JP2011133294A - Biosensor - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、第1電極又は第2電極に、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む試薬の各成分が塗布されたバイオセンサに関する。 The present invention relates to a biosensor in which each component of a reagent including an enzyme, a mediator, a water-soluble polymer, a hemolytic agent, a surfactant, and a buffer solution is applied to a first electrode or a second electrode.
近年、糖尿病の患者が各国において増加している。糖尿病の治療としては、例えば、インスリン療法がある。インスリンは血糖値をコントロールする薬物として知られており、糖尿病の治療薬として糖尿病患者に投与されている。インスリンを投与する必要性は、糖尿病患者の血糖値に基づいて判断される。このため、糖尿病患者にとって、血糖値の把握が重要である。血糖値とは、血液中のグルコース濃度である。糖尿病患者自らが自分の血糖値を簡易に測定できることを目的として、簡易な血糖測定装置が開発されている。 In recent years, the number of diabetic patients is increasing in each country. As a treatment for diabetes, for example, there is insulin therapy. Insulin is known as a drug that controls blood glucose levels and is administered to diabetic patients as a therapeutic agent for diabetes. The need to administer insulin is determined based on the blood glucose level of the diabetic patient. For this reason, it is important for a diabetic patient to grasp a blood glucose level. The blood glucose level is the glucose concentration in the blood. A simple blood glucose measuring device has been developed for the purpose of allowing a diabetic patient to easily measure his blood glucose level.
前述された血糖測定装置として、バイオセンサが用いられるものが知られている(特許文献1〜4)。バイオセンサは、血糖と反応する酵素が固定された電極を有する。血糖値の測定に用いられる酵素として、グルコースオキシターゼ(以下、「GOD」と略されることがある。)やグルコースデヒドロゲナーゼ(以下、「GDH」と略されることがある。)が知られている。バイオセンサにおいて、酵素が固定された電極が作用極と称され、試料中に電子を供給する電極が対極と称される。 As the blood glucose measurement device described above, one using a biosensor is known (Patent Documents 1 to 4). The biosensor has an electrode on which an enzyme that reacts with blood sugar is fixed. Glucose oxidase (hereinafter sometimes abbreviated as “GOD”) and glucose dehydrogenase (hereinafter sometimes abbreviated as “GDH”) are known as enzymes used for blood glucose level measurement. . In a biosensor, an electrode on which an enzyme is immobilized is called a working electrode, and an electrode that supplies electrons into a sample is called a counter electrode.
試料である血液がバイオセンサに導入され、その血液中のグルコースに作用極のGODが反応すると、グルコースがグルコン酸及び過酸化水素に分解され、その過酸化水素が水及び電子に分解される。このようにして発生した電子が作用極に伝達される。一方、対極からは血液中に電子が供給される。このようにして、GODとグルコースとの反応によって、作用極と対極との間に電流が流れる。そして、流れた電流値に基づいて、血液中のグルコース濃度、つまり血糖値が算出される。また、作用極には、電子を伝達する物質が固定されることがある。この物質は、電子メディエータと称される。電子メディエータとして、例えば、フェリシアン化カリウム、ヘキサアンミンルテニウムやキノン誘導体類等の有機化合物、又は有機−金属錯体などが挙げられる。 When blood as a sample is introduced into the biosensor and GOD of the working electrode reacts with glucose in the blood, glucose is decomposed into gluconic acid and hydrogen peroxide, and the hydrogen peroxide is decomposed into water and electrons. The electrons generated in this way are transmitted to the working electrode. On the other hand, electrons are supplied from the counter electrode into the blood. In this way, a current flows between the working electrode and the counter electrode due to the reaction between GOD and glucose. Then, based on the flowing current value, the glucose concentration in the blood, that is, the blood glucose level is calculated. In addition, a substance that transmits electrons may be fixed to the working electrode. This material is referred to as an electron mediator. Examples of the electron mediator include organic compounds such as potassium ferricyanide, hexaammineruthenium and quinone derivatives, or organic-metal complexes.
前述されたバイオセンサにおいて、GODやGDHなどの酵素は、水溶液にされて電極に塗布されることによって固定される。具体的には、ディッピング法やスクリーン印刷法、オフセット印刷法、インクジェット印刷法などが公知である(特許文献6〜8)。 In the biosensor described above, an enzyme such as GOD or GDH is fixed by making it into an aqueous solution and applying it to the electrode. Specifically, a dipping method, a screen printing method, an offset printing method, an ink jet printing method, and the like are known (Patent Documents 6 to 8).
また、前述されたバイオセンサにおいて、電極に塗布される酵素などの水溶液にカチオン性の界面活性剤(脂肪酸)が含有されることが公知である(特許文献9)。カチオン性の界面活性剤が含有されることによって、血液試料中の赤血球(ヘマトクリット値)が溶血されて、比較的粘度が高い血液試料であっても、誤差を少なくして、迅速に血糖値が測定されるという利点がある。 Moreover, in the biosensor described above, it is known that a cationic surfactant (fatty acid) is contained in an aqueous solution of an enzyme or the like applied to an electrode (Patent Document 9). By containing a cationic surfactant, red blood cells (hematocrit value) in a blood sample are hemolyzed, and even in a blood sample with a relatively high viscosity, the blood sugar level can be quickly increased with less error. There is an advantage that it is measured.
前述されたバイオセンサにおいて、スペーサによって形成された空間が試料空間とされる構成が公知である。試料空間は、バイオセンサの外側に開口されており、その開口が血液に曝されると、毛細管現象によって血液が試料空間へ導かれる。したがって、開口が血液に曝されてから試料空間が血液で満たされるまでの時間は、毛細管現象に依存することとなる。この時間は、迅速な測定を実現する観点からは、できる限り早いことが望ましい。 In the biosensor described above, a configuration in which a space formed by a spacer is a sample space is known. The sample space is opened outside the biosensor. When the opening is exposed to blood, blood is guided to the sample space by capillary action. Therefore, the time from when the opening is exposed to blood until the sample space is filled with blood depends on capillary action. This time is desirably as early as possible from the viewpoint of realizing quick measurement.
本発明は、前述された事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、対向配置された第1面と第2面とにより試料空間が形成されたバイオセンサにおいて、試料空間へ試料が迅速に満たされる手段を提供することにある。 The present invention has been made in view of the above-described circumstances, and an object of the present invention is to quickly move a sample to a sample space in a biosensor in which a sample space is formed by a first surface and a second surface arranged to face each other. It is to provide means to be satisfied.
本発明は、第1電極と、第2電極と、検体が導入される試料空間と、試薬とを備えたバイオセンサである。上記試料空間は、少なくとも上記第1電極の一部を含む第1面と、当該第1面と対向して配置された第2面との間に形成されている。上記試薬は、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む。上記試薬の各成分は、下記(A)又は(B)の態様で塗布されている。
(A)上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が上記第1面又は上記第2面の一方に塗布され、他の成分が上記第1面又は上記第2面の他方に塗布されている。
(B)上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第1面及び上記第2面に塗布されている。
The present invention is a biosensor including a first electrode, a second electrode, a sample space into which a specimen is introduced, and a reagent. The sample space is formed between a first surface including at least a part of the first electrode and a second surface disposed to face the first surface. The reagent includes an enzyme, a mediator, a water-soluble polymer, a hemolytic agent, a surfactant, and a buffer solution. Each component of the reagent is applied in the following mode (A) or (B).
(A) Among the components of the reagent, any one component selected from the group consisting of a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant is applied to one of the first surface and the second surface, and the other Is applied to the other of the first surface and the second surface.
(B) Among the components of the reagent, a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant are applied to the first surface and the second surface.
バイオセンサは、検体中の被検出物質を電気化学的に検出するためのものである。検体としては、血液や唾液、尿などの主として液体が挙げられる。例えば、検体が血液であれば、被検出物質として、血糖やコルチゾール、コレステロール、中性脂肪、ヘモグロビン、ビリルビン並びに銅、亜鉛及び鉄等の微量金属などが挙げられる。検体がバイオセンサの電極と接触されることにより、検体と酵素とが混合されて、被検出物質が酵素反応を起こす。その酵素反応の過程において生成される電荷が電極に流れることによって、被検出物質が電気的に検出可能となる。 The biosensor is for electrochemically detecting a substance to be detected in a specimen. Examples of the specimen include mainly liquids such as blood, saliva, and urine. For example, if the sample is blood, examples of the substance to be detected include blood glucose, cortisol, cholesterol, neutral fat, hemoglobin, bilirubin, and trace metals such as copper, zinc, and iron. When the specimen is brought into contact with the electrode of the biosensor, the specimen and the enzyme are mixed, and the substance to be detected causes an enzyme reaction. A substance to be detected can be detected electrically by the charge generated in the course of the enzyme reaction flowing to the electrode.
試薬に含まれる酵素は、前述された被検出物質の電気的な検出のために被検物質又は反応生成物と反応するものであれば特に限定されないが、例えば、被検出物質が血液中のグルコースであれば、グルコースを分解して電子を発生させるものである。具体的には、酵素として、グルコースオキシダーゼ、グルコースデヒドロゲナーゼ、フラビンアデニンジヌクレオチドを補酵素としたグルコースデヒドロゲナーゼ、ピロロキノリンキノンを補酵素としたグルコースデヒドロゲナーゼが挙げられる。 The enzyme contained in the reagent is not particularly limited as long as it reacts with the test substance or the reaction product for the electrical detection of the target substance described above. For example, the target substance is glucose in blood. If so, glucose is decomposed to generate electrons. Specific examples of the enzyme include glucose oxidase, glucose dehydrogenase, glucose dehydrogenase using flavin adenine dinucleotide as a coenzyme, and glucose dehydrogenase using pyrroloquinoline quinone as a coenzyme.
試薬に含まれるメディエータは、例えば、前述された酵素によってグルコースが分解されて発生した電子を第1電極又は第2電極へ伝達するものであり、具体的には、メディエータとして、フェリシアン化カリウム、フェロシアン化カリウム、ジメチルフェロセン、フェリシニウム、ヘキサアンミンルテニウム化合物、オスミウム化合物、ヒドロキノンなどが挙げられる。 The mediator contained in the reagent, for example, transmits electrons generated by the decomposition of glucose by the enzyme described above to the first electrode or the second electrode. Specifically, as the mediator, potassium ferricyanide, potassium ferrocyanide, etc. Dimethylferrocene, ferricinium, hexaammineruthenium compound, osmium compound, hydroquinone and the like.
試薬に含まれる水溶性高分子は、第1面又は第2面に皮膜を形成するものである。これにより、試薬に含まれる他の成分が第1面又は第2面に固定されやすくなり、また、酵素活性が安定する。具体的には、水溶性高分子として、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルアルコール、ポリフルオロスルホナート、酢酸セルロース、デキストランなどが挙げられる。 The water-soluble polymer contained in the reagent forms a film on the first surface or the second surface. Thereby, the other components contained in the reagent are easily fixed to the first surface or the second surface, and the enzyme activity is stabilized. Specific examples of the water-soluble polymer include polyvinyl pyrrolidone, carboxymethyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, polyvinyl alcohol, polyfluorosulfonate, cellulose acetate, and dextran.
試薬に含まれる溶血剤は、検体である血液を溶血させるものである。これにより、検体である血液の粘度に依存することなく、酵素反応による被検物質の測定が迅速に行われる。具体的には、溶血剤として、塩化アンモニウム、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド、ドデシルトリメチルアンモニウムブロミド、セチルトリメチルアンモニウムブロミド、オクタデシルトリメチルアンモニウムブロミドなどが挙げられる。 The hemolytic agent contained in the reagent is used to hemolyze blood as a specimen. Thereby, the measurement of the test substance by the enzyme reaction is rapidly performed without depending on the viscosity of the blood as the specimen. Specific examples of the hemolytic agent include ammonium chloride, sodium cholate, sodium deoxycholate, tetradecyltrimethylammonium bromide, dodecyltrimethylammonium bromide, cetyltrimethylammonium bromide, octadecyltrimethylammonium bromide and the like.
試薬に含まれる界面活性剤は、試薬の各成分の混合を円滑に行うためのものである。具体的には、界面活性剤として、Triton(商標)、Tween(商標)、Brij(商標)などが挙げられる。 The surfactant contained in the reagent is for smoothly mixing each component of the reagent. Specifically, Triton (trademark), Tween (trademark), Brij (trademark), etc. are mentioned as surfactant.
試薬に含まれる緩衝液は、安定な測定条件とするために試薬のpHを調整するものである。具体的には、緩衝液として、MES緩衝液、PBS緩衝液、TRIS緩衝液、PIPES緩衝液、MOPS緩衝液、HEPES緩衝液、CAPS緩衝液などが挙げられる。 The buffer contained in the reagent adjusts the pH of the reagent in order to obtain stable measurement conditions. Specifically, examples of the buffer include MES buffer, PBS buffer, TRIS buffer, PIPES buffer, MOPS buffer, HEPES buffer, and CAPS buffer.
本発明によれば、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が上記第1面又は上記第2面の一方に塗布され、他の成分が上記第1面又は上記第2面の他方に塗布されているか、或いは、試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第1面及び上記第2面に塗布されているので、試料空間へ試料が迅速に満たされる。これにより、迅速な被検物質の測定が実現される。 According to the present invention, among the components of the reagent including an enzyme, a mediator, a water-soluble polymer, a hemolyzing agent, a surfactant, and a buffer solution, selected from the group consisting of a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant Either one of the components is applied to one of the first surface or the second surface and the other component is applied to the other of the first surface or the second surface, or among the components of the reagent, Since the water-soluble polymer, hemolytic agent and surfactant are applied to the first surface and the second surface, the sample is quickly filled into the sample space. Thereby, rapid measurement of the test substance is realized.
以下に、適宜図面が参照されて、本発明の好ましい実施形態が説明される。なお、以下に説明される各実施形態は本発明の一例にすぎず、本発明の要旨を変更しない範囲で、本発明の実施形態が適宜変更できることは言うまでもない。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described with reference to the drawings as appropriate. Each embodiment described below is only an example of the present invention, and it is needless to say that the embodiment of the present invention can be changed as appropriate without departing from the gist of the present invention.
[血糖測定装置10]
図1に示されるように、血糖測定装置10は、バイオセンサ11と装置本体12とを有する。バイオセンサ11が装置本体12の接続部13に差し込まれることによって、バイオセンサ11と装置本体12とが電気的に接続される。バイオセンサ11は、1回の血糖測定毎に取り替えられるものである。このバイオセンサ11が、本発明におけるバイオセンサに相当する。
[Blood glucose measuring device 10]
As shown in FIG. 1, the blood
[装置本体12]
図1に示されるように、装置本体12は、筐体50に電子部品が収容された電子装置である。筐体50の表側には、液晶ディスプレイ51及び操作キー52,53,54が配置されている。操作キー52,53,54は、ユーザの操作に基づいて対応するコマンドを発生させるためのものである。液晶ディスプレイ51は、装置本体12の状態や測定結果、エラー表示などを行う。
[Apparatus body 12]
As shown in FIG. 1, the apparatus
[バイオセンサ11]
図1に示されるように、バイオセンサ11は、細長なシート形状である。バイオセンサ11の長手方向101の一端が、装置本体12の接続部13に差し込まれることによって、バイオセンサ11が装置本体12に装着される。また、バイオセンサ11が長手方向101に引き抜かれることによって、バイオセンサ11が装置本体10から取り外される。
[Biosensor 11]
As shown in FIG. 1, the
バイオセンサ11の表裏は相対的な関係なので、いずれが表であっても裏であってもよい。本実施形態においては、図1に現れる側が表と称され、図1に現れない側が裏と称される。つまり、バイオセンサ11は、表面21及び裏面22が表裏面をなすシート形状である。
Since the front and back of the
図2に示されるように、バイオセンサ11は、主として、第1基板23、第1電極24、スペーサ25、第2電極26、第3電極27及び第2基板28を有する。図2における上側、つまり表側から順に、第1基板23、スペーサ25、第1電極24、第2電極26及び第3電極27、第2基板28の順に積層されて、シート形状のバイオセンサ11が構成されている。
As shown in FIG. 2, the
[第1基板23]
図2に示されるように、第1基板23は、平面視がバイオセンサ11と概ね同じ形状であって、長手方向101において第2基板24より若干短いシートである。第1基板23は、電気絶縁性の材料からなる。この電気絶縁性の材料として、例えばポリエチレンテレフタレート(PET)、ポリメタクリル酸メチル(PMMA)等のポリエステルや、フッ素樹脂及びポリカーボネイト、ガラスなどが挙げられる。
[First substrate 23]
As shown in FIG. 2, the
第1基板23の一方の面は、表面21を構成する。第1基板23の表面21には、方向102の両端に一対の着色部30,31が形成されている。着色部30,31は、表面21と色分けされたものである。着色部30,31は、後述される試料導入口41の位置の視認を容易にするためのものである。したがって、着色部30,31は、試料導入口41の直上に配置されている。
One surface of the
後述されるように、第1基板23において、空間40に対応する領域42には、試薬の各成分が固定されている。試薬の各成分の詳細については、後述される。第1基板23において、スペーサ25側を向く面のうち、試薬が塗布される領域42が本発明における第2面に相当する。
As will be described later, each component of the reagent is fixed to a
[第2基板28]
図2に示されるように、第2基板28は、平面視がバイオセンサ11と概ね同じ形状のシートである。第2基板28は、電気絶縁性の材料からなる。この電気絶縁性の材料として、例えばポリエチレンテレフタレート(PET)、ポリメタクリル酸メチル(PMMA)等のポリエステルや、フッ素樹脂及びポリカーボネイト、ガラスなどが挙げられる。
[Second substrate 28]
As shown in FIG. 2, the
第2基板28の一方の面は、裏面22を構成する。後述されるように、裏面22と反対側の面34には第1電極24,第2電極26及び第3電極27が設けられている。第2基板28において、装置本体12の接続部13に差し込まれる長手方向101の一端側は、第1基板23とは対向されていない。
One surface of the
各図には現れていないが、第2基板28の裏面22には、着色部30,31と同様の着色部が形成されている。
Although not appearing in each figure, a colored portion similar to the
[第1電極24]
図2に示されるように、第1電極24は、第2基板28における裏面22と反対側の面34に設けられている。第1電極24は、第2基板28の面34において、長手方向101へ延出されており、方向102において第2基板28の1/3程度の幅を有する。面24において、第1電極24は、後述される第2電極26及び第3電極27と電気的に非接続に配置されている。第1電極24の素材としては、例えば、銀/塩化銀、金、パラジウム、白金などが挙げられる。第1電極24は、第1基板23に対して、スクリーン印刷法、インクジェット法、スパッタリング、真空蒸着、ゾルゲル法、クラスタビーム蒸着又はPLDなどの手法によって面34に積層されている。第1電極24において、装置本体12の接続部13側に対応する端部は、第1基板23と対向せずに露出されている。この端部が装置本体12と電気的に接続される接続端子33である。
[First electrode 24]
As shown in FIG. 2, the
[第2電極26]
図2に示されるように、第2電極26は、第2基板28における裏面22と反対側の面34に設けられている。第2電極26は、第2基板28の面34において、長手方向101へ延出されており、方向102において第2基板28の1/3程度の幅を有する。面24において、第2電極26は、第1電極24及び後述される第3電極27と電気的に非接続に配置されている。第2電極26の素材としては、例えば、カーボンが挙げられる。第2電極26にカーボンが用いられることによって、銀/塩化銀、金、パラジウム、白金などが採用される第1電極23の抵抗値が、カーボン製の第2電極26の抵抗値より低くなるので、空間40の血液に電子が供給されやすくなる。もちろん、第2電極26が、第1電極24と同様に、銀/塩化銀、金、パラジウム、白金などの素材で構成されてもよい。第2電極26において、装置本体12の接続部13側に対応する端部は、第1基板23と対向せずに露出されている。この端部が装置本体12と電気的に接続される接続端子37である。
[Second electrode 26]
As shown in FIG. 2, the
[第3電極27]
図2に示されるように、第3電極27は、第2基板28における裏面22と反対側の面34に設けられている。第3電極27は、第2基板28の面34において、長手方向101へ延出されており、方向102において第2基板28の1/3程度の幅を有する。面24において、第3電極27は、第1電極24及び第2電極26と電気的に非接続に配置されている。第3電極27の素材としては、例えば、銀/塩化銀、金、パラジウム、白金などが挙げられる。第3電極27は、空間40へ血液が導入されたか否かを検出するための電極である。第3電極27において、装置本体12の接続部13側に対応する端部は、第1基板23と対向せずに露出されている。この端部が装置本体12と電気的に接続される接続端子39である。
[Third electrode 27]
As shown in FIG. 2, the
[スペーサ25]
図2に示されるように、スペーサ25は、平面視がバイオセンサ11と概ね同じ形状のシートである。スペーサ25としては、電気絶縁性を有する両面テープが好適に用いられる。スペーサ25は、着色部30,31に対応する位置に、方向102へ延びる空間40を有する。つまり、スペーサ25は、長手方向101に対して空間40によって分断された2枚のシートから構成されている。空間40によって、領域38と領域42との間に、スペーサ25の厚み分の試料空間が形成される。つまり、空間40が試料空間となる。空間40には、第1電極24の一部、第2電極26の一部及び第3電極27の一部がそれぞれ露出されている。
[Spacer 25]
As shown in FIG. 2, the
第1電極24において、空間40に対応する領域38には、試薬の各成分が固定されている。試薬の各成分の詳細については、後述される。第1電極24において、スペーサ25側を向く面のうち試薬が塗布される領域38が本発明における第1面に相当する。
In the
図1に示されるように、空間40は、バイオセンサ11の端に開口されており、この開口が試料導入口41となる。なお、図1には現れていないが、試料導入口41と対向する位置においても空間40が開口されている。試料導入口41が血液に曝されると、毛細管作用によって血液が空間40に流れ込む。
As shown in FIG. 1, the
[領域38,42へ固定される試薬の成分]
以下、領域38,42に固定される試薬の成分が詳述される。この試薬は、グルコースオキシダーゼ、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む。なお、試薬は、更に他の成分を含んでもよい。
[Components of Reagent Fixed to
Hereinafter, the components of the reagent fixed to the
試薬は、領域38に塗布される第1試薬と、領域42に塗布される第2試薬に分けて調製される。第1試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうちいずれか一の成分を含む。第2試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうち残りの成分を含む。
The reagent is prepared by dividing it into a first reagent applied to the
したがって、第1試薬及び第2試薬において、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤の組成の組み合わせは、次の6パターンとなる。
(1)第1試薬:界面活性剤
第2試薬:水溶性高分子、溶血剤
(2)第1試薬:溶血剤
第2試薬:水溶性高分子、界面活性剤
(3)第1試薬:水溶性高分子
第2試薬:溶血剤、溶血剤
(4)第1試薬:溶血剤、界面活性剤
第2試薬:水溶性高分子
(5)第1試薬:水溶性高分子、界面活性剤
第2試薬:溶血剤
(6)第1試薬:水溶性高分子、溶血剤
第2試薬:界面活性剤
Therefore, in the first reagent and the second reagent, the combinations of the composition of the water-soluble polymer, hemolyzing agent, and surfactant that are the components of the reagent are the following six patterns.
(1) First reagent: surfactant Second reagent: water-soluble polymer, hemolytic agent (2) First reagent: hemolytic agent Second reagent: water-soluble polymer, surfactant (3) First reagent: water-soluble Second Polymer: Hemolytic Agent, Hemolytic Agent (4) First Reagent: Hemolytic Agent, Surfactant Second Reagent: Water-soluble Polymer (5) First Reagent: Water-soluble Polymer, Surfactant Second Reagent: hemolytic agent (6) 1st reagent: water-soluble polymer, hemolytic agent 2nd reagent: surfactant
なお、グルコースオキシダーゼ、メディエータ及び緩衝液は、第1試薬又は第2試薬のいずれに含まれてもよいが、本実施形態のように、第1電極24が作用極として機能し、領域38に第1試薬が塗布されるのであれば、酵素及びメディエータは第1試薬に含まれることが好ましい。また、第1試薬及び第2試薬が、領域38,42にそれぞれ塗布される手法は、公知の手法が採用される。このような公知の手法として、例えば、ディッピング法やスクリーン印刷法、オフセット印刷法、インクジェット印刷法などが挙げられる。
Note that glucose oxidase, mediator, and buffer may be included in either the first reagent or the second reagent, but as in the present embodiment, the
[本実施形態の作用効果]
本実施形態によれば、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含む試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が領域38,42の一方に塗布され、他の成分が領域38,42の他方に塗布されているので、試料導入口41から空間40へ血液が迅速に満たされる。これにより、バイオセンサ11において、第1電極24の領域38に固定されたグルコースオキシダーゼと血液中のグルコースが迅速に反応して、迅速な血糖値の測定が実現される。
[Operational effects of this embodiment]
According to the present embodiment, among the components of the reagent including an enzyme, a mediator, a water-soluble polymer, a hemolyzing agent, a surfactant, and a buffer, it is selected from the group consisting of a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant. Since one of the components is applied to one of the
なお、本実施形態では、試薬に含まれる酵素がグルコースオキシダーゼであるが、本発明の試薬に含まれる酵素がグルコースオキシダーゼに限定されないことは言うまでもない。例えば、血糖測定に用いられるバイオセンサであれば、グルコースオキシダーゼに代えてグルコースデヒドロゲナーゼが酵素として試薬に含まれてもよい。 In the present embodiment, the enzyme contained in the reagent is glucose oxidase, but it goes without saying that the enzyme contained in the reagent of the present invention is not limited to glucose oxidase. For example, in the case of a biosensor used for blood glucose measurement, glucose dehydrogenase may be included in the reagent as an enzyme instead of glucose oxidase.
また、本発明に係るバイオセンサは、血糖測定装置10のように携帯型の血糖測定装置に限定されるものではない。したがって、血液中の他の成分の測定にバイオセンサが用いられる場合に、その測定に必要な酵素が含まれる試薬が電極に固定される態様においても利用可能である。また、試料も血液に限定されず、尿や唾液などの検体であってもよいし、被検出物質が含まれる水溶液であってもよい。
Further, the biosensor according to the present invention is not limited to the portable blood glucose measurement device like the blood
[変形例]
前述された実施形態においては、第1試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうちいずれか一の成分を含み、第2試薬は、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤のうち残りの成分を含むが、第1試薬及び第2試薬のいずれもに、試薬の成分である水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が含まれてもよい。変形例においても、グルコースオキシダーゼ、メディエータ及び緩衝液は、第1試薬又は第2試薬のいずれに含まれてもよいが、本実施形態のように、第1電極24が作用極として機能し、第1電極24の領域38に第1試薬が塗布されるのであれば、酵素及びメディエータは第1試薬に含まれることが好ましい。
[Modification]
In the embodiment described above, the first reagent includes any one component of a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant that are components of the reagent, and the second reagent is a water-soluble component that is a component of the reagent. The remaining components of the soluble polymer, hemolytic agent, and surfactant are included, but both the first reagent and the second reagent include the water-soluble polymer, hemolytic agent, and surfactant that are components of the reagent. May be. Also in the modified example, the glucose oxidase, the mediator, and the buffer may be included in either the first reagent or the second reagent. However, as in the present embodiment, the
したがって、変形例において、第1試薬及び第2試薬の組成は次のようになる。
第1試薬:グルコースオキシダーゼ、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤
第2試薬:水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤、緩衝液
Therefore, in the modified example, the composition of the first reagent and the second reagent is as follows.
First reagent: glucose oxidase, mediator, water-soluble polymer, hemolytic agent, surfactant Second reagent: water-soluble polymer, hemolytic agent, surfactant, buffer
このような変形例によっても、前述された実施形態と同様に、試料導入口41から空間40へ血液が迅速に満たされ、バイオセンサ11において、第1電極24の領域38に固定されたグルコースオキシダーゼと血液中のグルコースが迅速に反応して、迅速な血糖値の測定が実現される。
Also in such a modification, as in the above-described embodiment, blood is rapidly filled from the
以下、本発明の実施例が説明される。 Examples of the present invention will be described below.
[バイオセンサ]
バイオセンサとしては、前述された実施形態と同様の構成のバイオセンサ11を用いた。第1電極24、第2電極26及び第3電極27の素材としてはカーボンを用いた。領域38,42への試薬の塗布は、後述される実施例1〜7、比較例1,2、表1に従って、ディスペンサーを用いて行った。
[Biosensor]
As the biosensor, the
[実施例1]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(フラビンアデニンジヌクレオチドを補酵素としたグルコースデヒドロゲ
ナーゼ:FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:界面活性剤(商品名:TritonX−100)
[Example 1]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: enzyme (glucose dehydrogenase with flavin adenine dinucleotide as a coenzyme
Nase: FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: surfactant (trade name: Triton X-100)
[実施例2]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
[Example 2]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
[実施例3]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
[Example 3]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
[実施例4]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
[Example 4]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
[実施例5]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
[Example 5]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
[実施例6]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
[Example 6]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
[実施例7]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
[Example 7]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
[比較例1]
バイオセンサの領域38に以下の第2試薬を、表1に示される組成及び塗布量で塗布し、領域42には何も塗布しなかった。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:なし
[Comparative Example 1]
The following 2nd reagent was apply | coated to the area |
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: None
[比較例2]
バイオセンサ11の領域38に塗布される第1試薬、及び領域42に塗布される第2試薬の組成を以下の通りとして、表1に示される組成及び塗布量で領域38,42にそれぞれ塗布した。
第1試薬:酵素(FAD−GDH)
メディエータ(フェリシアン化カリウム)
緩衝液(MES緩衝液)
第2試薬:水溶性高分子(ポリビニルピロリドン;PVP)
溶血剤(テトラデシルトリメチルアンモニウムブロマイド;MTAB)
界面活性剤(商品名:TritonX−100)
[Comparative Example 2]
The composition of the first reagent applied to the
First reagent: Enzyme (FAD-GDH)
Mediator (potassium ferricyanide)
Buffer solution (MES buffer solution)
Second reagent: water-soluble polymer (polyvinylpyrrolidone; PVP)
Hemolytic agent (tetradecyltrimethylammonium bromide; MTAB)
Surfactant (trade name: Triton X-100)
[評価試験]
評価試験は、ポテンシオスタットによる吸引時間の測定により行った。血液試料を空間40の第1電極24側の試料導入口41から吸引させ、第1電極24と第2電極26との間に電流が発生した時間を開始時間とし、第1電極24と第3電極27との間に電流が発生した時間を終了時間とした。そして、開始時間から終了時間までに要した時間を吸引時間とした。その結果を表1に示す。
[Evaluation test]
The evaluation test was performed by measuring the suction time with a potentiostat. A blood sample is sucked from the
表1に示されるように、各実施例1〜7では、平均値が1.02未満であるのに対して、比較例1,2は、最も遅い実施例7よりも大幅に遅かった。これにより、各実施例1〜7により、毛細管現象による空間40への血液の導入速度が速まることが確認された。
As shown in Table 1, in each of Examples 1 to 7, the average value was less than 1.02, whereas Comparative Examples 1 and 2 were significantly slower than the latest Example 7. Accordingly, it was confirmed that the introduction speed of blood into the
11・・・バイオセンサ
24・・・第1電極
26・・・第2電極
40・・・空間(試料空間)
11 ...
Claims (3)
上記試料空間は、少なくとも上記第1電極の一部を含む第1面と、当該第1面と対向して配置された第2面との間に形成されており、
上記試薬は、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含み、
上記試薬の各成分が、下記(A)又は(B)の態様で塗布されたバイオセンサ。
(A)上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が上記第1面又は上記第2面の一方に塗布され、他の成分が上記第1面又は上記第2面の他方に塗布されている。
(B)上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第1面及び上記第2面に塗布されている。 A first electrode, a second electrode, a sample space into which a specimen is introduced, and a reagent,
The sample space is formed between a first surface including at least a part of the first electrode and a second surface disposed to face the first surface,
The reagent includes an enzyme, a mediator, a water-soluble polymer, a hemolytic agent, a surfactant and a buffer solution,
A biosensor in which each component of the reagent is applied in the following mode (A) or (B).
(A) Among the components of the reagent, any one component selected from the group consisting of a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant is applied to one of the first surface and the second surface, and the other Is applied to the other of the first surface and the second surface.
(B) Among the components of the reagent, a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant are applied to the first surface and the second surface.
上記試料空間は、少なくとも上記第1電極の一部を含む第1面と、当該第1面と対向して配置された第2面との間に形成されており、
上記試薬は、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含み、
上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤からなる群より選択されるいずれか一の成分が上記第1面又は上記第2面の一方に塗布され、他の成分が上記第1面又は上記第2面の他方に塗布されたバイオセンサ。 A first electrode, a second electrode, a sample space into which a specimen is introduced, and a reagent,
The sample space is formed between a first surface including at least a part of the first electrode and a second surface disposed to face the first surface,
The reagent includes an enzyme, a mediator, a water-soluble polymer, a hemolytic agent, a surfactant and a buffer solution,
Among the components of the reagent, any one component selected from the group consisting of a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant is applied to one of the first surface and the second surface, and the other component is A biosensor applied to the other of the first surface or the second surface.
上記試料空間は、少なくとも上記第1電極の一部を含む第1面と、当該第1面と対向して配置された第2面との間に形成されており、
上記試薬は、酵素、メディエータ、水溶性高分子、溶血剤、界面活性剤及び緩衝液を含み、
上記試薬の成分のうち、水溶性高分子、溶血剤及び界面活性剤が上記第1面及び上記第2面に塗布されたバイオセンサ。 A first electrode, a second electrode, a sample space into which a specimen is introduced, and a reagent,
The sample space is formed between a first surface including at least a part of the first electrode and a second surface disposed to face the first surface,
The reagent includes an enzyme, a mediator, a water-soluble polymer, a hemolytic agent, a surfactant and a buffer solution,
A biosensor in which a water-soluble polymer, a hemolytic agent, and a surfactant are applied to the first surface and the second surface among the components of the reagent.
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