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JP2019506158A - 抗ｒｏｒ１抗体、ｒｏｒ１×ｃｄ３二重特異性抗体、及びそれらの使用法 - Google Patents

抗ｒｏｒ１抗体、ｒｏｒ１×ｃｄ３二重特異性抗体、及びそれらの使用法 Download PDF

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Abstract

本明細書では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する単離された抗体、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する抗原結合部位及びＣＤ３に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む二重特異性抗体、並びにそれらの使用法を提供する。

Description

本明細書では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する単離された抗体、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する抗原結合部位及びＣＤ３に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む二重特異性抗体、並びにそれらの使用法を提供する。
受容体型チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）は、受容体型チロシンキナーゼファミリーの１０６−ｋＤａメンバーである。構造的には、ＲＯＲ１受容体の細胞外ドメインは、３つの異なるドメイン（膜遠位免疫グロブリン様ドメイン、膜近位クリングルドメイン、及び介在フリッツルドドメイン）からなる。ＲＯＲ１欠損マウスに関する研究は、この受容体が胚形成中の肺分化において役割を果たすことを示唆するが、成人におけるその発現は厳しく制限されており、肺及び膵、並びに脂肪細胞及びＢ細胞系譜における発現は、低レベルである。正常な成人組織におけるＲＯＲ１の発現は厳重に調節されるが、血液系腫瘍及び充実性腫瘍の両方では高レベルであることが注目される。ＲＯＲ１は、通常、発達の初期段階に発現するが、腫瘍特異的なメカニズムによって活性化され、成人における疾患進行に寄与し得る。
ＲＯＲ１のリガンドは、ｗｎｔ５ａ及びＮＫＸ１−２であると考えられる。ｗｎｔ５ａは、ＲＯＲ１の細胞外部分においてフリッツルドドメインに結合することが示されており、トランスフェクト細胞では、正常細胞株及び肺腫瘍細胞株のＮＦ−κＢ活性及び増殖を調節することが示されている。ＲＯＲ１へのＮＫＸ１−２の結合は、キナーゼ依存性及びキナーゼ非依存性の両メカニズムを介して、肺癌細胞株の生存において役割を果たすことが示されている。ＲＯＲ１は、クリングルドメインを介してＥＧＦＲと相互作用することが示されており、この相互作用は、肺癌細胞株におけるアポトーシスを制御するシグナル伝達経路を調節する。卵巣癌では、ＲＯＲ１の発現は不良な予後と相関するが、肺癌については、ＲＯＲ１の発現と、臨床病期又は生存性の低下との関連は示されていない。更に、肺腫瘍細胞株のＲＯＲ１ ｓｉＲＮＡノックダウンは、インビトロでの生存性低下の原因となるが、原発性肺癌細胞でのＲＯＲ１の標的化が細胞死の増加をもたらすという証拠は存在しない。
本明細書では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体、又はその抗原結合フラグメントを開示し、この抗体及びその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｂ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｃ．配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｅ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｆ．配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｇ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｈ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｉ．配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｊ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｋ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｌ．配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｍ．配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｎ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｏ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｐ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は
ｑ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含み、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
更に、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体、又はその抗原結合フラグメントを提供し、この抗体及びその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｂ．配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｃ．配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｄ．配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｅ．配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｆ．配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｇ．配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｈ．配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｉ．配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｊ．配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｋ．配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｌ．配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｎ．配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｏ．配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｐ．配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｑ．配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７を含むＲＯＲ１上のエピトープに結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントを開示する。
本開示の単離された抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸分子、その核酸分子を含むベクター、及び単離された抗体又はその抗原結合フラグメントを発現する細胞を更に提供する。
ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントを開示する。この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｂ．配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｃ．配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｄ．配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｅ．配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｆ．配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｇ．配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｈ．配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｈ．配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｊ．配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｋ．配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｌ．配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｎ．配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｏ．配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
ｐ．配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｑ．配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本明細書では、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントを開示し、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７を含むＲＯＲ１上のエピトープに結合する。
単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体及びその二重特異性抗原結合フラグメントを開示する。いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、ａ）ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む、第１の抗原結合部位と、ｂ）ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む、第２の抗原結合部位と、を含む。ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する好適な第１の抗原結合部位には、
ａ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｂ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｃ．配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｄ．配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｅ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｆ．配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｇ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｈ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｉ．配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｊ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｋ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｌ．配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｍ．配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｎ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｏ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
ｐ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は
ｑ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含むものが挙げられ、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントでは、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有してよく、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、第１の重鎖（ＨＣ１）と、第２の重鎖（ＨＣ２）と、第１の軽鎖（ＬＣ１）と、第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含んでよく、ＨＣ１及びＬＣ１は、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。いくつかの態様では、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、ＨＣ１及びＬＣ１を含み、
ａ．ＨＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｂ．ＨＣ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｃ．ＨＣ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｄ．ＨＣ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｅ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｆ．ＨＣ１は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｇ．ＨＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｈ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｊ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｋ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｌ．ＨＣ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｍ．ＨＣ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｎ．ＨＣ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｏ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
ｐ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、又は
ｑ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ１は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有し、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの態様では、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、ＨＣ１及びＬＣ１を含み、
ａ．ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｂ．ＨＣ１は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｃ．ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｄ．ＨＣ１は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｅ．ＨＣ１は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｆ．ＨＣ１は、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｇ．ＨＣ１は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｈ．ＨＣ１は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｊ．ＨＣ１は、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｋ．ＨＣ１は、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｌ．ＨＣ１は、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｍ．ＨＣ１は、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｎ．ＨＣ１は、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｏ．ＨＣ１は、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
ｐ．ＨＣ１は、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｑ．ＨＣ１は、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。いくつかの実施形態では、ＨＣ２は、配列番号９０と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。
また、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体及びその二重特異性抗原結合フラグメントをコードする核酸分子、その核酸分子を含むベクター、並びにＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合フラグメントを発現する細胞を更に開示する。
癌を有する対象の治療法を提供し、この方法は、治療的に有効な量の、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のいずれか、又はその二重特異性抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
癌治療における、治療的に有効な量の、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のいずれか、又はその二重特異性抗原結合フラグメントの使用法、並びに癌治療用組成物の製造における、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のいずれか、又はその二重特異性抗原結合フラグメントの使用法を更に開示する。
要約、並びに以下の発明を実施するための形態は、添付の図面と併せて読むことで、更に理解される。本開示の単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法を説明する目的で、単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法の例示的な実施形態を示す。しかし、単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法は、開示する特定の実施形態に限定されるものではない。図面は、以下のとおりである。
種々の肺腫瘍細胞株（小細胞肺癌（ＮＣＩ−Ｈ１４１７）、ＮＳＣＬＣ腺癌（ＨＣＣ−８２７）、ＮＳＣＬＣ扁平上皮癌（ＳＫ−ＭＥＳ−１）、及び細気管支肺胞上皮癌（ＮＣＩ−Ｈ３５８８））における細胞表面ＲＯＲ１の発現を示す。０．５μｌの２Ａ２抗ＲＯＲ１クローン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号３５７８０６）を用いてフローサイトメトリー発現解析を行った。同濃度でｍＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４００１２０）の結合を用いてＭＦＩ値を正規化し、バックグラウンドに対する倍率変化を計算した。試料ごとに１回繰り返した。 ＩｇＧ４ ＰＡＡ分子として発現及び精製に進んだ、２４の抗ＲＯＲ１抗体のビニングを示す。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 ＩｇＧ４ ＰＡＡ分子として発現及び精製に進んだ、２４の抗ＲＯＲ１抗体のビニングを示す。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 ＩｇＧ４ ＰＡＡ分子として発現及び精製に進んだ、２４の抗ＲＯＲ１抗体のビニングを示す。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 ヒトＲＯＲ１のクリングルドメインバインダの交差競合データを示す。この実験では、標識化ＲＲ１Ｂ６９分子からのシグナルの代わりに、１μＭの競合ｍＡｂを用いた。 フローサイトメトリーにより評価した、ＨＣＣ８２７細胞に対する抗ＲＯＲ１抗体の結合親和性を示す。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 フローサイトメトリーにより評価した、ＨＣＣ８２７細胞に対する抗ＲＯＲ１抗体の結合親和性を示す。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 フローサイトメトリーにより評価した、ＨＣＣ８２７細胞に対する抗ＲＯＲ１抗体の結合親和性を示す。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 指定のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のインビトロ標的細胞殺傷データを示す。このデータは、クリングルドメインバイダが標的細胞の殺傷に最も効果を発揮したことを示唆する。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 指定のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のインビトロ標的細胞殺傷データを示す。このデータは、クリングルドメインバイダが標的細胞の殺傷に最も効果を発揮したことを示唆する。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 指定のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のインビトロ標的細胞殺傷データを示す。このデータは、クリングルドメインバイダが標的細胞の殺傷に最も効果を発揮したことを示唆する。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 指定のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体を用いて実行した、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）Ｔ細胞媒介性細胞毒性アッセイを示す。この実験では、改変ＳＫ−ＭＥＳ−１細胞を用いた。このデータは、クリングルドメインバイダが標的細胞の殺傷に最も効果を発揮したことを示唆する。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 指定のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体を用いて実行した、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）Ｔ細胞媒介性細胞毒性アッセイを示す。この実験では、改変ＳＫ−ＭＥＳ−１細胞を用いた。このデータは、クリングルドメインバイダが標的細胞の殺傷に最も効果を発揮したことを示唆する。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 指定のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体を用いて実行した、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ（登録商標）Ｔ細胞媒介性細胞毒性アッセイを示す。この実験では、改変ＳＫ−ＭＥＳ−１細胞を用いた。このデータは、クリングルドメインバイダが標的細胞の殺傷に最も効果を発揮したことを示唆する。（Ａ）Ｉｇドメインバインダ。（Ｂ）フリッツルドドメインバインダ。（Ｃ）クリングルドメインバインダ。 組み換えＲＯＲ１を用いてＢｉａｃｏｒｅによって得た（それぞれ左上パネル及び左下パネル）、及びＲＯＲ１を過剰発現するように遺伝子操作されたＨＥＫ２９３細胞を用いてＭＳＤ−ＣＡＴによって得た（それぞれ右上パネル及び右下パネル）、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、ＲＣＤＢ５、及びその親抗ＲＯＲ１抗体、ＲＲ１Ｂ６７の結合プロファイルを示す。ここに示すデータは、３回、又は４回以上の実験のうちの１回の例である。 組み換えＲＯＲ１を用いてＢｉａｃｏｒｅによって得た（それぞれ左上パネル及び左下パネル）、及びＲＯＲ１を過剰発現するように遺伝子操作されたＨＥＫ２９３細胞を用いてＭＳＤ−ＣＡＴによって得た（それぞれ右上パネル及び右下パネル）、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、ＲＣＤＢ５、及びその親抗ＲＯＲ１抗体、ＲＲ１Ｂ６７の結合プロファイルを示す。ここに示すデータは、３回、又は４回以上の実験のうちの１回の例である。 は、無胸腺ヌードマウスにおける混合インビボ研究を示す。このデータは、充実性腫瘍モデルでの用量依存効果を示唆する。 ＦｃγＲＩＩａに結合する抗ＲＯＲ１親ＲＲ１Ｂ６７及びＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５を示す。（Ａ）ｎ＝１；（Ｂ）ｎ＝２。 ＦｃγＲＩＩａに結合する抗ＲＯＲ１親ＲＲ１Ｂ６７及びＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５を示す。（Ａ）ｎ＝１；（Ｂ）ｎ＝２。 ＦｃγＲＩＩＩａに結合する抗ＲＯＲ１親ＲＲ１Ｂ６７及びＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５を示す。（Ａ）ｎ＝１；（Ｂ）ｎ＝２。 ＦｃγＲＩＩＩａに結合する抗ＲＯＲ１親ＲＲ１Ｂ６７及びＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５を示す。（Ａ）ｎ＝１；（Ｂ）ｎ＝２。 ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ／ＲＯＲ１クリングルの結晶構造に基づいた、ＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置及びヒトＲＯＲ１との相互作用を示す。（Ａ）ヒトＲＯＲ１の膜近位クリングルドメインに結合したＲＲ１Ｂ６７７ Ｆａｂの全体構造。参照用に、ＲＯＲ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の概略図を示す。（Ｂ）ＲＯＲ１クリングルドメインのＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置の概要。ヒトＲＯＲ１クリングルドメイン上の３つのジスルフィド結合及び１つのグリコシル化部位も示す。（Ｃ）ＲＯＲ１とＲＲ１Ｂ６７との直接接触を示す相互作用マップ。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格原子を指す。（Ｄ）ＲＯＲ１及びＲＲ１Ｂ６７の軽鎖と重鎖との境界面の近景。水素結合は破線で示す。 ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ／ＲＯＲ１クリングルの結晶構造に基づいた、ＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置及びヒトＲＯＲ１との相互作用を示す。（Ａ）ヒトＲＯＲ１の膜近位クリングルドメインに結合したＲＲ１Ｂ６７７ Ｆａｂの全体構造。参照用に、ＲＯＲ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の概略図を示す。（Ｂ）ＲＯＲ１クリングルドメインのＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置の概要。ヒトＲＯＲ１クリングルドメイン上の３つのジスルフィド結合及び１つのグリコシル化部位も示す。（Ｃ）ＲＯＲ１とＲＲ１Ｂ６７との直接接触を示す相互作用マップ。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格原子を指す。（Ｄ）ＲＯＲ１及びＲＲ１Ｂ６７の軽鎖と重鎖との境界面の近景。水素結合は破線で示す。 ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ／ＲＯＲ１クリングルの結晶構造に基づいた、ＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置及びヒトＲＯＲ１との相互作用を示す。（Ａ）ヒトＲＯＲ１の膜近位クリングルドメインに結合したＲＲ１Ｂ６７７ Ｆａｂの全体構造。参照用に、ＲＯＲ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の概略図を示す。（Ｂ）ＲＯＲ１クリングルドメインのＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置の概要。ヒトＲＯＲ１クリングルドメイン上の３つのジスルフィド結合及び１つのグリコシル化部位も示す。（Ｃ）ＲＯＲ１とＲＲ１Ｂ６７との直接接触を示す相互作用マップ。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格原子を指す。（Ｄ）ＲＯＲ１及びＲＲ１Ｂ６７の軽鎖と重鎖との境界面の近景。水素結合は破線で示す。 ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ／ＲＯＲ１クリングルの結晶構造に基づいた、ＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置及びヒトＲＯＲ１との相互作用を示す。（Ａ）ヒトＲＯＲ１の膜近位クリングルドメインに結合したＲＲ１Ｂ６７７ Ｆａｂの全体構造。参照用に、ＲＯＲ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の概略図を示す。（Ｂ）ＲＯＲ１クリングルドメインのＲＲ１Ｂ６７エピトープの位置の概要。ヒトＲＯＲ１クリングルドメイン上の３つのジスルフィド結合及び１つのグリコシル化部位も示す。（Ｃ）ＲＯＲ１とＲＲ１Ｂ６７との直接接触を示す相互作用マップ。ファンデルワールス相互作用は破線で示し、水素結合は実線であり、矢印は骨格原子を指す。（Ｄ）ＲＯＲ１及びＲＲ１Ｂ６７の軽鎖と重鎖との境界面の近景。水素結合は破線で示す。 ＲＲ１Ｂ６７のエピトープ残基及びパラトープ残基を示す。ＣＤＲ領域（Ｋａｂａｔ定義）並びにＩｇ様フリッツルドドメイン及びクリングルドメインには下線を引いた。エピトープザンキ残基及びパラトープ残基は、影付きである。ヒトＲＯＲ１及びＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂの細胞外領域の配列のみを示す。 ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５、及び従来技術の抗体（国際公開第２０１４１６７０２２（Ａ１）号、実施例３Ｃで公開）であり、Ｆｃを有し、ＲＯＲ１では二価、ＣＤ３では一価である、二重特異性（Ｆａｂ）２×（Ｆａｂ）抗体（簡略して「Ｅｎｇｍａｂ」抗体）によって活性化した、腫瘍細胞のリダイレクトされたＴ細胞殺傷を示す。（Ａ）ＲＣＤＢ５又はＥｎｇｍａｂ抗体のいずれかによる治療後の、プレート培養された細胞の総数に対する生肺腫瘍細胞の割合。（Ｂ）使用した最高抗体濃度（６．６７ｎＭ）における、ウェル当たりの生存腫瘍細胞の総数。（Ｃ）様々な抗体濃度における、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合によって示される、Ｔ（エフェクター）細胞の活性。 ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５、及び従来技術の抗体（国際公開第２０１４１６７０２２（Ａ１）号、実施例３Ｃで公開）であり、Ｆｃを有し、ＲＯＲ１では二価、ＣＤ３では一価である、二重特異性（Ｆａｂ）２×（Ｆａｂ）抗体（簡略して「Ｅｎｇｍａｂ」抗体）によって活性化した、腫瘍細胞のリダイレクトされたＴ細胞殺傷を示す。（Ａ）ＲＣＤＢ５又はＥｎｇｍａｂ抗体のいずれかによる治療後の、プレート培養された細胞の総数に対する生肺腫瘍細胞の割合。（Ｂ）使用した最高抗体濃度（６．６７ｎＭ）における、ウェル当たりの生存腫瘍細胞の総数。（Ｃ）様々な抗体濃度における、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合によって示される、Ｔ（エフェクター）細胞の活性。 ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５、及び従来技術の抗体（国際公開第２０１４１６７０２２（Ａ１）号、実施例３Ｃで公開）であり、Ｆｃを有し、ＲＯＲ１では二価、ＣＤ３では一価である、二重特異性（Ｆａｂ）２×（Ｆａｂ）抗体（簡略して「Ｅｎｇｍａｂ」抗体）によって活性化した、腫瘍細胞のリダイレクトされたＴ細胞殺傷を示す。（Ａ）ＲＣＤＢ５又はＥｎｇｍａｂ抗体のいずれかによる治療後の、プレート培養された細胞の総数に対する生肺腫瘍細胞の割合。（Ｂ）使用した最高抗体濃度（６．６７ｎＭ）における、ウェル当たりの生存腫瘍細胞の総数。（Ｃ）様々な抗体濃度における、ＣＤ２５＋Ｔ細胞の割合によって示される、Ｔ（エフェクター）細胞の活性。 ヘム癌細胞株におけるＲＯＲ１発現を示す。（Ａ）フローサイトメトリーにより平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表されたＲＯＲ１発現（ＭＣＬ／ＣＬＬは黒色バー、Ｂリンパ腫は灰色バー、ＭＭは破線バー）。対応するＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｉｎｕｓ Ｏｎｅ（ＦＭＯ）染色（白色バー）は、陰性対照として機能した。（Ｂ）ＭＡＶＥＲ−１細胞株（塗り潰されていないヒストグラム）及びＦＭＯ細胞株（塗り潰されたヒストグラム）における代表的なＲＯＲ１発現。 ヘム癌細胞株におけるＲＯＲ１発現を示す。（Ａ）フローサイトメトリーにより平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表されたＲＯＲ１発現（ＭＣＬ／ＣＬＬは黒色バー、Ｂリンパ腫は灰色バー、ＭＭは破線バー）。対応するＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｉｎｕｓ Ｏｎｅ（ＦＭＯ）染色（白色バー）は、陰性対照として機能した。（Ｂ）ＭＡＶＥＲ−１細胞株（塗り潰されていないヒストグラム）及びＦＭＯ細胞株（塗り潰されたヒストグラム）における代表的なＲＯＲ１発現。 フローサイトメトリーによる、ＭＣＬ細胞株におけるＲＯＲ１受容体密度（細胞当たりのＲＯＲ１分子の数）を示す。 フローサイトメトリーによる、初代凍結保存ＣＬＬ試料及びＭＣＬ試料でのＲＯＲ１発現を示す。（Ａ）リンパゲート内の腫瘍細胞の割合（％）。腫瘍細胞は、％ＣＤ１９＋ＣＤ５＋生細胞として定義した。（Ｂ）ＣＤ１９＋ＣＤ５＋腫瘍細胞のうちのＲＯＲ１＋細胞の割合（％）。（Ｃ）ＲＯＲ１＋集団で測定したＲＯＲ１ ＭＦＩ。（Ｄ）ＣＬＬ、ドナーＩＤ １１００２９３８６での代表的なＲＯＲ１発現。（Ｅ）ＭＣＬ、ドナーＩＤ １２０１３７１９０腫瘍細胞での代表的なＲＯＲ１発現。塗り潰されていないヒストグラムはＲＯＲ１、塗り潰されたヒストグラムはＦＭＯ対照。 フローサイトメトリーによる、初代凍結保存ＣＬＬ試料及びＭＣＬ試料でのＲＯＲ１発現を示す。（Ａ）リンパゲート内の腫瘍細胞の割合（％）。腫瘍細胞は、％ＣＤ１９＋ＣＤ５＋生細胞として定義した。（Ｂ）ＣＤ１９＋ＣＤ５＋腫瘍細胞のうちのＲＯＲ１＋細胞の割合（％）。（Ｃ）ＲＯＲ１＋集団で測定したＲＯＲ１ ＭＦＩ。（Ｄ）ＣＬＬ、ドナーＩＤ １１００２９３８６での代表的なＲＯＲ１発現。（Ｅ）ＭＣＬ、ドナーＩＤ １２０１３７１９０腫瘍細胞での代表的なＲＯＲ１発現。塗り潰されていないヒストグラムはＲＯＲ１、塗り潰されたヒストグラムはＦＭＯ対照。 フローサイトメトリーによる、初代凍結保存ＣＬＬ試料及びＭＣＬ試料でのＲＯＲ１発現を示す。（Ａ）リンパゲート内の腫瘍細胞の割合（％）。腫瘍細胞は、％ＣＤ１９＋ＣＤ５＋生細胞として定義した。（Ｂ）ＣＤ１９＋ＣＤ５＋腫瘍細胞のうちのＲＯＲ１＋細胞の割合（％）。（Ｃ）ＲＯＲ１＋集団で測定したＲＯＲ１ ＭＦＩ。（Ｄ）ＣＬＬ、ドナーＩＤ １１００２９３８６での代表的なＲＯＲ１発現。（Ｅ）ＭＣＬ、ドナーＩＤ １２０１３７１９０腫瘍細胞での代表的なＲＯＲ１発現。塗り潰されていないヒストグラムはＲＯＲ１、塗り潰されたヒストグラムはＦＭＯ対照。 フローサイトメトリーによる、初代凍結保存ＣＬＬ試料及びＭＣＬ試料でのＲＯＲ１発現を示す。（Ａ）リンパゲート内の腫瘍細胞の割合（％）。腫瘍細胞は、％ＣＤ１９＋ＣＤ５＋生細胞として定義した。（Ｂ）ＣＤ１９＋ＣＤ５＋腫瘍細胞のうちのＲＯＲ１＋細胞の割合（％）。（Ｃ）ＲＯＲ１＋集団で測定したＲＯＲ１ ＭＦＩ。（Ｄ）ＣＬＬ、ドナーＩＤ １１００２９３８６での代表的なＲＯＲ１発現。（Ｅ）ＭＣＬ、ドナーＩＤ １２０１３７１９０腫瘍細胞での代表的なＲＯＲ１発現。塗り潰されていないヒストグラムはＲＯＲ１、塗り潰されたヒストグラムはＦＭＯ対照。 フローサイトメトリーによる、初代凍結保存ＣＬＬ試料及びＭＣＬ試料でのＲＯＲ１発現を示す。（Ａ）リンパゲート内の腫瘍細胞の割合（％）。腫瘍細胞は、％ＣＤ１９＋ＣＤ５＋生細胞として定義した。（Ｂ）ＣＤ１９＋ＣＤ５＋腫瘍細胞のうちのＲＯＲ１＋細胞の割合（％）。（Ｃ）ＲＯＲ１＋集団で測定したＲＯＲ１ ＭＦＩ。（Ｄ）ＣＬＬ、ドナーＩＤ １１００２９３８６での代表的なＲＯＲ１発現。（Ｅ）ＭＣＬ、ドナーＩＤ １２０１３７１９０腫瘍細胞での代表的なＲＯＲ１発現。塗り潰されていないヒストグラムはＲＯＲ１、塗り潰されたヒストグラムはＦＭＯ対照。 インビトロでの全血細胞毒性アッセイにおけるＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）を示す。（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）を示す。Ｄ１−ドナー１０３４７；Ｄ２−ドナー１０２０７。 インビトロでの全血細胞毒性アッセイにおけるＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）を示す。（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）を示す。Ｄ１−ドナー１０３４７；Ｄ２−ドナー１０２０７。 インビトロでの全血細胞毒性アッセイにおけるＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）を示す。（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）を示す。Ｄ１−ドナー１０３４７；Ｄ２−ドナー１０２０７。 インビトロでの全血細胞毒性アッセイにおけるＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）を示す。（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）を示す。Ｄ１−ドナー１０３４７；Ｄ２−ドナー１０２０７。 インビトロでの全血細胞毒性アッセイにおけるＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）を示す。（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）を示す。Ｄ１−ドナー１０３４７；Ｄ２−ドナー１０２０７。 インビトロでの全血細胞毒性アッセイにおけるＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）を示す。（Ｄ）、（Ｅ）及び（Ｆ）は、それぞれ、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、及びＺ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）を示す。Ｄ１−ドナー１０３４７；Ｄ２−ドナー１０２０７。 ＰＢＭＣをエフェクター細胞として用いて、インビトロでの細胞毒性アッセイにおける、ＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）ＭＡＶＥＲ−１細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｂ）Ｚ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｃ）ＭＡＶＥＲ−１細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。（Ｄ）Ｚ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。Ｄ１−ドナーＭ７４４４；Ｄ２−ドナーＭ７２６７。 ＰＢＭＣをエフェクター細胞として用いて、インビトロでの細胞毒性アッセイにおける、ＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）ＭＡＶＥＲ−１細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｂ）Ｚ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｃ）ＭＡＶＥＲ−１細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。（Ｄ）Ｚ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。Ｄ１−ドナーＭ７４４４；Ｄ２−ドナーＭ７２６７。 ＰＢＭＣをエフェクター細胞として用いて、インビトロでの細胞毒性アッセイにおける、ＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）ＭＡＶＥＲ−１細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｂ）Ｚ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｃ）ＭＡＶＥＲ−１細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。（Ｄ）Ｚ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。Ｄ１−ドナーＭ７４４４；Ｄ２−ドナーＭ７２６７。 ＰＢＭＣをエフェクター細胞として用いて、インビトロでの細胞毒性アッセイにおける、ＭＣＬ株のＲＯＲ１×ＣＤ３媒介性殺傷を示す。（Ａ）ＭＡＶＥＲ−１細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｂ）Ｚ−１３８細胞における％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋細胞）。（Ｃ）ＭＡＶＥＲ−１細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。（Ｄ）Ｚ−１３８細胞におけるＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ球での％ＣＤ２５発現）。Ｄ１−ドナーＭ７４４４；Ｄ２−ドナーＭ７２６７。
本開示の単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法は、本開示の一部を形成する添付図面に関してなされる以下の詳細な説明を参照することにより、より容易に理解することができる。本開示の単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法は、本明細書に記載及び／又は図示した単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法に限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用する用語は、具体的な実施形態を例によって説明するためだけのものであり、請求項に記載の単離された二重特異性抗体、及び方法を制限することを意図しないことを理解されたい。
特別な記述がない限り、動作に関する可能なメカニズム又は形態、あるいは改善の理由についての説明は、説明のみを意図したものである。本開示の単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法は、提案されている動作に関するメカニズム又は形態、あるいは改善の理由の是非によって制限されない。
このテキスト全体にわたって、説明は、抗体及び当該抗体の使用法に言及する。本開示が抗体に関連する特徴又は実施形態について説明する、又は特許請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、抗体の使用法にも等しく適用可能である。同様に、本開示が抗体の使用法に関連する特徴又は実施形態について説明する、又は特許請求する場合、かかる特徴又は実施形態は、抗体にも等しく適用可能である。
値の範囲が表されている場合、別の実施形態においては、ある特定の値から、及び／又は他の特定の値までが含まれる。更に、範囲で記述される値に関する言及は、その範囲内のあらゆる値を含む。範囲はいずれも包括的であり、組み合わせが可能である。値が、先行詞「約」を用いて近似値として表現される場合、その特定の値は、別の実施形態を形成することが理解される。特定の数値に関する言及は、文脈上他に明記されない限り、少なくともその特定の値を含むものとする。
当然のことながら、明確にするために本明細書で別個の実施形態の文脈で説明する、本開示の単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供され得る。逆に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈で説明する、本開示の単離された抗体、単離された二重特異性抗体、及び方法の種々の特徴はまた、別個に若しくは任意のサブコンビネーションで提供され得る。
本明細書で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は複数を含むものとする。
本明細書及び特許請求の範囲を通して本明細書の諸態様に関する様々な用語が使用される。別途記載のない限り、そのような用語には、当該技術分野におけるそれらの通常の意味が与えられるものとする。その他の具体的に定義される用語は、本明細書に提供される定義と一致する様式で解釈されるものとする。
数値範囲、カットオフ、又は特定の値に言及するときに用いる場合、「約」という用語は、引用した値が、記載値から最大１０％変動し得ることを示すために用いる。したがって、「約」という用語は、規定値からの±１０％以下の変動、±５％以下の変動、±１％以下の変動、±０．５％以下の変動、又は±０．１％以下の変動を包含するために使用する。
「抗体」は、特に断らない限り、免疫グロブリンの全てのアイソタイプ（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＹ）を意味し、種々の単量体、多量体、及びキメラ型を含む。ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、及び抗体様ポリペプチド、例えば、キメラ抗体及びヒト化抗体が、「抗体」という用語に具体的に包含される。
「抗原結合フラグメント」又は「二重特異性抗原結合フラグメント」は、特定の抗原に対して結合親和性を示し得る、任意のタンパク質性構造体である。抗原結合フラグメントは、任意の既知の手法、例えば、酵素開裂、ペプチド合成、及び組み換え手法により提供されたものを含む。一部の抗原結合フラグメントは、親抗体分子の抗原結合特異性を保持しているインタクトな抗体の一部から構成される。例えば、抗原結合フラグメントは、特定の抗原に結合することが既知である抗体の、少なくとも１つの可変領域（重鎖若しくは軽鎖の可変領域のいずれか一方）、又は１つ若しくは２つ以上のＣＤＲを含んでもよい。好適な抗原結合フラグメントの例には、ディアボディ及び一本鎖分子、並びにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｃ、Ｆａｂｃ、及びＦｖ分子、一本鎖（Ｓｃ）抗体、個々の抗体軽鎖、個々の抗体重鎖、抗体鎖若しくはＣＤＲと他のタンパク質との間でのキメラ融合体、タンパク質スキャフォールド、重鎖単量体若しくは二量体、軽鎖単量体若しくは二量体、１本の重鎖と１本の軽鎖とからなる二量体、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント、国際公開第２００７０５９７８２号に記載された一価抗体、ヒンジ領域においてジスルフィド結合により連結された２つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント、Ｖ．ｓｕｂ．Ｈ及びＣ．ｓｕｂ．Ｈ１ドメインから本質的になるＦｄフラグメント；抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインから本質的になるＦｖフラグメント、ＶＨドメインから本質的になり、ドメイン抗体とも呼ばれる（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ．；２１（１１）：４８４〜９０）ｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４〜５４６（１９８９））；ラクダ若しくはナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５ Ｊａｎ．；５（１）：１１１〜２４）；単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）等が挙げられるが、これらに限定されない。全ての抗体アイソタイプが、抗原結合フラグメントを生成するのに使用されてもよい。加えて、抗原結合フラグメントは、対象となる所与の抗原に対する親和性を付与する方向にポリペプチドセグメントをうまく包含させ得る、非抗体タンパク質性フレームワーク、例えば、タンパク質スキャフォールドを含んでもよい。抗原結合フラグメントは、組み換え的に生成されてもよく、又はインタクトな抗体の酵素的若しくは化学的開裂により生成されてもよい。「抗体又はその抗原結合フラグメント」という表現は、所与の抗原結合フラグメントが、この表現内で参照された抗体の１つ又は２つ以上のアミノ酸セグメントを組み込んでいることを示すために使用されてもよい。
本明細書で、２つ以上の抗体又は抗原結合フラグメントの文脈において使用するとき、「〜と競合する」又は「〜と交差競合する」という用語は、２つ以上の抗体又は抗原結合フラグメントがＲＯＲ１への結合について競合する、例えば、本開示の実施例に記載したアッセイにおいてＲＯＲ１結合について競合することを示す。
「ＣＤ３」という用語は、ヒトＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体を意味する。ＣＤ３タンパク質マルチサブユニット複合体は、６つの区別できるポリペプチド鎖から構成される。これらは、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０４２３４）、２つのＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０７７６６）、及び１つのＣＤ３ζ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ２０９６３）を含み、Ｔ細胞受容体α及びβ鎖と会合する。「ＣＤ３」という用語は、特に断らない限り、細胞（Ｔ細胞を含む）により本来発現されているか、又はそれらのポリペプチドをコードする遺伝子若しくはｃＤＮＡによりトランスフェクションされた細胞上に発現され得る任意のＣＤ３変異体、アイソフォーム、及び種間ホモログを含む。
「有効量」又は「治療的に有効な量」は、必要とされる用量及び期間において、所望の治療結果を達成するのに有効な量を意味する。治療的に有効な量のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、個々の病態、年齢、性別及び体重等の因子、及び個々における所望の応答を引き出す抗体の能力に従って種々であってよい。治療的に有効な量はまた、抗体又は抗体部分の任意の毒性又は有害作用より、治療的に有益な作用が上回る量でもある。
「エピトープ」という用語は、抗体への特異的結合が可能なタンパク質決定因子を意味する。エピトープは、通常、分子の表面グルーピング、例えば、アミノ酸又は糖側鎖からなり、通常、特定の三次元構造特性並びに特定の荷電特性を有する。構造的及び非構造的エピトープは、後者ではなく前者に対する結合が、変性溶媒の存在下で損失するという点で区別される。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基と、結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、特異的に抗原に結合するペプチドにより効果的にブロックされるか、又は覆われるアミノ酸残基（すなわち、アミノ酸残基が、特異的に抗原に結合するペプチドのフットプリント内にある）とを含んでもよい。
抗体又は抗体フラグメントの文脈において使用されるとき、「免疫特異的」は、免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントによりコードされたドメインを介して、分子の混合集団を含有する試料中の他の分子に優先的に結合することなく、対象となるタンパク質の１つ又は２つ以上のエピトープに結合することを表す。典型的には、抗体は、表面プラズモン共鳴アッセイ又は細胞結合アッセイにより測定された場合、約１×１０−８Ｍ未満のＫｄで、同じ性質の抗原に結合する。「抗［抗原］抗体」（例えば、抗ＲＯＲ１抗体）等の語句は、列挙した抗体が列挙した抗原に特異的に結合することを伝達することを意味する。
「単離された」は、生物学的成分（例えば、抗体）が、これらの成分が本来存在する生物の他の生物学的成分、すなわち、他の染色体及び染色体外ＤＮＡ及びＲＮＡ、並びにタンパク質から、実質的に分離され、同他の成分とは別に生成され、又は同他の成分から離して精製されていることを意味する。したがって、「単離された」抗体は、標準的な精製方法で精製された抗体を含む。「単離された抗体」は、組成物の一部であり得、かかる組成物が抗体の本来の環境の一部ではない場合であっても単離されている。また、この用語は、宿主細胞中での組み換え発現により調製された抗体、並びに化学合成された抗体も包含する。本明細書で使用するとき、「単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント」は、種々の抗原特異性を有する他の抗体又は抗原結合フラグメントを実質的に含まない抗体又はその抗原結合フラグメントを意味することを意図している（例えば、ＲＯＲ１に特異的に結合する単離された抗体は、ＲＯＲ１以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。ただし、ＲＯＲ１のエピトープ、アイソフォーム、又は変異体に特異的に結合する単離された抗体は、例えば、他の種に由来する他の関連する抗原（例えば、ＲＯＲ１種間ホモログ）に対する交差反応性を有してもよい。
本明細書で使用するとき、「ｋｄ」（秒−１）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度定数を意味する。当該値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
本明細書で使用するとき、「ｋａ」（Ｍ−１秒−１）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度定数を意味する。
本明細書で使用するとき、「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離平衡定数を意味する。
本明細書で使用するとき、「ＫＡ」（Ｍ−１）という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の会合平衡定数を意味し、ｋａをｋｄで割ることにより得られる。
「対象」という用語は、ヒト及び非ヒト動物を意味し、全ての脊椎動物、例えば、哺乳類及び非哺乳類、例えば、非ヒト霊長類、マウス、ウサギ、ヒツジ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類を意味する。記載された方法の多くの実施形態において、対象はヒトである。
「ＲＯＲ１」（受容体型チロシンキナーゼ様オーファン受容体１）は、ＵｎｉＰｒｏｔアクセッション番号Ｑ０１９７３（ヒト）及びＱ９Ｚ１３９（マウス）を有する受容体型チロシンキナーゼファミリーの１０６−ｋＤａメンバーを指す。
「治療すること」又は「治療」は、損傷、病態、又は病状の減弱又は改善における、何らかの成功又は成功の兆候を指し、これには、症状の寛解、緩解、減少、病状を患者にとってより許容できるものにすること、変性又は減退速度を遅くすること、変性による最終的な衰弱を和らげること、対象の肉体的又は精神的健康を改善すること、あるいは生存期間の長さを延ばすこと等の、何らかの客観的又は主観的パラメータを含む。治療は、身体検査、神経学的検査、又は精神医学的評価の結果等客観的又は主観的パラメータに基づいて評価されてよい。
本明細書では、以下の略語を使用する：受容体型チロシンキナーゼ様オーファン受容体１（ＲＯＲ１）；小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）；循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）；細胞外ドメイン（ＥＣＤ）。
ＲＯＲ１特異性抗体及び抗原結合フラグメント
本明細書では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体及びその抗原結合フラグメントを開示する。本開示の単離された抗体又はその抗原結合フラグメントには、表２０に記載のものが挙げられる。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの実施形態では、重鎖は、配列番号１のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ６５、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号９のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号１１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号１２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ６６、又はその抗原結合フラグメントであり得る。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号１３のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号１４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号１５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号１６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号１３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ６７、又はその抗原結合フラグメントであり得る。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号１７のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又はそれから本質的になってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号１８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号２０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号１７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ６９、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号２１のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号２４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号２１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ７０、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号２５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号２９のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号２７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号２８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号３０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号３１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号３２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号２５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ７１、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号３３のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号３６のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号３４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号３５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号３７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号３８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号３３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ７２、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号３９のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号４１のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号４０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号４２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号４４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号３９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ７４、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号４５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号４６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号４７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号４８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号５０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号５２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号４５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ７６、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体及びその抗原結合フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号５６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又は抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号５３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ７７、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号６２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号６１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に有してよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ７８、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号６３のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号６４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号６５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号６３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ８２、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号６６のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号６７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号６８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号６９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号６６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ８３、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号７０のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号７１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号７２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号７０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ８４、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号７３のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号７４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号７５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号７７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号７８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号７３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ８５、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号７９のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号８１のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号８０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号８２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号７９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ８６、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、を含んでよい。いくつかの態様では、重鎖は、配列番号８４のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。また、軽鎖は、配列番号８７のアミノ酸配列を含んでよい、それからなってよい、又は本質的にそれからなってよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、
ａ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ１と、
ｂ．配列番号８５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ２と、
ｃ．配列番号８６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖ＣＤＲ３と、
ｄ．配列番号８８のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ１と、
ｅ．配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ２と、
ｆ．配列番号８９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖ＣＤＲ３とを含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＣＤＲとは別に、
ａ．配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である重鎖アミノ酸配列、及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である軽鎖アミノ酸配列、又は
ｂ．配列番号８４のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる重鎖、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる軽鎖、を含む重鎖及び軽鎖を更に含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＲ１Ｂ８８、又はその抗原結合フラグメントである。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）内でエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｉｇ様ドメインに結合してよい。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、フリッツルドドメインに結合してよい。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、クリングルドメインに結合してよい。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の領域に広がる残基３２４〜３８７（ＴＶＳＶＴＫＳＧＲＱＣＱＰＷＮＳＱＹＰＨＴＨＴＦＴＡＬＲＦＰＥＬＮＧＧＨＳＹＣＲＮＰＧＮＱＫＥＡＰＣＦＴＬＤＥＮＦＫＳＤＬＣＤ、配列番号９８）に結合してよい。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントのエピトープは、配列番号９８を含む。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントのエピトープは、配列番号９８から本質的になる。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントのエピトープは、配列番号９８からなる。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントのエピトープは、配列番号９８のアミノ酸配列と９０％、９５％、又は９９％同一である。
いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７を含むＲＯＲ１上のエピトープに結合してよい。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７から本質的になるＲＯＲ１上のエピトープに結合してよい。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７からなるＲＯＲ１上のエピトープに結合してよい。
また、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントを提供する。好適な参照抗体には、上記に開示した、単離された抗ＲＯＲ１抗体又はその抗原結合フラグメントのいずれかが挙げられる。いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号４９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号７９のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
いくつかの実施形態では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含んでよい。したがって、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
また、本明細書では、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントを提供し、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の残基３２４〜３８７（ＴＶＳＶＴＫＳＧＲＱＣＱＰＷＮＳＱＹＰＨＴＨＴＦＴＡＬＲＦＰＥＬＮＧＧＨＳＹＣＲＮＰＧＮＱＫＥＡＰＷＣＦＴＬＤＥＮＦＫＳＤＬＣＤ、配列番号９８）内のエピトープに結合する。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合し、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９８を含むエピトープに結合する。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合し、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９８から本質的になるエピトープに結合する。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合し、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９８からなるエピトープに結合する。いくつかの態様では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合し、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号９８のアミノ酸と９０％、９５％、又は９９％同一であるエピトープに結合する。
単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７を含むＲＯＲ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７から本質的になるＲＯＲ１上のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合してよく、この参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７からなるＲＯＲ１上のエピトープに結合する。いくつかの態様では、参照抗体又はその抗原結合フラグメントは、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる重鎖と、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、又はそれから本質的になる軽鎖と、を含む。
開示した抗ＲＯＲ１抗体又はその抗原結合フラグメントには、全てのアイソタイプである、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ、並びに４本鎖免疫グロブリン（Ｉｇ）構造の合成多量体が挙げられる。開示した抗体又は抗原結合フラグメントにはまた、雌鳥又はシチメンチョウの血清及び雌鳥又はシチメンチョウの卵黄中に一般的に見出されるＩｇＹアイソタイプが挙げられる。
開示した抗体又は抗原結合フラグメントはまた、Ｉｇサブクラスのいずれかに由来してよい。例えば、開示した抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の各アイソタイプに由来してよい。これらのサブタイプは、Ｆｃ領域のアミノ酸配列では９５％超の相同性を共有するものの、ヒンジ領域のアミノ酸組成及び構造では大きな相違を示す。Ｆｃ領域は、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を媒介する。ＡＤＣＣにおいて、抗体のＦｃ領域は、免疫エフェクター細胞、例えば、ナチュラルキラー及びマクロファージの表面上のＦｃ受容体（ＦｃｇＲ）に結合する。同免疫エフェクター細胞は、標的細胞の貪食又は溶解をもたらす。ＣＤＣにおいて、抗体は、標的細胞を、細胞表面における補体カスケードをトリガーすることにより殺傷する。本開示の抗体は、ＩｇＧアイソタイプのいずれかとの組み合わせで、記載した可変ドメインの特徴を有する抗体を含む。同ＩｇＧアイソタイプは、Ｆｃ配列が異なるエフェクター機能をもたらすために改変されている改変版を含む。
治療抗体の多くの用途について、Ｆｃ媒介性エフェクター機能は、作用のメカニズムの一部ではない。これらのＦｃ媒介性エフェクター機能は、オフメカニズムの毒性を引き起こすことにより、有害であるおそれがあり、安全性リスクを引き起こすおそれがある。エフェクター機能を改変することは、Ｆｃ領域を遺伝子操作して、ＦｃｇＲ又は補体因子への結合性を低下させることにより達成され得る。活性化（ＦｃｇＲＩ、ＦｃｇＲＩＩａ、ＦｃｇＲＩＩＩａ、及びＦｃｇＲＩＩＩｂ）及び阻害性（ＦｃｇＲＩＩｂ）ＦｃｇＲ又は補体の第１のコンポーネント（Ｃ１ｑ）へのＩｇＧの結合性は、ヒンジ領域及びＣＨ２ドメイン中に位置する残基により決まる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４に変異が導入されて、Ｆｃ機能を低下又はサイレンシングさせ得る。サイレンシング変異としては、ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）、ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）、ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）、ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）、又はＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）を挙げることができるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／又はＦ４０５Ｌ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及び／又はＲ４０９Ｋ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ−ＡＡ Ｆｃ−Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌを含んでよい。
本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントは、下記特性：（ａ）親Ｆｃと比較して低下したエフェクター機能、（ｂ）Ｆｃｇ ＲＩ、Ｆｃｇ ＲＩＩａ、Ｆｃｇ ＲＩＩｂ、Ｆｃｇ ＲＩＩＩｂ、及び／又はＦｃｇ ＲＩＩＩａに対する低下した親和性、（ｃ）Ｆｃｇ ＲＩに対する低下した親和性、（ｄ）Ｆｃｇ ＲＩＩａに対する低下した親和性、（ｅ）Ｆｃｇ ＲＩＩｂに対する低下した親和性、（ｆ）Ｆｃｇ ＲＩＩＩｂに対する低下した親和性、又は（ｇ）Ｆｃｇ ＲＩＩＩａに対する低下した親和性、のうちの１つ又は２つ以上を有するＦｃ領域を含んでよい。
抗ＲＯＲ１抗体及びその抗原結合フラグメントは、任意の種から組み換え手法により得ることができる。例えば、抗体又は抗原結合フラグメントは、マウス、ラット、ヤギ、ウマ、ブタ、ウシ、ニワトリ、ウサギ、ラクダ、ロバ、ヒト、又はそれらのキメラ版でもよい。ヒトへの投与において使用するために、非ヒト由来の抗体又は抗原結合フラグメントは、ヒトの患者への投与時に抗原性が低いように、遺伝的に又は構造的に改変することができる。
いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合フラグメントはキメラであってよい。本明細書で使用されるとき、「キメラ」という用語は、非ヒト哺乳類、げっ歯類、又は爬虫類の抗体アミノ酸配列に由来する少なくとも１つの可変ドメインの少なくとも一部の部分を有するが、抗体又はその抗原結合フラグメントの残り部分がヒトに由来する、抗体又はその抗原結合フラグメントを意味する。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化抗体であってよい。ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンから得られた最少配列を含有する、キメラ免疫グロブリン、その免疫グロブリン鎖、又はフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合部分配列）でもよい。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種（ドナー抗体）、例えば、マウス、ラット、又はウサギからの残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一般的には、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むこととなる。同可変ドメイン中、全て又は実質的に全てのＣＤＲ領域は、非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全て又は実質的に全てのフレームワーク領域は、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的には、ヒト免疫グロブリンのうち少なくとも一部を含んでもよい。
本明細書に記載した抗ＲＯＲ１抗体又はその抗原結合フラグメントは、約５×１０−７Ｍ未満、好ましくは、約５×１０−８Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を含む、ＲＯＲ１に対する結合親和性を有してよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載した抗ＲＯＲ１抗体又はその抗原結合フラグメントは、約５×１０−７Ｍ未満、好ましくは、約５×１０−８Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）を含む、ＲＯＲ１に対する結合親和性を有してよい。記載した抗ＲＯＲ１抗体又はその抗原結合フラグメントの親和性は、当技術分野において既知の各種の方法、例えば、表面プラズモン共鳴又はＥＬＩＳＡ系の方法により決定することができる。ＳＰＲにより親和性を測定するためのアッセイは、ＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００機器を用いて行われるアッセイを含む。この場合、このアッセイは、室温（例えば、２５℃又は２５℃付近）で行われる。ＲＯＲ１に結合可能な抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅセンサチップ上に、抗Ｆｃ抗体（例えば、ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異性抗体、Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製品番号１０９−００５−０９８）により、３００ＲＵ付近のレベルで捕捉され、続けて、５０μｌ／分の流量において、会合及び解離データが収集される。
記載した抗ＲＯＲ１抗体及びその抗原結合フラグメントに加えて、本開示の抗体及びその抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列も提供する。
ポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。ベクターは、発現ベクターであり得る。このため、本開示の抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする配列を含有する組み換え発現ベクターは、本開示の範囲内であると想到される。発現ベクターは、１つ又は２つ以上の追加配列を含有してもよい。同追加配列には、例えば、制御配列（例えば、プロモータ、エンハンサー）、選択マーカー、及びポリアデニル化シグナルが挙げられるが、これらに限定されない。広い各種の宿主細胞を形質転換するためのベクターは周知であり、プラスミド、ファージミド、コスミド、バキュロウイルス、バクミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、並びに、他の細菌、酵母、及びウイルスのベクターが挙げられるが、これらに限定されない。
また、本開示のベクターを発現する、発現可能な細胞も記載する。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）でもよい。本開示の抗体はまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体及び二重特異性抗原結合フラグメント
本明細書では、ＲＯＲ１及びＣＤ３に結合する、単離された二重特異性抗体（ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体）又はその二重特性抗原結合フラグメントを開示する。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、少なくとも、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位（ＲＯＲ１アーム）と、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位（ＣＤ３アーム）と、を有する。
単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ）ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む、第１の抗原結合部位と、
ｂ）ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む、第２の抗原結合部位と、を含んでよい。
ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、好適な第１の抗原結合部位には、上記に開示した、抗ＲＯＲ１抗体のいずれかが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、
ａ．配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｂ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｃ．配列番号１４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｄ．配列番号１８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｅ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｆ．配列番号２６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｇ．配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｈ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｉ．配列番号４６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｊ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｋ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｌ．配列番号６４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号６５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｍ．配列番号６７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｎ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号７２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｏ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、
ｐ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、又は
ｑ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３であって、Ｋａｂａｔに従って定義されるＣＤＲ、を有する。
ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有してよく、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＣＤ３Ｂ２１９に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、米国特許第８，２３６，３０８号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、米国特許出願公開第２０１０／０２６０６６８号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、同第２０１３／００１８１７４号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、欧州特許第２６４７７０７号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、米国特許出願公開第２０１２／０３２１６２６号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、国際公開第２０１２／１６２０６７号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、米国特許出願公開第２０１３／００６００１１号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、同第２０１３／００５８９３６号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、同第２０１３／００７８２４９号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、同第２０１３／００５８９３７号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、国際公開第２０１３／０６５７０８号に開示されるＣＤ３抗体に由来してよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）、ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）、ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）、ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）、又はＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）を挙げることができるが、これらに限定されないＦｃ領域内の変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／又はＦ４０５Ｌ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及び／又はＲ４０９Ｋ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ−ＡＡ Ｆｃ−Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／又はＦ４０５Ｌ変異を含んでよい。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号３５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号４８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号５６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号６５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号６７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号７２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号８０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
また、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントを提供し、これらは、
ａ．第１の重鎖（ＨＣ１）と、
ｂ．第２の重鎖（ＨＣ２）と、
ｃ．第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
ｄ．第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
ＨＣ１及びＬＣ１は、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、ＨＣ２及びＬＣ２は、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位はＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ａ．ＨＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｂ．ＨＣ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｃ．ＨＣ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｄ．ＨＣ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｅ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｆ．ＨＣ１は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｇ．ＨＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｈ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｊ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義され
ｋ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｌ．ＨＣ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｍ．ＨＣ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｎ．ＨＣ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｏ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、
ｐ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、又は
ｑ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、
ａ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｂ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｃ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｄ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｅ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｆ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｇ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｈ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｉ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｊ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｋ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｌ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｍ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｎ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｏ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｐ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、
ｑ．ＨＣ１及びＬＣ１であって、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であり、ＬＣ１は、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一である、又は
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、ＨＣ１及びＬＣ１、から形成される。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、
ａ．上記ａ〜ｑのいずれか１つの重鎖ＣＤＲ及び軽鎖ＣＤＲと、
ｂ．ＣＤＲとは別に、
ｉ．上記のａ．ｉ．〜ｑ．ｉ．のいずれか１つのＨＣ１及びＬＣ１、又は
ｉｉ．上記のａ．ｉｉ．〜ｑ．ｉｉ．のいずれか１つのＨＣ１及びＬＣ１を含む、重鎖及び軽鎖と、を含んでよい。
例えば、限定することを意図するものではないが、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、
配列番号１４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有するＨＣ１、並びに配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有するＬＣ１であって、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される、ＨＣ１及びＬＣ１、並びに、
ＣＤＲとは別に、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であるＨＣ１、及びＣＤＲとは別に、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるＬＣ１、を含んでよい。
ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位はＨＣ２及びＬＣ２から形成されてよく、ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有し、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位はＨＣ２及びＬＣ２から形成されてよく、ＨＣ２は、配列番号９０と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一であり、ＬＣ２は、配列番号９１と少なくとも９０％、９５％、又は９９％同一である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位はＨＣ２及びＬＣ２から形成されてよく、ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる。また、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、又はそれからなる。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号１４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号１６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号１７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号２１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号３０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号２５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号２９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号３３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号４２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号４６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号５０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号４９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号５３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号６７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号５のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号５４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８０のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第１の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、
ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、第１の抗原結合部位は、ＨＣ１及びＬＣ１から形成され、
ｉ．ＨＣ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ１は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ１は、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ１は、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ１は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ１は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、
ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、第２の抗原結合部位は、ＨＣ２及びＬＣ２から形成され、
ｉ．ＨＣ２は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる重鎖ＣＤＲ３を有し、ＬＣ２は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む、それから本質的になる、若しくはそれからなる軽鎖ＣＤＲ３を有する、
ｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含み、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９５％、若しくは９９％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
ｉｉｉ．ＨＣ２は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれからなり、ＬＣ２は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、それからなる、若しくはそれから本質的になる、第２の抗原結合部位と、を含んでよく、
ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに従って定義される。
本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約１００ｎＭ未満、約７５ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１５Ｍ未満、約１０ｎＭ未満、約７．５ｎＭ未満のＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜約１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜約７５ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜約５０ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜約３０ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜約２５ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜２０ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜約１５ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５ｎＭ〜１０ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約１０ｎＭ〜１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約１５ｎＭ〜１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約２０ｎＭ〜１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約２５ｎＭ〜１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約３０ｎＭ〜１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約５０ｎＭ〜１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定した、約７５ｎＭ〜１００ｎＭのＫＤでＲＯＲ１に結合してよい。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、下記変異：ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）；ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）；ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）；ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）；又はＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）、のうちの１つ又は２つ以上を有するＩｇＧに由来してよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／又はＦ４０５Ｌ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及び／又はＲ４０９Ｋ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位は、ＩｇＧ−ＡＡ Ｆｃ−Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌを含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、下記変異：ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）、ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）；ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）；ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）；又はＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）、のうちの１つ又は２つ以上を有するＩｇＧに由来してよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＡＡ（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ４ ＰＡＡ（Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ２ ＡＡ（Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＦＥＡ（Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｄ２６５Ａ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ ＦＥＳ（Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ）変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ１ Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及び／又はＦ４０５Ｌ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｆ４０５Ｌ、及び／又はＲ４０９Ｋ変異を含んでよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、ＩｇＧ−ＡＡ Ｆｃ−Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＦ４０５Ｌ変異を含んでよい。
いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、初代ヒトＴ細胞及び／又は初代カニクイザルＴ細胞上でＣＤ３εに結合してよい。いくつかの実施形態では、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位は、初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞及び／又は初代カニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞を活性化する。
いくつかの実施形態では、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、既知の親和性を有する標識化抗ＣＤ３抗体との結合の競合により決定した、５００ｎＭ未満、又は１００ｎＭ未満、又は２０ｎＭ未満（less that）の解離定数にて、ヒト又はカニクイザルのＴ細胞上でＣＤ３に結合可能である。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、一本鎖二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントであってよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、ＢＩＴＥ（Ｍｉｃｒｏｍｅｔ）であってよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異的抗原結合フラグメントは、ＤＡＲＴ（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ）であってよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｆｃａｂ及びＭａｂ２（Ｆ−ｓｔａｒ）であってよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、Ｆｃ改変ＩｇＧ１（Ｘｅｎｃｏｒ）であってよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、ＤｕｏＢｏｄｙ（Ｇｅｎｍａｂ）であってよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、ＴｅｔＢｉＡｂ（Ｍｅｒｃｋ）であってよい。
本発明の二重特異性抗体の調製方法には、国際公開第２００８／１１９３５３号、同第２０１１／１３１７４６号、ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ−Ｋｏｌｆｓｃｈｏｔｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ．２００７ Ｓｅｐ．１４；３１７（５８４４）：１５５４〜７）、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０５１３１４号、国際公開第２００５／０６１５４７号、米国特許出願公開第２０１４／０１７０１４８号、及び同第２０１６／０００９８２４号に記載されているものが挙げられる。
本開示のＲＯＲｌ×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントに加えて、記載したＲＯＲｌ×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントをコードするポリヌクレオチド配列を提供する。いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントのＨＣ１、ＨＣ２、ＬＣ１、又はＬＣ２をコードするポリヌクレオチドを提供する。記載したポリヌクレオチドを含むベクターも提供する。同様に、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントを発現する細胞を提供する。これらの細胞は、哺乳類細胞（例えば、２９３Ｆ細胞、ＣＨＯ細胞）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ７細胞）、酵母細胞、植物細胞、又は細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）でもよい。本開示のＲＯＲｌ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントはまた、ハイブリドーマ細胞により生成することができる。いくつかの実施形態では、細胞を培養することにより、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又は二重特異性抗原結合フラグメントを生成する方法を提供する。
本明細書では、ＲＯＲｌ×ＣＤ３二重特異性抗体又は二重特異性抗原結合フラグメントと、医薬的に許容される担体と、を含む医薬組成物を更に提供する。
癌の治療法
本明細書では、癌を有する対象の治療法を提供し、この方法は、治療的に有効な量の、上で開示したＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のいずれか及びその二重特異性抗原結合フラグメントを対象に投与することを含む。
癌の治療における、治療的に有効な量の、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体及びその二重特異性抗原結合フラグメントのいずれかの使用法も提供する。
本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体及びその二重特異性抗原結合フラグメントを使用して、癌細胞又はＲＯＲ１を発現する他の異常細胞の成長及び／又は増殖を阻害することができる。癌細胞の成長又は増殖を阻害するために、治療的に有効な量の、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のいずれか又はその二重特異性抗原結合フラグメントを投与することを含む、癌細胞の成長又は増殖を阻害する方法を提供する。
本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体及びその二重特異性抗原結合フラグメントを更に用いて、ＣＤ３を発現するＴ細胞をＲＯＲ１発現細胞に標的化することにより、癌細胞等ＲＯＲ１発現異常セルの殺傷を増強できる。本明細書では、治療的に有効な量の、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のいずれか又はその二重特異性抗原結合フラグメントを投与することを含む、Ｔ細胞をＲＯＲ１発現癌細胞にリダイレクトする方法を提供する。
いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、血液癌、乳癌、前立腺癌、膵癌、結腸癌、卵巣癌、腎癌、子宮癌、又は黒色腫等ＲＯＲ１発現癌である。ＲＯＲ１発現癌は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）又は小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）等肺癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、血液癌、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ、低リスク又は高リスク）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ、全てのサブタイプを含む）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、又は芽球性形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＤＰＤＣＮ）であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、乳癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、前立腺癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、膵癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、大腸癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、卵巣癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、腎癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、子宮癌であり得る。ＲＯＲ１発現癌は、黒色腫であり得る。
いくつかの実施形態では、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントは、医薬品組成物として対象に投与されてよい。したがって、癌治療用組成物の製造における、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合フラグメントのいずれかの使用法も開示する。
本明細書で提供した医薬組成物は、ａ）有効量のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントと、ｂ）不活性でも又は生理学的に活性でもよい、医薬的に許容される担体と、を含んでよい。本明細書で使用するとき、「医薬的に許容される担体」という用語は、生理学的に適合性である、任意かつ全ての溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤、及び抗真菌剤等を含む。適切な担体、希釈剤、及び／又は賦形剤の例には、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等のうち１種又は２種以上、並びにそれらの任意の組み合わせが挙げられる。多くの場合には、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含むのが好ましいであろう。具体的には、好適な担体の関連する例には、（１）Ｄｕｌｂｅｃｃｏのリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ約７．４、約１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミンを含有又は非含有、（２）０．９％生理食塩水（０．９％ｗ／ｖ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ））、及び（３）５％（ｗ／ｖ）デキストロースが挙げられ、抗酸化剤、例えば、トリプタミン及び安定化剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ ２０（登録商標）をも含有してよい。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物はまた、治療する特定の疾患に必要な、更なる治療薬を含有してよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント、及び更なる治療薬は、好ましくは、相互に悪影響を及ぼさない、相補性活性を有する。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２であってよい。好ましい実施形態では、更なる治療剤は、化学療法剤である。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物は、例えば、液体、半固体、固体の投薬形態等種々の形態であってよい。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療用途によって決まる。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物は、注射可能な、又は注入可能な液剤の形態であってよい。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物は、非経口的（例えば、静脈内、筋肉内、腹膜内（intraperinoneal）、皮下）に投与できる。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物は、静脈内にボーラスとして、又は一定期間の持続注入によって投与できる。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物は、筋肉内、皮下、関節内、滑液嚢内、腫瘍内、腫瘍周辺、病巣内、又は病変部周囲経路によって注入して、局所的治療効果及び全身治療効果を発揮できる。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物は、経口的に投与できる。
非経口投与用の無菌調製物は、抗体、又はその抗原結合フラグメントを、必要とされる量で適切な溶媒に包含させ、続けて、マイクロフィルター法により滅菌することにより調製され得る。溶媒又は媒体として、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、並びにこれらの組み合わせを使用することができる。多くの場合には、等張性剤、例えば、糖、ポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に含んでよい。これらの組成物はまた、補助剤、特に、湿潤剤、等張化剤、乳化剤、分散剤、及び安定化剤を含有してもよい。非経口投与用の無菌組成物はまた、使用時に滅菌水又は任意の他の注射用無菌媒体中に溶解されてもよい、無菌の固体組成物の形態に調製されてもよい。
錠剤、丸剤、粉末剤（ゼラチンカプセル剤、サッシェ剤）、又は顆粒剤等経口投与用の固体が使用されてよい。これらの組成物において、二重特異性抗体、又はその抗原結合フラグメントは、１つ、又は２つ以上の不活性な希釈剤、例えば、デンプン、セルロース、スクロース、ラクトース、又はシリカと、アルゴン流下において混合されてよい。これらの組成物はまた、希釈剤以外の物質、例えば、１つ又は２つ以上の滑材、例えば、ステアリン酸マグネシウム又はタルク、着色剤、コーティング（糖衣錠）、又はグレーズを含んでもよい。
経口投与用の液体組成物として、不活性な希釈剤、例えば、水、エタノール、グリセロール、植物油、又はパラフィンオイルを含有する、医薬的に許容され得る液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、及びエリキシル剤が使用されてよい。これらの組成物は、希釈剤以外の物質、例えば、湿潤剤、甘味料、増粘剤、着香剤、又は安定化製品を含んでもよい。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、二重特異性抗原結合フラグメント、又はそれを含む組成物の用量は、所望の効果、治療期間、及び用いる投与経路によって決まる。一般的には、医師は、適切な用量を、処置される対象の年齢、体重、及び同対象に固有の任意の他の要因に応じて決定するであろう。
処置及び使用の上記方法における投与計画は、最適な所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調節される。例えば、単一ボーラスを投与してもよく、いくつかの分離用量を、時間をかけて投与してもよく、又は用量を治療状況の緊急性によって示されるように、比例して減少又は増加させてよい。非経口組成物は、投与の容易性及び用量の均一性のための投与形態に製剤化されてもよい。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントはまた、併用療法において投与されてもよい。すなわち、治療される疾患又は病状に関連する他の治療剤と組み合わせられてもよい。いくつかの実施形態では、癌を治療する、又は予防する方法を提供し、この方法は、治療的に有効な量の、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントのいずれか、及び化学療法剤を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、他の治療剤は、シタラビン、アントラサイクリン、ヒスタミン二塩酸塩、又はインターロイキン２である。いくつかの実施形態では、癌を治療する、又は予防する方法を提供し、この方法は、治療的に有効な量の、本開示のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントのいずれか、及び放射線治療を対象に投与することを含む。放射線治療としては、放射線又は放射性医薬の関連する投与を含んでよい。放射線源は、処置される患者の外側又は内側のいずれか一方であってもよい（放射線処置は、例えば、放射線外部照射（ＥＢＲＴ）又は組織内照射療法（ＢＴ）の形態でもよい）。放射性元素には、例えば、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、及びインジウム−１１１が挙げられる。本開示の二重特異性ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特性抗原結合フラグメント、及び他の治療剤の併用投与は、任意の順序で、別々に、又は連続的であってよい。同時投与の場合、薬剤は、必要に応じて、１つの組成物又は別々の組成物として投与されてもよい。
本明細書に開示した実施形態のいくつかを更に説明するために、以下の実施例を提供する。これらの実施例は、例示を目的とするものであって、本開示の実施形態を制限するものではない。
一般法
ＨＥＫ ＥｘｐｉにおけるＲＯＲの一過性トランスフェクション及び発現
抗ＲＯＲ１抗体の反応性の確認（ＨＥＫ２９３Ｆ）、市販の抗ＲＯＲ１抗体の特性評価（ＨＥＫ２９３Ｆ及びＣＨＯ−Ｓ）、ＲＯＲ２クロススクリーンに対するファージ及びハイブリドーマパネルの試験、ＲＯＲ２−ＥＣＤ ＭＥＲＴＫに対するＲＯＲ１ ｍＡｂヒットの交差反応性の確認（ＣＨＯ−Ｓ）、ＲＯＲ１一過性トランスフェクション細胞への抗ＣＤ３及び抗ＲＯＲ１抗体の結合試験（ＨＥＫ２９３Ｆ）、並びにＲＯＲ２−ＥＣＤ ＭＥＲＴＫに対するＲＯＲ１ ｍＡｂヒットの交差反応性の確認（ＣＨＯ−Ｓ）のために、ＲＯＲ１細胞外ドメインｃ−Ｍｅｒ癌原遺伝子チロシンキナーゼ膜貫通ドメイン（ＲＯＲ１ ＥＣＤ ＭＥＲＴＫ ｔｍ）を一過性に細胞内で発現させた。ＲＯＲ１ ＥＣＤ ＭＥＲＴＫ ｔｍ（本明細書では、ＲＲ１Ｗ１と称する、配列番号９９）は、以下のアミノ酸配列を有する。
ＱＥＴＥＬＳＶＳＡＥＬＶＰＴＳＳＷＮＩＳＳＥＬＮＫＤＳＹＬＴＬＤＥＰＭＮＮＩＴＴＳＬＧＱＴＡＥＬＨＫＶＳＧＮＰＰＰＴＩＲＷＦＫＮＤＡＰＶＶＱＥＰＲＲＬＳＦＲＳＴＩＹＧＳＲＬＲＩＲＮＬＤＴＴＤＴＧＹＱＣＶＡＴＮＧＫＥＶＶＳＳＴＧＶＬＦＶＫＦＧＰＰＰＴＡＳＰＧＹＳＤＥＹＥＥＤＧＦＣＱＰＹＲＧＩＡＣＲＦＩＧＮＲＴＶＹＭＥＳＬＨＭＱＧＥＩＥＮＱＩＴＡＡＦＴＭＩＧＴＳＳＨＬＳＤＫＣＳＱＦＡＩＰＳＬＣＹＡＦＰＹＣＤＥＴＳＳＶＰＫＰＲＤＬＣＲＤＥＣＥＩＬＥＮＶＬＣＱＴＥＹＩＦＡＲＳＮＰＭＩＬＭＲＬＫＰＮＣＥＤＬＰＱＰＥＳＰＥＡＡＮＣＩＲＩＧＩＰＭＡＤＰＩＮＫＮＨＫＣＹＮＳＴＧＶＤＹＲＧＴＶＳＶＴＳＧＲＱＣＱＰＷＮＳＱＹＰＨＴＨＴＦＴＡＬＲＦＰＥＬＮＧＧＨＳＹＣＲＮＰＧＮＱＫＥＡＰＷＣＦＴＬＤＮＦＫＳＤＬＣＤＩＰＡＣＤＳＫＤＳＫＥＫＮＫＭＥＩＬＦＧＣＦＣＧＦＩＬＩＧＬＩＬＹＩＳＬＡＩＲＧＧＧＳＧＧＧＳ
ＲＯＲ２−ＥＣＤ ＭＥＲＴＫ（本明細書では、ＲＲ１Ｗ２と称する、配列番号１００）は、以下のアミノ酸配列を有する。
ＥＶＥＶＬＤＰＮＤＰＬＧＰＬＤＧＱＤＧＰＩＰＴＬＫＧＹＦＬＮＦＬＥＰＶＮＮＩＴＩＶＱＧＱＴＡＩＬＨＫＶＡＧＮＰＰＰＮＶＲＷＬＫＮＤＡＰＶＶＱＥＰＲＲＩＩＩＲＫＴＥＹＧＳＲＬＲＩＱＤＬＤＴＴＤＴＧＹＱＣＶＡＴＮＧＭＫＴＩＴＡＴＧＶＬＦＶＲＬＧＰＴＨＳＰＮＨＮＦＱＤＤＹＨＥＤＧＦＣＱＰＹＲＧＩＡＣＲＦＩＧＮＲＴＩＹＶＤＳＬＱＭＱＧＥＩＥＮＲＩＴＡＡＦＴＭＩＧＴＳＴＨＬＳＤＱＣＳＱＦＡＩＰＳＦＣＦＶＦＰＬＣＤＡＲＳＲＴＰＫＰＲＥＬＣＲＤＥＣＥＶＬＥＳＤＬＣＲＱＥＹＴＩＡＲＳＮＰＬＩＬＭＲＬＱＰＫＣＥＡＬＰＭＰＥＳＰＤＡＡＮＣＭＲＩＧＩＰＡＥＲＬＧＲＹＨＱＣＹＮＧＳＧＭＤＹＲＧＴＡＳＴＴＫＧＨＱＣＱＰＷＡＬＱＨＰＨＳＨＨＬＳＳＴＤＦＰＥＬＧＧＧＨＡＹＣＲＮＰＧＧＱＭＥＧＰＷＣＦＴＱＮＫＶＲＭＥＬＣＤＶＰＳＣＳＰＲＤＳＳＫＭＧＦＧＣＦＣＧＦＩＬＩＧＬＩＬＹＩＳＬＡＩＲＧＧＧＧＳＧＧＧ
ＨＥＫ ２９３Ｆ細胞を、６ｅ５細胞／ｍＬの密度でＦｒｅｅｓｔｙｌｅ（商標）２９３培地（Ｇｉｂｃｏ＃１２３３８）に入れ、１２５ｍＬ容通気式キャップ振盪フラスコ中で３０ｍＬの量にして、トランスフェクションの２４時間前に１３０ＲＰＭで振盪した。トランスフェクションの日に、Ｃｅｄｅｘによって細胞を計数し、８ｅ５細胞／ｍＬ〜１．２ｅ６細胞／ｍＬの密度及び９８％超の生存率を有すると決定した。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｍａｘ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１６４４７）を用いてトランスフェクションを行った。１回３０ｍＬのトランスフェクションについて、ある管で、３７．５μｌのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｍａｘ試薬を１ｍＬのＯｐｔｉＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ＃３１９８５）で希釈した。別の管で３７．５μｇのＤＮＡ（１８．７５μｇの標的及び１８．７５μｇのｐＡｄＶ Ａｎｔａｇｅ）を１ｍＬのＯｐｔｉＭＥＭに混入した。次いで、２本の管を合わせて混合し、バイオセーフティキャビネット内で３分間インキュベートしてから、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞のフラスコに混合物を直接添加した。
ＣＨＯ−Ｓトランスフェクションでは、ＣＨＯ−Ｓ細胞を、６ｅ５細胞／ｍＬの密度でＦｒｅｅｓｔｙｌｅ ＣＨＯ培地（Ｇｉｂｃｏ＃１２６５１）に入れ、１２５ｍＬ容通気式キャップ振盪フラスコ中で３０ｍＬの量にして、トランスフェクションの２４時間前に１３０ＲＰＭで振盪した。トランスフェクションの日に、Ｃｅｄｅｘによって細胞を計数し、８ｅ５細胞／ｍＬ〜１．２ｅ６細胞／ｍＬの密度及び９８％超の生存率を有すると決定した。ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｍａｘ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ＃１６４４７）を用いてトランスフェクションを行った。１回３０ｍＬのトランスフェクションについて、ある管で、３７．５μｌのＦｒｅｅＳｔｙｌｅ Ｍａｘ試薬を１ｍＬのＯｐｔｉＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ＃３１９８５）で希釈した。別の管で３７．５μｇのＤＮＡ（１８．７５μｇの標的及び１８．７５μｇのｐＡｄＶＡｎｔａｇｅ）を１ｍＬのＯｐｔｉＭＥＭに混入した。次いで、２本の管を合わせて混合し、バイオセーフティキャビネット内で３分間インキュベートしてから、ＣＨＯ−Ｓ細胞のフラスコに混合物を直接添加した。
ＨＥＫ Ｅｘｐｉ細胞における抗体の発現
Ｅｘｐｉ２９３Ｆトランスフェクションプロセス（Ｅｘｐｉ２９３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎカタログ番号Ａ１４６３５））を使用して、一過性発現を行った。Ｅｘｐｉ２９３Ｆ細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎカタログ番号Ａ１４５２７）は、３７℃、７％のＣＯ２、１３０ＲＰＭで、Ｅｘｐｉ２９３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎカタログ番号Ａ１４３５１−０１）にて成長させた。トランスフェクションの２日前に、細胞を７ｅ５細胞／ｍＬで分割した。トランスフェクション時点で細胞を計数し、少なくとも３０ｅ５細胞／ｍＬの濃度及び９５％超の生存率であることを確認した。３０ｍＬのトランスフェクションごとに、３０μｇのプラスミドＤＮＡをＯｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｓｅｒｕｍ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎカタログ番号３１９８５−０７０）内で混合し、総体積は１．５ｍとなった（１５μｇのｐＡｄｖａｎｔａｇｅ ＤＮＡ及び１５μｇの発現ベクターＤＮＡ（抗体では、１：３比のＨＣ：ＬＣ発現構築物）。次に、８１μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎカタログ番号Ａ１４５２５）を、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ培地で希釈し、総体積は１．５ｍＬになった。次いで、希釈したＤＮＡ及びＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ溶液をゆっくり混合し、室温で５分間インキュベートした。希釈したＤＮＡを希釈したＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３ Ｒｅａｇｅｎｔに添加し、ゆっくり混合し、室温で２０分間インキュベートした。インキュベーション後、次いで混合物を、１２５ｍＬ容振盪フラスコ内の細胞２５．５ｍＬに添加した。トランスフェクションの直後に、１５０μＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ １及び１．５ｍＬのＥｘｐｉＦｅｃｔａｍｉｎｅ ２９３ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒ ２を各フラスコ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎカタログ番号Ａ１４５２５）に添加した。トランスフェクションの５日後に、細胞上清を遠心分離により採取し、０．２μｍフィルターによって精製した。
抗体の精製
精製した培養上清内の抗体を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ（商標）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ樹脂によって採取し、１００ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）で溶出させた。抗体を含む画分をプールし、２．５ＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ７．２）でただちに中和してから、１×Ｄ−ＰＢＳ又は他の所望の緩衝液（指定がある場合）に入れ換えた。たんぱく質濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ分光光度計でＯＤ２８０を測定し、その吸光係数を用いて計算することにより決定した。抗体の純度及び均質性は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びＳＥ−ＨＰＬＣによって評価した。単量体がＳＥ−ＨＰＬＣ当たり９５％を下回ると、通常、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００を使用してＳＥＣ研磨工程を行った。
ＭＳＤ細胞結合
Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−Ｓｔａｎｄａｒｄ（ＳＡ−ＳＴＤ）プレートをウェル当たり５０μＬのアッセイ用緩衝液で５分間かけてブロッキングした。プレートをひっくり返してアッセイ用緩衝液を取り除き、ペーパータオルで軽くたたいた。アッセイ用緩衝液中１μｇ／ｍＬのビオチン化ＲＯＲ１の５０μＬをプレートの各ウェルに添加し、４℃で一晩インキュベートした。被覆プレートの各ウェルに、コーティング試薬を除去せずにアッセイ用緩衝液１５０μＬを添加して、１時間インキュベートした。プレートを洗浄用緩衝液で３回洗浄した。プレートをペーパータオルで軽くたたいて残留洗浄用緩衝液を取り除いた。アッセイ用緩衝液中５０μＬのヒト抗ＲＯＲ１ ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）Ａｂをプレートの各ウェルに添加し、周囲温度で〜１時間インキュベートした。プレートを洗浄用緩衝液で３回洗浄した。アッセイ用緩衝液中１．４μｇ／ｍＬのルテニウム標識化抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体５０μＬをプレートの各ウェルに添加した。プレートを、穏やかに撹拌しながら周囲温度で〜１時間インキュベートした。プレートを洗浄用緩衝液で３回洗浄した。プレートの各ウェルに、リードバッファーを１５０μＬ添加した。プレートの発光レベルを直ぐに、ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ６０００ａリーダーで読み取った。
細胞毒性のフローサイトメトリー分析
細胞毒性の評価は、フローサイトメトリーアッセイを用いて行った。このために、９６ウェル平底プレート内で２×１０４細胞／ウェルにてＧＦＰ標識化ＮＣＩ−Ｈ３５８標的細胞をプレート培養した。翌日、１×１０５の初代パンＴ細胞を、培地内の適切な二重特異性分子と共に各ウェルに添加した。分析前に、共培養物を３７℃で７２時間インキュベートした。細胞は、細胞解離用緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ）を用いて採取し、固定可能なＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ染料（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ）及び抗ＣＤ２５を用いて標識化した。これらのマーカーを用いて、ＧＦＰ＋細胞でのゲーティングにより標的細胞の死を評価し、ＧＦＰ−細胞でのゲーティングによりＴ細胞活性化を評価した。ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ ｉＱｕｅ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＨＴＦＣ）システムで試料を収集し、ＦｏｒｅＣｙｔソフトウェアを用いて分析した。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ６で計算した。非線形解析曲線フィッティングの許容基準は、１．４未満の信頼区間（ＣＩ）範囲であった。
ＳＰＲ結合親和性の研究
ＳＰＲ実験は、４チャネルのＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００光バイオセンサを用いて２５℃で行った。可溶性ＲＯＲ１を用いた実験では、高レベル（＞６０００応答単位（ＲＵ））のヤギ抗ヒトＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−００５−０９８）を用いて、ＣＭ５センサチップの４個のフローセルを固定化した。この工程に続いて、十分な結合応答を生じさせるために所望の捕捉レベルを得るまで（〜３５０ＲＵ）、フローセル２、３、及び４で対照抗体及び試験抗体を捕捉した。フローセル１は１つも抗体を採取せず、基準面として使用した。組み換えヒトＲＯＲ１は、４００ｎＭ〜５ｎＭ、３倍希釈の、ろ過し、脱記したＰＢＳＴＥ緩衝液（Ｂｉｏ−Ｒａｄ＃１７６−２７３０）中で調製した（図７Ａ（左）、図７Ｂ（左））。これらの溶液を、４つの全フローセルに５０μＬ／分の流量で注入し、１０分間の解離に続いて、会合を４分間モニターした。各相互作用後、グリシン（ｐＨ１．５）を用いてセンサチップ面を再生させて、以降のサイクルのために安定したベースラインを得た。
ＲＯＲ１との抗ＲＯＲ１抗体相互作用の結合速度論分析は、１：１のラングミュアモデルを用いたセンサーグラムの全体的な速度論フィッティングによって行った。
種々の細胞株でのＲＯＲ１の発現の分析
肺、結腸、前立腺、及びヘム癌細胞株におけるＲＯＲ１受容体の発現
ＲＯＲ１の発現と肺癌との関連を評価するために、７０の細胞株（腺癌及び扁平上皮癌由来のＮＳＣＬＣ、並びにＳＣＬＣ由来株等）でＲＯＲ１の発現を評価した。蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）に基づいたアプローチを用いて、ＲＯＲ２と交差反応しない、市販のフィコエリトリン（ＰＥ）結合モノクローナル抗ＲＯＲ１抗体（２Ａ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ＃３５７８０３／３５７８０４）の結合を評価した。ＰＥ結合ｍＩｇＧ１アイソタイプ対照の２倍を超える平均蛍光強度（ＭＦＩ）シグナルを示したとき、陽性として記録した。ＮＳＣＬＣ及びＳＣＬＣ由来株の両方を含む被験細胞株のかなりの割合（５４％）は、ＲＯＲ１の発現を示した（データは示さず）。陽性株内には、この検出法を用いて、高レベルのＲＯＲ１を発現した細胞株（ＮＣＩ−１１５５、ＬＵ１９０１Ｒ２、及びＮＣＩ−Ｈ４４６等）、中レベルのＲＯＲ１を発現した細胞株（ＮＣＩ−Ｈ１９７５及びＮＣＩ−Ｈ３５８等）、及び低レベル〜発現なしの細胞株（ＳＫＭＥＳ−１、ＮＣＩ−Ｈ５２０、及びＮＣＩ−Ｈ１４１７）の発現範囲が存在した。本明細書に開示したインビトロアッセイ及びインビボアッセイで用いるために、主に中間〜低発現の株をいくつか選択した。図１は、選択した肺癌細胞株のＲＯＲ１発現を示す。
結腸、前立腺、及び細胞株のＲＯＲ１発現も評価した。結腸及び前立腺のパネルは限定的であるが、結合及び機能アッセイで使用可能な高ＲＯＲ１発現を示すいくつかの株（ＨＴ−２９等）を特定した。
Figure 2019506158
 フローサイトメトリーによる、肺、結腸、及び前立腺由来腫瘍細胞株でのＲＯＲ１の発現。非固定試料でのＲＯＲ１の検出には、モノクローナル抗ＲＯＲ１抗体を用いた。この分析のために、同濃度でのｍＩｇＧ１アイソタイプ対照抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄカタログ番号４００１２０）の結合を用いてＭＦＩ値を正規化して、バックグラウンドに対する倍率変化を計算した。
ヘム癌細胞株におけるＲＯＲ１発現
製造者の指示書に従ってＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（Ａ６４７、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）に結合した、インハウスで生成した抗ＲＯＲ１モノクローナル抗体（ＲＲ１Ｂ１２１）を用いて、コンフルエントなマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、及び多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞をＲＯＲ１発現用に染色した。細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で２回洗浄し、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ（Ａｑｕａ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて、室温で１０分間染色した。Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色は、ＰＢＳで洗い流した。細胞は、染色されていないか、最終体積５０ｕＬのＦＡＣＳ染色用緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、３００ｎｇの抗ＲＯＲ１−Ａ６４７抗体を用いて、４℃で３０分間染色されたか、のいずれかとした。全ての染色工程を暗所で行った。非染色試料は、陰性対照（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｉｎｕｓ Ｏｎｅ（ＦＭＯ））として用いた。細胞は、ＰＢＳで２回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏサイトメーターで捕捉するために、染色用緩衝液中で再構成した。
ＲＯＲ１の発現は、選択した血液学的悪性疾患からの２５の細胞株で評価した（図１４）。被験ＭＣＬ株の全て及びＭＭ株の約半数で、特異的ＲＯＲ１発現を検出した。しかしながら、２つのＢリンパ腫株のみがＲＯＲ１発現を示した。
ヘム癌細胞株におけるＲＯＲ１受容体密度
フィコエリトリン（ＰＥ）に結合した抗ＲＯＲ１ ＭＡｂ（クローン２Ａ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を用いて、コンフルエントなマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞をＲＯＲ１発現用に染色した。細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で２回洗浄し、Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ（Ａｑｕａ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）用に室温で１０分間染色した。Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色は、ＰＢＳで洗い流した。細胞は、染色されていないか、最終体積５０ｕＬのＦＡＣＳ染色用緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、１ｕＬ／試料の抗ＲＯＲ１−ＰＥを用いて、４℃で３０分間染色されたか、のいずれかとした。全ての染色工程を暗所で行った。非染色試料は、陰性対照（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ Ｍｉｎｕｓ Ｏｎｅ（ＦＭＯ））として用いた。製造者の指示書に従ってＰＥ Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ Ｂｅａｄｓ（ＢＤ）を用いて、受容体密度を測定した。細胞は、ＰＢＳで２回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏサイトメーターで捕捉するために、染色用緩衝液中で再構成した。
ＲＯＲ１の発現を５つのＭＣＬ細胞株で評価し、ＡＢＣ法を用いて、受容体密度（細胞当たりのＲＯＲ１分子の数）を定量化した（図１５）。データは、細胞株当たり２回の独立した実験の平均（平均±ＳＤ）として示した。
正常なヒト組織におけるＲＯＲ１発現
４１０２ｓポリクローナル抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて、正常組織の広範なアレイを含む腫瘍マイクロアレイ（ＴＭＡ）でもＲＯＲ１陽性を評価した。この結果は、ＲＯＲ１発現は、乳房、結腸、腎、前立腺、及び子宮等一部の正常組織にも存在することを示唆した（表２）。とりわけ、分析した１２の肺試料のうち、２つがある程度の陽性を示し、１つは、ある程度の膜染色を示した。加えて、卵管部は、膜発現の一貫した証拠を示す唯一の組織であることが判明した（７つの試料のうち５つがこの染色プロファイルを示した）。全体としては、正常組織の相当数は、文献に記載されていない、ある程度の頻度で陽性を示した。このため、また、対照腫瘍細胞株で確認した、相当程度の非特異的染色のため、この抗体で見られる陽性の多くは、非特異的染色によるものであると仮定した。
Figure 2019506158
 †陽性試料の全てで膜染色
§陽性試料２つのうち１つで膜染色
ＩＨＣによる初代正常組織部でのＲＯＲ１の発現。ホルマリン固定の原発腫瘍試料でのＲＯＲ１の検出には、ウサギ抗ＲＯＲ１ポリクローナル抗体を用いた。染色は陽性又は陰性と記録し、病理医が細胞質又は膜質と判定した。
小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）患者の循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）におけるＲＯＲ１発現
有意な数の小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）細胞株がＲＯＲ１の発現を示しているため、この疾患を有する患者の原発腫瘍細胞で分析を行った。ＳＣＬＣは転移性が高いことを特徴とするので、患者は、かなり高い、末梢血中での循環腫瘍細胞（ＣＴＣ）の発生率を有する。このため、この種の肺悪性腫瘍におけるＲＯＲ１の発生率を分析できる。この分析のために、ＣｅｌｌＳａｖｅ管中のホルムアルデヒドの遅放性製剤を用いて新鮮血を固定した。ＲＯＲ１のフリッツルドドメインに結合する、２種類の検出抗体（２Ａ２及び抗ＲＯＲ１抗体ＲＲ１Ｂ７８（以下を参照））を試験した。対照ＲＯＲ１＋細胞株の全血への混合は、ＲＲ１Ｂ７８が２Ａ２よりも著しく敏感であることを示した。したがって、初代ＳＣＬＣ試料でのＣＴＣの分析は、ＲＲ１Ｂ７８を用いて行った。７つの試料からの末梢血試料の分析は、５人の患者が検出可能なＲＯＲ１ ＣＴＣを有することを示した。これらの検体のうち３つの試料は、ＲＯＲ１の発現を分析できる、１０、又は１１以上のＣＴＣを有した。３人の患者全員の腫瘍細胞は、７〜４５％の細胞で検出可能なＲＯＲ１を示した。このことは、ＲＯＲ１の発現は、一部のＳＣＬＣ腫瘍の特徴であることを示唆した（表３）。
Figure 2019506158
 §ＣＴＣは、サイトケラチン＋ＣＤ４５−表現型を有するものとして特定した。
ＳＣＬＣ患者の循環腫瘍細胞におけるＲＯＲ１の検出。患者の血液試料は、ＩＨＣによって、原発乳、結腸、肺、及び前立腺腫瘍（protate tumors）からＣｅｌｌＳａｖｅ採取管で固定した。ホルマリン固定の原発腫瘍試料におけるＲＯＲ１の検出には、ＲＲ１Ｂ７８を用いた。染色は、病理医が陽性又は陰性を記録した。発現は、全て細胞質と記録した。
慢性リンパ性白血病及びマントル細胞リンパ腫患者の腫瘍細胞におけるＲＯＲ１発現
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ、全てＢＭＭＣ）又はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ、２ドナーがＰＢＭＣ及びＢＭＭＣと一致）の患者の凍結末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）又は骨髄単核球（ＢＭＭＣ）をＣｏｎｖｅｒｓａｎｔ Ｂｉｏから購入した。試料は、３７Ｃで迅速に解凍し、１２ｍＬのＲＰＭＩ温培地（１０％のウシ胎児血清を含む）に移した。氷冷ＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中での洗浄及びろ過後、細胞を計数し、９６ウェルの丸底プレート内に１×１０６生細胞／ウェルで播種した。最初に、５０ｕＬのＮｅａｒＩＲ Ｌ／Ｄ ＩＲ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を用いて、製造者の手順に従って、暗所にて室温で１０〜１５分間細胞を染色した。氷冷ＰＢＳ及びＦＡＣｓ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ）での洗浄後、最終体積５０ｕＬのＢｒｉｌｌｉａｎｔ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中の抗体カクテル（抗ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗ＣＤ５−ＦＩＴＣ及び抗ＣＤ１９−ＰＥ−Ｃｙ７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗ＣＤ３８−ＰＥ、抗ＣＤ４０−ＢＶ６０５及び抗ＣＤ１３７−ＢＶ４２１（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を用いて、暗所にて４℃で３０分間細胞を染色した。ＦＡＣｓ緩衝液での洗浄に続いて、２００ｕＬのＦＡＣＳ緩衝液で細胞を再構成し、Ｆｏｒｔｅｓｓａ ＩＩサイトメーターで分析した。データ分析は、ＦｌｏｗＪｏ及びＰｒｉｓｍソフトウェアを用いて行った。腫瘍細胞は、生リンパ球のＣＤ１９＋ＣＤ５＋として特定した。
ＲＯＲ１は、腫瘍細胞の大部分のＣＬＬ試料の全てにおいて高度に発現し（ＭＦＩａｖｇ＝８５３）、試料内の％腫瘍細胞に依存しなかった（図１６）。ＲＯＲ１は、＞５０％腫瘍細胞において、ＭＣＬでは、ＣＬＬと比較して〜１．５倍低レベルで発現した（ＭＦＩａｖｇ＝５７５）（図１６）。
ファージパネルからの抗ＲＯＲ１ ｍＡｂの生成
ファージパニングとパネル選択
ＲＯＲ１結合Ｆａｂは、Ｓｈｉ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｄｅ ｎｏｖｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈ−ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｆａｂ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｏｎ ｐｈａｇｅ ａｓ ｐＩＸ ｆｕｓｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７，３８５〜３９６に記載のとおり、デノボｐＩＸファージディスプレイライブラリから選択した。簡潔に言うと、ヒト足場を多様化することによってライブラリが作製されたものであり、生殖系列ＶＨ遺伝子ＩＧＨＶ１−６９＊０１、ＩＧＨＶ３−２３＊０１、及びＩＧＨＶ５−５１＊０１が、Ｈ−ＣＤＲ３ループを介してヒトＩＧＨＪ−４ミニ遺伝子と組み換えられ、ヒト生殖系列ＶＬκ遺伝子Ｏ１２（ＩＧＫＶ１−３９＊０１）、Ｌ６（ＩＧＫＶ３−１１＊０１）、Ａ２７（ＩＧＫＶ３−２０＊０１）、及びＢ３（ＩＧＫＶ４−１＊０１）がＩＧＫＪ−１ミニ遺伝子と組み換えられて、完全なＶＨ及びＶＬドメインが構築された。ライブラリ設計の詳細は、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３９７、３８５〜９６、２０１０年に記載されている。３つの重鎖ライブラリを、４つの生殖系列軽鎖（バージョン２として知られる）と組み合わせるか、又は多様化した軽鎖ライブラリ（バージョン３として知られる）と組み合わせて、１２の特有のＶＨ：ＶＬの組み合わせを作製した。これらのライブラリは、その後、重鎖遺伝子に基づいて更に組み合わせて、ＲＯＲ１に対するパニング実験用の６つのライブラリを作製した。
Ｓｌｏｎｉｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈ突然変異生成技術によって、同一の重鎖（１〜６９、３〜２３、５〜５１）及び生殖系列軽鎖（Ａ２７、Ｂ３、Ｌ６、０１２）に基づく、更なるデノボｐＩＸライブラリを作製した。これらはファージライブラリとして作製し、重鎖遺伝子に基づいて組み合わせて、ＲＯＲ１に対するパニング実験用のライブラリを更に３つ作製した。
ライブラリは、ビオチン化ヒトＲＯＲ１−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃカタログ番号１３９６８−Ｈ０２Ｈ１）に対してパニングした。ビオチン化抗原を、ストレプトアビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ）で捕捉し、デノボｐＩＸ Ｆａｂライブラリーに１００ｎＭ又は１０ｎＭの最終濃度で曝露した。非特異的ファージをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中で洗い流し、結合したファージを、ＭＣ１０６１Ｆ’Ｅ．ｃｏｌｉ細胞の感染によって回収した。これらの細胞からファージを終夜増幅し、パニングを合計４回繰り返した。４回のバイオパニングに続いて、モノクローナルＦａｂを、ヒトＲＯＲ１Ｆｃへの結合について、次の２つの形式でスクリーニングした：１）ヒツジ抗ヒトＦＤによってＥＬＩＳＡプレート上でＦａｂを捕捉し、捕捉したＦａｂにビオチン化ＲＯＲ１−Ｆｃを添加し、その後、ストレプトアビジンＨＲＰを用いてｂｔＲＯＲ−Ｆｃを検出したＥＬＩＳＡ；２）ストレプトアビジンによってＥＬＩＳＡプレート上でｂｔＲＯＲ１−Ｆｃを捕捉し、捕捉した抗原にＦａｂ上清を添加し、ヤギＡｎｔｉＦａｂ’２：ＨＲＰを用いてＦａｂを検出したＥＬＩＳＡ。重鎖及び軽鎖可変領域において、いずれかの形式でｂｔＲＯＲ１−Ｆｃに対する、１０倍超のバックグラウンド結合を示すクローンをシーケンシングした。
ヒトＲＯＲ１−Ｆｃ結合に基づいて、デノボ選択から合計６９のクローンを選択した。６９のうちの６４のＦａｂ（標識化ＲＲ１Ｂ１−ＲＲ１Ｂ６４）は、ＩｇＧ２ｓｉｇｍａ／κ骨格にクローン化して全長の抗体を作製し、発現し、以下で更に特性化した。
ＲＯＲ１抗体の親和性成熟：
ＲＯＲ１抗体の親和性を成熟させるために、Ｓｌｏｎｉｎｇ Ｂｉｏｔｅｃｈ突然変異生成技術を用いて作製した軽鎖ライブラリを構成した。ＲＯＲ１クリングルドメインバインダの重鎖可変領域（ＲＲ１Ｂ６６、ＲＲ１Ｂ６７、ＲＲ１Ｂ６９、ＲＲ１Ｂ８２、ＲＲ１Ｂ８３、及びＲＲ１Ｂ８４（表９））を、この多様化したＶＬｋ３−１１ライブラリを含むｐＩＸファージミドベクターにクローン化した。発現し、ディスプレイされると、これらのファージライブラリを、ＲＯＲ１に対して厳しくパニングし、より高い親和性バインダを得た。
具体的には、ライブラリは、ビオチン化ヒトＲＯＲ１−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｃカタログ番号１３９６８−Ｈ０２Ｈ１）に対してパニングした。ビオチン化ＲＯＲ１を、ストレプトアビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ）で捕捉し、成熟ｐＩＸ Ｆａｂライブラリに１０ｎＭ又は１ｎＭの最終濃度で曝露した。非特異的ファージをＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ中で洗い流し、結合したファージを、ＭＣ１０６１Ｆ’Ｅ．ｃｏｌｉ細胞の感染によって回収した。これらの細胞からファージを終夜増幅し、パニングを合計３回繰り返した。３回のバイオパニングに続いて、モノクローナルＦａｂを、ヒトＲＯＲ１Ｆｃへの結合について、次の３つの形式でスクリーニングした：１）ヒツジ抗ヒトＦＤによってＥＬＩＳＡプレート上でＦａｂを捕捉し、捕捉したＦａｂにビオチン化ＲＯＲ１−Ｆｃを添加し、その後、ストレプトアビジンＨＲＰを用いてｂｔＲＯＲ−Ｆｃを検出したＥＬＩＳＡ；２）ストレプトアビジンによってＥＬＩＳＡプレート上でｂｔＲＯＲ１−Ｆｃを捕捉し、捕捉した抗原にＦａｂ上清を添加し、ヤギＡｎｔｉＦａｂ’２：ＨＲＰを用いてＦａｂを検出したＥＬＩＳＡ；３）Ｆａｂが、溶液中でｂｔ−ＲＯＲ−１、ａｎｔｉＦａｂ’２：ＨＲＰ、及びＳＡ−ａｃｒｉｄｉｎ（ＢＭＧ ＬａｂＴｅｃｈ Ｌｕｍｉｓｔａｒ Ｏｍｅｇａ）と結合できるようにされた、近接度に基づいた発光イムノアッセイ。重鎖及び軽鎖可変領域において、１０倍超のシグナル−バックグラウンド比を示したクローンをシーケンシングした。次いで、更なる特性化のために、一意であり、親ＶＬシーケンスに一致しないクローンを選択した。ヒツジ抗ヒトＦＤによってＥＬＩＳＡプレート上でＦａｂを捕捉し、捕捉したＦａｂにビオチン化ＲＯＲ１−Ｆｃを添加し、その後、ストレプトアビジンＨＲＰを有するｂｔ−ＲＯＲ−１−Ｆｃを検出したランキングＥＬＩＳＡでこれらのＦａｂを試験した。次いで、ｍＡｂに変換するために、また潜在的なＰＴＭリスクの不在及びＬＣシーケンスの多様性を考慮して、親Ｆａｂに対して向上した結合曲線を示したＦａｂを選択した。合計３６のクローンをＩｇＧ４−ＰＡＡ骨格にクローン化して、全長の抗体を作製し、発現させ、以下で更に特性化した（表２２を参照）。
ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を用いて２５℃でＳＰＲ実験を行い、親和性成熟抗ヒトＲＯＲ１抗体及び親ＲＲ１Ｂ６７のヒトＲＯＲ１への結合を測定した。０．００５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ中、流量３０μＬ／分で３００秒間、ＧＬＣ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ、カタログ番号１７６〜５０１１）の水平方向の全６リガンドチャネルでの、酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）中３０μｇ／ｍＬでのアミン結合によって、ヤギ抗ヒトＦｃ ＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１０９−００５−０９８）を直接固定した。固定密度は、平均約６０００応答単位（ＲＵ）であり、異なるチャネル間の変動は５％未満であった。垂直リガンド方向で０．５ｕｇ／ｍＬ（〜４００ＲＵ）にて、抗ヒトＦｃ ＩｇＧ表面で５つの異なるｍＡｂを捕捉した。６番目のリガンドチャネルは、リガンド表面対照を有さなかった。５種類の濃度の３倍希釈系列中３００ｎＭ濃度にてＣ末端ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）融合及びＨｉｓタグを有する組み換えヒトＲＯＲ１−ＥＣＤ（ＲＲ１Ｗ２７、インハウス）が検体として流入して、捕捉したｍＡｂに水平方向で結合する。緩衝液試料もまた、捕捉したｍＡｂの解離及びベースラインでの安定性をモニターするために注入した。Ａｇの全濃度について、１００μＬ／分の流量で３０分間解離をモニターした。１８秒パルスの０．８％リン酸を用いて、次の相互作用サイクルのために結合表面を再生した。応答データから次の２セットの基準データを減算することによって生データを処理した：１）Ａｇと空のチップ表面との間での非特異的相互作用を補正するためのスポット間シグナル；２）捕捉したｍＡｂの経時的な解離によるベースラインの揺れを補正するための緩衝液チャネルシグナル。ｍＡｂごとに全濃度で処理したデータを１：１の単純なラングミュア結合モデルに全体的にフィットさせて、速度論（ｋｏｎ、ｋｏｆｆ）及び親和性（ＫＤ）定数を引き出した。フィットの質を測定するために％Ｃｈｉ２／Ｒｍａｘ＜３０％を用いて任意基準を設定した。要約表３Ａ内で有効なフィットを示すもののみの定量的な速度論の結果を、定量的に信頼できると見なすべきである。
いくつかの実験では、ヒト血清アルブミン（Ｃ３４Ｓ）−６×Ｈｉｓ（ＲＲ１Ｗ２７）のＮ末端で融合したヒトＲＯＲ１の細胞外ドメインをコードする、哺乳類発現構築物（Ｕｎｉｐｒｏｔ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ＃Ｑ０１９７３｜残基３０〜４０６）を一過性トランスフェクションＥｘｐｉ２９３Ｆ細胞に用いた。トランスフェクションの６日後、遠心分離によって培養上清を採取した。ＲＲ１Ｗ２７は、固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）によってＥｘｐｉ２９３Ｆ上清から精製し、続いて、完全透析によって緩衝液を１Ｘ ＰＢＳに入れ換えた。
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抗ＲＯＲ１抗体細胞結合の特性化
ＲＯＲ１又はＲＯＲ２を発現したＣＨＯ−Ｓ細胞株に結合することにより、６４の抗ＲＯＲ１抗体を特性化した。１セットの結合試験に対して、トランスフェクトされたＣＨＯ−Ｓ細胞ＲＯＲ１（ＲＲ１Ｗ１）及びＲＯＲ２（ＲＲ１Ｗ２）並びに擬似対照ＣＨＯ−Ｓを準備した。ファージ由来ヒットの特性化の前に、フロー系分析に加えて、ウエスタンブロットを用いて、ＣＨＯ−Ｓ細胞でのＲＯＲ１の発現を確認した。
抗ＲＯＲ１抗体は、一過性トランスフェクションＣＨＯ−Ｓ細胞を用いて、トランスフェクションに続いて２４時間スクリーニングした。４種類の市販のモノクローナル抗ＲＯＲ１抗体（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓカタログ番号ＤＭＡＢ８６０６ＭＨ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（２Ａ２ Ａｂ）カタログ番号３５７８０３、３５７８０４；ＡＶＩＶＡ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙカタログ番号ＯＡＡＤ００３１６；ＡＣＲＩＳ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｉｎｃ．カタログ番号ＡＭ０６３９９ＳＵ−Ｎ）及びＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓからのヤギポリクローナル抗体（カタログ番号ＡＦ２０００）を、陽性対照として用いた。親及び擬似トランスフェクションＣＨＯ細胞、並びにＲＳＶアイソタイプ対照（Ｂ２３Ｂ３１）は、陰性対照として用いた。試験抗体の結合は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６７４で標識化されたポリクローナル抗ヒト抗体を用いて判定した。６４のうち６３の被検抗体が、ＲＯＲ１トランスフェクションＣＨＯ−Ｓ細胞に対するロバスト結合を示した。結合親和性は、被験物質の平均からの標準偏差（ＳＤ）を用いて測定した。平均−１ＳＤ未満の被験物質を低バインダと呼び、平均±１ＳＤの被験物質を中間バインダと呼び、平均＋１ＳＤ超の被験物質を強バインダと呼んだ。このアプローチを用いて、１２の低ＲＯＲ１バインダ、４４の中間ＲＯＲ１バインダ、７の強ＲＯＲ１バインダを特定した。この抗体セットは、フロー及びウエスタンブロットによって、内因性発現した腫瘍細胞株を用いて更に特性化した。
この実験では、一過性トランスフェクションＲＯＲ２ ＣＨＯ細胞も分析した。いずれの被験陽性対照抗体によっても、ＲＯＲ２発現は検出されなかった（データは示さず）。抗ＲＯＲ１抗体では、６４のうち１１の抗体が高ＲＯＲ２バインダとみなされた。ＲＲ１Ｂ３、Ｂ１１、Ｂ１４、Ｂ１５、Ｂ１７、Ｂ３２、Ｂ４３、Ｂ４６、Ｂ５１、Ｂ５５、及びＢ６１は、データに基づいて除外された。
ＲＯＲ１細胞外ドメインで一過性にトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｓ細胞への抗ＲＯＲ１抗体の結合（ＲＯＲ１−ＥＣＤ）を繰り返した。抗ヒト二次（ヤギ抗ヒトＩｇＧ ｖ６４７；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号Ａ２１４４５）を用いて、結合を可視化した。Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄからのモノクローナル抗ＲＯＲ１抗体（Ａ２Ａ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、陽性対照として３回実行した。親及び擬似トランスフェクションＣＨＯ細胞、並びにアイソタイプ対照（Ｂ２３Ｂ３１）は、陰性対照として実行した。抗体の結合は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７（ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ ６４７；Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号Ａ２１４４５）で標識化されたポリクローナル抗ヒト抗体を用いて読み取った。６４の被験抗体のうち、６２の抗体が、ＲＯＲ１−ＥＣＤトランスフェクション細胞の一部へのロバスト結合を示した。これは、陽性対照抗体でしたロバスト結合と相関した（データは示さず）。これは、前述の実験で特定した６４のうちの６３の被験抗体との比較である。前述の実験で良好な結合が判明したＲＲ１Ｂ３１は、この実験では結合しなかった。ＭＦＩ値を用いて、当初の実験とデータを比較し、抗体のランク付けを行った（表４）。２つの実験には、ランク付けの相違がある。これは恐らく、バインダが、ＭＦＩ値の非常に狭い範囲内で主に結合するという事実によるものであろう。しかしながら、研究内変動を前提とすると、データは、これらの抗体の大部分が、一過性トランスフェクション後にＣＨＯ細胞によって発現したＲＯＲ１に結合することを示唆する。
Figure 2019506158
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抗ＲＯＲ１抗体のパネルの特性化で用いるために、これらのＣＨＯ−Ｓトランスフェクション細胞に加えて、種々の細胞株を評価した。ＭＣＦ−７細胞は、ＲＯＲ１及びＲＯＲ２に関して陰性と判定した（データは示さず）。細胞株Ｕ２６６は、ＲＯＲ１に関して陰性及、ＲＯＲ２に関して陽性と判定した（データは示さず）。ＭＤＡ−ＭＢ２３１細胞は、ＲＯＲ１に関して強陽性であった（表５及び表６）。ＨＥＫ２９３は、ＲＯＲ２に関して陽性であることが判明した（データは示さず）。ＣＨＯ−Ｓは、ＨＥＫ２９３及び３Ｔ３細胞と比較して、比較的小さいシフトを示した。このことは、ウエスタンブロットによる特異的バンドの不在と関連している（データは示さず）。興味深いことに、より小さいバンドは、抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓカタログ番号＃ＡＦ２０００；ヤギポリクローナル）が、これらの細胞によって発現するタンパク質に結合し得ることを示す、ブロットに存在した。これが、ＲＯＲ１の切断形態であるか、異なるタンパク質であるかどうかは不明であり、更なる調査を要する。しかしながら、全細胞株で観察されるシフトは、このより小さい種への結合によって生じ得る。また、ＨＥＫ２９３細胞が、ＲＯＲ１で一過性にトランスフェクトされ、細胞表面での発現が検出され得ることを示した（データは示さず）。
２種類の乳房腫瘍細胞株（内因性ＲＯＲ１を発現するＭＤＡ−ＭＢ２３１乳房腫瘍細胞（表５及び表６）及びＲＯＲ１が陰性であるＭＣＦ−７）への結合について抗ＲＯＲ１抗体を評価した（データは示さず）。結合の可視化には、抗ヒト二次を用いた。４種類の市販のモノクローナル抗ＲＯＲ１抗体（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓカタログ番号ＤＭＡＢ８６０６ＭＨ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（２Ａ２ Ａｂ）カタログ番号３５７８０３、３５７８０４；ＡＶＩＶＡ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙカタログ番号ＯＡＡＤ００３１６；ＡＣＲＩＳ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｉｎｃ．カタログ番号ＡＭ０６３９９ＳＵ−Ｎ）及びＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓからのヤギポリクローナル抗体（カタログ番号ＡＦ２０００）を、陽性対照として用いた。６つのＲＳＶ対照（Ｂ２３Ｂ３１）のパネルを実行して、バックグラウンド結合を測定した。試験抗体の結合は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６７４で標識化されたポリクローナル抗ヒト抗体を用いて読み取った。マウス及びヤギ陽性対照抗体は、同一蛍光色素に結合された、適切なポリクローナル二次抗体を用いて検出した。試験した６４の抗体のうち、６１は、アイソタイプ対照の平均を超える結合を示した。３９の抗体は、最陽性対照抗体よりも良好な結合を示した。相対親和性は、被験物質の平均からの標準偏差（ＳＤ）を用いて測定した。平均超の被験物質を中間バインダ、平均＋１ＳＤを超える被験物質を高バインダと呼んだ。このアプローチを用いて、２４の中間ＲＯＲ１バインダ、７の強ＲＯＲ１バインダを特定した。
次に、ウエスタンブロットにより、ＲＯＲ１陽性細胞株、ＳＫＭＥＳ−１、及びＣＨＯ−Ｓ ＲＯＲ１への結合について抗ＲＯＲ１抗体を評価した（データは示さず）。ファージヒット上清を用いたＳＫＭＥＳ−１溶解液では、バンドは検出されなかった。ＲＯＲ１ポリクローナル抗体は、対照として機能した。ＲＯＲ１−ＣＨＯ−Ｓトランスフェクション溶解液中、複数のバンドを観察した（恐らくグリコシル化のため）。それぞれファージＲＲ１Ｂ３１、ＲＲ１Ｂ２０、ＲＲ１Ｂ５１、ＲＲ１Ｂ６１、ＲＲ１Ｂ２８において、約７０ｋＤａのバンドがウエスタンで観察された。この観察されたバンドは、ＲＯＲ１のグリコシル化形態と考えられる。ＳＫＭＥＳ−１溶解液中〜１３０ｋＤａの対照抗体を用いて、薄いバンドが観察された。このバンドは、全長ＲＯＲ１であると考えられる。
フローサイトメトリーを用いて、２種類の肺腫瘍細胞株（Ｈ３５８及びＳＫＭＥＳ−１）並びにマントル細胞癌株ＪＥＫＯ−１への結合について抗ＲＯＲ１抗体を評価した。これらの全株は、内因性ＲＯＲ１タンパク質の発現を示した。ＪＥＫＯ−１（マントル細胞株）は有意なバックグラウンドを示した（データは示さず）。本文献でＲＯＲ２の発現を示した神経芽腫株である、ＳＫ−ＳＨ５Ｙ細胞も実行した。ただし、これらの細胞のＲＯＲ１ステータスは不明である（データは示さず）。４種類の市販のモノクローナル抗ＲＯＲ１抗体（Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓカタログ番号ＤＭＡＢ８６０６ＭＨ；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（２Ａ２ Ａｂ）カタログ番号３５７８０３、３５７８０４；ＡＶＩＶＡ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙカタログ番号ＯＡＡＤ００３１６；ＡＣＲＩＳ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｉｎｃ．カタログ番号ＡＭ０６３９９ＳＵ−Ｎ）及びＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓからのヤギポリクローナル抗体（カタログ番号ＡＦ２０００）を、陽性対照として用いた。６つのＲＳＶアイソタイプ対照（Ｂ２３Ｂ３１）のパネルを用いて、バックグラウンド結合を測定した。試験抗体の結合は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６７４で標識化されたポリクローナル抗ヒト抗体を用いて読み取った。マウス及びヤギ抗ＲＯＲ１陽性対照抗体は、同一蛍光色素に結合された、適切なポリクローナル二次抗体を用いて検出した。
６４の被験抗ＲＯＲ１抗体のうち、過半数は、アイソタイプ対照の平均を超える結合を示した。少数の抗体は、陽性対照で観察される結合を超える結合を示した。ＲＲ１Ｂ４８は、ＲＲ１Ｂ４６、ＲＲ１Ｂ１１、ＲＲ１Ｂ５５、及びＲＲ１Ｂ５８のように、被験対照株にわたって一貫して良好な結合をし、ＳＫＭＥＳ−１、Ｈ３５８、及びＭＤＡ−ＭＢ２３１について、全て上位１０位内にランク付けされた（表６）。ＲＲ１Ｂ４８及びＲＲ１Ｂ１１は、ＲＲ１Ｂ４６、ＲＲ１Ｂ５５、及びＲＲ１Ｂ５８ほどには、ホルムアルデヒドベースの固定の影響を受けないことが判明した。これは、これらの２群がそれぞれ非固定及び固定に影響されるエピトープに結合することを示唆し得る。ＲＲ１Ｂ４８及びＲＲ１Ｂ１１は、標識化に先立って固定を必要とするＩＨＣで有用であり得る。全体としては、このデータは、過半数のパネルが内因性ＲＯＲ１に結合することを示唆し、また、親和性試験及びエピトープ結合に最良のバインダを選択できるようにする。固定データはまた、ＩＨＣのツール試薬（tool reagents）としての更なる試験用にいくつかの抗体を選択できるようにする。
Figure 2019506158
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ファージヒット抗体の大部分は、両ＲＯＲ１＋細胞株、ＳＫＭＥＳ−１、及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１に結合した。ファージヒットは、平均蛍光指数（ＭＦＩ）によって、まずＳＫＭＥＳでソートし、続いてＭＤＡ−ＭＢ−２３１でソートした。全体として、いずれの場合でも強度は良好に相関した。ファージヒットは、ＳＫＭＥＳ−１でソートしたか、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１でソートしたかに関わらず、高バインダ、中間バインダ、又は低若しくは非バイダとして大まかに分類できた。このアッセイ用の市販の抗体対照は、予想どおりには機能しなかった。同様の実験を、Ｈ３５８及びＳＨ−ＳＹ−５Ｙ細胞で行った。一般に、Ｈ３５８に対して良好なバインダであったファージヒットはまた、ＳＨ−ＳＹ−５Ｙに対して良好なバインダであり、不良なバインダであったファージヒットは、両細胞株にとって不良であった（データは示さず）。ファージヒットは、Ｈ３５８でのランク、又はＳＨ−ＳＹ−５Ｙでのランクのどちらでソートしたかに関わらず、概ね同一の「カテゴリ」に含まれた。つまり、高バインダは、両細胞株にとって概ね同一であり、中間バインダは、両細胞株にとって概ね同一であり、低又は非バインダも両細胞株にとって同一であった。加えて、結合ランキングは、他の被験ＲＯＲ１＋細胞株、ＳＫＭＥＳ−１、及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１で見られる傾向に概ね従った。
ＲＯＲ１ ＥＣＤドメインによるパネルのビニング
ファージ由来の抗ＲＯＲ１抗体の初期パネルを特性化するために、主要試薬として、Ｆｃ融合タンパク質セットを作製した（ＲＲ１Ｗ４ ＩｇＣ２ドメイン、ＲＲ１Ｗ５フリッツルドドメイン、及びＲＲ１Ｗ６クリングルドメイン）。この実験では、ＭＳＤによって、これらＦｃ融合タンパク質への各ｍＡｂの結合を実行した。簡潔に言うと（Breifly）、Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）ＨｉｇｈＢｉｎｄプレート（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）上で５μｌの１０μｇ／ｍＬのＲＯＲ１ ＥＣＤドメイン構築物（ＲＲ１Ｗ４ ＩｇＣ２ドメイン、ＲＲ１Ｗ５フリッツルドメイン、及びＲＲ１Ｗ６クリングルドメイン）を２時間吸収させ、１５０μｌの０．１Ｍ ＨＥＰＥＳで３回洗浄した。プレートは、５％のＢＳＡ緩衝液で、４℃で一晩遮断した。翌日、抗ＲＯＲ ｍＡｂ上清の添加に備えて、プレートを３回洗浄した。各変異体に２５μｌの１０μｇ／ｍＬ ｍＡｂ上清を添加し、試料を、穏やかに振盪させながら室温で２時間インキュベートした。プレートを３回洗浄してから、２５μｌの２０ｎＭ Ｒｕ標識化抗ヒトκ鎖（クローン番号ＳＢ８１ａ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）を各ウェルに添加して、種々のＲＯＲ１ドメイン構築物へのｍＡｂの結合を検出した。穏やかに振盪させながら室温で１時間インキュベートした。ドメイン変異体を、２０ ｎＭのＲｕ標識抗ヒトκ鎖、及び対照として２００ｎＭの市販の抗ＲＯＲ１（ＭＡＢ２０００；クローン番号２９１６０８、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と混合した。次に、プレートをＨＥＰＥＳ洗浄用緩衝液で３回洗浄した。各ウェルにＭＳＤ読み取り用緩衝液（１５０μｌ）を添加し、次いで、ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ６０００（ＭＳＤ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）を用いてプレートを分析した。
ビニング評価の結果は、ｍＡｂの一貫したビニングを示しており、以降の分析でもこれを用いた。フリッツルド及びクリングルドメインの選択的結合が強いことが判明した。ＩｇＣ２結合に着目すると、この結合は全体的に弱い。ＲＲ１Ｂ４６及びＲＲ１Ｂ５５は、平均的なＩｇＣ２バインダよりも明らかに良好と考えられる。分子ＲＲ１Ｂ０１、ＲＲ１Ｂ２０は、ＲＯＲ１又はＲＯＲ２タンパク質のいずれかにも明らかに結合なかった。表７では、第１、２、及び３列は、評価のためにまとめて分類されたｍＡｂセットを指す。表７は、抗ＲＯＲ１抗体のパネルが、ＲＯＲ１のＥＣＤの３ドメインにわたって、真っ二つに分割されたことを示す。
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 ６４抗ＲＯＲ１抗体のセットのビニングデータの集計により、３つの各細胞外ドメインに対する抗体を特定した。Ｉｇ様ドメイン（ＩｇＣ２−Ｆｃ）、フリッツルドドメイン（Ｆｚ−ＦＣ）、及びクリングル（Ｋｚ−Ｆｃ）に結合する分子を特定した。この分析では、２つの分子がＲＯＲ１に結合しないことが判明した。
Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）によって、ＲＯＲ１−Ｆｃ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）及びＲＯＲ２−Ｈｉｓ（Ｏｒｉｇｅｎｅ）タンパク質へのファージ由来のパネルの結合を評価する実験も行った。分子ＲＲ１Ｂ４３、ＲＲ１Ｂ４５、及びＲＲ１Ｂ５５は、低レベルのＲＯＲ２結合を示し、ＲＲ１Ｂ１１、ＲＲ１Ｂ４４、ＲＲ１Ｂ４６は、測定可能なＲＯＲ２結合を有した（データは示さず）。分子ＲＲ１Ｂ３６は潜在的なＲＯＲ２バインダとして特定され、ＲＲ１Ｂ２５は非常に低レベルのＲＯＲ２結合を有した。ＣＨＯ−ＲＯＲ２細胞への結合データとの比較は、一部の重複（太字）を示唆する：ＲＲ１Ｂ３、Ｂ１１、Ｂ１４、Ｂ１５、Ｂ１７、Ｂ３２、Ｂ４３、Ｂ４６、Ｂ５１、Ｂ５５、及びＢ６１（データは示さず）。
結合ドメインを特定するために、ＲＯＲ１及びＲＯＲ２ ｗｔ、単一ドメインＦｃ融合タンパク質、並びにＲＯＲ１／ＲＯＲ２ドメイン交換変異体への結合能力について、一連の抗体上清を試験した。実験では、ＲＯＲ１−ＥＣＤ−Ｆｃ及びＲＯＲ２−ＥＣＤ−Ｆｃ結合データを、ＩｇＣ２ドメインをＲＯＲ１ ＩｇＣ２ドメインに代えたＲＯＲ２ ＥＣＤのバージョン（ＩｇＣ２（１）−Ｆｚ−（２）−Ｋｇ（２）−Ｆｃ）及びＲＯＲ２ ＩｇＣ２ドメインが提示される、類似のドメインを再構成したキメラＥＣＤ（ＩｇＣ２（２）−Ｆｚ（１）−Ｋｒ（２）−Ｆｃ）と比較した。これらの実験では、ＲＯＲ１−ＥＣＤ−Ｆｃ結合がＩｇＣ２（１）キメラと相関することが予想される。同様に、ＲＯＲ２−ＥＣＤ−Ｆｃ結合は、ＩｇＣ２（２）キメラと相関することが予想される。予想されるペアリングは、いくつかの実験で観察した：ＲＲ１Ｂ２６、ＲＲ１Ｂ４９、ＲＲ１Ｂ５０、ＲＲ１Ｂ５８、ＲＲ１Ｂ５９、ＲＲ１Ｂ６０。しかし、キメラへの結合は概ね低調であり、一般的に非常に低いものであり、ＷＴ ＥＣＤについて結合値の５０％を越えたキメラはなかった（データは示さず）。
抗ＲＯＲ１抗体のビニングデータを用いて、市販の抗体２Ａ２のエピトープを判定した。親抗ＲＯＲ１抗体を用いて、競合実験を行った。３種類の細胞株を試験した。Ｈ５２０細胞は陰性対照として、Ｈ３５８及びＳＫ−ＭＥＳ−１はＲＯＲ１＋試験細胞として試験した。予想どおり、Ｈ５２０細胞は、ｍＡｂ対照なし（ブロッキングｍＡｂでの前処理なし）と２Ａ２対照なし（ウェルＤ１２）とのＭＦＩ値で同様に示されたように、結合の不在を示した（データは示さず）。対照的に、Ｈ３５８及びＳＫＭＥＳのデータは、２Ａ２抗体がＩｇ様ドメインに結合することを明らかに実証した。抗体ＲＲ１Ｂ７６（ＲＲ１Ｂ５８）、ＲＲ１Ｂ８５（ＲＲ１Ｂ４４）、及びＲＲ１Ｂ８６（ＲＲ１Ｂ４７）を用いたプレインキュベーションは、２Ａ２結合を阻害した。興味深いことに、ＲＲ１Ｂ６５（ＲＲ１Ｂ１２）のみが２Ａ２結合のみを若干阻害し、一方、ＲＲ１Ｂ８８は２Ａ２結合を全く阻害しなかった。このことは、Ｉｇ様領域内に少なくとも２つのエピトープが存在することを示す。
証拠加重値手法を採用して、ＩｇＧ４ ＰＡＡ分子としての発現及び精製に進む抗ＲＯＲ１抗体群を選択できるようにした。表６のデータをＲＯＲ２選択性データと組み合わされた。非バインダ及び交差反応性ＲＯＲ２バインダを排除した後、ごく少数の弱バインダの優先度を下げた。次いで、エピトープにより分子をビニングし、ＲＯＲ１ ＥＣＤ内の３つのエピトープごとに、高バインダ、中間バインダ、弱バインダを選択した。これらの分子ごとに、バックアップ分子を選択した。この選択運動により、１２ずつ２つのパネルに分けた、２４の分子の表を得た（表８及び図２）。この分子セットは、発現及び精製に進んだ。
Figure 2019506158
ＩｇＧ４ ＰＡＡプラットフォームにおける抗ＲＯＲ１ ｍＡｂの生成
ＩｇＧ４ ＰＡＡプラットフォームで２４の抗ＲＯＲ１抗体を調製した。当然のことながら、これらにはＲ４０９が含まれている（表９）。
Figure 2019506158
 これらの２４分子は、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）Ｋ４０９Ｒ変異を用いてＩｇＧ４ ＰＡＡとして再クローニングした。
選択したｍＡｂの一部は、良好に発現せず、ｍＡｂ ＲＲ１Ｂ６８、ＲＲ１Ｂ７３、ＲＲ１Ｂ７５、ＲＲ１Ｂ７９、ＲＲ１Ｂ８０、ＲＲ１Ｂ８１、及びＲＲ１Ｂ８７は進まなかった（上記の表では影付きの灰色）。これにより、１７の抗ＲＯＲ１ ｍＡｂが評価対象となった。
ＲＯＲ１へのＣＤ３アームの結合を試験するための表面プラズモン共鳴
抗ＣＤ３抗体ＣＤ３Ｂ２１９の結合。Ｈ３５８細胞、初代Ｔ細胞、ＳＫ−ＭＥＳ−１細胞、及びＨＥＫ２９３Ｆ細胞で発現したＲＯＲ１で実験を行った。結合結果は、ＲＯＲ１発現Ｈ３５８細胞への市販のマウス抗ＲＯＲ１抗体の濃度依存結合を示し、これらの細胞への抗ＣＤ３抗体の特異的結合は示さなかった。結合結果は、Ｔ細胞への抗ＣＤ３抗体の濃度依存の結合を示し、Ｔ細胞への抗ＲＯＲ１抗体の特異的結合は示さなかった。これらの結果は、抗ＣＤ３抗体が、予想どおりＴ細胞に特異的に結合することを確認した。結合結果は、ＲＯＲ１発現ＳＫ−ＭＥＳ−１細胞への抗ＲＯＲ１抗体の濃度依存結合を示し、ＲＯＲ１発現ＳＫ−ＭＥＳ−１細胞への抗ＣＤ３抗体の特異的結合は示さなかった。結合結果は、ＲＯＲ１一過性トランスフェクションＨＥＫ２９３Ｆ細胞及び親ＨＥＫ２９３Ｆ細胞への抗ＲＯＲ１抗体の濃度依存結合を示し、ＲＯＲ１一過性トランスフェクションＨＥＫ２９３Ｆ細胞及び親ＨＥＫ２９３Ｆ細胞への抗ＣＤ３抗体の特異的結合は示さなかった。これらのデータを下記表１０に要約した。
Figure 2019506158
抗ＲＯＲ１ ｍＡｂパネルの交差競合
ＩｇＧ４ ＰＡＡ Ｋ４０９Ｒ抗ＲＯＲ１抗体のパネルを、交差競合実験で評価した。５μＬの組み換えヒトＲＯＲ１−Ｆｃキメラ（１０μｇ／ｍＬ；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、カタログ番号１３９６８−Ｈ０２Ｈ１）を、室温で２時間、ＭＳＤ ＨｉｇｈＢｉｎｄプレート上で直接コーティングし、次いで室温で更に２時間、５％ ＭＳＤ Ｂｌｏｃｋｅｒ Ａ緩衝剤で遮断した。プレートを、０．１ＭのＨＥＰＥＳ緩衝剤（ｐＨ７．４）で３回洗浄し、続いてルテニウム（Ｒｕ）標識化抗ＲＯＲ１ ｍＡｂの混合物を添加し、これを室温で３０分間、異なる濃度（１μＭ〜１ｎＭ）の他の抗ＲＯＲ１ ｍＡｂでプレインキュベートした。プレートを、穏やかに振盪させながら室温で２時間インキュベートした後、０．１ＭのＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）で３回洗浄した。ＭＳＤ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを蒸留水で希釈し（４倍）、各ウェルに分注した。プレートは、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ ６０００（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）で解析し、データはＧｒａｐｈＰａｄで処理した。
クリングルドメイン結合ファミリーに割り当てられたＩｇＧ４ ＰＡＡ Ｋ４０９Ｒ抗ＲＯＲ１抗体（ＲＲ１Ｂ６７等）は、非常に明確な交差競合読み取り値を示した。ＲＲ１Ｂ６６、ＲＲ１Ｂ６７、ＲＲ１Ｂ６９、ＲＲ１Ｂ８２、ＲＲ１Ｂ８３、及びＲＲ１Ｂ８４は、Ｒｕ標識化ＲＲ１Ｂ６９分子の結合で競合した（図３及び表１１）。このデータから、クリングル結合分子は、全て同一のエピトープに結合するという結論に達した。加えて、市販の抗体２Ａ２は、Ｉｇ様ドメインに結合することを示した（表１１）。
Figure 2019506158
交差競合実験により、ＲＯＲ１のＥＣＤ上に６つの結合群が特定された（表１２）。クリングル結合分子では、１つの競合群を見出した（群１）。ＲＲ１Ｂ７１を除く全てのフリッツルドドメイン結合分子は、同一エピトープに結合した（群２）。ＲＲ１Ｂ７１は、群３を形成した。Ｉｇ様ドメインでは、３つのエピトープ群を特定した。市販の２Ａ２分子は、群５を形成した。
Figure 2019506158
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体の生成
ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）プラットフォームを用いて、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体を調製した。例えば、米国特許出願公開第２０１４／０１７０１４８号を参照のこと。簡潔に言うと、２つの意図的に設計された抗体（一方は、Ｆ４０５Ｌ変異を含有し、他方はＫ４０９Ｒを有する）間での制御されたＦａｂアーム交換（ｃＦＡＥ）。ｃＦＡＥは、等モル比の２つの親抗体（ＩｇＧ４ ＰＡＡ Ｋ４０９Ｒ抗ＲＯＲ１抗体（ＲＯＲ１アーム）及びＣＤ３Ｂ２１９（ＣＤ３アーム））、又は場合によっては、一方の親抗体を枯渇させる、６％増しの他方の親抗体を、７５ｍＭ（最終濃度）のシステアミンンＨＣｌ（２−ＭＥＡ）と混合することにより開始した。３１℃での５時間のインキュベーション後、抗体混合物を１×Ｄ−ＰＢＳに対して透析した。この期間中、２−ＭＥＡを取り除いて、還元されたジスルフィド結合の再結合を可能にした。陽イオン交換（ＣＥＸ）ＨＰＬＣ又は疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）ＨＰＬＣのいずれかによって、ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）ヘテロ二量体の形成を分析した。分取ＣＥＸ又はＨＩＣによって二重性特異性抗体を研磨して、残留親を取り除いた。このアプローチを用いて調製した１７のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体を表１３に記載する。
Figure 2019506158
 ファージヒット（列１）と、ＩｇＧ４ ＰＡＡ ＲＯＲ１抗体（列２）とに対応するＩＤ、及びＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体（ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標））。
本研究の残部で用いたＲＯＲ１×ＣＤ３ ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）分子は、ＣＤ３Ｂ２１９アームを有するものであった。したがって、実施例部分の残部で用いるとき、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、特に明記しない限り、ＣＤ３Ｂ２１９アームを有するもの指す。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体の相対的細胞結合
ＲＯＲ１発現ＨＣＣ８２７細胞への結合について、１７のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のセットを試験した。簡潔に言うと、細胞解離用緩衝液（Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ）を用いて細胞を採取し、ＰＢＳ中で洗浄した。ＦＡＣＳ染色用緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＵＳＡ）中４℃で、二重特異性抗体による標識化を４５分間行った。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７標識化抗ヒト二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＵＳＡ）でのインキュベーション前に、染色用緩衝液中で細胞を洗浄した。ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＨＴＦＣ）システムで試料を収集し、ＦｏｒｅＣｙｔソフトウェアを用いて分析した。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ Ｖ６を用いて計算した。非線形解析曲線フィッティングの許容基準は、１．４未満の信頼区間（ＣＩ）範囲であった。
用いた対照抗体は、ＣＤ３×Ｂ２１Ｍ ｉｓｏｔｙｐｅ、並びにＢｉｏＬｅｇｅｎｄからの市販の抗ＲＯＲ１抗体（２Ａ２）及び対応するアイソタイプであった。抗体は、１５μｇ／ｍＬ又は約１００ｎＭから開始して滴定した。各抗体希釈は２回実行し、全てのプレートでＣＤ３×Ｂ２１Ｍアイソタイプを含めた。全てのＲＯＲ１ ＣＤ３二重特異性抗体が、濃度依存的な方法で細胞に結合した。一方、ＣＤ３×Ｂ２１Ｍ及びＢｉｏＬｅｇｅｎｄアイソタイプは、濃度依存的な方法では細胞に結合しなかった。分析には、全試料のアイソタイプを差し引いた幾何平均蛍光指数（ｇｅｏＭＦＩ）データを用いた。アイソタイプ除去値は、各濃度で抗体ＧｅｏＭＦＩからプレートのＣＤ３×Ｂ２１ＭアイソタイプＧｅｏＭＦＩを引くことによって計算した。ＥＣ５０値は、アイソタイプ除去ｇｅｏＭＦＩ値を用いて計算した。データをＰｒｉｓｍでグラフ化し、ｎＭ濃度値を対数変換し、応答に対する対数（アゴニスト）についての非線形回帰を用いてＥＣ５０値を計算した。データはアイソタイプバックグラウンド除去のため、可変勾配分析（４パラメータ）の底値は０に制約された。一部の曲線は、被験抗体の最高濃度にて完全に水平ではなく、一部の曲線はまた、異なる最大結合シグナルを有する。
グラフ表示するために、ドメイン結合に従った分類により、これらのデータを再プロットした（図４）。アイソタイプ除去データをＰｒｉｓｍでグラフ化し、ｎＭ濃度値を対数変換し、非線形回帰を用いて曲線をフィットさせた。データはアイソタイプバックグラウンド除去のため、対数（アゴニスト）対応答−可変勾配（４パラメータ）分析の底値は０に制約された。ＥＣ５０結合値を計算し、表１４に示した。
Figure 2019506158
結合データは、フリッツルド及びＩｇ様ドメイン分子の相対親和性はより強力であり、一方、クリングルドメインバインダは平均よりも弱いことを示した。これらは、ＣＤ３アームの文脈においてのデータであり、１つのＲＯＲ１発現細胞株に関して判定したデータに過ぎない。フリッツルドドメインバインダのＥＣ５０値は、最良のＩｇ様ドメイン又は最良のクリングルドメインのいずれかの結合ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体よりも若干タイトであった。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体の機能評価
種々のアプローチを用いて、１７のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のセットの機能活性を評価した。ある実験では、Ｔ細胞リダイレクト殺傷アッセイでこれらの分子のサブセットを試験した。ＩｎｃｕＣｙｔｅ系アッセイは、接着性細胞株の殺傷を測定する研究により適しており、フロー系アッセイとは対照的に、ウェル当たりの絶対標的細胞数の計算及びこれらの増殖速度論を計算できるため、このアッセイを用いた。これは、Ｅｓｓｅｎ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓからのレンチウイルス構築物を用いて生成された、ＲＦＰ標識化標的細胞を用いたために可能である。この実験では、２つの独立した読み取り値を用いて、細胞毒性（標的細胞の成長阻害（図５）及びカスパーゼ３、７活性）を測定した（データは示さず）。これにより、標的細胞の喪失と、Ｔ細胞媒介性殺傷の特徴であるアポトーシス性標的細胞死と、を相関させることができる。実験の各時点における標的細胞／ウェルの数から生成した増殖指数に基づいて成長阻害を計算できる分析手順を開発した。これらの速度論曲線を用いて、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ごとに滴定曲線を生成するようにプロットした、曲線下面積を生成した。次に、補間を用いて、試験分子の効力を直接比較するために使用できる単一値を生成した。結合ドメインベースでビニングされた異なる分子セットを比較するときに最大値が大きく異なるため、ＥＣ５０ではなく、補間を用いた。成長阻害及びカスパーゼ読み取り値のランキングを比較した。これらは一致していないものの、強い相関を示した（データは示さず）。
成長阻害データは、異なるドメインに結合する分子群間に殺傷能の相違が存在することを明らかに示した（図５及び表１５）。クリングルドメインバインダによって生成された曲線は、フリッツルドドメインバインダと比較して、より高い最大値を有した。Ｉｇ様ドメインバインダは、標的細胞の成長阻害について最低の最大値を示した。これは、エピトープの位置と殺傷能との間には関係性が存在し、膜により近位の領域への結合は、ＥＣＤ分子のより遠位部分への結合よりも有効であることを示唆する。各分子郡内では、最高の相対親和性を有するものが最良の殺傷を示した。これは、親和性は重要であるが、エピトープの位置比べて二次的であることを示唆する。
Figure 2019506158
カスパーゼ読み取値はまた、クリングルバインダは、フリッツルド及びＩｇ様ドメインの結合と比較して、概ねより大きい殺傷能を有することを示した。しかしながら、データにはいくつかの相違点が存在した。ＲＣＤＢ１１及びＲＣＤＢ５について、曲線フィットは生じなかった。しかしながら、個々のデータ点は、標的細胞の成長阻害読み取り値で見られるものと同様の良好な殺傷を示した。ＲＣＤＢ１３及びＲＣＤＢ９は、フリッツルドドメイン内で最良の殺傷者であった。一方、ＲＣＤＢ５及びＲＣＤＢ１５は、クリングル郡内でＲＣＤＢ４及びＲＣＤＢ１６よりも若干良好であることが判明した。これらの観測結果は、他の読み取り値に見られる結果と同様である。
全体として、このデータは、膜近位性は、殺傷能の主な決定要因であり、親和性は二次的な影響を有することを強く示唆する。被験ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のパネルのうち、クリングルドメインバインダは、最良の殺傷効果を示した。フリッツルド及びＩｇ様ドメイン結合群のより親和性の高い分子はまた、良好な活性を示した。これは、いくつかの特異的な分子をリード選択に使用できることを示した。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体を、新規のＴ細胞媒介性細胞毒性アッセイで評価した。このアッセイでは、標的細胞をＤｉｓｃｏｖｅＲｘによる半βガラクトシダーゼとの細胞質融合で遺伝子操作し、βガラクトシダーゼ分子の一部と融合した非分泌ハウスキーピング遺伝子からなる融合タンパク質でトランスフェクトされた標的細胞株を生成した。これは、細胞の溶解後に培地内に放出され、読み取りに用いることができる（化学ルミネッセンス）。βガラクトシダーゼの補完部及び基質の添加の後、溶解放出βガラクトシダーゼを完全に再構成した。３つの細胞株（Ｈ５２０（陰性対照）、Ｈ３５８、及びＳＫＭＥＳ−１）をトランスフェクトした。
この細胞株では、２種類の異なるハウスキーピングタンパク質を用いた。予備データに基づいて、非溶解ＡＤＯ融合トランスフェクション細胞におけるバックグラウンドシグナルは、所望よりも高かった。したがって、パイロット細胞殺傷実験用にＦＫＢＰ１Ａ細胞を選択した。フローサイトメトリー分析でＨ５２０細胞株を検査し、ＲＯＲ１に対して（予想どおり）陰性であることが示された。Ｈ３５８及びＳＫ−ＭＥＳ−１細胞株は、予想どおり陽性であった。
ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ殺傷アッセイは、他のＴ細胞媒介性細胞毒性アッセイと同等のデータを提供した。この例では（図６）、クリングルドメイン結合ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体は、最良の殺傷分子のうちの１つであり、単一の分子群を構成した。フリッツルド及びＩｇ様ドメインバインダでは、より多様な応答が見られた。しかしながら、２つのフリッツルドバインダ及びＩｇ様バインダのうちの１つは、クリングル結合ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体セットと同等であった。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＲ１Ｂ６９、Ｂ６７、Ｂ７８、Ｂ７６、Ｂ７２、Ｂ７７、及びＢ８９を更に解析した。
公開したＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体との細胞毒性の比較
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体によって活性化された肺腫瘍細胞のリダイレクトされたＴ細胞殺傷を、ＲＣＤＢ５と従来技術の抗体（国際公開第２０１４１６７０２２（Ａ１）号、実施例３Ｃで公開、Ｆｃを有し、ＲＯＲ１では二価、ＣＤ３では一価である、二重特異性（Ｆａｂ）２×（Ｆａｂ）抗体、略して「Ｅｎｇｍａｂ」抗体）とで比較した。フローサイトメトリー系アッセイを用いて、細胞毒性を測定した。条件ごとに、３つの試料を用意した。簡潔に言うと、９６ウェル平底プレート内でウェル当り１０，０００のＧＦＰトランスフェクションＮＣＩ−Ｈ１９７５肺腫瘍細胞をプレート培養し、接着するように４〜６時間放置した。次いで、凍結保存し、精製したＴｓ細胞を解凍し、０．００６４〜６６６７ｐＭの最終滴定範囲でプレート培養した二重特異性抗体と共に、５０，０００細胞／ウェル（５：１ Ｅ：Ｔ）で各ウェルに添加した。プレートは、３７℃で７２時間インキュベートした。
採取時には、トリプシンと共に細胞を放出し、Ｆｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ）及び抗ヒトＣＤ２５（クローンＭ−Ａ２５１；ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ）で標識化し、ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ ｉＱｕｅ高スループットフローサイトメーターを用いて収集した。ＦｏｒｅＣｙｔ ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＩｎｔｅｌｌｉＣｙｔ，Ａｌｂｕｑｕｅｒｑｕｅ）でデータ分析を行い、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌにエクスポートした。次いで、Ｐｒｉｓｍ ｖ６．０２（ＧｒａｐｈＰａｄ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ）の「シグモイド型用量反応（可変勾配）」機能を用いて、ログ変換値を非線形回帰に用いた。曲線フィッティングの許容基準として、１．４未満のＬｏｇＥＣ５０ ９５％信頼区間範囲を設定した。チャートは平均値±ＳＥＭを示す。不対の両側検定を用いて、統計分析を行った。
データは、各種抗体濃度において、ＲＣＤＢ５活性細胞毒性は、Ｅｎｇｍａｂ活性細胞毒性よりも大きいことを示した（図１３Ａ）。ウェル当たりの生肺腫瘍細胞数は、試験した最高濃度において、ＲＣＤＢ５で処理したウェルがＥｎｇｍａｂで処理したウェルよりも４．６倍低かった（６．６７ｎＭ、図１３Ｂ）。Ｔ細胞でのＣＤ２５発現の誘発は、その活性と関連するため、このデータは、標的細胞の喪失がＴ細胞依存の方法で媒介されたことを示唆した（図１３Ｃ）。
インビドロでの全血細胞毒性アッセイにおいて、ＲＯＲ１×ＣＤ３はＭＣＬ株の強力な殺傷を媒介する
コンフルエントなＭＣＬ細胞、ＭＡＶＥＲ−１、ＪｅＫｏ−１、Ｚ−１３８、及びＮＡＭＡＬＷＡ，Ｂｕｒｋｉｔｔのリンパ腫株（データは示さず）をＰＢＳ中で洗浄し、５００ｎＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、室温で５分間標識化した。熱活性化ウシ胎児血清を用いて、反応物を１分間クエンチした。ＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞を培地で洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬで再構成した。ＲＯＲ１×ＣＤ３ ＲＣＤＢ１３又はＲＰＭＩ培地（１０％ ＦＢＳを含有）で再構成されたｎｕｌｌアーム対照ＭＡｂ（ｎｕｌｌ×ＣＤ３又はＲＯＲ１×ｎｕｌｌ）のいずれかの存在下で、２０，０００個の腫瘍細胞を、４人の健康なドナーからの４０ｕＬの全血と共培養した。細胞は、９６ウェルプレート内で、最終体積２００ｕＬ／ウェル、３７℃、、５％ ＣＯ２で６０時間培養した。水で希釈した（１：１０）Ｍｕｌｔｉｓｐｅｃｉｅｓ Ｒｅｄ Ｃｅｌｌ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて、赤血球を氷上で３分間溶解させた。細胞はＰＢＳで洗浄し、製造業者の手順に従ってＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ（Ｎｅａｒ−ＩＲ；ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で染色した。細胞ペレットは、５０ｕＬの体積のＦＡＣｓ Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＤ）中の抗ＣＤ４−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５、抗ＣＤ８−ＰＥ−Ｃｙ７、抗ＣＤ２５−ＰＥ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）で、暗所にて４℃で３０分間染色した。細胞は、Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒで２回洗浄し、Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒで再構成した。フローサイトメトリーにより、％細胞毒性（１００％−％生ＣＦＳＥ＋）及びＴ細胞活性（ＣＤ４＋及びＣＤ８＋リンパ画分上での％ＣＤ２５発現）を測定した。データはＢＤ ＦＡＣｓ Ｃａｎｔｏサイトメーターで取得し、ＣｙｔｏＢａｎｋソフトウェア及びＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６で分析した。データは、２回の独立した実験を代表するものである。
インビドロでの全血細胞毒性アッセイにおいて、ＲＯＲ１×ＣＤ３はＭＣＬ株の強力な殺傷を媒介した（図１７Ａ〜Ｆ）。用量依存的Ｔ細胞活性（活性マーカー、ＣＤ２５のアップレギュレーション、図１７Ｄ〜Ｆ）及び細胞毒性（図１７Ａ−Ｃ）を誘導するには、ＲＯＲ１×ＣＤ３によって媒介される、Ｔ細胞と腫瘍細胞との特異的結合が必要である。Ｔ細胞−腫瘍結合の特異性は、ｎｕｌｌ対照を用いたときの、１ｎＭを下回る細胞毒性の欠如によっても確認した。ドナー間でΔＥｍａｘ（最大細胞毒性率（％）−抗体不在下での％自然細胞毒性）は変動するものの、ＥＣ５０は、全被験細胞株間で同等であり、０．２〜１ｎＭの範囲であった。
ＰＢＭＣをエフェクター細胞として用いるインビトロでの細胞毒性アッセイにおいて、ＲＯＲ１×ＣＤ３はＭＣＬ株の強力な殺傷を媒介する
コンフルエントなＭＣＬ細胞、ＭＡＶＥＲ−１、Ｚ−１３８、ＪｅＫｏ−１、ＲＥＣ−１、及びＭｉｎｏ（ＪｅＫｏ−１、ＲＥＣ−１、Ｍｉｎｏのデータは示さず）をＰＢＳ中で洗浄し、５００ｎＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、室温で５分間標識化した。熱活性化ウシ胎児血清を用いて、反応物を１分間クエンチした。ＣＦＳＥ標識化腫瘍細胞をＲＰＭＩ培地（１０％のウシ胎児血清を含有）で洗浄し、１×１０６細胞／ｍＬで再構成した。ＰＢＭＣをＲＰＭＩ培地で洗浄し、２．５×１０６細胞／ｍＬに調整した。ＲＯＲ１×ＣＤ３ ＲＣＤＢ１３又は培地で再構成されたｎｕｌｌアーム対照ＭＡｂ（ｎｕｌｌ×ＣＤ３又はＲＯＲ１×ｎｕｌｌ）のいずれかの存在下で、２０，０００個の腫瘍細胞を、２人の健康なドナーからの１００，０００個のＰＢＭＣと共培養した（Ｅ：Ｔ＝１：５）。細胞は、９６ウェルプレート内で、最終体積２００ｕＬ／ウェル、３７℃、、５％ ＣＯ２で６０時間培養した。図４で行ったように、染色及びデータ分析を行った。データは、２回の独立した実験を代表するものである。
インビトロでの細胞毒性アッセイでＰＢＭＣをエフェクター細胞として用いたとき、ＲＯＲ１×ＣＤ３はＭＣＬ株の強力な殺傷を媒介した（図１８Ａ、ＣはＭＡＶＥＲ−１細胞のデータを示し、図１８Ｂ、ＤはＺ−１３８細胞のデータを示す）。用量依存的Ｔ細胞活性（活性マーカー、ＣＤ２５のアップレギュレーション、図１８Ｃ〜Ｄ）及び細胞毒性（図１８Ａ〜Ｂ）を誘導するには、ＲＯＲ１×ＣＤ３ ＤｕｏＢｏｄｙによって媒介される、Ｔ細胞と腫瘍細胞との特異的結合が必要である。Ｔ細胞−腫瘍結合の特異性は、ｎｕｌｌ対照を用いたときの、１ｎＭを下回る細胞毒性の欠如によっても確認した。ＥＣ５０は、全被験細胞株間で同等であり、同一のＭＣＬ株を標的細胞として用いた全血アッセイから得たＥＣ５０と同様に、０．２〜１ｎＭの範囲であった。これらのデータはまた、ＲＯＲ１受容体密度（図１５）とＥＣ５０との関係の欠如を示唆した。
ＣＤ３アームの脱アミド
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体の分析では、全放出試料においてＣＤ３重鎖ＣＤＲ３でのＣＤ３脱アミノを観察し、これは、高ｐＨでのストレス時に増加した。ＣＤ３脱アミドの分析評価を２回行った。ＲＣＤＢ５及びＲＣＤＢ１１放出試料は、前述の研究（１７±２％及び２０±４％）と比較して、同等量の脱アミノレベル（１７±２％及び１９±３％）を呈した。ＲＣＤＢ１３では、若干高いレベルを観察した（２４±２％対１９±５％）が、誤差範囲内であった（表１６）。
Figure 2019506158
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体の生物物理及び細胞結合
細胞結合に関する前述の結果（図５）に基づいて、Ｉｇ様及びフリッツルドバインダは、クリングルドメインバインダよりもタイトにＲＯＲ１発現細胞に結合し得ることが予測された。クリングルドメインバインダは、Ｔ細胞依存性細胞毒性の明らかにより良好な媒体であったため、細胞結合の的確な理解が所望された。
選択したＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のＲＯＲ１に対する親和性は、ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ技術（ＭＳＤ−ＣＡＴ）を用いた細胞親和性法で評価した。ＭＳＤ−ＣＡＴ実験は、ＲＯＲ１を内因性発現するＨ３５８細胞又はＨＥＫ２９３トランスフェクションヒトＲＯＲ１のいずれかを用いて行った。ＨＥＫ２９３トランスフェクションヒトＲＯＲ１の受容密度をフローサイトメトリーにより測定し、次いで、反応混合物中受容体の分子濃度に変換し、これらの研究で用いた。単一ｎｕｌｌアームの抗ＲＳＶを含むＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）ＣＤ３Ｂ２８８を陰性対照として用いた。親（擬似）ＨＥＫ２９３細胞を用いて、細胞表面への非特異的結合を評価した。ＭＳＤ−ＣＡＴ法を用いて相互作用の親和性を測定するために、固定濃度の可用性反応物（Ａ）及び種々の濃度の細胞（Ｂ）との一連の混合物を調製し、平衡に達するようにした。平衡化後、遊離Ａの濃度を決定し、データの親和性を分析した。これらの研究のために、４つの異なるが、固定の濃度で抗体を添加することにより、反応混合物を調製し、６ｅ７細胞／ｍＬから段階的に希釈した。反応混合物のインキュベーション及び平衡化後、ＳＡプレート上で捕捉したビオチン−ＲＯＲ１−ＤＤＫを介して遊離抗ＲＯＲ１を捕捉し、続いて、ルテニウム標識化抗ヒトＩｇＧを用いて検出した。１：１結合モデルを用いた結合曲線の非線形最小二乗フィッティングにより、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のＲＯＲ１との相互作用の結合プロファイルを行った。
ＭＳＤ−ＣＡＴ実験を行うために、反応混合物中の遊離ｍＡｂを検出するアッセイを開発した。２つの検出方法を試験した。第１の方法では、抗ＦＬＡＧタグ抗体を用いてＦＬＡＧタグ付きＲＯＲ１（ａｋａ ＲＯＲ１−ＤＤＫ）を捕捉し、続いて、遊離抗ＲＯＲ１が捕捉したＲＯＲ１−ＤＤＫに結合し、貧弱なアッセイ性能（低アッセイシグナル及び狭アッセイウインドウ）のため、ルテニウム標識化抗ヒトＩｇＧでの検出に失敗した。したがって、第２の検出アッセイを開発し、最終的にＭＳＤ ＣＡＴ実験に用いた。この検出アッセイでは、ＳＡプレート上のビオチンＲＯＲ１−ＤＤＫを介して、遊離抗ＲＯＲ１を捕捉し、ルテニウム標識化抗ヒトＩｇＧを用いて捕捉したｍＡｂを検出した。
ｈｕ ＲＯＲ１を発現するＨＥＫ細胞（レンチウイルスプラスミドｐＤＲ２５２２６）に結合するＲＯＲ１ ＤｕｏＢｏｄｙ用ＭＳＤ−ＣＡＴを生成し、ＨＥＫ２９３Ｆ細胞のトランスフェクションに用いた。この細胞株を用いて、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体（ＲＣＤＢ５、ＲＣＤＢ６、ＲＣＤＢ９、ＲＣＤＢ１１、ＲＣＤＢ１２、ＲＣＤＢ１３）を分析した（表１７）。フローサイトメトリーによる測定で、ＨＥＫ２９３当たり１８０万ヒトＲＯＲ１の受容体密度を用いて、これらのデータをフィットさせた（データは示さず）。例示的データを図７Ａ及び７Ｂに示す。これらの測定値から、ＤｕｏＢｏｄｙ ＲＣＤＢ５は３３１＋／−１５２ｐＭのＫＤを有し、ＲＲ１Ｂ６７親（二価性）抗体は５５＋／−１３ｐＭの見掛けのＫＤを有した。ＲＲ１Ｂ６７ Ｍａｂは、ＲＣＤＢ５（ＲＲ１Ｂ６７×ＣＤ３Ｂ２１９の場合はＤｕｏＢｏｄｙ）の〜６倍タイトな結合を示した。ＨＥＫ２９３ ＲＯＲ１発現細胞に対する親のより高い親和性は、親和性効果に起因した。ＲＣＤＢ１３、ＲＣＤＢ１１、ＲＣＤＢ１２、ＲＣＤＢ５、ＲＣＤＢ６の結合プロファイルは、サブｎＭ範囲内の親和性に類似していた。しかし、ｎＭ範囲内のＲＣＤＢ９では、より弱い親和性を観察した。ＲＣＤＢ９では、ＲＣＤＢ９について非特異的結合を示した対照（擬似）細胞での細胞濃度依存滴定が存在した。陰性ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）、ＣＤ３Ｂ２８８は、ＲＯＲ１発現細胞又はＨＥＫ２９３擬似細胞への結合を示さなかった。
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 ＲＯＲ１を過剰発現するように遺伝子操作したＨＥＫ２９３細胞への６つのＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体及び抗ＲＯＲ１抗体ＲＲ１Ｂ６７の結合についての細胞親和性（ＭＳＤ−ＣＡＴ）データの要約（ヒトＲＯＲ１受容体の数／細胞＝１．８×１０６）。このデータは、３つの独立した実験で得た、全ての許容可能な（総数はｎで示す）親和性値の平均及び標準偏差に対応する。ＲＣＤＢ９を除く全分子は、サブナノモル親和性を有した。細胞表面において、２つの隣接するＲＯＲ１に架橋する可能性のある抗体の二価的性質のために、親分子ＲＲ１Ｂ６７の結合は、結合における親和性効果を示唆した。
＊ 二価結合のために親和性の影響を受け得るため、「見掛けのＫＤ」と称した。
Ｂｉａｃｏｒｅ（表面プラズモン共鳴；ＳＰＲ）も用いて、組み換えヒトＲＯＲ１に対するＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体（ＲＣＤＢ５、ＲＣＤＢ６、ＲＣＤＢ９、ＲＣＤＢ１１、ＲＣＤＢ１２、ＲＣＤＢ１３）の親和性を判定した（表１８）。例示的ＳＰＲセンサーグラムを図７Ａ及び７Ｂに示す。
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 組み換えヒトＲＯＲ１への６つのＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、並びに抗ＲＯＲ１抗体ＲＲ１Ｂ６７及びＲＲＩＢ６９の結合についてのＢｉａｃｏｒｅデータの要約。このデータは、３つの独立した実験で得た、全ての許容可能な（総数はｎで示す）親和性値の平均及び標準偏差に対応する。ＲＣＤＢ９を除く全分子は、サブナノモル親和性を有した。細胞表面において、２つの隣接するＲＯＲ１に架橋する可能性のある抗体の二価的性質のために、親分子ＲＲ１Ｂ６７の結合は、結合における親和性効果を示唆した。
Ｂｉａｃｏｒｅ（ＳＰＲ）及びＭＳＤ−ＣＡＴの両方は、用いた抗原の形態（組み換え又は細胞表面発現）にかかわらず、ＲＯＲ１に対する最も弱いバインダはＲＣＤＢ９であることを示した。加えて、両方法は、他の５つのＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体（ＲＣＤＢ５、ＲＣＤＢ１３、ＲＣＤＢ６、ＲＣＤＢ１１、ＲＣＤＢ１２）は、互いの３．６倍以内である親和性で結合することを示す。細胞表面ＲＯＲ１に対するＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のＭＳＤ−ＣＡＴ親和性は、組み換えＲＯＲ１についてのＳＰＲデータよりも＞２０倍タイトである。細胞表面ＲＯＲ１に対するＳＰＲとＭＳＤ−ＣＡＴとの親和性の差は、組み換え抗原と比較して、細胞表面上での抗原の提示による可能性が最も高い。ＳＰＲで観察される結合は、一価親和性を代表するものである。これは、分析した分子の種類（単特異性又は二重特異性抗体）にかかわらず親和性効果の影響を受けないが、細胞アッセイの文脈では、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体とは対照的に、単特異性抗体は、抗体の二価的性質のために親和性の影響を受ける。この親和性効果の例は、ＲＣＤＢ５及びその親抗ＲＯＲ１ ｍＡｂ（ＲＲ１Ｂ６７）の結合により示す（図７）。親ｍＡｂは、ＢｉａｃｏｒｅにおいてＲＣＤＢ５の２倍の応答を示し（左パネル）、親ｍＡｂの２つのアームを占有しているが、結合プロファイルは同様であることを示した。しかしながら、ＭＳＤ−ＣＡＴの場合（右パネル）、曲線は左にシフトしており、親ｍＡｂの傾斜はより急であり、よりタイトな結合を示す。
要約すると、ＲＣＤＢ５及びＲＲ１Ｂ６７のＳＰＲデータは、低ナノモルＫＤを示唆した。これは、本実験において予測した一価性に一致した。ＲＯＲ１−ＥＣＤは、センサ表面で捕捉された抗体に単量体形態で結合した。細胞へのＲＣＤＢ５の結合は、約２５倍強力であった（〜３００ｐＭ）。細胞表面で発現したＲＯＲ１の膜固定形態は、結合により好ましい配置で抗原を示すことが可能であり得た。ＲＲ１Ｂ６７分子の細胞に対する効力の大きなシフトは、大部分は、親和性効果によるものであった。ＨＥＫ２９３細胞での外因性ＲＯＲ１表面発現の高密度は、受容体架橋が生じ、見掛けの結合定数が増加し得ることを示唆するであろう。
ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体のインビボ活性
混合マウスモデルを用いて、ＲＣＤＢ１３及びＲＣＤＢ５のインビボ効能を評価した。モデルでは、５０％ Ｃｕｌｔｒｅｘ中、５００万個のＨ１９７５細胞を１００万個のヒトＴ細胞と混合した（５：１のＥ：Ｔ比）。この混合物を、雌の無胸腺ヌードマウスの右脇腹に埋め込んだ（０．１ｍＬ／マウス）。ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体での治療を０日目に開始し、５用量（ＩＶ）続けた。ＰＢＳ対照群、並びに０．１、１、及び１０ｕｇ／マウスに各ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体を投与した（図８）。１及び１０ｕｇ／マウスのＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５は、ＰＢＳ対照と比較して、Ｈ１９７５腫瘍の成長を抑制した。ＲＣＤＢ１３では、全体的に弱い効果を観察した。
ＲＣＤＢ５のＦｃ受容体結合
この研究の目的は、競合ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎによって、野生型ｈＩｇＧ１並びに一連の関連するＩｇＧ４ ＰＡＡ対照親（二価）及びｎｕｌｌアーム（一価）分子に対して、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５と、ヒトＦｃγＲ１、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａｌ及びＦｃＲｎとの相互作用を特性化することであった。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎで用いた抗体を表１９に示す。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎは、マイクロプレート形態で生体分子の相互作用を調査するために用いる、ビーズ系アッセイシステムである。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイは、２種類のビーズ（ドナービーズ、アクセプタビーズ）を用いた。両種類のビーズは、非特異的結合及び自己擬似集を最小化しつつ、分子をビーズ表面に結合させるための反応基を提供するヒドロゲルで被覆されていた。ドナービーズは、６８０ｎｍでの照射時に雰囲気酸素を一重項酸素に変換する光増感剤を含んだ。一重項酸素は、他の励起分子のように遊離基ではなく、基底状態に戻る前に限られた寿命を有する。一重項酸素は、その４μｓｅｃの半減期内で、溶液中約２００ｎｍ拡散ができる。アクセプタビーズがこの距離内にある場合、化学エネルギーが一重項酸素からアクセプタビーズ内のチオキセン派生物に移動し得、これにより５２０〜６２０ｎｍでの光生成がもたらされる。隣接依存のエネルギー移動は、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎの均質性のもとである。開示した実験では、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎシグナルの減少として競合を記録した。簡潔に言うと、対照のビオチン化ＩｇＧ結合Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎドナービーズは、Ｈｉｓタグ付きＦｃγＲ／ＦｃＲｎ結合Ｎｉ２＋アクセプタビーズを近接させ、照射時に化学発光シグナルを生じさせる。非標識化競合試験用Ａｂを段階的に希釈し、適用した。ＦｃγＲ／ＦｃＲｎへの結合に関して試験用Ａｂが対照ビオチン化ＩｇＧと競合するとき、シグナルは減少した。
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競合結合アッセイにおけるランク付けは、用量反応曲線から得たＥＣ５０値に基づいて実行することが多い。しかしながら、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイでは、競合Ａｂは、常にシグモイド型用量反応曲線を生成するわけではない。したがって、ＥＣ５０値を常に導出できるわけではない。代わりに、被験Ａｂのコホート全体にわたって、任意の所与の濃度での％最大シグナルを比較することによって、静粛度を確立した。異なる日に実行した２回の再現実験期間にわたって試験Ａｂを測定した。１つの（代表的な）結果セットのみを示す。
ＦｃγＲＩでは、ＲＣＤＢ５は、ｈＩｇＧ４ ＰＡＡアイソタイプ対照と同程度結合した（データは示さず）。ＲＣＤＢ５は、ＩｇＧ４ ＰＡＡアイソタイプ対照の結合とほぼ同一の方法で、ＦｃγＲＩＩａ（図９）及びＦｃγＲＩＩｂ（図示せず）に結合した。ＦｃγＲＩＩＩａでは、ＲＣＤＢ５は、ｈＩｇＧ４ ＰＡＡアイソタイプＡｂと同様に競合しなった（図１０）。ＲＣＤＢ５は、ｈＩｇＧ１ ＷＴと同様にＦｃＲｎに効率的に結合する（図１０Ａを参照；Ｂ２１Ｍ ＩｇＧ１はＲＳＶ ＩｇＧ１ ＷＴ対照を示す）。要約すると、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体ＲＣＤＢ５は、対応するＩｇＧ４ ＰＡＡアイソタイプと本質的に同程度に、全ての被験Ｆｃ受容体に結合した。
ヒトＲＯＲ１及びＲＲ１Ｂ６７のクリングルドメインの結晶化
４段回法でヒトＲＯＲ１クリングルドメイン／ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ複合体を調製した。第１に、Ｆａｂ及びクリングルドメインを合わせて混合し（Ｆａｂが１．２モル過剰）、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）中で透析しながら、週末にかけて４℃でインキュベートした。第２に、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）中、この複合体をｍｏｎｏＳ ５／５０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に結合させ、ＡＫＴＡ浄水器システム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてＮａＣｌ勾配で希釈した。分離不良のため、ピーク画分を合わせてプールし、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）中で８倍に希釈し、２０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）内のモノＳ ５／５０カラム及びＮａＣｌ勾配を用いて精製した。最後に、限外ろ過（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ、４ ３ｋＤａ）により、複合体を７．８ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
２０℃でのシッティングドロップ蒸気拡散法、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５５０ ９６ウェルプレート（Ｈａｍｐｔｏｎ、カタログ番号ＨＲ８−１４６）、及び結晶化スクリーンＩＨ１Ｍ、ＩＨ２Ｍ、ＪＣＳＧ＋、ＣＳを用いて、遊離Ｆａｂ及びクリングル／Ｆａｂ複合体の結晶化実験を行った。及び。２００ｕＬモデルのＬｉｑｕｉｄａｔｏｒ ９６（Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ）を用いてスクリーン溶液をプレートウェルに分注し、室温でＭｏｓｑｕｉｔｏ ＬＣＰロボット（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）を用いてナノ液滴を調製した。液滴画像を自動的に記録するＦｏｒｍｕｌａｔｒｉｘ撮像装置を用いて、結晶化液滴を少なくとも２１日間モニターした。ＲＯＲ１クリングル／ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ複合体の回折品質の結晶は、１８％ ＰＥＧ ３ｋ、０．２Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、０．１Ｍ酢酸（ｐＨ４．５）から成長した。結晶は、当初７．８ｍｇ／ｍＬであった。ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂの結晶は、２Ｍ（ＮＨ４）２ＳＯ４、５％ ＭＰＤ、０．１Ｍ ＭＥＳ（ｐＨ６．５）から入手した。Ｆａｂは、当初１３ｍｇ／ｍＬであった。データ収集のため、２０％グリセロールを添加した対応する母液を含むクライオプロテクタント溶液中に結晶を数秒間浸漬した後、液体窒素中で瞬間凍結した。
Ａｒｇｏｎｎｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙのＡｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ Ｓｏｕｒｃｅ（ＡＰＳ）のビームライン２２−ＩＤにおいてＰｉｌａｔｕｓ ６Ｍ検出器によって、Ｘ線回析データセットを収集した。Ｘ線解析データセットをＨＫＬ２０００プログラムにより処理した。構造は、プログラムＰｈａｓｅｒを用いた分子置換によって（ヒト生殖系列抗体１−６９／Ｂ３（ＰＤＢコード３ＱＯＴ）は遊離ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂの検索モデルとして）、ヒトプラスミノーゲンクリングル３ドメイン（ＰＤＢコード：２ＬＯＳ、ＮＭＲモデル１）及び遊離ＲＲ１Ｂ６７ ＦａｂはＲＯＲ１クリングル／ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ複合体の検索モデルとして）解明した。プログラムＰＨＥＮＩＸにより構造を精密化した。モデル調節及び構造のオーバーレイは、プログラムＣＯＯＴを使用して行った。結晶学的計算、エピトープ及びパラトープ残基の定義に用いる接触距離、並びにエピトープ領域の計算は、ＣＣＰ４プログラムスイートを用いて行った。全ての分子図形は、ＰｙＭｏｌ（ＰｙＭＯＬ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｖｅｒｓｉｏｎ １．４．１，Ｓｃｈｒｏｄｉｎｇｅｒ，ＬＬＣ）で生成し、ＣＤＲはＫａｂａｔ定義を用いて決定した。
単離されたヒトＲＯＲ１クリングルドメインに結合したＲＲ１Ｂ６７のＦａｂの結晶構造（ＦｃはＥＶ消化により除去済み）は、３．２Å分解能と判定した。抗体／抗原複合体の構造により、原子について詳細に相互作用を特性化でき、抗体の作用メカニズムの理解が促進され、ＲＯＲ１細胞外領域に関する知識が増加する。公開文献では、ＲＯＲ１細胞外ドメインのいずれの部分の構造も使用可能ではない。ＲＯＲ１構造は、全クリングルドメイン及びＡｓｎ−３１５内の１つのＮ結合グリカンに対応する、残基３１０〜３９１を含む。この構造は、Ｆａｂとの重要な相互作用を全て明らかにする。一部のタンパク質残基は、結晶環境中に存在するが、規則的ではない（６のＮ末端及び１５のＣ末端ＲＯＲ１残基、並びにＦｃ融合の余りの１４のアミノ酸残基）。これらの不規則残基の構造は解決されず、最終モデルから除外された。ＲＲ１Ｂ６７ Ｆａｂ構造は、軽鎖残基１〜２１３と、重鎖残基１〜２２０と、を含んだ（開示され、含まれなかった重鎖残基１３４〜１４０を除く）。信頼性の高い結合残基の位置付けを可能にした、電子密度マップで良好に定義されたＦａｂ／抗原結合部位を有する、非対称ユニット内の１つのＲＲ１Ｂ６７／クリングル複合体が存在した。Ｆａｂは全ての図で順番に番号付けされており、ＲＯＲ１の番号付けはシグナルペプチドから始まっている。
ＲＲ１Ｂ６７ ＦａｂとＲＯＲ１クリングルドメインとの複合体の構造は、エピトープが不連続であり、膜近位クリングルドメインのループ領域全体に分布する残基（残基Ｔ３２４〜Ｔ３２８、Ｓ３３０〜Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９〜Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７）を含むことを示した（図１１及び図１２）。Ｆａｂによって埋もれたクリングル表面領域は、およそ８８２Å２であり、クリングルとＦａｂとの間には過剰な接触が存在した（図１１Ｃ〜図１１Ｄ）。これは、ＳＰＲによって判定されたと抗体／抗原のサブナノモルの親和性に一致した。ＲＲ１Ｂ６７パラトープは、ＣＤＲ−Ｌ１、−Ｌ３、−Ｈ２、及び−Ｈ３内の残基からなった（図１２）。Ｇｌｙ３３１、Ｇｌｎ３３３、及びＨｉｓ３５９は、ＲＲ１Ｂ６７の重鎖及び軽鎖の両方に接触し、一方、他の全てのエピトープは、重鎖又は軽鎖のいずれかに接触する（図１１Ｃ〜図１１Ｄ）。ヒト／カニクイザルとマウスＲＯＲ１クリングルとの間で異なる残基は、Ｔ３９６Ｓのみである。この残基は、抗体／抗原界面にはない。
当業者であれば、本開示の単離された抗ＲＯＲ１抗体、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特性抗体、及びそれらの使用法の好ましい実施形態に対して、多数の変更及び修正を加えることができ、そのような変更及び修正が、本発明の趣旨を逸脱しない範囲内で行うことができることを理解するであろう。したがって、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の趣旨及び範囲に含まれる、そのような等価的な変形の全てを網羅することが意図されている。
本明細書に引用又は記載されている各特許、特許出願、及び刊行物の開示は、その全文において本明細書に参考として組み込まれる。
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Claims (39)

  1. ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体、又はその抗原結合フラグメントであって、
    ａ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｂ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｃ．配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｄ．配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｅ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｆ．配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｇ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｈ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｉ．配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｊ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｋ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｌ．配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｍ．配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｎ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｏ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｐ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は
    ｑ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３
    を含み、
    前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、
    前記単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  2. 前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、請求項１に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  3. 前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を含み、前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、請求項１に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  4. ａ．（ａ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｂ．（ｂ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｃ．（ｃ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｄ．（ｄ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｅ．（ｅ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｆ．（ｆ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｇ．（ｇ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｈ．（ｈ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｉ．（ｉ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｊ．（ｊ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｋ．（ｋ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｌ．（ｌ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｍ．（ｍ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｎ．（ｎ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｏ．（ｏ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    ｐ．（ｐ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、又は
    ｑ．（ｑ）の前記抗体、又はその抗原結合フラグメントが、配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、
    請求項１に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  5. 前記重鎖が、配列番号１３のアミノ酸配列を有し、軽鎖は、配列番号５のアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
  6. 前記重鎖が、配列番号６１のアミノ酸配列を有し、軽鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を有する、請求項４に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
  7. ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する、単離された抗体、又はその抗原結合フラグメントであって、
    ａ．配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｂ．配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｃ．配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｄ．配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｅ．配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｆ．配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｇ．配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｈ．配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｉ．配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｊ．配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｋ．配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｌ．配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｎ．配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｏ．配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｐ．配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｑ．配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む、前記単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  8. Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７を含むＲＯＲ１上のエピトープに結合する、単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  9. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが、ヒト抗体又はその抗原結合フラグメントである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  10. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが組み換え体である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  11. 前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ２フラグメント、又は一本鎖抗体である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  12. 請求項１〜１１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメントをコードする、核酸分子。
  13. 請求項１２に記載の核酸分子を含む、ベクター。
  14. 請求項１〜１１のいずれか一項に記載の単離された抗体、又はその抗原結合フラグメントを発現する細胞。
  15. ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する、単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記参照抗体又はその抗原結合フラグメントが、
    ａ．配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｂ．配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｃ．配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｄ．配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｅ．配列番号２１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｆ．配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｇ．配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｈ．配列番号３９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４１のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｈ．配列番号４５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号４９のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｊ．配列番号５３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｋ．配列番号６１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５７のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｌ．配列番号６３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｍ．配列番号６６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｎ．配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｏ．配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖、
    ｐ．配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｑ．配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む、前記単離された抗体、又はその抗原結合フラグメント。
  16. ＲＯＲ１への結合について参照抗体又はその抗原結合フラグメントと競合する単離された抗体又はその抗原結合フラグメントであって、前記参照抗体又はその抗原結合フラグメントが、Ｔ３２４、Ｖ３２５、Ｓ３２６、Ｖ３２７、Ｔ３２８、Ｓ３３０、Ｇ３３１、Ｒ３３２、Ｑ３３３、Ｐ３３６、Ｎ３３８、Ｓ３３９、Ｙ３４１、Ｈ３５９、Ｓ３６０、Ｙ３６１、Ｌ３７７、Ｄ３７８、及びＤ３８７を含むＲＯＲ１上のエピトープに結合する、前記単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  17. 前記参照抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１６に記載の単離された抗体又はその抗原結合フラグメント。
  18. 単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合フラグメントであって、
    ａ）ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む、第１の抗原結合部位と、
    ｂ）ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位であって、重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３とを含む、第２の抗原結合部位とを含む、
    前記単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  19. ＲＯＲ１に特異的に結合する前記第１の抗原結合部位が、
    ａ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｂ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｃ．配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｄ．配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｅ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｆ．配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｇ．配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｈ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｉ．配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｊ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｋ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｌ．配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｍ．配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｎ．配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｏ．配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、
    ｐ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３、又は
    ｑ．配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有し、
    前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、請求項１８に記載の単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  20. ＣＤ３に免疫特異的に結合する前記第２の抗原結合部位が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有し、前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、請求項１８又は１９に記載の、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  21. ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する前記第１の抗原結合部位が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有し、
    ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する前記第２の抗原結合部位が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有し、
    前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、請求項２０に記載の単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  22. ａ．ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する前記第１の抗原結合部位が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有し、
    ｂ．ＣＤ３に免疫特異的に結合する前記第２の抗原結合部位が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有し、
    前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、請求項２０に記載の単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  23. 単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合フラグメントであって、
    ａ）第１の重鎖（ＨＣ１）と、
    ｂ）第２の重鎖（ＨＣ２）と、
    ｃ）第１の軽鎖（ＬＣ１）と、
    ｄ）第２の軽鎖（ＬＣ２）とを含み、
    前記ＨＣ１及び前記ＬＣ１が、ＲＯＲ１に免疫特異的に結合する第１の抗原結合部位を形成し、前記ＨＣ２及び前記ＬＣ２が、ＣＤ３に免疫特異的に結合する第２の抗原結合部位を形成する、単離されたＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  24. ａ．前記ＨＣ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｂ．前記ＨＣ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｃ．前記ＨＣ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｄ．前記ＨＣ１が、配列番号１８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｅ．前記ＨＣ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｆ．前記ＨＣ１が、配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号２８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号３０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｇ．前記ＨＣ１が、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号３４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号３５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号３７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号３８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｈ．前記ＨＣ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号４２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号４４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｉ．前記ＨＣ１が、配列番号４６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号４７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号４８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号５０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号５２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｊ．前記ＨＣ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号５６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｋ．前記ＨＣ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｌ．前記ＨＣ１が、配列番号６４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号６５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｍ．前記ＨＣ１が、配列番号６７のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号６８のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号６９のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｎ．前記ＨＣ１が、配列番号１０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号７１のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号７２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｏ．前記ＨＣ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号７４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５１のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、
    ｐ．前記ＨＣ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号２３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号８０のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有する、又は
    ｑ．前記ＨＣ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号８６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号４３のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有し、
    前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、
    請求項２３に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  25. ａ．（ａ）のＨＣ１が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ａ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｂ．（ｂ）のＨＣ１が配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｂ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｃ．（ｃ）のＨＣ１が配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｃ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｄ．（ｄ）のＨＣ１が配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｄ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｅ．（ｅ）のＨＣ１が配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｅ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｆ．（ｆ）のＨＣ１が配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｆ）のＬＣ１が、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｇ．（ｇ）のＨＣ１が配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｇ）のＬＣ１が、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｈ．（ｈ）のＨＣ１が配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｈ）のＬＣ１が、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｉ．（ｉ）のＨＣ１が配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｉ）のＬＣ１が、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｊ．（ｊ）のＨＣ１が配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｊ）のＬＣ１が、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｋ．（ｋ）のＨＣ１が配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｋ）のＬＣ１が、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｌ．（ｌ）のＨＣ１が配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｌ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｍ．（ｍ）のＨＣ１が配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｍ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｎ．（ｎ）のＨＣ１が配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｎ）のＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｏ．（ｏ）のＨＣ１が配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｏ）のＬＣ１が、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｐ．（ｐ）のＨＣ１が配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｐ）のＬＣ１が、配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
    ｑ．（ｑ）のＨＣ１が配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｑ）のＬＣ１が、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    請求項２４に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  26. ａ．（ａ）の前記ＨＣ１が、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ａ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｂ．（ｂ）の前記ＨＣ１が配列番号９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｂ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｃ．（ｃ）の前記ＨＣ１が配列番号１３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｃ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｄ．（ｄ）の前記ＨＣ１が配列番号１７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｄ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｅ．（ｅ）の前記ＨＣ１が配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｅ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｆ．（ｆ）の前記ＨＣ１が配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｆ）の前記ＬＣ１が、配列番号２９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｇ．（ｇ）の前記ＨＣ１が配列番号３３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｇ）の前記ＬＣ１が、配列番号３６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｈ．（ｈ）の前記ＨＣ１が配列番号３９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｈ）の前記ＬＣ１が、配列番号４１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｉ．（ｉ）の前記ＨＣ１が配列番号４５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｉ）の前記ＬＣ１が、配列番号４９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｊ．（ｊ）の前記ＨＣ１が配列番号５３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｊ）の前記ＬＣ１が、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｋ．（ｋ）の前記ＨＣ１が配列番号６１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｋ）の前記ＬＣ１が、配列番号５７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｌ．（ｌ）の前記ＨＣ１が配列番号６３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｌ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｍ．（ｍ）の前記ＨＣ１が配列番号６６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｍ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｎ．（ｎ）の前記ＨＣ１が配列番号７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｎ）の前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｏ．（ｏ）の前記ＨＣ１が配列番号７３のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｏ）の前記ＬＣ１が、配列番号７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    ｐ．（ｐ）の前記ＨＣ１が配列番号７９のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｐ）の前記ＬＣ１が、配列番号８１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、又は
    ｑ．（ｑ）の前記ＨＣ１が配列番号８４のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、（ｑ）の前記ＬＣ１が、配列番号８７のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、
    請求項２３に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  27. 前記ＨＣ２が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を有し、前記ＬＣ２が、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３を有し、前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の、ＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  28. 前記ＨＣ２が、配列番号９０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２が、配列番号９１と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合。
  29. ａ．前記ＨＣ１が、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号１６のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有し、
    ｂ．前記ＨＣ２が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ２が、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有し、
    前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、
    請求項２３〜２７のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  30. ａ．前記ＨＣ１が、配列番号５４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号６２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ１が、配列番号５８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号５９のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号６０のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有し、
    ｂ．前記ＨＣ２が、配列番号９２のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１と、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２と、配列番号９４のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３とを有し、前記ＬＣ２が、配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１と、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２と、配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３とを有し、
    前記ＣＤＲが、Ｋａｂａｔに従って定義される、
    請求項２３〜２７のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  31. ａ．前記ＨＣ１が、配列番号１３のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ１が、配列番号５のアミノ酸配列を含み、
    ｂ．前記ＨＣ２が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、
    請求項２３〜２８のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  32. ａ．前記ＨＣ１が、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ１が、配列番号５７のアミノ酸配列を含み、
    ｂ．前記ＨＣ２が、配列番号９０のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣ２が、配列番号９１のアミノ酸配列を含む、
    請求項２３〜２８のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  33. 前記抗体又は抗原結合フラグメントが一本鎖である、請求項１８〜３２のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメント。
  34. 請求項１８〜３３のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントを発現する、単離された細胞。
  35. 癌を有する対象の治療法であって、
    治療的に有効な量の、請求項１８〜３３のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントを前記対象に投与することを含む、前記方法。
  36. 前記癌が肺癌又は血液癌である、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記癌の治療における、治療的に有効な量の、請求項１８〜３３のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントの使用。
  38. 前記癌の治療用組成物の製造における、請求項１８〜３３のいずれか一項に記載のＲＯＲ１×ＣＤ３二重特異性抗体、又はその二重特異性抗原結合フラグメントの使用。
  39. 前記癌が、肺癌、血液癌、乳癌、前立腺癌、膵癌、結腸癌、卵巣癌、腎癌、子宮癌、又は黒色腫である、請求項３７又は３８に記載の使用。
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