JP2011512821A5

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Info

Publication number: JP2011512821A5
Application number: JP2010548938A
Authority: JP
Filing date: 2009-03-02
Publication date: 2012-04-19
Anticipated expiration: 2029-03-02

Description

Claims

コールドショックタンパク質又はそのホモローグ、及びＤＮＡポリメラーゼを含む、ＤＮＡ合成用の組成物。
コールドショックタンパク質はＣｓｐＡ又はそのホモローグを含む、請求項１に記載の組成物。
ＣｓｐＡ又はそのホモローグは大腸菌由来である、請求項１に記載の組成物。
少なくとも１つのさらなるＤＮＡポリメラーゼをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
少なくとも１つのＤＮＡポリメラーゼは３’→５’エキソヌクレアーゼ活性を有し、且つ少なくとも１つのＤＮＡポリメラーゼは３’→５’エキソヌクレアーゼ活性を実質的に有しない、請求項４に記載の組成物。
少なくとも１種のデオキシリボヌクレオチド三リン酸をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
反応緩衝液をさらに含む、請求項６に記載の組成物。
組成物２５μＬ当たり０．５μｇ超のＣｓｐＡを含む、請求項２に記載の組成物。
ＤＮＡを合成する方法であって、
Ａ）コールドショックタンパク質、ＤＮＡポリメラーゼ、少なくとも１種のプライマー、少なくとも１種のデオキシリボヌクレオチド三リン酸、及びＤＮＡを含む混合物を調製する工程、並びに
Ｂ）工程Ａ）で調製した混合物をインキュベートする工程を含む、方法。
ＤＮＡの合成はＰＣＲによって行われる、請求項９に記載の方法。
室温に置いてある混合物を直接工程Ｂ）に供する、請求項１０に記載の方法。
ＤＮＡ合成用のキットであって、
Ａ）コールドショックタンパク質、
Ｂ）ＤＮＡポリメラーゼ、プライマー、及びデオキシリボヌクレオチドから成る群から選択される少なくとも１つのコンポーネント、並びに
Ｃ）反応緩衝液を含む、キット。
各々のコンポーネントは個別に存在する、請求項１２に記載のキット。
少なくとも２つのコンポーネントが組み合わせてある、請求項１２に記載のキット。
逆転写反応用の組成物であって、コールドショックタンパク質又はそのホモローグ、及び逆転写酵素を含む、組成物。
コールドショックタンパク質はＣｓｐＡ又はそのホモローグである、請求項１５に記載の組成物。
ＣｓｐＡ又はそのホモローグは、大腸菌由来ＣｓｐＡである、請求項１６に記載の組成物。
逆転写酵素はモロニーマウス白血病ウイルス由来逆転写酵素、若しくはトリ骨髄芽球症ウイルス由来逆転写酵素、又はそれらの組み合わせである、請求項１５に記載の組成物。
少なくとも１種のデオキシリボヌクレオチド三リン酸をさらに含む、請求項１５に記載の組成物。
反応緩衝液をさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
組成物２０μＬ当たり約０．５μｇ〜約２０μｇのＣｓｐＡを含む、請求項１６に記載の組成物。
オリゴ（ｄＴ）プライマー、若しくはランダムな配列を有するオリゴヌクレオチドプライマー、又はそれらの組み合わせをさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
ｃＤＮＡを合成する方法であって、
Ａ）コールドショックタンパク質、逆転写酵素、少なくとも１種のプライマー、少なくとも１種のデオキシリボヌクレオチド三リン酸、及びＲＮＡを含む混合物を調製する工程、並びに
Ｂ）工程Ａ）で調製した混合物をインキュベートする工程を含む、方法。
混合物を３０℃〜６５℃で５分〜１２０分間インキュベートする、請求項２３に記載の方法。
混合物を３７℃〜５０℃でインキュベートする、請求項２３に記載の方法。
逆転写反応用のキットであって、
Ａ）コールドショックタンパク質、
Ｂ）逆転写酵素、プライマー、及びデオキシリボヌクレオチド三リン酸から成る群から選択される少なくとも１つのコンポーネント、並びに
Ｃ）反応緩衝液を含む、キット。
遺伝子増幅反応を行うための試薬をさらに含む、請求項２６に記載のキット。
試薬は耐熱性のＤＮＡポリメラーゼ、反応緩衝液、及び少なくとも１種のデオキシリボヌクレオチド三リン酸を含む、請求項２７に記載のキット。
各々のコンポーネントは個別に存在する、請求項２６に記載のキット。
少なくとも２つのコンポーネントが組み合わせてある、請求項２６に記載のキット。
エンドリボヌクレアーゼ切断部位の同定用の組成物であって、
Ａ）コールドショックタンパク質、並びに
Ｂ）ＲＮＡ基質及びエンドリボヌクレアーゼから成る群から選択される少なくとも１つのコンポーネントを含む、組成物。
コールドショックタンパク質及びＲＮＡ基質を含む、請求項３１に記載の組成物。
反応緩衝液をさらに含む、請求項３１に記載の組成物。
エンドリボヌクレアーゼ切断部位を同定する方法であって、
Ａ）コールドショックタンパク質、ＲＮＡ基質、及びエンドリボヌクレアーゼを含む混合物を調製する工程、並びに
Ｂ）工程Ａ）の混合物をインキュベートする工程を含む、方法。
混合物を電気泳動によって解析する工程をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
エンドリボヌクレアーゼ切断部位の同定用のキットであって、コールドショックタンパク質及びＲＮＡ基質を含む、キット。
反応緩衝液をさらに含む、請求項３６に記載のキット。
コールドショックタンパク質及びＲＮＡ基質は個別に存在する、請求項３６に記載のキット。
コールドショックタンパク質及びＲＮＡ基質は組み合わせてある、請求項３６に記載のキット。