Ａ及びＢの各々は、その順序は必須でないが、ＡＢＭ１又はＡＢＭ２を表し、ただし、ＢＢＭは、少なくとも１つのＡＢＭ１と少なくとも１つのＡＢＭ２とを含むものとする。したがって、４価ＡＢＭは、１つ、２つ又は３つのＡＢＭ１と、１つ、２つ又はＡＢＭ２とを含むことになる。一部の実施形態において、４価ＢＢＭは、３つのＡＢＭ１と１つのＡＢＭ２とを含む。他の実施形態において、４価ＢＢＭは、２つのＡＢＭ１ ２つのＡＢＭ２を含む。更に他の実施形態において、４価ＢＢＭは、１つのＡＢＭ１と３つのＡＢＭ２とを含む。
したがって、本開示では、ＸがＡＢＭ１であり、Ｙ、Ａ及びＢの各々がＡＢＭ２を含む（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ １」と称される）図１ＡＡ～図１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを提供する。
本開示は、ＹがＡＢＭ１であり、Ｘ、Ａ及びＢの各々がＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ２」と称される）図１ＡＡ～図１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、ＡがＡＢＭ１であり、Ｘ、Ｙ及びＢの各々がＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ３」と称される）図１ＡＡ～図１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、ＢがＡＢＭ１であり、Ｘ、Ｙ及びＡの各々がＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ４」と称される）図１ＡＡ～図１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、Ｘ及びＹが両方ともＡＢＭ１であり、Ａ及びＢの両方がＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ５」と称される）図１ＡＡ～図１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、Ｘ及びＡが両方ともＡＢＭ１であり、Ｙ及びＢの両方がＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ６」と称される）図１ＡＡ～図１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供する。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ｘ及びＢが両方ともＡＢＭ１であり、Ｙ及びＡが両方ともＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ７」として示される）。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＧのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ｙ及びＡが両方ともＡＢＭ１であり、Ｘ及びＢが両方ともＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ８」として示される）。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ｙ及びＢが両方ともＡＢＭ１であり、Ｘ及びＡが両方ともＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ ９」として示される）。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ａ及びＢが両方ともＡＢＭ１であり、Ｘ及びＹが両方ともＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ １０」として示される）。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ｘ、Ｙ及びＡのそれぞれがＡＢＭ１であり、ＢがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ １１」として示される）。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ｘ、Ｙ及びＢのそれぞれがＡＢＭ１であり、ＡがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ １２」として示される）。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ｘ、Ａ及びＢのそれぞれがＡＢＭ１であり、ＹがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ １３」として示される）。
本開示は、図１ＡＡ～１ＡＨのいずれか１つに示されるような４価ＢＢＭを更に提供し、Ｙ、Ａ及びＢのそれぞれがＡＢＭ１であり、ＸがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔｖ １４」として示される）。
７．２．４．三重特異性結合分子形態
例示的なＴＢＭ形態を図２に示す。図２Ａは、図２Ｂ～図１Ｖに示されるＴＢＭ形態の構成要素を示す。ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃは、各々が、第７．２．１節及び７．２．２節にこれらの構成要素について記載される特徴を有し得る。図２に示されるＴＢＭ形態の構成要素は、第７．２．１節及び７．２．２節に記載される手段のいずれかによって（例えば、直接的な結合、ＡＢＭリンカー、ジスルフィド結合、ノブ・イン・ホール相互作用で修飾されたＦｃドメイン等によって）互いに会合され得る。図２に示される様々な構成要素の向き及び会合は、単に例に過ぎない；当業者が理解するであろうとおり、他の向き及び会合が（例えば、第７．２．１節及び７．２．２節に記載されるとおり）好適であり得る。
例示的なＴＢＭ形態を図２に示す。図２Ａは、図２Ｂ～図１Ｖに示されるＴＢＭ形態の構成要素を示す。ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃは、各々が、第７．２．１節及び７．２．２節にこれらの構成要素について記載される特徴を有し得る。図２に示されるＴＢＭ形態の構成要素は、第７．２．１節及び７．２．２節に記載される手段のいずれかによって（例えば、直接的な結合、ＡＢＭリンカー、ジスルフィド結合、ノブ・イン・ホール相互作用で修飾されたＦｃドメイン等によって）互いに会合され得る。図２に示される様々な構成要素の向き及び会合は、単に例に過ぎない；当業者が理解するであろうとおり、他の向き及び会合が（例えば、第７．２．１節及び７．２．２節に記載されるとおり）好適であり得る。
ＴＢＭは、図２に示される形態に限定されない。用いることのできる他の形態は、当業者に公知である。例えば、国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレット；国際公開第２０１７／１２４００２号パンフレット；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：３８；Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ＆Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，２０１７，ｍＡｂｓ ９：２，１８２－２１２；米国特許出願公開第２０１６／０３５５６００号明細書；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，２０１６，ＭＡｂｓ ８（６）：１０１０－２０；及び米国特許出願公開第２０１７／０１４５１１６号明細書を参照されたい。
７．２．４．１．例示的な３価ＴＢＭ
ＴＢＭは３価であることができ、すなわち、このＴＢＭは３つの抗原結合ドメインを有し、その１つがＣＤ１９に結合し、その１つがＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１つがＣＤ２又はＴＡＡのいずれかに結合する。
ＴＢＭは３価であることができ、すなわち、このＴＢＭは３つの抗原結合ドメインを有し、その１つがＣＤ１９に結合し、その１つがＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１つがＣＤ２又はＴＡＡのいずれかに結合する。
例示的な３価ＴＢＭ形態を図２Ｂ～図２Ｐに示す。
図２Ｂ～図２Ｋ及び図２Ｎ～図２Ｐに示されるように、ＴＢＭは、一方が２つのＡＢＭを含み、他方が１つのＡＢＭを含む２つの半抗体を含むことができ、これらの２つの半抗体は、Ｆｃドメインを介して対を成している。
図２Ｂの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｃの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、２つのＦａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｄの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｅの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、２つのＦａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｆの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及びＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｇの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ Ｆｃ領域及びｓｃＦＶを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｈの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、２つのＦａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｉの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｊの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｋの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及び第２のｓｃＦｖを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｎの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｏの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｐの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、非免疫グロブリンベースのＡＢＭ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
代わりに、図２Ｌに示されるように、３価ＴＢＭは、各々が１つの完全なＡＢＭと別のＡＢＭの一部分（一方がＶＨ、他方がＶＬ）とを含む２つの半抗体を含み得る。これらの２つの半抗体はＦｃドメインを介して対を成し、そこでＶＨ及びＶＬが会合して完全な抗原結合Ｆｖドメインを形成する。
ＴＢＭは、図２Ｍに示されるように、単鎖であり得る。図２ＭのＴＢＭは、リンカーを介して連結された３つのｓｃＦｖドメインを含む。
図２Ｂ～図２Ｐに示される形態の各々において、Ｘ、Ｙ及びＺと称されるドメインの各々は、この順番である必要はないが、ＡＢＭ１、ＡＢＭ２又はＡＢＭ３を表す。換言すれば、ＸはＡＢＭ１、ＡＢＭ２又はＡＢＭ３であり得、ＹはＡＢＭ１、ＡＢＭ２又はＡＢＭ３であり得、及びＺはＡＢＭ１、ＡＢＭ２又はＡＢＭ３であり得、ただし、ＴＢＭは１つのＡＢＭ１、１つのＡＢＭ２及び１つのＡＢＭ３を含むものとする。
したがって、本開示では、ＸがＡＢＭ１であり、ＹがＡＢＭ３であり、ＺがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ１」と称される）図２Ｂ～図２Ｐのいずれか１つに示されるような３価ＴＢＭを提供する。
本開示は、ＸがＡＢＭ１であり、ＹがＡＢＭ２であり、ＺがＡＢＭ３である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ２」と称される）図２Ｂ～図２Ｐのいずれか１つに示されるような３価ＴＢＭも提供する。
本開示は、ＸがＡＢＭ３であり、ＹがＡＢＭ１であり、ＺがＡＢＭ２である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ３」と称される）図２Ｂ～図２Ｐのいずれか１つに示されるような３価ＴＢＭを更に提供する。
本開示はなおも、ＸがＡＢＭ３であり、ＹがＡＢＭ２であり、ＺがＡＢＭ１である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ４」と称される）図２Ｂ～図２Ｐのいずれか１つに示されるような３価ＴＢＭを更に提供する。
本開示はなおも、ＸがＡＢＭ２であり、ＹがＡＢＭ１であり、ＺがＡＢＭ３である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ５」と称される）図２Ｂ～図２Ｐのいずれか１つに示されるような３価ＴＢＭを更に提供する。
本開示はなおも、ＸがＡＢＭ２であり、ＹがＡＢＭ３であり、ＺがＡＢＭ１である（ＡＢＭのこの形態は、便宜上、「Ｔ６」と称される）図２Ｂ～図２Ｐのいずれか１つに示されるような３価ＴＢＭを更に提供する。
７．２．４．２．例示的な４価ＴＢＭ
本開示のＴＢＭは４価であることができ、すなわち、このＴＢＭは４つの抗原結合ドメインを有し、その１つ又は２つがＣＤ１９に結合し、その１つ又は２つがＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１つ又は２つがＣＤ２又はＴＡＡに結合する。
本開示のＴＢＭは４価であることができ、すなわち、このＴＢＭは４つの抗原結合ドメインを有し、その１つ又は２つがＣＤ１９に結合し、その１つ又は２つがＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１つ又は２つがＣＤ２又はＴＡＡに結合する。
例示的な４価ＴＢＭ形態を図２Ｑ～図２Ｓに示す。
図２Ｑ～図２Ｓに示されるように、４価ＴＢＭは、各々が２つの完全なＡＢＭを含む２つの半抗体を含むことができ、これらの２つの半抗体はＦｃドメインを介して対を成している。
図２Ｑの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及び第２のＦａｂを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及び第２のＦａｂを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｒの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｓの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含み、第２の（又は右側）半抗体は、ｓｃＦｖ、Ｆｃ領域及びＦａｂを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｑ～図２Ｓに示される形態において、Ｘ、Ｙ、Ｚ及びＡの各々は、この順番である必要はないが、ＡＢＭ１、ＡＢＭ２又はＡＢＭ３を表し、ただし、ＴＢＭは、少なくとも１つのＡＢＭ１と、少なくとも１つのＡＢＭ２と、少なくとも１つのＡＢＭ３とを含むものとする。したがって、４価ＡＢＭは、ＣＤ１９、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡの１つに対する２つのＡＢＭを含むことになる。ある場合には、４価ＴＢＭは、２つのＣＤ１９ ＡＢＭを有する。
７．２．４．３．例示的な５価ＴＢＭ
本開示のＴＢＭは５価であることができ、すなわち、このＴＢＭは５つの抗原結合ドメインを有し、その１つ、２つ又は３つはＣＤ１９に結合し、その１つ、２つ又は３つはＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１つ、２つ又は３つはＣＤ２又はＴＡＡに結合する。
本開示のＴＢＭは５価であることができ、すなわち、このＴＢＭは５つの抗原結合ドメインを有し、その１つ、２つ又は３つはＣＤ１９に結合し、その１つ、２つ又は３つはＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１つ、２つ又は３つはＣＤ２又はＴＡＡに結合する。
例示的な５価ＴＢＭ形態を図２Ｔに示す。
図２Ｔに示されるように、５価ＴＢＭは、その一方が２つの完全なＡＢＭを含み、その他方が１つの完全なＡＢＭを含む２つの半抗体を含むことができ、これらの２つの半抗体はＦｃドメインを介して対を成している。
図２Ｔの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｔに示される形態において、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ及びＢの各々は、この順番である必要はないが、ＡＢＭ１、ＡＢＭ２又はＡＢＭ３を表し、ただし、ＴＢＭは、少なくとも１つのＡＢＭ１、１つのＡＢＭ２及び１つのＡＢＭ３を含むものとする。したがって、５価ＴＢＭは、ＣＤ１９、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡの２つに対する２つのＡＢＭ又はＣＤ１９、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡの１つに対する３つのＡＢＭを含み得る。ある場合には、５価ＴＢＭは、２つ又は３つのＣＤ１９ ＡＢＭを有する。一部の実施形態において、５価ＴＢＭは、３つのＡＢＭ１、１つのＡＢＭ２及び１つのＡＢＭ３を有する。
７．２．４．４．例示的な６価ＴＢＭ
本開示のＴＢＭは６価であることができ、すなわち、このＴＢＭは６つの抗原結合ドメインを有し、その１、２、３又は４つはＣＤ１９に結合し、その１、２、３又は４つはＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１、２、３又は４つはＣＤ２又はＴＡＡに結合する。
本開示のＴＢＭは６価であることができ、すなわち、このＴＢＭは６つの抗原結合ドメインを有し、その１、２、３又は４つはＣＤ１９に結合し、その１、２、３又は４つはＴＣＲ複合体の構成要素に結合し、及びその１、２、３又は４つはＣＤ２又はＴＡＡに結合する。
例示的な６価ＴＢＭ形態を図２Ｕ～図２Ｖに示す。
図２Ｕ～図２Ｖに示されるように、５価ＴＢＭは、その一方が２つの完全なＡＢＭを含み、その他方が１つの完全なＡＢＭを含む２つの半抗体を含むことができ、これらの２つの半抗体はＦｃドメインを介して対を成している。
図２Ｕの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、Ｆａｂ、第２のＦａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含み、第２の（又は右側）半抗体は、Ｆａｂ、第２のＦａｂ、Ｆｃ領域及びｓｃＦｖを含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｖの実施形態において、第１の（又は左側）半抗体は、第１のＦｖ、第２のＦｖ、第３のＦｖ及びＦｃ領域を含み、第２の（又は右側）半抗体は、第１のＦｖ、第２のＦｖ、第３のＦｖ及びＦｃ領域を含む。第１及び第２の半抗体は、Ｆｃ領域がＦｃドメインを形成することによって会合されている。
図２Ｕ～図２Ｖに示される形態において、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ、Ｂ及びＣの各々は、この順番である必要はないが、ＡＢＭ１、ＡＢＭ２又はＡＢＭ３を表し、ただし、ＴＢＭは、少なくとも１つのＡＢＭ１、１つのＡＢＭ２及び１つのＡＢＭ３を含むものとする。したがって、６価ＴＢＭは、（ｉ）ＣＤ１９、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡの各々に対する２つのＡＢＭ、（ｉｉ）ＣＤ１９、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡの１つに対する３つのＡＢＭ、又は（ｉｉｉ）ＣＤ１９、ＴＣＲ複合体の構成要素及びＣＤ２又はＴＡＡの１つに対する４つのＡＢＭを含み得る。例えば、６価ＡＢＭは、ＣＤ１９に対する３つのＡＢＭ、ＣＤ２又はＴＡＡに対する２つのＡＢＭ及びＴＣＲ複合体の構成要素に対する１つのＡＢＭを含み得る。別の例として、６価ＡＢＭは、ＣＤ１９に対する３つのＡＢＭ、ＴＣＲ複合体の構成要素に対する２つのＡＢＭ及びＣＤ２又はＴＡＡに対する１つのＡＢＭを含み得る。ある場合には、６価ＴＢＭは、２、３又は４つのＣＤ１９ ＡＢＭを有する。一部の実施形態において、６価ＴＢＭは、３つのＣＤ１９ ＡＢＭを有する。他の実施形態において、６価ＴＢＭは、４つのＣＤ１９ ＡＢＭを有する。
７．２．５．ＴＣＲ ＡＢＭ
本開示のＭＢＭは、ＣＤ１９に特異的に結合するＡＢＭと、異なる抗原に特異的なＡＢＭ２とを含む。本開示のＢＢＭ、１型ＴＢＭ及び２型ＴＢＭでは、ＡＢＭ２はＴＣＲ複合体の構成要素に結合し得る。ＴＣＲは、インバリアントなＣＤ３鎖分子との複合体の一部として発現する超可変的なアルファ（α）及びベータ（β）鎖から通常はなるジスルフィド結合した膜固定型のヘテロ二量体タンパク質である。この受容体を発現するＴ細胞は、α：β（又はαβ）Ｔ細胞と呼ばれ、しかし少数のＴ細胞は別の受容体を発現し、これは可変ガンマ（γ）及びデルタ（δ）鎖によって形成されるものであり、γδ Ｔ細胞と呼ばれる。
本開示のＭＢＭは、ＣＤ１９に特異的に結合するＡＢＭと、異なる抗原に特異的なＡＢＭ２とを含む。本開示のＢＢＭ、１型ＴＢＭ及び２型ＴＢＭでは、ＡＢＭ２はＴＣＲ複合体の構成要素に結合し得る。ＴＣＲは、インバリアントなＣＤ３鎖分子との複合体の一部として発現する超可変的なアルファ（α）及びベータ（β）鎖から通常はなるジスルフィド結合した膜固定型のヘテロ二量体タンパク質である。この受容体を発現するＴ細胞は、α：β（又はαβ）Ｔ細胞と呼ばれ、しかし少数のＴ細胞は別の受容体を発現し、これは可変ガンマ（γ）及びデルタ（δ）鎖によって形成されるものであり、γδ Ｔ細胞と呼ばれる。
ある実施形態において、ＭＢＭは、ＣＤ３に特異的に結合するＡＢＭを含む。
７．２．５．１．ＣＤ３ ＡＢＭ
ＭＢＭは、ＣＤ３に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。用語「ＣＤ３」は、Ｔ細胞受容体の分化クラスター３共受容体（又は共受容体複合体若しくは共受容体複合体のポリペプチド鎖）を指す。ヒトＣＤ３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ受託番号Ｐ０４２３４、Ｐ０７７６６及びＰ０９６９３に提供される。ＣＤ３タンパク質には、変異型も含まれ得る。ＣＤ３タンパク質には、フラグメントも含まれ得る。ＣＤ３タンパク質には、ＣＤ３アミノ酸配列の翻訳後修飾も含まれ得る。翻訳後修飾としては、限定はされないが、Ｎ結合型及びＯ結合型グリコシル化が挙げられる。
ＭＢＭは、ＣＤ３に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。用語「ＣＤ３」は、Ｔ細胞受容体の分化クラスター３共受容体（又は共受容体複合体若しくは共受容体複合体のポリペプチド鎖）を指す。ヒトＣＤ３のポリペプチド鎖のアミノ酸配列は、ＮＣＢＩ受託番号Ｐ０４２３４、Ｐ０７７６６及びＰ０９６９３に提供される。ＣＤ３タンパク質には、変異型も含まれ得る。ＣＤ３タンパク質には、フラグメントも含まれ得る。ＣＤ３タンパク質には、ＣＤ３アミノ酸配列の翻訳後修飾も含まれ得る。翻訳後修飾としては、限定はされないが、Ｎ結合型及びＯ結合型グリコシル化が挙げられる。
いくつかの実施形態では、ＭＢＭは、（例えば、米国特許出願公開第２０１６／０３５５６００号明細書、国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレット、国際公開第２０１４／１４５８０６号パンフレット又は国際公開第２０２０／０５２６９２号パンフレットに記載される）抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインであるＡＢＭを含み得る。ＭＢＭにおいて使用可能である例示的な抗ＣＤ３のＶＨ配列、ＶＬ配列及びｓｃＦＶ配列は、表９Ａに提供される。更に、ＭＢＭにおいて使用可能である例示的な抗ＣＤ３のＶＨ配列、ＶＬ配列及びｓｃＦｖ配列は、国際公開第２０１９／１０４０７５号パンフレット、国際公開第２０１９／１９５５３５号パンフレット及び国際公開第２０２０／０５２６９２号パンフレットに提供され、その内容は、全体的に参照により本明細書に組み込まれる。
Ｋａｂａｔ番号付けスキーム（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ）によって定義されるようなＣＤ３ｈｉ、ＣＤ３ｍｅｄ及びＣＤ３ｌｏのＣＤＲ配列は、表９Ｂに提供される。
いくつかの実施形態では、ＭＢＭは、表９Ｂに記載されるＣＤ３ｈｉ、ＣＤ３ｍｅｄ又はＣＤ３ｌｏのいずれかのＣＤＲを含むＣＤ３ ＡＢＭを含み得る。
いくつかの実施形態では、ＭＢＭは、ＣＤ３ｈｉのＶＨ配列及びＶＬ配列を含むＣＤ３ ＡＢＭを含む。いくつかの実施形態では、ＭＢＭは、ＣＤ３ｍｅｄのＶＨ配列及びＶＬ配列を含むＣＤ３ ＡＢＭを含む。いくつかの実施形態では、ＭＢＭは、ＣＤ３ｌｏのＶＨ配列及びＶＬ配列を含むＣＤ３ ＡＢＭを含む。
表９Ｂに記載されるＣＤＲ組（すなわちＣＤ３ｈｉ、ＣＤ３ｍｅｄ及びＣＤ３ｌｏの各々についての６つのＣＤＲの組）に加えて、本開示は、変異型ＣＤＲ組を提供する。一実施形態において、６つのＣＤＲの組は、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えばＯｃｔｅｔアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される際、ＣＤ３ ＡＢＭがなおも標的抗原に結合することが可能である限りにおいて、表９Ｂに記載されるＣＤＲ組と比べて１、２、３、４又は５つのアミノ酸変化を有し得る。
ＣＤ３に対するＡＢＭを形成する表９Ａに開示される可変重鎖及び可変軽鎖ドメインに加えて、本開示は、変異型ＶＨ及びＶＬドメインを提供する。一実施形態において、変異型ＶＨ及びＶＬドメインは、各々が、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えばＯｃｔｅｔアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される際、ＡＢＭがなおも標的抗原に結合することが可能である限りにおいて、表９Ａに記載されるＶＨ及びＶＬドメインと比べて１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸変化を有し得る。別の実施形態において、変異型ＶＨ及びＶＬは、Ｂｉａｃｏｒｅ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及び／又はＢＬＩ（バイオレイヤー干渉法、例えばＯｃｔｅｔアッセイ）アッセイの少なくとも１つによって測定される際、ＡＢＭがなおも標的抗原に結合することが可能である限りにおいて、表９Ａに開示されるそれぞれのＶＨ又はＶＬと少なくとも９０、９５、９７、９８又は９９％同一である。
ＶＨ及びＶＬ配列（アミノ酸配列及びアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列）は、他のＣＤ３ ＡＢＭを作り出すため「種々選んで組み合わせる（ｍｉｘ ａｎｄ ｍａｔｃｈ）」ことができる。このような「種々選んで組み合わせた」ＣＤ３ ＡＢＭは、当技術分野において公知の結合アッセイ（例えば、ＦＡＣＳアッセイ）を用いて試験することができる。鎖を種々選んで組み合わせるとき、特定のＶＨ／ＶＬ対からのＶＨ配列は、構造的に類似したＶＨ配列に置き換えなければならない。特定のＶＨ／ＶＬ対からのＶＬ配列は、構造的に類似したＶＬ配列に置き換えなければならない。
一部の実施形態において、ヒトＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインは非免疫グロブリンベースであり、代わりに、非抗体足場タンパク質、例えば第７．２．１．２節に記載される非抗体足場タンパク質の１つに由来する。ある実施形態において、ヒトＣＤ３に特異的に結合する抗原結合ドメインは、国際公開第２０１７／０１３１３６号パンフレットに記載されるＡｆｆｉｌｉｎ－１４４１６０を含む。Ａｆｆｉｌｉｎ－１４４１６０は、以下のアミノ酸配列を有する。
７．２．５．２．ＴＣＲ－α／β ＡＢＭ
ＭＢＭは、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖又はＴＣＲ－αβ二量体に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。例示的な抗ＴＣＲ－α／β抗体は公知である（例えば、米国特許出願公開第２０１２／００３４２２１号明細書；Ｂｏｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（３）：１７５－８８（抗体ＢＭＡ０３１について記載している）を参照されたい）。抗体ＢＭＡ０３１のＶＨ、ＶＬ及びＫａｂａｔ ＣＤＲ配列を表１０に提供する。
ＭＢＭは、ＴＣＲ－α鎖、ＴＣＲ－β鎖又はＴＣＲ－αβ二量体に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。例示的な抗ＴＣＲ－α／β抗体は公知である（例えば、米国特許出願公開第２０１２／００３４２２１号明細書；Ｂｏｒｓｔ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（３）：１７５－８８（抗体ＢＭＡ０３１について記載している）を参照されたい）。抗体ＢＭＡ０３１のＶＨ、ＶＬ及びＫａｂａｔ ＣＤＲ配列を表１０に提供する。
ある実施形態において、ＴＣＲ ＡＢＭは、抗体ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列を含み得る。他の実施形態において、ＴＣＲ ＡＢＭは、抗体ＢＭＡ０３１のＶＨ及びＶＬ配列を含み得る。
７．２．５．３．ＴＣＲ－γ／δ ＡＢＭ
ＭＢＭは、ＴＣＲ－γ鎖、ＴＣＲ－δ鎖又はＴＣＲ－γδ二量体に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。例示的な抗ＴＣＲ－γ／δ抗体は公知である（例えば、米国特許第５，９８０，８９２号明細書（ＡＴＣＣに受託番号ＨＢ ９５７８として寄託されているハイブリドーマによって作製される、δＴＣＳ１について記載している）を参照されたい）。
ＭＢＭは、ＴＣＲ－γ鎖、ＴＣＲ－δ鎖又はＴＣＲ－γδ二量体に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。例示的な抗ＴＣＲ－γ／δ抗体は公知である（例えば、米国特許第５，９８０，８９２号明細書（ＡＴＣＣに受託番号ＨＢ ９５７８として寄託されているハイブリドーマによって作製される、δＴＣＳ１について記載している）を参照されたい）。
７．２．６．ＣＤ２ ＡＢＭ
７．２．６．１．免疫グロブリンベースのＣＤ２ ＡＢＭ
１型ＴＢＭは、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合ドメインであるＡＢＭを含み得る。例示的な抗ＣＤ２抗体は公知である（例えば、米国特許第６，８４９，２５８号明細書、中国特許出願公開第１０２８２７２８１Ａ号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１３９５７９ Ａ１号明細書及び米国特許第５，７９５，５７２号明細書を参照されたい）。表１１には、本開示のＭＢＭにおける使用のための、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合フラグメントに含めることのできる例示的なＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬ配列を提供する。
７．２．６．１．免疫グロブリンベースのＣＤ２ ＡＢＭ
１型ＴＢＭは、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合ドメインであるＡＢＭを含み得る。例示的な抗ＣＤ２抗体は公知である（例えば、米国特許第６，８４９，２５８号明細書、中国特許出願公開第１０２８２７２８１Ａ号明細書、米国特許出願公開第２００３／０１３９５７９ Ａ１号明細書及び米国特許第５，７９５，５７２号明細書を参照されたい）。表１１には、本開示のＭＢＭにおける使用のための、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合フラグメントに含めることのできる例示的なＣＤＲ、ＶＨ及びＶＬ配列を提供する。
一部の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、ＣＤ２－１のＣＤＲ配列（配列番号）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列（配列番号及びそれぞれ）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、ｈｕ１ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列（配列番号及びそれぞれ）を含む。一部の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、ｈｕ２ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列（配列番号及びそれぞれ）を含む。
他の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、２０１２年５月１６日にＣｈｉｎｅｓｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒに受託番号ＣＧＭＣＣ ６１３２で寄託されたハイブリドーマによって産生される、中国特許出願公開第１０２８２７２８１Ａ号明細書に記載されている抗体９Ｄ１のＣＤＲ配列を含み得る。他の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、１９９９年６月２２日にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに受託番号ＰＴＡ－８０２で寄託されたハイブリドーマによって産生される、米国特許出願公開第２００３／０１３９５７９ Ａ１号明細書に記載されている抗体ＬＯ－ＣＤ２ｂのＣＤＲ配列を含み得る。更に他の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、１９９３年４月９日にＡＴＣＣに受託番号６９２７７で寄託された組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）にクローニングされたコンストラクトの発現によって産生される、米国特許第５，７９５，５７２号明細書に記載されているＣＤ２ ＳＦｖ－ＩｇのＣＤＲ配列を含み得る。
他の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、抗体９Ｄ１のＶＨ及びＶＬ配列を含み得る。他の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、抗体ＬＯ－ＣＤ２ｂのＶＨ及びＶＬ配列を含み得る。更に他の実施形態において、ＣＤ２ ＡＢＭは、ＡＴＣＣ受託番号６９２７７を有する組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）にクローニングされたコンストラクトの発現によって産生されるＣＤ２ ＳＦｖ－ＩｇのＶＨ及びＶＬ配列を含み得る。
７．２．６．２．ＣＤ５８ベースのＣＤ２ ＡＢＭ
特定の態様において、本開示は、リガンドであるＣＤ２ ＡＢＭを含む１型ＴＢＭを提供する。ＣＤ２ ＡＢＭはヒトＣＤ２に特異的に結合し、ヒトＣＤ２の天然リガンドは、ＣＤ５８、別名ＬＦＡ－３である。ＣＤ５８／ＬＦＡ－３タンパク質は、種々の細胞型の表面に発現する糖タンパク質であり（Ｄｕｓｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２７）、Ｔ細胞がＡＰＣと抗原依存的様式及び抗原非依存的様式の両方で相互作用するのを媒介する役割を果たす（Ｗａｌｌｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：９２３）。したがって、特定の態様において、ＣＤ２ ＡＢＭはＣＤ５８部分である。本明細書で使用されるとき、ＣＤ５８部分は、ＣＤ５８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％の配列同一性、例えばＣＤ５８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を含むアミノ酸配列を含む。ヒトＣＤ５８の配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ１９２５６を有する（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１９２５６）。ＣＤ２への結合には、完全長ＣＤ５８のアミノ酸残基３０～１２３を含むＣＤ５８フラグメント（すなわち以下の表１２においてＣＤ５８－６と称される配列）が十分であることが確立されている。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃｅｌｌ ９７：７９１－８０３。したがって、特定の態様において、ＣＤ５８部分は、ＣＤ５８のアミノ酸３０～１２３と少なくとも７０％の配列同一性、例えばＣＤ５８－６として指定されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を含むアミノ酸配列を含む。
特定の態様において、本開示は、リガンドであるＣＤ２ ＡＢＭを含む１型ＴＢＭを提供する。ＣＤ２ ＡＢＭはヒトＣＤ２に特異的に結合し、ヒトＣＤ２の天然リガンドは、ＣＤ５８、別名ＬＦＡ－３である。ＣＤ５８／ＬＦＡ－３タンパク質は、種々の細胞型の表面に発現する糖タンパク質であり（Ｄｕｓｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：２７）、Ｔ細胞がＡＰＣと抗原依存的様式及び抗原非依存的様式の両方で相互作用するのを媒介する役割を果たす（Ｗａｌｌｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：９２３）。したがって、特定の態様において、ＣＤ２ ＡＢＭはＣＤ５８部分である。本明細書で使用されるとき、ＣＤ５８部分は、ＣＤ５８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％の配列同一性、例えばＣＤ５８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を含むアミノ酸配列を含む。ヒトＣＤ５８の配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ１９２５６を有する（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ１９２５６）。ＣＤ２への結合には、完全長ＣＤ５８のアミノ酸残基３０～１２３を含むＣＤ５８フラグメント（すなわち以下の表１２においてＣＤ５８－６と称される配列）が十分であることが確立されている。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｃｅｌｌ ９７：７９１－８０３。したがって、特定の態様において、ＣＤ５８部分は、ＣＤ５８のアミノ酸３０～１２３と少なくとも７０％の配列同一性、例えばＣＤ５８－６として指定されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を含むアミノ酸配列を含む。
ＣＤ５８とＣＤ２との間の相互作用は、Ｘ線結晶構造解析及び分子モデリングを用いてマッピングされている。残基Ｅ２５、Ｋ２９、Ｋ３０、Ｋ３２、Ｄ３３、Ｋ３４、Ｅ３７、Ｄ８４及びＫ８７を置換すると（番号付けは成熟ポリペプチドのものを基準とする）、ＣＤ２への結合が減少する。Ｉｋｅｍｉｚｕ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：４２８９－９４。したがって、一部の実施形態において、ＣＤ５８部分は、Ｅ２５、Ｋ２９、Ｋ３０、Ｋ３２、Ｄ３３、Ｋ３４、Ｅ３７、Ｄ８４及びＫ８７に野生型残基を保持している。
対照的に、以下の置換（番号付けは完全長ポリペプチドを基準とする）は、ＣＤ２への結合に影響を与えなかった：Ｆ２９Ｓ；Ｖ３７Ｋ；Ｖ４９Ｑ；Ｖ８６Ｋ；Ｔ１１３Ｓ；及びＬ１２１Ｇ。したがって、ＣＤ５８部分は、前述の置換の１、２、３、４、５つ又は６つ全てを含むことができる。
一部の実施形態において、ＣＤ５８部分は、組換え発現時にジスルフィド架橋を作り出す一対のシステイン置換を含むように操作される。発現時にジスルフィド架橋を形成するようにするためシステインに置換することのできる例示的なアミノ酸対（番号付けは完全長ポリペプチドを基準とする）は、（ａ）Ｖ４５Ｃ置換及びＭ１０５Ｃ置換；（ｂ）Ｖ５４Ｃ置換及びＧ８８Ｃ置換；（ｃ）Ｖ４５Ｃ置換及びＭ１１４Ｃ置換；並びに（ｄ）Ｗ５６Ｃ置換及びＬ９０Ｃ置換である。
例示的なＣＤ５８部分は、以下の表１２に提供される。
７．２．６．３．ＣＤ４８ベースのＣＤ２ ＡＢＭ
特定の態様において、本開示は、ＣＤ４８部分であるＣＤ２ ＡＢＭを含むＭＢＭを提供する。本明細書で使用されるとき、ＣＤ４８部分は、ＣＤ４８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％の配列同一性、例えばＣＤ４８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を含むアミノ酸配列を含む。ヒトＣＤ４８の配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６を有し（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ０９３２６）、これはシグナルペプチド（アミノ酸１～２６）及びＧＰＩアンカー（アミノ酸２２１～２４３）を含んでいる。特定の態様において、ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２７～２２０からなるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性）を含むアミノ酸配列を含む。ヒトＣＤ４８は、Ｉｇ様Ｃ２－Ｉ型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２９～１２７）及びＩｇ様Ｃ２ ２型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸１３２～２１２）を有する。したがって、一部の実施形態において、ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２９～２１２、Ｃ２－Ｉ型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２９～１２７）及び／又はＩｇ様Ｃ２ ２型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸１３２～２１２）からなるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性）を含むアミノ酸配列を含む。ＣＤ４８部分は、一部の実施形態では、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６の配列と比べて１つ以上の天然変異型を含み得る。例えば、ＣＤ４８部分は、Ｅ１０２Ｑ置換を含むことができる。別の例として、ＣＤ４８部分は、ＣＤ－４８アイソフォーム又はそのＣＤ２結合部分、例えばＵｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６－２を有するアイソフォーム又はそのＣＤ２結合部分に対応するアミノ酸配列を含むことができる。
特定の態様において、本開示は、ＣＤ４８部分であるＣＤ２ ＡＢＭを含むＭＢＭを提供する。本明細書で使用されるとき、ＣＤ４８部分は、ＣＤ４８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％の配列同一性、例えばＣＤ４８のＣＤ２結合部分と少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を含むアミノ酸配列を含む。ヒトＣＤ４８の配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６を有し（ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ０９３２６）、これはシグナルペプチド（アミノ酸１～２６）及びＧＰＩアンカー（アミノ酸２２１～２４３）を含んでいる。特定の態様において、ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２７～２２０からなるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性）を含むアミノ酸配列を含む。ヒトＣＤ４８は、Ｉｇ様Ｃ２－Ｉ型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２９～１２７）及びＩｇ様Ｃ２ ２型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸１３２～２１２）を有する。したがって、一部の実施形態において、ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２９～２１２、Ｃ２－Ｉ型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸２９～１２７）及び／又はＩｇ様Ｃ２ ２型ドメイン（Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６のアミノ酸１３２～２１２）からなるアミノ酸配列と少なくとも７０％の配列同一性（例えば、少なくとも７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性）を含むアミノ酸配列を含む。ＣＤ４８部分は、一部の実施形態では、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６の配列と比べて１つ以上の天然変異型を含み得る。例えば、ＣＤ４８部分は、Ｅ１０２Ｑ置換を含むことができる。別の例として、ＣＤ４８部分は、ＣＤ－４８アイソフォーム又はそのＣＤ２結合部分、例えばＵｎｉｐｒｏｔ識別番号Ｐ０９３２６－２を有するアイソフォーム又はそのＣＤ２結合部分に対応するアミノ酸配列を含むことができる。
７．２．７．腫瘍関連抗原ＡＢＭ
２型ＴＢＭは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。一部の実施形態において、ＴＡＡはヒトＴＡＡである。この抗原は又は正常細胞に存在することも又はしないこともある。特定の実施形態において、ＴＡＡは、正常細胞と比較して腫瘍細胞に優先的に発現するか又はそこで上方制御される。他の実施形態において、ＴＡＡは系統マーカーである。
２型ＴＢＭは、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合するＡＢＭを含み得る。一部の実施形態において、ＴＡＡはヒトＴＡＡである。この抗原は又は正常細胞に存在することも又はしないこともある。特定の実施形態において、ＴＡＡは、正常細胞と比較して腫瘍細胞に優先的に発現するか又はそこで上方制御される。他の実施形態において、ＴＡＡは系統マーカーである。
特定の実施形態において、ＴＡＡは、正常Ｂ細胞と比較して癌性Ｂ細胞に発現されるか又はそこで上方制御される。他の実施形態において、ＴＡＡはＢ細胞系統マーカーである。
本開示のＭＢＭによっては、任意のタイプのＢ細胞悪性腫瘍を標的化し得ると予想される。標的化し得るＢ細胞悪性腫瘍の例示的なタイプとしては、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）及び多発性骨髄腫が挙げられる。ＮＨＬの例としては、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、辺縁帯リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、ヘアリー細胞白血病、脾性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、ＭＡＬＴ型節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫及び原発性滲出性リンパ腫が挙げられる。
ＣＤ１９結合ＭＢＭ（例えば、ＴＢＭ）によって標的化し得るＴＡＡの例としては、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１３８（別名シンデカン－１、ＳＤＣ１）、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１３３、ＦＬＴ３、ＣＤ５２、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｃ、当技術分野ではＢＡＦＦＲ：Ｂ細胞活性化因子受容体とも称される）、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ（ＴＮＦ受容体スーパーファミリーメンバー１３Ｂ、当技術分野ではＴＡＣＩ：膜貫通活性化因子及びＣＡＭＬ相互作用因子とも称される）、ＣＸＣＲ４（Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体４）、ＰＤ－Ｌ１（プログラム死－リガンド１）、ＬＹ９（リンパ球抗原９、当技術分野ではＣＤ２２９とも称される）、ＣＤ２００、ＦＣＧＲ２Ｂ（ＩｇＧ受容体ＩＩｂのＦｃフラグメント、当技術分野ではＣＤ３２ｂとも称される）、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂが挙げられる。一部の実施形態において、ＴＡＡはＢＣＭＡである。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ２０である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ２２である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ１２３である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ３３である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＬＬ１である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ１３８である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＳ１である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ３８である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ１３３である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＦＬＴ３である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ５２である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＴＮＦＲＳＦ１３Ｃである。一部の実施形態において、ＴＡＡはＴＮＦＲＳＦ１３Ｂである。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＸＣＲ４である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＰＤ－Ｌ１である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＬＹ９である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ２００である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ２１である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ２３である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ２４である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ４０Ｌである。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ７２である。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ７９ａである。一部の実施形態において、ＴＡＡはＣＤ７９ｂである。
ＴＡＡ結合ＡＢＭは、例えば、抗ＴＡＡ抗体又はその抗原結合フラグメントを含み得る。抗ＴＡＡ抗体又は抗原結合フラグメントは、例えば、表１５に記載される抗体のＣＤＲ配列を含み得る。一部の実施形態において、抗ＴＡＡ抗体又はその抗原結合ドメインは、表１５に記載される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域配列を有する。
特定の実施形態において、ＴＡＡは、ＢＣＭＡ及びＣＤ２０から選択される。一部の実施形態において、ＴＡＡはＢＣＭＡである。「ＢＣＭＡ」とは、Ｂ細胞成熟抗原を指す。ＢＣＭＡ（別名ＴＮＦＲＳＦ１７、ＢＣＭ又はＣＤ２６９）は、腫瘍壊死受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーであり、最終分化型Ｂ細胞、例えばメモリーＢ細胞及び形質細胞に主に発現する。そのリガンドには、Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）及び増殖誘導リガンド（ＡＰＲＩＬ）が含まれる。タンパク質ＢＣＭＡは遺伝子ＴＮＦＲＳＦ１７によってコードされる。例示的なＢＣＭＡ配列は、Ｕｎｉｐｒｏｔデータベースにおいて受託番号Ｑ０２２２３で入手可能である。
特定の態様では、２型ＴＢＭは、ＢＣＭＡに特異的に結合するＡＢＭ３、例えば抗ＢＣＭＡ抗体又はその抗原結合ドメインを含む。抗ＢＣＭＡ抗体又はその抗原結合ドメインは、例えば、国際公開第２０１９／１９５５３５号パンフレット（その内容は、全体的に参照により本明細書に組み込まれる）の表１１Ａ～１１Ｇに記載されるＣＤＲ配列、ＶＨ配列、ＶＬ配列又はｓｃＦＶ配列を含み得る。
７．２．８．核酸及び宿主細胞
本明細書に記載のＣＤ１９結合分子は、単一核酸によってコードされ得るか、又は代替的に複数の（例えば、２、３、４つ又はそれを超える）核酸によってコードされ得る。
本明細書に記載のＣＤ１９結合分子は、単一核酸によってコードされ得るか、又は代替的に複数の（例えば、２、３、４つ又はそれを超える）核酸によってコードされ得る。
単一の核酸が、単一のポリペプチド鎖を含むＣＤ１９結合分子、２つ以上のポリペプチド鎖を含むＣＤ１９結合分子又は３つ以上のポリペプチド鎖を含むＣＤ１９結合分子の一部分をコードすることができる（例えば、単一の核酸が、３、４つ以上のポリペプチド鎖を含むＣＤ１９結合分子の２つのポリペプチド鎖又は４つ以上のポリペプチド鎖を含むＣＤ１９結合分子の３つのポリペプチド鎖をコードすることができる）。発現の別個の制御のために、２つ以上のポリペプチド鎖をコードするオープンリーディングフレームは、別個の転写調節要素（例えば、プロモーター及び／又はエンハンサー）の制御下にあり得る。２つ以上のポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームは、同じ転写調節要素によって制御され、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離されて、別個のポリペプチドへの翻訳も可能にし得る。
ある実施形態において、２つ以上のポリペプチド鎖を含むＣＤ１９結合分子は、２つ以上の核酸によってコードされる。ＣＤ１９結合分子をコードする核酸の数は、ＣＤ１９結合分子中のポリペプチド鎖の数以下であり得る（例えば、２つ以上のポリペプチド鎖が単一の核酸によってコードされる場合）。
核酸は、ＤＮＡ又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）であり得る。
宿主細胞は、ＣＤ１９結合分子をコードする１つ以上の核酸を含むように遺伝子改変され得る。一実施形態では、宿主細胞は、発現カセットを用いることによって遺伝子改変される。「発現カセット」という語句は、ヌクレオチド配列であって、そのような配列に適合する宿主内での遺伝子の発現に作用する能力があるものを指す。そのようなカセットは、プロモーター、イントロンの存在下又は不在下でのオープンリーディングフレーム及び終結シグナルを含み得る。発現を引き起こすのに必要又は有用である追加的要素、例えば誘導性プロモーターなどを用いることもできる。細胞は、限定はされないが、真核細胞、細菌細胞、昆虫細胞又はヒト細胞であり得る。好適な真核細胞として、限定はされないが、ベロ細胞、ヒーラ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞及びＭＤＣＫＩＩ細胞が挙げられる。好適な昆虫細胞として、限定はされないが、Ｓｆ９細胞が挙げられる。
７．３．ＣＡＲ分子
いくつかの態様では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子を発現する細胞の集団である。本明細書で用いられるとき、「ＣＡＲ分子」という用語は、隣接ポリペプチドであるＣＡＲと非隣接ポリペプチドであるＣＡＲの両方を包含する。典型的に、ＣＡＲによる処置は、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子を発現する細胞の集団の投与を手段とする。
いくつかの態様では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用される抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）分子を発現する細胞の集団である。本明細書で用いられるとき、「ＣＡＲ分子」という用語は、隣接ポリペプチドであるＣＡＲと非隣接ポリペプチドであるＣＡＲの両方を包含する。典型的に、ＣＡＲによる処置は、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子を発現する細胞の集団の投与を手段とする。
特定の態様では、ＣＡＲ分子は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含み、任意選択的に、１つ以上の共刺激分子由来の１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。例えば、ＣＡＲ分子は、細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン並びに１つ以上の共刺激分子由来の２つの機能的シグナル伝達ドメイン及び刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含み得る。細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインは、第７．３．１節、第７．３．２節及び第７．３．３節にそれぞれ記載されており、例示的なＣＡＲ配列は、第７．３．４節に記載されている。
いくつかの場合、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに、ヒンジを介して結合され得る。例示的なヒンジ配列は、第７．３．２節に記載されている。
ＣＡＲは、存在する場合、典型的に、細胞外抗原結合ドメインのＮ末端に位置する、ＣＡＲ融合タンパク質のアミノ末端（Ｎ－ｔｅｒ）に任意選択的なリーダー配列も含み得る。リーダー配列は、ＣＡＲの細胞膜への細胞プロセシング及び局在化中、抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）から切断され得、そのため、対象に投与されるＣＡＲ組成物は、リーダー配列を欠くことがある。本開示のＣＡＲ分子において有用なリーダー配列は、第７．３．１節に記載されている。
本開示の方法及び組み合わせにおいて有用なＣＡＲ分子の更なる態様は、以下に記載される。
７．３．１．ＣＤ１９結合ドメイン及び任意選択的なリーダー
抗体又はその抗体フラグメントを含むＣＡＲの部分は、抗原結合ドメインが、例えば、単一ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒト化抗体又は二重特異性抗体を含む、隣接ポリペプチド鎖の一部として発現される場合、種々の形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）。一態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。更なる態様では、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体フラグメントを含む。
抗体又はその抗体フラグメントを含むＣＡＲの部分は、抗原結合ドメインが、例えば、単一ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）、ヒト化抗体又は二重特異性抗体を含む、隣接ポリペプチド鎖の一部として発現される場合、種々の形態で存在し得る（Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｉｎ：Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈｏｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３；Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６）。一態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。更なる態様では、ＣＡＲは、ｓｃＦｖを含む抗体フラグメントを含む。
一態様では、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの部分は、ＣＤ１９を標的にする抗原結合ドメインを含む。一態様では、抗原結合ドメインは、ヒトＣＤ１９を標的にする。一態様では、ＣＡＲの抗原結合ドメインは、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎ．３４（１６－１７）：１１５７－１１６５に記載のＦＭＣ６３ ｓｃＦｖフラグメントと同一又は類似の結合特異性を有するか又はそれを含む。一態様では、抗原結合ドメインを含むＣＡＲの部分は、Ｂ細胞抗原、例えばヒトＢ細胞抗原を標的にする抗原結合ドメインを含む。ＣＤ１９抗体分子は、例えば、全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに記載の抗体分子（例えば、ヒト化抗ＣＤ１９抗体分子）であり得る。国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットは、様々なＣＡＲＴ構築物の結合性及び有効性をアッセイする方法についても記載している。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、抗ＣＤ１９抗体（例えば、抗ＣＤ１９単一又は二重特異性抗体）に由来する抗原結合ドメイン又はそのフラグメント若しくはコンジュゲートを含む（例えば、そのアミノ酸配列を含む）。一実施形態では、抗ＣＤ１９抗体は、参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレット（例えば、国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットの表１）に記載されるヒト化抗原結合ドメイン又はそのコンジュゲートである。他の例示的な抗ＣＤ１９抗体又はそのフラグメント若しくはコンジュゲートとして、限定はされないが、ＣＤ１９を標的にする二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（例えば、ブリナツモマブ）、ＳＡＲ３４１９（Ｓａｎｏｆｉ）、ＭＥＤＩ－５５１（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ ＬＬＣ）、Ｃｏｍｂｏｔｏｘ、ＤＴ２２１９ＡＲＬ（Ｍａｓｏｎｉｃ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｎｔｅｒ）、ＭＯＲ－２０８（ＸｍＡｂ－５５７４とも呼ばれる；ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ）、ＸｍＡｂ－５８７１（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＭＤＸ－１３４２（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）及びＡＦＭ１１（Ａｆｆｉｍｅｄ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）が挙げられる。例えば、Ｈａｍｍｅｒ．ＭＡｂｓ．４．５（２０１２）：５７１－７７を参照されたい。ブリナツモマブは、２つのｓｃＦｖであって、１つがＣＤ１９に結合し、且つ１つがＣＤ３に結合するものからなる二重特異性抗体である。ブリナツモマブは、Ｔ細胞が癌細胞を攻撃するように誘導する。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００２７４７４２及びＮＣＴ０１２０９２８６を参照されたい。ＭＥＤＩ－５５１は、増強された抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有するように改変されたＦｃを有するヒト化抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ０１９５７５７９を参照されたい。Ｃｏｍｂｏｔｏｘは、ＣＤ１９及びＣＤ２２に結合する免疫毒素の混合物である。免疫毒素は、脱グリコシル化リシンＡ鎖に融合されたｓｃＦｖ抗体フラグメントから構成される。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＨｅｒｒｅｒａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．３１．１２（２００９）：９３６－４１；Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１５４．４（２０１１）：４７１－６を参照されたい。ＤＴ２２１９ＡＲＬは、２つのｓｃＦｖ及び切断されたジフテリア毒素を含む、ＣＤ１９及びＣＤ２２を標的にする二重特異性免疫毒素である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００８８９４０８を参照されたい。ＳＧＮ－ＣＤ１９Ａは、合成細胞傷害性細胞殺傷剤のモノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）に連結された抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体からなる抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏｓ．ＮＣＴ０１７８６０９６及びＮＣＴ０１７８６１３５を参照されたい。ＳＡＲ３４１９は、切断可能なリンカーを介してメイタンシン誘導体にコンジュゲートされた抗ＣＤ１９ヒト化モノクローナル抗体を含む抗ＣＤ１９抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。例えば、Ｙｏｕｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．３０．２（２０１２）：２７７６－８２；Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ００５４９１８５；及びＢｌａｎｃ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１；１７：６４４８－５８を参照されたい。ＸｍＡｂ－５８７１は、Ｆｃ改変ヒト化抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。ＭＤＸ－１３４２は、ＡＤＣＣが増強された、ヒトＦｃ改変抗ＣＤ１９抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。いくつかの実施形態では、抗体分子は、二重特異性抗ＣＤ１９及び抗ＣＤ３分子である。例えば、ＡＦＭ１１は、ＣＤ１９及びＣＤ３を標的にする二重特異性抗体である。例えば、Ｈａｍｍｅｒ ｅｔ ａｌ．；及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｔｒｉａｌ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｒ Ｎｏ．ＮＣＴ０２１０６０９１を参照されたい。
特定の実施形態では、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用されるＣＡＲ分子は、単一特異性であり、専らＣＤ１９に対する特異性を有し、ＣＤ１９結合ドメインが単一特異性抗体又は多重特異性抗体のいずれに由来するかは無関係である。
一実施形態では、ＣＤ１９に対する抗原結合ドメインは、本明細書中の表、例えば表１又はこの第７．３節（その下位部分を含む）に記載の抗原結合ドメインの抗原結合部分、例えばＣＤＲである。一実施形態では、ＣＤ１９抗原結合ドメインは、任意のＣＤ１９ ＣＡＲ、例えばＬＧ－７４０に由来し得る；米国特許第８，３９９，６４５号明細書；米国特許第７，４４６，１９０号明細書；Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．５４（２）：２５５－２６０（２０１２）；Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｂｌｏｏｄ １２２（１７）：２９６５－２９７３；Ｂｒｅｎｔｊｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｂｌｏｏｄ，１１８（１８）：４８１７－４８２８；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｂｌｏｏｄ １１６（２０）：４０９９－１０２；Ｋｏｃｈｅｎｄｅｒｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｂｌｏｏｄ １２２（２５）：４１２９－３９；及び１６ｔｈ Ａｎｎｕ Ｍｅｅｔ Ａｍ Ｓｏｃ Ｇｅｎ Ｃｅｌｌ Ｔｈｅｒ（ＡＳＧＣＴ）（Ｍａｙ１５－１８，Ｓａｌｔ Ｌａｋｅ Ｃｉｔｙ）２０１３，Ａｂｓｔ１０（これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）。
一態様では、ＣＡＲの抗ＣＤ１９タンパク質結合部分は、ｓｃＦｖ抗体フラグメントである。一態様では、そのような抗体フラグメントは、同等の結合親和性を保持する、例えば同じ抗原にその由来元であるＩｇＧ抗体と同等の親和性で結合するという点で機能的である。一態様では、そのような抗体フラグメントは、当業者によって理解されるであろうが、限定はされないが、免疫応答の活性化、その標的抗原からのシグナル伝達開始の阻害、キナーゼ活性の阻害などを含み得る生物学的応答を提供するという点で機能的である。一態様では、ＣＡＲの抗ＣＤ１９抗原結合ドメインは、由来元であるｓｃＦｖのマウス配列と比較して、ヒト化されたｓｃＦｖ抗体フラグメントである。一態様では、親マウスｓｃＦｖ配列は、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに提供され、且つ本明細書で配列番号１４９として提供されるＣＡＲ１９構築物である。一実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに記載されており、且つ配列番号１４９で提供されるｓｃＦｖ又はそれと少なくとも９５％、例えば９５～９９％同一の配列である。ある実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットに提供され、且つ本明細書で配列番号１４８として提供されるＣＡＲ構築物の一部又はそれと少なくとも９５％、例えば９５％～９９％同一の配列である。ある実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、表１４及び／又は表１５から選択される少なくとも１つ（例えば、２、３、４、５又は６つ）のＣＤＲを含む。
一態様では、ＣＡＲは、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットで配列番号１２として提供され、且つ本明細書で配列番号１４９として提供されるポリペプチド配列を含み、ｓｃＦｖドメインは、配列番号９６～１０７から選択される１つ以上の配列で置換される。一態様では、配列番号９６～１０７のｓｃＦｖドメインは、ヒトＣＤ１９に特異的に結合するマウス起源のｓｃＦｖフラグメントである、配列番号１４９のｓｃＦｖドメインのヒト化変異体である。このマウスｓｃＦｖのヒト化は、マウスに特異的な残基が、ＣＡＲＴ１９治療、例えばＣＡＲ１９構築物が形質導入されたＴ細胞による治療を受ける対象においてヒト抗マウス抗原（ＨＡＭＡ）応答を誘導し得る場合の臨床状況において、所望され得る。
一実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、ＰＣＴ公開の国際公開第２０１２／０７９０００号パンフレットにおいて配列番号１２として提供されるアミノ酸配列を含む。実施形態では、アミノ酸配列は、
又はそれと実質的に相同な配列
である。
又はそれと実質的に相同な配列
である。
別の実施形態では、アミノ酸配列は、
又はそれと実質的に相同な配列
である。
又はそれと実質的に相同な配列
である。
一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号９６で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号９７で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号９８で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号９９で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１００で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１０１で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１０２で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１０３で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１０４で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１０５で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１０６で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲ１９は、配列番号１０７で提供されるｓｃＦｖ部分を含む。
一態様では、本開示のＣＡＲは、特異抗体の抗原結合ドメインを細胞内シグナル伝達分子と組み合わせる。例えば、いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達分子は、限定はされないが、ＣＤ３ゼータ鎖、４－１ＢＢ及びＣＤ２８シグナル伝達モジュール及びそれらの組み合わせを含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２２～１３３の１つ以上で提供される配列から選択されるＣＡＲを含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２２で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２３で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２４で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２５で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２６で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２７で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２８で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１２９で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１３０で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１３１で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１３２で提供される配列を含む。一態様では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１３３で提供される配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のヒト化ＣＡＲ分子、例えば表１６の又は表１４及び表１５に提示されるようなＣＤＲを有するヒト化ＣＤ１９ ＣＡＲ分子である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載のＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えば本明細書に記載のマウスＣＡＲ分子、例えば表１７の又は表１４及び表１５に提示されるようなＣＤＲを有するマウスＣＤ１９ ＣＡＲ分子である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子は、表１４及び表１５のマウス又はヒト化ＣＤ１９ ＣＡＲの、重鎖可変領域からの１つ、２つ及び／若しくは３つのＣＤＲ並びに／又は軽鎖可変領域からの１つ、２つ及び／若しくは３つのＣＤＲを含む。
一実施形態では、抗原結合ドメインは、上に列記される抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全部）の重鎖ＣＤＲ、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに／又は上に列記される抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全部）の軽鎖ＣＤＲ、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗原結合ドメインは、上に列記又は記載される抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、抗原結合ドメインは、ヒト化抗体又は抗体フラグメントを含む。一実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載のマウス又はヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインの１つ以上（例えば、３つ全部）の軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）並びに／又は本明細書に記載のマウス又はヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインの１つ以上（例えば、３つ全部）の重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含み、例えば、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、１つ以上、例えば３つ全部の軽鎖ＣＤＲ及び１つ以上、例えば３つ全部の重鎖ＣＤＲを含む。
一実施形態では、抗原結合ドメインは、本明細書で列記される、例えば表１４、表１６若しくは表１７中の抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全部）の重鎖ＣＤＲ、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに／又は本明細書で列記される、例えば表１５、表１６若しくは表１７中の抗体からの１つ、２つ、３つ（例えば、３つ全部）の軽鎖ＣＤＲ、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。一実施形態では、抗原結合ドメインは、上に列記又は記載される抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域を含む。
ある実施形態では、ＣＤ１９結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）は、表１６若しくは表１７に提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列又は表１６若しくは表１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、９５～９９％）の同一性を有する配列の少なくとも１つ、２つ又は３つの修飾（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の修飾（例えば、置換）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；並びに／又は表１６若しくは表１７に提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列又は表１６若しくは表１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、９５～９９％）の同一性を有する配列の少なくとも１つ、２つ又は３つの修飾（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の修飾（例えば、置換）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合ドメインは、表１６若しくは表１７の１つ以上のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３のそれぞれ１つ）又はＣＤＲの１つ以上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つの修飾（例えば、置換）を有するＣＤＲを含む。
例示的な抗ＣＤ１９抗体分子（抗体又はそのフラグメント若しくはコンジュゲートを含む）は、表１４、表１５、表１６又は表１７のいずれか１つに記載のｓｃＦｖ、ＣＤＲ又はＶＨ鎖及びＶＬ鎖を含み得る。ある実施形態では、ＣＤ１９結合抗体分子は、表１６若しくは表１７に提供される軽鎖可変領域のアミノ酸配列又は表１６若しくは表１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、９５～９９％）の同一性を有する配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の修飾（例えば、置換）を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；及び／或いは表１６若しくは表１７に提供される重鎖可変領域のアミノ酸配列又は表１６若しくは表１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％（例えば、９５～９９％）の同一性を有する配列の少なくとも１つ、２つ若しくは３つの修飾（例えば、置換）であるが、３０、２０若しくは１０以下の修飾（例えば、置換）を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合抗体分子は、表１４若しくは表１５の１つ以上のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３のそれぞれ１つ）又はＣＤＲの１つ以上の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ若しくは６つの修飾（例えば、置換）を有するＣＤＲを含む。
いくつかの実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、表１６又は表１７に列記されるいずれかの重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を更に含む。いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、表１６又は表１７に列記されるいずれかの軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態では、抗原結合ドメインは、表３又は表１７に列記されるいずれかの軽鎖結合ドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３の１つ、２つ又は全て並びに表１７に列記されるいずれかの重鎖結合ドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３の１つ、２つ又は全てを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けスキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム又はそれらの組み合わせに従って定義される。
ｓｃＦｖドメインのヒト化ＣＤＲ配列の配列は、重鎖可変ドメインについて表１４及び軽鎖可変ドメインについて表１５に示される。「ＩＤ」は、各ＣＤＲに対する各配列番号を表す。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９結合ドメインは、ＤＹＧＶＳの配列（配列番号２１４）を有するＫａｂａｔ ＣＤＲ－Ｈ１、表１４のＣＤＲ－Ｈ２、表１４のＣＤＲ－Ｈ３、表１５のＣＤＲ－Ｌ１、表１５のＣＤＲ－Ｌ２及び表１５のＣＤＲ－Ｌ３を含む。
一実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６及び配列番号１０７からなる群から選択される配列又はそれと９５～９９％の同一性を有する配列を含む。一実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインをコードする核酸配列は、配列番号１５１、配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６、配列番号１５７、配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０及び配列番号１６１からなる群から選択される配列又はそれと９５～９９％の同一性を有する配列を含む。
一実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書に記載の、例えば表１６又は表１７中のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書に記載の、例えば表１６又は表１７中のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーを介して結合される。一実施形態では、ヒト化抗ＣＤ１９結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、例えば３又は４である）（配列番号１４４）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の配向性：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域のいずれかであり得る。
一態様では、抗原結合ドメイン部分は、配列番号９６～１０７から選択される１つ以上の配列を含む。一態様では、ヒト化ＣＡＲは、配列番号１２２～１３３から選択される１つ以上の配列から選択される。いくつかの態様では、非ヒト抗体は、ヒト化され、この場合、抗体の特定の配列又は領域は、ヒト又はそのフラグメントにおいて天然に産生される抗体に対する類似性を増加させるように修飾される。
一実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、ｓｃＦｖであり、本明細書に記載の、例えば表１６又は表１７中のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域は、本明細書に記載の、例えば表１６又は表１７中のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域に、リンカー、例えば本明細書に記載のリンカーを介して結合される。一実施形態では、抗原結合ドメインは、（Ｇｌｙ４－Ｓｅｒ）ｎリンカー（式中、ｎは、１、２、３、４、５又は６、例えば３又は４）（配列番号１４４）を含む。ｓｃＦｖの軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、例えば、以下の配向性：軽鎖可変領域－リンカー－重鎖可変領域又は重鎖可変領域－リンカー－軽鎖可変領域のいずれかであり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子は、ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び刺激ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、前記ＣＤ１９結合ドメインは、表１６又は表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９軽鎖結合ドメインアミノ酸配列の軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）の１つ以上（例えば、３つ全部）並びに表１６又は表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９重鎖結合ドメインアミノ酸配列の重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）の１つ以上（例えば、３つ全部）を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、表１６又は表１７に列記される軽鎖可変領域及び表１６又は表１７に列記されるいずれかの重鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子は、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、配列番号９９、配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６及び配列番号１０７からなる群から選択される配列又はそれと９５～９９％の同一性を有する配列を含むＣＤ１９結合ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲは、配列番号１４８のポリペプチドを含む。
一実施形態では、ＣＡＲ分子は、本明細書に記載の抗ＣＤ１９結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）及び軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）の１つ以上（例えば、３つ全部）並びに本明細書に記載の抗ＣＤ１９結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）の１つ以上（例えば、３つ全部）を含む抗ＣＤ１９結合ドメイン、例えば１つ以上、例えば３つ全部の軽鎖ＣＤＲ及び１つ以上、例えば３つ全部の重鎖ＣＤＲを含む抗ＣＤ１９結合ドメインを含む。一実施形態では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、本明細書に記載の抗ＣＤ１９結合ドメインの重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）の１つ以上（例えば、３つ全部）を含み、例えば、抗ＣＤ１９結合ドメインは、２つの可変重鎖領域を有し、それぞれは、本明細書に記載のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３を含む。
一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、抗体又は抗体フラグメントの特定の機能的特徴又は特性によって特徴付けられる。例えば、一態様では、抗原結合ドメインを含むＣＡＲ分子の部分は、ヒトＣＤ１９に特異的に結合する。一態様では、本開示は、抗体又は抗体フラグメントを含む抗原結合ドメインに関し、抗体結合ドメインは、ＣＤ１９タンパク質又はそのフラグメントに特異的に結合し、抗体又は抗体フラグメントは、配列番号９６～１０７又は配列番号１４９のアミノ酸配列を含む可変軽鎖及び／又は可変重鎖を含む。一態様では、抗原結合ドメインは、配列番号９６～１０７又は配列番号１４９から選択されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む。特定の態様では、ｓｃＦｖは、リーダー配列と隣接し、リーダー配列と同じリーディングフレーム内に存在する。
７．３．２．膜貫通ドメイン及び任意選択的なヒンジ
膜貫通ドメインに関して、様々な実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合された膜貫通ドメインを含むように設計され得る。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接する１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通の由来元である細胞外領域のタンパク質（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の、最大で１５のアミノ酸）と会合する１つ以上のアミノ酸及び／又は膜貫通タンパク質の由来元である細胞内領域のタンパク質（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の、最大で１５のアミノ酸）と会合する１つ以上の更なるアミノ酸を含み得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインの１つと会合するものである。一実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン又はヒンジドメインの由来元と同じタンパク質に由来し得る。別の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの任意の他のドメインの由来元と同じタンパク質に由来しない。いくつかの場合、膜貫通ドメインは、そのようなドメインの、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへの結合を回避する、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するようなアミノ酸置換によって選択又は修飾され得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞の細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体を形成する能力がある。異なる態様では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞内に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように修飾又は置換され得る。
膜貫通ドメインに関して、様々な実施形態において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに結合された膜貫通ドメインを含むように設計され得る。膜貫通ドメインは、膜貫通領域に隣接する１つ以上の更なるアミノ酸、例えば膜貫通の由来元である細胞外領域のタンパク質（例えば、細胞外領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の、最大で１５のアミノ酸）と会合する１つ以上のアミノ酸及び／又は膜貫通タンパク質の由来元である細胞内領域のタンパク質（例えば、細胞内領域の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０の、最大で１５のアミノ酸）と会合する１つ以上の更なるアミノ酸を含み得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの他のドメインの１つと会合するものである。一実施形態では、膜貫通ドメインは、シグナル伝達ドメイン、共刺激ドメイン又はヒンジドメインの由来元と同じタンパク質に由来し得る。別の態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの任意の他のドメインの由来元と同じタンパク質に由来しない。いくつかの場合、膜貫通ドメインは、そのようなドメインの、同じ又は異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへの結合を回避する、例えば受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するようなアミノ酸置換によって選択又は修飾され得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ発現細胞の細胞表面上の別のＣＡＲとホモ二量体を形成する能力がある。異なる態様では、膜貫通ドメインのアミノ酸配列は、同じＣＡＲ発現細胞内に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するように修飾又は置換され得る。
膜貫通ドメインは、天然又は組換え供給源のいずれかに由来し得る。供給源が天然である場合、ドメインは、任意の膜結合又は膜貫通タンパク質に由来し得る。一態様では、膜貫通ドメインは、ＣＡＲが標的に結合しているときには常に、細胞内ドメインにシグナル伝達する能力がある。本開示で特に用いられる膜貫通ドメインは、少なくとも、例えばＴ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の膜貫通領域を含み得る。いくつかの実施形態では、膜貫通ドメインは、少なくとも、例えばＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ又はＣＤ１９の膜貫通領域を含み得る。
いくつかの場合、膜貫通ドメインは、ＣＡＲの細胞外領域、例えばＣＡＲの抗原結合ドメインに、ヒンジ、例えばヒトタンパク質由来のヒンジを介して結合され得る。例えば、一実施形態では、ヒンジは、ヒトＩｇ（免疫グロブリン）ヒンジ、例えばＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ、ＧＳリンカー（例えば、本明細書に記載のＧＳリンカー）、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジ又はＣＤ８ａヒンジであり得る。
一態様では、膜貫通ドメインは、組換えであり得、その場合、主にロイシン及びバリンなどの疎水性残基を含むことになる。一態様では、フェニルアラニン、トリプトファン及びバリンの三つ組は、組換え膜貫通ドメインの各末端に見出すことができる。
任意選択的に、２～１０のアミノ酸長の短いオリゴリンカー又はポリペプチドリンカーは、ＣＡＲの膜貫通ドメインと細胞質領域との間に結合を形成し得る。グリシン－セリンの二つ組は、特に好適なリンカーを提供する。例えば、一態様では、リンカーは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳのアミノ酸配列（配列番号１４０）を含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、ＧＧＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＧＡＧＧＴＴＣＣのヌクレオチド配列（配列番号１４１）によってコードされる。
一態様では、ヒンジ又はスペーサーは、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジを含む。
７．３．３．細胞内シグナル伝達ドメイン
ＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般に、ＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。
ＣＡＲの細胞質ドメイン又は領域は、細胞内シグナル伝達ドメインを含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、一般に、ＣＡＲが導入されている免疫細胞の正常なエフェクター機能の少なくとも１つの活性化に関与する。
ＣＡＲにおける使用のための細胞内シグナル伝達ドメインの例として、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及び抗原受容体の会合後にシグナル伝達の開始と連携して作用する共受容体の細胞質配列並びにこれらの配列の任意の誘導体又は変異体及び同じ機能的能力を有する任意の組換え配列が挙げられる。
ＴＣＲ単独を通して生成されるシグナルは、Ｔ細胞の十分な活性化にとって不十分であり、且つ二次及び／又は共刺激シグナルも要求されることが公知である。そのため、Ｔ細胞活性化は、細胞質シグナル伝達配列の２つの異なるクラス：ＴＣＲを通して抗原依存性一次活性化を開始させるもの（一次細胞内シグナル伝達ドメイン）及び二次又は共刺激シグナルを提供するような抗原非依存的様式で作用するもの（二次細胞質ドメイン、例えば共刺激ドメイン）によって媒介されると言及することができる。
一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ複合体の一次活性化を、刺激的様式又は阻害的様式のいずれかで制御する。刺激的様式で作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。
本開示において特に使用される、ＩＴＡＭを含む一次細胞内シグナル伝達ドメインの例として、ＣＤ３ゼータ、一般的なＦｃＲγ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」としても知られる）、ＦｃεＲＩ、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ６６ｄのものが挙げられる。一実施形態では、本開示のＣＡＲは、細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータの一次シグナル伝達ドメインを含む。
特定の実施形態では、刺激分子は、Ｔ細胞受容体複合体と会合するゼータ鎖である。一態様では、細胞質シグナル伝達ドメインは、下で定義されるような少なくとも１つの共刺激分子に由来する１つ以上の機能的シグナル伝達ドメインを更に含む。
更なる実施形態では、共刺激分子は、本明細書に記載の共刺激分子、例えば４－１ＢＢ（すなわちＣＤ１３７）、ＣＤ２７及び／又はＣＤ２８から選択される。
したがって、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能であるＣＡＲ分子は、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメイン及びそれらの任意の組み合わせの群から選択される少なくとも１つの細胞内ドメインを含み得、且つ／又は少なくとも１つの細胞内シグナル伝達ドメインは、任意選択的に、ＣＤ１３７（４－１ＢＢ）若しくはＣＤ２８以外である、１つ以上の共刺激分子に由来する。
一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、修飾ＩＴＡＭドメイン、例えば天然ＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、増加又は低下した）活性を有する突然変異ＩＴＡＭドメインを含む。一実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、修飾されたＩＴＡＭを含む一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば最適化及び／又は切断されたＩＴＡＭを含む一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、１つ、２つ、３つ、４つ又はそれを超えるＩＴＡＭモチーフを含む。
本開示で特に用いられる、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む分子の更なる例として、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２及びＣＤ３２の分子が挙げられる。ある実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメイン（細胞質ドメインとも称される）は、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメインは、一次刺激又は抗原依存性刺激に関与する分子に由来するものを含む。ある実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナル又は抗原非依存性刺激に関与する分子に由来するものを含む。例えば、ＣＡＲＴの場合、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体の細胞質配列を含み得、共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共受容体又は共刺激分子からの細胞質配列を含み得る。
一次細胞内シグナル伝達ドメイン：一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ又はＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例として、限定はされないが、ＣＤ３ゼータ、ＦｃＲガンマ、一般的なＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲ１ｂ）、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」）、ＦｃεＲＩ、ＣＤ６６ｄ、ＣＤ３２、ＤＡＰ１０及びＤＡＰ１２に由来するものが挙げられる。
共刺激細胞内シグナル伝達ドメイン：ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータシグナル伝達ドメインを単独で含み得るか、又は本開示のＣＡＲとの関連で有用な任意の他の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせることができる。例えば、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖部分及び共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＣＡＲの部分を指す。
共刺激分子は、リンパ球の抗原への効率的応答に必要とされる、抗原受容体又はそのリガンド以外の細胞表面分子であり得る。そのような分子の例として、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどが挙げられる。例えば、ＣＤ２７共刺激は、インビトロでヒトＣＡＲＴ細胞の拡大、エフェクター機能及び生存を増強することが実証されており、インビボでヒトＴ細胞の持続性及び抗腫瘍活性を増強する（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ．２０１２；１１９（３）：６９６－７０６）。そのような共刺激分子の更なる例として、ＭＨＣクラスＩ分子、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、活性化ＮＫ細胞受容体、ＢＴＬＡ、Ｔｏｌｌリガンド受容体、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＬＩＧＨＴ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＫＩＲＤＳ２、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ及びＣＤ８３と特異的に結合するリガンドが挙げられる。
一実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＩＣＯＳのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。
本開示のＣＡＲの細胞質部分内の細胞内シグナル伝達配列は、ランダムに又は特定の順序で互いに連結され得る。任意選択的に、短いオリゴリンカー又はポリペプチドリンカー、例えば長さが２～１０のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０のアミノ酸）は、細胞内シグナル伝達配列間の結合を形成し得る。一実施形態では、グリシン－セリンの二つ組が好適なリンカーとして使用可能である。一実施形態では、単一のアミノ酸、例えばアラニン、グリシンが好適なリンカーとして使用可能である。
一態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つ以上、例えば２、３、４、５つ又はそれを超える共刺激シグナル伝達ドメインを含むように設計される。ある実施形態では、２つ以上、例えば２、３、４、５つ又はそれを超える共刺激シグナル伝達ドメインは、リンカー分子、例えば本明細書に記載のリンカー分子によって分離される。一実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、２つの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態では、リンカー分子は、グリシン残基である。いくつかの実施形態では、リンカーは、アラニン残基である。
一態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２８のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及び４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインを含むように設計される。一態様では、４－１ＢＢのシグナル伝達ドメインは、配列番号１１５６のシグナル伝達ドメインである。一態様では、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメインは、配列番号１１６０又は配列番号１１６２のシグナル伝達ドメインである。特定の態様では、ＣＡＲ－Ｔは、配列番号９７又は配列番号１４９の配列を有するＣＡＲ分子を含む。
一態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータのシグナル伝達ドメイン及びＣＤ２７のシグナル伝達ドメインを含むように設計される。
共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、その由来元である分子の全細胞内部分若しくは全天然細胞内シグナル伝達ドメイン又はその機能フラグメント若しくは誘導体を含み得る。
７．３．４．例示的なＣＡＲ分子
本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＣＡＲ分子の配列並びにそれらをコードする核酸配列が本明細書に提供される。典型的に、本開示の方法及び組み合わせにおいて有用なＣＡＲ分子は、任意選択的なリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン及び細胞内刺激ドメインをコードするＣＡＲ構築物によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ構築物は、細胞内共刺激ドメインを更にコードすることで、発現されるＣＡＲ分子は、任意選択的なリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン及び細胞内刺激ドメインを含む。
本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＣＡＲ分子の配列並びにそれらをコードする核酸配列が本明細書に提供される。典型的に、本開示の方法及び組み合わせにおいて有用なＣＡＲ分子は、任意選択的なリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン及び細胞内刺激ドメインをコードするＣＡＲ構築物によってコードされる。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ構築物は、細胞内共刺激ドメインを更にコードすることで、発現されるＣＡＲ分子は、任意選択的なリーダー配列、細胞外抗原結合ドメイン、ヒンジ、膜貫通ドメイン、細胞内共刺激ドメイン及び細胞内刺激ドメインを含む。
例示的なＣＡＲ構成要素配列は、表Ｃに示される。
特定の態様では、ＣＡＲ分子は、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書に記載されるＣＤ１９ ＣＡＲ分子、例えば参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１５－０２８３１７８－Ａ１号明細書に記載されるアミノ酸を含むか、又はヌクレオチド配列によってコードされるＣＤ１９ ＣＡＲを含む。いくつかの実施形態では、ＣＡＲ分子は、配列番号１４９又は配列番号９７の配列を含む。特定の態様では、ＣＡＲ分子は、配列番号１１６２又は配列番号１１６０の配列を含む。
更なる態様では、ＣＡＲ分子は、国際出願の国際公開第２０１４／１５３２７０号パンフレットに記載されており、その特定の配列が本明細書で再現される、アミノ酸配列を含むか、又は核酸構築物によってコードされる。
ヒト化ｓｃＦｖフラグメントの配列（配列番号９６～１０７）は、以下の表１６に提供される。
ｓｃＦｖドメイン配列番号９６～１０７を有する例示的な全ＣＡＲ構築物は、配列番号１２２～１３３で示される。
マウスｓｃＦｖフラグメントの配列（配列番号１８８、１９４、１９６及び１９９）は、以下の表１７に提供される。
配列番号１８８、１９４、１９６及び２０９を用いる全ＣＡＲ構築物は、配列番号１４８、１９５、１９７、１９８及び２００に示される。
本開示は、本開示の方法及び組み合わせにおける配列番号１２２～１３３、１４８、１９５、１９７、１９８及び２００のいずれか１つのＣＡＲ分子の使用を包含する。具体的態様では、本開示のＣＡＲ構築物は、配列番号９６～１０７からなる群から選択されるｓｃＦｖドメイン又は配列番号１４９のｓｃＦＶドメインを含み、ｓｃＦｖは、任意選択的なリーダー配列が先行し、且つ任意選択的なヒンジ配列、膜貫通領域及びＣＤ３ゼータ配列が後続し得、ドメインは、単一の融合タンパク質を形成するように隣接し且つ同じリーディングフレーム内に存在する。
本開示のＣＡＲ分子構築物は、配列番号１７５～１８９のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む核酸構築物によってコードされ得る。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１７５を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１７６を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１７７を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１７８を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１７９を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８０を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８１を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８２を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８３を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８４を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８５を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８６を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８７を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８８を含む。一態様では、ＣＡＲ構築物の核酸配列は、配列番号１８９を含む。
全長ＣＡＲ配列は、表１６（例えば、ＣＴＬ１１９）及び表１７（例えば、ＣＴＬ０１９）に示されるとおり、配列番号１２２～１３３及び１４８としても本明細書に提供される。
様々なｓｃＦｖフラグメント及び他のＣＡＲ構成要素の例示的配列が本明細書に提供される。リーダー配列を有しないこれらのＣＡＲ構成要素も本明細書に提供されることに留意されたい。
一態様では、ＣＡＲ分子は、細胞内シグナル伝達ドメインをコードする核酸配列と隣接し、その核酸配列と同じリーディングフレーム内に存在する、例えば本明細書に記載の、抗ＣＤ１９結合ドメインをコードする核酸配列を含む核酸分子によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号９６～１０７及び１４８の１つ以上から選択される。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５１～１６６及び１８７の１つ以上で提供される配列のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５６のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５２のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５３のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５４のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５５のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５６のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５７のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５８のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１５９のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１６０のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１６１のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。一態様では、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１６２のヌクレオチド残基６４～８１３によってコードされる。
更なる態様では、ＣＡＲ分子は、１９２８ｚのｓｃＦｖ部分と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み（例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第１０，１２４，０２３号明細書を参照されたい）、且つ／又は１９２８ｚの重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子は、以下に再現される、１９２８ｚの全アミノ酸配列（そのリーダー配列の存在下又は不在下）又は１９２８ｚの配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは１００％の同一性を有するアミノ酸配列（そのリーダー配列の存在下又は不在下）を含む。
配列番号２０１の１９２８ｚポリペプチドをコードする例示的な核酸配列が以下に再現される。
７．３．５．ＣＡＲをコードする核酸
本明細書で開示される方法において有用なＣＡＲ分子、例えば第７．３．４節に記載のＣＡＲ分子をコードする核酸分子は、当技術分野で公知の組換え方法を用いて、例えば標準技術を用いて、核酸分子を発現する細胞からライブラリーをスクリーニングすることにより、核酸分子を、それを含むことが知られるベクターから誘導するか、又はそれを含む細胞及び組織から直接的に単離することによって得ることができる。代わりに、目的の核酸は、クローン化ではなく、合成的に作製することができる。
本明細書で開示される方法において有用なＣＡＲ分子、例えば第７．３．４節に記載のＣＡＲ分子をコードする核酸分子は、当技術分野で公知の組換え方法を用いて、例えば標準技術を用いて、核酸分子を発現する細胞からライブラリーをスクリーニングすることにより、核酸分子を、それを含むことが知られるベクターから誘導するか、又はそれを含む細胞及び組織から直接的に単離することによって得ることができる。代わりに、目的の核酸は、クローン化ではなく、合成的に作製することができる。
哺乳動物細胞への遺伝子導入のため、いくつかのウイルスに基づく系が開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達系に便宜的なプラットフォームを提供する。選択される遺伝子は、当技術分野で公知の技術を用いて、ベクターに挿入し、レトロウイルス粒子にパッケージングすることができる。次に、組換えウイルスは、インビボ又は生体外のいずれかで、単離し、対象の細胞に送達することができる。いくつかのレトロウイルス系は、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。いくつかのアデノウイルスベクターは、当技術分野で公知である。一実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。
短くまとめると、ＣＡＲをコードする天然又は合成核酸の発現は、典型的に、ＣＡＲポリペプチド又はその部分をコードする核酸をプロモーターに作動可能に連結し、構築物を発現ベクターに組み込むことによって達成される。ベクターは、複製及び組み込み真核生物において好適であり得る。典型的なクローニングベクターは、所望される核酸配列の発現の調節にとって有用である、転写及び翻訳ターミネーター、開始配列及びプロモーターを含む。
７．３．６．ＣＡＲ分子の投与
ＣＡＲ分子は、典型的に、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子を発現するように改変された、エフェクター細胞の集団、例えばＴ細胞の集団として投与される。
ＣＡＲ分子は、典型的に、ＣＤ１９ ＣＡＲ分子を発現するように改変された、エフェクター細胞の集団、例えばＴ細胞の集団として投与される。
エフェクター細胞は、ＣＡＲ分子が細胞表面上で発現されるように、ＣＡＲで形質転換され得る。好適なＣＡＲ分子は、第７．３．４節に記載されている。ＣＡＲ分子を発現する細胞、例えば免疫エフェクター細胞の集団は、本明細書中で「ＣＡＲ組成物」と称される。ＣＡＲ組成物は、非経口的に、最も好ましくは注入として対象に投与することができる。細胞は、単回注入として又は種々の期間にわたる複数回注入で投与され得る。
いくつかの実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲをコードするウイルスベクターが形質導入される。好適なウイルスベクターは、レトロウイルスベクター及びレンチウイルスベクターである。いくつかのそのような実施形態では、細胞は、ＣＡＲを安定に発現し得る。
他の実施形態では、細胞（例えば、Ｔ細胞）は、ＣＡＲをコードする核酸、例えばｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡがトランスフェクトされる。いくつかのそのような実施形態では、細胞は、ＣＡＲを一過性に発現し得る。
特定の態様では、ＣＡＲ組成物は、配列番号１４９又は配列番号９７の配列を有するＣＡＲ分子を含む。特定の態様では、ＣＡＲ組成物は、配列番号１１６２又は配列番号１１６０の配列を有するＣＡＲ分子を含む。
特定の態様では、ＣＡＲ組成物は、ＣＴＬ０１９を含む。
特定の態様では、ＣＡＲ組成物は、ＵＳＡＮ又はＩＮＮ命名のチサゲンレクロイセルを有する。チサゲンレクロイセルは、ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）として市販されている。例えば、ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａ．ｕｓ．ｎｏｖａｒｔｉｓ．ｃｏｍ／ｓｉｔｅｓ／ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａ．ｕｓ．ｎｏｖａｒｔｉｓ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅｓ／ｋｙｍｒｉａｈ．ｐｄｆで入手可能なＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）の処方情報を参照されたい。
他の態様では、ＣＡＲ組成物は、ＵＳＡＮ又はＩＮＮ命名のアキシカブタゲンシロロイセルを有する。アキシカブタゲンシロロイセルは、ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）として市販されている。例えば、ｗｗｗ．ｙｅｓｃａｒｔａ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅｓ／ｙｅｓｃａｒｔａ－ｐｉ．ｐｄｆで入手可能なＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）の処方情報を参照されたい。他の態様では、ＣＡＲ組成物は、ＵＳＡＮ命名のブレクスカブタゲンオートロイセルを有する。ブレクスカブタゲンオートロイセルは、ＴＥＣＡＲＴＵＳ（商標）として市販されている。例えば、ｗｗｗ．ｇｉｌｅａｄ．ｃｏｍ／－／ｍｅｄｉａ／ｆｉｌｅｓ／ｐｄｆｓ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｔｅｃａｒｔｕｓ／ｔｅｃａｒｔｕｓ－ｐｉ．ｐｄｆで入手可能なＴＥＣＡＲＴＵＳ（商標）の処方情報を参照されたい。他の態様では、ＣＡＲ組成物は、ＵＳＡＮ又はＩＮＮ命名のリソカブタゲンマラロイセルを有する。リソカブタゲンマラロイセルは、ＢＲＥＹＡＮＺＩ（登録商標）として市販されている。例えば、ｐａｃｋａｇｅｉｎｓｅｒｔｓ．ｂｍｓ．ｃｏｍ／ｐｉ／ｐｉ＿ｂｒｅｙａｎｚｉ．ｐｄｆで入手可能なＢＲＥＹＡＮＺＩ（登録商標）の処方情報を参照されたい。
７．４．Ｂ細胞標的化剤
本開示の組み合わせは、Ｂ細胞標的化剤を含む。例示的なＢ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦＲ結合分子、ＣＤ２０結合分子、ＣＤ２２結合分子及びＢＡＦＦ結合分子を含む。
本開示の組み合わせは、Ｂ細胞標的化剤を含む。例示的なＢ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦＲ結合分子、ＣＤ２０結合分子、ＣＤ２２結合分子及びＢＡＦＦ結合分子を含む。
７．４．１．ＢＡＦＦＲ結合分子
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦＲ結合分子、例えばＢＡＦＦＲ抗体である。ＢＡＦＦＲに対する抗体（「抗ＢＡＦＦＲ抗体」）は、例えば、国際公開第２０１０／００７０８２号パンフレットから公知であり、配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含むことによって特徴付けられる抗体を含む。抗体ＭＯＲ６６５４は、１つのそのような抗体（ＩｇＧ１カッパ）である。それは、配列番号６１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号６２の軽鎖アミノ酸配列を有する。この抗体は、好ましくは、フコシルトランスフェラーゼを欠いている宿主細胞内、例えば不活性なＦＵＴ８遺伝子（例えば、ＦＵＴ８－／－）を有する哺乳動物細胞系内で、配列番号２４９及び２５０から発現されることで、ＡＤＣＣが増強された機能的な非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体を提供することができる。この抗体は、以降、ＭＯＲ６６５４Ｂ若しくはＶＡＹ７３６と称されるか、又はその国際的な非専売名としてイアナルマブと称される。非フコシル化抗体を作製するための代替的方法は、当技術分野で公知である。
いくつかの実施形態では、Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦＲ結合分子、例えばＢＡＦＦＲ抗体である。ＢＡＦＦＲに対する抗体（「抗ＢＡＦＦＲ抗体」）は、例えば、国際公開第２０１０／００７０８２号パンフレットから公知であり、配列番号５９のアミノ酸配列を有するＶＨドメイン及び配列番号６０のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含むことによって特徴付けられる抗体を含む。抗体ＭＯＲ６６５４は、１つのそのような抗体（ＩｇＧ１カッパ）である。それは、配列番号６１の重鎖アミノ酸配列及び配列番号６２の軽鎖アミノ酸配列を有する。この抗体は、好ましくは、フコシルトランスフェラーゼを欠いている宿主細胞内、例えば不活性なＦＵＴ８遺伝子（例えば、ＦＵＴ８－／－）を有する哺乳動物細胞系内で、配列番号２４９及び２５０から発現されることで、ＡＤＣＣが増強された機能的な非フコシル化抗ＢＡＦＦＲ抗体を提供することができる。この抗体は、以降、ＭＯＲ６６５４Ｂ若しくはＶＡＹ７３６と称されるか、又はその国際的な非専売名としてイアナルマブと称される。非フコシル化抗体を作製するための代替的方法は、当技術分野で公知である。
表１９は、本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である、更なる例示的なＢＡＦＦ結合剤のＣＤＲ配列、ＶＨ配列及びＶＬ配列を列記する。
特定の態様では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１～ＢＡＦＦＲ－７のいずれか１つのアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－６の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－７の重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲを含む。
特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－６のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。特定の実施形態では、ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－７のＶＨアミノ酸配列及びＶＬアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
更なる例示的なＢＡＦＦＲ結合分子は、国際公開第２０１７／２１４１７０号パンフレットに記載されている。
７．４．２．ＣＤ２０結合分子
特定の態様では、Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２０結合分子、例えば抗ＣＤ２０抗体である。様々なＣＤ２０結合分子は、当技術分野において、例えば米国特許第７，４２２，７３９号明細書及び米国特許第７，８５０，９６２号明細書、国際公開第２００５／１０３０８１号パンフレット、国際公開第２０１１／１００４０３号パンフレット、国際公開第２０１７／１８５９４９号パンフレット及び国際公開第２０１８／０４４１７２号パンフレットに記載されている。Ｄｕ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ａｕｔｏ Ｉｍｍｕｎ Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ．８（１）：１２も参照されたい。本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＣＤ２０結合分子は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ及びオビヌツズマブを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、リツキシマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、オファツムマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、オクレリズマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、ベルツズマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、オビヌツズマブである。
特定の態様では、Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２０結合分子、例えば抗ＣＤ２０抗体である。様々なＣＤ２０結合分子は、当技術分野において、例えば米国特許第７，４２２，７３９号明細書及び米国特許第７，８５０，９６２号明細書、国際公開第２００５／１０３０８１号パンフレット、国際公開第２０１１／１００４０３号パンフレット、国際公開第２０１７／１８５９４９号パンフレット及び国際公開第２０１８／０４４１７２号パンフレットに記載されている。Ｄｕ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ａｕｔｏ Ｉｍｍｕｎ Ｈｉｇｈｌｉｇｈｔｓ．８（１）：１２も参照されたい。本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＣＤ２０結合分子は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ及びオビヌツズマブを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、リツキシマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、オファツムマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、オクレリズマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、ベルツズマブである。他の実施形態では、ＣＤ２０結合分子は、オビヌツズマブである。
７．４．３．ＣＤ２２結合分子
特定の態様では、Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２２結合分子、例えば抗ＣＤ２２抗体である。様々なＣＤ２２結合分子は、当技術分野において、例えば国際公開第２００９／１２４１０９号パンフレット、国際公開第２０１７／００９４７６号パンフレット及び国際公開第２０２０／１８５７６３号パンフレットに記載されている。Ｈａｓｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｂｌｏｏｄ，１２１（７）：１１６５－１１７４；Ｗａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６（６）：１８９４－１９０３；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ ３７（１）：８３－８８も参照されたい。本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＣＤ２２結合分子は、エプラツズマブ、イノツズマブ及びイノツズマブオゾガマイシンを含む。
特定の態様では、Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２２結合分子、例えば抗ＣＤ２２抗体である。様々なＣＤ２２結合分子は、当技術分野において、例えば国際公開第２００９／１２４１０９号パンフレット、国際公開第２０１７／００９４７６号パンフレット及び国際公開第２０２０／１８５７６３号パンフレットに記載されている。Ｈａｓｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｂｌｏｏｄ，１２１（７）：１１６５－１１７４；Ｗａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １６（６）：１８９４－１９０３；Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｌｅｕｋ Ｒｅｓ ３７（１）：８３－８８も参照されたい。本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＣＤ２２結合分子は、エプラツズマブ、イノツズマブ及びイノツズマブオゾガマイシンを含む。
７．４．４．ＢＡＦＦ結合分子
特定の態様では、Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ結合分子、例えば抗ＢＡＦＦ抗体である。様々な抗ＢＡＦＦ結合分子は、当技術分野において、例えば国際公開第２００６／０２５３４５号パンフレット及び国際公開第２０１６／０３９８０１号パンフレットに記載されている。本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブ、チブリズマブ、ＢＲ３－Ｆｃ、ブリシビモド及びアタシセプトを含む。
特定の態様では、Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ結合分子、例えば抗ＢＡＦＦ抗体である。様々な抗ＢＡＦＦ結合分子は、当技術分野において、例えば国際公開第２００６／０２５３４５号パンフレット及び国際公開第２０１６／０３９８０１号パンフレットに記載されている。本開示の方法及び組み合わせにおいて使用可能である例示的なＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブ、チブリズマブ、ＢＲ３－Ｆｃ、ブリシビモド及びアタシセプトを含む。
いくつかの実施形態では、ＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブである。他の実施形態では、ＢＡＦＦ結合分子は、チブリズマブである。他の実施形態では、ＢＡＦＦ結合分子は、ＢＲ３－Ｆｃである。他の実施形態では、ＢＡＦＦ結合分子は、ブリシビモドである。他の実施形態では、ＢＡＦＦ結合分子は、アタシセプトである。
７．５．医薬組成物及び組み合わせ投与
抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤又は担体を含有する医薬組成物として製剤化され得る。医薬組成物又は無菌組成物を調製するため、抗ＣＤ１９剤又はＢ細胞標的化剤の調製では、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体と組み合わせることができる。組み合わせの抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、典型的に、別個の医薬組成物として製剤化される。それぞれは、例えば、単回用量又は複数回用量容器で提供することができる。
抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤又は担体を含有する医薬組成物として製剤化され得る。医薬組成物又は無菌組成物を調製するため、抗ＣＤ１９剤又はＢ細胞標的化剤の調製では、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤及び／又は担体と組み合わせることができる。組み合わせの抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、典型的に、別個の医薬組成物として製剤化される。それぞれは、例えば、単回用量又は複数回用量容器で提供することができる。
例えば、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の製剤は、薬剤を、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤と例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液、ローション又は懸濁液の形態で混合することによって調製することができる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ，２０００，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９３，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９０，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），１９９０，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ，２０００，Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．を参照されたい）。
薬剤における投与レジメンの選択は、薬剤の血清又は組織代謝回転速度、症状のレベル、薬剤の免疫原性及び標的細胞のアクセシビリティを含むいくつかの要素に依存する。特定の実施形態では、投与レジメンは、副作用の許容されるレベルに一致するように、対象に送達される１つ又は複数の薬剤の量を最大化する。したがって、送達される抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の量は、部分的に、特定の薬剤及び治療中の病態の重症度に依存する。抗体及び小分子の適切な投与量の選択における指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ，１９９６，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．），１９９１，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｂａｃｈ（ｅｄ．），１９９３，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｂａｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２を参照されたい）。
適切な投与量の決定は、例えば、治療に影響することが当技術分野で公知であるか若しくは疑われるか、又は治療に影響することが予測されるパラメータ又は因子を用いて、臨床医によってなされる。一般に、投与量は、最適用量よりやや少ない量で開始され、その後、何らかの負の副作用が生じるのではなく、所望の又は最適な効果が達成されるまで、少しずつ増加される。重要な診断尺度は、例えば、炎症の症状又は産生される炎症性サイトカインのレベルといった尺度を含む。
医薬組成物中の抗ＣＤ１９剤又はＢ細胞標的化剤の実際の用量レベルは、別の薬剤と組み合わせて、特定の対象、組成物及び投与の様式に対して所望の治療反応を達成するのに有効であり、対象にとって有毒でない薬剤の量を得るように変化し得る。選択される用量レベルは、特定の薬剤の活性、投与の経路、投与の時間、使用中の特定の薬剤の排泄速度、治療の持続時間、使用される特定の抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤と組み合わせた他の薬剤（例えば、治療薬若しくは化合物などの活性薬剤及び／又は担体として使用される不活性材料）、治療中の対象の年齢、性別、体重、病態、一般健康及び以前の病歴並びに医術における公知の類似要素を含む、種々の薬物動態学的因子に依存することになる。
ＣＤ１９結合分子及び／又はＢ細胞標的化剤を含む組成物は、例えば、連続注入又は間欠投与によって提供することができる。投与量は、静脈内、皮下、局所的、経口的、経鼻的、直腸、筋肉内、脳内又は吸入によって提供することができる。具体的な投与プロトコルは、有意な望ましくない副作用を回避するような最大投与量又は投与頻度を含むものである。
特定の対象に対する有効量は、治療中の病態、対象の健康全般、投与方法・経路及び投与量並びに副作用の重症度などの要素に応じて変化し得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ＳＯＰｓ ｆｏｒ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫを参照されたい）。
ＣＤ１９結合分子又はＢ細胞標的化剤における投与経路は、例えば、静脈内、腹腔内、脳内、筋肉内、眼内、動脈内、脳脊髄内、病変内による局所若しくは皮膚への適用、注射若しくは注入又は徐放系若しくはインプラントを介し得る（例えば、Ｓｉｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ２２：５４７－５５６；Ｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．１５：１６７－２７７；Ｌａｎｇｅｒ，１９８２，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．１２：９８－１０５；Ｅｐｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：３６８８－３６９２；Ｈｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４０３０－４０３４；米国特許第６，３５０，４６６号明細書及び米国特許第６，３１６，０２４号明細書を参照されたい）。必要な場合、組成物は、注射部位での疼痛を和らげるため、可溶化剤及びリドカインなどの局所麻酔薬も含み得る。更に、例えば、吸入器又は噴霧器の使用及びエアロゾル化剤との製剤化により、経肺投与を用いることもできる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書、米国特許第５，９８５，３２０号明細書、米国特許第５，９８５，３０９号明細書、米国特許第５，９３４，２７２号明細書、米国特許第５，８７４，０６４号明細書、米国特許第５，８５５，９１３号明細書、米国特許第５，２９０，５４０号明細書及び米国特許第４，８８０，０７８号明細書；並びにＰＣＴ公開の国際公開第９２／１９２４４号パンフレット、国際公開第９７／３２５７２号パンフレット、国際公開第９７／４４０１３号パンフレット、国際公開第９８／３１３４６号パンフレット及び国際公開第９９／６６９０３号パンフレットを参照されたい。
本開示の組成物は、様々な公知の方法の１つ以上を用いて、１つ以上の投与経路によっても投与され得る。当業者によって理解されるように、投与の経路及び／又は方法は、所望の結果に応じて変化する。ＣＤ１９結合分子及びＢ細胞標的化剤の投与の選択された経路としては、例えば、注射又は注入による静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄又は他の一般的な投与経路が挙げられる。一般的な投与は、通常、注射による腸内及び局所投与以外の投与方法を表し得、限定はされないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入が挙げられる。代わりに、本開示の組成物は、局所、表皮又は粘膜投与経路、例えば鼻腔内、経口、経膣的、直腸内、舌下又は局所などの非一般的経路によって投与され得る。一実施形態において、ＣＤ１９結合分子及び／又はＢ細胞標的化剤は、注入によって投与される。別の実施形態において、ＣＤ１９結合分子及び／又はＢ細胞標的化剤は、皮下投与される。
ＣＤ１９結合分子及び／又はＢ細胞標的化剤が制御放出又は持続放出系において投与される場合、ポンプが制御又は持続放出を行うのに使用され得る（Ｌａｎｇｅｒ、上記；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照されたい）。ポリマー材料が本開示の治療法の制御又は持続放出を行うのに使用され得る（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｐｅｐｐａｓ，１９８３，Ｊ．，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたい；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照されたい）；米国特許第５，６７９，３７７号明細書；米国特許第５，９１６，５９７号明細書；米国特許第５，９１２，０１５号明細書；米国特許第５，９８９，４６３号明細書；米国特許第５，１２８，３２６号明細書；ＰＣＴ公開番号国際公開第９９／１５１５４号パンフレット；及びＰＣＴ公開番号国際公開第９９／２０２５３号パンフレットも参照されたい。持続放出製剤に使用されるポリマーの例としては、限定はされないが、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－コ－酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）及びポリオルトエステルが挙げられる。一実施形態において、持続放出製剤に使用されるポリマーは、不活性であり、浸出可能な不純物を含まず、貯蔵中に安定しており、滅菌され、生分解性である。制御又は持続放出系は、予防又は治療標的の近くに配置され得、したがって全身投与量のごく一部を必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上記、ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）を参照されたい）。
制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒによる概説において説明される（１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７－１５３３）。当業者に公知の任意の技術は、１つ以上のＣＤ１９結合分子又はＢ細胞標的化剤を含む持続放出製剤を製造するのに使用され得る。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号明細書、ＰＣＴ公報国際公開第９１／０５５４８号パンフレット、ＰＣＴ公報国際公開第９６／２０６９８号パンフレット、Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ＆Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９－１８９、Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ５０：３７２－３９７、Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３－８５４及びＬａｍ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：７５９－７６０を参照されたい。
ＣＤ１９結合分子及び／又はＢ細胞標的化剤が局所投与される場合、それは、軟膏剤、クリーム、経皮パッチ、ローション、ジェル、シャンプー、スプレー、エアゾール、液剤、乳剤の形態又は当業者に周知の他の形態で製剤化され得る。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）を参照されたい。スプレー不可能な局所剤形では、局所適用と適合し、且つ場合により水よりも高い動的粘度を有する担体又は１つ以上の賦形剤を含む粘性～半固体又は固体形態が典型的に用いられる。好適な製剤としては、限定はされないが、液剤、懸濁液、乳剤、クリーム、軟膏剤、粉末、塗布薬、軟膏などが挙げられ、これらは、必要に応じて、滅菌されるか、又は例えば浸透圧などの様々な特性に影響を与えるために、補助剤（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、緩衝液又はその塩）と混合される。他の好適な局所剤形としては、スプレー可能なエアゾール製剤が挙げられ、場合により、固体又は液体不活性担体と組み合わされた有効成分は、加圧された揮発性物質（例えば、フロンなどのガス状噴射剤）との混合物中において又はスクイーズボトル中に包装される。湿潤剤又は保湿剤も必要に応じて医薬組成物及び剤形に加えられ得る。このような更なる成分の例は、周知である。
ＣＤ１９結合分子又はＢ細胞標的化剤を含む組成物が鼻腔内に投与される場合、ＣＤ１９結合分子又はＢ細胞標的化剤は、エアロゾル形態、スプレー、ミスト又は液滴の形態で製剤化することができる。特に、本開示に従う使用のための予防薬又は治療薬は、加圧パック又は噴霧器からのエアロゾルスプレー提示の形態で、好適な噴霧剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適な気体）を用いて、便宜的に送達することができる。加圧エアロゾルの場合、用量単位は、計量された量を送達するためのバルブを提供することによって決定することができる。インヘラー又は吸入器における使用のためのカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンからなる）は、ＣＤ１９結合分子又はＢ細胞標的化剤及びラクトース又はデンプンなどの好適な粉末ベースの混合粉体を含有するように製剤化することができる。
特定の実施形態において、ＣＤ１９結合分子及びＢ細胞標的化剤は、インビボでの適切な分配を確実にするように製剤化され得る。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を除外する。本開示の治療用化合物がＢＢＢを越えることを確実にするために（必要に応じて）、それらは、例えば、リポソーム中で製剤化され得る。リポソームを製造する方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書；同第５，３７４，５４８号明細書；及び同第５，３９９，３３１号明細書を参照されたい。リポソームは、特定の細胞又は器官中に選択的に輸送されて、それにより標的化された薬物送達を促進する１つ以上の部分を含み得る（例えば、Ｒａｎａｄｅ，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５を参照されたい）。例示的な標的化部分としては、フォレート又はビオチン（例えば、Ｌｏｗらに付与された米国特許第５，４１６，０１６号明細書を参照されたい）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｂｌｏｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｏｗａｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０）；界面活性剤プロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）；ｐ １２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられ；Ｋｅｉｎａｎｅｎ ａｎｄ Ｌａｕｋｋａｎｅｎ，１９９４，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；Ｋｉｌｌｉｏｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ，１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２７３も参照されたい。
抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤の組み合わせは、同じ医薬組成物で対象に投与することができる。代わりに、組み合わせの抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の医薬組成物で対象に投与される。
「組み合わせて」投与されるとは、本明細書で用いられるとき、２つ（以上）の異なる治療薬が、障害による対象の苦悩の過程の中で対象に送達される、例えば２つ以上の治療薬が、対象が障害と診断された後と、障害が治癒されるか若しくは取り除かれる前又は他の理由で治療が止まる前に送達されることを意味する。いくつかの実施形態では、１回目の治療薬の送達は、投与に関して重複が生じるように、２回目の送達が開始するときにもなされている。これは、ときに本明細書中で「同時」又は「同時送達」と称される。例えば、各治療薬は、同時に又は異なる時点で逐次的に任意の順序で対象に投与され得るが、同時に投与されない場合、それらは、所望の治療効果を得るように、十分に近い時間で投与される必要がある。
抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、同時に、同じ組成物若しくは別々の組成物において又は逐次的に投与することができる。逐次投与の場合、Ｂ細胞標的化剤を最初に投与し、且つ抗ＣＤ１９剤を２番目に投与することができるか、又は投与の順序は、逆転可能である。
抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、任意の適切な形態において且つ任意の好適な経路によって対象に投与することができる。いくつかの実施形態では、投与の経路は、同じである。他の実施形態では、投与の経路は、異なる。
他の実施形態では、一方の治療薬の送達は、他方の治療薬の送達が開始する前に終了し、例えば、Ｂ細胞標的化剤の投与は、抗ＣＤ１９剤の投与が開始する前に終了する。
いくつかの実施形態では、治療薬は、組み合わせ投与が理由で、より有効である。例えば、抗ＣＤ１９剤療法は、より有効であり、例えば抗ＣＤ１９剤がより少なくても、同等の効果が認められるか、又はＢ細胞標的化剤は、抗ＣＤ１９剤がＢ細胞標的化剤の不在下で投与された場合に経験されるであろうＣＲＳの症状を低下させる。いくつかの実施形態では、症状又は障害に関連する他のパラメータの低下が、一方の治療薬が他方の不在下で送達される場合に認められると思われるよりも大きいように送達がなされる。２つの治療薬の効果は、部分的に相加的である、全体的に相加的であるか又は相加性を上回る可能性がある。送達される１番目の治療薬の効果が２番目の送達時であっても検出可能であるように送達することが可能である。
抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤を含む本開示の組み合わせは、１つ以上の追加の薬剤、例えばコルチコステロイド（例えば、デキサメタゾン又はプレドニゾン）及び／又は免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）（例えば、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド又はイベルドミド）を更に含み得る。いくつかの実施形態では、組み合わせは、デキサメタゾンを含む。いくつかの実施形態では、組み合わせは、レナリドミドを含む。追加の薬剤は、典型的に、抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤からの別個の医薬組成物中で製剤化される。
７．６．Ｂ細胞悪性腫瘍及び患者集団
本開示の組み合わせは、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療において使用可能である。一態様では、本開示は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有し、且つ抗ＣＤ１９剤で治療されるべきであるか又は治療中である対象におけるＣＲＳの１つ以上の症状の重症度を低下させる方法であって、Ｂ細胞標的化剤を対象に抗ＣＤ１９剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
本開示の組み合わせは、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療において使用可能である。一態様では、本開示は、Ｂ細胞悪性腫瘍を有し、且つ抗ＣＤ１９剤で治療されるべきであるか又は治療中である対象におけるＣＲＳの１つ以上の症状の重症度を低下させる方法であって、Ｂ細胞標的化剤を対象に抗ＣＤ１９剤と組み合わせて投与することを含む方法を提供する。
本開示は、ＣＤ１９発現細胞に関連するＢ細胞悪性腫瘍（例えば、血液癌）を予防、治療及び／又は管理するための方法であって、本開示の組み合わせを、必要とする対象に投与することを含む方法も提供する。一態様では、対象はヒトである。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、血液癌である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、悪性リンパ増殖性疾患である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、形質細胞悪液質である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、急性白血病である。一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病又はＢ細胞急性リンパ性白血病としても知られる）（ＡＬＬ又はＢ－ＡＬＬ）、例えば再発性及び／又は難治性Ｂ－ＡＬＬである。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、例えば慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ系組織リンパ腫）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）（例えば、節外性辺縁帯リンパ腫（ＥＭＺＬ）又は節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＺＭＬ））である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、例えば再発性及び／又は難治性ＣＬＬ／ＳＬＬである。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、例えば再発性及び／又は難治性ＦＬである。一部の実施形態において、ＦＬは、小細胞ＦＬである。他の実施形態において、ＦＬは、大細胞ＦＬである。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、例えば再発性及び／又は難治性ＭＣＬである。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、例えば再発性及び／又は難治性ＤＬＢＣＬである。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はバーキットリンパ腫である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍はリンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ系組織リンパ腫）である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、節外性辺縁帯リンパ腫（ＥＭＺＬ）である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＺＭＬ）である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＳＭＺＬ）である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、ホジキンリンパ腫である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、多発性骨髄腫である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、ヘアリー細胞白血病である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、原発性滲出性リンパ腫である
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞前リンパ球性白血病である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、形質芽球性リンパ腫である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、濾胞中心リンパ腫である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、前駆Ｂリンパ芽球性白血病である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、高悪性度Ｂ細胞リンパ腫である。
一部の実施形態において、Ｂ細胞悪性腫瘍は、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。
前述の実施形態の特定の態様は、ＮＨＬを有し、且つ（ｉ）少なくとも１回の以前の（及び任意選択的に最大で５回の以前の）標準治療、例えばリツキシマブなどの抗ＣＤ２０療法に失敗しており、及び／又は（ｉｉ）１つ又は複数の他の承認された療法、例えば自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）に不耐性又は不適格であり、及び／又は（ｉｉｉ）キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法に対して非応答者である対象に関する。ＮＨＬは、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンシュトレームマクログロブリン血症）、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ系組織リンパ腫）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）（例えば、節外性辺縁帯リンパ腫（ＥＭＺＬ）又は節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＺＭＬ））であり得る。一部の実施形態において、ＮＨＬは、再発性及び／又は難治性ＤＬＢＣＬ又はＭＣＬなどの再発性及び／又は難治性であり得る。
したがって、特定の態様において、本開示の組み合わせが投与されるＮＨＬを有する対象は、少なくとも１回の以前の標準治療、任意選択的に最大で５回の以前の標準治療に失敗している。様々な実施形態において、対象は、１回、２回、３回、４回又は５回の標準治療に失敗している。Ｂ細胞悪性腫瘍の例示的な標準治療としては、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０療法が挙げられる。
更なる態様において、本開示の組み合わせが投与されるＮＨＬを有する対象は、１つ又は複数の他の承認された療法、例えば自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）に対して不耐性又は不適格である。
なお更なる態様において、本開示の組み合わせが投与されるＮＨＬを有する対象は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法組成物（「ＣＡＲ組成物」）、例えば抗ＣＤ１９ ＣＡＲ組成物に対して非応答者である。特定の実施形態において、ＣＡＲ組成物は、ＣＴＬ０１９を含む。他の実施形態において、ＣＡＲ組成物は、米国一般名／国際一般名チサゲンレクロイセルを有する。チサゲンレクロイセルは、ＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）として販売されている。例えば、ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａ．ｕｓ．ｎｏｖａｒｔｉｓ．ｃｏｍ／ｓｉｔｅｓ／ｗｗｗ．ｐｈａｒｍａ．ｕｓ．ｎｏｖａｒｔｉｓ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅｓ／ｋｙｍｒｉａｈ．ｐｄｆで入手可能なＫＹＭＲＩＡＨ（登録商標）処方情報を参照されたい。他の実施形態において、ＣＡＲ組成物は、米国一般名／国際一般名アキシカブタゲンシロロイセル（ａｘｉｃａｖｔａｇｅｎｅ ｃｉｌｏｌｅｕｃｅｌ）を有する。アキシカブタゲンシロロイセルは、ＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）として販売されている。例えば、ｗｗｗ．ｙｅｓｃａｒｔａ．ｃｏｍ／ｆｉｌｅｓ／ｙｅｓｃａｒｔａ－ｐｉ．ｐｄｆで入手可能なＹＥＳＣＡＲＴＡ（登録商標）処方情報を参照されたい。他の態様において、ＣＡＲ組成物は、米国一般名ブレクスカブタゲンオートロイセル（ｂｒｅｘｕｃａｂｔａｇｅｎｅ ａｕｔｏｌｅｕｃｅｌ）を有する。ブレクスカブタゲンオートロイセルは、ＴＥＣＡＲＴＵＳ（商標）として販売されている。例えば、ｗｗｗ．ｇｉｌｅａｄ．ｃｏｍ／－／ｍｅｄｉａ／ｆｉｌｅｓ／ｐｄｆｓ／ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ／ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｔｅｃａｒｔｕｓ／ｔｅｃａｒｔｕｓ－ｐｉ．ｐｄｆで入手可能なＴＥＣＡＲＴＵＳ（商標）処方情報を参照されたい。更に他の実施形態において、ＣＡＲ組成物は、米国一般名／国際一般名リソカブタゲンマラロイセル（ｌｉｓｏｃａｂｔａｇｅｎｅ ｍａｒａｌｅｕｃｅｌ）を有する。リソカブタゲンマラロイセルは、ＢＲＥＹＡＮＺＩ（登録商標）として販売されている。例えば、ｐａｃｋａｇｅｉｎｓｅｒｔｓ．ｂｍｓ．ｃｏｍ／ｐｉ／ｐｉ＿ｂｒｅｙａｎｚｉ．ｐｄｆで入手可能なＢＲＥＹＡＮＺＩ（登録商標）処方情報を参照されたい。
いくつかの実施形態では、本開示の組み合わせがキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法組成物（「ＣＡＲ組成物」）に対する非応答者に投与されるとき、抗ＣＤ１９剤は、キメラ抗原受容体を含まず、且つ／又はＣＡＲ組成物ではない。しかし、他の実施形態では、抗ＣＤ１９剤は、キメラ抗原受容体を含み得、且つ／又はＣＡＲ組成物、例えば対象が応答しなかった場合と異なるＣＡＲ組成物であり得る。したがって、本開示の組み合わせにおけるＣＡＲ形式での抗ＣＤ１９剤の使用は、対象に対する代替的なＣＡＲ療法の一部であり得る。
以下の実施例は、部分的には、ヒトＣＤ１９に結合し、且つカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＣＤ１９と交差反応性を示す新規ＣＤ１９結合剤、ＮＥＧ２１８及びＮＥＧ２５８の同定、ＣＤ３及びＴＳＰの場合にはＣＤ２と会合する二重特異性（ＢＳＰ）及び三重特異性（ＴＳＰ）結合分子へのその取り込み並びにＢＳＰ及びＴＳＰの抗腫瘍活性及び免疫刺激活性の広範な特徴付けに関する。
機能アッセイでは、ＴＳＰ、特にＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、対応するＢＳＰと比較したとき亢進した腫瘍細胞死滅並びにＴ細胞の活性化及び増殖を実証する。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の両方は、腫瘍担持マウスの樹立腫瘍に対して有効な抗腫瘍応答を実証するが、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１によるＴ細胞活性化は、より若齢で且つより機能性の表現型を有するＴ細胞を富化させるのに特に有効である。加えて、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、枯渇した／最終分化型の細胞傷害性Ｔ細胞であるＣＤ２８ｎｅｇ ＣＤ８－Ｔ細胞を活性化させるのに特に有効である。更に、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１で処理したＴ細胞は、繰り返しチャレンジしたときに標的細胞を死滅させる能力をより良好に保持している。
総じて、本明細書で提示されるこのエビデンスは、ＣＤ２共刺激、特にＣＤ５８部分によるＣＤ２共刺激を用いることにより、最適なＴ細胞活性化が実現し、且つ枯渇が防止されるような形でＣＤ１９結合分子がＴ細胞と会合することができ、より有効性が高く、持続性のある抗腫瘍応答となる可能性があることを指し示している。
ＴＳＰ、特にＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ｃｙｎｏ ＣＤ１９と交差反応する新規ＣＤ１９結合ドメインから、ＣＤ２結合部分の取込み、Ｔ細胞結合部分の性質及び親和性（ＣＤ５８対抗ＣＤ２抗体、ＣＤ３結合部分の比較的「高い」又は「中程度の」親和性）及び分子における結合部分の形態（例えば、Ｎ末端にあるＣＤ１９）にまで及ぶ範囲の、全てが、個別に、優れたＣＤ１９治療薬をもたらすと期待される有利な特性を付与するものである要因の組み合わせに関して最適化される。
イアナルマブは、ヒト、カニクイザル及びマウスＢ細胞上で発現されるＢＡＦＦ－Ｒと類似する効力で結合する、完全ヒトＩｇＧ１（免疫グロブリンサブクラスＧ１）モノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。以下の実施例７～８は、抗ＢＡＦＦＲ抗体イアナルマブは、マウスとカニクイザルの両方においてインビボで健常Ｂ細胞を枯渇させる能力があることを示す。Ｂ細胞悪性腫瘍を患っている対象に、抗ＣＤ１９剤を対象に投与する前にイアナルマブを投与することにより、抗ＣＤ１９剤に曝露される対象における健常Ｂ細胞の数が減少し、それにより対象によって経験されるＣＲＳの重症度は、イアナルマブ投与の不在下で対象によって経験されるであろうＣＲＳと比較して低下することが予想される。
８．１．実施例１：ノブ・イントゥ・ホールフォーマットの抗ＣＤ３－抗ＣＤ１９ ＩｇＧ１二重特異性及び三重特異性結合分子の作製
８．１．１．実施例１Ａ：初期ＢＢＭ及びＴＢＭコンストラクト
ＣＤ３ ＡＢＭ及びＣＤ１９ ＡＢＭを有するＢＢＭ（図３Ａに概略的に示される）並びにＣＤ３ ＡＢＭ、ＣＤ１９ ＡＢＭ及びＣＤ２ ＡＢＭを有するＴＢＭ（図３Ｂに概略的に示される）をノブ・イントゥ・ホール（ＫＩＨ）フォーマットで作製した。本実施例の各ＢＢＭ及びＴＢＭは、第１の半抗体（図３Ａ～図３Ｂに示される各コンストラクトの左半分として概略的に示される）と第２の半抗体（図３Ａ～図３Ｂに示される各コンストラクトの右半分として概略的に示される）とを含む。
８．１．１．実施例１Ａ：初期ＢＢＭ及びＴＢＭコンストラクト
ＣＤ３ ＡＢＭ及びＣＤ１９ ＡＢＭを有するＢＢＭ（図３Ａに概略的に示される）並びにＣＤ３ ＡＢＭ、ＣＤ１９ ＡＢＭ及びＣＤ２ ＡＢＭを有するＴＢＭ（図３Ｂに概略的に示される）をノブ・イントゥ・ホール（ＫＩＨ）フォーマットで作製した。本実施例の各ＢＢＭ及びＴＢＭは、第１の半抗体（図３Ａ～図３Ｂに示される各コンストラクトの左半分として概略的に示される）と第２の半抗体（図３Ａ～図３Ｂに示される各コンストラクトの右半分として概略的に示される）とを含む。
８．１．１．１．材料及び方法
８．１．１．１．１．ＢＢＭ及びＴＢＭをコードするプラスミド
全てのコンストラクトのプラスミドを合成し、哺乳類細胞での発現のためにコドン最適化した。
８．１．１．１．１．ＢＢＭ及びＴＢＭをコードするプラスミド
全てのコンストラクトのプラスミドを合成し、哺乳類細胞での発現のためにコドン最適化した。
各二重特異性コンストラクトにつき、３つのプラスミドを合成した。抗ＣＤ１９重鎖をコードする第１のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）抗ＣＤ１９ ＶＨドメイン及び（ｉｉ）ヘテロ二量体化を促進するホールのためのＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ突然変異並びにサイレンシング突然変異を含む定常ｈＩｇＧ１ドメインを含む融合体として合成した。軽鎖をコードする第２のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）抗ＣＤ１９ ＶＬドメイン及び（ｉｉ）定常ヒトκ配列を含む融合体として合成した。第１及び第２のプラスミドによってコードされるタンパク質が、第１の半抗体を形成する。第２の半抗体をコードする第３のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）抗ＣＤ３単鎖可変フラグメント（ＣＤ３ｈｉ（以下の段落に定義されるとおり）と称される抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬドメインを有する）、（ｉｉ）リンカー、及び（ｉｉｉ）ヘテロ二量体化を促進するノブのためのＴ３６６Ｗ突然変異並びにサイレンシング突然変異を含む定常ｈＩｇＧ１ドメインを含む融合体として合成した。
各三重特異性コンストラクトにつき、３つのプラスミドを合成した。抗ＣＤ１９重鎖をコードする第１のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）定常ｈＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインに融合された抗ＣＤ１９ ＶＨドメイン、（ｉｉ）リンカー、（ｉｉｉ）ＣＤ３に対して（相対的に見て）高い、中程度の又は低い親和性を有し、且つ本明細書においてＣＤ３ｈｉ、ＣＤ３ｍｅｄ又はＣＤ３ｌｏと呼ばれる（Ｂｉａｃｏｒｅによって測定される際、ＣＤ３に対する親和性が、それぞれ１６ｎＭ、３０ｎＭ又は４８ｎｍである抗ＣＤ３抗体からの）抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬドメインを有する抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、（ｉｖ）第２のリンカー、及び（ｖ）ヘテロ二量体化を促進するホールのためのＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ突然変異並びにサイレンシング突然変異を含むｈＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む融合体として合成した。言及されるＢｉａｃｏｒｅ親和性値及びコンストラクト名にある相対的表現に関して、それらは単に、識別する目的で使用されるに過ぎず、絶対的な親和性値を表す意図はないことが理解されなければならない。軽鎖をコードする第２のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）抗ＣＤ１９ ＶＬドメイン及び（ｉｉ）定常ヒトκ配列を含む融合体として合成した。第１及び第２のプラスミドによってコードされるタンパク質が、第１の半抗体を形成する。第２の半抗体をコードする第３のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）ＣＤ５８のＩｇＶドメイン（ＣＤ５８－６）及び（ｉｉ）ヘテロ二量体化を促進するノブのためのＴ３６６Ｗ突然変異並びにサイレンシング突然変異を含む定常ｈＩｇＧ１ドメインを含む融合体として合成した。
ＣＤ２ ＡＢＭを鶏卵リゾチームに対するＶｈｈに置き換えた、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１（これは、ＮＥＧ２５８ベースのＣＤ１９結合アームを有する）及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ２（これは、ＮＥＧ２１８ベースのＣＤ１９結合アームを有する）三重特異性コンストラクトに対応する対照コンストラクトを作製した（このような対照コンストラクトは、それぞれ名称ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｌ及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ２Ｌを有する）。
コンストラクトの構成要素のアミノ酸配列を表２０Ａ－１（Ｆｃ配列なし）及び表２０Ａ－２（Ｆｃ配列あり）に示す。
以下の表２０Ａ－２は、Ｆｃ配列を含む、表２０Ａ－１に示される構築物の全長アミノ酸配列を示す。
８．１．１．１．２．発現及び精製
それぞれの鎖をＨＥＫ２９３細胞にコトランスフェクトすることにより、ＢＢＭ及びＴＢＭを一過性に発現させた。簡潔に言えば、ＰＥＩをトランスフェクション試薬として使用して、１：３の最終ＤＮＡ：ＰＥＩ比で細胞への重鎖及び軽鎖プラスミドのトランスフェクションを実施した。２００万細胞／血清培地１ｍＬを有する培養物のトランスフェクションには、培養液１リットル当たり１ｍｇのプラスミドを使用した。５日間発現させた後、遠心及びろ過によって培地を清澄化することにより、ＢＢＭ及びＴＢＭを回収した。抗ＣＨ１アフィニティーバッチ結合（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ－ＣＨ１アフィニティーマトリックス、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，米国）又はプロテインＡ（ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、Ｆａｓｔ ｆｌｏｗ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）バッチ結合により、１ｍｌ樹脂／１００ｍＬ上清を用いて精製を実施した。穏やかに混合しながらタンパク質を最低でも２時間結合させておき、上清を重力ろ過カラムにロードした。樹脂を２０～５０ＣＶのＰＢＳで洗浄した。ＢＢＭ及びＴＢＭを、２０ＣＶの５０ｍＭクエン酸塩、９０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．２、５０ｍＭスクロースで溶出させた。溶出したＢＢＭ及びＴＢＭ画分を１Ｍクエン酸ナトリウム ５０ｍＭスクロースでｐＨ５．５に調整した。凝集体が存在する場合、最終仕上げ段階としてＨｉ Ｌｏａｄ １６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００グレードカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）を使用して分取サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。発現したＢＢＭ及びＴＢＭのタンパク質のアイデンティティが一次アミノ酸配列の予測質量と一致することを確認するため、高速液体クロマトグラフィーと質量分析との組み合わせによってタンパク質を分析した。
それぞれの鎖をＨＥＫ２９３細胞にコトランスフェクトすることにより、ＢＢＭ及びＴＢＭを一過性に発現させた。簡潔に言えば、ＰＥＩをトランスフェクション試薬として使用して、１：３の最終ＤＮＡ：ＰＥＩ比で細胞への重鎖及び軽鎖プラスミドのトランスフェクションを実施した。２００万細胞／血清培地１ｍＬを有する培養物のトランスフェクションには、培養液１リットル当たり１ｍｇのプラスミドを使用した。５日間発現させた後、遠心及びろ過によって培地を清澄化することにより、ＢＢＭ及びＴＢＭを回収した。抗ＣＨ１アフィニティーバッチ結合（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ－ＣＨ１アフィニティーマトリックス、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，米国）又はプロテインＡ（ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、Ｆａｓｔ ｆｌｏｗ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）バッチ結合により、１ｍｌ樹脂／１００ｍＬ上清を用いて精製を実施した。穏やかに混合しながらタンパク質を最低でも２時間結合させておき、上清を重力ろ過カラムにロードした。樹脂を２０～５０ＣＶのＰＢＳで洗浄した。ＢＢＭ及びＴＢＭを、２０ＣＶの５０ｍＭクエン酸塩、９０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．２、５０ｍＭスクロースで溶出させた。溶出したＢＢＭ及びＴＢＭ画分を１Ｍクエン酸ナトリウム ５０ｍＭスクロースでｐＨ５．５に調整した。凝集体が存在する場合、最終仕上げ段階としてＨｉ Ｌｏａｄ １６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００グレードカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）を使用して分取サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。発現したＢＢＭ及びＴＢＭのタンパク質のアイデンティティが一次アミノ酸配列の予測質量と一致することを確認するため、高速液体クロマトグラフィーと質量分析との組み合わせによってタンパク質を分析した。
８．１．１．１．３．ＣＤ３親和性測定
ＣＤ３に対するＣＤ３ｈｉ、ＣＤ３ｍｅｄ及びＣＤ３ｌｏ ｍＡｂの親和性をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システムを使用して２５℃で決定した。簡潔に言えば、抗ｈＦｃ ＩｇＧ１をＣＭ５チップに固定化した。ＣＤ３－Ｆｃの捕捉後（ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中１μｇ／ｍｌ、５０μｌ／分の流量、３０秒の注入時間）、続いてＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中の１：２希釈系列の種々の抗体を注入することにより反応速度データを収集した。
ＣＤ３に対するＣＤ３ｈｉ、ＣＤ３ｍｅｄ及びＣＤ３ｌｏ ｍＡｂの親和性をＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００システムを使用して２５℃で決定した。簡潔に言えば、抗ｈＦｃ ＩｇＧ１をＣＭ５チップに固定化した。ＣＤ３－Ｆｃの捕捉後（ＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中１μｇ／ｍｌ、５０μｌ／分の流量、３０秒の注入時間）、続いてＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中の１：２希釈系列の種々の抗体を注入することにより反応速度データを収集した。
データはＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア、バージョン１．０を使用して評価した。生データは二重参照とし、すなわち測定用フローセルの反応を参照フローセルの反応で補正し、第２段階でブランク注入の反応を差し引いた。最後に、１：１結合モデルを適用することによりセンサーグラムのフィッティングを行い、動的速度定数及び解離平衡定数を計算した。Ｒｍａｘはローカルで設定した。データはラン毎に個別に処理した。
８．１．２．実施例１Ｂ：追加的なＢＢＭ及びＴＢＭコンストラクト
ＣＤ３ ＡＢＭ及びＣＤ１９ ＡＢＭを有するワンアームＢＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、図３Ｃに概略的に示される）並びにＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１に対応するが、ＣＤ１９結合アームの代わりにリゾチーム結合アームを有するＴＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ）を作製した。ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃコンストラクトのアミノ酸配列を表２０Ｂに示す。
ＣＤ３ ＡＢＭ及びＣＤ１９ ＡＢＭを有するワンアームＢＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、図３Ｃに概略的に示される）並びにＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１に対応するが、ＣＤ１９結合アームの代わりにリゾチーム結合アームを有するＴＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ）を作製した。ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃコンストラクトのアミノ酸配列を表２０Ｂに示す。
加えて、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃコンストラクトについて、各々、表２０Ａ－２（ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１の場合）又は表２０Ｂ（ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃの場合）に記載されるコンストラクトの第２の半抗体配列とＦｃ配列の１アミノ酸が異なる第２の半抗体配列を有する第２のバージョンを作製した。具体的には、表２０Ａ－２及び表２０Ｂでは第２の半抗体配列はアルギニン残基を有するが、第２のバージョンはそこにヒスチジン残基を有する。アルギニン残基は、プロテインＡ結合による精製を促進するためにコンストラクトに含められた。表２０Ａ－２及び表２０Ｂに記載されるバージョンのコンストラクトは、本明細書では「Ｒ変異型」と呼ばれ、以下の表２０Ｃに記載されるバージョンのコンストラクトは、本明細書では「Ｈ変異型」と呼ばれる。コンストラクトのＲ変異型の機能活性はそのＨ変異型の機能活性と大差ないと考えられる。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１ＣのＨ変異型をコードするヌクレオチド配列を表２０Ｄに示す。
８．２．実施例２：ＢＢＭがＣＤ１９＋標的細胞に対するリダイレクトＴ細胞傷害性（ＲＴＣＣ）を誘発する能力
８．２．１．材料及び方法
実施例１ＡのＢＢＭによるＲＴＣＣアッセイを実施して、ＢＢＭがＣＤ１９＋ Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ及びＫａｒｐａｓ４２２－ｌｕｃ細胞に対するＲＴＣＣを誘発する能力を測定した。Ｎａｌｍ－６はヒトＢ細胞前駆体白血病細胞株であり、Ｋａｒｐａｓ４２２はヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株である。簡潔に言えば、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現するように操作したＮａｌｍ６及びＫａｒｐａｓ４２２細胞を１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）含有ＲＰＭＩ１６４０培養培地で培養した。段階希釈したＢＢＭ又はｇＨアイソタイプ抗体対照（αｇＨ－ＣＤ３ｈｉ）と共に１０，０００個の標的細胞を３８４ウェル平底マイクロタイタープレートに播種した。凍結保存された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から初代ヒトＴ細胞を単離し、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８ ｄｙｎａｂｅａｄ（Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号１１１３１Ｄ）を使用して増殖させ、続いて凍結保存した。増殖したＴ細胞を解凍し、３：１のエフェクター細胞（すなわちＴ細胞）対標的細胞（すなわち癌細胞）比（Ｅ：Ｔ比）が実現するようにプレートへとアリコートに分けた。プレートを３７℃のインキュベーターにおいて５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。コインキュベーション後、全てのウェルにＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６２０）を加え、続いてＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で発光シグナルを測定した。Ｂｒｉｇｈｔ Ｇｌｏとの標的細胞が、最大シグナルとして働いた。標的細胞のＲＴＣＣ率は、以下の式：［１００－（試料／最大シグナル）×１００％］を用いて計算した。
８．２．１．材料及び方法
実施例１ＡのＢＢＭによるＲＴＣＣアッセイを実施して、ＢＢＭがＣＤ１９＋ Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ及びＫａｒｐａｓ４２２－ｌｕｃ細胞に対するＲＴＣＣを誘発する能力を測定した。Ｎａｌｍ－６はヒトＢ細胞前駆体白血病細胞株であり、Ｋａｒｐａｓ４２２はヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株である。簡潔に言えば、ホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子を発現するように操作したＮａｌｍ６及びＫａｒｐａｓ４２２細胞を１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）含有ＲＰＭＩ１６４０培養培地で培養した。段階希釈したＢＢＭ又はｇＨアイソタイプ抗体対照（αｇＨ－ＣＤ３ｈｉ）と共に１０，０００個の標的細胞を３８４ウェル平底マイクロタイタープレートに播種した。凍結保存された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から初代ヒトＴ細胞を単離し、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８ ｄｙｎａｂｅａｄ（Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号１１１３１Ｄ）を使用して増殖させ、続いて凍結保存した。増殖したＴ細胞を解凍し、３：１のエフェクター細胞（すなわちＴ細胞）対標的細胞（すなわち癌細胞）比（Ｅ：Ｔ比）が実現するようにプレートへとアリコートに分けた。プレートを３７℃のインキュベーターにおいて５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。コインキュベーション後、全てのウェルにＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６２０）を加え、続いてＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で発光シグナルを測定した。Ｂｒｉｇｈｔ Ｇｌｏとの標的細胞が、最大シグナルとして働いた。標的細胞のＲＴＣＣ率は、以下の式：［１００－（試料／最大シグナル）×１００％］を用いて計算した。
８．２．２．結果
結果は図４Ａ～図４Ｂに示す。ＮＥＧ２５８及びＮＥＧ２１８の両方をベースとするＢＢＭが、Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ及びＫａｒｐａｓ４２２－ｌｕｃ細胞に対するＲＴＣＣ活性を媒介した一方、予想どおり、ｇＨアイソタイプ抗体（対照）は活性を示さなかった。
結果は図４Ａ～図４Ｂに示す。ＮＥＧ２５８及びＮＥＧ２１８の両方をベースとするＢＢＭが、Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ及びＫａｒｐａｓ４２２－ｌｕｃ細胞に対するＲＴＣＣ活性を媒介した一方、予想どおり、ｇＨアイソタイプ抗体（対照）は活性を示さなかった。
８．３．実施例３：ＢＢＭがＴ細胞増殖を誘発する能力
８．３．１．材料及び方法
ＮＥＧ２５８及びＮＥＧ２１８の可変領域を含む実施例１Ａに記載されるＢＢＭについて、ＣＤ１９を発現する標的細胞と共培養したときにＴ細胞増殖を誘発するその能力を評価した。簡潔に言えば、アッセイ当日、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＫａｒｐａｓ４２２及びＮａｌｍ－６標的細胞を照射し、Ｃｏｓｔａｒ ９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３９０４）内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１８７５－０８５）、１０％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ、カタログ番号１５００－５００）、１％Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２５８３０－０８１）、１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１４０－０５０）、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５０７００６３）、１％ＨＥＰＥＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５６３００８０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１３６０－０７０）、０．１％β－メルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１９８５－０２３）］に６０，０００細胞／ウェルの密度で播いた。予めＬｅｕｋｏｐａｋドナー（Ｈｅｍａｃａｒｅ）から単離して凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、汎Ｔ細胞単離キット、ヒト［Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５］を製造者のプロトコルに従って使用して、ネガティブ選択によって汎Ｔ細胞を単離した。単離したＴ細胞を５μＭ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｃ３４５５７）で製造者のプロトコルに従って標識し、６０，０００個のＣＴＶ標識Ｔ細胞を６０，０００個の標的細胞と共培養することにより、１：１のＥ：Ｔ比を実現した。１６ｐＭ～１０，０００ｐＭの範囲のＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＢＢＭ及び対照結合分子（αｇＨ－ＣＤ３ｈｉ）の希釈系列を細胞に加え、プレートを５％ＣＯ２、３７℃インキュベーターで９６時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を回収し、製造者の指示に従ってヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ）［Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２］で処理し、次に４℃で３０分間インキュベートすることにより固定可能生死判別色素ｅＦｌｏｕｒ ７８０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５－０８６５－１４）で染色した。次に、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液を使用して２回洗浄し、４℃で３０分間インキュベートすることによりＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５コンジュゲート抗ヒトＣＤ３ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３３６）で染色した。次に試料をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにかけ、ＦｌｏｗＪｏを使用して分析することにより、ＣＤ３染色及びＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ染色剤の希釈度に基づいて％増殖ＣＤ３＋ Ｔ細胞率を決定した。
８．３．１．材料及び方法
ＮＥＧ２５８及びＮＥＧ２１８の可変領域を含む実施例１Ａに記載されるＢＢＭについて、ＣＤ１９を発現する標的細胞と共培養したときにＴ細胞増殖を誘発するその能力を評価した。簡潔に言えば、アッセイ当日、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＫａｒｐａｓ４２２及びＮａｌｍ－６標的細胞を照射し、Ｃｏｓｔａｒ ９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３９０４）内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１８７５－０８５）、１０％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ、カタログ番号１５００－５００）、１％Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２５８３０－０８１）、１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１４０－０５０）、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５０７００６３）、１％ＨＥＰＥＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５６３００８０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１３６０－０７０）、０．１％β－メルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１９８５－０２３）］に６０，０００細胞／ウェルの密度で播いた。予めＬｅｕｋｏｐａｋドナー（Ｈｅｍａｃａｒｅ）から単離して凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、汎Ｔ細胞単離キット、ヒト［Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５］を製造者のプロトコルに従って使用して、ネガティブ選択によって汎Ｔ細胞を単離した。単離したＴ細胞を５μＭ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｃ３４５５７）で製造者のプロトコルに従って標識し、６０，０００個のＣＴＶ標識Ｔ細胞を６０，０００個の標的細胞と共培養することにより、１：１のＥ：Ｔ比を実現した。１６ｐＭ～１０，０００ｐＭの範囲のＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＢＢＭ及び対照結合分子（αｇＨ－ＣＤ３ｈｉ）の希釈系列を細胞に加え、プレートを５％ＣＯ２、３７℃インキュベーターで９６時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を回収し、製造者の指示に従ってヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ）［Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２］で処理し、次に４℃で３０分間インキュベートすることにより固定可能生死判別色素ｅＦｌｏｕｒ ７８０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５－０８６５－１４）で染色した。次に、細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液を使用して２回洗浄し、４℃で３０分間インキュベートすることによりＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５コンジュゲート抗ヒトＣＤ３ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３３６）で染色した。次に試料をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにかけ、ＦｌｏｗＪｏを使用して分析することにより、ＣＤ３染色及びＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ染色剤の希釈度に基づいて％増殖ＣＤ３＋ Ｔ細胞率を決定した。
８．３．２．結果
ＮＥＧ２５８ベースのＢＢＭ及びＮＥＧ２１８ベースのＢＢＭの両方は、２つの異なるＣＤ１９発現標的細胞株と共培養したとき、Ｔ細胞の増殖を誘導した（図５Ａ～図５Ｂ）。Ｔ細胞増殖効果は用量依存的であり、ＮＥＧ２５８ベースのＢＢＭはＮＥＧ２１８ベースのＢＢＭよりも強力な活性を示した。対照抗体はいかなるＴ細胞増殖も誘導しなかったことから、Ｔ細胞の増殖にＣＤ１９標的特異的会合が必要であることが指摘される。
ＮＥＧ２５８ベースのＢＢＭ及びＮＥＧ２１８ベースのＢＢＭの両方は、２つの異なるＣＤ１９発現標的細胞株と共培養したとき、Ｔ細胞の増殖を誘導した（図５Ａ～図５Ｂ）。Ｔ細胞増殖効果は用量依存的であり、ＮＥＧ２５８ベースのＢＢＭはＮＥＧ２１８ベースのＢＢＭよりも強力な活性を示した。対照抗体はいかなるＴ細胞増殖も誘導しなかったことから、Ｔ細胞の増殖にＣＤ１９標的特異的会合が必要であることが指摘される。
８．４．実施例４：ＴＢＭがＣＤ２依存性Ｔ細胞活性化を誘発する能力
８．４．１．材料及び方法
ＮＦＡＴプロモーターによってドライブされるルシフェラーゼレポーター遺伝子を安定に発現するジャーカット細胞株（ＪＮＬ、不死化ヒトＴ細胞株）を使用して、Ｔ細胞活性化を測定した。ＪＮＬ細胞のＣＤ２発現レベルをフローサイトメトリーによって確認した（図６Ａ）。ＣＲＩＳＰＲ（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート）によってＣＤ２ノックアウト（ＫＯ）細胞を作成するため、ＪＮＬ細胞にＣＤ２ Ｃａｓ９リボ核タンパク質複合体を電気穿孔した。続いてＣＤ２－細胞を選別することにより富化して、均一なＣＤ２－集団とした（図６Ｂ）。次にＣＤ２＋及びＣＤ２－ＪＮＬ細胞によるＪＮＬレポーターアッセイを実施して、二重特異性又は三重特異性コンストラクト依存的Ｔ細胞活性化を測定した。端的には、段階希釈した実施例１ＡのＢＢＭ又はＴＢＭ（すなわちＲ変異型）と共に１０，０００個のＮａｌｍ６又はＫａｒｐａｓ４２２細胞を３８４ウェル平底マイクロタイタープレートに播種した。次にプレートに、３：１のエフェクター対標的比が実現するようにＪＮＬ細胞を加えた。プレートを３７℃インキュベーターにおいて５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。コインキュベーション後、全てのウェルにＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６２０）を加え、続いてＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で発光シグナルを測定した。
８．４．１．材料及び方法
ＮＦＡＴプロモーターによってドライブされるルシフェラーゼレポーター遺伝子を安定に発現するジャーカット細胞株（ＪＮＬ、不死化ヒトＴ細胞株）を使用して、Ｔ細胞活性化を測定した。ＪＮＬ細胞のＣＤ２発現レベルをフローサイトメトリーによって確認した（図６Ａ）。ＣＲＩＳＰＲ（クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート）によってＣＤ２ノックアウト（ＫＯ）細胞を作成するため、ＪＮＬ細胞にＣＤ２ Ｃａｓ９リボ核タンパク質複合体を電気穿孔した。続いてＣＤ２－細胞を選別することにより富化して、均一なＣＤ２－集団とした（図６Ｂ）。次にＣＤ２＋及びＣＤ２－ＪＮＬ細胞によるＪＮＬレポーターアッセイを実施して、二重特異性又は三重特異性コンストラクト依存的Ｔ細胞活性化を測定した。端的には、段階希釈した実施例１ＡのＢＢＭ又はＴＢＭ（すなわちＲ変異型）と共に１０，０００個のＮａｌｍ６又はＫａｒｐａｓ４２２細胞を３８４ウェル平底マイクロタイタープレートに播種した。次にプレートに、３：１のエフェクター対標的比が実現するようにＪＮＬ細胞を加えた。プレートを３７℃インキュベーターにおいて５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。コインキュベーション後、全てのウェルにＢｒｉｇｈｔ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２６２０）を加え、続いてＥｎｖｉｓｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で発光シグナルを測定した。
８．４．２．結果
ＢＢＭ及びＴＢＭの両方は、ＣＤ２ ＷＴ ＪＮＬ細胞とインキュベートしたとき発光の用量依存的増加を誘導し、ＴＢＭとの反応レベルの方が高かった（図６Ｃ～図６Ｆ）。ＣＤ２－ＫＯ ＪＮＬ細胞をエフェクターとして使用したとき、対応するＢＢＭと比較するとＴＢＭでＴ細胞活性化の低下が観察されたことから、ＴＢＭの利点がＴ細胞上のＣＤ２発現に依存することが示唆される。
ＢＢＭ及びＴＢＭの両方は、ＣＤ２ ＷＴ ＪＮＬ細胞とインキュベートしたとき発光の用量依存的増加を誘導し、ＴＢＭとの反応レベルの方が高かった（図６Ｃ～図６Ｆ）。ＣＤ２－ＫＯ ＪＮＬ細胞をエフェクターとして使用したとき、対応するＢＢＭと比較するとＴＢＭでＴ細胞活性化の低下が観察されたことから、ＴＢＭの利点がＴ細胞上のＣＤ２発現に依存することが示唆される。
８．５．実施例５：ｃｙｎｏ Ｂ細胞に対するＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭの結合
８．５．１．材料及び方法
ＭＡＣＳポジティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０－０９２－０１２）を使用して、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＰＢＭＣ（ｉＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃ＩＱＢ－ＭｎＰＢ１０２）からＣＤ３＋細胞を枯渇させた。残りの細胞集団をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。Ｖ字底９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００，０００個の細胞を播き、１ｕｇ／ｍＬの実施例１ＡのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）と共に氷上で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ－６４７標識抗ヒトＦｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ ＃１０９－６０５－０９８）及びｃｙｎｏ交差反応性ＦＩＴＣマウス抗ヒトＣＤ２０抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５６６３２）と共に氷上で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞を１００μＬの緩衝液に再懸濁し、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｙｔｏｆｌｅｘでデータを収集した。ＣｙｔＥｘｐｅｒ ｖ２．３を使用して細胞を分析し、ＣＤ２０陽性集団でゲーティングした。
８．５．１．材料及び方法
ＭＡＣＳポジティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＃１３０－０９２－０１２）を使用して、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＰＢＭＣ（ｉＱ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃ＩＱＢ－ＭｎＰＢ１０２）からＣＤ３＋細胞を枯渇させた。残りの細胞集団をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。Ｖ字底９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００，０００個の細胞を播き、１ｕｇ／ｍＬの実施例１ＡのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）と共に氷上で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞をＡｌｅｘａ－６４７標識抗ヒトＦｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ ＃１０９－６０５－０９８）及びｃｙｎｏ交差反応性ＦＩＴＣマウス抗ヒトＣＤ２０抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５６６３２）と共に氷上で１時間インキュベートした。ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄した後、細胞を１００μＬの緩衝液に再懸濁し、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｙｔｏｆｌｅｘでデータを収集した。ＣｙｔＥｘｐｅｒ ｖ２．３を使用して細胞を分析し、ＣＤ２０陽性集団でゲーティングした。
８．５．２．結果
カニクイザルは、ヒトとの進化的関係が近接しているため、抗体治療薬の治療効果及び潜在的毒性の分析に最適な前臨床モデルであり、したがって、臨床開発中の抗体は、そのヒト標的のカニクイザルホモログに結合させることが有用である。図７Ａ～図７Ｂに示されるように、ＮＥＧ２５８－ＴＢＭ及びＮＥＧ２１８ ＴＢＭは、両方ともｃｙｎｏ Ｂ細胞に結合し、これは、ＣＤ１９結合アームがｃｙｎｏ ＣＤ１９を認識することを示している。
カニクイザルは、ヒトとの進化的関係が近接しているため、抗体治療薬の治療効果及び潜在的毒性の分析に最適な前臨床モデルであり、したがって、臨床開発中の抗体は、そのヒト標的のカニクイザルホモログに結合させることが有用である。図７Ａ～図７Ｂに示されるように、ＮＥＧ２５８－ＴＢＭ及びＮＥＧ２１８ ＴＢＭは、両方ともｃｙｎｏ Ｂ細胞に結合し、これは、ＣＤ１９結合アームがｃｙｎｏ ＣＤ１９を認識することを示している。
８．６．実施例６：ＰＢＭＣにおけるｃｙｎｏ Ｂ細胞の枯渇時にＴＢＭがＴ細胞活性化を誘導する能力
８．６．１．材料及び方法
エキソビボｃｙｎｏ Ｂ細胞枯渇アッセイを実施して、実施例１のＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭがＰＢＭＣ（末梢血単核球）中のＣＤ２０陽性Ｂ細胞を溶解させる能力を測定した。端的には、カニクイザル（ｃｙｎｏ）全血（ＢｉｏＩＶＴ）からフィコール勾配遠心法を用いてＰＢＭＣを単離した。単離したＰＢＭＣ及び段階希釈した実施例１ＡのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）を９６ウェル平底マイクロタイタープレートに播種した。プレートを３７℃インキュベーターにおいて５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。２４時間インキュベートした後、試料を回収すると同時にＣＤ３及びＣＤ２０に関して染色して、ＰＢＭＣ集団中のＢ細胞及びＴ細胞を識別した。細胞集団の定量分析を可能にするため、７５，６００個の計数用ビーズを加えた後、フローサイトメトリーによって捕捉した。Ｂ細胞の絶対数を決定するため、各試料につき２０，０００個のビーズを捕捉した。Ｂ細胞数とビーズ数との比率を計算することにより、パーセントＢ細胞枯渇率を決定した。Ｔ細胞活性化の検出のため、細胞を抗ＣＤ３、抗ＣＤ６９及び抗ＣＤ２５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ及びＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。
８．６．１．材料及び方法
エキソビボｃｙｎｏ Ｂ細胞枯渇アッセイを実施して、実施例１のＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭがＰＢＭＣ（末梢血単核球）中のＣＤ２０陽性Ｂ細胞を溶解させる能力を測定した。端的には、カニクイザル（ｃｙｎｏ）全血（ＢｉｏＩＶＴ）からフィコール勾配遠心法を用いてＰＢＭＣを単離した。単離したＰＢＭＣ及び段階希釈した実施例１ＡのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）を９６ウェル平底マイクロタイタープレートに播種した。プレートを３７℃インキュベーターにおいて５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。２４時間インキュベートした後、試料を回収すると同時にＣＤ３及びＣＤ２０に関して染色して、ＰＢＭＣ集団中のＢ細胞及びＴ細胞を識別した。細胞集団の定量分析を可能にするため、７５，６００個の計数用ビーズを加えた後、フローサイトメトリーによって捕捉した。Ｂ細胞の絶対数を決定するため、各試料につき２０，０００個のビーズを捕捉した。Ｂ細胞数とビーズ数との比率を計算することにより、パーセントＢ細胞枯渇率を決定した。Ｔ細胞活性化の検出のため、細胞を抗ＣＤ３、抗ＣＤ６９及び抗ＣＤ２５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ及びＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で染色した。
８．６．２．結果
ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭの両方は、ｃｙｎｏ Ｂ細胞を枯渇させ（図８Ａ）、ＣＤ６９及びＣＤ２５発現の上方制御から明らかなとおり、ＣＤ３＋ Ｔ細胞の活性化を誘導した（図８Ｃ～図８Ｈ）。予想どおり、ＴＢＭを加えない場合、Ｂ細胞枯渇もＴ細胞活性化も起こらなかった。これらの結果は、いずれも、ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭの能力がｃｙｎｏ Ｔ細胞の活性化並びに活性化の特異性を誘導することを示している。
ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭの両方は、ｃｙｎｏ Ｂ細胞を枯渇させ（図８Ａ）、ＣＤ６９及びＣＤ２５発現の上方制御から明らかなとおり、ＣＤ３＋ Ｔ細胞の活性化を誘導した（図８Ｃ～図８Ｈ）。予想どおり、ＴＢＭを加えない場合、Ｂ細胞枯渇もＴ細胞活性化も起こらなかった。これらの結果は、いずれも、ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭの能力がｃｙｎｏ Ｔ細胞の活性化並びに活性化の特異性を誘導することを示している。
８．７．実施例７：ＣＤ１９ ＴＢＭによるリダイレクトＴ細胞傷害性
実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）（Ｂｉａｃｏｒｅによって測定される際にＣＤ３に対する親和性が１６ｎＭである抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含むＣＤ３ ＡＢＭを有する）について、腫瘍標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を分析した。
実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）（Ｂｉａｃｏｒｅによって測定される際にＣＤ３に対する親和性が１６ｎＭである抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含むＣＤ３ ＡＢＭを有する）について、腫瘍標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を分析した。
８．７．１．材料及び方法
一研究では、複数のドナーエフェクター細胞間でＴＢＭを比較した。簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６又はＫａｒｐａｓ４２２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり２，５００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ＃ＣＴＬ－ＵＰ１）から２ドナーからのＭＡＣＳネガティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＃１３０－０９６－５３５）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に３：１又は５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。段階希釈した全てのコンストラクト及び対照と共に共培養細胞をインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で２４、４８、７２又は９６時間インキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
一研究では、複数のドナーエフェクター細胞間でＴＢＭを比較した。簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６又はＫａｒｐａｓ４２２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり２，５００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ＃ＣＴＬ－ＵＰ１）から２ドナーからのＭＡＣＳネガティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＃１３０－０９６－５３５）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に３：１又は５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。段階希釈した全てのコンストラクト及び対照と共に共培養細胞をインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で２４、４８、７２又は９６時間インキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
８．７．２．結果
図９Ａ～図９Ｐに示されるように、ＴＢＭは、複数の時点、Ｅ：Ｔ比及びエフェクターＴ細胞ドナーで、Ｎａｌｍ６標的細胞（図９Ａ～図９Ｈ）及びＫａｒｐａｓ４２２細胞（図９Ｉ～図９Ｐ）の両方に対する細胞傷害活性を示す。ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭは、ＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭよりも効力が高いように見える。
図９Ａ～図９Ｐに示されるように、ＴＢＭは、複数の時点、Ｅ：Ｔ比及びエフェクターＴ細胞ドナーで、Ｎａｌｍ６標的細胞（図９Ａ～図９Ｈ）及びＫａｒｐａｓ４２２細胞（図９Ｉ～図９Ｐ）の両方に対する細胞傷害活性を示す。ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭは、ＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭよりも効力が高いように見える。
８．８．実施例８：種々のＣＤ３親和性を有するＴＢＭによるリダイレクトＴ細胞傷害性
ＣＤ３ ＡＢＭ（Ｂｉａｃｏｒｅによって測定される際にＣＤ３に対する親和性が１６ｎＭ、３０ｎＭ及び４８ｎＭである抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む）を有する実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）について、腫瘍標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を分析した。
ＣＤ３ ＡＢＭ（Ｂｉａｃｏｒｅによって測定される際にＣＤ３に対する親和性が１６ｎＭ、３０ｎＭ及び４８ｎＭである抗ＣＤ３抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む）を有する実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）について、腫瘍標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を分析した。
８．８．１．材料及び方法
一研究では、複数のドナーエフェクター細胞間でＴＢＭを比較した。簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり２，５００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ＃ＣＴＬ－ＵＰ１）から２ドナーからのＭＡＣＳネガティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＃１３０－０９６－５３５）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に３：１又は５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞をＴＢＭの段階希釈液又は対照とインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で２４、４８、７２又は９６時間インキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
一研究では、複数のドナーエフェクター細胞間でＴＢＭを比較した。簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり２，５００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ＃ＣＴＬ－ＵＰ１）から２ドナーからのＭＡＣＳネガティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＃１３０－０９６－５３５）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に３：１又は５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞をＴＢＭの段階希釈液又は対照とインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で２４、４８、７２又は９６時間インキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
８．８．２．結果
図１０Ａ～図１０Ｐに示されるように、ＴＢＭは、複数の時点、Ｅ：Ｔ比及びエフェクターＴ細胞ドナーで、Ｎａｌｍ６標的細胞（図１０Ａ～図１０Ｈ）及びＫａｒｐａｓ４２２（図１０Ｉ～図１０Ｐ）の両方に対する細胞傷害活性を示す。
図１０Ａ～図１０Ｐに示されるように、ＴＢＭは、複数の時点、Ｅ：Ｔ比及びエフェクターＴ細胞ドナーで、Ｎａｌｍ６標的細胞（図１０Ａ～図１０Ｈ）及びＫａｒｐａｓ４２２（図１０Ｉ～図１０Ｐ）の両方に対する細胞傷害活性を示す。
８．９．実施例９：ＢＢＭ及びＣＤ２に結合しないＴＢＭと比べたＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭのＲＴＣＣ活性
ＣＤ２結合アーム又は対照リゾチーム結合アームのいずれかを持つ実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）について、Ｎａｌｍ６又はＫａｒｐａｓ４２２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を比較した。この研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。ブリナツモマブは、ＣＤ１９及びＣＤ３の両方に結合するが、Ｆｃドメインを欠いている二重特異性Ｔ細胞会合体、すなわちＢｉＴＥである（例えば、米国特許第１０，１９１，０３４号明細書を参照されたい）。
ＣＤ２結合アーム又は対照リゾチーム結合アームのいずれかを持つ実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）について、Ｎａｌｍ６又はＫａｒｐａｓ４２２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を比較した。この研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。ブリナツモマブは、ＣＤ１９及びＣＤ３の両方に結合するが、Ｆｃドメインを欠いている二重特異性Ｔ細胞会合体、すなわちＢｉＴＥである（例えば、米国特許第１０，１９１，０３４号明細書を参照されたい）。
８．９．１．材料及び方法
複数のドナーエフェクター細胞間で精製ＴＢＭを比較した。簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり５，０００個の標的細胞を播いた。フィコール密度勾配遠心法によってｌｅｕｋｏｐａｋ（Ｈｅｍａｃａｒｅ ＃ＰＢ００１Ｆ－１）から分離した凍結保存ＰＢＭＣから２ドナーからのネガティブ選択（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃１７９５１）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離した。次に、精製したＴ細胞を３：１、１：１、１：３又は１：５の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞を全てのコンストラクトの段階希釈液及び対照とインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で４８、７２又は９６時間インキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
複数のドナーエフェクター細胞間で精製ＴＢＭを比較した。簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり５，０００個の標的細胞を播いた。フィコール密度勾配遠心法によってｌｅｕｋｏｐａｋ（Ｈｅｍａｃａｒｅ ＃ＰＢ００１Ｆ－１）から分離した凍結保存ＰＢＭＣから２ドナーからのネガティブ選択（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃１７９５１）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離した。次に、精製したＴ細胞を３：１、１：１、１：３又は１：５の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞を全てのコンストラクトの段階希釈液及び対照とインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で４８、７２又は９６時間インキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
８．９．２．結果
図１１Ａ～図１１Ｌに示されるように、両方のタイプのＴＢＭが、Ｎａｌｍ６標的細胞（図１１Ａ～図１１Ｈ）及びＫａｒｐａｓ４２２細胞（図１１Ｉ～図１１Ｌ）の両方に対する細胞傷害活性を示す。ＣＤ２結合アームを持つＴＢＭは、リゾチーム結合アームを有する対照ＴＢＭ及びブリナツモマブと比較して、特に低いＥ：Ｔ比で優れた細胞傷害活性を実証した。
図１１Ａ～図１１Ｌに示されるように、両方のタイプのＴＢＭが、Ｎａｌｍ６標的細胞（図１１Ａ～図１１Ｈ）及びＫａｒｐａｓ４２２細胞（図１１Ｉ～図１１Ｌ）の両方に対する細胞傷害活性を示す。ＣＤ２結合アームを持つＴＢＭは、リゾチーム結合アームを有する対照ＴＢＭ及びブリナツモマブと比較して、特に低いＥ：Ｔ比で優れた細胞傷害活性を実証した。
８．１０．実施例１０：サイトカイン放出アッセイ
実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）について、腫瘍標的細胞の存在下でサイトカインのＴ細胞媒介性デノボ分泌を誘導するその能力を分析した。
実施例１ＡのＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）について、腫瘍標的細胞の存在下でサイトカインのＴ細胞媒介性デノボ分泌を誘導するその能力を分析した。
８．１０．１．材料及び方法
簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６標的細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地に再懸濁した。平底９６ウェルプレートに１ウェル当たり２０，０００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣからＭＡＣＳネガティブ選択によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞を全てのコンストラクトの段階希釈液及び対照とインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、３００×ｇで５分間遠心することにより、続く分析のために上清を回収した。
簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６標的細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地に再懸濁した。平底９６ウェルプレートに１ウェル当たり２０，０００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣからＭＡＣＳネガティブ選択によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞を全てのコンストラクトの段階希釈液及び対照とインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間インキュベートした後、３００×ｇで５分間遠心することにより、続く分析のために上清を回収した。
Ｖ－ＰＬＥＸ炎症誘発性パネル１キット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＃Ｋ１５０４９Ｄ）を使用して、製造者の指示に従ってマルチプレックスＥＬＩＳＡを実施した。
８．１０．２．結果
図１２Ａ～図１２Ｃに示されるように、ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭの両方は、測定した全ての用量レベルでＴ細胞による有意なサイトカイン分泌を誘導する。これらの図は、それらが低い用量ほど有効であり得ることを示している。
図１２Ａ～図１２Ｃに示されるように、ＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭの両方は、測定した全ての用量レベルでＴ細胞による有意なサイトカイン分泌を誘導する。これらの図は、それらが低い用量ほど有効であり得ることを示している。
８．１１．実施例１１：ヒト及びｃｙｎｏ ＣＤ１９に対するＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭの結合
８．１１．１．材料及び方法
マウス細胞株３００．１９を操作して、ヒトＣＤ１９又はｃｙｎｏ ＣＤ１９のいずれかを過剰発現するようにした。細胞を１０％ＦＢＳ及び２－メルカプトエタノール含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）で培養した。細胞を回収し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）に再懸濁した。Ｖ字底９６ウェルプレートに１ウェル当たり５０，０００個の細胞を播いた。各細胞株を実施例１ＡのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）の段階希釈液と氷上で１時間インキュベートした。細胞を４００×ｇで４分間遠心し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。これを２回繰り返し、次に細胞をＡｌｅｘａ－６４７標識抗ヒトＦｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ ＃１０９－６０５－０９８）と氷上で３０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、次に１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏｆｌｅｘでＦＡＣＳデータを収集し、ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ ｖ２．３を用いて分析を実施した。
８．１１．１．材料及び方法
マウス細胞株３００．１９を操作して、ヒトＣＤ１９又はｃｙｎｏ ＣＤ１９のいずれかを過剰発現するようにした。細胞を１０％ＦＢＳ及び２－メルカプトエタノール含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）で培養した。細胞を回収し、ＦＡＣＳ緩衝液（１％ＦＢＳ含有ＰＢＳ）に再懸濁した。Ｖ字底９６ウェルプレートに１ウェル当たり５０，０００個の細胞を播いた。各細胞株を実施例１ＡのＴＢＭ（すなわちＲ変異型）の段階希釈液と氷上で１時間インキュベートした。細胞を４００×ｇで４分間遠心し、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。これを２回繰り返し、次に細胞をＡｌｅｘａ－６４７標識抗ヒトＦｃ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ ＃１０９－６０５－０９８）と氷上で３０分間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、次に１００μＬのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ ＣｙｔｏｆｌｅｘでＦＡＣＳデータを収集し、ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ ｖ２．３を用いて分析を実施した。
８．１１．２．結果
図１３Ａ～図１３Ｂに示されるように、ＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭは、ヒトＣＤ１９及びｃｙｎｏ ＣＤ１９の両方を過剰発現するように操作された細胞株に結合する。ＮＥＧ２５８は、ヒト及びｃｙｎｏの両方に等しく結合するように見える一方、ＮＥＧ２１８は、ヒトＣＤ１９よりもｃｙｎｏ ＣＤ１９に対する親和性が高いように見える。これら２つの中では、ＮＥＧ２５８の方が、ヒトＣＤ１９及びｃｙｎｏ ＣＤ１９のいずれに対する親和性も高いように見える。
図１３Ａ～図１３Ｂに示されるように、ＮＥＧ２５８ベース及びＮＥＧ２１８ベースのＴＢＭは、ヒトＣＤ１９及びｃｙｎｏ ＣＤ１９の両方を過剰発現するように操作された細胞株に結合する。ＮＥＧ２５８は、ヒト及びｃｙｎｏの両方に等しく結合するように見える一方、ＮＥＧ２１８は、ヒトＣＤ１９よりもｃｙｎｏ ＣＤ１９に対する親和性が高いように見える。これら２つの中では、ＮＥＧ２５８の方が、ヒトＣＤ１９及びｃｙｎｏ ＣＤ１９のいずれに対する親和性も高いように見える。
８．１２．実施例１２：安定性を改善するためのＣＤ５８の操作
８．１２．１．背景
ヒトＣＤ５８は、２９アミノ酸のシグナルペプチドと２つのＩｇ様ドメインとを含む。ドメイン１と呼ばれる最もＮ末端側のＩｇ様ドメインは、抗体の可変領域に似たＶ型であり、ドメイン２という名前の第２のドメインはＣ型で、抗体の定常領域に似ている。ＣＤ５８ドメイン構造の概略図を図１４に示す。
８．１２．１．背景
ヒトＣＤ５８は、２９アミノ酸のシグナルペプチドと２つのＩｇ様ドメインとを含む。ドメイン１と呼ばれる最もＮ末端側のＩｇ様ドメインは、抗体の可変領域に似たＶ型であり、ドメイン２という名前の第２のドメインはＣ型で、抗体の定常領域に似ている。ＣＤ５８ドメイン構造の概略図を図１４に示す。
実施例１～１１に示されるとおり、ＣＤ２と相互作用するＣＤ５８のドメイン１は、多重特異性結合分子中の抗ＣＤ２抗体結合フラグメントの代わりに使用することができる。抗ＣＤ２結合アームでなく、むしろＣＤ５８結合アームを使用すると、標的細胞が存在しない場合の非特異的免疫活性化が減少する。しかしながら、ＣＤ５８は免疫グロブリンと比べて低い安定性を呈する。
ヒトＣＤ５８ドメイン１の安定性を改善するため、発現時にジスルフィド架橋を形成して分子を安定化させる一対のシステインを含むようにタンパク質を操作した。
４つの異なるアミノ酸対：（１）Ｖ４５及びＭ１０５、（２）Ｖ４５及びＭ１１４、（３）Ｖ５４及びＧ８８及び（４）Ｗ５６及びＬ９０をシステインに置き換える操作を行った。
８．１２．２．材料及び方法
８．１２．２．１．組換え発現
結合及び生物物理学的特徴を評価するため、ＣＤ５８ジスルフィド変異型をＣＤ２細胞外ドメインと共にＨＥＫ２９３細胞から一過性に産生させて、精製した。プラスミドは、全て哺乳類発現のためにコドン最適化した。Ｃ末端Ａｖｉタグ及びＮ末端８ｘｈｉｓタグ（配列番号７６９）と、それに続いて精製後にｈｉｓタグを切断するためのＥＶＮＬＹＦＱＳ配列（配列番号７７０）を含むヒト及びｃｙｎｏ ＣＤ２コンストラクトを作製した。ＢｉｒＡ酵素をコードするプラスミドをコトランスフェクトすることにより、発現時にＣＤ２コンストラクトを部位選択的にビオチン化した。ＣＤ５８はＣ末端８ｘｈｉｓタグ（配列番号７６９）と共に発現した。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞における一過性発現及び精製は、標準方法で実施した。配列を表２１に示す。
８．１２．２．１．組換え発現
結合及び生物物理学的特徴を評価するため、ＣＤ５８ジスルフィド変異型をＣＤ２細胞外ドメインと共にＨＥＫ２９３細胞から一過性に産生させて、精製した。プラスミドは、全て哺乳類発現のためにコドン最適化した。Ｃ末端Ａｖｉタグ及びＮ末端８ｘｈｉｓタグ（配列番号７６９）と、それに続いて精製後にｈｉｓタグを切断するためのＥＶＮＬＹＦＱＳ配列（配列番号７７０）を含むヒト及びｃｙｎｏ ＣＤ２コンストラクトを作製した。ＢｉｒＡ酵素をコードするプラスミドをコトランスフェクトすることにより、発現時にＣＤ２コンストラクトを部位選択的にビオチン化した。ＣＤ５８はＣ末端８ｘｈｉｓタグ（配列番号７６９）と共に発現した。ＨＥＫ２９３Ｆ細胞における一過性発現及び精製は、標準方法で実施した。配列を表２１に示す。
発現のため、ＰＥＩをトランスフェクション試薬として使用してトランスフェクションを実施した。小規模（５Ｌ未満）のトランスフェクションについて、細胞は、８％ＣＯ２）の加湿したインキュベーター（８５％）内にあるオービタルシェーカー（１００ｒｐｍ）上の振盪フラスコで成長させた。トランスフェクションは１ＤＮＡ：３ＰＥＩ比で行った。Ｅｘｐｉ２９３培地中２００万細胞／ｍＬのトランスフェクションに１ｍｇ／Ｌのプラスミド培養物を使用した。５日間発現させた後、培養物を遠心し、ろ過した。１ｍｌ樹脂／１００ｍＬ上清を使用して、ニッケル－ＮＴＡバッチ結合法による精製を実施した。タンパク質を最低２時間、穏やかに混合しながら結合させて、その混合物を重力ろ過カラムにロードした。樹脂を３０ＣＶのＰＢＳで洗浄した。タンパク質をイミダゾールで溶出させた。溶出したタンパク質を濃縮し、最後に分取サイズ排除クロマトグラフィー（Ｈｉ Ｌｏａｄ １６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ７５グレードカラム、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）によって精製した。発現したタンパク質のアイデンティティが一次アミノ酸配列の予測質量と一致することを確認するため、高速液体クロマトグラフィーと質量分析との組み合わせによってタンパク質を分析した。
８．１２．２．２．安定性
ジスルフィド安定化変異型について、標準技法を用いた示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）及び示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）の両方を用いて熱安定性の改善を評価した。ＤＳＦについて、１～３ｕｇの各コンストラクトを２５ｕｌ総容積で９６ウェルＰＣＲプレート内の１×Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）に加えた。Ｃ１０００サーマルサイクラーを備えたＢｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ９６ ＲＴ－ＰＣＲシステムを使用して、温度を２５℃から９５℃に０．５℃／分で上昇させて、蛍光をモニタした。製造者により供給されるソフトウェアを使用してＴｍを決定した。
ジスルフィド安定化変異型について、標準技法を用いた示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）及び示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）の両方を用いて熱安定性の改善を評価した。ＤＳＦについて、１～３ｕｇの各コンストラクトを２５ｕｌ総容積で９６ウェルＰＣＲプレート内の１×Ｓｙｐｒｏ Ｏｒａｎｇｅ（Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ）に加えた。Ｃ１０００サーマルサイクラーを備えたＢｉｏ－Ｒａｄ ＣＦＸ９６ ＲＴ－ＰＣＲシステムを使用して、温度を２５℃から９５℃に０．５℃／分で上昇させて、蛍光をモニタした。製造者により供給されるソフトウェアを使用してＴｍを決定した。
ＤＳＣについて、全ての試料をＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）に透析し、０．５ｍｇ／ｍＬの最終濃度に希釈した。ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－キャピラリーＤＳＣシステム（Ｍａｌｖｅｒｎ）を使用して、ろ過時間２秒及び中程度のゲイン設定で温度を２５℃から１００℃に１℃／分で上昇させることによりＴｍ及びＴｏｎｓｅｔを決定した。
８．１２．２．３．結合親和性
安定化ジスルフィドという変化を加えたことによっても結合親和性が損なわれず保たれていることを確かめるため、得られた組換えＣＤ５８タンパク質に関して等温熱量測定法（ＩＴＣ）を実施して、組換えヒトＣＤ２に対するその見かけのＫＤ及び結合化学量論（ｎ）を決定した。
安定化ジスルフィドという変化を加えたことによっても結合親和性が損なわれず保たれていることを確かめるため、得られた組換えＣＤ５８タンパク質に関して等温熱量測定法（ＩＴＣ）を実施して、組換えヒトＣＤ２に対するその見かけのＫＤ及び結合化学量論（ｎ）を決定した。
簡潔に言えば、組換えヒトＣＤ２及び組換えヒトＣＤ５８変異型をＨＥＰＥＳ緩衝生理食塩水（ＨＢＳ）に透析した。ＣＤ２を１００μＭの最終濃度に希釈し、ＣＤ５８変異型を１０μＭに希釈した。ＣＤ２を複数回の注入によって１０μＭのＣＤ５８変異型に対して滴定し、ＭｉｃｒｏＣａｌ ＶＰ－ＩＴＣ等温滴定熱量計（Ｍａｌｖｅｒｎ）を使用してΔＨ（ｋｃａｌ／モル）を決定した。ＨＢＳに対するＣＤ２の滴定を基準として用いて、得られたデータからＫＤ及びｎを決定した。
８．１２．３．結果
これらのコンストラクトについてのＤＳＦ及びＤＳＣの両方の測定結果を以下の表２２に示す。
これらのコンストラクトについてのＤＳＦ及びＤＳＣの両方の測定結果を以下の表２２に示す。
親和性試験の結果が以下の表２３に示される。安定化ジスルフィドの付加は、親和性又は結合化学量論に対する有害な影響を有しなかった。
８．１３．実施例１３：ノブ・イントゥ・ホールフォーマットの抗ＣＤ３－抗ＣＤ１９－ＣＤ５８ ＩｇＧ１ ＴＢＭの作製
８．１３．１．材料及び方法
コンストラクトを合成し、哺乳類細胞での発現のためにコドン最適化した。各三重特異性コンストラクトにつき、３つのプラスミドを合成した。抗ＣＤ１９重鎖をコードする第１のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）定常ｈＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインに融合されたＶＨドメイン、（ｉｉ）リンカー、（ｉｉｉ）抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、（ｉｖ）第２のリンカー及び（ｖ）ヘテロ二量体化を促進するホールのための突然変異並びにサイレンシング突然変異を含むｈＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む融合体として合成した。軽鎖をコードする第２のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）抗ＣＤ１９ ＶＬドメイン及び（ｉｉ）定常ヒトκ配列を含む融合体として合成した。第２の半抗体をコードする第３のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）ヘテロ二量体化を促進するノブのための突然変異並びにサイレンシング突然変異を含む定常ｈＩｇＧ１ドメインに融合されたＣＤ５８ジスルフィド安定化変異型を含む融合体として合成した。これらの配列を表２４に示す。
８．１３．１．材料及び方法
コンストラクトを合成し、哺乳類細胞での発現のためにコドン最適化した。各三重特異性コンストラクトにつき、３つのプラスミドを合成した。抗ＣＤ１９重鎖をコードする第１のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）（ｉ）定常ｈＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインに融合されたＶＨドメイン、（ｉｉ）リンカー、（ｉｉｉ）抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ、（ｉｖ）第２のリンカー及び（ｖ）ヘテロ二量体化を促進するホールのための突然変異並びにサイレンシング突然変異を含むｈＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む融合体として合成した。軽鎖をコードする第２のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）抗ＣＤ１９ ＶＬドメイン及び（ｉｉ）定常ヒトκ配列を含む融合体として合成した。第２の半抗体をコードする第３のプラスミドは、（Ｎ末端からＣ末端の向きに）ヘテロ二量体化を促進するノブのための突然変異並びにサイレンシング突然変異を含む定常ｈＩｇＧ１ドメインに融合されたＣＤ５８ジスルフィド安定化変異型を含む融合体として合成した。これらの配列を表２４に示す。
それぞれの鎖をＨＥＫ２９３細胞にコトランスフェクトすることにより、三重特異性結合分子を一過性に発現させた。
簡潔に言えば、ＰＥＩをトランスフェクション試薬として使用してトランスフェクションを実施した。小規模（５Ｌ未満）のトランスフェクションについて、細胞は、５％ＣＯ２）の加湿したインキュベーター（８５％）内にあるオービタルシェーカー（１１５ｒｐｍ）上の振盪フラスコで成長させた。プラスミドをＰＥＩと１ＤＮＡ：３ＰＥＩの最終比で組み合わせた。２００万細胞／血清培地１ｍＬのトランスフェクションに１ｍｇ／Ｌのプラスミド培養物を使用した。５日間発現させた後、遠心及びろ過によって培地を清澄化することにより、ＴＢＭを回収した。抗ＣＨ１アフィニティーバッチ結合（ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ－ＣＨ１アフィニティーマトリックス、Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，米国）又はプロテインＡ（ｒＰｒｏｔｅｉｎＡ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ、Ｆａｓｔ ｆｌｏｗ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）バッチ結合により、１ｍｌ樹脂／１００ｍＬ上清を用いて精製を実施した。タンパク質を最低でも２時間、穏やかに混合しながら結合させておき、上清を重力ろ過カラムにロードした。樹脂を２０～５０ＣＶのＰＢＳで洗浄した。２０ＣＶの５０ｍＭクエン酸塩、９０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．２、５０ｍＭスクロースでＴＢＭを溶出させて、溶出したＴＢＭを１Ｍクエン酸ナトリウム ５０ｍＭスクロースでｐＨ５．５に調整した。凝集体が存在する場合、最終仕上げ段階としてＨｉ Ｌｏａｄ １６／６０ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００グレードカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｕｐｐｓａｌａ，スウェーデン）を使用して分取サイズ排除クロマトグラフィーを実施した。発現したＴＢＭのタンパク質のアイデンティティが一次アミノ酸配列の予測質量と一致することを確認するため、高速液体クロマトグラフィーと質量分析との組み合わせによってタンパク質を分析した。
８．１３．２．結果
以下の表２５に示されるとおり、安定化ジスルフィド変異型を含めても、精製時に凝集体含有量が増加するという全体的な発現収率への悪影響が及ぶことはなかった。
以下の表２５に示されるとおり、安定化ジスルフィド変異型を含めても、精製時に凝集体含有量が増加するという全体的な発現収率への悪影響が及ぶことはなかった。
８．１４．実施例１４：ＣＤ５８変異型を含むＴＢＭによるリダイレクトＴ細胞傷害性
変異型ＣＤ５８ドメインを含む実施例１３のＴＢＭについて、腫瘍標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を分析した。
変異型ＣＤ５８ドメインを含む実施例１３のＴＢＭについて、腫瘍標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を分析した。
８．１４．１．材料及び方法
簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底９６ウェルプレートに１ウェル当たり１０，０００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ＃ＣＴＬ－ＵＰ１）から２ドナーからのＭＡＣＳネガティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＃１３０－０９６－５３５）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞を全てのコンストラクトの段階希釈液及び対照とインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間又は４８時間のいずれかにわたってインキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
簡潔に言えば、ｈｕＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底９６ウェルプレートに１ウェル当たり１０，０００個の標的細胞を播いた。凍結保存したＰＢＭＣ（Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ＃ＣＴＬ－ＵＰ１）から２ドナーからのＭＡＣＳネガティブ選択（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＃１３０－０９６－５３５）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離し、次に５：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。共培養細胞を全てのコンストラクトの段階希釈液及び対照とインキュベートした。正規化に関して、平均発光最大値とは、エフェクター細胞とコインキュベートした、しかしいかなる試験コンストラクトも含まなかった標的細胞を指す。３７℃、５％ＣＯ２で２４時間又は４８時間のいずれかにわたってインキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解率は、以下の式を用いて計算した：特異的溶解率（％）＝（１－（試料の発光／平均発光最大値））×１００
８．１４．２．結果
図１５に示されるように、変異型ＣＤ５８ドメインを含むＴＢＭは、野生型ＣＤ５８を有するＴＢＭと同等の細胞傷害活性を示す。
図１５に示されるように、変異型ＣＤ５８ドメインを含むＴＢＭは、野生型ＣＤ５８を有するＴＢＭと同等の細胞傷害活性を示す。
８．１５．実施例１５：ＣＤ５８変異型を含むＴＢＭによるＴ細胞活性化
初代Ｔ細胞活性化の代替として、ジャーカット－ＮＦＡＴレポーター細胞株を使用して、変異型ＣＤ５８ドメインを含む実施例１３のＴＢＭの機能活性を評価した。
初代Ｔ細胞活性化の代替として、ジャーカット－ＮＦＡＴレポーター細胞株を使用して、変異型ＣＤ５８ドメインを含む実施例１３のＴＢＭの機能活性を評価した。
８．１５．１．材料及び方法
ジャーカットＴ細胞株（Ｅ６－１）にＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターコンストラクトをトランスフェクトし、更なる特徴付けのため、ＰＭＡ及びイオノマイシン刺激後のＮＦＡＴレポーターの強力な誘導に基づき、ＮＦＡＴ－ＬＵＣレポーターを有する安定クローン細胞株ジャーカット細胞（ＪＮＬ）を選択した。
ジャーカットＴ細胞株（Ｅ６－１）にＮＦＡＴ－ルシフェラーゼレポーターコンストラクトをトランスフェクトし、更なる特徴付けのため、ＰＭＡ及びイオノマイシン刺激後のＮＦＡＴレポーターの強力な誘導に基づき、ＮＦＡＴ－ＬＵＣレポーターを有する安定クローン細胞株ジャーカット細胞（ＪＮＬ）を選択した。
ＮＦＡＴの非特異的活性化の決定には、ジャーカットレポーター細胞株を使用した。
精製したＴＢＭについて、標的細胞の非存在下でＮＦＡＴ活性化を誘導するその潜在的能力を試験した。
２ｍＭグルタミン及び１０％ウシ胎仔血清を０．５ｕｇ／ｍｌのピューロマイシンと共に含有するＲＰＭＩ－１６４０培地で、ＮＦＡＴ－ＬＵＣレポーターを有するジャーカット細胞（ＪＮＬ）を成長させた。平底９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００，０００個のＪＮＬ細胞を播き、ＴＢＭの段階希釈液及び対照と共にインキュベートした。３７℃、５％ＣＯ２で６時間インキュベートした後、プレートにＯｎｅＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ６１２０）を加えた。１０分間のインキュベーション後にＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。
８．１５．２．結果
図１６に示されるように、変異型ＣＤ５８ドメインを含むＴＢＭは、野生型ＣＤ５８を含むＴＢＭと同等であるか又はそれより低い腫瘍非依存的（すなわち非標的細胞特異的）活性化レベルを示す。
図１６に示されるように、変異型ＣＤ５８ドメインを含むＴＢＭは、野生型ＣＤ５８を含むＴＢＭと同等であるか又はそれより低い腫瘍非依存的（すなわち非標的細胞特異的）活性化レベルを示す。
８．１６．実施例１６：様々な細胞株のＣＤ１９及びＣＤ５８発現
８．１６．１．材料及び方法
ＯＣＩ－ＬＹ－１９（ヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株）、Ｋａｒｐａｓ－４２２（ヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株）、Ｔｏｌｅｄｏ（ヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株）及びＮａｌｍ－６（Ｂ細胞前駆体白血病細胞株）細胞株におけるＣＤ１９及びＣＤ５８の細胞表面発現を、ＡＰＣ標識抗ＣＤ１９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２２１２）及びＡＰＣ標識抗ＣＤ５８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３３０９１８）及びそれぞれのアイソタイプ対照抗体を使用してフローサイトメトリーにより決定した。試料をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにかけ、ＦｌｏｗＪｏを使用して分析した。
８．１６．１．材料及び方法
ＯＣＩ－ＬＹ－１９（ヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株）、Ｋａｒｐａｓ－４２２（ヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株）、Ｔｏｌｅｄｏ（ヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫細胞株）及びＮａｌｍ－６（Ｂ細胞前駆体白血病細胞株）細胞株におけるＣＤ１９及びＣＤ５８の細胞表面発現を、ＡＰＣ標識抗ＣＤ１９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２２１２）及びＡＰＣ標識抗ＣＤ５８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３３０９１８）及びそれぞれのアイソタイプ対照抗体を使用してフローサイトメトリーにより決定した。試料をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにかけ、ＦｌｏｗＪｏを使用して分析した。
８．１６．２．結果
これらの細胞株は種々のレベルのＣＤ１９及びＣＤ５８発現を有する（図１７Ａ～図１７Ｈ）。細胞株間でのＣＤ１９発現の順位は、ＯＣＩ－ＬＹ－１９＞Ｋａｒｐａｓ ４２２＞Ｔｏｌｅｄｏ＝Ｎａｌｍ－６であった。ＣＤ５８発現の順位は、ＯＣＩ－ＬＹ－１９＞Ｎａｌｍ－６＞Ｋａｒｐａｓ＝Ｔｏｌｅｄｏであった。
これらの細胞株は種々のレベルのＣＤ１９及びＣＤ５８発現を有する（図１７Ａ～図１７Ｈ）。細胞株間でのＣＤ１９発現の順位は、ＯＣＩ－ＬＹ－１９＞Ｋａｒｐａｓ ４２２＞Ｔｏｌｅｄｏ＝Ｎａｌｍ－６であった。ＣＤ５８発現の順位は、ＯＣＩ－ＬＹ－１９＞Ｎａｌｍ－６＞Ｋａｒｐａｓ＝Ｔｏｌｅｄｏであった。
８．１７．実施例１７：ＣＤ２に結合しないワンアームＢＢＭ及びＣＤ１９に結合しないＴＢＭと比べたＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭのＲＴＣＣ及びサイトカイン分泌活性
Ｋａｒｐａｓ４２２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力に関して、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）を比較した。
Ｋａｒｐａｓ４２２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力に関して、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）を比較した。
８．１７．１．材料及び方法
実施例９に記載される材料及び方法に従い、ただし最終Ｅ：Ｔ比は１：１とし、インキュベーションは９６時間として、ｈｕＣＤ１９を発現するＫａｒｐａｓ４２２標的細胞によるＲＴＣＣアッセイを実施した。
実施例９に記載される材料及び方法に従い、ただし最終Ｅ：Ｔ比は１：１とし、インキュベーションは９６時間として、ｈｕＣＤ１９を発現するＫａｒｐａｓ４２２標的細胞によるＲＴＣＣアッセイを実施した。
８．１７．２．結果
図１８Ａ～図１８Ｂに示されるように、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１は、Ｋａｒｐａｓ４２２標的細胞に対する細胞傷害活性を示し、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が最も高い細胞傷害活性を有する。
図１８Ａ～図１８Ｂに示されるように、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１は、Ｋａｒｐａｓ４２２標的細胞に対する細胞傷害活性を示し、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が最も高い細胞傷害活性を有する。
８．１８．実施例１８：サイトカイン放出アッセイ
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）について、Ｋａｒｐａｓ４２２細胞の存在下でサイトカインのＴ細胞媒介性デノボ分泌を誘導するその能力を分析した。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）について、Ｋａｒｐａｓ４２２細胞の存在下でサイトカインのＴ細胞媒介性デノボ分泌を誘導するその能力を分析した。
８．１８．１．材料及び方法
実施例１０にあるように、ただしＫａｒｐａｓ４２２細胞で最終Ｅ：Ｔ比を１：１とし、及びインキュベーションを４８時間としてサイトカイン放出アッセイを実施した。
実施例１０にあるように、ただしＫａｒｐａｓ４２２細胞で最終Ｅ：Ｔ比を１：１とし、及びインキュベーションを４８時間としてサイトカイン放出アッセイを実施した。
８．１８．２．結果
図１９Ａ～図１９Ｆに示されるように、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１は、Ｔ細胞によるサイトカイン分泌を誘導し、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が最も高いレベルのサイトカイン分泌を誘導し、その後にＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１が続き、これはＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１と同程度であった。
図１９Ａ～図１９Ｆに示されるように、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１は、Ｔ細胞によるサイトカイン分泌を誘導し、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が最も高いレベルのサイトカイン分泌を誘導し、その後にＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１が続き、これはＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１と同程度であった。
８．１９．実施例１９：Ｔ細胞に対するＴＢＭ及びＢＢＭ結合
Ｔ細胞に対するＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）の結合を、フローサイトメトリーを用いて評価した。
Ｔ細胞に対するＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）の結合を、フローサイトメトリーを用いて評価した。
８．１９．１．材料及び方法
２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナー（Ｈｅｍａｃａｒｅ）からの予め単離し、凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、汎Ｔ細胞単離キット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５）を製造者のプロトコルに従って使用してネガティブ選択によって汎Ｔ細胞を単離した。Ｔ細胞をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、９６ウェル丸底プレートの各ウェルに１００，０００個の細胞を加えた。３３μｇ／ｍｌ～０．００５μｇ／ｍｌの範囲のＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃの希釈系列を細胞に加え、氷上で１時間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、１００μｌの抗ヒトＩｇＧ二次抗体に再懸濁し、氷上で更に１時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を２回洗浄し、１００μｌの固定可能生死判別色素に再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートした。再び２回洗浄した後、細胞を１２０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。次に細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにかけて、ＦｌｏｗＪｏを使用してデータを分析することにより抗ヒトＩｇＧ二次抗体のＭＦＩを決定し、それを抗体濃度に対してプロットした。
２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナー（Ｈｅｍａｃａｒｅ）からの予め単離し、凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、汎Ｔ細胞単離キット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５）を製造者のプロトコルに従って使用してネガティブ選択によって汎Ｔ細胞を単離した。Ｔ細胞をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁し、９６ウェル丸底プレートの各ウェルに１００，０００個の細胞を加えた。３３μｇ／ｍｌ～０．００５μｇ／ｍｌの範囲のＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃの希釈系列を細胞に加え、氷上で１時間インキュベートした。細胞を２回洗浄し、１００μｌの抗ヒトＩｇＧ二次抗体に再懸濁し、氷上で更に１時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を２回洗浄し、１００μｌの固定可能生死判別色素に再懸濁し、氷上で３０分間インキュベートした。再び２回洗浄した後、細胞を１２０μｌのＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁した。次に細胞をＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａにかけて、ＦｌｏｗＪｏを使用してデータを分析することにより抗ヒトＩｇＧ二次抗体のＭＦＩを決定し、それを抗体濃度に対してプロットした。
８．１９．２．結果
全ての抗体が、Ｔ細胞に対して様々な程度の結合を示した（図２０）。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が最も強力な結合剤であり、続いてＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１であり、ＢＳＰ１が最も弱い結合剤であった。理論によって拘束されるものではないが、ＴＢＭの結合の改善は、ＣＤ２アームとＣＤ３アームとの同時会合によってＴ細胞に対する結合アビディティが増加することによるものであり得ると考えられる。
全ての抗体が、Ｔ細胞に対して様々な程度の結合を示した（図２０）。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が最も強力な結合剤であり、続いてＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１であり、ＢＳＰ１が最も弱い結合剤であった。理論によって拘束されるものではないが、ＴＢＭの結合の改善は、ＣＤ２アームとＣＤ３アームとの同時会合によってＴ細胞に対する結合アビディティが増加することによるものであり得ると考えられる。
８．２０．実施例２０：ＴＢＭ及びＢＢＭ媒介性Ｔ細胞増殖
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）並びにブリナツモマブについて、ＣＤ１９を発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９、Ｋａｒｐａｓ４２２及びＴｏｌｅｄｏ標的細胞との共培養時にＴ細胞増殖を誘導するその能力を評価した。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）並びにブリナツモマブについて、ＣＤ１９を発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９、Ｋａｒｐａｓ４２２及びＴｏｌｅｄｏ標的細胞との共培養時にＴ細胞増殖を誘導するその能力を評価した。
８．２０．１．材料及び方法
簡潔に言えば、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９、Ｋａｒｐａｓ４２２及びＴｏｌｅｄｏ標的細胞を９６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）（ＲＰＭＩ－１６４０、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１８７５－０８５）、１０％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ、カタログ番号１５００－５００）、１％Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２５８３０－０８１）、１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１４０－０５０）、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５０７００６３）、１％ＨＥＰＥＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５６３００８０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１３６０－０７０）、０．１％β－メルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１９８５－０２３）］に播いた。予め単離し、凍結保存しておいた２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナーからのＰＢＭＣを解凍し、汎Ｔ細胞を単離した（先述のとおり）。単離されたＴ細胞を５μＭ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｃ３４５５７）で製造者のプロトコルに従って標識し、標的細胞と１：３のＥ：Ｔ比で共培養した。２．５ｎＭ～０．０００６ｎＭの範囲のＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ及びブリナツモマブの希釈系列を細胞に加え、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーターでプレートを９６時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を回収し、ヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２）で処理し、固定可能生死判別色素ｅＦｌｏｕｒ ７８０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５－０８６５－１４）で染色し、続いてＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５コンジュゲート抗ヒトＣＤ３ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３３６）で染色した。染色ステップは、全て製造者のプロトコルに従って実施した。ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してフロー分析を実施することにより、ＣＤ３染色及びＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素の希釈度に基づいて％増殖ＣＤ３＋ Ｔ細胞を決定した。
簡潔に言えば、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９、Ｋａｒｐａｓ４２２及びＴｏｌｅｄｏ標的細胞を９６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）（ＲＰＭＩ－１６４０、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１８７５－０８５）、１０％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ、カタログ番号１５００－５００）、１％Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２５８３０－０８１）、１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１４０－０５０）、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５０７００６３）、１％ＨＥＰＥＳ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５６３００８０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１３６０－０７０）、０．１％β－メルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１９８５－０２３）］に播いた。予め単離し、凍結保存しておいた２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナーからのＰＢＭＣを解凍し、汎Ｔ細胞を単離した（先述のとおり）。単離されたＴ細胞を５μＭ Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣＴＶ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｃ３４５５７）で製造者のプロトコルに従って標識し、標的細胞と１：３のＥ：Ｔ比で共培養した。２．５ｎＭ～０．０００６ｎＭの範囲のＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ及びブリナツモマブの希釈系列を細胞に加え、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーターでプレートを９６時間インキュベートした。インキュベーション後、細胞を回収し、ヒトＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２２３０２）で処理し、固定可能生死判別色素ｅＦｌｏｕｒ ７８０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号６５－０８６５－１４）で染色し、続いてＰｅｒＣＰ－Ｃｙ５．５コンジュゲート抗ヒトＣＤ３ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３３６）で染色した。染色ステップは、全て製造者のプロトコルに従って実施した。ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してフロー分析を実施することにより、ＣＤ３染色及びＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ色素の希釈度に基づいて％増殖ＣＤ３＋ Ｔ細胞を決定した。
８．２０．２．結果
全てのＣＤ１９標的化抗体が、種々のＣＤ１９発現標的細胞株との共培養時にＴ細胞の増殖を誘導した（図２１Ａ～図２１Ｃ）。Ｔ細胞増殖効果は用量依存的であり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１よりも強力な活性を示した。対照抗体はいかなるＴ細胞増殖も誘導しなかったことから、Ｔ細胞の増殖にはＣＤ１９標的特異的会合が必要であったことが指摘される。ブリナツモマブは、ＯＣＩ－ＬＹ－１９及びＴｏｌｅｄｏ細胞の存在下で最も強力なＴ細胞増殖を媒介した。Ｋａｒｐａｓ４２０の存在下では、増殖したＴ細胞の割合が最大であることによって示されるとおり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が一層有効にＴ細胞増殖を誘導した。
全てのＣＤ１９標的化抗体が、種々のＣＤ１９発現標的細胞株との共培養時にＴ細胞の増殖を誘導した（図２１Ａ～図２１Ｃ）。Ｔ細胞増殖効果は用量依存的であり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１よりも強力な活性を示した。対照抗体はいかなるＴ細胞増殖も誘導しなかったことから、Ｔ細胞の増殖にはＣＤ１９標的特異的会合が必要であったことが指摘される。ブリナツモマブは、ＯＣＩ－ＬＹ－１９及びＴｏｌｅｄｏ細胞の存在下で最も強力なＴ細胞増殖を媒介した。Ｋａｒｐａｓ４２０の存在下では、増殖したＴ細胞の割合が最大であることによって示されるとおり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１が一層有効にＴ細胞増殖を誘導した。
８．２１．実施例２１：ＢＢＭ及びブリナツモマブと比べた種々のＣＤ３親和性を有するＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭのＲＴＣＣ活性
種々の親和性のＣＤ３結合アームを持つＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型））及びＢＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｈ変異型））について、Ｋａｒｐａｓ４２２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を比較した。本研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。
種々の親和性のＣＤ３結合アームを持つＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型））及びＢＢＭ（ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｈ変異型））について、Ｋａｒｐａｓ４２２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を比較した。本研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。
８．２１．１．材料及び方法
実施例９に記載される材料及び方法に従い、ただし最終Ｅ：Ｔ比は１：１とし、インキュベーションは９６時間として、ｈｕＣＤ１９を発現するＫａｒｐａｓ４２２標的細胞によるＲＴＣＣアッセイを実施した。
実施例９に記載される材料及び方法に従い、ただし最終Ｅ：Ｔ比は１：１とし、インキュベーションは９６時間として、ｈｕＣＤ１９を発現するＫａｒｐａｓ４２２標的細胞によるＲＴＣＣアッセイを実施した。
８．２１．２．結果
図２２Ａ～図２２Ｂに示されるように、両方のタイプのＴＢＭが、Ｋａｒｐａｓ４２２細胞に対する細胞傷害活性を示す。ＴＢＭは、ＢＢＭと比較して優れた細胞傷害活性を実証した。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ブリナツモマブと比較して同程度の又は優れた細胞傷害活性を示した。
図２２Ａ～図２２Ｂに示されるように、両方のタイプのＴＢＭが、Ｋａｒｐａｓ４２２細胞に対する細胞傷害活性を示す。ＴＢＭは、ＢＢＭと比較して優れた細胞傷害活性を実証した。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ブリナツモマブと比較して同程度の又は優れた細胞傷害活性を示した。
８．２２．実施例２２：ＣＤ１９に結合しないＢＢＭ及びＴＢＭと比べた種々のＣＤ３親和性のＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭの複数のＢ細胞リンパ腫細胞株に対するＲＴＣＣ活性
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）について、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６、Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を比較した。Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６細胞は、ｈＣＤ１９抗原を発現する。ｈＣＤ１９発現を欠くＮａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞を使用して、標的非依存性死滅を評価した。本研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）について、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６、Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞のＴ細胞媒介性アポトーシスを誘導するその潜在的能力を比較した。Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６細胞は、ｈＣＤ１９抗原を発現する。ｈＣＤ１９発現を欠くＮａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞を使用して、標的非依存性死滅を評価した。本研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。
８．２２．１．材料及び方法
Ｎａｌｍ６親細胞株からＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳ９技術を用いてＮａｌｍ６ ＫＯを作成し、ｈＣＤ１９発現を欠いていることを確認した。Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６、Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。実施例９に記載される材料及び方法に従い、ただし最終Ｅ：Ｔ比は１：１とし、インキュベーションは４８時間として、種々の細胞株でＲＴＣＣアッセイを実施した。
Ｎａｌｍ６親細胞株からＣＲＩＳＰＲ－ＣＡＳ９技術を用いてＮａｌｍ６ ＫＯを作成し、ｈＣＤ１９発現を欠いていることを確認した。Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６、Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞を操作して、ホタルルシフェラーゼを過剰発現するようにした。実施例９に記載される材料及び方法に従い、ただし最終Ｅ：Ｔ比は１：１とし、インキュベーションは４８時間として、種々の細胞株でＲＴＣＣアッセイを実施した。
８．２２．２．結果
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１は、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ及びＮａｌｍ６に対して細胞傷害活性を示したが、抗原陰性Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２に対しては最小限の活性のみを示した（図２３Ａ～図２３Ｊ）。ＴＢＭは、ＢＢＭと比較して優れた細胞傷害活性を実証した。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ブリナツモマブと同等の細胞傷害活性を示した。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１は、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ及びＮａｌｍ６に対して細胞傷害活性を示したが、抗原陰性Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２に対しては最小限の活性のみを示した（図２３Ａ～図２３Ｊ）。ＴＢＭは、ＢＢＭと比較して優れた細胞傷害活性を実証した。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ブリナツモマブと同等の細胞傷害活性を示した。
８．２３．実施例２３：ＣＤ１９に結合しないＢＢＭ及びＴＢＭと比べた種々のＣＤ３親和性を有するＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭの複数のＢ細胞リンパ腫細胞株に対するサイトカイン放出アッセイ
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）について、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６、Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞においてサイトカインのＴ細胞媒介性デノボ分泌を誘導するその潜在的能力を比較した。Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６細胞は、ｈＣＤ１９抗原を発現する。ｈＣＤ１９発現を欠くＮａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞を使用して、標的非依存性サイトカイン放出を評価した。本研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（Ｈ変異型）について、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６、Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞においてサイトカインのＴ細胞媒介性デノボ分泌を誘導するその潜在的能力を比較した。Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ、Ｎａｌｍ６細胞は、ｈＣＤ１９抗原を発現する。ｈＣＤ１９発現を欠くＮａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２標的細胞を使用して、標的非依存性サイトカイン放出を評価した。本研究には、対照としてブリナツモマブも含めた。
８．２３．１．材料及び方法
標的細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり５，０００個の標的細胞を播いた。フィコール密度勾配遠心法によってｌｅｕｋｏｐａｋ（Ｈｅｍａｃａｒｅ ＃ＰＢ００１Ｆ－１）から分離した凍結保存ＰＢＭＣから２ドナーからのネガティブ選択（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃１７９５１）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離した。次に、精製したＴ細胞を１：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした後、続く分析のために上清を回収した。ヒトサイトカインカスタム３プレックス３８４ ４スポットキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＃Ｎ３１ＩＢ－１）を使用して、製造者の指示に従ってマルチプレックスＥＬＩＳＡを実施した。
標的細胞を回収し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１１８７５－０９３）に再懸濁した。平底３８４ウェルプレートに１ウェル当たり５，０００個の標的細胞を播いた。フィコール密度勾配遠心法によってｌｅｕｋｏｐａｋ（Ｈｅｍａｃａｒｅ ＃ＰＢ００１Ｆ－１）から分離した凍結保存ＰＢＭＣから２ドナーからのネガティブ選択（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃１７９５１）によってヒト汎Ｔエフェクター細胞を単離した。次に、精製したＴ細胞を１：１の最終Ｅ：Ｔ比が達成されるようにプレートに加えた。３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした後、続く分析のために上清を回収した。ヒトサイトカインカスタム３プレックス３８４ ４スポットキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ＃Ｎ３１ＩＢ－１）を使用して、製造者の指示に従ってマルチプレックスＥＬＩＳＡを実施した。
８．２３．２．結果
図２４Ａ～図２４Ｊに示されるように、両方のＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭが、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ及びＮａｌｍ６細胞とインキュベートしたとき、Ｔ細胞による有意なサイトカイン分泌を用量依存的に誘導する。抗原陰性Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２とインキュベートしたとき、検出されたサイトカイン分泌は最小限であった。
図２４Ａ～図２４Ｊに示されるように、両方のＮＥＧ２５８ベースのＴＢＭが、Ｏｃｉ－Ｌｙ１９、Ｔｏｌｅｄｏ及びＮａｌｍ６細胞とインキュベートしたとき、Ｔ細胞による有意なサイトカイン分泌を用量依存的に誘導する。抗原陰性Ｎａｌｍ６ ＫＯ及びＫ５６２とインキュベートしたとき、検出されたサイトカイン分泌は最小限であった。
８．２４．実施例２４：Ｋａｒｐａｓ ４２２及びＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞株による再チャレンジＲＴＣＣアッセイ
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｈ変異型）及びブリナツモマブで処理したＴ細胞の死滅活性に対して標的細胞再チャレンジが及ぼす効果を、用量滴定再チャレンジＲＴＣＣアッセイを用いて決定した。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｈ変異型）及びブリナツモマブで処理したＴ細胞の死滅活性に対して標的細胞再チャレンジが及ぼす効果を、用量滴定再チャレンジＲＴＣＣアッセイを用いて決定した。
８．２４．１．材料及び方法
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞をＣｏｓｔａｒ ６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）に播いた。予め単離し、凍結保存しておいた２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナーからのＰＢＭＣを解凍し、汎Ｔ細胞を単離した（先述のとおり）。ＥＣ９０濃度（ＯＣＩ－ＬＹ－１９について０．１ｎＭ及びＫａｒｐａｓ ４２２について０．５ｎＭ）のＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びブリナツモマブと併せた１：１のＥ：Ｔ比のＴ細胞とＯＣＩ－ＬＹ－１９又はＫａｒｐａｓ ４２２細胞との共培養をセットアップした。プレートをＯＣＩ－ＬＹ－１９について４日間及びＫａｒｐａｓ ４２２細胞について５日間インキュベートした。インキュベーションの終了時、発光シグナルを用いて標的細胞の死滅を決定した。抗体処理条件毎のＴ細胞絶対数も決定した。次の再チャレンジラウンドについて、様々な抗体条件間で標的細胞の死滅が等しくなることを確実にした。種々の抗体条件間でＴ細胞数を正規化し、両方の標的細胞について４日間のインキュベーションとしてＥＣ９０濃度を用いて１：１のＥ：Ｔで別の単一濃度再チャレンジラウンドをセットアップした。加えて、各細胞株について４日間のインキュベーションで種々の抗体処理条件からのＴ細胞を使用して１：１のＥ：Ｔ及び２ｎＭ～０．０００００１ｎＭの濃度範囲の用量滴定ＲＴＣＣをセットアップした。発光シグナルを用いて標的細胞の死滅を決定することにより、用量反応曲線を作成した。チャレンジ終了時、上記の手順をＫａｒｐａｓ ４２２について更に１回及びＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞について更に２回繰り返した。アッセイセットアップを図２５Ａに示す。
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞をＣｏｓｔａｒ ６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）に播いた。予め単離し、凍結保存しておいた２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナーからのＰＢＭＣを解凍し、汎Ｔ細胞を単離した（先述のとおり）。ＥＣ９０濃度（ＯＣＩ－ＬＹ－１９について０．１ｎＭ及びＫａｒｐａｓ ４２２について０．５ｎＭ）のＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びブリナツモマブと併せた１：１のＥ：Ｔ比のＴ細胞とＯＣＩ－ＬＹ－１９又はＫａｒｐａｓ ４２２細胞との共培養をセットアップした。プレートをＯＣＩ－ＬＹ－１９について４日間及びＫａｒｐａｓ ４２２細胞について５日間インキュベートした。インキュベーションの終了時、発光シグナルを用いて標的細胞の死滅を決定した。抗体処理条件毎のＴ細胞絶対数も決定した。次の再チャレンジラウンドについて、様々な抗体条件間で標的細胞の死滅が等しくなることを確実にした。種々の抗体条件間でＴ細胞数を正規化し、両方の標的細胞について４日間のインキュベーションとしてＥＣ９０濃度を用いて１：１のＥ：Ｔで別の単一濃度再チャレンジラウンドをセットアップした。加えて、各細胞株について４日間のインキュベーションで種々の抗体処理条件からのＴ細胞を使用して１：１のＥ：Ｔ及び２ｎＭ～０．０００００１ｎＭの濃度範囲の用量滴定ＲＴＣＣをセットアップした。発光シグナルを用いて標的細胞の死滅を決定することにより、用量反応曲線を作成した。チャレンジ終了時、上記の手順をＫａｒｐａｓ ４２２について更に１回及びＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞について更に２回繰り返した。アッセイセットアップを図２５Ａに示す。
８．２４．２．結果
図２５Ｂ～図２５Ｈを見ると分かるとおり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１と比較して、標的細胞でチャレンジを繰り返したときに死滅させる能力をより良好に保持することができた。次に良好なのはＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１であり、全ての抗体の中でＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１が最も活性が低かった。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、Ｋａｒｐａｓ４２２及びＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞についてのそれぞれ最初の２又は３ラウンドの再チャレンジでは、ブリナツモマブと比較したとき同程度の活性を実証した。ＯＣＩ－ＬＹ－１９についての最後の再チャレンジでは、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１はブリナツモマブよりも強力なＲＴＣＣを（ＥＣ５０及び最大溶解量の両方で）媒介した一方、Ｋａｒｐａｓ４２２について、ＥＣ５０が同程度であるにも関わらず、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１と比べてブリナツモマブの方が高い最大溶解量を媒介した。
図２５Ｂ～図２５Ｈを見ると分かるとおり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１と比較して、標的細胞でチャレンジを繰り返したときに死滅させる能力をより良好に保持することができた。次に良好なのはＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１であり、全ての抗体の中でＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１が最も活性が低かった。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、Ｋａｒｐａｓ４２２及びＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞についてのそれぞれ最初の２又は３ラウンドの再チャレンジでは、ブリナツモマブと比較したとき同程度の活性を実証した。ＯＣＩ－ＬＹ－１９についての最後の再チャレンジでは、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１はブリナツモマブよりも強力なＲＴＣＣを（ＥＣ５０及び最大溶解量の両方で）媒介した一方、Ｋａｒｐａｓ４２２について、ＥＣ５０が同程度であるにも関わらず、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１と比べてブリナツモマブの方が高い最大溶解量を媒介した。
８．２５．実施例２５：Ｋａｒｐａｓ ４２２及びＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞株による再チャレンジＴ細胞表現型タイピング
標的細胞再チャレンジがＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｈ変異型）処理Ｔ細胞の表現型に及ぼす効果を、単一濃度再チャレンジアッセイを用いて決定した。
標的細胞再チャレンジがＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｈ変異型）処理Ｔ細胞の表現型に及ぼす効果を、単一濃度再チャレンジアッセイを用いて決定した。
８．２５．１．材料及び方法
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞をＣｏｓｔａｒ ６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）に播いた。予め単離し、凍結保存しておいた２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナーからのＰＢＭＣを解凍し、汎Ｔ細胞を単離した（先述のとおり）。１：１のＥ：Ｔ比でのＴ細胞とＯＣＩ－ＬＹ－１９又はＫａｒｐａｓ ４２２細胞との共培養をセットアップし、１ｎＭのＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１又はＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１を加えた。プレートをＯＣ－ＬＹ－１９について４日間及びＫａｒｐａｓ ４２２細胞について５日間インキュベートした。インキュベーションの終了時、抗体処理条件毎の標的細胞の死滅及びＴ細胞絶対数を決定した。種々の抗体条件間でＴ細胞数を正規化し、更に２ラウンドの再チャレンジを前回のチャレンジと同じように、両方の標的細胞とも４日間のインキュベーションで、合計３チャレンジについてセットアップした。３回目のチャレンジ後、Ｋａｒｐａｓ ４２２共培養からは２日目及びＯＣＩ－ＬＹ－１９共培養からは４日目に種々の抗体処理条件からのＴ細胞を回収し、２画分に分けた。一方の画分は、青色の固定可能生死判別色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｌ２３１０５）で染色した後、抗ヒトＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３２４）、ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３４４６０８）、ＣＤ８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６３７９５）、ＣＤ２７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３５６４１２）及びＣＤ６２Ｌ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０４８１４）のカクテルで染色した。２つ目の画分は、ＴＣＭ中に１ｅ６／ｍｌとなるように再懸濁し、細胞刺激カクテル（Ｔｏｎｂｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＴＮＢ４９７５）によって３７℃で４時間刺激した。その後、細胞を洗浄し、続いて青色の固定可能生死判別色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｌ２３１０５）、抗ヒトＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３２４）と、ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３４４６０８）と、ＣＤ８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６３７９５）とのカクテルで染色した後、ＦｏｘＰ３転写因子染色セット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号００－５５２３－００）を使用して透過処理し、最後に抗ヒトＩＦＮγ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４００１３４）及びＩＬ－２ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４００５５１）又はそれぞれのアイソタイプ対照で染色した。染色は、全て製造者のプロトコルに従って実施した。フロー分析は、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して実施した。
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＯＣＩ－ＬＹ－１９及びＫａｒｐａｓ４２２標的細胞をＣｏｓｔａｒ ６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）に播いた。予め単離し、凍結保存しておいた２人のＬｅｕｋｏｐａｋドナーからのＰＢＭＣを解凍し、汎Ｔ細胞を単離した（先述のとおり）。１：１のＥ：Ｔ比でのＴ細胞とＯＣＩ－ＬＹ－１９又はＫａｒｐａｓ ４２２細胞との共培養をセットアップし、１ｎＭのＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１又はＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１を加えた。プレートをＯＣ－ＬＹ－１９について４日間及びＫａｒｐａｓ ４２２細胞について５日間インキュベートした。インキュベーションの終了時、抗体処理条件毎の標的細胞の死滅及びＴ細胞絶対数を決定した。種々の抗体条件間でＴ細胞数を正規化し、更に２ラウンドの再チャレンジを前回のチャレンジと同じように、両方の標的細胞とも４日間のインキュベーションで、合計３チャレンジについてセットアップした。３回目のチャレンジ後、Ｋａｒｐａｓ ４２２共培養からは２日目及びＯＣＩ－ＬＹ－１９共培養からは４日目に種々の抗体処理条件からのＴ細胞を回収し、２画分に分けた。一方の画分は、青色の固定可能生死判別色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｌ２３１０５）で染色した後、抗ヒトＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３２４）、ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３４４６０８）、ＣＤ８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６３７９５）、ＣＤ２７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３５６４１２）及びＣＤ６２Ｌ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０４８１４）のカクテルで染色した。２つ目の画分は、ＴＣＭ中に１ｅ６／ｍｌとなるように再懸濁し、細胞刺激カクテル（Ｔｏｎｂｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号ＴＮＢ４９７５）によって３７℃で４時間刺激した。その後、細胞を洗浄し、続いて青色の固定可能生死判別色素（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｌ２３１０５）、抗ヒトＣＤ３（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３１７３２４）と、ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３４４６０８）と、ＣＤ８（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カタログ番号５６３７９５）とのカクテルで染色した後、ＦｏｘＰ３転写因子染色セット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号００－５５２３－００）を使用して透過処理し、最後に抗ヒトＩＦＮγ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４００１３４）及びＩＬ－２ ｍＡｂ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４００５５１）又はそれぞれのアイソタイプ対照で染色した。染色は、全て製造者のプロトコルに従って実施した。フロー分析は、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して実施した。
８．２５．２．結果
図２６Ａ～図２６Ｈ（Ｋａｒｐａｓ ４２２モデル）及び図２６Ｉ～図２６Ｐ（ＯＣＩ－ＬＹ－１９モデル）に示されるとおり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１と比べて若齢表現型のＴ細胞の富化をより良好に促進した。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、試験した他のＣＤ１９結合剤と比較して、Ｔ細胞からのサイトカイン産生もより良好に誘導することができた。
図２６Ａ～図２６Ｈ（Ｋａｒｐａｓ ４２２モデル）及び図２６Ｉ～図２６Ｐ（ＯＣＩ－ＬＹ－１９モデル）に示されるとおり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１と比べて若齢表現型のＴ細胞の富化をより良好に促進した。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、試験した他のＣＤ１９結合剤と比較して、Ｔ細胞からのサイトカイン産生もより良好に誘導することができた。
８．２６．実施例２６：ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１がＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１と比べてＣＤ１９＋標的細胞の存在下でＴ細胞増殖及びサイトカイン産生を誘発する能力
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｒ変異型）について、ＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６標的細胞との共培養時にＴ細胞増殖、サイトカイン産生及びＴ細胞の表面マーカー発現の変化を誘導するその能力を評価した。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｒ変異型）について、ＣＤ１９を発現するＮａｌｍ６標的細胞との共培養時にＴ細胞増殖、サイトカイン産生及びＴ細胞の表面マーカー発現の変化を誘導するその能力を評価した。
８．２６．１．材料及び方法
アッセイセットアップ当日、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＮａｌｍ－６標的細胞を５０Ｇｙで照射した。バフィーコートドナー（Ｂｅｒｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）からの予め単離し、凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、ヒト汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５）を製造者のプロトコルに従って使用してネガティブ選択によって全Ｔ細胞を単離した。共培養のフィーダーとして使用するため、陽性画分（ＰＢＭＣ－Ｔ細胞枯渇型と呼ばれる）を５０Ｇｙで照射した。全Ｔ細胞において富化された陰性画分から、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞エンリッチメントキット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ、カタログ番号１９０５３）を使用した更なるネガティブ選択ステップによってＣＤ８＋Ｔ細胞を単離した。次に未着手のＣＤ８＋細胞を抗ＣＤ２８抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２９２２）で染色し、ＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ）でＣＤ２８発現：ＣＤ８＋ＣＤ２８＋及びＣＤ８＋ＣＤ２８－に基づいて選別した。選別された細胞の純度は９５％超であった。
アッセイセットアップ当日、ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＮａｌｍ－６標的細胞を５０Ｇｙで照射した。バフィーコートドナー（Ｂｅｒｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）からの予め単離し、凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、ヒト汎Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５）を製造者のプロトコルに従って使用してネガティブ選択によって全Ｔ細胞を単離した。共培養のフィーダーとして使用するため、陽性画分（ＰＢＭＣ－Ｔ細胞枯渇型と呼ばれる）を５０Ｇｙで照射した。全Ｔ細胞において富化された陰性画分から、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞エンリッチメントキット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ、カタログ番号１９０５３）を使用した更なるネガティブ選択ステップによってＣＤ８＋Ｔ細胞を単離した。次に未着手のＣＤ８＋細胞を抗ＣＤ２８抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２９２２）で染色し、ＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ）でＣＤ２８発現：ＣＤ８＋ＣＤ２８＋及びＣＤ８＋ＣＤ２８－に基づいて選別した。選別された細胞の純度は９５％超であった。
選別後、Ｔ細胞を２．５μＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｃ３４５５４）で製造者のプロトコルに従って標識した。
ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞の各Ｔ細胞サブセット（ＣＤ８＋ＣＤ２８＋又はＣＤ８＋ＣＤ２８－のいずれか）をＮａｌｍ６標的細胞と共培養し、ここでは１：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比が実現するように５０，０００個のＴ細胞及び５０，０００個の標的細胞を播種した。細胞を希釈し、１：３又は１：６の更なる最終Ｅ：Ｔ比が達成されるように同時に播いた。
照射ＰＢＭＣ－Ｔ細胞枯渇型の存在を必要とする共培養条件では、５：１比のエフェクターＴ細胞：ＰＢＭＣが達成されるように１０，０００個のＰＢＭＣを播いた。
Ｃｏｓｔａｒ ９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３５８５）内のＴ細胞培地［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１８７５－０３４）；１０％ＦＢＳ ＨｙＣｌｏｎｅ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＳＨ３００７０．０３）；１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１４０－０５０）；１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５１４０１２２）；１％ＨＥＰＥＳ（Ｌｏｎｚａ、カタログ番号１７７３７Ｅ）；ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１３６０－０７０）；５０μＭ β－メルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３１３５０）］にＴ細胞－腫瘍細胞共培養物を播いた。
Ｔ細胞培地に希釈したＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１を種々の濃度（１ｎＭ、０．１ｎＭ及び０．０１ｎＭ）で細胞に加え、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーターで７２時間インキュベートした。細胞内サイトカイン産生を検出可能にするため、共培養の最後の１．５時間はプレートをＰＭＡ（５０ｎｇ／ｍｌ；ＳＩＧＭＡ、カタログ番号Ｐ１５８５））とインキュベートした。インキュベーションの最後の１．５時間にイオノマイシン（５００μｇ／ｍｌ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ、カタログ番号４０７９５０）；ブレフェルジン（１０μｇ／ｍｌ；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号９９７２）も加えた。
７２時間の終了時、細胞を回収し、生死判別色素、Ｚｏｍｂｉｅ Ａｑｕａ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号４２３１０２）により、室温で１０分間インキュベートすることによって染色した。次にＦＡＣＳ緩衝液を使用して細胞を２回洗浄し、表面マーカー：抗ＣＤ２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３００２１４）、抗ＣＤ２８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２９２２）、抗ＣＣＲ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３５３２２６）及び抗ＣＤ４５ＲＯ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０４２１６）に対する抗体で染色した。Ｔ細胞をＢＤ ｃｙｔｏｆｉｘ ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ、カタログ番号５５５０２８）で製造者の指示に従って処理し、それを抗ＩＦＮｇ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号５０２５０９）及び抗グランザイムＢ抗体（ＢＤ、カタログ番号５６０２１３）で染色することにより、細胞内ＩＦＮ－ｇ及びグランザイムＢ（ＧｚＢ）を検出した。試料をＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、ＢＤ ＬＳＲ Ｆｏｒｔｅｓｓａ（ＢＤ）で捕捉した。分析はＦＬＯＷＪＯソフトウェア（バージョン１０．６．０；Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ Ｉｎｃ．）で実施した。
８．２６．２．結果
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１の両方は、ＣＤ１９発現標的細胞株Ｎａｌｍ６との共培養時にＣＤ２８＋Ｔ細胞及びＣＤ２８－Ｔ細胞の両方の増殖を誘導した（図２７Ａ～図２７Ｄ）。しかしながら、いずれのＴ細胞サブセットの増殖を誘導する効力も、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１と比較してＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１の方が高かった。この効果は、試験した両方の濃度で、且つ用いた種々のＥ：Ｔ比で観察された。Ｔ細胞増殖に及ぼす効果は、照射ＰＢＭＣの存在下又は非存在下の両方で観察された。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１の両方は、ＣＤ１９発現標的細胞株Ｎａｌｍ６との共培養時にＣＤ２８＋Ｔ細胞及びＣＤ２８－Ｔ細胞の両方の増殖を誘導した（図２７Ａ～図２７Ｄ）。しかしながら、いずれのＴ細胞サブセットの増殖を誘導する効力も、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１と比較してＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１の方が高かった。この効果は、試験した両方の濃度で、且つ用いた種々のＥ：Ｔ比で観察された。Ｔ細胞増殖に及ぼす効果は、照射ＰＢＭＣの存在下又は非存在下の両方で観察された。
１ｎＭのＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１の存在下では、ＩＦＮ－ｇ又はグランザイムＢ（ＧｚＢ）を産生するＴ細胞の割合の点で大きい違いは観察されなかった；しかしながら、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１の存在下では、両方のサイトカインについて、特に照射ＰＢＭＣの存在下で共培養したときのＣＤ２８－Ｔ細胞間で、ＩＦＮｇ及びＧｚＢの両方の発現の増加を示す蛍光強度中央値（ＭＦＩ）の明らかなシフトがあった（図２８Ａ～図２８Ｄ）。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１がサイトカイン産生Ｔ細胞に及ぼす効果は、０．１ｎＭで更に一層顕著であった：照射ＰＢＭＣの存在下及び非存在下の両方で、ＣＤ２８－及びＣＤ２８＋ Ｔ細胞サブセットの両方の範囲内におけるＭＦＩとしてのＧｚＢ＋Ｔ細胞及びＩＦＮｇ＋Ｔ細胞の明らかな増加があった（図２８Ｅ～図２８Ｈ）。更に、ＣＤ２８－Ｔ細胞ＩＦＮｇ＋ＧｚＢ＋の比率（％）もＣＤ３ｈｉＴＳＰ１の存在下で一層顕著であった（図２８Ｉ～図２８Ｌ）。
ＣＤ４５ＲＯ及びＣＣＲ７の発現プロファイルの組み合わせにより、異なるＴ細胞集団の分布が定義される：ナイーブ（ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７＋）、セントラルメモリー（ＣＭ）（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７＋）、エフェクターメモリー（ＥＭ）（ＣＤ４５ＲＯ＋ＣＣＲ７－）及び最終分化型（ＴＥＭＲＡ）（ＣＤ４５ＲＯ－ＣＣＲ７－）。Ｔ細胞表面表現型の変化を図２９に示す。選別直後、また７２時間の共培養後、種々のＴ細胞集団の均質な分布を維持するＣＤ２８＋細胞にＣＤ３ｈｉ分子が及ぼす大きい効果は観察されなかった。逆に、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１がＣＤ２８－細胞に及ぼす効果はあった：選別後は、ＣＤ２８－細胞はほぼ全面的にＴＥＭＲＡ表現型を示したが、ＣＤ３ｈｉＴＳＰ１による７２時間の処理後には、ＣＤ２８－細胞はセントラルメモリー／エフェクターメモリー表現型を再獲得し、これに付随して、更に最終分化した（ＴＥＭＲＡ）プロファイルを有する細胞の比率が低下した。
８．２７．実施例２７：ＣＤ３ｈｉＴＳＰ１分子がＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１分子と比べてＣＤ１９＋標的細胞に対するリダイレクトＴ細胞傷害性（ＲＴＣＣ）を誘発する能力
ルシフェラーゼ遺伝子を発現するように操作したＣＤ１９＋ Ｎａｌｍ６細胞でＲＴＣＣアッセイをセットアップし、ＣＤ８ Ｔ細胞集団を選別することによりＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｒ変異型）がＣＤ８ Ｔ細胞サブセットの細胞傷害活性を誘発する能力を測定した。
ルシフェラーゼ遺伝子を発現するように操作したＣＤ１９＋ Ｎａｌｍ６細胞でＲＴＣＣアッセイをセットアップし、ＣＤ８ Ｔ細胞集団を選別することによりＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（Ｒ変異型）がＣＤ８ Ｔ細胞サブセットの細胞傷害活性を誘発する能力を測定した。
８．２７．１．材料及び方法
予めバフィーコートドナー（Ｂｅｒｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）から単離し、凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、汎Ｔ細胞単離キット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５）を製造者のプロトコルに従って使用してネガティブ選択によって全Ｔ細胞を単離した。共培養のフィーダーとして使用するため、陽性画分（ＰＢＭＣ－Ｔ細胞枯渇型と呼ばれる）を５０Ｇｙで照射した。
予めバフィーコートドナー（Ｂｅｒｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）から単離し、凍結保存しておいた末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、汎Ｔ細胞単離キット、ヒト（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ番号１３０－０９６－５３５）を製造者のプロトコルに従って使用してネガティブ選択によって全Ｔ細胞を単離した。共培養のフィーダーとして使用するため、陽性画分（ＰＢＭＣ－Ｔ細胞枯渇型と呼ばれる）を５０Ｇｙで照射した。
次に、全Ｔ細胞において富化された陰性画分から、ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞エンリッチメントキット（Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ、カタログ番号１９０５３）を使用した更なるネガティブ選択ステップにより、ＣＤ８＋Ｔ細胞を単離した。次に未着手のＣＤ８＋細胞を抗ＣＤ２８抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、カタログ番号３０２９２２）で染色し、ＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ）でＣＤ２８発現：ＣＤ８＋ＣＤ２８＋及びＣＤ８＋ＣＤ２８－に基づいて選別した。選別された細胞の純度は９５％超であった。
次に３８４ウェル平底マイクロタイタープレート（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１４２７６１）において各Ｔ細胞サブセット（ＣＤ８＋ＣＤ２８＋又はＣＤ８＋ＣＤ２８－のいずれか）を１：１のエフェクター：標的（Ｅ：Ｔ）比が実現するように同数のＮａｌｍ６標的細胞と共培養した（３，０００個のＴ細胞及び３，０００個の標的細胞）。この共培養は、Ｔ細胞培地［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２１８７５－０３４）、１０％ＦＢＳ ＨｙＣｌｏｎｅ（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号ＳＨ３００７０．０３）、１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１１４０－０５０）、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１５１４０１２２）、１％ＨＥＰＥＳ（Ｌｏｎｚａ、カタログ番号１７７３７Ｅ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号１１３６０－０７０）、５０μＭ β－メルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号３１３５０）］にセットアップした。細胞を希釈し、１：３又は１：６の更なる最終Ｅ：Ｔ比が達成されるように同時に播いた。照射ＰＢＭＣ－枯渇Ｔ細胞型の存在を必要とする共培養条件では、５：１比のエフェクターＴ細胞：ＰＢＭＣが達成されるように６００個のＰＢＭＣを播いた。
細胞にＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ抗体対照を種々の濃度（１ｎＭ、０．１ｎＭ及び０．０１ｎＭ）で加えた。
プレートを３７℃インキュベーターにおいて５％ＣＯ２で７２時間インキュベートした。コインキュベーション後、全てのウェルにＯｎｅ－Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ６１１０）を加え、続いてＥＬＩＳＡ Ｒｅａｄｅｒ ４．１８ １（Ｂｉｏｔｅｋ、Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１）で発光シグナルを測定した。Ｏｎｅ－Ｇｌｏとの標的細胞が最大シグナルとして働いた。標的細胞のＲＴＣＣ率は、以下の式：［１００－（試料／最大シグナル）×１００％］を用いて計算した。
８．２７．２．結果
結果は図３０Ａ～図３０Ｄに示す。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１の両方が、対照抗体ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃと比較してＣＤ１９＋ Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ標的細胞に対するＲＴＣＣ活性を媒介した。０．１ｎＭ又は１ｎＭのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１を使用したとき、他の治療と比較して、ＣＤ８＋ＣＤ２８－Ｔ細胞とのセッティング（照射フィーダーの存在下）においてＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１媒介性ＲＴＣＣの増加が観察された。
結果は図３０Ａ～図３０Ｄに示す。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１の両方が、対照抗体ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃと比較してＣＤ１９＋ Ｎａｌｍ６－ｌｕｃ標的細胞に対するＲＴＣＣ活性を媒介した。０．１ｎＭ又は１ｎＭのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１を使用したとき、他の治療と比較して、ＣＤ８＋ＣＤ２８－Ｔ細胞とのセッティング（照射フィーダーの存在下）においてＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１媒介性ＲＴＣＣの増加が観察された。
８．２８．実施例２８：ＮＳＧマウスのＯＣＩ－ＬＹ－１９びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫腫瘍モデルの養子免疫伝達適応におけるＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の抗腫瘍活性
ＮＳＧマウスのＯＣＩ－ＬＹ－１９びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）腫瘍モデルにおいて、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
ＮＳＧマウスのＯＣＩ－ＬＹ－１９びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）腫瘍モデルにおいて、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
８．２８．１．材料及び方法
０日目、ＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞を回収し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に５００×１０６細胞／ｍＬの濃度で懸濁した。約６週齢の雌ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウス（ＮＳＧマウス）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＭＥ）の右側腹部に２００μＬの５×１０６個のＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞を皮下注射した。腫瘍接種の７日後、各マウスが外側尾静脈に静脈注射によって１００μＬの１５×１０６個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の養子免疫伝達（ＡｄＴ）を受けた。ＰＢＭＣは予めヒトｌｅｕｋｏｐａｋから単離し、凍結し、使用時まで気相液体窒素タンク内のＣｒｙｏｓｔｏｒ１０培地に保存してあった。ＡｄＴの直前にＰＢＭＣを解凍し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に１００×１０６細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。腫瘍負荷（ＴＢ）が機械的ノギスで測定して平均約２００ｍｍ３の容積に達したとき、マウス（ｎ＝８／群）を用量レベル０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１又はＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の単回ＩＶ投与で治療した。各抗体の抗腫瘍活性を、腫瘍移植及びＡｄＴを受けたが治療は受けていない未治療対照群（腫瘍＋ＡｄＴ）と比較した（表２６）。未治療対照で観察される同種反応を測るため、腫瘍のみの群を含めた。治療は、全て個々のマウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇで投与した。抗腫瘍活性は、未治療対照における変化と比べた腫瘍負荷の変化百分率（％ΔＴ／ΔＣ）又は％退縮率により決定した。
０日目、ＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞を回収し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に５００×１０６細胞／ｍＬの濃度で懸濁した。約６週齢の雌ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウス（ＮＳＧマウス）（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＭＥ）の右側腹部に２００μＬの５×１０６個のＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞を皮下注射した。腫瘍接種の７日後、各マウスが外側尾静脈に静脈注射によって１００μＬの１５×１０６個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の養子免疫伝達（ＡｄＴ）を受けた。ＰＢＭＣは予めヒトｌｅｕｋｏｐａｋから単離し、凍結し、使用時まで気相液体窒素タンク内のＣｒｙｏｓｔｏｒ１０培地に保存してあった。ＡｄＴの直前にＰＢＭＣを解凍し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に１００×１０６細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。腫瘍負荷（ＴＢ）が機械的ノギスで測定して平均約２００ｍｍ３の容積に達したとき、マウス（ｎ＝８／群）を用量レベル０．００３ｍｇ／ｋｇ、０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ又は０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１又はＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の単回ＩＶ投与で治療した。各抗体の抗腫瘍活性を、腫瘍移植及びＡｄＴを受けたが治療は受けていない未治療対照群（腫瘍＋ＡｄＴ）と比較した（表２６）。未治療対照で観察される同種反応を測るため、腫瘍のみの群を含めた。治療は、全て個々のマウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇで投与した。抗腫瘍活性は、未治療対照における変化と比べた腫瘍負荷の変化百分率（％ΔＴ／ΔＣ）又は％退縮率により決定した。
腫瘍負荷及び体重を週２回記録した。腫瘍負荷は、生物発光イメージングシステム（ＩＶＩＳ２００、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、ｐ／ｓ単位で生物発光シグナル強度により測定した。抗腫瘍活性は、式：ΔＴＢ≧０の場合、１００×ΔＴＢ治療、時点／ΔＴＢ対照群、時点を用いて％ΔＴ／ΔＣにより決定し；又はΔＴＶ＜０の場合、％退縮：（－１×（１００×（ＴＢ最終－ＴＢ初期／ＴＢ初期）により決定した。ＴＢ初期は、治療開始当日の腫瘍負荷である。４２％未満の％ΔＴ／ΔＣ値を、抗腫瘍活性があると見なした。体重変化率は、式：１００×（（ＢＷ時点－ＢＷ初期）／ＢＷ初期）を用いて決定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア、バージョン７．０３を使用して、一元配置ＡＮＯＶＡをダネットの多重比較検定と共に用いた統計的分析を実施した。
ＯＣＩ－ＬＹ－１９移植後２５日目、腫瘍負荷に起因して、未治療対照群の全ての動物を安楽死させた。
８．２８．２．結果
本研究では同種反応は最小限であった（図３１Ａ～図３１Ｂ）。
本研究では同種反応は最小限であった（図３１Ａ～図３１Ｂ）。
０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１による抗体治療は、それぞれ７２．４１％及び８４．５０％の有意な腫瘍退縮を生じた。０．０３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１による抗体治療は、１３．７４％の腫瘍退縮を生じた。０．００３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１による抗体治療は、１．３８％ΔＴ／ΔＣで有意な抗腫瘍活性を呈した。０．００３ｍｇ／ｋｇ用量レベルのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１による抗体治療は、このモデルでは活性を示さなかった（表２６；図３１Ａ）。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１では、抗体に関連する体重減少はなかった。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１の治療で観察された体重変化は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の発症に起因する可能性が最も高かった。体重減少は、疾患負荷及びＧｖＨＤ発症の両方のエンドポイントパラメータである。ＰＢＭＣ注射後３５～４２日（腫瘍移植後２８～３５日）で、動物は、ＧｖＨＤが原因の体重減少を呈し始めた。腫瘍負荷が高い動物は、疾患負荷に関連する体重減少も実証した。本研究中、体重は、腫瘍移植当日に量った初期測定値と比べて増加した（表２６、図３２Ａ）。しかしながら、研究終了時、増加最大値と比べて観察された体重減少は、ＧｖＨＤ及び疾患負荷が体重減少を誘導したことを示すものである。
ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１による抗体治療は、０．１ｍｇ／ｋｇ（５．６０％退縮）及び０．３ｍｇ／ｋｇ（３６．３３％退縮）で有意な抗腫瘍応答を生じた。ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１による治療は、０．０３ｍｇ／ｋｇの用量レベルについて７．３９％の％ΔＴ／ΔＣ値で有意な抗腫瘍応答を生じた。０．００３及び０．０１ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１による抗体治療は、このモデルでは活性を示さなかった（表２７；図３１Ｂ）。
ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１では、抗体に関連する体重減少はなかった。このコンストラクトについて、研究終了までにＧｖＨＤの発症に起因する体重減少は観察されなかった（表２７、図３２Ｂ）。
８．２９．実施例２９：ｈｕＣＤ３４＋ ＮＳＧマウスのＤＬＢＣＬ皮下腫瘍モデルの適応におけるＯＣＩ－ＬＹ－１９でのＣＤ３ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の複数回投与後の抗腫瘍活性
ｈｕＣＤ３４＋ ＮＳＧマウスのＯＣＩ－ＬＹ－１９ ＤＬＢＣＬ皮下腫瘍モデルにおいて、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
ｈｕＣＤ３４＋ ＮＳＧマウスのＯＣＩ－ＬＹ－１９ ＤＬＢＣＬ皮下腫瘍モデルにおいて、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
８．２９．１．材料及び方法
本研究に用いたＮＧＳマウスのヒト化手順を図３３に概略的に示す。簡潔に言えば、約６週齢の雌ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＭＥ）をプレコンディショニングプロトコルにかけて骨髄ニッチを離脱させた。これは、化学的アブレーション又はＸ線照射のいずれかによって各ＮＳＧマウスにおけるヒト免疫系の再構成を可能にすることにより達成された。プレコンディショニング後２４時間以内に、単一の臍帯（Ｌｏｎｚａ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ）から単離した５０，０００個のｈｕＣＤ３４＋幹細胞（ｈｕＣＤ３４＋ ＳＣ）を１００μＬで静脈注射によって外側尾静脈に導入した。各マウスが単一のドナーからのｈｕＣＤ３４＋ ＳＣを投与された。ｈｕＣＤ３４＋ ＳＣは、受領し、凍結し、使用時まで－２００℃の液体窒素タンクに保存した。接種直前に、液体窒素タンクからｈｕＣＤ３４＋ ＳＣバイアルを取り出し、３７℃のビーズバスで解凍し、５００，０００細胞／ｍＬの最終濃度でＰＢＳに再懸濁した。ヒト化後の１６週間、マウスを毎週、体重及び体調に関してモニタした。１６週目に、マウスを尾から出血させて、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によりヒト免疫再構築（ヒト生着）を確かめた。２５％を超えるｈＣＤ４５／全ＣＤ４５のマウスを安定に生着したと見なし、研究登録に適格とした。
本研究に用いたＮＧＳマウスのヒト化手順を図３３に概略的に示す。簡潔に言えば、約６週齢の雌ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＭＥ）をプレコンディショニングプロトコルにかけて骨髄ニッチを離脱させた。これは、化学的アブレーション又はＸ線照射のいずれかによって各ＮＳＧマウスにおけるヒト免疫系の再構成を可能にすることにより達成された。プレコンディショニング後２４時間以内に、単一の臍帯（Ｌｏｎｚａ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ）から単離した５０，０００個のｈｕＣＤ３４＋幹細胞（ｈｕＣＤ３４＋ ＳＣ）を１００μＬで静脈注射によって外側尾静脈に導入した。各マウスが単一のドナーからのｈｕＣＤ３４＋ ＳＣを投与された。ｈｕＣＤ３４＋ ＳＣは、受領し、凍結し、使用時まで－２００℃の液体窒素タンクに保存した。接種直前に、液体窒素タンクからｈｕＣＤ３４＋ ＳＣバイアルを取り出し、３７℃のビーズバスで解凍し、５００，０００細胞／ｍＬの最終濃度でＰＢＳに再懸濁した。ヒト化後の１６週間、マウスを毎週、体重及び体調に関してモニタした。１６週目に、マウスを尾から出血させて、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）によりヒト免疫再構築（ヒト生着）を確かめた。２５％を超えるｈＣＤ４５／全ＣＤ４５のマウスを安定に生着したと見なし、研究登録に適格とした。
生着の評価後、マウスに腫瘍細胞を皮下移植した。０日目、ＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞を採取し、１０×１０７細胞／ｍＬの濃度でハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に懸濁し、次にマトリゲルで１：１希釈して、５×１０７細胞／ｍＬの最終濃度を得た。マウスの右側腹部に１００μＬの容積中５×１０６細胞／マウスを皮下（ＳＱ）注射によって移植した。移植から１５日後（ノギスで測った平均腫瘍容積が約２５０～３００ｍｍ３）、２つのパラメータ：ドナー及び腫瘍容積に関してマウスを無作為化した。これにより、各群での均等なドナー配分及び同等の腫瘍容積が確保された。３つの治療群、ｎ＝８及び未治療対照、ｎ＝５があった。マウスは、毎週、２～４週間にわたり、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１（０．３ｍｇ／ｋｇ）、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（１．０ｍｇ／ｋｇ）又はＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１（０．３ｍｇ／ｋｇ）によってＩＶ投与で治療した。各抗体の抗腫瘍活性を、腫瘍移植を受けた未治療のｈｕＣＤ３４＋ＳＣ対照群（腫瘍＋ＣＤ３４＋）と比較した（表２８）。治療は、全て個々のマウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇで投与した。抗腫瘍活性は、未治療対照と比べた治療下の腫瘍容積の変化率（％ΔＴ／ΔＣ）又は％退縮により決定し、時間の経過に伴う％動物生存率をモニタすることにより応答の持続性を評価した。ＴＶ、ＢＷ又はＢＣＳ（ボディコンディションスコア）が実験動物使用プロトコル（ＡＵＰ）に定められた限度を超えることによりエンドポイント基準に達した動物は、安楽死させた。
腫瘍負荷（ＴＶ）及び体重は週２回記録した。腫瘍負荷は、ノギスで測って長さ及び幅を取得し、式（幅２×長さ）／３．１４を用いて腫瘍容積を計算した。体重は体重計で測定した。両パラメータとも、インハウスのシステム（ＩＮＤＩＧＯ）に入力した。抗腫瘍活性は、ΔＴＢ≧０の場合、式：１００×ΔＴＢ治療、時点／ΔＴＢ対照群、時点を用いて％ΔＴ／ΔＣにより決定し；又はΔＴＶ＜０の場合、％退縮：（－１×（１００×（ＴＢ最終－ＴＢ初期／ＴＢ初期）により決定した。ＴＢ初期は、治療開始当日の腫瘍負荷である。４２％未満の％ΔＴ／ΔＣ値を、抗腫瘍活性があると見なした。体重変化率は、式：１００×（（ＢＷ時点－ＢＷ初期）／ＢＷ初期）を用いて決定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア、バージョン７．０３を使用して、一元配置ＡＮＯＶＡをダネットの多重比較検定と共に用いた統計的分析を実施した（移植後２４日目）。
加えて、カプラン・マイヤー生存グラフを用いてエンドポイントまでの時間を評価し、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア、バージョン７．０３を使用した分析を実施してエンドポイントまでの時間（ＴＴＥ）の中央値の差を比較した。腫瘍容積が１２００ｍｍ３を超えたときに腫瘍エンドポイントに達していたマウス及び潰瘍、転移、体重減少又は体調不良など、疾患の進行に関連する腫瘍容積以外の理由で安楽死させたマウスは、死亡と記録した（「１」）。有害薬物事象など、腫瘍進行以外の理由で安楽死させた動物は、打ち切りとした（「０」）。ログ・ランク（マンテル・コックス）生存分析を実施し、全体の有意水準Ｐ＜０．０５としてホルム・シダック法を用いて、全てのペアワイズ多重比較手順を実施した（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ １３．０）。ＴＴＥのグラフ解析は、Ｐｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ ｖ７．０３）で実施した。個々の応答基準も評価し、完全応答（ＣＲ）、最終測定時点で検出可能な腫瘍なし；部分応答（ＰＲ）、任意の時点で腫瘍容積がベースライン測定値未満であり、その後再増殖が続く；又は応答なし（ＮＲ）、研究期間中、腫瘍はベースライン測定値を上回って増加し続ける、のいずれかとして記録した。３９日目が本研究の最終日となった。
ＯＣＩ－ＬＹ－１９移植後２４日目、腫瘍負荷に起因して、未治療対照群の全ての動物を安楽死させた。統計的分析は２４日目に評価した。
８．２９．２．結果
３つの抗体のいずれによる治療も、腫瘍＋ＣＤ３４＋対照群と比較して腫瘍活性の有意差を示した。０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１では、４７．４％の有意な腫瘍退縮が得られた一方、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１では退縮は達成されなかった（１６．３％ΔＴ／ΔＣ）。１．０ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１による治療では、６４．５％の腫瘍退縮が得られた（表２８、図３４Ａ）。
３つの抗体のいずれによる治療も、腫瘍＋ＣＤ３４＋対照群と比較して腫瘍活性の有意差を示した。０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１では、４７．４％の有意な腫瘍退縮が得られた一方、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１では退縮は達成されなかった（１６．３％ΔＴ／ΔＣ）。１．０ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１による治療では、６４．５％の腫瘍退縮が得られた（表２８、図３４Ａ）。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１では、初回投与後に限り、治療に関連する体重減少が観察された。体重減少の重症度は、同様にドナーの影響もあり、ドナー毎に様々な体重減少最大値を示した。理論によって拘束されるものではないが、初回投与後に観察される体重変化は、標的媒介性で促進され、固有のＢ細胞の枯渇によって悪化すると仮定される。体重減少は、疾患負荷と、治療によって誘導される応答との両方のエンドポイントパラメータである。腫瘍負荷が高い動物は、疾患負荷に関連する体重減少を実証した。本研究中、体重は、腫瘍移植当日に量った初期測定値と比べて増加するが、疾患負荷の進行に応じて減少することが観察された（表２８、図３４Ｂ）。
８．３０．実施例３０：ｈｕＣＤ３４＋ ＮＳＧマウスのＤＬＢＣＬ皮下腫瘍モデルでＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１とＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１とを比較する単回投与用量設定研究における抗腫瘍活性
ｈｕＣＤ３４＋ ＮＳＧマウスのＯＣＩ－ＬＹ－１９ ＤＬＢＣＬ皮下腫瘍モデルでＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
ｈｕＣＤ３４＋ ＮＳＧマウスのＯＣＩ－ＬＹ－１９ ＤＬＢＣＬ皮下腫瘍モデルでＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
８．３０．１．材料及び方法
Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ、ＣＡ）から雌ヒト化ＣＤ３４＋ ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウス（ＨｕＮＳＧマウス）を購入した。臍帯血を用いてマウスをヒト化した。
Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｓａｃｒａｍｅｎｔｏ、ＣＡ）から雌ヒト化ＣＤ３４＋ ＮＯＤ．Ｃｇ－Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ Ｉｌ２ｒｇｔｍ１Ｗｊｌ／ＳｚＪマウス（ＨｕＮＳＧマウス）を購入した。臍帯血を用いてマウスをヒト化した。
出荷前にｈＣＤ４５＋細胞が生着レベルを決定され、研究開始前にインハウスで確認した。末梢血中に２５％を超えるｈＣＤ４５＋細胞を有するＨｕＮＳＧマウスを、生着していてヒト化されていると見なした。研究では、生着レベルが異なるドナーに由来するＨｕＮＳＧを各治療群に無作為化した。
生着の評価後、マウスに腫瘍細胞を皮下移植した。０日目、ＯＣＩ－ＬＹ－１９細胞を採取し、１０×１０７細胞／ｍＬの濃度でハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に懸濁し、次にマトリゲルで１：１希釈して、５×１０７細胞／ｍＬの最終濃度を得た。マウスの右側腹部に１００μＬの容積中５×１０６細胞／マウスを皮下（ＳＱ）注射によって移植した。移植から９日後（ノギスで測った平均腫瘍容積が約２５０～３００ｍｍ３）、２つのパラメータ：ドナー及び腫瘍容積に関してマウスを無作為化した。これにより、各群での均等なドナー配分及び同等の腫瘍容積が確保された。ｎ＝８の治療群及び未治療対照にｎ＝５の１１群があった。マウスには、以下の用量範囲１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｇｋ、０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．０１ｍｇ／ｋｇにわたるＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１又はＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１のＩＶ投与によって単回用量を投与した。各抗体の抗腫瘍活性を、腫瘍移植を受けた未治療のｈｕＣＤ３４＋ＳＣ対照群（腫瘍＋ＣＤ３４＋）と比較した（表２９）。治療は、全て個々のマウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇで投与した。抗腫瘍活性は、未治療対照と比べた治療下の腫瘍容積の変化率（％ΔＴ／ΔＣ）又は％退縮により決定し、時間の経過に伴う％動物生存率をモニタすることにより応答の持続性を評価した。ＴＶ、ＢＷ又はＢＣＳ（ボディコンディションスコア）が実験動物使用プロトコル（ＡＵＰ）に定められた限度を超えることによりエンドポイント基準に達した動物は、安楽死させた。
腫瘍負荷（ＴＶ）及び体重は週２回記録した。腫瘍負荷は、ノギスで測って長さ及び幅を取得し、式（幅２×長さ）／３．１４を用いて腫瘍容積を計算した。体重は体重計で測定した。両パラメータとも、インハウスのシステム（ＩＮＤＩＧＯ）に入力した。抗腫瘍活性は、ΔＴＢ≧０の場合、式：１００×ΔＴＢ治療、時点／ΔＴＢ対照群、時点を用いて％ΔＴ／ΔＣにより決定し；又はΔＴＶ＜０の場合、％退縮：（－１×（１００×（ＴＢ最終－ＴＢ初期／ＴＢ初期）により決定した。ＴＢ初期は、治療開始当日の腫瘍負荷である。（４２％未満の％ΔＴ／ΔＣ値を、抗腫瘍活性があると見なした）。体重変化率は、式：１００×（（ＢＷ時点－ＢＷ初期）／ＢＷ初期）を用いて決定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア、バージョン７．０３を使用して、一元配置ＡＮＯＶＡをダネットの多重比較検定と共に用いた統計的分析を実施した。加えて、カプラン・マイヤー生存グラフ及びＧｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア、バージョン７．０３を使用した分析を用いて応答の持続性を評価した。
ＯＣＩ－ＬＹ－１９移植後２４日目、腫瘍負荷に起因して、未治療対照群の全ての動物を安楽死させた。統計的分析は２４日目に評価した。
８．３０．２．結果
１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰで観察された腫瘍活性には、腫瘍＋ＣＤ３４＋対照群と比較して統計的に有意な差があった。１．０ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１では３５．３％の有意な腫瘍退縮が得られた一方、０．３ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、それぞれ０．０５％及び１９．５％のΔＴ／ΔＣ値のロバストで有意な抗腫瘍活性を示した。投与した用量レベルが０．１ｍｇ／ｋｇより低いと、抗腫瘍応答は実現せず、０．０３ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１ではΔＴ／ΔＣ値が６５．８％であり、０．０１ｍｇ／ｋｇ用量ではΔＴ／ΔＣ値が１００％であった（表２９、図３５Ａ）。
１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰで観察された腫瘍活性には、腫瘍＋ＣＤ３４＋対照群と比較して統計的に有意な差があった。１．０ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１では３５．３％の有意な腫瘍退縮が得られた一方、０．３ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１は、それぞれ０．０５％及び１９．５％のΔＴ／ΔＣ値のロバストで有意な抗腫瘍活性を示した。投与した用量レベルが０．１ｍｇ／ｋｇより低いと、抗腫瘍応答は実現せず、０．０３ｍｇ／ｋｇ用量のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１ではΔＴ／ΔＣ値が６５．８％であり、０．０１ｍｇ／ｋｇ用量ではΔＴ／ΔＣ値が１００％であった（表２９、図３５Ａ）。
ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１による抗体治療は、有意な抗腫瘍活性を生じた。１．０ｍｇ／ｋｇで投与したＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１は、０．０５％のΔＴ／ΔＣの有意な腫瘍応答を実現した。０．３ｍｇ／ｋｇ用量レベルのＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１は実に抗腫瘍活性を示したが（ΔＴ／ΔＣ：２６．９＜４２）、対照と比較して有意ではなかった。０．３ｍｇ／ｋｇより低い用量について、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０３ｍｇ／ｋｇ及び０．０１ｍｇ／ｋｇ用量のΔＴ／ΔＣ値がそれぞれ７９．８％、９０．３％及び１００％と、有意な腫瘍活性を示さなかった（表２９、図３５Ｃ）。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の投与後、複数の用量レベルで治療に関連する体重減少が観察された。体重減少の重症度は、ドナー及び用量レベルの両方の効果の組み合わせであり、ドナー毎に様々な体重減少最大値を示した。理論によって拘束されるものではないが、投与後に観察される体重変化は、標的媒介性で促進され、固有のＢ細胞の枯渇によって悪化すると仮定される。体重減少は、疾患負荷と、治療によって誘導される応答との両方のエンドポイントパラメータである。腫瘍負荷が高い動物は、疾患負荷に関連する体重減少を実証した。本研究中、体重は、腫瘍移植当日に量った初期測定値と比べて増加するが（表２９、図３５Ｂ及び図３５Ｄ）、疾患負荷の進行に応じて減少することが観察された。
８．３１．実施例３１：ＮＳＧマウスのＤａｕｄｉ－Ｌｕｃバーキットリンパ腫皮下腫瘍モデルの養子免疫伝達適応におけるＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の抗腫瘍活性
ＮＳＧマウスのＤａｕｄｉ－Ｌｕｃバーキットリンパ腫皮下腫瘍モデルの養子免疫伝達適応におけるＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
ＮＳＧマウスのＤａｕｄｉ－Ｌｕｃバーキットリンパ腫皮下腫瘍モデルの養子免疫伝達適応におけるＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１（Ｈ変異型）の抗腫瘍活性を研究した。
８．３１．１．材料及び方法
０日目、Ｄａｕｄｉ－ｌｕｃ細胞を回収し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）とマトリゲルとの１：１混合物に５０×１０６細胞／ｍＬの濃度で懸濁した。約６週齢の雌ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＭＥ）の右側腹部に１００μＬ中の５×１０６個のＤａｕｄｉ－Ｌｕｃ細胞を皮下（ＳＱ）注射した。腫瘍接種の３日後、各マウスが外側尾静脈に静脈内（ＩＶ）注射によって１００μＬ中の１５×１０６個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の養子免疫伝達（ＡｄＴ）を受けた。ＰＢＭＣは予めヒトｌｅｕｋｏｐａｋから単離し、凍結し、使用時まで気相液体窒素タンク内のＣｒｙｏｓｔｏｒ１０培地に保存してあった。ＡｄＴの直前に、ＰＢＭＣを解凍し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に１５０×１０６細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。ノギスで測って腫瘍容積（ＴＶ）が平均約２５０立方ミリメートル（ｍｍ３）に達したとき（移植後１０日目）、マウス（ｎ＝８／群）を、１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの用量レベルのＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１又はＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の単回ＩＶ投与で治療した。各抗体の抗腫瘍活性を、腫瘍移植及びＡｄＴを受けたが治療は受けていない未治療対照群（腫瘍＋ＡｄＴ）と比較した（表３０）。未治療対照で観察される同種反応を測るため、腫瘍のみの群を含めた。治療は、全て個々のマウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇで投与した。抗腫瘍活性は、未治療対照の変化と比べた腫瘍容積の変化率（％ΔＴ／ΔＣ）又は％退縮により決定した。
０日目、Ｄａｕｄｉ－ｌｕｃ細胞を回収し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）とマトリゲルとの１：１混合物に５０×１０６細胞／ｍＬの濃度で懸濁した。約６週齢の雌ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＭＥ）の右側腹部に１００μＬ中の５×１０６個のＤａｕｄｉ－Ｌｕｃ細胞を皮下（ＳＱ）注射した。腫瘍接種の３日後、各マウスが外側尾静脈に静脈内（ＩＶ）注射によって１００μＬ中の１５×１０６個の末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の養子免疫伝達（ＡｄＴ）を受けた。ＰＢＭＣは予めヒトｌｅｕｋｏｐａｋから単離し、凍結し、使用時まで気相液体窒素タンク内のＣｒｙｏｓｔｏｒ１０培地に保存してあった。ＡｄＴの直前に、ＰＢＭＣを解凍し、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）に１５０×１０６細胞／ｍｌの濃度で懸濁した。ノギスで測って腫瘍容積（ＴＶ）が平均約２５０立方ミリメートル（ｍｍ３）に達したとき（移植後１０日目）、マウス（ｎ＝８／群）を、１．０ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍｇ／ｋｇの用量レベルのＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１又はＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１の単回ＩＶ投与で治療した。各抗体の抗腫瘍活性を、腫瘍移植及びＡｄＴを受けたが治療は受けていない未治療対照群（腫瘍＋ＡｄＴ）と比較した（表３０）。未治療対照で観察される同種反応を測るため、腫瘍のみの群を含めた。治療は、全て個々のマウス体重に基づいて１０ｍＬ／ｋｇで投与した。抗腫瘍活性は、未治療対照の変化と比べた腫瘍容積の変化率（％ΔＴ／ΔＣ）又は％退縮により決定した。
腫瘍容積及び体重を週２回記録した。腫瘍容積はノギスで測定した。抗腫瘍活性は、ΔＴＶ≧０の場合、式：１００×ΔＴＶ治療、時点／ΔＴＶ対照群、時点を用いて％ΔＴ／ΔＣにより決定し；又はΔＴＶ＜０の場合、％退縮：（－１×（１００×（ＴＶ最終－ＴＶ初期／ＴＶ初期）により決定した。ＴＶ初期は、治療開始当日の腫瘍容積である。４２％未満の％ΔＴ／ΔＣ値を、抗腫瘍活性があると見なした。体重変化率は、式：１００×（（ＢＷ時点－ＢＷ初期）／ＢＷ初期）を用いて決定した。Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア、バージョン７．０３を使用して、一元配置ＡＮＯＶＡをダネットの多重比較検定と共に用いた統計的分析を実施した。
Ｄａｕｄｉ－Ｌｕｃ移植後３６日目、腫瘍容積が原因で、腫瘍＋ＡｄＴ対照群の動物の２５％を安楽死させた。
８．３１．２．結果
本研究では同種反応は最小限であった（図３６Ａ～図３６Ｃ）。
本研究では同種反応は最小限であった（図３６Ａ～図３６Ｃ）。
１．０ｍｇ／ｋｇ及び０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１による抗体治療では、それぞれ８５．２１％及び７３．２６％の有意な腫瘍退縮が得られた。０．１ｍｇ／ｋｇのＣＤ３ｈｉ ＢＳＰ１による抗体治療は、有意な抗腫瘍活性を呈した（２０．８９％ΔＴ／ΔＣ値）。ＣＤ３ｍｅｄ ＴＳＰ１による抗体治療では、３つ全ての用量レベルで有意な抗腫瘍応答が得られた：１．０ｍｇ／ｋｇ（９０．８６％退縮）、０．３ｍｇ／ｋｇ（８５．１３％退縮）及び０．１ｍｇ／ｋｇ（１３．５１％退縮）。ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１による抗体治療では、３つ全ての用量レベルで有意な腫瘍退縮が得られた：１．０ｍｇ／ｋｇ（９０．０８％退縮）、０．３ｍｇ／ｋｇ（９１．８６％退縮）及び０．１ｍｇ／ｋｇ（８７．５２％退縮）。
試験した３つのコンストラクトのいずれにおいても、抗体に関連する体重減少はなかった。理論によって拘束されるものではないが、約３５日目に観察されたベースラインからの体重変化は、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）の発症に起因した可能性が最も高い。体重減少は、ＧｖＨＤ発症のエンドポイントパラメータである。ＰＢＭＣ注射後３２～３９日（腫瘍移植後３５～４２日）で、動物は、ＧｖＨＤが原因の体重減少を呈し始めた。本研究中、体重は、腫瘍移植当日に量った初期測定値と比べて増加した（表３０、図３７Ａ～図３７Ｃ）。しかしながら、研究終了時、増加最大値と比べて観察された体重減少は、ＧｖＨＤが体重減少を誘導したことを示すものである。
８．３２．実施例３２：設計－残基位置の選択
エフェクター機能の低下などの所望の特性を示す可能性のある修飾されたＦｃ領域を有する抗体のセットを作製するための設計手法を試験した。Ｆｃγ受容体のＩｇＧにおける重要なアミノ酸結合部位を定義する初期の研究は、突然変異分析によって行われ、ヒンジ下部、近位ＣＨ２領域及びＮ２９７のグリコシル化が重要であることが判明した（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）。Ｆｃγ受容体への残留結合を減少させることを目的として、Ｆｃγ受容体と相互作用する領域に突然変異を導入した。この特別な理由により、抗体医薬の開発可能性や免疫原性のリスクを損なうことなく、Ｆｃ位置の様々な組み合わせを試験し、一連の突然変異を生じさせる必要があった。いくつかの突然変異のセットを生じさせ、野生型ＩｇＧ１と比較した。実施例３３～３６において：ＬＡＬＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａ）、ＬＡＬＡＧＡ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ）、ＬＡＬＡＰＧ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ）、ＤＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ）、ＬＡＬＡＳＫＰＡ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｓ２６７Ｋ／Ｐ３２９Ａ）、ＤＡＰＡＳＫ－ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ／Ｓ２６７Ｋ）、ＧＡＤＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ）、ＧＡＤＡＰＡＳＫ－ＩｇＧ１（Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ／Ｓ２６７Ｋ）及びＤＡＮＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）を評価した。以前に記載したＤＡＰＡ及びＤＡＮＡＰＡサイレンシングモチーフを比較のために含めた。実施例３７～３９において：ＬＡＬＡ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）、ＬＡＬＡＳＫＰＡ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｓ２６７Ｋ／Ｐ３２９Ａ）、ＧＡＤＡＰＡＳＫ（Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ／Ｓ２６７Ｋ）及びＤＡＮＡＰＡ（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）突然変異のセットを評価した。
エフェクター機能の低下などの所望の特性を示す可能性のある修飾されたＦｃ領域を有する抗体のセットを作製するための設計手法を試験した。Ｆｃγ受容体のＩｇＧにおける重要なアミノ酸結合部位を定義する初期の研究は、突然変異分析によって行われ、ヒンジ下部、近位ＣＨ２領域及びＮ２９７のグリコシル化が重要であることが判明した（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）。Ｆｃγ受容体への残留結合を減少させることを目的として、Ｆｃγ受容体と相互作用する領域に突然変異を導入した。この特別な理由により、抗体医薬の開発可能性や免疫原性のリスクを損なうことなく、Ｆｃ位置の様々な組み合わせを試験し、一連の突然変異を生じさせる必要があった。いくつかの突然変異のセットを生じさせ、野生型ＩｇＧ１と比較した。実施例３３～３６において：ＬＡＬＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ａ）、ＬＡＬＡＧＡ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ）、ＬＡＬＡＰＧ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ）、ＤＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ）、ＬＡＬＡＳＫＰＡ－ＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｓ２６７Ｋ／Ｐ３２９Ａ）、ＤＡＰＡＳＫ－ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ／Ｓ２６７Ｋ）、ＧＡＤＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ）、ＧＡＤＡＰＡＳＫ－ＩｇＧ１（Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ／Ｓ２６７Ｋ）及びＤＡＮＡＰＡ－ＩｇＧ１（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）を評価した。以前に記載したＤＡＰＡ及びＤＡＮＡＰＡサイレンシングモチーフを比較のために含めた。実施例３７～３９において：ＬＡＬＡ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ）、ＬＡＬＡＳＫＰＡ（Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｓ２６７Ｋ／Ｐ３２９Ａ）、ＧＡＤＡＰＡＳＫ（Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｐ３２９Ａ／Ｓ２６７Ｋ）及びＤＡＮＡＰＡ（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）突然変異のセットを評価した。
８．３３．実施例３３：Ｆｃ修飾ＣＤ３抗体の発現及び精製
以下に記載する実験のために、示されるアミノ酸置換を含み、示されるヌクレオチド配列によって発現される、表Ａ及びＢに列挙したＣＤ３に対する抗体を使用した。ＩｇＧ１分子を、ＨＥＫ２９３哺乳動物細胞で発現させ、プロテインＡ及びサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。簡単に述べると、抗ＣＤ３ ＷＴＩｇＧ１の重鎖及び軽鎖ＤＮＡをＧｅｎｅＡｒｔ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で合成し、制限酵素ライゲーションベースのクローニング技術を使用して哺乳動物発現ベクターにクローニングした。次に、本明細書に記載される全ての変異体を、ＰＣＲベースの突然変異誘発を使用して作製した。得られたプラスミドをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。抗体の一過性発現の場合、各鎖について等量のベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ；カタログ番号２４７６５ Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して懸濁液適応ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。典型的には、１ｍｌ当たり１～２Ｍｉｏ細胞の密度の１００ｍｌの細胞懸濁液を、重鎖をコードする５０μｇの発現ベクター及び軽鎖をコードする５０μｇの発現ベクターを含むＤＮＡでトランスフェクトした。次に、組換え発現ベクターを宿主細胞に導入し、０．１％プルロン酸、４ｍＭグルタミン及び０．２５μｇ／ｍｌ抗生物質を補充した培養培地（ＨＥＫ、無血清培地）への分泌を可能にするために細胞を７日間にわたって更に培養することによってコンストラクトを作製した。
以下に記載する実験のために、示されるアミノ酸置換を含み、示されるヌクレオチド配列によって発現される、表Ａ及びＢに列挙したＣＤ３に対する抗体を使用した。ＩｇＧ１分子を、ＨＥＫ２９３哺乳動物細胞で発現させ、プロテインＡ及びサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。簡単に述べると、抗ＣＤ３ ＷＴＩｇＧ１の重鎖及び軽鎖ＤＮＡをＧｅｎｅＡｒｔ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で合成し、制限酵素ライゲーションベースのクローニング技術を使用して哺乳動物発現ベクターにクローニングした。次に、本明細書に記載される全ての変異体を、ＰＣＲベースの突然変異誘発を使用して作製した。得られたプラスミドをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。抗体の一過性発現の場合、各鎖について等量のベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ；カタログ番号２４７６５ Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して懸濁液適応ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。典型的には、１ｍｌ当たり１～２Ｍｉｏ細胞の密度の１００ｍｌの細胞懸濁液を、重鎖をコードする５０μｇの発現ベクター及び軽鎖をコードする５０μｇの発現ベクターを含むＤＮＡでトランスフェクトした。次に、組換え発現ベクターを宿主細胞に導入し、０．１％プルロン酸、４ｍＭグルタミン及び０．２５μｇ／ｍｌ抗生物質を補充した培養培地（ＨＥＫ、無血清培地）への分泌を可能にするために細胞を７日間にわたって更に培養することによってコンストラクトを作製した。
次に、作製したコンストラクトを、免疫親和性クロマトグラフィーを使用して無細胞上清から精製した。ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４で平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、液体クロマトグラフィーシステム（Ａｅｋｔａ ｐｕｒｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｓｙｓｔｅｍ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、濾過した馴化培地と共にインキュベートした。この樹脂をＰＢＳｐＨ７．４で洗浄した後、コンストラクトを溶出緩衝液（５０ｍＭ クエン酸塩、９０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ２．７）で溶出した。捕捉後、溶出したタンパク質を、１Ｍ ＴＲＩＳ ｐＨ１０．０溶液を使用してｐＨを中和し、サイズ排除クロマトグラフィー技術を使用して精製した（ＨｉＰｒｅｐ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １６／６０，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。精製したタンパク質を、最終的にＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）で製剤化した。
８．３４．実施例３４：Ｆｃ修飾ＣＤ３抗体の生物物理学的特性：ＳＰＲ－ヒトＦｃγ受容体及びヒトＣ１ｑへの修飾抗体の結合
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を実施して、ヒト活性化受容体ＦｃγＲ１Ａ、ＦｃγＲ３Ａ（Ｖ１５８）及びヒトＣ１ｑとＩｇＧ１ ＷＴ及び抗体－Ｆｃ変異体との相互作用を分析した。結合キネティクス及びその相対的な結合親和性を調べた。結合親和性は、抗体と抗原との間の相互作用の重要な特性である。平衡解離定数（ＫＤ）は、相互作用の強さ、すなわち平衡状態で形成される抗体－抗原複合体の量を定義する。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を実施して、ヒト活性化受容体ＦｃγＲ１Ａ、ＦｃγＲ３Ａ（Ｖ１５８）及びヒトＣ１ｑとＩｇＧ１ ＷＴ及び抗体－Ｆｃ変異体との相互作用を分析した。結合キネティクス及びその相対的な結合親和性を調べた。結合親和性は、抗体と抗原との間の相互作用の重要な特性である。平衡解離定数（ＫＤ）は、相互作用の強さ、すなわち平衡状態で形成される抗体－抗原複合体の量を定義する。
抗体特性の知識は、最良の治療用抗体候補を選択する際に不可欠であるだけではなく、インビボでの挙動を理解し、細胞性免疫応答を潜在的に予測するためにも重要である。その目的は、モノクローナル抗体治療薬の安全性を向上させることを期待して、エフェクター機能を低減又は排除するために、Ｆｃγ受容体にほとんど結合しない抗体変異体を作製することである。ヒトＣ１ｑへの結合を評価した。全てのＳＰＲ緩衝液は、脱イオン水を使用して調製した。サンプルを、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含むランニング緩衝液ＰＢＳ ｐＨ７．４で調製した。ＳＰＲ測定値を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００制御ソフトウェアバージョン２．０．１によって制御されるＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。表面プラズモン共鳴を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して実施し、ＦｃγＲ１Ａ及びＦｃγＲ３Ａ（Ｖ１５８）及びヒトＣ１ｑを含むヒトＦｃ受容体に対する抗体ＩｇＧ１ ＷＴ及び変異体の結合親和性を評価した。
抗体は、ＣＭ５センサーチップ上に共有結合で固定し、Ｆｃγ受容体又はヒトＣ１ｑは、溶液中の分析物としての役割を果たした（図３８）。Ｆｃγ受容体の結合の評価（方法１）では、抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４で希釈し、標準的なアミンカップリング手順を適用してＣＭ５センサーチップ上に約９５０共鳴単位（ＲＵ）の密度で固定した。フローセル１は、参照としての役割を果たすように固定したブランクとした。動態結合データを、ヒトＦｃγ受容体の１：２希釈系列の３０μｌ／分の流速、２５℃の温度での全てのフローセルへのその後の注入によって収集した。Ｆｃγ受容体を、ランニング緩衝液で０．２ｎＭ～１０００ｎＭの範囲（例えば、ＦｃγＲ１Ａ：０．２～１００ｎＭ、ＦｃγＲ３Ａ Ｖ１５８：１．９５～１０００ｎＭ）の濃度に希釈した。各測定サイクル後に、２０ｍＭグリシンｐＨ２．０溶液を使用してチップ表面を再生した。ヒトＣ１ｑ結合の評価（方法２）では、抗体を、１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４で希釈し、標準的なアミンカップリング手順を適用してＣＭ５センサーチップ上に約７０００共鳴単位（ＲＵ）の密度で固定化した。フローセル１は、参照としての役割を果たすように固定化したブランクとした。動態結合データを、ヒトＣ１ｑの１：２希釈系列の流速３０μｌ／分、温度２５℃での全てのフローセルへのその後の注入によって収集した。ヒトＣ１ｑを、ランニング緩衝液で０．４９ｎＭ～２５０ｎＭの範囲の濃度に希釈した。各測定サイクル後に、５０ｍＭ ＮａＯＨ溶液を使用してチップ表面を再生した。データ評価中の二重参照を可能にするために、両方の方法でゼロ濃度サンプル（ブランクラン）を測定した。
データを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して評価した。生データを二重参照した。すなわち、測定フローセルの応答を参照フローセルの応答に対して補正し、第２のステップでブランク注入の応答を減算した。次に、１：１動態結合モデルを適用することによってセンサーグラムを適合させて解離平衡定数を計算した。加えて、実験中に到達した最大応答を監視した。最大応答は、飽和時の応答の観点から表面の結合能力を表す。これらの相互作用を要約した最大応答値を表３１に示す。各受容体に対する各変異体のＳＰＲ Ｂｉａｃｏｒｅ結合センサーグラムを図３９に示した（濃度範囲：ＦｃｇＲ１では０．２ｎＭ～１００ｎＭ、ＦｃｇＲ２Ａ Ｒ１３１ ｄ ＦｃγＲ３Ａ（Ｖ１５８及びＦ１５８）では７．８ｎＭ～４０００ｎｍ）。図３９Ａは、ＦｃγＲ１Ａに対するＷＴ及び変異体の代表的なセンサーグラム及び応答プロットを示す（濃度範囲：ヒトＦｃγＲ１Ａでは０．２ｎＭ～１００ｎＭ）。図３９Ｂは、ＦｃγＲ３Ａ Ｖ１５８に対するＷＴ及び変異体の代表的なセンサーグラム及び応答プロットを示す（濃度範囲：ヒトＦｃγＲ３Ａ Ｖ１５８では１．９５ｎＭ～１０００ｎＭ）。図３９Ｃは、ヒトＣ１ｑに対するＷＴ及び変異体の代表的なセンサーグラム及び応答プロットを示す（濃度範囲：ヒトＣ１ｑでは０．４９ｎＭ～２５０ｎＭ）。全てのＩｇＧ１抗体－Ｆｃ変異体は、ＷＴと比較してＦｃγ受容体への結合を阻害し、残留結合はほとんど測定されなかった。低い残留結合が測定されたため、全てのＩｇＧ１抗体－Ｆｃ変異体は、ＷＴと比較してヒトＣ１ｑへの結合を阻害する。
８．３５．実施例３５：示差走査熱量測定－修飾抗体の融解温度
表３２に示すように、操作した抗体ＣＨ２ドメインの熱安定性を、熱量測定を使用して比較した。熱量測定は、示差走査マイクロ熱量計（Ｎａｎｏ ＤＳＣ，ＴＡ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で実施した。セル容積は、０．５ｍｌであり、加熱速度は１℃／分であった。全てのタンパク質は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用した。各タンパク質のモル熱容量を、タンパク質を除去した同一の緩衝液を含む二重サンプルと比較することによって推定した。部分モル熱容量及び融解曲線を、標準手順を使用して分析した。サーモグラムをベースライン補正し、濃度を正規化した。サイレントバージョンＬＡＬＡＳＫＰＡ（７０℃）は、ＤＡＮＡＰＡ（６２℃）と比較して大幅に優れたＴｍを示す。
表３２に示すように、操作した抗体ＣＨ２ドメインの熱安定性を、熱量測定を使用して比較した。熱量測定は、示差走査マイクロ熱量計（Ｎａｎｏ ＤＳＣ，ＴＡ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で実施した。セル容積は、０．５ｍｌであり、加熱速度は１℃／分であった。全てのタンパク質は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用した。各タンパク質のモル熱容量を、タンパク質を除去した同一の緩衝液を含む二重サンプルと比較することによって推定した。部分モル熱容量及び融解曲線を、標準手順を使用して分析した。サーモグラムをベースライン補正し、濃度を正規化した。サイレントバージョンＬＡＬＡＳＫＰＡ（７０℃）は、ＤＡＮＡＰＡ（６２℃）と比較して大幅に優れたＴｍを示す。
ＩｇＧ１抗ＣＤ３抗体及びＦｃ変異体の捕捉後の凝集傾向
サイズ排除クロマトグラフィー測定を実施して、ＩｇＧ１抗体及びＦｃ修飾誘導体の凝集傾向（％ＨＭＷ）を評価した。作製して精製した抗ＣＤ３抗体を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４で平衡化した分析用サイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＳＥＣ ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用した。結果を表３３に要約する。
サイズ排除クロマトグラフィー測定を実施して、ＩｇＧ１抗体及びＦｃ修飾誘導体の凝集傾向（％ＨＭＷ）を評価した。作製して精製した抗ＣＤ３抗体を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４で平衡化した分析用サイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＳＥＣ ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用した。結果を表３３に要約する。
８．３６．実施例３６：抗ＣＤ３ ＮＦＡＴシグナル伝達アッセイ
活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）経路についてのＪｕｒｋａｔレポーター遺伝子アッセイ（ＲＧＡ）を、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴルシフェラーゼ処理（ＪＮＬ）細胞及びＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ，ＴＩＢ２０２）を使用して実施した。ＴＨＰ－１細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で６時間、５：１のエフェクターと腫瘍の比率で、図示した様々な濃度の各サンプルと共にコインキュベートした。等量のＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１１０）を培養液量に加えた。プレートを２分間振盪し、次に、光から保護して更に８分間インキュベートした。ＪＮＬ＋ＴＨＰ＋ＩＦＮｇ実験では、ＴＨＰ－１細胞を、共培養前に３７℃、５％ＣＯ２で、１００μ／ｍＬ ＩＦＮｇで４８時間前処理した。ＩＦＮｇ刺激により、ＦｃγＲＩ発現が増加する。ルシフェラーゼ活性を、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で定量した。データを分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して５パラメータ－ロジスティック曲線に当てはめた。
活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）経路についてのＪｕｒｋａｔレポーター遺伝子アッセイ（ＲＧＡ）を、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴルシフェラーゼ処理（ＪＮＬ）細胞及びＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ，ＴＩＢ２０２）を使用して実施した。ＴＨＰ－１細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２で６時間、５：１のエフェクターと腫瘍の比率で、図示した様々な濃度の各サンプルと共にコインキュベートした。等量のＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１１０）を培養液量に加えた。プレートを２分間振盪し、次に、光から保護して更に８分間インキュベートした。ＪＮＬ＋ＴＨＰ＋ＩＦＮｇ実験では、ＴＨＰ－１細胞を、共培養前に３７℃、５％ＣＯ２で、１００μ／ｍＬ ＩＦＮｇで４８時間前処理した。ＩＦＮｇ刺激により、ＦｃγＲＩ発現が増加する。ルシフェラーゼ活性を、ＥｎＶｉｓｉｏｎプレートリーダー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）で定量した。データを分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して５パラメータ－ロジスティック曲線に当てはめた。
両方の処理において、ＷＴは、最大のＮＦＡＴ活性を示した。全てのサイレンシング突然変異セットは、全体としてＮＦＡＴ活性化の大幅な抑制を示した。ＩＦＮｇを使用せずに実施したＲＧＡでは（図４０Ａ）、ＤＡＰＡを除く全てのサイレンシング突然変異セットが、同等のＴ細胞活性化を示した。ＴＨＰ－１細胞をＩＦＮｇとプレインキュベートした場合（図４０Ｂ）、突然変異セットはより低い活性を示し、強力なＦｃサイレンシングを実証したが、ＤＡＰＡ、ＬＡＬＡＰＡ及びＧＡＤＡＰＡにはある程度の活性が残った。
８．３７．実施例３７：修飾抗体の発現及び精製
以下に記載する実験では、表３４に示す抗体を使用した。設計した分子をＨＥＫ２９３哺乳動物細胞で発現させ、プロテインＡ及びサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。簡単に述べると、重鎖及び軽鎖ＤＮＡを、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で合成し、制限酵素ライゲーションに基づくクローニング技術を使用して哺乳動物発現ベクターにクローニングした。得られたプラスミドをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。抗体の一過性発現のために、各鎖の等量のベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ；カタログ番号２４７６５ Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して懸濁液適応ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。典型的には、１ｍｌ当たり１～２Ｍｉｏ細胞の密度で懸濁した細胞１００ｍｌを、第１の重鎖をコードする３３μｇの発現ベクター、第２の重鎖をコードする３３μｇの発現ベクター及び軽鎖をコードする３３μｇの発現ベクターを含むＤＮＡでトランスフェクトした。次に、組換え発現ベクターを宿主細胞に導入し、０．１％プルロン酸、４ｍＭグルタミン及び０．２５μｇ／ｍｌ抗生物質を補充した培養培地（ＨＥＫ、無血清培地）への分泌を可能にするために細胞を７日間にわたって更に培養することによってコンストラクトを作製した。
以下に記載する実験では、表３４に示す抗体を使用した。設計した分子をＨＥＫ２９３哺乳動物細胞で発現させ、プロテインＡ及びサイズ排除クロマトグラフィーを使用して精製した。簡単に述べると、重鎖及び軽鎖ＤＮＡを、ＧｅｎｅＡｒｔ（Ｒｅｇｅｎｓｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で合成し、制限酵素ライゲーションに基づくクローニング技術を使用して哺乳動物発現ベクターにクローニングした。得られたプラスミドをＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。抗体の一過性発現のために、各鎖の等量のベクターを、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ；カタログ番号２４７６５ Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して懸濁液適応ＨＥＫ２９３Ｔ細胞にコトランスフェクトした。典型的には、１ｍｌ当たり１～２Ｍｉｏ細胞の密度で懸濁した細胞１００ｍｌを、第１の重鎖をコードする３３μｇの発現ベクター、第２の重鎖をコードする３３μｇの発現ベクター及び軽鎖をコードする３３μｇの発現ベクターを含むＤＮＡでトランスフェクトした。次に、組換え発現ベクターを宿主細胞に導入し、０．１％プルロン酸、４ｍＭグルタミン及び０．２５μｇ／ｍｌ抗生物質を補充した培養培地（ＨＥＫ、無血清培地）への分泌を可能にするために細胞を７日間にわたって更に培養することによってコンストラクトを作製した。
次に、作製したコンストラクトを、免疫親和性クロマトグラフィーを使用して無細胞上清から精製した。ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４で平衡化したＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、液体クロマトグラフィーシステム（Ａｅｋｔａ ｐｕｒｅ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｓｙｓｔｅｍ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して濾過した馴化培地でインキュベートした。この樹脂をＰＢＳ ｐＨ７．４で洗浄した後、コンストラクトを溶出緩衝液（５０ｍＭクエン酸塩、９０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ２．７）で溶出した。捕捉後、溶出したタンパク質を１Ｍ ＴＲＩＳ ｐＨ１０．０溶液を使用してｐＨ中和し、サイズ排除クロマトグラフィー技術（ＨｉＰｒｅｐ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １６／６０，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して精製した。精製したタンパク質を、最終的にＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）で製剤化した。
８．３８．実施例３８：修飾抗体の生物物理学的特性：ＳＰＲ－実施例３７の修飾抗体のヒトＦｃγ受容体１Ａへの結合
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を実施して、ＷＴ及び抗体－Ｆｃ変異体に対するヒト活性化受容体ＦｃγＲ１Ａの相互作用を分析した。結合キネティクス及びその相対的な結合親和性を調べた。結合親和性は、抗体と抗原との間の相互作用の重要な特性である。平行解離定数（ＫＤ）は、相互作用の強さ、すなわち平衡状態で形成される抗体－抗原複合体の量を定義する。抗体特性の知識は、最適な治療用抗体候補を選択する際に不可欠であるだけでなく、インビボでの挙動を理解し、細胞性免疫応答を潜在的に予測するためにも重要である。その目的は、モノクローナル抗体治療薬の安全性を向上させることを期待して、エフェクター機能を低減又は排除するために、Ｆｃγ受容体にほとんど結合しない抗体変異体を作製することである。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）実験を実施して、ＷＴ及び抗体－Ｆｃ変異体に対するヒト活性化受容体ＦｃγＲ１Ａの相互作用を分析した。結合キネティクス及びその相対的な結合親和性を調べた。結合親和性は、抗体と抗原との間の相互作用の重要な特性である。平行解離定数（ＫＤ）は、相互作用の強さ、すなわち平衡状態で形成される抗体－抗原複合体の量を定義する。抗体特性の知識は、最適な治療用抗体候補を選択する際に不可欠であるだけでなく、インビボでの挙動を理解し、細胞性免疫応答を潜在的に予測するためにも重要である。その目的は、モノクローナル抗体治療薬の安全性を向上させることを期待して、エフェクター機能を低減又は排除するために、Ｆｃγ受容体にほとんど結合しない抗体変異体を作製することである。
全てのＳＰＲ緩衝液は、脱イオン水を使用して調製した。サンプルを、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ－２０を含むランニング緩衝液ＰＢＳ ｐＨ７．４で調製した。ＳＰＲ測定値を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００制御ソフトウェアバージョン２．０．１によって制御されるＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で測定した。
表面プラズモン共鳴を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００を使用して実施し、ヒトＦｃγＲ１Ａに対する抗体ＷＴ及び変異体の結合親和性を評価した。
抗体は、ＣＭ５センサーチップ上に共有結合で固定し、Ｆｃγ受容体１Ａは、溶液中の分析物としての役割を果たした（図３８）。抗体を１０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ４で希釈し、標準的なアミンカップリング手順を適用してＣＭ５センサーチップ上に約９５０共鳴単位（ＲＵ）の密度で固定した。フローセル１は、参照としての役割を果たすように固定したブランクとした。動態結合データを、ヒトＦｃγ受容体１Ａの１：２希釈系列の３０μｌ／分の流速及び２５℃の温度での全てのフローセルへのその後の注入によって収集した。Ｆｃγ受容体をランニング緩衝液で０．２ｎＭ～２５ｎＭの範囲の濃度に希釈した。各測定サイクル後に、２０ｍＭグリシンｐＨ２．０溶液を使用してチップ表面を再生した。データの評価中の二重参照を可能にするためにゼロ濃度サンプル（ブランクラン）を測定した。
データを、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して評価した。生データを二重参照した。すなわち、測定フローセルの応答を参照フローセルの応答に対して補正し、第２のステップでブランク注入の応答を減算した。次に、１：１動態結合モデルを適用することによってセンサーグラムを適合させて解離平衡定数を計算した。加えて、実験中に到達した最大応答を監視した。最大応答は、飽和時の応答の観点から表面の結合能力を表す。
これらの相互作用を要約した最大応答値を表３５に示す。
ＦｃγＲ１Ａに対する各変異体のＳＰＲ Ｂｉａｃｏｒｅ結合センサーグラムを図４１に示した。
低い残留結合が測定されたため、全ての変異体は、ＷＴと比較してＦｃγ受容体への結合を阻害する。
示差走査熱量測定－修飾抗体の融解温度
改変抗体ＣＨ２ドメインの熱安定性を、表３６に示すような熱量測定を用いて比較した。熱量測定を、示差走査微量熱量測定（Ｎａｎｏ ＤＳＣ，ＴＡ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で実施した。細胞体積は１ｍｌであり、加熱速度は１℃／分であった。全てのタンパク質は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用した。各タンパク質のモル熱容量を、タンパク質を取り除いた同一緩衝液を含有する２通りのサンプルとの比較によって評価した。部分モル熱容量及び融解曲線を、標準的手順を用いて分析した。サーモグラムをベースライン補正し、濃度を正規化した。サイレントバージョンＬＡＬＡＳＫＰＡ（６８℃）は、ＤＡＮＡＰＡ（５７℃）と比較して、有意により良好なＴｍを示す。
改変抗体ＣＨ２ドメインの熱安定性を、表３６に示すような熱量測定を用いて比較した。熱量測定を、示差走査微量熱量測定（Ｎａｎｏ ＤＳＣ，ＴＡ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）で実施した。細胞体積は１ｍｌであり、加熱速度は１℃／分であった。全てのタンパク質は、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中、１ｍｇ／ｍｌの濃度で使用した。各タンパク質のモル熱容量を、タンパク質を取り除いた同一緩衝液を含有する２通りのサンプルとの比較によって評価した。部分モル熱容量及び融解曲線を、標準的手順を用いて分析した。サーモグラムをベースライン補正し、濃度を正規化した。サイレントバージョンＬＡＬＡＳＫＰＡ（６８℃）は、ＤＡＮＡＰＡ（５７℃）と比較して、有意により良好なＴｍを示す。
Ｆｃ変異体の捕捉後の凝集傾向
サイズ排除クロマトグラフィー測定を実施して、ＷＴ及びＦｃ修飾誘導体の凝集傾向（％ＨＭＷ）を評価した。作製して精製した抗体を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４で平衡化した分析用サイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＳＥＣ ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用した。結果を表３７に要約する。
サイズ排除クロマトグラフィー測定を実施して、ＷＴ及びＦｃ修飾誘導体の凝集傾向（％ＨＭＷ）を評価した。作製して精製した抗体を、ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４で平衡化した分析用サイズ排除クロマトグラフィーカラム（ＳＥＣ ２００，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に適用した。結果を表３７に要約する。
８．３９．実施例３９：抗ＣＤ３ ＮＦＡＴシグナル伝達アッセイ
活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）経路についてのＪｕｒｋａｔレポーター遺伝子アッセイ（ＲＧＡ）を、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴルシフェラーゼ処理（ＪＮＬ）細胞及びＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ，ＴＩＢ２０２）を使用して実施した。ＴＨＰ－１細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。細胞を、５：１のエフェクターと腫瘍細胞の比率で、３７℃、５％ＣＯ２で６時間、図示した様々な濃度の各サンプルと共にコインキュベートした。等量のＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１２０）を培養液量に加えた。プレートを２分間振盪し、次に、光から保護して更に８分間インキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴプレートリーダーで定量した。データを分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して４パラメータ－ロジスティック曲線に当てはめた。
活性化Ｔ細胞核因子（ＮＦＡＴ）経路についてのＪｕｒｋａｔレポーター遺伝子アッセイ（ＲＧＡ）を、Ｊｕｒｋａｔ ＮＦＡＴルシフェラーゼ処理（ＪＮＬ）細胞及びＴＨＰ－１細胞（ＡＴＣＣ，ＴＩＢ２０２）を使用して実施した。ＴＨＰ－１細胞は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。細胞を、５：１のエフェクターと腫瘍細胞の比率で、３７℃、５％ＣＯ２で６時間、図示した様々な濃度の各サンプルと共にコインキュベートした。等量のＯＮＥ－Ｇｌｏ（商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｅ６１２０）を培養液量に加えた。プレートを２分間振盪し、次に、光から保護して更に８分間インキュベートした。ルシフェラーゼ活性を、Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴプレートリーダーで定量した。データを分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して４パラメータ－ロジスティック曲線に当てはめた。
要約すると、ＷＴは、最大のＮＦＡＴ活性を示した。全てのサイレンシング突然変異セットは、ＮＦＡＴ活性化の大幅な抑制を示した。ＩＦＮｇを使用せずに実施したＲＧＡでは（図４２）、ＤＡＮＡＰＡを除く全てのサイレンシング突然変異セットが同等のＴ細胞活性化を示した。
８．４０．実施例４０：ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１変異体
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１と比較して反対のＦｃ領域にノブ・イントゥ・ホール突然変異を含むＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１変異体を作製した。変異体のアミノ酸配列を表３８に示す。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１と比較して反対のＦｃ領域にノブ・イントゥ・ホール突然変異を含むＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１変異体を作製した。変異体のアミノ酸配列を表３８に示す。
８．４１．実施例４１：ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１変異体
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１の更なるＦｃ変異体を実施例３７に記載の方法に従って設計し、発現させ、精製する。変異体のアミノ酸配列を表３９に記載する。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１の更なるＦｃ変異体を実施例３７に記載の方法に従って設計し、発現させ、精製する。変異体のアミノ酸配列を表３９に記載する。
８．４２．実施例４２：マウスにおけるイアナルマブによる正常Ｂ細胞の枯渇
マウスにおける健常Ｂ細胞レベルに対するイアナルマブの効果を、反復用量毒性試験において評価した。
マウスにおける健常Ｂ細胞レベルに対するイアナルマブの効果を、反復用量毒性試験において評価した。
８．４２．１．材料及び方法
ＣＤ－１マウスに、０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇのイアナルマブを静脈内投与で１３週にわたり毎週投与し、その後、１１週の回復期間を設けた。
ＣＤ－１マウスに、０ｍｇ／ｋｇ又は１００ｍｇ／ｋｇのイアナルマブを静脈内投与で１３週にわたり毎週投与し、その後、１１週の回復期間を設けた。
８．４２．２．結果
１００ｍｇ／ｋｇのイアナルマブを投与したＣＤ－１マウスにおいて、７０～９０％の成熟Ｂ細胞枯渇を認めた。Ｂ細胞レベルは、回復期間中に回復した。
１００ｍｇ／ｋｇのイアナルマブを投与したＣＤ－１マウスにおいて、７０～９０％の成熟Ｂ細胞枯渇を認めた。Ｂ細胞レベルは、回復期間中に回復した。
８．４３．実施例４３：カニクイザルにおけるイアナルマブによる正常Ｂ細胞の枯渇
カニクイザルにおいて、増加する単回静脈内用量範囲設定（ＤＲＦ）、毒性及びＴＫ／ＰＤ試験及び３回の反復用量毒性試験を、イアナルマブを用いて実施した。試験において、Ｂ細胞レベルを評価した。
カニクイザルにおいて、増加する単回静脈内用量範囲設定（ＤＲＦ）、毒性及びＴＫ／ＰＤ試験及び３回の反復用量毒性試験を、イアナルマブを用いて実施した。試験において、Ｂ細胞レベルを評価した。
単回用量試験において、０．４ｍｇ／ｋｇの投与量及びより高い投与量のイアナルマブにより、Ｂ細胞の枯渇が誘導された。イアナルマブは、十分な耐容性があった。
３回の反復用量試験にわたり、全ての投与量レベルで、Ｂ細胞枯渇が認められた。
まとめると、マウス及びカニクイザル試験は、イアナルマブがインビボで健常Ｂ細胞を枯渇させることを示す。ヒトにおける健常Ｂ細胞に対するイアナルマブの類似効果が予想される。
８．４４．実施例４４：Ｂ細胞滴定によるＢ細胞を枯渇させるＰＢＭＣ－Ｋａｒｐａｓ ４２２又はＴ細胞－Ｋａｒｐａｓ ４２２の共培養物からのインビトロサイトカイン放出
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１によって誘導されるサイトカイン分泌に対するＢ細胞の影響を、増加するＢ細胞を、Ｂ細胞を枯渇させるＰＢＭＣ－Ｋａｒｐａｓ ４２２又はＴ細胞－Ｋａｒｐａｓ ４２２の共培養系に加えることによって評価した。
ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１によって誘導されるサイトカイン分泌に対するＢ細胞の影響を、増加するＢ細胞を、Ｂ細胞を枯渇させるＰＢＭＣ－Ｋａｒｐａｓ ４２２又はＴ細胞－Ｋａｒｐａｓ ４２２の共培養系に加えることによって評価した。
８．４４．１．材料及び方法
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＫａｒｐａｓ ４２２細胞を、９６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１８７５－０８５）、１０％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ，Ｃａｔ＃１５００－５００）、１％Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃２５８３０－０８１）、１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１１４０－０５０）、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１５０７００６３）、１％ヘペス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１５６３００８０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１３６０－０７０）、０．１％ベータメルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃２１９８５－０２３）］に蒔いた。２つのロイコパックドナー（Ｈｅｍａｃａｒｅ）から予め単離及び凍結保存された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、Ｂ細胞を、ＲＥＡｌｅａｓｅ ＣＤ１９マイクロビーズキット［Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｃａｔ＃１３０－１１７－０３４］を使用し、製造業者のプロトコルに従い、ポジティブ選択によって単離した。フロースルー中の細胞は、Ｂ細胞枯渇ＰＢＭＣ画分を表し、それは２．５：１のＥ：Ｔ比でＫａｒｐａｓ ４２２細胞と共培養させたものである。次に、増加する単離されたＢ細胞を、共培養物に添加した。１０ｎＭ～０．００００１ｎＭの範囲のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１（Ｈ変異体）抗体の希釈系列を、細胞に添加し、プレートを、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で４８時間インキュベートした。４８時間後、細胞上清を収集し、５倍希釈し、多重ＥＬＩＳＡを、製造業者の使用説明書に従い、Ｖ－ＰＬＥＸ炎症誘発性パネル１ヒトキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ＃Ｋ１５０４９Ｄ－４）を使用して実施した。アッセイをもう１回反復する際、単離されたＴ細胞とＫａｒｐａｓ ４２２細胞との間の共培養を１：１のＥ：Ｔ比でセットアップし、セットアップの残りをそのままにした。
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＫａｒｐａｓ ４２２細胞を、９６ウェルプレート内のＴ細胞培地（ＴＣＭ）［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１８７５－０８５）、１０％ＦＢＳ（Ｓｅｒａｄｉｇｍ，Ｃａｔ＃１５００－５００）、１％Ｌ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃２５８３０－０８１）、１％非必須アミノ酸（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１１４０－０５０）、１％Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１５０７００６３）、１％ヘペス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１５６３００８０）、ピルビン酸ナトリウム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１３６０－０７０）、０．１％ベータメルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃２１９８５－０２３）］に蒔いた。２つのロイコパックドナー（Ｈｅｍａｃａｒｅ）から予め単離及び凍結保存された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、Ｂ細胞を、ＲＥＡｌｅａｓｅ ＣＤ１９マイクロビーズキット［Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｃａｔ＃１３０－１１７－０３４］を使用し、製造業者のプロトコルに従い、ポジティブ選択によって単離した。フロースルー中の細胞は、Ｂ細胞枯渇ＰＢＭＣ画分を表し、それは２．５：１のＥ：Ｔ比でＫａｒｐａｓ ４２２細胞と共培養させたものである。次に、増加する単離されたＢ細胞を、共培養物に添加した。１０ｎＭ～０．００００１ｎＭの範囲のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１（Ｈ変異体）抗体の希釈系列を、細胞に添加し、プレートを、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で４８時間インキュベートした。４８時間後、細胞上清を収集し、５倍希釈し、多重ＥＬＩＳＡを、製造業者の使用説明書に従い、Ｖ－ＰＬＥＸ炎症誘発性パネル１ヒトキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ＃Ｋ１５０４９Ｄ－４）を使用して実施した。アッセイをもう１回反復する際、単離されたＴ細胞とＫａｒｐａｓ ４２２細胞との間の共培養を１：１のＥ：Ｔ比でセットアップし、セットアップの残りをそのままにした。
８．４４．２．結果
サイトカイン分泌における用量依存性の増加が全ての共培養条件下で認められた（図４３Ａ～４３Ｂ）。ＩＬ－６及びＴＮＦαは、ＣＲＳに対する重要な寄与体であることが文献に記載されている（Ｊｉ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１１：ｅａａｘ８８６１）。Ｂ細胞を伴わない共培養条件と比較して、分泌されるＩＬ－６（図４３Ａ）及びＴＮＦα（図４３Ｂ）の絶対量の増加が、増加するＢ細胞の添加と共に認められた。
サイトカイン分泌における用量依存性の増加が全ての共培養条件下で認められた（図４３Ａ～４３Ｂ）。ＩＬ－６及びＴＮＦαは、ＣＲＳに対する重要な寄与体であることが文献に記載されている（Ｊｉ ｅｔ ａｌ．，２０１９，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．１１：ｅａａｘ８８６１）。Ｂ細胞を伴わない共培養条件と比較して、分泌されるＩＬ－６（図４３Ａ）及びＴＮＦα（図４３Ｂ）の絶対量の増加が、増加するＢ細胞の添加と共に認められた。
８．４５．実施例４５：Ｂ細胞リンパ腫細胞株でのＢＡＦＦ－Ｒの発現
リンパ腫細胞株のパネルに対して、フローサイトメトリー分析を実施し、ＣＤ１９及びＢＡＦＦ－Ｒの表面発現を確認した。
リンパ腫細胞株のパネルに対して、フローサイトメトリー分析を実施し、ＣＤ１９及びＢＡＦＦ－Ｒの表面発現を確認した。
８．４５．１．材料及び方法
ルシフェラーゼ化されたＤＯＨＨ－２、Ｋａｒｐａｓ ４２２細胞、ＯＣＩＬＹ－１９、ＳＵＤＨＬ－４及びＴｏｌｅｄｏ細胞でのＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ１９の細胞表面発現を、ＡＰＣ標識抗ＢＡＦＦ－Ｒ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ＃３１６９１６）及びＦＩＴＣ標識抗ＣＤ１９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ＃３０２２０６）抗体を用いて、フローサイトメトリーによって測定した。データは、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏで取得し、ＦｌｏｗＪｏを用いて分析した。
ルシフェラーゼ化されたＤＯＨＨ－２、Ｋａｒｐａｓ ４２２細胞、ＯＣＩＬＹ－１９、ＳＵＤＨＬ－４及びＴｏｌｅｄｏ細胞でのＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ１９の細胞表面発現を、ＡＰＣ標識抗ＢＡＦＦ－Ｒ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ＃３１６９１６）及びＦＩＴＣ標識抗ＣＤ１９（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔ＃３０２２０６）抗体を用いて、フローサイトメトリーによって測定した。データは、ＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏで取得し、ＦｌｏｗＪｏを用いて分析した。
８．４５．２．結果
様々な細胞株が異なるレベルのＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ１９の発現を有した（図４４Ａ．１～４４Ｅ．２）。Ｋａｒｐａｓ ４２２細胞は、ＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ１９の両方を高レベルで発現することが見出された（図４４Ｂ．１～４４Ｂ．２）。
様々な細胞株が異なるレベルのＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ１９の発現を有した（図４４Ａ．１～４４Ｅ．２）。Ｋａｒｐａｓ ４２２細胞は、ＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ１９の両方を高レベルで発現することが見出された（図４４Ｂ．１～４４Ｂ．２）。
８．４６．実施例４６：ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１－ＶＡＹ７３６抗腫瘍の組み合わせ活性
抗ＢＡＦＦ－Ｒ抗体及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１抗体の組み合わせた抗腫瘍活性を、Ｋａｒｐａｓ ４２２細胞をＢ細胞枯渇ＰＢＭＣと共培養することによって評価した。
抗ＢＡＦＦ－Ｒ抗体及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１抗体の組み合わせた抗腫瘍活性を、Ｋａｒｐａｓ ４２２細胞をＢ細胞枯渇ＰＢＭＣと共培養することによって評価した。
８．４６．１．材料及び方法
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＫａｒｐａｓ ４２２細胞を、９６ウェルプレート内のＮＫ培地（ＮＫＭ）［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１８３５０３０）、１０％Ｕｌｔｒａ ｌｏｗ ＩｇＧ ＦＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃Ａ３３８１９０１）、１％ヘペス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１５６３００８０）、０．１％ベータメルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃２１９８５－０２３）］に蒔いた。２つのロイコパックドナー（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から予め単離及び凍結保存された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、Ｂ細胞を、ＲＥＡｌｅａｓｅ ＣＤ１９マイクロビーズキット［Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｃａｔ＃１３０－１１７－０３４］を使用し、製造業者のプロトコルに従い、ポジティブ選択によって枯渇させた。フロースルー中の細胞は、Ｂ細胞枯渇ＰＢＭＣ画分を表し、それは２０：１のＥ：Ｔ比でＫａｒｐａｓ ４２２細胞と共培養させたものである。１０００ｎｇ／ｍｌ～０．０１ｎｇ／ｍｌの範囲の抗ＢＡＦＦ－Ｒ抗体ＶＡＹ７３６又は非標的化対照抗体（Ａｆｕｃ）の希釈系列を細胞に添加し、プレートを、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で２４時間インキュベートした。２４時間後、０．１ｎＭ～０．０００１ｎＭの範囲のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１ Ａｂ（Ｈ変異体）又はＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ抗体の希釈系列を細胞に添加し、プレートを、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で更に４８時間インキュベートした。インキュベーションの終了時、ＢｒｉｇｈｔＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ２６５０）をプレートに添加し、シェーカー上で５分間のインキュベーション後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解を、以下の式：
特異的溶解（％）＝（１－（サンプル発光／平均最大発光））＊１００
を用いて計算した。
ホタルルシフェラーゼを安定に発現するＫａｒｐａｓ ４２２細胞を、９６ウェルプレート内のＮＫ培地（ＮＫＭ）［ＲＰＭＩ－１６４０（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１１８３５０３０）、１０％Ｕｌｔｒａ ｌｏｗ ＩｇＧ ＦＢＳ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃Ａ３３８１９０１）、１％ヘペス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃１５６３００８０）、０．１％ベータメルカプトエタノール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ＃２１９８５－０２３）］に蒔いた。２つのロイコパックドナー（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から予め単離及び凍結保存された末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を解凍し、Ｂ細胞を、ＲＥＡｌｅａｓｅ ＣＤ１９マイクロビーズキット［Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｃａｔ＃１３０－１１７－０３４］を使用し、製造業者のプロトコルに従い、ポジティブ選択によって枯渇させた。フロースルー中の細胞は、Ｂ細胞枯渇ＰＢＭＣ画分を表し、それは２０：１のＥ：Ｔ比でＫａｒｐａｓ ４２２細胞と共培養させたものである。１０００ｎｇ／ｍｌ～０．０１ｎｇ／ｍｌの範囲の抗ＢＡＦＦ－Ｒ抗体ＶＡＹ７３６又は非標的化対照抗体（Ａｆｕｃ）の希釈系列を細胞に添加し、プレートを、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で２４時間インキュベートした。２４時間後、０．１ｎＭ～０．０００１ｎＭの範囲のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１ Ａｂ（Ｈ変異体）又はＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ抗体の希釈系列を細胞に添加し、プレートを、５％ＣＯ２、３７℃のインキュベーター内で更に４８時間インキュベートした。インキュベーションの終了時、ＢｒｉｇｈｔＧｌｏルシフェラーゼ基質（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｅ２６５０）をプレートに添加し、シェーカー上で５分間のインキュベーション後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーで発光を測定した。パーセント特異的溶解を、以下の式：
特異的溶解（％）＝（１－（サンプル発光／平均最大発光））＊１００
を用いて計算した。
８．４６．２．結果
異なるドナーからの細胞は、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１に対する異なる感受性を有し、そのため、異なる濃度のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１をＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＶＡＹ７３６の組み合わせの評価のために選択した。それぞれの場合、最大下濃度のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１を組み合わせの評価のために選択した。ＶＡＹ７３６及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１抗体の組み合わせは、対照条件（抗ＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（アイソタイプ対照）抗体の組み合わせ又はアイソタイプ及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１抗体の組み合わせのいずれか）より大きい抗腫瘍活性を示した（図４５Ａ～４５Ｃ）。
異なるドナーからの細胞は、ＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１に対する異なる感受性を有し、そのため、異なる濃度のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１をＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１及びＶＡＹ７３６の組み合わせの評価のために選択した。それぞれの場合、最大下濃度のＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１を組み合わせの評価のために選択した。ＶＡＹ７３６及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１抗体の組み合わせは、対照条件（抗ＢＡＦＦ－Ｒ及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１Ｃ（アイソタイプ対照）抗体の組み合わせ又はアイソタイプ及びＣＤ３ｈｉ ＴＳＰ１抗体の組み合わせのいずれか）より大きい抗腫瘍活性を示した（図４５Ａ～４５Ｃ）。
８．４７．実施例４７：ＶＡＹ７３６はＤＬＢＣＬモデルにおける腫瘍増殖を遅くする
インビボＤＬＢＣＬモデルにおけるＶＡＹ７３６の効果を評価するための試験を実施した。すなわち、ＤＬＢＣＬ細胞株ＳＵＤＨＬ４を、ＳＣＩＤマウスに皮下移植し、次に毎週、５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇのＶＡＹ７３６で静脈内処置した。媒体及びリツキシマブを対照として使用した。図４６Ａ～４６Ｃに示すとおり、ＶＡＹ７３６処置により、経時的に収集された腫瘍体積測定による評価として、モデルにおける腫瘍増殖が媒体対照と比較して有意に遅くなった。
インビボＤＬＢＣＬモデルにおけるＶＡＹ７３６の効果を評価するための試験を実施した。すなわち、ＤＬＢＣＬ細胞株ＳＵＤＨＬ４を、ＳＣＩＤマウスに皮下移植し、次に毎週、５ｍｇ／ｋｇ又は５０ｍｇ／ｋｇのＶＡＹ７３６で静脈内処置した。媒体及びリツキシマブを対照として使用した。図４６Ａ～４６Ｃに示すとおり、ＶＡＹ７３６処置により、経時的に収集された腫瘍体積測定による評価として、モデルにおける腫瘍増殖が媒体対照と比較して有意に遅くなった。
９．特定の実施形態、参考文献の引用
様々な特定の実施形態が例示及び説明されている一方、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更形態がなされ得ることが理解されるであろう。
様々な特定の実施形態が例示及び説明されている一方、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な変更形態がなされ得ることが理解されるであろう。
本開示は、以下に記載される番号付けされた実施形態によって例示される。
１．（ａ）抗ＣＤ１９剤；及び
（ｂ）Ｂ細胞標的化剤
を含む組み合わせ。
２．抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９結合分子である、実施形態１の組み合わせ。
３．ＣＤ１９結合分子は、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
４．ＣＤ１９結合分子は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
５．ＣＤ１９結合分子は、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
６．ＣＤ１９結合分子は、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
７．ＣＤ１９結合分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、実施形態３～６のいずれか１つの組み合わせ。
８．ＣＤ１９結合分子は、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態３～７のいずれか１つの組み合わせ。
９．ＣＤ１９結合分子は、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１０．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１１．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１２．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１３．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、実施形態９～１２のいずれか１つの組み合わせ。
１４．ＣＤ１９結合分子は、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態９～１３のいずれか１つの組み合わせ。
１５．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｈ１として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｈ２Ａ、ＨＤ１９－Ｈ２Ｂ、ＣＤ１９－Ｈ２Ｃ及びＣＤ１９－Ｈ２Ｄとして指定されるＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｈ３として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｌ１として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｌ２として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｌ２３として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ３
を含む、実施形態２の組み合わせ。
１６．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）表１ＣにおいてＣＤ１９－ＶＨＡ、ＣＤ１９－ＶＨＢ、ＣＤ１９－ＶＨＣ及びＣＤ１９－ＶＨＤとして指定されるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ；及び
（ｂ）表１ＣにおいてＣＤ１９－ＶＬＡ及びＣＤ１９－ＶＬＢとして指定されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ
を含む、実施形態１５の組み合わせ。
１７．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ａ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
１８．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＡのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＡのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
１９．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｂ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２０．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＢのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
２１．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｃ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２２．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＣのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
２３．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｄ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２４．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＤのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
２５．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２６．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ２のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２７．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ３のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２８．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２９．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３０．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３１．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ７のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３２．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ８のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３３．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３４．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１０のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３５．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３６．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１２のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３７．ＣＤ１９結合分子は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２又は単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）を含む、実施形態２～２４のいずれか１つの組み合わせ。
３８．ＣＤ１９結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインを含む、実施形態３７の組み合わせ。
３９．ＣＤ１９結合分子は、単一特異性結合分子である、実施形態２～３８のいずれか１つの組み合わせ。
４０．ＣＤ１９結合分子は、多重特異性結合分子（ＭＢＭ）である、実施形態２～３８のいずれか１つの組み合わせ。
４１．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；及び
（ｂ）異なる標的分子に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）を含み、任意選択的に、標的分子は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素である、実施形態４０の組み合わせ。
４２．ＡＢＭ１は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態４１の組み合わせ。
４３．ＡＢＭ１は、Ｆａｂである、実施形態４２の組み合わせ。
４４．Ｆａｂは、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態４３の組み合わせ。
４５．ＡＢＭ１は、ｓｃＦｖである、実施形態４２の組み合わせ。
４６．ＡＢＭ１は、抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態４２の組み合わせ。
４７．ＡＢＭ２は、非免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態４１～４６のいずれか１つの組み合わせ。
４８．ＡＢＭ２は、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィボディ、ダルピン、アビマー、アンチカリン、リポカリン、センチリン、バーサボディ、ノッチン、アドネクチン、プロネクチン、アフィチン／ナノフィチン、アフィリン、アトリマー／テトラネクチン、二環状ペプチド、ｃｙｓ－ｋｎｏｔ、Ｆｎ３足場、Ｏｂｏｄｙ、Ｔｎ３、アフィマー、ＢＤ、アドヒロン、デュオカリン、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質、レペボディ又はフィノマーである、実施形態４７の組み合わせ。
４９．ＡＢＭ２は、免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態４１～４６のいずれか１つの組み合わせ。
５０．ＡＢＭ２は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態４９の組み合わせ。
５１．ＡＢＭ２は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態５０の組み合わせ。
５２．ＡＢＭ２は、ｓｃＦｖである、実施形態５０の組み合わせ。
５３．ＡＢＭ２は、Ｆａｂである、実施形態５０の組み合わせ。
５４．ＡＢＭ２は、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態５０の組み合わせ。
５５．ＡＢＭ２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合する、実施形態４１～５４のいずれか１つの組み合わせ。
５６．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＣＤ３である、実施形態５５の組み合わせ。
５７．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｈｉのＣＤＲ配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
５８．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｍｅｄのＣＤＲ配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
５９．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｌｏのＣＤＲ配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６０．ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けによって定義される、実施形態５７～５９のいずれか１つの組み合わせ。
６１．ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けによって定義される、実施形態５７～５９のいずれか１つの組み合わせ。
６２．ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けの組み合わせによって定義される、実施形態５７～５９のいずれか１つの組み合わせ。
６３．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｈｉの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６４．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｍｅｄの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６５．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｌｏの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６６．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－α、ＴＣＲ－β又はＴＣＲ－α／β二量体である、実施形態５５の組み合わせ。
６７．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－αである、実施形態６６の組み合わせ。
６８．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－βである、実施形態６６の組み合わせ。
６９．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－α／β二量体である、実施形態６６の組み合わせ。
７０．ＡＢＭ２は、ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列を含む、実施形態６６の組み合わせ。
７１．ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ番号付けによって定義される、実施形態７０の組み合わせ。
７２．ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けによって定義される、実施形態７０の組み合わせ。
７３．ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けの組み合わせによって定義される、実施形態７０の組み合わせ。
７４．ＡＢＭ２は、ＢＭＡ０３１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態７０の組み合わせ。
７５．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－γ、ＴＣＲ－δ又はＴＣＲ－γ／δ二量体である、実施形態５５の組み合わせ。
７６．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－γである、実施形態７５の組み合わせ。
７７．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－δである、実施形態７５の組み合わせ。
７８．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－γ／δ二量体である、実施形態７５の組み合わせ。
７９．ＡＢＭ２は、δＴＣＳ１のＣＤＲ配列を含む、実施形態７５の組み合わせ。
８０．δＴＣＳ１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ番号付けによって定義される、実施形態７９の組み合わせ。
８１．δＴＣＳ１のＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けによって定義される、実施形態７９の組み合わせ。
８２．δＴＣＳ１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けの組み合わせによって定義される、実施形態７９の組み合わせ。
８３．ＡＢＭ２は、δＴＣＳ１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態７９の組み合わせ。
８４．ＡＢＭ１は、ＡＢＭ２がその標的分子に結合されるのと同時にＣＤ１９に結合する能力がある、実施形態４１～８３のいずれか１つの組み合わせ。
８５．ＣＤ１９結合分子は、二重特異性結合分子（ＢＢＭ）である、実施形態４０～８４のいずれか１つのＣＤ１９結合分子。
８６．ＢＢＭは、二価である、実施形態８５の組み合わせ。
８７．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｂ～１Ｆで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態８６の組み合わせ。
８８．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｂで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
８９．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｃで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９０．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｄで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９１．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｅで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９２．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｆで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９３．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．１節においてＢ１と称される立体配置を有する、実施形態８７～９２のいずれか１つの組み合わせ。
９４．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．１節においてＢ２と称される立体配置を有する、実施形態８７～９２のいずれか１つの組み合わせ。
９５．ＣＤ１９結合分子は、三価である、実施形態８５の組み合わせ。
９６．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｇ～１Ｚで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態９５の組み合わせ。
９７．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｇで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
９８．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｈで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
９９．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｉで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１００．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｊで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０１．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｋで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０２．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｌで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０３．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｍで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０４．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｎで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０５．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｏで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０６．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｐで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０７．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｑで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０８．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｒで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０９．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｓで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１０．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｔで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１１．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｕで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１２．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｖで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１３．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｗで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１４．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｘで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１５．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｙで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１６．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｚで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１７．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ１と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１１８．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ２と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１１９．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ３と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２０．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ４と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２１．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ５と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２２．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ６と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２３．ＣＤ１９結合分子は、四価である、実施形態８５の組み合わせ。
１２４．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＡ～１ＡＨで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１２３の組み合わせ。
１２５．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＡで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２６．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＢで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２７．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＣで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２８．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＤで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２９．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＥで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３０．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＦで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３１．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＧで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３２．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＨで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３３．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３４．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ２と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３５．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ３と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３６．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ４と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３７．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ５と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３８．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ６と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３９．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ７と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４０．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ８と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４１．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ９と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４２．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１０と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４３．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１１と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４４．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１２と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４５．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１３と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４６．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１４と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４７．ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９以外の標的分子に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態４１～８４のいずれか１つの組み合わせ。
１４８．ＡＢＭ２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合し、及びＡＢＭ３は、（ｉ）ヒトＣＤ２、又は（ｉｉ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合する、実施形態１４７の組み合わせ。
１４９．三価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１５０．ＣＤ１９結合分子は、図２Ａ～２Ｐで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１４９の組み合わせ。
１５１．ＣＤ１９結合分子は、図２Ａで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５２．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｂで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｃで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５４．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｄで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５５．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｅで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５６．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｆで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５７．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｇで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５８．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｈで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５９．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｉで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６０．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｊで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６１．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｋで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６２．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｌで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｍで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６４．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｎで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６５．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｏで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６６．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｐで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６７．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ１と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１６８．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ２と称される立体配置を有する、施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１６９．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ３と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７０．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ４と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７１．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ５と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７２．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ６と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７３．ＣＤ１９結合分子は、四価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１７４．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｑ～２Ｓで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１７３の組み合わせ。
１７５．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｑで表される立体配置を有する、実施形態１７４の組み合わせ。
１７６．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｒで表される立体配置を有する、実施形態１７４の組み合わせ。
１７７．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｓで表される立体配置を有する、実施形態１７４の組み合わせ。
１７８．ＣＤ１９結合分子は、五価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１７９．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｔで表される立体配置を有する、実施形態１７８の組み合わせ。
１８０．ＣＤ１９結合分子は、六価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１８１．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｕ～２Ｖで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１８０の組み合わせ。
１８２．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｕで表される立体配置を有する、実施形態１８１の組み合わせ。
１８３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｖで表される立体配置を有する、実施形態１８１の組み合わせ。
１８４．ＡＢＭ１は、ＡＢＭ３がその標的分子に結合されるのと同時にＣＤ１９に結合する能力がある、実施形態１４７～１８３のいずれか１つの組み合わせ。
１８５．ＡＢＭ３は、ヒトＣＤ２に特異的に結合する、実施形態１４７～１８４のいずれか１つの組み合わせ。
１８６．ＡＢＭ３は、非免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態１８５の組み合わせ。
１８７．ＡＢＭ３は、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィボディ、ダルピン、アビマー、アンチカリン、リポカリン、センチリン、バーサボディ、ノッチン、アドネクチン、プロネクチン、アフィチン／ナノフィチン、アフィリン、アトリマー／テトラネクチン、二環状ペプチド、ｃｙｓ－ｋｎｏｔ、Ｆｎ３足場、Ｏｂｏｄｙ、Ｔｎ３、アフィマー、ＢＤ、アドヒロン、デュオカリン、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質、レペボディ又はフィノマーである、実施形態１８６の組み合わせ。
１８８．ＡＢＭ３は、ＣＤ２リガンドの受容体結合ドメインを含む、実施形態１８６の組み合わせ。
１８９．ＡＢＭ３は、ＣＤ５８部分である、実施形態１８５の組み合わせ。
１９０．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－１のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９１．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－２のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９２．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－３のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９３．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－４のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９４．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－５のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９５．Ｂとして指定されるアミノ酸は、フェニルアラニンである、実施形態１９４の組み合わせ。
１９６．Ｂとして指定されるアミノ酸は、セリンである、実施形態１９４の組み合わせ。
１９７．Ｊとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態１９４～１９６のいずれか１つの組み合わせ。
１９８．Ｊとして指定されるアミノ酸は、リジンである、実施形態１９４～１９６のいずれか１つの組み合わせ。
１９９．Ｏとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態１９４～１９８のいずれか１つの組み合わせ。
２００．Ｏとして指定されるアミノ酸は、グルタミンである、実施形態１９４～１９８のいずれか１つの組み合わせ。
２０１．Ｕとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態１９４～２００のいずれか１つの組み合わせ。
２０２．Ｕとして指定されるアミノ酸は、リジンである、実施形態１９４～２００のいずれか１つの組み合わせ。
２０３．Ｘとして指定されるアミノ酸は、トレオニンである、実施形態１９４～２０２のいずれか１つの組み合わせ。
２０４．Ｘとして指定されるアミノ酸は、セリンである、実施形態１９４～２０２のいずれか１つの組み合わせ。
２０５．Ｚとして指定されるアミノ酸は、ロイシンである、実施形態１９４～２０４のいずれか１つの組み合わせ。
２０６．Ｚとして指定されるアミノ酸は、グリシンである、実施形態１９４～２０４のいずれか１つの組み合わせ。
２０７．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２０８．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－７のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２０９．Ｊとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態２０８の組み合わせ。
２１０．Ｊとして指定されるアミノ酸は、リジンである、実施形態２０８の組み合わせ。
２１１．Ｏとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態２０８～２１０のいずれか１つの組み合わせ。
２１２．Ｏとして指定されるアミノ酸は、グルタミンである、実施形態２０８～２１０のいずれか１つの組み合わせ。
２１３．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－８のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１４．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－９のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１５．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１６．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－１１のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１７．ＡＢＭ３は、ＣＤ４８部分である、実施形態１８５の組み合わせ。
２１８．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも７０％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２１９．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも８０％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２０．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも９０％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２１．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２２．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも９９％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２３．ＡＢＭ３は、免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態１８５の組み合わせ。
２２４．ＡＢＭ３は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態２２３の組み合わせ。
２２５．ＡＢＭ３は、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態２２３の組み合わせ。
２２６．ＡＢＭ３は、ｓｃＦｖである、実施形態２２４の組み合わせ。
２２７．ＡＢＭ３は、Ｆａｂである、実施形態２２４の組み合わせ。
２２８．ＡＢＭ３は、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態２２７の組み合わせ。
２２９．ＡＢＭ３は、ＣＤ２－１のＣＤＲ配列を含む、実施形態２２３～２２８のいずれか１つの組み合わせ。
２３０．ＡＢＭ３は、ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３１．ＡＢＭ３は、ｈｕ１ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３２．ＡＢＭ３は、ｈｕ２ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３３．ＡＢＭ３は、Ｍｅｄｉ５０７のＣＤＲ配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３４．ＡＢＭ３は、Ｍｅｄｉ５０７の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２３３の組み合わせ。
２３５．ＡＢＭ３は、ヒトＴＡＡに特異的に結合する、実施形態１４７～１８４のいずれか１つの組み合わせ。
２３６．ＡＢＭ３は、非免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態２３５の組み合わせ。
２３７．ＴＡＡが受容体である場合、ＡＢＭ３は、受容体のリガンドの受容体結合ドメインを含み、ＴＡＡがリガンドである場合、ＡＢＭ３は、リガンドの受容体のリガンド結合ドメインを含む、実施形態２３６の組み合わせ。
２３８．ＡＢＭ３は、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィボディ、ダルピン、アビマー、アンチカリン、リポカリン、センチリン、バーサボディ、ノッチン、アドネクチン、プロネクチン、アフィチン／ナノフィチン、アフィリン、アトリマー／テトラネクチン、二環状ペプチド、ｃｙｓ－ｋｎｏｔ、Ｆｎ３足場、Ｏｂｏｄｙ、Ｔｎ３、アフィマー、ＢＤ、アドヒロン、デュオカリン、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質、レペボディ又はフィノマーである、実施形態２３６の組み合わせ。
２３９．ＡＢＭ３は、免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態２３５の組み合わせ。
２４０．ＡＢＭ３は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態２３９の組み合わせ。
２４１．ＡＢＭ３は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態２４０の組み合わせ。
２４２．ＡＢＭ３は、ｓｃＦｖである、実施形態２４０の組み合わせ。
２４３．ＡＢＭ３は、Ｆａｂである、実施形態２４０の組み合わせ。
２４４．ＡＢＭ３は、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態２４３の組み合わせ。
２４５．ＴＡＡは、Ｂ細胞由来の形質細胞である癌性Ｂ細胞上で発現されるＴＡＡである、実施形態２３５～２４４のいずれか１つの組み合わせ。
２４６．ＴＡＡは、形質細胞でない癌性Ｂ細胞上で発現されるＴＡＡである、実施形態２３５～２４５のいずれか１つの組み合わせ。
２４７．ＴＡＡは、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１３３、ＦＬＴ３、ＣＤ５２、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、ＬＹ９、ＣＤ２００、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂから選択される、実施形態２３５～２４６のいずれか１つの組み合わせ。
２４８．ＴＡＡは、ＢＣＭＡである、実施形態２４７の組み合わせ。
２４９．ＴＡＡは、ＣＤ２０である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５０．ＴＡＡは、ＣＤ２２である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５１．ＴＡＡは、ＣＤ１２３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５２．ＴＡＡは、ＣＤ３３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５３．ＴＡＡは、ＣＬＬ１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５４．ＴＡＡは、ＣＤ１３８である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５５．ＴＡＡは、ＣＳ１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５６．ＴＡＡは、ＣＤ３８である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５７．ＴＡＡは、ＣＤ１３３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５８．ＴＡＡは、ＦＬＴ３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５９．ＴＡＡは、ＣＤ５２である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６０．ＴＡＡは、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃである、実施形態２４７の組み合わせ。
２６１．ＴＡＡは、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂである、実施形態２４７の組み合わせ。
２６２．ＴＡＡは、ＣＸＣＲ４である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６３．ＴＡＡは、ＰＤ－Ｌ１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６４．ＴＡＡは、ＬＹ９である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６５．ＴＡＡは、ＣＤ２００である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６６．ＴＡＡは、ＦＣＧＲ２Ｂである、実施形態２４７の組み合わせ。
２６７．ＴＡＡは、ＣＤ２１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６８．ＴＡＡは、ＣＤ２３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６９．ＡＢＭ３は、表１３に記載される結合配列を含む、実施形態２４７の組み合わせ。
２７０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインを形成する、第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域を含む、実施形態３８～２６９のいずれか１つの組み合わせ。
２７１．第１の変異体Ｆｃ領域は、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、及び第２の変異体Ｆｃ領域は、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ（「ＬＡＬＡＧＡ」）置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｋ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」）置換、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＤＡＰＡＳＫ」）置換、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＧＡＤＡＰＡ」）置換、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」）置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「ＬＡＬＡＰＧ」）置換又はＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７０の組み合わせ。
２７２．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ（「ＬＡＬＡＧＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７３．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｋ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７４．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＤＡＰＡＳＫ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７５．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＧＡＤＡＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７６．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７７．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「ＬＡＬＡＰＧ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７８．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１、ＦＣＶ－２、ＦＣＶ－３、ＦＣＶ－４、ＦＣＶ－５、ＦＣＶ－６又はＦＣＶ－７と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７１の組み合わせ。
２８０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３００．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３２０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３２１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３２２．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成する、実施形態２７０～３２１のいずれか１つの組み合わせ。
３２３．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２４．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２５．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２６．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２７．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２８．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｄ ３７０Ｓ：Ｓ３６４／Ｅ３５７Ｌを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２９．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３０．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレットの図４（表４中で再現される）に列挙される立体変異体のいずれか１つのアミノ酸置換を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３１．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレットの図５（表４中で再現される）に列挙される変異体のいずれかのアミノ酸置換を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３２．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレットの図６（表４中で再現される）に列挙される変異体のいずれかのアミノ酸置換を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３３．Ｆｃ領域の少なくとも１つは、切除変異体修飾を含む、実施形態３２２～３３２のいずれか１つの組み合わせ。
３３４．切除変異体修飾は、表３から選択される、実施形態３３３の組み合わせ。
３３５．切除変異体修飾は、Ｇ２３６Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３６．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３７．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３８．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｑを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３９．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４０．切除変異体修飾は、Ｖ２６６Ｄを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４１．切除変異体修飾は、Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４２．切除変異体修飾は、Ｓ２６７Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４３．切除変異体修飾は、Ｈ２６８Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４４．切除変異体修飾は、Ｅ２６９Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４５．切除変異体修飾は、２９９Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４６．切除変異体修飾は、２９９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４７．切除変異体修飾は、Ｋ３２２Ａを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４８．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４９．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｌを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５０．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｎを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５１．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｑを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５２．切除変異体修飾は、Ｌ３２８Ｅを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５３．切除変異体修飾は、Ｌ３２８Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５４．切除変異体修飾は、Ｐ３２９Ａを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５５．切除変異体修飾は、Ｐ３２９Ｈを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５６．切除変異体修飾は、Ｐ３２９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５７．切除変異体修飾は、Ａ３３０Ｌを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５８．切除変異体修飾は、Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５９．切除変異体修飾は、Ｉ３３２Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６０．切除変異体修飾は、Ｉ３３２Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６１．切除変異体修飾は、Ｖ２６６Ｄ／Ａ３２７Ｑを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６２．切除変異体修飾は、Ｖ２６６Ｄ／Ｐ３２９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６３．切除変異体修飾は、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６４．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６５．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６６．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６７．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６８．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６９．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｋ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７０．切除変異体修飾は、２６７Ｋ／Ｐ３２９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７１．切除変異体修飾は、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７２．切除変異体修飾は、Ｄ２６５Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｐ３２９Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７３．切除変異体修飾は、Ｄ２６５Ｅ／Ｎ２９７Ｑ／Ｐ３２９Ｓを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７４．両方の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾を含む、実施形態３３３～３７３のいずれか１つの組み合わせ。
３７５．Ｆｃ領域の少なくとも１つは、ｐＩ変異体置換を更に含む、実施形態３２２～３７４のいずれか１つの組み合わせ。
３７６．ｐＩ変異体置換は、表４から選択される、実施形態３７５の組み合わせ。
３７７．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿ＩＳＯ（－）中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３７８．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３７９．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ｂ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８０．ｐＩ変異体置換は、Ｐｌ＿ＩＳＯ（＋ＲＲ）中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８１．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿ＩＳＯ（＋）中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８２．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ａ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８３．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｂ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８４．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２６９Ｑ／Ｅ２７２Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８５．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２６９Ｑ／Ｅ２８３Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８６．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２７２０／Ｅ２８３Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８７．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２６９Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８８．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、４３４Ａ、４３４Ｓ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６１又はＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ、２５２Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌ、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２３６Ｒ、３２８Ｒ、２３６Ｒ／３２８Ｒ、２３６Ｎ／２６７Ｅ、２４３Ｌ、２９８Ａ及び２９９Ｔから選択される１つ以上のアミノ酸置換を更に含む、実施形態３２２～３８７のいずれか１つの組み合わせ。
３８９．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換４３４Ａ、４３４Ｓ又は４３４Ｖを更に含む、実施形態３２２～３８７のいずれか１つの組み合わせ。
３９０．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換４２８Ｌを更に含む、実施形態３８９の組み合わせ。
３９１．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３０８Ｆを更に含む、実施形態３８９～３９０のいずれか１つの組み合わせ。
３９２．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５９Ｉを更に含む、実施形態３８９～３９１のいずれか１つの組み合わせ。
３９３．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換４３６Ｉを更に含む、実施形態３８９～３９２のいずれか１つの組み合わせ。
３９４．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５２Ｙを更に含む、実施形態３８９～３９３のいずれか１つの組み合わせ。
３９５．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５４Ｔを更に含む、実施形態３８９～３９４のいずれか１つの組み合わせ。
３９６．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５６Ｅを更に含む、実施形態３８９～３９５のいずれか１つの組み合わせ。
３９７．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２３９Ｄ又は２３９Ｅを更に含む、実施形態３８９～３９６のいずれか１つの組み合わせ。
３９８．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３３２Ｅ又は３３２Ｄを更に含む、実施形態３８９～３９７のいずれか１つの組み合わせ。
３９９．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２６７Ｄ又は２６７Ｅを更に含む、実施形態３８９～３９８のいずれか１つの組み合わせ。
４００．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３３０Ｌを更に含む、実施形態３８９～３９９のいずれか１つの組み合わせ。
４０１．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２３６Ｒ又は２３６Ｎを更に含む、実施形態３８９～４００のいずれか１つの組み合わせ。
４０２．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３２８Ｒを更に含む、実施形態３８９～４０１のいずれか１つの組み合わせ。
４０３．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２４３Ｌを更に含む、実施形態３８９～４０２のいずれか１つの組み合わせ。
４０４．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２９８Ａを更に含む、実施形態３８９～４０３のいずれか１つの組み合わせ。
４０５．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２９９Ｔを更に含む、実施形態３８９～４０４のいずれか１つの組み合わせ。
４０６．（ａ）第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み；
（ｂ）第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、及び
（ｃ）第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ｐＩ変異体置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ）を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
４０７．第１の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態４０６の組み合わせ。
４０８．第２の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態４０６～４０７のいずれか１つの組み合わせ。
４０９．第１の変異体Ｆｃ領域は、ｐＩ変異体置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ）を含む、実施形態４０６～４０８のいずれか１つの組み合わせ。
４１０．第２の変異体Ｆｃ領域は、ｐＩ変異体置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ）を含む、実施形態４０６～４０９のいずれか１つの組み合わせ。
４１１．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１２．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５２と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１３．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５２のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１４．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１５．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１６．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５３と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１７．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５３のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１８．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５３のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１９．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２０．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２１．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５４のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２２．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２３．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２４．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５１と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２５．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５１のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２６．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５１のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインを含む、実施形態４０～２６９のいずれか１つの組み合わせ。
４２８．Ｆｃドメインは、Ｆｃヘテロ二量体である、実施形態４２７の組み合わせ。
４２９．Ｆｃヘテロ二量体は、表４に記載されるＦｃ修飾のいずれかを含む、実施形態４２８の組み合わせ。
４３０．Ｆｃヘテロ二量体は、ノブ・イン・ホール（「ＫＩＨ」）修飾を含む、実施形態４２８の組み合わせ。
４３１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１～Ｆｃ１５０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４２８～４３０のいずれか１つの組み合わせ。
４３２．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１～Ｆｃ５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３３．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ６～Ｆｃ１０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１１～Ｆｃ１５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３５．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１６～Ｆｃ２０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ２１～Ｆｃ２５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ２６～Ｆｃ３０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３８．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ３１～Ｆｃ３５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３９．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ３６～Ｆｃ４０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ４１～Ｆｃ４５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ４６～Ｆｃ５０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４２．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ５１～Ｆｃ５５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４３．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ５６～Ｆｃ６０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ６１～Ｆｃ６５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４５．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ６６～Ｆｃ７０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ７１～Ｆｃ７５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ７６～Ｆｃ８０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４８．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ８１～Ｆｃ８５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４９．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ８６～Ｆｃ９０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ９１～Ｆｃ９５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ９６～Ｆｃ１００として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５２．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１０１～Ｆｃ１０５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５３．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１０６～Ｆｃ１１０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１１１～Ｆｃ１１５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５５．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１１６～Ｆｃ１２０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１２１～Ｆｃ１２５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１２６～Ｆｃ１３０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５８．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１３１～Ｆｃ１３５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５９．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１３６～Ｆｃ１４０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４６０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１４１～Ｆｃ１４５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４６１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１４６～Ｆｃ１５０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４６２．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、改変されたエフェクター機能を有する、実施形態４２７～４６１のいずれか１つの組み合わせ。
４６３．Ｆｃドメインは、１つ以上のＦｃ受容体への改変された結合を有する、実施形態４６２の組み合わせ。
４６４．１つ以上のＦｃ受容体は、ＦｃＲＮを含む、実施形態４６３の組み合わせ。
４６５．１つ以上のＦｃ受容体は、白血球受容体を含む、実施形態４６３又は実施形態４６４の組み合わせ。
４６６．Ｆｃは、修飾されたジスルフィド結合構造を有する、実施形態４２７～４６５のいずれか１つの組み合わせ。
４６７．Ｆｃは、改変されたグリコシル化パターンを有する、実施形態４２７～４６６のいずれか１つの組み合わせ。
４６８．Ｆｃは、ヒンジ領域を含む、実施形態４２７～４６７のいずれか１つの組み合わせ。
４６９．ヒンジ領域は、第７．２．２．２節に記載されるヒンジ領域のいずれか１つを含む、実施形態４６８の組み合わせ。
４７０．ヒンジ領域は、Ｈ１として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７１．ヒンジ領域は、Ｈ２として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７２．ヒンジ領域は、Ｈ３として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７３．ヒンジ領域は、Ｈ４として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７４．ヒンジ領域は、Ｈ５として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７５．ヒンジ領域は、Ｈ６として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７６．ヒンジ領域は、Ｈ７として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７７．ヒンジ領域は、Ｈ８として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７８．ヒンジ領域は、Ｈ９として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７９．ヒンジ領域は、Ｈ１０として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８０．ヒンジ領域は、Ｈ１１として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８１．ヒンジ領域は、Ｈ１２として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８２．ヒンジ領域は、Ｈ１３として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８３．ヒンジ領域は、Ｈ１４として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８４．ヒンジ領域は、Ｈ１５として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８５．ヒンジ領域は、Ｈ１６として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８６．ヒンジ領域は、Ｈ１７として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８７．ヒンジ領域は、Ｈ１８として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８８．ヒンジ領域は、Ｈ１９として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８９．ヒンジ領域は、Ｈ２０として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４９０．ヒンジ領域は、Ｈ２１として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４９１．ＣＤ１９結合分子は、少なくとも１つのｓｃＦｖドメインを含む、実施形態４０～４９０のいずれか１つの組み合わせ。
４９２．少なくとも１つのｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬドメインを連結するリンカーを含む、実施形態４９１の組み合わせ。
４９３．リンカーは、５～２５アミノ酸長である、実施形態４９２の組み合わせ。
４９４．リンカーは、１２～２０アミノ酸長である、実施形態４９３の組み合わせ。
４９５．リンカーは、荷電リンカー及び／又は可撓性リンカーである、実施形態４９２～４９４のいずれか１つの組み合わせ。
４９６．リンカーは、リンカーＬ１～Ｌ５４のいずれか１つから選択される、実施形態４９２～４９５のいずれか１つの組み合わせ。
４９７．リンカー領域は、Ｌ１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
４９８．リンカー領域は、Ｌ２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
４９９．リンカー領域は、Ｌ３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５００．リンカー領域は、Ｌ４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０１．リンカー領域は、Ｌ５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０２．リンカー領域は、Ｌ６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０３．リンカー領域は、Ｌ７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０４．リンカー領域は、Ｌ８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０５．リンカー領域は、Ｌ９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０６．リンカー領域は、Ｌ１０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０７．リンカー領域は、Ｌ１１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０８．リンカー領域は、Ｌ１２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０９．リンカー領域は、Ｌ１３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１０．リンカー領域は、Ｌ１４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１１．リンカー領域は、Ｌ１５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１２．リンカー領域は、Ｌ１６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１３．リンカー領域は、Ｌ１７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１４．リンカー領域は、Ｌ１８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１５．リンカー領域は、Ｌ１９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１６．リンカー領域は、Ｌ２０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１７．リンカー領域は、Ｌ２１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１８．リンカー領域は、Ｌ２２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１９．リンカー領域は、Ｌ２３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２０．リンカー領域は、Ｌ２４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２１．リンカー領域は、Ｌ２５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２２．リンカー領域は、Ｌ２６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２３．リンカー領域は、Ｌ２７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２４．リンカー領域は、Ｌ２８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２５．リンカー領域は、Ｌ２９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２６．リンカー領域は、Ｌ３０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２７．リンカー領域は、Ｌ３１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２８．リンカー領域は、Ｌ３２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２９．リンカー領域は、Ｌ３３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３０．リンカー領域は、Ｌ３４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３１．リンカー領域は、Ｌ３５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３２．リンカー領域は、Ｌ３６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３３．リンカー領域は、Ｌ３７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３４．リンカー領域は、Ｌ３８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３５．リンカー領域は、Ｌ３９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３６．リンカー領域は、Ｌ４０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３７．リンカー領域は、Ｌ４１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３８．リンカー領域は、Ｌ４２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３９．リンカー領域は、Ｌ４３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４０．リンカー領域は、Ｌ４４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４１．リンカー領域は、Ｌ４５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４２．リンカー領域は、Ｌ４６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４３．リンカー領域は、Ｌ４７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４４．リンカー領域は、Ｌ４８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４５．リンカー領域は、Ｌ４９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４６．リンカー領域は、Ｌ５０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４７．リンカー領域は、Ｌ５１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４８．リンカー領域は、Ｌ５２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４９．リンカー領域は、Ｌ５３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５５０．リンカー領域は、Ｌ５４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５５１．ＣＤ１９結合分子は、少なくとも１つのＦａｂドメインを含む、実施形態４０～５５０のいずれか１つの組み合わせ。
５５２．少なくとも１つのＦａｂドメインは、表２に記載されるＦａｂヘテロ二量体化修飾のいずれかを含む、実施形態５５１の組み合わせ。
５５３．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ１として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５４．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ２として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５５．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ３として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５６．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ４として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５７．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ５として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５８．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ６として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５９．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ７として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５６０．ＣＤ１９結合分子は、リンカーを介して互いに連結される、少なくとも２つのＡＢＭ、ＡＢＭ及びＡＢＭ鎖又は２つのＡＢＭ鎖を含む、実施形態４０～５５９のいずれか１つの組み合わせ。
５６１．リンカーは、５～２５アミノ酸長である、実施形態５６０の組み合わせ。
５６２．リンカーは、１２～２０アミノ酸長である、実施形態５６１の組み合わせ。
５６３．リンカーは、荷電リンカー及び／又は可撓性リンカーである、実施形態５６０～５６２のいずれか１つの組み合わせ。
５６４．リンカーは、リンカーＬ１～Ｌ５４のいずれか１つから選択される、実施形態５６０～５６３のいずれか１つの組み合わせ。
５６５．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；及び
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態２の組み合わせ。
５６６．ＣＤ１９結合分子は、三価である、実施形態５６５の組み合わせ。
５６７．ＡＢＭ１は、Ｆａｂである、実施形態５６５又は５６６の組み合わせ。
５６８．ＡＢＭ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態５６５～５６７のいずれか１つの組み合わせ。
５６９．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＣＤ３である、実施形態５６５～５６９のいずれか１つの組み合わせ。
５７０．ＡＢＭ２は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態５６９の組み合わせ。
５７１．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｈｉのＣＤＲ配列を含む、実施形態５７０の組み合わせ。
５７２．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｈｉの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５７０又は５７１の組み合わせ。
５７３．抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖの形態である、実施形態５７０～５７２のいずれか１つの組み合わせ。
５７４．ＡＢＭ２は、表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む、実施形態５７３の組み合わせ。
５７５．ＡＢＭ３は、ＣＤ５８部分である、実施形態５６５～５７４のいずれか１つの組み合わせ。
５７６．ＡＢＭ３は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む、実施形態５６５～５７５のいずれか１つの組み合わせ。
５７７．Ｆｃドメインを含む、実施形態５６５～５７６のいずれか１つの組み合わせ。
５７８．Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成する第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域を含む、実施形態５６５～５７６のいずれか１つの組み合わせ。
５７９．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ（ｉ）配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；又は（ｉｉ）配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；及び
（ｄ）Ｆｃドメイン
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態２の組み合わせ。
５８０．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ（ｉ）配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；又は（ｉｉ）配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；及び
（ｄ）Ｆｃドメイン
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態２の組み合わせ。
５８１．ＡＢＭ１は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態５７９又は実施形態５８０の組み合わせ。
５８２．ＡＢＭ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態５７９～５８１のいずれか１つの組み合わせ。
５８３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｉで表され、第７．２．４．１節においてＴ２と称される立体配置を有する、実施形態５６５～５８２のいずれか１つの組み合わせ。
５８４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃヘテロ二量体であるＦｃドメインを含む、実施形態５６５～５８３のいずれか１つの組み合わせ。
５８５．ＣＤ１９結合分子のＦｃヘテロ二量体は、ノブ・イン・ホール（「ＫＩＨ」）修飾を含む、実施形態５８４の組み合わせ。
５８６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１２１～Ｆｃ１２５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態５８５の組み合わせ。
５８７．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、改変されたエフェクター機能を有する、実施形態５８４～５８６のいずれか１つの組み合わせ。
５８８．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、１つ以上のＦｃ受容体への改変された結合を有する、実施形態５８７の組み合わせ。
５８９．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、Ｄ２６５Ａ突然変異を含むサイレントＩｇＧ１である、実施形態５８４～５８８のいずれか１つの組み合わせ。
５９０．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ突然変異を含むサイレントＩｇＧ１である、実施形態５８４～５８９のいずれか１つの組み合わせ。
５９１．ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）は、定常ヒトＩｇＧ１ドメインＣＨ１に融合されたＶＨ及び定常ヒトカッパ配列に融合されたＶＬを含む、実施形態５６５～５９０のいずれか１つの組み合わせ。
５９２．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、
（ａ）修飾Ｔ３６６Ｗを含む第１のＣＨ３ドメイン；及び
（ｂ）第１のＣＨ３ドメインとヘテロ二量体を形成し、修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む第２のＣＨ３ドメイン
を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、実施形態５８４～５９１のいずれか１つの組み合わせ。
５９３．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、
（ａ）修飾Ｓ３５４Ｃを含む第１のＣＨ３ドメイン、及び
（ｂ）修飾Ｙ３４９Ｃを含む第２のＣＨ３ドメイン
を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、実施形態５８４～５９２のいずれか１つの組み合わせ。
５９４．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位（ＥＵ番号付け）の１、２、３、４、５又は６つの位置で突然変異を有する配列番号２５１のヒトＩｇＧ１配列を含む、実施形態５８４～５９３のいずれか１つの組み合わせ。
５９５．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、２６５位のアスパラギン酸残基をアラニン残基で、２９７位のアスパラギン残基をアラニン残基で、且つ３２９位のプロリン残基をアラニン残基で置換すること（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）によって修飾されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、実施形態５８４～５９４のいずれか１つの組み合わせ。
５９６．ＣＤ１９結合分子において、ａ）ＶＨは、定常ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインに融合され、ｓｃＦｖを含む、ＣＤ３に特異的に結合するｂ）抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）にリンカーによって連結される、実施形態５８２～５９５のいずれか１つの組み合わせ。
５９７．ａ）ＶＨは、定常ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインに融合され、ｄ）Ｆｃドメインにリンカーによって連結されるｓｃＦｖを含む、ＣＤ３に特異的に結合するｂ）抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）にリンカーによって連結される、実施形態５８２～５９５のいずれか１つの組み合わせ。
５９８．ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９に特異的に結合するａ）抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；ＣＤ３に特異的に結合し、且つｓｃＦｖを含むｂ）抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）及びｄ）Ｆｃ領域を含む第１の半抗体；並びにヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つＣＤ５８ ＩｇＶドメインを含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）及びｄ）Ｆｃ領域を含む第２の半抗体を含み、第１の半抗体におけるＦｃ領域及び第２の半抗体におけるＦｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体を形成する、実施形態５６５～５９７のいずれか１つの組み合わせ。
５９９．ＣＤ１９結合分子は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖；及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む第１の半抗体；並びに配列番号６５のアミノ酸配列を含む第２の半抗体を含む、実施形態５９８の組み合わせ。
６００．ＣＤ１９結合分子は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖；及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む第１の半抗体；並びに配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む第２の半抗体を含む、実施形態５９８の組み合わせ。
６０１．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１の半抗体重鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６３のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第１の半抗体重鎖；
（ｂ）第１の半抗体軽鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第１の半抗体軽鎖；
（ｃ）第２の半抗体であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６５のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第２の半抗体
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０２．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０３．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０４．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０５．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２０のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２２のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０６．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２７のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２９のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０７．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２６のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０８．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３５のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０９．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３６のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３７のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１０．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３８のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３９のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１１．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１４０のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１４１のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１２．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３１のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３２のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１３．ＣＤ１９結合分子は、表２０Ａ－１、表２０Ａ－２、表２０Ｂ又は表２０Ｃ、好ましくは、表２０Ｃで示される構築物の配列を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１４．ＣＤ１９結合分子は、ブリナツモマブである、実施形態２の組み合わせ。
６１５．ＣＤ１９結合分子は、コルツキシマブラブタンシンである、実施形態２の組み合わせ。
６１６．ＣＤ１９結合分子は、ＭＯＲ２０８である、実施形態２の組み合わせ。
６１７．ＣＤ１９結合分子は、ＭＥＤＩ－５５１である、実施形態２の組み合わせ。
６１８．ＣＤ１９結合分子は、デニンツズマブマホドチンである、実施形態２の組み合わせ。
６１９．ＣＤ１９結合分子は、ＤＩ－Ｂ４である、実施形態２の組み合わせ。
６２０．ＣＤ１９結合分子は、タプリツモマブパプトクスである、実施形態２の組み合わせ。
６２１．ＣＤ１９結合分子は、ＸｍＡｂ５８７１である、実施形態２の組み合わせ。
６２２．ＣＤ１９結合分子は、ＭＤＸ－１３４２である、実施形態２の組み合わせ。
６２３．ＣＤ１９結合分子は、ＡＦＭ１１である、実施形態２の組み合わせ。
６２４．ＣＤ１９結合分子は、ＭＤＸ－１３４２である、実施形態２の組み合わせ。
６２５．ＣＤ１９結合分子は、ロンカスツキシマブテシリンである、実施形態２の組み合わせ。
６２６．ＣＤ１９結合分子は、ＧＢＲ４０１である、実施形態２の組み合わせ。
６２７．抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子を発現する細胞の集団（「ＣＡＲ組成物」）である、実施形態１の組み合わせ。
６２８．ＣＡＲ分子は、抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態６２７の組み合わせ。
６２９．細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む、実施形態６２８の組み合わせ。
６３０．ＣＡＲ分子は、抗ＣＤ１９結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む抗ＣＤ１９結合ドメインを含む、実施形態６２８又は実施形態６２９の組み合わせ。
６３１．ＣＡＲ分子は、ｓｃＦｖを含む．実施形態６２８～６３０のいずれか１つの組み合わせ。
６３２．抗ＣＤ１９結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）にリンカーを介して結合した重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖである、実施形態６３１の組み合わせ。
６３３．リンカーは、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む、実施形態６３２の組み合わせ。
６３４．ＣＡＲ分子は、マウスＣＡＲ分子である、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６３５．ＣＡＲ分子は、表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３の１つ以上並びに表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３の１つ以上を含む、実施形態６２８～６３４のいずれか１つの組み合わせ。
６３６．ＣＡＲ分子は、表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＨ及び表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＬを含む、実施形態６２８～６３５のいずれか１つの組み合わせ。
６３７．ＣＡＲ分子は、表１７に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインを含む、実施形態６２８～６３６のいずれか１つの組み合わせ。
６３８．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１４９のアミノ酸配列又は配列番号１４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６３９．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１９４のアミノ酸配列又は配列番号１９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６４０．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１９６のアミノ酸配列又は配列番号１９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６４１．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１９９のアミノ酸配列又は配列番号１９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６４２．ＣＡＲ分子は、表１７に列記される全長ＣＤ１９ ＣＡＲアミノ酸配列又は表１７に列記される全長ＣＤ１９ ＣＡＲアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６２８～６３６のいずれか１つの組み合わせ。
６４３．ＣＡＲ分子は、配列番号１９５のアミノ酸配列又は配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４４．ＣＡＲ分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列又は配列番号１９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４５．ＣＡＲ分子は、配列番号１９８のアミノ酸配列又は配列番号１９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４６．ＣＡＲ分子は、配列番号２００のアミノ酸配列又は配列番号２００のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４７．ＣＡＲ分子は、配列番号１４８の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１４８の残基２２～４８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４８．ＣＡＲ分子は、ヒト化ＣＡＲ分子である、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６４９．ＣＡＲ分子は、表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３の１つ以上並びに表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３の１つ以上を含む、実施形態６２８～６３３及び６４８のいずれか１つの組み合わせ。
６５０．ＣＡＲ分子は、表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＨ及び表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＬを含む、実施形態６２８～６３３、６４８及び６４９のいずれか１つの組み合わせ。
６５１．ＣＡＲ分子は、表１６に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列又は表１６に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６２８～６３３及び６４８～６５０のいずれか１つの組み合わせ。
６５２．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列又は配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５３．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列又は配列番号９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５４．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９８のアミノ酸配列又は配列番号９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５５．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列又は配列番号９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５６．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列又は配列番号１００のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５７．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０１のアミノ酸配列又は配列番号１０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５８．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０２のアミノ酸配列又は配列番号１０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５９．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０３のアミノ酸配列又は配列番号１０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６０．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列又は配列番号１０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６１．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列又は配列番号１０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６２．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０６のアミノ酸配列又は配列番号１０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６３．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列又は配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６４．ＣＡＲ分子は、表１６に列記される全長ＣＤ１９ ＣＡＲアミノ酸配列又は表１６に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６２８～６３３及び６４８～６５１のいずれか１つの組み合わせ。
６６５．ＣＡＲ分子は、配列番号１２２～１２５若しくは１３３のいずれか１つの残基２２～４８６、配列番号１２６～１３２のいずれか１つの残基２２～４９１のアミノ酸配列又は前記配列のいずれかと少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態６６４の組み合わせ。
６６６．ＣＡＲ分子は、配列番号１２２の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２２の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６６７．ＣＡＲ分子は、配列番号１２３の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２３の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６６８．ＣＡＲ分子は、配列番号１２４の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２４の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６６９．ＣＡＲ分子は、配列番号１２５の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２５の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７０．ＣＡＲ分子は、配列番号１３３の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１３３の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７１．ＣＡＲ分子は、配列番号１２６の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２６の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７２．ＣＡＲ分子は、配列番号１２７の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２７の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７３．ＣＡＲ分子は、配列番号１２８の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２８の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７４．ＣＡＲ分子は、配列番号１２９の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２９の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７５．ＣＡＲ分子は、配列番号１３０の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１３０の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７６．ＣＡＲ分子は、配列番号１３１の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１３１の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７７．ＣＡＲ分子は、配列番号１３２の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１３２の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７８．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６７９．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８０．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８１．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８２．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態６７８～６８１のいずれか１つの組み合わせ。
６８３．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む．実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８４．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８５．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８６．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８７．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態６８３～６８６のいずれか１つの組み合わせ。
６８８．ＣＡＲ分子は、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む、実施形態６２７～６８７のいずれか１つの組み合わせ。
６８９．ＣＡＲ分子は、ヒンジ領域を含む、実施形態６２７～６８８のいずれか１つの組み合わせ。
６９０．ＣＡＲ分子は、機能的シグナル伝達ドメインである共刺激ドメインを含む、実施形態６２７～６８９のいずれか１つの組み合わせ。
６９１．共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）又は４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）からのアミノ酸配列を有する、実施形態６９０の組み合わせ。
６９２．ＣＡＲ分子は、４－１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態６２７～６９０のいずれか１つの組み合わせ。
６９３．ＣＡＲ分子は、リーダー配列を含む、実施形態６２７～６９２のいずれか１つの組み合わせ。
６９４．ＣＡＲ分子は、１９２８ｚのアミノ酸配列（配列番号２０１）をそのシグナル（リーダー）配列の存在下又は不在下で含む、実施形態６２７～６３２のいずれか１つの組み合わせ。
６９５．ＣＡＲ分子は、１９２８ｚのｓｃＦｖ部分のアミノ酸配列（配列番号２０１）を含む、実施形態６２７～６３２のいずれか１つの組み合わせ。
６９６．ＣＡＲ分子は、１９２８ｚの重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号２０１）を含む、実施形態６２７～６３２のいずれか１つの組み合わせ。
６９７．ＣＡＲ組成物は、チサゲンレクロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
６９８．ＣＡＲ組成物は、アキシカブタゲンシロロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
６９９．ＣＡＲ組成物は、リソカブタゲンマラロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
７００．ＣＡＲ組成物は、ブレクスカブタゲンオートロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
７０１．Ｂ細胞標的化剤は、Ｂ細胞枯渇剤である、実施形態１～７００のいずれか１つの組み合わせ。
７０２．Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ受容体（ＢＡＦＦＲ）結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７０３．ＢＡＦＦＲ結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７０２の組み合わせ。
７０４．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７０５．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１８に記載されるイアナルマブのＶＨ及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０４の組み合わせ。
７０６．ＢＡＦＦＲ結合分子は、イアナルマブである、実施形態７０５の組み合わせ。
７０７．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７０８．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７０９．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１０．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１１．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１２．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１３．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１４．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１５．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１６．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１７．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１８．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１９．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－６のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７２０．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－７のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７２１．Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２０結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７２２．ＣＤ２０結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７２１の組み合わせ。
７２３．ＣＤ２０結合分子は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ又はオビヌツズマブである、実施形態７２１又は実施形態７２２の組み合わせ。
７２４．ＣＤ２０結合分子は、リツキシマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２５．ＣＤ２０結合分子は、オファツムマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２６．ＣＤ２０結合分子は、オクレリズマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２７．ＣＤ２０結合分子は、ベルツズマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２８．ＣＤ２０結合分子は、オビヌツズマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２９．Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２２結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７３０．ＣＤ２２結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３１．ＣＤ２２結合分子は、エプラツズマブである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３２．ＣＤ２２結合分子は、イノツズマブである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３３．ＣＤ２２結合分子は、イノツズマブオゾガマイシンである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３４．Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７３５．ＢＡＦＦ結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７３４の組み合わせ。
７３６．ＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブ、チブリズマブ、ＢＲ３－Ｆｃ、ブリシビモド又はアタシセプトである、実施形態７３４の組み合わせ。
７３７．ＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブである、実施形態７３６の組み合わせ。
７３８．ＢＡＦＦ結合分子は、チブリズマブである、実施形態７３６の組み合わせ。
７３９．ＢＡＦＦ結合分子は、ＢＲ３－Ｆｃである、実施形態７３６の組み合わせ。
７４０．ＢＡＦＦ結合分子は、ブリシビモドである、実施形態７３６の組み合わせ。
７４１．ＢＡＦＦ結合分子は、アタシセプトである、実施形態７３６の組み合わせ。
７４２．１つ以上の追加の薬剤を更に含む、実施形態１～７４１のいずれか１つの組み合わせ。
７４３．１つ以上の追加の薬剤は、コルチコステロイドを含む、実施形態７４２の組み合わせ。
７４４．コルチコステロイドは、デキサメタゾンである、実施形態７４３の組み合わせ。
７４５．コルチコステロイドは、プレドニゾンである、実施形態７４３の組み合わせ。
７４６．１つ以上の追加の薬剤は、免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）を含む、実施形態７４２～７４５のいずれか１つの組み合わせ。
７４７．免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）は、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド又はイベルドミドである、実施形態７４６の組み合わせ。
７４８．免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）は、レナリドミドである、実施形態７４７の組み合わせ。
７４９．組み合わせにおけるＢ細胞標的化剤の量は、対象に投与されるとき、抗ＣＤ１９剤の投与後に対象がＣＲＳを発現する可能性を低減するのに有効である、実施形態１～７４８のいずれか１つの組み合わせ。
７５０．組み合わせにおけるＢ細胞標的化剤の量は、抗ＣＤ１９剤の投与後に、対象におけるＣＲＳの１つ以上の症状の重症度を、Ｂ細胞標的化剤の不在下での１つ以上の症状の重症度と比較して低下させるのに有効である、実施形態１～７４８のいずれか１つの組み合わせ。
７５１．抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の分子である、実施形態１～７５０のいずれか１つの組み合わせ。
７５２．抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の医薬組成物中で製剤化される、実施形態１～７５１のいずれか１つの組み合わせ。
７５３．抗ＣＤ１９剤及び／又はＢ細胞標的化剤は、単位剤形で製剤化される、実施形態７５２の組み合わせ。
７５４．Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を治療する方法で使用するためのものである、施形態１～７５３のいずれか１つの組み合わせ。
７５５．Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を治療する方法であって、実施形態１～７５３のいずれか１つの組み合わせを対象に投与することを含む方法。
７５６．実施形態７５４に従う使用のための組み合わせ又は実施形態７５５の方法であって、方法は、抗ＣＤ１９剤の対象への初回投与前に、Ｂ細胞標的化剤を対象に１回以上投与することを含む、使用のための組み合わせ又は方法。
７５７．実施形態７５４～７５６のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法であって、方法は、抗ＣＤ１９剤の対象への初回投与前に、Ｂ細胞標的化剤を対象に単回投与することを含む、使用のための組み合わせ又は方法。
７５８．実施形態７５４～７５６のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法であって、方法は、抗ＣＤ１９剤の対象への初回投与前に、Ｂ細胞標的化剤を対象に２回以上投与することを含む、使用のための組み合わせ又は方法。
７５９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、細胞表面ＣＤ１９を発現するＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態７５４～７５８のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６０．Ｂ細胞悪性腫瘍は、血液癌である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、悪性リンパ増殖性状態である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、形質細胞悪液質である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６３．Ｂ細胞悪性腫瘍は、急性白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６４．Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６６．Ｂ細胞悪性腫瘍は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６８．Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７０．Ｂ細胞悪性腫瘍は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）であり、任意選択的に、ＦＬは、小細胞ＦＬ又は大細胞ＦＬである、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性濾胞性リンパ腫（ＦＬ）であり、任意選択的に、ＦＬは、小細胞ＦＬ又は大細胞ＦＬである、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７３．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７４．Ｂ細胞悪性腫瘍は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７６．Ｂ細胞悪性腫瘍は、バーキットリンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７８．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８０．Ｂ細胞悪性腫瘍は、節外性辺縁帯リンパ腫（ＥＭＺＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＺＭＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＳＭＺＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８３．対象は、少なくとも１回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７６６～７８２のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８４．対象は、最大で５回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３の使用のための組み合わせ又は方法。
７８５．対象は、１回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８６．対象は、２回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８７．対象は、３回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８８．対象は、４回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８９．対象は、５回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７９０．少なくとも１回の以前の標準治療は、抗ＣＤ２０療法を含む、実施形態７８３～７８９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９１．抗ＣＤ２０療法は、リツキシマブである、実施形態７９０の使用のための組み合わせ又は方法。
７９２．対象は、１つ以上の他の承認された療法に対して不耐性又は不適格である、実施形態７８３～７９１のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９３．１つ以上の他の承認された療法は、自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を含む、実施形態７９２の使用のための組み合わせ又は方法。
７９４．対象は、ＣＡＲ組成物に対して非応答者である、実施形態７８３～７９３のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９５．ＣＡＲ組成物は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ組成物である、実施形態７９４の使用のための組み合わせ又は方法。
７９６．ＣＡＲ組成物は、ＣＴＬ０１９、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、ブレクスカブタゲンオートロイセル又はリソカブタゲンマラロイセルを含む、実施形態７９４又は実施形態７９５の使用のための組み合わせ又は方法。
７９７．抗ＣＤ１９剤は、キメラ抗原受容体を含まず、且つ／又はＣＡＲ組成物ではない、実施形態７９４～７９６のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９８．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ホジキンリンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、多発性骨髄腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８００．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ヘアリー細胞白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、原発性滲出性リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞前リンパ球性白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０３．Ｂ細胞悪性腫瘍は、形質芽球性リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０４．Ｂ細胞悪性腫瘍は、濾胞中心リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、前駆体Ｂリンパ芽球性白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０６．Ｂ細胞悪性腫瘍は、高グレードＢ細胞リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０８．Ｂ細胞標的化剤と組み合わせた薬剤としての使用のための抗ＣＤ１９剤。
８０９．Ｂ細胞標的化剤と組み合わせた、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療で使用するための抗ＣＤ１９剤。
８１０．実施形態８０８又は実施形態８０９に従う使用のための抗ＣＤ１９剤であって、実施形態２～７００のいずれか１つに従うＣＤ１９剤である、抗ＣＤ１９剤。
８１１．Ｂ細胞標的化剤は、実施形態７０１～７４１のいずれか１つに従うＢ細胞標的化剤である、実施形態８０８～８１０のいずれか１つに従う使用のための抗ＣＤ１９剤。
８１２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８０９～８１１のいずれか１つに従う使用のための抗ＣＤ１９剤。
８１３．抗ＣＤ１９剤と組み合わせた薬剤としての使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１４．抗ＣＤ１９剤と組み合わせた、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療で使用するためのＢ細胞標的化剤。
８１５．抗ＣＤ１９剤は、実施形態２～７００のいずれか１つに記載のＣＤ１９剤である、実施形態８１３又は実施形態８１４に従う使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１６．実施形態７０１～７４１のいずれか１つに記載のＢ細胞標的化剤である、実施形態８１３～８１５のいずれか１つに従う使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８１４～８１６のいずれか１つに従う使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１８．Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するための薬剤の製造における抗ＣＤ１９剤の使用であって、薬剤は、Ｂ細胞標的化剤と組み合わせた投与のためのものである、使用。
８１９．抗ＣＤ１９剤は、実施形態２～７００のいずれか１つに記載のＣＤ１９剤である、実施形態８１８の使用。
８２０．Ｂ細胞標的化剤は、実施形態７０１～７４１のいずれか１つに記載のＢ細胞標的化剤である、実施形態８１８～８１９のいずれか１つに従う使用。
８２１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８０９～８１１のいずれか１つに従う使用。
８２２．Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するための薬剤の製造におけるＢ細胞標的化剤の使用であって、薬剤は、抗ＣＤ１９剤と組み合わせた投与のためのものである、使用。
８２３．抗ＣＤ１９剤は、実施形態２～７００のいずれか１つに記載のＣＤ１９剤である、実施形態８２２に従う使用。
８２４．Ｂ細胞標的化剤は、実施形態７０１～７４１のいずれか１つに記載のＢ細胞標的化剤である、実施形態８２２～８２３のいずれか１つに従う使用。
８２５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８２２～８２４のいずれか１つに従う使用。
８２６．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８２７．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８２８．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８２９．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３０．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態８２６～８２９のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８３１．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３２．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３３．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３４．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３５．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態８３１～８３４のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８３６．細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む、実施形態８２６～８３５のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８３７．ＣＡＲ分子は、ｓｃＦｖを含む、実施形態８２６～８３６のいずれか１つのＣＡＲ。
８３８．抗ＣＤ１９結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）にリンカーを介して結合された重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖｓである、実施形態８３７のＣＡＲ分子。
８３９．Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む、実施形態８２６～８３８のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４０．ヒンジ領域を含む、実施形態８２６～８３９のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４１．機能的シグナル伝達ドメインである共刺激ドメインを含む、実施形態８２６～８４０のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４２．共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）又は４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）からのアミノ酸配列を有する、実施形態８４１のＣＡＲ分子。
８４３．４－１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態８２６～８４２のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４４．リーダー配列を含む、実施形態８２６～８４３のいずれか１つのＣＡＲ分子。
１．（ａ）抗ＣＤ１９剤；及び
（ｂ）Ｂ細胞標的化剤
を含む組み合わせ。
２．抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９結合分子である、実施形態１の組み合わせ。
３．ＣＤ１９結合分子は、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
４．ＣＤ１９結合分子は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
５．ＣＤ１９結合分子は、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
６．ＣＤ１９結合分子は、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
７．ＣＤ１９結合分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、実施形態３～６のいずれか１つの組み合わせ。
８．ＣＤ１９結合分子は、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態３～７のいずれか１つの組み合わせ。
９．ＣＤ１９結合分子は、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１０．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１１．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１２．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態２の組み合わせ。
１３．ＣＤ１９結合分子は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨを含む、実施形態９～１２のいずれか１つの組み合わせ。
１４．ＣＤ１９結合分子は、配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態９～１３のいずれか１つの組み合わせ。
１５．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｈ１として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１；
（ｂ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｈ２Ａ、ＨＤ１９－Ｈ２Ｂ、ＣＤ１９－Ｈ２Ｃ及びＣＤ１９－Ｈ２Ｄとして指定されるＣＤＲのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ２；
（ｃ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｈ３として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ３；
（ｄ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｌ１として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１；
（ｅ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｌ２として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ２；及び
（ｆ）表１ＣにおいてＣＤ１９－Ｌ２３として指定されるＣＤＲのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ３
を含む、実施形態２の組み合わせ。
１６．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）表１ＣにおいてＣＤ１９－ＶＨＡ、ＣＤ１９－ＶＨＢ、ＣＤ１９－ＶＨＣ及びＣＤ１９－ＶＨＤとして指定されるＶＨドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨ；及び
（ｂ）表１ＣにおいてＣＤ１９－ＶＬＡ及びＣＤ１９－ＶＬＢとして指定されるＶＬドメインのいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＬ
を含む、実施形態１５の組み合わせ。
１７．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ａ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
１８．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＡのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＡのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
１９．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｂ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２０．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＢのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
２１．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｃ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２２．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＣのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
２３．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｈ１、ＣＤ１９－Ｈ２Ｄ及びＣＤ１９－Ｈ３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ並びに表１Ｃに記載されるＣＤ１９－Ｌ１、ＣＤ１９－Ｌ２及びＣＤ１９－Ｌ３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２４．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＶＨＤのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び表１Ｃに記載されるＶＬＢのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、実施形態１５の組み合わせ。
２５．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２６．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ２のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２７．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ３のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２８．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ４のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
２９．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ５のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３０．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３１．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ７のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３２．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ８のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３３．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３４．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１０のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３５．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１１のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３６．ＣＤ１９結合分子は、表１Ｃに記載されるＣＤ１９－ｓｃＦｖ１２のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、実施形態１５の組み合わせ。
３７．ＣＤ１９結合分子は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２又は単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）を含む、実施形態２～２４のいずれか１つの組み合わせ。
３８．ＣＤ１９結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインを含む、実施形態３７の組み合わせ。
３９．ＣＤ１９結合分子は、単一特異性結合分子である、実施形態２～３８のいずれか１つの組み合わせ。
４０．ＣＤ１９結合分子は、多重特異性結合分子（ＭＢＭ）である、実施形態２～３８のいずれか１つの組み合わせ。
４１．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；及び
（ｂ）異なる標的分子に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）を含み、任意選択的に、標的分子は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素である、実施形態４０の組み合わせ。
４２．ＡＢＭ１は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態４１の組み合わせ。
４３．ＡＢＭ１は、Ｆａｂである、実施形態４２の組み合わせ。
４４．Ｆａｂは、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態４３の組み合わせ。
４５．ＡＢＭ１は、ｓｃＦｖである、実施形態４２の組み合わせ。
４６．ＡＢＭ１は、抗ＣＤ１９抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態４２の組み合わせ。
４７．ＡＢＭ２は、非免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態４１～４６のいずれか１つの組み合わせ。
４８．ＡＢＭ２は、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィボディ、ダルピン、アビマー、アンチカリン、リポカリン、センチリン、バーサボディ、ノッチン、アドネクチン、プロネクチン、アフィチン／ナノフィチン、アフィリン、アトリマー／テトラネクチン、二環状ペプチド、ｃｙｓ－ｋｎｏｔ、Ｆｎ３足場、Ｏｂｏｄｙ、Ｔｎ３、アフィマー、ＢＤ、アドヒロン、デュオカリン、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質、レペボディ又はフィノマーである、実施形態４７の組み合わせ。
４９．ＡＢＭ２は、免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態４１～４６のいずれか１つの組み合わせ。
５０．ＡＢＭ２は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態４９の組み合わせ。
５１．ＡＢＭ２は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態５０の組み合わせ。
５２．ＡＢＭ２は、ｓｃＦｖである、実施形態５０の組み合わせ。
５３．ＡＢＭ２は、Ｆａｂである、実施形態５０の組み合わせ。
５４．ＡＢＭ２は、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態５０の組み合わせ。
５５．ＡＢＭ２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合する、実施形態４１～５４のいずれか１つの組み合わせ。
５６．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＣＤ３である、実施形態５５の組み合わせ。
５７．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｈｉのＣＤＲ配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
５８．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｍｅｄのＣＤＲ配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
５９．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｌｏのＣＤＲ配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６０．ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ番号付けによって定義される、実施形態５７～５９のいずれか１つの組み合わせ。
６１．ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けによって定義される、実施形態５７～５９のいずれか１つの組み合わせ。
６２．ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けの組み合わせによって定義される、実施形態５７～５９のいずれか１つの組み合わせ。
６３．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｈｉの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６４．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｍｅｄの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６５．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｌｏの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５６の組み合わせ。
６６．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－α、ＴＣＲ－β又はＴＣＲ－α／β二量体である、実施形態５５の組み合わせ。
６７．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－αである、実施形態６６の組み合わせ。
６８．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－βである、実施形態６６の組み合わせ。
６９．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－α／β二量体である、実施形態６６の組み合わせ。
７０．ＡＢＭ２は、ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列を含む、実施形態６６の組み合わせ。
７１．ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ番号付けによって定義される、実施形態７０の組み合わせ。
７２．ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けによって定義される、実施形態７０の組み合わせ。
７３．ＢＭＡ０３１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けの組み合わせによって定義される、実施形態７０の組み合わせ。
７４．ＡＢＭ２は、ＢＭＡ０３１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態７０の組み合わせ。
７５．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－γ、ＴＣＲ－δ又はＴＣＲ－γ／δ二量体である、実施形態５５の組み合わせ。
７６．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－γである、実施形態７５の組み合わせ。
７７．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－δである、実施形態７５の組み合わせ。
７８．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＴＣＲ－γ／δ二量体である、実施形態７５の組み合わせ。
７９．ＡＢＭ２は、δＴＣＳ１のＣＤＲ配列を含む、実施形態７５の組み合わせ。
８０．δＴＣＳ１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ番号付けによって定義される、実施形態７９の組み合わせ。
８１．δＴＣＳ１のＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けによって定義される、実施形態７９の組み合わせ。
８２．δＴＣＳ１のＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けの組み合わせによって定義される、実施形態７９の組み合わせ。
８３．ＡＢＭ２は、δＴＣＳ１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態７９の組み合わせ。
８４．ＡＢＭ１は、ＡＢＭ２がその標的分子に結合されるのと同時にＣＤ１９に結合する能力がある、実施形態４１～８３のいずれか１つの組み合わせ。
８５．ＣＤ１９結合分子は、二重特異性結合分子（ＢＢＭ）である、実施形態４０～８４のいずれか１つのＣＤ１９結合分子。
８６．ＢＢＭは、二価である、実施形態８５の組み合わせ。
８７．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｂ～１Ｆで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態８６の組み合わせ。
８８．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｂで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
８９．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｃで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９０．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｄで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９１．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｅで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９２．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｆで表される立体配置を有する、実施形態８７の組み合わせ。
９３．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．１節においてＢ１と称される立体配置を有する、実施形態８７～９２のいずれか１つの組み合わせ。
９４．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．１節においてＢ２と称される立体配置を有する、実施形態８７～９２のいずれか１つの組み合わせ。
９５．ＣＤ１９結合分子は、三価である、実施形態８５の組み合わせ。
９６．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｇ～１Ｚで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態９５の組み合わせ。
９７．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｇで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
９８．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｈで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
９９．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｉで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１００．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｊで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０１．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｋで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０２．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｌで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０３．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｍで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０４．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｎで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０５．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｏで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０６．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｐで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０７．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｑで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０８．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｒで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１０９．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｓで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１０．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｔで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１１．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｕで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１２．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｖで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１３．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｗで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１４．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｘで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１５．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｙで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１６．ＣＤ１９結合分子は、図１Ｚで表される立体配置を有する、実施形態９６の組み合わせ。
１１７．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ１と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１１８．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ２と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１１９．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ３と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２０．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ４と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２１．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ５と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２２．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．２節においてＴ６と称される立体配置を有する、実施形態９５～１１６のいずれか１つの組み合わせ。
１２３．ＣＤ１９結合分子は、四価である、実施形態８５の組み合わせ。
１２４．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＡ～１ＡＨで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１２３の組み合わせ。
１２５．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＡで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２６．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＢで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２７．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＣで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２８．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＤで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１２９．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＥで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３０．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＦで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３１．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＧで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３２．ＣＤ１９結合分子は、図１ＡＨで表される立体配置を有する、実施形態１２４の組み合わせ。
１３３．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３４．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ２と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３５．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ３と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３６．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ４と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３７．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ５と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３８．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ６と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１３９．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ７と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４０．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ８と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４１．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ９と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４２．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１０と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４３．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１１と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４４．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１２と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４５．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１３と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４６．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．３．３節においてＴｖ１４と称される立体配置を有する、実施形態１２３～１３２のいずれか１つの組み合わせ。
１４７．ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９以外の標的分子に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態４１～８４のいずれか１つの組み合わせ。
１４８．ＡＢＭ２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合し、及びＡＢＭ３は、（ｉ）ヒトＣＤ２、又は（ｉｉ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合する、実施形態１４７の組み合わせ。
１４９．三価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１５０．ＣＤ１９結合分子は、図２Ａ～２Ｐで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１４９の組み合わせ。
１５１．ＣＤ１９結合分子は、図２Ａで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５２．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｂで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｃで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５４．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｄで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５５．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｅで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５６．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｆで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５７．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｇで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５８．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｈで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１５９．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｉで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６０．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｊで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６１．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｋで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６２．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｌで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｍで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６４．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｎで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６５．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｏで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６６．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｐで表される立体配置を有する、実施形態１５０の組み合わせ。
１６７．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ１と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１６８．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ２と称される立体配置を有する、施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１６９．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ３と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７０．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ４と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７１．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ５と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７２．ＣＤ１９結合分子は、第７．２．４．１節においてＴ６と称される立体配置を有する、実施形態１５０～１６６のいずれか１つの組み合わせ。
１７３．ＣＤ１９結合分子は、四価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１７４．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｑ～２Ｓで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１７３の組み合わせ。
１７５．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｑで表される立体配置を有する、実施形態１７４の組み合わせ。
１７６．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｒで表される立体配置を有する、実施形態１７４の組み合わせ。
１７７．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｓで表される立体配置を有する、実施形態１７４の組み合わせ。
１７８．ＣＤ１９結合分子は、五価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１７９．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｔで表される立体配置を有する、実施形態１７８の組み合わせ。
１８０．ＣＤ１９結合分子は、六価である、実施形態１４７又は実施形態１４８の組み合わせ。
１８１．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｕ～２Ｖで表される立体配置のいずれか１つを有する、実施形態１８０の組み合わせ。
１８２．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｕで表される立体配置を有する、実施形態１８１の組み合わせ。
１８３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｖで表される立体配置を有する、実施形態１８１の組み合わせ。
１８４．ＡＢＭ１は、ＡＢＭ３がその標的分子に結合されるのと同時にＣＤ１９に結合する能力がある、実施形態１４７～１８３のいずれか１つの組み合わせ。
１８５．ＡＢＭ３は、ヒトＣＤ２に特異的に結合する、実施形態１４７～１８４のいずれか１つの組み合わせ。
１８６．ＡＢＭ３は、非免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態１８５の組み合わせ。
１８７．ＡＢＭ３は、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィボディ、ダルピン、アビマー、アンチカリン、リポカリン、センチリン、バーサボディ、ノッチン、アドネクチン、プロネクチン、アフィチン／ナノフィチン、アフィリン、アトリマー／テトラネクチン、二環状ペプチド、ｃｙｓ－ｋｎｏｔ、Ｆｎ３足場、Ｏｂｏｄｙ、Ｔｎ３、アフィマー、ＢＤ、アドヒロン、デュオカリン、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質、レペボディ又はフィノマーである、実施形態１８６の組み合わせ。
１８８．ＡＢＭ３は、ＣＤ２リガンドの受容体結合ドメインを含む、実施形態１８６の組み合わせ。
１８９．ＡＢＭ３は、ＣＤ５８部分である、実施形態１８５の組み合わせ。
１９０．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－１のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９１．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－２のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９２．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－３のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９３．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－４のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９４．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－５のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
１９５．Ｂとして指定されるアミノ酸は、フェニルアラニンである、実施形態１９４の組み合わせ。
１９６．Ｂとして指定されるアミノ酸は、セリンである、実施形態１９４の組み合わせ。
１９７．Ｊとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態１９４～１９６のいずれか１つの組み合わせ。
１９８．Ｊとして指定されるアミノ酸は、リジンである、実施形態１９４～１９６のいずれか１つの組み合わせ。
１９９．Ｏとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態１９４～１９８のいずれか１つの組み合わせ。
２００．Ｏとして指定されるアミノ酸は、グルタミンである、実施形態１９４～１９８のいずれか１つの組み合わせ。
２０１．Ｕとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態１９４～２００のいずれか１つの組み合わせ。
２０２．Ｕとして指定されるアミノ酸は、リジンである、実施形態１９４～２００のいずれか１つの組み合わせ。
２０３．Ｘとして指定されるアミノ酸は、トレオニンである、実施形態１９４～２０２のいずれか１つの組み合わせ。
２０４．Ｘとして指定されるアミノ酸は、セリンである、実施形態１９４～２０２のいずれか１つの組み合わせ。
２０５．Ｚとして指定されるアミノ酸は、ロイシンである、実施形態１９４～２０４のいずれか１つの組み合わせ。
２０６．Ｚとして指定されるアミノ酸は、グリシンである、実施形態１９４～２０４のいずれか１つの組み合わせ。
２０７．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２０８．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－７のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２０９．Ｊとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態２０８の組み合わせ。
２１０．Ｊとして指定されるアミノ酸は、リジンである、実施形態２０８の組み合わせ。
２１１．Ｏとして指定されるアミノ酸は、バリンである、実施形態２０８～２１０のいずれか１つの組み合わせ。
２１２．Ｏとして指定されるアミノ酸は、グルタミンである、実施形態２０８～２１０のいずれか１つの組み合わせ。
２１３．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－８のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１４．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－９のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１５．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－１０のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１６．ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－１１のアミノ酸配列を含む、実施形態１８９の組み合わせ。
２１７．ＡＢＭ３は、ＣＤ４８部分である、実施形態１８５の組み合わせ。
２１８．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも７０％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２１９．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも８０％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２０．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも９０％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２１．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも９５％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２２．ＣＤ４８部分は、Ｕｎｉｐｒｏｔ識別子Ｐ０９３２６のアミノ酸配列のアミノ酸２７～２２０と少なくとも９９％の配列同一性を有する、実施形態２１７の組み合わせ。
２２３．ＡＢＭ３は、免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態１８５の組み合わせ。
２２４．ＡＢＭ３は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態２２３の組み合わせ。
２２５．ＡＢＭ３は、抗ＣＤ２抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態２２３の組み合わせ。
２２６．ＡＢＭ３は、ｓｃＦｖである、実施形態２２４の組み合わせ。
２２７．ＡＢＭ３は、Ｆａｂである、実施形態２２４の組み合わせ。
２２８．ＡＢＭ３は、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態２２７の組み合わせ。
２２９．ＡＢＭ３は、ＣＤ２－１のＣＤＲ配列を含む、実施形態２２３～２２８のいずれか１つの組み合わせ。
２３０．ＡＢＭ３は、ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３１．ＡＢＭ３は、ｈｕ１ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３２．ＡＢＭ３は、ｈｕ２ＣＤ２－１の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３３．ＡＢＭ３は、Ｍｅｄｉ５０７のＣＤＲ配列を含む、実施形態２２９の組み合わせ。
２３４．ＡＢＭ３は、Ｍｅｄｉ５０７の重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態２３３の組み合わせ。
２３５．ＡＢＭ３は、ヒトＴＡＡに特異的に結合する、実施形態１４７～１８４のいずれか１つの組み合わせ。
２３６．ＡＢＭ３は、非免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態２３５の組み合わせ。
２３７．ＴＡＡが受容体である場合、ＡＢＭ３は、受容体のリガンドの受容体結合ドメインを含み、ＴＡＡがリガンドである場合、ＡＢＭ３は、リガンドの受容体のリガンド結合ドメインを含む、実施形態２３６の組み合わせ。
２３８．ＡＢＭ３は、クニッツドメイン、アドネキシン、アフィボディ、ダルピン、アビマー、アンチカリン、リポカリン、センチリン、バーサボディ、ノッチン、アドネクチン、プロネクチン、アフィチン／ナノフィチン、アフィリン、アトリマー／テトラネクチン、二環状ペプチド、ｃｙｓ－ｋｎｏｔ、Ｆｎ３足場、Ｏｂｏｄｙ、Ｔｎ３、アフィマー、ＢＤ、アドヒロン、デュオカリン、アルファボディ、アルマジロリピートタンパク質、レペボディ又はフィノマーである、実施形態２３６の組み合わせ。
２３９．ＡＢＭ３は、免疫グロブリン足場に基づくＡＢＭである、実施形態２３５の組み合わせ。
２４０．ＡＢＭ３は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２、単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）、ＶＨ若しくはＶＬドメイン又はラクダＶＨＨドメインである、実施形態２３９の組み合わせ。
２４１．ＡＢＭ３は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態２４０の組み合わせ。
２４２．ＡＢＭ３は、ｓｃＦｖである、実施形態２４０の組み合わせ。
２４３．ＡＢＭ３は、Ｆａｂである、実施形態２４０の組み合わせ。
２４４．ＡＢＭ３は、Ｆａｂヘテロ二量体である、実施形態２４３の組み合わせ。
２４５．ＴＡＡは、Ｂ細胞由来の形質細胞である癌性Ｂ細胞上で発現されるＴＡＡである、実施形態２３５～２４４のいずれか１つの組み合わせ。
２４６．ＴＡＡは、形質細胞でない癌性Ｂ細胞上で発現されるＴＡＡである、実施形態２３５～２４５のいずれか１つの組み合わせ。
２４７．ＴＡＡは、ＢＣＭＡ、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ１２３、ＣＤ３３、ＣＬＬ１、ＣＤ１３８、ＣＳ１、ＣＤ３８、ＣＤ１３３、ＦＬＴ３、ＣＤ５２、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃ、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂ、ＣＸＣＲ４、ＰＤ－Ｌ１、ＬＹ９、ＣＤ２００、ＦＣＧＲ２Ｂ、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ７２、ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂから選択される、実施形態２３５～２４６のいずれか１つの組み合わせ。
２４８．ＴＡＡは、ＢＣＭＡである、実施形態２４７の組み合わせ。
２４９．ＴＡＡは、ＣＤ２０である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５０．ＴＡＡは、ＣＤ２２である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５１．ＴＡＡは、ＣＤ１２３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５２．ＴＡＡは、ＣＤ３３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５３．ＴＡＡは、ＣＬＬ１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５４．ＴＡＡは、ＣＤ１３８である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５５．ＴＡＡは、ＣＳ１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５６．ＴＡＡは、ＣＤ３８である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５７．ＴＡＡは、ＣＤ１３３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５８．ＴＡＡは、ＦＬＴ３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２５９．ＴＡＡは、ＣＤ５２である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６０．ＴＡＡは、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｃである、実施形態２４７の組み合わせ。
２６１．ＴＡＡは、ＴＮＦＲＳＦ１３Ｂである、実施形態２４７の組み合わせ。
２６２．ＴＡＡは、ＣＸＣＲ４である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６３．ＴＡＡは、ＰＤ－Ｌ１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６４．ＴＡＡは、ＬＹ９である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６５．ＴＡＡは、ＣＤ２００である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６６．ＴＡＡは、ＦＣＧＲ２Ｂである、実施形態２４７の組み合わせ。
２６７．ＴＡＡは、ＣＤ２１である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６８．ＴＡＡは、ＣＤ２３である、実施形態２４７の組み合わせ。
２６９．ＡＢＭ３は、表１３に記載される結合配列を含む、実施形態２４７の組み合わせ。
２７０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインを形成する、第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域を含む、実施形態３８～２６９のいずれか１つの組み合わせ。
２７１．第１の変異体Ｆｃ領域は、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、及び第２の変異体Ｆｃ領域は、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ（「ＬＡＬＡＧＡ」）置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｋ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」）置換、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＤＡＰＡＳＫ」）置換、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＧＡＤＡＰＡ」）置換、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」）置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「ＬＡＬＡＰＧ」）置換又はＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７０の組み合わせ。
２７２．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ（「ＬＡＬＡＧＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７３．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｋ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７４．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＤＡＰＡＳＫ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７５．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＧＡＤＡＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７６．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７７．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「ＬＡＬＡＰＧ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７８．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、実施形態２７１の組み合わせ。
２７９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１、ＦＣＶ－２、ＦＣＶ－３、ＦＣＶ－４、ＦＣＶ－５、ＦＣＶ－６又はＦＣＶ－７と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７１の組み合わせ。
２８０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２８９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
２９９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３００．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３０９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９６％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１２．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９７％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１３．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９８％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１４．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と少なくとも９９％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１５．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－１と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１６．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－２と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１７．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－３と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１８．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－４と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３１９．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－５と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３２０．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－６と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３２１．第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ＦＣＶ－７と１００％の同一性を有する配列を含む、実施形態２７９の組み合わせ。
３２２．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成する、実施形態２７０～３２１のいずれか１つの組み合わせ。
３２３．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｔ３６６Ｗ：Ｔ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２４．第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２５．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２６．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｅ／Ｋ３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２７．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｔ４１１Ｔ／Ｅ３６０Ｅ／Ｑ３６２Ｅ：Ｄ４０１Ｋを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２８．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｌ３６８Ｄ ３７０Ｓ：Ｓ３６４／Ｅ３５７Ｌを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３２９．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換３７０Ｓ：Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑを含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３０．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレットの図４（表４中で再現される）に列挙される立体変異体のいずれか１つのアミノ酸置換を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３１．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレットの図５（表４中で再現される）に列挙される変異体のいずれかのアミノ酸置換を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３２．第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、国際公開第２０１４／１１０６０１号パンフレットの図６（表４中で再現される）に列挙される変異体のいずれかのアミノ酸置換を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
３３３．Ｆｃ領域の少なくとも１つは、切除変異体修飾を含む、実施形態３２２～３３２のいずれか１つの組み合わせ。
３３４．切除変異体修飾は、表３から選択される、実施形態３３３の組み合わせ。
３３５．切除変異体修飾は、Ｇ２３６Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３６．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３７．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３８．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｑを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３３９．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４０．切除変異体修飾は、Ｖ２６６Ｄを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４１．切除変異体修飾は、Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４２．切除変異体修飾は、Ｓ２６７Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４３．切除変異体修飾は、Ｈ２６８Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４４．切除変異体修飾は、Ｅ２６９Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４５．切除変異体修飾は、２９９Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４６．切除変異体修飾は、２９９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４７．切除変異体修飾は、Ｋ３２２Ａを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４８．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３４９．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｌを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５０．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｎを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５１．切除変異体修飾は、Ａ３２７Ｑを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５２．切除変異体修飾は、Ｌ３２８Ｅを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５３．切除変異体修飾は、Ｌ３２８Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５４．切除変異体修飾は、Ｐ３２９Ａを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５５．切除変異体修飾は、Ｐ３２９Ｈを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５６．切除変異体修飾は、Ｐ３２９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５７．切除変異体修飾は、Ａ３３０Ｌを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５８．切除変異体修飾は、Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３５９．切除変異体修飾は、Ｉ３３２Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６０．切除変異体修飾は、Ｉ３３２Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６１．切除変異体修飾は、Ｖ２６６Ｄ／Ａ３２７Ｑを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６２．切除変異体修飾は、Ｖ２６６Ｄ／Ｐ３２９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６３．切除変異体修飾は、Ｇ２３６Ｒ／Ｌ３２８Ｒを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６４．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６５．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６６．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６７．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６８．切除変異体修飾は、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３６９．切除変異体修飾は、Ｓ２３９Ｋ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７０．切除変異体修飾は、２６７Ｋ／Ｐ３２９Ｋを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７１．切除変異体修飾は、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７２．切除変異体修飾は、Ｄ２６５Ｎ／Ｎ２９７Ｄ／Ｐ３２９Ｇを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７３．切除変異体修飾は、Ｄ２６５Ｅ／Ｎ２９７Ｑ／Ｐ３２９Ｓを含む、実施形態３３４の組み合わせ。
３７４．両方の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾を含む、実施形態３３３～３７３のいずれか１つの組み合わせ。
３７５．Ｆｃ領域の少なくとも１つは、ｐＩ変異体置換を更に含む、実施形態３２２～３７４のいずれか１つの組み合わせ。
３７６．ｐＩ変異体置換は、表４から選択される、実施形態３７５の組み合わせ。
３７７．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿ＩＳＯ（－）中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３７８．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３７９．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ｂ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８０．ｐＩ変異体置換は、Ｐｌ＿ＩＳＯ（＋ＲＲ）中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８１．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿ＩＳＯ（＋）中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８２．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ａ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８３．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｂ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８４．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２６９Ｑ／Ｅ２７２Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８５．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２６９Ｑ／Ｅ２８３Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８６．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２７２０／Ｅ２８３Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８７．ｐＩ変異体置換は、ｐｌ＿（＋）＿イソステリック＿Ｅ２６９Ｑ中に存在する置換を含む、実施形態３７６の組み合わせ。
３８８．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、４３４Ａ、４３４Ｓ、４２８Ｌ、３０８Ｆ、２５９Ｉ、４２８Ｌ／４３４Ｓ、２５９Ｉ／３０８Ｆ、４３６Ｉ／４２８Ｌ、４３６１又はＶ／４３４Ｓ、４３６Ｖ／４２８Ｌ、２５２Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、２５９Ｉ／３０８Ｆ／４２８Ｌ、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、３３２Ｅ、３３２Ｄ、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、３２８Ｆ、２６７Ｅ／３２８Ｆ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３９Ｄ／３３２Ｅ／３３０Ｙ、２３９Ｄ、３３２Ｅ／３３０Ｌ、２３６Ｒ、３２８Ｒ、２３６Ｒ／３２８Ｒ、２３６Ｎ／２６７Ｅ、２４３Ｌ、２９８Ａ及び２９９Ｔから選択される１つ以上のアミノ酸置換を更に含む、実施形態３２２～３８７のいずれか１つの組み合わせ。
３８９．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換４３４Ａ、４３４Ｓ又は４３４Ｖを更に含む、実施形態３２２～３８７のいずれか１つの組み合わせ。
３９０．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換４２８Ｌを更に含む、実施形態３８９の組み合わせ。
３９１．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３０８Ｆを更に含む、実施形態３８９～３９０のいずれか１つの組み合わせ。
３９２．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５９Ｉを更に含む、実施形態３８９～３９１のいずれか１つの組み合わせ。
３９３．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換４３６Ｉを更に含む、実施形態３８９～３９２のいずれか１つの組み合わせ。
３９４．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５２Ｙを更に含む、実施形態３８９～３９３のいずれか１つの組み合わせ。
３９５．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５４Ｔを更に含む、実施形態３８９～３９４のいずれか１つの組み合わせ。
３９６．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２５６Ｅを更に含む、実施形態３８９～３９５のいずれか１つの組み合わせ。
３９７．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２３９Ｄ又は２３９Ｅを更に含む、実施形態３８９～３９６のいずれか１つの組み合わせ。
３９８．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３３２Ｅ又は３３２Ｄを更に含む、実施形態３８９～３９７のいずれか１つの組み合わせ。
３９９．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２６７Ｄ又は２６７Ｅを更に含む、実施形態３８９～３９８のいずれか１つの組み合わせ。
４００．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３３０Ｌを更に含む、実施形態３８９～３９９のいずれか１つの組み合わせ。
４０１．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２３６Ｒ又は２３６Ｎを更に含む、実施形態３８９～４００のいずれか１つの組み合わせ。
４０２．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換３２８Ｒを更に含む、実施形態３８９～４０１のいずれか１つの組み合わせ。
４０３．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２４３Ｌを更に含む、実施形態３８９～４０２のいずれか１つの組み合わせ。
４０４．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２９８Ａを更に含む、実施形態３８９～４０３のいずれか１つの組み合わせ。
４０５．第１及び／又は第２のＦｃ領域は、アミノ酸置換２９９Ｔを更に含む、実施形態３８９～４０４のいずれか１つの組み合わせ。
４０６．（ａ）第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ３６４Ｋ／Ｅ３５７Ｑ：Ｌ３６８Ｄ／Ｋ３７０Ｓを含み；
（ｂ）第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含み、及び
（ｃ）第１の変異体Ｆｃ領域及び／又は第２の変異体Ｆｃ領域は、ｐＩ変異体置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ）を含む、実施形態３２２の組み合わせ。
４０７．第１の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態４０６の組み合わせ。
４０８．第２の変異体Ｆｃ領域は、切除変異体修飾Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋを含む、実施形態４０６～４０７のいずれか１つの組み合わせ。
４０９．第１の変異体Ｆｃ領域は、ｐＩ変異体置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ）を含む、実施形態４０６～４０８のいずれか１つの組み合わせ。
４１０．第２の変異体Ｆｃ領域は、ｐＩ変異体置換Ｎ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ（ｐｌ＿（－）＿イソステリック＿Ａ）を含む、実施形態４０６～４０９のいずれか１つの組み合わせ。
４１１．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５２と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１２．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５２と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１３．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５２のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１４．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５２のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４１０のいずれか１つの組み合わせ。
４１５．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５３と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１６．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５３と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１７．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５３のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１８．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５３のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４１９．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５４と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２０．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５４と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２１．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５４のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２２．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５４のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４１４のいずれか１つの組み合わせ。
４２３．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２４．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、配列番号２５１と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２５．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換で修飾された配列番号２５１のアミノ酸配列を含む、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２６．第１の変異体Ｆｃ領域又は第２の変異体Ｆｃ領域は、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位の１、２、３、４、５又は６つで置換を有する配列番号２５１のアミノ酸配列を含み、任意選択的に、置換の１つ以上は、実施形態３２４～４１０のいずれか１つで列挙される置換である、実施形態３２２～４２２のいずれか１つの組み合わせ。
４２７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃドメインを含む、実施形態４０～２６９のいずれか１つの組み合わせ。
４２８．Ｆｃドメインは、Ｆｃヘテロ二量体である、実施形態４２７の組み合わせ。
４２９．Ｆｃヘテロ二量体は、表４に記載されるＦｃ修飾のいずれかを含む、実施形態４２８の組み合わせ。
４３０．Ｆｃヘテロ二量体は、ノブ・イン・ホール（「ＫＩＨ」）修飾を含む、実施形態４２８の組み合わせ。
４３１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１～Ｆｃ１５０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４２８～４３０のいずれか１つの組み合わせ。
４３２．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１～Ｆｃ５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３３．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ６～Ｆｃ１０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１１～Ｆｃ１５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３５．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１６～Ｆｃ２０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ２１～Ｆｃ２５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ２６～Ｆｃ３０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３８．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ３１～Ｆｃ３５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４３９．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ３６～Ｆｃ４０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ４１～Ｆｃ４５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ４６～Ｆｃ５０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４２．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ５１～Ｆｃ５５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４３．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ５６～Ｆｃ６０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ６１～Ｆｃ６５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４５．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ６６～Ｆｃ７０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ７１～Ｆｃ７５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ７６～Ｆｃ８０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４８．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ８１～Ｆｃ８５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４４９．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ８６～Ｆｃ９０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ９１～Ｆｃ９５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ９６～Ｆｃ１００として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５２．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１０１～Ｆｃ１０５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５３．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１０６～Ｆｃ１１０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１１１～Ｆｃ１１５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５５．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１１６～Ｆｃ１２０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１２１～Ｆｃ１２５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５７．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１２６～Ｆｃ１３０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５８．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１３１～Ｆｃ１３５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４５９．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１３６～Ｆｃ１４０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４６０．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１４１～Ｆｃ１４５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４６１．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１４６～Ｆｃ１５０として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態４３１の組み合わせ。
４６２．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、改変されたエフェクター機能を有する、実施形態４２７～４６１のいずれか１つの組み合わせ。
４６３．Ｆｃドメインは、１つ以上のＦｃ受容体への改変された結合を有する、実施形態４６２の組み合わせ。
４６４．１つ以上のＦｃ受容体は、ＦｃＲＮを含む、実施形態４６３の組み合わせ。
４６５．１つ以上のＦｃ受容体は、白血球受容体を含む、実施形態４６３又は実施形態４６４の組み合わせ。
４６６．Ｆｃは、修飾されたジスルフィド結合構造を有する、実施形態４２７～４６５のいずれか１つの組み合わせ。
４６７．Ｆｃは、改変されたグリコシル化パターンを有する、実施形態４２７～４６６のいずれか１つの組み合わせ。
４６８．Ｆｃは、ヒンジ領域を含む、実施形態４２７～４６７のいずれか１つの組み合わせ。
４６９．ヒンジ領域は、第７．２．２．２節に記載されるヒンジ領域のいずれか１つを含む、実施形態４６８の組み合わせ。
４７０．ヒンジ領域は、Ｈ１として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７１．ヒンジ領域は、Ｈ２として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７２．ヒンジ領域は、Ｈ３として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７３．ヒンジ領域は、Ｈ４として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７４．ヒンジ領域は、Ｈ５として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７５．ヒンジ領域は、Ｈ６として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７６．ヒンジ領域は、Ｈ７として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７７．ヒンジ領域は、Ｈ８として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７８．ヒンジ領域は、Ｈ９として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４７９．ヒンジ領域は、Ｈ１０として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８０．ヒンジ領域は、Ｈ１１として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８１．ヒンジ領域は、Ｈ１２として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８２．ヒンジ領域は、Ｈ１３として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８３．ヒンジ領域は、Ｈ１４として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８４．ヒンジ領域は、Ｈ１５として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８５．ヒンジ領域は、Ｈ１６として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８６．ヒンジ領域は、Ｈ１７として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８７．ヒンジ領域は、Ｈ１８として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８８．ヒンジ領域は、Ｈ１９として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４８９．ヒンジ領域は、Ｈ２０として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４９０．ヒンジ領域は、Ｈ２１として示されるヒンジ領域のアミノ酸配列を含む、実施形態４６９の組み合わせ。
４９１．ＣＤ１９結合分子は、少なくとも１つのｓｃＦｖドメインを含む、実施形態４０～４９０のいずれか１つの組み合わせ。
４９２．少なくとも１つのｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬドメインを連結するリンカーを含む、実施形態４９１の組み合わせ。
４９３．リンカーは、５～２５アミノ酸長である、実施形態４９２の組み合わせ。
４９４．リンカーは、１２～２０アミノ酸長である、実施形態４９３の組み合わせ。
４９５．リンカーは、荷電リンカー及び／又は可撓性リンカーである、実施形態４９２～４９４のいずれか１つの組み合わせ。
４９６．リンカーは、リンカーＬ１～Ｌ５４のいずれか１つから選択される、実施形態４９２～４９５のいずれか１つの組み合わせ。
４９７．リンカー領域は、Ｌ１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
４９８．リンカー領域は、Ｌ２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
４９９．リンカー領域は、Ｌ３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５００．リンカー領域は、Ｌ４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０１．リンカー領域は、Ｌ５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０２．リンカー領域は、Ｌ６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０３．リンカー領域は、Ｌ７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０４．リンカー領域は、Ｌ８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０５．リンカー領域は、Ｌ９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０６．リンカー領域は、Ｌ１０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０７．リンカー領域は、Ｌ１１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０８．リンカー領域は、Ｌ１２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５０９．リンカー領域は、Ｌ１３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１０．リンカー領域は、Ｌ１４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１１．リンカー領域は、Ｌ１５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１２．リンカー領域は、Ｌ１６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１３．リンカー領域は、Ｌ１７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１４．リンカー領域は、Ｌ１８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１５．リンカー領域は、Ｌ１９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１６．リンカー領域は、Ｌ２０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１７．リンカー領域は、Ｌ２１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１８．リンカー領域は、Ｌ２２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５１９．リンカー領域は、Ｌ２３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２０．リンカー領域は、Ｌ２４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２１．リンカー領域は、Ｌ２５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２２．リンカー領域は、Ｌ２６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２３．リンカー領域は、Ｌ２７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２４．リンカー領域は、Ｌ２８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２５．リンカー領域は、Ｌ２９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２６．リンカー領域は、Ｌ３０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２７．リンカー領域は、Ｌ３１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２８．リンカー領域は、Ｌ３２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５２９．リンカー領域は、Ｌ３３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３０．リンカー領域は、Ｌ３４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３１．リンカー領域は、Ｌ３５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３２．リンカー領域は、Ｌ３６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３３．リンカー領域は、Ｌ３７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３４．リンカー領域は、Ｌ３８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３５．リンカー領域は、Ｌ３９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３６．リンカー領域は、Ｌ４０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３７．リンカー領域は、Ｌ４１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３８．リンカー領域は、Ｌ４２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５３９．リンカー領域は、Ｌ４３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４０．リンカー領域は、Ｌ４４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４１．リンカー領域は、Ｌ４５として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４２．リンカー領域は、Ｌ４６として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４３．リンカー領域は、Ｌ４７として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４４．リンカー領域は、Ｌ４８として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４５．リンカー領域は、Ｌ４９として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４６．リンカー領域は、Ｌ５０として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４７．リンカー領域は、Ｌ５１として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４８．リンカー領域は、Ｌ５２として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５４９．リンカー領域は、Ｌ５３として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５５０．リンカー領域は、Ｌ５４として示されるリンカーのアミノ酸配列を含む、実施形態４９６の組み合わせ。
５５１．ＣＤ１９結合分子は、少なくとも１つのＦａｂドメインを含む、実施形態４０～５５０のいずれか１つの組み合わせ。
５５２．少なくとも１つのＦａｂドメインは、表２に記載されるＦａｂヘテロ二量体化修飾のいずれかを含む、実施形態５５１の組み合わせ。
５５３．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ１として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５４．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ２として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５５．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ３として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５６．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ４として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５７．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ５として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５８．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ６として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５５９．少なくとも１つのＦａｂドメインは、Ｆ７として示されるＦａｂヘテロ二量体化修飾を含む、実施形態５５２の組み合わせ。
５６０．ＣＤ１９結合分子は、リンカーを介して互いに連結される、少なくとも２つのＡＢＭ、ＡＢＭ及びＡＢＭ鎖又は２つのＡＢＭ鎖を含む、実施形態４０～５５９のいずれか１つの組み合わせ。
５６１．リンカーは、５～２５アミノ酸長である、実施形態５６０の組み合わせ。
５６２．リンカーは、１２～２０アミノ酸長である、実施形態５６１の組み合わせ。
５６３．リンカーは、荷電リンカー及び／又は可撓性リンカーである、実施形態５６０～５６２のいずれか１つの組み合わせ。
５６４．リンカーは、リンカーＬ１～Ｌ５４のいずれか１つから選択される、実施形態５６０～５６３のいずれか１つの組み合わせ。
５６５．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；及び
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態２の組み合わせ。
５６６．ＣＤ１９結合分子は、三価である、実施形態５６５の組み合わせ。
５６７．ＡＢＭ１は、Ｆａｂである、実施形態５６５又は５６６の組み合わせ。
５６８．ＡＢＭ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態５６５～５６７のいずれか１つの組み合わせ。
５６９．ＴＣＲ複合体の構成要素は、ＣＤ３である、実施形態５６５～５６９のいずれか１つの組み合わせ。
５７０．ＡＢＭ２は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態５６９の組み合わせ。
５７１．ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｈｉのＣＤＲ配列を含む、実施形態５７０の組み合わせ。
５７２．ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｈｉの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、実施形態５７０又は５７１の組み合わせ。
５７３．抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖの形態である、実施形態５７０～５７２のいずれか１つの組み合わせ。
５７４．ＡＢＭ２は、表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む、実施形態５７３の組み合わせ。
５７５．ＡＢＭ３は、ＣＤ５８部分である、実施形態５６５～５７４のいずれか１つの組み合わせ。
５７６．ＡＢＭ３は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む、実施形態５６５～５７５のいずれか１つの組み合わせ。
５７７．Ｆｃドメインを含む、実施形態５６５～５７６のいずれか１つの組み合わせ。
５７８．Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成する第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域を含む、実施形態５６５～５７６のいずれか１つの組み合わせ。
５７９．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ（ｉ）配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；又は（ｉｉ）配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；及び
（ｄ）Ｆｃドメイン
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態２の組み合わせ。
５８０．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ（ｉ）配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；又は（ｉｉ）配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；及び
（ｄ）Ｆｃドメイン
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、実施形態２の組み合わせ。
５８１．ＡＢＭ１は、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態５７９又は実施形態５８０の組み合わせ。
５８２．ＡＢＭ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態５７９～５８１のいずれか１つの組み合わせ。
５８３．ＣＤ１９結合分子は、図２Ｉで表され、第７．２．４．１節においてＴ２と称される立体配置を有する、実施形態５６５～５８２のいずれか１つの組み合わせ。
５８４．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃヘテロ二量体であるＦｃドメインを含む、実施形態５６５～５８３のいずれか１つの組み合わせ。
５８５．ＣＤ１９結合分子のＦｃヘテロ二量体は、ノブ・イン・ホール（「ＫＩＨ」）修飾を含む、実施形態５８４の組み合わせ。
５８６．ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃ１２１～Ｆｃ１２５として指定されるＦｃ修飾の少なくとも１つを含む、実施形態５８５の組み合わせ。
５８７．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、改変されたエフェクター機能を有する、実施形態５８４～５８６のいずれか１つの組み合わせ。
５８８．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、１つ以上のＦｃ受容体への改変された結合を有する、実施形態５８７の組み合わせ。
５８９．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、Ｄ２６５Ａ突然変異を含むサイレントＩｇＧ１である、実施形態５８４～５８８のいずれか１つの組み合わせ。
５９０．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ突然変異を含むサイレントＩｇＧ１である、実施形態５８４～５８９のいずれか１つの組み合わせ。
５９１．ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）は、定常ヒトＩｇＧ１ドメインＣＨ１に融合されたＶＨ及び定常ヒトカッパ配列に融合されたＶＬを含む、実施形態５６５～５９０のいずれか１つの組み合わせ。
５９２．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、
（ａ）修飾Ｔ３６６Ｗを含む第１のＣＨ３ドメイン；及び
（ｂ）第１のＣＨ３ドメインとヘテロ二量体を形成し、修飾Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む第２のＣＨ３ドメイン
を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、実施形態５８４～５９１のいずれか１つの組み合わせ。
５９３．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、
（ａ）修飾Ｓ３５４Ｃを含む第１のＣＨ３ドメイン、及び
（ｂ）修飾Ｙ３４９Ｃを含む第２のＣＨ３ドメイン
を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである、実施形態５８４～５９２のいずれか１つの組み合わせ。
５９４．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、２３３位、２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２３９位、２６５位、２６６位、２６７位、２６８位、２６９位、２９７位、２９９位、３２２位、３２７位、３２８位、３２９位、３３０位、３３１位及び３３２位（ＥＵ番号付け）の１、２、３、４、５又は６つの位置で突然変異を有する配列番号２５１のヒトＩｇＧ１配列を含む、実施形態５８４～５９３のいずれか１つの組み合わせ。
５９５．ＣＤ１９結合分子のＦｃドメインは、２６５位のアスパラギン酸残基をアラニン残基で、２９７位のアスパラギン残基をアラニン残基で、且つ３２９位のプロリン残基をアラニン残基で置換すること（Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ／Ｐ３２９Ａ）によって修飾されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む、実施形態５８４～５９４のいずれか１つの組み合わせ。
５９６．ＣＤ１９結合分子において、ａ）ＶＨは、定常ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインに融合され、ｓｃＦｖを含む、ＣＤ３に特異的に結合するｂ）抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）にリンカーによって連結される、実施形態５８２～５９５のいずれか１つの組み合わせ。
５９７．ａ）ＶＨは、定常ヒトＩｇＧ１ ＣＨ１ドメインに融合され、ｄ）Ｆｃドメインにリンカーによって連結されるｓｃＦｖを含む、ＣＤ３に特異的に結合するｂ）抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）にリンカーによって連結される、実施形態５８２～５９５のいずれか１つの組み合わせ。
５９８．ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９に特異的に結合するａ）抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；ＣＤ３に特異的に結合し、且つｓｃＦｖを含むｂ）抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）及びｄ）Ｆｃ領域を含む第１の半抗体；並びにヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つＣＤ５８ ＩｇＶドメインを含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）及びｄ）Ｆｃ領域を含む第２の半抗体を含み、第１の半抗体におけるＦｃ領域及び第２の半抗体におけるＦｃ領域は、Ｆｃヘテロ二量体を形成する、実施形態５６５～５９７のいずれか１つの組み合わせ。
５９９．ＣＤ１９結合分子は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖；及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む第１の半抗体；並びに配列番号６５のアミノ酸配列を含む第２の半抗体を含む、実施形態５９８の組み合わせ。
６００．ＣＤ１９結合分子は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖；及び配列番号６４のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む第１の半抗体；並びに配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む第２の半抗体を含む、実施形態５９８の組み合わせ。
６０１．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１の半抗体重鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６３のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第１の半抗体重鎖；
（ｂ）第１の半抗体軽鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第１の半抗体軽鎖；
（ｃ）第２の半抗体であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６５のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第２の半抗体
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０２．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０３．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０４．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０５．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２０のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２２のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０６．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２７のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２９のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０７．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２６のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０８．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３５のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６０９．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３６のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３７のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１０．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３８のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３９のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１１．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１４０のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１４１のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１２．ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３１のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３２のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１３．ＣＤ１９結合分子は、表２０Ａ－１、表２０Ａ－２、表２０Ｂ又は表２０Ｃ、好ましくは、表２０Ｃで示される構築物の配列を含む、実施形態２の組み合わせ。
６１４．ＣＤ１９結合分子は、ブリナツモマブである、実施形態２の組み合わせ。
６１５．ＣＤ１９結合分子は、コルツキシマブラブタンシンである、実施形態２の組み合わせ。
６１６．ＣＤ１９結合分子は、ＭＯＲ２０８である、実施形態２の組み合わせ。
６１７．ＣＤ１９結合分子は、ＭＥＤＩ－５５１である、実施形態２の組み合わせ。
６１８．ＣＤ１９結合分子は、デニンツズマブマホドチンである、実施形態２の組み合わせ。
６１９．ＣＤ１９結合分子は、ＤＩ－Ｂ４である、実施形態２の組み合わせ。
６２０．ＣＤ１９結合分子は、タプリツモマブパプトクスである、実施形態２の組み合わせ。
６２１．ＣＤ１９結合分子は、ＸｍＡｂ５８７１である、実施形態２の組み合わせ。
６２２．ＣＤ１９結合分子は、ＭＤＸ－１３４２である、実施形態２の組み合わせ。
６２３．ＣＤ１９結合分子は、ＡＦＭ１１である、実施形態２の組み合わせ。
６２４．ＣＤ１９結合分子は、ＭＤＸ－１３４２である、実施形態２の組み合わせ。
６２５．ＣＤ１９結合分子は、ロンカスツキシマブテシリンである、実施形態２の組み合わせ。
６２６．ＣＤ１９結合分子は、ＧＢＲ４０１である、実施形態２の組み合わせ。
６２７．抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子を発現する細胞の集団（「ＣＡＲ組成物」）である、実施形態１の組み合わせ。
６２８．ＣＡＲ分子は、抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態６２７の組み合わせ。
６２９．細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む、実施形態６２８の組み合わせ。
６３０．ＣＡＲ分子は、抗ＣＤ１９結合ドメインの軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｌ１）、軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｌ２）、軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｌ３）、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ－Ｈ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ－Ｈ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ－Ｈ３）を含む抗ＣＤ１９結合ドメインを含む、実施形態６２８又は実施形態６２９の組み合わせ。
６３１．ＣＡＲ分子は、ｓｃＦｖを含む．実施形態６２８～６３０のいずれか１つの組み合わせ。
６３２．抗ＣＤ１９結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）にリンカーを介して結合した重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖである、実施形態６３１の組み合わせ。
６３３．リンカーは、配列番号１４４のアミノ酸配列を含む、実施形態６３２の組み合わせ。
６３４．ＣＡＲ分子は、マウスＣＡＲ分子である、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６３５．ＣＡＲ分子は、表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３の１つ以上並びに表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３の１つ以上を含む、実施形態６２８～６３４のいずれか１つの組み合わせ。
６３６．ＣＡＲ分子は、表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＨ及び表１７に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＬを含む、実施形態６２８～６３５のいずれか１つの組み合わせ。
６３７．ＣＡＲ分子は、表１７に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸を有するＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインを含む、実施形態６２８～６３６のいずれか１つの組み合わせ。
６３８．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１４９のアミノ酸配列又は配列番号１４９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６３９．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１９４のアミノ酸配列又は配列番号１９４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６４０．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１９６のアミノ酸配列又は配列番号１９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６４１．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１９９のアミノ酸配列又は配列番号１９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６３７の組み合わせ。
６４２．ＣＡＲ分子は、表１７に列記される全長ＣＤ１９ ＣＡＲアミノ酸配列又は表１７に列記される全長ＣＤ１９ ＣＡＲアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６２８～６３６のいずれか１つの組み合わせ。
６４３．ＣＡＲ分子は、配列番号１９５のアミノ酸配列又は配列番号１９５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４４．ＣＡＲ分子は、配列番号１９７のアミノ酸配列又は配列番号１９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４５．ＣＡＲ分子は、配列番号１９８のアミノ酸配列又は配列番号１９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４６．ＣＡＲ分子は、配列番号２００のアミノ酸配列又は配列番号２００のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４７．ＣＡＲ分子は、配列番号１４８の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１４８の残基２２～４８６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６４２の組み合わせ。
６４８．ＣＡＲ分子は、ヒト化ＣＡＲ分子である、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６４９．ＣＡＲ分子は、表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３の１つ以上並びに表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３の１つ以上を含む、実施形態６２８～６３３及び６４８のいずれか１つの組み合わせ。
６５０．ＣＡＲ分子は、表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＨ及び表１６に列記されるいずれかのＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列のＶＬを含む、実施形態６２８～６３３、６４８及び６４９のいずれか１つの組み合わせ。
６５１．ＣＡＲ分子は、表１６に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列又は表１６に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６２８～６３３及び６４８～６５０のいずれか１つの組み合わせ。
６５２．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９６のアミノ酸配列又は配列番号９６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５３．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列又は配列番号９７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５４．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９８のアミノ酸配列又は配列番号９８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５５．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号９９のアミノ酸配列又は配列番号９９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５６．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１００のアミノ酸配列又は配列番号１００のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５７．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０１のアミノ酸配列又は配列番号１０１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５８．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０２のアミノ酸配列又は配列番号１０２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６５９．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０３のアミノ酸配列又は配列番号１０３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６０．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列又は配列番号１０４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６１．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０５のアミノ酸配列又は配列番号１０５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６２．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０６のアミノ酸配列又は配列番号１０６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６３．ＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインは、配列番号１０７のアミノ酸配列又は配列番号１０７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６５１の組み合わせ。
６６４．ＣＡＲ分子は、表１６に列記される全長ＣＤ１９ ＣＡＲアミノ酸配列又は表１６に列記されるＣＤ１９ ｓｃＦｖドメインアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６２８～６３３及び６４８～６５１のいずれか１つの組み合わせ。
６６５．ＣＡＲ分子は、配列番号１２２～１２５若しくは１３３のいずれか１つの残基２２～４８６、配列番号１２６～１３２のいずれか１つの残基２２～４９１のアミノ酸配列又は前記配列のいずれかと少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸を含む、実施形態６６４の組み合わせ。
６６６．ＣＡＲ分子は、配列番号１２２の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２２の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６６７．ＣＡＲ分子は、配列番号１２３の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２３の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６６８．ＣＡＲ分子は、配列番号１２４の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２４の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６６９．ＣＡＲ分子は、配列番号１２５の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１２５の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７０．ＣＡＲ分子は、配列番号１３３の残基２２～４８６のアミノ酸配列又は配列番号１３３の残基２２～４８６と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７１．ＣＡＲ分子は、配列番号１２６の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２６の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７２．ＣＡＲ分子は、配列番号１２７の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２７の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７３．ＣＡＲ分子は、配列番号１２８の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２８の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７４．ＣＡＲ分子は、配列番号１２９の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１２９の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７５．ＣＡＲ分子は、配列番号１３０の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１３０の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７６．ＣＡＲ分子は、配列番号１３１の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１３１の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７７．ＣＡＲ分子は、配列番号１３２の残基２２～４９１のアミノ酸配列又は配列番号１３２の残基２２～４９１と少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、実施形態６６５の組み合わせ。
６７８．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６７９．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８０．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８１．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８２．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態６７８～６８１のいずれか１つの組み合わせ。
６８３．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む．実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８４．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８５．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８６．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態６２８～６３３のいずれか１つの組み合わせ。
６８７．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態６８３～６８６のいずれか１つの組み合わせ。
６８８．ＣＡＲ分子は、Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む、実施形態６２７～６８７のいずれか１つの組み合わせ。
６８９．ＣＡＲ分子は、ヒンジ領域を含む、実施形態６２７～６８８のいずれか１つの組み合わせ。
６９０．ＣＡＲ分子は、機能的シグナル伝達ドメインである共刺激ドメインを含む、実施形態６２７～６８９のいずれか１つの組み合わせ。
６９１．共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）又は４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）からのアミノ酸配列を有する、実施形態６９０の組み合わせ。
６９２．ＣＡＲ分子は、４－１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態６２７～６９０のいずれか１つの組み合わせ。
６９３．ＣＡＲ分子は、リーダー配列を含む、実施形態６２７～６９２のいずれか１つの組み合わせ。
６９４．ＣＡＲ分子は、１９２８ｚのアミノ酸配列（配列番号２０１）をそのシグナル（リーダー）配列の存在下又は不在下で含む、実施形態６２７～６３２のいずれか１つの組み合わせ。
６９５．ＣＡＲ分子は、１９２８ｚのｓｃＦｖ部分のアミノ酸配列（配列番号２０１）を含む、実施形態６２７～６３２のいずれか１つの組み合わせ。
６９６．ＣＡＲ分子は、１９２８ｚの重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲのアミノ酸配列（配列番号２０１）を含む、実施形態６２７～６３２のいずれか１つの組み合わせ。
６９７．ＣＡＲ組成物は、チサゲンレクロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
６９８．ＣＡＲ組成物は、アキシカブタゲンシロロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
６９９．ＣＡＲ組成物は、リソカブタゲンマラロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
７００．ＣＡＲ組成物は、ブレクスカブタゲンオートロイセルである、実施形態６２７の組み合わせ。
７０１．Ｂ細胞標的化剤は、Ｂ細胞枯渇剤である、実施形態１～７００のいずれか１つの組み合わせ。
７０２．Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ受容体（ＢＡＦＦＲ）結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７０３．ＢＡＦＦＲ結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７０２の組み合わせ。
７０４．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７０５．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１８に記載されるイアナルマブのＶＨ及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０４の組み合わせ。
７０６．ＢＡＦＦＲ結合分子は、イアナルマブである、実施形態７０５の組み合わせ。
７０７．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７０８．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７０９．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１０．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１１．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１２．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１３．ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３及び表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１４．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－１のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１５．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－２のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１６．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－３のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１７．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－４のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１８．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－５のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７１９．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－６のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７２０．ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１９に記載されるＢＡＦＦＲ－７のＶＨ配列及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、実施形態７０２又は７０３の組み合わせ。
７２１．Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２０結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７２２．ＣＤ２０結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７２１の組み合わせ。
７２３．ＣＤ２０結合分子は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ又はオビヌツズマブである、実施形態７２１又は実施形態７２２の組み合わせ。
７２４．ＣＤ２０結合分子は、リツキシマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２５．ＣＤ２０結合分子は、オファツムマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２６．ＣＤ２０結合分子は、オクレリズマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２７．ＣＤ２０結合分子は、ベルツズマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２８．ＣＤ２０結合分子は、オビヌツズマブである、実施形態７２３の組み合わせ。
７２９．Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２２結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７３０．ＣＤ２２結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３１．ＣＤ２２結合分子は、エプラツズマブである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３２．ＣＤ２２結合分子は、イノツズマブである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３３．ＣＤ２２結合分子は、イノツズマブオゾガマイシンである、実施形態７２９の組み合わせ。
７３４．Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ結合分子である、実施形態１～７０１のいずれか１つの組み合わせ。
７３５．ＢＡＦＦ結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、実施形態７３４の組み合わせ。
７３６．ＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブ、チブリズマブ、ＢＲ３－Ｆｃ、ブリシビモド又はアタシセプトである、実施形態７３４の組み合わせ。
７３７．ＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブである、実施形態７３６の組み合わせ。
７３８．ＢＡＦＦ結合分子は、チブリズマブである、実施形態７３６の組み合わせ。
７３９．ＢＡＦＦ結合分子は、ＢＲ３－Ｆｃである、実施形態７３６の組み合わせ。
７４０．ＢＡＦＦ結合分子は、ブリシビモドである、実施形態７３６の組み合わせ。
７４１．ＢＡＦＦ結合分子は、アタシセプトである、実施形態７３６の組み合わせ。
７４２．１つ以上の追加の薬剤を更に含む、実施形態１～７４１のいずれか１つの組み合わせ。
７４３．１つ以上の追加の薬剤は、コルチコステロイドを含む、実施形態７４２の組み合わせ。
７４４．コルチコステロイドは、デキサメタゾンである、実施形態７４３の組み合わせ。
７４５．コルチコステロイドは、プレドニゾンである、実施形態７４３の組み合わせ。
７４６．１つ以上の追加の薬剤は、免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）を含む、実施形態７４２～７４５のいずれか１つの組み合わせ。
７４７．免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）は、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド又はイベルドミドである、実施形態７４６の組み合わせ。
７４８．免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）は、レナリドミドである、実施形態７４７の組み合わせ。
７４９．組み合わせにおけるＢ細胞標的化剤の量は、対象に投与されるとき、抗ＣＤ１９剤の投与後に対象がＣＲＳを発現する可能性を低減するのに有効である、実施形態１～７４８のいずれか１つの組み合わせ。
７５０．組み合わせにおけるＢ細胞標的化剤の量は、抗ＣＤ１９剤の投与後に、対象におけるＣＲＳの１つ以上の症状の重症度を、Ｂ細胞標的化剤の不在下での１つ以上の症状の重症度と比較して低下させるのに有効である、実施形態１～７４８のいずれか１つの組み合わせ。
７５１．抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の分子である、実施形態１～７５０のいずれか１つの組み合わせ。
７５２．抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の医薬組成物中で製剤化される、実施形態１～７５１のいずれか１つの組み合わせ。
７５３．抗ＣＤ１９剤及び／又はＢ細胞標的化剤は、単位剤形で製剤化される、実施形態７５２の組み合わせ。
７５４．Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を治療する方法で使用するためのものである、施形態１～７５３のいずれか１つの組み合わせ。
７５５．Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を治療する方法であって、実施形態１～７５３のいずれか１つの組み合わせを対象に投与することを含む方法。
７５６．実施形態７５４に従う使用のための組み合わせ又は実施形態７５５の方法であって、方法は、抗ＣＤ１９剤の対象への初回投与前に、Ｂ細胞標的化剤を対象に１回以上投与することを含む、使用のための組み合わせ又は方法。
７５７．実施形態７５４～７５６のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法であって、方法は、抗ＣＤ１９剤の対象への初回投与前に、Ｂ細胞標的化剤を対象に単回投与することを含む、使用のための組み合わせ又は方法。
７５８．実施形態７５４～７５６のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法であって、方法は、抗ＣＤ１９剤の対象への初回投与前に、Ｂ細胞標的化剤を対象に２回以上投与することを含む、使用のための組み合わせ又は方法。
７５９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、細胞表面ＣＤ１９を発現するＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態７５４～７５８のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６０．Ｂ細胞悪性腫瘍は、血液癌である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、悪性リンパ増殖性状態である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、形質細胞悪液質である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６３．Ｂ細胞悪性腫瘍は、急性白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６４．Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性Ｂ細胞急性リンパ球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６６．Ｂ細胞悪性腫瘍は、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６８．Ｂ細胞悪性腫瘍は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７６９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７０．Ｂ細胞悪性腫瘍は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）であり、任意選択的に、ＦＬは、小細胞ＦＬ又は大細胞ＦＬである、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性濾胞性リンパ腫（ＦＬ）であり、任意選択的に、ＦＬは、小細胞ＦＬ又は大細胞ＦＬである、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７３．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７４．Ｂ細胞悪性腫瘍は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、再発性及び／又は難治性びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７６．Ｂ細胞悪性腫瘍は、バーキットリンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、リンパ形質細胞性リンパ腫（ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７８．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ＭＡＬＴリンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７７９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８０．Ｂ細胞悪性腫瘍は、節外性辺縁帯リンパ腫（ＥＭＺＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＮＺＭＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、脾辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（ＳＭＺＬ）である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８３．対象は、少なくとも１回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７６６～７８２のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７８４．対象は、最大で５回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３の使用のための組み合わせ又は方法。
７８５．対象は、１回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８６．対象は、２回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８７．対象は、３回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８８．対象は、４回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７８９．対象は、５回の以前の標準治療に失敗している、実施形態７８３又は実施形態７８４の使用のための組み合わせ又は方法。
７９０．少なくとも１回の以前の標準治療は、抗ＣＤ２０療法を含む、実施形態７８３～７８９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９１．抗ＣＤ２０療法は、リツキシマブである、実施形態７９０の使用のための組み合わせ又は方法。
７９２．対象は、１つ以上の他の承認された療法に対して不耐性又は不適格である、実施形態７８３～７９１のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９３．１つ以上の他の承認された療法は、自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を含む、実施形態７９２の使用のための組み合わせ又は方法。
７９４．対象は、ＣＡＲ組成物に対して非応答者である、実施形態７８３～７９３のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９５．ＣＡＲ組成物は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ組成物である、実施形態７９４の使用のための組み合わせ又は方法。
７９６．ＣＡＲ組成物は、ＣＴＬ０１９、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、ブレクスカブタゲンオートロイセル又はリソカブタゲンマラロイセルを含む、実施形態７９４又は実施形態７９５の使用のための組み合わせ又は方法。
７９７．抗ＣＤ１９剤は、キメラ抗原受容体を含まず、且つ／又はＣＡＲ組成物ではない、実施形態７９４～７９６のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９８．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ホジキンリンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
７９９．Ｂ細胞悪性腫瘍は、多発性骨髄腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８００．Ｂ細胞悪性腫瘍は、ヘアリー細胞白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、原発性滲出性リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞前リンパ球性白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０３．Ｂ細胞悪性腫瘍は、形質芽球性リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０４．Ｂ細胞悪性腫瘍は、濾胞中心リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、前駆体Ｂリンパ芽球性白血病である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０６．Ｂ細胞悪性腫瘍は、高グレードＢ細胞リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、実施形態７５４～７５９のいずれか１つの使用のための組み合わせ又は方法。
８０８．Ｂ細胞標的化剤と組み合わせた薬剤としての使用のための抗ＣＤ１９剤。
８０９．Ｂ細胞標的化剤と組み合わせた、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療で使用するための抗ＣＤ１９剤。
８１０．実施形態８０８又は実施形態８０９に従う使用のための抗ＣＤ１９剤であって、実施形態２～７００のいずれか１つに従うＣＤ１９剤である、抗ＣＤ１９剤。
８１１．Ｂ細胞標的化剤は、実施形態７０１～７４１のいずれか１つに従うＢ細胞標的化剤である、実施形態８０８～８１０のいずれか１つに従う使用のための抗ＣＤ１９剤。
８１２．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８０９～８１１のいずれか１つに従う使用のための抗ＣＤ１９剤。
８１３．抗ＣＤ１９剤と組み合わせた薬剤としての使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１４．抗ＣＤ１９剤と組み合わせた、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療で使用するためのＢ細胞標的化剤。
８１５．抗ＣＤ１９剤は、実施形態２～７００のいずれか１つに記載のＣＤ１９剤である、実施形態８１３又は実施形態８１４に従う使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１６．実施形態７０１～７４１のいずれか１つに記載のＢ細胞標的化剤である、実施形態８１３～８１５のいずれか１つに従う使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１７．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８１４～８１６のいずれか１つに従う使用のためのＢ細胞標的化剤。
８１８．Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するための薬剤の製造における抗ＣＤ１９剤の使用であって、薬剤は、Ｂ細胞標的化剤と組み合わせた投与のためのものである、使用。
８１９．抗ＣＤ１９剤は、実施形態２～７００のいずれか１つに記載のＣＤ１９剤である、実施形態８１８の使用。
８２０．Ｂ細胞標的化剤は、実施形態７０１～７４１のいずれか１つに記載のＢ細胞標的化剤である、実施形態８１８～８１９のいずれか１つに従う使用。
８２１．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８０９～８１１のいずれか１つに従う使用。
８２２．Ｂ細胞悪性腫瘍を治療するための薬剤の製造におけるＢ細胞標的化剤の使用であって、薬剤は、抗ＣＤ１９剤と組み合わせた投与のためのものである、使用。
８２３．抗ＣＤ１９剤は、実施形態２～７００のいずれか１つに記載のＣＤ１９剤である、実施形態８２２に従う使用。
８２４．Ｂ細胞標的化剤は、実施形態７０１～７４１のいずれか１つに記載のＢ細胞標的化剤である、実施形態８２２～８２３のいずれか１つに従う使用。
８２５．Ｂ細胞悪性腫瘍は、実施形態７５９～８０７のいずれか１つに記載のＢ細胞悪性腫瘍である、実施形態８２２～８２４のいずれか１つに従う使用。
８２６．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８２７．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８２８．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８２９．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３０．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態８２６～８２９のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８３１．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３２．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３３．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３４．抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
８３５．抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、実施形態８３１～８３４のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８３６．細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激ドメイン及び一次シグナル伝達ドメインを含む、実施形態８２６～８３５のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８３７．ＣＡＲ分子は、ｓｃＦｖを含む、実施形態８２６～８３６のいずれか１つのＣＡＲ。
８３８．抗ＣＤ１９結合ドメインは、軽鎖可変領域（ＶＬ）にリンカーを介して結合された重鎖可変領域（ＶＨ）を含むｓｃＦｖｓである、実施形態８３７のＣＡＲ分子。
８３９．Ｔ細胞受容体のアルファ鎖、ベータ鎖又はゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７及びＣＤ１５４から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む、実施形態８２６～８３８のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４０．ヒンジ領域を含む、実施形態８２６～８３９のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４１．機能的シグナル伝達ドメインである共刺激ドメインを含む、実施形態８２６～８４０のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４２．共刺激ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）又は４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）からのアミノ酸配列を有する、実施形態８４１のＣＡＲ分子。
８４３．４－１ＢＢの機能的シグナル伝達ドメイン及び／又はＣＤ３ゼータの機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態８２６～８４２のいずれか１つのＣＡＲ分子。
８４４．リーダー配列を含む、実施形態８２６～８４３のいずれか１つのＣＡＲ分子。
１０．参照による援用
本出願に引用される全ての刊行物、特許、特許出願及び他の文献は、各個別の刊行物、特許、特許出願又は他の文献があらゆる目的から参照により援用されることが個別に指示されたものと見なすのと同程度に、本明細書によってあらゆる目的から全体として参照により援用される。本明細書に援用される参考文献の１つ以上の教示と本開示との間に何らかの矛盾があった場合、本明細書の教示が意図される。
本出願に引用される全ての刊行物、特許、特許出願及び他の文献は、各個別の刊行物、特許、特許出願又は他の文献があらゆる目的から参照により援用されることが個別に指示されたものと見なすのと同程度に、本明細書によってあらゆる目的から全体として参照により援用される。本明細書に援用される参考文献の１つ以上の教示と本開示との間に何らかの矛盾があった場合、本明細書の教示が意図される。
Claims (120)
- （ａ）抗ＣＤ１９剤；及び
（ｂ）Ｂ細胞標的化剤
を含む組み合わせ。 - 前記抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９結合分子である、請求項１に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；
（ｂ）配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；
（ｃ）配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；又は
（ｄ）配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項３に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；
（ｂ）配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；
（ｃ）配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；又は
（ｄ）配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項５に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、抗体、抗体フラグメント、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、ｓｃＦａｂ、（Ｆａｂ’）２又は単一ドメイン抗体（ＳＤＡＢ）を含む、請求項２～６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインを含む、請求項７に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、単一特異性結合分子である、請求項２～８のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、多重特異性結合分子（ＭＢＭ）である、請求項２～８のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合する抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；及び
（ｂ）異なる標的分子に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）
を含む、請求項１０に記載の組み合わせ。 - ＡＢＭ２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合する、請求項１１に記載の組み合わせ。
- 前記ＴＣＲ複合体の前記構成要素は、ＣＤ３である、請求項１２に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｈｉのＣＤＲ配列を含む、請求項１３に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｈｉの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、請求項１３に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、二重特異性結合分子（ＢＢＭ）である、請求項１０～１５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、ＣＤ１９以外の標的分子に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、請求項１１～１５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ２は、ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合し、及びＡＢＭ３は、（ｉ）ヒトＣＤ２、又は（ｉｉ）腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的に結合する、請求項１７に記載の組み合わせ。
- 三価である、請求項１７又は１８に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ３は、ヒトＣＤ２に特異的に結合する、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ３は、ＣＤ５８部分である、請求項２０に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ５８部分は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成する第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域を含む、請求項１０～２２のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ヒトＴ細胞受容体（ＴＣＲ）複合体の構成要素に特異的に結合する抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；及び
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合する抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、三価である、請求項２４に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ１は、Ｆａｂである、請求項２４又は２５に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＴＣＲ複合体の前記構成要素は、ＣＤ３である、請求項２４～２７のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ２は、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインである、請求項２８に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ２は、ＣＤ３ｈｉのＣＤＲ配列を含む、請求項２９に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ２は、表９Ａに記載されるＣＤ３ｈｉの重鎖及び軽鎖可変配列を含む、請求項２９又は３０に記載の組み合わせ。
- 前記抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合ドメインは、ｓｃＦｖの形態である、請求項２９～３１のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ２は、表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む、請求項３２に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ３は、ＣＤ５８部分である、請求項２４～３３のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- ＡＢＭ３は、表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む、請求項２４～３４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- Ｆｃドメインを含む、請求項２４～３５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- Ｆｃヘテロ二量体を一緒に形成する第１の変異体Ｆｃ領域及び第２の変異体Ｆｃ領域を含む、請求項２４～３５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記第１の変異体Ｆｃ領域は、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、及び前記第２の変異体Ｆｃ領域は、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域であり、前記第１及び第２の変異体Ｆｃ領域は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ（「ＬＡＬＡＧＡ」）置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｋ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＳＫＰＡ」）置換、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＤＡＰＡＳＫ」）置換、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＧＡＤＡＰＡ」）置換、Ｇ２３７Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｐ３２９Ａ及びＳ２６７Ｋ（「ＧＡＤＡＰＡＳＫ」）置換、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ｇ（「ＬＡＬＡＰＧ」）置換又はＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３２９Ａ（「ＬＡＬＡＰＡ」）置換を含み、アミノ酸残基は、ＥＵ番号付け方式に従って番号付けされている、請求項３７に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）ＣＤ１９に特異的に結合し、且つ（ｉ）配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３；又は（ｉｉ）配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＦａｂである抗原結合モジュール１（ＡＢＭ１）；
（ｂ）ＣＤ３に特異的に結合し、且つ表９ＡにおいてＣＤ３ｈｉとして指定されるｓｃＦｖのアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール２（ＡＢＭ２）；
（ｃ）ヒトＣＤ２に特異的に結合し、且つ表１２に記載されるＣＤ５８－６のアミノ酸配列を含む抗原結合モジュール３（ＡＢＭ３）；及び
（ｄ）Ｆｃドメイン
を含む三重特異性結合分子（ＴＢＭ）である、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１の半抗体重鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６３のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第１の半抗体重鎖；
（ｂ）第１の半抗体軽鎖であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第１の半抗体軽鎖；
（ｃ）第２の半抗体であって、そのアミノ酸配列は、配列番号６５のアミノ酸配列及びＦｃ配列を含む、第２の半抗体
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７５又は配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２０のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２２のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２７のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２９のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１２６のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３４のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３５のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３６のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３７のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３８のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３９のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１４０のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１４１のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１１０のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、
（ａ）第１のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３１のアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３２のアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；及び
（ｃ）第３のポリペプチドであって、そのアミノ酸配列は、配列番号１１３３のアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド
を含む、請求項２に記載の組み合わせ。 - 前記ＣＤ１９結合分子は、ブリナツモマブ、コルツキシマブラブタンシン、ＭＯＲ２０８、ＭＥＤＩ－５５１、デニンツズマブマホドチン、ＤＩ－Ｂ４、タプリツモマブパプトクス、ＸｍＡｂ５８７１、ＡＦＭ１１、ＭＤＸ－１３４２、ＡＦＭ１１、ロンカスツキシマブテシリン又はＧＢＲ４０１である、請求項２に記載の組み合わせ。
- 前記抗ＣＤ１９剤は、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子を発現する細胞の集団（「ＣＡＲ組成物」）である、請求項１に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＡＲ組成物は、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、リソカブタゲンマラロイセル又はブレクスカブタゲンオートロイセルである、請求項５３に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＡＲ組成物は、チサゲンレクロイセルである、請求項５４に記載の組み合わせ。
- 前記Ｂ細胞標的化剤は、Ｂ細胞枯渇剤である、請求項１～５５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ受容体（ＢＡＦＦＲ）結合分子である、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、抗体又はその抗原結合ドメインである、請求項５７に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３並びに表１８に記載されるイアナルマブのアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、請求項５７又は５８に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、表１８に記載されるイアナルマブのＶＨ及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項５９に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、イアナルマブである、請求項６０に記載の組み合わせ。
- 前記Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２０結合分子である、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ２０結合分子は、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ、ベルツズマブ又はオビヌツズマブである、請求項６２に記載の組み合わせ。
- 前記Ｂ細胞標的化剤は、ＣＤ２２結合分子である、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＣＤ２２結合分子は、エプラツズマブ、イノツズマブ又はイノツズマブオゾガマイシンである、請求項６４に記載の組み合わせ。
- 前記Ｂ細胞標的化剤は、ＢＡＦＦ結合分子である、請求項１～５６のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦ結合分子は、ベリムマブ、チブリズマブ、ＢＲ３－Ｆｃ、ブリシビモド又はアタシセプトである、請求項６６に記載の組み合わせ。
- １つ以上の追加の薬剤を更に含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記１つ以上の追加の薬剤は、コルチコステロイドを含む、請求項６８に記載の組み合わせ。
- 前記コルチコステロイドは、デキサメタゾンである、請求項６９に記載の組み合わせ。
- 前記１つ以上の追加の薬剤は、免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）を含む、請求項６８～７０のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）は、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド又はイベルドミドである、請求項７１に記載の組み合わせ。
- 前記免疫調節イミド薬（ＩＭｉＤ）は、レナリドミドである、請求項７２に記載の組み合わせ。
- 前記抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の分子である、請求項１～７３のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記抗ＣＤ１９剤及びＢ細胞標的化剤は、別個の医薬組成物中で製剤化される、請求項１～７４のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を治療する方法で使用するための、請求項１～７５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- Ｂ細胞悪性腫瘍を有する対象を治療する方法であって、請求項１～７４のいずれか一項に記載の組み合わせを前記対象に投与することを含む方法。
- 前記方法は、前記抗ＣＤ１９剤の前記対象への初回投与前に、前記Ｂ細胞標的化剤を前記対象に１回以上投与することを含む、請求項７６に記載の使用のための組み合わせ又は請求項７７に記載の方法。
- 前記方法は、前記抗ＣＤ１９剤の前記対象への初回投与前に、前記Ｂ細胞標的化剤を前記対象に単回投与することを含む、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記方法は、前記抗ＣＤ１９剤の前記対象への初回投与前に、前記Ｂ細胞標的化剤を前記対象に２回以上投与することを含む、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記方法は、前記Ｂ細胞標的化剤及び前記抗ＣＤ１９剤を前記対象に同時に投与することを含む、請求項７６に記載の使用のための組み合わせ又は請求項７７に記載の方法。
- 前記Ｂ細胞悪性腫瘍は、細胞表面ＣＤ１９を発現するＢ細胞悪性腫瘍である、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記疾患又は障害は、非ホジキンリンパ腫である、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記疾患又は障害は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記疾患又は障害は、再発性及び／又は難治性ＤＬＢＣＬである、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記疾患又は障害は、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記疾患又は障害は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記疾患又は障害は、バーキットリンパ腫である、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、少なくとも１回の以前の標準治療に失敗している、請求項８２～８８のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、最大で５回の以前の標準治療に失敗している、請求項８９に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、１回の以前の標準治療に失敗している、請求項８９又は９０に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、２回の以前の標準治療に失敗している、請求項８９又は９０に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、３回の以前の標準治療に失敗している、請求項８９又は９０に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、４回の以前の標準治療に失敗している、請求項８９又は９０に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、５回の以前の標準治療に失敗している、請求項８９又は９０に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記少なくとも１回の以前の標準治療は、抗ＣＤ２０療法を含む．請求項８９～９５のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記抗ＣＤ２０療法は、リツキシマブである、請求項９６に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、１つ以上の他の承認された療法に対して不耐性又は不適格である、請求項８９～９７のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記１つ以上の他の承認された療法は、自家幹細胞移植（ＡＳＣＴ）を含む、請求項９８に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記対象は、ＣＡＲ組成物に対して非応答者である、請求項８９～９９のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記ＣＡＲ組成物は、抗ＣＤ１９ ＣＡＲ組成物である、請求項１００に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記ＣＡＲ組成物は、ＣＴＬ０１９、チサゲンレクロイセル、アキシカブタゲンシロロイセル、ブレクスカブタゲンオートロイセル又はリソカブタゲンマラロイセルを含む、請求項１００又は１０１に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 前記抗ＣＤ１９剤は、キメラ抗原受容体を含まず、且つ／又はＣＡＲ組成物ではない、請求項１００～１０２のいずれか一項に記載の使用のための組み合わせ又は方法。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号７、配列番号８及び配列番号９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１０、配列番号１１及び配列番号１２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項１０４～１０７のいずれか一項に記載のＣＡＲ分子。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号２７、配列番号２８及び配列番号２９のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４０、配列番号４１及び配列番号４２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３０、配列番号３１及び配列番号３２のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４３、配列番号４４及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３３、配列番号３４及び配列番号３５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４６、配列番号４７及び配列番号４８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 抗ＣＤ１９結合ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む、ＣＤ１９に結合するキメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子であって、前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３６、配列番号３７及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びに配列番号４９、配列番号５０及び配列番号５１のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）分子。
- 前記抗ＣＤ１９結合ドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を有するＶＨ及び／又は配列番号５２のアミノ酸配列を有するＶＬを含む、請求項１０９～１１２のいずれか一項に記載のＣＡＲ分子。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、イアナルマブのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３並びにイアナルマブのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、請求項５７又は５８に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、イアナルマブのＶＨ及びＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項５７又は１１４に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、イアナルマブである、請求項５７又は１１４若しくは１１５のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、それぞれ配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３並びにそれぞれ配列番号５６、配列番号５７、配列番号５８のアミノ酸配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２及びＣＤＲ－Ｌ３を含む、請求項５７に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、配列番号５９のＶＨ配列及び配列番号６０のＶＬ配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、請求項５７又は１１７に記載の組み合わせ。
- 前記ＢＡＦＦＲ結合分子は、配列番号６１の重鎖配列及び配列番号６２の軽鎖配列を含む、請求項５７又は１１７若しくは１１８のいずれか一項に記載の組み合わせ。
- 前記方法は、前記抗ＣＤ１９剤を前記対象に投与する前に前記Ｂ細胞標的化剤を投与することを含む、請求項７６に記載の使用のための組み合わせ又は請求項７７に記載の方法。
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