JP2010538024A - Ｉ型及びｉｉ型抗ｃｄ２０抗体による組合せ治療 - Google Patents

Abstract

本出願は、癌、特にＣＤ２０発現癌の治療のための、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体とII型抗ＣＤ２０抗体の組合せ治療に関する。

Description

本発明は、癌、特にＣＤ２０発現癌の治療用医薬の製造のための２つの異なる抗ＣＤ２０抗体の使用に関する。

ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球制限分化抗原、又はＢｐ３５とも呼ばれる）は、プレＢ及び成熟Ｂリンパ球上に存在する分子量が約３５kDの疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264(19) (1989) 11282-11287；及びEinfield, D.A. et al., EMBO J. 7(3) (1988) 711-717）。ＣＤ２０は、末梢血又はリンパ器官からのＢ細胞の９０％以上の表面に存在し、早期プレＢ細胞発生中に発現され、形質細胞分化まで維持される。ＣＤ２０は、正常のＢ細胞ならびに悪性Ｂ細胞の両方の上に存在する。特にＣＤ２０は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の９０％以上で発現される（Anderson, K.C. et al., Blood 63(6) (1984) 1424-1433）が、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常形質細胞、又は他の正常な組織上には存在しない（Tedder T.F. et al., J. Immunol. 135(2) (1985) 973-979）。

ＣＤ２０タンパク質の８５アミノ酸のカルボキシ末端領域は、細胞質内に位置する。この領域の長さは、例えば、それぞれ比較的短い３、３、２８、１５、及び１６アミノ酸を有する、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＧ重鎖、又は組織適合抗原クラスII ａ又はβ鎖のような他のＢ細胞特異的表面構造体の領域とは異なる（Komaromy, M. et al., NAR 11 (1983) 6775-6785）。最後の６１個のカルボキシ末端アミノ酸のうち、２１個は酸性残基で、２個のみが塩基性であり、この領域が強い正味の陰性荷電を有することを示す。ジーンバンク（GenBank）受託番号はＮＰ−６９０６０５である。ＣＤ２０は、Ｂ細胞の活性化と分化プロセスの早期段階の制御に関与し（Tedder et al., Eur. J. Immunol. 25 Vo. 16 (1986) 881-887）、カルシウムイオンチャネルとして機能すると考えられる（Tedder, T.F. et al., J. Cell. Biochem. 14D (1990) 195）。

そのＣＤ２０結合方法と生物活性が大きく異なる、２つの異なるタイプの抗ＣＤ２０抗体が存在する（Cragg, M. S. et al., Blood 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S. et al., Blood 101 (2003) 1045-1052）。Ｉ型抗体（リツキシマブ（Rituximab））は補体性細胞毒性において強力であり、II型抗体（トシツモマブ（ＢＩ）、IIＢ８、及びＡＴ８０、又はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）は、同時ホスファチジルセリン曝露を伴うカスパーゼ非依存性アポトーシスを介して標的細胞死滅を有効に開始させる。

Ｉ型及びII型抗ＣＤ２０抗体の共通の特徴は以下に要約される：

ＷＯ２００４０３５６０７号は、ＣＤ２０に対するヒトモノクローナル抗体と、ＣＤ２０発現細胞に関連する疾患の治療のためのその使用とに関する。

本発明は、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、ＣＤ２０発現癌の治療用医薬の製造のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用に関する。

本発明はさらに、ＣＤ２０発現癌の治療用医薬の製造のための、第１の抗ＣＤ２０抗体としてのＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用を含み、
ａ）該第１の抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ（Raji）細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．８〜１．２である、
ｂ）該第１の抗ＣＤ２０抗体は、第２の抗ＣＤ２０抗体としてのII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与される、
ｃ）該第２の抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．３〜０．６である、
ことを特徴とする。

本発明は、ＣＤ２０発現癌の患者の治療用医薬の製造のための、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の使用を含み、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、II型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする。

本発明はさらに、ＣＤ２０発現癌の患者の治療用医薬の製造のための、第１の抗ＣＤ２０抗体としてのＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用を含み、
ａ）該第１の抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．８〜１．２である、
ｂ）該第１の抗ＣＤ２０抗体は、第２の抗ＣＤ２０抗体としてのII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与される、
ｃ）該第２の抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．３〜０．６である、
ことを特徴とする。

本発明はさらに、ＣＤ２０発現癌の治療のための、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体を含み、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、II型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする。

本発明はさらに、ＣＤ２０発現癌の患者の治療のための、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体を含み、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、II型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする。

好ましくはＣＤ２０発現癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
好ましくは該第１及び第２の抗ＣＤ２０抗体（Ｉ型とII型）はモノクローナル抗体である。
好ましくは該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブである。
好ましくは該II型抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
好ましくは該II型抗ＣＤ２０抗体は、上昇した抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を有する。

好ましくは該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．９〜１．１である。
好ましくは該II型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．３５〜０．５５、さらに好ましくは０．４〜０．５である。

本発明のある好適な実施態様において該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、該II型抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、該ＣＤ２０発現癌はＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。

本発明はさらに、ＣＤ２０発現癌の患者の組合せ治療のための、II型抗ＣＤ２０抗体とＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含むキットをさらに含む。
好ましくはキットは、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであり、該II型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、該ＣＤ２０発現癌がＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする。

発明の詳細な説明
用語「抗体」は、本発明の特徴が維持される限りは、特に限定されないが、全抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及び遺伝子操作抗体、例えばモノクローナル抗体、キメラ抗体、もしくは組換え抗体、ならびにかかる抗体の断片を含む種々の型の抗体を包含する。

本明細書において用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一のアミノ酸組成の抗体分子の調製物を意味する。すなわち用語「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から得られる可変領域及び定常領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を意味する。ある実施態様においてヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖トランス遺伝子とヒト軽鎖トランス遺伝子とを含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマにより産生される。

好ましくは該第１及び第２の抗ＣＤ２０抗体（Ｉ型とII型）は、モノクローナル抗体である。

用語「キメラ抗体」は、通常は組換えＤＮＡ技術により調製される、１つの起源もしくは種からの可変領域、すなわち結合領域と、異なる起源もしくは種から得られる定常領域の少なくとも１部とを含むモノクローナル抗体を意味する。マウス可変領域とヒト定常領域とを含むキメラ抗体が特に好ましい。かかるマウス／ヒトキメラ抗体は、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントと、ヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントとを含む発現された免疫グロブリン遺伝子の生成物である。本発明により包含される他の型の「キメラ抗体」は、クラス又はサブクラスが元々の抗体のものからは修飾もしくは改変されているものである。かかる「キメラ」抗体はまた、「クラス交換（class-switched）抗体」とも呼ばれる。キメラ抗体の産生法は、当該分野で公知の従来の組換えＤＮＡ法及び遺伝子トランスフェクション法を含む。例えば、Morrison, S.L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855；ＵＳ５，２０２，２３８号及びＵＳ５，２０４，２４４号を参照されたい。

用語「ヒト化抗体」は、親免疫グロブリンの「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と比較して、異なる特異性の免疫グロブリンのＣＤＲを含むように、フレームワーク又はＣＤＲが修飾されている抗体を意味する。好適な実施態様においてマウスＣＤＲはヒト抗体のフレームワーク領域に移植されて「ヒト化抗体」が調製される。例えばRiechmann, L. et al., Nature 332 (1988) 323-327；及びNeuberger, M.S. et al., Nature 314 (1985) 268-270を参照されたい。特に好適なＣＤＲは、キメラ抗体と２機能性抗体について上記した抗原を認識する配列を示すものに対応する。

本明細書において用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から得られる可変領域と定常領域とを有する抗体を含むことを企図する。ヒト抗体は当該分野で公知である（van Dijk, M.A. and van de Winkel, J.G., Curr. Opin. in Chemical Biology 5 (2001) 368-374）。かかる方法に基づいて、広範囲の標的に対するヒト抗体を産生することができる。ヒト抗体の例は、例えばKellermann, S.A. et al., Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597に記載されている。

本明細書において用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段により調製、発現、作成、又は単離されるすべてのヒト抗体を含むことを企図し、例えばＮＳ０又はＣＨＯ細胞などの宿主細胞から単離される抗体、又はヒト免疫グロブリン遺伝子でトランスジェニックされた動物（マウス）から単離される抗体、或いは宿主細胞にトランスフェクトされる組み替え発現ベクターを用いて発現される抗体を含むことを企図する。かかる組換えヒト抗体は、再配置型でヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列から得られる可変領域と定常領域を有する。本発明の組換えヒト抗体は、インビボ体細胞超変異を受けている。すなわち組換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨ及びＶＬ配列から得られかつこれらと関連しているが、ヒト抗体生殖細胞系レパートリー内にインビボで天然には存在しない配列である。

本明細書において「特異的結合性」又は「に特異的に結合する」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体について言及する。好ましくは結合親和性は、ＫＤ値が１０^-8mol/l又はそれ以下、好ましくは１０^-9mol/l又はそれ以下（例えば１０^-10mol/l）、さらに好ましくはＫＤ値が１０^-10mol/l又はそれ以下（例えば１０^-12mol/l）である。結合親和性は、標準的結合アッセイ、例えばＣＤ２０発現細胞についての表面プラズモン共鳴法（例えば、Biacore（登録商標））を用いて測定される。

本明細書において用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことを企図する。核酸分子は、１本鎖又は２本鎖でもよいが、好ましくは２本鎖ＤＮＡである。

「定常ドメイン」は、抗体を抗原に結合させるのに直接関与していないが、エフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体結合、及びＣＤＣ）に関与している。

本明細書において「可変領域」（軽鎖の可変領域（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））は、抗原への抗体の結合に直接関与する軽鎖と重鎖の対のそれぞれを示す。可変ヒト軽鎖と重鎖のドメインは同じ一般的構造を有し、各ドメインは、その配列が３つの「超可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）により連結されて広く保存されている４つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域はｂ−シートコンフォメーションを取り、ＣＤＲはｂ−シート構造を連結してループを形成する。各鎖中のＣＤＲは、フレームワーク領域によりその３次元構造で維持され、他の鎖からのＣＤＲとともに抗原結合部位を形成する。抗体の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ３領域は、本発明の抗体の結合特異性／親和性において特に重要な役割を果たし、従って本発明のさらなる対象を提供する。

本明細書において用語「超可変領域」又は「抗体の抗原結合部分」は、抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」からのアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」すなわち「ＦＲ」領域は、本明細書で定義される超可変領域残基とは異なる可変ドメイン領域である。すなわち抗体の軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端からＣ末端に、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４ドメインを含む。特に重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に最も寄与する領域である。ＣＤＲとＦＲ領域は、Kabat, E.A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991) の標準的定義に従って決定され、及び／又は「超可変ループ」由来の残基である。

用語「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」は本明細書において同義で使用され、細胞により自然に発現されるか又はＣＤ２０遺伝子でトランスフェクトされた細胞上で発現される、ヒトＣＤ２０の任意の変種、アイソフォーム、及び種ホモログを含む。ＣＤ２０抗原への本発明の抗体の結合は、ＣＤ２０を不活性化することによりＣＤ２０を発現する細胞（例えば、腫瘍細胞）の死滅を仲介する。ＣＤ２０を発現する細胞の死滅は、以下の１つ又はそれ以上の機構により起きる：細胞死滅／アポトーシス誘導、ＡＤＣＣ、及び／又はＣＤＣ。

当該分野で認識されているＣＤ２０の同義語には、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５がある。

本発明において用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。ＣＤ２０抗原への抗ＣＤ２０抗体の結合性及び生物活性に依存して、Cragg, M.S. et al., Blood 103 (2004) 2738-2743；及びCragg, M.S. et al., Blood 101 (2003) 1045-1052に従って、２種類の抗ＣＤ２０抗体（Ｉ型とII型抗ＣＤ２０抗体）を区別することができる。表２を参照されたい。

Ｉ型及びII型抗ＣＤ２０抗体の１つの基本的な性質は、その結合様式である。すなわちＩ型及びII型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較した、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への該抗ＣＤ２０抗体の結合能力の比により分類することができる。

Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への該抗ＣＤ２０抗体の結合能力の比が０．８〜１．２、好ましくは０．９〜１．１である。かかるＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えばリツキシマブ、１Ｆ５ ＩｇＧ２ａ（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ；Press, O.W. et al., Blood 69/2 (1987) 584-591）、Ｈ１４７ ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／１０３０８１号に開示されている）、２Ｆ２ ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０３５６０７号及びＷＯ２００５／１０３０８１号に開示されている）、及び２Ｈ７ ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０５６３１２号に開示されている）がある。好ましくは該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。

II型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への該抗ＣＤ２０抗体はの結合能力の比が０．３〜０．６、好ましくは０．３５〜０．５５、さらに好ましくは０．４〜０．５である。かかるII型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えばトシツモマブ（Ｂ１ ＩｇＧ２ａ）、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（ＷＯ２００５／０４４８５９号に開示されているキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（ＷＯ２００４／０３５６０７号に開示されている）、及びＡＴ８０ ＩｇＧ１がある。好ましくは該II型抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（ＷＯ２００５／０４４８５９号に記載されている）と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。

「リツキシマブと比較した、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への抗ＣＤ２０抗体の結合能力の比」は、実施例２に記載されるようにラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）を用いるＦＡＣＳアレイ（Becton Dickinson）で、Ｃｙ５に結合した該抗ＣＤ２０抗体とＣｙ５に結合したリツキシマブとを使用する直接免疫蛍光測定（平均蛍光強度（ＭＦＩ）が測定される）により測定され、以下のように算出される：
ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への結合能力の比＝

ＭＦＩは、平均蛍光強度である。本明細書において「Ｃｙ５標識比」は、抗体１分子当たりのＣｙ５標識分子の数を意味する。

典型的には該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への該第１抗ＣＤ２０抗体の結合能力が０．８〜１．２、好ましくは０．９〜１．１である。

典型的には該II型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への該第２抗ＣＤ２０抗体の結合能力が０．３〜０．６、好ましくは０．３５〜０．５５、さらに好ましくは０．４〜０．５である。

好適な実施態様において該II型抗ＣＤ２０抗体、好ましくはヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、上昇した抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を有する。

「上昇した抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を有する抗体」とは、この用語が本発明で定義されるように、当業者に公知の任意の適切な方法で測定した時、上昇したＡＤＣＣを有する抗体を意味する。１つの認められているインビトロＡＤＣＣアッセイは以下の通りである：

１）このアッセイは、抗体の抗原結合領域により認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する；
２）このアッセイは、エフェクター細胞として、ランダムに選択された健常ドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；

３）このアッセイは、以下のプロトコールに従って行われる：
ｉ）ＰＢＭＣは標準的密度遠心分離法を使用して単離され、ＲＰＭＩ細胞培養培地中に５×１０６細胞／mlで懸濁される；
ii）標的細胞は標準的組織培養法により培養され、９０％より大きい生存活性を有する指数増殖期から採取され、ＲＰＭＩ細胞培養培地で洗浄され、１００マイクロキュリーの”ＣＩ−で標識され、細胞培養培地で２回洗浄され、１０細胞／mlの密度で細胞培養培地に再懸濁される；
iii）上記の最終標的細胞懸濁物１００マイクロリットルが、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移される；
iv）抗体は細胞培養培地で４０００ng/mlから０．０４ng/mlに連続希釈され、得られた抗体溶液の５０マイクロリットルが９６ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に添加され、上記の全濃度範囲をカバーする種々の抗体濃度が三重測定で試験される；
ｖ）最大放出（ＭＲ）対照のために、標識標的細胞を含有するプレート中の３つの追加のウェルに、抗体溶液の代わりに（上記iv）、非イオン性界面活性剤（Nonidet、Sigma, St. Lours）の２％（ＶＮ）水溶液５０マイクロリットルを加える；
vi）自発的放出（ＳＲ）対照のために、標識標的細胞を含有するプレート中の３つの追加のウェルに、抗体溶液の代わりに（上記iv）、ＲＰＭＩ細胞培養培地５０マイクロリットルを加える；
vii）次に９６ウェルマイクロタイタープレートを５０×ｇで１分間遠心分離し、４℃で１時間インキュベートする；
viii）各ウェルに５０マイクロリットルのＰＢＭＣ懸濁物（上記ｉ）を加えて、エフェクター：標的細胞比２５：１を得て、プレートを５％ ＣＯ２雰囲気下で３７℃のインキュベーター中に４時間入れる；
ix）各ウェルの細胞不含上清を採取し、実験的放出放射活性（ＥＲ）をガンマカウンターで定量する；
ｘ）各抗体濃度について特異的溶解の割合を、式（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）×１００に従って計算される［ここで、ＥＲは抗体濃度について定量された平均放射活性（上記ix参照）であり、ＭＲはＭＲ対照（上記Ｖ参照）について定量された平均放射活性であり、ＳＲはＳＲ対照（上記vi参照）について定量された平均放射活性である］；

４）「上昇したＡＤＣＣ」は、上記で試験した抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大割合の上昇、及び／又は上記で試験した抗体濃度内で観察される特異的溶解の最大割合の半分を達成するのに必要な抗体の濃度の低下として定義される。ＡＤＣＣの上昇は、ＡＤＣＣと比較して、当業者に公知の標準的製造法、精製法、調製法、及び保存法を使用して、同じタイプの宿主細胞により引き起こされるが、ＧｎＴIIIを過剰発現しないように工学作成された宿主細胞によっては引き起こされない。

該「上昇したＡＤＣＣ」は、該抗体の糖鎖操作により得られ、これは、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及びＵＳ６，６０２，６８４号に記載のように、そのオリゴ糖成分を糖鎖操作して、モノクローナル抗体の自然の細胞性エフェクター機能を増強することを意味する。

用語「補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）」は、補体の存在下での本発明の抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を意味する。ＣＤＣは好ましくは、補体の存在下で本発明の抗ＣＤ２０抗体を用いて、ＣＤ２０発現細胞の調製物を処理することにより測定される。ＣＤＣは、抗体が１００nMの濃度で４時間後に腫瘍細胞の２０％又はそれ以上の溶解（細胞死滅）を誘導する場合に認められる。このアッセイは好ましくは、⁵¹ＣｒもしくはＥｕ標識腫瘍細胞を用いて、放出された⁵¹ＣｒもしくはＥｕの測定により行われる。対照は、補体を用いて、しかし抗体無しで、標的腫瘍細胞をインキュベーションすることを含む。

典型的にはＩｇＧ１イソタイプのＩ型及びII型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ性を示す。互いと比較すると、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は上昇したＣＤＣ（ＩｇＧ１イソタイプの場合）を有し、II型抗ＣＤ２０抗体は低下したＣＤＣ（ＩｇＧ１イソタイプの場合）を有する。好ましくは両方のＩ型及びII型抗ＣＤ２０抗体はＩｇＧ１イソタイプ抗体である。

「リツキシマブ」抗体は、ヒトＣＤ２０抗原に対する遺伝子工学作成したキメラヒトガンマ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。このキメラ抗体はヒトガンマ１定常ドメインを含有し、ＵＳ５，７３６，１３７号（Andersen, et al.）（１９９８年４月１７日発行、IDEC Pharmaceuticals Corporationに譲渡されている）で「Ｃ２Ｂ８」という名前で特定される。リツキシマブは、再発性又は難治性低グレードもしくは濾胞性のＣＤ２０陽性、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫について認可されている。インビトロの作用機序については、リツキシマブがヒト補体依存性細胞障害作用（ＣＤＣ）を示すことが研究で証明されている（Reiff, M.E. et al., Blood 83 (2) 435-445 (1994)）。さらにこれは、抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイで強い活性を示す。

用語「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号１：マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号２、Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139を参照）から、ヒトＩｇＧ１からのヒト定常ドメインとのキメラ化と次のヒト化により得られた、ＷＯ２００５／０４４８５９号とＷＯ２００７／０３１８７５号に開示されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を意味する。これらの「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、ＷＯ２００５／０４４８５９号とＷＯ２００７／０３１８７５号に詳細に開示されている。

好ましくは「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３〜配列番号２０の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）（ＷＯ２００５／０４４８５９号とＷＯ２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２〜Ｂ−ＨＨ９、及びＢ−ＨＬ８〜Ｂ−ＨＬ１７）を有する。特に好適なものは、配列番号３、４、７、９、１１、１３及び１５（ＷＯ２００５／０４４８５９号のＢ−ＨＨ２、Ｂ−ＨＨ３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１及びＢ−ＨＬ１３）である。好ましくは「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号２０の軽鎖の可変領域（ＶＬ）（ＷＯ２００５／０４４８５９号のＢ−ＫＶ１）を有する。さらにヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は好ましくはＩｇＧ１抗体である。好ましくはかかるヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、ＷＯ２００５／０４４８５９号、ＷＯ２００４／０６５５４０号、ＷＯ２００７／０３１８７５号、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及びＷＯ９９／１５４３４２号に記載の方法に従って、Ｆｃ領域が糖鎖操作されている。かかる糖鎖操作ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体はＦｃ領域中のグリコシル化パターンが変化しており、好ましくはフコース残基のレベルが低下している。好ましくは、Ｆｃ領域のオリゴ糖の少なくとも４０％又はそれ以上（ある実施態様においては４０％〜６０％、別の実施態様においては少なくとも５０％、及びさらに別の実施態様において少なくとも７０％又はそれ以上）は、フコシル化されていない。さらにＦｃ領域のオリゴ糖は好ましくは二分されている。

本発明は、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、ＣＤ２０発現癌の治療用医薬の製造のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。

本発明は、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、ＣＤ２０発現癌の患者の治療用医薬の製造のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。

好ましくはこの使用は、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであり、該II型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、該ＣＤ２０発現癌がＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする。

オリゴ糖成分は、治療用糖タンパク質の効力に関連する性質（物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態、及び特異的生物活性を含む）に大きく影響することがある。かかる性質は、オリゴ糖の有無のみでなく、その特定の構造にも依存する。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能の関係についていくつかの一般化をすることができる。例えばいくつかのオリゴ糖構造は、特定の炭水化物結合タンパク質との相互作用を介して血流からの糖タンパク質の迅速なクリアランスを仲介し、一方他のオリゴ糖構造は、抗体に結合されて好ましくない免疫反応を引き起こす（Jenkins, N. et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-81）。

哺乳動物細胞は、ヒトへの応用に最も適合した形でタンパク質をグリコシル化する能力のために、治療用糖タンパク質の産生に好適な宿主である（Cumming, D.A. et al., Glycobiology 1 (1991) 115-30; Jenkins, N. et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-81）。細菌はタンパク質をグリコシル化することはあまり無く、他のタイプの一般的な宿主（例えば、酵母、糸状菌、昆虫、及び植物細胞）のように、血流からの迅速なクリアランス、好ましくない免疫反応が引き起こすグリコシル化パターンを与え、ある場合には、低下した生物活性を与える。哺乳動物細胞の中では、過去２０年間チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が最も一般的に使用されている。適切なグリコシル化パターンを与える以外に、この細胞は、遺伝的に安定な、高度に生産的なクローン性細胞株の一貫した生成を可能にする。これは、無血清培地を使用して単純なバイオリアクター中で高密度に培養することができ、安全で再現性のあるバイオプロセスの開発を可能にする。他の一般的に使用される動物細胞には、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯ−及びＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞がある。さらに最近は、トランスジェニック動物からの産生が試験されている（Jenkins, N. et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-81）。

すべての抗体は重鎖定常領域中の保存された位置に炭水化物構造を含有し、各イソタイプはＮ−結合炭水化物構造の明確なアレイを有し、これはタンパク質組み立て、分泌、又は機能活性に種々の影響を与える（Wright, A. and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。結合したＮ−結合炭水化物の構造は、プロセシングの程度により大きく変動し、高マンノース性の多重分岐ならびに二分岐複合オリゴ糖を含むことがある（Wright, A. and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。典型的には、モノクローナル抗体でも複数の糖型で存在するように、特定のグリコシル化部位に結合したコアオリゴ糖構造の不均一プロセシングがある。同様に、抗体のグリコシル化の大きな差が細胞株間で起き、異なる培養条件下で培養されたある細胞株についての小さな差も見られることが証明されている（Lifely, M.R. et al., Glycobiology 5(8) (1995) 813-22）。

単純な生産法を維持し、大きな好ましくない副作用を避けながら力価の大きな上昇を得るための１つの方法は、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及びＵＳ６，６０２，６８４号に記載のように、オリゴ糖成分を遺伝子操作してモノクローナル抗体の自然の細胞性エフェクター機能を増強することである。癌免疫療法で最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインでＡｓｎ２９７に保存されたＮ−結合グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複雑な二分岐オリゴ糖はＣＨ２ドメイン間に埋め込まれ、ポリペプチド骨格との広範囲な接触を生成し、その存在は、抗体が抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）のようなエフェクター機能を仲介するのに必須である（Lifely, M.R. et al., Glycobiology 5:813-822 (1995); Jerreris, R. et al., Immunol. Rev. 163: 59-76 (1998); Wright, A. and Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15: 26-32 (1997)）。

チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞中のβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼIII（「ＧｎＴII１７ｙ」）（二分岐オリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼ）の過剰発現が、遺伝子操作されたＣＨＯ細胞により産生される抗神経芽腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のインビトロＡＤＣＣ活性を有意に上昇させることがすでに証明されている（Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180；及びＷＯ９９／１５４３４２号を参照、これらの完全な内容は参照することにより本明細書に組み込まれる）。抗体ｃｈＣＥ７は、高腫瘍親和性と特異性を有する大きな群の非結合モノクローナル抗体に属するが、ＧｎＴIII酵素が欠如した標準的工業細胞株で産生されると、力価が低すぎて臨床的有用性は小さい（Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180）。この研究は、抗体産生細胞を遺伝子操作してＧｎＴIIIを発現させることによりＡＤＣＣ活性の大きな上昇が得られることを示した最初の研究であり、これはまた、天然に存在する抗体で見られるレベルより高い、定常領域（Ｆｃ）結合した二分岐オリゴ糖（二分岐フコシル化オリゴ糖を含む）比率の上昇を引き起こした。

用語「ＣＤ２０抗原の発現」は、腫瘍もしくは癌（好ましくは非固形腫瘍）からの、細胞中の、好ましくはＴ細胞もしくはＢ細胞、さらに好ましくはＢ細胞の細胞表面上のＣＤ２０抗原の発現の有意なレベルを示す。「ＣＤ２０発現癌」を有する患者は、当該分野で公知の標準的アッセイにより決定することができる。例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学的（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳ、又は対応するｍＲＮＡのＰＣＲベースの検出を使用して測定される。

本明細書において用語「ＣＤ２０発現癌」は、好ましくはリンパ腫（好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＨＮＬ））及びリンパ性白血病を意味する。かかるリンパ腫及びリンパ性白血病には、例えばａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小非切断細胞リンパ腫／バーキットリンパ腫（風土性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫、及び非バーキットリンパ腫を含む）、ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、結節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、及び脾臓性辺縁帯リンパ腫を含む）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性肺 B 細胞リンパ腫を含む）、ｆ）ヘアリーセル白血病、ｇ）リンパ性リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ｉ）形質細胞新生物、形質細胞骨髄腫、多発性骨髄腫、形質細胞腫、ｊ）ホジキン病がある。

好ましくはＣＤ２０発現癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。特にＣＤ２０発現癌は、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、ヘアリーセル白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁帯リンパ腫、移植後リンパ増殖症（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、又は原発性ＣＮＳリンパ腫である。

用語「治療法」又はその同等語は、例えば癌に適用されると、患者の癌細胞の数を低減させるか又は排除するように、又は癌の症状を緩和するように設計された方法又は行動の経過を意味する。癌又は他の増殖性疾患の「治療法」は必ずしも、癌細胞もしくは他の疾患が実際に排除されること、細胞もしくは疾患の数が実際に減少すること、又は癌もしくは他の疾患の症状が実際に緩和されることを意味しない。癌の治療法はしばしば、成功の確率が低くても、患者の病歴や推定される生存期間から、全体として有効な行動経過を誘導すると考えられる場合に行われる。

用語「同時投与」又は「同時投与する」は、１つの処方として又は２つの別の処方としての、第１の抗ＣＤ２０抗体と第２の抗ＣＤ２０抗体の投与を意味する。同時投与は同時でもいずれかの順序で連続でもよく、好ましくは両方（すべて）の活性物質が同時にその生物活性を示す期間がある。１つの処方が使用される場合、両方の抗ＣＤ２０抗体は同時に投与される。２つの異なる処方（１つは第１の抗ＣＤ２０抗体用で、他の１つは第２の抗ＣＤ２０抗体用）が使用される場合、該第１及び第２の抗ＣＤ２０抗体は、同時に（例えば、１回の連続注入により、又は同時に２回の連続注入により）、又は連続して同時投与される。両方の抗体が連続して同時投与される場合、用量は、同じ日に２回の別の投与で投与される（例えば、異なる時に２回の別の連続注入）か、又は１日目に抗体の１つが投与され、第２の抗体が２日目〜７日目（好ましくは２日目〜４日目）に同時投与される。すなわち用語「連続して」は、第１の抗体の投与後７日以内（好ましくは第１の抗体の投与後４日以内）を意味し；用語「同時に」は同時を意味する。抗ＣＤ２０抗体の維持用量について用語「同時投与」は、治療サイクルが両方の抗体について適切な場合（例えば毎週）、維持用量が同時に投与される（例えば、１回の連続注入により）ことを意味する。又は維持用量が、１日もしくは数日以内に連続して同時投与され、例えば抗体の１つの維持用量が毎週適切に投与され、第２の抗体の維持用量もまた２週毎に同時投与される。また両方の抗体について他の治療サイクル（通常例えば３日〜数週間）も使用される。

抗体が治療的有効量（これは、研究者、獣医師、医師、又は他の臨床家により求められる、組織、システム、動物、又はヒトの生物学的もしくは医学的応答を誘発する対象化合物又は組合せの量である）で患者に投与されることは明らかである。

該第１及び第２の抗ＣＤ２０抗体の同時投与の量及び同時投与のタイミングは、治療される患者のタイプ（種、性、年齢、体重など）、及び治療される疾患又は状態の重症度に依存する。該第１及び第２の抗ＣＤ２０抗体は適切には、１回で又は一連の治療で患者に同時投与される。疾患のタイプと重症度により、例えば１回又はそれ以上の別の投与でも、又は連続的注入でも、約１μg/kg〜５０mg/kg（例えば、０．１〜２０mg/kg）の該第１又は第２の抗ＣＤ２０抗体が、患者への同時投与の初期用量の候補である。ある実施態様において該第１又は第２の抗ＣＤ２０抗体の初期注入時間は、以後の注入時間より長くてもよく、例えば初期注入が約９０分で、以後の注入が約３０分でもよい（初期注入が許容される場合）。

該第１又は第２の抗ＣＤ２０抗体の好適な用量は、約０．０５mg/kg〜約３０mg/kgの範囲である。すなわち約０．５mg/kg、２．０mg/kg、４．０mg/kg、１０mg/kg、又は３０mg/kg（又はこれらの任意の組合せ）の１つ又はそれ以上の用量が患者に同時投与される。患者のタイプ（種、性、年齢、体重など）と症状により、かつ抗ＣＤ２０抗体のタイプにより、該第１抗ＣＤ２０抗体の用量は第２抗ＣＤ２０抗体の用量と異なってもよい。かかる用量は毎日又は間欠的に（例えば３日〜６日毎、又は毎週〜３週間毎に）同時投与される。初期の高用量後に１回又はそれ以上の低用量を投与してもよい。

好適な実施態様においてこの医薬は、ＣＤ２０発現癌の患者の転移又はさらに播種性転移を予防又は低減させるのに有用である。この医薬は、かかる患者の生存期間を延長するのに、かかる患者のプログレッションの無い生存を延長するのに、応答の期間を延長して、治療される患者の統計的に有意で臨床的に意味のある改善（生存期間、プログレッションの無い生存、応答率、又は応答の期間により測定される）を引き起こすのに、有用である。好適な実施態様においてこの医薬は、患者群の応答率を上昇させるのに有用である。

本発明の文脈において、追加の他の細胞障害剤、化学療法剤、抗癌剤、又はかかる物質の作用を増強する化合物は、ＣＤ２０発現癌の抗ＣＤ２０抗体組合せ治療で使用される。好ましくは、かかる追加の他の細胞障害剤、化学療法剤、抗癌剤、又はかかる物質の作用を増強する化合物無しで、抗ＣＤ２０抗体組合せ治療が使用される。

このような物質には、例えば：アルキル化作用を有するアルキル化剤、例えばシクロホスファミド（ＣＴＸ；例えばcytoxan（登録商標））、クロランブシル（ＣＨＬ；例えばleukeran（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えばplatinol（登録商標））、ブスルファン（例えばmyleran（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣなど；代謝拮抗物質、例えばメソトレキセート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えばvepesid（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えばXeloda（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）など；抗生物質、例えばアクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えばアドリアマイシン（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンなど；アルカロイド、例えばビンカアルカロイド、例えばビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチンなど；及び他の抗腫瘍剤、例えばパクリタキセル（例えばtaxol（登録商標）））、及びパクリタキセル誘導体、細胞静止剤、糖質コルチコイド、例えばデキサメタゾン（ＤＥＸ；例えばdecadron（登録商標））、及びコルチコステロイド、例えばプレドニソン、ヌクレオシド酵素インヒビター、例えばヒドロキシ尿素、アミノ酸枯渇化酵素、例えばアスパラギナーゼ、ロイコボリン、及び他の葉酸誘導体、及び同様の多様な抗腫瘍剤がある。以下の物質も追加の物質として使用してもよい：アルニホスチン（例えばethyol（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（例えばdoxil（登録商標））、ゲムシタビン（例えばgemzar（登録商標））、ダウノルビシンリポ（例えばdaunoxome（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えばtaxotere（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、ＣＰＴ１１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ７−エチル−カンプトテシン（ＳＮ３８）、フロクスリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロランブシル。好ましくはかかる追加の物質無しで、抗ＣＤ２０抗体組合せ治療が使用される。

上記の細胞障害剤及び抗癌剤ならびに抗増殖性標的特異的抗癌薬物（例えば化学療法処方におけるプロテインキナーゼインヒビター）の使用は、一般的に癌治療の分野で充分に解析されており、本発明におけるその使用は、一部の調整を用いて、耐性と有効性を追跡するための、及び投与経路と用量を管理するための、同じ検討項目に属する。例えば細胞障害剤の実際の用量は、組織培養法を使用して測定される患者の培養細胞応答により変動する。追加の他の物質の非存在下で使用される量と比較して、一般に用量は減少する。

有効な細胞障害剤の典型的な用量は、製造業者が推奨する範囲でもよく、インビトロ応答又は動物モデルの応答により示される場合、最大約１オーダー分の濃度又は量を減少させることができる。すなわち実際の用量は、医師の判断、患者の状態、及び初代培養悪性腫瘍細胞又は組織培養組織試料のインビトロ応答性、又は適切な動物モデルで観察される応答に基づく治療法の有効性に依存する。

本発明の文脈において、ＣＤ２０発現癌の抗ＣＤ２０抗体組合せ治療以外に、電離放射線の有効量が照射され、及び／又は放射医薬品が使用される。放射線源は、治療される患者に対して体外でも体内でもよい。線源が患者に対して体外である場合、治療は外部ビーム放射線療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者に対して体内である場合、治療は小線源照射療法（ＢＴ）と呼ばれる。本発明の文脈で使用される放射活性原子は、特に限定されないが、ラジウム、セシウム１３７、インジウム１９２、アメリシウム２４１、金１９８、コバルト５７、銅６７、テクネチウム９９、ヨード１２３、ヨード１３１、及びインジウム１１１を含む群から選択される。また、かかる放射活性アイソトープを用いて抗体を標識することもできる。好ましくは抗ＣＤ２０抗体組合せ治療は、かかる電離放射線無しで使用される。

放射線療法は、切除不能癌又は手術不可能な癌及び／又は腫瘍転移を抑制するための標準的治療法である。放射線療法を化学療法と組合せると、改善された結果が得られる。放射線療法は、標的部位に放射される高用量放射線が、腫瘍組織と正常組織の両方の生殖細胞の死滅を引き起こすという原理に基づく。放射線照射法は、一般に放射線吸収用量（Ｇｙ）、時間、及び分割で定義され、腫腸遺伝子学者が注意深く定義する必要がある。患者の放射線被爆量は種々の検討事項に依存するが、最も重要な２つは、体の他の極めて重要な構造体もしくは臓器に対する腫瘍の位置と、腫瘍が広がっている程度である。放射線療法を受けている患者の典型的な治療経過は、１〜６週間で、患者に投与される総用量が１０〜８０Ｇｙで、１日の割合が約１．８〜２．０Ｇｙで、週に５日間という治療スケジュールである。本発明の好適な実施態様において、ヒト患者の腫瘍が本発明の組合せ治療と放射線で治療される時、相乗作用がある。すなわち本発明の組合せを含む物質による腫瘍増殖の阻害は、放射線と組合せ、随時追加の化学療法剤又は抗癌剤を組合せると、増強する。アジュバント放射線療法のパラメータは、例えばＷＯ９９／６００２３号に含まれる。

抗体は公知の方法で、ボーラスとして静脈内投与により、又は筋肉内、腹腔内、髄内、皮下、動脈内、滑液内、又はくも膜下経路で、一定期間連続的注入により、患者に投与される。抗体の静脈内又は皮下投与が好ましい。

本発明はさらに、容器、１つの調製物もしくは２つの別の調製物の形で該Ｉ型及びII型抗ＣＤ２０抗体を含む容器内の組成物、及びＣＤ２０発現癌の患者に該Ｉ型及びII型抗ＣＤ２０抗体を投与することを組成物の使用者に指令する能書を含むことを特徴とするキットを含む。

好ましくはキットは、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであり、該II型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、該ＣＤ２０発現癌がＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする。

用語「能書」は、治療用製品の商業的パッケージに通常含まれる説明書を意味し、これはかかる治療用製品の使用に関する適応症、使用法、用量、投与、禁忌、及び／又は警告を含む。

好適な実施態様において製造品容器はさらに、医薬的に許容し得る担体を含んでよい。製造品はさらに無菌希釈剤を含んでよく、これは好ましくは別の追加の容器に保存される。

本明細書において「医薬的に許容し得る担体」は、溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤及び抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤、及び薬剤投与に適合する他の材料や化合物を含んでよい。通常の媒体又は物質が活性化合物と適合しない場合以外は、本発明の組成物におけるその使用が企図される。補助活性化合物もまた、組成物中に導入することができる。

医薬製剤
本発明で使用される抗体の治療用製剤は、所望の程度の純度を有する抗体を、随時の医薬的に許容し得る担体、賦形剤、又は安定剤（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980））とともに、凍結乾燥製剤又は水溶液の形で混合することにより、保存用に調製される。許容される担体、賦形剤、又は安定剤は、使用される用量と濃度で受容者にとって非毒性のものであり、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、他の他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レソルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン；単糖、二糖、及び他の炭水化物（グルコース、マンノース、又はデキストリンを含む）；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖、例えばショ糖、マンニトール、トレハロース、又はソルビトール；塩形成性対イオン、例えばナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤、例えばツイーン（登録商標）、プルロニクス（登録商標）、又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）がある。

本発明の製剤は、各抗ＣＤ２０抗体の２つの別の製剤でもよい。あるいは本発明の製剤はまた、１つの製剤中に両方の抗体を含んでよい。

さらに組成物は、化学療法剤、細胞障害剤、サイトカイン、成長抑制剤、又は抗血管形成剤を含んでよい。かかる分子は適切には、目的に対して有効な量で組合わされて存在してもよい。

活性成分はまた、例えばそれぞれヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセル、及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルを、コロイド薬剤送達システム（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）、又はマクロエマルジョンで、コアセルベート化法又は界面重合により調製されたマイクロカプセル中に捕捉してもよい。かかる方法は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。

持続放出調製物を調製してもよい。持続放出調製物の適切な例には、抗体を含有する固体親水性ポリマーの半透性マトリックスがあり、該マトリックスは、成形物、例えばフィルム又はマイクロカプセルでもよい。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（ＵＳ３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、例えばLUPRON DEPOT（登録商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸ロイプロリドからなる注入性微小球）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸がある。

インビボ投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、無菌ろ過膜でろ過することにより容易に達成される。

本発明はさらに、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、ＣＤ２０発現癌の治療のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む。

本発明はさらに、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、ＣＤ２０発現癌の患者の治療のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体を含む。

本発明の好適な実施態様において、該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブであり、該II型抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、該ＣＤ２０発現癌はＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。

本発明はさらに、ＣＤ２０発現癌又はＣＤ２０発現癌の患者の治療のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体を含み、
ａ）該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．８〜１．２である、
ｂ）該第１の抗ＣＤ２０抗体はII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与される、
ｃ）該II型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．３〜０．６である、
ことを特徴とする。

好ましくはＣＤ２０発現癌は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。
好ましくは該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体はリツキシマブである。
好ましくは該II型抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
好ましくは該II型抗ＣＤ２０抗体は、上昇した抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を有する。

以下の例と図は本発明の理解を助けるために提供され、その真の範囲は添付の特許請求の範囲に記載される。本発明の精神から逸脱することなく、記載の方法の変更が可能であることを理解されたい。

配列リスト
配列番号１：マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列。
配列番号２：マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１の軽鎖の可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列。
配列番号３〜１９：ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体（Ｂ−ＨＨ２〜Ｂ−ＨＨ９、Ｂ−ＨＬ８、及びＢ−ＨＬ１０〜Ｂ−ＨＬ１７）の重鎖の可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列。
配列番号２０：ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体Ｂ−ＫＶ１の軽鎖の可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列。

リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が１．０であるＩ型抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）と、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのその結合能力の比が０．４４であるII型抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ）との組合せ治療の、ＯＣＩ−Ｌｙ１８ヒト非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する抗腫瘍活性。ｙ軸に腫瘍容積の平均値［mm³］をプロット；ｘ軸に腫瘍細胞注入後の日数をプロット。凡例：Ａ）ビヒクル（丸）、Ｂ）リツキシマブ ３０mg/kgを静脈内に毎週１回（三角）、Ｃ）ヒト化Ｂ−ｌｙ１（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ） ３０mg/kgを毎週１回（四角）、及びＤ）リツキシマブをＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥと同時投与（各３０mg/kgを毎週１回）（×）。

ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＩ型抗ＣＤ２０抗体（Ｃｙ５−リツキシマブ＝白い棒）とII型抗ＣＤ２０抗体（Ｃｙ５ヒト化Ｂ−Ｌｙ１ Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ＝黒い棒）の平均蛍光強度（ＭＦＩ、左のｙ軸）；リツキシマブと比較した、Ｉ型抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）とII型抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ）の結合能力の比（右のｙ軸の目盛）。

２つのII型抗ＣＤ２０抗体の、Ｚ１３８ヒト非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する抗腫瘍活性。両方の抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗ＣＤ２０抗体である；１）Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ グリコ改変（ＧＥ）、及び２）Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１野生型（ｗｔ，非グリコ改変）。ｙ軸に腫瘍容積の平均値［mm³］をプロット；ｘ軸に腫瘍細胞注入後の日数をプロット。凡例：Ａ）ビヒクル（丸）、Ｂ）ヒト化Ｂ−Ｌｙ１（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ） ３０mg/kgを毎週１回（三角）、及びＣ）ヒト化Ｂ−Ｌｙ１ ｗｔ（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ｗｔ） ３０mg/kgを毎週１回）（×）。

実験法

実施例１：Ｉ型抗ＣＤ２０抗体（リツキシマブ）とII型抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ）との組合せ治療の抗腫瘍活性

試験物質
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体リツキシマブは、ストック溶液（ｃ＝１０mg/ml）としてHoffman La Roche, Basel, Switzerlandから提供された。緩衝液は、ポリソルベート８０、塩化ナトリウム、及びクエン酸ナトリウムを含む。

II型抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ（＝ヒト化Ｂ−Ｌｙ１、グリコ改変Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１、ＷＯ２００５／０４４８５９号及びＷＯ２００７／０３１８７５号を参照）は、ストック溶液（ｃ＝９．４mg/kg）としてGlycArt, Schlieren, Switzerlandから提供された。抗体緩衝液は、ヒスチジン、トレハロース、及びポリソルベート８０を含有した。
両方の溶液を、先行注入用にストックからＰＢＳで適切に希釈した。

細胞株と培養条件
ＯＣＩ−Ｌｙ１８ヒト非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞（Chang, H. et al., Leuk Lymphoma, 1992 Sep:8(1-2): 129-36）（びまん性大細胞リンパ腫−ＤＬＣＬ）を使用した。腫瘍細胞株を、２０％胎児牛血清（PAA Laboratoris, Austria）、２mM Ｌ−グルタミン、２５nM ヘペス、及び０．０５mMメルカプトエタノールを補足したＩＮＤＭ培地（PAA Laboratoris, Austria）中で、３７℃で、５％ＣＯ₂の水飽和雰囲気中で日常的に培養した。継代２を移植に使用した。

動物
雌のＳＣＩＤベージュマウス［到着時４〜５週齢（Bomholtgard, Ry, Denmarkから購入）］を、専用のガイドライン（GV-Solas; Felasa; TierschG）に従って特定病原体不含条件下で、毎日１２時間／１２時間の明暗サイクルで維持した。実験の試験プロトコールは、地方自治体により校閲され認可された。到着後、動物を新しい環境に馴れさせるためと観察のために、動物施設の検疫部で１週間維持した。連続的な健康モニタリングを定期的に行った。食餌（Provimi Kliba 3337）と水（酸性化、ｐＨ２．５〜３）は自由に与えた。

モニタリング
臨床症状と有害作用の検出のために、動物を毎日管理した。モニタリングのために実験中、動物の体重を週２回記録し、腫瘍容積をステージ分類後ノギスで測定した。

動物の処理
細胞移植の２４日後のランダム化の日に、動物の処理を開始した。ヒト化II型抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ受容群と対応するビヒクル群を、７日毎に試験日２４、３１、３８、４５、及び５２日目に、指定の３０mg/kgの用量で静脈内処理した。単一薬剤としてのＩ型抗ＣＤ２０抗体リツキシマブ処理と、II型抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥとの組合せ処理を、２６、３３、４０、４７、及び５４日目に行った。

インビボの腫瘍増殖阻害試験
ビヒクル対照を投与された担腫瘍動物は、腫瘍の負担が大きいために処理開始後１０日目に除外しなければならなかった。単一薬剤としての毎週３０mg/kgのリツキシマブによる動物の処理は、異種移植片増殖を１０日間阻害した（ＴＧＩ ６８％）。毎週リツキシマブ単一薬剤注入にもかかわらず、以後腫瘍異種移植片は連続的に成長し続けた。これに対して、Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ（３０mg/kg）による毎週１回の単一薬剤療法は、ＯＣＩ−Ｌｙ１８腫瘍増殖を抑制した（ＴＧＩ １００％）。しかしＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ単一薬剤投与下でも、最後に腫瘍異種移植片は成長し始めた。しかしリツキシマブとＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥ（両方とも３０mg/kg）の組合せは、明らかに優れて有効であった。異種移植腫瘍は抑制され、各単一薬剤抗体群に対して、腫瘍成長停止がずっと維持された。

実施例２：リツキシマブと比較した、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０へのII型抗ＣＤ２０抗体の結合能力の測定
ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）を、１０％ ＦＣＳ（Gibco, Cat. No.10500-064）含有ＲＰＭＩ−１６４０培地（PanBiotech GmbH, Cat. No. PO4-18500）中で培養して維持した。II型抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１（ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）とリツキシマブを、製造業者の説明書に従ってＣｙ５モノＮＨＳエステル（Amersham GE Healthcare, Catalogue No. PA15101）を使用して標識した。Ｃｙ５結合リツキシマブは標識比が、抗体１分子当たり２．０分子のＣｙ５であった。Ｃｙ５結合Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１は標識比が、抗体１分子当たり２．２分子のＣｙ５であった。両方の抗体の結合能力と結合様式を測定し比較するために、バーキットリンパ腫細胞株Raji（ATCC-No. CCL-86）を使用して直接免疫蛍光により、結合曲線（Ｃｙ５結合リツキシマブとＣｙ５結合Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１の力価測定により）を作成した。Ｃｙ５結合リツキシマブとＣｙ５結合Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１について、それぞれ平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＥＣ５０（最大強度の５０％）として分析した。１試料当たり５×１０５細胞を４℃で３０分染色した。次に細胞を培地で洗浄した。ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色を使用して、死滅細胞を排除した。測定はFACSArray（Becton Dickinson）を使用して行い、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）をファーレッドＡで、Ｃｙ５をレッドＡで測定した。図２は、Ｃｙ５標識Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１（黒い棒）とＣｙ５標識リツキシマブ（白い棒）のＥＣ５０（最大強度の５０％）での結合の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。

次にラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への結合能力の比を、以下の式に従って計算する：
ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への結合能力の比＝

すなわち典型的なII型抗ＣＤ２０抗体としてのＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１は、リツキシマブと比較した結合能力を低下させる。

実施例３：ＳＣＩＤベージュマウスのＺ１３８ＭＣＬ異種移植片に対する、グリコ改変（ＧＥ）及び非グリコ改変（野生型、ｗｔ）抗ＣＤ２０抗体の同様の抗腫瘍活性

試験物質
II型抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１（グリコ改変（ＧＥ）及び野生型（ｗｔ））は、ストック溶液（ｃ＝９．４mg/mlと１２．５mg/ml）としてGlycArt, Schlieren, Switzerlandから提供された。抗体緩衝液は、ヒスチジン、トレハロース、及びポリソルベート８０を含有した。
両方の溶液を、先行注入用にストックからＰＢＳで適切に希釈した。

細胞株と培養条件
Ｚ１３８ヒトＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）細胞は、元々GlycArtから得られた（マントル細胞リンパ腫−ＭＣＬ）。腫瘍細胞株を、１０％胎児牛血清（PAA Laboratoris, Austria）と２mM Ｌ−グルタミンを補足したＤＭＥＭ培地（PAA Laboratoris, Austria）中３７℃で、５％ＣＯ₂の水飽和雰囲気中で日常的に培養した。継代２を移植に使用した。

動物
雌のＳＣＩＤベージュマウス［到着時４〜５週齢（Bomholtgard, Ry, Denmarkから購入）］を、専用のガイドライン（GV-Solas; Felasa; TierschG）に従って特定病原体不含条件下で、毎日１２時間／１２時間の明暗サイクルで維持した。実験の試験プロトコールは、地方自治体により校閲され認可された。到着後、動物を新しい環境に馴れさせるためと観察のために、動物施設の検疫部で１週間維持した。連続的な健康モニタリングを定期的に行った。食餌（Provimi Kliba 3337）と水（酸性化、ｐＨ２．５〜３）は自由に与えた。

モニタリング
臨床症状と有害作用の検出のために、動物を毎日管理した。モニタリングのために実験中、動物の体重を週２回記録し、ステージ分類で開始して腫瘍容積をノギスで測定した。

動物の処理
皮下への細胞移植の１４日後のランダム化の日に、動物の処理を開始した。ヒト化抗ＣＤ２０抗体（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥとｗｔ）投与群と対応するビヒクル群を、７日毎に試験日１４、２０、２７、及び３４日目に、指定の１０mg/kgの用量で静脈内処理した。

インビボの腫瘍増殖阻害試験
ビヒクル対照を投与された担腫瘍動物は、腫瘍の負担が大きいために処理開始後１９日目に除外しなければならなかった。ｗｔ又はグリコ改変型（Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥとｗｔ）としての毎週１０mg/kgのＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１による動物の処理は、処理開始後まもなく、異種移植片増殖を阻害した。対照の終了時にすべての抗体腫瘍は退縮し、後にＺ１３８腫瘍異種移植片のほとんどは完全に緩解した。この異種移植モデルでは抗ＣＤ２０抗体Ｂ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１のｗｔとグリコ改変型の間に有意な差は観察されなかった。マウスはそのＮＫ細胞上に正しいＦｃ受容体を発現せず、さらにＳＣＩＤベージュマウスは、重症の３重免疫不全症のためにＮＫ介在ＡＤＣＣ能は無いと考えられるため、これは予想外であった。従って、ＳＣＩＤベージュマウスの皮下異種移植モデルは、グリコ改変抗体を用いてヒトＡＤＣＣ性作用を模倣するのに適切ではない。

Claims (16)

1. ＣＤ２０発現癌の治療用医薬の製造のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用であって、当該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体が、II型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、前記使用。
2. ＣＤ２０発現癌を患う患者の治療用医薬の製造のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体の使用であって、当該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、前記使用。
3. ＣＤ２０発現癌の治療のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、当該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体が、II型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、前記抗体。
4. ＣＤ２０発現癌を患う患者の治療のためのＩ型抗ＣＤ２０抗体であって、当該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がII型抗ＣＤ２０抗体と同時投与されることを特徴とする、前記抗体。
5. 以下の：
   ａ）前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較したラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への当該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の結合能力の比が０．８〜１．２であり、かつ
   ｂ）前記II型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較したラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への当該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の結合能力の比が０．３〜０．６である
   を特徴とする請求項１又は２に記載の使用。
6. 前記ＣＤ２０発現癌が、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
7. 前記Ｉ型及びII型抗ＣＤ２０抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の使用。
8. 前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の使用。
9. 前記II型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の使用。
10. Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであり、II型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、ＣＤ２０発現癌がＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
11. 前記II型抗ＣＤ２０抗体が、上昇した抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を有することを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
12. 前記II型抗ＣＤ２０抗体のＦｃ領域のオリゴ糖の少なくとも４０％又はそれ以上はフコシル化されていないことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
13. 前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体が、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への当該Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の結合能力の比が０．９〜１．１であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の使用。
14. 前記II型抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブと比較して、ラージ細胞（ATCC-No. CCL-86）上のＣＤ２０への当該ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の結合能力の比が０．３５〜０．５５、好ましくは０．４〜０．５であることを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載のの使用。
15. ＣＤ２０発現癌を患う患者の組合せ治療のための、II型抗ＣＤ２０抗体とＩ型抗ＣＤ２０抗体とを含むキット。
16. 前記Ｉ型抗ＣＤ２０抗体がリツキシマブであり、前記II型抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、そして前記ＣＤ２０発現癌がＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）であることを特徴とする、請求項１５に記載のキット。

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