JP2007170997A - Virus-suspension collection method - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ウィルス浮遊液の採取方法、より具体的には、特定の採便容器による、糞便からの効率的なウィルス浮遊液の採取方法に関する発明である。 The present invention relates to a method for collecting a virus suspension, more specifically, an invention relating to an efficient method for collecting a virus suspension from feces using a specific stool collection container.
下痢や嘔吐等を伴う消化器系のウィルス、例えば、ノロウィルス、サポウィルス、ロタウィルス、アデノウィルス等は、当該ウィルス感染者の糞便中に存在し、これらの感染症の診断には糞便検体が用いられている。これらのウィルスのPCR法(RNAウィルスの場合には、RT−PCR法)等の遺伝子増幅法を用いたウィルス核酸検査には、糞便検体の約10%懸濁液の遠心上清を調製し、当該上清のウィルス核酸を含み得る層を必要量だけ分散し、それに対してウィルス核酸の調製工程を行っている。現状では、糞便検体の前処理工程は、糞便検体ごと凍結された採便容器を融解し、ディスポーザルのループ(白金耳)で当該融解液の適量を採取し、蒸留水入りのマイクロチューブに懸濁するという煩雑な手作業を強いられてきた。寄せられる糞便検体は、多くが下痢症患者のものであるため、水様便から0.1ml前後の少量を分取するという操作も頻回強いられ、場合によってはディスポーザルスポイトも用いられていた。検出対象となるウィルスの感染力は強い場合が多く、例えば、ノロウィルスではエアロゾル中に数十個のウィルス粒子が含まれ、それを吸い込んだだけで感染することがある。エアロゾルによる飛沫感染だけでなく、不用意な糞便懸濁作業時の液滴漏出や付着等の汚染により、それが作業者の手を介して口に持ち込まれる接触感染事故も、多数の受託検体を前処理していく過程において危険因子として認識されている。このような事情から、糞便の懸濁作業は、全てP3実験室内の安全キャビネット内で行わなければならない。
上記の背景技術を鑑み、本発明は、ウィルス検出を行う場合における、糞便検体の効率的かつ安全な処理手段を提供することを課題とする発明である。本発明者らは、かかる課題を解決するために、一旦、採便から糞便検体の検出作業までの工程を、同一の採便容器において、安全かつ効率的に行うことが可能な採便容器の、ウィルス検出を目的とした使用方法について鋭意検討を行った。 In view of the above-described background art, the present invention is an object of the present invention to provide an efficient and safe processing means for a stool specimen when virus detection is performed. In order to solve such a problem, the present inventors once made a stool collection container capable of performing the steps from stool collection to stool specimen detection work safely and efficiently in the same stool collection container. In addition, intensive studies were conducted on how to use for virus detection.
かかる課題を解決するためには、例えば、下記の条件(1)〜(4)を満たすことが可能な、新規の採便容器を提供して、この採便容器を用いたウィルスの糞便検体からの分離方法を提供することが必要である。 In order to solve such a problem, for example, a new stool collection container capable of satisfying the following conditions (1) to (4) is provided, and a virus stool specimen using the stool collection container is used. It is necessary to provide a separation method.
(1)検査ラボに到着してから、糞便懸濁サンプルを再度調製しなくても済むように、採便時に、既に適度な濃度の糞便の懸濁液を調製することが可能な採便容器であること。 (1) A stool collection container that can already prepare a stool suspension with an appropriate concentration at the time of stool collection so that it is not necessary to prepare a stool suspension sample again after arriving at the laboratory. Be.
(2)糞便検体の提供者の多くは、すでに下痢状態であるため、水様便であっても、検体提供者本人が、便器内から無理なく必要量の糞便を採取することが可能であること。そのためには、以下のような具体的な要求1)〜2)を満たすことが好適である。
1)糞便採取に用いる器具(採便棒)は、固形便と水様便双方について、規定量が無理なく取れるような構造をしていること。
2)糞便検体が過剰量懸濁されることがないように、過剰量の糞便の採取を阻止できる構造を備えていることと共に、糞便検体が容器外面にあふれ出て、当該容器表面や周囲を汚染することを未然に防げるような構造を備えていること。
(2) Since many donors of stool specimens are already in diarrhea, the specimen provider himself / herself can easily collect the necessary amount of stool even from watery stool. thing. For that purpose, it is preferable to satisfy the following specific requirements 1) to 2).
1) The equipment used to collect stool (stool collection rod) shall be structured so that the prescribed amount can be taken without difficulty for both solid stool and watery stool.
2) In order to prevent the stool sample from being suspended in an excessive amount, it has a structure that can prevent the collection of an excessive amount of stool, and the stool sample overflows to the outer surface of the container and contaminates the surface and surroundings of the container. It has a structure that can prevent it from happening.
(3)採便後の容器を凍結保存したとき、破損することのない材質からなる容器であり、また、内液の凍結に伴う体積の膨張による容器の破損や、ジョイント部からの内液の漏出が抑止されていること。 (3) A container made of a material that will not be damaged when the container after stool collection is stored frozen. Also, the container may be damaged due to volume expansion caused by freezing of the internal liquid, or the internal liquid from the joint may Leakage is suppressed.
(4)ラボ到着後、糞便懸濁サンプル中の食物消化残渣や細菌の菌体を分離するために、糞便懸濁サンプルの遠心分離を行うが、この際、糞便懸濁サンプルを採便容器から、別のテストチューブに取り移す操作を行う必要がないように、採便容器自体に、ウィルス浮遊液層を、安全かつ効率的に分離できる構造を備えていること。 (4) After arriving at the laboratory, the stool suspension sample is centrifuged to separate food digestion residues and bacterial cells in the stool suspension sample. At this time, the stool suspension sample is removed from the stool collection container. The stool collection container itself must have a structure that allows the virus suspension layer to be separated safely and efficiently so that it is not necessary to transfer to another test tube.
従来より、便潜血検査や各種ウィルス検査の際に使用する採便容器として、例えば、特許文献1に示されるものが知られている。この採便容器は、両端が開口され、中間が薄膜で閉鎖された容器本体と、容器本体の一端を閉鎖するキャップ部材と、容器本体の他端に撞着される試料採取手段(採便棒)とを備え、キャップ部材と薄膜との間の溶解液収容室には糞便を溶かすための溶解液が収容されている。試料採取手段を容器本体の開放端から挿入すると、試料採取部に付着した余分な糞便が薄膜の淵で拭い取られ、一定量の糞便のみが溶解液収容室に供給されようになっている。また、検査の際には、キャップ部材の先端の閉鎖部を手でねじって開封し、容器本体の中央を手で押さえて内部を圧迫することにより、容器本体の懸濁液がフィルターで濾過され排出されるものである。 Conventionally, as a stool collection container used in the fecal occult blood test and various virus tests, for example, the one shown in Patent Document 1 is known. This stool collection container has a container body whose both ends are opened and a middle is closed with a thin film, a cap member for closing one end of the container body, and a sample collection means (stool collection rod) attached to the other end of the container body. And a solution for dissolving feces is stored in a solution storage chamber between the cap member and the thin film. When the sample collection means is inserted from the open end of the container main body, excess stool adhering to the sample collection unit is wiped off with a thin film jar, and only a certain amount of stool is supplied to the solution storage chamber. Also, during inspection, the closure at the tip of the cap member is unscrewed by hand, and the suspension of the container body is filtered through a filter by pressing the inside of the container body by hand. It will be discharged.
しかし、特許文献1に代表される従来の採便容器の場合、試料採取手段を溶解液収容室に挿入する際に溶解液収容室の内圧が上昇し、溶解液がフィルターを通して下へ漏れ出てしまい、検査に支障をきたすことがある。 However, in the case of a conventional stool collection container represented by Patent Document 1, when the sample collection means is inserted into the solution storage chamber, the internal pressure of the solution storage chamber rises and the solution leaks down through the filter. The inspection may be hindered.
そこで、特許文献2では、容器本体の内部に設けられ、採便棒を挿通させる際に余分な糞便を除去する分離壁に、採便棒の外周面に気密に係合する凸条を周設するとともに、採便棒の周面の少なくとも一部に分離壁の凸条の軸方向長よりも長い凹部を分離壁に対向して形成した採便容器が開示されている。特許文献2に記載された採便容器によれば、採便棒を容器本体へ挿入することにより上昇した容器本体の内圧を、挿入過程の完了直前に常圧に低下させることができ、滴下部を穿刺したときに懸濁液が過剰な圧力によって容器本体から噴出飛散して周囲を汚染することがない。 Therefore, in Patent Document 2, a ridge that is provided inside the container body and that airtightly engages with the outer peripheral surface of the stool collection rod is provided on the separation wall that removes excess feces when the stool collection rod is inserted. In addition, a stool collection container is disclosed in which a recess that is longer than the axial length of the ridge of the separation wall is formed on at least a part of the peripheral surface of the stool collection rod so as to face the separation wall. According to the stool collection container described in Patent Document 2, the internal pressure of the container body, which has been raised by inserting the stool collection rod into the container body, can be reduced to normal pressure immediately before the completion of the insertion process. The suspension does not spout from the container body due to excessive pressure to contaminate the surroundings.
しかしながら、特許文献2に記載された採便容器においても、容器本体の内圧は挿入過程の完了直前まで上昇するため、その聞、溶解液がフィルターを通過して容器本体の外へ漏れ出てしまうおそれがある。 However, even in the stool collection container described in Patent Document 2, since the internal pressure of the container body rises until just before the insertion process is completed, the dissolved solution leaks out of the container body through the filter. There is a fear.
本発明者は、上記の課題を解決するために、糞便を溶解する溶解液を収容する溶解収容室が内部に設けられ、一端部に糞便を採取する採便棒が挿着されるとともに、他端部に懸濁液を濾過するフィルターが備えられた筒状の採便チューブと、当該採便チューブの他端部に装着される濾液チューブとからなることを特徴とする採便容器を用いたウィルス浮遊液の採取方法であって、糞便が付着した採便棒を前記採便容器に挿着した後、当該採便棒に付着した糞便を前記溶解液中に溶解し、前記採便容器に1000G以上の遠心力を加え、前記フィルターを通過した前記濾液チューブ内の液層のみを捕集することを特徴とするウィルス浮遊液の採取方法(以下、本採取方法ともいう)を提供することに想到した。 In order to solve the above-mentioned problems, the inventor has a dissolution storage chamber for storing a solution for dissolving feces, and a stool collection rod for collecting stool is inserted into one end, A stool collection container comprising a cylindrical stool collection tube provided with a filter for filtering the suspension at the end and a filtrate tube attached to the other end of the stool collection tube was used. A method for collecting a virus suspension, wherein a stool collection stick attached to a stool is inserted into the stool collection container, and then the stool attached to the stool collection stick is dissolved in the solution, Providing a method for collecting a virus suspension (hereinafter also referred to as the present collection method), which applies a centrifugal force of 1000 G or more and collects only the liquid layer in the filtrate tube that has passed through the filter. I came up with it.
本採取方法において、糞便中のウィルス検出を目的として用いる採便容器(以下、本採便容器ともいう)は、糞便を溶解する溶解液を収容する溶解液収容室が内部に設けられ、当該溶解液収容室の一端部が破断可能な膜で封止された筒状の採便チューブと、棒状部材の基端側が把持部とされ、先端側に糞便を採取する採便部が設けられた採便棒とを備え、前記採便部は、軸線上に頂部を有する角錐からなる先端部と角柱からなる軸部からなり、前記角錐と前記角柱とが連続する稜線を形成していることを特徴としている。 In this collection method, a stool collection container (hereinafter also referred to as a “stool collection container”) used for the purpose of detecting viruses in stool is provided with a solution storage chamber for storing a solution for dissolving stool, and the dissolution A tubular stool collection tube sealed at one end of the liquid storage chamber with a breakable membrane, a collection part provided with a stool collection part for collecting stool at the distal end side, with the proximal end side of the rod-shaped member as a gripping part A stool, and the stool collection part includes a tip part made of a pyramid having a top on an axis and a shaft part made of a prism, and forms a ridge line in which the pyramid and the prism are continuous. It is said.
従来の採便棒の採便部は、先端部が円錐状とされ、軸部は円柱状とされていたため、溶解液収容室を封止する膜を採便部で突き破る際に、膜の破れ方にバラツキが生じていた。 The conventional stool collection portion of the stool collection rod has a conical tip and a cylindrical column, so that when the membrane for sealing the solution storage chamber is broken through the stool collection membrane, There was variation in the direction.
これに対して、本採便容器では、採便部の先端部を角錐状とするとともに軸部を角柱状としているので、角錐および角柱の稜線部分で膜を鋭利に破断することができ、膜の破れ方が一定してばらつくことがない。そして、破断して三角状となった膜片と角柱状の軸部との間に生じた隙間から空気が流通し、採便棒を溶解液収容室に挿入した時点から溶解液収容室の内圧は常圧に保たれる。 On the other hand, in this stool collection container, the tip of the stool collection part has a pyramid shape and the shaft part has a prism shape, so that the membrane can be sharply broken at the pyramid and the ridge line portion of the prism. The way of tearing does not vary consistently. Then, air flows from the gap formed between the broken and triangular film piece and the prismatic shaft portion, and the internal pressure of the solution storage chamber starts when the stool collection rod is inserted into the solution storage chamber. Is kept at normal pressure.
また、本採便容器において着脱が可能な状態で装着されている濾液チューブは、糞便を溶解する溶解液を収容する溶解液収容室が内部に設けられ、一端部に糞便を採取する採便棒が挿着されるとともに、他端部に懸濁液を濾過するフィルターが備えられた筒状の採便チューブと、当該採便チューブの他端部に装着される濾液チューブとからなることを特徴としている。 Further, the filtrate tube mounted in a detachable state in the stool collection container is provided with a solution storage chamber for storing a solution for dissolving stool, and a stool collection rod for collecting stool at one end. And a cylindrical stool collection tube provided with a filter for filtering the suspension at the other end, and a filtrate tube attached to the other end of the stool collection tube. It is said.
本採取方法では、本採便容器を用いて、糞便に含まれるウィルス浮遊液の採取を行うことを特徴とする。具体的には、糞便が付着した採便棒を採便容器本体に挿着した後、当該採便棒に付着した糞便を前記溶解液中に溶解し、容器本体を遠心分離機にかけて1000G以上(好ましくは2000〜3000G)の遠心力を加え、前記フィルターを通過した前記濾液チューブ内の液層のみを捕集し、当該液層をウィルス浮遊液として用いることを特徴とする。 This collection method is characterized in that the virus suspension contained in the stool is collected using this stool collection container. Specifically, after the stool collection stick attached to the stool collection container main body is inserted into the stool collection container body, the stool attached to the stool collection stick is dissolved in the solution, and the container main body is subjected to a centrifugal separator at 1000 G or more ( Preferably, a centrifugal force of 2000 to 3000 G) is applied to collect only the liquid layer in the filtrate tube that has passed through the filter, and the liquid layer is used as a virus suspension.
本採取方法では、密閉された本採便容器本体に対して、遠心分離機を用いて遠心力を加え、フィルターを通過した濾液チューブ内の液層(ウィルス浮遊液)のみを捕集する形態としているため、糞便懸濁サンプルの調製が不要となり、飛沫感染を防止することができる。この際、上記のように、遠心力を重力加速度の1000倍(1000G)以上とすることにより、細菌類を含む雑物はフィルターに捕捉されるか、または濾液チューブの底に沈殿し、主にウィルスが濾液チューブの液層に浮遊した状態となり、当該液層をウィルス浮遊液として用いることが可能となる。 In this collection method, a centrifugal force is applied to the sealed main stool collection body using a centrifuge to collect only the liquid layer (virus suspension) in the filtrate tube that has passed through the filter. Therefore, it is not necessary to prepare a stool suspension sample, and droplet infection can be prevented. At this time, as described above, by setting the centrifugal force to 1000 times the gravitational acceleration (1000 G) or more, foreign substances including bacteria are trapped by the filter or settled on the bottom of the filtrate tube. The virus is suspended in the liquid layer of the filtrate tube, and the liquid layer can be used as the virus suspension.
本採取方法の対象となるウィルスは、糞便中に存在し得るウィルスであれば特に限定されず、例えば、ノロウィルス、サポウィルス、ロタウィルス、アデノウィルス等が例示されるが、これらに限定されるものではない。 The target virus of this collection method is not particularly limited as long as it is a virus that can exist in feces, and examples thereof include norovirus, sapovirus, rotavirus, adenovirus, etc., but are not limited thereto. is not.
本発明のウィルスの浮遊液の採取方法にて用いる採便容器では、採便棒の採便部の形状を、先端部を角錐状とするとともに軸部を角柱状としているので、溶解液収容室を封止する膜を採便部で突き破る際に膜の破れ方が一定してばらつくことがない。そして、破断した膜と角柱状の軸部との間に生じた隙間から空気が流通し、採便棒を溶解液収容室に挿入した時点から溶解液収容室の内圧を常圧に保つことができる。 In the stool collection container used in the method for collecting the virus suspension of the present invention, the stool collection part of the stool collection rod has a pyramidal shape at the tip and a prismatic shape at the shaft. When the membrane that seals the membrane is pierced by the stool collection portion, the manner in which the membrane is torn does not vary. Then, air flows from the gap formed between the fractured membrane and the prismatic shaft, and the internal pressure of the solution storage chamber can be maintained at normal pressure from the time when the stool collection rod is inserted into the solution storage chamber. it can.
そして、密閉された容器本体に遠心分離機を用いて遠心力を加え、フィルターを通過した濾液チューブ内の液層のみをウィルス浮遊液として捕集すればよいので、糞便懸濁液の飛沫感染を防ぐことができる。その結果、安全キャビネット内の作業が不要となり、作業者の安全性を向上させるとともに作業の効率化を図ることができる。 Then, centrifugal force is applied to the sealed container body using a centrifuge, and only the liquid layer in the filtrate tube that has passed through the filter needs to be collected as a virus suspension. Can be prevented. As a result, the work in the safety cabinet becomes unnecessary, and the safety of the worker can be improved and the work efficiency can be improved.
本採便容器は、本採取方法を行うための前提となる要件であり、本採便容器の最良の形態を本採取方法にて用いることは、本採取方法の最良の形態の一つを行うことを意味するものである。 This stool collection container is a prerequisite for carrying out this collection method. Using the best form of this stool collection container in this collection method is one of the best forms of this collection method. It means that.
本採便容器は、採便棒の採便部の形状を、先端部を角錐状とするとともに軸部を角柱状とすることにより、破断した膜と角柱状の軸部との間に生じた隙間から空気が流通し、採便棒を溶解液収容室に挿入した時点から溶解液収容室の内圧を常圧に保つものであるが、実施に当たっては、さらに以下の構成を備えていることが好ましい。 In this stool collection container, the shape of the stool collection part of the stool collection rod was formed between the broken membrane and the prismatic shaft part by making the tip part a pyramidal shape and the shaft part a prismatic shape. The air flows from the gap, and the internal pressure of the solution storage chamber is maintained at a normal pressure from the time when the stool collection rod is inserted into the solution storage chamber. preferable.
本採便容器では、前記採便部の軸部に糞便を収容する凹陥部が形成され、さらに前記凹陥部内に当該凹陥部を区画するリブが設けられていることを好適とする。 In this stool collection container, it is preferable that a concave portion for accommodating feces is formed in a shaft portion of the stool collection portion, and a rib for partitioning the concave portion is provided in the concave portion.
溶解液収容室を封止する膜を採便棒で突き破った場合、破断した膜片が採便棒に密着する可能性がある。特に、採便部に糞便を収容する凹陥部を設けた場合、破れた膜片が凹陥部内に入り込んで空気の流通路が塞がれ、溶解液収容室の内圧が上昇するだけでなく、破れた膜片が凹陥部内の糞便を削り取るおそれもある。これに対して、本採便容器では、凹陥部内に当該凹陥部を区画するリブを設けることにより、破れた膜片が凹陥部内に入り込むのを防止して空気の流通路を確保するとともに、凹陥部内の糞便が削り取られないようにする。 When the membrane that seals the solution storage chamber is pierced by the stool collection rod, the broken membrane piece may adhere to the stool collection rod. In particular, if the stool collection part is provided with a recessed part that accommodates feces, the torn film piece enters the recessed part and the air flow passage is blocked, not only the internal pressure of the solution storage chamber increases, but also the tear is broken. There is also a possibility that the film piece scrapes off the stool in the recess. In contrast, in the present stool collection container, by providing ribs that define the recessed portion in the recessed portion, the torn film piece is prevented from entering the recessed portion to ensure an air flow path, and the recessed portion. Make sure that feces in the club are not scraped off.
また、本採便容器では、前記採便部の軸部の両側部が前記凹陥部の開口側に突出していてもよい。 In the stool collection container, both side portions of the shaft portion of the stool collection portion may protrude toward the opening side of the recessed portion.
本採便容器では、軸部の両側部が凹陥部の開口側に突出しているので、凹陥部の上面に空気の流通路となる空隙を確保することができる。 In the present stool collection container, since both side portions of the shaft portion protrude toward the opening side of the recessed portion, it is possible to secure a space serving as an air flow path on the upper surface of the recessed portion.
また、本採便容器では、前記溶解液収容室の一端部に筒状の封止部材が挿着され、前記封止部材の一端面に前記破断可能な膜が張設され、前記封止部材の外周部には凸状のシール部が周設されるとともに、複数のフィンが前記シール部の上方に放射状に配設されていてもよい。 Further, in the present stool collection container, a cylindrical sealing member is inserted into one end portion of the dissolution liquid storage chamber, the breakable membrane is stretched on one end surface of the sealing member, and the sealing member A convex seal portion may be provided around the outer peripheral portion of the first and second fins, and a plurality of fins may be provided radially above the seal portion.
本採便容器では、採便棒に付着する余分な糞便を封止部材の外周部(フィンとフィンの間)に収容するとともに、封止部材の外周部に凸状のシール部を周設して、収容した余分な糞便が封止部材の外周部から溶解液収容室内へ回り込まないようにすることができる。 In this stool collection container, excess stool adhering to the stool collection rod is accommodated in the outer peripheral portion (between fins) of the sealing member, and a convex seal portion is provided around the outer peripheral portion of the sealing member. Thus, it is possible to prevent the stored excess feces from entering the solution storage chamber from the outer peripheral portion of the sealing member.
このように、本採取方法を行うための採便容器である本採便容器は、糞便検体を、効率よく、かつ、安全に、同一の採便容器にてウィルス浮遊液を採取可能な構成を有することを特徴としている。 As described above, the stool collection container, which is a stool collection container for carrying out the collection method, has a configuration in which a stool sample can be collected efficiently and safely in the same stool collection container. It is characterized by having.
以下、本発明の実施例について、図面に基いて説明する。
本実施例において例示する本採便容器は、糞便を溶解する溶解液を収容する溶解液収容室11が内部に設けられた筒状の採便チューブ10と、当該採便チューブ10の一方の端部に装着される筒状容器からなる濾液チューブ20とからなる容器本体40と、棒状部材の基端側が把持部37とされ、先端側に糞便を採取する採便部31が設けられた採便棒30とから構成されている。容器本体40の形状を図1に、採便棒30の形状を図2および図3にそれぞれ示す。以下の説明では、採便チューブ10に採便棒30を挿入する方向を「下」、その反対方向を「上」と便宜上、呼ぶことにする。
Embodiments of the present invention will be described below with reference to the drawings.
The stool collection container exemplified in the present embodiment includes a tubular stool collection tube 10 in which a solution storage chamber 11 for storing a solution for dissolving stool is provided, and one end of the stool collection tube 10. A stool collection apparatus provided with a container body 40 composed of a filtrate tube 20 composed of a cylindrical container attached to the section, a proximal end side of a rod-shaped member as a gripping section 37, and a stool collection section 31 for collecting stool at the distal end It is composed of a rod 30. The shape of the container body 40 is shown in FIG. 1, and the shape of the stool collection rod 30 is shown in FIGS. In the following description, the direction in which the stool collection rod 30 is inserted into the stool collection tube 10 will be referred to as “down” and the opposite direction as “up” for convenience.
溶解液収容室11は採便チューブ10の中間部に設けられており、溶解液収容室11には溶解液として緩衝液が収容されている。ここで、溶解液は、滅菌蒸留水や生理食塩水やリン酸バッファー等である。 The solution storage chamber 11 is provided in an intermediate portion of the stool collection tube 10, and a buffer solution is stored in the solution storage chamber 11 as a solution. Here, the solution is sterilized distilled water, physiological saline, phosphate buffer, or the like.
溶解液収容室11の上端部はストッカー12(封止部材)で封止されるとともに、溶解液収容室11の下端部は懸濁液を濾過するフィルター13によって仕切られ、負荷のかからない状態では、溶解液がフィルター13を通して溶解液収容室11から漏れ出ないようになっている。 While the upper end of the solution storage chamber 11 is sealed with a stocker 12 (sealing member), the lower end of the solution storage chamber 11 is partitioned by a filter 13 that filters the suspension, and in a state where no load is applied, The solution is prevented from leaking from the solution storage chamber 11 through the filter 13.
また、フィルター13に隣接する採便チューブ10の下端部外周面には、雄ねじ部15が形成されており、濾液チューブ20の開口部内周面に形成された雌ねじ部21に螺合するようになっている。一方、ストッカー12に隣接する採便チューブ10の上端部内周面には雌ねじ部14が形成されており、後述する採便棒30の雄ねじ部36が螺合するようになっている。 A male threaded portion 15 is formed on the outer peripheral surface of the lower end portion of the stool collection tube 10 adjacent to the filter 13, and is screwed into a female threaded portion 21 formed on the inner peripheral surface of the opening of the filtrate tube 20. ing. On the other hand, an internal thread portion 14 is formed on the inner peripheral surface of the upper end portion of the stool collection tube 10 adjacent to the stocker 12, and an external thread portion 36 of the stool collection rod 30 to be described later is screwed together.
ストッカー12は、採便チューブ10の内周面に内接する円筒状の底部12dと、底部12dより小径の円筒部12bと、円筒部12bの外周面に放射状に形成され、円筒部12bより長尺の複数のフィン12cとが一体的に形成されたものである。円筒部12bの上端面には、ポリエチレン、エラストマー、アルミニウム等からなる破断可能な膜12aが張設され、底部12dの外周面には凸状のシール部12eが周設されている。 The stocker 12 is formed in a cylindrical bottom portion 12d inscribed in the inner peripheral surface of the stool collection tube 10, a cylindrical portion 12b having a smaller diameter than the bottom portion 12d, and radially formed on the outer peripheral surface of the cylindrical portion 12b, and is longer than the cylindrical portion 12b. The plurality of fins 12c are integrally formed. A breakable film 12a made of polyethylene, elastomer, aluminum or the like is stretched on the upper end surface of the cylindrical portion 12b, and a convex seal portion 12e is provided on the outer peripheral surface of the bottom portion 12d.
採便棒30に付着した余分な糞便は、破れた膜12aおよび複数のフィン12cで拭い取られ、ストッカー12上に蓄積するが、採便容器を遠心分離機にかけると、これら余分な糞便はフィン12cとフィン12cの間に移動する。この際、底部12dの外周面にシール部12eが周設されているので、収容した余分な糞便がストッカー12の外周部から溶解液収容室11内へ回り込むことはない。なお、本実施例のように、採便棒30と容器本体40を使用前は別個とすることも可能であるが、使用前において、採便棒30の雄ねじ部36が螺合した形態を選択することも可能である。この場合は、膜12aは設けずに、かつ、円筒部12bの断面形状が円形であり、当該円筒部の形状が採便棒30における円柱状の拡径部35が嵌合することができる形状であることが好適である。 Excess stool adhering to the stool collection rod 30 is wiped off by the torn membrane 12a and the plurality of fins 12c and accumulates on the stocker 12. However, when the stool collection container is centrifuged, these excess stool is removed. It moves between the fin 12c and the fin 12c. At this time, since the seal portion 12e is provided around the outer peripheral surface of the bottom portion 12d, the excess stool stored does not enter the solution storage chamber 11 from the outer periphery of the stocker 12. As in the present embodiment, the stool collection rod 30 and the container body 40 can be separated before use, but before use, the form in which the male thread portion 36 of the stool collection rod 30 is screwed is selected. It is also possible to do. In this case, the membrane 12a is not provided, and the cross-sectional shape of the cylindrical portion 12b is circular, and the shape of the cylindrical portion is such that the columnar enlarged diameter portion 35 of the stool collection rod 30 can be fitted. It is preferable that
採便棒30の採便部31は、軸線上に頂部を有する四角錐からなる先端部32と四角柱からなる軸部33から構成されており、四角錐と四角柱は連続する稜線を形成している。 The stool collection portion 31 of the stool collection rod 30 is composed of a tip portion 32 made of a quadrangular pyramid having an apex on the axis and a shaft portion 33 made of a quadrangular column, and the quadrangular pyramid and the quadrangular column form a continuous ridgeline. ing.
採便棒30の場合、採便部31の稜線部分でストッカー12の膜12aを十字状に破断し、膜12aの破れ方が一定してばらつくことがない。そして、破断して三角状となった膜片と四角柱からなる軸部33との間に生じた隙間から空気が流通し、採便棒30を溶解液収容室11に挿入した時点から溶解液収容室11の内圧は常圧に保たれる。 In the case of the stool collection rod 30, the film 12a of the stocker 12 is broken in a cross shape at the ridge line portion of the stool collection part 31, and the way the film 12a is torn does not vary. Then, the air is circulated through the gap formed between the broken and triangular film piece and the shaft portion 33 made of a quadrangular column, and the solution is taken from the time when the stool collection rod 30 is inserted into the solution storage chamber 11. The internal pressure of the storage chamber 11 is kept at normal pressure.
軸部33の上半部および下半部には、対向する面にそれぞれ軸方向に長い凹陥部33aが形成されており、各凹陥部33a内に糞便が収容される。 In the upper half portion and the lower half portion of the shaft portion 33, concave portions 33a that are long in the axial direction are formed on opposite surfaces, respectively, and feces are accommodated in the respective recessed portions 33a.
採便部31は、糞便を掬い取らずに、糞便に押し付けながら掻き取って凹陥部33a内に収容するのに適した形状になっており、規定量以上の糞便を採取することを未然に防止しつつ、従来のサジ状の採便部のように糞便を山盛りに採取することがないように誘導することが可能となる。 The stool collection part 31 has a shape suitable for being scraped while being pressed against the stool and accommodated in the recessed part 33a without scooping the stool, and prevents the collection of stool of a specified amount or more in advance. However, it is possible to guide the feces not to be collected in a heap like the conventional sagittal stool collection part.
また、各凹陥部33a内は軸方向に配設されたリブ33bで二列に仕切られており、破れた膜12aが凹陥部33a内に入り込むのを防止して空気の流通路を確保するとともに、凹陥部33a内の糞便が削り取られないようにしている。しかも、図3に示すように、リブ33bを挟んで軸方向に配設された両側部33c、33cが凹陥部33aの開口側に突出しており、凹陥部33aの上面に空気の流通路となる空隙を確保することができる。加えて、凹陥部33aがリブ33bで仕切られてスリット状とされ、凹陥部33aの幅が適度な狭さとなっているため、水様便を採取する際に、液体の表面張力を利用して凹陥部33a内に水様便を満たした状態で採便棒30を取り上げることができる。 Each recess 33a is partitioned into two rows by axially arranged ribs 33b to prevent the torn film 12a from entering the recess 33a and secure an air flow path. The feces in the recess 33a is prevented from being scraped off. Moreover, as shown in FIG. 3, both side portions 33c and 33c disposed in the axial direction with the rib 33b interposed therebetween protrude to the opening side of the recessed portion 33a, and serve as an air flow path on the upper surface of the recessed portion 33a. A void can be secured. In addition, the concave portion 33a is partitioned by the rib 33b to form a slit, and the width of the concave portion 33a is moderately narrow. Therefore, when collecting watery stool, the surface tension of the liquid is used. The stool collection rod 30 can be taken up in a state where the recessed portion 33a is filled with watery stool.
採便部31と把持部37の間には、採便部31から把持部37に向けて、円柱状の縮径部34、円柱状の拡径部35、雄ねじ部36が順に形成されている。縮径部34は、空気の流通路を確保するために採便部31よりも小径とされている。一方、拡径部35の先端側はテーパー状とされ、ストッカー12の膜12aが破れた後、拡径部35でストッカー12の開口を塞いで糞便が外に漏れ出ないようにしている。 Between the stool collection portion 31 and the gripping portion 37, a columnar reduced diameter portion 34, a columnar enlarged diameter portion 35, and a male screw portion 36 are sequentially formed from the stool collection portion 31 toward the gripping portion 37. . The reduced diameter portion 34 has a smaller diameter than the stool collection portion 31 in order to secure an air flow passage. On the other hand, the distal end side of the enlarged diameter portion 35 is tapered, and after the film 12a of the stocker 12 is broken, the enlarged diameter portion 35 closes the opening of the stocker 12 so that feces do not leak out.
なお、採便チューブ10は、凍結保存と遠心分離に耐えられるように、例えば、ポリプロピレン等で形成されていることが好適である。また、採便チューブ10と濾液チューブ20の密着性を高めるため、例えば、濾液チューブ20には、採便チューブ10のポリプロピレンとは異なる、低密度ポリエチレン等を使用することが好ましい。また、ストッカー12は低密度ポリエチレン等、採便棒30はABS樹脂等でそれぞれ形成されていることが好適である。 Note that the stool collection tube 10 is preferably formed of, for example, polypropylene or the like so as to withstand cryopreservation and centrifugation. Moreover, in order to improve the adhesiveness of the stool collection tube 10 and the filtrate tube 20, it is preferable to use low density polyethylene etc. which are different from the polypropylene of the stool collection tube 10 for the filtrate tube 20, for example. The stocker 12 is preferably formed of low density polyethylene or the like, and the stool collection rod 30 is preferably formed of ABS resin or the like.
一方、フィルター13は、ポリプロピレンやポリエチレン等の合成樹脂からなる焼結体である。孔径は、検出すべき対象によって異なるが、ウィルス粒子の直径の100〜2000倍位のポアサイズのフィルターを用いることが好適である。なお、ウィルス粒子の直径は、概ね20〜300nmである。例えば、ノロウィルスを、本採取方法における採取対象ウィルスとする場合、ウィルス粒子の直径は30nm程度であるので、それより約1000倍ポアサイズが大きい30μm程度のポアサイズのフィルターを装着すれば容易にウィルスを通過させることができる。一方、細菌類の大きさは20〜100μm程度であるので、フィルターに捕捉される。また万一、細菌類がフィルターを通過しても遠心沈渣となり、ウィルス浮遊液の回収には影響しない。 On the other hand, the filter 13 is a sintered body made of a synthetic resin such as polypropylene or polyethylene. Although the pore diameter varies depending on the target to be detected, it is preferable to use a filter having a pore size of about 100 to 2000 times the diameter of the virus particle. In addition, the diameter of a virus particle is about 20-300 nm in general. For example, when Norovirus is the virus to be collected in this collection method, the diameter of the virus particle is about 30 nm. Can be passed. On the other hand, since the size of bacteria is about 20 to 100 μm, it is captured by the filter. In addition, even if bacteria pass through the filter, it becomes a centrifugal sediment and does not affect the recovery of the virus suspension.
次に、ウィルス浮遊液の分取作業における本採便容器の取り扱い方法について説明する。 Next, the handling method of this stool collection container in the fractionation work of a virus suspension is demonstrated.
採便前は、緩衝液が詰められた採便チューブ10の下端部に空の濾液チューブ20が装着され、採便棒30は予め外された状態である。採便棒30を用いて糞便を採取する場合は、糞便が付着した採便棒30を採便チューブ10の上端開口部から挿入して、採便部31の先端部32でストッカー12の膜12aを突き破って溶解液収容室11に採便部31を挿入した後、採便棒30の雄ねじ部36を採便チューブ10の雌ねじ部14に螺合して密閉する(図4参照)。 Before the stool collection, the empty filtrate tube 20 is attached to the lower end of the stool collection tube 10 packed with the buffer solution, and the stool collection rod 30 is removed in advance. When collecting the stool using the stool collection rod 30, the stool collection rod 30 to which the stool is attached is inserted from the upper end opening of the stool collection tube 10, and the membrane 12a of the stocker 12 is inserted at the tip 32 of the stool collection unit 31. Then, the stool collection portion 31 is inserted into the solution storage chamber 11, and the male thread portion 36 of the stool collection rod 30 is screwed into the female thread portion 14 of the stool collection tube 10 to be sealed (see FIG. 4).
ウィルス浮遊液の分取は、凍結保存された採便後の採便容器を融解して適度に撹拌した後、採便容器を直接、遠心分離機(図示省酪)にかけて溶解液収容室11の下端部に設置してあるフィルター13により糞便中の食物消化残滓や細菌塊を除去し、空の濾液チューブ20内の液層のみを捕集するという手順により行われる。遠心処理において採便容器に、好適には1000G以上、さらに好適には2000〜3000Gの遠心力を加えることにより、フィルター13を通過した細菌類を含む雑物は濾液チューブ20の底に沈殿し、主にウィルスが濾液チューブ20の液層に浮遊した状態となる。また、1000G以上という大きな遠心力を採便容器に負荷しているので、採便容器を密閉状態としても、懸濁液はフィルター13を経由して採便チューブ10から濾液チューブ20に移動する。 In order to separate the virus suspension, after thawing the frozen stool collection container and stirring it appropriately, the stool collection container 11 is directly placed in the lysate storage chamber 11 by directly centrifuging the stool collection container. The filter 13 installed at the lower end is used to remove food digestion residues and bacterial clumps in the stool and collect only the liquid layer in the empty filtrate tube 20. By applying a centrifugal force of preferably 1000 G or more, more preferably 2000 to 3000 G to the stool collection container in the centrifugal treatment, foreign matters including bacteria that have passed through the filter 13 are precipitated at the bottom of the filtrate tube 20. The virus mainly floats in the liquid layer of the filtrate tube 20. In addition, since a large centrifugal force of 1000 G or more is applied to the stool collection container, the suspension moves from the stool collection tube 10 to the filtrate tube 20 via the filter 13 even when the stool collection container is sealed.
なお、懸濁液が採便チューブ10から濾液チューブ20にスムーズに移動するように、遠心分離機に載せる直前に、採便チューブ10と採便棒30との間のねじ(採便チューブ10の雌ねじ部14と採便棒30の雄ねじ部36の間)、および採便チューブ10と濾液チューブ20との間のねじ(採便チューブ10の雄ねじ部15と濾液チューブ20の雌ねじ部21の間)を緩めて気密を解除しておいてもよい。採便チューブ10の雄ねじ部15は濾液チューブ20内に深く螺挿されるので、フィルター13を通過した懸濁液が濾液チューブ20から外に漏れ出ることはない。 It should be noted that the screw between the stool collection tube 10 and the stool collection rod 30 (of the stool collection tube 10) immediately before being placed on the centrifuge so that the suspension smoothly moves from the stool collection tube 10 to the filtrate tube 20. Between the female threaded portion 14 and the male threaded portion 36 of the stool collection rod 30) and between the stool collection tube 10 and the filtrate tube 20 (between the male threaded portion 15 of the stool collection tube 10 and the female threaded portion 21 of the filtrate tube 20). The airtightness may be released by loosening. Since the male thread portion 15 of the stool collection tube 10 is screwed deeply into the filtrate tube 20, the suspension that has passed through the filter 13 does not leak out of the filtrate tube 20.
遠心分離後、濾液チューブ20は、採便チューブ10から取り外してそのまま次の工程に移すことができるように設計されていることが好適である。例えば、本実施例では、濾液チューブ20の外形は、8行12列の96穴マイクロタイタープレートの規格サイズに合致しており、専用サイズのチューブ・ラックに整列させると、96穴マイクロタイタープレートのウェルのピッチに一致する。次工程では、標準的な8連マイクロピペットを用いて必要量のウィルス浮遊液を分取することができる。 After centrifugation, the filtrate tube 20 is preferably designed so that it can be removed from the stool collection tube 10 and transferred directly to the next step. For example, in this embodiment, the outer shape of the filtrate tube 20 conforms to the standard size of a 96-well microtiter plate of 8 rows and 12 columns. Match the pitch of the well. In the next step, the required amount of virus suspension can be dispensed using a standard 8 micropipette.
以上、本発明の実施例について説明したが、本発明は上記の実施例に限定されるものではなく、その趣旨を逸脱しない範囲で適宜変更可能である。例えば、上記の実施例では、採便部は、先端部を四角錐とするとともに軸部を四角柱としているが、先端部を三角錐とするとともに軸部を三角柱としてもよい。また、上記の実施例では、凹陥部を採便部の対向する面に互い違いにそれぞれ設けているが、同一面側にそれぞれ設けてもよい。要は、本発明において所期の機能が得られればよいのである。 As mentioned above, although the Example of this invention was described, this invention is not limited to said Example, In the range which does not deviate from the meaning, it can change suitably. For example, in the above embodiment, the stool collection portion has a quadrangular pyramid at the tip and a quadrangular prism at the tip, but may have a triangular pyramid at the tip and a triangular prism. Further, in the above embodiment, the recessed portions are provided alternately on the opposing surfaces of the stool collection unit, but may be provided on the same surface side. The point is that the desired function can be obtained in the present invention.
10 採便チューブ
11 溶解液収容室
12 ストッカー(封止部材〉
12a 膜
12b 円筒部
12c フィン
12d 底部
12e シール部
13 フィルター
14、21 雌ねじ部
15、36 雄ねじ部
20 濾液チューブ
30 採便棒
31 採便部
32 先端部
33 軸部
33a 凹陥部
33b リブ
33c 両側部
34 縮径部
35 拡径部
37 把持部
40 容器本体
10 Stool Collection Tube 11 Solution Storage Chamber 12 Stocker (Sealing Member)
12a Membrane 12b Cylindrical part 12c Fin 12d Bottom part 12e Seal part 13 Filter 14, 21 Female thread part 15, 36 Male thread part 20 Filtrate tube 30 Stool collection rod 31 Stool collection part 32 Tip part 33 Shaft part 33a Recessed part 33b Rib 33c Both sides 34 Diameter reduction part 35 Diameter expansion part 37 Grasping part 40 Container body
Claims (7)
糞便が付着した採便棒を前記採便容器に挿着した後、当該採便棒に付着した糞便を前記溶解液中に溶解し、前記採便容器に遠心力を加え、前記フィルターを通過した前記濾液チューブ内の液層のみを捕集することを特徴とするウィルス浮遊液の採取方法。 A dissolution chamber for storing a solution for dissolving stool is provided inside, a stool collection rod for collecting stool is inserted into one end, and a filter for filtering the suspension is provided at the other end. A method for collecting a virus suspension using a stool collection container characterized by comprising a tubular stool collection tube and a filtrate tube attached to the other end of the stool collection tube,
After inserting the stool collection stick attached to the stool collection container, the stool attached to the stool collection specimen was dissolved in the solution, and centrifugal force was applied to the stool collection container and passed through the filter. A method for collecting a virus suspension characterized by collecting only the liquid layer in the filtrate tube.
(1)溶解液収容室が、その一端部が破断可能な膜で封止された筒状の採便チューブである。
(2)採便棒が、その基端側が把持部とされ、先端側に糞便を採取する採便部が設けられた棒状部材であり、当該採便部は、軸線上に頂部を有する角錐からなる先端部と角柱からなる軸部からなり、前記角錐と前記角柱とが連続する稜線を形成する。 The method for collecting a virus suspension according to any one of claims 1 to 3, wherein a stool collection container used in the method for collecting a virus suspension has the following characteristics (1) and (2).
(1) The solution storage chamber is a tubular stool collection tube whose one end is sealed with a breakable membrane.
(2) The stool collection rod is a rod-like member provided with a stool collection portion for collecting stool at the distal end side, the proximal end side of which is a gripping portion, and the stool collection portion is formed from a pyramid having a top portion on an axis. And a ridge line in which the pyramid and the prism are continuous.
In the method for collecting the virus suspension, a cylindrical sealing member is inserted into one end portion of the lysing solution storage chamber, and the breakable film is stretched on one end surface of the sealing member. A convex seal portion is provided around the outer peripheral portion of the member, and a plurality of fins are radially disposed above the seal portion. A method for collecting the virus suspension described in the above.
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