JP2021514632A - Ｐｄ−１ペプチド阻害剤 - Google Patents

Abstract

本開示は、チェックポイント受容体「プログラム死１」（ＰＤ−１）に対して強い親和性を有するペプチドを提供する。これらのペプチドは、ＰＤ−１とそのリガンドＰＤ−Ｌ１との相互作用を阻止し、したがって、がんを含む、過剰増殖性障害の進行の阻害；感染性疾患の処置；ワクチン接種に対する応答の増強；敗血症の処置；及び毛の再色素化又は色素性皮膚病変の軽減の促進などの様々な治療目的のために使用することができる。本開示は、概して、免疫調節ペプチドに関する。

Description

本出願は、２０１８年２月２７日出願の米国特許出願第１５／９０６，４８１号の優先権を主張する。米国特許出願第１５／９０６，４８１号は、２０１７年９月１５日出願の米国特許出願第１５／７０５，３３３号の一部継続出願であり、２０１６年９月１５日出願の米国特許出願第６２／３９５，１９５号の優先権を主張する。

本出願は、本出願の配列表である２０１８年２月２７日に作成され、「０００４７９００２５４ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と命名された１．３８ｋｂのテキストファイルの内容を参照により組み込む。

技術分野
本開示は、概して、免疫調節ペプチドに関する。

Ｊｕｒｋａｔ細胞に対する抗ヒトＰＤ−１抗体の飽和可能な結合を示すグラフ。

Ｊｕｒｋａｔ細胞へのＰＤ−Ｌ１ Ｆｃの飽和可能な結合を示すグラフ。

ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＱＰ２０の効果を示すグラフ。図３Ａ、ＭＦＩ；図３Ｂ、正規化された平均蛍光強度（ＭＦＩ）。 ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＱＰ２０の効果を示すグラフ。図３Ａ、ＭＦＩ；図３Ｂ、正規化された平均蛍光強度（ＭＦＩ）。

ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＨＤ２０の効果を示すグラフ。図４Ａ、ＭＦＩ；図４Ｂ、正規化されたＭＦＩ。 ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＨＤ２０の効果を示すグラフ。図４Ａ、ＭＦＩ；図４Ｂ、正規化されたＭＦＩ。

ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＷＱ２０の効果を示すグラフ。図５Ａ、ＭＦＩ；図５Ｂ、正規化されたＭＦＩ。 ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＷＱ２０の効果を示すグラフ。図５Ａ、ＭＦＩ；図５Ｂ、正規化されたＭＦＩ。

ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＳＱ２０の効果を示すグラフ。図６Ａ、ＭＦＩ；図６Ｂ、正規化されたＭＦＩ。 ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の結合に対するペプチドＳＱ２０の効果を示すグラフ。図６Ａ、ＭＦＩ；図６Ｂ、正規化されたＭＦＩ。

ＩＬ−２、ＮＦＡＴ、及びＮＦ−κＢ応答エレメントを含有するプロモーターの制御下にあるルシフェラーゼレポーターのＰＤ−１媒介性抑制の阻害をもたらすＰＤ−１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞とＰＤ−Ｌ１発現ＣＨＯ細胞間の相互作用に対する抗ヒトＰＤ−１抗体の効果を示すグラフ。

ＰＤ−１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞とＰＤ−Ｌ１発現ＣＨＯ細胞間の相互作用に対する抗ヒトＰＤ−１抗体の効果を示すグラフ（図７Ａのデータは倍数阻害として表されている）。

ＰＤ−１ペプチド阻害剤が、ルシフェラーゼレポーター発現の増加をもたらす、ＰＤ−１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞とＰＤ−Ｌ１発現ＣＨＯ細胞間の相互作用を用量依存的に阻害することを示すグラフ。

ＰＤ−１発現Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞とＰＤ−Ｌ１発現ＣＨＯ細胞間の相互作用に対する抗ヒトＰＤ−１抗体の効果を示すグラフ（図８Ｂのデータは倍数阻害として表されている）。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、ＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおける末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−２産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、ＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−４産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、ＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−６産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、ＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−１０産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、ＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−１７ａ産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、ＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、ＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＴＮＦα産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の様々な組み合わせとの培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−２産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の様々な組み合わせとの培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−４産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の様々な組み合わせとの培養後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−６産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の様々な組み合わせでの刺激後の、破傷風トキソイドリコールアッセイにおけるＰＢＭＣによるＩＬ−１０産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の様々な組み合わせでの刺激後のＰＢＭＣによるＩＬ−１７ａ産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の様々な組み合わせとの培養後のＰＢＭＣによるＩＦＮγ産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の様々な組み合わせとの培養後のＰＢＭＣによるＴＮＦα産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後のドナーＡからのＰＢＭＣによるＩＬ−２産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、又はＳＱ２０及びこれらのペプチドの組み合わせとの培養後のドナーＢからのＰＢＭＣによるＩＬ−２産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０、又はＣＱ−２２との培養後のドナーＡからのＰＢＭＣによるＩＬ−１７ａ産生を示すグラフ。

ペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、又はＳＱ２０及びこれらのペプチドの組み合わせとの培養後のドナーＢからのＰＢＭＣによるＩＬ−１７ａ産生を示すグラフ。

Ｂ１６−Ｆ１０−ＬａｃＺの腫瘍細胞を有し、ペプチドの組み合わせで処置したマウスにおける表面転移の数を示すグラフ。

実施例８で試験した各コホートの０．５×１０^６個の脾細胞当たりのプラスモジウム・ヨエリのスポロゾイト周囲タンパク質（ＰｙＣＳ）特異的ＩＦＮγ分泌ＣＤ８ Ｔ細胞の平均数±標準偏差を示すグラフ。

感染後２及び３週目に、血清ＨＢｓＡｇ（Ｂ型肝炎表面抗原）の平均レベルに対するＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０ペプチドの組み合わせの効果を示すグラフ。

詳細な説明
本開示は、４つのペプチド：

を提供する。

これらのペプチドは、太字で上記に示されているＨＨ＿のコア配列を共有し、チェックポイント受容体「プログラム死１」（ＰＤ−１）に対して強い親和性を有する。これらのペプチドは、ＰＤ−１とそのリガンドＰＤ−Ｌ１との相互作用を阻止し、したがって、癌を含む、過剰増殖性障害の進行を阻害するため、又は個体の免疫応答を増強、刺激、及び／若しくは増加させることによってＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、及び熱帯熱マラリア原虫などの病原体による持続性感染症を含む、感染性疾患を治療するために使用することができる。

いくつかの実施形態において、開示されるペプチドのうちのいずれかは、化学的方法又は組換え方法を使用して、安定性又は他の薬物動態特性を増強するために改変され得る。例えば、ＵＳ ２０１７／００２０９５６を参照のこと。改変としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：１又はこれより多くのＬ−アミノ酸をその対応するＤ−形態で置き換えること、Ｃ末端残基及び／又はＮ末端残基上でのアセチル化、Ｃ末端残基及び／又はＮ末端残基上でのアミド化、環化、エステル化、グリコシル化、アシル化、ミリスチン酸又はパルミチン酸の結合、Ｎ末端グリシンの付加、親油性部分（例えば、長鎖脂肪酸）の付加、並びにＰＥＧ化。

いくつかの実施形態において、開示されるペプチドのうちの１又はこれより多くは、様々な部分（例えば、アルブミン及びトランスサイレチン）にコンジュゲートして、そのペプチド（複数可）の血漿半減期を高めることができる。そのようなコンジュゲートを調製する方法は当技術分野において周知である（例えば、Ｐｅｎｃｈａｌａ ｅｔ ａｌ．， ２０１５； Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ， ２０１６； Ｚｏｒｚｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１７）。

いくつかの実施形態において、開示されるペプチドのうちのいずれかは、パートナー分子（例えば、インビボでその半減期を増大させる及び／又は標的組織もしくは細胞への特異的送達を提供することが意図された抗体のようなペプチド又はタンパク質）にコンジュゲートされ得る。コンジュゲーションは、直接であってもよいし、リンカーを介することもできる。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、そのペプチドは、１又はこれより多くのアミノ酸を、パートナー分子に結合するために使用されるアミノ酸（例えば、リジン）で置換するために、又は例えば、１個、２個、３個、もしくは４個のグリシンスペーサー分子でのそのペプチドのＮ末端伸長によって、改変され得る。

ペプチド、又は上記で記載されるとおりのそのペプチドの改変バージョンは、当該分野で公知の任意の方法（合成方法、組換え方法、又は両方）によって作製され得る。合成方法としては、固相及び液相方法が挙げられ、保護基の使用を含み得る。例えば、Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ ｅｔ ａｌ． （１９７６）、ＭｃＯｍｉｅ （１９７３）、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ （１９６３）、Ｎｅｕｒａｔｈ ｅｔ ａｌ． （１９７６）、Ｓｔｕａｒｔ ＆ Ｙｏｕｎｇ （１９８４）を参照のこと。

ペプチドの組換え生成は、任意の適切な発現系においてそのペプチドをコードする任意のヌクレオチド配列（複数可）を使用して行われ得る。開示されるペプチドのうちの１又はこれより多くをコードする核酸分子は、そのコード配列に作動可能に連結される制御エレメントを含む発現カセットへと組み込まれ得る。制御エレメントとしては、イニシエーター、プロモーター（誘導性、抑制性、及び構成性のプロモーターが挙げられる）、エンハンサー、及びポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。シグナル配列を含むことができる。その発現カセットは、そのペプチド（複数可）の生成のために適切な宿主細胞へと導入され得るベクターの中で提供することができる。発現カセット及び発現ベクターを構築する方法は、周知である。発現ベクターは、以下の段落において記載される発現カセットのうちの１又はこれより多くを含むことができる。

いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号１のアミノ酸配列から本質的になるペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチドをコードする。

いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号２のアミノ酸配列から本質的になるペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号２のアミノ酸配列からなるペプチドをコードする。

いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号３のアミノ酸配列から本質的になるペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチドをコードする。

いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号４のアミノ酸配列から本質的になるペプチドをコードする。いくつかの実施形態において、発現カセットは、配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチドをコードする。

いくつかの実施形態において、発現カセットは、開示されるペプチドのうちの２つのみ；例えば、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；（ｃ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；あるいは（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、をコードする。

いくつかの実施形態において、発現カセットは、開示されるペプチドのうちの３つのみ；例えば、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；（ｂ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；（ｃ）配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド；あるいは（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、をコードする。

いくつかの実施形態において、発現カセットは、開示されるペプチドのうちの４つ全て；すなわち、配列番号１のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチド、及び配列番号４のアミノ酸配列を含むか、それから本質的になるか、又はそれからなるペプチドをコードする。

治療的使用
開示されるペプチドは、多くの治療適用を有し、様々な目的でヒト及び獣医学的被験体の両方に投与することができる。「投与する」は、本明細書で使用される場合、以下で記載されるように、開示されるペプチド又はその改変バージョンの直接的投与、及び間接的投与（例えば、そのペプチド又はそのペプチドの改変バージョンをコードする核酸分子を使用）を含む。いくつかの実施形態において、投与は、１又はこれより多くの他の治療部分とともに行われる。「とともに（in conjunction with）」は、その１又はこれより多くの他の治療部分の投与と一緒の、その前の、又はその後の投与を含む。

がんを含む過剰増殖性障害の処置
いくつかの実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、過剰増殖性障害（例えば、がん）の進行を阻害するために投与することができる。かかる阻害は、例えば、新生物又は前新生物（pre-neoplastic）細胞の増殖を低減すること、新生物又は前新生物細胞を破壊すること；及び転移を阻害すること又は腫瘍のサイズを減少させることを含むことができる。

開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くを使用して処置することができるがんの例としては、黒色腫、リンパ腫、肉腫、及び結腸のがん、腎臓のがん、胃のがん、膀胱のがん、脳のがん（例えば、神経膠腫、神経膠芽腫、星細胞腫、髄芽腫）、前立腺のがん、膀胱のがん、直腸のがん、食道のがん、膵臓のがん、肝臓のがん、肺のがん、乳房のがん、子宮のがん、子宮頸部のがん、卵巣のがん、血液のがん（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、バーキットリンパ腫、ＥＢＶ−誘発性Ｂ細胞リンパ腫）が挙げられるが、これらに限定されない。

併用がん治療
いくつかの実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、１もしくはこれより多くの治療又は免疫療法（例えば、以下で記載されるもの）とともに投与することができる。

いくつかの実施形態において、その第２の治療は、ＰＤ−１の活性を低減又は阻止する第２の薬剤（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、デュルバルマブ）を含む。

いくつかの実施形態において、その第２の治療は、ＰＤ−Ｌ１の活性を低減又は阻止する薬剤（例えば、アテゾリズマブ）を含む。

いくつかの実施形態において、その第２の治療は、他の阻害性チェックポイント分子及び／又は免疫系を抑制する分子の活性を低減又は阻止する薬剤を含む。これらの分子としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
１． リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３； Ｈｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１６； Ｔｒｉｅｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， １９９０を参照のこと）；
２． 細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）；
３． Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン抑制因子（ＶＩＳＴＡ（ｃ１０ｏｒｆ５４、ＰＤ−１Ｈ、ＤＤ１α、Ｇｉ２４、Ｄｉｅｓ１、及びＳＩＳＰ１としても公知））；ＵＳ ２０１７／０３３４９９０、ＵＳ ２０１７／０１１２９２９、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．， ２０１７、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１１； Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．， ２０１５を参照のこと）；
４． Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ−３；ＵＳ ２０１７／０１９８０４１、ＵＳ ２０１７／００２９４８５、ＵＳ ２０１４／０３４８８４２、Ｓａｋｕｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１０を参照のこと）；
５． キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ； ＵＳ ２０１５／０２９０３１６を参照のこと）；
６． インドールアミン（２，３）−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ； Ｍｅｌｌｅｍｇａａｒｄ ｅｔ ａｌ．， ２０１７を参照のこと）を阻害する作用物質；
７． Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ； ＵＳ ２０１６／０９２２２１１４を参照のこと）；及び
８． Ａ２Ａアデノシン受容体（Ａ２ＡＲ； Ｂｅａｖｉｓ ｅｔ ａｌ．， ２０１５； ＵＳ ２０１３／０２６７５１５； ＵＳ ２０１７／０１６６８７８； Ｌｅｏｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１５； Ｍｅｄｉａｖｉｌｌａ−Ｖａｒｅｌａ ｅｔ ａｌ．， ２０１７； Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１６を参照のこと）。

ＬＡＧ−３の活性を低減又は阻止する薬剤としては、ＢＭＳ−９８６０１６、ＩＭＰ３２１、及びＧＳＫ２８３１７８１（Ｈｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１６）が挙げられるが、これらに限定されない。

ＣＴＬＡ−４の活性を低減又は阻止する薬剤としては、イピリムマブ及びトレメリムマブが挙げられるが、これらに限定されない。

ＶＩＳＴＡの活性を低減又は阻止する薬剤としては、低分子（例えば、ＣＡ−１７０）、及び抗体（例えば、Ｌｅ Ｍｅｒｃｉｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１４）が挙げられるが、これらに限定されない。

ＴＩＭ−３の活性を低減又は阻止する薬剤としては、抗体（例えば、ＭＢＧ４５３及びＴＳＲ−０２２；Ｄｅｍｐｋｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１７を参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。

ＫＩＲの活性を低減又は阻止する薬剤としては、モノクローナル抗体（例えば、ＩＰＨ２１０１及びリリルマブ（ＢＭＳ−９８６０１５（以前のＩＰＨ２１０２））が挙げられるが、これらに限定されない；Ｂｅｎｓｏｎ ＆ Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ， ２０１４を参照のこと。

ＩＤＯの活性を低減又は阻止する薬剤としては、エパカドスタット及びＵＳ ２０１７／００３７１２５で開示される薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。

ＢＴＬＡの活性を低減又は阻止する薬剤としては、ペプチド（例えば、Ｓｐｏｄｚｉｅｊａ ｅｔ ａｌ．， ２０１７）が挙げられるが、これらに限定されない。

Ａ２ＡＲの活性を低減又は阻止する薬剤としては、ＣＰＩ−４４４及びビパデナントのような低分子が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、その第２の治療は、サイトカイン（例えば、インターロイキン７）を含む。

いくつかの実施形態において、その第２の治療は、刺激性チェックポイント分子のアゴニストを含む。これらの分子としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：
１． ＣＤ４０；
２． ＯＸ４０；
３． グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子関連タンパク質（ＧＩＴＲ）；及び
４． 誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）。

ＣＤ４０のアゴニストとしては、ＣＤ４０アゴニストモノクローナル抗体（例えば、ｃｐ−８７０，８９３、ＣｈｉＬｏｂ７／４、ダセツズマブ、及びルカツムマブが挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ ｅｔ ａｌ．， ２００７； Ｋｈｕｂｃｈａｎｄａｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２００９； Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１０； Ｂｅｎｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１２； Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅ ａｎｄ Ｇｌｅｎｎｉｅ， ２０１３； Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１５を参照のこと。

ＯＸ４０のアゴニストとしては、ＯＸ４０アゴニスト抗体（例えば、ＭＯＸＲ０９１６、ＭＥＤ１６４６９、ＭＥＤ１０５６２、ＰＦ−０４５６１８６００、ＧＳＫ３１７４９９８、及びＩＮＣＣＡＧＮ０１９４９）、及びＯＸ４０Ｌ−Ｆｃ融合タンパク質（例えば、ＭＥＤＩ６３８３）が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｈｕｓｅｎｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１４； Ｌｉｎｃｈ ｅｔ ａｌ．， ２０１５； Ｍｅｓｓｅｎｈｅｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１７を参照のこと。Ｓｈｒｉｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．， ２０１７もまた参照のこと。

ＧＩＴＲのアゴニストとしては、ＭＥＤＩ１８７３が挙げられるが、これに限定されない。例えば、Ｓｃｈａｅｒ ｅｔ ａｌ．， ２０１２； Ｔｉｇｕｅ ｅｔ ａｌ．， ２０１７を参照のこと。

ＩＣＯＳのアゴニストとしては、ＩＣＯＳアゴニスト抗体ＪＴＸ−２０１１及びＧＳＫ３３５９６０９が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｈａｒｖｅｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１５； Ｍｉｃｈａｅｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１６を参照のこと。

他の実施形態において、その第２の治療は、ウレルマブのような４−１ＢＢアゴニスト（Ｓｈｉｎｄｏ ｅｔ ａｌ．， ２０１５）；４−１ＢＢアンタゴニスト（ＵＳ ２０１７／０１７４７７３を参照のこと）；クリゾチニブ、セリチニブ、アレクチニブ、ＰＦ−０６４６３９２２、ＮＶＰ−ＴＡＥ６８４、ＡＰ２６１１３、ＴＳＲ−０１１、Ｘ−３９６、ＣＥＰ−３７４４０、ＲＸＤＸ−１０１のような、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ； Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１４； ＵＳ ２０１７／０２７４０７４）の阻害剤；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ；ＵＳ ２０１７／０３２７５８２を参照のこと）の阻害剤；アキシチニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、チボザニブ、ベバシズマブのようなＶＥＧＦＲ阻害剤；並びに／又はバルリルマブのような抗ＣＤ２７抗体を含む。

いくつかの実施形態において、その第２の治療は、がんワクチン（例えば、Ｄｕｒａｉｓｗａｍｙ ｅｔ ａｌ．， ２０１３）を含む。「がんワクチン」は、がんワクチンが投与される個体における特定の抗原に対する免疫応答を誘導することが意図される免疫原性組成物である。がんワクチンは、典型的には、腫瘍抗原に対する免疫応答を誘導又は刺激することができる腫瘍抗原を含有する。「腫瘍抗原」は、標的腫瘍の表面上に存在する抗原である。腫瘍抗原は、非腫瘍細胞が発現しない分子であり得るか、又は例えば、非腫瘍細胞が発現する分子の改変バージョン（例えば、ミスフォールドされるか、切断されるか、又はそうでなければ変異したタンパク質）であり得る。

いくつかの実施形態において、その第２の治療は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を含む。例えば、Ｊｏｈｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１３； Ｃｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２０１６を参照のこと。

さらなる治療的使用
いくつかの実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、例えば、ウイルス、真菌、細菌、及び原生動物、並びに蠕虫によって引き起こされる慢性感染症を含む感染性疾患を処置するために投与することができる。

ウイルス病原体の例としては、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ１及びＨＳＶ２を含むＨＳＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＳＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、並びにＡ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びＣ型肝炎ウイルスが挙げられる。

真菌病原体の例としては、アスペルギルス、カンジダ、コクシジオイデス、クリプトコッカス、及びヒストプラスマカプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）が挙げられる。

細菌病原体の例としては、連鎖球菌細菌（例えば、化膿連鎖球菌、ストレプトコッカス・アガラクティエ、肺炎連鎖球菌）、クラミジア・ニューモニエ（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、及びマイコバクテリウム・ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）が挙げられる。

原生動物の例としては、肉質虫（例えば、エントアメーバ）、鞭毛虫（例えば、ジアルジア）、繊毛虫（例えば、バランチジウム）、及び胞子虫（例えば、熱帯熱マラリア原虫、クリプトスポリジウム）が挙げられる。

蠕虫の例としては、扁形動物（Platyhelminths）（例えば、吸虫、条虫）、鉤頭動物（Acanthocephalins）、及び線虫が挙げられる。

いくつかの実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、（例えば、エフェクターＴ細胞を増加させること及び／又はＴ細胞の消耗を低減することにより）ワクチン接種に対する応答を高めるためにワクチンとともに、ワクチンアジュバントとして投与することができる。そのワクチンは、例えば、ＲＮＡワクチン（例えば、ＵＳ ２０１６／０１３０３４５、ＵＳ ２０１７／０１８２１５０）、ＤＮＡワクチン、組換えベクター、タンパク質ワクチン、又はペプチドワクチンであり得る。当技術分野で周知のように、かかるワクチンは、例えば、ウイルス様粒子を用いて送達することができる。

いくつかの実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、敗血症を処置するために投与することができる。

いくつかの実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、毛の色の再色素化を促進するために投与することができる。いくつかの実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、色素性皮膚病変の軽減を促進するために投与することができる。

ペプチドの投与
いくつかの実施形態において、開示されるペプチド自体又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、投与される。これらの実施形態のうちのいくつかにおいて、ペプチドキャリアシステムが使用される。多くのペプチドキャリアシステムは、当該分野で公知であり、微粒子、ポリマーナノ粒子、リポソーム、固体脂質ナノ粒子、親水性粘膜付着性ポリマー、チオール化ポリマー、ポリマーマトリクス、ナノエマルジョン、及びヒドロゲルが挙げられる。Ｐａｔｅｌ ｅｔ ａｌ． （２０１４）， Ｂｒｕｎｏ ｅｔ ａｌ． （２０１３）， Ｆｅｒｉｄｏｏｎｉ ｅｔ ａｌ． （２０１６）を参照のこと。任意の適切なシステムを使用することができる。

いくつかの実施形態において、ペプチド又はタンパク質を発現及び分泌する、操作されたＴ細胞ベースの治療が、Ｔ細胞受容体と抗原との結合の部位においてＰＤ−１阻害を送達するために使用することができる。そのＴ細胞ベースの治療は、例えば、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞であり得る。誘導性又は構成性いずれかの発現を使用することができる。

他の実施形態において、開示されるペプチド又はその改変バージョンのうちの１又はこれより多くは、そのペプチド（複数可）をコードする１又はこれより多くの核酸（例えば、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、ＲＮＡ又はこれらの組み合わせ）を使用して送達される；例えば、ＵＳ ２０１７／０１６５３３５を参照のこと。１又はこれより多くのペプチドをコードする核酸は、当該分野で公知の様々な送達システムを使用して送達することができる。核酸送達システムとしては、遺伝子銃；カチオン性脂質及びカチオン性ポリマー；リポソーム、微粒子、又はマイクロカプセル中への被包；エレクトロポレーション；ウイルスベースの、及び細菌ベースの送達システムが挙げられるが、これらに限定されない。ウイルスベースのシステムとしては、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、レトロウイルス、ワクシニアウイルス、又は１もしくはこれより多くのウイルスのエレメントを含むハイブリッドウイルスのような改変されたウイルスが挙げられるが、これらに限定されない。ＵＳ ２００２／０１１１３２３は、ペプチドを投与するために、「裸のＤＮＡ」、すなわち、「トランスフェクションを促進するタンパク質、ウイルス粒子、リポソーム製剤、荷電した脂質及びリン酸カルシウム沈殿剤」を含まない「非感染性、非免疫原性、非標的化ＤＮＡ配列」の使用を記載する。細菌ベースの送達システムは、例えば、Ｖａｎ Ｄｅｓｓｅｌ ｅｔ ａｌ． （２０１５）及びＹａｎｇ ｅｔ ａｌ． （２００７）に開示されている。

いくつかの実施形態において、ペプチドは、そのペプチドをコードするＲＮＡ分子を介して投与される。いくつかの実施形態において、そのＲＮＡ分子は、ナノ粒子に被包される。いくつかの実施形態において、そのナノ粒子は、カチオン性ポリマー（例えば、ポリ−Ｌ−リジン、ポリアミドアミン、ポリエチレンイミン、キトサン、ポリ（β−アミノエステル））を含む。いくつかの実施形態において、そのナノ粒子は、カチオン性脂質又はイオン化可能な脂質を含む。いくつかの実施形態において、そのＲＮＡ分子は、生体活性リガンド（例えば、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、コレステロール、ビタミンＥ、抗体、細胞透過性ペプチド）にコンジュゲートされる。例えば、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ． （２００８）， Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ． （２００９）， Ａｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （２００３）， Ｂｅｈｒ （１９９７）， Ｂｏｕｓｓｉｆ ｅｔ ａｌ． （１９９５）， Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ． （２０１２）， Ｄａｈｌｍａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１４）， Ｄｅｓｉｇａｕｘ ｅｔ ａｌ． （２００７）， Ｄｏｎｇ ｅｔ ａｌ． （２０１４）， Ｄｏｓｔａ ｅｔ ａｌ． （２０１５）， Ｆｅｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ． （２０１６）， Ｇｕｏ ｅｔ ａｌ． （２０１２）， Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ． （２００６）， Ｋａｃｚｍａｒｅｋ ｅｔ ａｌ． （２０１６）， Ｋａｎａｓｔｙ ｅｔ ａｌ． （２０１３）， Ｋａｕｆｆｍａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１５）， Ｋｏｚｉｅｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ． （２０１３）， Ｌｅｕｓ ｅｔ ａｌ． （２０１４）， Ｌｏｒｅｎｚ ｅｔ ａｌ． （２００４）， Ｌｏｖｅ ｅｔ ａｌ． （２０１０）， Ｌｙｎｎ ＆ Ｌａｎｇｅｒ （２０００）， Ｍｏｓｃｈｏｓ ｅｔ ａｌ． （２００７）， Ｎａｉｒ ｅｔ ａｌ． （２０１４）， Ｎｉｓｈｉｎａ ｅｔ ａｌ． （２００８）， Ｐａｃｋ ｅｔ ａｌ． （２００５）， Ｒｅｈｍａｎ ｅｔ ａｌ． （２０１３）， Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ｅｔ ａｌ． （２０１０）， Ｔｓｕｔｓｕｍｉ ｅｔ ａｌ． （２００７）， Ｔｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ． （２０１２）， Ｗｏｎ ｅｔ ａｌ． （２００９）， Ｘｉａ ｅｔ ａｌ． （２００９）， Ｙｕ ｅｔ ａｌ． （２０１６）を参照のこと。

いくつかの実施形態において、ＲＮＡ分子は、免疫系が分解又は認識するその機会を低減するように改変される。リボース糖、リン酸結合、及び／又は個々の塩基が改変され得る。例えば、Ｂｅｈｌｋｅ （２００８）， Ｂｒａｍｓｅｎ （２００９）， Ｃｈｉｕ （２００３）， Ｊｕｄｇｅ ＆ ＭａｃＬａｃｈｌａｎ （２００８）， Ｋａｕｆｆｍａｎ （２０１６）， Ｌｉ （２０１６）， Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ （２００５）， Ｐｒａｋａｓｈ （２００５）， Ｐｒａｔｔ ＆ ＭａｃＲａｅ （２００９）， Ｓａｈｉｎ （２０１４）， Ｓｏｕｔｓｃｈｅｋ （２００４）， Ｗｉｔｔｒｕｐ ＆ Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ （２０１５）を参照のこと。いくつかの実施形態において、その改変は、リボ−ジフルオロトルイルヌクレオチド、４’−チオ改変ＲＮＡ、ボラノホスフェート結合、ホスホロチオエート結合、２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）糖置換、２’−フルオロ（２’−Ｆ）、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−ＭＯＥ）糖置換、ロックド核酸（ＬＮＡ）、及びＬ−ＲＮＡのうちの１又はこれより多くのものである。

投与経路、医薬組成物、及びデバイス
上記の段落で記載される活性薬剤のうちのいずれかの有効量を含む医薬組成物は、薬学的に許容されるビヒクルを含む。その「薬学的に許容されるビヒクル」は、その活性薬剤（複数可）の生物学的活性に影響しない１種又はこれより多くの物質を含んでよく、患者に投与された場合、有害反応を引き起こさない。医薬組成物は、液体であってもよく、又は凍結乾燥されてもよい。凍結乾燥組成物は、組成物の再構成に使用するのに適する液体、典型的には、注射用水（ＷＦＩ）と共にキットに提供され得る。医薬組成物の他の適切な形態としては、懸濁剤、エマルジョン、及び錠剤が挙げられる。

投与経路としては、注射又は注入（例えば、硬膜外、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下）、経皮（例えば、ＵＳ ２０１７／０２８１６７２）、粘膜（例えば、鼻内又は口腔）、肺、及び局所（例えば、ＵＳ ２０１７／０２７４０１０）投与が挙げられる。例えば、ＵＳ ２０１７／０１０１４７４を参照のこと。

投与は、全身又は局所であり得る。局所注入及び注射に加えて、移植物は、局所投与を達成するために使用することができる。適切な材料の例としては、シラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）、ポリマー、線維性マトリクス、及びコラーゲンマトリクスが挙げられるが、これらに限定されない。

局所投与は、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、経皮パッチ（例えば、マイクロニードルパッチ）、又は当該分野で周知の他の適切な形態によるものであり得る。

投与はまた、制御された放出によるもの、例えば、マイクロニードルパッチ、ポンプ及び／又は適切なポリマー材料を使用するものであり得る。適切な材料の例としては、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン−ｃｏ−ビニルアセテート）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ酸無水物、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられるが、これらに限定されない。

上記で記載される活性薬剤のうちのいずれかを含むデバイスとしては、シリンジ、ポンプ、経皮パッチ、スプレーデバイス、膣リング、及びペッサリーが挙げられるが、これらに限定されない。

実施例１．ペプチドライブラリーのスクリーニング
ＴｒｉＣｏ−２０（商標）（ＴＲＩＣＯ−２０（商標））及びＴｒｉＣｏ−１６（商標）（ＴＲＩＣＯ−１６（商標））ファージディスプレイペプチドライブラリー（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ，４５−１ Ｒａｍｓｅｙ Ｒｏａｄ，Ｓｈｉｒｌｅｙ，ＮＹ １１９６７）を、可溶性組換えヒトＰＤ−１受容体の結合体を特定するためにスクリーニングした。パニングの第４ラウンド後、特異的結合体についての明白な濃縮が観察され、個々のペプチドは、クローンファージＥＬＩＳＡにおいて弱い特異的結合体として確認された。パニングの第５ラウンドにより、さらに濃縮した。表１に、クローンファージＥＬＩＳＡにおいて強い特異的結合を示した４つのペプチドを記載する。

実施例２．競合ＰＤ−１：ＰＤ−Ｌ１結合阻害アッセイ
簡単に説明すると、Ｊｕｒｋａｔ細胞上の細胞表面ＰＤ−１の検出は、ヒトＰＤ−Ｌ１−Ｆｃ融合タンパク質と細胞をインキュベートし、その後、蛍光標識抗ヒトＦｃ抗体での組換え分子の検出によって達成した。フローサイトメトリーを、ＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１組換えタンパク質との間の結合を検出するために行った。次いで、定量的な結合測定値を、平均蛍光強度（ＭＦＩ）によって決定した。

図１及び図２に示すように、ＰＤ１のＪｕｒｋａｔ細胞表面発現及びこれらの細胞へのＰＤ−Ｌ１の結合を確認した。その結果を図３Ａ〜Ｂ、図４Ａ〜Ｂ、図５Ａ〜Ｂ、及び図６Ａ〜Ｂに示す。

実施例３．細胞ベースのレポーターアッセイ
細胞ベースのレポーターアッセイを用いて、上記で特定した４つのペプチドの結合が、ＰＤ−１とそのリガンドＰＤ−Ｌ１との相互作用を阻止するのに十分であったかどうかを評価した。該アッセイの成分には、該アッセイにおいて測定可能な効果をもたらすヒトＰＤ−１及びルシフェラーゼレポーターを安定に発現するＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株、ヒトＰＤ−Ｌ１を安定に発現したＣＨＯ細胞株、及びＰＤ−１とＰＤ−Ｌ１の相互作用を阻止する陽性対照抗ＰＤ−１抗体が含まれる。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞株におけるルシフェラーゼレポーターは、プロモーター領域におけるＩＬ−１、ＮＦＡＴ、又はＮＦ−κＢ応答エレメントによって誘発される。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞をＣＤ３で前処理し、該アッセイで使用するためにすぐに凍結保存する。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞とＰＤ−Ｌ１発現細胞株との相互作用は、ルシフェラーゼ構築物が活性化される細胞内メカニズムを阻害し、それによってルシフェラーゼ発現を防止する。Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞上のＰＤ−１又はＣＨＯ細胞上のＰＤ−Ｌ１のいずれかに結合してそれらの相互作用を十分に防止する分子は、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞がルシフェラーゼを産生するのを可能にする。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）、Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、ルシフェラーゼ発現を測定した。

抗ＰＤ−１対照抗体を用いた陽性対照アッセイの結果を、図７Ａ〜Ｂに示す。これらの結果は、対照抗体が、２０μΜの抗体濃度で約８のピーク倍数阻害を有して、用量依存的にルシフェラーゼ発現を回復することを実証する。

上記で特定されたペプチドのアッセイの結果を図８Ａ〜Ｂに示す。これらの結果は、４つのペプチドの各々が、約２５μΜの濃度で約１．５のピーク倍数阻害を有して、用量依存的にルシフェラーゼ発現を回復することを実証する。

実施例４．個々のペプチドを用いた破傷風トキソイドリコールアッセイ
ペプチド１〜４を、ヒトＰＢＭＣベース破傷風抗原リコールアッセイで試験した。「ペプチドＣＱ−２２」を、陰性対照として使用した。

ＰＢＭＣを、ヒトのドナーの血漿から取得して、破傷風トキソイドのリコールについてインビトロで試験した。必要になるまで適切なＰＢＭＣを凍結保存し、次いで、解凍し、９６ウェルプレートで培養した。破傷風トキソイドをペプチド１〜４の存在下又は非存在下で培養物に添加し、サイトカインの産生及び細胞表面Ｔ細胞活性化マーカーを調べた。

これらのアッセイの結果を図９〜１５に示し、表２に定性的にまとめる。表中の「ｘ」は、全く効果がないことを示し、「−」は可能性のある低効果を示し、「＋」はある程度の効果を示し、「＋＋」は明確な効果を示す。

結果は、最高濃度のペプチドで、ＩＬ−６、ＩＬ−１７α、ＩＦＮγ、及びＴＮＦα産生の適度な増強に向かう傾向を実証した。ＩＬ−２産生の有意な増強は検出されなかった。

実施例５．ペプチドの組み合わせを用いた破傷風トキソイドリコールアッセイ
ペプチドの組み合わせを、異なるＰＢＭＣドナー及び破傷風トキソイドの異なるロット番号を用いて、上記の抗原リコールアッセイで試験した。結果を図１６、１７、１８、１９、２０、２１、及び２２に示す。これらの結果は、４つのペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０の４つのペプチド組み合わせの組み合わせがＩＬ−２産生の増加及びＩＬ−１７ａ産生の減少をもたらすことを実証した。

図２３Ａ〜Ｂ及び図２４Ａ〜Ｂに示すように、ＩＬ−２及びＩＬ−１７ａの産生に対するペプチドＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＱＰ２０の効果は、ドナー特異的であると考えられる。

実施例６．ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ
ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイを、２５℃でＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ−２００を用いて行った。該アッセイ及び再生緩衝液は、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、及び０．０５％のＰ２０を含有していた。固定化緩衝液は、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０であった。リガンドを固定化するために使用した流速は、５μｌ／分であった。動態分析のための流速は、３０μｌ／分であった。

スカウティング
ヒトＰＤ−１受容体の１２,０００応答単位（ＲＵ）及びマウスＰＤ−１受容体の６０００ ＲＵを、アミンカップリング法（ＥＤＣ／ＮＨＳ）によってＣＭ５チップのフローセル２及びフローセル４上に直接固定化した。非占有部位を、１Ｍのエタノールアミンでブロックした。スカウティングを、結合の有無を確認するために、２５μΜの単一検体濃度で行った。フローセル１をブランクとして保持し、基準減算（reference subtraction）に使用した。リガンドへの検体の結合をリアルタイムで監視した。

完全な動態
スカウティングの結果に基づいて、新しいチップへより高いＲＵのリガンドを固定し、２５μΜの検体濃度とそれに続いて１２．５、６．２５、３．１２５、１．５６２、０．７８及び０μΜ濃度に連続希釈して、又は示されるように完全な動態を行った。速いオン速度及びオフ速度により、定常状態の平衡動態によってＫＤを決定した。

カイ二乗（χ２）分析を、実際のセンサーグラム及びＢＩＡＮＡＬＹＳＩＳ（登録商標）ソフトウェア（黒線）から生成されたセンサーグラムの間で行い、分析の精度を決定した。１〜２内のχ２値は有意（正確）とみなされ、１を下回るχ２値は非常に有意（高精度）である。結果を表３にまとめる。

これらの結果は、４つのペプチドの各々がヒトＰＤ−１とマウスＰＤ−１の両方に結合することを示している。ＱＰ２０及びＳＱ２０は、マウスＰＤ−１に対して最も高い親和性を示した。ＨＤ２０及びＳＱ２０は、ヒトＰＤ−１に対して最も高い親和性を示した。

実施例７．実験的転移モデル
ペプチドの有効性を、Ｂ１６−Ｆ１０−ＬａｃＺ実験的転移モデルで評価した。このモデルにおいて、細胞内酵素のβガラクトシドをコードするＬａｃＺ遺伝子を発現するようにトランスフェクトされたＢ１６−Ｆ１０−ＬａｃＺ細胞を、同系マウスの尾静脈に注射する。細胞は、循環を通って移動し、肺に定着し、腫瘍を形成する。マウスを移植後２週間で屠殺する。酵素がその基質Ｘ−ｇａｌを切断する場合、生成物は二量体化し、色を変え、エクスビボで検出することができる。その後、肺の表面上の転移性腫瘍の数を、解剖顕微鏡下で腫瘍の手動計数によって定量する。

簡単に説明すると、研究０日目に、マウス（Ｎ＝７）に、尾静脈への静脈内注射によってＢ１６−Ｆ１０−ＬａｃＺ腫瘍細胞（マウス当たり５×１０^５又は１×１０^６個の細胞）を移植した。研究２、５、７、９及び１２日目に、尾静脈注射によってマウスの静脈内にペプチド組み合わせ（用量あたり２００μｇ、２０μｇ、又は２μｇの各ペプチド）を投与した。臨床試験の詳細及び体重を治療中に定期的に記録した。マウスを研究１４日目に屠殺し、その肺を摘出し、染色した。腫瘍転移数を数えた。処置群を表４に記載する。

結果を図２５に示す。マウスに両方の細胞濃度で移植したときに、良好な用量応答が観察された。最高用量（２００μｇ）のペプチド混合物で処置したマウスは最も少ない腫瘍（平均９７）を有し、最低用量（２μｇ）のペプチド混合物で処置したマウスは最も多くの腫瘍（平均２０５）を有していた。同様に、高い腫瘍数を移植した２つの群において、未処置群は有意により多くの腫瘍を有していた。これは、組み合わせた４つのペプチドがインビボでのＢ１６−Ｆ１０−ＬａｃＺ腫瘍増殖に対して用量依存的効果を示したことを示す。さらに、該ペプチド組み合わせは、マウスに十分に許容され、動物の健康にいかなる急性の悪影響も及ぼさなかった。

実施例８．マラリアワクチンの免疫原性に対するペプチド組み合わせの効果
予防ワクチンアジュバントとしてのペプチド組み合わせの免疫原性を、マラリアのマウスモデルで評価した。プラスモジウム・ヨエリのスポロゾイト周囲タンパク質（ＡｄＰｙＣＳ）を発現するアデノウイルスに基づくマラリアワクチンで免疫したＢａｌｂ／ｃマウスに、２００μｇのペプチド組み合わせ、抗ＰＤ−１ｍＡｂ、抗ＰＤＬ１ ｍＡｂ、又は陰性対照ペプチドオボアルブミン（ＯＶＡ）を、ＡｄＰｙＣＳによる免疫付与後１、３、５、及び７日目に与えた（表５）。追加のアジュバントをＡｄＰｙＣＳ抗原に添加しなかったことに留意されたい。免疫付与の１２日後に脾臓を回収し、脾臓ＰｙＣＳ特異的ＩＦＮγ分泌ＣＤ８^＋Ｔ細胞数を、ＥＬＩＳｐｏｔアッセイによって決定した。ＥＬＩＳｐｏｔアッセイのために、脾細胞をＰｙＣＳのＨ−２Ｋｄ制限ＣＤ８^＋Ｔ細胞エピトープであるＳＹＶＰＳＡＥＱＩペプチド（配列番号５）で刺激したことに留意されたい。

図２６は、各コホートについて０．５×１０^６個の脾細胞当たりのＣＳＰ特異的ＩＦＮγ分泌ＣＤ８^＋Ｔ細胞の平均数±標準偏差を示す。ＡｄＰｙＣＳ単独（コホート１）及びペプチド組み合わせ（コホート３）、抗ＰＤ−１抗体（コホート４）又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体（コホート５）の間の有意差を、一元配置ＡＮＯＶＡ検定を用いて検出した（^＊＊＊ｐ＜０．００１、及び^＊ｐ＜０．０５）。これらの結果は、該ペプチド組み合わせ（コホート３）がインビボで機能的に活性があり、ＡｄＰｙＣＳ単独（コホート１）に対してＣＳＰ特異的ＩＦＮγ分泌ＣＤ８^＋Ｔ細胞の数を約１．６倍増加させ、抗ＰＤ−１又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体（コホート４及び５）での変化と類似していたことを実証する。

実施例９．敗血症のモデルにおける生存に対するペプチド組み合わせの効果
敗血症はＴ細胞機能及び生存を負に変化させ得るが、これは、ＰＤ−１：ＰＤＬ１相互作用が阻止された場合に逆になり得、生存率が改善される。したがって、ＣＤ１マウスを盲腸結紮及び穿刺（ＣＬＰ）に供して、腹腔内腹膜炎を誘導した敗血症の代表的な、臨床的に関連するモデルでペプチド組み合わせの有効性を評価した。この研究のために、ペプチド組み合わせ又は抗ＰＤ−１抗体のいずれか２００μｇを、手術の２、２４、４８、７２及び９６時間後に静脈内投与した。ビヒクル対照群も含めた。各群には６匹のマウスがいた。全てのマウスを、罹患率及び死亡率の兆候について毎日２回チェックした。該ペプチド組み合わせの投与により、該ペプチド組み合わせが２倍高い生存率を示し、ビヒクル対照群を上回って延命効果が増強された（表６）。さらに、該ペプチド組み合わせの群における生存率は、抗ＰＤ−１抗体での処置をわずかに上回った。

実施例１０．ＨＢＶ感染マウスにおける血清ＨＢｓＡｇレベルに対するペプチド組み合わせの効果
Ｔ細胞の消耗及び免疫寛容におけるＰＤ−１の役割が実証されているＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）マウスモデルでＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０ペプチドの組み合わせを評価した（Ｔｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，２０１５）。ＰＤ−１は、持続的ＨＢＶ感染を有するマウスの肝臓Ｔ細胞において上昇しているが、感染をクリアした動物では上昇しない。このモデルにおいて、ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１の相互作用の抗ＰＤ−１ｍＡｂによる阻害により、肝臓Ｔ細胞による抗原特異的ＩＦＮγ産生を増加させ、ＨＢＶの持続性を逆転することの両方が示された（Ｔｚｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１２）。持続的ＨＢＶのこのマウスモデルは、ＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０ペプチド組み合わせが、インビボでのＴ細胞消耗を無くし、ウイルス感染を制御する際に免疫系を助けることができるかどうかを試験する機会を提供した。

ＨＢＶ感染マウスを、感染２日前、及び感染後１、３、６、９、１２、１４、１７及び２０日目の９時点で、生理食塩水（陰性対照）、２００μｇのＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０ペプチド組み合わせ、又は２００μｇの抗ＰＤ−１ ｍＡｂで処置した。血清ＨＢ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）のレベルを、感染後７、１４、及び２１日目にＥＬＩＳＡにより監視し（血清ＨＢｓＡｇのより高いレベルは、より高いウイルス力価を反映している）、ＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０ペプチドの組み合わせの免疫増強活性を検出した。ＱＰ２０、ＨＤ２０、ＷＱ２０、及びＳＱ２０ペプチドの組み合わせで処置した群は、陰性対照生理食塩水と比較して、感染後２及び３週目に血清ＨＢｓＡｇの有意に低い平均レベルを示した（ｐ＜０．０５、一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｔｕｋｅｙの多重比較検定）（図２７）。
参考文献

技術分野
本開示は、概して、免疫調節ペプチドに関する。
特定の実施形態では、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
過剰増殖性障害の進行を阻害する、感染性疾患を処置する、ワクチン接種に対する応答を増強する、敗血症を処置する、毛の再色素化を促進する、又は色素性皮膚病変の軽減を促進する方法であって、前記方法は、それを必要とする個体に、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドからなる群より選択される少なくとも１種のペプチドの有効量を投与することを含み、ここで前記投与は、
（ａ）前記少なくとも１種のペプチドをコードする核酸の投与；
（ｂ）前記少なくとも１種のペプチドを含むペプチドキャリアシステムの投与；又は
（ｃ）前記少なくとも１種のペプチドを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞の投与、
を含む方法。
（項目２）
前記少なくとも１種のペプチドをコードする前記核酸の投与を含み、ここで前記核酸は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、及びＲＮＡからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記少なくとも１種のペプチドを含む前記ペプチドキャリアシステムの投与を含み、ここで前記ペプチドキャリアシステムは、微粒子、ポリマーナノ粒子、リポソーム、固体脂質ナノ粒子、親水性粘膜付着性ポリマー、チオール化ポリマー、ポリマーマトリクス、ナノエマルジョン、及びヒドロゲルからなる群より選択される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記少なくとも１種のペプチドは、前記過剰増殖性障害の進行を阻害するために投与される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記過剰増殖性障害はがんである、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記がんは黒色腫である、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記患者に第２の治療を投与することをさらに含む、項目５に記載の方法。
（項目８）
前記第２の治療は、がんワクチンを含む、項目７に記載の方法。
（項目９）
前記第２の治療は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を含む、項目７に記載の方法。
（項目１０）
前記第２の治療は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン（２，３）−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ａ２Ａアデノシン受容体（Ａ２ＡＲ）からなる群より選択される分子の活性を低減又は阻止することを含む、項目７に記載の方法。
（項目１１）
前記第２の治療はサイトカインを含む、項目７に記載の方法。
（項目１２）
前記第２の治療は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、及び誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）からなる群より選択される分子のアゴニストを含む、項目７に記載の方法。
（項目１３）
前記第２の治療は、４−１ＢＢアゴニスト、４−１ＢＢアンタゴニスト、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤、及びＶＥＧＦＲの阻害剤からなる群より選択される治療剤を含む、項目７に記載の方法。
（項目１４）
前記少なくとも１種のペプチドは、感染性疾患を処置するために投与される、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記感染性疾患は、マラリア又はＢ型肝炎である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記少なくとも１種のペプチドは、前記感染性疾患に対するワクチンへのワクチンアジュバントとして投与される、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記少なくとも１種のペプチドは、敗血症を処置するために投与される、項目１に記載の方法。
（項目１８）
前記少なくとも１種のペプチドは、毛の再色素化を促進するために又は色素性皮膚病変の軽減を促進するために投与される、項目１に記載の方法。
（項目１９）
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチド、からなる群より選択される最大で４種のペプチドをコードする発現構築物。
（項目２０）
（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される最大で４種のペプチドをコードし、（ｉ）リボース糖の改変、（ｉｉ）リン酸結合の改変、及び（ｉｉｉ）塩基の改変からなる群より選択される少なくとも１種の改変を含む、ＲＮＡ分子。
（項目２１）
前記少なくとも１種の改変は、リボ−ジフルオロトルイルヌクレオチド、４’−チオ改変ＲＮＡ、ボラノホスフェート結合、ホスホロチオエート結合、２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）糖置換、２’−フルオロ（２’−Ｆ）、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−ＭＯＥ）糖置換、ロックド核酸（ＬＮＡ）、及びＬ−ＲＮＡからなる群より選択される、項目２０に記載のＲＮＡ分子。
（項目２２）
（ａ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される最大で４種のペプチドをコードする核酸分子；並びに
（ｂ）薬学的に許容されるキャリア、
を含む医薬組成物。
（項目２３）
前記核酸分子は、ＲＮＡ分子である、項目２２に記載の医薬組成物。

Claims (23)

1. 過剰増殖性障害の進行を阻害する、感染性疾患を処置する、ワクチン接種に対する応答を増強する、敗血症を処置する、毛の再色素化を促進する、又は色素性皮膚病変の軽減を促進する方法であって、前記方法は、それを必要とする個体に、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含むペプチドからなる群より選択される少なくとも１種のペプチドの有効量を投与することを含み、ここで前記投与は、
   （ａ）前記少なくとも１種のペプチドをコードする核酸の投与；
   （ｂ）前記少なくとも１種のペプチドを含むペプチドキャリアシステムの投与；又は
   （ｃ）前記少なくとも１種のペプチドを発現するＣＡＲ−Ｔ細胞の投与、
   を含む方法。
2. 前記少なくとも１種のペプチドをコードする前記核酸の投与を含み、ここで前記核酸は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、及びＲＮＡからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
3. 前記少なくとも１種のペプチドを含む前記ペプチドキャリアシステムの投与を含み、ここで前記ペプチドキャリアシステムは、微粒子、ポリマーナノ粒子、リポソーム、固体脂質ナノ粒子、親水性粘膜付着性ポリマー、チオール化ポリマー、ポリマーマトリクス、ナノエマルジョン、及びヒドロゲルからなる群より選択される、請求項１に記載の方法。前
4. 前記少なくとも１種のペプチドは、前記過剰増殖性障害の進行を阻害するために投与される、請求項１に記載の方法。
5. 前記過剰増殖性障害はがんである、請求項４に記載の方法。
6. 前記がんは黒色腫である、請求項５に記載の方法。
7. 前記患者に第２の治療を投与することをさらに含む、請求項５に記載の方法。
8. 前記第２の治療は、がんワクチンを含む、請求項７に記載の方法。
9. 前記第２の治療は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞治療を含む、請求項７に記載の方法。
10. 前記第２の治療は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、リンパ球活性化遺伝子−３（ＬＡＧ−３）、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）、Ｔ細胞活性化のＶドメイン免疫グロブリン抑制因子（ＶＩＳＴＡ）、Ｔ細胞免疫グロブリンドメイン及びムチンドメイン３（ＴＩＭ−３）、キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）、インドールアミン（２，３）−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）、Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）、Ａ２Ａアデノシン受容体（Ａ２ＡＲ）からなる群より選択される分子の活性を低減又は阻止することを含む、請求項７に記載の方法。
11. 前記第２の治療はサイトカインを含む、請求項７に記載の方法。
12. 前記第２の治療は、ＣＤ４０、ＯＸ４０、グルココルチコイド誘導性腫瘍壊死因子関連タンパク質（ＧＩＴＲ）、及び誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ）からなる群より選択される分子のアゴニストを含む、請求項７に記載の方法。
13. 前記第２の治療は、４−１ＢＢアゴニスト、４−１ＢＢアンタゴニスト、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）の阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤、及びＶＥＧＦＲの阻害剤からなる群より選択される治療剤を含む、請求項７に記載の方法。
14. 前記少なくとも１種のペプチドは、感染性疾患を処置するために投与される、請求項１に記載の方法。
15. 前記感染性疾患は、マラリア又はＢ型肝炎である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記少なくとも１種のペプチドは、前記感染性疾患に対するワクチンへのワクチンアジュバントとして投与される、請求項１４に記載の方法。
17. 前記少なくとも１種のペプチドは、敗血症を処置するために投与される、請求項１に記載の方法。
18. 前記少なくとも１種のペプチドは、毛の再色素化を促進するために又は色素性皮膚病変の軽減を促進するために投与される、請求項１に記載の方法。
19. （ｉ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチド、からなる群より選択される最大で４種のペプチドをコードする発現構築物。
20. （ｉ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される最大で４種のペプチドをコードし、（ｉ）リボース糖の改変、（ｉｉ）リン酸結合の改変、及び（ｉｉｉ）塩基の改変からなる群より選択される少なくとも１種の改変を含む、ＲＮＡ分子。
21. 前記少なくとも１種の改変は、リボ−ジフルオロトルイルヌクレオチド、４’−チオ改変ＲＮＡ、ボラノホスフェート結合、ホスホロチオエート結合、２’−Ｏ−メチル（２’−ＯＭｅ）糖置換、２’−フルオロ（２’−Ｆ）、２’−Ｏ−メトキシエチル（２’−ＭＯＥ）糖置換、ロックド核酸（ＬＮＡ）、及びＬ−ＲＮＡからなる群より選択される、請求項２０に記載のＲＮＡ分子。
22. （ａ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列からなるペプチド；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列からなるペプチド；及び（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列からなるペプチドからなる群より選択される最大で４種のペプチドをコードする核酸分子；並びに
    （ｂ）薬学的に許容されるキャリア、
    を含む医薬組成物。
23. 前記核酸分子は、ＲＮＡ分子である、請求項２２に記載の医薬組成物。

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