JP2012506716A5 - - Google Patents
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Description
このように生成された化学製品は、乳酸、エタノール、およびコハク酸であり得るが、これらに限定されない。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
微生物内で還元炭素源から酸化還元中性または酸化した化学製品を製造するための方法であって、
電子受容体は、それらが提供されるのと少なくとも同様に迅速に消費される速度で、前記微生物に電子受容体を提供することと、
前記酸化還元中性または酸化した生成物および少なくともいくつかの細胞集団が、前記還元炭素源から生じ、前記還元炭素源が、前記細胞集団よりもさらに還元されるように、前記微生物の供給原料として前記還元炭素源を提供することと、を含み、
前記還元炭素源の前記還元化学製品への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロ以上であり、炭素源の細胞集団への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロを超える、方法。
（項目２）
前記還元炭素源はグリセロールを含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記酸化還元中性または酸化した化学製品は、アルコール、有機酸、アミノ酸、またはラクトンを含む、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記酸化還元中性または酸化した化学製品は、コハク酸、プロピオン酸、エタノール、乳酸、またはアラニンを含む、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記電子受容体は、大気、酸素、硝酸、亜硝酸、またはこれらの組み合わせを含む、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記電子受容体は、１時間当たり細胞集団１グラムにつき酸素１ミリグラムから１時間当たり細胞集団１グラムにつき酸素１５ミリグラムの範囲内の速度で、前記微生物に提供される、項目４に記載の方法。
（項目７）
前記微生物は、エシェリキア属、バシラス属、パエニバチルス属、またはサッカロミセス属に属する、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記化学製品は、コハク酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す）、フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する）、ピルビン酸およびＣＯ ２ のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ ２ のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ ２ のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する）、または、ピルビン酸およびＣＯ ２ のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する）のうちの１つまたはそれ以上を含む、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記化学製品は、プロピオン酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す）、フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する）、ピルビン酸およびＣＯ ２ のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する）、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ ２ のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子、ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ ２ のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する）、または、ピルビン酸およびＣＯ ２ のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子（前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する）、スクシニル−ＣｏＡをメチルマロニル−ＣｏＡに、メチルマロニル−ＣｏＡをプロピオニル−ＣｏＡおよびＣＯ ２ に、ならびにプロピオニル−ＣｏＡおよびコハク酸をプロピオン酸およびスクシニル−ＣｏＡに変換する酵素をコードする、外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの１つまたはそれ以上を含む、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記化学製品は、エタノールを含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ギ酸のＣＯ ２ および水素への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、またはグリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセトアルデヒドおよびＣＯ ２ への変換に関与する外因性遺伝子、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡ、ＣＯ ２ 、およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡおよびギ酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ギ酸のＣＯ ２ およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記化学製品は、乳酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のＬ−乳酸もしくはＤ−乳酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記化学製品は、乳酸を含み、前記微生物は、
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアラニンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現のうちの少なくとも１つを含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
ａｄｈＥ遺伝子、ｐｔａ遺伝子、ｐｏｘＢ遺伝子、ｐｐｃ遺伝子、またはｄｈαＫ遺伝子のうちの１つまたはそれ以上の破壊、
外因性シトロバクターフロインディ（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ）ｄｈａＫＬ遺伝子、および
外因性アクチノバチルスサクシノゲネス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）ｐｃｋＡ遺伝子
を含む、大腸菌株。
（項目１４）
過剰発現されるｇｌｄＡ遺伝子または過剰発現されるｄｈａＫＬＭオペロン、
ｆｒｄＡ、ｆｒｄＢ、ｆｒｄＣ、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの少なくとも１つの破壊、および
ｐｔａ遺伝子の破壊またはｐｏｘＢ遺伝子の破壊を含む、大腸菌株。
（項目１５）
過剰発現されるｇｌｄＡ遺伝子または過剰発現されるｄｈａＫＬＭオペロン、および
ａｄｈＥ遺伝子、ｐｔａ遺伝子、ｐｏｘＢ遺伝子；ｆｒｄＡ遺伝子、ｆｒｄＢ遺伝子、ｆｒｄＣ遺伝子、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの１つまたはそれ以上の破壊を含む、大腸菌株。
（項目１６）
代謝産物を生成するための細菌を培養する方法であって、
ａ．代謝産物を生成することができる細菌を用いて、供給原料としてグリセロールを含む培養培地を接種するステップと、
ｂ．前記グリセロールを代謝産物に変換するために前記反応器中で、≦２０ｍｇ Ｏ ２ ／Ｌ／時の微好気性であるが、好気性あるいは嫌気性でない条件下で、前記細菌を育てるステップであって、グリセロールの代謝産物への変換は、それが生成するよりもさらに還元当量を消費しない、ステップと、を含む、方法。
（項目１７）
前記細菌は、Δｐｔａ、ΔｆｒｄＡ、ならびに過剰発現されるｇｌｄＡおよびｄｈａＫＬＭを含む大腸菌である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記代謝産物は、エタノール、乳酸、コハク酸、プロピオン酸、アラニン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記代謝産物は、エタノール、乳酸、プロピオン酸、コハク酸、プロピオン酸、アラニン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、項目１６に記載の方法。
The chemical products thus produced can be, but are not limited to, lactic acid, ethanol, and succinic acid.
For example, the present invention provides the following items.
(Item 1)
A method for producing a redox neutral or oxidized chemical product from a reduced carbon source in a microorganism comprising:
Providing electron acceptors to the microorganism at a rate that is at least as quickly consumed as they are provided;
As a feedstock for the microorganism, such that the redox neutral or oxidized product and at least some cell population originate from the reduced carbon source, and the reduced carbon source is further reduced than the cell population. Providing the reduced carbon source,
A method wherein the degree of reduction balance for the conversion of the reduced carbon source to the reduced chemical product is zero or greater and the degree of reduction balance for the conversion of the carbon source to a cell population is greater than zero.
(Item 2)
Item 2. The method according to Item 1, wherein the reduced carbon source comprises glycerol.
(Item 3)
Item 2. The method of item 1, wherein the redox neutral or oxidized chemical product comprises an alcohol, an organic acid, an amino acid, or a lactone.
(Item 4)
Item 2. The method of item 1, wherein the redox neutral or oxidized chemical product comprises succinic acid, propionic acid, ethanol, lactic acid, or alanine.
(Item 5)
Item 2. The method of item 1, wherein the electron acceptor comprises air, oxygen, nitric acid, nitrous acid, or a combination thereof.
(Item 6)
5. The method of item 4, wherein the electron acceptor is provided to the microorganism at a rate in the range of 1 milligram of oxygen per gram of cell population per hour to 15 milligrams of oxygen per gram of cell population per hour.
(Item 7)
Item 2. The method according to Item 1, wherein the microorganism belongs to the genus Escherichia, Bacillus, Paenibacillus, or Saccharomyces.
(Item 8)
The chemical product includes succinic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, pyruvin Disruption of genes involved in conversion of acid to lactic acid, destruction of genes involved in conversion of phosphoenolpyruvate to oxaloacetate, destruction of genes involved in conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, pyruvate Of genes involved in the conversion of glycerol to acetyl-CoA, destruction of genes involved in the conversion of phosphoenolpyruvate to pyruvate, destruction of genes involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, glycerol-3-phosphorus Disruption of genes involved in the conversion of acids to dihydroxyacetone-phosphate, glycero Disruption of a gene involved in the conversion to glycerol 3-phosphate Le, dihydroxyacetone - disruption of the gene involved in the conversion of the phosphoric acid to methyl glyoxal, and
b) an exogenous gene that expresses an enzyme involved in the conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate (which uses ATP as a cofactor and produces ADP as a byproduct), glycerol-3-phosphate Exogenous gene expressing an enzyme involved in the conversion of dihydroxyacetone to phosphate (the enzyme passes a reducing equivalent to fumaric acid), an exogenous expressing an enzyme involved in the conversion of fumaric acid to succinic acid Exogenous genes that express genes involved in the conversion of genes (the enzymes accept reducing equivalents from oxidation of glycerol-3-phosphate), pyruvate and CO 2 to oxaloacetate (the enzymes using ATP as a factor to generate the ADP as a byproduct), responsible for the conversion to oxaloacetate phosphoenolpyruvate and CO 2 That exogenous genes that express the enzyme, exogenous gene (the enzyme which expresses an enzyme involved in conversion to oxaloacetate phosphoenolpyruvate and CO 2 uses ADP as a cofactor, produce ATP as a by-product to), or exogenous genes (the enzyme which expresses an enzyme involved in conversion to malate pyruvate and CO 2 comprises one or more of using the NADH) as a cofactor, The method according to item 1.
(Item 9)
The chemical product includes propionic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, pyruvin Disruption of genes involved in conversion of acid to lactic acid, destruction of genes involved in conversion of phosphoenolpyruvate to oxaloacetate, destruction of genes involved in conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, pyruvate Of genes involved in the conversion of glycerol to acetyl-CoA, destruction of genes involved in the conversion of phosphoenolpyruvate to pyruvate, destruction of genes involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, glycerol-3-phosphorus Disruption of genes involved in the conversion of acids to dihydroxyacetone-phosphate, glycero Disruption of a gene involved in the conversion to glycerol 3-phosphate Le, dihydroxyacetone - disruption of the gene involved in the conversion of the phosphoric acid to methyl glyoxal, and
b) an exogenous gene that expresses an enzyme involved in the conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate (which uses ATP as a cofactor and produces ADP as a byproduct), glycerol-3-phosphate Exogenous gene expressing an enzyme involved in the conversion of dihydroxyacetone to phosphate (the enzyme passes a reducing equivalent to fumaric acid), an exogenous expressing an enzyme involved in the conversion of fumaric acid to succinic acid Exogenous genes that express genes involved in the conversion of genes (the enzymes accept reducing equivalents from oxidation of glycerol-3-phosphate), pyruvate and CO 2 to oxaloacetate (the enzymes using ATP as a factor to generate the ADP as a byproduct), responsible for the conversion to oxaloacetate phosphoenolpyruvate and CO 2 That exogenous genes that express the enzyme, exogenous gene (the enzyme which expresses an enzyme involved in conversion to oxaloacetate phosphoenolpyruvate and CO 2 uses ADP as a cofactor, produce ATP as a by-product to), or exogenous genes (the enzyme which expresses an enzyme involved in conversion to malate pyruvate and CO 2 uses NADH as a cofactor), succinyl-CoA to methylmalonyl-CoA, methylmalonyl-CoA to propionyl-CoA and CO 2, as well as propionyl-CoA and succinate encodes an enzyme that converts propionic acid and succinyl-CoA, one of the over-expression of exogenous genes or endogenous genes 2. The method of item 1, comprising or more.
(Item 10)
The chemical product includes ethanol, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in the conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in the conversion of pyruvate to acetic acid, destruction of genes involved in the conversion of fumarate to succinate, dihydroxy Disruption of genes involved in conversion of acetone to dihydroxyacetone-phosphate, disruption of genes involved in conversion of glycerol to dihydroxyacetone, genes involved in conversion of glycerol-3-phosphate to dihydroxyacetone-phosphate Destruction of genes involved in the conversion of glycerol to glycerol-3-phosphate, destruction of genes involved in the conversion of formic acid into CO 2 and hydrogen, destruction of genes involved in the conversion of pyruvate into lactic acid Disruption of genes involved in the conversion of dihydroxyacetone-phosphate to methylglyoxal, and
b) Exogenous gene involved in conversion of glycerol to dihydroxyacetone, overexpression of exogenous or endogenous gene involved in conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, glycerol to glycerol-3-P Overexpression of exogenous or endogenous genes involved in conversion, or overexpression of exogenous or endogenous genes involved in conversion of glycerol-3-P to dihydroxyacetone-phosphate, acetaldehyde of pyruvate and CO exogenous gene involved in conversion to 2, acetyl -CoA pyruvate, CO 2, and overexpression of exogenous gene or an endogenous gene involved in the conversion to NADH, to acetyl -CoA and formic acid pyruvate Exogenous gene or endogenous involved in conversion Overexpression of gene, including at least one of the over-expression of the exogenous gene or an endogenous gene involved in the conversion to CO 2 and NADH formic acid The method of claim 1.
(Item 11)
The chemical product includes lactic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, fuma Disruption of genes involved in conversion of acid to succinic acid, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetyl-CoA, destruction of genes involved in conversion of dihydroxyacetone-phosphate to methylglyoxal, pyruvate Of genes involved in the conversion of D to lactic acid, and
b) overexpression of an exogenous gene or endogenous gene involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, overexpression of an exogenous gene or endogenous gene involved in the conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, Overexpression of an exogenous or endogenous gene involved in conversion to glycerol-3-P, overexpression of an exogenous gene or endogenous gene involved in conversion of glycerol-3-P to dihydroxyacetone-phosphate, Item 2. The method according to Item 1, comprising at least one of overexpression of an exogenous gene or an endogenous gene involved in the conversion of pyruvate to L-lactic acid or D-lactic acid.
(Item 12)
The chemical product includes lactic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, fuma Disruption of genes involved in conversion of acid to succinic acid, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetyl-CoA, destruction of genes involved in conversion of dihydroxyacetone-phosphate to methylglyoxal, pyruvate Of genes involved in the conversion of D to lactic acid, and
b) overexpression of an exogenous gene or endogenous gene involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, overexpression of an exogenous gene or endogenous gene involved in the conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, Overexpression of an exogenous or endogenous gene involved in conversion to glycerol-3-P, overexpression of an exogenous gene or endogenous gene involved in conversion of glycerol-3-P to dihydroxyacetone-phosphate, The method according to item 1, comprising at least one of an exogenous gene or an overexpression of an endogenous gene involved in the conversion of pyruvate to alanine.
(Item 13)
disruption of one or more of the adhE gene, the pta gene, the poxB gene, the ppc gene, or the dhαK gene;
Exogenous Citrobacter freundii dhaKL gene, and
Exogenous Actinobacillus succinogenes pckA gene
E. coli strains, including
(Item 14)
An overexpressed gldA gene or an overexpressed dhaKLM operon,
disruption of at least one of the frdA, frdB, frdC, or frdD genes; and
An E. coli strain comprising disruption of the pta gene or the poxB gene.
(Item 15)
An overexpressed gldA gene or an overexpressed dhaKLM operon, and
An E. coli strain comprising disruption of one or more of the adhE gene, the pta gene, the poxB gene; the frdA gene, the frdB gene, the frdC gene, or the frdD gene.
(Item 16)
A method of culturing bacteria to produce a metabolite comprising:
a. Inoculating a culture medium containing glycerol as a feedstock with bacteria capable of producing metabolites;
b. Cultivating the bacteria in the reactor to convert the glycerol to a metabolite in a microaerobic but not aerobic or anaerobic condition of ≦ 20 mg O 2 / L / hr, Converting the glycerol to a metabolite does not consume more reducing equivalents than it produces.
(Item 17)
The method according to item 16, wherein the bacterium is E. coli comprising Δpta, ΔfrdA, and overexpressed gldA and dhaKLM.
(Item 18)
The method according to item 16, wherein the metabolite is selected from the group consisting of ethanol, lactic acid, succinic acid, propionic acid, alanine, and combinations thereof.
(Item 19)
The method of item 16, wherein the metabolite is selected from the group consisting of ethanol, lactic acid, propionic acid, succinic acid, propionic acid, alanine, and combinations thereof.
Claims (19)
外因性シトロバクターフロインディ（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅｕｎｄｉｉ）ｄｈａＫＬ遺伝子、および
外因性アクチノバチルスサクシノゲネス（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｃｃｉｎｏｇｅｎｅｓ）ｐｃｋＡ遺伝子
を含む、大腸菌株。 disruption of one or more of the adhE gene, the pta gene, the poxB gene, the ppc gene, or the dhαK gene;
Exogenous Citrobacter freundii (Citrobacter freundii) dhaKL gene and exogenous Actinobacillus succinonitrile monocytogenes (Actinobacillus succinogenes) pckA containing gene <br/>, E. coli strain.
ｆｒｄＡ、ｆｒｄＢ、ｆｒｄＣ、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの少なくとも１つの破壊、および
ｐｔａ遺伝子の破壊またはｐｏｘＢ遺伝子の破壊を含む、大腸菌株。 An overexpressed gldA gene or an overexpressed dhaKLM operon,
An E. coli strain comprising disruption of at least one of the frdA, frdB, frdC, or frdD genes, and disruption of the pta gene or the poxB gene.
ａｄｈＥ遺伝子、ｐｔａ遺伝子、ｐｏｘＢ遺伝子；ｆｒｄＡ遺伝子、ｆｒｄＢ遺伝子、ｆｒｄＣ遺伝子、またはｆｒｄＤ遺伝子のうちの１つまたはそれ以上の破壊を含む、大腸菌株。 An E. coli comprising an overexpressed gldA gene or an overexpressed dhaKLM operon and a disruption of one or more of the adhE gene, the pta gene, the poxB gene; the frdA gene, the frdB gene, the frdC gene, or the frdD gene Stocks .
ａ．代謝産物を生成することができる細菌を用いて、供給原料としてグリセロールを含む培養培地を接種するステップと、
ｂ．前記グリセロールを代謝産物に変換するために前記反応器中で、≦２０ｍｇ Ｏ２／Ｌ／時の微好気性であるが、好気性でも嫌気性でもない条件下で、前記細菌を育てるステップであって、グリセロールの前記代謝産物への変換は、代謝により生成される量より多く還元当量を消費しない、ステップと、
を含む、方法。 A method of culturing bacteria to produce a metabolite comprising:
a. Inoculating a culture medium containing glycerol as a feedstock with bacteria capable of producing metabolites;
b. Growing the bacteria in the reactor to convert the glycerol into a metabolite under conditions of microaerobic but not aerobic or anaerobic at ≦ 20 mg O 2 / L / hour there are, conversion to the metabolites of glycerol does not consume more reducing equivalents amount produced by metabolism, the steps,
Including a method.
電子受容体が、それらが提供される速度と少なくとも同じ速度で消費される速度で、前記微生物に電子受容体を提供することと、
前記酸化還元中性または酸化した生成物および少なくともいくつかの細胞集団が、前記還元炭素源から生じ、前記還元炭素源が、前記細胞集団よりもさらに還元されるように、前記微生物の供給原料として前記還元炭素源を提供することと、を含み、
前記還元炭素源の前記還元化学製品への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロ以上であり、炭素源の細胞集団への変換のための還元バランスの度合いは、ゼロを超える、方法。 A method for producing a redox neutral or oxidized chemical product from a reduced carbon source in a microorganism comprising:
And the electron acceptor, at a rate they are consumed at a rate at least as rate provided to provide an electron acceptor to said microorganism,
As a feedstock for the microorganism, such that the redox neutral or oxidized product and at least some cell population originate from the reduced carbon source, and the reduced carbon source is further reduced than the cell population. Providing the reduced carbon source,
A method wherein the degree of reduction balance for the conversion of the reduced carbon source to the reduced chemical product is zero or greater and the degree of reduction balance for the conversion of the carbon source to a cell population is greater than zero.
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す外因性遺伝子；フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する外因性遺伝子；ピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する外因性遺伝子；または、ピルビン酸およびＣＯ２のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する外因性遺伝子
のうちの１つまたはそれ以上を含む、請求項８に記載の方法。 The chemical product includes succinic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, pyruvin Disruption of genes involved in conversion of acid to lactic acid, destruction of genes involved in conversion of phosphoenolpyruvate to oxaloacetate, destruction of genes involved in conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, pyruvate Of genes involved in the conversion of glycerol to acetyl-CoA, destruction of genes involved in the conversion of phosphoenolpyruvate to pyruvate, destruction of genes involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, glycerol-3-phosphorus Disruption of genes involved in the conversion of acids to dihydroxyacetone-phosphate, glycero Disruption of a gene involved in the conversion to glycerol 3-phosphate Le, dihydroxyacetone - disruption of the gene involved in the conversion of the phosphoric acid to methylglyoxal Lumpur, and b) dihydroxyacetone dihydroxyacetone - phosphate a exogenous genes that express enzymes involved in conversion to, the enzyme uses ATP as a cofactor, the exogenous gene to produce a ADP as a by-product; glycerol-3-dihydroxyacetone phosphate - phosphorus a exogenous gene which expresses an enzyme involved in the conversion to an acid, the enzyme, exogenous genes pass reducing equivalents to fumaric acid; exogenous expressing an enzyme involved in the conversion to succinate fumarate a gene, the enzyme is exogenous gene receiving the reducing equivalents from the oxidation of glycerol-3-phosphate; pyruvate and A exogenous genes that express enzymes involved in conversion to O 2 of oxaloacetate, the enzyme uses ATP as a cofactor, the exogenous gene to produce a ADP as a by-product; phosphoenolpyruvate and CO An exogenous gene expressing an enzyme involved in the conversion of 2 to oxaloacetate ; an exogenous gene expressing an enzyme involved in the conversion of phosphoenolpyruvate and CO 2 to oxaloacetate , said enzyme comprising An exogenous gene that uses ADP as a factor and produces ATP as a by-product ; or an exogenous gene that expresses an enzyme involved in the conversion of pyruvate and CO 2 to malate , said enzyme comprising a cofactor 9. The method of claim 8 , comprising one or more of the exogenous genes that use NADH as.
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のオキサロ酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ホスホエノールピルビン酸のピルビン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、フマル酸へ還元当量を渡す外因性遺伝子；フマル酸のコハク酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、グリセロール−３−リン酸の酸化からの還元当量を受容する外因性遺伝子；ピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＴＰを使用し、副産物としてＡＤＰを生成する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子；ホスホエノールピルビン酸およびＣＯ２のオキサロ酢酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＡＤＰを使用し、副産物としてＡＴＰを生成する外因性遺伝子；または、ピルビン酸およびＣＯ２のリンゴ酸への変換に関与する酵素を発現する外因性遺伝子であって、前記酵素は、補因子としてＮＡＤＨを使用する外因性遺伝子；スクシニル−ＣｏＡをメチルマロニル−ＣｏＡに、メチルマロニル−ＣｏＡをプロピオニル−ＣｏＡおよびＣＯ２に、ならびにプロピオニル−ＣｏＡおよびコハク酸をプロピオン酸およびスクシニル−ＣｏＡに変換する酵素をコードする、外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの１つまたはそれ以上を含む、請求項８に記載の方法。 The chemical product includes propionic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, pyruvin Disruption of genes involved in conversion of acid to lactic acid, destruction of genes involved in conversion of phosphoenolpyruvate to oxaloacetate, destruction of genes involved in conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, pyruvate Of genes involved in the conversion of glycerol to acetyl-CoA, destruction of genes involved in the conversion of phosphoenolpyruvate to pyruvate, destruction of genes involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, glycerol-3-phosphorus Disruption of genes involved in the conversion of acids to dihydroxyacetone-phosphate, glycero Disruption of a gene involved in the conversion to glycerol 3-phosphate Le, dihydroxyacetone - disruption of the gene involved in the conversion of the phosphoric acid to methylglyoxal Lumpur, and b) dihydroxyacetone dihydroxyacetone - phosphate a exogenous genes that express enzymes involved in conversion to, the enzyme uses ATP as a cofactor, the exogenous gene to produce a ADP as a by-product; glycerol-3-dihydroxyacetone phosphate - phosphorus a exogenous gene which expresses an enzyme involved in the conversion to an acid, the enzyme, exogenous genes pass reducing equivalents to fumaric acid; exogenous expressing an enzyme involved in the conversion to succinate fumarate a gene, the enzyme is exogenous gene receiving the reducing equivalents from the oxidation of glycerol-3-phosphate; pyruvate and A exogenous genes that express enzymes involved in conversion to O 2 of oxaloacetate, the enzyme uses ATP as a cofactor, the exogenous gene to produce a ADP as a by-product; phosphoenolpyruvate and CO An exogenous gene expressing an enzyme involved in the conversion of 2 to oxaloacetate ; an exogenous gene expressing an enzyme involved in the conversion of phosphoenolpyruvate and CO 2 to oxaloacetate , said enzyme comprising An exogenous gene that uses ADP as a factor and produces ATP as a by-product ; or an exogenous gene that expresses an enzyme involved in the conversion of pyruvate and CO 2 to malate , said enzyme comprising a cofactor exogenous genes using a NADH as; succinyl-CoA to methylmalonyl-CoA, prop methylmalonyl-CoA The sulfonyl-CoA and CO 2, as well as propionyl-CoA and succinate encodes an enzyme that converts propionic acid and succinyl-CoA, including one or more of the over-expression of exogenous genes or endogenous genes The method according to claim 8 .
ａ）アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロール−３−リン酸のジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、グリセロールのグリセロール−３−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ギ酸のＣＯ２および水素への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、またはグリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセトアルデヒドおよびＣＯ２への変換に関与する外因性遺伝子、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡ、ＣＯ２、およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡおよびギ酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ギ酸のＣＯ２およびＮＡＤＨへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの少なくとも１つを含む、請求項８に記載の方法。 The chemical product includes ethanol, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in the conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in the conversion of pyruvate to acetic acid, destruction of genes involved in the conversion of fumarate to succinate, dihydroxy Disruption of genes involved in conversion of acetone to dihydroxyacetone-phosphate, disruption of genes involved in conversion of glycerol to dihydroxyacetone, genes involved in conversion of glycerol-3-phosphate to dihydroxyacetone-phosphate Destruction of genes involved in the conversion of glycerol to glycerol-3-phosphate, destruction of genes involved in the conversion of formic acid into CO 2 and hydrogen, destruction of genes involved in the conversion of pyruvate into lactic acid , dihydroxyacetone - disruption of the gene involved in the conversion of the phosphoric acid to methylglyoxal Lumpur, and b) For exogenous gene involved in conversion of glycerol to dihydroxyacetone, overexpression of exogenous gene or endogenous gene involved in conversion of dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate, conversion of glycerol to glycerol-3-P Overexpression of exogenous or endogenous genes involved, or overexpression of exogenous or endogenous genes involved in conversion of glycerol-3-P to dihydroxyacetone-phosphate, pyruvate to acetaldehyde and CO 2 exogenous gene involved in the conversion, acetyl -CoA pyruvate, CO 2, and overexpression of exogenous gene or an endogenous gene involved in the conversion to NADH, the conversion to acetyl -CoA and formic acid pyruvate Exogenous or endogenous inheritance involved Overexpression comprises at least one of the over-expression of the exogenous gene or an endogenous gene involved in the conversion to CO 2 and NADH formic acid method according to claim 8.
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のＬ−乳酸もしくはＤ−乳酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの少なくとも１つを含む、請求項８に記載の方法。 The chemical product includes lactic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, fuma disruption of a gene involved in the conversion to succinate acid, disruption of a gene involved in the conversion of the acetyl -CoA pyruvate, dihydroxyacetone - disruption of the gene involved in the conversion of the phosphoric acid to methylglyoxal Lumpur Disruption of genes involved in the conversion of pyruvate to D-lactic acid, and b) overexpression of exogenous or endogenous genes involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate Overexpression of exogenous or endogenous genes involved in the conversion of glycerol, glycerol glycerol Overexpression of exogenous gene or endogenous gene involved in conversion to 3-P, overexpression of exogenous gene or endogenous gene involved in conversion of glycerol-3-P to dihydroxyacetone-phosphate, pyruvate The method according to claim 8 , comprising at least one of an exogenous gene or an overexpression of an endogenous gene involved in the conversion of L-lactic acid or D-lactic acid.
ａ）アセチル−ＣｏＡのエタノールへの変換に関与する遺伝子の破壊、アセチル−ＣｏＡのアセチル−リン酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸の酢酸への変換に関与する遺伝子の破壊、フマル酸のコハク酸への変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のアセチル−ＣｏＡへの変換に関与する遺伝子の破壊、ジヒドロキシアセトン−リン酸のメチルグリオキサールへの変換に関与する遺伝子の破壊、ピルビン酸のＤ−乳酸への変換に関与する遺伝子の破壊、および
ｂ）グリセロールのジヒドロキシアセトンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ジヒドロキシアセトンのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロールのグリセロール−３−Ｐへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、グリセロール−３−Ｐのジヒドロキシアセトン−リン酸への変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現、ピルビン酸のアラニンへの変換に関与する外因性遺伝子もしくは内在性遺伝子の過剰発現
のうちの少なくとも１つを含む、請求項８に記載の方法。
The chemical product includes lactic acid, and the microorganism is
a) Disruption of genes involved in conversion of acetyl-CoA to ethanol, destruction of genes involved in conversion of acetyl-CoA to acetyl-phosphate, destruction of genes involved in conversion of pyruvate to acetic acid, fuma disruption of a gene involved in the conversion to succinate acid, disruption of a gene involved in the conversion of the acetyl -CoA pyruvate, dihydroxyacetone - disruption of the gene involved in the conversion of the phosphoric acid to methylglyoxal Lumpur Disruption of genes involved in the conversion of pyruvate to D-lactic acid, and b) overexpression of exogenous or endogenous genes involved in the conversion of glycerol to dihydroxyacetone, dihydroxyacetone to dihydroxyacetone-phosphate Overexpression of exogenous or endogenous genes involved in the conversion of glycerol, glycerol glycerol Overexpression of exogenous gene or endogenous gene involved in conversion to 3-P, overexpression of exogenous gene or endogenous gene involved in conversion of glycerol-3-P to dihydroxyacetone-phosphate, pyruvate 9. The method of claim 8 , comprising at least one of an exogenous gene or an overexpression of an endogenous gene involved in the conversion of alanine to alanine.
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