JP2010096529A - Transfer laminate, electrophoresis and transfer laminate and electrophoresis and transfer chip - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、転写用積層体、電気泳動兼転写用積層体および電気泳動兼転写用チップに関するものであり、より詳細には、転写用媒体と半透膜とを備えてなる転写用積層体、電気泳動支持体と転写用媒体とが一体形成された電気泳動兼転写用積層体および該電気泳動兼転写用積層体を用いた電気泳動兼転写用チップに関するものである。 The present invention relates to a transfer laminate, an electrophoresis / transfer laminate, and an electrophoresis / transfer chip, and more specifically, a transfer laminate comprising a transfer medium and a semipermeable membrane, The present invention relates to an electrophoresis / transfer laminate in which an electrophoresis support and a transfer medium are integrally formed, and an electrophoresis / transfer chip using the electrophoresis / transfer laminate.
動植物の組織や細胞から抽出されたＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質等の生体高分子をサイズ、性状等の違いに基づいて電気泳動ゲル中に分離する電気泳動技術は、ライフサイエンス分野において非常に重要な技術である。特にタンパク質を電気泳動によって分離する場合、タンパク質の分子量の違いに基づくＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法および等電点の違いに基づく等電点電気泳動法を組み合わせた二次元電気泳動法が広く用いられている。 Electrophoresis technology that separates biopolymers such as DNA, RNA, and proteins extracted from animal and plant tissues and cells into electrophoresis gels based on differences in size, properties, etc. is an extremely important technology in the life science field. It is. In particular, when separating proteins by electrophoresis, two-dimensional electrophoresis combining SDS-polyacrylamide gel electrophoresis based on differences in protein molecular weight and isoelectric focusing based on differences in isoelectric points is widely used. It has been.
また、電気泳動技術を用いて分離した生体高分子をさらに分析する場合、分離した生体高分子を電気泳動ゲルから転写膜に転写し、転写膜上においてハイブリダイゼーション、抗原抗体反応等を利用した遺伝子工学的または免疫化学的分析が行われている。電気泳動後、電気泳動ゲル中に分離された生体高分子を転写膜に転写するために、電気泳動後のゲルを電気泳動装置から取り出し、取り出したゲル上に転写膜を貼り合わせた後、ゲルと転写膜とを共に転写装置に取り付けてゲル中の分子を転写膜に吸着させる。特許文献１には、生体分子を検出および分析するための方法および装置が開示されている。
しかしながら、上記の転写において、電気泳動支持体中で分離した生体高分子のうち、分子量の低いものほど電気泳動支持体から転写膜へと移動しやすく、反対に、分子量の高いものは転写膜への移動に時間がかかる。そのため、分子量の高い生体分子を充分に転写させるために転写を長時間かけて行うと、一旦吸着された分子量の低い生体分子の一部が転写膜を通り抜けてしまう。よって、分離した生体高分子を損失することなく、且つ、一律に効率よく転写させることが非常に難しい。ゆえに、従来の構成においては、印加電圧や転写時間を固定するなど、転写の諸条件を一定にしなければならず、ゲル上に分離した各分子を精度よく、均一に転写膜に転写することが困難であった。 However, in the above transfer, among the biopolymers separated in the electrophoretic support, those having a lower molecular weight are more likely to move from the electrophoretic support to the transfer film, whereas those having a higher molecular weight are transferred to the transfer film. It takes time to move. Therefore, if transfer is performed over a long period of time in order to sufficiently transfer a biomolecule having a high molecular weight, a part of the biomolecule having a low molecular weight once adsorbed passes through the transfer film. Therefore, it is very difficult to transfer the separated biopolymer uniformly and efficiently without loss. Therefore, in the conventional configuration, various conditions of transfer such as fixing the applied voltage and transfer time must be fixed, and each molecule separated on the gel can be accurately and uniformly transferred to the transfer film. It was difficult.
本発明は、上記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、電気泳動によって分離した分子を、精度よく、且つ、透過することによる損失がなく均一に転写することができる転写用媒体、電気泳動兼転写用積層体および電気泳動兼転写用チップを提供することにある。 The present invention has been made in view of the above problems, and its object is to transfer molecules that have been separated by electrophoresis accurately and without loss due to transmission. An object is to provide a medium, a laminate for electrophoresis and transfer, and a chip for electrophoresis and transfer.
請求項１に記載の発明は、転写用媒体と半透膜とを備えてなることを特徴とする転写用積層体である。
請求項２に記載の発明は、前記転写用積層体を構成する転写用媒体は、ポリカーボネート、ポリフッ化ビニリデン、ニトロセルロース、セルロース混合エステル、ポリオレフィンのいずれかを主成分とすることを特徴とする請求項１に記載の転写用積層体である。
請求項３に記載の発明は、前記転写用積層体を構成する半透膜は、セロファン、アセチルセルロース、ポリアクリロニトリル、エチレンビニルアルコール共重合体、ポリアミド、ポリエステル系ポリマーアロイのいずれかを主成分とすることを特徴とする請求項１または２に記載の転写用積層体である。
請求項４に記載の発明は、前記転写用積層体を構成する転写用媒体と半透膜との間に接着層を介していることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の転写用積層体である。
請求項５に記載の発明は、電気泳動支持体と請求項１〜４のいずれかに記載の転写用積層体とが一体形成された電気泳動兼転写用積層体である。
請求項６に記載の発明は、請求項５に記載の電気泳動兼転写用積層体を包含することを特徴とする電気泳動兼転写用チップである。
The invention according to claim 1 is a transfer laminate comprising a transfer medium and a semipermeable membrane.
The invention according to
According to a third aspect of the present invention, the semipermeable membrane constituting the transfer laminate is mainly composed of cellophane, acetylcellulose, polyacrylonitrile, ethylene vinyl alcohol copolymer, polyamide, or polyester-based polymer alloy. The laminate for transfer according to
The invention according to claim 4 is characterized in that an adhesive layer is interposed between the transfer medium constituting the transfer laminate and the semipermeable membrane. It is a laminate for transfer.
The invention according to
The invention described in
本発明によれば、転写用積層体は転写用媒体と半透膜が積層されているため、電気泳動支持体中で分離した被分離物質を転写用積層体に転写するときに、透過して損失することなく、分離パターンを維持したまま、精度よく、均一に写し取ることができる。また、電気泳動支持体と当該転写用積層体とを一体形成させる場合、被分離物質の分離パターンを精度よく、均一に転写することが可能である。また、電気泳動後の電気泳動支持体に転写用積層体を貼り合わせる必要もなく、さらに、電気泳動装置から電気泳動支持体を取り出し、転写用積層体と貼り合わせるときに生じうるズレや気泡混入等の不具合を回避することも可能になる。 According to the present invention, since the transfer laminate is formed by laminating the transfer medium and the semipermeable membrane, it is transmitted when transferring the separated material separated in the electrophoretic support to the transfer laminate. Without loss, it is possible to copy accurately and uniformly while maintaining the separation pattern. In addition, when the electrophoretic support and the transfer laminate are integrally formed, the separation pattern of the substance to be separated can be accurately and uniformly transferred. Moreover, there is no need to attach the transfer laminate to the electrophoretic support after electrophoresis, and further, deviation or bubbles that may occur when the electrophoretic support is taken out from the electrophoresis apparatus and attached to the transfer laminate. It is also possible to avoid problems such as these.
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
（転写用積層体）
図１に示すように、本発明に係る転写用積層体３は、転写用媒体１と半透膜２とを備えている。本発明に係る転写用媒体１は、電気泳動支持体中に分離された被分離物質を、転写、吸着させるために用いられる。また、図２に示すように、転写用積層体５を構成する転写用媒体１と半透膜２は接着層４によって密着させてもよく、転写工程において被分離物質が多孔質膜を透過して損失することがないため、十分に、均一に転写される。
Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
(Transfer laminate)
As shown in FIG. 1, the
また、本発明に係る転写用積層体を構成する転写用媒体および半透膜は、電気泳動支持体と略同一形状であり、面積が略同一であることが好ましい。また、転写用積層体の厚さは、それぞれ転写用または電気泳動用に常用されている一般的な厚さ範囲から逸脱しない範囲内であればよく、転写用積層体と電気泳動支持体とを備えた電気泳動兼転写用積層体の厚さは、従来の方法または装置を用いて電気泳動および転写可能な厚さ範囲から逸脱しない範囲内であればよい。 In addition, the transfer medium and the semipermeable membrane constituting the transfer laminate according to the present invention preferably have substantially the same shape and the same area as the electrophoretic support. The thickness of the transfer laminate may be within a range that does not deviate from the general thickness range commonly used for transfer or electrophoresis. The thickness of the laminated body for electrophoresis and transfer provided may be within a range that does not deviate from the thickness range that can be electrophoresed and transferred using a conventional method or apparatus.
（転写用媒体）
本発明に係る転写用積層体が備える転写用媒体としては、ポリカーボネート膜、ポリフッ化ビニリデン膜、ニトロセルロース膜、セルロース混合エステル膜、ポリオレフィン膜等が好適である。これらは、均質な孔を有する多孔質膜で、電気泳動によって分離したサンプルを、分離パターンを維持したまま透過させて電気泳動支持体から精度よく吸着して固定することが可能な薄膜である。また、上記の転写用媒体を含む転写用積層体を電気泳動支持体と一体化させた場合に、電気泳動による被分離物質の分離を妨げない。なお、これらの膜は、例えば、一般にろ過膜として用いられているような膜を商業的に入手したものであってもよい。
(Transfer medium)
As the transfer medium provided in the transfer laminate according to the present invention, a polycarbonate film, a polyvinylidene fluoride film, a nitrocellulose film, a cellulose mixed ester film, a polyolefin film, and the like are suitable. These are porous membranes having uniform pores, which are thin films that can be permeated through an electrophoresis sample while maintaining the separation pattern, and can be adsorbed and fixed with high precision from the electrophoresis support. Further, when the transfer laminate including the transfer medium is integrated with the electrophoretic support, separation of the substance to be separated by electrophoresis is not hindered. Note that these membranes may be commercially obtained membranes that are generally used as filtration membranes, for example.
また、上記の転写用媒体のうち、ポリカーボネート膜もしくはポリオレフィン膜を用いるのが好ましい。そのいずれかの膜上に電気泳動支持体溶液を充填、重合させて、電気泳動もしくは転写後に分離することが可能であるため、そのいずれかを用いることにより、転写用積層体を電気泳動支持体と一体形成させることが可能になる。 Of the above transfer media, a polycarbonate film or a polyolefin film is preferably used. Since any of the membranes can be filled with an electrophoretic support solution, polymerized, and separated after electrophoresis or transfer, the transfer laminate can be electrophoresed by using either of them. And can be formed integrally.
さらに、それらのうち、ポリカーボネート膜を用いるのがより好ましい。ポリカーボネート膜は、乾燥状態、あるいは、水系溶媒で湿潤させた状態で設置可能であるだけでなく、膜を湿潤させる水系溶媒の吸水により、膜の体積変化がほとんどなく歪みが生じにくいので、転写用積層体の構成成分として用いるのにより好適である。 Furthermore, among them, it is more preferable to use a polycarbonate film. Polycarbonate membranes can be installed in a dry state or wetted with an aqueous solvent. In addition, the water absorption of the aqueous solvent that wets the membrane hardly changes the volume of the membrane and hardly causes distortion. It is more suitable to use as a structural component of a laminated body.
（半透膜）
本発明に係る転写用積層体の一構成成分である半透膜は、セロファン、アセチルセルロース、ポリアクリロニトリル、エチレンビニルアルコール共重合体、ポリアミド、ポリエステル系ポリマーアロイから選択されることが好ましい。そのなかでも特に、親水性であるセロファンを用いるのが好適である。半透膜はタンパク質やＤＮＡなどの高分子を透過しないので、半透膜を転写用媒体に積層させた転写用積層体を用いることにより、転写でのタンパク質の透過を防止することが可能になる。
(Semipermeable membrane)
The semipermeable membrane which is one constituent of the transfer laminate according to the present invention is preferably selected from cellophane, acetylcellulose, polyacrylonitrile, ethylene vinyl alcohol copolymer, polyamide, and polyester polymer alloy. Among these, it is particularly preferable to use cellophane that is hydrophilic. Since the semipermeable membrane does not transmit a polymer such as protein or DNA, it is possible to prevent protein permeation during transfer by using a transfer laminate in which the semipermeable membrane is laminated on a transfer medium. .
（接着層）
図２に示すように、本発明に係る転写用積層体を構成する転写用媒体と半透膜との間に接着層４を介することにより、転写用積層体が強固になる。なお、接着層は、転写を阻害しないものであればいずれの接着剤でも差し支えないが、転写用積層体がバッファーに浸漬されるため、親水性のものが好ましい。水溶性の接着剤であるポリビニルアルコールは、乾燥させることにより固化し、そのことにより接着効果が生じる。なお、転写用積層体中に接着層４が存在することにより、転写時の導電ならびに溶媒の透過を妨げない。
(Adhesive layer)
As shown in FIG. 2, the transfer laminate is strengthened by interposing the adhesive layer 4 between the transfer medium and the semipermeable membrane constituting the transfer laminate according to the present invention. The adhesive layer may be any adhesive as long as it does not inhibit the transfer, but is preferably hydrophilic because the transfer laminate is immersed in the buffer. Polyvinyl alcohol, which is a water-soluble adhesive, is solidified by drying, thereby producing an adhesive effect. Note that the presence of the adhesive layer 4 in the transfer laminate does not hinder the conductivity and the permeation of the solvent during transfer.
（電気泳動兼転写用積層体）
図３に示すように、本発明に係る転写用積層体５を、電気泳動支持体６と積層することにより電気泳動兼転写用積層体７が形成される。転写用積層体５を構成する転写用媒体において、ポリカーボネート膜あるいはポリオレフィン膜を用いれば、予め転写用積層体を設置したゲルカセットに電気泳動支持体溶液を充填することにより一体形成させることが可能で、また、電気泳動ならびに転写実施後に転写用積層体を電気泳動支持体から容易に分離することも可能になる。なお、電気泳動支持体を形成させた後に転写用積層体を設置してもよく、これに限定されない。
(Laminate for electrophoresis and transfer)
As shown in FIG. 3, an electrophoretic /
本発明に係る電気泳動兼転写用積層体は、転写用積層体および電気泳動支持体を備えているので、被分離物質の電気泳動による分離から転写までを連続して行うことができる。すなわち本発明に係る電気泳動兼転写用積層体は電気泳動および転写用途に用いられるものであり、電気泳動用の支持体でもあり、転写用の媒体でもある。したがって、本発明に係る電気泳動兼転写用積層体を、転写用積層体一体型電気泳動支持体または電気泳動支持体一体型転写用積層体と称することもできる。 Since the laminate for electrophoresis and transfer according to the present invention includes the laminate for transfer and the electrophoresis support, the separation of the substance to be separated from the electrophoresis to the transfer can be performed continuously. That is, the laminate for electrophoresis and transfer according to the present invention is used for electrophoresis and transfer applications, and is also a support for electrophoresis and a medium for transfer. Therefore, the electrophoresis / transfer laminate according to the present invention can also be referred to as a transfer laminate-integrated electrophoresis support or an electrophoresis support-integrated transfer laminate.
（被分離物質）
本発明に係る電気泳動兼転写用積層体を用いて分離される被分離物質は、電気泳動および転写することによって分析すべき物質であり、サンプルと称することもある。被分離物質として、生物材料（例えば、生物個体、体液、細胞株、組織培養物、または組織断片）からの調製物を好適に用いることが可能であり、特にタンパク質サンプル、ＤＮＡサンプルおよびＲＮＡサンプルを好適に用いることが可能である。これらのサンプルは、予め蛍光試料等によって染色（蛍光染色または蛍光標識）されていてもよい。
(Substance to be separated)
The substance to be separated which is separated using the electrophoretic / transfer laminate according to the present invention is a substance to be analyzed by electrophoresis and transfer, and may be referred to as a sample. As a material to be separated, a preparation from a biological material (for example, an individual organism, a body fluid, a cell line, a tissue culture, or a tissue fragment) can be preferably used. Particularly, a protein sample, a DNA sample, and an RNA sample can be used. It can be suitably used. These samples may be prestained with a fluorescent sample or the like (fluorescent staining or fluorescent labeling).
（電気泳動支持体）
本発明に係る電気泳動兼転写用積層体が備える電気泳動支持体は、被分離物質を支持体中において電気泳動することによって、被分離物質のサイズ、性状等の違いに基づいて分離するものであり、単に支持体と称することもある。電気泳動支持体は、支持体中を被分離物質が移動できるように、重合体分子が複雑な網目構造を形成してなるゲルであるため、単にゲルまたは電気泳動ゲルと称することもある。ゲルを構成する主材料としてポリアクリルアミドまたはアガロースのように、従来から一般に電気泳動に用いられるゲル材料を好適に使用可能である。
(Electrophoresis support)
The electrophoretic support provided in the electrophoretic / transfer laminate according to the present invention separates a substance to be separated based on differences in size, properties, etc. of the substance to be separated by electrophoresis in the support. Yes, it may be simply called a support. The electrophoretic support is a gel in which polymer molecules form a complex network structure so that a substance to be separated can move in the support, and thus may be simply referred to as a gel or an electrophoretic gel. Conventionally generally used gel materials such as polyacrylamide or agarose can be suitably used as the main material constituting the gel.
（電気泳動兼転写用ゲルチップの構成）
本発明の電気泳動兼転写用積層体を備えた電気泳動兼転写用ゲルチップの構成を図４に示す。図１または図２に示すようにして作成した転写用積層体３ないし５を準備し、ゲルカセット基板（電気泳動ゲルカセット８）上に載置し、もう一方の電気泳動ゲルカセット８により蓋をしてゲルカセット基板８と前記蓋とを密着させる。次に電気泳動ゲルカセット８中の転写用積層体３ないし５上にゲル溶液を充填し、ゲル溶液を重合させて電気泳動支持体６を形成し、電気泳動兼転写用チップ９を作成する。なお、電気泳動支持体を形成させた後に転写用積層体３ないし５を積層してもよく、これに限定されない。
(Configuration of gel chip for electrophoresis and transfer)
FIG. 4 shows the configuration of an electrophoresis / transfer gel chip provided with the electrophoresis / transfer laminate of the present invention. The transfer laminates 3 to 5 prepared as shown in FIG. 1 or 2 are prepared, placed on the gel cassette substrate (electrophoresis gel cassette 8), and the lid is covered by the other electrophoresis gel cassette 8. Then, the gel cassette substrate 8 and the lid are brought into close contact with each other. Next, a gel solution is filled on the
本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能である。すなわち、請求項に示した範囲で適宜変更した技術的手段を組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。 The present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications can be made within the scope shown in the claims. That is, embodiments obtained by combining technical means appropriately modified within the scope of the claims are also included in the technical scope of the present invention.
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって何ら限定されない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention more concretely, this invention is not limited at all by these Examples.
〔１．材料および方法〕
（１−１．転写用媒体、半透膜および接着層）
転写用媒体として孔径が０．４μｍのポリカーボネート膜（商品名Isopore Membrane Filter（Millipore 社製））を、半透膜としてセロファン（TOHO社製）を用いた。チップに設置させるため、各々 ５×６ cm の大きさに切断した。接着層として、ポリビニルアルコール（完全けん化型、分子量２，０００（和光純薬工業(株)）を用いた。詳細には、ポリビニルアルコールの固形粉末を、沸騰させた蒸留水に攪拌しながら溶解させて、２重量％の溶液を調製し、それを接着層として用いた。
[1. Materials and methods〕
(1-1. Transfer medium, semipermeable membrane and adhesive layer)
A polycarbonate membrane (trade name Isopore Membrane Filter (manufactured by Millipore)) having a pore diameter of 0.4 μm was used as a transfer medium, and cellophane (manufactured by TOHO) was used as a semipermeable membrane. Each chip was cut to a size of 5 × 6 cm for placement on the chip. As the adhesive layer, polyvinyl alcohol (completely saponified, molecular weight 2,000 (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used. Specifically, a solid powder of polyvinyl alcohol was dissolved in boiling distilled water with stirring. A 2 wt% solution was prepared and used as the adhesive layer.
（１−２．転写用積層体の作成）
上記１−１の転写用媒体ならびに半透膜を用いて転写用積層体を作成した。詳細には、半透膜を２％ポリビニルアルコール水溶液からなる接着層に、半透膜の片面あるいは全体を浸漬させたものを転写用媒体に重ね合わせて密着させ、乾燥機にて８０℃で３０分程度乾燥させた。
(1-2. Preparation of laminate for transfer)
A transfer laminate was prepared using the transfer medium of 1-1 and the semipermeable membrane. Specifically, a semi-permeable membrane made of 2% polyvinyl alcohol aqueous solution and a semi-permeable membrane with one or all surfaces immersed therein are superposed and adhered to a transfer medium, and then dried at 80 ° C. at 30 ° C. Dried about minutes.
（１−３．電気泳動ゲルおよび電気泳動兼転写用チップの調製）
上記１−２の転写用積層体を、ゲルを形成するための領域が ５×６ cmのプラスチック製容器の基板面に載置し、容器に蓋をして超音波溶着装置にて基板と蓋とを溶着した。ゲル形成領域の下端部を封止した後上端部よりポリアクリルアミドゲル溶液を充填し、静置してゲルを重合させた。
(1-3. Preparation of electrophoresis gel and electrophoresis / transfer chip)
The transfer laminate of 1-2 is placed on a substrate surface of a plastic container having a region for forming a gel of 5 × 6 cm, the container is covered, and the substrate and the cover are covered with an ultrasonic welding apparatus. And welded. After sealing the lower end of the gel forming region, the polyacrylamide gel solution was filled from the upper end and allowed to stand to polymerize the gel.
13% アクリルアミド、375 mM トリス塩酸・pH 8.8、0.1% 過硫酸アンモニウム、0.1% テトラメチルエチレンジアミンを含むポリアクリルアミドゲル溶液を用いた。29.2% アクリルアミド-0.8% メチレンビスアクリルアミド混合溶液を添加して、ポリアクリルアミドゲル中のアクリルアミドの最終濃度が 13% になるように調製した。 A polyacrylamide gel solution containing 13% acrylamide, 375 mM Tris-HCl / pH 8.8, 0.1% ammonium persulfate, and 0.1% tetramethylethylenediamine was used. A 29.2% acrylamide-0.8% methylenebisacrylamide mixed solution was added to prepare a final concentration of acrylamide in the polyacrylamide gel of 13%.
（１−４．サンプル）
電気泳動および転写するサンプルとして、着色分子量マーカーであるSeeBlue Pre-Stained Standard（Invitrogen 社製）を用いた。
(1-4. Sample)
As a sample to be electrophoresed and transferred, SeeBlue Pre-Stained Standard (manufactured by Invitrogen), which is a colored molecular weight marker, was used.
（１−５．電気泳動）
上記１−３において調製した電気泳動兼転写用チップのゲルのウエルにサンプルと 1% アガロースを混合したものをのせて SDS-PAGE に供した。電気泳動バッファーとして、25 mM トリス、192 mM グリシンおよび 0.1% SDS を含む陰極バッファーと、150 mM トリス塩酸・pH 8.8 を含む陽極バッファーとを用いた。サンプルをのせた電気泳動兼転写用チップを４℃において約５分固めた後電気泳動装置に装着した後、装置のバッファー槽に上記バッファーを各 5 ml添加し、定電流 20 mAにおいて３０分間電気泳動を行った。
(1-5. Electrophoresis)
The sample and 1% agarose mixed in the gel well of the electrophoresis / transfer chip prepared in 1-3 above were placed on SDS-PAGE. As the electrophoresis buffer, a cathode buffer containing 25 mM Tris, 192 mM glycine and 0.1% SDS and an anode buffer containing 150 mM Tris-HCl / pH 8.8 were used. The electrophoresis / transfer chip on which the sample is placed is solidified at 4 ° C. for about 5 minutes, and then attached to the electrophoresis apparatus. Then, 5 ml of the above buffer is added to the buffer tank of the apparatus, and electricity is applied for 30 minutes at a constant current of 20 mA. Electrophoresis was performed.
（１−６．転写）
電気泳動終了後、チップを電気泳動装置から取り出した後、さらにチップから一体形成された転写用積層体および電気泳動ゲルを取り出す。取り出した転写用積層体と電気泳動ゲルとを iBlot Transfer Stacks, Mini（Invitrogen 社製）に装着した後、iBlot Gel Transfer Device（Invitrogen 社製）に装着し、プロトコールに従って定電圧 20 V において６分間通電させてゲルに展開されたサンプルを転写用積層体に転写した。
(1-6. Transcription)
After the electrophoresis is completed, the chip is taken out from the electrophoresis apparatus, and then the transfer laminate and the electrophoresis gel integrally formed from the chip are taken out. The transferred laminate and electrophoresis gel are attached to iBlot Transfer Stacks, Mini (Invitrogen), then attached to iBlot Gel Transfer Device (Invitrogen), and energized for 6 minutes at a constant voltage of 20 V according to the protocol. The sample developed on the gel was transferred to the transfer laminate.
〔２．結果〕
本発明に係る転写用積層体を含む電気泳動兼転写用チップを用いて、電気泳動および転写を実施した。
[2. result〕
Electrophoresis and transfer were performed using the electrophoresis and transfer chip including the transfer laminate according to the present invention.
ポリアクリルアミドゲルおよび転写用積層体を設置した電気泳動兼転写用積層体を用いて、着色分子量マーカーを試料に供して電気泳動ならびに転写を行った。結果を図５および図６に示す。図５および図６は、電気泳動を行い、さらに転写した後の電気泳動ゲル（図５および図６中（ａ））と転写用積層体（図５および図６中（ｂ））およびiBlot のニトロセルロース膜（図５および図６中（ｃ））を示している。なお、図５は対照実験で、図５中（ｂ）では転写用積層体の代わりに、半透膜を積層していないポリカーボネート膜のみを用いた。 Electrophoresis and transfer were performed using a colored molecular weight marker on a sample using a polyacrylamide gel and a transfer and transfer laminate provided with a transfer laminate. The results are shown in FIG. 5 and FIG. FIG. 5 and FIG. 6 show the electrophoresis gel (a in FIG. 5 and FIG. 6 (a)), the transfer laminate (FIG. 5 and FIG. 6 (b)) and iBlot after electrophoresis and further transfer. A nitrocellulose membrane ((c) in FIGS. 5 and 6) is shown. FIG. 5 shows a control experiment. In FIG. 5B, only a polycarbonate film without a semipermeable membrane was used instead of the transfer laminate.
図６で、半透膜を転写用媒体に接着層を介して積層することにより、電気泳動での着色分子量マーカーの移動を損ねることなく、また、転写操作でタンパク質が透過することなく、分離パターンを維持したまま転写用積層体に転写された（図６中（ｂ））。なお、セロファンを積層していないポリカーボネート膜を用いて電気泳動ならびに転写を行うと、着色分子量マーカーは転写用積層体に殆ど吸着せずに透過してしまい（図５中（ｂ））、ｉＢｌｏｔに設置されているニトロセルロース膜に吸着されていた（図５中（ｃ））。 In FIG. 6, by separating the semipermeable membrane on the transfer medium via an adhesive layer, the separation pattern can be obtained without impairing the movement of the colored molecular weight marker during electrophoresis and without allowing the protein to permeate through the transfer operation. The film was transferred to the transfer laminate while maintaining the above ((b) in FIG. 6). When electrophoresis and transfer are performed using a polycarbonate film on which cellophane is not laminated, the colored molecular weight marker permeates almost without being adsorbed to the transfer laminate ((b) in FIG. 5). It was adsorbed on the installed nitrocellulose membrane ((c) in FIG. 5).
本発明を用いれば、電気泳動で分離された生体試料を、分離パターンを維持したまま、損失することなく、効率よく、均一に転写することが可能である。また、電気泳動支持体と転写用積層体とを一体形成させることにより、電気泳動による分子の分離から、分離した分子の転写までの工程をより簡便に行うことが可能であり、電気泳動および転写を連続して行い得るような装置に適用することが可能になる。さらに、ＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質等の生体高分子の研究をより発展させることによって、特に医学、生物学、化学分野の産業の発展に貢献し得る。 By using the present invention, a biological sample separated by electrophoresis can be efficiently and uniformly transferred without loss while maintaining the separation pattern. In addition, by integrally forming the electrophoresis support and the transfer laminate, it is possible to more easily perform the steps from separation of molecules by electrophoresis to transfer of separated molecules. Can be applied to an apparatus capable of continuously performing the above. Furthermore, by further developing research on biopolymers such as DNA, RNA, and proteins, it can contribute to the development of industries in the fields of medicine, biology, and chemistry.
１ 転写用媒体
２ 半透膜
３ 転写用積層体
４ 接着層
５ 接着層介在転写用積層体
６ 電気泳動ゲル（電気泳動支持体）
７ 電気泳動兼転写用積層体
８ 電気泳動ゲルカセット
９ 電気泳動兼転写用チップ
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7 Laminate for electrophoresis and transfer 8
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