JP2019528279A

JP2019528279A - キナーゼ阻害物質化合物、組成物、及びがんの治療方法

Info

Publication number: JP2019528279A
Application number: JP2019508942A
Authority: JP
Inventors: アーヴィンシー．ダー; ロスエル．ケイガン; アレックスピー．スコープトン; マサヒロソノシタ
Original assignee: アイカーンスクールオブメディシンアットマウントサイナイ
Priority date: 2016-08-17
Filing date: 2017-08-17
Publication date: 2019-10-10
Also published as: CN110072526A; WO2018035346A1; US10519113B2; CA3034332A1; US20190202789A1; WO2018035346A8; EP3500257A1; EP3500257A4; US20200325103A1; US11066370B2

Abstract

本発明は、式（Ｉ）の構造を有する化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、酸化物、もしくは溶媒和物に関し、式中、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、及びＲ６は本明細書に記載のとおりである。本発明はまた、前記式（Ｉ）の構造を有する化合物を含有する組成物、及び対象におけるがんの治療方法にも関する。

Description

本願は、２０１６年８月１７日に出願され本記載をもってその全体が参照により援用される、米国仮特許出願第６２／３７６，１３８号の優先権を主張する。

本発明は、国立衛生研究所により授与された助成金第Ｕ５４ＯＤ０２０３５３号、同第Ｒ０１−ＣＡ１７０４９５号、及び同第Ｒ０１−ＣＡ１０９７３０号、ならびに国防総省により授与された助成金第Ｗ８１ＸＷＨ−１５−１−０１１１号に基づく政府の支援を受けてなされた。政府は本発明において一定の権利を有する。

発明の分野
本発明は、キナーゼ阻害物質化合物、該化合物を含有する組成物、及びがんの治療方法に関する。

発明の背景
がんなどの複雑な疾患において、薬物の併用は、治療が持続的に奏効し、有害事象を最小限に抑え、且つ耐性の発生を制限する可能性を有する（Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ， “ＧｕｉｄａｎｃｅｆｏｒＩｎｄｕｓｔｒｙ．ＣｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＴｗｏｏｒＭｏｒｅＮｅｗＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌＤｒｕｇｓｆｏｒＵｓｅｉｎＣｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，” （Ｊｕｎｅ２０１３）（非特許文献１））。併用療法に類似した関連するものとしては、多標的キナーゼ阻害物質などの単剤多重薬理学的薬物がある。しかしながら、体系的な設計アプローチが欠如し、且つ歴史的に偶然の発見に頼ってきたことにより、新規な多重薬理学的薬物の数は限定されてきた（Ａｎｉｇｈｏｒｏｅｔａｌ．， “Ｐｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ＣｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄＯｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓｉｎＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，” Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５７：７８７４−７８８７（２０１４）（非特許文献２）；Ｒｅｄｄｙｅｔａｌ．， “Ｐｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙｆｏｒｔｈｅＦｕｔｕｒｅ，” ＥｘｐｅｒｔＲｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６：４１−４７（２０１３）（非特許文献３））。特に動物全身の状況における、多重薬理学的薬物に対する計画的で合理的な取り組みによって、複合的な治療薬を開発する能力が著しく拡大されることとなろう。更に、動物全身の状況において、「バランスのとれた多重薬理学的薬物」を達成すれば、細胞ネットワーク及び組織ネットワークに対する薬物の効果のバランスをとることによって、全体的な毒性を低減することが可能になる。

本発明は、当該技術分野におけるこれら及びその他の欠如している点を克服することに指向している。

Ｕ．Ｓ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅａｌｔｈａｎｄＨｕｍａｎＳｅｒｖｉｃｅｓＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ， "ＧｕｉｄａｎｃｅｆｏｒＩｎｄｕｓｔｒｙ．ＣｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＴｗｏｏｒＭｏｒｅＮｅｗＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌＤｒｕｇｓｆｏｒＵｓｅｉｎＣｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ，" （Ｊｕｎｅ２０１３）Ａｎｉｇｈｏｒｏｅｔａｌ．， "Ｐｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ＣｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄＯｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓｉｎＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，" Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５７：７８７４−７８８７（２０１４）Ｒｅｄｄｙｅｔａｌ．， "Ｐｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙｆｏｒｔｈｅＦｕｔｕｒｅ，" ＥｘｐｅｒｔＲｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６：４１−４７（２０１３）

本発明の一態様は、以下の構造を有する式（Ｉ）

の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、酸化物、もしくは溶媒和物に関し、
式中、
Ｒは、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群より選択され、ここで、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは任意で、Ｒ^１３でｎ回置換されていてもよく、
Ｒ^１はＨであり、
Ｒ^２はＨであるか、
またはＲ^１及びＲ^２が、Ｒ^１及びＲ^２が結合しているフェニル環と結合して、

を形成し、
Ｒ^３はＨもしくはハロゲンであり、
Ｒ^４はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^５はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^６はＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｘは、任意であり、且つ、存在する場合にはＮＨであり、
Ｙは

であり、
ＺはＣ（Ｒ^１２）もしくはＮであり、
Ｒ^７はＨもしくはＭｅであり、
Ｒ^８はＨもしくはＭｅであるか、
または、Ｒ^７及びＲ^８が、Ｒ^７及びＲ^８が結合している炭素原子と一緒になって、

を形成し、
Ｒ^９はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリル、−ＣＮ、もしくは

であり、
Ｒ^１０はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、もしくはＣ_３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ^１１はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、もしくはＣ_３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ^１２はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１３は、Ｒ^１３のそれぞれの場合において、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＣｌＦ_２、ＣＢｒＦ_２、ＣＩＦ_２、ＣＦ_３、Ｃ_２Ｆ_５、Ｃ_３Ｆ_７、Ｃ_４Ｆ_９、ＯＣＦ_３、及びヘテロシクリルからなる群より独立に選択され、且つ
ｎは１〜５であり、
但し、
ｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｘが存在せず、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｉｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｙが

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｖ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＦであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、Ｙが

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

であることができず、
ｖ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｘが存在せず、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、且つ
ｖｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができない。

本発明の別の態様は、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物及び担体を含む、組成物に関する。

本発明の更なる態様は、対象におけるがんの治療方法に関する。この方法は、以下の構造を有する式（Ｉ）

の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、酸化物、もしくは溶媒和物を対象に投与するステップであって、
式中、
Ｒは、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群より選択され、ここで、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは任意で、Ｒ^１３でｎ回置換されていてもよく、
Ｒ^１はＨであり、
Ｒ^２はＨであるか、
または、Ｒ^１及びＲ^２が、Ｒ^１及びＲ^２が結合しているフェニル環と結合して、

である場合、Ｒは

である場合、Ｒは

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

である場合、Ｒは

であることができない、前記ステップを含む。

多重薬理学的キナーゼ阻害物質は、複数の結節で且つ複数の経路を介して生物学的ネットワークを標的とする。臨床上認可されたがん治療薬ソラフェニブを含むかかる薬物は、設計の複雑さ、著しい毒性、及び投与上の問題のために歴史的に制限されてきた。これらの問題点をなくすことにより、患者において耐性を生じ難いこと及び長期にわたる奏効に関する潜在的能力といった望ましい特性を浮かび上がらせることができる。しかしながら、計画的に多重薬理学的薬物を設計するために利用可能な方法はほとんどない。化学的修飾剤及び遺伝的変更因子のスクリーニングを組み合わせた集学的アプローチを用いて、確立された甲状腺髄様がんのｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ} ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）モデルにおけるＦＤＡ認可キナーゼ阻害物質ソラフェニブの離散的な一連の生物学的プロターゲット及びアンチターゲットを特定した。当初意図したソラフェニブの標的であるＲａｆ、及びＭＫＮＫ１は、それぞれ高次の複雑なアセンブリー及びパスウェイフィードバックの結果として出現する重要な薬理学的アンチターゲットであることが実証された。この情報をリード化合物の段階的な合成による精密化と組み合わせることによって、アンチターゲット活性が低下し、それによって動物全身の状況において治療指数が大幅に向上した、新規なクラスの「ソラフェログ（ｓｏｒａｆｅｌｏｇ）」が得られた。より概括的には、このプラットフォームを種々の疾患及び候補治療薬リード化合物に適用することにより、新規な種類の高有効性／低毒性の多重薬理学的薬物を開発するための合理的で計画的な道筋を提供することが可能になる。

ショウジョウバエは、創薬及び薬物開発のための有用な動物全身モデルとして既報である（Ｖｉｄａｌｅｔａｌ．， “ＺＤ６４７４ＳｕｐｐｒｅｓｓｅｓＯｎｃｏｇｅｎｉｃＲＥＴＩｓｏｆｏｒｍｓｉｎａＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＭｏｄｅｌｆｏｒＴｙｐｅ２ＭｕｌｔｉｐｌｅＥｎｄｏｃｒｉｎｅＮｅｏｐｌａｓｉａＳｙｎｄｒｏｍｅｓａｎｄＰａｐｉｌｌａｒｙＴｈｙｒｏｉｄＣａｒｃｉｎｏｍａ，” ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６５：３５３８−３５４１（２００５）；Ｒｕｄｒａｐａｔｎａｅｔａｌ．， “ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＣａｎｃｅｒＭｏｄｅｌｓ，” Ｄｅｖ．Ｄｙｎ．２４１：１０７−１１８（２０１２）；Ｄａｒｅｔａｌ．， “ＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴａｒｇｅｔｓａｎｄＡｎｔｉ−ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＰｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，” Ｎａｔｕｒｅ４８６：８０−８４（２０１２）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。

本出願は、臨床に用いられる抗がん剤ソラフェニブの治療指数を合理的に向上させるための、ショウジョウバエにおける遺伝的変更因子及び化学的修飾剤のスクリーニングの使用に関する。動物全身の遺伝的変更因子のスクリーニングを計算化学及び反復的な化学アプローチと組み合わせることにより、最適化されたプロターゲット及びアンチターゲットプロファイルを有する新規なソラフェニブ類縁体（「ソラフェログ」）が開発された。驚くべきことに、Ｒａｆキナーゼに対する活性を除去することによって治療指数が大幅に向上した。総じて、合理的、段階的な方法で、治療指数が著しく向上した新規化合物が開発された。

化合物ＬＳ１−１１−２のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＬＳ１−１１−２の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。ソラフェニブのＬＣ−ＭＳデータを示す図である。ソラフェニブの^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＬＳ１−１５のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＬＳＩ−１５の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。レゴラフェニブのＬＣ−ＭＳデータを示す図である。レゴラフェニブの^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ−３−６９−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ−３−６９−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ−４−６１−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ−４−６１−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−７０−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−７０−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−７０−２のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−７０−２の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−３４−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−３４−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−３４−２のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−３４−２の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−５４のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−５４の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ５−１６−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ５−１６−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ５−１６−２のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ５−１６−２の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ５−３１−３のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ５−３１−３の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ５−３１−４のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ５−３１−４の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ６−４５のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ６−４５の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６４−２のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６４−２の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６４−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６４−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６３−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６３−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６７−４のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６７−４の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６７−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６７−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６７−２のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６７−２の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−４のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−４の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−３のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−３の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−１のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−１の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−２のＬＣ−ＭＳデータを示す図である。化合物ＡＰＳ４−６８−２の^１ＨＮＭＲスペクトルを示す図である。図５３Ａ〜Ｃは、ショウジョウバエがんモデルを用いた薬物スクリーニングにおけるソラフェニブの同定を示す図である。図５３Ａは、薬物及び化合物のスクリーニングに用いる、定量的な「致死からのレスキュー」ショウジョウバエプラットフォームを示す概略図である。ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエにおいて、ｐａｔｃｈｅｄ（ｐｔｃ）プロモーターは、いくつかの組織においてショウジョウバエＲｅｔ（ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}）の発がん性変異体アイソフォームを駆動し、これが成虫としての羽化の前に死に至らしめる。幼虫は候補薬剤を食べ尽くし、薬効は、レスキューされた成虫の数（Ａ）を蛹の総数（Ｐ）で除することによって定量化される。図５３Ｂは、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエにおけるＦＤＡ認可抗がん性キナーゼ阻害物質の試験を示すグラフである。ＭＴＣに対して認可された２種類の薬物には下線が引かれている。最も成功したソラフェニブで約５％のレスキューを増進したに過ぎなかった。エラーバーは３回繰り返しの実験における標準誤差を表す。アスタリスクはスチューデントのｔ検定においてｐ＜０．０５を表し、ＤＭＳＯビヒクル対照との比較を反映する。図５３Ｃはインビボ細胞遊走アッセイの結果を示す。左側の写真は、ＧＦＰ標識した、ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}発現形質転換細胞を有する発生中の翅原基（ｗｉｎｇｄｉｓｃ）を示す。青色のＤＡＰＩ染色は翅原基縁部の輪郭を示す。中央上段及び右側上段の写真はそれぞれ、ビヒクル及びソラフェニブによって処理した場合の頂端側（ａｐｉｃａｌ）拡大画像である。矢印は遊走細胞の例を示す。下段の写真は、上段の写真において点線で示す平面から見た、仮想ｚシリーズの共焦点画像であり、組織をｐｈｏｓｐｈｏ（ｐ）−Ｓｒｃに対して染色する（赤）。矢印は、基底側における（ｂａｓａｌｌｙ）ｐＳｒｃを発現する遊走形質転換細胞を示す（赤）。図５４Ａ〜Ｄは、ソラフェニブ類縁体、ソラフェログの生成及び有効性を示す図である。図５４Ａは、ソラフェニブが４のドメインで構成されていることを示す概略図である。左側の図は、ＤＦＧ−ｏｕｔ（すなわち不活性な）立体配座（灰色）の種々のキナーゼに結合した場合のソラフェニブの立体配座を示し、表示する構造のＰＤＢＩＤを括弧内に記載する。例えば、ＢＲＡＦに結合する場合、ソラフェニブ（黄色の配座）は、ＡＴＰ結合ポケットのヒンジ領域及びＣ−ヘリックス（Ｅ８８５）の保存されたグルタミン酸残基と、それぞれヒンジバインダー及びリンカー領域を用いて相互作用する。ソラフェニブのキャップ基は、それ以前は、ＤＦＧ−ｉｎ（すなわち活性な）立体配座においてフェニルアラニン（Ｆ１０４７）によって占有されていたＤＦＧ−ポケットを占有する。右側の図は、ソラフェニブの化学構造及びモジュール方式の合成計画に適した４種類の単純なビルディングブロックへの概念的な分割を示す。ヒンジバインダーはこれらの研究においては変化させなかった。図５４Ｂはソラフェログの段階的誘導体化を示す略図である。ソラフェログの第１のセットは、薬化学によって生成したスペーサー／リンカー／キャップの間の組み合わせを含む。ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエを用いた薬物スクリーニング実験により、ＬＳ１−１５が最良の誘導体として特定され、その後の遺伝学的スクリーニングにより、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５に対するプロターゲット及びアンチターゲットが明らかになった。計算によって、分子内立体障害などの化合物間での物理化学的特徴、及びキャップのアンチターゲットに対する結合を妨げるための該キャップの修飾を比較し、新規化学種ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５が指し示された。図５４Ｃは誘導体化したソラフェニブのセグメントを示す。グレーの構造はｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエで評価して効果のない構成要素である。図５４Ｄはソラフェニブによるｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエのレスキューを示すグラフである。ＬＳ１−１５（「ｊ」）がソラフェニブ（ａ）及びレゴラフェニブ（ｂ）よりも有意に良好に生存率を回復させたことを示すグラフであり、（丸で囲んだ）フッ素の追加及び（×で示した）塩素が存在しないことがソラフェニブとの際立った構造上の違いである。嵩高いキャップを有するＡＰＳ５−１６−２も有意なレスキューを示した（ｋ）一方、最も大きなキャップを有するＡＰＳ６−４５が、ＡＤ８０を超える最も強い有効性（ｏ）を示す。Ｔはハエに対して有毒な用量を表す。エラーバーは３回繰り返しの実験における標準誤差を表す。下部の事例を表す文字は図５８Ａにおける文字に対応している。図５５Ａ〜Ｃは、遺伝学的スクリーニングによって特定されたＬＳ１−１５に対するプロターゲット及びアンチターゲットを示す図である。図５５Ａは、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエにおけるＬＳ１−１５の有効性の遺伝的変更因子を特定するためのスクリーニングアプローチを示す概略図である。ハエキノーム遺伝子を、（−／＋）ヘテロ接合体として、上記遺伝的変更因子がＬＳ１−１５の有効性を増加または減少させる場合、それぞれ「プロターゲット」または「アンチターゲット」として特定した。図５５Ｂは、ＬＳ１−１５のプロターゲットの例（ＥＰＨ、ＦＲＫ）及びアンチターゲットの例（ＭＫＮＫ１）を示すグラフである。例えば、ＬＳ１−１５の存在下でＬｋ６の１つの機能的コピー（ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}、Ｌｋ６^−／＋）を削除すると全てが致死となった。図５５Ｃは、ＬＳ１−１５のプロターゲット及びアンチターゲットによって規定される代表的なシグナル伝達及び細胞経路を示す概略図である。全てのデータは図５９及び６０に示す。２３℃でＬＳ１−１５による処理を行った対照ハエの約５０％の生存率と比較して、＞９１％及び＜９％の生存率を与える、それぞれ強力なプロターゲット及び強力なアンチターゲットを示す。ヒトオルソログを（括弧内に）示す。アスタリスクは、スチューデントのｔ検定において、対照と比較してｐ＜０．０５であることを表す。図５６Ａ〜Ｄは、アンチターゲットＭＫＮＫ１及びＢＲＡＦを低減することによる新規ソラフェログＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５の開発を示す図である。図５６Ａは成虫のハエにおける翅脈形成アッセイの結果を示す。全翅原基ドライバ７６５−ｇａｌ４によって駆動されたｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}では異所性翅脈物質（矢印）が誘導され、７６５−ｇａｌ４単独を対照として示す。低用量のＬＳ１−１５によって余分な翅脈形成及び翅縁部の切欠きも増加した一方、高用量では両方共抑制された。ＭＥＫ阻害物質トラメチニブが異所性翅脈形成を強力に抑制し、異所性翅脈形成がＲａｓ／Ｒａｆ経路活性の上昇によるものであることが実証された。図５６Ｂは翅脈形成アッセイの定量化を示す。ＬＳ１−１５及びソラフェニブは２つの要素を含む効果を示した。すなわち、低用量では翅脈形成が高められた一方で、高用量では翅脈形成が抑制された。（丸で囲んだ）嵩高いキャップの下位基を有するＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５は専ら翅脈形成を抑制した。アスタリスクはビヒクル対照と比較してｐ＜０．０５であることを表す。＃はＬＳ１−１５単独処理と比較してｐ＜０．０５であることを表す。エラーバーは翅の数が＞１５である場合における標準誤差を表す。図５６Ｃは、ヒトＲＥＴ、その活性変異体ＲＥＴ（Ｍ９１８Ｔ）、ならびにアンチターゲットＢＲＡＦ及びＭＫＮＫ１に対するソラフェログのＫｄ値を示すグラフである。図５６Ｄは、ＤＦＧ−ｏｕｔ配置のヒトＲＥＴ、ＢＲＡＦ、及びＭＫＮＫ１のＤＦＧポケットを示す。ＤＦＧポケットは色付きの表面によって描かれており、ＬＳ１−１５、ＡＰＳ５−１６−２、またはＡＰＳ６−４５のキャップと重ね描きされている。矢印は、上記キャップとポケットとの間の代表的な立体的衝突を示し、ＤＦＧ−ＢＲＡＦに関する挿入図は、衝突を視覚化するためのＡＰＳ６−４５の側面図を示す。誤差は１０回の計算の標準誤差である。図５７Ａ〜Ｄは、新規ソラフェログＡＰＳ６−４５が破格の有効性を示したことを示す図である。図５７Ａは、Ｌｋ６変異が異常な翅脈形成を高め、全体的な翅構造に影響を与えたことを示す。矢印は過剰な翅脈物質を強調している。対照としては図５６Ａを参照されたい。図５７Ｂは、Ｒａｓ／ＭＡＰＫ経路シグナル伝達のＭＫＮＫ１阻害の可能性のある一モデルを示す概略図である。図５７Ｃは、ソラフェログの存在下でＬｋ６を低減することの細胞遊走に対する効果を示す。Ｌｋ６がヘテロ接合の翅原基によって、ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}に誘導される細胞遊走が高められることが示され、この細胞遊走はソラフェニブ及びＬＳ１−１５によって更に高められたが、ＡＰＳ５−１６−２またはＡＰＳ６−４５によっては高められなかった。矢印は遊走細胞を示す（頂端側画像）。図５７Ｄは、ラフアイ（ｒｏｕｇｈｅｙｅ）表現型に対する化合物の効果を示す。ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}は成虫の前眼部において個眼領域の乱れ（かぎ括弧）を示した。ＡＰＳ６−４５はラフアイ表現型を強力にレスキューし、ｐｔｃ−ｇａｌ４対照と同様の滑らかに配列された個眼が生じた（矢印）。ビヒクル処理した対照ハエは、成虫期まで生存しなかったことから、蛹の状態で解剖した。図５８Ａ〜Ｂは多重薬理学的薬物の最適化を示す。図５８Ａはソラフェニブの化学進化を示す図である。ｘ軸はキャップ（−Ｒ）の修飾の進化を示す。白い領域は、内部の立体障害を試験するためのキャップである。陰影を付けた領域は、（丸で囲んだ）キャップの下位基中のフッ素の数に関して一貫したＳＡＲを示す（２）−フッ素化化合物である。アスタリスクは、Ｓ１及びＳ２の両方のスペーサーに関してレスキューがみられないことを表す。図５８Ｂは各ソラフェログの作用機序のモデルを示す。（左側の図）ソラフェニブはＲＥＴなどのプロターゲットを阻害する。但し、低用量ではかかる阻害はそれほど強力ではなく、ＢＲＡＦは活性化されて毒性を生じることすらある。かかる望ましくない作用はより高濃度では消失するが、同時に起こるアンチターゲットの阻害によって治療域が制限される。（中央の図）ＬＳ１−１５は更にプロターゲットＥＰＨ及びＦＲＫを阻害し、ソラフェニブよりも大きな治療域が生じる。ＬＳ１−１５は、ソラフェニブと同様にＢＲＡＦを活性化するため、低用量であってもなお毒性を生じる。（右側の図）ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５ではアンチターゲットＢＲＡＦに対する結合力が低下しており、そのため低用量ではＢＲＡＦの活性化を妨げる。別のアンチターゲットＭＫＮＫ１も阻害されないままであり、ソラフェニブよりも顕著な治療効果に繋がる。ソラフェニブ及びＬＳ１−１５のプロターゲットを示す表である。遺伝子のヘテロ接合性によって、薬物の存在下でｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエの生存率が統計的に有意に増加する、該遺伝子の一覧。ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエをキナーゼ変異ハエと交雑させ、成虫の数を蛹の総数で除して生存率を算出した。交雑において親ハエの性別が入れ替わっているために、キナーゼ発現能力をもつ対照の生存率が、異なる染色体についてのデータセット間で異なる（図６２Ａ〜Ｈ）。Ｗ、Ｍ、及びＳは、それぞれ統計的に有意に弱い効果、中程度の効果、及び強い効果を表し、Ｘ染色体上の遺伝子については、それぞれ弱い効果（２１〜５０％の生存率）、中程度の効果（５１〜８０％の生存率）、及び強い効果（８１〜１００％の生存率）、第２、第３、及び第４染色体上の遺伝子については、それぞれ弱い効果（５１〜７０％の生存率）、中程度の効果（７１〜９０％の生存率）、及び強い効果（９１〜１００％の生存率）を表す。ＳＥは３回繰り返しの実験についての標準誤差を表す。アスタリスクは、薬物の非存在下でのキナーゼ発現能力をもつ対照と比較した、キナーゼ変異による％表記の生存率の統計的に有意な変化を表す。−、ｓｏｒａｆ、及びＬ１５はそれぞれ、ビヒクル処理したハエ、ソラフェニブ処理したハエ、及びＬＳ１−１５処理したハエを表す。ソラフェニブ及びＬＳ１−１５のアンチターゲットを示す表である。遺伝子のヘテロ接合性によって、薬物の存在下でｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエの生存率％が統計的に有意に低下する、該遺伝子の一覧。凡例は、Ｗ、Ｍ、及びＳが、Ｘ染色体上の遺伝子については、それぞれ弱い効果（１１〜１７％の生存率）、中程度の効果（６〜１０％の生存率）、及び強い効果（０〜５％の生存率）、または第２、第３、及び第４染色体上の遺伝子については、それぞれ弱い効果（３０〜４７％の生存率）、中程度の効果（１０〜２９％の生存率）、及び強い効果（０〜９％の生存率）を表す以外は、図５９におけるものと同一である。キナーゼに対するインビトロ阻害データを示す表である。ソラフェログによるヒトキナーゼ活性の阻害率であり、赤は８０％を超える阻害率、白は４１〜８０％の阻害率、青は４０％未満の阻害率、灰色は有用なデータなしを表す。図６２Ａ〜Ｈは、ショウジョウバエＭＴＣモデルにおける阻害物質の効果の判定またはキナーゼ遺伝子のヘテロ接合性の決定を示す図である。ｐｔｃ−ｇａｌ４、ＵＡＳ−ＧＦＰ、ＵＡＳ−ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}／ＳＭ５（ｔｕｂ−ｇａｌ８０）−ＴＭ６Ｂハエにおいて、チューブリンプロモーター駆動ｇａｌ８０はｇａｌ４活性を阻害してｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}発現を抑制した。薬物スクリーニングのために、上記のハエをｗ⁻ハエと交雑し、蛹期にＴｂ対照ハエと形態学的に識別可能な非Ｔｂ、発がん性ｐｔｃ−ｇａｌ４、ＵＡＳ−ＧＦＰ；ＵＡＳ−ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}（ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}）ハエを作製した（図６２Ａ）。ハエの後代を薬物でまたは薬物なしで処理し、２５℃で飼育した。遺伝学的スクリーニングを目的として、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエを、Ｘ染色体上（図６２Ｂ〜Ｃ）、第２染色体上（図６２Ｄ〜Ｅ）、第３染色体上（図６２Ｆ〜Ｇ）、または第４染色体上（図６２Ｈ）のいずれかのキナーゼ遺伝子についての変異体であるハエと交雑し、それらの後代を、２３℃で薬物を含むまたは含まないハエ用の餌で飼育した。親ハエにおける変異対立遺伝子は、Ｔｂ対立遺伝子（図６２Ｂ、６２Ｄ、及び６２Ｆ）と平衡にあるか、またはホモ接合性（図６２Ｃ、６２Ｇ、及び６２Ｈ）のいずれかであった。細胞遊走に対するソラフェログの明確な効果を示す図である。翅原基における細胞遊走（中段）及び非発がん性ｗ⁻ハエにおける全身毒性（下段）に対するソラフェログ（上段）の効果である。丸及びバツはソラフェニブと比較した修飾部分を表す。矢印は、ｐｔｃドメインから離れて遊走するｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}発現形質転換細胞を示す（頂端側画像）。アスタリスクは、スチューデントのｔ検定において、薬物を用いない対照と比較してｐ＜０．０５であることを表す。ソラフェログの物理化学的特徴を計算した結果を示す図である。リンカー／キャップ及びリンカー／スペーサーのねじれ角の回転エネルギーは、ヒートマップに表される当該化合物の相対的な立体配座の分布に変換されている。ほとんどのソラフェログはスペーサー領域上に置換基を有していないことから、リンカー／スペーサーは１８０°で対称であった。ソラフェニブ、ＡＰＳ５−１６−１、及びＡＤ５７には、おそらくリンカー／キャップの回転に起因して、２種類の優勢な立体配座分布、シス及びトランスの配座異性体がある。これとは逆に、ＬＳ１−１５、ＡＰＳ５−１６−２、及びＡＤ８０では、おそらく、尿素アミド水素とフッ素との間の多極相互作用（破線）、及びトランス立体配座異性体におけるフッ素と尿素カルボニル酸素との間の強い静電反発力（円弧）に起因して、トランス立体配座よりもシス立体配座が優先される。図６５Ａ〜Ｃは共通する及び固有のプロ／アンチターゲットを示す図である。図６５Ａは、ソラフェニブ及び／またはＬＳ１−１５に対するプロターゲット及びアンチターゲットを表示するベン図を示す。強力なプロターゲット及び強力なアンチターゲットが示されており、それらのヘテロ接合性によって、薬物の存在下でｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエの生存率がそれぞれ＞９１％及び＜９％となる。図６５Ｂは、Ｌｋ６のヘテロ接合性が対照ハエの生存率に影響を及ぼさなかったことを示すグラフである。対照（ｗ⁻）ハエまたはＬｋ６ヘテロ接合体（ｗ⁻；Ｌｋ６^−／＋）の幼虫を薬物でまたは薬物なしで処理した。生存率を蛹及び成虫の数を用いて測定した。図６５Ｃは、ソラフェログによるプロターゲットキナーゼの明確な阻害を示すグラフである。キナーゼ活性の阻害率はインビトロアッセイによって測定した。図６６Ａ〜ＥはＡＰＳ６〜４５のインビボでの有効性を示す図である。図６６Ａは、ハエのラフアイ表現型に対する化合物ソラフェニブ（４００μＭ）、ＬＳ１−１５（２００μＭ）、ＡＰＳ５−１６−２（１００μＭ）、ＡＰＳ６−４５（１００μＭ）、及びＡＤ８０（１００μＭ）の効果を示す。図６６ＢはＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５によるヒトＭＴＣコロニー形成の抑制を示す。図６６ＣはＡＰＳ６−４５によるインビボでのヌードマウスにおけるＴＴ細胞増殖の抑制を示す。図６６Ｄは処理前のベースラインに対する３０日目の腫瘍量の変化率を示す。図６６Ｅは、処理がマウスの体重に対して影響を与えないことを示す。マウスにおけるＡＰＳ６−４５の投与実験を示す図である。４０匹のメスのヌードマウスにＴＴ細胞を皮下移植した。腫瘍量が約１２０ｍｍ^３に達した時点でマウスを無作為に４群に分け、それぞれの群に、週当たり５日、ビヒクル（水で４倍希釈したクレモファーＥＬ／エタノール（１：１））または１０ｍｇ／ｋｇ／日のカボザンチニブ（ＬＣＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ソラフェニブ（ＬＣＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、もしくはＡＰＳ６−４５を経口投与した。ｐｔｃ＞ｄＲＥＴＭ９５５Ｔハエにおける類縁体の試験を示すレスキュープロットの図である。

発明の詳細な説明
本発明は、臨床に用いられるキナーゼ阻害物質の多重薬理学のバランスをとるための段階的アプローチに関する。このアプローチに従って、新規なキナーゼ阻害物質化合物が合成された。本発明は、かかる化合物、該化合物を含有する組成物、及びがんの治療方法を対象とする。

本発明の一態様は、以下の構造を有する式（Ｉ）

の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、酸化物、もしくは溶媒和物に関し、
式中、
Ｒは、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群より選択され、ここで、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは任意で、Ｒ^１３でｎ回置換されていてもよく、
Ｒ^１はＨであり、
Ｒ^２はＨであるか、
または、Ｒ^１及びＲ^２が、Ｒ^１及びＲ^２が結合しているフェニル環と結合して、

である場合、Ｒは

である場合、Ｒは

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

である場合、Ｒは

であることができない。

上記に用いられたように、及び本明細書の記述の全体を通じて、別段の指示がない限り、以下の用語は以下の意味を有すると理解されるべきものである。本明細書で用いられる全ての技術用語及び科学用語は、本明細書において別段の定義がなされない限り、本技術が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書中の用語に関して複数の定義がある場合には、別段の明記がない限り、本節の定義が優先する。

本明細書では、用語「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを意味する。

用語「アルキル」とは、連鎖中に約１〜約６個の炭素原子（または、ｎ〜ｎが炭素原子の数値範囲である、「Ｃ_ｎ〜ｎ」によって示される数の炭素）を有する直鎖または分枝鎖であってよい脂肪族炭化水素基を意味する。分枝鎖とは、メチル、エチル、もしくはプロピルなどの１つまたは複数の低級アルキル基が直鎖アルキル鎖に結合していることを意味する。例示的なアルキル基としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、及び３−ペンチルが挙げられる。

用語「シクロアルキル」とは、約３〜約７個の炭素原子、好ましくは約５〜約７個の炭素原子の、非芳香族、飽和または不飽和の、単環式または多環式（ｍｕｌｔｉ−ｃｙｃｌｉｃ）環系を意味し、該環系は少なくとも１つの二重結合を含んでいてもよい。例示的なシクロアルキル基としては、限定はされないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロフェニル、ａｎｔｉ−ビシクロプロパン、及びｓｙｎ−トリシクロプロパンが挙げられる。

用語「アルコキシ」とは、酸素を介して親構造に結合した、１〜８個の炭素原子の直鎖状、分岐鎖状、または環状の配置及びそれらの組み合わせの基を意味する。例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロピルオキシ、シクロヘキシルオキシなどが挙げられる。低級アルコキシとは１〜６個の炭素を含有する基をいう。本特許出願の意図に関して、アルコキシは、メチレンジオキシ及びエチレンジオキシも含み、当該メチレンジオキシまたはエチレンジオキシ基において、ペンダントしている原子、連鎖、または環に対して、それぞれの酸素原子が環を形成するように結合している。したがって、例えば、アルコキシで置換されたフェニルは

であってもよい。

用語「アリール」とは、６〜約１９個の炭素原子、好ましくは６〜約１０個の炭素原子の芳香族単環式または多環式（多環式（ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃ））環系を意味し、アリールアルキル基を包含する。上記アリール基の環系は任意で置換されていてもよい。本発明の代表的なアリール基としては、フェニル、ナフチル、アズレニル、フェナントレニル、アントラセニル、フルオレニル、ピレニル、トリフェニレニル、クリセニル、及びナフタセニルなどの基が挙げられるが、これらに限定はされない。

用語「ヘテロアリール」とは、約５〜約１９個の環原子、好ましくは約５〜約１０個の環原子の芳香族単環式または多環式環系であって、該環系中の１つまたは複数の原子が炭素以外の元素、例えば、窒素、酸素、または硫黄である、前記芳香族単環式または多環式環系を意味する。多環式環系の場合、当該環系が「ヘテロアリール」と定義されるためには、それらの環のうちの１つのみが芳香族であればよい。好ましいヘテロアリールは約５〜６個の環原子を含有する。ヘテロアリールの前の接頭辞アザ、オキサ、チア、またはチオとは、それぞれ、少なくとも窒素、酸素、または硫黄原子が環原子として存在することを意味する。上記ヘテロアリール環中の窒素、炭素、または硫黄原子は任意で酸化されていてもよく、上記窒素は任意で四級化されていてもよい。代表的なヘテロアリールとしては、ピリジル、２−オキソ−ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル、フラニル、ピロリル、チオフェニル、ピラゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、テトラゾリル、インドリル、イソインドリル、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェニル、インドリニル、２−オキソインドリニル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチオフェニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾ［１，３］ジオキソリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、シンノリニル、フタラジニル、キノキサリニル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニル、ベンゾ［１，２，３］トリアジニル、ベンゾ［１，２，４］トリアジニル、４Ｈ−クロメニル、インドリジニル、キノリジニル、６ａＨ−チエノ［２，３−ｄ］イミダゾリル、１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジニル、ピラゾロ［１，５−ａ］ピリジニル、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジニル、［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジニル、チエノ［２，３−ｂ］フラニル、チエノ［２，３−ｂ］ピリジニル、チエノ［３，２−ｂ］ピリジニル、フロ［２，３−ｂ］ピリジニル、フロ［３，２−ｂ］ピリジニル、チエノ［３，２−ｄ］ピリミジニル、フロ［３，２−ｄ］ピリミジニル、チエノ［２，３−ｂ］ピラジニル、イミダゾ［１，２−ａ］ピラジニル、５，６，７，８−テトラヒドロイミダゾ［１，２−ａ］ピラジニル、６，７−ジヒドロ−４Ｈ−ピラゾロ［５，１−ｃ］［１，４］オキサジニル、２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾ［ｄ］オキサゾリル、３，３−ジメチル−２−オキソインドリニル、２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジニル、ベンゾ［ｃ］［１，２，５］オキサジアゾリル、ベンゾ［ｃ］［１，２，５］チアジアゾリル、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジニル、５，６，７，８−テトラヒドロ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジニル、［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピラジニル、３−オキソ−［１，２，４］トリアゾロ［４，３−ａ］ピリジン−２（３Ｈ）−イルなどが挙げられる。

本明細書中では、「ヘテロシクリル」または「ヘテロ環」とは、炭素原子ならびに窒素、酸素、及び硫黄から選択される１〜５個のヘテロ原子の安定な３〜１８員環（ラジカル）をいう。上記ヘテロ環は単環式または多環式（ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃ）環系であってよく、該環系は縮合環系、架橋環系、またはスピロ環系を含んでいてもよく、上記ヘテロ環中の窒素、炭素、または硫黄原子は任意で酸化されていてもよく、上記窒素原子は任意で四級化されていてもよく、上記環は部分的にまたは完全に飽和していてもよい。かかるヘテロ環の例としては、限定はされないが、アゼピニル、アゾカニル、ピラニルジオキサニル、ジチアニル、１，３−ジオキソラニル、テトラヒドロフリル、ジヒドロピロリジニル、デカヒドロイソキノリル、イミダゾリジニル、イソチアゾリジニル、イソオキサゾリジニル、モルホリニル、オクタヒドロインドリル、オクタヒドロイソインドリル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、２−オキソアゼピニル、オキサゾリジニル、オキシラニル、ピペリジニル、ピペラジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、ピラゾリジニル、チアゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、及びチアモルホリニルスルホンが挙げられる。更なるヘテロ環及びヘテロアリールは、Ｋａｔｒｉｔｚｋｙｅｔａｌ．，ｅｄｓ．，ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ：ＴｈｅＳｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＵｓｅｏｆＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｖｏｌ．１−８，ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）に記載されており、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される。

語句「任意で置換された」とは、ある基が当該の基のそれぞれの置換可能な原子に置換基を有していてもよく（単一の原子上の２つ以上の置換基を含む）、それぞれの置換基の種類は他の置換基とは独立であることを指す。

用語「置換された」とは、指定された原子上の１つまたは複数の水素が、当該指定された原子の通常の原子価を超えないとの条件で、指定された群からの選択物で置換されていることを意味する。「未置換」原子は、該原子の原子価により決定される全ての水素原子を有する。置換基がオキソ（すなわち＝Ｏ）である場合、当該原子上の２つの水素が置換されている。置換基及び／または変数の組み合わせは、かかる組み合わせによって安定な化合物が生じる場合に限って許容される。「安定な化合物」とは、反応混合物から有用な純度への単離及び有効な治療薬への製剤化に耐えるのに十分堅固である化合物を意味する。

「本発明の化合物」及びこれと同等の表現は、本明細書に記載の化合物を意味し、その表現は、それらのプロドラッグ、薬学的に許容される塩、酸化物、及び溶媒和物、例えば水和物を、それらが文脈上許容される場合に包含する。

用語「治療」とは、本明細書に記載の疾患もしくは障害に関連する症状及び／または影響の改善または除去を意味する。

本明細書に記載の化合物は、１つまたは複数の不斉中心を含んでいてもよく、したがって鏡像異性体、ジアステレオマー、及び他の立体異性の形態を生じてもよい。各キラル中心は、絶対立体化学の観点から、（Ｒ）−または（Ｓ）−として規定されてもよい。本発明は、全てのかかる可能な異性体、ならびにラセミ体及び光学的に純粋な形態を含む上記異性体の混合物を含むことを意図する。光学活性な（Ｒ）−及び（Ｓ）−、（−）−及び（＋）−、または（Ｄ）−及び（Ｌ）−異性体は、キラルな出発原料またはキラルな反応剤を用いて調製してもよく、または従来の技法を用いて分割してもよい。全ての互変異性体も包含されることが意図される。

当業者に理解されるとおり、「化合物」との記述は、当該化合物の塩、溶媒和物、酸化物、及び包接錯体、ならびに任意の立体異性体、または当該化合物の任意のかかる形態の任意の比率の混合物を包含することを意図している。したがって、本発明のいくつかの実施形態によれば、医薬組成物、治療方法、及び化合物それら自体の状況においてなどの、本明細書に記載の化合物は塩の形態として提供される。

用語「溶媒和物」とは、適宜の溶媒の分子が結晶格子中に取り込まれている固体状態の化合物をいう。治療のための投与に好適な溶媒は、投与される用量において生理学的に忍容性のあるものである。治療のための投与に好適な溶媒の例はエタノール及び水である。水が上記溶媒である場合、当該溶媒和物は水和物と呼ばれる。一般に溶媒和物は、当該化合物を適宜の溶媒に溶解し、冷却するまたは貧溶媒を用いることにより当該溶媒和物を単離することにより形成される。上記溶媒和物は一般的には周囲条件下で乾燥または共沸される。

包接錯体はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ，ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈＥｄ．１：１７６−１７７（１９９５）に記載されており、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される。最も一般的に用いられる包接錯体はシクロデキストリンとの包接錯体であり、天然物及び合成物の全てのシクロデキストリン錯体がとりわけ本発明に包含される。

用語「薬学的に許容される塩」とは、無機酸及び無機塩基ならびに有機酸及び有機塩基を含む薬学的に許容される無毒性の酸または塩基から調製される塩をいう。

用語「薬学的に許容される」とは、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずにヒト及び下等動物の細胞と接触する使用に適し、且つ合理的なベネフィット／リスク比に見合うことを意味する。

一実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｒは

であり、
ここで、
Ｖ^１はＣ（Ｒ^１４）またはＮであり、
Ｖ^２はＣＨまたはＮであり、
Ｖ^３はＣ（Ｒ^１５）またはＮであり、
Ｖ^４はＣ（Ｒ^１６）またはＮであり、
Ｖ^５はＣＨまたはＮであり、
Ｒ^１４はＨまたはハロゲンであり、
Ｒ^１５はＨまたはハロゲンであり、且つ
Ｒ^１６は、ハロゲンで２〜１３回置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
ここで、Ｖ^１〜Ｖ^５の１つのみがＮである。

別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ^１６はフッ素で２〜１３回置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルである。この実施形態によれば、Ｒ^１６は、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＣｌＦ_２、ＣＢｒＦ_２、ＣＩＦ_２、ＣＦ_３、Ｃ_２Ｆ_５、Ｃ_３Ｆ_７、及びＣ_４Ｆ_９からなる群より選択されてもよい。

別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ^１４はＦである。

更に別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、Ｒ^３はＦである。

別の実施形態では、式（Ｉ）の化合物において、ＸはＮＨであり、且つＹは

である。

更に別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は

からなる群より選択される。

別の実施形態において、式（Ｉ）の化合物は、

からなる群より選択される。

式（Ｉ）の尿素リンカー（Ｌ１）ソラフェログは、例えばアミンＨＢ／ＳＸをハロゲン化アシル、アシルイミダゾール、または活性化エステルと反応させることによって調製することができる（スキーム１）。
スキーム１

アニリンとＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）との間の反応によってアシルイミダゾールが形成される（スキーム２）。尿素リンカー（Ｌ１）ソラフェログは、アシルイミダゾールをアミンＨＢ／ＳＸと反応させることによって調製することができる。
スキーム２

式（Ｉ）の尿素リンカー（Ｌ１）ソラフェログは、アミンＨＢ／ＳＸをイソシアナートと反応させることによっても調製することができる（スキーム３）。
スキーム３

式（Ｉ）のスルホンアミドリンカーソラフェログは、アミンＨＢ／ＳＸを塩化スルホニル誘導体と反応させることによっても調製することができる（スキーム４）。
スキーム４

式（Ｉ）の化合物（及び上記の方法によって製造された本明細書に記載の他の化合物）は、公知の方法、例えば、溶媒の蒸留後の残渣を分配、抽出、再沈殿、再結晶、または別の精製方法もしくは精製方法の組み合わせに供することによって、単離及び精製することができる。

本発明の更なる態様は、本発明の化合物及び担体を含む、組成物を対象とする。

一実施形態において、上記担体は薬学的に許容される担体であり、組成物は医薬組成物である。

「医薬組成物」とは、本発明の化合物と、投与形態及び剤形の性格に応じて、防腐剤、増量剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味料、香味料、芳香剤、抗菌剤、抗真菌剤、滑沢剤、及び分散剤などの、薬学的に許容される担体、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを含む少なくとも１種類の成分とを含む組成物を意味する。

用語「薬学的に許容される担体」は、本明細書に記載される任意の担体、希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを意味するために用いられる。

懸濁剤の例としては、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、及びトラガカント、またはこれらの物質の混合物が挙げられる。

微生物の作用の予防は、種々の抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって確保することができる。

等張剤、例えば糖、塩化ナトリウムなどを含むことが望ましい場合もある。

吸収を遅延させる剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを用いることによって、注射用剤形の吸収を長期化させることができる。

好適な担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例としては、水、エタノール、ポリオール、それらの適宜の混合物、植物油（オリーブ油など）、及びオレイン酸エチルなどの注射用有機エステルが挙げられる。

賦形剤の例としては、ラクトース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、及びリン酸二カルシウムが挙げられる。

崩壊剤の例としては、デンプン、アルギン酸、及び特定の複合シリケートが挙げられる。

潤滑剤の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルク、ならびに高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。

本発明の別の態様は対象におけるがんの治療方法に関する。この方法は、以下の構造を有する式（Ｉ）

の化合物またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、酸化物、もしくは溶媒和物を対象に投与するステップを含み、式中、Ｒ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、Ｒ^１１、Ｒ^１２、及びＲ^１３は本明細書に定義されるとおりである。

対象への化合物及び／または医薬組成物の投与は、治療有効量を投与することを含んでいてもよく、治療有効量とは、対象における明示した疾病及び／または障害を治療するのに有効な化合物の量を意味する。かかる量は一般に、十分当業者の領域内である多数の因子によって変化する。これらの因子としては、限定はされないが、特定の対象、ならびに当該対象の年齢、体重、身長、全般的な健康状態、及び病歴、用いる特定の化合物、ならびに、当該化合物が該担体中で製剤される担体、及び当該化合物に対して選択される投与経路、ならびに治療を受けている疾病の性質及び重篤度が挙げられる。

投与は一般的に、薬学的に許容される剤形を投与することを含み、該薬学的に許容される剤形は本明細書に記載の化合物の剤形を意味し、該剤形としては、例えば、錠剤、糖衣錠、散剤、エリキシル剤、シロップ剤、懸濁液剤を含む液体製剤、噴霧剤、吸入剤錠剤、トローチ剤、乳剤、溶液剤、顆粒剤、カプセル剤、及び坐剤、ならびにリポソーム製剤を含む注射用液体製剤が挙げられる。技法及び製剤は、概括的にＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，最新版に記載され、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される。

投与は、経口投与、局所投与、経皮投与、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、鼻腔内注入、腔内もしくは膀胱内注入、眼内投与、動脈内投与、病巣内投与、または粘膜への適用によって行われてもよい。化合物は単独でまたは適宜の医薬担体と共に投与されてもよく、錠剤、カプセル剤、散剤、溶液剤、懸濁液剤、もしくは乳剤などの固体または液体形態であってよい。

本発明のこの態様を実施する際に、治療を受けるのに適した対象としては、ヒトなどの哺乳動物が挙げられる。

本発明の治療方法に適したがんとしては、限定はされないが、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質がん（ＡｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌＣａｒｃｉｎｏｍａ）、副腎皮質がん（ＡｄｒｅｎａｌＣｏｒｔｅｘＣａｎｃｅｒ）、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、基底細胞がん、肝外胆管がん、膀胱がん、骨がん、脳腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、心（心臓）腫瘍、子宮頸がん、胆管細胞がん、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性腫瘍、大腸がん、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、非浸潤性乳管がん（ＤＣＩＳ）、子宮内膜がん、上衣腫、食道がん、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、眼球内黒色腫、網膜芽細胞腫、骨悪性線維性組織球腫、骨肉腫、胆嚢がん、胃がん（Ｇａｓｔｒｉｃ（Ｓｔｏｍａｃｈ）Ｃａｎｃｅｒ）、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、妊娠性絨毛性疾患、神経膠腫、有毛細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、ランゲルハンス細胞組織球症、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼球内黒色腫、カポジ肉腫、腎がん、ランゲルハンス細胞組織球症、白血病、肺がん、リンパ腫、甲状腺髄様がん、黒色腫、眼球内（眼）黒色腫、メルケル細胞がん、悪性中皮腫、原発不明転移性扁平上皮性頸部がん、多発性内分泌腫瘍症候群、多発骨髄腫／形質細胞腫瘍、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、及び慢性骨髄増殖性腫瘍、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、上咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、口唇及び口腔がん、中咽頭がん、卵巣がん、膵臓がん及び膵臓神経内分泌腫瘍（膵島細胞腫）、乳頭腫、傍神経節腫、副鼻腔がん及び鼻腔がん、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍／多発骨髄腫、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞（腎）がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、セザリー症候群、小細胞肺がん、小腸がん、軟部組織肉腫、扁平上皮がん、扁平上皮性頸部がん、胃がん（Ｓｔｏｍａｃｈ（Ｇａｓｔｒｉｃ）Ｃａｎｃｅｒ）、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、喉頭がん、胸腺腫及び胸腺がん、甲状腺がん、腎盂及び尿管の移行上皮がん、尿道がん、子宮がん、子宮内膜及び子宮肉腫、膣がん、外陰部がん、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。

本発明のこの態様の特定の一実施形態において、本治療方法は甲状腺がん、肝臓及び腎細胞がん、または大腸がんを治療するために実施される。

実施例１ − 一般的な化学的方法
全ての溶媒はＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、受け入れた状態のまま使用した。化学反応には無水溶媒を使用し、水系での後処理、再結晶、及びクロマトグラフィーにはＨＰＬＣグレードの溶媒を使用した。水素化反応に用いる固体担体担持パラジウム金属は、５０％ｗ／ｗの水が添加された（Ｄｅｇｕｓｓａ型）、（乾燥ベースで）活性炭１０％ｗ／ｗ担持物としてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、手順においては「活性炭５％ｗ／ｗ担持物」と表記した。他の試薬は様々な供給元から購入し、受け入れた状態のまま使用した。反応は、標準的なダブルマニホールド及び注射器技法を用いて、個々の手順に記載したようにして実施した。ガラス器具は使用前に１３０℃のオーブン中で１２時間加熱することによって乾燥するか、または火炎乾燥した。水溶液のｐＨはｐＨ試験紙を用いて見積もった。真空ろ過は施設に設置の真空ライン（約１００トール）を用いて実施した。個々の手順において、語句「真空下での濃縮」及び「濃縮乾固した」とは、（自動真空度調整器を備えた）ダイヤフラムポンプを用い、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去し、残存する微量の揮発分を高真空（＜１トール）オイルポンプで除去したことを意味する。別段の明示がない限り、用語「フラスコ」とは丸底型をいう。反応を、ＥＭＤシリカゲル６０Ｆ２５４（２５０μｍ）のガラスで裏打ちされたプレートを用いたＴＬＣ（ＵＶ蛍光の消光によって可視化し、塩基性ＫＭｎＯ_４溶液で染色）によって、及び液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析（ＬＣ−ＭＳ）によって監視した。逆相ＬＣ−ＭＳによる分析は、ＷａｔｅｒｓＡｑｕｉｔｙＩ−ＣｌａｓｓＵＰＬＣシステム上で、Ｃ１８カラム（２．１×３０ｍｍ；１．７μｍ粒径）を用い、５０℃に加熱し、溶離速度０．６ｍＬ／分で、水／アセトニトリル（それぞれに０．１％ｖ／ｖのギ酸を添加）からなる移動相による３分間の直線勾配法、すなわち、９５：５→１：９９（０〜２．５分）、次いで１：９９（２．５〜３分）を用いて実施した。試料分析を、交互のポジティブ／ネガティブエレクトロスプレーイオン化（５０〜１０００ａｍｕ）及び２５４ｎｍでのＵＶ検出を用いて監視した。ろ過またはフラッシュクロマトグラフィー用のプラグ、パッド、及びカラムの寸法は、（（直径×長さ）ｃｍ）として記載する。ろ過及びマイクロスケールフラッシュクロマトグラフィーに用いた５^３／_４インチピペット（４ｍＬ）は、ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入した（製品番号２２−３７８−８９３）。自動分取順相及び逆相クロマトグラフィーは、ダイオードアレイ検出器（分析を２２０〜４００ｎｍで監視）を備えたＩｎｔｅｒｃｈｉｍＰｕｒｉＦｌａｓｈ４５０精製システムを用いて実施した。予め充填されたシリカゲルカートリッジ（１２、２５、及び４０ｇ；粒径１５μｍ）を順相（シリカゲル）クロマトグラフィーに用い、２０〜３０ｍＬ／分で溶離させた。逆相クロマトグラフィーにはＣ１８カラム（３０×１５０ｍｍ；５μｍ粒径）を用い、５０バールの圧力制限による１５〜２０ｍＬ／分で溶出させた。炭素デカップリング^１ＨＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ分光計上、４００ＭＨｚで記録し、内部標準として残留溶媒シグナル（ジメチルスルホキシド−ｄ６＝２．５０ｐｐｍ）を用いてｐｐｍ単位で報告する。データは以下、すなわち、｛（シフト），［（ｓ＝シングレット、ｄ＝ダブレット、ｄｄ＝ダブレットのダブレット、ｄｄｄ＝ダブレットのダブレットのダブレット、ｔ＝トリプレット、ｄｔ＝トリプレットのダブレット、ｑ＝カルテット、ｍ＝マルチプレット、ｂｒ＝ブロード、ａｐ＝見掛け），（Ｊ＝Ｈｚ単位での結合定数），（積分値）］｝のように報告する。プロトンデカップリング^１３ＣＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ分光計上、１００ＭＨｚで記録し、内部標準として残留溶媒シグナル（ジメチルスルホキシド−ｄ６＝３９．５ｐｐｍ）を用いてｐｐｍ単位で報告する。プロトンデカップリング^１９ＦＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ分光計上、３７６ＭＨｚで記録し、内部標準として添加したＣＦＣｌ_３（０．００ｐｐｍ）を用いてｐｐｍ単位で報告する。１つのシグナルのみを有する化合物は、既知量の上記内部標準との対比で積分した。

実施例２ − ４−クロロ−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＨＢ）の調製

火炎乾燥し、Ａｒ下で冷却した２５０ｍＬのフラスコに、４−クロロピコリン酸（１０．０ｇ、６３．５ｍｍｏｌ）、及びＴＨＦ（１２５ｍＬ）を投入した。この混合物を０℃に冷却し、塩化オキサリル（６．７０ｍＬ、７９．２ｍｍｏｌ）を注射器で５分間かけて滴下により添加した後、ＤＭＦ（０．１ｍＬ）を注射器で一気に加えた（注意：ガスが急激に発生）。３０分後にこの反応混合物を室温まで自然に加温し、Ａｒ入り風船下で１５時間撹拌した。得られた褐色溶液をロータリーエバポレーターで濃縮し、ＫＯＨペレットを充填した乾燥管を用いて残留ＨＣｌを捕捉した。残留した油状物をトルエン（３×１０ｍＬ）から濃縮乾固し、次いで高真空下で更に乾燥させて固体を得た。この粗４−クロロピコリノイルクロリド塩酸塩をＡｒ下に置き、ＴＨＦ（５０ｍＬ）を加えた。この暗色溶液を０℃に冷却し、メチルアミン（１６０ｍＬ、２．０ＭＴＨＦ溶液、３２０ｍｍｏｌ）を注射器で２０分間かけて滴下により添加した。５分後にこの反応混合物を室温まで自然に加温し、１６時間撹拌した。この反応混合物を水（２００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、水（１００ｍＬ）及び飽和食塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して、約１１ｇの赤褐色油状物を得、これを、３０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の３０倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇカートリッジ）によって精製した。適切な画分をプールし、濃縮乾固した。残留した無色透明な油状物（約１０ｇ）をヘキサン／ＣＨ_２Ｃｌ_２（４：１；１５０ｍＬ）の混合物に溶解し、−２０℃で１２時間静置した。生成した沈殿を真空ろ過により単離し、ヘキサン（２×３０ｍＬ）で洗浄し、風乾して８．９０ｇ（８２％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例３ − ４−（４−アミノフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＨＢ／Ｓ１）の調製

１００ｍＬの二口フラスコ（注入口アダプター及びセプタムを備えた）を真空下で火炎乾燥し、Ａｒ下で冷却した。このフラスコに４−アミノフェノール（２．０９ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３０ｍＬ）を投入した。この溶液に撹拌下でカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２．１４ｇ、１９．１ｍｍｏｌ）を１分間かけて少しずつ添加した。得られた淡褐色の混合物を２時間撹拌し、次いで４−クロロ−Ｎ−メチルピコリンアミド（２．１７ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）を一度に添加し、この反応混合物をＡｒ入り風船下、８０℃で４時間加熱した。この反応混合物を室温まで放冷し、次いで撹拌下の氷水（１００ｍＬ）に注ぎ込んだ。撹拌を１５分間継続し、次いでこの混合物をＥｔＯＡｃ（１×１００ｍＬ及び２×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、１ＭＫＯＨ（３×５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、及び飽和食塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して３．２３ｇの橙色油状物を得、これを、３０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の３５倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇカートリッジ）によって精製した。２．６９ｇ（８７％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例４ − ４−（４−アミノ−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＨＢ／Ｓ２）の調製

オーブン乾燥した１００ｍＬの二口フラスコ（注入口アダプター及びセプタムを備えた）にＡｒ下で、４−アミノ−３−フルオロフェノール（１．１２ｇ、８．８１ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（１８ｍＬ）を投入した。撹拌下のこの溶液にカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（９７８ｍｇ、８．７２ｍｍｏｌ）を２分間かけて少しずつ添加した。得られた暗紫色の混合物を３時間撹拌し、次いで４−クロロ−Ｎ−メチルピコリンアミド（１．０６ｇ、６．２１ｍｍｏｌ）を一度に添加し、この反応混合物をＡｒ入り風船下、９０℃で１０時間加熱した。この反応混合物を室温まで放冷し、次いで撹拌下の氷水（５０ｍＬ）に注ぎ込んだ。撹拌を１５分間継続し、次いでこの混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、１ＭＫＯＨ（３×５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、及び飽和食塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して褐色固体を得、これを、３０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の３８倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇカートリッジ）によって精製した。８８２ｍｇ（５４％）の標記化合物を淡褐色固体として得た。

実施例５ − ４−（（４−アミノナフタレン−１−イル）オキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＨＢ／Ｓ３）の調製

オーブン乾燥した１００ｍＬの二口フラスコ（注入口アダプター及びセプタムを備えた）にＡｒ下で、４−アミノナフタレン−１−オール塩酸塩（１．３３ｇ、６．８０ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（８ｍＬ）を投入した。撹拌下のこの溶液にカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．５２ｇ、１３．５ｍｍｏｌ）を２分間かけて少しずつ添加した。得られた暗紫色の混合物を３時間撹拌し、次いで４−クロロ−Ｎ−メチルピコリンアミド（６４０ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を一度に添加し、この反応混合物をＡｒ入り風船下、８０℃で３時間加熱した。この反応混合物を室温まで放冷し、次いで撹拌下の氷水（５０ｍＬ）に注ぎ込んだ。撹拌を１５分間継続し、次いでこの混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、１ＭＫＯＨ（３×５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、及び飽和食塩水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して褐色の半固体を得、これを、３０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の３８倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（４０ｇカートリッジ）によって精製した。得られた固体をＥｔＯＡｃで粉体化し、真空ろ過により単離し、集取した固体をＥｔＯＡｃ（×１）及びヘキサン（×２）で洗浄し、次いで風乾した。６４０ｍｇ（５８％）の標記化合物を明褐色固体として得た。

実施例６ − イソシアナートを用いた尿素リンカー（Ｌ１）ソラフェログの合成の一般的手法

火炎乾燥したバイアル中、Ａｒ下で、撹拌下のＨＢ／ＳＸ（Ｘ＝１〜３）及びＣＨ_２Ｃｌ_２の溶液（０．１〜０．５Ｍ）に、上記イソシアナート（ニートでまたはＣＨ_２Ｃｌ_２溶液として）を注射器で１〜３分間かけて滴下により添加した。この反応混合物の上部のヘッドスペースをＡｒで覆い、バイアルをねじ込み蓋で密封し（テフロンテープで包み）、この反応混合物を、ＭｅＯＨで希釈した反応混合物アリコートのＬＣ−ＭＳ分析によって完結したと判断されるまで撹拌した。生成物は一般的には溶液から沈殿し、これを真空ろ過により単離し、集取した固体をＣＨ_２Ｃｌ_２（×２）及びヘキサン（×２）で洗浄し、次いで風乾し、最後に高真空下で乾燥した。この合成計画によって調製したソラフェログに関する具体的な反応の詳細及び特性決定データを以下に記載する。

実施例７ − Ｎ−メチル−４−（４−（３−フェニルウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ１／Ｃ１（ＡＰＳ３−２））の調製

８ｍＬのバイアル中、イソシアナトベンゼン（３０．０μＬ、０．２７６ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（６５．０ｍｇ、０．２６７ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（０．６ｍＬ）溶液から合成した。１８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。８５．４ｍｇ（８８％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例８ − Ｎ−メチル−４−（４−（３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ１／Ｃ２（ＬＳ１−１１−２））の調製

４ｍＬのバイアル中、１−イソシアナト−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン（２１．２μＬ、０．１５４ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（３６．８ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）溶液から合成した。２４時間撹拌し、真空ろ過により生成物を単離した。５３．４ｍｇ（８４％）の標記化合物を白色粉末として得た。

実施例９ − Ｎ−メチル−４−（４−（３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ１／Ｃ３（ソラフェニブ））の調製

２０ｍＬのバイアル中のＨＢ／Ｓ１（５００ｍｇ、２．０６ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）の溶液に、１−クロロ−４−イソシアナト−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（４６３ｍｇ、２．０９ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（５ｍＬ）の溶液を添加した。２４時間撹拌し、生成物を真空ろ過により単離した。８８９ｍｇ（９３％）の標記化合物を白色粉末として得た（Ｂａｎｋｓｔｏｎｅｔａｌ．， “ＡＳｃａｌａｂｌｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＢＡＹ４３−９００６：ＡＰｏｔｅｎｔＲａｆＫｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｆｏｒｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＣａｎｃｅｒ，” Ｏｒｇ．ＰｒｏｃｅｓｓＲｅｓ．Ｄｅｖ．６：７７７−７８１（２００２）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。

実施例１０ − ４−（４−（３−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ１／Ｃ４（ＬＳ１−１５））の調製

２０ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−２−イソシアナト−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（７２０μＬ、４．９８ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（１．０９ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１６ｍＬ）溶液から合成した。７２時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１．９２ｇ（９６％）の標記化合物を白色粉末として得た。

実施例１１ − ４−（３−フルオロ−４−（３−フェニルウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド）（Ｓ２／Ｌ１／Ｃ１（ＡＰＳ６−１８））の調製

８ｍＬのバイアル中、イソシアナトベンゼン（５０．０μＬ、０．４６０ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（１００ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。２４時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１１５ｍｇ（７９％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例１２ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ１／Ｃ２（ＡＰＳ４−４−２））の調製

８ｍＬのバイアル中、１−イソシアナト−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン（４５．０μＬ、０．３２７ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（７８．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。２４時間撹拌し、真空ろ過により単離した。５７．４ｍｇ（４３％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例１３ − ４−（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ１／Ｃ３（レゴラフェニブ））の調製

８ｍＬのバイアル中のＨＢ／Ｓ２（４５０ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５ｍＬ）の溶液に、１−クロロ−４−イソシアナト−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（３８４ｍｇ、１．７３ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（２．５ｍＬ）の溶液を添加した。２４時間撹拌し、真空ろ過により生成物を単離した。７２０ｍｇ（８７％）の標記化合物を白色粉末として得た。

実施例１４ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ１／Ｃ４（ＡＰＳ３−６９−１））の調製

４ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−２−イソシアナト−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（３１．０μＬ、０．２１４ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（５２．３ｇ、０．２００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。１８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。８２．６ｍｇ（８８％）の標記化合物を白色粉末として得た。

実施例１５ − Ｎ−メチル−４−（（４−（３−フェニルウレイド）ナフタレン−１−イル）オキシ）ピコリンアミド（Ｓ３／Ｌ１／Ｃ１（ＡＰＳ４−６１−４））の調製

８ｍＬのバイアル中、イソシアナトベンゼン（４５．０μＬ、０．４１４ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ３（１００ｍｇ、０．３４１ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）溶液から合成した。７２時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１３５ｍｇ（９６％）の標記化合物を淡紫色固体として得た。

実施例１６ − Ｎ−メチル−４−（（４−（３−（３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ナフタレン−１−イル）オキシ）ピコリンアミド（Ｓ３／Ｌ１／Ｃ２（ＡＰＳ４−６１−３））の調製

８ｍＬのバイアル中、１−イソシアナト−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン（５５．０μＬ、０．３９９ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ３（１００ｍｇ、０．３４１ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）溶液から合成した。７２時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１３３ｍｇ（７８％）の標記化合物を淡桃色固体として得た。

実施例１７ − ４−（（４−（３−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ナフタレン−１−イル）オキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ３／Ｌ１／Ｃ３（ＡＰＳ４−６１−１））の調製

８ｍＬのバイアル中のＨＢ／Ｓ３（１００ｍｇ、０．３４１ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、１−クロロ−４−イソシアナト−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（８３．１ｍｇ、０．３７５ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液を添加した。７２時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１３６ｍｇ（７７％）の標記化合物を淡桃色固体として得た。

実施例１８ − ４−（（４−（３−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）ナフタレン−１−イル）オキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ３／Ｌ１／Ｃ４（ＡＰＳ４−６１−２））の調製

８ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−２−イソシアナト−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（５５．０μＬ、０．３８０ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ３（１００ｍｇ、０．３４１ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）溶液から合成した。７２時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１３９ｍｇ（８５％）の標記化合物を淡紫色固体として得た。

実施例１９ − ４−（４−（３−（４−クロロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド２，２，２−トリフルオロアセテート（ＬＳ１−１４）の調製

４ｍＬのバイアル中のＨＢ／Ｓ１（３６．８ｍｇ、０．１５１ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．３ｍＬ）の溶液に、１−クロロ−４−イソシアナトベンゼン（２３．７ｍｇ、０．１５４ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．３ｍＬ）の溶液を添加した。１４時間撹拌し、沈殿を真空ろ過により単離した。わずかに不純物を含む白色固体を、２０ｍＬ／分で溶離し、２０分間にわたるＨ_２Ｏ（０．１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）／ＭｅＣＮ：８０：２０→５：９５の直線勾配を用いた逆相クロマトグラフィーにより精製した。５７．４（７４％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例２０ − ４−（４−（３−（２，５−ジフルオロフェニル）ウレイド）−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ３−６９−２）の調製

８ｍＬのバイアル中、１，４−ジフルオロ−２−イソシアナトベンゼン（２５．０μＬ、０．２１３ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（５２．３ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。２４時間撹拌し、真空ろ過により単離した。７５．２ｍｇ（９０％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例２１ − ４−（４−（３−（２，６−ジフルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−３−１）の調製

８ｍＬのバイアル中のＨＢ／Ｓ１（７３．０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．８ｍＬ）の溶液に、１，３−ジフルオロ−２−イソシアナトベンゼン（５０．０ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．３ｍＬ）の溶液を添加した。４８時間撹拌し、沈殿を真空ろ過により単離した。１１１ｍｇ（９３％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例２２ − ４−（４−（３−（２，６−ジフルオロフェニル）ウレイド）−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−３−２）の調製

８ｍＬのバイアル中のＨＢ／Ｓ２（７８．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．８ｍＬ）の溶液に、１，３−ジフルオロ−２−イソシアナトベンゼン（５０．０ｍｇ、０．３２２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．３ｍＬ）の溶液を添加した。４８時間撹拌し、沈殿を真空ろ過により単離した。１１４ｍｇ（９１％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例２３ − ４−（４−（３−（２，５−ジフルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−４−１）の調製

８ｍＬのバイアル中、１，４−ジフルオロ−２−イソシアナトベンゼン（３８．０μＬ、０．３２４ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（７３．０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）ＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。２４時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１１３ｍｇ（９４％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例２４ − ４−（４−（３−（２−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−１）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−２−イソシアナトベンゼン（４０．０μＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（７３．０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１１０ｍｇ（９６％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例２５ − ４−（４−（３−（３−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）―Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−２）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−３−イソシアナトベンゼン（４１．０μＬ、０．３５９ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（７３．０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１１１ｍｇ（９７％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例２６ − ４−（４−（３−（４−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−３）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−４−イソシアナトベンゼン（４１．０μＬ、０．３５９ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（７３．０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１０９ｍｇ（９６％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例２７ − Ｎ−メチル−４−（４−（３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−４）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−イソシアナト−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（５１．０μＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（７３．０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１２３ｍｇ（９５％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例２８ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（２−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−５）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−２−イソシアナトベンゼン（４０．０μＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（７８．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１０８ｍｇ（９０％）の標記化合物を灰白色の固体として得た。

実施例２９ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（３−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−６）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−３−イソシアナトベンゼン（４１．０μＬ、０．３５９ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（７８．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１１０ｍｇ（９２％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例３０ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（４−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−７）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−フルオロ−４−イソシアナトベンゼン（４１．０μＬ、０．３５９ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（７８．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、沈殿を真空ろ過により単離した。わずかに不純物を含む固体をＥｔＯＡｃ／ＥｔＯＨ／ヘキサンの混合物（１：１：１、約２ｍＬ）から再結晶した。７１．５ｍｇ（６０％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例３１ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（４−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−９−８）の調製

８ｍＬのバイアル中、１−イソシアナト−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（５１．０μＬ、０．３５７ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ２（７８．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）溶液から合成した。４８時間撹拌し、真空ろ過により単離した。１１７ｍｇ（８７％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例３２ − ４−（４−（３−（４−クロロフェニル）ウレイド）−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−３２）の調製

８ｍＬのバイアル中のＨＢ／Ｓ２（１００ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、１−クロロ−４−イソシアナトベンゼン（８２．３ｍｇ、０．５３６ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液を添加した。２４時間撹拌し、沈殿を真空ろ過により単離した。１５５ｍｇ（９７％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例３３ − ４−（４−（３−（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−７０−１）の調製

４ｍＬのバイアル中、１−クロロ−２−イソシアナト−４−（トリフルオロメチル）ベンゼン（２７．０μＬ、０．１８０ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（３６．５ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（０．６ｍＬ）溶液から合成した。１４時間撹拌し、真空ろ過により単離した。５４．５ｍｇ（７８％）の標記化合物を白色粉末として得た。

実施例３４ − ４−（４−（３−（３−クロロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−７０−２）の調製

４ｍＬのバイアル中、１−クロロ−３−イソシアナトベンゼン（２２．０μＬ、０．１８１ｍｍｏｌ）及びＨＢ／Ｓ１（３６．５ｍｇ、０．１５０ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（０．６ｍＬ）溶液から合成した。１４時間撹拌した後、Ｅｔ_２Ｏ（３ｍＬ）で希釈した。生じた沈殿を真空ろ過により単離し、ヘキサンで洗浄した。５０．７ｍｇ（８５％）の標記化合物を白色粉末として得た。

実施例３５ − アニリン及びＮ，Ｎ−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を用いる尿素リンカー（Ｌ１）ソラフェログの合成の一般的手法

火炎乾燥したバイアル（ｓｅｐｃａｐを備えた）中、Ａｒ下で、０℃のＣＤＩ（０．２〜１．０Ｍ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２の溶液に、上記アニリン（ニートでまたはＣＨ_２Ｃｌ_２溶液として）を注射器で１０分間かけて滴下により添加した。２−置換アニリンについては１５分後に冷浴を外した一方、他のアニリン（２−置換基をもたない）については、反応混合物を、冷浴の氷が融解するのに伴って、自然に室温まで徐々に加温した（一般的には２〜３時間）。上記アシルイミダゾール中間体の形成が完結するまで反応混合物を撹拌し、反応混合物アリコートをＭｅＯＨ中でクエンチし、当該アニリンの当該カルバミン酸メチルへの転化を観測することによって進行を監視した。１２〜２４時間後に固体のＨＢ／ＳＸ（Ｘ＝１〜２）を一度に添加し、この反応混合物をＡｒ下で更に１〜２４時間撹拌した。一部の反応においては、生成物が溶液から沈殿し、これを真空ろ過により単離し、集取した固体をＣＨ_２Ｃｌ_２（×２）及びヘキサン（×２）で洗浄し、風乾した。生成物が溶液から沈殿しなかった場合は、粗反応混合物をクロマトグラフィーにより直接精製した。全ての生成物を高真空下で≧２４時間乾燥した。

実施例３６ − ４−（４−（３−（４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−３４−１）の調製

４ｍＬのバイアル中のＣＤＩ（５１．６ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）に、４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）アニリン（３９．０μＬ、０．３０３ｍｍｏｌ）をニートで添加した。１０分後にこの反応混合物を自然に室温まで加温し、１６時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（７３．８ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を１２時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２７倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇカートリッジ）によって精製した。１０５ｍｇ（７７％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例３７ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−３４−２）の調製

４ｍＬのバイアル中のＣＤＩ（５１．６ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）に、４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）アニリン（３９．０μＬ、０．３０３ｍｍｏｌ）をニートで添加した。１０分後にこの反応混合物を室温まで自然に加温し、１６時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ２（７９．１ｍｇ、０．３０３ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を１２時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２７倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇカートリッジ）によって精製した。８４．６ｍｇ（６０％）の標記化合物を白色固形物として得た。

実施例３８ − ４−（４−（３−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−３５−１）の調製

４ｍＬのバイアル中のＣＤＩ（５１．０ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１．０ｍＬ）に、２−フルオロ−５−メチルアニリン（３４．０μＬ、０．３０１ｍｍｏｌ）をニートで添加した。１０分後にこの反応混合物を室温まで自然に加温し、１６時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（７３．０ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を１２時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２７倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。７３．５ｍｇ（６２％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例３９ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（２−フルオロ−５−メチルフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−３５−２）の調製

４ｍＬのバイアル中のＣＤＩ（５１．０ｍｇ、０．３１５ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１．０ｍＬ）に、２−フルオロ−５−メチルアニリン（３４．０μＬ、０．３０１ｍｍｏｌ）をニートで添加した。１０分後にこの反応混合物を室温まで自然に加温し、１６時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ２（７８．４ｍｇ、０．３００ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を１２時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２７倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。６８．２ｍｇ（５５％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例４０ − ４−（４−（３−（５−（ジフルオロメチル）−２−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ４−５４）の調製

８ｍＬのバイアル中の０℃のＣＤＩ（１０６ｍｇ、０．６５４ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液に、５−（ジフルオロメチル）−２−フルオロアニリン（ＡＰＳ４−５３；１００ｍｇ、０．６２１ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液を添加した。１０分後にこの反応混合物を室温まで自然に加温し、２２時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（１５１ｍｇ、０．６２１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を１４時間継続した。生成物が沈殿し、これを真空ろ過により単離した。１９９ｍｇ（７５％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例４１ − ４−フルオロ−３−ニトロベンズアルデヒド（ＡＰＳ４−４８）の調製

５０ｍＬのフラスコに４−フルオロベンズアルデヒド（２．２０ｍＬ、２０．５ｍｍｏｌ）及び濃硫酸（１０ｍＬ）を投入した。この溶液を０℃に冷却し、発煙硝酸（１．１０ｍＬ、９０％ｗ／ｗ水溶液、２３．３ｍｍｏｌ）をピペットで５分間かけて滴下により添加した。この反応混合物を２．５時間撹拌し、氷浴の氷が融解するのに伴って自然に加温した。この反応混合物を素早く撹拌下の氷水（１５０ｍＬ）に注ぎ込み、更に１５分間撹拌した。生じた沈殿を真空ろ過により集取し、この集取した固体を水（２×１０ｍＬ）で洗浄した。風乾して、１．８４ｇ（５３％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例４２ − ４−（ジフルオロメチル）−１−フルオロ−２−ニトロベンゼン（ＡＰＳ４−５０）の調製

火炎乾燥しＡｒ下で冷却した５０ｍＬのフラスコに、４−フルオロ−３−ニトロベンズアルデヒド（ＡＰＳ４−４８；７１５ｍｇ、４．２３ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）を投入した。この溶液を−７８℃に冷却し、（ジエチルアミノ）三フッ化硫黄（ＤＡＳＴ；１．１２ｍＬ、８．４８ｍｍｏｌ）を注射器で３分間かけて滴下により添加した。得られた明黄色の不均一な反応混合物を−７８℃で３時間撹拌したところ、この間にこの反応混合物は均一且つ淡赤色となった。冷浴を外し、この溶液を室温まで自然に加温した。この反応混合物を室温で１６時間撹拌し、次いで水（１０ｍＬ）でクエンチした。水層のｐＨを飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で約７に調整し、この混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して７９０ｍｇの橙色油状物を得、これを、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の１８倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。６０８ｍｇ（７５％）の標記化合物を黄色油状物として得た。

実施例４３ − ５−（ジフルオロメチル）−２−フルオロアニリン（ＡＰＳ４−５３）の調製

５０ｍＬのフラスコに、４−（ジフルオロメチル）−１−フルオロ−２−ニトロベンゼン（５９７ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）、及び鉄粉（８７１ｍｇ、１５．６ｍｍｏｌ）を逐次投入した。この混合物を室温で撹拌し、ＨＣｌ水溶液（８．０ｍＬ、４．０Ｍ水溶液、３２ｍｍｏｌ）を１〜２分間かけて滴下により添加した。１時間後に、この反応混合物を未反応の鉄からデカントし、残った溶液をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で希釈した。水相のｐＨを６ＮＮａＯＨ（約５．３ｍＬ）で約７に調整し、次いでこの混合物を分液ロートに移し、層を分離し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して黄色油状物を得、これを、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２０倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。２５７ｍｇ（５１％）の標記化合物を無色透明油状物として得た。

実施例４４ − Ｎ−メチル−４−（４−（３−（３−（ペルフルオロエチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）ピコリンアミド（ＡＰＳ５−１６−１）の調製

８ｍＬのバイアル中の０℃のＣＤＩ（１２２ｍｇ、０．７５２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１．５ｍＬ）の溶液に、３−（ペルフルオロエチル）アニリン（ＡＰＳ５−９；１５８ｍｇ、０．７４８ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）の溶液を添加した。この反応混合物を２時間かけて室温まで自然に加温し、２０時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（１７３ｍｇ、０．７１１ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を８時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２４倍の容量にわたるＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。２０３ｍｇ（５９％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例４５ − １−ニトロ−３−（ペルフルオロエチル）ベンゼン（ＡＰＳ５−４）の調製

合成は公知の手法（Ｓｅｒｉｚａｗａｅｔａｌ．， “ＤｉｒｅｃｔＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＰｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌＣｏｐｐｅｒＦｒｏｍＰｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅａｓａｎＥｃｏｎｏｍｉｃａｌＣ_２Ｆ_５Ｓｏｕｒｃｅ：ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏＰｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆＡｒｙｌｂｏｒｏｎｉｃＡｃｉｄｓａｎｄＡｒｙｌＢｒｏｍｉｄｅｓ，” Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１６：３４５６−３４５９（２０１４）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）に従って実施した。２５ｍＬのシュレンクフラスコ（１０ｍＬの固体添加用ロートを備える）を真空下で火炎乾燥し、Ａｒ下で冷却した。このフラスコに塩化銅（Ｉ）（４２４ｍｇ、４．２８ｍｍｏｌ；Ａｒパージしたグローブバッグ中で移動）及びＤＭＦ（１５ｍＬ）を投入した。ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８２４ｍｇ、８．５７ｍｍｏｌ；Ａｒパージしたグローブバッグ中で移動）を上記添加用ロートによって１０分間かけて少しずつ添加した。上記添加用ロートをセプタムに換装した後、この混合物を室温で２時間撹拌し、次いで５０℃に加熱しながら、２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロパン酸エチル（６３５μＬ、４．２９ｍｍｏｌ）を注射器で２分間かけて滴下により添加した。この反応混合物を５０℃で３時間撹拌し、次いで０℃に冷却した。三水酸化フッ化トリエチルアミン（２６５μＬ、１．６３ｍｍｏｌ）を注射器で１〜２分間かけて滴下により添加したところ、ほぼ均一な溶液が得られた。０℃で５分間、次いで室温で２０分間撹拌を継続した。固体の１−ヨード−３−ニトロベンゼン（５０８ｍｇ、２．０４ｍｍｏｌ）を一度に添加し、この反応混合物をＡｒ入り風船下、８０℃で１２時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却した後に、１ＭＨＣｌ（約１０ｍＬ）をピペットで１〜２分間かけて少しずつ添加した。この混合物を水（５０ｍＬ）及びＥｔ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、次いで真空下でセライトのパッド（３×３ｃｍ）を通してろ過した。ろ過ケーキをＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）で洗浄し、１つにまとめたろ液を分析ロートに移した。層を分離し、水相をＥｔ_２Ｏ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液／濃ＮＨ_４ＯＨ溶液の６０：４０混合物（２×５０ｍＬ）、半飽和ＮａＣｌ溶液（２×５０ｍＬ）、及び飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して約５００ｍｇの橙色油状物を得、これを更に精製することなく使用した（ＡＰＳ５−９の合成を参照のこと）。

実施例４６ − ３−（ペルフルオロエチル）アニリン（ＡＰＳ５−９）の調製

上記粗１−ニトロ−３−（ペルフルオロエチル）ベンゼン（ＡＰＳ５−４、約２．０４ｍｍｏｌ；上記の反応由来）が入った１００ｍＬのフラスコに、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）及び鉄粉（５７０ｍｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を０℃に冷却し、濃ＨＣｌ（２．０ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）をピペットで１〜２分間かけて滴下により添加した。この反応混合物を３時間かけて自然に室温まで加温し、更に３時間撹拌した。この反応混合物を未反応の鉄からデカントし、水（５０ｍＬ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈し、次いで水相のｐＨを１ＭＫＯＨ（２４〜２５ｍＬ）で約７に調整した。この混合物をセライト／砂（５０：５０）のパッドを通して真空ろ過し、ろ過ケーキをＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）で洗浄した。１つにまとめたろ液を分液ロートに移し、層を分離し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×２５ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。ろ液を真空下で濃縮すると４９２ｍｇの橙色液体が残留し、これを、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２２倍の容量にわたるヘキサン／ＣＨ_２Ｃｌ_２：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。３１６ｍｇ（７３％）の標記化合物を淡黄色液体として得た。

実施例４７ − ４−（４−（３−（２−フルオロ−５−（ペルフルオロエチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ５−１６−２）の調製

８ｍＬのバイアル中の０℃のＣＤＩ（１５１ｍｇ、０．９３１ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）の溶液に、２−フルオロ−５−（ペルフルオロエチル）アニリン（ＡＰＳ５−１１；２１３ｍｇ、０．９３０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液を添加した。１０分後に、この反応混合物を室温まで自然に加温し、２０時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（２１５ｍｇ、０．８８４ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を８時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の３３倍の容量にわたるＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。２４２ｍｇ（５５％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例４８ − １−フルオロ−２−ニトロ−４−（ペルフルオロエチル）ベンゼン（ＡＰＳ５−７）の調製

合成は公知の手法（Ｓｅｒｉｚａｗａｅｔａｌ．， “ＤｉｒｅｃｔＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＰｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌＣｏｐｐｅｒ fｒｏｍＰｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｐｒｏｐｉｏｎａｔｅａｓａｎＥｃｏｎｏｍｉｃａｌＣ_２Ｆ_５Ｓｏｕｒｃｅ：ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏＰｅｎｔａｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆＡｒｙｌｂｏｒｏｎｉｃＡｃｉｄｓａｎｄＡｒｙｌＢｒｏｍｉｄｅｓ，” Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１６：３４５６−３４５９（２０１４）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）に従って実施した。２５ｍＬのシュレンクフラスコ（１０ｍＬの固体添加用ロートを備える）を真空下で火炎乾燥し、Ａｒ下で冷却した。このフラスコに塩化銅（Ｉ）（５１６ｍｇ、５．２１ｍｍｏｌ；Ａｒパージしたグローブバッグ中で移動）及びＤＭＦ（１８ｍＬ）を投入した。ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１．０１ｇ、１０．４ｍｍｏｌ；グローブバッグ中で移動）を上記添加用ロートによって１０分間かけて少しずつ添加した。上記添加用ロートをセプタムに換装した後、この混合物を室温で２．５時間撹拌し、次いで５０℃に加熱しながら、２，２，３，３，３−ペンタフルオロプロパン酸エチル（７７０μＬ、５．２１ｍｍｏｌ）を注射器で２〜３分間かけて滴下により添加した。この反応混合物を５０℃で３時間撹拌し、次いで０℃に冷却した。三水酸化フッ化トリエチルアミン（３２５μＬ、１．９９ｍｍｏｌ）を注射器で１〜２分間かけて滴下により添加したところ、ほぼ均一な溶液が得られた。０℃で５分間、次いで室温で１５分間撹拌を継続した。固体の１−フルオロ−４−ヨード−２−ニトロベンゼン（６６２ｍｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を一度に添加し、この反応混合物をＡｒ入り風船下、８０℃で１２時間加熱した。この反応混合物を室温まで冷却した後に、１ＭＨＣｌ（約１５ｍＬ）をピペットで１〜２分間かけて少しずつ添加した。この混合物を水（５０ｍＬ）及びＥｔ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、次いで真空下でセライトのパッド（３×３ｃｍ）を通してろ過した。ろ過ケーキをＥｔ_２Ｏ（２０ｍＬ）で洗浄し、１つにまとめたろ液を分析ロートに移した。層を分離し、水相をＥｔ_２Ｏ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液／濃ＮＨ_４ＯＨ溶液の６０：４０混合物（３×５０ｍＬ）、半飽和ＮａＣｌ溶液（２×５０ｍＬ）、及び飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して約６７０ｍｇの橙色油状物を得、これを更に精製することなく使用した（ＡＰＳ５−１１の合成を参照のこと）。

実施例４９ − ２−フルオロ−５−（ペルフルオロエチル）アニリン（ＡＰＳ５−１１）の調製

上記粗１−フルオロ−２−ニトロ−４−（ペルフルオロエチル）ベンゼン（ＡＰＳ５−７、約２．４８ｍｍｏｌ；上記の反応由来）の入った１００ｍＬのフラスコに、ＭｅＯＨ（４０ｍＬ）及び鉄粉（６９３ｍｇ、１２．４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を０℃に冷却し、濃ＨＣｌ（２．１ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）をピペットで１〜２分間かけて滴下により添加した。この反応混合物を３時間かけて室温まで自然に加温し、更に３時間撹拌した。この反応混合物を未反応の鉄からデカントし、水（７５ｍＬ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（７５ｍＬ）で希釈し、水相のｐＨを６ＭＮａＯＨ（約４．３ｍＬ）で約７に調整した。得られた混合物をセライト／砂（５０：５０）のパッドを通して真空ろ過し、ろ過ケーキをＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）で洗浄した。１つにまとめたろ液を分液ロートに移し、層を分離し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。ろ液を真空下で濃縮すると８４０ｍｇの橙褐色油状物が残留し、これを、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２４倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→７５：２５の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。４２６ｍｇ（７５％）の標記化合物を橙色液体として得た。

実施例５０ − ４−（４−（３−（５−クロロ−２−フルオロフェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ５−１７−１）の調製

８ｍＬのバイアル中のＣＤＩ（７０．０ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１．５ｍＬ）に、５−クロロ−２−フルオロアニリン（４６．５μＬ、０．４３１ｍｍｏｌ）をニートで添加した。この反応混合物を１０分間かけて室温まで自然に加温し、１２時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（１００ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を４時間継続した。生成物が溶液から沈殿し、これを真空ろ過により単離した。６０．０ｍｇ（３５％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例５１ − ４−（４−（３−（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド２，２，２−トリフルオロアセテート（ＡＰＳ５−１７−２）の調製

８ｍＬのバイアル中の０℃のＣＤＩ（７０．０ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、３，４−メチレンジオキシアニリン（５９．２ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液を（４５分間かけて）添加した。この反応混合物を２時間かけて室温まで自然に加温し、１２時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（１００ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を４時間継続した。この反応混合物を真空下で濃縮し、１８ｍＬ／分で溶離し、４２分間にわたるＨ_２Ｏ（０．１％ｖ／ｖのＴＦＡを含む）／ＭｅＣＮ：９５：５→０：１００の直線勾配を用いた逆相クロマトグラフィーによって精製した。４８．４ｍｇ（２３％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例５２ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（３−（ペルフルオロエチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ５−３１−３）の調製

８ｍＬのバイアル中の０℃のＣＤＩ（４０．５ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、３−（ペルフルオロエチル）アニリン（ＡＰＳ５−９；５２．７ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液を添加した。この反応混合物を２時間かけて室温まで自然に加温し、２４時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ２（５８．５ｍｇ、０．２２７ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を２４時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２４倍の容量にわたるＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。６４．０ｍｇ（５７％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例５３ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（２−フルオロ−５−（ペルフルオロエチル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ５−３１−４）の調製

８ｍＬのバイアル中の０℃のＣＤＩ（５０．３ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、２−フルオロ−５−（ペルフルオロエチル）アニリン（ＡＰＳ５−１１；７１．０ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液を添加した。１０分後に、この反応混合物を室温まで自然に加温し、２４時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ２（７３．６ｍｇ、０．２８２ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を２４時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２４倍の容量にわたるＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。４７．０ｍｇ（３２％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例５４ − ４−（４−（３−（２−フルオロ−５−（ペルフルオロプロパン−２−イル）フェニル）ウレイド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（ＡＰＳ６−４５）の調製

４ｍＬのバイアル中の０℃のＣＤＩ（７０．０ｍｇ、０．４３２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．４ｍＬ）の溶液に、２−フルオロ−５−（ペルフルオロプロパン−２−イル）アニリン（ＡＰＳ６−３９；１１５ｍｇ、０．４１２ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．６ｍＬ）の溶液を添加した。１０分後に、この反応混合物を室温まで自然に加温し、２４時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（１００ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を４時間継続した。２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の３０倍の容量にわたるＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。１４２ｍｇ（６３％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例５５ − １−フルオロ−２−ニトロ−４−（ペルフルオロプロパン−２−イル）ベンゼン（ＡＰＳ６−３６）の調製

合成は公知の手法（Ｇｕｉｎｅｔａｌ．， “ＨｉｇｈｌｙＥｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅＨｅｔｅｒｏ−Ｄｉｅｌｓ−ＡｌｄｅｒＲｅａｃｔｉｏｎｏｆ１，３−Ｂｉｓ−（ｓｉｌｙｏｘｙ）−１，３−ｄｉｅｎｅｓＷｉｔｈＡｌｄｅｈｙｄｅｓＣａｔａｌｙｚｅｄｂｙＣｈｉｒａｌＤｉｓｕｌｆｏｎｉｍｉｄｅ，” Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．５１：８８５９−８８６３（２０１２）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）に従って実施した。１−フルオロ−４−ヨード−２−ニトロベンゼン（１．２５ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）、活性化した銅粉末（１．２０ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）、及び脱水ＤＭＦ（１３ｍＬ；Ａｒを１０分間バブリングすることによって脱酸素した）の混合物に、ヘプタフルオロ−２−ヨードプロパン（１．００ｍＬ、７．０３ｍｍｏｌ）を注射器で１分間かけて添加した。この混合物をＡｒ下で撹拌し、１００℃で４８時間加熱した。この反応混合物を室温まで放冷し、次いで真空下でセライトのパッド（３×３ｃｍ）を通してろ過し、パッドをＥｔ_２Ｏ（２×２０ｍＬ）で洗浄した。１つにまとめたろ液をＥｔ_２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈し、次いで飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液／濃ＮＨ_４ＯＨ溶液の６０：４０混合物（３×３０ｍＬ）、水（２×３０ｍＬ）、及び飽和食塩水（２×３０ｍＬ）で洗浄し、脱水し（ＭｇＳＯ_４）、ろ過した。真空下で濃縮して１．３８ｇの橙色半固体を得、これを、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２５倍の容量にわたるヘキサン／ＣＨ_２Ｃｌ_２：１００：０→８０：２０の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。８６０ｍｇ（５９％）の標記化合物を無色油状物として得た。

実施例５６ − ２−フルオロ−５−（ペルフルオロプロパン−２−イル）アニリン（ＡＰＳ６−３９）の調製

５０ｍＬのフラスコに、１−フルオロ−２−ニトロ−４−（ペルフルオロプロパン−２−イル）ベンゼン（ＡＰＳ６−３６；６６５ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（１５ｍＬ）、及び鉄粉（７２０ｍｇ、１２．９ｍｍｏｌ）を投入した。この混合物を０℃に冷却し、濃ＨＣｌ（２．１ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）をピペットで５分間かけて滴下により添加した。この反応混合物を３０分間かけて室温まで自然に加温し、更に３時間撹拌した。この反応混合物をセライトのパッド（２×２ｃｍ）を通して真空ろ過して未反応の鉄粉を除去し、パッドをＭｅＯＨ（５ｍＬ）で洗浄した。１つにまとめたろ液を水（７５ｍＬ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（７５ｍＬ）で希釈し、水相のｐＨを６ＭＮａＯＨ溶液（約４．３ｍＬ）で７〜８に調整した。得られた混合物をセライト（１×４ｃｍ）の上に重層した砂（３×４ｃｍ）のパッド（４×４ｃｍの両方を合わせた大きさ）を通して真空ろ過し、ろ過ケーキをＣＨ_２Ｃｌ_２（３０ｍＬ）で洗浄した。１つにまとめたろ液を分液ロートに移し、層を分離し、水相をＣＨ_２Ｃｌ_２（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過した。このろ液を真空下で濃縮すると油状物が残留し、これを、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２５倍の容量にわたるヘキサン／ＣＨ_２Ｃｌ_２：１００：０→５０：５０の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。４７３ｍｇ（７９％）の標記化合物を無色油状物として得た。

実施例５７ − アミドリンカー（Ｌ２）ソラフェログの調製の一般的合成計画

実施例５８ − ４−（４−ベンズアミドフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ２／Ｃ１（ＡＰＳ４−６４−２））の調製

火炎乾燥した８ｍＬのバイアルに、Ａｒ下でＨＢ／Ｓ１（６０．０ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）を投入し、次いで撹拌下の上記溶液に、塩化ベンゾイル（３５．０μＬ、０．３０２ｍｍｏｌ）を１分間かけて滴下により添加した。得られた混合物にピリジン（２５．０μＬ、０．３０９ｍｍｏｌ）を添加したところ、透明な溶液が生成した。この反応混合物を１４時間撹拌し、次いでＭｅＯＨ（１ｍＬ）を添加し、撹拌を３０分間継続した。この溶液を濃縮乾固し、残留した物質を、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２４倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇカートリッジ）によって精製した。３９．６ｍｇ（４６％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例５９ − Ｎ−メチル−４−（４−（３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）フェノキシ）ピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ２／Ｃ２（ＡＰＳ４−６４−１））の調製

火炎乾燥した８ｍＬのバイアルに、Ａｒ下でＨＢ／Ｓ１（６０．０ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）を投入し、次いで撹拌下の上記溶液に、３−（トリフルオロメチル）ベンゾイルクロリド（４５．０μＬ、０．２９８ｍｍｏｌ）を１分間かけて滴下により添加した。得られた混合物にピリジン（２５．０μＬ、０．３０９ｍｍｏｌ）を添加したところ、透明な溶液が生成した。この反応混合物を１４時間撹拌し、次いでＭｅＯＨ（１ｍＬ）を添加し、撹拌を３０分間継続した。この溶液を濃縮乾固し、残留した物質を、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２４倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇカートリッジ）によって精製した。７５．８ｍｇ（７４％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例６０ − ４−（４−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ２／Ｃ３（ＬＳ１−３７））の調製

オーブン乾燥した８ｍＬのバイアルに、Ａｒ下で４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）安息香酸（１３８ｍｇ、０．６１５ｍｍｏｌ）及びＣＤＩ（１００ｍｇ、０．６１７ｍｍｏｌ）を投入し、次いで撹拌しながらＴＨＦ（１ｍＬ）を加えところ、ガスが急激に発生した。この溶液を室温で１時間撹拌し、次いで４５℃で２時間加熱した。この溶液を室温に冷却した後、ＨＢ／Ｓ１（１００ｍｇ、０．４１１ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を２時間継続した。この反応混合物をＭｅＯＨ（３ｍＬ）で希釈し、２０ｍＬ／分で溶離し、２６分間にわたるＨ_２Ｏ／ＭｅＣＮ：９０：１０→５：９５の直線勾配を用いた逆相クロマトグラフィーによって精製した。１７７ｍｇ（９６％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例６１ − ４−（４−（２−フルオロ−５（トリフルオロメチル）ベンズアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ２／Ｃ４（ＡＰＳ４−６３−１））の調製

８ｍＬのバイアル中の２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）安息香酸（７５．３ｍｇ、０．３６４ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１４０ｍｇ、０．３６８ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（７０．０μＬ、０．４０２ｍｍｏｌ）を注射器で１分間かけて滴下により添加した。この溶液を３０分間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ１（８０．０ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を１２時間継続した。この反応混合物をＮａＨＣＯ_３の飽和溶液（２０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出液をプールし、脱水し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、ろ過し、濃縮した。粗生成物を、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の１８倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（２５ｇカートリッジ）によって精製した。１３９ｍｇ（９７％）の標記化合物を黄褐色固体として得た。

実施例６２ − ４−（４−ベンズアミド−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ２／Ｃ１（ＡＰＳ６−２２−１））の調製

火炎乾燥した８ｍＬのバイアルに、Ａｒ下でＨＢ／Ｓ２（１００ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１．５ｍＬ）を投入し、次いで撹拌下の上記溶液に、塩化ベンゾイル（６５．０μＬ、０．５６０ｍｍｏｌ）を注射器で１分間かけて滴下により添加した。得られた混合物にトリエチルアミン（８０．０μＬ、０．５７４ｍｍｏｌ）を添加したところ、透明な溶液が生成した。この反応混合物を１２時間撹拌し、次いでＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、撹拌を３０分間継続した。この溶液を濃縮乾固し、残留した物質を、２５ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の３０倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇカートリッジ）によって精製した。８９．６ｍｇ（６４％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例６３ − ４−（３−フルオロ−４−（３（トリフルオロメチル）ベンズアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ２／Ｃ２（ＡＰＳ６−２２−２））の調製

火炎乾燥した８ｍＬのバイアルに、Ａｒ下でＨＢ／Ｓ２（１００ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１．５ｍＬ）を投入し、次いで撹拌下の上記溶液に、３−（トリフルオロメチル）ベンゾイルクロリド（８５．０μＬ、０．５６４ｍｍｏｌ）を１分間かけて滴下により添加した。得られた混合物にトリエチルアミン（８０．０μＬ、０．５７４ｍｍｏｌ）を添加したところ、透明な溶液が生成した。この反応混合物を１２時間撹拌し、次いでＭｅＯＨ（２ｍＬ）を添加し、撹拌を３０分間継続した。この溶液を濃縮乾固し、残留した物質を、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２４倍の容量にわたるヘキサン／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇカートリッジ）によって精製した。７２．９ｍｇ（４４％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例６４ − ４−（４−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ２／Ｃ３（ＡＰＳ４−５８））の調製

８ｍＬのバイアル中の４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）安息香酸（５２．５ｍｇ、０．２３４ｍｍｏｌ）、１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスファート（ＨＡＴＵ；８８．９ｍｇ、０．２３４ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ；４５．０μＬ、０．２５８ｍｍｏｌ）を注射器で１分間かけて滴下により添加した。この溶液を２時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ２（５５．５ｍｇ、０．２１２ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を１８時間継続した。この溶液をＭｅＯＨ（５ｍＬ）で希釈し、２０ｍＬ／分で溶離し、２５分間にわたるＨ_２Ｏ／ＭｅＣＮ：９０：１０→０：１００の直線勾配を用いた逆相クロマトグラフィーによって精製した。クロマトグラフィーから得られた生成物はわずかに不純物を含み、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）から再結晶して、５７．９ｍｇ（５８％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例６５ − ４−（３−フルオロ−４−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンズアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ２／Ｃ４（ＡＰＳ６−２１））の調製

８ｍＬのバイアル中の２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）安息香酸（９６．０ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（１７５ｍｇ、０．４６０ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（１ｍＬ）の溶液に、ＤＩＰＥＡ（８０．０μＬ、０．４５９ｍｍｏｌ）を１分間かけて滴下により添加した。この溶液を２時間撹拌し、次いでＨＢ／Ｓ２（１００ｍｇ、０．３８３ｍｍｏｌ）を一度に添加し、撹拌を１４時間継続した。この溶液をＭｅＯＨ（５ｍＬ）で希釈し、２０ｍＬ／分で溶離し、４２分間にわたるＨ_２Ｏ／ＭｅＣＮ：９０：１０→０：１００の直線勾配を用いた逆相クロマトグラフィーによって精製した。９３．０ｍｇ（５４％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例６６ − 塩化スルホニルを用いたスルホンアミドリンカーソラフェログの合成の一般的手法

火炎乾燥し、Ａｒ下で冷却した８ｍＬのバイアルに、ＨＢ／ＳＸ（Ｘ＝１〜２）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５〜１ｍＬ）を投入した。撹拌下の上記溶液に、塩化スルホニル（ニートでまたは０．５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液として）及びピリジンを逐次添加し、両者共に注射器で１分間かけて滴下により添加した。この反応混合物の上部のヘッドスペースをＡｒで覆い、バイアルをねじ込み蓋で密封し（テフロンテープで包み）、この反応混合物を２４時間撹拌した。この群の全ての反応混合物は、２０ｍＬ／分で溶離し、カラム容量の２０倍の容量にわたるＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ：１００：０→０：１００の直線勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィー（１２ｇカートリッジ）によって精製した。全ての生成物を高真空下で≧２４時間乾燥した。この合成計画によって調製したソラフェログに関する具体的な詳細及び特性決定データを以下に記載する。

実施例６７ − Ｎ−メチル−４−（４−フェニルスルホンアミド）フェノキシ）ピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ３／Ｃ１（ＡＰＳ４−６７−４））の調製

ＨＢ／Ｓ１（５０．０ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液に、ベンゼン−１−スルホニルクロリド（３２．０μＬ、０．２５１ｍｏｌ；ニート）、次いでピリジン（２５．０μＬ、０．３０９ｍｍｏｌ）を添加した。５８．１ｍｇ（７４％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例６８ − Ｎ−メチル−４−（４−（３−（トリフルオロメチル）フェニルスルホンアミド）フェノキシ）ピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ３／Ｃ２（ＡＰＳ４−６７−３））の調製

ＨＢ／Ｓ１（５０．０ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液に、３−（トリフルオロメチル）ベンゼン−１−スルホニルクロリド（４０．０μＬ、０．２５０ｍｏｌ；ニート）、次いでピリジン（２５．０μＬ、０．３０９ｍｍｏｌ）を添加した。３７．４ｍｇ（４０％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例６９ − ４−（４−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルスルホンアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ３／Ｃ３（ＡＰＳ４−６７−１））の調製

ＨＢ／Ｓ１（５０．０ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン−１−スルホニルクロリド（６９．０ｍｇ、０．２４７ｍｍｏｌ；０．５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液として）、次いでピリジン（２５．０μＬ、０．３０９ｍｍｏｌ）を添加した。８５．７ｍｇ（８６％）の標記化合物を灰白色固体として得た。

実施例７０ − ４−（４−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルスルホンアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ１／Ｌ３／Ｃ４（ＡＰＳ４−６７−２））の調製

ＨＢ／Ｓ１（５０．０ｍｇ、０．２０６ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンゼン−１−スルホニルクロリド（６５．０ｍｇ、０．２４８ｍｍｏｌ；０．５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液として）、次いでピリジン（２５．０μＬ、０．３０９ｍｍｏｌ）を添加した。５４．６ｍｇ（５６％）の標記化合物を灰白色固形物として得た。

実施例７１ − ４−（３−フルオロ−４−（フェニルスルホンアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ３／Ｃ１（ＡＰＳ４−６８−４））の調製

ＨＢ／Ｓ２（６０．０ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液に、ベンゼン−１−スルホニルクロリド（３５．０μＬ、０．２７４ｍｏｌ；ニート）、次いでピリジン（２８．０μＬ、０．３４６ｍｍｏｌ）を添加した。４４．５ｍｇ（４８％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例７２ − ４−（３−フルオロ−４−（３−（トリフルオロメチル）フェニルスルホンアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ３／Ｃ２（ＡＰＳ４−６８−３））の調製

ＨＢ／Ｓ２（６０．０ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（１ｍＬ）の溶液に、３−（トリフルオロメチル）ベンゼン−１−スルホニルクロリド（４５．０μＬ、０．２８１ｍｏｌ；ニート）、次いでピリジン（２８．０μＬ、０．３４６ｍｍｏｌ）を添加した。２３．５ｍｇ（２２％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例７３ − ４−（４−（４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルスルホンアミド）−３−フルオロフェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ３／Ｃ３（ＡＰＳ４−６８−１））の調製

ＨＢ／Ｓ２（６０．０ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）ベンゼン−１−スルホニルクロリド（７７．０ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ；０．５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液として）、次いでピリジン（２８．０μＬ、０．３４６ｍｍｏｌ）添加した。７８．４ｍｇ（６８％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例７４ − ４−（３−フルオロ−４−（２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルスルホンアミド）フェノキシ）−Ｎ−メチルピコリンアミド（Ｓ２／Ｌ３／Ｃ４（ＡＰＳ４−６８−２））の調製

ＨＢ／Ｓ２（６０．０ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）及びＣＨ_２Ｃｌ_２（０．５ｍＬ）の溶液に、２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）ベンゼン−１−スルホニルクロリド（７２．５ｍｇ、０．２７６ｍｍｏｌ；０．５ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２中の溶液として）、次いでピリジン（２８．０μＬ、０．３４６ｍｍｏｌ）を添加した。７８．４ｍｇ（７０％）の標記化合物を白色固体として得た。

実施例７５ − 材料及び方法
ハエ系統
キナーゼ変異ハエ系統及びバランサーハエ系統はＢｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＳｔｏｃｋＣｅｎｔｅｒ（ＢＤＳＣ；Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎ，ＩＮ）から入手した。Ｘ染色体上に変異キナーゼ遺伝子を有するＦＭ７ａまたはＦＭ７ｃのバランスがとれたハエを、ＦＭ７ａ−Ｔｂ−ＲＦＰのバランスがとれたハエと異系交雑し、ＣｙＯまたはＳＭ５のバランスがとれたハエをＣｙＯ−Ｔｂ−ＲＦＰバランサーと再平衡化した（Ｌａｔｔａｏｅｔａｌ．， “Ｔｕｂｂｙ−ＴａｇｇｅｄＢａｌａｎｃｅｒｓｆｏｒｔｈｅＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＸａｎｄＳｅｃｏｎｄＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ，” Ｆｌｙ５：３６９−３７０（２０１１）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。同様に、ＴＭ３またはＭＫＲＳのバランスがとれたハエをＴＭ６Ｂバランサーと再平衡化した。ｄＲｅｔの活性変異型（ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}）は、ＭＥＮ２Ｂ型患者に見られるＭ９１８Ｔ変異に相当するＭ１００７Ｔ変異を有する（Ｖｉｄａｌｅｔａｌ．， “ＺＤ６４７４ＳｕｐｐｒｅｓｓｅｓＯｎｃｏｇｅｎｉｃＲＥＴＩｓｏｆｏｒｍｓｉｎａＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＭｏｄｅｌｆｏｒＴｙｐｅ２ＭｕｌｔｉｐｌｅＥｎｄｏｃｒｉｎｅＮｅｏｐｌａｓｉａＳｙｎｄｒｏｍｅｓａｎｄＰａｐｉｌｌａｒｙＴｈｙｒｏｉｄＣａｒｃｉｎｏｍａ，” ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６５：３５３８−３５４１（２００５）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。ｐｔｃ−ｇａｌ４、ＵＡＳ−ＧＦＰ；ＵＡＳ−ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}／ＳＭ５（ｔｕｂ−ｇａｌ８０）−ＴＭ６Ｂトランスジェニックハエを標準的なプロトコールに従って調製し、薬物スクリーニング及びキノーム遺伝学的スクリーニング用に、それぞれｗ⁻及びキナーゼ変異ハエと交雑した（図６２Ａ〜Ｈ）。遺伝学的スクリーニングの結果を検証するために、プロターゲットに対する１０種類の更なる対立遺伝子を無作為に選び出して試験した。得られた結果は９種類の遺伝子についての結果と本質的に類似しており、プロターゲットを決定するための上記実験設計が完全なものであることが確認された。ハエ遺伝子のヒトオルソログをＤＩＯＰＴ（ｗｗｗ．ｆｌｙｒｎａｉ．ｏｒｇ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ＤＲＳＣ＿ｏｒｔｈｏｌｏｇｓ．ｐｌ）により予測した。

ハエアッセイ
ＦＤＡ認可薬物及びソラフェログは、ＳｅｌｌｅｃｋＣｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）、ＬＣＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｏｂｕｒｎ，ＭＡ）、及びＴｏｃｒｉｓＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＫ）から購入するか、または施設内で合成した。ＡＤ８０は既報（Ｄａｒｅｔａｌ．， “ＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴａｒｇｅｔｓａｎｄＡｎｔｉ−ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＰｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，” Ｎａｔｕｒｅ４８６：８０−８４（２０１２）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）のとおりに合成した。全ての化合物をＤＭＳＯに溶解し、一部組成が不明なハエ用培地（ＢＤＳＣ）と混合して、薬物入りの餌（０．１％の最終ＤＭＳＯ濃度）を作製した。キナーゼ変異を有するまたは有さない約１００個のｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}胚を、２３℃で１５日間（遺伝学的スクリーニング）または２５℃で１３日間（薬物スクリーニング及び翅脈形成アッセイ）、薬物入りの餌で成虫期まで飼育した。蛹が空の事例の数（図５３ＡのＰ）を蛹の事例の総数（Ａ）で除して、％表記の生存率を測定した。

細胞遊走及び翅脈形成アッセイ
インビボ細胞遊走アッセイのために、三齢幼虫を解剖して発生中の翅原基を採取した。４％パラホルムアルデヒドのＰＢＳ溶液で固定化した後、原基を全組織標本とし、共焦点顕微鏡下、ＧＦＰで標識したｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}発現細胞を観測した。それぞれの遺伝子型または処理に対して少なくとも２０の翅原基を調べた。Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｒｃを抗Ｓｒｃ（ｐＹ４１８）抗体（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。翅脈形成アッセイのために、翅特異的な７６５−ｇａｌ４ドライバ系統をＵＡＳ−ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエと交雑した。１５を超える成虫の翅が異常な翅脈形成のスコアとなった。

がん細胞株を用いたＭＴＴアッセイ
ＴＴヒトＭＴＣ細胞を、１０％のウシ胎児血清、１００単位／ｍｌのペニシリン、及び０．１ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシンの混合物を追加したＲＰＭＩ１６４０中、３７℃で培養した。細胞を９６ウェルプレート中で種々の用量のキナーゼ阻害物質と共に５日間インキュベートし、チアゾリルブルーテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ；ＳＩＧＭＡ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を用い、製造元のプロトコールに従って細胞生存率を測定した。

キナーゼ阻害率測定
上記ソラフェログを一連の精製ヒトキナーゼ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に対してアッセイし、阻害率の値を測定し、キノームプロファイルを導き出した（図６１）。全ての化合物を、２つの生物学的レプリケートを用い、１μＭでスクリーニングし、阻害率の値を測定した。キナーゼ反応の詳細な手法及びアッセイ形式は、ｗｗｗ．ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ．ｃｏｍ／ｋｉｎａｓｅｐｒｏｆｉｌｉｎｇに記載されている。

Ｋｄ測定
ビーズベースの競合アッセイ（ＫＩＮＯＭＥｓｃａｎ）を用い、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸによってＫｄ値を測定した。簡単に説明すると、キナーゼをファージ上で発現させ、活性部位特異的リガンドを介してビーズ上に固定化した。試験化合物をキナーゼと予備混合し、固定化リガンドに対して競合する能力についてアッセイした。結合定数は、標準的な用量−応答曲線及びヒルの式を用いて算出し、ヒルの勾配を−１に設定した。この方法はキナーゼ阻害物質結合データを特性決定するために広く使用されてきた（Ｄａｖｉｓｅｔａｌ．， “ＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＫｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＳｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ，” Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２９：１０４６−５１（２０１１）；Ｙｏｕｎｇｅｔａｌ．， “ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅＫｉｎａｓｅＤｏｍａｉｎｏｆａｎＩｍａｔｉｎｉｂ−ＲｅｓｉｓｔａｎｔＡｂｌＭｕｔａｎｔｉｎＣｏｍｐｌｅｘｗｉｔｈｔｈｅＡｕｒｏｒａＫｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＶＸ−６８０，” ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６６：１００７−１４（２００６）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。各ソラフェログ−キナーゼ対について、３倍希釈での３０，０００〜０．５ｎＭの範囲の段階希釈液１１点を用いてＫｄ値を導き出した。Ｋｄ値、及び平均値の標準誤差（ＳＥＭ）は、２つの生物学的レプリケートの平均値である。

計算：ＤＦＧ−ｏｕｔのモデル化
ソラフェニブ及び他の関連するキナーゼ阻害物質は、ＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座に結合する公知のＩＩ型阻害物質であることから、ソラフェログもまたＩＩ型キナーゼ阻害物質であるとの仮説を立てた。強力なＩＩ型阻害物質を合理的に設計するためには、プロターゲット及びアンチターゲットのそれらのＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座における原子構造が必要であった。一部のプロターゲット／アンチターゲットについてはそれらのＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座における構造が判明していないが、ホモロジーモデル化を用いてそれらの構造を予測した。特に、活性なＤＦＧ−ｉｎ構造または配列情報のみからＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座をモデル化するＤＦＧモデルを用いた（Ｕｎｇｅｔａｌ．， “ＤＦＧｍｏｄｅｌ：ＰｒｅｄｉｃｔｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎＫｉｎａｓｅＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓｉｎＩｎａｃｔｉｖｅＳｔａｔｅｓｆｏｒＳｔｒｕｃｔｕｒｅ−ＢａｓｅｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴｙｐｅ−ＩＩＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，” ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０：２６９−２７８（２０１５）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。

簡単に説明すると、標的キナーゼの配列を、ＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座の特有の範囲を表す一組のテンプレートキナーゼ構造にアラインした。次いでＤＦＧモデルは、当該ＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座のホモロジーモデルを作製するようにＭＯＤＥＬＬＥＲの自動マルチテンプレート機能（Ｓａｌｉｅｔａｌ．， “ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＰｒｏｔｅｉｎＭｏｄｅｌｌｉｎｇｂｙＳａｔｉｓｆａｃｔｉｏｎｏｆＳｐａｔｉａｌＲｅｓｔｒａｉｎｔｓ，” Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２３４：７７９−８１５（１９９３）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）を求めた。各アラインメントに対して５０種類の初期モデルを構築し、ＤＦＧ−ｏｕｔモデルに対するキナーゼ−阻害物質結合の良好な予測ツールであることが明らかになっているＰＯＶＭＥｖ２．０（Ｄｕｒｒａｎｔｅｔａｌ．， “ＰＯＶＭＥ２．０：ＡｎＥｎｈａｎｃｅｄＴｏｏｌｆｏｒＤｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＰｏｃｋｅｔＳｈａｐｅａｎｄＶｏｌｕｍｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，” Ｊ．Ｃｈｅｍ．ＴｈｅｏｒｙＣｏｍｐｕｔ．１０：５０４７−５０５６（２０１４）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）によって計算した阻害物質結合部位の体積に従ってランク付けを行った。各キナーゼについて、公知のＩＩ型阻害物質を該キナーゼに対して結合しないものと区別する能力に基づいて１０種類のＤＦＧ−ｏｕｔモデルを選定し、それにより、タンパク質−ＩＩ型阻害物質の相補性に関して上記モデルを最適化した。

計算：ねじれ角
Ｎ−置換基に対する上記尿素リンカーのねじれエネルギーを、水溶液中の分子力学ＯＰＬＳ＿２００５力場を用いたＳｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ’ｓＭａｅｓｔｒｏ（Ｍａｅｓｔｒｏ，ｖｅｒｓｉｏｎ１０．３，Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹ，２０１５、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）によって計算した。ねじれ角は２度の間隔で走査した。相対ねじれエネルギーをねじれ角に対してプロットし、基準となるソラフェニブのＸ線結晶構造において観測された相当するねじれ角と比較した。

計算：ＤＦＤ−ポケット
ＤＦＧモデルによって作製した上位１０種類のＤＦＧ−ｏｕｔモデルのＤＦＧポケットの平均体積を、ＰＯＶＭＥ２．０（Ｄｕｒｒａｎｔｅｔａｌ．， “ＰＯＶＭＥ２．０：ＡｎＥｎｈａｎｃｅｄＴｏｏｌｆｏｒＤｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇＰｏｃｋｅｔＳｈａｐｅａｎｄＶｏｌｕｍｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，” Ｊ．Ｃｈｅｍ．ＴｈｅｏｒｙＣｏｍｐｕｔ．１０：５０４７−５０５６（２０１４）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）を用いて計算した。

実施例７６ − ソラフェニブはショウジョウバエＭＴＣモデルにおいて有効であった
治療指数と呼ばれる、腫瘍抑制と全般的な毒性の両方が関わる治療域によって、臨床に使用される抗がん剤の有効性が明らかになる。現在、３１種類のキナーゼ阻害物質が患者への使用に対してＦＤＡの認可を受けている。これらの薬物の大部分は、（ｉ）腫瘍の複雑さ及び、（ｉｉ）（ｉ）と結びついた、毒性を最小限にするために、正常組織中のものを含む適切な細胞ネットワークを維持することの重要性に起因して、狭い治療指数を示す。総じて、抗がん剤の治験の成功率は主要な疾患向けの薬物の中で最低のままであり、失敗の大部分は治療指数の制限によるものである（Ｍｅａｎｗｅｌｌ，Ｎ．Ａ．， “ＩｍｐｒｏｖｉｎｇＤｒｕｇＣａｎｄｉｄａｔｅｓｂｙＤｅｓｉｇｎ：ＡＦｏｃｕｓｏｎＰｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｓａＭｅａｎｓｏｆＩｍｐｒｏｖｉｎｇＣｏｍｐｏｕｎｄＤｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄＳａｆｅｔｙ，” Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．２４：１４２０−１４５６（２０１１）；Ｈａｙｅｔａｌ．， “ＣｌｉｎｉｃａｌＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＳｕｃｃｅｓｓＲａｔｅｓｆｏｒＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌＤｒｕｇｓ，” Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２：４０−５１（２０１４）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。標的治療薬に対する耐性が生じると、全生存期間を延ばす上での該治療薬の有効性が制限されることが多い。

ｐａｔｃｈｅｄ（ｐｔｃ）プロモーターが、ヒト発がん性アイソフォームＲＥＴ（Ｍ９１８Ｔ）をモデル化するように設計されたショウジョウバエＲｅｔのＭ９５５Ｔアイソフォームの発現を導く、甲状腺髄様がん（ＭＴＣ）のトランスジェニックショウジョウバエモデルは既報である（Ｄａｒｅｔａｌ．， “ＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴａｒｇｅｔｓａｎｄＡｎｔｉ−ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＰｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，” Ｎａｔｕｒｅ４８６：８０−８４（２０１２）；Ｍｕｌｌｉｇａｎ， “ＲＥＴＲｅｖｉｓｉｔｅｄ：ＥｘｐａｎｄｉｎｇｔｈｅＯｎｃｏｇｅｎｉｃＰｏｒｔｆｏｌｉｏ，” Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ１４：１７３−１８６（２０１４）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエを２５℃で培養すると、該ハエの１００％が成虫期の前に死亡し、これは候補薬物の効率的且つ定量的な「致死からのレスキュー」アッセイとなる（図５３Ａ及び６２Ａ；（Ｄａｒｅｔａｌ．， “ＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴａｒｇｅｔｓａｎｄＡｎｔｉ−ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＰｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，” Ｎａｔｕｒｅ４８６：８０−８４（２０１２）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される））。このアッセイは分子を治療指数に基づいて分類し、該アッセイにおいて、有効な化合物は発がん性のＲｅｔに誘導される毒性を抑制する一方で、正常なハエの発生に際しては毒性作用を示さないことが必要である。次いで、有望な的中した化合物を、該化合物のＲｅｔ媒介形質転換を低減する能力に関して評価した。

改良を行うべき薬物を選択するために、２０１５年現在でがん治療薬としてＦＤＡに認可された臨床に使用されるキナーゼ阻害物質のスクリーニングを実施した。薬物をハエ培地に混合し、それによって経口送達した。３１種類の被検キナーゼ阻害物質のうち、ソラフェニブがｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエを最も強力に致死からレスキューした（図５３Ｂ）。しかしながら、ハエの生存率を最も強力に向上させたにもかかわらず、ソラフェニブレスキューは低く（約５％）、且つ治療域は小さかった（ハエ用の餌中で２００〜４００μＭの範囲に過ぎない；図５４Ｄ参照）。これはヒトの患者に由来する報告、すなわち、ソラフェニブは肝臓及び腎細胞がんならびに分化甲状腺がんの治療において限界効力を示し、治療を受けた患者における下痢、膵臓萎縮、及び皮膚腫瘍の発生を含む重度の副作用を伴うとの報告（Ｈｅｓｃｏｔｅｔａｌ．， “ＰａｎｃｒｅａｔｉｃＡｔｒｏｐｈｙ−ＡＮｅｗＬａｔｅＴｏｘｉｃＥｆｆｅｃｔｏｆＳｏｒａｆｅｎｉｂ，” Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１４７５−１４７６（２０１３）；Ｆｕｅｔａｌ．， “ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＢＥＴＢｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｓａｓａＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＳｔｒａｔｅｇｙｆｏｒＣａｎｃｅｒＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ，” Ｏｎｃｏｔａｒｇｅｔ．６：５５０１−５５１６（２０１５）；Ｇｈａｒｗａｎｅｔａｌ．， “ＫｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓａｎｄＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎＯｎｃｏｌｏｇｙ：ＣｌｉｎｉｃａｌＩｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，” Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１３：２０９−２２７（２０１６），ｗｈｉｃｈａｒｅｈｅｒｅｂｙｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄｂｙｒｅｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｉｒｅｎｔｉｒｅｔｙ、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）と一致する。注目すべきは、更なるフッ素原子を有するソラフェニブ類縁体である大腸がん治療薬レゴラフェニブ（Ｗｉｌｈｅｌｍｅｔａｌ．， “Ｒｅｇｏｒａｆｅｎｉｂ（ＢＡＹ７３−４５０６）：ＡＮｅｗＯｒａｌＭｕｌｔｉｋｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＡｎｇｉｏｇｅｎｉｃ，ＳｔｒｏｍａｌａｎｄＯｎｃｏｇｅｎｉｃＲｅｃｅｐｔｏｒＴｙｒｏｓｉｎｅＫｉｎａｓｅｓｗｉｔｈＰｏｔｅｎｔＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｏｆＡｎｔｉｔｕｍｏｒＡｃｔｉｖｉｔｙ，” Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ１２９：２４５−２５５（２０１１）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）の有効性も弱いことが判ったことである（図５４Ｄ）。

ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}導入遺伝子は、後期における致死性を導くことに加えて、発生中の翅原基上皮の正中線にある縦縞の細胞に対するｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}発現を標的とし、細胞が、含まれるＵＡＳ−ＧＦＰ導入遺伝子によって可視化された。これらのｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}細胞は上皮間葉転換（ＥＭＴ）及びそれに続く翅上皮下への浸潤を起こし、細胞形質転換及び転移における初期段階のモデルになった（Ｖｉｄａｌｅｔａｌ．， “Ｃｓｋ−ＤｅｆｉｃｉｅｎｔＢｏｕｎｄａｒｙＣｅｌｌｓａｒｅＥｌｉｍｉｎａｔｅｄｆｒｏｍＮｏｒｍａｌＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＥｐｉｔｈｅｌｉａｂｙＥｘｃｌｕｓｉｏｎ，Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄＡｐｏｐｔｏｓｉｓ，” Ｄｅｖ．Ｃｅｌｌ１０：３３−４４（２００６）；Ｒｕｄｒａｐａｔｎａｅｔａｌ．， “ＡＪｎｋ−Ｒｈｏ−ＡｃｔｉｎＲｅｍｏｄｅｌｉｎｇＰｏｓｉｔｉｖｅＦｅｅｄｂａｃｋＮｅｔｗｏｒｋＤｉｒｅｃｔｓＳｒｃ−ＤｒｉｖｅｎＩｎｖａｓｉｏｎ，” Ｏｎｃｏｇｅｎｅ３３（２１）：２８０１−２８０６（２０１４）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。ソラフェニブは一貫してｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}発現翅細胞のＥＭＴ及び遊走の両方を抑制し（図５３Ｃ）、これにより複数の態様の形質転換を低減するソラフェニブの能力が実証された。

実施例７７ − ソラフェログは顕著な構造活性相関を示す
ソラフェニブはＲＥＴ、ＢＲＡＦ、及びＫＤＲ／ＶＥＧＦＲを含む複数のキナーゼに結合する（Ｗｉｌｈｅｌｍｅｔａｌ．， “ＢＡＹ４３−９００６ＥｘｈｉｂｉｔｓＢｒｏａｄＳｐｅｃｔｒｕｍＯｒａｌＡｎｔｉｔｕｍｏｒＡｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＴａｒｇｅｔｓｔｈｅＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫＰａｔｈｗａｙａｎｄＲｅｃｅｐｔｏｒＴｙｒｏｓｉｎｅＫｉｎａｓｅｓＩｎｖｏｌｖｅｄｉｎＴｕｍｏｒＰｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＡｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，” ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６４：７０９９−７１０９（２００４）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。これらのキナーゼ及び他のキナーゼに結合したソラフェニブの結晶構造によって、類似の結合ポーズが明らかになった（図５４Ａ、左側の図）。構造解析に基づいて、ソラフェニブを４種類のサブユニット、すなわち、（ｉ）標的キナーゼのＡＴＰ結合部位を占めるヒンジバインダー（本発明者らの研究においては一定に保持される）、（ｉｉ）スペーサー、（ｉｉｉ）リンカー、及び（ｉｖ）キャップに概念的に分解した。キャップは、キナーゼ間で組成及び大きさが異なる、キナーゼドメイン内の構成要素である疎水性のＤＦＧポケットまで延在する（図５４Ａ；（Ｕｎｇｅｔａｌ．， “ＤＦＧｍｏｄｅｌ：ＰｒｅｄｉｃｔｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎＫｉｎａｓｅＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓｉｎＩｎａｃｔｉｖｅＳｔａｔｅｓｆｏｒＳｔｒｕｃｔｕｒｅ−ＢａｓｅｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴｙｐｅ−ＩＩＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，” ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０：２６９−２７８（２０１５）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される））。

化学的修飾剤アプローチの一部として、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}モデルにおけるＳＡＲ解析に用いるために、ソラフェニブ類縁体（「ソラフェログ」）を開発した（図５４Ｂ）。ソラフェログシリーズには、様々なリンカー（Ｌ１〜Ｌ６）、スペーサー（Ｓ１〜Ｓ４）、または４種類の異なるキャップ（Ｃ１〜Ｃ４、図５４Ｃ）の状況における組み合わせを有する分子が含まれていた。初期のシリーズに関しては、約１００種類のソラフェログを合成し、これらの化合物の活性をｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエのレスキューに基づいて評価した（図５４Ｄ及び５８Ａ）。この解析からいくつかの概括的な特徴が明らかになった。例えば、キャップ試験群（Ｃ１〜Ｃ４）の状況においては、リンカーＬ４、Ｌ５、及びＬ６、ならびにスペーサーＳ４は効果がなく（レスキュー率０％、図５４Ｃにおいて灰色）、アミド（Ｌ２）リンカー及びスルホンアミド（Ｌ３）リンカーが弱い活性を示した。総じて、キャップ位置の変化を伴う尿素（Ｌ１）が最も有効であることが明らかになった（図５４Ｄ）。

初期のシリーズから、Ｌ１／Ｓ１／Ｃ４：ｊのリンカー−スペーサー−キャップ構造を有する化合物であるソラフェログＬＳ１−１５が、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエの致死性をレスキューするのに最も有効であると特定した（図５４Ｃ及び５４Ｄ）。ＬＳ１−１５はソラフェニブ（Ｌ１／Ｓ１／Ｃ３：ａ）よりも有意に有効であった。更に、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５の両方が、それぞれ、スペーサーＳ２を有するそれらの対照化合物であるレゴラフェニブ（Ｌ１／Ｓ２／Ｃ３：ｂ）及びＡＰＳ−３−６９−１（Ｌ１／Ｓ２／Ｃ４：ｎ）よりも有効であった。総じて、スペーサーＳ２を含有するソラフェログは、スペーサーＳ１を有する類縁化合物と比較して毒性の増加を示した（図６３）。

ソラフェニブと同様に、ＬＳ１−１５及びＡＰＳ３−６９−１もまたｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}媒介ＥＭＴ及び浸潤を強力に抑制した（図６３）。対照的に、ＬＳ１−３７（Ｌ２／Ｓ１／Ｃ３）は細胞遊走を悪化させ、このことはＬＳ１−３７がｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}形質転換ネットワークを活性化したことを示している。更に、ＬＳ１−３７は、対照である非形質転換ハエに給餌した場合でも毒性があることが明らかになり、全身毒性を示した（図６３）。まとめると、これらの研究により、Ｒｅｔ媒介形質転換を抑制するための最も有用なスペーサー−リンカー−キャップ構造を明確にすることが可能になった。

実施例７８ − 有望な化合物構造のコンピューター誘導決定
上記ソラフェログは、上記ハエにおける動物全身の治療指数に関する定量的ＳＡＲデータを提供した。特に、ソラフェログのキャップ基の微妙な構造上の変化によって、Ｒｅｔ駆動の致死性からのレスキューに著しい違いが生じたことが特記された。観測されたＳＡＲをよりよく理解するために、インシリコでこれらのキャップ構造の物理的特徴を調査し、構造と動物全身の機能との間の相関関係を探索した。部分電荷分布、ｐＫａ、及び分子双極子を含むいくつかのキャップの特性は、有効性と有意に相関しなかった。更に、主要なプロターゲットに対する化合物のドッキングのモデルにおける自由エネルギーの計算も、ソラフェログの有効性と強い相関はなかった。

有効性とＮ−置換リンカー（尿素）−キャップのねじれ角との間には有意な相関関係が認められた（図６４）。（ｉ）上記キャップの４位の塩素原子（ソラフェニブ）を（ｉｉ）該キャップの２位のフッ素原子（ＬＳ１−１５）に交換することによって、ソラフェニブと比較して、非結合状態におけるＬＳ１−１５の好ましい立体配座が有意に変化した。注目すべきことに、この好ましいＬＳ１−１５の立体配座は、キナーゼ共結晶構造について報告されたソラフェニブの結合状態での立体配座と厳密に一致した（図５４Ａ及び６４）。ＬＳ１−１５の好ましい立体配座は、恐らくは、（ｉ）上記キャップ中の２位のフッ素と尿素酸素との間の反発的相互作用、及び（ｉｉ）２位のフッ素と尿素水素との間の有利な多極相互作用に起因していた。これらの相互作用はソラフェニブ及びレゴラフェニブの両方には存在しない。すなわち、ＬＳ１−１５の非結合状態での立体配座をその最適なキナーゼ結合立体配座に「予め一致する」ように拘束することは、動物全身の有効性が強力に向上したことと相互に関連があった。

しかしながら、リード化合物を更に改善するための指針を提供するにあたって、立体配座動態及び物理的特徴のみが限定されていた。例えば、ＡＰＳ４−５４及びＡＰＳ４−３５−１は、同様に拘束されたねじれ角動態であるにもかかわらず、ＬＳ１−１５と比較して動物全身において低い活性を示した（図５８Ａ）。最適な治療標的のｆｕｌｌｐａｌａｔｅをよりよく理解することが、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５に対して更に改良を加えるのに役立つことが想定された。

実施例７９ − ＬＳ１−１５及びソラフェニブに対するプロターゲット及びアンチターゲットの特定
上記リード分子の有効性を増加させるために、遺伝学的アプローチを用いて、ハエの発生の全体を通じて減少させた場合にＬＳ１−１５またはソラフェニブのｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の致死性を抑制する能力が変化するキナーゼを特定した。ＧＡＬ４ドライバの活性を制御するために温度を用いて、ＬＳ１−１５の存在下で約５０％までのｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエの生存率のキャリブレーションを行った。この増感アッセイを用いて、主要な「プロ（プロスペクティブ）ターゲット」遺伝子及び「アンチターゲット」遺伝子、すなわち、ヘテロ接合の場合に薬効をそれぞれ増加させるまたは減少させる遺伝子をスクリーニングした（図５４Ｂ、５５Ａ、及び６２Ｂ〜Ｈ）。プロターゲットはソラフェニブの有効性の正の変更因子としての役割を果たした。アンチターゲットは、腫瘍ネットワーク内における負の変更因子であって、これらの因子が阻害された場合に薬物の有効性を低下させることまたは薬物の全身毒性を促進することができる、上記変更因子としての役割を果たした。

例えば、ＬＳ１−１５はｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}を５０％の生存率までレスキューしたが、Ｌｋ６の１つの活性な対立遺伝子を除去すると（ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}，Ｌｋ６^−／＋）、ハエの成中になるまでの生存率は０％となった（図５５Ｂ）。このことから、Ｌｋ６はＬＳ１−１５のアンチターゲットであることが明らかになった。Ｌｋ６は、新たに見出されたがん標的である哺乳動物のＭＫＮＫ１（例えば、Ｊｏｓｈｉｅｔａｌ．， “ＭｎｋＫｉｎａｓｅＰａｔｈｗａｙ：ＣｅｌｌｕｌａｒＦｕｎｃｔｉｏｎｓａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＯｕｔｃｏｍｅｓ，” ＷｏｒｌｄＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．５：３２１−３３３（２０１４）；Ｔｅｏｅｔａｌ．， “ＡｎＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＡｐｐｒｏａｃｈｆｏｒＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＨｉｇｈｌｙＰｏｔｅｎｔａｎｄＳｅｌｅｃｔｉｖｅＭｎｋＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓ：Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄＳＡＲＡｎａｌｙｓｉｓ，” Ｅｕｒ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１０３：５３９−５５０（２０１５）；Ｂａｓｎｅｔｅｔａｌ．， “ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａＨｉｇｈｌｙＣｏｎｓｅｒｖｅｄＡｌｌｏｓｔｅｒｉｃＢｉｎｄｉｎｇＳｉｔｅｏｎＭｎｋ１ａｎｄＭｎｋ２，” Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．８８：９３５−９４８（２０１５）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）のハエオルソログであり、本願は、少なくとも一部の状況において、ＭＫＮＫ１があまり有効ではない治療標的であることが明らかになる可能性があることを示唆している。対照的に、遺伝子型に関してｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}，ｐｈｌ^−／＋であるハエをＬＳ１−１５で処理すると生存率が９６％となった。ｐｈｌはＲａｆのショウジョウバエオルソログであり、ＲａｆがＬＳ１−１５のプロターゲットであることが明らかになった（図５５Ｃ、６０、及び６５Ａ）。

ＬＳ１−１５の存在下で２０６種類の遺伝子を試験したが、これは予測されたショウジョウバエキノームの８０％を超える範囲に及ぶ。ＬＳ１−１５に対する２２種類の強力なプロターゲット遺伝子が特定され、これらの遺伝子において、ヘテロ接合性によって生存率の有意な向上（＞９１％）が促進された（図５５Ｂ、５５Ｃ、５９、及び６５Ａ）。ＬＳ１−１５が作用するネットワークがソラフェニブとどのように異なっているかを理解するために、ソラフェニブに対して類似のキノームスクリーニングを実施した。注目すべきことに、１７種類のＬＳ１−１５特異的プロターゲットが、ソラフェニブとは同様の機能的相互作用を示さず（図６５Ａ〜Ｃ）、このことは、ＬＳ１−１５とソラフェニブとが有意に異なる細胞活性を有することを示している。無細胞キナーゼ阻害アッセイにおいて、ＬＳ１−１５は少なくとも２種類のプロターゲット、ＥＰＨ及びＦＲＫを阻害することが判っているが（図６１）、それにもかかわらず、この遺伝的変更因子のデータは、ＬＳ１−１５は、ＥＰＨまたはＦＲＫの阻害が更に増加すれば、更に効果が高くなるであろうことを示している。Ｌｋ６を含む、ＬＳ１−１５に対する８種類の強力なアンチターゲット及びソラフェニブに対する６種類の強力なアンチターゲットも特定された（図５５Ｃ及び６５Ａ）。このことは、Ｌｋ６／ＭＫＮＫ１に対する活性を低下させることが、ソラフェログの有効性の向上に繋がるはずであることを示している。興味深いことに、ショウジョウバエのｍＴＯＲオルソログＴｏｒはアンチターゲットとして特定されなかった。Ｔｏｒは既報（Ｄａｒｅｔａｌ．， “ＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴａｒｇｅｔｓａｎｄＡｎｔｉ−ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＰｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，” Ｎａｔｕｒｅ４８６：８０−８４（２０１２）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）においてＡＤ５７に対するアンチターゲットとして特定されており、このことは、ソラフェログはＡＤ５７と重複してはいるが異なるネットワーク上で作用することを示している。

実施例８０ − Ｒａｆはプロターゲット及びアンチターゲットの両方である
これらの研究の過程で、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５の状況において、ショウジョウバエＲａｆに関する二重の要件、すなわち、ｒａｆ^−／＋が高い薬物用量ではプロターゲットとして作用したが、低用量ではアンチターゲットとして作用したことを観察したのは驚くべきことであった。最近の研究では、第一世代のＢＲＡＦ阻害物質が「阻害物質誘導トランス活性化」により低用量でＢＲＡＦを活性化できること、すなわち、薬物が結合したＲＡＦプロトマーが薬物を含まないＲＡＦプロトマーのキナーゼ活性を刺激し、下流のＭＡＰＫを活性化することができるが実証されている（Ｐｏｕｌｉｋａｋｏｓｅｔａｌ．， “ＲＡＦＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓＴｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｅＲＡＦＤｉｍｅｒｓａｎｄＥＲＫＳｉｇｎａｌｌｉｎｇｉｎＣｅｌｌｓｗｉｔｈＷｉｌｄ−ＴｙｐｅＢＲＡＦ，” Ｎａｔｕｒｅ４６４：４２７−４３０（２０１０）；Ｗｅｅｒａｒａｔｎａ， “ＲＡＦＡｒｏｕｎｄｔｈｅＥｄｇｅｓ−ＴｈｅＰａｒａｄｏｘｏｆＢＲＡＦＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，” Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６６：２７１−２７３（２０１２）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。薬物を含まないＲＡＦプロトマーの数、延いてはＢＲＡＦ／ＭＡＰＫ活性を低下させるためには、より高い薬物用量が必要であった。

ソラフェニブは、元来比較的中程度の結合活性のＲＡＦ阻害物質として開発され（Ｌｙｏｎｓｅｔａｌ．， “ＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆａＮｏｖｅｌＲａｆｋｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，” Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｌａｔ．Ｃａｎｃｅｒ８：２１９−２２５（２００１）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）、このことによって、ソラフェニブ及びソラフェログが、本発明者らのショウジョウバエプラットフォームにおいて同様の低用量での活性化／高用量での阻害へと導く可能性が高くなる。成虫のハエにおける翅脈形成を用いて、動物全身の状況における、ＭＡＰＫシグナル伝達活性に対するソラフェログの用量効果を調べた。以前の研究により、Ｒａｓ／ＭＡＰＫ経路の活性を高めることによって、発生に際して異所性翅脈形成が促進されることが実証されており（Ｋａｒｉｍｅｔａｌ．， “ＥｃｔｏｐｉｃＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＡｃｔｉｖａｔｅｄＲａｓ１ＩｎｄｕｃｅｓＨｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃＧｒｏｗｔｈａｎｄＩｎｃｒｅａｓｅｄｃｅｌｌＤｅａｔｈｉｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＩｍａｇｉｎａｌＴｉｓｓｕｅｓ，” Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２５：１−９（１９９８）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）、このことは、ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}が翅原基特異的ドライバ７６５−ｇａｌ４によって駆動されるｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエにおいて観察されたものであった（図５６Ａ）。

対照幼虫に低用量（１０μＭ）のソラフェニブまたはＬＳ１−１５を給餌することにより、有意に過剰な翅脈物質が刺激された（図５６Ａ及び５６Ｂ）。これらの結果は、ソラフェニブまたはＬＳ１−１５の低用量での処理によって、Ｒａｓ／ＭＡＰＫが有意に活性化されることを示した。この所見と一致して、低用量ＬＳ１−１５を、ＲＡＫの下流で作用する強力なＲａｓ経路阻害物質であるＭＥＫ阻害物質トラメチニブ（Ｓｌａｃｋｅｔａｌ．， “ＴｈｅＲａｓ−Ｅｒｋ−ＥＴＳ−ＳｉｇｎａｌｉｎｇＰａｔｈｗａｙＩｓａＤｒｕｇＴａｒｇｅｔｆｏｒＬｏｎｇｅｖｉｔｙ，” Ｃｅｌｌ１６２：７２−８３（２０１５）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）と共に給餌すると、異所性翅脈形成が強力に抑制された（図５６Ａ及び５６Ｂ）。対照的に、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の生存率を高成績でレスキューしたより高濃度のソラフェニブまたはＬＳ１−１５は、異所性翅脈形成を促進しなかった（図５６Ａ及び図５６Ｂ）。

総じて、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５を用いた結果は阻害物質誘導トランス活性化モデルと一致した。すなわち、ソラフェニブまたはＬＳ１−１５は、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の成虫がレスキューされなかった中程度の用量では、対照動物における翅脈形成を増加させた一方、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の成虫がレスキューされたより高い用量では、異所性翅脈形成を生じなかったという、釣り鐘状の用量曲線であることが特定された（図５６Ｂ）。これらの結果はまた、ＲＡＦキナーゼが標的として除去された場合、上記ソラフェログがより広い治療域を有することになるという興味深い可能性も示唆した。すなわち、そのＲＡＦはアンチターゲットとしてのみならず、プロターゲットとしても作用する可能性があり、これは試験済みの可能性である。

実施例８１ − 新規阻害物質ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５の開発
インビトロ結合アッセイにより、ヒトＢＲＡＦに対するソラフェニブ及びＬＳ１−１５の有意な結合が明らかになった（図５６Ｃ）。翅脈形成の結果に基づいて、Ｒａｆキナーゼに対するソラフェログの活性を、該ソラフェログのキャップの大きさに注目することによって低下させることに研究の焦点を絞った。

ＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座における重要な標的ＲＥＴの相同性モデルによって、それが約１６３Å^３のアロステリックＤＦＧ−ポケットを含むキナーゼクレフトを有することが明らかになった。対照的に、実験的に決定されたＢＲＡＦの構造及びＢＲＡＦの相同性モデルの解析によって、そのアロステリックＤＦＧポケットは１３６Å^３と推定され、有意に小さいことが明らかになった（図５６Ｄ）。したがって、Ｒａｆキナーゼに対する活性はキャップ基に対する修飾に対して非常に敏感であろうと推論した。

次いで、研究を上記キャップ中の５位の−ＣＦ_３に集中させた。これは、ソラフェログのＳＡＲ内に見られた重要な傾向によって裏付けられたアプローチである。ＬＳ１−１５の−ＣＦ_３から単一のフッ素原子（ＡＰＳ４−５４：ｉ）または全てのフッ素原子（ＡＰＳ４−３５−１）を除去したところ、ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の生存率のレスキューが低下した（図５４Ｄ及び５８Ａ）。ＬＳ１−１５の２−フルオロ基の除去も生存率を低下させた（ＬＳ１−１１−２：ｅ、図５４Ｄ及び５８Ａ）。すなわち、−ＣＦ_３基を減少させるとソラフェログの有効性が低下し、これにより、上記のように−ＣＦ_３を保持してキャップ基全体の回転を拘束することが重要であることが強く示された（図６４）。次いで、この基を大きくした場合の効果を試験した。

ＬＳ１−１５の−ＣＦ_３キャップ基を−Ｃ_２Ｆ_５または−イソ−Ｃ_３Ｆ_７で置換することによって拡張することにより、化合物ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５が生成した。計算において、キャップの５位におけるこれらの置換により、ＲＡＦのＤＦＧポケットとの立体的衝突が生じるであろうことが予測された（図５６Ｂ及び５６Ｄ）。事実、無細胞インビトロ試験において、ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５は両方共、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５と比較して、ＲＥＴ阻害を保持しつつ有意にＢＲＡＦ結合の低下を示すことが明らかになった（図５６Ｃ）。インビボでは、ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５は両方共、７６５＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエにおいて異所性翅脈形成を促進しなかった（図５６Ｂ）。このデータは、試験したいずれの用量でも、ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５が共にＲａｓ経路を活性化しなかったことを示しており、これはおそらく、ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５がＲａｆに結合してそれを活性化することができないことを反映していると考えられる。

最も重要なことは、ＡＰＳ５−１６−２及び特にＡＰＳ６−４５の経口投与によって、最適用量におけるＬＳ１−１５を超えてｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の全生存率が大幅に増加したことである（図５４Ｄ及び５８Ａ）。ＡＰＳ６−４５によってｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエは驚くべき８４％の全生存率までレスキューされた（図５４Ｄ及び５８Ａ）。このレスキューのレベルは、既報の最適化された化合物ＡＤ８０を含む、過去に試験された全ての化合物よりも高く、ＡＤ８０自体並外れた多重薬理学的特性を示していた（Ｄａｒｅｔａｌ．， “ＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴａｒｇｅｔｓａｎｄＡｎｔｉ−ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＰｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，” Ｎａｔｕｒｅ４８６：８０−８４（２０１２）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。更に、ＡＰＳ６−４５の最適用量範囲は、ソラフェニブまたはＬＳ１−１５と比較してより低い用量に移動した（図５４Ｄ及び５８Ｂ）。興味深いことに、ＡＰＳ６−４５はインビトロで、ソラフェニブもしくは本明細書に記載のソラフェログ（図５６Ｃ）と比較して、野生型または発がん性のＲＥＴに対してより低い活性を示し、細胞ネットワークに対するその全体的な活性が重要であることが強く示された。

実施例８２ − ＡＰＳ６−４５は複数の手段によりＲａｓ経路活性を阻害する
発生中の眼球上皮へのｄＲａｓ^Ｇ１２ＶまたはｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}のいずれかの発現を標的化することによるＲａｓ−ＭＡＰＫシグナル伝達の活性化によって、複数の態様の形質転換が生じ、ラフアイ表現型が発生する（Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．， “ＡＭｉｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｃｒｅｅｎＩｄｅｎｔｉｆｉｅｓＧｅｎｅｓｔｈａｔｃａｎＭｏｄｕｌａｔｅＲＡＳ１ＰａｔｈｗａｙＳｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＭｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ，” Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１５６：１２１９−１２３０（２０００）；Ｒｅａｄｅｔａｌ．， “ＡＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＭｏｄｅｌｏｆＭｕｌｔｉｐｌｅＥｎｄｏｃｒｉｎｅＮｅｏｐｌａｓｉａｔｙｐｅ２，” Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１７１：１０５７−１０８１（２００５）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。切開した瀕死の（ビヒクル処理した）ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}蛹を解剖することによって、最前眼部領域においてラフアイ表現型が観測され（図５７Ｄ）、これは前眼部領域内のｐｔｃの発現と整合した（Ｓｈｙａｍａｌａｅｔａｌ．， “ＡＰｏｓｉｔｉｖｅＲｏｌｅｆｏｒＰａｔｃｈｅｄ−ＳｍｏｏｔｈｅｎｅｄＳｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＰｒｏｍｏｔｉｎｇＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎＤｕｒｉｎｇＮｏｒｍａｌＨｅａｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ，” Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ１２９：１８３９−１８４７（２００２）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。ＡＰＳ６−４５は、蛹においても及びレスキューされた成虫においてもこの前眼部のラフアイ表現型を強力に抑制したのに対して、他のソラフェログのみならずＡＤ８０でも抑制は起こらなかった（図５７Ｄ）。更にこれらの結果は、ＡＰＳ６−４５が特に高レベルで、動物全身に対する毒性が最小限でありながら、Ｒａｓシグナル伝達を阻害することを示している。

最後に、ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５の有効性の向上は、おそらく他のプロターゲット及びアンチターゲットの変化も反映しているものと考えられる。例えば、ＭＫＮＫ１オルソログＬｋ６は、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５の両方の特に強力なアンチターゲットであることが明らかになった（図５５Ｂ及び５５Ｃ）。以前の研究により、Ｌｋ６がＲａｓ経路活性の抑制と結び付けられた（Ｈｕａｎｇｅｔａｌ．， “ＡＭｉｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＳｃｒｅｅｎＩｄｅｎｔｉｆｉｅｓＧｅｎｅｓｔｈａｔｃａｎＭｏｄｕｌａｔｅＲＡＳ１ＰａｔｈｗａｙＳｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＭｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ，” Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１５６：１２１９−１２３０（２０００）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）。この所見と一致して、７６５＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}，Ｌｋ６^−／＋ハエは、７６５＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の翅と比較して、翅脈形成が増強され且つ翅構造が不十分となり、これらの翅の欠陥は、Ｒａｓ経路阻害物質トラメチニブによって抑制された（図５７Ａ及び５７Ｂ）。

実験的に決定されたＭＫＮＫ１の構造及びＭＫＮＫ１の相同性モデルの解析によって、そのアロステリックＤＦＧポケットも、１５０Å^３と推定され、RETよりも小さいことが明らかになった（図５６Ｄ）。事実、ＡＰＳ６−４５ではソラフェニブと比較してインビトロＭＫＮＫ１結合がごく僅かに減少した一方、ＡＰＳ５−１６−２では有意にＭＫＮＫ１結合が減少した（図５６Ｃ）。インビボデータはこれらの計算した活性と一致した。Ｌｋ６を低減すると（７６５＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}，Ｌｋ６^−／＋）、ソラフェニブまたはＬＳ１−１５による７６５＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}の細胞遊走の抑制が逆転し（図５７Ｃ）、これはＬｋ６が両化合物に対してアンチターゲットとして作用することと整合する。対照的に、ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５の有効性はＬｋ６の低下による影響を受けず（図５７Ｃ）、これはＭＫＮＫ１に対するＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５の結合がより低いことと整合する。

まとめると、これらの結果は、ＭＫＮＫ１に対する化合物の活性を低下させると、Ｒａｆ−ＭＡＰＫシグナル伝達の阻害が増強される場合があることを示唆している。総じて、ソラフェニブ及びＬＳ１−１５などのソラフェログは、（ｉ）キャップ基の回転を拘束すること、ならびに（ｉｉ）−ＣＦ_３基を拡張して、ＲＡＦ、及び潜在的にはＭＫＮＫ１などの他のアンチターゲットに対する結合を低下させることによって改良することができることが結論付けられた。

実施例８３ − 新規ＴＣＩＡＰＳ６−４５のインビボ有効性
ハエのラフアイ表現型に対する化合物の効果を評価した。ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}は、成虫の前眼部に個眼領域の乱れを含む形質転換様表現型を示した。ＡＰＳ６−４５は、ラフアイ表現型を強力にレスキューし、ｐｔｃ−ｇａｌ４対照と同様の滑らかに配列された個眼が生じた。ビヒクル処理した対照ハエは、成虫期まで生存しなかったことから、蛹の状態で解剖した。薬物濃度は、ソラフェニブ（４００μＭ）、ＬＳ１−１５（２００μＭ）、ＡＰＳ５−１６−２（１００μＭ）、ＡＰＳ６−４５（１００μＭ）、及びＡＤ８０（１００μＭ）であった（図６６Ａ）。ＡＰＳ５−１６−２及びＡＰＳ６−４５によるＭＴＣコロニー形成の抑制を図６６Ｂに示す。ＴＴヒトＭＴＣ細胞を、ＴＣＩの存在下で軟寒天アッセイにおいてコロニー形成活性についてアッセイした。３週目におけるコロニーの代表的な形態を図６６Ｂ（上段の写真）に示す。矢印（図６６Ｂ）は増殖中のコロニーの例である。４０倍で撮影した。コロニー形成効率に対するＴＣＩの効果を図６６Ｂ（下段）に示す。３週目におけるコロニー数を播種細胞数で除してコロニー形成効率を判定した。各実験において１５０〜２００個の細胞を採点した。エラーバーは３回繰り返しの実験における標準誤差を表す。アスタリスクは、スチューデントのｔ検定において、ソラフェニブ（ｓｏｒａｆ）と比較してｐ＜０．０５であることを表す。＃は、スチューデントのｔ検定において、ＡＰＳ５−１６−２と比較してｐ＜０．０５であることを表す。

図６６Ｃ〜Ｅは、異種移植片を有するマウスに対するＡＰＳ６−４５の経口投与の有効性を示す。ＡＰＳ６−４５によるインビボＴＴ細胞増殖の抑制である。ヌードマウスの皮下にＴＴ細胞腫瘍（約１２０ｍｍ^３）を定着させた後、０日目に投与（各１０ｍｇ／ｋｇ／日）を開始した。エラーバーは標準誤差（ｎ＝１０）を表す。Ｃａｂｏはカボザンチニブ、ｓｏｒａｆはソラフェニブを表す。アスタリスクは、スチューデントのｔ検定において、ビヒクル対照と比較してｐ＜０．０５であることを示し、＃記号は、スチューデントのｔ検定において、ソラフェニブ及びカボザンチニブと比較してｐ＜０．０５であることを示す（図６６Ｃ）。図６６Ｄ及び図６７は、処理前のベースラインに対する３０日目の腫瘍量の変化率を示すウォーターフォールプロットを示す。各バーは１匹の動物を表す。線はベースラインからの３０％の腫瘍の大きさの低下、すなわち、ＲｅｓｐｏｎｓｅＥｖａｌｕａｔｉｏｎＣｒｉｔｅｒｉａｉｎＳｏｌｉｄＴｕｍｏｒｓ（ＲＥＣＩＳＴ）（Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒｅｔａｌ．， “ＮｅｗＲｅｓｐｏｎｓｅＥｖａｌｕａｔｉｏｎＣｒｉｔｅｒｉａｉｎＳｏｌｉｄＴｕｍｏｕｒｓ：ＲｅｖｉｓｅｄＲＥＣＩＳＴＧｕｉｄｅｌｉｎｅ，” Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．４５：２２８−２４７（２００９）、該文献は本記載をもってその全体が参照により援用される）によって定義される部分奏効を示す最小の減少率を示す。アスタリスクは完全奏効を表す。実験の過程で２匹のマウスが原因不明により死亡した。図６６Ｅ（図６６Ｃと同一の凡例）に示すように、ＡＰＳ６−４５の投与によるマウスの体重への影響は見られなかった。

実施例８４ − マウスにおける投与実験
全てのマウス実験は、ＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＡｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ（ＡＡＡＬＡＣ）または国立衛生研究所（ＮＩＨ）の実験動物福祉局（ＯＬＡＷ）によって示された指針に従って実施した。

ＡＰＳ６−４５の忍容性アッセイはＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）によって実施された。簡単に説明すると、５匹のメスの無胸腺ヌードマウス（５〜６週齢）に、ＡＰＳ６−４５を、０．１ｍｇ／ｋｇ／日で開始し用量を増加させて経口投与し、体重減少、嘔吐、及び病的状態などの臨床的苦痛の徴候について２日間観察した。用量を最大１６０ｍｇ／ｋｇ／日まで徐々に増加させたが、かかる徴候は観察されなかった。

ＡＰＳ６−４５の薬物動態学的アッセイは、ＭｅｄｉｃｉｌｏｎＰｒｅｃｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ（Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｃｈｉｎａ）によって実施された。２０ｍｇ／ｋｇのＡＰＳ６−４５をオスのＩＣＲマウス（５〜６週齢）に経口投与し、その血漿濃度を投与の０．２５、０．５、１、２、４、８、１０、及び２４時間後に測定した。投与後に処理に関連する臨床徴候は観察されなかった。

異種移植アッセイもＷａｓｈｉｎｇｔｏｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによって実施された。４０匹のメスのヌードマウス（５〜６週齢）にＴＴ細胞を皮下移植した。腫瘍量が約１２０ｍｍ^３に達した時点でマウスを無作為に４群に分け、それぞれの群に、週当たり５日、ビヒクル（水で４倍希釈したクレモファーＥＬ／エタノール（１：１））、または１０ｍｇ／ｋｇ／日のカボザンチニブ（ＬＣＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、ソラフェニブ（ＬＣＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、もしくはＡＰＳ６−４５を経口投与した。これらの投与によって、各薬物の臨床上意義のあるＡＵＣ及び最大血漿濃度が得られることが予想された（Ｂｅｎｔｚｉｅｎｅｔａｌ．， “ＩｎＶｉｔｒｏａｎｄＩｎＶｉｖｏＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ（ＸＬ１８４），ａｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＲＥＴ，ＭＥＴ，ａｎｄＶＥＧＦＲ２，ｉｎａＭｏｄｅｌｏｆＭｅｄｕｌｌａｒｙＴｈｙｒｏｉｄＣａｎｃｅｒ，” Ｔｈｙｒｏｉｄ．２３：１５６９−１５７７（２０１３）；Ｃｌａｒｋｅｔａｌ．， “ＳａｆｅｔｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｏｆｔｈｅＤｕａｌＡｃｔｉｏｎＲａｆＫｉｎａｓｅａｎｄＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＲｅｃｅｐｔｏｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＢＡＹ４３−９００６，ＩｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＡｄｖａｎｃｅｄ，ＲｅｆｒａｃｔｏｒｙｓｏｌｉｄＴｕｍｏｒｓ，” ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１１：５４７２−５４８０（２００５）；Ｋｕｒｚｒｏｃｋｅｔａｌ．， “ＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＸＬ１８４（Ｃａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ），ａｎＯｒａｌＴｙｒｏｓｉｎｅＫｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎＰａｔｉｅｎｔｓＷｉｔｈＭｅｄｕｌｌａｒｙＴｈｙｒｏｉｄＣａｎｃｅｒ，” Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２９：２６６０−２６６６（２０１１）；Ｌａｃｙｅｔａｌ．， “ＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆＣａｂｏｚａｎｔｉｎｉｂ，” Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．５６：４７７−４９１（２０１７）；Ｍｉｎａｍｉｅｔａｌ．， “ＰｈａｓｅＩａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃＳｔｕｄｙｏｆＳｏｒａｆｅｎｉｂ，ａｎＯｒａｌＭｕｌｔｉｋｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎＪａｐａｎｅｓｅＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＡｄｖａｎｃｅｄＲｅｆｒａｃｔｏｒｙＳｏｌｉｄＴｕｍｏｒｓ．，” ＣａｎｃｅｒＳｃｉ．９９：１４９２−１４９８（２００８）；Ｓｔｒｕｍｂｅｒｇｅｔａｌ．， “ＡＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｓｅＩＩＳｔｕｄｙｗｉｔｈＳｏｒａｆｅｎｉｂｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＰｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅＨｏｒｍｏｎｅ−ＲｅｆｒａｃｔｏｒｙＰｒｏｓｔａｔｅＣａｎｃｅｒ：ＡＳｔｕｄｙｏｆｔｈｅＣＥＳＡＲＣｅｎｔｒａｌＥｕｒｏｐｅａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＤｒｕｇＲｅｓｅａｒｃｈ−ＥＷＩＶ，” Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ９７：１４８０−１４８５（２００７）；Ｚａｒｒｉｎｋａｒｅｔａｌ．， “ＡＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＫｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒＳｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ，” ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６：１２７−１３２（２００９）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。統計的解析はＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．；ＬａＪｏｌｌａ，ＣＡ）を用いて実施した。

実施例８５ − ｐｔｃ＞ｄＲｅｔＭ９５５Ｔハエにおける類縁体の試験
２種類の臨床上認可されたキナーゼ阻害物質ソラフェニブ及びレゴラフェニブ（１−３１−１とも表示される）が最適用量で増進したレスキュー率は５％未満であった。化合物名と濃度（単位はμＭ）をｘ軸に表示する。ｐｔｃ＞ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}ハエを用いたこのアッセイにおいて、ｐａｔｃｈｅｄ（ｐｔｃ）プロモーターはいくつかの組織においてショウジョウバエＲｅｔ（ｄＲｅｔ^{Ｍ９５５Ｔ}）の発がん性変異体アイソフォームを駆動し、これによって成虫として羽化する前に致死に導かれる。幼虫は候補薬物を食べ尽くす。薬効（Ｙ軸）は、レスキューされた成虫の数（Ａ）を蛹の総数（Ｐ）で除することによって定量化される（図６８）。

実施例８６ − 考察
本明細書に記載の研究は、ショウジョウバエ遺伝学を薬化学及び計算化学と組み合わせて、合理的、段階的な方法で多重薬理学的薬物を開発するプラットフォームを明示している。研究は、臨床上重要であるにもかかわらず、臨床において著しい禁忌を示しているがん治療薬としてのＦＤＡ認可キナーゼ阻害物質ソラフェニブ（Ｈｅｓｃｏｔｅｔａｌ．， “ＰａｎｃｒｅａｔｉｃＡｔｒｏｐｈｙ−ＡＮｅｗＬａｔｅＴｏｘｉｃＥｆｆｅｃｔｏｆＳｏｒａｆｅｎｉｂ，” Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３６９：１４７５−１４７６（２０１３）；Ｈｅｓｓｅｌｉｎｋｅｔａｌ．， “ＴｈｅｒａｐｙｏｆＥｎｄｏｃｒｉｎｅＤｉｓｅａｓｅ：ＲｅｓｐｏｎｓｅａｎｄＴｏｘｉｃｉｔｙｏｆＳｍａｌｌ−ＭｏｌｅｃｕｌｅＴｙｒｏｓｉｎｅＫｉｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＴｈｙｒｏｉｄＣａｒｃｉｎｏｍａ：ＡＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＲｅｖｉｅｗａｎｄＭｅｔａ−Ａｎａｌｙｓｉｓ，” Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１７２：Ｒ２１５−２５（２０１５）；Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．， “Ｍｅｔａ−ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌＴｏｘｉｃｉｔｉｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＳｏｒａｆｅｎｉｂ，” Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．３６：３４４−３５０（２０１１）を参照されたく、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）に焦点を当てた。

本願は、ソラフェニブを改善した２つのステップを示している。第１のステップでは、動物全身の構造／活性関係研究により、分子内回転を拘束し、動物においてより最適な立体配座に固定されたソラフェログを得ることの重要性が確認された。第２のステップでは、動物全身の状況においてソラフェログに対する重要なプロターゲット及び特にアンチターゲットを特定した。例えば、ＲＡＦキナーゼに対する活性によって、ソラフェログを改善することができるレベルが制限されるという証拠が見出された。ＤＦＧ−ｏｕｔ立体配座におけるアロステリックポケットの相同性モデル化（図５６Ｄ）に基づいて、キャップ構造の修飾を拡大し、その結果、ＲＡＦキナーゼに対する活性の低下、ならびにＭＴＣに対して現在認可されている薬物であるカボザンチニブ及びバンデタニブよりも有効性の高い化合物が得られた。

重要なことに、ソラフェログの有効性は単にＲＥＴに対する活性に追従するものではなかった。例えば、ＡＰＳ６−４５は最も強力な有効性を示したが、最も弱いＲＥＴ結合を示した（図５６Ｃ）。インビボ遺伝学的スクリーニングによって、他のプロターゲット及びアンチターゲットもまたソラフェログによる全体的なネットワーク効果に寄与していることが明らかになった。インビトロアッセイによって、明確なレスキュー効果を有するソラフェログによるプロターゲットＤＤＲ２、ＡＢＬ２、ＬＣＫ、ＬＲＲＫ１、及びＨＣＫの漸進的な阻害が明らかになった（図６５Ｃ）。これらの結果は、これらのプロターゲットががん細胞の増殖及び浸潤を制御するという既報（Ｍｏｎｔｅｒｏｅｔａｌ．， “ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＳＲＣＦａｍｉｌｙＫｉｎａｓｅｓａｎｄＲｅｃｅｐｔｏｒＴｙｒｏｓｉｎｅＫｉｎａｓｅｓｂｙＤａｓａｔｉｎｉｂ：ＰｏｓｓｉｂｌｅＣｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｉｎＳｏｌｉｄＴｕｍｏｒｓ，” Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１７：５５４６−５５５２（２０１１）；Ｇｒｅｕｂｅｒｅｔａｌ．， “ＲｏｌｅｏｆＡＢＬＦａｍｉｌｙＫｉｎａｓｅｓｉｎＣａｎｃｅｒ：ｆｒｏｍＬｅｕｋａｅｍｉａｔｏＳｏｌｉｄＴｕｍｏｕｒｓ，” Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ１３：５５９−５７１（２０１３）；Ｒａｍｍａｌｅｔａｌ．， “ＤｉｓｃｏｉｄｉｎＤｏｍａｉｎＲｅｃｅｐｔｏｒｓ：ＰｏｔｅｎｔｉａｌＡｃｔｏｒｓａｎｄＴａｒｇｅｔｓｉｎＣａｎｃｅｒ，” Ｆｒｏｎｔ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７：５５（２０１６）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）と一致する。また注目すべきことに、アンチターゲットＭＫＮＫ１を減少させることによってＲａｓ経路活性が増加した。ＭＫＮＫ１はハエ及び哺乳動物の両方においてｅＩＦ−４Ｅをリン酸化する（Ｊｏｓｈｉｅｔａｌ．， “ＭｎｋＫｉｎａｓｅＰａｔｈｗａｙ：ＣｅｌｌｕｌａｒＦｕｎｃｔｉｏｎｓａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＯｕｔｃｏｍｅｓ，” ＷｏｒｌｄＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．５：３２１−３３３（２０１４）；Ａｒｑｕｉｅｒｅｔａｌ．， “ＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＬｋ６ＫｉｎａｓｅＣｏｎｔｒｏｌｓＰｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆＥｕｋａｒｙｏｔｉｃＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎＩｎｉｔｉａｔｉｏｎＦａｃｔｏｒ４ＥａｎｄＰｒｏｍｏｔｅｓＮｏｒｍａｌＧｒｏｗｔｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，” Ｃｕｒｒ．Ｂｉｏｌ．１５：１９−２３（２００５）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される）。既報において、ｅＩＦ−４Ｅ活性化因子ｍＴＯＲがＲａｓ経路の活性化を介してアンチターゲットとしても作用する場合があることが明らかになった（Ｄａｒｅｔａｌ．， “ＣｈｅｍｉｃａｌＧｅｎｅｔｉｃＤｉｓｃｏｖｅｒｙｏｆＴａｒｇｅｔｓａｎｄＡｎｔｉ−ＴａｒｇｅｔｓｆｏｒＣａｎｃｅｒＰｏｌｙｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，” Ｎａｔｕｒｅ４８６：８０−８４（２０１２）；Ｄｉｂｂｌｅｅｔａｌ．， “ＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍＴＯＲＣ１ｂｙＰＩ３ＫＳｉｇｎａｌｉｎｇ，” ＴｒｅｎｄｓＣｅｌｌＢｉｏｌ．２５：５４５−５５５（２０１５）、該文献は本記載をもってそれらの全体が参照により援用される。まとめると、このデータは、ＭＫＮＫ１、ｍＴＯＲ、ｅＩＦ−４Ｅ、及びその翻訳標的が、ＲＥＴ依存性がんにおける「アンチターゲット経路」を構成することを示唆している。

近年、がん治療薬における重要な発展は、焦点が単一の標的である精密治療薬に向かっての動きである。本願は、腫瘍内及び全身の状況の両方における細胞ネットワークに最適化された多重薬理学的薬物を生み出すための、代替的で補完的なアプローチ、効率的で安価なプラットフォームを提供する。このアプローチは、全身的または長期にわたる治療を行うことによって全身ネットワークに対する考慮が必要となる、及び創薬が困難であり且つ多額の費用を要することを明らかにすることができる、神経疾患ならびに心血管疾患などの他の疾患向けの創薬計画において有用であることが明らかな場合がある。

本明細書において、好ましい実施形態を詳細に図示及び説明してきたが、本発明の趣旨から逸脱することなく、様々な修正、追加、置換などを行うことができること、及び、それ故に、これらの修正、追加、置換などは添付の特許請求の範囲に規定される本発明の範囲内であるものと見なされることは当業者には明らかであろう。

Claims

以下の構造を有する式（Ｉ）

の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、酸化物、もしくは溶媒和物：
式中、
Ｒは、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群より選択され、ここで、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは任意で、Ｒ^１３でｎ回置換されていてもよく、
Ｒ^１はＨであり、
Ｒ^２はＨであるか、
または、Ｒ^１及びＲ^２が、Ｒ^１及びＲ^２が結合しているフェニル環と結合して、

を形成し、
Ｒ^３はＨもしくはハロゲンであり、
Ｒ^４はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^５はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^６はＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｘは、任意であり、且つ、存在する場合にはＮＨであり、
Ｙは

であり、
ＺはＣ（Ｒ^１２）もしくはＮであり、
Ｒ^７はＨもしくはＭｅであり、
Ｒ^８はＨもしくはＭｅであるか、
または、Ｒ^７及びＲ^８が、Ｒ^７及びＲ^８が結合している炭素原子と一緒になって、

を形成し、
Ｒ^９はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリル、−ＣＮ、もしくは

であり、
Ｒ^１０はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、もしくはＣ_３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ^１１はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、もしくはＣ_３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ^１２はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１３は、Ｒ^１３のそれぞれの場合において、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＣｌＦ_２、ＣＢｒＦ_２、ＣＩＦ_２、ＣＦ_３、Ｃ_２Ｆ_５、Ｃ_３Ｆ_７、Ｃ_４Ｆ_９、ＯＣＦ_３、及びヘテロシクリルからなる群より独立に選択され、且つ
ｎは１〜５であり、
但し、
ｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｘが存在せず、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｉｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｙが

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｖ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＦであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、Ｙが

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

であることができず、
ｖ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｘが存在せず、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、且つ
ｖｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができない。
Ｒが

であり、
ここで、
Ｖ^１がＣ（Ｒ^１４）またはＮであり、
Ｖ^２がＣＨまたはＮであり、
Ｖ^３がＣ（Ｒ^１５）またはＮであり、
Ｖ^４がＣ（Ｒ^１６）またはＮであり、
Ｖ^５がＣＨまたはＮであり、
Ｒ^１４がＨまたはハロゲンであり、
Ｒ^１５がＨまたはハロゲンであり、
Ｒ^１６が、ハロゲンで２〜１３回置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、且つ
ここで、Ｖ^１〜Ｖ^５の１つのみがＮである、
請求項１に記載の化合物。
Ｒ^１６が、フッ素で２〜１３回置換されたＣ_１〜Ｃ_６アルキルである、請求項２に記載の化合物。
Ｒ^１６が、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＣｌＦ_２、ＣＢｒＦ_２、ＣＩＦ_２、ＣＦ_３、Ｃ_２Ｆ_５、Ｃ_３Ｆ_７、及びＣ_４Ｆ_９からなる群より選択される、請求項２に記載の化合物。
Ｒ^１４がＦである、請求項２に記載の化合物。
Ｒ^３がＦである、請求項１に記載の化合物。
ＸがＮＨであり、且つ
Ｙが

である、
請求項１に記載の化合物。
からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
請求項１に記載の化合物及び担体を含む、組成物。
前記担体が薬学的に許容される担体である、請求項１０に記載の組成物。
以下の構造を有する式（Ｉ）

の化合物、またはその立体異性体、薬学的に許容される塩、酸化物、もしくは溶媒和物を対象に投与するステップであって、
式中、
Ｒは、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、−Ｎ（Ｃ_１〜６アルキル）_２、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群より選択され、ここで、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは任意で、Ｒ^１３でｎ回置換されていてもよく、
Ｒ^１はＨであり、
Ｒ^２はＨであるか、
または、Ｒ^１及びＲ^２が、Ｒ^１及びＲ^２が結合しているフェニル環と結合して、

を形成し、
Ｒ^３はＨもしくはハロゲンであり、
Ｒ^４はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^５はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^６はＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｘは、任意であり、且つ、存在する場合にはＮＨであり、
Ｙは

であり、
ＺはＣ（Ｒ^１２）もしくはＮであり、
Ｒ^７はＨもしくはＭｅであり、
Ｒ^８はＨもしくはＭｅであるか、
または、Ｒ^７及びＲ^８が、Ｒ^７及びＲ^８が結合している炭素原子と一緒になって、

を形成し、
Ｒ^９はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜６シクロアルキル、アリル、−ＣＮ、もしくは

であり、
Ｒ^１０はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、もしくはＣ_３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ^１１はＨ、Ｃ_１〜６アルキル、もしくはＣ_３〜６シクロアルキルであり、
Ｒ^１２はＨ、ハロゲン、もしくはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、
Ｒ^１３は、Ｒ^１３のそれぞれの場合において、Ｈ、ハロゲン、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、ＣＨ_２Ｆ、ＣＨＦ_２、ＣＣｌＦ_２、ＣＢｒＦ_２、ＣＩＦ_２、ＣＦ_３、Ｃ_２Ｆ_５、Ｃ_３Ｆ_７、Ｃ_４Ｆ_９、ＯＣＦ_３、及びヘテロシクリルからなる群より独立に選択され、且つ
ｎは１〜５であり、
但し、
ｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｘが存在せず、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｉｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｙが

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

であることができず、
ｉｖ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＦであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、Ｙが

であり、且つｎが２である場合、Ｒは

であることができず、
ｖ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、Ｘが存在せず、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができず、且つ
ｖｉ）Ｒ^１がＨであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^３がＨであり、Ｒ^４がＨであり、Ｒ^５がＨであり、Ｒ^６がＣＨ_３であり、ＺがＣＨであり、ＸがＮＨであり、且つＹが

である場合、Ｒは

であることができない、前記ステップ
を含む、対象におけるがんの治療方法。
前記式（Ｉ）の化合物が、

からなる群より選択される、請求項１２に記載の方法。
前記式（Ｉ）の化合物が、

からなる群より選択される、請求項１２に記載の方法。
前記投与するステップが、経口投与、局所投与、経皮投与、非経口投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、鼻腔内注入、腔内もしくは膀胱内注入、眼内投与、動脈内投与、病巣内投与、または粘膜への適用によって行われる、請求項１２に記載の方法。
前記対象が哺乳動物である、請求項１２に記載の方法。
前記対象がヒトである、請求項１６に記載の方法。